DD255001A1 - Verfahren zur gewinnung eines monoklonalen antikoerpers gegen das protein p24 des rinderleukaemievirus (blv) - Google Patents
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Abstract
Ziel der Erfindung ist die Herstellung eines monoklonalen Antikoerpers gegen das Protein p24 aus BLV. Das erfindungsgemaesse Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man Myelomzellen mit Milzzellen von Maeusen, die mit BLV immunisiert wurden, mit Hilfe von PEG fusioniert. Die antikoerperproduzierenden Hybridzellen werden in bekannter Weise selektiert, kloniert und zur Antikoerperproduktion in vitro oder in vivo vermehrt. Mit dem erfindungsgemaessen Verfahren koennen monoklonale Antikoerper gegen das Protein p24 aus BLV hergestellt werden. Anwendungsgebiet der Erfindung ist die Biologie, Veterinaermedizin, Landwirtschaft und Biotechnologie.
Description
Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung monoklonaler Antikörper gegen Proteine des Rinderleukämievirus (BLV). Es wird insbesondere die Herstellung eines monoklonalen Antikörpers (mAK) gegen das Hauptstrukturprotein des BLV p24 beschrieben. Anwendungsgebiet der Erfindung sind die Veterinärmedizin, Landwirtschaft, Biotechnologie und Biologie.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Antikörper gegen Proteine können durch Immunisierung geeigneter Versuchtstiere gewonnen werden.
Werden Mäuse immunisiert, so können nach Fusion der Milzzellen mit geeigneten Myelomzellen mit Hilfe von Polyäthylenglykol (PEG) Hybridome, die mAK produzieren, gewonnen werden. Entsprechend dieser Methode wurden bereits mAK gegen das Hüllprotein gp51 aus BLV hergestellt (Bruck, C. Mathot, S., Portetelle, D., Berte, C., Franssen, J.-D., Herion, P., and Burny, A. Virology 122 [1982] 342-352). Ein mAK gegen das Protein p24 aus BLV ist bisher aus der Literatur nicht bekannt.
Ziel der Erfindung
Die Erfindung hat das Ziel, einen mAK gegen das Protein p24 des BLV mit guter Bindungsfähigkeit und hoher Spezifität herzustellen.
Darlegung des Wesens der Erfindung »
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung eines mAK gegen das Protein p24aus BLV ist dadurch gekennzeichnet, daß man Mäuse mit gereinigtem BLV immunisiert, die Milzzellen entnimmt und mit Hilfe von PEG mit Myelomzellen fusioniert. Die fusionierten Zellen werden in Mikrotestplatten ausgesät, die BLV-p24-spezifischen antikörperproduzierenden Hybridzellen mit Hilfe des radioaktiven Bindungstestes selektiert, kloniert, weitervermehrt und ggf. in flüssigem Stickstoff gelagert und zur Produktion der mAK in bekannter Weise in vitro oder in vivo kultiviert.
Man gewinnt den mAK gegen das Protein p24 des BLV durch Kultivierung des Hybridoms Nr. 0137 der Nationalen Liste.
Der mAK gegen das Protein p24des BLV ist gekennzeichnet durch eine hohe Affinität gegenüber p24. Er gehört der Immunglobulinsubklasse lgG2a an und reagiert mit p24aus BLV (Western Blot, Immunpräzipitation mit 125J-markiertem p24) und mit mikrobiell in gentechnisch manipulierten Mikroorganismen synthetisiertem p24-Derivat (Western Blot mit E.coli-pEX-Rekombinante, die das Expressionsplasmid pGAG46-200 enthält).
Ausführungsbeispiel 1. Balb/c-Mäuse wurden mit dem aus Zellkulturüberstand permanent infizierten FLK-Zeilen gereinigten BLV immunisiert. 2. Vitale p3-X63/Ag8-Myelomzellen wurden mit Milzzellen der immunisierten Tiere mit Hilfe von PEG fusioniert. Kultivierung und Klonierung erfolgte entsprechend den üblichen Methoden. 3. Die Selektion der Antikörper produzierenden Hybridome erfolgte mit einem Flüssigphasen-Radioimmuntest unter Verwendung von 125J-markiertem p24-Protein aus BLV und Anti-Maus-Antikörpern aus Kaninchen, mit dem nur Anti-p24-Antikörper erfaßt werden. 4. Das Hybridom, das Antikörper gegen Protein p 214 aus BLV stabil produziert, wurde in bekannter Weise in flüssigem Stickstoff eingefroren und zur Antikörpergewinnung in vitro oder in vivo weitervermehrt.
Claims (4)
1. Balb/c-Mäuse wurden mit dem ausZellkulturüberstand permanent infizierten FLK-Zellen gereinigten BLV immunisiert.
1. Verfahren zur Gewinnung eines monoklonalen Antikörpers, der mit ρ24 aus BLV und biosynthetisch und peptidchemisch hergestelltem p24-Derivat reagiert, dadurch gekennzeichnet, daß Myelomzellen mit Milzzellen von Mäusen, die mit BLV immunisiert wurden, mit Hilfe von PEG fusioniert werden, das anti-p24-antikörperproduzierende Hybridom in an sich bekannter Weise selektiert, kloniert und für die Antikörperproduktion in vivo oder in vitro vermehrt wird.
2. Vitale p3-X63/Ag8-Myelomzellen wurden mit Milzzellen der immunisierten Tiere mit Hilfe von PEG fusioniert. Kultivierung und Klonierung erfolgte entsprechend den üblichen Methoden.
2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß zur Produktion von monoklonalen Antikörpern gegen das Protein ρ24 aus BLV das Hybridon Nr. 0137 eingesetzt wird.
Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung monoklonaler Antikörper gegen Proteine des Rinderleukämievirus (BLV). Es wird insbesondere die Herstellung eines monoklonalen Antikörpers (mAK) gegen das Hauptstrukturprotein des BLV p24 beschrieben. Anwendungsgebiet der Erfindung sind die Veterinärmedizin, Landwirtschaft, Biotechnologie und Biologie.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Antikörper gegen Proteine können durch Immunisierung geeigneter Versuchtstiere gewonnen werden. Werden Mäuse immunisiert, so können nach Fusion der Milzzellen mit geeigneten Myelomzellen mit Hilfe von Polyäthylenglykol (PEG) Hybridome, die mAK produzieren, gewonnen werden. Entsprechend dieser Methode wurden bereits mAK gegen das Hüllprotein gp51 aus BLV hergestellt (Brück, C. Mathot, S., Portetelle, D., Berte, C, Franssen, J.-D., Herion, P., and Burny, A. Virology 122 [1982] 342-352). Ein mAK gegen das Protein p24 aus BLV ist bisher aus der Literatur nicht bekannt.
Ziel der Erfindung
Die Erfindung hat das Ziel, einen mAK gegen das Protein p24 des BLV mit guter Bindungsfähigkeit und hoher Spezifität herzustellen.
Darlegung des Wesens der Erfindung
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung eines mAK gegen das Protein p24aus BLV ist dadurch gekennzeichnet, daß man Mäuse mit gereinigtem BLV immunisiert, die Milzzellen entnimmt und mit Hilfe von PEG mit Myelomzellen fusioniert. Die fusionierten Zellen werden in Mikrotestplatten ausgesät, die BLV-p24-spezifischen antikörperproduzierenden Hybridzellen mit Hilfe des radioaktiven Bindungstestes selektiert, kloniert, weitervermehrt und ggf. in flüssigem Stickstoff gelagert und zur Produktion der mAK in bekannter Weise in vitro oder in vivo kultiviert.
Man gewinnt den mAK gegen das Protein ρ24 des BLV durch Kultivierung des Hybridoms Nr. 0137 der Nationalen Liste. Der mAK gegen das Protein p24des BLV ist gekennzeichnet durch eine hohe Affinität gegenüber ρ24. Er gehört der Immunglobulinsubklasse lgG2a an und reagiert mit p24 aus BLV (Western Blot, Immunpräzipitation mit 126J-markiertem p24) und mit mikrobiell in gentechnisch manipulierten Mikroorganismen synthetisiertem ρ24-Derivat (Western BlotmitE.coli-pEX-Rekombinante, die das Expressionsplasmid pGAG46-200 enthält).
Ausführungsbeispiel
3. Die Selektion der Antikörper produzierenden Hybridome erfolgte mit einem Flüssigphasen-Radioimmuntest unter Verwendung von 125J-markiertem p24-Protein aus BLV und Anti-Maus-Antikörpern aus Kaninchen, mit dem nur Anti-p24-Antikörper erfaßt werden.
4. Das Hybridom, das Antikörper gegen Protein ρ 214 aus BLV stabil produziert, wurde in bekannter Weise in flüssigem Stickstoff eingefroren und zur Antikörpergewinnung in vitro oder in vivo weitervermehrt.
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|---|---|---|---|
| DD29659386A DD255001A1 (de) | 1986-11-24 | 1986-11-24 | Verfahren zur gewinnung eines monoklonalen antikoerpers gegen das protein p24 des rinderleukaemievirus (blv) |
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Publications (1)
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| DD255001A1 true DD255001A1 (de) | 1988-03-16 |
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| Country | Link |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110078820A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-08-02 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） | 牛白血病病毒抗体及检测试剂盒 |
| CN116284352A (zh) * | 2022-08-22 | 2023-06-23 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） | 牛白血病病毒抗体及检测试剂盒 |
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1986
- 1986-11-24 DD DD29659386A patent/DD255001A1/de not_active IP Right Cessation
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