CZ292523B6

CZ292523B6 - Extrakty ze Zanthoxylum bungeanum a farmaceutické a kosmetické prostředky je obsahující

Info

Publication number: CZ292523B6
Application number: CZ200121A
Authority: CZ
Inventors: Ezio Bombardelli; Bruno Gabetta
Original assignee: Indena S. P. A.
Priority date: 1998-07-07
Filing date: 1999-04-07
Publication date: 2003-10-15
Also published as: DK1096944T3; EP1096944A1; AU749947B2; NO20010033D0; JP2002520289A; RU2214817C2; NO325091B1; PL191160B1; IL140702A; WO2000002570A1; JP4776776B2; EP1096944B1; DE69900999D1; PL345262A1; DE69900999T2; CA2336542C; ATE213949T1; KR20010053374A; US20010002260A1; SK72001A3

Abstract

Extrakty ze Zanthoxylum bungeanum získané extrakcí oplodí superkritickým oxidem uhličitým. Jsou popsány také farmaceutické a kosmetické prostředky, které jako účinnou složku obsahují tyto extrakty.ŕ

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nových extraktů získaných extrakcí oplodí Zanthoxylum bungeanum a farmaceutických a kosmetických prostředků, které je obsahují. Tyto extrakty mají protizánětlivé a analgetické účinky a mohou se používat pro léčení svědění.

I

Dosavadní stav techniky

Oplodí ze Zanthoxylum bungeanum je obvykle používáno v Číně jako koření pro sezónní potravu. Navíc se v čínském a indickém lidovém lékařství tato část rostliny používá jako místní anestetikum a pro léčení úplavice střevní. Je popsáno, že éterický olej, který obsahuje řady monoterpenů, jako je 1,8-cimol, linalol, 4-terpinol, karyofylen, limonen a podobné, je silným repelentem hmyzu.

Evropský patent EP 568 001 nedávno popsal protivirovou aktivitu slupky tohoto ovoce.

V USA patentu US5 137912 bylo popsáno, že chelcrythrin extrahovaný z kůry kořenů Zanthoxylum simulans (synonymum bungeanum) je aktivní při prevenci trombózy. Podle japonského patentu JP 01 294 657 extrakce oplodí organickými rozpouštědly poskytuje extrakt obsahující izobutylamidy vykazující místní anestetický účinek již 30 vteřin po aplikaci na jazyk a trvající až 20 až 80 minut.

Podstata vynálezu

Nyní bylo překvapivě objeveno, že extrakt oplodí Zanthoxylum bungeanum, vyrobený extrakcí oxidem uhličitým za superkritických podmínek, má významnou analgetickou aktivitu, aniž by vykazoval anestetickou aktivitu charakteristickou pro extrakty získané pomocí rozpouštědel. Produkt podle předloženého vynálezu se vyrábí získané pomocí rozpouštědel. Produkt podle předloženého vynálezu se vyrábí extrahováním oplodí Zanthoxylum bungeanum jemně rozemletého nebo převedeného na pelety oxidem uhličitým za tlaku v rozmezí od 15 do 30 MPa, s výhodou 18 až 23 MPa, za teploty v rozmezí od 35 do 55 °C, s výhodou 35 až 40 °C.

Výsledný extrakt může být použit buď jako takový, po odstranění extrakční vody, nebo může být dále vyčištěn roztřepáním s nemísitelnými rozpouštědly, jako jsou alifatické alkoholy a alifatické uhlovodíky, s výhodou hexan nebo petrolether.

Bylo prokázáno, že výsledné extrakty vykazují významnou analgetickou aktivitu, jestliže se aplikují perkutánně na člověka; jsou tedy cennými pro použití jak ve farmaceutické, tak kosmetické oblasti. I

Ve farmaceutické oblasti jsou užitečné pro zmínění bolesti při diabetické mikroangiopatii, u hemeroidních bolestí, u popálenin a u jakékoliv formy místní bolesti. Další aplikací extraktů podle vynálezu je léčení svědění.

V kosmetické oblasti jsou extrakty podle vynálezu užitečné v depilačních krémech, u prostředků používaných po opalování na sluníčku, v lotionech a krémech používaných po holení a u všech ošetření pokožky vyžadujících lokální analgetickou a protisvědivou účinnost.

-1 CZ 292523 B6

Protisvědivá účinnost extraktů podle vynálezu byla vyhodnocována elektrofyziologickým měřením použitím experimentálního modelu krysího ischiatického nervu - dlouhého natahovače prstu (EDL) připraveného in vitro.

Byly používány dospělé krysy Sprague-Dawley zabité intrakardiálním předávkováním Penthotalem. EDL sval s dlouhým úsekem ischiatického nervu byl odebrán a umístěn do nádoby pro elektrofyziologii sRingerovým roztokem, který byl vyměňován každých 10 minut. Testované extrakty, s výhodou přidávané s povrchově aktivním činidlem, byly dispergovány v různých koncentracích, takže přicházely do kontaktu s nervovými vlákny, neuromuskulámími 10 spoji a svalem. U elektrofyziologických testů byla intracelulámí mikroelektroda naplněná 3MKC1 umístěna do svalových buněk pro zaznamenávání elektrického jevu (miniaturní potenciály na ukončení motorického nervu, potenciály na ukončení motorického nervu, membránové potenciály svalové buňky) jak spontánní tak indukované stimulací nervu. Pro tyto účely byl nerv spojen se stimulátorem a popřípadě stimulován jednou za vteřinu. Elektrické 15 události ve svalových buňkách byly detegovány mikroelektrodou napojenou na nosič signálu a zviditelněny digitálním osciloskopem.

Extrakty podle vynálezu, když byly testovány v koncentračním rozmezí od 0,0005 do 0,002 % hmotn., vykazovaly silný, dočasný aktivující účinek na neuromuskulámí synaptickou transmisi, 20 což bylo prokázáno zvýšením frekvence miniaturních potenciálů na ukončení motorického nervu a objevení se spontánních potenciálů na ukončení motorického nervu. Obráceně - extrakty získané z rozpouštědel, které mají lokální anestetickou aktivitu, snižují a inhibují transmisi nervového impulsu.

Analgetická aktivita testovaných extraktů byla vyhodnocována u 10 zdravých dobrovolníků vyhodnocením studie tepelné citlivosti pokožky.

Progresivně zahřívaná tepelná sonda byla umístěna na skapulámí oblast subjektu 30 minut po ošetření testovaným produktem nebo odpovídajícím placebem. Byla měřena hodnota teploty, 30 kterou subjekt považoval za bolestivou. Podáváno bylo 0,5 ml emulze vyrobené podle příkladu 7, která obsahovala 0,5 % extraktu Zanthoxylum bengeanum vyrobeného podle příkladu 1. Dále uvedené výsledky ukazují analgetickou aktivitu testovaného extraktu.

ošetření	T_o	T30 minut
placebo	45,7 ± 1,0	45,3 ± 0,4
extrakt	46,0 ± 0,8	47,2 ± 0,4

Extrakty podle vynálezu se mohou připravovat ve formě krémů, lotionů, pěn, gelů, přípravků pro podávání na pokožku nebo mukózu, tobolek z měkké želatiny, tobolek z tvrdé želatiny, tablet nebo čípků; s výhodou se extrakt podle vynálezu připravuje ve formě krémů nebo pěn pro kutánní ošetření nebo ve formě tobolek z měkké želatiny, žvýkatelných tablet nebo čípků pro systémové použití.

Přesná dávka v přípravcích je v rozmezí mezi 5 a 100 mg na dávku v přípravcích pro systémové použití, zatímco v místních přípravcích se pohybuje od 0,05 do 1 % hmotn.

Příklady popsané níže dále ilustrují tento vynález bez jeho omezení.

-2CZ 292523 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava lipofílního extraktu ze Zanthoxylum bungeanum kg oplodí Zanthoxylum bungeanum se extrahuje podle níže popsaného postupu ve 25 1 extrakčním zařízení pro superkritický plyn, který je spojen se dvěma odlučovači jako chladiči J frakcionujícího extraktu.

kg oplodí mechanicky vysušeného po sklizni za teploty nepřevyšující 60 °C bylo vylisováno do krychliček a extrahováno oxidem uhličitým za superkritických podmínek za následujících experimentálních podmínek.

- teplota v extraktoru 35 °C, 30 °C v prvním odlučovači a 20 °C ve druhém odlučovači a

- tlak 18 MPa v extraktoru, 10 MPa v prvním odlučovači a 5 MPa v druhém odlučovači.

Tok oxidu uhličitého byl 101 za minutu po dobu 45 minut. Extrakt byl zahuštěn ve druhém odlučovači, při němž většina vody přítomná v rostlinné matrici byla zahuštěna v prvním odlučovači. Po vysušení extraktu v druhém odlučovači ve vakuu při teplotě nepřevyšující 40 °C bylo získáni 1,5 kg pastovitého extraktu, který byl patrně zabarven do žlutá, intenzivně voněl a obsahoval kolem 25 % hmotn. izobutylaminů. HPLC analýza byla prováděna na Hibar RT LiChrospher 100RP-18 koloně selučním profilem (1 ml/min) popsaným v tabulce. Injektované množství bylo 5 ml roztoku o koncentraci 2 mg/ml. Chromatogram je popsán na obrázku.

Tabulka

doba (min)	voda (% hmotn.)	acetonitril (% hmotn.)	počet gradientových křivek
0	60	40	-
20	60	40	6
30	10	90	6
35	60	40	6
40	60	40	6

Příklad 2

Příprava lipofílního extraktu ze Zanthoxylum bungeanum kg oplodí mechanicky vysušeného po sklizni za teploty nepřevyšující 60 °C bylo vylisováno do krychliček a extrahováno oxidem uhličitým za superkritických podmínek za následujících experimentálních podmínek:

- teplota v extraktoru 40 °C, 30 °C v prvním odlučovači a 20 °C ve druhém odlučovači a

- tlak 20,5 MPa v extraktoru, 10 MPa v prvním odlučovači a 5 MPa v druhém odlučovači.

Tok oxidu uhličitého byl 101 za minutu po dobu 45 minut. Extrakt byl zahuštěn ve druhém odlučovači, při němž většina vody přítomná v rostlinné matrici byla zahuštěna v prvním odlučovači. Po vysušení extraktu v druhém odlučovači ve vakuu při teplotě nepřevyšující 40 °C bylo získáno 1,5 kg pastovitého extraktu, který byl nepatrně zabarven do žlutozelená, měl stejné

-3CZ 292523 B6

Chemicko-fyzikální znaky jako extrakt z příkladu 1 a obsahoval kolem 20 % hmotn. Izobutylamidů.

( 10

Příklad 3

Příprava lipofilního extraktu ze Zanthoxylum bungeanum kg oplodí mechanicky vysušeného po sklizni za teploty nepřevyšující 60 °C bylo vylisováno do krychliček a extrahováno oxidem uhličitým za superkritických podmínek za následujících experimentálních podmínek: teplota v extraktu 40 °C a tlak 23 MPa. Poměr oxidu uhličitého použitého pro extrakci léčiva, které má být extrahováno, byl 27 až 54 kg léčiva. Extrakt byl zahuštěn v odlučovači při 5 MPa a 20 °C. Po vysušení ve vakuu při teplotě nepřevyšující 40 °C bylo získáno 1,3 kg pastovitého extraktu, který byl nepatrně zabarven do žluto/zelena a měl stejné chemicko-fyzikální znaky jako extrakt z příkladu 1.

Příklad 4

Příprava vyčištěného lipofilního extraktu ze Zanthoxylum bungeanum

0,5 kg lipofilního extraktu oplodí Zanthoxylum bungeanum vyrobeného podle příkladu 1 bylo rozpuštěno ve 2,5 1 95% vodného methanolu a extrahováno třikrát 0,5 1 dávkami hexanu. Hexanová fáze byla protiproudně extrahována methanolem použitím izobutylaminů, které by měly zůstat v methanolové fázi, jako markéru. Neaktivní hexanová fáze byla odstraněna, zatímco methanolové fáze byly spojeny, zředěny 0,61 vody a reextrahovány dvakrát 0,6 1 hexanu. Spojené hexanové fáze byly odbarveny 0,3 % hmotn. aktivního uhlí, vysušeny nad síranem sodným a zahuštěny na olej za teploty nepřevyšující 40 °C ve vakuu. Získá se tak 0,22 kg olejovitého extraktu medovité konzistence, který měl obsah izobutylamidů kolem 50 % hmotn.

Příklad 5

Alkoholický roztok Zanthoxylum bungeanum

100 ml alkoholického roztoku Zanthoxylum bungeanum obsahuje:

20% (hmotn.) roztok Zanthoxylum bungeanum v oleyalkoholu cyklomethikon alkohol

0,50 g 20,00 g 100,0 ml

Příklad 6

Η

Nealkoholický roztok Zanthoxylum bungeanum

100 ml nealkoholického roztoku Zanthoxylum bungeanum obsahuje:

20% (hmotn.) roztok Zanthoxylum bungeanum v oleyalkoholu PPG-26 Buteth 26 a PEG-40 hydrogenovaný ricinový olej methyl-chlorizothiazolinon a methyl-izothiazolinon vyčištěná voda

0,50 g

5,00 g

0,10 g

q.s. do 100,0 ml

-4CZ 292523 B6

Příklad 7

Emulze Zanthoxylum bungeanum

100 g emulze Zanthoxylum bungeanum obsahuje:

20% (hmotn.) roztok Zanthoxylum bungeanum v oleylalkoholu izohexadekan glycerin alkyl(s 12 až 15 atomy uhlíku)benzoát cyklomethikon PEG-20 glycerylstearát a glycerylstearát lanolinový vosk zesíťovaný polymer akryláty/alkyl(Cio-3o)akryláty cetylalkohol imidazolidinylmočovina fenoxyethanol methylparaben tokoferol dvojsodná sůl EDTA voda

0,50 g 5,00 g 4,00 g 2,00 g 2,00 g 2,00 g 1,00 g 0,50 g 0,50 g 0,30 g 0,50 g 0,20 g 0,10 g 0,10 g q.s. do 100,0 g

Příklad 8

Kapalná emulze Zanthoxylum bungeanum

100 g kapalné emulze Zanthoxylum bungeanum obsahuje:

20% (hmotn.) roztok Zanthoxylum bungeanum v oleyalkoholu PEG-20 glycerylstearát a glycerylstearát triglyceridy s 10 až 18 atomy uhlíku glycerin olej z pšeničných klíčků dimethikon PPG-25 Laureth-25 cetylalkohol hydroxylovaný lanolin imidazolidiylmočovina hydroxyethyl-hektorit (e)

0,50 g 10,00 g 10,00 g 5,00 g 2,00 g 2,00 g 2,00 g 1,00 g 0,50 g 0,30 g 0,50 g

fenoxyethanol, methylparaben, ethylparaben, propylparaben a butylparaben 0,50 g

tokoferol voda

0,10 g q.s. do 100,0 g

-5CZ 292523 B6

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Extrakty ze Zanthoxylum bungeanum, získaná extrakcí oplodí oxidem uhličitým za superkritických podmínek.
2. Extrakty podle nároku 1, získané extrakcí oxidem uhličitým za teplot v rozmezí od 35 do

10 55 °C a tlaků v rozmezí od 15 MPa do 30 MPa.
3. Extrakty podle nároků 1 a 2, vyznačující se tím, že mají obsah izobutylamidů v rozmezí od 20 do 50 % hmotn.

15
4. Farmaceutické prostředky, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahují extrakt podle nároků 1 až 3 ve směsi s vhodnými excipienty.
5. Kosmetické prostředky, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahují extrakt podle nároků 1 až 3 ve směsi s vhodnými excipienty.