DK151274B - Fremgangsmaade til fremstilling af meldroejealkaloider, isaer ergokornin og beta-ergokryptin - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af meldroejealkaloider, isaer ergokornin og beta-ergokryptin Download PDFInfo
- Publication number
- DK151274B DK151274B DK052581AA DK52581A DK151274B DK 151274 B DK151274 B DK 151274B DK 052581A A DK052581A A DK 052581AA DK 52581 A DK52581 A DK 52581A DK 151274 B DK151274 B DK 151274B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- nutrient medium
- ergocryptin
- strain
- ergocornin
- colonies
- Prior art date
Links
- UJYGDMFEEDNVBF-UHFFFAOYSA-N ergocornin Chemical compound C1=CC(C=2C(N(C)CC(C=2)C(=O)NC2(C(=O)N3C(C(N4CCCC4C3(O)O2)=O)C(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 UJYGDMFEEDNVBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 36
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 claims description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 12
- 241000221751 Claviceps purpurea Species 0.000 claims description 10
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical class N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 35
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 16
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 6
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- XLMJRFCCCWFQRE-SJRQCXNHSA-N ecboline Chemical compound C([C@H]1[C@]2(O)O3)CCN1C(=O)CN2C(=O)[C@]3(C(C)C)NC(=O)[C@@H](CN(C)[C@@H]1C2)C=C1C1=C3C2=CNC3=CC=C1 XLMJRFCCCWFQRE-SJRQCXNHSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- QHZUABXEBRGBLP-LKWYKXIFSA-N (6aR,9R,10aR)-N-[(2R,4R,9aS,9bR)-4-benzyl-9b-hydroxy-3,5-dioxo-2-propan-2-yl-3a,4,7,8,9,9a-hexahydrofuro[3,2-g]indolizin-2-yl]-7-methyl-6,6a,8,9,10,10a-hexahydro-4H-indolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide (6aR,9R,10aR)-N-[(2R,4R,9aS,9bR)-9b-hydroxy-3,5-dioxo-2,4-di(propan-2-yl)-3a,4,7,8,9,9a-hexahydrofuro[3,2-g]indolizin-2-yl]-7-methyl-6,6a,8,9,10,10a-hexahydro-4H-indolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide (6aR,10aR)-N-[(2S,4S,9bS)-9b-hydroxy-4-(2-methylpropyl)-3,5-dioxo-2-propan-2-yl-3a,4,7,8,9,9a-hexahydrofuro[3,2-g]indolizin-2-yl]-7-methyl-6,6a,8,9,10,10a-hexahydro-4H-indolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O.C1=CC([C@H]2C[C@H](CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@]3(C(=O)C4[C@H](C(N5CCC[C@H]5[C@]4(O)O3)=O)C(C)C)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1.C1=CC([C@H]2CC(CN(C)[C@@H]2C2)C(=O)N[C@@]3(C(=O)C4[C@@H](C(N5CCCC5[C@@]4(O)O3)=O)CC(C)C)C(C)C)=C3C2=CNC3=C1.C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@](C(C21)=O)(NC(=O)[C@H]1CN(C)[C@H]2[C@@H](C=3C=CC=C4NC=C(C=34)C2)C1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 QHZUABXEBRGBLP-LKWYKXIFSA-N 0.000 description 2
- 241000221760 Claviceps Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- UJYGDMFEEDNVBF-OGGGUQDZSA-N ergocornine Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@]2(C(=O)N3[C@H](C(N4CCC[C@H]4[C@]3(O)O2)=O)C(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 UJYGDMFEEDNVBF-OGGGUQDZSA-N 0.000 description 2
- NESVMZOPWPCFAU-ZPRCMDFASA-N ergosine Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@]2(C(=O)N3[C@H](C(N4CCC[C@H]4[C@]3(O)O2)=O)CC(C)C)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 NESVMZOPWPCFAU-ZPRCMDFASA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WVVSZNPYNCNODU-CJBNDPTMSA-N Ergometrine Natural products C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-CJBNDPTMSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- WVVSZNPYNCNODU-XTQGRXLLSA-N Lysergic acid propanolamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-XTQGRXLLSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- LIMAOLZSWRJOMG-HJPBWRTMSA-N dihydroergocristine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@](C(N21)=O)(NC(=O)[C@H]1CN(C)[C@H]2[C@@H](C3=CC=CC4=NC=C([C]34)C2)C1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 LIMAOLZSWRJOMG-HJPBWRTMSA-N 0.000 description 1
- 229960004318 dihydroergocristine Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- OWEUDBYTKOYTAD-MKTPKCENSA-N ergocristine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@](C(N21)=O)(NC(=O)[C@@H]1C=C2C3=CC=CC4=NC=C([C]34)C[C@H]2N(C)C1)C(C)C)C1=CC=CC=C1 OWEUDBYTKOYTAD-MKTPKCENSA-N 0.000 description 1
- HEFIYUQVAZFDEE-UHFFFAOYSA-N ergocristinine Natural products N12C(=O)C(C(C)C)(NC(=O)C3C=C4C=5C=CC=C6NC=C(C=56)CC4N(C)C3)OC2(O)C2CCCN2C(=O)C1CC1=CC=CC=C1 HEFIYUQVAZFDEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001405 ergometrine Drugs 0.000 description 1
- OFKDAAIKGIBASY-VFGNJEKYSA-N ergotamine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@@](C(N21)=O)(C)NC(=O)[C@H]1CN([C@H]2C(C3=CC=CC4=NC=C([C]34)C2)=C1)C)C1=CC=CC=C1 OFKDAAIKGIBASY-VFGNJEKYSA-N 0.000 description 1
- 229960004943 ergotamine Drugs 0.000 description 1
- XCGSFFUVFURLIX-UHFFFAOYSA-N ergotaminine Natural products C1=C(C=2C=CC=C3NC=C(C=23)C2)C2N(C)CC1C(=O)NC(C(N12)=O)(C)OC1(O)C1CCCN1C(=O)C2CC1=CC=CC=C1 XCGSFFUVFURLIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229930015720 peptide alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
- C12P17/183—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system containing an indolo[4,3-F,G]quinoleine nucleus, e.g. compound containing the lysergic acid nucleus as well as the dimeric ergot nucleus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/02—Ergot alkaloids of the cyclic peptide type
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
! Ο I * / 4 o
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af meldrøjealkaloider, især ergokornin og β-ergo-kryptin, ved fermentering af en hidtil ukendt stamme af Claviceps purpurea under aerobe betingelser på et nærings-5 medium indeholdende carbon- og nitrogenkilder, mineralsalte og eventuelt andre tilsætninger.
Det er kendt, at det lægemiddelvirksomme stof, dihydroergotoxin, der fremkommer ved hydrogenering af ergotoxin, er en blanding af dihydroergokristin, dihydroer-10 gokornin, α-dihydroergokryptin og β-dihydroergokryptin (HU-PS nr. 129.061, angående dihydroergokryptins modifikationer, se W. Schliern m.fl.: Experientia 23_, 991 (1967)). Som udgangsmateriale til fremstilling af dihydroergotoxin anvendes således ergokristin, ergokornin og 15 a- og β-ergokryptin. Disse kan fremstilles ved fermentering. Der kendes f.eks. den ergokryptin- og ergotamin-· producerende stamme ATCC 20102 (GB-PS nr. 1.158.380), den ergokornin- og ergosinproducerende stamme ATCC 20106 (GB-PS nr. 1.184.039), den ergokryptinproducerende stam-20 me ATCC 20019 (US-PS nr. 3.485.772), den β-ergokryptin- og ergosinproducerende stamme fra Soc. Farmaceutici Italia (deponeret i deres egen samling under nr. FI 7374, beskrevet i BE-PS nr. 824.987).
Deraf ses, at disse udvalgte stammer ikke kun pro-25 ducerer de til fremstillingen af ergotoxin vigtige alkaloider, men også andre meldrøjealkaloider, dvs. at deres fermentering ikke er selektivt orienteret på ergotoxin.
Man har nu isoleret en hidtil ukendt stamme af arten Claviceps purpurea, som har den overraskende egen-30 skab, at den ved dyrkning i næringsmedier, der er kendte fra litteraturen, og som indeholder sukker og ammoniumsaltet af en organisk syre, producerer en alkaloidblanding, hvor 25-30% er β-ergokryptin, hovedmængden, 55-60%, er ergokornin, og den resterende andel er α-ergokryptin. For-35 uden de karakteristiske peptidalkaloider danner stammen kun ergometrin, der er vandopløseligt og let kan fraskil- 151274
O
2 les. Denne hidtil ukendte variantstamme af Claviceps purpurea deponeredes den 9. maj 1979 ved den ungarske nationale mikroorganismesamling under betegnelsen MNG 00186.
5 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i over ensstemmelse hermed ejendommelig ved, at man anvender stammen Claviceps purpurea MNG 00186 som dyrket stamme.
Den hidtil ukendte stamme er isoleret ud fra en Claviceps-stamme voksende på en ikke-kunstigt inokuleret 10 rugmark, og ud fra denne opnåedes der ifølge HU-PS nr.
151.724 ved gentagen selektion under afvekslende isolering af kolonierne og berigelse i den flydende kultur den hidtil ukendte stamme af arten Claviceps purpurea.
Grundlaget for selektionen består i, at den alkal-15 oidproducerende stamme på det næringsmedium, som er beskrevet i det nævnte patentskrift, danner farvede kolonier, som let kan adskilles fra de hvide kolonier af de ikke--producerende stammer.
Kolonierne af den alkaloidproducerende hidtil 20 ukendte stamme isoleres og overpodes på et såkaldt dif- ferencierende næringsmedium med berigelse til formål. Det differentierende næringsmedium indeholder udover uorganiske phosphater og andre mineralsalte i første række saccharose, ravsyre og glycin.
25 Ved gentagen isolering og berigelse opnås den hidtil ukendte stamme. Stammen (intern betegnelse: CLY) vokser langsommere end kulturen af markstammen Claviceps, den producerer ingen konidier og ligner gær morfologisk i samtlige næringsmedier, dvs. at de for mycelformen ka-30 rakteristiske trådagtige hyfer mangler.
Makroskopisk beskrivelse af stammen På det til selektering anvendte stivelse- og thyptophanholdige agarmedium har kolonierne efter 10 dage en rynket overflade og en orange-rosa farvning, de er 35 skarpt afgrænsede, deres diameter er 6-8 mm. Efter 20 dage har kolonierne en diameter på 20-25 mm, udviser en for-
O
3 151274 højning i midten og er radialt rynket, deres farve er rosa-lilla. Koloniernes underside er mørkebrun, næringsmediet i deres omgivelse er farvet lilla.
På maltagar danner stammen i en alder af 10 dage 5 lys-beigefarvede kolonier med en diameter på 1-2 mm og en regelmæssig kalvkugleform. I en alder af 20 dage har kolonierne en diameter på 2-4 dage, deres vækst er svag, deres farve er blevet dybere imod brunlig.
På St-agar er stammens kolonier., i en alder af 10 10 dage skarpt omgrænset, rynket i retning af midten, de har en spids forhøjning på midten og en diameter på 8-12 mm. Spidsen er 3-5 mm høj. Koloniernes farve er fra beige til lysebrun. Efter 20 dage er koloniernes, overflade stærkt furet og ud til kanten furet i forgreninger, 15 spidsen er kraterformet. Kolonierne er af lysebrun farve, med en kakaolignende nuance, deres diameter er forskellig og ligger mellem 25 og 40 mm, højden er 6-8 mm. Kolonierne lader sig dårligt løsne fra agarets overflade. De danner ingen sporer.
20 Mikroskopisk karakterisering af stammen i flydende kultur I næringsmedium GK efter 40 timers kultivering:
Kolonier af få celler eller for en stor dels vedkommende af enkelte celler. Cellerne er 4-8 x 8-20 ^μπι store, cylindriske, afrundede eller af uregelmæssig form. Deling 25 ved celleenden eller ved sideforgrening kan iagttages lige hyppigt. Cellerækkerne er korte, består af nogle celler. Under fasekontrastmikroskop viser cellerne sig stærkt kornede, de ældre celler indeholder vakuoler. Ingen sporedannelse.
30 I St-næringsmedium efter 40 timers kultivering:
Det mikroskopiske billede er identisk med det allerede beskrevne med den undtagelse, at dannelsen af kolonier eller cellerækker er hyppigere på dette næringsmedium.
De enkelte celler er større, de større, ældre celler inde-35 holder ingen vakuoler.
151274
O
4
De næringsmedier, der anvendes ved undersøgelsen af den makroskopiske og mikroskopiske fremtoning, er til dels angivet i det følgende, medens næringsmedierne St--næringsmedium, St-agar og næringsmedium GK er beskrevet 5 i eksempeldelen.
Stivelse-tryptophan-agar Stivelse 20 g
Tryptophan 1 g 10 Kaliumchlorid 1 g
Diammoniumhydrogenphosphat 2 g BH-værdien indstilles på 6,6-6,8, og volumenet fyldes op med vand til 1000 ml; til væsken sættes 25 g 15 agarpulver (Difco), næringsmediet koges op, fyldes på flasker med 150 ml i hver og steriliseres.
Maltagar-næringsmedium Maltekstrakt 60 g 20 Vand til 1000 ml
Agarpulver (Difco) 25 g Næringsmediet koges op, fyldes på flasker med 150 ml i hver og steriliseres.
25 Biokemiske karakteristika af stammen Sønderdeler med enzymet β-fructo-furanosidase saccharose og danner transfer-oligosaccharider; udnytter citronsyre godt; producerer et først og fremmest af hydroxyanthraquioner bestående pigment af anthraquinon-30 karakter.
Dyrkningen af den hidtil ukendte, under betegnelsen MNG 00186 deponerede stamme foretages som nævnt under aerobe betingelser på et næringsmedium indeholdende carbon- og nitrogenkilder, mineralsalte og eventuelt an-35 dre tilsætninger.
O
5 151274
Endvidere har det vist sig, at mængden af producerede alkaloider i fermenteringsvæsken stiger, når man som precursor af de resulterende forbindelser sætter f.eks. valin til fermenteringsvæsken under fermenteringen.
5 Der fermenteres ved temperaturer mellem 20 og 26°C, ved en pH-værdi på 5,2-6,8 i 4 til 8 dage.
Precursoren tilsættes kulturmediet i en mængde på 0,05 til 0,5 g/100 ml, fortrinsvis 0,1 til 0,3 g/100 ml, i form af en vandig, eventuelt svagt sur opløsning efter 10 sterilisering af næringsmediet. Precursoren kan tilsættes på én gang, i flere portioner eller kontinuerligt i en periode af fermenteringen.
I litteraturen karakteriseres produktionen ofte ved de spektrofotometrisk bestemte værdier af det samlede 15 alkaloidindhold. Også ved de her beskrevne forsøg blev de samlede alkaloidværdier målt fotometrisk på grundlag af farvereaktioner; men de viste sig dog at være uspeci-f ikke.
Til karakterisering af fermenteringen blev de 20 enkelte ergotoxin-komponenter bestemt ved elueringschro-matografi eller kvantitativ væskechromatografi.
Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de følgende eksempler. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 2
Eksempel 1 3
En kultur af Claviceps purpurea MNG 00186, der 4 vokser på St-agar næringsmedium, podes på 100 ml nærings 5 medium GK, der befinder sig i en 500 ml Erlenmeyerkolbe, 6 og inkuberes ved 24°C på rystebordet (frekvens: 300/min) 7 i 4 dage. Hver 10 ml af den resulterende kultur overpodes 8 på i alt 8 andre kolber, der hver især indeholder 100 ml 9
St-næringsmedium. Disse kulturer fermenteres ved 24°C på 10 rystebordet i 7 dage. Til 4 kolber sættes ingen precursor, 11 til hver af de andre 4 kolber sættes 2 g valin som precursor ved begyndelsen af fermenteringen. På den 7. dag afbrydes fermenteringen. Kulturmedierne uden precursor forenes, og deres indhold af alkaloider bestemmes. Ergo- 151274
O
6 korninindholdet andrager 80 μg/ml, a-ergokryptinindhol-det er 15 ^g/ml og β-ergokryptinindholdet er 30 ^ig/ml.
De med precursor tilberedte kulturmedier forenes ligeledes, og deres indhold af alkaloider bestemmes.
5 De indeholder 250 ^g/ml ergokornin, 25 ^g/ml a-ergokryp-tin og 30 ^pg/ml 3-ergokryptin.
De anvendte næringsmedier:
Næringsmedium GK
10 trypcasin 7,0 g citronsyre 4,1 g kaliumdihydrogenphosphat 0,3 g magnesiumsulfat 0,3 g ammoniumhydroxid til en 15 pH-værdi 5,7-5,8 vand til 840 ml
Hver 84 eller 840 ml næringsmedium hældes på kolber og blandes under sterile betingelser med 16 eller 20 160 ml 50%'s glucoseopløsning.
S t-næringsmedium saccharose 100,0 g ravsyre 10,0 g 25 kaliumdihydrogenphosphat 0,25 g magnesiumsulfat 0,25 g ammoniumnitrat 1,0 g calciumchlorid 1,0 g ammoniumhydroxid til en 5,2-5,3 30 pH-værdi vand til 1000 ml Næringsmediet steriliseres i portioner på 100 ml 35 i Erlenmeyerkolber eller i en mængde på 100 liter i en halvteknisk fermentor.
O
7 151274
St-agar-næringsmediet (Blake) adskiller sig fra det flydende St-næringsmedium, ved at der tilsættes 25 g agarpulver pr. liter. Efter tilsætningen af agar koges næringsmediet op, hældes på flasker i portioner på hver 5 især 150 ml og steriliseres.
Eksempel 2
De typiske, 20 dage gamle kolonier af Claviceps purpurea MNG 00186, der har vokset på St-agar-nærings-10 medium, løsnes fra agaroverfladen, homogeniseres i 20 ml steril fysiologisk kogsaltopløsning, og 10 ml af suspensionen sættes til 100 ml forsteriliseret St-nærings-medium, der befinder sig i 500 ml-Erlenmeyerkolber. Kulturen dyrkes i 6 dage ved 24°C på rystebordet og over-15 podes derefter på 100 ml næringsmedium TC-54, der befinder sig i en 500 ml-Erlenmeyerkolbe. Efter 3 dages fermentering på rystebordet overpodes 10 ml af kulturen på 100 ml steriliseret St-næringsmedium, der befinder sig i en 500 ml-Erlenmeyerkolbe. Denne kultur dyrkes i 7 dage 20 e under de nævnte betingelser pa rystebordet. Derefter indeholder den følgende alkaloidmængder: ergokornin 150 ^ig/ml, a-ergokryptin 40 ;ug/ml og β-ergokryptin 90 ^g/ml.
Sammensætningen af St-næringsmediet og St-agar- -næringsmediet (Blake) blev allerede angivet i eksempel 1.
25 Næringsmediet TC-54 har følgende sammensætning: saccharose 100,0 g citronsyre 10,0 g natriumchlorid 10,0 g 30 kaliumdihydrogenphosphat 0,5 g magnesiumsulfat 0,5 g ammoniumhydroxid til pH-værdi 5,7-5,8 vand til 1000 ml 35 151274
O
8 Næringsmediet steriliseres for hver 100 ml i Erlenmeyerkolber med et volumen på 500 ml eller for hver 10 liter i en laboratoriefermentor med et volumen på 15 liter.
5
Eksempel 5
En 25 dage gammel kultur af Claviceps purpurea MNG 00186 på St-agar-næringsmedium fjernes ved afkrads-ning fra agarets overflade og homogeniseres i 100 ml fysio-10 logisk kogsaltopløsning. 1 liter næringsmedium GK (forsteriliseret i en Erlenmeyerkolbe med et volumen på 3 liter) podes med den resulterende suspension. Kiklturen rystes ved 24°C i 44 timer. Derefter indføres kulturen i en fermentor med et volumen på 15 liter, hvori der be-15 finder sig 10 liter næringsmedium TC-54. Der fermenteres véd 24°C under tilledning af 0,25 liter/liter/min. luft og et omdrejningstal på 240 min Efter 3 dage overføres kulturen til en syrefast laboratoriefermentor (150 liter), hvori der befinder sig 100 liter St-næringsmedium. Denne 20 kultur dyrkes ved 22°C, et omdrejningstal på 150 min ^ og en tilledt luftmængde på 0,35 liter/liter/min. i 6 dage.
På den 2., 3. og 5. dag sættes hver gang 100 g valin og 20 g isoleucin til kulturmediet.
Efter 6 dages fermentering indeholder kulturme-25 diet 320 /ig/ml ergokornin, 60 /ig/ml α-ergokryptin og 160 ^g/ml β-ergokryptin.
Claims (3)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af meldrøjealkaloider, især ergokornin og β-ergokryptin, ved fermentering af en stamme af Claviceps purpurea under aero- 5 be betingelser på et næringsmedium indeholdende carbon-og nitrogenkilder, mineralsalte og eventuelt andre tilsætninger, kendetegnet ved, at man anvender stammen Claviceps purpurea MNG 00186 som dyrket stamme.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg-10 net ved, at man foretager fementer ingen ved 20-26°C og en pH-værdi på 5,2-6,8.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegne t ved, at man som tilsætning sætter precursorfor-bindelserne for de producerede alkaloider til fermente- 15 ringsmediet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU28280 | 1980-02-08 | ||
| HU8080282A HU178405B (en) | 1980-02-08 | 1980-02-08 | Process for preparing ergocornine and beta-ergocryptine by fermentation |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK52581A DK52581A (da) | 1981-08-09 |
| DK151274B true DK151274B (da) | 1987-11-16 |
| DK151274C DK151274C (da) | 1988-06-20 |
Family
ID=10948889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK052581A DK151274C (da) | 1980-02-08 | 1981-02-06 | Fremgangsmaade til fremstilling af meldroejealkaloider, isaer ergokornin og beta-ergokryptin |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4369252A (da) |
| JP (1) | JPS56158094A (da) |
| BE (1) | BE887391A (da) |
| CA (1) | CA1154699A (da) |
| CH (1) | CH648846A5 (da) |
| CS (1) | CS215148B2 (da) |
| DD (1) | DD156189A5 (da) |
| DE (1) | DE3104151A1 (da) |
| DK (1) | DK151274C (da) |
| FR (1) | FR2475573A1 (da) |
| GB (1) | GB2071651B (da) |
| HU (1) | HU178405B (da) |
| IL (1) | IL62079A (da) |
| IT (1) | IT1135359B (da) |
| NL (1) | NL8100567A (da) |
| SU (1) | SU1119609A3 (da) |
| YU (1) | YU27881A (da) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS222391B1 (en) * | 1981-07-28 | 1983-06-24 | Karin Strnadova | Microorganism strain of the claviceps purpurea /fr./ tul,ccm f-725 species |
| JPS58178988A (ja) * | 1982-04-14 | 1983-10-20 | 松下電器産業株式会社 | 調理器ユニツト |
| DE3420953A1 (de) | 1984-06-01 | 1985-12-05 | Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen | Verfahren zur herstellung von (alpha)-ergokryptin |
| CN101238208A (zh) * | 2005-11-07 | 2008-08-06 | 伊瓦克斯制药有限公司 | 真菌麦角菌（Fr.)Tul.的工业生产菌株 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3884762A (en) * | 1972-04-21 | 1975-05-20 | Richger Gedeon Vegyeszeti Gyar | Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids |
| IT1059516B (it) * | 1974-06-07 | 1982-06-21 | Farmaceutici Italia | Procedimento per la preparazione di beta-ergocriptina |
-
1980
- 1980-02-08 HU HU8080282A patent/HU178405B/hu not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-02-03 YU YU00278/81A patent/YU27881A/xx unknown
- 1981-02-05 CH CH774/81A patent/CH648846A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-02-05 BE BE1/10131A patent/BE887391A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-02-06 IT IT19586/81A patent/IT1135359B/it active
- 1981-02-06 NL NL8100567A patent/NL8100567A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-02-06 DK DK052581A patent/DK151274C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-02-06 US US06/232,172 patent/US4369252A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-02-06 CS CS81912A patent/CS215148B2/cs unknown
- 1981-02-06 IL IL8162079D patent/IL62079A/xx unknown
- 1981-02-06 DD DD81227468A patent/DD156189A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-02-06 DE DE19813104151 patent/DE3104151A1/de active Granted
- 1981-02-06 SU SU813245499A patent/SU1119609A3/ru active
- 1981-02-06 CA CA000370248A patent/CA1154699A/en not_active Expired
- 1981-02-06 FR FR8102322A patent/FR2475573A1/fr active Granted
- 1981-02-07 JP JP1738381A patent/JPS56158094A/ja active Pending
- 1981-02-09 GB GB8103853A patent/GB2071651B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH648846A5 (de) | 1985-04-15 |
| GB2071651B (en) | 1983-10-19 |
| DD156189A5 (de) | 1982-08-04 |
| IL62079A (en) | 1984-04-30 |
| GB2071651A (en) | 1981-09-23 |
| HU178405B (en) | 1982-04-28 |
| DK151274C (da) | 1988-06-20 |
| IT8119586A0 (it) | 1981-02-06 |
| CS215148B2 (en) | 1982-07-30 |
| US4369252A (en) | 1983-01-18 |
| CA1154699A (en) | 1983-10-04 |
| NL8100567A (nl) | 1981-09-01 |
| DE3104151C2 (da) | 1989-09-14 |
| JPS56158094A (en) | 1981-12-05 |
| IL62079A0 (en) | 1981-03-31 |
| BE887391A (fr) | 1981-08-05 |
| FR2475573B1 (da) | 1984-04-27 |
| YU27881A (en) | 1983-10-31 |
| SU1119609A3 (ru) | 1984-10-15 |
| DE3104151A1 (de) | 1981-12-03 |
| FR2475573A1 (fr) | 1981-08-14 |
| DK52581A (da) | 1981-08-09 |
| IT1135359B (it) | 1986-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gamborg et al. | Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells | |
| Converse | Effect of physico-chemical environment on spherulation of Coccidioides immitis in a chemically defined medium | |
| Leonian et al. | The effect of vitamins on ten strains of Saccharomyces cerevisiae | |
| RU2092547C1 (ru) | Способ активации микробиологических процессов, роста растений и клеток растений | |
| JP4623766B2 (ja) | アカルボース調製のためのオスモル濃度制御発酵法 | |
| US4369252A (en) | Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids, primarily ergocornine and β-ergocryptine | |
| Moustafa | Nutrition and the development of mushroom flavor in Agaricus campestris mycelium | |
| DE2152039B2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Baktenenzellmasse | |
| Quispel | Symbiotic nitrogen fixation in non-leguminous plants. III. Experiments on the growth in vitro of the endophyte of Alnus glutinosa | |
| RU2188868C2 (ru) | Способ получения клавулановой кислоты | |
| US2056360A (en) | Ergot preparation and process of obtaining same | |
| US4447540A (en) | Microorganism strain of species Claviceps purpurea | |
| SU562205A3 (ru) | Способ получени алкалоидов спорыньи | |
| SU1495370A1 (ru) | Способ получени культуры проте в О-форме | |
| SU427989A1 (da) | ||
| BE887392A (fr) | Procede pour regler la quantite et les proportions des alcaloides qui se forment lors de la fermentation | |
| SU258845A1 (ru) | Способ производства 1-лизина | |
| SU1423588A1 (ru) | Способ получени ноурзеотрицина | |
| SU1406155A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани РSеUDомоNаS aeRUGINoSa-продуцента алкалоидов фенилтиазолового р да | |
| RU1784618C (ru) | Штамм бактерий RнIZовIUм Sp. (ОNовRYснIS) дл производства удобрени под эспарцет | |
| KR920005976B1 (ko) | 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법 | |
| RU2575804C1 (ru) | ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Candida parapsilosis - ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ | |
| DE2447274A1 (de) | Verfahren zur herstellung von l-lysin | |
| CN109761701A (zh) | 一种有效促进蜜宝西瓜花芽生长的液体肥料及其制备方法 | |
| ABOU-EL-SEOUD | The relation of environment to lipid and protein synthesis by a species of cladosporium |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |