DD201024A1

DD201024A1 - Verfahren zur herstellung von cyclo [eledoisin(6-11)-hexapeptid]

Info

Publication number: DD201024A1
Application number: DD81231955A
Authority: DD
Inventors: Hans-Dieter Jakubke; Klaus Neubert; Bianka Hartrodt; Johanna Mansfeld; Jutta Bergmann; Burkhard Mehlis
Original assignee: Jakubke Hans Dieter; Klaus Neubert; Bianka Hartrodt; Johanna Mansfeld; Jutta Bergmann; Burkhard Mehlis
Priority date: 1981-07-21
Filing date: 1981-07-21
Publication date: 1983-06-29

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des homodet-cyclischen Eledoisin(6-11)-hexapeptides. Das Cyclopeptid ist ein potentieller Antagonist der Tachykininwirkstoffe. Die Darstellung des cyclischen Eledoisin(6-11)-hexapeptides erfolgt durch Ringschlussreaktion der linearen Vorstufe H-Leu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-OH nach verschiedenen strategischen Varianten. Das lineare Hexapeptid wird durch Segmentkondensation aufgebaut. das Cyclopeptid ist fuer die pharmazeutische Industrie und die klinische Pharmakologie von Interesse.

Description

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Anwendungssebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des homodet-cyclisehen EledoisinCö - 1T,)-hea:speptides. Eledoisin gehört zur Gruppe der (Tachykinine, die sieb durch glatfmuskulär-kontrshierende, hypotensive und sialoge Wirkungen auszeichnen, wobei das C-terminale Pentapeptid(7 - 11;) Träger der biologischen Aktivität ist. Das homodet-cycliache EledoisinCS - 11 )-he;xapeptid ist ein potentieller Antagonist der Tachykinin-Wirkstoffe· Die Erfindung ist von Bedeutung für die.pharmazeutische Industrie und die klinische Pharmakologie,

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

Die Cyclisierung nativ vorliegender linearer Peptidwirkstoffe für biologische Aktivitätsuntersuchungen in Richtung Wirkungsdifferenzierung ist bekannt»

So wurden im Rahmen von Untersuchungen über den Einfluß der Konformationsstabilisierung auf die biologische Aktivität u,a· die linearen Peptide Kallidin, Bradykinin, luteinisierendes Hormon-Releasing Hormon und Substanz P-Teilsequenzen cyclisiert (vgl. beispielsweise <T· Meienhofer, Mebigs Ahn·

Chem· 69J., 218 (1966); M. Mutulis et al», 5. Alluni ons sym^ posium über Chemie und Physik der Eiweiße und Peptide, Baku, ökt» 1i980, UdSSHj H. David et al., Central nervous System Effect of Hypothalamie Hormones and other Peptides (Ed· by Collu et al«), Raven Press, New York, 1979, S. 317; K. Herbert et al·, Peptides 1978, Proceed, of the 15^tb European Peptide Symposium _t Gdansk, Poland, Sept· 1978 (Ed. Z. Siemion, G· Kupryszewski), Wroclaw University Press, Foland 1979, S. 455).

Die Ringschlußreaktion der entsprechenden linearen Peptidsequenz erfolgte unter Verdünnungsbedingungen nach den in der Peptidchemie üblichen Cyclisierungsstrategien (vgl. B. Wünsch, Synthese von Peptiden in Houben-Weyl Bd. 15/11, Methoden der organischen Chemie (Ed. E. Müller), Georg Thieme-Verlag Stuttgart, 1974). Die Herstellung von homodet-cyclischem Eledoisin bzw. Eledoisin-Partialsequenzen ist aus der Literatur bisher nicht bekannt·

Ziel der Erfindung

Das Ziel der Erfindung ist ein einfaches Verfahren zur Herstellung des horaodet-cyclischen Eledoisin(6 - 1T;)-hexapeptides durch Ringschlußreaktion von H-Ieu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-CH (.Aminosäuresymbole entsprechend IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature, J. Bio!· Chem. 247, 977 (1972) ), wobei der Aufbau der linearen Torstufe in einfacher Weise durch Segmentkondensation erfolgt.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, durch Cyclisierung des linearen Peptides H-Leu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-CH unter Yerdünnungsbedingungen cyclo-[Eledoisin(6 - 1t)-hexapeptidJ herzustellen*

Für den Aufbau der linearen Vorstufe sind mehrere strategische Varianten möglich, da die Ringschlußreaktion prinzipiell

Li 1 955 4

an jeder Aminosäure, erfolgen kann· Die gewählte Segmentkondensation (2+4 Verknüpfung) mit C-terminalem Glycin besitzt den Vorteil, daß bei der nachfolgenden Cyclisierungsreaktion eine Racemisierung ausgeschlossen wird·. Die mit Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens dargestellte Verbindung ist durch die Pormel I

LAIa - Phe - lie - GIy - Leu - Met J (I) S 7 8 9 10 111

gekennzeichnet»

Als Zwischenprodukte zur Darstellung der Verbindung der Pormel (I) dienen die linearen geschützten Hexapeptide der Formel (II)

X - Met - leu - AIa - Phe - lie - GIy - Y (II),

worin X für tert* Butyloxycarbonyl; Benzoyloxycarbonyl; unterschiedlich substituierte Benzoyloxycarbonyl-Verbindungen; o-Sfitropheny !sulfenyl ; 2-p-Biph enylisopropyloxycarbony1; <*,<*^f-Dimethyl-3,5-dimethosybenzyloxycarbonyl und Έ für CH; Methyl-;: Ethyl-; tert» Butyl-; Phenacyl-^ Benzyl-; unterschiedlich substituierte Benzylester steht» Die Verbindungen der Pormel (II) werden durch Segmentkondensation hergestellt, die dadurch gekennzeichnet ist, daß man ein geschütztes Dipeptid der Pormel (III)

X - Met - Leu - S (ΙΙΓ),

worin T die oben genannte Bedeutung besitzt und S für CH; p-Hitrophenyl-; H-Hydroxysuccinimid^ Pentachlorphenyl-^ Trichlorphenyl-; Pentafluorphenylester; Hydrazid steht, mit einem Tetrapeptid der Pormel (IV)

H-AIa- Phe - lie - GIy - Y (IV),

worin Y wie oben definiert ist, nach den in der Peptidchemie üblichen Kupplungsmethoden (vgl·. B, Wünsch, Bd* 15/H s.o.) DCC, Mischanhydrid-, Azid-, vorzugsweise über das DCC/Addi-

J ^f ^s w

tiv- oder das Aktivester-Verfahren - verknüpft. Die Verbindungen der Formel II werden in die als Cyclisierungsvorstuf en dienenden Verbindungen der Formel (V)

H - Met - Leu - AIa - Phe - He - GIy-T (V),

worin T für CH; Hydrazid oder Aktivester, u.a. p-Uitrophenyl-;; IT-fiydr oxy succinimide Pentafluorphenyl-r Trichlorphenyl-; Pentachlorphenylester steht, nach folgenden Varianten überführt:

1·Für Y in der oben genannten Definition entsprechend der Schutzgruppenkombination X/Y durch simultane bzw· aufeinanderfolgende Entfernung der Carboxyl- und Aminoschutzgruppe nach den in der Peptidchemie für diese Schutzgruppen üblichen Deblockierungsmethoden (Acidolyse, Hydrolyse, Hydrogenolyse - vgl« E, Wünsch Bd, 15/1 a· o,)*

2* Für den Fall Y = Methyl-; Ethyl-; Benzyl-j substituierte Benzylester durch Hydrazinolyse und anschließende Abspaltung der Aminoschutzgruppe Z durch Acidolyse bzw. Hydrogenolyse·

3* Für Y in der oben genannten Bedeutung nach Freisetzung der Carboxylgruppe durch selektive..Entfernung von Y in Abhängigkeit von der Hatur der Aminoschutzgruppe X durch alkalische oder saure Hydrolyse, Hydrogenolyse, Zn/Sisessig oder Hatriumthiophenolat-Behandlung, anschließende Überführung der als. Zwischenprodukte erhaltenen H-Acylpeptide in N-Acyl-hexapeptid-aktivierte Ester (H-Hydroxysuccinimid-; Pentafluorphenyl-; Trichlorphenyl-ϊ Pentachlorphenyl-; vor allem p-Nitrophenylester) mit Hilfe der DCC- bzw. Mischanhydrid-Methode (vgl, E, Wünsch, Bd, 15/H a· o,) und nachfolgende Entacylierung mittels Acidolyse bzw. Hydrogenolyse,

Die Verbindungen der Formel (V) werden für T =» CH nach der DCC- bzw. DCC/Additiv-Methode, vorzugsweise DCC/H-Hydroxysuccinimid, für T = Hydrazid nach dem Azidverfahren und für

T - aktivierter Eater in der oben genannten Definition durch intramolekulare Aminolyse bei Temperaturen von 20; bis 70 ^σΟ, vorzugsweise über den entaprechenden p-Hitrophenylester, unter Verdünnungsbedingungsn cyclisiert und nach Abtrennung nichtcyclischer Verbindungen durch Behandlung mit sauren und basischen Ionenaustauschern durch Gelfiltration an Sephadex LH-20 gereinigt, wobei man in allen Fällen das homodetcyclische Eledoisin(6 - 11)-hexapeptid der Formel CE) erhält«

Ausführungsbeispiele

Die.Erfindung soll nachstehend anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden

Es werden folgende Abkürzungen verwendet::

Aminosäuresymbole entsprechend IUPAC-IUB Commission on Biochemical nomenclature,. JV Biol· Chem· 247, 977 (1972)

AcQE Essigsäure

Boc tert. Butyloxycarbonyl

DC Dünnschichtchromatogramm^

-* Chromatograph is ch

DCC UjH'-Dicyclohexylcarbodiimid

DffiF Dimethylformamid

EE Essigsäureethylester

h Stunde(n)

HOBt 1-Hydröxybenzotriazol

EOSSn N-Hydroxysuccinimid

i^Vak« im Vakuum

IM Lösungsmittel

-OtfSu H-Hydroxysuccinimidester

-OHp p-Eitrophenylester

PE Petrolether

RT Raumtemperatur

THF Tetrahydrofuran

Folgende Laufmittelsysteme (in Volumenanteilen) zur dünnschichtchromatographischen Reinheitskontrolle der Synthese-

O I Ό 3 Ό

produkte auf Silicagel-Fertigplatten (Silufol werden verwendet:

2-Butanol-Ameisensäure-Wasser 75+13,5+11',?

BEW r I-Butanol-Essigsäure-Wasser 80+20+20

BPEWr. I-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser 30+20+6+241

GU z, Chloroform-Methanol 90-10

CMB : Chlorofoim-Methanol-Easigsäure 1110+6+3,6

Beispiel I

cycloCEledoisin(6 - 11i)-he3:apeptid3 - Ringschluß mittels DCG/HOKSu

I. 1, Boc - AIa - Phe - lie - GIy - OH

Eine lösung von 1,9 g (6,6 mMol)' Boc-Ala-OHSu in 20 ml DMP wird bei. 0 ⁰C mit 2,45 g (6,6 mMol) H-Phe-Ile-Gly-OH.HCl (erhalten durch schrittweisen Aufbau vom C-Terminua durch Anknüpfung der entsprechenden Boc-Aminosäure-OHSii^ Entacylierung mittels 1,1 H HCl/AcCH) und 0,74 ml (6,6

thylmorpholin versetzt. Der Ansatz wird 1 h bei 0 C und weitere 24 h bei RT gerührt. Danach wird die Lösung mit iger Zitronensäure auf pH 3 gebracht, das ausgefallene Produkt abgesaugt, nacheinander mit verd« Zitronensäure, Wasser O und wenig EE auf der Pritte gewaschen und i· Vak. über ^2^3

getrocknet. Das Rohprodukt wird zweimal aus DMP/Ether umgefällt.

Ausbeute: 2.27 g (68 % d. Th.)

Schmp.: 176 - 179 ⁰C

Cc*] D²⁰* - 22,Q ^0: (c = - 1, 33SaP)

DCr einheitlich in BEW und BPEW

^ (506,6)

Ber. C 59,27 H 7,56 I 11,06 Gef» C 59,08 H 7,41 H 11:,O5^::

I* 2. Boc - leu - Met - OUSu

2,5 g (10 mMol) Boc-Leu-OH werden unter Argonatmosphäre in 25 ml THP gelöst, mit 1,1^; ml (10 mMol) SM/Ietfaylmorpholin versetzt und bei - T5 ⁰O unter Rühren 1,3 ml (t.O rsMol) Chlorkohlensäureisobutylester hinzugegeben· Nach 6 Min. werden 1,1 ml (10 mMöl) ΪΓ-iTethylmorpholin und sofort danach 2,82 g (1GmMol) H-Met-ÖNSu-HCl (aus der entsprechenden Boc-Yerbindung durch Entacylierung erhalten) in 20 ml THi¹ hinzugefügt und-der Ansatz eine Stunde bei - 15 ⁰CJ und 2 h bei RO?. gerührt. Nach Zugabe von 5 ml Wasser wird das IM: i. Yak» abgezogen, der Rückstand in EE aufgenommen, nacheinander mit Fasser, gesatt. IaHCQ^-Lösung, Wasser, 5%iger EHSO₄-Lösung und Wasser gewaschen und über Ua₂SO₄ getrocknet. Der SE wird i. Yak. verdampft und der ölige Rückstand zur Kristallisation mit. PE überschichtet. Das Rohprodukt wird zweimal aus EE/PE umgefällt,

Ausbeuter 2,3 g (50 % d. Th.) Schmp«t 127 - 129 ⁰GT

t - 39,2 ® (o *1, EE)

einheitlich in BPEW und

(459,6) Ber, C 52,27 H 7,24

Gef. C 52,02-· H 7,20 Έ 8,97

I· 3* Boc-L-Leucyl-L-methionyl-L-aäLanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycin

a): DCC/HOBt-Methode

Zu einer Lösung von 1,27 g (3,5 mMol) Boc-Leu-Met-OE und 0,47 g (3,5. mMol) HOBt in 8 ml DMP werden bei 0 ⁰C 0,72 g (3,5 mMol) DCC in 2 ml DMP hinzugefügt und die Mischung 1 h bei RT gerührt. Danach wird der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff abgetrennt und das Piltrat bei 0 ⁰C mit einer Lösung von 1,33 g (3 mMol) A-AIa-PhC-IIe-GIy-OHi-HCl (erhalten durch Entacylierung von I. 1. mit 1,1 Ή HCl/AcOH) in 5 ml

DMP vereinigt. Man gibt 0,33 ml (3 mMol) I-Methylmorpholin hinzu und rührt den Ansatz 30 Min· bei 0 ⁰C und 10 h bei RT, Anschließend engt man i· Vak. ein, verrührt den Rückstand mit 5 % KHSO^-Lösung, saugt ab und wäscht das Rohprodukt nacheinander mit Wasser, gesätt. UaHCO-^Lösung und Wasser. Das getrocknete Hexapeptid wird mit El und wenig Methanol gewaschen und aus DMP/Ether umgefällt,

Ausbeute: 1,8 g (80$d,Th·)

Schmp,s ab 270 ⁰C Zers.

kx]_D r - 26,7 ^ω (c= 0,5; DMP)

DCr einheitlich in BAW und BEW

SAT¹W* (750,9)

Ber·' C 57,57 H 7,78 Έ ir,19

Gef* C 57,28 H 7,92 S 11!,Ot

Aminosäure analyse:, Leu 1,OG;: Met 0,87s AIa 1,02;·

Ph e 1,10*116 0,98^ GIy 1,03

b) Methode der aktivierten Ester

1,4 g (3 mMol) Boc-Ieu-raet-OHSu werden in 10 ml DMP gelöst, auf 0 ⁰C abgekühlt, 1,33 g (3 mMol) H-AIa-Phe~Ile-GIy-BH-HCl sowie 0,33 ml (3 mMol) ΪΓ-Methylmorpholin hinzugegeben und der Ansatz 2 h bei Q; ⁰G" und 24 h bei RT gerührt. Danach wird das Rohprodukt durch Zugabe von 5%iger KHSO.«Lösung ausgefällt und wie unter a) beschrieben aufgearbeitet,

Ausbeuter 1,7 g (76 % d. Th.)

Bs ist in den analytischen Daten mit dem nach Variante a) erhaltenen Produkt identisch·

I, 4, cycloCAla-Phe-Ile-Gly-Leu-Met]

0,83 g (1,2MnMoI) H-Leu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-OH'HCl (erhalten durch Deblockierung von I. 3. mittels 1,1 Έ HCT/AcOH, 40 Min. bei 20 °er, Argonatmosphäre) werden in 10 ml DMP gelöst, mit:

Pyridin auf 100 ml verdünnt und mit 0,175 ml (1,25 mMol) Tr3 ethylamin 30 Min. bei Rt geschüttelt. Danach fügt man 2,76 g (24 mlol) HONSu in 1.00 ml Pyridin hinzu und tropft die Lösua unter Rühren innerhalb von 24 fc bei ST zu 4,94 g (24 mMol) DCC in 1,5 1 Pyridin. Uach weiteren 72 h werden 8 ml 50%ige AcGH zugegeben, der Ansatz i_# Tfak. auf ca» 10 ml eingedampft abgekühlt und vom Dicyclohexy!harnstoff? befreit. Das Filtrat wird zur Trockne eingedampft, der Rückstand in 1OQ ml Methanol/Wasser (4 t- 1) gelöst und jeweils 1,5 h mit 15 g Dowex 1X-2 (CH~-Form) sowie 15 g Dowex 50WX-2 (H+-Form) gerührt. Die Ionenaustauscherharze werden nach Abfiltrieren mit jeweils 100 ml derselben LM-Mischung nachgewaschen und das Filtrat i« Vak* eingedampfte Das Rohprodukt wird aus DMF/ Ether umgefällt, abgesaugt, getrocknet, in 2 ml DMF gelöst und an Sephadez IH-20 (2,5 x 110 cm) mit DMF als Elutionsmittel chrqmatographiert»

Ausbeuter 180 mg (24 % d. Th.)

Schmp* ε	29 σ -' 295	(c =*	H 7	0,5?	AcCH)	283
	- 14,3 °	einheitlich in	H 7	BBW,		74
DCr		(632,8)	Phe			1,05;:
	C 58,83:	Leu	,64	BAW und CM	0,97.
Ber?	C 58,52		,45
Gef^T	AIa H,OÖ;	11,08?	.BF 13,
alyse r	GIy 1,02^	1 ,-OQs	'HT 13,
			lie
Met

Beispiel ΙΈ

cycloCEledoisin(6 - 11i)-J3eaapeptid3 - intramolekulare Est eraminolyse

1. Boc - Leu - Met - AIa - Phe - lie - GIy - OHp 1,1 S (1»46 mMol) Boc-Leu-Met-AIa-Phe-Ile-Gly-GE werden in

10 ml DME gelöst und bei - TO ⁰C mit 0,22 g (1,68 mMol) p-Uitrophenol und 0,33 g (1,65 mMol) DCC, in 5 ml DM3? gelöst, versetzt. Der Ansatz wird 2 h bei - 10 ⁰C, 12 h bei 0 ⁰C und 18 h bei RT gerührt»

Danach wird der entstandene Dicyclohexylharnstoff abgetrennt, das DMP i. Yak·: abgedampft, der Rückstand mit Ether verrieben, abgesaugt, auf der Fritte mit gesätt. HaHCO~-Lösung, Wasser und EE gewaschen, am Soxleth mit Ether extrahiert und anschließend aus DMF/Ether umgefällt.

Ausbeute: 0,92 g (72 % d. Th.) Schmp.:. ab 290 ⁰C Zers.

| : - 41,3 ° (c =1, AcOH) DC: einheitlich in BAW" und BPEW

II* 2v" cycloCAla-Phe-Ile-Gly-Leu-Met 3

0»T g (0,8 mlol) H-Leu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-OHp'Trifluorcacetat (erhalten durch Ent acylierung von HV 1· mittels Trifluoressigsäure 20 Min. bei RT unter Argonaimosphäre) werden in 125 ml DME gelöst und innerhalb von 5 h in eine auf 50 ⁰G erwärmte Lösung von 500 ml Pyridin und 0,14 ml (1,1 mMol) H-Methylmorpholin unter Rühren eingetropft. Der Ansatz wird 35 h bei RT: weiter gerührt. Danach dampft man das LM i. Yak· ab, der Rückstand wird mit wenig Aceton gewaschen, in 80 ml Methanol/Wasser (4 : 1) gelöst, mit Ionenaustauscherharzen wie unter I. 4. beschrieben behandelt und anschließend an Sephadex LH-20)chromatographiert.

Ausbeute: 131 mg (26 % d. Th·)

Das Cyclopeptid ist in seinen analytischen Daten mit dem unter I. 4. beschriebenen Produkt identisch.

Claims

HDD

Erf ind ling s an sp rüc he

1. Verfahren zur Herstellung des homodet-cyclischen Eledoisin(6-11)-hexapeptides der Formel I

-Ala-Phe-lie-GIy-Leu-Met ^

6 7 8 9 10 11

gekennzeichnet dadurch, daß

ein Dipeptidderivat der Formel III

X-Leu-Met-S (III)

worin X = tert.-Butyloxycarbonyl; Benzyloxycarbonyl; unterschiedlich substituierte Benzyloxycarbonyl-Yerbindungen; o-Hitrophenylsulfenyl; 2-p-Biphenylisopropyloxycarbonyl; cc, o<'-Dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl bedeutet und S für OH, p-Hitrophenyl-; N-Eydroxysuccinimid-; Pentachlorphenyl-; Pentafluorphenylester; Hydraziä steht mit einem Tetrapeptidderivat der Formel 17

H-Ala-Phe-Ile-Gly-Y (I¥)

worin Y = OHi Methyl; Ethyl; tert.-Butyl; Phenacyl; Benzyl; unterschiedlich substituierte Benzylester bedeutet,

nach den üblichen Methoden der Peptidchemie wie der DCG-, der DCC/AdditiT-, der Mischanhydrid-, der Azid-, der Aktivestermethode o.dgl. zu einem linearen geschützten Hexapeptid der Formel II verknüpft wird

X-Leu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-Y (II).

das Hesapeptid der Formel II durch simultane oder aufeinanderfolgende Entfernung der Carboxyl- und Aminosehutzgruppen nach den in der Peptidchemie für diese Schutzgruppen üblichen Deblockierungsmethoden

oder durch Hydrazinolyse und anschließende Abspaltung der Aniinoschutsgruppe mittels Äcidolyse bzw. Hydrogenolyse

oder durch selektive Entfernung von Y und anschließende Umwandlung der resultierenden N-geschützten Hexapeptide

in carboxylaktivierte Derivate sowie deren nachfolgende Entacylierung

in die Cyclisierungsvorstufe der Formel V überführt wird H-Leu-Met-Ala-Phe-Ile-Gly-T (7)

worin T für eine aktivierbare oder aktivierte Carboxylgruppierung steht

und die so erhaltene Verbindung nach der DCC-, DCC/Additivmethode, nach dem AzidverfahrenT durch intramolekulare Aminolyse aktivierter Ister bei 20 - 70⁰G o.dgl. cyclisiert

und da3 erhaltene Produkt durch Ionenaustauschchromatografie und Gelfiltration an Sephadex LH 20 gereinigt wird.
2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Umwandlung des Hexapeptidderivates II in die Gyclisierungsvorstufe V durch Hydrazinolyse der Estergruppen Y = Methyl; Ethyl; substituierte Benzylgruppen und anschließende Abspaltung der Aminoschutzgruppeη X der oben genannten Definition erfolgt.
3. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Umwandlung des Hexapeptidderivates II in die Cyclisierungavorstufe V durch selektive Entfernung von Y, anschließende Überführung der Zwischenprodukte in N-geschützte carbozyl-

aktivierte Hexapeptidester und nachfolgende Abspaltung der Aminoschutzgruppen X der oben genannten Definition erfolgt.
4. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß die aktivierbare oder aktivierte Carboxy!gruppierung T in Formel V OH; Hydrazid; Aktivester?wie p-Witrophenyl-; H-Hydroxysuccinimid-; Pentafluorphenyl-; Trichlorphenyl-; Pentachlorphenylester o.dgl. ist.
5. Verfahren nach Punkt 1 und 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Cyclisierung für T = OH in Formel V nach der DCC-.bzw. DCC/Additivmethode, insbesondere nach der DCC-H-Hy- droxysuccinimidßiethode erfolgt.

-1J r
6. Verfahren nach Punkt 1 und 4, dadurch'gekennzeichnet, daß für T = Hydrazid in Formel Y die Cyclisierung nach der Azidmethode erfolgt.
7. Verfahren nach Punkt 1 und 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Cyclisierung, für T = Aktivester in Formel 1 durch intramolekulare. Aminol^se erfolgt.