CZ6498A3 - Použití rapamycinu a jeho derivátů v kombinaci s antagonistou NMDA a/nebo AMPA pro výrobu farmaceutických prostředků - Google Patents

Description

sr- ji · · ··· · · · · · *·· · · / .‘J. ······ ···

Použití rapamycinu a jeho derivátů v kombinaci s antagonistou NMDA a/nebo AMPA pro výrobu farmaceutických prostředků

Oblast techniky 5 Vynález se týká použití sloučeniny, zvolené ze skupiny rapamycin, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s fenyltriazolin-dionem, 42-ester rapamycinu s kyselinou 4-{[4-(dimethylamino)-fenyl]azo]benzensulfonovou, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin - 0-benzyl-27-oxim v kombinaci s io antagonistou NMDA a/nebo AMPA jako neuroprotektivního prostředku, zvláště při léčení mrtvice, poranění hlavy a neurodegenerativních poruch, jako je Alzheimerova choroba, amytrofická laterální skleróza (ALS), epilepsie, Huntingtonova choroba nebo Parkinsonova choroba. 15 Dosavadní stav techniky Předpokládá se, že smrt neuronů při ischemii, mrtvici a zranění hlavy způsobuje glutamátem indukovaná toxicita. [Simon RP, Science 226:850 (1984); Benveniste H, J. Neurochem. 43:1369 (1984)]. Účastní se také jiných neurologických poruch, jako je Alzheimerova 20 choroba, ALS, epilepsie, Huntingtonova choroba a Parkinsonova choroba. [Beal F, Nátuře 321:168 (1986); Maragos WF, Trends Neurosci. 10:65 (1987); Greenamyre JT, Neurobiol. Aging 10:593 (1989); Koh J-Y, Brain Res. 533:315 (1990); Mattson MP, J. Neurosci. 12:376 (1992); Rothstein, JD, New England J. Med. 326:1464 (1992); 25 Choi, DW, New England J. Med. 326(22):1493-4 (1992)]. Za normálních podmínek funguje glutamát v mozku jako excitační neuronový přenašeč. Uvolňuje se z presynaptických zakončení a aktivuje receptory na postsynaptických neuronech. Aktivované • · · · ·· · ···· • · ··· · · · · · ··· ι · • · · · · · · · β -2- ............. receptory umožní sodným a vápenatým iontům proudit do buňky za vzniku excitační odezvy. Účinek těchto excitačních aminokyselin je zprostředkován několika rozdílnými subtypy receptorů, z nichž nejlépe prostudován je receptor pro N-methyl-D-aspartát (NMDA). Nadbytečná 5 aktivace receptorového komplexu NMDA může způsobit nadměrnou stimulaci neuronů s patologickými důsledky. Za patologických podmínek se v extracelulárním prostoru akumulují zvýšené hladiny glutamátu, což vede k nadměrné stimulaci glutamátových receptorů. To indukuje zvýšený příliv sodíku a vápníku do buňky, což má za 10 následek zvýšenou hladinu intracelulárního vápníku, který iniciuje dosud neznámý proces smrti buňky. V poslední době se pracuje na vývoji antagonistů glutamátových receptorů, schopných zabránit smrti neuronové buňky po mrtvici nebo úrazu hlavy. [ Hirose K, Neurochem. Res. 18:479 (1993); Dugan LL, 15 Annais of Neurology, díl 35, dodatek S 17 - 19 (1994)]. Velké množství studií ukázalo, že blokáda receptorů subtypu NMDA výrazně sníží poškození a ztráty neuronů, které se vyskytují u zvířecích modelů simulujících různé neuropatologické situace. Tato pozorování silně ukazují na to, že NMDA antagonisté poskytují u několika klinických 20 souborů ochranu neuronů. Mnoho z těchto léčiv je však účinných pouze tehdy, když se podá v průběhu šesti hodin po záchvatu nebo zranění. To může být způsobeno tím, že hladiny intracelulárního vápníku mohou stoupat také průchodem vápníku do buňky napětím řízenými kalciovými kanály. Navíc, protože aktivace glutamátových 25 receptorů je nutná pro normální synaptický přenos a mozkovou aktivitu, není možno provádět dlouhodobé léčení blokátory glutamátového receptorů. To omezuje jejich použití jako neuroprotektivních prostředků při chronických neurodegenerativních poruchách. Proto léčiva, která mohou zabránit smrti neuronu po 30 vzestupu hladiny intracelulárního vápníku, jsou vhodná pro opožděné ošetření mrtvice a zranění hlavy, stejně jako pro chronické léčení neurodegenerativních onemocnění, ·· ·♦ ·· · ·· ··

2 V « » * » W WWW

Bylo navrženo několik hypotéz pro vysvětlení, jak mohou vést vysoké hladiny intracelulárního vápníku ke smrti buňky. Jedna z nich je, že vápník aktivuje kalcium dependentní proteázy, jako je kalpain. Další hypotéza je, že vápník aktivuje kalcineurin, kalcium/kalmodulin 5 dependentní fósfatázu, která defosforyluje syntézu oxidu dusnatého (NOS). Defosforylace NOS umožňuje vytváření oxidu dusnatého, který je pro buňky toxický. Podle třetí hypotézy vysoké intracelulární hladiny vápníku indukují apoptózu, neboli naprogramovanou smrt buňky. Tyto rozdílné hypotézy se vzájemně nevylučují a je pravděpodobné, že 10 všechny tyto procesy, stejně jako další ještě neobjevené, jsou spouštěny vysokou hladinou intracelulárního vápníku a mají za následek smrt buňky. Při apoptóze jsou aktivovány některé geny, potřebné pro buněčné dělení, stejně jako kdyby se buňka pokoušela dělit. [Heintz 15 N, Trends-Biochem-Sci. 18:157 (1993)]. Mnoho vysoce diferenciovaných buněk, jako jsou neurony, ztratilo schopnost dělení, a když se nemohou rozdělit, umírají. Proto je možné, že léky, které mohou inhibovat dělení buňky, mohou také zabránit apoptóze. 20 Podstata vynálezu

Vynález poskytuje použití sloučeniny, zvolené ze skupiny rapamycin, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s ..fenyl-triazolindionem, 42-ester rapamycinu s kyselinou 4-[[4-(dimethyl-amino)fěnyl]azo]benzensulfonovou, 1,3-Diels Alderův addukt 25 rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin - O-benzyl-27-oxim (společně označované jako sloučeniny podle vynálezu) v kombinaci s antagonistou NMDA a/nebo AMPA pro výrobu neuroprotektivního prostředku, který se podává savci při potřebě léčby orálně, parenterálně, intravaskulárně, intranazálně, intrabronchiáíně, 3o transdermálně nebo rektálně. Zvláště se tento vynález týká použití pro - 4 - výrobu farmaceutického prostředku pro léčení mrtvice, poranění hlavy a neurodegenerativních poruch, jako je Alzheimerova choroba, amytrofická laterální skleróza (ALS), epilepsie, Huntingtonova choroba nebo Parkinsonova choroba u savců v případě potřeby takového 5 léčení, který obsahuje účinné množství sloučeniny, zvolené ze skupiny rapamycin, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s fenyltriazolindionem, 42-ester rapamycinu s kyselinou 4-[[4-(dimethylamino)fenyl]azo]benzensulfonovou, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin - O-benzyl-27-oxim v 10 kombinaci s antagonistou NMDA a/nebo AMPA pro podávání uvedenému savci orálně, parenterálně, intravaskulárně, intranazálně, intrabronchiálně, transdermálně nebo rektálně. Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou také užitečné při inhibici smrti neuronů, spojené s výše uvedenými stavy onemocnění. Vynález také poskytuje použití 15 sloučeniny, zvolené ze skupiny rapamycin, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s fenyltriazolindionem, 42-ester rapamycinu s kyselinou 4-[[4-(dimethylamino)fenyl]azo]benzensulfonovou, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin - O-benzyl-27-oxim v kombinaci s NMDA a/nebo AMPA antagonisty pro výrobu 20 farmaceutického prostředku použitelného jako neuroprotektivní prostředek při léčení mrtvice, poranění hlavy a neurodegenerativních poruch, jako je Alzheimerova choroba, amytrofická laterální skleróza (ALS), epilepsie, Huntingtonova choroba nebo Parkinsonova choroba. Sloučeniny v kombinaci s NMDA a/nebo AMPA antagonisty podle 25 tohoto vynálezu jsou také použitelné pro výrobu farmaceutického prostředku pro inhibici smrti neuronů spojené s výše uvedenými stavy onemocnění.

Kombinace s antagonisty NMDA a/nebo AMPA může být podávána současně nebo postupně bez ohledu na pořadí podávání. 3o Výhodnými antagonisty NMDA jsou kyselina [2-(8,9-dioxo-2,6-

diazabicyklo[5.2.0]-non-1(7)-en-2-yl)ethyl]fosfónová (popisovaná v US * · patentu 5,168,103, zde uvedená jako referenční), D-amino-5-fosfonopentanoát (D-AP5), kyselina 4-fosfonomethyl-2-piperidin-karboxylová (CGS19755), kyselina D, L-(E)-2-amino-4-methylfosfono-3-pentanová (CGP37849), 5,7-dichlorokynurenát, trans-2-karboxy-5,7-5 dichloro-4-fenylaminokarbonyÍamino-1,2,3,4-tetrahydrochinolin (L689560) a 5,7-dinitrochinoxolin-2,3-dion (MNQX); a výhodnými antagonisty AMPA jsou 6-(1H-imidazol-1-yl)-7-nitro-2,3(1 H,4H)-chinoxalindionhydrochlorid (YM90K) (J.Med. Chem. 37:647 (1994)), 1-(4-aminofenyl)-4-methyl-7,8-methylendioxy-5H-2,3-benzo-io diazepinhydrochlorid (GYKI52466), a 6-nitro-7-sulfamobenzo-(f)chinoxalin-2,3-dion (NBQX), 6-kyano-7-nitrochinoxalin-2,3-dion (CNQX) a 6,7-dinitrochinoxalin-2,3-dion (DNQX).

Pod léčením se rozumí léčení existujícího stavu, zabránění postupu nebo rozvoji stavu, zlepšení stavu a zmírnění stavu. 15 Příklady provedení vynálezu

Schopnost sloučenin podle vynálezu v kombinaci s antagonistou NMDA a/nebo AMPA účinkovat jako neuroprotektivní prostředky, byla ukázána v následujícím standardním farmakologickém testovacím 20 postupu in vitro. který ukazuje schopnost sloučenin podle vynálezu zvýšit neuroprotektivní účinky, pozorované s inhibitory NMDA a AMPA. Stručně, kortikální kultury byly pěstovány 8 týdnů ve 24-jamkových destičkách podle následujícího postupu. Ve stručnosti, krysí kortikální kultury bylý připraveny způsobem podle: Furshpan a Potter s určitými 25 modifikacemi [Neuron 3:199 (1989)]. Z nově narozených jedinců kmene Long Evans, po anestézi injekcí 0,1 ml 20 % chloralhydrátu byly odstraněny mozky. Byly vyříznuty hippokampy a odstraněny od zbytku kůry.. Obě tkáně byly enzymaticky tráveny v 5 ml EBSS (Earle s Balanced Salt Solution), který obsahoval 20 u/ml papainu, 1 mM L-30 cysteinu a 0,5 mM EDTA za mírného kývání 30 minut při 37 °C. -6-

Hippokampy a kortikální tkáně pak byly jednou promyty EBSS a trávení bylo ukončeni inkubací 30 minut při 30 °C s 3 až 5 ml inhibičního roztoku, obsahujícího 1 mg/ml ovomukoidu a 1 mg/ml albuminu v EBSS. 5 Natrávené kortikální tkáně byly dvakrát promyty DME bez L- giutaminu s 4,5 g/l dextrózou a potom byly rozmělněny ve dvou ml DME, který byl doplněn 5 % fetálním telecím sérem, 5 % krysím sérem, 50 u/ml penicilinu, 0,05 mg/ml streptomycinu a doplňkem séra MITO+ [doplněk séra firmy Collaborative Biomedical Products] (10 % io DME). Po padesátinásobném rozmělňování byla nedisociovaná tkáň ponechána usadit a disociovaná suspenze buněk byla odtažena. Ke zbývající tkáni bylo přidáno 2 ml čerstvého 10 % DME a rozmělňování bylo opakováno. Dva alikvoty buněčné suspenze byly spojeny a hustota buněk byla určena hemacytometrem. Kortikální neurony byly 15 promyty 6 x DME bez glukózy, který byl zbaven kyslíku probubláváním média směsí 95 % N2/5 % C02 po dobu alespoň 10 minut, aby byl navozen ischemický stav působící smrt neuronů, která může být pozorována měřením aktivity laktát dehydrogenázy, protože množství aktivity LDH v každé jamce přímo koreluje s počtem mrtvých buněk. K 20 některým jamkám bylo přidáno 100 μΜ kyseliny [2-(8,9-dioxo-2,6-diazabicyklo[5.2.0]non-1 (7)-en'2-yl)-ethyl]-fosfonové (popisované v US patentu 5,168,103, který je zde uváděn jako reference) a 10 μΜ YM90K pro blokování receptorů NMDA a AMPA. K testovacím jamkám bylo přidáno 1 pM sloučeniny podle příkladu 1. Kontrolní jamky byly 25 promyty normálním DME s glukózou a 100 pM kyseliny [2-(8,9-dioxo-2,6-diazabicyklo[5.2.0]non-1 (7)-en-2-yl)-ethyl]-fosfonové. Z každé jamky byly odebrány v různých časech po navození ischemie vzorky a aktivita LDH v těchto vzorcích byla určována přídavkem 250 pl roztoku 2 mg NADH na 25 ml fosfátového pufru. Po inkubaci 20 - 30 minut 30 bylo přidáno 10 pl 22,7 mM pyruvátu a byla odečtena optická densita (OD) při 340 nm. Změna optické density s časem (mOD/min) odráží množství LDH ve vzorku. Vyšší změny optické density znamenají větší • · aktivitu LDH a větší počet mrtvých buněk. Vzorky byly odebírány pro každou koncentraci ze 4 až 8 jamek a byla určena průměrná hodnota a standardní odchylka pro každou koncentraci a každý časový úsek. Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.

Aktivita LDH (± standardní odchyl <a) Čas (h) Kontrola Ischemie AMPA/NMDA AMPA/NMDA/Příklad 1 0 0.31 ± 0.41 0.27 ± 0.05 0.69 ± 0.70 0.67 ± 0.29 0.5 0.51 ± 0.14 0.57 ±. 0.29 0.45 ± 0.25 0.80 ± 0.28 1 0.40 ± 0.07 0.56 ± 0.16 0.46 ± 0.23 0.90 ± 0.37_________________ 1.5 0.43 ± 0.15 0.84 ± 0.44 0.38 ± 0.30 1.03 ± 0.32 4 0.64 t 0.01 9.11 ± 1.63 2.29 ± 0.50 2.09 ± 0.58 5 0.68 ± 0.20 31.65 ± 5.76 16.07 ± 2.9 4.21 ± 1.02 6 0.78 ± 0.22 40.52 ± 6.43 29.99 ±9.11 9.11 ± 7.04 7 1.28 ± 0.41 50.30 ± 6.96 44.56 ± 7.73 15.77 ± 4.68 8 1.15 ± 0.28 60.05 ± 8.66 61.77 ± 13.96 24.43 ± 7.87 is Sloučeniny podle vynálezu byly testovány také standardním testovacím postupem napodobujícím ischemickou neurotoxicitu s tím rozdílem, že byly použity jeden týden staré kortikáiní buněčné kultury, které jsou méně citlivé k neurotoxicitě způsobené ischemií. Testované sloučeniny byly podávány s inhibitory NMDA a AMPA, jak se popisuje 20 výše. Pro účely srovnání byl testován také cyklosporin.

Stand. odchylka

Aktivita LP Η Čas (h)

Kontrola 8 0.30 0.54 13 1.37 1.58 24 2.97 2.67 30 4.44 2.50 Ischemie 0.36 8 0.49 13 6.17 1.10 24 16.40 4.29 30 21.49 3.35 Příklad 1 0.20 3 1.04 13 3.08 -------- 0.71 24 9.00 1.64 30 14.02 2.4 Příklad 2 8 1.08 0.34 13 2.31 1.41 24 7.69 3.13 30 12.43 3.85 Příklad 3 0.20 8 0.84 13 2.36 1.41 24 7.03 3.24 30 11.25 2.62 Příklad 4 8 0.91 0.34 13 2.54 1.02 24 8.21 4.14 30 13.31 3.41 Příklad 5 8 0.74 0.38 13 1.65 0.81 24 4.82 1.42 30 8.83 2.41 Cyklosporin 0.63 8 1.54 13 3.31 1.37 24 8.45 1.94 30 13.59 2.34 - 9 - ·· ·· • · « · ·

Tyto výsledky, získané standardním farmaceutickým testovacím postupem ukazují, že sloučeniny podle vynálezu zvyšují neuroprotektivní účinky NMDA a AMPA inhibitorů při inhibici ischemií indukované neurotoxicity. 5 Sloučeniny podle vynálezu mohou být ve farmaceutických přípravcích jako takové nebo v kombinaci s farmaceutickým nosičem. Farmaceutický nosič může být kapalný nebo pevný. Pokud se přípravek podává ústy, bylo zjištěno, že přijatelný orální prostředek poskytuje 0,01 % Tween 80 ve PHOSAL-PG-50 (fosfolipidový io koncentrát s 1,2-propylenglykolem, A. Nattermann & Cie. GmbH).

Pevný nosič může zahrnovat jednu nebo více látek, které mohou zároveň působit jako ochucovací prostředky, maziva, látky pro usnadnění rozpouštění, suspendující prostředky, plnidla, kluzné látky, látky usnadňující stlačování, vazné látky nebo prostředky pro 15 rozpadávání tablet; může jít také o materiál pouzdra. U prášků je nosnou látkou jemně rozptýlená pevná látka, která je ve směsi s jemně rozptýlenou aktivní složkou. V tabletách je aktivní složka smísena s nosnou látkou, která má nezbytné vlastnosti pro stlačování ve vhodném poměru a ve stlačeném stavu poskytne požadovaný tvar 20 a velikost. Prášky a tablety s výhodou obsahují až do 99 % aktivní složky. Vhodné pevné nosné látky např. zahrnují fosforečnan vápenatý, stearan hořečnatý, talek, cukry, laktóza, dextrin, škrob, želatina, Celulóza, methylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy, polyvinylpyrrolidon, nízkotající vosky a iontoměničové pryskyřice. 25 Kapalné nosné látky se používají pro přípravu roztoků, suspenzí, emulzí, sirupů, elixírů a tlakových prostředků. Aktivní složka může být rozpuštěna nebo suspendována ve farmaceuticky přijatelném nosiči, jako je voda, organické rozpouštědlo, směs obou nebo farmaceuticky přijatelné oleje nebo tuky. Kapalný nosný 30 prostředek může obsahovat jiná vhodná farmaceutická aditiva, jako jsou látky pro usnadnění rozpouštění, emulgátory, pufry, ochranné ·· ·· ♦* ♦ ·« ·· • · · · · · ·· ···· • · · · ·· · ···· • · ··· · · · » · ··· · · • · ···· ··· - 10 - látky, sladidla, ochucovací prostředky, suspendující prostředky, zahušťující prostředky, barviva, regulátory viskozity, stabilizátory nebo regulátory osmotického tlaku. Vhodnými příklady kapalných nosičů pro orální a parenterální podávání jsou voda (částečně obsahující 5 přídavné látky jak je uvedeno výše, např. deriváty celulózy, s výhodou roztok sodné soli karboxymethylcelulózy), alkoholy (včetně monohydroxyalkoholů a polyhydroxyalkoholů, například glykolú) a jejich deriváty, lecitiny a oleje (např. frakcionovaný kokosový a arašídový olej). Pro parenterální podávání může být nosnou látkou 10 také olejový ester, jako je ethyloleát a izopropylmyristát. Sterilní kapalné nosiče jsou použitelné ve sterilních kapalných prostředcích pro parenterální podávání. Kapalnými nosiči pro tlakové prostředky mohou být halogenované uhlovodíky nebo jiné farmaceuticky přijatelné hnací plyny. 15 Kapalné farmaceutické prostředky ve formě sterilních roztoků nebo suspenzí mohou být např. použity jako intramuskulární, intraperitoneální nebo subkutánní injekce. Sterilní roztoky je možno rovněž podávat intravenózně. Sloučeniny podle vynálezu mohou také být podávány orálně buď v kapalné nebo pevné lékové formě. 2o Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány rektálně ve formě běžného čípku. Pro podávání intranazální nebo intrabronchiální inhalací nebo insuflací může být rapamycin ve formě vodného nebo částečně vodného roztoku, který pak může být použit ve formě aerosolu. Sloučeniny podle vynálezu je možno také podávat 25 transdermálně použitím transdermáiní náplasti, která obsahuje aktivní sloučeninu a nosič, který je k ní inertní a netoxický na kůži a dovolí systémovou absorpci prostředku před kůži do krevního řečiště. Nosná látka může mít jakoukoli formu, jako jsou krémy a masti, pasty, gely a okluzívní přípravky. Krémy a masti mohou být viskózní kapaliny nebo 3o polotuhé emulze jak typu olej ve vodě, tak i voda v oleji. Pasty obsahují absorpční prášky, dispergované ve vazelíně nebo hydrofilní - 11 - * ·· Μ ·· · ·· ·· • · · · · ·· ···· ··· ·· · · · · · ······ · · · ···· · • · t · · ··· vazelíně, obsahující aktivní složku. Pro uvolňování aktivní složky do krevního řečiště může být použita řada různých okluzívních zařízení, jako je semipermeabilní membrána pokrývající zásobník s obsahem aktivní složky s nebo neb nosiče nebo matrix, obsahující aktivní 5 složku. Jiná okluzívní zařízení jsou známa z literatury.

Požadavky na dávkování se liší podle konkrétní použité sloučeniny, cesty podávání, vážnosti symptomů a léčeného pacienta. V závislosti na výsledcích, získaných ve standardních farmakologických testech, je navrhovaná intravenózní denní dávka 10 aktivní sloučeniny 0,1 jjg/kg až 100 pg/kg, s výhodou mezi 0,001 až 25 mg/kg, ještě lépe mezi 0,01 až 25 mg/kg a nejlépe mezi 0,05 až 10 mg/kg. Léčení se obvykle zahajuje malou dávkou, menší než dávka optimální, účinné sloučeniny. Potom se dávka zvyšuje až do dosažení optimálního účinku v závislosti na okolnostech; přesné dávky pro 15 orální, parenterální, nazální nebo intrabronchiální podávání bude určovat ošetřující lékař v závislosti na zkušenosti s jednotlivým pacientem. S výhodou je farmaceutický prostředek v jednotlivé dávkovači formě, např. jako tablety nebo kapsle. V takovéto formě je prostředek rozdělen do jednotlivých dávek, obsahujících vhodná 2o množství aktivní složky; jednotlivá dávkovači forma může být ve formě baleného prostředku, například balíčkovaných prášků, lahviček, ampulí, přednaplněnných stříkaček nebo sáčků s obsahem kapaliny. Jednotlivá dávkovači forma se může například skládat z kapsle nebo tablety jako takové, nebo může být v balení vhodný počet takových 25 prostředků. Následující příklady ilustrují přípravu prostředků podle vynálezu. - 12 -

Příklady sloučenin podle vynálezu Příklad 1

Rapamvcin Příprava rapamycinu byla popsána v US patentu 3,929,992, 5 který se zde uvádí jako referenční. Příklad 2

Rapamvcin 1.3-Diels Alderův addukt s fenvltriazolindionem

Rapamycin (0,66 g, 721 mM) byl rozpuštěn v dichlormethanu io (10 ml) a ochlazen na 0 °C. K této směsi byl po kapkách přidáván roztok fenyltriazolindionu (0,133 g, 758 mM) v dichlormethanu (10 ml). Roztok byl přes noc míchán, a TLC ukázala, že reakce není u konce. Byl přidán další fenyltriazendion (0,025 g, 27 mM). Směs byla vyčištěna pomocí HPLC (kolona 4,1 x 31 cm, Si02) s ethylacetátem 15 jako mobilní fází a byla získána v názvu uvedená sloučenina jako pevná látka. Tato látka byla rozetřena s 30 ml hexanu a 1 ml ethylacetátu, zfiltrována a sušena na vzduchu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako prášku (0,383 g).

Vypočtené složení pro C59H84N4O15: C, 65,05; H, 7,77; N,5,14. 20 Nalezeno: C, 65,39; H, 7,98; N, 4,92. IR (KBr, cm'1) 3450, 1715 NMR (DMSO) 5 7,50 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 3,11 (s, 3H), 3,00 (S, 3H), 2,95 (s, 3H), 0,8 (q, 1H) MS (-FAB) 1088 (M-) Příklad 3

Rapamvcin 42-ester s kyselinou 4-fí4-(dimethvlaminoV fenvllazolbenzensulfonúvou - 13 -

Příprava sloučeniny podle příkladu 3 se popisuje v US patentu 5,177,203, který je zde uveden jako referenční. Příklad 4 5 1.3-Diels Alderův addukt rapamvcinu s methvltriazolindionem V názvu uvedená sloučenina byla připravena podle způsobu, popsaného v příkladu 2. Příklad 5 io Rapamvcin -O-benzvl-27-oxim Příprava sloučeniny z příkladu 5 se popisuje v US patentu 5,023,265, který je zde uveden jako referenční. 15

Zastupuje:

Claims (6)

1. PATENTOVÉ NÁROKY 1. Použití účinného množství sloučeniny, zvolené ze skupiny 5 rapamycin, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s fenyltriazolindionem, 42-ester rapamycinu s kyselinou 4-[[4-(dimethylamino)fenyl]azo]benzensulfonovou, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin -O-benzyl-27-oxim v kombinaci s antagonistou NMDA nebo ίο AMPA pro výrobu farmaceutického prostředku pro inhibici smrti neuronů u savce pro podávání uvedenému savci orálně, parenterálně, intravaskulárně, intranazálně, intrabronchiálně, transdermálně nebo rektálně.
2. 2. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, ž e farmaceutický prostředek obsahuje sloučeniny v kombinaci jak s antagonistou NMDA, tak i s antagonistou AMPA.
3. 3. Použití účinného množství rapamycinu, 1,3-Diels Alderova •tfv. adduktu rapamycinu s fenyltriazolindionem, 42-esteru rapamycinu s kyselinou 4-[Í4-(dimethylamino)-fenyljazojbenzensulfonovou, 1,3-Diels Alderova adduktu rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin-O-benzyl-25 27-oximu v kombinaci s antagonistou NMDA nebo AMPA pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení mrtvice, poranění hlavy nebo neurodegenerativních poruch u savce pro podávání uvedenému savci orálně, parenterálně, intravaskulárně, intranazálně, intrabronchiálně, 30 transdermálně npbo rektálně. ·♦ ·· « ·· ·· • · · « ···· ···· ···· « t · · · ·ν • · ··· · · « · « ··♦« · ·· ···· · · · - 15 -.............
4. 4. Použití podle nároku 3, vyznačující se tím, ž e farmaceutický prostředek obsahuje sloučeniny v kombinaci jak s antagonistou NMDA, tak i antagonistou s AMPA.
5. 5. Použití sloučeniny, zvolené ze skupiny rapamycin, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s fenyltriazolindionem, 42-ester rapamycinu - s kyselinou 4-[[4-(dimethylamino)-io fenyljazojbenzensulfonovou, 1,3-Diels Alderův addukt rapamycinu s methyltriazolindionem a rapamycin-O-benzyl-27-oxim v kombinaci s antagonistou NMDA nebo AMPA pro výrobu neuroprotektivního prostředku pro podávání účinného množství uvedené sloučeniny savci v případě potřeby orálně, 15 parenterálně, intravaskulárně, intranazálně, intrabronchiálně, transdermálně nebo rektálně.
6. 6. Použití podle nároku 5, vyznačující se tím, ž e farmaceutický prostředek obsahuje sloučeniny v 2o kombinaci jak s antagonistou NMDA, tak i antagonistou AMPA. Zastupuje: