DK157713B - Fremgangsmaade til bestemmelse af maengden af en vanillinpositiv ionophor i et foderstof og testudstyr til anvendelse ved fremgangsmaaden - Google Patents

Description

i

DK 157713 B

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til bestemmelse af mængden af en vanillinpositiv ionophor i et foderstof og et testudstyr til anvendelse ved en sådan fremgangsmåde.

Det er almindelig praksis i dyrefoderstoffer at inkorporere foder-5 additiver, som bidrager til foderets næringsværdi, eller som har den funktion at fremme vækst. Et sådant foderadditiv er monensin, et produkt, som i vid udstrækning anvendes både i kvæg- og fjerkræfoder, og som er beskrevet i US patentskrift nr. 3.501.568. Andre additiver af lignende natur, der generisk betegnes som ionophorer, indbefatter for 10 eksempel narasin og salinomycin.

Vi har nu fundet frem til en bekvemt måde, hvorpå indholdet af sådanne foderadditiver kan bestemmes under fabrikationsprocessen eller under praktiske anvendelsesbetingelser.

Den foreliggende opfindelse tilvejebringer en fremgangsmåde til be-15 stemmelse af mængden af en vanillinpositiv ionophor, såsom monensin eller salinomycin, i et foderstof, ved hvilken man blander foderstoffet med et alkoholisk opløsningsmiddel, til den resulterende opløsning sætter en syre med en pKa-værdi på mindre end 4 og et farvefremkaldende arylaldehyd, udvalgt blandt vanillin, ethylvanillin, 2,4-dimethoxybenz-20 aldehyd, 3,4-dimethoxybenzaldehyd, 2,4,5-trimethoxybenzaldehyd, 4-di-methylaminobenzaldehyd og kanel aldehyd ved en temperatur, som er tilstrækkelig til at fremkalde en farvereaktion, og sammenligner den således frembragte farve med en standard, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at både syren og det farvefremkaldende arylaldehyd an-25 vendes i fast form.

Anvendelsen af faste testingredienser og specielt af syre i fast form ved testmetoden har vist sig at give praktiske forbedringer. Som farvefremkaldende arylaldehyder anvendes vanillin, ethylvanillin, 2,4-dimethoxybenzaldehyd, 3,4-dimethoxybenzaldehyd, 2,4,5-trimethoxybenz-30 aldehyd, 4-dimethylaminobenzaldehyd eller kanelaldehyd med vanillin som det mest foretrukne aldehyd. Aldehydet behøver ikke i sig selv at være et fast stof, når blot det anvendes i fast form, for eksempel absorberet på en fast bærer.

Fra Chemical Abstracts, bind 78 (1973), side 377, nr. 56542f, kend-35 es en fremgangsmåde til bestemmelse af monensin, ved hvilken en opløsning af vanillin i en opløsning af svovlsyre i methanol anvendes som farvereagens.

Anvendelsen af flydende ingredienser til tests til bestemmelse af

DK 157713 B

2 ionophorer, såsom for eksempel opløsninger af vanillin og af flydende syre, som er påkrævet for at katalysere reaktionen mellem vanillin og ionophor, resulterer imidlertid i betydeligt besvær, når der er behov for at foretage en hurtig bestemmelse under praktiske forhold, og har 5 vist sig at give upålidelige resultater. Det har overraskende vist sig, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen udover at være mere bekvem giver større pålidelighed. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan også anvendes til at bekræfte fravær af vanillinpositiv ionophor i et foderstof, når det for eksempel påtænkes at anvende foderet til dyr, såsom en hest, der 10 reagerer negativt på sådanne ionophorer.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes til bestemmelse af vanillinpositive ionophorer, såsom for eksempel narasin og salinomycin og specielt monensin. Blandt faste syrer, som kan anvendes, er fx 5-sulfosal icylsyre, sulfaminsyre, hydroxylamin-O-sulfonsyre og p-toluen-15 sulfonsyre, og det foretrukne materiale er 5-sulfosalicylsyre. Det fore^ trukne opløsningsmiddel til blanding med foderstoffet er methanol, men andre alkoholiske opløsningsmidler, såsom for eksempel ethanol, kan anvendes enten alene eller som en vandig alkoholisk blanding, der indeholder en tilstrækkelig mængde af alkoholen til effektivt at ekstrahere 20 ionophorkomponenten.

Den ved reaktion mellem ionophor i foderstoffet og arylaldehyd og syre fremkaldte farve bestemmes ved sammenligning med en standard, som for eksempel kan være en farveopløsning, som er fremstillet ved blanding af en kendt mængde ionophor med aldehyd og syre eller ved anvendelse af 25 et kalibreret farvekort. For at frembringe en farve er det nødvendigt at sikre, at reaktionen finder sted ved en passende, temperatur, som fortrinsvis er i intervallet fra ca. 50-70°C, specielt 60°C, hvilken for eksempel tilvejebringes ved at dyppe en beholder med opløsningen i et opvarmet vandbad.

30 I praksis er det ofte bedst at dekantere den ved blanding af foderstoffet med alkoholisk opløsningsmiddel dannede opløsning og derefter blande supernatanten med aldehyd og syre på et understøttende medium, såsom for eksempel en skive af filtermateriale eller mere foretrukket med tabletter af arylaldehyd og syre. Da syrekomponenten og arylalde-35 hydet kan være vanskelige at formulere sammen i stabil form, foretrækkes det at anvende to separate tabletter, som hver indeholder en af komponenterne. Både fast syre og arylaldehyd kan let fremstilles i tabletform. Hvis det drejer sig om flydende aldehyder, kan materialet adsor-

DK 157713 B

3 beres på passende bærere ved tabletformuleringen. En foretrukket fremgangsmåde ifølge opfindelsen, omfatter følgelig de trin at man (a) blander et foderstof indeholdende en vanil linpositiv ionophor med et alkoholisk opløsningsmiddel, 5 (b) dekanterer en portion af supernatanten, (c) tilsætter en eller flere tabletter indeholdende en fast syre med en pKa-værdi på mindre end 4 og en eller flere tabletter indeholdende vanillin til supernatantportionen ved en temperatur, som er tilstrækkelig til at fremkalde en farvereak- 10 tion, og (d) sammenligner den således dannede farve med en standard, der er valgt i overensstemmelse med de specifike mængder og volumener af testmaterialer, der er anvendt.

Som man vil forstå, må mængden af foderstoffet, volumenet af opløs-15 ningsmidlet og ander mængder, der benyttes, udvælges omhyggeligt, så de svarer til standardens krav. Af praktiske hensyn vil mængden af foderstof fortrinsvis blive sat til en værdi på 3, 4 eller 5 g, som for eksempel kan afmåles ved, at en beholder, såsom en flaske eller et rør, fyldes op til et nærmere angivet mærke. Derefter kan opløsningsmiddel 20 med et specificeret volumen, for eksempel 8 til 12 ml, tilsættes, og blandingen opvarmes i et tidsrum på et til to minutter. En specificeret portion af supernatanten, for eksempel 1,5 til 2,5 ml, dekanteres derefter over i en anden beholder, hvortil tabletterne med syre og arylaldehyd sættes, i almindelighed en af hver af disse to komponenter. Tablet-25 terne indeholder en passende mængde af syrekatalysatoren eller vanilli-net til, at der frembringes en farvereaktion, som kan vurderes kvantitativt ved sammenligning med standardfarveopløsningen eller det kalibrerede farvekort. Der anvendes fortrinsvis et overskud af syre og vanillin, og mængden pr. tablet kan for eksempel være 40 til 60 mg syre og 40 mg 30 og 60 mg vanillin. Standardfarveopløsningen kan fremstilles ved at blande en tablet, som for eksempel indeholder en specificeret mængde ionophor på 100, 200 eller 300 pg, med en passende mængde opløsningsmiddel.

Som anført ovenfor må testen udføres ved en temperatur, som er tilstrækkelig til at fremkalde en farvereaktion mellem komponenterne. Vi er 35 nået til det resultat, at den optimale temperatur er 60°C, og at det er mest bekvemt at tilføre varme efter, at arylaldehydet og syren er blevet sat til den alkoholiske opløsning. Som alternativ kan opløsningsmidlet imidlertid opvarmes til 60°C, før det blandes med foderstoffet, eller

DK 157713 B

4 det kan opvarmes derefter umiddelbart før, der tilsættes syre og aldehyd.

Tabletterne, der anvendes, kan fremstilles på konventionel måde, hvorved den faste syre eller aldehydet blandes med en passende mængde 5 fyldstof og overfladeaktivt middel. Typiske formuleringer til sådanne tabletter er som følger:

Tablet 1. 5-sulfosalicylsyre 50 mg magnesiumstearat 0,25 mg 10 "Aerosil" 0,25 mg

Tablet 2. Vanillin 50 mg magnesiumstearat 0,25 mg "Aerosil" 0,25 mg 15

Opfindelsen omfatter også et testudstyr til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som omfatter en ekstraktionsbeholder, der fortrinsvis er gradueret i overensstemmelse med mængden af foderstof, som skal ekstraheres, volumenet af opløsningsmiddel, som skal tilsættes, 20 og volumenet af supernatant, som skal dekanteres, en prøvebeholder til iagttagelse af supernatantens farve, en beholder indeholdende opløsningsmiddel, tabletter af standardmængder af fast syre og farvefremkaldende arylaldehyd samt et farvekort, eller en eller flere tabletter med vanillinpositiv ionophor i standardmængde.

25 Opfindelsen illustreres nærmerer i det efterfølgende eksempel.

EKSEMPEL

Først fremstilledes en standardfarveopløsning ved blanding af en tablet indeholdende 100 βg monensin med 2 ml methanol i et prøverør, 30 tilsætning af 50 mg 5-sulfosalicylsyre og 50 mg vanillin i separat tabletform, og blandingen blev holdt på 60°C ved nedsænkning i et vandbad.

Da komponenterne gik i opløsning, frembragtes en rød farvetone.

For sammenligning med denne standardopløsning, anbragtes 5 g kvægfoderstof indeholdende en kendt mængde monensin på 50 dele pr. million i 35 en ekstraktionsflaske, 10 ml methanol tilsattes, blandingen rystedes, og supernatanten testedes for farvereaktion. Noget (2 ml) af supernatanten hældtes i et prøverør, og 50 mg 5-sulfosalicylsyre og 50 mg vanillin tilsattes i separat tabletform. Prøverøret nedsænkedes i et vandbad på

Claims (7)

1. Fremgangsmåde til bestemmelse af mængden af en vanil linpositiv ionophor, såsom monensin eller salinomycin, i et foderstof, ved hvilken man blander foderstoffet med et alkoholisk opløsningsmiddel, til den resulterende opløsning sætter en syre med en pKa-værdi på mindre end 4 og et farvefremkaldende arylaldehyd, udvalgt blandt vanillin, ethyl -15 vanillin, 2,4-dimethoxybenzaldehyd, 3,4-dimethoxybenzaldehyd, 2,4,5-tri-methoxybenzaldehyd, 4-dimethylaminobenzaldehyd og kanelaldehyd ved en temperatur, som er tilstrækkelig til at fremkalde en farvereaktion, og sammenligner den således frembragte farve med en standard KENDETEGNET ved, at både syren og det farvefremkaldende arylaldehyd anvendes i fast 20 form.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det farvefremkaldende arylaldehyd er vanillin.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, KENDETEGNET ved, at syren er 5-sulfosalicylsyre.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den omfatter, at man 30 (a) blander et foderstof, der indeholder en vanillinpositiv iono phor, med et alkoholisk opløsningsmiddel, (b) dekanterer en portion af supernatanten, (c) tilsætter en eller flere tabletter indeholdende en fast syre med en pKa-værdi på mindre end 4 og en eller flere tabletter 35 indeholdende vanillin til supernatantportionen ved en tempera tur, som er tilstrækkelig til at fremkalde en farvereaktion, og DK 15 7 713 B (d) sammenligner den således dannede farve med en standard, der svarer til de specifike mængder og volumener af testmaterialer, der er anvendt.

5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav til bestemmelse af mængden af monensin i et foderstof.

6. Testudstyr til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, KENDETEGNET ved, at det omfatter en eks- 10 traktionsbeholder, en prøvebeholder til iagttagelse af supernatantens farve, en beholder indeholdende opløsningsmiddel, tabletter af standardmængder af fast syre og farvefre'mkaldende arylaldehyd samt et farvekort eller en eller flere tabletter med vanillinpositiv ionophor i standardmængde. 15

7. Testudstyr ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at ekstraktionsbeholderen er gradueret i overensstemmelse med mængden af foderstof, som skal ekstraheres, volumenet af opløsningsmiddel, som skal tilsættes, og volumenet af supernatant, som skal dekanteres. 20 25