DE3851238T2

DE3851238T2 - Antikoagulierende Peptide.

Info

Publication number: DE3851238T2
Application number: DE3851238T
Authority: DE
Inventors: John L Krstenansky; Simon J T Mao
Original assignee: Merrell Dow Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1987-01-23
Filing date: 1988-01-22
Publication date: 1995-03-16
Anticipated expiration: 2008-01-23
Also published as: AR245140A1; EP0276014A3; IL85159A; JPS63215698A; PT86600B; NO174105B; EP0276014B1; ATE110743T1; FI880286A7; HU199159B; NZ223236A; EP0276014A2; IL85159A0; PH26263A; AU1072988A; FI89060C; ES2063740T3; DK31088A; NO880268L; CA1341032C

Description

Antikoagulanzien sind nützliche therapeutische Wirkstoffe beispielsweise für die pharmakologische Behandlung einer akuten tiefen Venenthrombose, Lungenembolie, akuten arteriellen Embolie der Extremitäten, eines Herzinfarkts und einer gestreuten intravaskulären Koagulation. Es wird angenommen, daß eine prophylaktische Verabreichung von Antikoagulanzien ein Wiederauftreten einer Embolie in Patienten mit einer rheumatischen oder arteriosklerotischen Herzerkrankung und bestimmte operative thromboembolische Komplikationen verhindert. Eine Verabreichung von Antikoagulanzien ist auch bei der Behandlung von Erkrankungen der Koronararterien und Hirngefäße indiziert. Die arterielle Thrombose, besonders in Herz, Muskel und Gehirn versorgenden Arterien, ist eine der Haupttodesursachen.
Hirudin ist ein Polypeptid von 65 Aminosäuren, das aus den Speicheldrüsen von Blutegeln isoliert wird. Es ist ein antikoagulierend wirkendes Mittel, das Thrombin spezifisch hemmt. Obwohl aus Blutegelextrakten isoliertes Hirudin sehr potent ist, ist seine klinische Verwendung aufgrund seiner nur begrenzt zur Verfügung stehenden Mengen, den Kosten und den üblicherweise nach einer Verabreichung eines jeden Fremdproteins dieser Größe auftretenden allergischen Reaktionen unwahrscheinlich.
Krstenansky, J. L. et al., FEBS Letters 211(1) (1987), 10-16, beschreiben die Antithrombin-Eigenschaften des C-Terminus von Hirudin 1 bis 65.
Krstenansky, L. et al., J. Med. Chem. 30 (September 1987), 1688-1691, beschreiben Analoge von C-terminalen Hirudinfragmenten, zu denen die mit der Aminosäure Ala in Position 62 gehören (vgl. Tabelle III, Peptid 13).
Die Anmelder haben festgestellt, daß eine spezifische Region von Hirudin zumindest teilweise für seine Aktivität als Antikoagulans verantwortlich ist. Diese Region ist chemisch synthetisiert worden, und bestimmte ihrer Analoge binden anscheinend an die Erkennungsstelle von Thrombin, jedoch nicht an die räumlich von ihr getrennte enzymatische Spaltstelle. Eine Bindung der synthetischen Peptide verhindert kompetitiv eine Bindung des Fibrinogens an die Erkennungsstelle von Thrombin, eine Vorbedingung für die Fibrinerzeugung und Blutgerinnselbildung. Die erfindungsgemäßen Peptide weisen eine signifikante Aktivität als Antikoagulans auf, und ihre ungewöhnliche Fähigkeit, lediglich an die Erkennungsstelle und nicht an die Spaltstelle von Thrombin zu binden, kann einen wissenschaftlich interessanten und therapeutisch signifikanten Beitrag zur Therapie mit Antikoagulanzien leisten.

Peptidderivate der Formel

X-A&sub1;-A&sub2;-A&sub3;-A&sub4;-A&sub5;-A&sub6;-A&sub7;-A&sub8;-A&sub9;-A&sub1;&sub0;-Y
in der
X ein aminoterminaler Rest ist, der aus einem Wasserstoffatom, einem oder zwei Alkylresten mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, einem oder zwei Acylresten mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen, Carbobenzyloxy- oder t-Butyloxycarbonylgruppen ausgewählt ist,
A&sub1; eine Bindung oder ein Peptid darstellt, das 1 bis 5 Reste beliebiger Aminosäuren enthält,
A&sub2; Phe, ortho-, meta- oder para-, mono- oder disubstituiertes Phenylalanin, β-(2-Thienyl)alanin, β-(3-Thienyl)alanin, β-(2-Furanyl)alanin, β-(3-Furanyl)alanin, β-(2- Pyridyl)alanin, β-(3-Pyridyl)alanin, β-(4-Pyridyl)alanin, β- (Benzothien-2-yl)alanin, β-(Benzothien-3-yl)alanin, β-(1- Naphthyl)alanin, β-(2-Naphthyl)alanin Tyr oder Trp bedeutet,
A&sub3; Glu oder Asp darstellt,
A&sub4; eine beliebige Aminosäure ist,
A&sub5; Ile, Val, Leu, NorLeu oder Phe bedeutet,
A&sub6; Pro, Hydroxyprolin, 3,4-DehydroPro, Thiazolidin-4- carboxylat, Sarcosin oder N-Methylphenylglycin oder D-Ala darstellt,
A&sub7; eine beliebige Aminosäure ist,
A&sub8; eine beliebige Aminosäure mit Ausnahme von Ala ist,
A&sub9; eine lipophile Aminosäure, die aus Tyr, Trp, Phe, Leu, NorLeu, Ile, Val, Cyclohexylalanin und Pro ausgewählt, oder ein Dipeptid ist, das mindestens eine dieser lipophilen Aminosäuren enthält,
A&sub1;&sub0; eine Bindung oder ein Peptidfragment darstellt, das 1 bis 5 Reste beliebiger Aminosäuren enthält und Y einen C-terminalen Rest darstellt, der aus einer OH-Gruppe, einem (C&sub1;-C&sub6;)-Alkoxyrest, einer Aminogruppe, einer mono- oder di-(C&sub1;-C&sub4;)-alkylsubstituierten Aminogruppe ausgewählt ist,
und die pharmazeutisch verträglichen Salze davon sind nützliche Antikoagulanzien.
Die üblichen, nachstehend angegebenen Abkürzungen der Aminosäuren werden in dieser Anmeldung verwendet:
Cha - Cyclohexylalanin
Orn - Ornithin
Glt - Glutaryl
Mal - Maleyl
NpA - beta-(2-Naphthyl)alanin
Gly - Glycin
Ala - Alanin
Val - Valin
Leu - Leucin
Ile - Isoleucin
Pro - Prolin
Phe - Phenylalanin
Trp - Tryptophan
Met - Methionin
Ser - Serin
Thr - Threonin
Cys - Cystein
Tyr - Tyrosin
Asn - Asparagin
Gln - Glutamin
Asp - Asparaginsäure
Glu - Glutaminsäure
Lys - Lysin
Arg - Arginin
His - Histidin
Nle - Norleucin
Hyp - Hydroxyprolin
3,4-DehydroPro - 3,4-Dehydroprolin
Tyr(SO&sub3;H) - Tyrosinsulfat
Pgl - Phenylglycin
NMePgl - N-Methylphenylglycin
Sar - Sarcosin (N-Methylglycin)
pSubPhe - para-substituiertes Phenylalanin
SubPhe - ortho-, meta- oder para-, mono- oder disubstituiertes Phenylalanin
DAla - D-Alanin
Ac - Acetyl
Suc - Succinyl
pClPhe - para-Chlorphenylalanin
pNO&sub2;Phe - para-Nitrophenylalanin.
Ein Alkylrest und der Alkylteil eines Alkoxyrestes können gerade, verzweigte oder zyclische Alkylreste beinhalten, beispielsweise Methyl-, Ethyl-, Propyl-, isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, tert. -Butyl-, Pentyl-, Isopentyl-, sec. - Pentyl-, Cyclopentyl-, Hexyl-, Isohexyl-, Cyclohexyl- und Cyclopentylmethylreste. Ein Acylrest mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen kann gerade, verzweigte, zyclische, gesättigte und nicht-gesättigte Acylreste mit 1 oder 2 Carbonyleinheiten pro Rest beinhalten, beispielsweise Acetyl-, Benzoyl-, Maleyl-, Glutaryl- und Succinylgruppen. Ein Halogenrest ist ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Iodrest.
Der Begriff "jede Aminosäure", wie hier verwendet, schließt die natürlich vorkommenden Aminosäuren sowie andere, üblicherweise bei der Herstellung von synthetischen Analogen von natürlich vorkommenden Peptiden in der Peptidchemie verwendeten "nicht-Protein"-α-Aminosäuren ein. Die natürlich vorkommenden Aminosäuren sind Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Serin, Methionin, Threonin, Phenylalanin, Tyrosin, Tryptophan, Cystein, Prolin, Histidin, Asparaginsäure, Asparagin, Glutaminsäure, Glutamin, Arginin, Ornithin und Lysin. Beispiele von "nicht-Protein"α-Aminosäuren sind Norleucin, Norvalin, Alloisoleucin, Homoarginin, Thiaprolin, Dehydroprolin, Hydroxyprolin (Hyp), Homoserin, Cyclohexylglycin (Chg), α-Amino-n-buttersäure (Aba), Cyclohexylalanin (Cha), Aminophenylbuttersäure (Pba), Phenylalanine, die in der ortho-, meta- oder para-Stellung der Phenyleinheit mit einer oder zwei der nachstehend aufgeführten Gruppen, einem (C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl- oder (C&sub1;-C&sub4;)- Alkoxyrest, Halogen- oder Nitrogruppen, substituiert sind oder mit einer Methylendioxygruppe, mit β-2- und 3-Thienylalanin, β-2- und 3-Furanylalanin, β-2-, 3- und 4-PyridylaIanin, β-(Benzothienyl-2- und 3-yl)alanin, β-(1- und 2- Naphthyl)alanin, O-alkylierten Derivaten von Serin, Threonin oder Tyrosin, S-alkyliertem Cystein, den O-Sulfatestern von Tyrosin, 3,5-Diiodtyrosin und den D-Isomeren der natürlich vorkommenden Aminosäuren.
Der Begriff "lipophile Aminosäure" schließt Tyr, Phe, Leu, Nle, Ile, Val, His und Pro ein.
Die natürlichen Aminosäuren mit Ausnahme von Glycin enthalten ein chirales Kohlenstoffatom. Sofern nicht ausdrücklich anders angegeben weisen die hier beschriebenen, optisch aktiven Aminosäuren die L-Konfiguration auf. Beispielsweise kann jede Aminosäure der A&sub1;- oder A&sub1;&sub0;-Gruppe die D- oder L-Konfiguration aufweisen. Wie üblich ist in der Struktur der hier ausgeschriebenen Proteine das aminoterminale Ende auf der linken Seite und das carboxyterminale Ende auf der rechten Seite der Kette.
Die Polypeptide der Formel 1 können pharmazeutisch verträgliche Salze mit jeder nichttoxischen, organischen oder anorganischen Säure bilden. Zu den anorganischen Säuren, die geeignete Salze bilden, gehören beispielsweise die Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Schwefel- und Phosphorsäure und saure Metallsalze, beispielsweise Natriummonohydrogenorthophosphat und Kaliumhydrogensulfat. Zu den geeignete Salze bildenden, organischen Säuren gehören beispielsweise die Mono-, Di- und Tricarbonsäuren. Zu solchen Säuren gehören beispielsweise die Essig-, Glycol-, Milch-, Brenztrauben-, Malon-, Bernstein-, Glutar-, Fumar-, Äpfel-, Wein-, Zitronen-, Ascorbin-, Malein-, Hydroxymalein-, Benzoe-, Hydroxybenzoe-, Phenylessig-, Zimt-, Salicyl-, 2- Phenoxybenzoe- und Sulfonsäuren, beispielsweise Methansulfon- und 2-Hydroxyethansulfonsäure. Zu den Salzen der carboxyterminalen Aminosäureeinheit gehören die nichttoxischen, mit allen geeigneten anorganischen oder organischen Basen gebildeten Salze der Carbonsäuren. Zu diesen Salzen gehören beispielsweise die der Alkalimetalle, beispielsweise Natrium und Kalium, Erdalkalimetalle, beispielsweise Calcium und Magnesium, Leichtmetalle der Gruppe ITIA einschließlich Aluminium, und organische primäre, sekundäre und tertiäre Amine, beispielsweise Trialkylamine, einschließlich Triethylamin, Procain, Dibenzylamin, 1-Ethenamin, N,N' -Dibenzylethylendiamin, Dihydrodiethylamin, N-(Nieder)alkylpiperidin und jedes andere geeignete Amin.
Wie bei jeder chemischen Verbindungsklasse sind bestimmte Gruppen bevorzugt. Die Anmelder bevorzugen die Peptidderivate der Formel 1, in der
X ein Wasserstoffatom, eine Acetyl- oder Succinylgruppe ist.
Ebenfalls bevorzugt sind die Verbindungen der Formel 1, in denen
A&sub1;-His-Asn-Asp-Gly-Asp-, -Asn-Asp-Gly-Asp-, -Asp- Gly-Asp-, -Gly-Asp-, -Asp- oder eine Bindung ist,
A&sub2; vorzugsweise Phe, β-2- oder 3-Thienylalanin, Tyr, Trp, pC1Phe oder Npa ist,
A&sub3; Glu ist,
A&sub4; Glu, Asp, Pro oder Ala ist,
A&sub5; Ile oder Leu ist,
A&sub6; Pro, Sar, D-Ala, Hyp oder NMePgl ist,
A&sub7; Glu, Asp, Ala oder Gln ist,
A&sub8; Glu, Asp oder Ala ist,
A&sub9; Pro, Ala-Tyr, Ala-Cha, Tyr-Cha, Tyr-Leu, Ala-Phe oder Tyr-Tyr ist,
A&sub1;&sub0; Glu, Asn, Asp-Glu, Pro, Gln, Ala, eine Bindung, D-Lys, Lys, D-Asp oder Orn ist und Y OH oder NH&sub2; ist.
Besonders bevorzugt sind die Peptidderivate der Formel 1, in denen entweder X ein Acetylrest und A&sub1; Gly-Asp oder Asp oder X ein Succinylrest und A&sub1; eine Bindung ist, und in denen A&sub2; Phe, β-(2-Thienylalanin) oder Tyr ist,
A&sub3; Glu ist,
A&sub4; Glu oder Pro ist,
A&sub5; Ile ist,
A&sub6; Pro ist,
A&sub7; Glu oder Gln ist,
A&sub8; Glu oder Asp ist,
A&sub9; Tyr-Leu, Ala-Tyr, Tyr-Tyr, Ala-Phe, Ala-Cha oder Pro ist,
A&sub1;&sub0; Gln, Asp, Pro, eine Bindung, Asp-Glu, D-Asp, D- Lys, oder D-Glu ist und
Y OH oder NH&sub2; ist.
Die erfindungsgemäßen Proteine können durch unterschiedliche, dem Fachmann vertrauten Verfahren hergestellt werden. Zu solchen Verfahren gehören die Festphasenseguenz- und Blocksynthese, Genclonierung und Kombinationen dieser Verfahren. Das Festphasensequenzverfahren kann unter Verwendung von etablierten automatischen Verfahren durchgeführt werden, beispielsweise unter Verwendung eines automatischen Peptidsynthesizers. In diesem Verfahren wird eine an der α- Aminogruppe geschützte Aminosäure an einen Träger aus Harz gebunden. Der verwendete Träger aus Harz kann jedes geeignete Harz sein, das im Stand der Technik üblicherweise für die Herstellung von Polypeptiden an festen Phasen verwendet wird, vorzugsweise Polystyrol, das mit 0,5 bis etwa 3 Prozent Divinylbenzol vernetzt worden ist, das entweder chlormethyliert oder hydroxymethyliert worden ist, um Stellen zur Esterbildung mit der zuerst eingeführten, an der α-Aminogruppe geschützten Aminosäure zu erzeugen.
Ein Beispiel eines Hydroxymethylharzes wird von Bodanszky et al., Chem. Ind. (London) 38 (1966), 1597-98, beschrieben. bin chlormethyliertes Harz ist im Handel von BioRad-Laboratories, Richmond, Kalifornien, erhältlich, und die Herstellung eines solchen Harzes wird von Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., San Francisco 1969) , Kapitel 1, S. 1-6, beschrieben. Die geschützte Aminosäure kann durch das Verfahren von Gisin, Helv. Chem. Acta 56 (1973), 1476, an Harz gebunden werden. Viele an Harz gebundene Aminosäuren sind im Handel erhältlich. Als Beispiel zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Polypeptids, in dem der Carboxyterminus ein Thr-Rest ist, kann ein mit einer tert.-Butyloxycarbonylgruppe (Boc) geschütztes Thr, das an ein mit einem Benzylrest versehenes, hydroxymethyliertes Phenylacetamidomethyl (PAM)-Harz gebunden ist, verwendet und im Handel erhalten werden.
Nachdem die an der α-Aminogruppe geschützte Aminosäure an den Träger aus Harz gekuppelt ist, wird die Schutzgruppe unter Verwendung eines geeigneten Verfahrens, beispielsweise unter Verwendung von Trifluoressigsäure in Methylenchlorid, Trifluoressigsäure allein oder HCl in Dioxan, entfernt. Die Entfernung der Schutzgruppe wird bei einer Temperatur zwischen 0ºC und Raumtemperatur durchgeführt. Andere übliche Reagenzien zur Abspaltung der Schutzgruppe und andere Bedingungen zur Entfernung von spezifischen α- Aminoschutzgruppen können verwendet werden. Nachdem die α- Aminoschutzgruppe entfernt worden ist, werden die anderen Aminosäuren mit einer geschützten Aminogruppe schrittweise in der gewünschten Reihenfolge daran gebunden. Mehrere Aminosäurereste können alternativ vor der Bindung an die vom Harz getragene Aminosäureseguenz durch das Lösungsverfahren aneinander gekuppelt werden.
Die α-Aminoschutzgruppe, die in jeder in die Polypeptidseguenz eingeführten Aminosäure verwendet wird, kann jede derart schützende, im Stand der Technik bekannte Schutzgruppe sein. Zu den Klassen von α-Aminoschutzgruppen gehören (1) Schutzgruppen vom Acyltyp, beispielsweise Formyl-, Trifluoracetyl-, Phthalyl-, Toluolsulfonyl- (Tosyl-), Benzolsulfonyl-, Nitrophenylsulfenyl-, Tritylsulfenyl-, o-Nitrophenoxyacetyl- und α-Chlorbutyrylgruppen, (2) aromatische, urethanartige Schutzgruppen, beispielsweise Benzyloxycarbonyl- und substituierte Benzyloxycarbonylgruppen, beispielsweise p-Chlorbenzyloxycarbonyl-, p-Nitrobenzyloxycarbonyl-, p-Brombenzyloxycarbonyl-, p-Methoxybenzyloxycarbonyl-, 1-(p- Biphenylyl) 1-Methylethoxycarbonyl-, α,α-Dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl - und Benzhydryloxycarbonylgruppen, (3) aliphatische, urethanartige Schutzgruppen, beispielsweise tert. -Butyloxycarbonyl- (Boc), Diisopropylmethoxycarbonyl-, Isopropyloxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl- und Allyloxycarbonylgruppen, (4) alicyclische, urethanartige Schutzgruppen, beispielsweise Cyclopentyloxycarbonyl-, Adamantyloxycarbonyl- und Cyclohexyloxycarbonylgruppen, (5) urethanartige Thioschutzgruppen, beispielsweise Phenylthiocarbonylgruppen, (6) alkylartige Schutzgruppen, beispielsweise Triphenylmethyl- (Trityl-) und Benzylgruppen, und (7) Trialkylsilanreste, beispielsweise Trimethylsilan. Die bevorzugte α- Aminoschutzgruppe ist die tert.-Butyloxycarbonylgruppe.
Ein geeignetes Kupplungsreagens kann gemäß dem Stand der Technik gewählt werden. Besonders geeignete Kupplungsreagenzien bei der Anknüpfung der Aminosäuren GIn, Asn oder Arg sind N,N'-Diisopropylcarbodiimid und 1-Hydroxybenzotriazol. Die Verwendung dieser Reagenzien verhindert die Nitril- oder Lactambildung. Weitere Kupplungsreagenzien sind (1) Carbodiimide (z. B. N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid und N- Ethyl-N'-(γ-dimethylaminopropylcarbodiimid), (2) Cyanamide (z. B. N,N'-Dibenzylcyanamid), (3) Ketenimine, (4) Isoxazoliumsalze (z. B. N-Ethyl-5-phenylisoxazolium-3'-sulfonat, (5) monocyclische, Stickstoff enthaltende, heterocyclische Amide von aromatischem Charakter, die ein bis vier Stickstoffe im Ring enthalten, beispielsweise Imidazolide, Pyrazolide und 1,2,4-Triazolide. Zu den nützlichen heterocyclischen Amiden gehören insbesondere N,N'-Carbonyldiimidazol und N,N-Carbonyl-di-1,2,4-triazol, (6) alkoxyliertes Acetylen (z. B. Ethoxyacetylen), (7) Reagenzien, die ein gemischtes Anhydrid mit der Carboxyleinheit der Aminosäure (z. B. Ethylchlorformiat und Isobutylchlorformiat) oder das symmetrische Anhydrid der zu kuppelnden Aminosäure bilden (z. B. Boc-Ala-O-Ala-Boc) und (8) Stickstoff enthaltende, heterocyclische Verbindungen, die eine Hydroxylgruppe an einem Ringstickstoff aufweisen (z. B. N-Hydroxyphthalimid, N-Hydroxysuccinimid und 1-Hydroxybenzotriazol). Weitere aktivierende Reagenzien und deren Verwendung in der Peptidkupplung werden von Kapoor, J. Pharm. Sci. 59 (1970), 1-27, beschrieben. Die Anmelder bevorzugen die Verwendung des symmetrischen Anhydrids als Kupplungsreagens für alle Aminosäuren mit der Ausnahme von Arg, Asn und Gln.
Jede geschützte Aminosäure oder Aminosäuresequenz wird in einem etwa vierfachen Überschuß in den Festphasenreaktor eingeführt und die Kupplung in einem Medium aus Dimethylformamid : Methylenchlorid (1 : 1) oder in Dimethylformamid allein oder vorzugsweise in Methylenchlorid allein durchgeführt. Bei einer unvollständigen Kupplung wird das Kupplungsverfahren vor dem Entfernen der α-Aminoschutzgruppe vor der Kupplung der nächsten Aminosäure im Festphasenreaktor wiederholt. Der Erfolg der Kupplungsreaktion in jedem Stadium der Synthese wird durch die Ninhydrinreaktion, wie von Kaiser, E. et al., Analyt. Biochem. 34 (1970), 595, beschrieben, überwacht.
Nachdem die gewünschte Aminosäuresequenz erhalten worden ist, wird das Peptid vom Harz entfernt. Dies kann durch Hydrolyse durchgeführt werden, beispielsweise durch Behandlung des an das Harz gebundenen Polypeptids mit einer Lösung aus Dimethylsulfid, p-Kresol und Thiokresol in verdünnter wäßriger Fluorwasserstofflösung.
Wie im Stand der Technik bezüglich Festphasenpeptidsynthese bekannt ist, tragen viele der Aminosäuren Funktionen, die während der Herstellung der Kette geschützt werden müssen. Die Verwendung und Wahl der geeigneten Schutzgruppe sind dem Fachmann bekannt und hängen von der zu schützenden Aminosäure und der Gegenwart von anderen geschützten Aminosäureresten auf dem Peptid ab. Die Wahl einer solchen, die Seitenkette schützenden Gruppe ist kritisch, da es eine sein muß, die während der Abspaltung der Schutzgruppe der α-Aminoeinheit nicht durch Abspaltung entfernt wird. Zu den geeigneten, die Seitenketten schützenden Gruppen für Lysin gehören Benzyloxycarbonyl- und substituierte Benzyloxycarbonylgruppen, wobei die Substituenten von Halogenatomen (z. B. von Chlor-, Brom- und Fluoratomen) und Nitrogruppen (z. B. 2-Chlorbenzyloxycarbonyl-, p-Nitrobenzyloxycarbonyl- und 3,4-Dichlorbenzyloxycarbonylgruppen), Tosyl-, t-Amyloxycarbonyl-, t-Butyloxycarbonyl- und Diisopropylmethoxycarbonylgruppen ausgewählt sind. Die alkoholische Hydroxylgruppe von Threonin und Serin kann mit einer Acetyl-, Benzoyl-, tert.-Butyl-, Trityl-, Benzyl-, 2,6-Dichlorbenzyl- oder Benzyloxycarbonylgruppe geschützt werden. Die bevorzugte Schutzgruppe ist die Benzylgruppe.
Diese Gruppen können durch Verfahren entfernt werden, die im Stand der Technik gut bekannt sind. üblicherweise wird die Schutzgruppe nach Abschluß der Synthese der Peptidkette entfernt, die Schutzgruppen können jedoch auch zu jedem anderen geeigneten Zeitpunkt entfernt werden.
Die Dosis des Antikoagulans eines erfindungsgemäßen Peptidderivats liegt zwischen 0 mg/kg und 250 mg/kg des Körpergewichts des Patienten pro Tag je nach Patienten, der Schwere des zu behandelnden, thrombotischen Zustands und des gewählten Peptidderivats. Die für einen bestimmten Patienten geeignete Dosis kann leicht bestimmt werden. Vorzugsweise 1 bis 4 tägliche Dosen werden üblicherweise mit 5 bis 100 mg aktiver Verbindung pro Dosis verabreicht.
Eine Antikoagulanstherapie ist zur Behandlung und Prävention mehrerer thrombotischer Zustände, besonders bei einer Erkrankung der Koronararterien und Hirngefäße, indiziert. Fachleute erkennen leicht Zustände, die eine Antikoagulanstherapie erfordern. Der hier verwendete Begriff "Patient" bezeichnet Säuger, beispielsweise Primaten, einschließlich Menschen, Schafe, Pferde, Vieh, Schweine, Hunde, Katzen, Ratten und Mäuse.
Obwohl einige Peptidderivate nach der oralen Verabreichung die Darmpassage überleben können, bevorzugen die Anmelder eine nichtorale, beispielsweise subcutane, intravenöse, intramuskuläre oder intraperitoneale Verabreichung, eine Verabreichung durch eine Depotinjektion, durch Herstellung eines Implantats oder durch eine Applikation auf die Schleimhäute, beispielsweise auf die der Nase, des Halses und der Bronchien, beispielsweise durch eine Aerosolflasche, die ein erfindungsgemäßes Peptidderivat als Spray oder trockenes Pulver enthält.
Zur parenteralen Verabreichung können die Verbindungen als injizierbare Dosierungen einer Lösung oder Suspension der Verbindung in einem physiologisch verträglichen Verdünnungsmittel mit einem pharmazeutischen Träger verabreicht werden, das eine sterile Flüssigkeit, beispielsweise Wasser und Öle, mit oder ohne Zusatz eines grenzflächenaktiven Mittels und weiterer pharmazeutisch verträglicher Adjuvanzien sein kann. Beispiele von in diesen Präparaten verwendbaren Ölen sind Petroleum, Öle tierischen, pflanzlichen oder synthetischen Ursprungs, beispielsweise Erdnußöl, Soyabohnenöl und Mineralöl. Üblicherweise sind Wasser, Kochsalzlösung, wäßrige Dextrose und Lösungen verwandter Zucker, Ethanol und Glycole, beispielsweise Propylenglycol oder Polyethylenglycol, bevorzugte flüssige Träger, besonders für injizierbare Lösungen.
Die Verbindungen können als Depotinjektion oder präparatimplantat verabreicht werden, die so formuliert sind, daß eine verlangsamte Freisetzung des aktiven Bestandteils erfolgt. Der aktive Bestandteil kann in Pellets oder kleine Zylinder gepreßt und als Depotinjektion oder Implantat subkutan oder intramuskulär implantiert werden. Für Implantate können inerte Materialien, beispielsweise biologisch abbaubare Polymere oder synthetische Silikone, beispielsweise Silastic, das ein von der Dow-Corning Corporation hergestelltes Gummi aus Silikon ist, verwendet werden.

Beispiele

Diese Erfindung wird durch die nachstehend beschriebenen, nicht-einschränkenden Beispiele erläutert.

Beispiel 1

Herstellung von H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Das Peptid wurde mit Festphasenverfahren unter Verwendung von 0,1 mmol 0,66 mmol/g Boc-Gln-PAM-Harz synthetisiert. Zweifache symmetrische Anhydridkupplungen wurden, ausgenommen bei Boc-Gln, das durch das DCC/HOBT-Verfahren gebunden wurde, mit 2,0 mmol Na-Boc-Aminosäure (Peptides international) durchgeführt. Die verwendete Schutzgruppe der Seitenkette war: Asp(Chx), Glu(Bzl), Tyr(2-BrZ). Nach Abschluß der Synthese wurde die Na-Boc-Schutzgruppe mit 50% Trifluoressigsäure in Methylenchlorid entfernt. Das Harz wurde dreimal mit Methylenchlorid gewaschen, durch dreimaliges Waschen mit 10% Diisopropylethylamin in Methylenchlorid neutralisiert, dreimal mit Methylenchlorid gewaschen und im Vakuum getrocknet.
Die Schutzgruppe des Peptids wurde entfernt und das Peptid vom Harz mit 2% Anisol enthaltender HF 35 Min. bei 0ºC abgespalten. Die HF wurde bei 0ºC im Vakuum entfernt, das Peptid mit Ethylether ausgefällt, mit 30% wäßriger Essigsäure aus dem Harz extrahiert und gefriergetrocknet.
Das Peptid wurde durch Entsalzen auf einer 92·2,6 cm Sephadex G-15-Säule in 5% wäßriger Essigsäure gereinigt und gefriergetrocknet. Eine präparative HPLC wurde auf einer C¹&sup8;-Vydac-218TP1010 (250·10 mm)-Säule mit 24% Acetonitril in 0,1% wäßriger Trifluoressigsäure mit 5 ml/Min. durchgeführt. Der Hauptpeak wurde gesammelt und gefriergetrocknet, wobei ein Rückstand von 101 mg des gewünschten Produkts (eine Ausbeute von 58%, wenn von der anfänglichen Harzsubstitution ausgegangen wird) erhalten wurde. Die Homogenität wurde durch HPLC und TLC ermittelt. HPLC-Vydac 218TP54 (250·4,6 mm)-C¹&sup8;-Säule, 2 ml/Min., t&sub0; = 1,9 Min.: Die Elutionszeit mit einem linearen Gradienten aus 15 bis 40 -% Acetonitril in 0,1% Trifluoressigsäure mit 1%/Min. (HPLC) ist 14,4 Min.
TLC: [Merck 5715 20·20 cm Kieselgel 60-Platten (0,25 mm Dicke) n-Butanol/Essigsäure/Wasser/Pyridien (6 : 1,2 : 4,8 : 6) (TLC I) Rf = 0,42; Isopropanol/konz. Ammoniumhydroxid/Wasser (3 : 1:1) (TLC 11) Rf = 0,32; n-Butanol/Essigsäure/Wasser (4 : 5:5) (TLC III) Rf = 0,70. FAB-MS: (M+H)-1468 4 ± 1 mu (theoret. 1468,6). Aminosäureanalyse: (Hydrolyse mit 6 N HCl; 24 Std. bei 106ºC). Asx 1,03 (1) Glx 5,05 (5); Pro 1,03 (1) Gly 1,00 (1) Ile 0,97 (1) Leu 1,01 (1) Tyr 0,93 (1); Phe 0,98 (1) NH&sub3; 1,06 (1). 280 = 1254. Peptidgehalt von 85 Gewichts-%.
Entsprechend wurden die Peptide der nachstehend beschriebenen Beispiele 2 bis 32 hergestellt.

Beispiel 2 (gestrichen)

Beispiel 3

H-Asn-Asp-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 4

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 5

H-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 6

H-Asp-Phe-Glu-Ala-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 7

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Ala-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 8

H-ASP-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Ala-OH

Beispiel 9

H-ASP-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Glu-Leu-Ala-OH

Beispiel 10

Ac-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 11

Ac-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 12

Suc-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 13

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-NH&sub2;

Beispiel 14

H-Gly-Asp-Tyr-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 15

H-Gly-Asp-Trpr-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 16

H-Gly-Asp-pClPhe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 17

H-Gly-Asp-pNO&sub2;Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 18

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Sar-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 19

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-DAla-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 20

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Hyp-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 21

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-NMePgl-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 22

S-GlY-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Asp-Glu-OH

Beispiel 23 (gestrichen)

Beispiel 24

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Pro-NH&sub2;

Beispiel 25

Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Pro-NH&sub2;

Beispiel 26

H-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gln-OH

Beispiel 27

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gln-OH

Beispiel 28

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Gln-OH

Beispiel 29

Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Pro-NH&sub2;

Beispiel 30

H-Gly-Asp-β-(2-thienyl)alanyl-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 31

H-Gly-Ala-O-methyltyrosyl-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 32

Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Pro-OH

Beispiel 33

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Ala-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 34

H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Leu-Gln-OH

Beispiel 35

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Leu-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 36

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Val-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 37

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Phe-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 38

H-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 39

Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH

Beispiel 40

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Glu-OH

Beispiel 41

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Phe-Asp-Gln-OH

Beispiel 42

Ac-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Orn-NH&sub2;

Beispiel 43

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Tyr-Glu-OH

Beispiel 44

H-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Tyr-Gln-OH

Beispiel 45

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Lys-NH&sub2;

Beispiel 46

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-D-Lys-NH&sub2;

Beispiel 47

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Orn-NH&sub2;

Beispiel 48

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Lys-NH&sub2;

Beispiel 49

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Lys-OH

Beispiel 50

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-His-Lys-OH

Beispiel 51

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Lys-NH&sub2;

Beispiel 52

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Leu-Phe-Lys-NH&sub2;

Beispiel 53

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Gln-Glu-Ala-Phe-Lys-NH&sub2;

Beispiel 54

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Glu-OH

Beispiel 55

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Gln-OH

Beispiel 56

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Asp-OH

Beispiel 57

H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-D-Asp-OH

Beispiel 58 (gestrichen)

Die Peptide der Beispiele 2 bis 58 weisen die nachstehend aufgeführten Eigenschaften auf: Beispiel Nr. Aminosäureanalyse (Hydrolyse mit 6 N HCl; 24 Std. bei 106ºC) * (Me)Tyr wird mit-eluiert, wurde jedoch nicht quantitativ bestimmt Beispiel Nr. Aminosäureanalyse (Hydrolyse mit 6 N HCl; 24 Std. bei 106ºC) * (Me)Tyr wird mit-eluiert, wurde jedoch nicht quantitativ bestimmt Beispiel Nr. Aminosäureanalyse (Hydrolyse mit 6 N HCl; 24 Std. bei 106ºC) * (Me)Tyr wird mit-eluiert, wurde jedoch nicht quantitativ bestimmt. ** (Zur quantitativen Bestimmung verwendeter Orn-Standard) Beispiel Nr. Aminosäureanalyse (Hydrolyse mit 6 N HCl; 24 Std. bei 106ºC) * (Me)Tyr wird mit-eluiert, wurde jedoch nicht quantitativ bestimmt. ** (Zur quantitativen Bestimmung verwendeter Orn-Standard) Physikalische Eigenschaften Beispiel Nr. Physikalische Eigenschaften Beispiel Nr. *(M+Na) Physikalische Eigenschaften Beispiel Nr. *(M+Na) Physikalische Eigenschaften Beispiel Nr. *(M+Na) DP MPT

Claims

1. Peptidderivat der Formel

X-A&sub1;-A&sub2;-A&sub3;-A&sub4;-A&sub5;-A&sub6;-A&sub7;-A&sub8;-A&sub9;-A&sub1;&sub0;-Y

in der

X ein Wasserstoffatom, einen oder zwei Alkylreste mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder einen oder zwei Acylreste mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen bedeutet;

A&sub1; eine Bindung oder ein Peptidfragment darstellt, das 1 bis 5 Reste beliebiger Aminosäuren enthält;

A&sub2; Phe, ortho-, meta- oder para-, mono- oder disubstituiertes Phenylalanin, β-(2-Thienyl)alanin, β-(3- Thienyl)alanin, β-(2-Furanyl)alanin, β-(3-Furanyl)alanin, β-(2-Pyridyl)alanin, β-(3-Pyridyl)alanin, β- (4-Pyridyl)alanin, β-(Benzothien-2-yl)alanin, β- (Benzothien-3-yl)alanin, β-(1-Naphthyl)alanin, β-(2- Naphthyl)alanin, Tyr oder Trp bedeutet;

A&sub3; Glu oder Asp darstellt;

A&sub4; eine beliebige Aminosäure ist;

A&sub5; Ile, Val, Leu, NorLeu oder Phe bedeutet;

A&sub6; Pro, Hydroxyprolin, 3,4-DehydroPro, Thiazolidin-4- carboxylat, Sarcosin oder N-Methylphenylglycin oder D-Ala darstellt;

A&sub7; eine beliebige Aminosäure ist;

A&sub8; eine beliebige Aminosäure ist mit Ausnahme von Ala;

A&sub9; eine lipophile Aminosäure ist, ausgewählt aus Tyr, Trp, Phe, Leu, NorLeu, Ile, Val, Cyclohexylalanin und Pro, oder ein Dipeptid ist, das mindestens eine dieser lipophilen Aminosäuren enthält;

A&sub1;&sub0; eine Bindung oder ein Peptidfragment darstellt, das 1 bis 5 Reste beliebiger Aminosäuren enthält; und

Y einen C-terminalen Rest darstellt, ausgewählt aus einer OH-Gruppe, einem (C&sub1;-C&sub6;)-Alkoxyrest, einer Aminogruppe, einer mono- oder di-(C&sub1;-C&sub4;)-alkylsubstituierten Aminogruppe,

und die pharmazeutisch verträglichen Salze davon.

2. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub2; Phe, β-(2-Thienyl)alanin, β-(3-Thienyl)alanin oder Tyr ist.

3. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub3; Glu ist.

4. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub4; Glu, Ala oder Pro ist.

5. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub5; Ile ist.

6. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub6; Pro ist.

7. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub7; Glu oder Ala ist.

8. Peptidderivat nach Anspruch i, wobei A&sub8; Glu oder Asp ist.

9. Peptidderivat nach Anspruch l, wobei A&sub9; Tyr-Leu, Ala-Tyr oder Ala-Cyclohexylalanin ist.

10. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub1;&sub0; Gln, Asp, Pro, eine Bindung, Asn, Asp-Glu, Glu, Ala, D-Lys, Lys, D-Asp, D-Glu oder Orn ist.

11. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei X ein Wasserstoffatom, ein Acetylrest oder eine Succinylgruppe bedeutet.

12. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei Y eine OH- oder NH&sub2;-Gruppe bedeutet.

13. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub1;

Asn-Asp-Gly-Asp,

Asp-Gly-Asp,

Gly-Asp,

Asp, oder eine Bindung bedeutet.

14. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei A&sub1;

Thr-Pro-Lys-Pro-Gln-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp

ist.

15. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei

X ein Wasserstoffatom,

A&sub1; -Gly-Asp-,

A&sub2; Phe,

A&sub3; Glu,

A&sub4; Glu,

A&sub5; Ile,

A&sub6; Pro,

A&sub7; Glu,

A&sub8; Glu,

A&sub9; Tyr-Leu,

A&sub1;&sub0; Gln und

Y eine OH-Gruppe bedeutet.

16. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei

X ein Wasserstoffatom,

A&sub1; -Gly-Asp-,

A&sub2; Phe,

A&sub3; Glu,

A&sub4; Pro,

A&sub5; Ile,

A&sub6; Pro,

A&sub7; Glu,

A&sub8; Asp,

A&sub9; Ala-Tyr,

A&sub1;&sub0; Asp-Glu und

Y eine OH-Gruppe bedeutet.

17. Peptidderivat nach Anspruch 1, wobei

X Suc,

A&sub1; eine Bindung,

A&sub2; Phe,

A&sub3; Glu,

A&sub4; Pro,

A&sub5; Ile,

A&sub6; Pro,

A&sub7; Glu,

A&sub8; Glu,

A&sub9; Tyr-Leu,

A&sub1;&sub0; Pro und

Y eine NH&sub2;-Gruppe bedeutet.

18. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH.

19. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH.

20. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-D-Lys-NH&sub2;.

21. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Lys-NH&sub2;.

22. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Lys-NH².

23. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Lys-NH&sub2;.

24. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Glu-OH.

25. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Gln-OH.

26. Peptidderivat nach Anspruch 1, nämlich Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Asp-OH.

27. Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 26 zur Verwendung als Medikament.

28. Pharmazeutische Formulierung, umfassend eine Verbindung der Ansprüche 1 bis 26 im Gemisch mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.

29. Verwendung einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 26 für die Herstellung eines Medikaments zur Verminderung der Blutkoagulation.

30. Festphasenseguenz- und blocksyntheseverfahren zur Herstellung einer Verbindung der Ansprüche 1 bis 26, umfassend das Binden einer geeignet geschützten Aminosäure der Formel A&sub1; an einen aktivierten Harzträger und anschließendes Binden der anderen α-aminogeschützten Aminosäuren von A&sub2; bis A&sub1;&sub0; an die terminale Aminogruppe der wachsenden Peptidkette, die mittlerweile durch Entfernung ihrer Aminoschutzgruppe freigelegt wurde.