DK160313B

DK160313B - 7-aminocephalosporinderivater til anvendelse som mellemprodukt til fremstilling af cephalosporinderivater

Info

Publication number: DK160313B
Application number: DK063990A
Authority: DK
Inventors: Susumu Tsushima; Michiyuki Sendai; Mitsuru Shiraishi
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1975-02-24
Filing date: 1990-03-12
Publication date: 1991-02-25
Also published as: DK76190A; MX3635E; HU179598B; DK161201C; SE7907455L; DK159154C; DE2607064C2; SE435182B; SE435183B; US4245088A; DK76190D0; NL7601902A; HK2482A; DK63990D0; ES445348A1; DK44076A; DE2607064A1; FR2301528B1; DK161201B; ATA126476A

Description

DK 160313 B

i

Opfindelsen angår en forbindelse til anvendelse som mellemprodukt til fremstilling af en forbindelse med formlen i s R NH -,-S Nj ΊΓίΧν· "

o' I

COOH

i hvilken er en acylgruppe med formlen CHCO- R5^ hvor R4 betyder acetyl, halogenacetyl, phenyl, p-hydroxyphenyl, thienyl, 2-imino-4-thiazolin-4-yl, 2-oxo-4-thiazolin-4-yl, tetra-zolyl eller phenoxy, og R^ betyder hydrogen, sulfo, amino eller hydroxy, og R3 er en rest af en nucleofil forbindelse, som er ejendommelig ved, at den har formlen -1-"Ϊ Å I (II)

-N -CHjOCOW

COOH

i hvilken w betyder acetonyl (-CH2COCH3), Æ) euer

-CH I

OH COOH

som kan være substituerede med en nitrogruppe, eller et salt deraf.

Cephalosporinderivater med en 3-hydroxymethylde1 har hidtil kun kunnet opnås ved enzymatisk fraspaltning af 3-acetylgruppen fra 3-acetoxymethylcephalosporiner eller ved fraskillelse fra cephalo-

DK 160313B

2 sporin C-gæringsbiprodukter. For nylig er det blevet muligt at fremstille 7-(d-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (desacetylcephalosporin C, DCPC) i højt udbytte ved gæring (USA-patentskrift nr. 3.926.726, Nature New Biology, 246, 154 (1963)), og ved siden af cephalosporin C har dette stof tiltrukket opmærksomhed som udgangsmateriale for cephalosporinforbindelser med stærkere antibiotisk aktivitet.

Det har imidlertid været anset for vanskeligt at acylere 3-hydroxymethylgruppen i 3-hydroxymethylforbindelsen (cephalo-sporadessyre). F.eks. rapporterede Heyningen [Van Heyningen: J.Med.Chem., ii, 22 (1965), Advan. Drug. Res., 4, 28 (1968)], at O-acyleringen af cephalosporadessyre kun var mulig med brugen af et stort overskud af aroylchlorid (udbytte 32-57%), og at brugen af keten, aliphatiske syrechlorider eller eddikesyreanhydrid ikke bevirkede O-acylering eller fremkaldte en lactonisering. Kukolja [J.Med.Chem. 13, 1114 (1970)] rapporterede en omvejsproces til syntese af O-acyloxymethylcephalosporiner, hvilken bestod i, at man 0-acylerede en 3-hydroxymethyl-2-cephemforbindelse og derpå isomeriserede denne til 3-cephemforbindelsen. USA-patentskrift nr. 3.532.694 og japansk patentpublikation nr. 33080/1975 omhandlede en fremgangsmåde, ved hvilken man for at forhindre lactoniserings-reaktionen først beskytter 4-carboxylgruppen i cephalosporadessyre, f.eks. ved forestering, og derpå udfører O-acyleringen. I den japanske fremlagte patentansøgning nr. 42792/1972 er omhandlet en fremgangsmåde, som består i at 0-acylere cephalosporadessyre med azolid. Imidlertid er disse processer ikke kommercielt udnyttelige, f.eks. fordi de kun giver lave udbytter og/eller medfører besværlige og tidskrævende procedurer og/eller kostbare reagenser. Således kan f.eks. foresteringen af cephalosporadessyre ikke udføres ved en almindelig foresteringsproces, ved hvilken flytningen af dobbeltbindingen eller lactoniseringen dominerer. Selv om det er muligt at indføre sådanne begrænsede grupper som methyl, ethyl, diphenylmethyl, benzyl ved hjælp af diazoforbindelser som diazomethan, diazoethan, diphenyldiazo- 3

DK 160313 B

methan, phenyldiazomethan er det vanskeligt efter 3-acyleringen at afesterificere forbindelsen uden ledsagelse af en eller anden sidereaktion, såsom spaltning af β-laetamringen eller en flytning af dobbeltbindingen.

På den anden side medfører reaktionen, ved hvilken 3-acetoxy-methylgruppen i en cephalosporinforbindelse substitueres med et nukleofilt reagens, en samtidig dekomponering af udgangsmaterialet, mellemproduktet og produktet i sit forløb og en langvarig reaktionstid og derfor lavere udbytter [A.B. Taylor, J.Chem.Soc., 7020 (1965)]. Det har således været ønskeligt at desponere over et derivat, der har en gruppe, der vil være mere villig til substitution end acetoxygruppen.

For at klare de ovennævnte problemer er der blevet udført en omfattende forskning, som førte til, at det lykkedes at syntetisere forbindelserne I, og det har vist sig, at forbindelserne I eller deres salte undergår den ønskede substitution med en nukleo-fil forbindelse med stor lethed. Den foreliggende opfindelse er udviklet på basis af ovennævnte erkendelse.

Af forbindelserne II kan forbindelserne, hvori W er acetonyl, fremstilles ved, at man omsætter en forbindelse med den almene formel 2 s R NH - ^ I (III)

Jr- N - CH20H

° T

COOH

hvori R2 er hydrogen eller en acylgruppe, med diketen. Diketenet kan også anvendes i form af et addukt med acetone, acetophenon eller lignende. Dette er en ækvimolær reaktion, hvilket betyder, at den ønskede reaktion kan udføres ved at anvende (III) og diketen i ækvimolære forhold. For at kompensere for den mulige

DK 160313B

4 dekomponering af diketen, som ville finde sted i nærværelse af vand eller alkohol, kan der imidlertid anvendes et overskud af diketen. Normalt kan denne reaktion med held udføres ved at lade en 3-hydroxymethylcephalosporin (III) og diketen indvirke på hinanden i et egnet indifferent opløsningsmiddel ved en temperatur på -30 til 40°C. Som indifferente opløsningsmidler kan der f.eks. anvendes dichlormethan, chloroform, dichlorethan, dimethylform-amid, dimethylacetamid, tetrahydrofuran, acetonitril, ethylace-tat, acetone, dioxan eller ether og forskellige blandinger af sådanne opløsniongsmidler. Reaktionen af diketen med 3-hydroxymethylcephalosporin (III) foregår med høj hastighed, men i betragtning af det forhold, at reaktionshastigheden i nogen grad afhænger af reaktionstemperaturen, og for at sikre, at reaktionen bliver ført til ende, udføres denne reaktion sædvanligvis i et tidsrum på 0,5 til 15 timer. Om nødvendigt kan en amin, såsom triethylamin, sættes til reaktionssystemet, eller når udgangsmaterialet (III) er et alkalimetalsalt, kan et ækvivalent af f.eks. triethylamin-hydrochlorid tilsættes for at udføre en salt-udveksling, før den ønskede reaktion finder sted.

-p Når W står for COOH, kan forbindelsen fremstilles ved, at man omsætter en 3-hydroxymethylcephalosporin III med en forbindelse med den almene formel / c x ^0 (IV) hvori X betyder decarboxylatdelen af W.

Som eksempler på forbindelsen IV kan nævnes maleinsyreanhydrid, ravsyreanhydrid, phthalsyreanhydrid, glutarsyreanhydrid, diglycol-syreanhydrid, thiodiglycolsyreanhydrid, p-chlorphenylravsyre- 5

DK 160313 B

anhydrid, methylenravsyreanhydrid, 3-nitrophthaXsyreanhydrid, tri-me11ithsyreanhydrid, isatoinsyreanhydrid.

I almindelighed udføres reaktionen af forbindelsen III med forbindelsen XV hensigtsmæssigt i nærværelse af et egnet indifferent opløsningsmiddel som dem, der anvendes i den lige ovenfor beskrevne reaktion. De støkiometriske forhold mellem reaktionsdeltagerne, reaktionstemperaturen og andre reaktionsbetingelser kan også ligne dem, der anvendes til den beskrevne reaktion.

/O

Forbindelserne, hvori W er -CH , kan fremstilles ved, at man noh omsætter en 3-hydroxymethylcephalosporin III med en forbindelse med den almene formel x (v) - c hvori X betyder dehydroxydelen af W.

Som eksempler på forbindelsen V kan nævnes O-carboxymandelsyre-anhydrid, O-carboxy-a-hydroxypropionsyreanhydrid, O-carboxy-Ø-hydroxypropionsyreanhydrid, O-carboxy-3-methylsalicylsyreanhy- drid, 0-carboxy- (o'-hydroxy-a-phenyl) -propionsyreanhydrid, 0-carb-oxy- (a-hydroxy-Ø-phenyl) -propionsyreanhydrid.

Betingelserne ved reaktionen mellem forbindelsen III og forbindelsen V ligner dem, der anvendes til de tidligere beskrevne reaktioner. Når udgangsmaterialet III har en ubeskyttet aminogruppe, kan reaktionen deraf med diketen, forbindelsen IV eller forbindelsen V udføres således, at både 3-hydroxy- og aminogruppen acyleres samtidig med de samme acylgrupper.

6

DK 160313 B

De fremkomne forbindelser II kan omdannes til forbindelser I eller tilsvarende salte deraf. Dette sker ved fraspaltning af 7-acyl-gruppen repræsenteret ved Ri på i og for sig kendt måde, f.eks. enhver af de procedurer, der er angivet i japansk patentpublikation nr. 13862/1966 og nr. 40899/1970, fremlagte japanske patentansøgninger nr. 34387/1972, nr. 95292/1975 og nr. 96591/ 1975, japansk patentpublikation nr. 35079/1975, USA-patentskrift nr. 3.632.578.

Forbindelserne med formlen I og deres salte kan anvendes som vigtige mellemprodukter til syntese af forskellige cephalosporin-antibiotika.

Aminogruppen og gruppen -0C0W kan modificeres på forskellige måder. Eksempelvis kan man i forbindelserne I eller deres salte indføre en forbindelse, som tidligere er nævnt som eksempel på R1 som 6- eller 7-substituenter i penicillin- eller cephalosporinfor-bindelser, ved forud at aktivere den samme på kendt måde. Således kan f.eks. forbindelsen, hvori R1 er 4-halogen-3-oxobutyryl, fås ved at omsætte den nævnte forbindelse med et 4-halogen-3-oxo-butyrylhalogenid, som på sin side kan omsættes med thiourinstof til dannelse af den tilsvarende 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido ]-forbindelse. Selv om det afhænger i nogen grad af typen af 3-substituenten, viser disse forbindelser altid fortrinlig antibiotisk aktivitet. F.eks. er forbindelsen med 1-methyltetra-zol-5-ylthiomethyl i 3-stilling særlig nyttig, idet der opnås omtrent samme virkning med denne forbindelse i en dosis på omkring en femtedel af dosen af cephazolin.

Den foreliggende opfindelse illustreres yderligere af de følgende eksempler. I denne beskrivelse er harpikser benævnt "Amberlite" produkter fremstillet af Rohm & Haas Co. i USA. "Celite" og "Sephadex" markedsføres af henholdsvis Johns-Manvilla Sales Corp. og Pharmacia A.B. Alle temperaturerne er ukorrigeret, og procenterne er alle på vægtbasis, medmindre andet er angivet. De angiv

DK 160313B

7 ne NMR-spektre blev målt under anvendelse af et Varian Model HA 100 (100 MHz)- eller T60 (60 MHz)-spektrometer med tetramethyl-silan som intern reference, og alle δ-værdier er i ppm. Symbolet s står for singlet, d for dublet, t for triplet, q for kvartet, m for multiplet og J for en koblingskonstant.

Eksempel 1 I di chlo rmethan (75 ml) suspenderes 7β-[D-5-phthalimido-5-carboxy-val eramido ] - 3 - (2 -c arbo xyb enz o y 1 o xy) -m e t hyl - 3-c eph em-4-c arb o xyl syre (6,51 g). Ved en temperatur, der ikke overstiger 10°C, tilsættes så triethylamin (4,20 ml). Til den således opnåede opløsning sættes Η,Ν-dimethylanilin (10,0 ml) sammen med dimethyldiehlorsilan (4,40 ml). Blandingen omrøres ved 20-25°C i 30 minutter. Blandingen afkøles så til -30°C, hvorpå der tilsættes phosphorpentachlorid (4,20 g).

Den omsættes så ved -25 ± 2°C i 30 minutter, hvorefter der dråbevis tilsættes methanol (25 ml) ved en temperatur, der ikke overstiger -20°C. Blandingen omsættes ved -15 til -30°C i 20 minutter, og efter tilsætning af vand (50 ml) omrøres der kraftigt i 5 minutter. Reaktionsblandingen adskilles, og man tager det vandige lag, vasker det med ethylacetat og indstiller på pH 3,2 med 40^'s vandig kaliumearbo-natopløsning. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med vand, 50$’s vandigt methanol og acetone i den nævnte rækkefølge og tørres. Proceduren giver 7P-amino-3-(2-carboxybenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,43 g).

IR (KBr): 3170, 1798, 1730, 1700, 1615 cm-1.

MR (δ i D20+Ra0D): 3,55 (2H,ABq,J=l8Hz), 4,6-5,6 (4H,m), 7,30-7,90 (4H,m).

Eksempel 2 I dichlormethan (70 ml) suspenderes 7p-[D~5-phthalimido-5-carboxy-val eramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,88 g). Ved en temperatur, der ikke overstiger 10°C, tilsættes så triethylamin (2,80 ml), hvorpå der tilsættes E,E-dimethylanilin (10,0 ml) og dimethyldiehlorsilan (3,13 ml). Blandingen omrøres ved 8

DK 160313 B

20-25°C i 30 minutter, hvorefter der tilsættes phosphorpentachlorid (4,20 g) ved -30°C. Blandingen omsættes ved -25 ± 2°C i 30 minutter, hvorefter der dråbevis tilsættes methanol (25 ml) ved en temperatur, der ikke overstiger -20°C. Reaktionen får lov at forløbe ved -15 til -10°C i 20 minutter, hvorpå der tilsættes vand (50 ml) ved -15 til -10°C og omrøres kraftigt i 5 minutter. Vandlaget tages, vaskes med diehlormethan og indstilles på pH 3,5 med en 40f°'s vandig opløsning af kaiiumcarbonat. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med vand, 50$' s vandigt methanol og acetone og tørres til slut. Proceduren giver 7p*-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4"Carb-oxylsyre (2,84 g).

IR (KBr): 3200, l800, 1745, 1720, 1622 cm-1.

HMR (δ i D20+HaOD): 2,27 (3H,s), 3,48 (2H, ABq,J=l8Hz), 4,6-5,6 (4H,m).

Eksempel 3 I dimethylformamid (70 ml) suspenderes desacetyl-cephalosporin C (13,7 g), hvorpå der tilsættes koncentreret svovlsyre (2,4 ml). Til den resulterende opløsning sættes triethylamin (29 ml) sammen med N-carboethoxyphthalimid (8,5 g). Blandingen omrøres ved 30°C i 50 minutter, hvorefter der tilsættes ravsyreanhydrid (3,0 g). Blandingen omrøres i 30 minutter, hvorefter der tilsættes en yderligere mængde (0,6 g) ravsyreanhydrid. Blandingen omrøres yderligere i 1 time og hældes derpå i en kold mættet vandig opløsning af natriumchlorid (200 ml). Opløsningen gøres sur med phosphorsyre og ekstraheres tre gange med ethylacetat. Ekstrakten ekstraheres tilbage til en opløsning af natriumhydrogencarbonat (8 g) i vand (150 ml). Vandlaget indstilles på pH 1,7 med phosphorsyre og ekstraheres med en blanding af tetrahydrofuran og diehlormethan (1:4). Ekstrakten tørres over magne-siumsulfat, filtreres, og efter tilsætning af triethylamin (18 ml) koncentreres den til tørhed. Til remanensen sættes diehlormethan -(200 ml) sammen med triethylamin (6 ml) og dimethylanilin (30 ml). Efter tilsætning af dimethyldichlorsilan (2® ml) omrøres blandingen i 30 minutter, hvorefter den afkøles til -30°C, og der tilsættes phosphorpentachlorid (20 g). Blandingen omrøres ved -'30°C i 30 minutter, og efter tilsætning af methanol (63 ml) omrøres den yderligere i 30 minutter. Derpå fortyndes den med vand (120 ml), bringes på pH 3,0 og får lov at køle af. De resulterende krystaller filtreres fra. Den ovennævnte procedure giver 7-amino-3-(3-carboxypropionyl-oxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,4 g) · IR (KBr): 1802, 1735, 1720 (skulder) cm”1.

9 DK 160313 B

Eksempel 4

Til 7β-[ D-5 - (p -t -butylb enz ami do) -5 -c arbo xyval er amido ] - 3-mandelylo xy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,67 g) sættes dichlormethan (60 ml), og under køling med is tilsættes dimethylanilin (3,78 ml) og triethyl-amin (4,20 ml). Til den resulterende opløsning sættes dimethyldichlor-silan (3,87 g), hvorpå der omrøres ved 8-15°C i 1 time. Ved —30°C tilsættes derpå dimethylanilin (1,26 ml) og phosphorpentachlorid (4,17 g] Blandingen omrøres ved -30 til -20°C i 2 timer. Ved -45°C tilsættes derpå dråbevis methanol (30 ml) over et tidsrum på 10 minutter. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, omrøres blandingen ved -10 til -5°C i 40 minutter, og derpå tilsættes vand (20 ml) dråbevis i løbet af 5 minutter. Derpå indstilles blandingen på pH 3,3 med koncentreret vandig ammoniak, hvorved en hvid opslæmning udskilles. Efter 1 times henstand -under iskøling filtreres bundfaldet fra, vaskes med vand, methanol og ether i den nævnte rækkefølge og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-amino-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,31 g).

IR (KBr): 1800, 1740, 1621 cm-1.

Eksempel 5

Til 7β -[ D-5 - (p -t-butylb enzamido) -5-carboxyvaleramido ] -3-[ 2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (7,26 g) sættes dichlormethan (60 ml), og under køling med is tilsættes dime-thylanilin (3,78 ml) og triethylamin (4,20 ml). Til den resulterende opløsning sættes dimethyldichlorsilan (3,87 g), hvorpå der omrøres ved 7-15°C i 1 time. Blandingen afkøles til -30°0, og der tilsættes dim ethyl anilin (1,26 ml) og phosphorpentachlorid (4,17 g). Blandingen omrøres ved -30 til -20°C i 2 timer, hvorefter den afkøles til -45°C, og der tilsættes methanol (30 ml) dråbevis over et tidsrum på 15 minutter. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, omrøres blandingen ved -10 til -8°C i 40 minutter, og der tilsættes vand (20 ml) dråbevis i løbet af 10 minutter. Blandingen indstilles så på pH 3,4 med koncentreret vandig ammoniak, hvorved der udskilles en. i det væsentlige hvid opslæmning. Efter 45 minutters henstand under iskøling filtreres bundfaldet fra og vaskes med vand, methanol og ether i den nævnte rækkefølge. Det tørres så under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-^ϊηο-3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitro-benzoyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,93 g).

IR (KBr): 1787, 1734, 1614, 1535, 1350 cm"1.

10 DK 160313 B

Eksempel 6 I vand (48 ml) suspenderes 7P-amino-3-(2-carboxybenzoyloxy)-methyl-

3-cephem-4-carboxylsyre (7r33 g), o g ved 0-3°C tilsættes 2 H natriumhydroxid (19,5 ml) i små portioner, idet man sørger for, at pH-værdi-en ikke overstiger 8,5- Efter tilsætning af natriumhydrogencarbonat (3,65 g) tilsættes en opløsning af D-a-sulfophenylacetylchlorid (5,0 g) i ethylacetat (8,8 ml) dråbevis ved 0-5°C over et tidsrum på 1 time. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, udføres reaktionen ved 0-5°C i 20 minutter. Reaktionsblandingen indstilles på pH

5,5 og adskilles. Vandlaget tages, afgasses, og efter at have fået bekræftet, at pH-værdien ligger i området på 5,5 til 6,5, tilsættes ethanol (800 ml) over et tidsrum på 1 time. Derefter omrøres blandingen i 30 minutter, hvorefter den afkøles til en temperatur, der ikke overstiger 5°C. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med ethanol/vand (10:1) og ethanol i den nævnte rækkefølge og tørres. Proceduren giver 7p-(D-a-sulfophenylacetåmido)-3-(2-carboxybenzoyl-oxy) -methyl-3-c ephem-4-carboxylsyre-trinatriumsalt (11,6 g).

IR (KBr): 3350, 1768, 1735, 1670, 1610 cm-1.

MR (δ i D20): 3,44 (2H,iffiq,J=l8Hz), 5,00 (2H,ABq,J=13Hz), 5,06 -(lH,d,J=5Hz), 5,08 (IH,s), 5,67 (IH,d, J=5Hz), 7,3-7,9 (m,9H).

Eksempel 7 I vand (48 ml) suspenderes 7β-amino-3-(3-0xobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,09 g), og ved 0-3°C tilsættes 2 H natriumhydroxid (10,4 ml) i små portioner, idet man sørger for, at pH-vær-dien ikke overstiger 8,5. Efter tilsætning af natriumhydrogencarbonat (3,65 g) tilsættes en opløsning af D-a-sulfophenylacetylchlorid (5,0 g) i ethylacetat (8,8 ml) dråbevis ved 0-5°C over et tidsrum på 1 time. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, udføres reaktionen ved 0-5°C i 20 minutter. Derpå indstilles reaktionsblandingen på pH 5,5 og adskilles. Vandlaget tages, afgasses, og efter at have fået bekræftet, at pH-værdien ligger i området på 5,5 til 6,5, sættes ethanol (8θ0 ml) til denne vandige opløsning (ca. 80 ml). Derefter omrøres blandingen i 30 minutter, hvorefter den afkøles til en temperatur, der ikke overstiger 5°C. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med ethanol/vand (10:1) og ethanol og tørres. Proceduren giver 7β-( D-α-sul fo phenyl ac etami do )-3-( 3-oxobutyryloxy)-me-thyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (8,8 g).

IR (KBr): 3300, 1763, 1740, 1680, 1610, 1215, 1047 cm-1.

DK 160313 B

11 o NMR (δ i D20): 2,27 (3H,s,_£CH ), 3,29 (2H, ABq, J=l8Hz, 2-0¾), 4,84 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,00 (lå,d,J=5Hz,6-H), 5,07 (lH,s,-CH- ), SO .Na

5,70 (lH,d,J=5Hz,7-H), 7,25-7,80 (5H,m). J

Eksempel 8 · I dichlormethan (80 ml) suspenderes 7β-amino-3-(3-0xobuturylo xy) -meth.yl-3-cephem-4-carboxylsyre (15,7 g). Ved -10°C tilsættes tri-ethylamin (10,1 g). Til den resulterende opløsning sættes en opløsning af 4-chlor-3-oxobutyrylchlorid (1,41 mmol/g) (44,9 g) dråbevis ved -20 til -15°C over et tidsrum på 20 minutter. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, udføres reaktionen ved en temperatur, der ikke overstiger -5°C, i 1 time. Efter reaktionen afdestilleres dichlormethanet, og remanensen opløses ved tilsætning af tetrahydro-furan (50 ml), ethylacetat (100 ml) og 10$'s phosphorsyre. Den resulterende opløsning adskilles, og det organiske lag tages. Det vandige lag ekstraheres med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetat og tetrahydrofuran (5:1). Ekstrakterne forenes, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres over magnesiumsulfat og filtreres. Opløsningsmidlet afdestilleres, og remanensen behandles med ethylacetat-ether. Det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres. Proceduren giver 7P~(4-chlor-3-oxobutyramido)-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (20,4 g).

IR (KBr): 3325, 1782, 1740, 1732, 1715, 1685, 1650 cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,14 (3H,s), 3,55 (4H,s), 3,54 (2H,br), 4,44 (2H,s), 4,90 (2H,ABq,J=13Hz), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,54 (lH,q, J=5 og 8Hz), 8,96 (lH,d,J=8Hz).

Dichlormethanopløsningen af 4-chlor-3-oxobutyrylchlorid, der anvendes ved denne reaktion, fremstilles ved at opløse diketen (84,0 g) i di-chlormethan (420 ml) og indføre chlorgas (78,1 g) ved -30 til -35°C i 1 time.

12 DK 160313 B

.,Eksempel 9

Medens en opløsning af diketen (0,91 g) i dichlormethan (2 ml) omrøres ved -40 til -30°C, tilsættes brom (1,82 g) dråbevis. Separat opløses 7P-amino-3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,6 g) og triethylamin5 (1,7 g) i dichlormethan (20 ml) og afkøles til -40°C. Denne opløsning sættes til ovennævnte réaktionsblanding.

Efter omrøring i 20 minutter omrøres blandingen yderligere under køling med is. Efter tilsætning af vand (7 ml), phosphorsyre og ethyl-acetat omrøres blandingen kraftigt, .og det organiske lag vaskes med en vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og affarves med aktiveret kul. Derpå afdestilléres opløsningsmidlet, og der tilsættes ether. Proceduren giver 7β-(4-brom-3-oxobutyramido)-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,4 g).

IR (KBr): 1790, 1730, 1645, 1545 cm"1.

EMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H, s,C0CH3), 3,60 (2H,s,-C0CH2C0- 3,3-3,8 (2H,bred, 2-CH2) ,. 4,36 (2H,s,BrCH2C0-), 4,76 og 5,06 (2H,ABq, J=12Hz,3-CH2), 5,07 (lH,d, J=4,5Hz, 6-H), 5,68 (lH,dd,J=4,5 og 8Hz,7-H), 9,04 (lH,d, J=8Hz,-C0NH-).

Eksempel 10

En opløsning af diketen (0,20 ml) i dichlormethan (1 ml) omrøres ved -30°C; en 1,5 M opløsning af ehlor i carbontetrachlorid (2,0 g) tilsættes dråbevis over et tidsrum på 10 minutter. Blandingen omrøres yderligere ved -25 til -35°C i 30 minutter. Separat opløses 7β-amino- 3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl-3-eephem-4-carboxyl-syre (0,90 g) og triethylamin (0,84 ml) i dichlormethan (5 ml) og afkøles til -5 til -10°C. Til denne opløsning sættes ovennævnte reaktionsblanding dråbevis ved -20 til -30°C over et tidsrum på 15 minutter. Blandingen omrøres så ved den samme temperatur i 45 minutter. Derpå = destilleres reaktionsblandingen under reduceret tryk, og remanensen omrøres kraftigt med ethyl acetat (25 ml), tetrahydro furan (5 ml) og IQfo's vandig phosphorsyre (20 ml). Det organiske lag vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (15 ml), tørres over natriumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Ved tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether (10 ml) og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-(4-chlor-3-oxobutylamido )-3-[ 2-carboxy-6( eller 3) -nitrobenzoyloxy] -methyl-3-cephem-4~carboxylsyre (0,70 g).

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,4-3,8 (2H,2-CH2), 3,54 (2H,s, -COCH2CO-), 4,52 (2H,s,C1CH2-), 4,94 og 5,22 (2H,ABq,J=13Hz, 3-0¾), 13

DK 160313 B

5,04 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,68 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,7-8,5 (3H,m, v N0? -q: ^), 9,04 (IH,d, J=8Hz,-CONH-).

Eksempel 11 I acetone (10 ml) opløses 7p-(4-chlor-3-oxobutylamido)-3-(3-oxobuty-ryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,33 g), og under køling med is tilsættes vand (10 ml) og thiourinstof (0,84 g). Derpå tilsættes nat r iumhy drogenearbonat (0,84 g) og vand (10 ml). Blandingen omsættes ved stuetemperatur i 5 timer, hvorefter den afkøles med is. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med vand, acetone og ether og tørres. Proceduren giver 7β —[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetami do ] -3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,22 g).

IR (KBr): 1775, 1740, 1710, 1661 cm-1. Q

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H,s,_£CH ), 3,38 (2H,s, 0 0 -CH2C0NH-), 3,51 (2H,2-CH2), 3,59 (2H,s,_gCH gj, 4,77 og 5,06 (2H, ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,05 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,69 (lH,dd,J=5 og 9Hz,7-H), 6,23 (IH, s, thiazolin-H), 8,82 (lH,d, J=9Hz,-C0im-).

Eksempel 12

Dichlormethan (20 ml) sættes til en blanding af 7P-amino-3-(3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,14 g) og dimethylacet-amid (1,8 g). Under iskøling og omrøring tilsættes derpå phenoxyace-tylchlorid (1,8 g). Blandingen omrøres i 1 time, hvorefter det uopløselige filtreres fra, og filtratet vaskes med en vandig opløsning af natriumchlorid. Det organiske lag ekstraheres med en vandig na-triumhydro gene arb onat opløsning. Vandlaget gøres surt med phosphorsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vandig natrium-chloridopløsning, tørres og destilleres for at fjerne opløsningsmidlet. Til remanensen sættes ether, og det resulterende pulver filtreres fra og vaskes med ether. Proceduren giver 7P-phenoxyacetamido-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 1788, 1722 cm-1. Q

mm (δ i d6-dimethylsulfoxid): 2,18 (3H,s, CCH3), 3,60 (2H,2-CH2), 3,66 (2H,s, -CCHpC- ), 4,67 (2H,s,-0CHc>-), 4,99 (2H,3-CH0), 5,18 0 o (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,78 (lH,dd,J=5 og8Hz,7-H), 6,8-7,7 (5H,m), 9,07 (IH,d,J=8Hz).

„ DK 160313B

14

Eksempel 13 I dichlormethan (5 nil) suspenderes 7P-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (314 mg), og ved -10°C tilsættes triethylamin (0,28 ml). Til den resulterende opløsning sættes diketen (0,2 ml), og reaktionen udføres ved en temperatur, der ikke overstiger 0°C, i 2 timer. Efter denne reaktion afdestilleres dichlormetha-net, og remanensen opløses i vand-ethylacetat, indstilles på pH 2,0 med 4 ΪΓ saltsyre og adskilles. Ethylacetatlaget tages, fortyndes med vand, indstilles på pH 7,0 med 5$'s vandig natriumhydro gene arb onat- -opløsning og adskilles. Vandlaget tages, koncentreres og underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand-me~ thanol. Eluatet lyofiliseres. Proceduren giver 7P-(3-oxobutylamido)- 3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (375 mg).

IR (KBr): 3320, 1770, 1745, 1660, 1610 cm-1.

mm (δ i D20): 2,27 (6H,s), 3,55 (2H,ABq,J=l8Hz), 4,93 (2H,ABq, J=13Hz), 5,15 (lH,d,J=5Hz), 5,70 (lH,d,J=5Hz). i

Eksempel 14 I acetonitril (5 ml) opløses 7P-(4-brom-3-oxobutylamido)-3-(3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,4 g), hvorpå der tilsættes thiocarbaminsyre-O-methylester (0,6 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i ca. 16 timer, og de resulterende krystaller filtreres fra. Proceduren giver 7β-[2-(2-oxo-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]- 3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 1780, 1722, 1675, 1629 cm-1.

mm ( δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H, s,-COCH^), 3,32 (2H, s, -CH2-C0HH), 3,41 og 3,64 (2H, ÅBq,J=l8Hz,2-H), 3,58 (2H,s,-C0CH2C0-), 4,75 og 5,06 (2H,ABq,J=13Hz), 5,06 (lH,d, J=4,5Hz, 6-H), 5,68 (lH,dd,J=4,5 og 8Hz, 7-H), 5,99 (IH, s, thiazolin-H), 8,94 (IH, d, J=8Hz,-C0HH-), 11,06 (IH, thiazolin-HH).

ie DK 160313 B

lb

Eksempel 15 I dichlormethan (7 ml) suspenderes 7p-amino-3-(3-carboxypropionyl- 0 xy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (660 mg), hvorpå der tilsættes Ν,Ν-dim ethyl acetamid (0,7 ml). Under iskøling og omrøring tilsættes derpå en opløsning af (iH-tetrazol-l-yl)-acetylehlorid (294 mg) i dichlormethan (2 ml). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter den hældes i en vandig opløsning af natriumhydrogencarbo-nat og adskilles. Vandlaget tages, vaskes med dichlormethan, gøres surt med phosphorsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten gen-ekstraheres med vandig natriumhydrogencarbonatopløsning for at bringe den ønskede forbindelse i den vandige fase. Denne vandige opløsning renses ved søjlekromatografi på Sephadex 1H-20. De fraktioner, der indeholder det dominerende produkt, forenes og lyofiliseres. Proceduren giver 7β-[2-(lH-tetrazol-l-yl)-acetamido]-3-(3-carboxypropionyl-oxy) -methyl-3-c ephem-4-carboxylsyr e-dinatriumsalt.

IR (KBr): 1765, 1620 cm-1.

MR (δ i D20): 2,60 (4H,m,-(CH2)2-), 3,44 og 3,74 (2H,ABq,J=17Hz, 2-CH2), 5,20 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,59 (2H,s,NCH2C0-), 5,76 (lH,d, J=5Hz,7-H), 9,33 (IH,s,tetrazol-H).

Eksempel 16 1 dichlormethan (10 ml) suspenderes 7p-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (942 mg), hvorpå der tilsættes N,U-dimethylacetamid (l ml). Under iskøling og omrøring tilsættes derpå en opløsning af (lH-tetrazol-l-yl)-acetylchlorid (441 mg) i dichlormethan (3 ml). Blandingen omrøres yderligere ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter den hældes i en vandig opløsning af natrium-hydro genearbonat. Vandlaget, dvs. den vandige ekstrakt, renses ved søjlekromatografi på Sephadex 1H-20. Fraktionerne, der er rige på det ønskede produkt, forenes, koncentreres, gøres sure med phosphorsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten tørres, koncentreres og behandles med ether. Proceduren giver 7P-[2-(lH-tetrazol-l-yl)-acet- amido] -3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR (ZBr): 1782, 1707 cm-1.

MR (δ i d^-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H,s,-0¾), 3,55 (2H,bred, b 0 0 J % 2-CH2), 3,59 (2H,s,_gCHg_ ), 4,78 og 5,08 (2H, ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,09 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,34 (2H,s,NCH2C0-), 5,71 (lH,dd,J=5 og 8Hz, 7-H), 9,28 (IH,s,tetrazol-H), 9,46 (lH,d,J=8Hz,-C0HH-).

16

DK 160313 B

Eksempel 17 I tørt t e tr ahydro fur an (30 ml) opløses D-α-t-butoxy carbonyl amino-a-(p-hyd.r03yph.enyl)-eddikesyre (2,68 g), hvorpå der tilsættes 2,6-luti-din (1,08 g). Under køling ved -10°C og omrøring tilsættes forsigtigt ethylchlorformiat (1,08 g), og blandingen omrøres ved -10°C i 20 minutter. En isafkølet opløsning af 7β-amino-3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl- 3-cephem-4-earboxylsyre (3,14 g) og natriumhydrogencarbonat (1,0 g) i vand (30 ml) sættes på en gang til ovennævnte blanding. Hele blandingen omrøres ved -3°C i 10 minutter og derpå under køling med is-vand i 2 timer. Efter tilsætning af vand (60 ml) vaskes blandingen med ethylacetat (50 ml), og under omrøring i nærværelse af ethylacetat (100 ml) tilsættes forsigtigt 50$'s phosphorsyre, så at pH-værdien bringes på 3,0. Ethylacetatlaget tages, skylles med vand (100 ml), tørres over vandfrit natriumsulfat og behandles med en 2 I opløsning af natrium-2-ethylhexanoat i isopropylalkohol (6 ml). Det resulterende bundfald tages ved dekantering, befries for ethylacetat, filtreres fra og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Det således opnåede brune pulver renses ved søjlekromatografi på Amberlite XÅD-2. Proceduren giver 7β-[D-a-t-butoxycarbonylamino-a-(p-hydroxyphenyl) -acetamido] -3-(3-0 xobutyrylo xy)-methyl-3-cephem-4-carbo3ylsyr e-natrium-salt.

IR (EBr): 3400, 1770, 1680, 1610 cm-1.

HMR (δ i D20): 1,45 (9H,s), 2,30 (3H,s), 3,43 (2H,bred), 5,65 (lH,d, J=5Hz,7-H), 6,76-7,40 (4H,m).

DK 160313B

17

Referenceeksempel 1 (1) I dichlormethan (50 ml) opløses 7p-[D-5-phthalimido--5-carboxy-val er amido ] - 3-hydro xyme thyl - 3-c eph em-4 -c arb oxyl syr e -di t r i ethyl amin-salt (7,05 g), hvorpå der tilsættes diketen (0,92 g). Reaktionen ud-føres ved stuetemperatur i 3 timer. Efter at reaktionen er afsluttet, afdestilleres opløsningsmidlet under reduceret tryk, og remanensen fortyndes med vand og indstilles på pH 6,0 med natriumhydrogencarbo-nat. Den vandige opløsning vaskes to gange med ethylacetat, bringes ned på pH 2,0 med4NHClog ekstraheres tre gange med ethylacetat.

Ethylacetatopløsningen vaskes med en mættet vandig opløsning af na-triumchlorid, behandles med magnesiumsulfat og filtreres. Opløsningsmidlet afdestilleres så under reduceret tryk. Til remanensen sættes ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres. Den ovennævnte procedure giver 7β-[D-5-phthalimido-5-carbo xy-valeramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4--carboxylsyre (5,48 g (udbytte 93,296).

IR(KBr): 3350, 1775, 1740, 1715, 1640, 1530 cm"1.

MR(fi i dg-dimethylsulfoxid): 1,30-2,40(6H,m), 2,17(3H,s), 3,46(2H, ABq, J = 18Hz) , 3,60(2H, s), 4,72(lH,t), 4,90(2H,ABq, J =12Hz), 5,01 (lH,d, J = 5Hz), 5,62(lH,dd, J = 5 og 8Hz), 7,88(4H,s), 8,80(lH,d, J = 8Hz).

(2) I vand (50 ml) opløses 7β-[D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido]- 3-(3-oxobutyryloxy)”methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,88 g) sammen med 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol (1,50 g) og natriumhydrogenearbo-nat (2,10 g). Efter tilsætning af natriumchlorid (15,0 g) indstilles opløsningen på pH 5,0 og omsættes så ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling tilsættes en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (50 ml), og blandingen indstilles på pH 1,5 med4.N HC1. Det resulterende faste bundfald filtreres fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (20 ml) og opløses i ethylacetat (100 ml)-vand (20 ml). Efter fraskillelse tørres ethylacetatopløsningen; der tilsættes toluen (50 ml) og koncentreres. Det faste bundfald filtreres fra, vaskes med toluen-ether og tørres. Proceduren giver 7β-[ϋ-5- 18

DK 160313 B

ph.thali.mi do -5 -c arbo xy val eramido ] - 3- (1-methyl-lH-t etrazol-5 -yl) -thio -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,75 g) (udbytte 95,5$).

IR (KBr): 3325, 1780, 1730, 1715, 1650, 1545 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,40-1,76 (2H,m), 2,0-2,4 (4H,m), 3,64 (2H, ABq, J = l&Hz), 3,93. (3H,s), 4,30 (2H, ABq, J = 15Hz), 4,73 (IH,t, J = 8Hz), 5,01 (lH,d, J = 5Hz), 5,62 (lH,dd, J = 5 og 9Hz), 7,85 (4H,s), 8,80 (d, J = 9Hz).

(3) I vand (60 ml) opløses 7β-[ D-5-phthalimido-5-carboxyval eramido] - 3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-earboxylsyre (5,88 g) sammen med 2-(2-hydroxyethylthio)-5-mercapto-l, 3,4-thiadiazol (2,90 g) og natriumhydrogencarbonat (2,20 g). Efter tilsætning af natriumbromid (30 g) indstilles opløsningen på pH 5,5 og omsættes ved 60°C i 50 mi-, nutter. Efter at reaktionen er afsluttet, fortyndes reaktionsblandingen med vand (40 ml) og indstilles på pH 5,0. Hen vandige opløsning vaskes to gange med ethylacetat, bringes ned på pH 2,0 med 4 H HC1 og ekstraheres tre gange med en blanding af ethylacetat og tetrahydro-furan (4:1). Det organiske lag vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og destilleres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet. Til remanensen sættes ethylacetat-ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres. Proceduren giver 7P-[D-5-phthalimido- 5-carboxyvaleramido] -3-[ 2-(2-hydroxyethylthio) -1,3,4-thiadiazol-5-yl]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,56 g) (udbytte 96,6$).

IR (KBr): 3325, 1780, 1715, 1645, 1530 cm-1.

EMR (dg-dimethylsulfoxid): δ 1,30-2,40 (6H,m), 3,20-3,80 (6H,m), 4,27 (2H,ABq,J=12Hz), 4,65 (lH,t,J=9Hz), 4,96 (lH,d, J=5Hz), 5,55 (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,87 (4H,s), 8,70 (lH,d, J=8Hz).

(4) I en blanding af vand (50 ml) og tetrahydrofuran (30 ml) opløses 7β-[ D-5-phihalimi do-5-c arbo xyval eramido ] - 3-(3-0 xobutyrylo xy)-me thyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,88 g) sammen med 2-carbamoylmethylthio-5-mercapto-1,3,4-thiadiazol (2,28 g) og natriumhydrogencarbonat (2,20 g).' Opløsningen indstilles på pH 5,8 -og omsættes derpå ved 60°C i 70 minutter. Efter afkøling tilsættes vand (30 ml), og den vandige opløs-

w DK 160313 B

ning indstilles på pH 5,0, vaskes to gange med ethylacetat og bringes ned på pH 2,0 med 4NHC1. Den ekstraheres så tre gange med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetat og tetrahydrofuran (2:1), og det organiske lag vaskes med en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet afdestille-res under reduceret tryk, og remanensen behandles med ethylacetat.

Det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ethylacetat og tørres. Proceduren giver 7 β-[D-5-phthalimido-5-c arb o xy val er ami do]-3-(2-carbamoylmethylthio-1,3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,83 g) (udbytte 84,2$).

IR (KBr): 3430, 3340, 1776, 1717, 1680, 1535 cm-1.

NMR (dg-dimethylsulfoxid) δ 1,30-2,40 (6H,m), 3,57 (2H,br), 4,40 (2H,s), 4,32 (2H,ABq,J=12Hz), 4,70 (lH,t,J=8Hz), 5,0 (lH,d,J=5Hz), 5,55 (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,20 (lH,bred), 7,60 (IH,bred), 7,86 (4H,s), 8,74 (lH,d,J=8Hz).

Referenceeksempel 2 (1) I dichlormethan (50 ml) opløses 7P-[D-5-benzamido-5-carboxyvaler-ami do ] - 3-hy dro xyme thyl - 3-c ephem-4-c arbo xyl syr e-di tr i e thyl aminsal t (6,69 g). Ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (1,01 g) og di-keten (1,68 g), og reaktionen udføres i 3,0 timer. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles reaktionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 1. Proceduren giver 7$-/p-5-benzamido-5-carboxyvaleramido/- 3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,12 g) (udbytte 91,3$).

IR (KBr): 3350, 1780, 1735, 1720, 1640, 1530 cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,45-2,40 (6H,m), 2,18 (3Η,s), 3,50 (2H,ABq,J=19Hz), 4,34 (lH,m), 4,88 (2H, ABq,J=13Hz), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,65 (lH,dd,J=5 og 9Hz), 7,27-8,0 (5H,m), 8,46 (lH,d,J=8Hz), 8,75 (lH,d,J=9Hz).

(2) I vand (20 ml) opløses 7-[D-5-benzamido-5-earboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (561 mg) sammen med kaiiumiodid (400 mg) og pyridin (212 mg). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omsættes så ved 60°C i 50 minutter. Efter tilsætning af vand (10 ml) indstilles den vandige opløsning på pH 7,0, vaskes to gange med dichlormethan (5,0 ml), indstilles igen på pH 6,0 og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen underkastes søjlekromatografi på Amberlite XåD-2, og der elueres med vand og derpå med en blanding af vand og methanol. Eluatet koncentreres og lyofiliseres.

20 DK 160313 B

Proceduren giver N-{7P-[D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-3-cephem-3-ylmethylj -pyridinium-4-cafboxylat-mononatriumsalt (352 mg).

IE (KBr): 3360, 3250, 1765, 1645, 1630, 1605, 1575, 1530 cm"1.

NMR (D20): δ 1,50-2,60 (6H,m), 3,14 (2H,ABq,J=19Hz), 4,36 (lH,m), 5,05 (1H,d, J=5Hz), 5,32 (2H,ABq,J=15Hz), 5,60 (lH,dd, J=5Hz), 7,0-9,0 (10H,m).

(3) I vand (6,0 ml) opløses 7-[D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (561 mg) sammen med thiourinstof (100 mg) og natriumhydro genearbonat (253 mg). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omsættes ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amber- ' lite XAD-2, og der elueres med vand og vand-methanol. Eluatet koncentreres og lyofiliseres. Proceduren giver S—{7—[D-5-benzamido-5-carb- 0 xyval eramido ] - 3-c ephem- 3-ylmethyl {-thiouronium-4-carboxylat-mono- .

natriumsalt (464 mg). , IR (KBr): 3350, 3230, 1762, 1645, 1630, 1600, 1580, 1535 cm"1.

NMR (D20): δ 1,50-2,50 (6H,m), 3,20-3,80 (3H,m), 4,40 (2H,m), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,53 (lH,dd,J=5Hz), 7,30-7,90 (5H,m).

Referenceeksempel 3 1 dichlormethan (50 ml) opløses 7-[b-5-(p-toluensulfonamido)-5-carb- oxyval eramido ] -3-hydroxymethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre-ditri ethyl-aminsalt (7,29 g), og ved stuetemperatur tilsættes triethylamin : (0,51 g) og diketen (1,26 g). Reaktionen udføres i 4,0 timer, hvorefter reaktionsblandingen, behandles som i referenceeksempel 1. Proceduren giver 7-[ D-5-(p-toluensulfonami do) -5-carboxyval eramido] -3-(3-oxobutyryl- 0 xy) -m e thyl -3-cephem-4-c arb o xyl sy r e (5,64 g) (udbytte 92,3%).

IR (KBr): 3275, 1780, 1740, 1730, 1715, 1640, 1535 cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,30-1,80 (4H,m), 2,0-2,4 (2H,m), 2,16 (3H,s), 2,33 (3H,s), 3,45 (2H,ABq,J=19Hz), 4,91 (2H‘,ABq, J=12Hz), 5,0 (lH,d,J=5Hz), 5,57 (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,40 (4H,m), 7,81 (lH,d, J=9Hz), 8,64 (lH,d,J=8Hz).

Referenceeksempel 4 1 dichlormethan (50 ml) opløses 7-[D-5-(p-tert.butylbenzamido)-5-carboxyval eramido ]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditri-ethylaminsalt (7,35 g), og ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (1,01 g) og diketen (1,68 g). Reaktionen udføres i 2 timer, hvorefter reaktionsblandingen behandles som i referenceeksempel 1. Proceduren giver

21 DK 160313 B

7-[ D-5 - (p -t er t. butylb enz ami do) -5 -c arb o xy val er ami do ] — 3- (3-o xobutyryl -oxy)-methyl-3-cephem—4-carboxylsyre (5,78 g) (udbytte 93,8$).

IR (KBr): 3280, 1780, 1740, 1725, 1710, 1640, 1530 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,32 (9H,s), 1,50-2,40 (6H,m), 2,l8 (3H,s), 3,48 (2H,br), 3,57 (2H,s), 4,35 (lH,m), 4,94 (2H,ABq,J=13Hz), 5,06 (lH,d,j=5Hz), 5,62 (lH,dd,j= 5 og 8Hz), 7,46 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (2H,d,j=8Hz), 8,35 (lH,d,J=8Hz), 8,78 (lH,d,J=8Hz).

Referenceeksempel 5 I dichlormethan (50 ml) opløses 7-[D-5-caprylamido-5-carboxyvaler-amido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-earboxylsyre-ditriethylaminsalt (6,01 g), hvorpå der tilsættes triethylamin (1,01 g) og diketen (1,68 g). Reaktionen udføres ved stuetemperatur i 3 timer, hvorefter reaktionsblandingen behandles som i referenceeksempel 1. Proceduren giver 7-[D-5 -caprylamido-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,36 g) (udbytte 90,3$)· IR (KBr): 3320, l?8o, 1745, 1725, 1715, 1645, 1535 cm-1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 0,70-2,40 (2 lH,m), 2,22 (3H,s), 3,53 (2H,bred), 3,60 (2H,s), 4,18 (lH,m), 4,91 (2H,ABq,J=12Hz), 5,04 (lH,d,J=5Hz), 5,65 (lH,dd,J=5 og8Hz), 7,87 (lH,d,J=8Hz), 8,70 (lH,d,J=8Hz).

Referenceeksempel 6 I dichlormethan (50 ml) opløses 7-phenylacetamido-3-hydroxymethyl-3-c e ph em-4-c arbo xylsyre-tri ethylaminsalt (4,49 g), og ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (0,51 g) og diketen (1,26 g). Reaktionen udføres i 2 timer, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk. Remanensen fortyndes med vand og indstilles på pH 6,0. Denne vandige opløsning ekstraheres to gange med ethylacetat, bringes ned på pH 2,0 med 4HHC1 og ekstraheres tre gange med ethylacetat. Ethylacetatopløsningen vaskes med en mættet vandig Opløsning af na-triumchlorid, behandles med magnesiumsulfat og filtreres. Opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk, og remanensen omkrystalliseres af ethylacetat-ether. Proceduren giver 7-phenylacetamido-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,16 g) (udbytte 96,3$) IR (KBr): 3270, 1785, 1745, 1715, 1655, 1540 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,14 (3H,s), 3,52 (6H,bred), 4,86 (2H,ABq,J=13Hz), 5,00 (IH,d,J=5Hz), 5,63 (lH,dd,J=5 og9Hz), 7,22 (5H,s), 8,93 (lH,d,j=9Hz).

22 DK 160313 B

i

Referenceeksempel 7 ! J i

En blanding af dichlormethan (300 ml), triethylamin (27 ml) og dime thyl anil in (100 ml) forkøles til 10°C, og 7-[D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (50 g) opløses deri. Til denne opløsning sættes di-chlordimethylsilan (36 ml), hvorpå den indre temperatur forøges til 27°C. Blandingen omrøres ved denne temperatur i 30 minutter, hvorefter den indre temperatur bringes ned til -35°C. Derpå tilsættes phos-phorpentachlorid (32,4 g). Blandingen omrøres ved -25°C i 40 minutter, og efter køling til -35°C tilsættes thioacetamid (20 g). Blandingen omrøres yderligere ved -20 til -25°C i 40 minutter, og efter køling til -30°C tilsættes forsigtigt methanol (200 ml) i små dråber.

Derpå tilsættes forsigtigt dråbevis ved den samme temperatur svovl-monochlorid (17 ml). Blandingen omrøres i 20 minutter, hvorefter den fortyndes med vand (200 ml) og bringes på pH 3,2 med 40$'s vandig kaliumcarbonatopløsning. Efter omrøring i 60 minutter filtreres de resulterende krystaller fra og vaskes med vand og acetone. De således opnåede krystaller suspenderes i 10%'s saltsyre (230 ml), og der omrøres ved 30°C i 1 time. Det uopløselige filtreres fra, og·filtratet afkøles til 5-10°C og bringes på pH 3,3 nied kaliumearbonat.

Filtratet omrøres i 1 time, derpå filtreres de udfældede krystaller fra, vaskes med vand og acetone og tørres over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7-amino-3-(1 -methylt etrazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem- 4-earboxylsyre (17,0 g).

IR (KBr): 1795 cm"1.

MR (δ i D20-HaHC03): 3,61 og 3,98 (ABq.,J=l8Hz,2-CH2), 4,21 (s, tetrazol-CH^), 5,21 (d,J=4,5Hz,6-H), 5,60 (d,J=4,5Hz,7-H).

Chlorgas (2,.8 g) bobles gennem en opløsning af diketen (3,3 g) i methylenchlorid (160 ml) under omrøring og køling for at holde den indre .temperatur på -25 til -35°C i et tidsrum på 100 minutter. Derpå omrøres blandingen yderligere ved den samme temperatur i 30 minutter. Separat opløses 7-amino-3-(l-methyltetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (10,0 g) og dibutylamin (7,9 g) i methylen-chlorid (60 ml), og opløsningen afkøles til -10°C. Til denne opløsning sættes ovennævnte reaktionsblanding dråbevis under omrøring og køling for at holde en indre temperatur på -10 til -20°C i 30 minutter. Blandingen omrøres yderligere ved denne temperatur i 40 minutter. Tyndtlagskromatografi af denne reaktionsblanding viser tilstedeværelsen af 7-(4-chlor-3-oxobutyramido)-3-(l-methyltetrazol-5-yl)-

23 DK 160313 B

thi om e thyl-3-cephem-4-carboxyl syre. Thiourinstof (4,64 g) opløses i denne reaktionsblanding, og den indre temperatur forøges til 17-19°C. Blandingen omrøres ved denne temperatur, hvorved der udfældes krystaller. Krystallerne isoleres ved sugefiltrering, vaskes med methylen-chlorid (30 ml) og tørres. Proceduren giver [ 2-(2-imino-4-thiazolin- 4-yl) -acetamido]-3-(l-methyltetrazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (12,8 g), smp. 176-l80°C (dekomp.).

IR (KBr): 1762, 1662 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,39 (s,CH2C0), 3,55 og 3,77 (ABq, J=18Hz,2-CH2), 3,90 (s,tetrazol 1-CH3>, 4,21 og 4,36 (ABq,J=14Hz, 3-CH2), 5,03 (d,J=5Hz,6-H), 5,66 (dd,J=9 og 5Hz,7-H), 6,23 (s,thia-zolin 5-H), 6,2-7,1 (ιη,^γ^Ν.), 8,85 (d,J=9Hz,-C0HH-).

HN-Ϊ

Referenceeksempel 8 I dichlormethan (30 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido)-3-hydroxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (4,55 g), hvorpå der tilsættes ravsyreanhydrid (1,50 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Diehlormethanet afdestilleres, og efter tilsætning af yfo 's vandig phosphor syreopløsning (100 ml) ekstraheres remanensen med ethylacetat (150 ml). Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (100 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen behandles med ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β~(2-thienylac etamido)-3-(3-carboxypropionyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,00 g).

IR (KBr): 1782 (β-lactam), 1733 (-C02H) cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,50 (4H,-C0(CH2)2-), 3,40 og 3,63 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,75 (2H,s,-CH2C0RH-), 4,71 og 5,07 (2H,ABq, J=13Hz,3-CH2), 5,07 (lH,d,<J=5Hz, 6-H), 5,68 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H) , 6,90 og 7,30 (3H, J^jj^), 9,10 (lH,d,J=8Hz,-C0im-).

Referenceeksempel· 9 I dichlormethan (25 ml) opløses 7β-(2-^ΐθ^1ηοθΐ8ΐηχ1ο)-3--1^η1τχ^-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (3,60 g), hvorpå der tilsættes phthalsyreanhydrid (l,8o g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter den behandles på lignende måde som beskrevet i referenceeksempel 8. Proceduren giver 76-(2-thienylacetamido)-3-

24 DK 160313 B

(2-carboxyb enz oylo xy )-methyl - 3-c ephem-4-c arbo xyl syre (3,44 g).

IR (KBr): 1777, 1724, 1650 (skulder) cm HMR (δ i dg-dime thyl sulf oxid): 3,50 og 3,70 (2H,ABq, J=l8Hz,2-CH2) , 3,77 (2H,s,-CH2C0-), 4,91 og 5,29 (2H,ABq, J =13Hz, 3-CH2), 5,10 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,70 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 6,92 og 7,32 (3H, Γ~1 ), 7,64 (4H, ), 9,12 (lH,d,J=8Hz,-C0HH-).

Referenceeksempel 10 I dichlormethan (40 ml) opløses 7β-mandelamido-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-tri ethyl aminsalt (4,65 g), hvorpå der tilsættes ravsyreanhydrid (1,50 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1- jg· time. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles blandingen som 2, rsferenc^ékssnipel 8, hvorved der fes 7B-nidiidel3ifiidO“3*' (3“C3rboxypropionyl 0 xy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,45 g).

IR (KBr): 1776, 1737, 1684 (skulder) cm-1.

UMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,48 (4H,-C0(CH2>2~), 3,3-3,7 (2H, 2- CH2), 4,69 og 5,03 (2H,ABq,J=13Hz,3-0¾), 4,99 (IH, <Z7>-CH~), 5,06 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,68 (lH,dd,J=5 og8Hz,7-H), 7,35 (5H, 9,31 (IH,d, J=8Hz, -C0HH-).

Referenceeksempel 11 1 dichlormethan (7 ml) opløses 7P-(2-thienylacetamido)-3-hydroxyme-thyl-3-cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (0,68 g), hvorpå der tilsættes glutarsyreanhydrid (0,34 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2·§· time. Dichlormethanet afdestilleres., og efter tilsætning af 3$' s vandig phosphorsyre (15 ml) ekstraheres remanensen med ethylacetat (25 ml). Ethyl acetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (15 ml x 2) og tørres over magnesiumsulfat. Efter dråbevis tilsætning af en 2Hopløsning af natrium-2-ethyl-hexanoat i isopropylalkohol (1,50 ml) fås et pulver. Bette pulver filtreres fra, vaskes med ethylacetat-ether og tørres over phosphor-pentoxid. Proceduren giver 7p-(2-thienylaeetamido)-3-(4-carboxy-butyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (0,42 g).

IR (KBr): 1760, 1736 (skulder), 1661, 1609 cm-1.

HMR (δ i B20): 1,90 (2H,-CH2CH2CH2-), 2,28 (4H,-CH2CH2CH2-), 3,21 og 3,61 (2H, ABq, J=l8Hz, 2-CHp), 3,78 (2H,s, fj j] ), 4,4-4,9 (2H, vs^ch2- 3- CH2), 4,98 (IH,d,J=5Hz,6-H), 5,60 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,95 og 7,28 (3H’ QL >·

DK 160313 B

25

Referenceeksempel 12 I dimethyl formamid (50 ml) opløses 7p-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-c ar boxy val eramido] -3-hydroxymethyl-3-c ephem-4-carboxyl syre-di tri ethyl· aminsalt (7,35 g), hvorpå der tilsættes ravsyreanhydrid (1,50 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, tilsættes 3$'s vandig phosphorsyre (250 ml), hvorp< der ekstraheres med ethylacetat (500 ml). Ethylacetatlaget vaskes med vand (250 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås et pulver. Pulveret filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β -[ D-5 - (p-t -hutylbenzamido)-carb-oxyvai eramido] -3-( 3-carboxypropionyloxy) -methyl-3-c ephem-4-carboxyl-syre (6,20 g).

IR (KBr): 1779, 1732, 1640 cm-1.

EMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,28 (9H,s, > 1,73 og 2,24 (6H,-(CH2)3-), 2,50 (4H,-C0CH2CH2C0-), 3,38 og 3,63 (2H,ABq,J=l8Hz, 2- CH2), 4,37 (IH, -CH-EH-), 4,71 og 5,06 (2H,ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,04 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,66 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,44 og 7,81 (4H, -), 8,43 (lH,d, J=8Hz, +<^^>-C0EH-), 8,8o (lH,d,J=8Hz,-C0NH-).

Referenceeksempel 13 I dimethylformamid (50 ml) opløses 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditri-ethylaminsalt (7,35 g), hvorpå der tilsættes phthalsyreanhydrid (1,63 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 12. Proceduren giver 7β-/ρ-5-(p-t- butylb enzamido) -5 -carboxyval eramido ] -3- (2-carboxyb enzoyloxy) -methyl- 3- cephem-4-carboxylsyre (6,70 g).

IR (KBr): 1784, 1726, 1642 cnf1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,27 (9H,s, <ζΖ7>+), 1,72 og 2,22 (6H,-(CH2)3-), 3,46 og 3,71 (2H, ABq, J=18Hz,2-CH2), 4,37 (1H,-CH-),

4,89 og 5,27 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,08 (lH,d,J=5Hz,6-H), RH

5,67 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,43 og 7,81 (4H, 7,62 (4H, <f35~), 8,42 (IH, d, J=8Hz, -CHNHC0-), 8,80 (lH,d, J=8Hz,-C0RH-).

Referenceeksempel 14 I dimethyl formamid (50 ml) opløses 7p-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-c arbo xy val eramido]- 3-hy dr o xyme thyl- 3 -c eph em-4 -c arb o xyl syr e -di t r i ethyl -aminsalt (7,35 g), hvorpå der tilsættes maleinsyreanhydrid (1,49 g)-Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter den ...... - · i 26 DK 160313B i behandles som i referenceeksempel 12. Proceduren giver 73-/D-5-(p-t-butyl- '

benzamido) -5-carboxyvaleramido]-3~( 3-carboxyacryloyloxy )-methyl-3- I

cepbem-4-carboxylsyre (6,05 g) -IR (KBr): 1780, 1727, 1640 cm'1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,32 (9H,s, 1,77 o g 2,26 (6H,-(CEL) , 3,41 og 3,65 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH9), 4,37 (1H,“?S“ ),

J ^ NH

4,8o og 5,16 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,02 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,66 j (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 6,34 (2H,-CH=CH-), 7,44 og 7,82 (4H, +<Z>-) ' 8.40 (lH,d, J=8Hz,-CHRHC0-), 8,80 (lH,d, J=8Hz,-C0M-).

Referenceeksempel 15 I dichlormethan (20 ml) opløses 7β-[I>-5-(p-t-butyΓbenzamido)-5-carb-oxyval eramido ] -3-hydroxymethyl-3-c ephem-4rcarboxylsyr e-di tri ethyl-aminsalt (1,47 g), hvorpå der tilsættes p-chlorphenylthioravsyre-anhydrid (0,51 g)· Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 8. Proceduren giver 7β-/ρ-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-L3-carboxy-3(eller 2)-(p-chlorphenylthio) -propionyloxy] -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,50 g).

IE (KBr): 1778, 1728, 1636 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,28 (9H,s, 4^ -), 1,74 og 2,24 (6H,-(CH2)3-), 2,73 (2H,-CH2CH-), 3,3-3,8 (2H,2-CH2), 4,03 (1H,-CH-S), S- 4.40 (IH,-CH-NH-) , 4,73 og 5,07 (2H, ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,02 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,68 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,42 (4Η,01-<ζ^-S-), 7,44 og 7,82 (4H, 8,44 (lH,d, j=8Hz,-CHHHC0-) , 8,82 (lH,d, J=8Hz, -C0NH-).

Referenceeksempel 16 I dichlormethan (50 ml) opløses 7β-(D-5-phthalimi do-5-carboxyvaleramido ) -3-hydroxymethyl-3-c ephem-4-carboxylsyr e-ditriethylaminsalt (7,05 g), hvorpå der tilsættes ravsyreanhydrid (1,50 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1½ time, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 8. Proceduren giver 7 β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido)- 3-(3-carboxypropionyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,43 g).

IR (KBr): 1777, 1710, 1644 cm-1.

MR (g i dg-dimethylsulfoxid): 1,52 og 2,17 (6H,-(CH2)y), 2,50 (4H,-(CH2)2-), 3,3-3,8 (2H,2-CH2), 4,70 og 5,03 (2H, ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,72 (IH,t, J=7Hz, -CH-), 5,01 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,62 (lH,dd,cT=5 og 8Hz, 7-H), 7,86 (4H,s, ) > 8»78 (IH,d, J=8Hz,-C0HH-).

27 DK 16 0313 B

Referenceeksempel 17 I dichlormethan (50 ml) opløses 7P-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaler-amido) -3-hydro xymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (7,05 g), hvorpå der tilsættes phthalsyreanhydrid (2,22 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i ljt time, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 8. Proceduren giver 7 β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaler- amido)-3-(2-carboxybenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6, 39 g) IR (KBr): 1772, 1714, 1643 cm-1.

RMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,52 og 2,18 (6H,-(CH2)y), 3,42 og 3,69 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,74 (IH,t,J=8Hz,-CH-), 4,89 og 5,28 (2H,ABq,13Hz,3-CH9), 5,06 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,66 (lH,dd,J=5 og 8Hz, 0 7-H), 7,64 (4H, -<£z> ), 7,86 (4H,s, )» M1 (lH,d,J=8Hz, 0 -com·).

Referenceeksempel 18 7P-(2-thienylacetamido) -3-( 3-carboxyacryloyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre syntetiseres som i referenceeksempel 8.

IR (KBr): 1780, 1725, 1638 cm-1.

NMR (dg-dimethylsulfoxid): δ 3,43 og 3,76 (2H,ABq, J=l8Hz,2-CH2), 3,75 (2H,s,-CH2C0-), 4,79 og 5,14 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,07 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,68 (lH,dd,J= 5 og 8Hz,7-H), 6,35 (2H,s,-CH=CH-), 6,90 og 7,29 (3H, (T^), 9,10 (lH,d,J=8Hz,-C0M-).

Referenceeksempel 19

Til en blanding af 7 β -[ D -5 - (p-t-butylbenzamido) -5-carboxyvai eramido ] -3-hydro xym e thyl -3-c ephem-4 -c arbo xyl syr e-di t r i ethyl aminsal t (2,20 g) og 3-nitrophthalsyreanhydrid (1,16 g) sættes dichlormethan (15 ml) sammen med triethylamin (0,42 ml). Den resulterende opløsning omrøres ved stuetemperatur i 1-g- time. Efter at reaktionen er afsluttet, af destilleres dichlormethanet under reduceret tryk, og 3$' s vandig phosphorsyre (120 ml) og ethylacetat (160 ml) sættes til remanensen. Ethyl acetatlaget vaskes med vand (80 ml x 2), tørres over magnesium-sulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,10 g).

IR (KBr): 1783, 1735, 1640 cm-1.

28 DK 160313 B

MR (δ i d g-dime thyl sul f oxid): 1,28 (gH, s,-C(CH^) , 1,53 og 2,23 (6H,-(CH2)3-), 3,43 og 3,70 (2H,kBq, J=l8Hz, 2-CH2), 4,37 (ΙΗ,-CH-), ! 4,96 og 5,41 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,07 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,68 (1H, dd, J=5 og 8Hz,7-H) , 7,42 og 7,80 (4H, 7,8-8,4 (3H, ), 8,44 (1H,d, J=8Hz,-CH-NH-), 8,84 (lH,d, J=8Hz,-C0WH-).

Referenceeksempel 20

Til en blanding af 7P-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido) -3-hydr-oxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (2,12 g) og 3-nitrophthalsyreanhydrid (1,16 g) sættes dichlormethan (15 ml) sammen med triethylamin (0,42 ml). Opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 1¾ time, hvorefter den behandles scm i referenceeksempel 19. Proceduren giver 7β - ( D-5 -ph thalimi do -5 -c arb o xyval er amido) -3-(2-carboxy-6( eller 3)-nitrobenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,08 g).

IR (HBr): 1775 (skulder), 1718, 1642 cm”1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,54 og 2,19 (6H,-(CH2)3“), 3,40 og 3,68 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,73 (ΙΗ,-t, J=7Hz,-0H-)', 4,98 og 5,42 (2H,ÅBq,J=13Hz,3-CHP), 5,06 (lH,d,cT=5Hz, 6-H), 5,66 (lH,dd,J=5 og 8Hz, 0 i TT09 * " 7-H), 7,7-8,4 (3H, )> 7,86 (4H,s, ), 8,8l (lH,d,

II

o J =8Hz,-COHH-).

Referenceeksempel 21

Til 7p-[D-5-(p-i~butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-hydroxymethyl-3-eephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (2,20 g) og trimellith-syreanhydrid (1,15 g) sættes dichlormethan (15 ml) og triethylamin (0,84 ml), og den resulterende opløsning omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles blandingen på samme måde som i referenceeksempel 19. Proceduren giver 70-/D-S-(p-t-butyl-benzamido)-5-carboxyvaieramido]-3-(2,4(eller 5)-dicarboxybenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,14 g).

IR (KBr): 1777, 1724, 1636 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,29 (9H, 3,-0(0¾¾), 1,54 og 2,25 (6H,-(CH2)3-), 3,99 og 3,72 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,38 (1H,-CH-), 4,95 og 5,30 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,11 (IH,d, J=5Hz, 6-H), 5,70 (IH, dd, J=5 og 8Hz, 7-H), 7,43 og 7,82 (4H, —>-{-), 7,7-8,3 (3H, . C00H , - ^ ), 8,43 (IH,d, J =8Hz,-CH-HH-), 8,84 (lH,d, J=8Hz,-C0HH-).

29 DK 160313 B

Referenceeksempel 22 I dim ethyl formamid (10 ml) suspenderes desacetyl-cephalosporin. C (2,16 g), og under køling med is tilsættes koncentreret saltsyre (0,83 ml). Til den resulterende opløsning sættes dimethylformamid (10 ml) sammen med trie thyl amin (4,20 ml) og 3-nitrophthalsyrean-hydrid (3,86 g), og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Efter denne reaktion fortyndes blandingen med 3$' s vandig phosphor-syre (150 ml) og ekstraheres med ethylacetat (250 ml x 2). Ethylace-tatlaget vaskes med vand (200 ml) og en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (200 ml), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7£-[D-5-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,77 g).

IR (KBr): 1780 (skulder), 1729, 1638, 1534, 1348 cm-1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,67 og 2,23 (6H,-(CH2)^-), 3,60 (2H,2-CHg), 4,39 (1H,-CH-), 4,97 og 5,40 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,08 (lH,d,J=5Hz,6-H),'5,68 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,5-8,5 (7H, N0p x 2 °£ -CH-BH-), 8,78 (IH, d, J=8Hz, -C0NH-).

Referenceeksempel 23 I dichlormethan (30 ml) opløses 7P-(2-thienylacetamido)-3-hydroxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (4,55 g), hvorpå der tilsættes O-carboxymandelsyreanhydrid (2,38 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter dichlormethanet af destillér es. Til remanensen sættes 3$'s vandig phosphorsyre (100 ml), hvorpå der ekstraheres med ethylacetat (150 ml). Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (100 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Yed tilsætning af ether fås et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres over phosphorpentoxid under reduceret tryk. Proceduren giver 7β-(2-thienylacetamido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre (4,00 g).

IR (KBr): 1778, 1742, 1666 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,24 og 3,45 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,74 (2H,s,-CH2C0NH-), 4,76 og 5,06 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,03 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,16 (lH,s, -CH-), 5,68 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H) 6,90 og 7,34 (8h, [ΓΠ|_ og <!!>-)’ 9,09 (lH,d, J=8Hz,-C0NH-).

30 DK 160313 B

Referenceeksempel 24 I dimethylformamid (40 ml) opløses natrium-7P-mandel amido-3-hydro3cy- | methyl-3-cephem—4-carboxylat (3,86 g), hvorpå der tilsættes 0-earb- ] oxymandelsyreanhydrid (2,67 g)· Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter der tilsættes 2$' s H^PO^ (150 ml). Blandingen ekstraheres med ethylacetat (250 ml), og ethylacetatlaget vaskes med vand (150 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og kone entre- j res under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås et pulver. !

Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduce- j ret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7p-mandelamido-3- | mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,68 g). j IR (KBr): 1777, 1745, 1669 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,2-3,7 (2H,2-CH2), 4,7-5,2 (5H,3-CH2, 6-H og -CH-x2), 5,69 (1H,7-H), 7,2-7,6 (10H, <^>- *2 ), 8,67 (IH, -C0NH-).

Referenceeksempel 25 I dimethylformamid (50 ml) opløses 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido] -3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditri-ethylaminsalt (7,35 g), hvorpå der tilsættes Q-carboxymandelsyre-anhydrid (2,67 g)· Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter der tilsættes 3$'s vandig phosphorsyre (250 ml) og ekstraheres med ethylacetat (500 ml). Ethylacetatlaget vaskes med 1 vand (.250 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5 -carboxyvaleramido] -3-mandelyloxymethyl-3-c ephem-4-carboxylsyr e (6,30 g).

IE (KBr): 1778, 1736, 1642 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,29 (9H,s,-C(CH^)·^), 1,73 og 2,23 (6H,-(CH2)3-), 3,2-3,6 (2H,2-CH2), 4,38 (IH, -CH-NH-) ,4,75 og 5,04 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,02 (IH,d, J=5Hz, 6-H), 5,16 (IH*,s, <3>-0H-), 5,66 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,2-7,5 (5H, <3>- ), 7,43 og 7,81 (4H, +<£ZT>- )» 8,43 (IH,d,J=8Hz,-CH-HH- ),.8,80 (lH,d,J=8Hz,-C0HH-).

Referenceeksempel 26 I dichlormethan (50 ml) opløses 7p-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaler-amido - 3-hydro xymethyl-3-c ephem-4-c arb o xylsyre-ditri ethyl aminsalt (7,05 g), hvorpå der tilsættes O-carboxymandelsyreanhydrid (2,38 g).

DK 160313 B

31

Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 23. Proceduren giver 73-(D-5-phthalimido-5-carb-oxyvaleramido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,25 g) -IR (KBr): 1773, 1715, 1647 (skulder) cm-1.

MR (δ i dg-dimethyisulfoxid): 1,54 og 2,22 (6H,-(CH2)^-), 3,27 og 3,49 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,73 (lH,t,J=7Hz, -CH-K ), 4,74 og 5,03 (2H,ilBq,J=13Hz,3-CH2), 4,98 (lH,d, J=5Hz, 6-H), 5^16 (lH,s, <f77>-CH-), 5,61 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,2-7,5 (5H, 4-), 7,86 (4H,s,

O

11 ), 8,77 (IH,d,J=8Hz,-C0NH-).

t« 0

Referenceeksempel 28 I dimethylformamid (10 ml) opløses 7P-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (940 mg) sammen med glutarsyreanhydrid (580 mg) og triethylamin (404 mg). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter dimethylformamidet afdestilleres. Til remanensen sættes en lille mængde vand, og den vandige opløsning afsaltes med Amberlite IR-120(H), indstilles på pH 6,0 med 1 N natriumhydroxidopløsning og lyofiliseres. Lyof ilisat et genopløses i vand og renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Proceduren giver 7P-(D-oc-sulfophenylacetamido)-3-(4-carboxybutyryloxy)-methyl -3-c ephem-4-carboxyl syr e-trinatriumsalt.

IR (KBr): 1760, 1675, 1620 cm-1.

MR (δ i D20): 1,65-2,60 (6H,m), 3,41 (2H,q,2-CH2), 4,83 (2H,d, 3-CH9), 5,0 (IH,s, 4—*>-CH- ), 5,08 (IH,d,6-H), 5,75 (lH,d,7-H), SO,Na 7,47 (5H,m). -3

Referenceeksempel 29 I dimethylformamid (3 ml) opløses 7P-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsait (470 mg) sammen med ravsyreanhydrid (250 mg) og triethylamin (200 mg). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Den fortyndes så med en lille mængde vand, og dimethylformamidet afdestilleres under reduceret tryk. Remanensen opløses ved tilsætning af vand og renses ved søjle- . kromatografi på Amberlite XAD-2. Proceduren giver 7P-(D-a-sulfophe-

32 DK 160313 B

nylae etami do) -3-( 3-c arb o xyp ro pi onylo xy ) -methyl-3-c ephem-4-carboxyl-syr e-trinatriumsalt.

IR (EBr): 1765, 1685, 1600 cm-1.

MR (δ i D20): 2,62 (4H,s,-00(0¾)2C0-), ' 3,38 (2H,q,2-CH2), 4,95 (2H,3-CH2), 5,10 (IH,s, <f3>-CH- ), 5,21 (lH,d,6-H), 5,91 (lH,d, SO,Ha

7-H), 7,78 (5H,m, J

Referenceeksempel 30 I chloroform (5 ml) opløses 7P-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-hydroxy-methyl-3-c ephem-4-carboxyl syre-di tri ethyl aminsalt (480 mg), hvorpå der tilsættes diketen (300 mg). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres. Remanensen fortyndes med vand og afsaltes med Amberlite IR-120(H). Den afsaltede opløsning indstilles på pH 5,7 med 1 H natriumhy dr oxidopløsning og lyo-filiseres. Udbytte 400 mg. Lyofilisatet renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Proceduren giver 7P-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-(3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt.

Med hensyn til IR- og HMR-spektre findes dette produkt i god overensstemmelse med produktet opnået i eksempel 7.

Referenceeksempel 31 I dimethyl formamid (3,5 ml) opløses 7β-[ 2-( 2-imino-4-thiazolin-4-yl) -ac et amido] -3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natri-umsalt (1, 37 g. hvorpå der tilsættes O-carboxymandelsyreahhydrid (0,90 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter det meste af dimethyl -formamidet afdestilleres under reduceret tryk. Til remanensen sættes ethylacetat (50 ml)-, Hvorpå der omrøres kraftigt. Det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ethylacetat (20 ml), dichlormethan (20 ml) og ether (20 ml) i den nævnte rækkefølge. Proceduren giver 7β-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,60 g).

IR (EBr): 1780, 1743, 1665, 1643, 1537 cm"1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid+D20): 3,33 og 3,65 (2H,ABq, J=l8Hz, 2-0¾), 3,37 (2H,s,-CH2C0-), 4,8-5,3 (2H,3-CH2), 4,97 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,21 (IH,s, <^>-CH-), 5,64 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,25 (lH,s,thiazoliri-H), 7,2-7,6 (5H, )-

Referenceeksempel 32 I H,H—dimethyl formamid (20 ml) opløses 7β-(2—thienylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carhoxylsyre-natriumsalt (3,86 g), og ved

DK 160313 B

-5°C tilsættes triethylamin (1,40 ml) og diketen (1,50 ml). Reaktioner udføres ved -5 til 0°C i 1 time, hvorefter reaktionsblandingen hældes i is-vand (200 ml). Blandingen indstilles på pH 2,0 med 4 IT saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand, fortyndes med vand, bringes på pH 7,0 med 5$' s vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning og adskilles. Vandlaget tages, koncentreres og underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand-methanol. Eluatet lyofiliseres. Proceduren giver 7β-(2-ΐ1ιχ6^1-ac etamido) -3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natrium-sait (4,48 g).

IR (KBr): 3300, 1765, 1745,. 1670, 1613 cm"1.

HMR (δ i D20): 2,31 (3H,s), 3,47 (2H,ABq,J=18Hz), 3,85 (2H,s), 4,88 (2H,ABq,J=13Hz), 5,08 (lH,d,J=5Hz), 5,60 (lH,d,J=5Hz), 6,9-7,5 (3H,m).

Referenceeksempel 33 I dichlormethan (50 ml) opløses 7p-phenylacetamido-3-bydroxymethyl-3-

cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (4,5 g), hvorpå der tilsættes ravsyreanhydrid (1,5 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 5 timer, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk. Efter tilsætning af vand og ethylacetat indstilles remanensen på pH

2,0 med phosphorsyre. Ethyl acetatlaget tørres og koncentreres. De resulterende krystaller filtreres fra (2,9 g). Moderluden koncentreres yderligere, og efter tilsætning af ether får koncentratet lov at stå, hvorved der fås krystaller (1,6 g). Disse krystaller omkrystalliseres af ethylacetat. Proceduren giver 7P-phenylacetamido-3-(3-carboxy-propionyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, smp. 86-89°C.

IR (KBr): l800, 1735, 1692, 1660 cm-1.

mm. (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,48 (4H,-(CH2)2-), 3,51 (4H,2-CH2, -CH2C0-), 4,69 og 5,02 (2H,ABq,J=13Hz), 5,00 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,63 (lH,dd,J=5 og 9Hz,7-H), 7,23 (5H, <3>- ), 9,02 (lH,d,J=9Hz,-C0NH-).

Keferenceeksempel 34

Reaktionsproceduren i referenceeksempel 33 gentages bortset fra, at der anvendes phthal syr eanhydrid (2,2 g) i stedet for ravsyr eanhydrid. Denne p ro c edur e giver 7β -phenyl ac etami do - 3- (2-c arb o xyb enz oyl o xy) -methyl - 3-cephem-4-carboxylsyre. Smp. 128-129°C (ethylacetat-ether).

IR (KBr): 1788, 1731, 1695, 1662 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,53 (2H,s,-CH2C0-), 3,61 (2H,2-CH2), 4,90 og 5,27 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,08 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,68 (IH, dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,25 (5H, <ΙΓ>-), 7,62 (4H, ^3^.-), 9,07 (lH,d,J=8Hz,-C0NH-).

34 DK 160313 B

Referenceeksempel 35 I vand (0,3. ml) opløses 7P-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-(3-oxobuty-rylo xy)-me thyl -3-c ephem-4-carboxylsy r e-dinat r i ums al t (278 mg) sammen med pyridin (60 mg) og KSCH (1,2 g). Blandingen opvarmes ved 60°C i 1 time, hvorefter den underkastes søjlekromatografi på Amberli te XAD-2, idet der elueres med vand. Fraktionerne, der er rige på det ønskede produkt, forenes, lyofiliseres og omkrystalliseres af methanol. Proceduren giver 73-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-cephem-3-pyridi-niummethyl-4-carbo xyl at-natriumsalt.

IR (EBr): 1760, 1665, 1610 cm-1.

mm. (6iD20): 2,97, 3,35 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 5,27, 5,40 (2H,3-CH2), 5,07 (lH,d,J=5,2Hz,6-H), 5,71 (lH,d,p‘,J=5,2Hz,7-H), 5,10 (IH,s, ), 7,47 (5H,m), 8,04, 8,55, 8,90 (5H, .) · SO^Na

Referenceeksempel 36

Reaktionsproceduren i referenceeksempel 35 gentages under anvendelse af iso-nieotinamid (90 mg) i stedet for pyridin, og reaktionsproduktet behandles på samme måde som i eksempel 51. Proceduren giver 7-(D-a-sulf ophenylac etamido) -3-cephem-3-(4-carbamoylpyridinium) -methyl-4-c arb o xyl at-natriums alt. Det renses ved omkrystallisation af ethanol-vand. Smp. 175°C (dekomp.).

IR (EBr)s 1765, 1692, 1645, 1615, 1029 cm-1.

mm (δ i D20): 2,99, 3,56 (2H,ABq, J=l8Hz, 2-CH2), 5,40, 5,51 (2H, 3-CH2), 5,13 (lH,d,J=4,8Hz,6-H), 5,73 (lH,d, J=4,8Hz,7-H) , 5,10 (lH,s, <T~>-CH- ), 7,40 (5H,m), 8,31, 9,07 (4H).

SO^Ra

Referenceeksempel 37 I 50$'s vandigt acetone (80 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,49 g) sammen med acetylacetone (0,50 g) og natriumhydrogencarbonat (0,17 g), og opløsningen omrøres ved 60°C i 1 time. Reaktionsblandingen bringes på stuetemperatur, og det meste af acetonet afdestilleres under reduceret tryk.

Til remanensen sættes 5$'s vandig phsophorsyreopløsning (10 ml) sammen med ethylacetat (20 ml). Ethylac etati åget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (20 ml), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver suspenderes i vand (3 ml) og opløses ved tilsætning af natriumhydrogencarbonat. Opløsningen underkastes

35 DK 160313 B

søjlekromatografi på Sephadex LH-20, idet der elueres med vand. De ønskede fraktioner forenes og lyofiliseres. Proceduren giver 7β-(2-thienylacetamido) -3-(2-acetyl-3-oxo) -butyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (0,28 g). Dette produkt opløses i vand (10 ml), hvorpå der tilsættes 10%'s vandig phosphor syre (2 ml) og ethylacetat (20 ml). Ethylacetatlaget vaskes med vand, tørres over magnesiumsul·fat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7p-(2-thienyl-acetamido)--3“(2-acetyl-3“Oxo)-butyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,23 g). IR (KBr): 1765, 1718 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,13 og 2,18 (6H,s,(C0CH^)2), 2,6-3,1 (2H,m,3-CH2), 3,31 og 3,56 (2H,ABq,2-CH2), 3,75 (2H,s,-CH2C0-), 4,14 (IH,-CH-), 5,01 (IH,d,J=5Hz,6-H), 5,58 (lH,dd,J=5 og8Hz,7-H), 6,92 og 7,30 (3H, UU’ 9,04 (lH,d,J=8Hz,-C0HH-).

Referenceeksempel 38 I 50^'s vandigt acetone (40 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido)-3-[2-carboxy-6( eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxyl-syre (2,65 g) sammen med acetylacetone (2,42 g) og natriumhydrogen-carbonat (1,22 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1 time, hvorefter den behandles ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 37. Proceduren giver 73—(2—thienylacetamido)—3—(2—acetyl—3— oxo)-butyl-3-cephem-4-carboxylsyre (l,2'6 g). Med hensyn til IR- og NMR-spektre er dette pulver i god overensstemmelse med produktet ifølge referenceeksempel 37.

Referenceeksempel 39 I 50$'s vandigt acetone (8 ml) opløses 7β-[D-5-(p-t-butylbenzamido)- 5-carboxyvaieramido]-3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,73 g) sammen med acetylacetone (0,50 g) og natriumhydrogencarbonat (0,34 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1 time, hvorefter den behandles ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 37. Proceduren giver 7 β-/ρ-5-(p-t-butylbenzamido)- 5-carboxyval eramido] -3-( 2-ae etyl-3-oxo )-butyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (0,29 g).

IR (KBr): 1767, 1721, 1655, 1635 cm-1.

NIR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,30 (9H,s,-C(CH^)^), 1,76 og 2,25 (6H,-(CH2)3-), 2,6-3,1 (2H,m,3-CH2), 3,2-3,6 (2H,2-CH2), 4,13 (IH, -CH(C0CH3)2), 4,37 (IH,-CH-), 4,99 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,57 (lH,dd,

DK 160313B

36 J=5 og 8Hz, 7-H), 7,43 og 7,83 (4H,-<r^>f ), 8,40 (lH,d,J=8Hz, -CH-HH-) , 8,77 (IH, d, J=8Hz , -C0NH-).

Referenceeksempel 40 I 50$' s vandigt acetone (8 ml) opløses 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido) -5 -c arbo xyval eramido ] - 3-mandelylo xymethyl-3-c ephem-4-c arboxylsyr e (0,67 g) sammen med acetylacetone (0,50 g) og natriumhydro gene arb o -nat (0,25 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1,5 timer, hvorefter den behandles ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 37. Proceduren giver 73-/D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxy-val eramido]-3-(2-acetyl-3-oxo)-butyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,33 g)* Med hensyn til IR- og MR-spektre er dette produkt i overensstemmelse med produktet opnået i referenceeksempel 39.

Referenceeksempel 41 I 50$'s vandigt acetone (14 ml) opløses 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido)- 5-carboxyvaleramido]-3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl- 3- cephem-4-carboxylsyre (0,73 g), pyrrol (0,20 g) og natriumhydrogen-carbonat (0,25 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1 time, hvorefter den bringes ned på stuetemperatur, og det meste af acetonet afdestil-leres under reduceret tryk. Derpå tilsættes 5$'s vandig phosphorsyre-opløsning (15 ml) og ethylacetat (30 ml). Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (20 ml), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver suspenderes i vand (3 ml) og opløses ved tilsætning af natriumhydrogencarbonat (0,17 g). Opløsningen underkastes søjlekromatografi på Sephadex LH-20 (250 ml), idet der elueres med vand. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes og lyofiliseres. Proceduren giver 7P-[D-5-(p-t-butylb enzamido ) -5 -carbo xyval eramido] -3- ( 2-pyrrolyl) -methyl-3-c ephem- 4- carboxylsyre-dinatriumsalt (0,29 g).

IR (KBr): 1760, 1600 cm-1.

MR (δ i D20): 1,23 (9H,s,-C(CH3)3), 1,86 og 2,42 (6Η,-(0Η2)^, 2,86 og 3,25 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,42 og 3,73 (2H,ABq, J=15Hz,3-CH2), 4,51 (1H,-CH-), 4,96 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,61 (lH,d, J=5Hz,7-H), 5,93 (IH,pyrrol-3-H), 6, 07 (lH,pyrrol-4-H), 6,77 (IH,pyrrol-5-H), 7,38 og 7,76 (4H, “<3>f ), 7,80 (IH,pyrrol-l-H).

Referenceeksempel 42 I 50$'s vandigt acetone (14 ml) opløses 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-

37 DK 160313 B

5-carboxyvaleramido] -3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl -3-cephem-4-c arb oxyl syre (0,73 g) sammen med N-methylpyrrol (0,24 g) og natriumhydro g ene arb onat (0,25 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1 time. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles blandingen på samme måde som i referenceeksempel 41, Proceduren giver 7β-/ρ-5-(p-t-butyl-benzamido) -5-carboxyvaleramido]-3- (N-methylpyrrol-2-yl) nnethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (0,21 g).

IR (KBr): 1757, 1597 cm-1.

NMR (δ i D20): 1,21 (9H,s,-C(CH3)3), 1,87 og 2,45 (6H,-(CH2)^, 2,79 og 3,07 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,46 (3H,s,N-CH3), 3,51 og 3,87 (2H, ABq,J=15Hz,3-CH2), 4,51 (1H,-CH-), 4,91 (IH,d,J=5Hz,6-H), 5,58 (IH, d,<J=5Hz,7-H), 5,86 (IH,pyrrol-3-H), 5,99 (lH,pyrrol-4-H), 6,61 (IH, pyrrol-5-H), 7,39 og 7,79 (4H, -<*Z>4 ).

Referenceeksempel 43 I 50$'s vandigt acetone (12 ml) opløses 7β-(D-5-phthalimido-5-carb-oxyvaleramido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,64 g) sammen med indol (0,35 g) og natriumhydrogenearbonat (0,17 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1 time. Efter reaktionens afslutning behandles blandingen ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 41, Proceduren giver 7β—(D—5-phthalimido-5~carboxy— valeramido) -3-( 3-indolyl) -methyl-3-eephem-4-carboxylsyre-dinatrium-salt (0,24 g).

IR (KBr): 1758, 1702, 1600 cm"1.

NMR (δ i D20): 1,68 og 2,26 (6H,-(0¾) 3~), 2,45 og 2,82 (2H, ABq, J=l8Hz,2-CH2), 3,61 og 3,86 (2H,ÅBq, J =15Hz, 3-CH2), 4,6-4,9 (2H, -CH- og 6-H), 5,46 (lH,d, J=5Hz,7-H), 7,0-7,8 (10H, fy-f o g

. " ^ H

o>- ’· ff 0

Referenceeksempel 44 I 50$'s vandigt acetone (14 ml) opløses 7p-(D-5-phthalimido-5-carb-oxyvaleramido)-3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,70 g) sammen med indol (0,35 g) og natrium-hydro g ene arb onat (0,25 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 45 minutter, og, efter at reaktionen er afsluttet, behandles den ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i eksempel 57· Proceduren giver 7β - (D -5 -pht hal imi do -5 -c arb o xy val er ami do) -3-( 3-indolyl) -methyl-3-

38 DK 160313 B

cephem-4-carbo:xylsyre-dinatrIumsalt (0,22 g). Med hensyn til IR-spek-trum. findes dette produkt at stemme overens med produktet opnået i referenceeksempel 43.

Referenceeksempel 45 I vand (7 ml) opløses 7p-[D-5-(p-t-butyrbenzamido)-5-carboxyvaler-amido]-3-[2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,73 g), natriumazid (0,26 g) og natriumhydrogencarbo-nat (0,25 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 40 minutter. Reaktionsblandingen bringes på stuetemperatur, og efter tilsætning af 10$' s vandig phosphor syre (10 ml) ekstraheres med ethyl acetat (30 ml).

Ethyl acetatlaget vaskes med en mættet opløsning af natriumchlorid (20 ml), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver suspenderes i vand (3 ml) og opløses ved tilsætning af natriumhydro-gencarbonat (0,17 g). Denne opløsning underkastes søjlekromatografi på Sephadex LH-20 (250 ml), idet der elueres med vand. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, 'forenes og lyofiliseres. Proceduren giver 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-azidomethyl-3-cephem-4"Carboxylsyre-dinatriumsalt (0,36 g).

IR (KBr): 2100, 1766, 1606 cm-1.

RMR (δ i D20): 1,32 (9H,s,-C(CH3)3), 1,92 og 2,48 (6H,-(CH2)3-), 3,05 og 3,53 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,03 og 4,20 (2H,ABq, J=13Hz, 3-CH2), 4,52 (IH,-CH-), 5,08 (lH,d,tT=5Hz, 6-H), 5,68 (lH,d, J=5Hz,7-H), 7,56. og 7,86 (4H, -<fZT>+ )<

Referenceeksempel 46 I phosphatpuffer (40 ml) med pH 6,4 opløses 7-[2-(2-imino-4-thiazolin- 4-yl) -acetamido] -3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-earbo:xylsyre (908 mg) sammen med en nitrogenholdig heterocyclisk thiol (2,2 mmol) og natriumhydrogenearbonat (336 mg). Opløsningen omrøres ved 60°C i 1 time, hvorefter den koncentreres under reduceret tryk til ca. 20 ml. Koncentratet underkastes søjlekromatografi på Amberli te XAD-2, idet der elueres med vand, 5$' s ethanol og 10$' s ethanol i den nævnte rækkefølge. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes og lyofiliseres, og man får en af følgende forbindelser. Tallet for reaktionsudbyttet er den værdi, der bestemmes ved væskekromatografi umiddelbart efter reaktionen.

(l) 7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido] -3-(2-carboxymethyl- 1,3,4-thiadiazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatrium-sait; udbytte 85$.

39 DK 160313 B

IR (KBr): 1761 cm-1.

NMR (δ i D20): 3,56 og 3,92 (2H,ABq,J=18Hz,2-CH2), 3,76 (2H,s,-CHgCO), 4,16 (2H,s,-CH2CO), 4,20 og 4,62 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,24 (lH,d, J=5Hz,β-Η), 5,79 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,65 (IH,s,thiazolin-5-H).

(2) 7-[ 2-( 2-imino-4-thiazolin-4-yl) -ac et amido] -3-( 3-hydroxymethyl- 4-methyl-1,2,4-triazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt; udbytte 82$.

IR (KBr): 1760 cm-1.

HMR (δ i D20): 3,40 og 3,82 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,62 (2H,s,-CH2C0) 3,74 (3H,s,-CH3), 3,72 og 4,34 (2H,ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,82 (2H,s, CH20H), 5,08 (IH,d,J=5Hz,6-H), 5,64 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,52 (IH,s, thiazolin-5-H).

Referenceeksempel 47 I 50 ml vand opløses 5,61 g 7-[D-5-(benzamido)-adipinamido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,50 g 5-mercapto-1-methyl-lH-tetrazol og 2,20 g natriumhydrogenearbonat.

Efter at pH-værdien er indstillet på 5,2, udføres reaktionen ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling tilsættes 100 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, og pH-værdien indstilles på 1,5 med 4 N HC1. Det faste bundfald filtreres fra, vaskes med 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og opløses i 100 ml ethylacetat-tetrahydrofuran (2:1) og 20 ml vand. Det organiske lag tørres, og opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk. Til remanensen sættes ether-ethylacetat, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes méd ether og tørres. Proceduren giver 5,45 g (udbytte 94,8$) 7-[D-5-(benz amido)-5-carboxyvalerami do]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3340, 1783, 1730, 1645, 1535 cm-1.

NIR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,50-2,0 (4H,m), 2,05-2,45 (2H,m), 3,70 (2H,bred), 3,93 (3H,s,HCH3), 4,15-4,55 (3H,m), 5,10 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,66 (lH,dd,J=5 og 9Hz,7-H), 7,32-7,97 (5H,m, -<ζΓ> ), 8,43 (lH,d,J=8Hz,-C0NH-), 8,73 (lH,d, J=9Hz,-C0NH-).

Referenceeksempel 48 I 50 ml vand opløses 6,11 g 7-[D-5-(p-toluensulfonamido)-adipin-amido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,50 g 5-mercapto—l-methyl-lH-tetrazol og 2,20 g natriumhydro-gencarbonat. Efter at opløsningen er indstillet på pH 5,0, udføres reaktionen ved 60°C i 50 minutter. Efter reaktionen behandles reak- 40

DK 160313 B

tionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 47. Proceduren giver 5,96 g (udbytte 95,1$) 7-[D-5-(p-toluensulfonamido)-5-carboxyvaler-amido] -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-3-cepliem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3275, 1780, 1727, 1635, 1535 cm-1.

KMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,45-1,78 (4H,m), 2,0-2,3 (2H,m), 2,41 (3H,s,-CH3), 3,71 (2H,bred,2-CH2), 3,95 (3H,s,-K0H3), 4,28 (2H,bred), 5,06 (lH,d, J=5Hz, 6-H), 5,62 (lH,dd,J=5,0 og 9,0Hz,7-H), 7,47 (4H,m, ), 7,91 (lH,d,J=9,0Hz), 8,68 (IH,d,J=9,0Hz).

Referenceeksempel 49 I 50 ml vand opløses 6,17 g 7-[D-5-(p-tert.butylbenzamido)-5-carboxy-vaieramido] -3-( 3-oxobutyryloxy)-metbyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,74 g 5-mercapto-1-methyl-lH-t etrazol og 2,50 g natriumhydrogen-carbonat. Efter at opløsningen er indstillet på pH 5,0, udføres reaktionen ved 60°C i 50 minutter. Efter reaktionen behandles blandingen på samme måde som i eksempel 63, og man får 6,02 g (udbytte 95,3$) 7-[D-5-(p-t ert. butylb enzamido) -5-carboxyvaleramido] -3-(l-methyl-lH-t etrazol-5-yl)-thiornethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3350, 1780, 1725, 1643, 1532, 1504 cm"1.

KMR (δ i d g-dim ethyl sul foxid): 1,30 (9H,s,-C(CH3)3), 1,50-2,45 (6H,m, -(CH2)3-), 3,64 (2H,bred,2-CH2), 3,93 (3H,s,-KCH3), 4,27 (2H,bred, 3-CH2), 4,36 (lH,m,-CH-), 5,0 (lH,d, J=5Hz, 6-H), 5,62 (lH,dd,J=5,0 og 8,0Hz,7-H), 7,35 (2H*d, J=8,0Hz), 7,70 (2H,d, J=8Hz), 8,36 (lH,d,J= 8,0Hz,-C0HH-), 8,76 (lH,d, J=8,0Hz,-00KH-).‘

Referenceeksempel 50 I 50 ml vand opløses 4,83 g 7-[D-5-(caprylamido)-5-carboxyvaleramido]-3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,74 g 5-mercapto-1-methyl-lH-tetrazol og 2,50 g natriumhydrogencarbonat. Efter at opløsningen er indstillet på pH 5,0, og 35,0 g natriumbromid er tilsat, udføres reaktionen ved 60°C i 45 minutter.

Efter denne reaktionsperiode behandles reaktionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 47. Proceduren giver 4,78 g (udbytte 96,3%) 7- [ D-5 -(caprylamido) -5-carboxyvaleramido] -3- (1-methyl-lH-t etrazol-5-yl)-thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3300, 1775, 1725, 1655, 1640, 1545, 1533 cm-1.

KMR (δ i d ^-dim e t hyl sul f oxid): 0,60-2,40 (21H,m), 3,70 (2H,bred,

DK 160313 B

41 2-CH2), 3,95 (3H,s,NCH3), 4,15 (lH,m), 4,27 (2H,bred, 3-0¾), 5,03 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,65 (IH,dd,J=5,O og 8,OHz,7-H), 7,97 (IH,d,J=8,OHz, -COM-), 8,7 6 (IH, d, J=8, OHz, -COM-).

Referenceeksempel 51 I 50 ml vand opløses 4,32 g 7-phenylac etami do-3-(3-0 xobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,50 g 5-mercapto-l-methyl-ΙΗ-tetrazol og 1,68 g natriumhydrogencarbonat, og reaktionen udføres ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling indstilles reaktionsblandingen på pH 5,0 og vaskes med ethylacetat. Den bringes så ned på pH 2,0 og eks traller es tre gange med ethylacetat. Ethylacetatopløsningen vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, behandles med mag-nesiumsulfat, filtreres og destilleres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet. Remanensen omkrystalliseres af ethylacetat-ether. Proceduren giver 4,29 g (udbytte 96,2$) 7-phenylaeetamido-3-(1-methyl-lH-t etrazol -5 -yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxyl syre.

IR (KBr): 3270, 1785, 1733, 1662, 1628, 1542 cm"1.

EMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,55 (2H,s,-CH2C0-), 3,60 (2H,bred, 2-CH2), 3,92 (3H,s,HCH3), 4,26 (2H,bred-3-CH2), 5,00 (lH,d,J=5,0Hz, 6-H), 5,60 (IH,dd,J=5,0 og 8,OHz,7-H), 7,23 (5H,s, <Z>" )» M8 (IH, d, J=8Hz,-COM-).

Referenceeksempel 52 I 10 ml vand opløses 561 mg 7-[D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 252 mg natriumhydrogencarbonat og 212 mg 2-methylthio-5-mercapto-l, 3,4-thiadiazol. Reaktionen udføres ved 60°C i 50 minutter, og efter afkøling vaskes reaktionsblandingen med ethylacetat og frysetørres.

Det resulterende faste stof opløses i en lille mængde methanol og behandles med acetone. De dannede krystaller filtreres fra og vaskes med ether. Proceduren giver 614 mg 7-[D-5-benzamido-5-carboxyvaier-amido] -3-( 2-methylthio-l, 3,4-thiadiazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxyl syre-dinatriums alt.

IR (KBr): 3400, 1766, 1640, 1600, 1530 cm"1.

NMR (δ i D20): 1,40-2,55 (6H,m,-(CH2)3~), 2,68 (3H,s,SCH3), 3,33 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,14 (2H,ABq,J=14Hz,3-CH2), 4,30 (lH,m,-CH-), 5,01 (lH,d,J=4,5Hz,6-H), 5,58 (lH,d,J=4,5Hz,7-H), 7,25-7,95 (5H*m, -<3> )-

42 DK 160313 B

Referenceeksempel 53 I 10 ml vand opløses 561 mg 7^D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-5-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 252 mg nat r iumc arb o nat og 224 mg 5-mercapto-2-ethoxycarbonylmethyl-lH-l, 3,4-triazol. Reaktionen udføres ved 60°C i 50 minutter, og efter afkøling behandles reaktionsblandingen på samme måde som i ref'erenceeksempel 52. Proceduren giver 642 mg 7-[D-5-b enzami do -5 -c arb o xy val er ami do ] - 3- (2- e tho xy-carbonylmethyl-lH-1, 3,4-triazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxyl-syr e-dinatriumsalt.

IR (KBr): 3400, 3280, 1765, 1745, 1640, 1603, 1535 cm-1. mR (fi l D20): 1»20 (3H,t,J=8,OHz,-CH2CH3), 1,50-2,50 (6H,m,-(0¾) 3,32 (2H,ABq,J-=l9Hz,2-CH2), 3,80-4,50 (7H,m), 4,95 (lH,d, J=4,5Hz, 6-H), 5,52 (IH,d,J=4,5Hz,7-H), 7,20-7,90 (5H,m, -<f^3 ).

Referenceeksempel 54 I 12 ml vand opløses 1,27 g 7β -[ D-5 - ( p -t -but ylb enz ami do) -5 -c arb oxy-valeramido ]-3-( 3-carboxypropionyloxy)-metkyl-3-c ephem-4-carboxylsyre sammen med 0,25 g 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol og 0,68 g natrium-hydro gencarbonat, hvorpå der omrøres i 1-jr time ved 60°C. Reaktionsopløsningen får lov at køle af· til stuetemperatur, og der tilsættes 30 ml af en 4/«'s vandig opløsning af phosphorsyre, hvorpå der ekstra-heres med 60 ml ethylacetat. Ethylac etati åget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (40 ml x 2) og tørres over magnesiumsulfat, hvorpå der koncentreres under reduceret tryk. Til koncentratet sættes ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres over phosphorpentoxid under reduceret tryk, hvorved der fås 1,02 g 7β -[ D-5 - ( p -t -but ylb enz ami do) -5 -c arb o xyvai er amido ] - 3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

Med hensyn til IR- og HMR-spektre er dette produkt i god overensstemmelse med produktet opnået i referenceeksempel 49.

Referenceeksempel 55 I 12 ml vand opløses 1,26 g 7β-[D-5-(p-t -butylb enz ami do) -5 -c arb o xyvai er ami do ] -3- (3-c arb o xy acrylo xy) -methyl—3-c ephem-4-c arb o xyl syr e, 0,25 g 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol og 0,68 g natriumhydrogen-carbonat, og opløsningen omrøres i 2 timer ved 60°C, hvorpå den behandles, på samme måde som i referenceeksempel 54. Proceduren giver 0,88 g 7β- [ D-5-(p-t-butylb enzamido) -5 -c arb o xyvai e r ami do]-3-(l-me t hy 1-1 H-t et r a-zol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, hvis IR- og NMR-spektre er i god overensstemmelse med spektrene for produktet opnået i referenceeksempel 49.

43 DK 160313 B

Referenceeksempel 56

Reaktionen i referenceeksempel 55 gentages under anvendelse af 1,36 g 7(3-[ D-5 - (p-t -butylb enz ami do) -5 -c arbo xyval erami do ] - 3- (2 -c arbo xyb enzoyl - 0 xy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Proceduren giver 0,97 g 7β- [ D-5 - (p-t-butylb enz ami do) -5 -carboxy val erami do ] -3- (1-me thyl-lH-t etra-zol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-ca.rboxylsyre, hvis IR- og NMR-spektre er i god overensstemmelse med spektrene for produktet opnået i referenceeksempel 4 9.

Referenceeksempel 57 1 12 ml vand opløses 1,55 g 7p-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxy-valeramido] -3-[ 3-carboxy-3(eller 2)-(p-chlorphenylthio)-propionyloxy]-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, 0,25 g 5-mercapto-l-methyl-lH-tetra-zol og 0,68 g natriumhydrogencarbonat, og opløsningen omrøres i Intime ved 60°c, hvorpå den behandles på samme måde som i referenceeksempel 54. Proceduren giver 0,99 g 73-[D-5-(p-t-butyibenzamido)-5-earboxyvaler-amido ] -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-c arbo xyl -syre, hvis IR- og NMR-spektre er i god overensstemmelse med spektrene for produktet opnået i referenceeksempel 49.

Referenceeksempel 58

Reaktionen i referenceeksempel 57 gentages under anvendelse af 1,21 g 7(3-(D-5 -phthalimido -5-c arbo xyval erami do) -3-( 3-carboxypropionyloxy ) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Proceduren giver 1,00 g 7β—(D—5— phthaiimido-5 -carboxyval erami do) -3-(l-methyl-lH-t etrazol-5-yl) -thio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, hvis IR- og NMR-spektre er i god overensstemmelse med spektrene for produktet^opnået i referenceeksempel 1 (2).

Referenceeksempel 59

Reaktionen i referenceeksempel 57 gentages under anvendelse af 1,30 g 73- (D-5-phthaiimido-5 -carboxyval eramido) -3-(2-carboxybenzoyloxy) -me--thyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Proceduren giver 0,94 g 7β-(D-5-phthal-imido-5-carboxyvaleramido)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl- 3-cephem-4-carboxylsyre, hvis IR- og NMR-spektre er i god overensstemmelse med spektrene for produktet opnået i referenceeksempel 1 (2).

Referenceeksempel 60 I vand (6 ml) opløses 7β-LD-5-(2~carboxy-6(eller 3)-nitrobenzamido)- 5-carboxyvaleramido]-3-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,78 g) sammen med 5-mercapto-l-methyl-IH-

44 DK 160313 B

tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogencarbonat (0,42 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 54. Proceduren giver 7(3-/5-5-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenz-amido )-5-carboxyval eramido]-3~(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,50 g).

IR (KBr): 1782, 1731, 1645, 1537, 1351 cm”1.

MR (d^-dimethylsulfoxid): δ 1,73 og 2,26 .(δΗ,-ζΟΗ^)^-), 3,69 (2H, 2- CH2), 3,94 (3H,s, >R-CH3), 4,32 (2H,3-CH2), 4,52 (1H,-CH-), 5,06 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,67 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H>, 7,6-8,4 (4H, og -CH-KH-), 8,79 (lH,d,J=8Hz,-CORH->.

Referenceeksempel 61 I vand (6 ml) opløses 7β -[ D -5 - (p -t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido 3- (2-carbo xy-6(eller 3)-nitrob enzoyloxy)-methyl-3-e ephem-4-c arbo xylsyr (0,73 g) sammen med 5-mercapto-1-methyl-lH-tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogencarbonat (0,34 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 30 minutter, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 54. Proceduren giver 7(3- [ D-5 -(p-t-butylb enzamido) -5-carboxyvaleramido J -3- (1-methyl-lH-t etra-zol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,53 g)· Med hensyn til IR (KBr)- og MR (dg-dimethylsulfoxid)-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet opnået i referenceeksempel 49.

Referenceeksempel 62

Reaktionen i referenceeksempel 60 gentages under anvendelse af 0,73 g 7β-/ρ-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramidoJ-3-(2,4(eller 5)-dicarboxy-benzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, og man får 0,52 g 7β-[D-5-(p-t-butylb enzamido) -5-carboxyvaleramido] -3-(l-methyl-lH-tetra-zol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Med hensyn til IR (KBr)-og MR ( d g-dime thyl sul foxid)-spektre er denne forbindelse i god over-* ensstemmelse med produktet i referenceeksempel 49.

Referenceeksempel 63 I vand (6 ml) opløses 7β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido)-3-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,70 g) sammen med 5-mercapto-2-methyl-l, 3,4-thiadiazOl (0,13 g) og natriumhydrogencarbonat (0,34 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter, hvorefter den behandles som i referenceeksempel 49. Proceduren giver 7β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido) -3-(2-methyl-1, 3,4-thiadiazol- 5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,51 g).

IR (KBr): 1773 (sk), 1715, 1648 (sk) cm"1.

45 DK 160313 B

MR (dg-dimethylsulfoxid): δ 1,53 og 2,15 (6H,-(CH2)3-), 2,67 (3H,s, -CH3), 3,45 og 3,72 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,19 og 4,50 (2H, ABq, J=13Hz,3-CH9), 4,72 (lH,t,J=7Hz,-CH-), 5,02 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,61 0 (lH,dd, J=5 og 8Hz, 7-H), 7,87 (4H,s, 8,74 (1H’d’J=8Hz,-C0NH- tf

O

Referenceeksempel· 64

Reaktionen i referenceeksempel 63 gentages under anvendelse af 0,73 g 73~/. D-5- (p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-(2-carboxy-6(eller 3)-nitrobenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, og man får 0,55 g 7β —[ D -5 - (p -1 -butylb enzamido) -5-carboxyval eramido ] -3-( 2-methyl-l ,3,4-thi adiazol -5 -yl) -tM orne t hyl -3-c ephem-4-carboxylsyr e.

IR (EBr): 1780, 1728, 1644 cm-1.

MR (dg-dimethylsulfoxid)δ 1,28 (9H,s,-C(CH3)3), 1,74 og 2,23 (6H, -(CH2)3-), 2,66 (3H,s,-CH3), 3,50 og 3,75 (2H,ABq, J=l8Hz,2-CH2), 4,20 og 4,50 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 4,39 (1H,-CH-), 5,05 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,65 (lH,dd, J=5 og 8Hz,7-H), 7,44 og 7,8o'(4H,-<f3>+), 8,42 (lH,d, J=8Hz , -CH-lrø-), 8,80 (lH,d, J=8Hz,-C0NH-) .

Referenceeksempel 65 I vand (5 ml) opløses 7P-(D-mandelamido)-3-(3-carboxypropionyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,46 g) sammen med 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogenearbonat (0,25 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i l-§- time. Efter afkøling i luften underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand og derpå med en opløsningsmiddelblanding af vand og methanol. Fraktionerne, der indeholder den ønskede forbindelse, forenes, koncentreres og lyofiliseres. Proceduren giver 7p-(D-mandel-amido) -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre-natriumsalt (0,31 g).

IR (EBr): 1761, 1675, 1604 cm-1.

MR (D20): δ -3,25 og 3,68 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,95 (3H,s, >H-CH3), 4,02 og 4,29 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 4,97 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,18 (IH, s,-CH-), 5,51 (lH,d,J=5Hz,7-H), 7,37 (5H,s,

Referenceeksempel 66 I vand (5 ml) opløses 7p-(2-thienylacetamido)-3-(2-carboxybenzoyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,50 g), sammen med natriumhydrogen-

46 DK 160313 B

carbonat (0,17 g), kaliumiodid (0,40 g) og py ri din (0,21 g). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omrøres så ved 60°C i 1-g- time. Efter afkøling i. luften underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand og derpå med en opløsningsmiddelblanding af vand og methanol. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes, koncentreres og lyofiliséres. Proceduren giver 7β-( 2-thienylacetamido) -3-(l-pyridylmethyl) -3-cephem-4-carboxyl-syre-betain (0,23 g).

IR (KBr): 1763, 1698, 1617 cm-1.

MR (Ρ20): δ 3,17 og 3,67 (2H, ABq, J=17Hz, 2-CH2), 3,38 (2H,s,-CH2C0-), 5,19 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,41 og 5,67 (2H,ABq,J=14Hz, 3-0¾), 5,75 (IH, d,J=5Hz,7-H), 7,01 og 7,28 (3H, ), 8,15 og 8,62 og 9,04 (5H,

fi K

w Θ

Referenceeksempel 67

De følgende forbindelser fremstilles ved lignende procedurer som den, der er beskrevet i referenceeksempel 63.

(1) 7β - (D-5 -Phthalimido -5 -carboxyval er amido) -3-L 2-(2-hydroxyethyl-thio) -1,3,4-thiadiazol-5-yl] -thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3325, 1780, 1715, 1645, 1530 cm-1.

MR (dg-dimethylsulfoxid): δ 1,30-2,40 (m,6H), 3,20-3,80 (m,6H), 4,27 (AB-q,2H,J=12Hz), 4,65 (t,lH,J=9Hz)* 4,96 (d,lH,J=5Hz), 5,55 (q,lH,J=5 og 8Hz), 7,87 (s,4H), 8,70 (d,lH, J=8Hz).

(2) 7β-(D-5-Phthalimido-5-carboxyvaleramido)-3-(2-carbamoylmethyl-thio-1,3,4-thiadiazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephern-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3430, 3340, 1776, 1717, 1680, 1535 cm-1.

MR (dg-dimethylsulfoxid): δ 1,30-2,40 (m,6H), 3,57 (bred,2H), 4,40 (s, 2H), 4,32 (AB-q, 2H, J=12Hz), 4,70 (t,lH, J=8,OHz) , 5,0 (d,lH,d=5Hz) , 5,55 (q,lH,J=5 og 8Hz), 7,20 (br. ,1H), 7,60 (br.,lH), 7,86 (s,4H), 8,74 (d,lH,J=5Hz).

Referenceeksempel 68 7β-( 2 -Thi enyl ac et ami do) -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre fremstilles ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 65. Udbytte 0,37 g ud fra 0,50 g 7β—(2— thi enylac etami do ) -3- (2-carboxyb enzoyloxy) -methyl-3-c ephem-4-carboxyl-syre. .

IR (KBr): 1776, 1734, 1672 cm'1.

MR (dg-dimethylsulfoxid): δ 3,56 og 3,78 (2H,ABq, J=l8Hz,2-CH2),

47 DK 160313 B

3,73 (2H,s,-CH2CO-), 3,92 (3H,s, CH3), 4,21 og 4,37 (2H, ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,05 (IH,d,J=5Hz,e-Hi, 5,66 (lH,dd,J=5 og8Hz,7-H), 6,90 og 7,29 (3H, jfn^), 9,10 (lH,d,J=8Hz,-CONH-).

Referenceeksempel 69 I vand (12 ml) opløses 7β -[ D-5 - (p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaler-amido]-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,33 g) sammen med 5-mercapto-l-methyl-IH-tetrazol (0,25 g) og nat riumhydrogenearbo-nat (0,51 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 30 minutter, hvorefter den bringes ned på stuetemperatur. Efter tilsætning af 4%' s vandig phosphorsyreopløsning (30 ml) ekstraheres reaktionsblandingen med ethyl acetat (60 ml). Ethyl acetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (40 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-[Β-5-(p-t-butylb enz ami do) -5-carboxyvaleramido] -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,14 g). Med hensyn til IR (KBr)- og MR (dg-dimethylsulfoxid)-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 49.

Referenceeksempel 70 I vand (12 ml) opløses 7β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,27 g) sammen med 5-mercapto-l -methyl -IH-tetrazol (0,25 g) og natriumhydrogencarbonat (0,51 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles reaktionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 69. Proceduren giver 7β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaler- amido) -3-(l-methyl-lH-t etrazol-5-yl) -thiomethyl-3-c eph em-4-carboxylsyre (1,12 g). Med hensyn til IR (KBr)-· og MR (dg-dimethylsulfoxid)-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 1 (3).

Referenceeksempel 71 I vand (5 ml) opløses 7β-(ΰ-ιη3η1βΐ3ΐηί1ο)-3-ιη3^0^1οχ3τιη0ΐ]ΐ7ΐ-3-οβρ1ιβΐϊΐ- 4-carboxylsyre (0,50 g) sammen med 5-mercapto-1-methyl-IH-tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogencarbonat (0,17 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter. Efter afkøling i luften underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand og en opløsningsmiddelblanding af vand og methanol. Fraktionerne,

48 DK 160313 B

der indeholder det ønskede produkt, forenes, koncentreres og lyofili-seres. Proceduren giver 7P~(D-mandelamido) -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (0,34 g). Med.hensyn til IR- og RMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 65.

Referenceeksempel 72 I vand (5 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido)-3-mandelyloxymethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (488 mg) sammen med natriumhydrogencarbonat' (84 mg), kaliumiodid (400 mg) og pyridin (212 mg). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omsættes ved 60°C i 45 minutter. Efter afkøling underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand og derpå med en opløsningsmiddelblanding af vand og methanol. Pr aktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes, koncentreres og lyofiliseres. Proceduren giver 7p-(2-thienyl-acetamido)-3-(l-pyridylmethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-betain (250 mg) Med hensyn til IR- og HMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 66.

Referenceeksempel 73 I vand (4 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,49 g) sammen med 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogencarbonat (0,17 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles reaktionsblandingen ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 69. Proceduren giver 7β-(2-thienylacetamido)- 3- (1 -methyl -IH-1 e t r az o 1 -5 -yl) -thi ome thyl - 3-c eph em-4-c arb o xyl syre (0,40 g). Med hensyn til IR- og HMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 68.

Referenceeksempel 74

De følgende forbindelser fremstilles ved lignende procedurer som dem, der er beskrevet i referenceeksempel· 69 og 70.

(1) 7β-[Β-5-(ρ-ΐ-ΐ&^16βηζ3ΐιιϊάο)-5-οη^οχ3Γνα1βηηιιο^ο]-3-(2-ιιΐθΐ1ψ1- 1,3,4-thi adi azo 1 -5 -yl) -thi omethyl- 3-c ephem-4-c arb o xyl syr e. Udbytte 84$.. Med hensyn til IR- og UMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 64.

(2) 7β - (D-5 -Phthalimido -5 -c arb o xyval erami do)- 3- (2-me thyl -1,3,4-thia-diazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Udbytte 86$. Med hensyn til IR- og UMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 63.

49 DK 160313 B

(3) 73-(D-5-Phthalimido-5-carboxyvaleramido)-3~[2-(2-hydroxyethyl-thio)-l, 3,4-thiadiazol-5-yl]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Udbytte 8lfc. Med hensyn til IR- og NMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 67 (1).

(4) 7P-(D-5-Phthalimido-5-carboxyvaleramido) -3-( 2-carbamoylmethyl-thio-1, 3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Udbytte 88<fc. Med hensyn til IR- og NMR-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 67 (2).

Referenceeksempel 75 I vand (30 ml) opløses 7β-amino-3-(3-0xobutyryloxy)-methyl-3-cephem-

4-carboxylsyre (3,14 g), natriumhydrogenearbonat (1,84 g) og 5-mer-capto-1-methyl-lH-tetrazol (1,4 g), og opløsningen indstilles på pH

5,5, hvorpå der omrøres og opvarmes ved 60°C i 1 time. Efter afkøling vaskes reaktionsopløsningen med dichlormethan (20 ml), og det vandige lag indstilles på pH 3,3, hvorefter der omrøres i 1 time under iskøling. Det resulterende bundfald filtreres fra, vaskes med vand, methanol og acetone i denne rækkefølge og tørres, hvorved man får 7P-amino-3~(l-methyl-lH-t etrazol-5 -yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (2,7 g).

IR (KBr): 1795 cnT1.

NIR (δ i D20+NaHC03): 3,61 og 3,98 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,21 (s, -NCH3), 5,21 (d,J=4,5Hz,6-H), 5,60 (d,J=4,5Hz,7-H).

Referenceeksempel 76 I vand (30 ml) opløses 7p-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem- 4-earboxylsyre (3,14 g), natriumhydrogencarbonat (0,84 g) og 5-mer-capto-l-[2-(N,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol (2,60 g), og den resulterende opløsning omrøres i 60 minutter ved 55°C. Efter afkøling sættes acetone (15 ml) til reaktionsopløsningen, og blandingen ledes gennem en søjle af aktivt aluminiumoxid (10 g). Søjlen vaskes med vandacetone (1:1) (30ml), og vaskevæsken forenes med eluatet, hvorpå man afdestillerer acetonet under reduceret tryk. Til den resterende opløsning sættes Amberlite IR-120 (syreform) (6,0 ml), og blandingen omrøres i 30 minutter under iskøling. Det uopløselige filtreres fra, og filtratet koncentreres. Koncentratet sættes dråbevis til ethanol i en mængde på ca. 30 gange rumfanget af koncentratet, og det udfældede faste stof filtreres fra, vaskes med ethanol og tørres, hvorved man får 7β-amino—3-(2--[ 2-(N,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol-5-ylj -thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,28 g).

50 DK 160313 B

IE (KBr): 3450, 1780, 1620, 1540 cm-1.

MR (δ i D20): 3,07 (6H,s), 3,70 (2H,AjBq, J=17Hz), 3,85 (2H, t, J=6Hz), - 4,25 (2H, ABq., J=l2Hz), 4,8-5,2 (4H,m).

Referenceeksempel 77 I vand (30 ml) opløses 7β-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (3,14 g) sammen med natriumhydrogencarbonat (1,84 g) og 2-mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazol (1,6 g), og den resulterende opløsning indstilles på pH 6,4, hvorpå der omrøres i 1 time ved 60°C. Efter afkøling vaskes reaktionsopløsningen, med dichlormethan, og pH-værdien af det vandige lag indstilles på 3,5 under iskøling, hvorpå der omrøres i 1 time. Det udfældede materiale filtreres fra, vaskes med vand, methanol og acetone i denne rækkefølge og tørres, hvorved man får 7P-amino— 3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,9 g).

IR (KBr): 1795 cm-1.

MR (δ i D20+HaHC03): 2,87 ( 3H, s, thiadiazol-OH^), 3,53 og 3,95 (2H, ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,10 og 4,46 (2H,ABq,J=13Hz, 3~CH2), 5,17 (lH,d, J=4,5Hz,6-H), 5,58 (lH,d,J=4,5Hz,7-H).

Referenceeksempel 78 I vand (l ml), der indeholder natriumsaltet af 5-mercapto~lH-l,2,3-triazol (120 mg) og natriumhydroxid (40 mg), opløses under iskøling 7p-amino-3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (282 mg), og til den resulterende opløsning sættes 1 N HC1 for at indstille dens pH-værdi på 5,5 under omrøring, hvorpå der omrøres yderligere i 1 time ved 55°C. Til reaktionsopløsningen sættes methanol (5 ml), og blandingen får lov at køle af til stuetemperatur. Den afkølede blanding indstilles på pH 3,9 ved tilsætning af 1 Η HC1 under omrøring, og den resulterende blanding omrøres yderligere i 1 time under, iskøling. Det udfældede uopløselige stof filtreres fra og vaskes med vand og methanol i denne rækkefølge. Det uopløselige stof tørres naturligt og derpå over phorphorpentoxid, og man får 76~amino-3-(lH-l, 2, 3- · triazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (190 mg).

IR (KBr): 1800, 1525 cm-1.

Referenceeksempel 79 I vand (1 ml), der indeholder natriumhydrogencarbonat (84 mg), opløses 7 β -amino - 3- ( 3-o xobutyrylo xy) -methyl-3-c ephem-4-c arbo xyl syre (314 mg), og til den resulterende opløsning sættes isonicotinamid 51

DK 160313 B

(I85 mg) og kaliumiodid (1,0 g), hvorpå der omrøres i 1 time ved 55°C. Til reaktionsblandingen sættes ethanol (20 ml) under omrøring, og det resulterende bundfald filtreres fra og vaskes med ethanol. Efter naturlig tørring opløses det brune pulver i vand (3 ml), og opløsningen kromatograferes på en søjle pakket med Amberlite XAD-2. Eluatet frysetørres, og man får 7P-amino-3-(4-earbamoylpyridinium)-methyl-4-carb-oxylat (150 mg).

IR (KBr): 3500, 1760, 1600 cm-1.

Referenceeksempel 80 I en blanding af tetrahydrofuran (5 ml) og vand (10 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido) -3-( 3~o xobutyrylo xy) -methyl - 3-c eph em-4 -c arb o xyl -syre (876 mg) og natriumsulfit (504 mg), og den resulterende opløsning omrøres i 120 minutter ved 60°C. Til reaktionsblandingen sættes vand (10 ml), og blandingen indstilles på en pH-værdi på 7,2 med 2 R HC1, hvorpå der koncentreres under reduceret tryk. Remanensen underkastes søjlekromatografi på silicagel og elueres med acetonitril-vand (7:1-5:1). Fraktionerne, der indeholder den ønskede forbindelse, forenes, og acetonitrilet afdestilleres. Remanensen kromatograferes på en søjle pakket med Amberlite XAD-2, og der elueres med vand og derpå vand-methanol. Fraktionerne, der indeholder den ønskede forbindelse, forenes, og blandingen koncentreres under reduceret tryk, hvorefter der frysetørres, og man får dinatriumsaltet af 7β-(2-thienylacetamido)-3-sulfomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (310 mg).

IR (KBr): 3450, 1760, 1665, 1605, 1190, 1055 cm-1.

ΜΕ (δ i D20): 3,67 (2H, ABq, J=17Hz), 3,92 (2H,s), 4,16 (2H, ABq, J=l6Hz), 5,20 (lH,d,J=5Hz), 5,64 (IH, d, J=5Hz), 7,05 og 7,40 (3H,m).

Referenceeksempel 81 I 50 ml dichlormethan opløses 7,05 g 7-[D-phthalimido-5-carboxyvaler-amido ] -3-hydroxymethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre-ditri ethylaminsalt, og ved 0°C sættes triethylamin (1,5 ml) til opløsningen, hvorpå der tildryppes diketen (2,0 ml) i løbet af 10 minutter ved -5 til 0°C. Blandingen omrøres yderligere i 50 minutter ved -5 til 0°C, og der tilsættes 40 ml vand, hvorpå dens pH-værdi indstilles på 6,0 med 2 K HC1. Det vandige lag vaskes med dichlormethan (10 ml), og der tilsættes 2,25 g 5-mercapto-l-[2-(R,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol, hvorpå pH-værdien indstilles på 5,5· Opløsningen omrøres ved 60°C i 40 minutter, og derpå filtreres det uopløselige fra. Til filtratet sættes natriumchlorid (15,0 g) og en mættet vandig opløsning af na-

52 DK 160313 B

triumchlorid (50 ml), og blandingen indstilles på pH 2,0 med 4 N HC1. Det udfældede faste materiale filtreres fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natrlumchlorid og vand i denne rækkefølge og tørres, hvorved man får 6,75 g 7β-(D-5-pht hal imido-5-carboxyvaleramido)-3—{l—[ 2-(h, H-dimethylamino) -ethyl] -lH-tetrazol-5-yl} -thiomethyl-3-c eph em-4 -c arb o xyl syre -hydro chl o r i d.

IR tør): 3370, 1775, 1715, 1640 cm-1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,30-2,40 (6H,m), 3,5-4,8 (9H,m), 5,04 (lH,d,J=5Hz), 5,60 (lH,q,J=5,8Hz), 7,90 (4H,s), 8,86 (lH,d, J=8Hz).

Referenceeksempel 82 I en phosphat puf fer opløsning på pH 6,4 (3 ml) opløses 5-mereapto-2-methyl-1,3,4-thiadiazol (79 mg), natriumhydrogencarbonat (50 mg) og 7β-[ 2-(lH-tetrazol-l-yl) -acetamido] -3-(3-carboxypropionyloxy)-meihyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (243 mg), og den resulterende opløsning opvarmes i 1 time ved 60°C. Efter afkøling koncentreres · reaktionsopløsningen under reduceret tryk, og remanensen underkastes søjlekromatografi på Sephadex LH-20 (250 ml), idet der elueres med vand. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes og lyofiliseres. Proceduren giver ηηΪΓΪ^-7β-[2-(lH-tetrazol-l-yl)-acetamido] -3-(2-me thyl-1 , 3,4-thiadiazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem-4-carb-oxylat.

mm (δ i D20): 2,78 (3H,s,-CH3), 3,60 (2H, ABq, J=l8Hz, 2-0¾) , 4,25 (2H,åBq,J=13Hz,3-CH2), 5,12 (lH,d, J=4,5Hz,6-H), 5,58 (2H,s,-CH2C0-), 5,70 (lH,d,J=4,5Hz,7-H), 9,15 (lH,s,tetrazol-H).

Referenceeksempel 83 I en phosphatpuffer på pH 6,4 (3 ml) opløses natrium-7p~[D-a-t-but-oxycarbonylamino-a-(p-hydroxylphenyl) -acetamido] -3~( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylat (280 mg) og natriumsaltet af 5-mercapto-1H-1,.2,3-triazol (120 mg), og den resulterende opløsning opvarmes ved 60°C i 60 minutter. Efter afkøling til stuetemperatur kromat ograf er es reaktionsopløsningen på en søjle pakket med Amberlite XAD-2, og de forenede eluater, der indeholder det ønskede produkt, frysetørres, og man får natrium-7β-[D-α-t-butoxycarbonylamino-α-(p-hydroxyphenyl)-acetamido] -3-(lH-l ,2,3-triazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat. IR tør): 3400, 1762, 1678 cm-1.

HMR (D20): δ 1,46 (9H,s,-0(0¾)^, 3,00-4,12 (4H,m,2-CH2,3-CH2), '

53 DK 160313 B

5,00 (lH,d,J=4,5Hz,6-H), 5,60 (lH,d,J=4,5Hz,7-H), 6,78-7,42 (4H,m, j 7,71 (IH, s, triazol-4-H).

Det således opnåede natri um-7P-[D-a-t-butoxycarbonyl amino-a-(p-hydr-oxyphenyl)-acetamido] -3-(lH-l,2, 3-triazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylat (175 mg) opløses i myresyre (4 ml), og den resulterende opløsning omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsopløsningen underkastes destillation under reduceret tryk og derpå azeotrop destillation (3 gange) med toluen for at fjerne myresyre, hvorpå der tørres over phosphorpentoxid i ca. 16 timer. Det således opnåede skumagtige materiale omrøres med vand-ethanol (8:2) (15 ml), og blandingen underkastes filtrering, behandling med aktiveret kul og derpå filtrering under anvendelse af Celite. Filtratet frysetørres, og man får 7-[D-a-amino-a-(p“hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(lH-l,2, 3~ triazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Dette produkt er i god overensstemmelse med standarden med hensyn til tyndtlagskromato-grafi og væskekromatografi.

Referenceeksempel 84 I vand (10 ml) opløses 7β-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido] -3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (908 mg), 5-mer-capto-l-[ 2-(N,N-dimethylamino)-ethyl] -lH-tetrazol (450 mg) og natrium-hydro gencarbonat (168 mg), og den resulterende opløsning opvarmes ved 55°C i 60 minutter. Reaktionsopløsningen viser sig at indeholde 7β-[ 2-( 2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido] -3~|l-[2-(Sf,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol-5-ylj-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 8l$' s udbytte i forhold til udgangscephalosporinen ved væskekromatografi. Reaktionsopløsningen indstilles på pH 5,8 og renses ved søjlekromatografi under anvendelse af Amberlite XAD-2.

IR (KBr): 1765 cm"1.

NMR (D20): δ 3,06 (6H,s,-N(CH3)2) , 3,5-4,8 (10H,m), 5,12 (lH,d,J=5Hz, 6-H), 5,65 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,62 (lH,s,thiazolin-H).

Referenceeksempel 85 I dimethylformamid (16,0 ml) suspenderes mononatriumsalt-monohydratet af deacetylcephalosporin C (4,13 g), og den resulterende suspension opløses ved tilsætning af koncentreret saltsyre (1,66 ml) ved en temperatur under 0°C, hvorpå der tilsættes dimethylformamid (16,0 ml), triethylamin (4,90 ml) og phthalsyreanhydrid (2,96 g) i denne rækkefølge. Den resulterende blanding omrøres i ΐΊ time ved 20°C, og reak 54

DK 160313 B

tionsopløsningen hældes på en blanding af en vandig opløsning af na-triumchlorid (200 ml) og dichlormethan (40 ml). Blandingen indstilles på pH 6,5, og det vandige lag skilles fra. Laget vaskes med dichlormethan og ekstraheres med en blandet opløsning af ethylacetat-tetra-hydrofuran (3=1) (50 ml x 3), og de forenede ekstrakter vaskes med en mættet vandig opløsning af nat riumchl o ri d og tørres over magnesiumsulfat. Den tørrede ekstrakt koncentreres under reduceret tryk, og der sættes ether til koncentratet. Proceduren giver 7β -[ D -5 - (2-e arbo xyb enz ami do) -5 -c arb o xyval er ami do ] - 3- ( 2-c arbo xyb enzoyl -o xy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,22 g).

IR (EBr): 1780, 1735, 1725, 1715, 1640 cm-1.

RMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,40-2,40 (6H,m), 2,62 (2H,ABq,J=l8Hz), 4,35 (lH,m), 5,09 (2H,ABq,J=13Hz), 5,10 (lH,d, J=5Hz), 5,72 (lH,dd, J=5 og 8Hz), 7,30-7,9 (8H,m), 8,53 (lH,d,J=8Hz), 8,82 (lH,d,J=8Hz).

Claims

DK 160313 B Forbindelse til anvendelse som mellemprodukt til fremstilling af en forbindelse med formlen S,MT“n_ 3 « Jr- - CH2R COOH i hvilken R1 er en acylgruppe med formlen R4 CHCO- R5^ hvor R^ betyder acetyl, halogenacetyl, phenyl, p-hydroxyphenyl, thienyl, 2-imino-4-thiazolin-4-yl, 2-oxo-4-thiazolin-4-yl, tetra-zolyl eller phenoxy, og r5 betyder hydrogen, sulfo, amino eller hydroxy, og R^ er en rest af en nucleofil forbindelse, kendetegnet ved, at den har formlen 'η-Γ'ΐ i— n -ch2ocow T COOH i hvilken W betyder acetonyl (-CH2COCH3), eller -CH _ 1 X0H COOH som kan være substituerede med en nitrogrupe, eller et salt deraf.