DK162896B - Fremgangsmaade til oprensning af factor viii:c samt farmaceutisk praeparat indeholdende denne - Google Patents
Fremgangsmaade til oprensning af factor viii:c samt farmaceutisk praeparat indeholdende denne Download PDFInfo
- Publication number
- DK162896B DK162896B DK575184A DK575184A DK162896B DK 162896 B DK162896 B DK 162896B DK 575184 A DK575184 A DK 575184A DK 575184 A DK575184 A DK 575184A DK 162896 B DK162896 B DK 162896B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- factor viii
- buffer
- process according
- viii
- column
- Prior art date
Links
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title claims abstract description 92
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 title 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims abstract description 91
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims abstract description 91
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims abstract description 15
- -1 aminohexyl Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 11
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 10
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 10
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 10
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims 2
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 48
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 32
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 24
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 9
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 9
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 9
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 9
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 9
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 8
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 4
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 4
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101710126321 Pancreatic trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 2
- 229960000900 human factor viii Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229940108519 trasylol Drugs 0.000 description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000002356 Nectin Human genes 0.000 description 1
- 108060005251 Nectin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241001237728 Precis Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000603 anti-haemophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
i
DK 162896 B
Den foreliggende opfindelse angår oprensningen af det prokoagulerende stof faktor VIII:C fra råmateriale, såsom plasma eller cryoprecipitat, som indeholder antihaemofil faktor (heri kaldt "AHF").
5
Det er en almindelig opfattelse på området, at AHF i sin naturlige form som opnået fra plasma består af aggregater af to molekylenheder, som benævnes faktor VIII :R og VIII:C. Faktor VIII:C er biologisk aktiv ved korrigering 10 af koaguleringsdefekt for hæmofilia A. Derimod er faktor VIII:R, der også er kendt som faktor VIII:WF (von Wille-brand faktor), biologisk aktiv til korrigering af koaguleringsdefekten ved von Willebrand's sygdom, en blodpla-deaggregeringsfej1. Det er yderst ønskeligt at være i 15 stand at rense faktor VIII:C med hensyn til faktor VIII:R og de øvrige plasmaproteiner, med hvilke faktor VIII:C sædvanligvis findes, herunder især fibronectin og fibrinogen.
20 Tidligere kendte processer til oprensning af faktor VIII:C indfører tab af udbytte og/eller renhed, som hidtil har været tolereret. Den foreliggende opfindelse giver højere rensningsgrader og højere udbytte uden desaktivering på en måde, som ikke er foreslået i den kendte 25 teknik.
D.E.6. Austen, "The Chromatographic Separation of Factor VIII on Aminohexyl Sepharose", i British Journal of Hematology, 1979, (43) 669-674, beskriver en chromatografisk 30 adskillelsesproces, i hvilken human faktor VIII koncen trat eller svinefaktor VIII koncentrat blev passeret gennem en søjle af 6-amino-n-hexylsubstitueret agarose. Søjlen og alle elueringsopløsninger havde et pH på 5,5. Der blev opnået en høj separationsgrad af faktor VIII:C fra 35 faktor VIII:R og en høj rensningsgrad for faktor VIII:C fra andre proteiner. Den totale udvinding af human faktor VIII:C var imidlertid kun 35-40%, og for svinefaktor
DK 162896B
2 VIII:C var den kun 24-30%. Forfatterne indikerer, at surere pH-værdier i pufferne (ned til pH ca. 5,2) favoriserer højere rensning af faktor VIII, og de valgte med vilje pH 5,5 for at have et så surt miljø som muligt uden 5 at få et for lavt udbytte. Der er således ud fra denne litteratur en fordom mod at anvende højere (dvs. mindre sure) pH-værdier.
Adskillige nyere publikationer har fortsat med at insis-10 tere på at opretholde et surt pH i den chromatografiske søjle. Morgenthaier, "Chromatography of Antihemophilic Factor on Diaminoalkane- and Aminoalkane-Derivatized Se-pharose", Thromb. Haemostas. 47(2) 124-127 (1982), fandt, at når AHF blev chromatograferet på Sepharose CL-2B aga-15 rosegel ved pH-værdier på 6,0, 6,5 og 7,0, kunne der ikke opnås nogen adskillelse af faktor VIII:C og VIII:R af betydning. Chromatografi af AHF ved pH 5,5 gav en meget mærkbar separation mellem faktor VIII:C og VIII:C. Ifølge en endnu nyere litteratur, Faure et al., Note, "Improved 20 buffer for the chromatographic Separation of Factor VIII coagulant", J. Chromatography 257 (1983), 387-391, opretholder man den af Austen angivne pH-værdi på 5,5 og forsøger at forbedre udbyttet af den chromatografiske procedure ved tilsætning af forbindelser til pufferne. Austen 25 fortsætter i et forsøg på at forbedre de resultater, der er anført i hans ovennævnte artikel, med at operere ved en pH-værdi på 5,5 og opnår et udbytte af faktor VIII:C på ca. 40%, Austen et al., "Factor VIII Fractionation on Aminohexyl Sepharose with Possible Reduction in Hepatitis 30 B Antigen", Thromb. Haemostasis, 48(1), 46-48 (1982).
Så vidt vides, er faktor VIII:C kun blevet påført en søjle ved et pH nærmere det neutrale i det tilfælde, hvor faktor VIII:R og et stort antal af de øvrige forurenin-35 ger, herunder fibronectin og fibrinogen, allerede er blevet skilt fra faktor VIII:C. Specifikt anvender Zimmerman et al., ifølge US patentskrift nr. 4 361 509 en søjle,
DK 162896 B
3 der bærer monoklonale antistoffer mod faktor VIII:R, til udvinding af en fortyndet opløsning af faktor VIII:C, der er blevet ultrarenset for faktor VIII:R. Opløsningen af ultrarenset faktor VIII:C koncentreres ved indstilling af 5 pH til 6,8 med puffer, påføring af opløsningen til en søjle af aminohexylagarose og derpå eluering af faktor VIII:C fra søjlen. Dette koncentreringstrin starter ud fra materiale, som er ca. 1000 gange så rent som udgangsmaterialet, og foreslår således ikke, hvilke resultater, 10 der kunne opnås, hvis væsentlige mængder VIII:R var til stede; det er faktisk således, at hvis man har læst dette patentskrift og blev præsenteret for råmateriale indeholdende både faktor VIII:C og faktor VIII:R ville man anvende den yderst effektive monoklonale antistof-søjlese-15 parationsteknik til fjernelse af faktor VIII:R. Læren fra det nævnte patentskrift i henseende til betingelserne for anvendelse aminohexylagarosesøjlen kontraindikerer eller modificerer således ikke læren af de i det følgende nævnte artikler.
20
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen giver den fordelagtige kombination af udbytte og rensning under betingelser, der ifølge den hidtil kendte teknik er fuldstændigt uventede og faktisk angivet som ufavorable.
25
Opfindelsen angår specielt en fremgangsmåde til oprensning af faktor VIII:C i højt udbytte fra råmateriale indeholdende faktor VIII:C og faktor VIII;R, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig, ved at man 30 (a) tilvejebringer en vandig opløsning af råmaterialet, som har en pH-værdi på 5,5-8,0 og en ledningsevne på 25-35 mS/cm, 35 (b) adsorberer faktor VIII:C og faktor VIII:R fra opløs ningen over på aminohexylagarose,
DK 162896 B
4 (c) eluerer faktor VIII:R fra aminohexylagarosen og derpå (d) eluerer faktor VIII:C fra aminohexylagarosen, hvorved man opnår en opløsning af faktor VIII: C, som er op- 5 renset med hensyn til råmaterialet.
Råmaterialet egnet til anvendelse i den foreliggende opfindelse omfatter et vilkårligt materiale indeholdende faktor VIII:C med et eller flere plasmaproteiner. Særlige 10 eksempler er materialer, som indeholder faktor VIII, dvs. komplekset af faktor VIII:C og VIII:R, såsom plasma, i handelen tilgængelige faktor VIII koncentrater og cryo-precipitat opnået fra plasma såvel som produktfraktioner og på anden måde kasserede sidefraktioner fra den vel-15 kendte Cohn-fraktioneringsproces. Der kan behandles humant råmateriale såvel som materiale fra køer og svin. Proteiner ud over faktor VIII:R, der kan være til stede, omfatter fibrinogen, fibronectin og albumin.
20 Når cryoprecipitat er udgangsmaterialet, må det rekonstitueres i en vandig puffer på en måde, der er almindeligt kendt for fagmanden på området, idet man må iagttage det nye pH-område og den ionstyrke, der skal anvendes i forbindelse med den foreliggende opfindelse. Plasma og plas-25 makoncentrater er allerede på en hensigtsmæssig form til påføring på en søjle med undtagelse af de stoffer, hvis pH og ionstyrke må indstilles på passende måde ved hjælp af en vandig puffer.
30 pH kan indstilles ved tilsætning af en vandig opløsning af forbindelser, som puf rer pH for den resulterende opløsning til et sted i det ønskede område 6,5-7,2, og som ikke forstyrrer aktiviteten af faktor VIII:C. Mange sådanne opløsninger er kendte for fagmanden; et eksempel er 35 en pufferopløsning indeholdende 20 mM imidazol, 0,1 M ly-sin og 0,02% natriumazid (i det følgende kaldt "Buffer A"), som puf rer pH til ca. 6,8. Et andet eksempel er 10
DK 162896 B
5 mM histidin, 0,1 M lysin og 0,02 vægt-% natriumazid.
Ledningsevnen kan indstilles ved ganske enkelt at tilsætte natriumchlorid i en tilstrækkelig mængde, således at 5 den samlede ledningsevne sammen med ledningsevnen af de allerede tilstedeværende ioner kommer til at ligge mellem ca. 25 mS/cm og ca, 35 mS/cm (milli-Siemens pr. can, sva- «3 rende til 10 mhos/cm). Natriumchlorid kan tilsættes som et fast stof eller som en vandig opløsning til pufferop-10 løsning eller direkte til faktor VIII:C kildeopløsningen.
Hvis ledningsevnen er for høj eller for lav, mistes bindingskapacitet, og hvis den er for lav, nedsættes endvidere produktets renhed.
15 Det i søjlen anvendte adsorptionsmateriale er aminohexyl-agarose. Det er, som det er velkendt i teknikken, agarose med omega-aminosidekæder. Der må være tilstrækkeligt med sidekæder til at tillade den ønskede oprensning at finde sted. Fordelagtigt må der være mindst ca. 10 umol amino-20 hexylsidekæder pr. g agarose, og mere fordelagtigt mindst ca. 15 umol/g. Mængder af adsorptionsmiddel er angivet i den foreliggende beskrivelse og kravene som vådvægten, defineret som vægten af materiale, der er blevet filtreret under sugning til det punkt, hvor filterkagen knæk-25 ker. Tilfredsstillende aminohexylagarose er tilgængelig i handelen under handelsnavnet "Aminohexyl Sepharose", forhandlet af Pharmacia Fine Chemicals Company, og det har ca. 12 umol aminohexylkæder pr. g materiale.
30 Adsorptionsmidlet fremstilles ved ligevægtsindstilling deraf, dvs. vask deraf i en puffer til opnåelse af et pH derfor på over 5,5 op til ca. 8,0, foretrukkent 6,0 til 7,5, særligt foretrukkent 6,5 til 7,2. Forholdet mellem råmateriale og adsorptionsmiddel må helst ikke overskride 35 kapaciteten af adsorptionsharpiksen, som er en værdi, der let kan bestemmes af en fagmand, der er kendt med chroma-tografiske adskillelser. Almindeligvis er kapaciteten 5-
DK 162896 B
6 10 VIII;C enheder pr. g harpiks, når der anvendes cryo-precipitat, og adskillige gange højere, når der anvendes mere renset råmateriale. Adsorptionen kan udføres batch-vis eller på en søjle, idet man i hvert tilfælde anvender 5 teknik og udstyr, der er sædvanligt på dette område til chromatografiske adskillelser af denne type.
Råmaterialet, som allerede separat er blevet indstillet til samme pH som adsorptionsmidlet, bringes sammen med 10 adsorptionsmidlet, idet man giver tilstrækkelig kontakttid til, at de ønskede protein-adsorptionsmiddelinterak-tioner kan foregå. Ved udførelse på søjle er typiske tilfredsstillende strømningshastigheder ca. 5 søjlevolumener pr. time, men ikke så høj hastighed, at søjlen trykkes 15 sammen eller ødelægges. Det materiale, der passerer gennem søjlen først i dette trin, vil være blevet reduceret i indhold af faktor VIII:C samt indhold af faktor VIII:R, hvis faktor VIII:C i råmaterialet var til stede kompleksdannet med faktor VIII:R. Fjernelsen af ikke-adsorberet 20 materiale kan lettes ved vask af søjlen med pufferopløsning, såsom Buffer A indeholdende 0,3 M NaCl.
Efter vask af massen af ikke-adsorberet materiale fra søjlen (som indikeret ved en absorbans ved 280 nm af 25 eluatet på 1 eller mindre), fortsættes vask under anvendelse af Buffer A indeholdende 0,3 M NaCl og 10 mM CaC^·
CaCl2 er kendt i teknikken for at stabilisere faktor VIII:C, men kan ikke anvendes tidligere på grund af faren for at aktivere størkningsfaktorer, hvilket fører til fi-30 brinklumper på harpiksen og potentiel nedbrydning af faktor VIII:C. Vask af harpiksen er effektiv til fjernelse af fibronectin, fibrinogen og massen af forurenende protein.
35 Hvor faktor VIII:C er kompleksdannet med faktor VIII:R, er det fordelagtigt at eluere søjlen derefter med et elueringsmiddel, som er effektivt til at desorbere størs-
DK 162896 B
7 tedelen af faktor VIII:R, der bliver tilbage på søjlen, som ikke er elueret ved vasken. En del af faktor VIII:C kan også eluere i dette trin, men der kompenseres derfor af den kendsgerning, at faktor VIII:C, som ikke eluerer i 5 dette trin, vil blive udvundet på renere form og i et udbytte, som stadig overgår hidtil kendt teknik med en væsentlig faktor. Faktor VIII:R kan elueres med et elue-ringsmiddel omfattende førnævnte "Buffer A", hvori der er indeholdt 0,4 M NaCl og 10 mM CaC^- Den eluerede 10 fraktion samles og repræsenterer en beriget kilde for faktor VIII:R.
Den mængde faktor VIII:C, der bliver tilbage på adsorptionsmidlet, elueres derpå under betingelser, der er ef-15 fektive til desorbering af faktor VIII:C uden nedsættelse af dens biologiske aktivitet. Et tilfredsstillende elue-ringsmiddel omfatter førnævnte "Buffer A", indeholdende opløst deri 0,3 M til 0,5 M CaC^, foretrukkent 0,5 M CaC^· Den eluerede fraktion samles og kan behandles 20 yderligere eller anvendes som sådan som kilde for faktor VIII:C til terapeutiske formål.
Når råmaterialet er plasma, må fremgangsmåden udføres med tilsætning af små, men effektive mængder inhibitorer mod 25 proteolytisk nedbrydning, såsom benzamidin, pancreatisk trypsininhibitor eller hirudin. Ingen sådanne inhibitorer er nødvendige, når råmaterialet er cryoprecipitat eller materiale med højere faktor VIII:C renhed.
30 Opfindelsen forklares nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler.
EKSEMPEL 1 35 Dette eksempel sammenligner rensning af antihæmofil faktor fra humant cryoprecipitat ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen og ved dermed beslægtede offentliggjorte pro-
DK 162896 B
8 cedurer. Alle procedurer blev udført ved stuetemperatur, a. Rensning ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen 5 3 g humant cryoprecipitat blev gensuspenderet under an vendelse af en vibromixer i 10 ml "Buffer A" (20 mM imi-dazol, 0,1 M lysin, 0,02% azid, pH 6,8) indeholdende 0,3 M NaCl. Vitamin K afhængige proteaser blev fjernet ved behandling med aluminiumhydroxidgel ("Resorptar"®, Armour 10 Pharmaceutical Co.). Opløsningen blev omrørt med 1/30 volumen "Resorptar" i 10 minutter, der blev centrifugeret ved 10 000 x g i 5 minutter og readsorberet med samme mængde "Resorptar" i 10 minutter. Efter centrifugering (10 000 x g i 5 minutter) blev opløsningen passeret gen-15 nem 2 lag osteklæde. Den resulterende opløsning havde en ledningsevne på 32 mS/cm. 2,5 ml af denne opløsning blev påført en 10 ml søjle af "AH-Sepharose" (Pharmacia) (10 x 0,55 cm) bragt i ligevægt med "Buffer A" indeholdende 0,3 M NaCl ved en strømningshastighed på 12 ml/time. Søjlen 20 blev vasket med ligevægtsbevirkende puffer ("Buffer A" indeholdende 0,3 M NaCl), indtil absorbansen ved 280 nm for eluatet var mindre end 0,1. Søjlen blev yderligere vasket med "Buffer A" indeholdende 0,3 M NaCl og 10 mM CaCl2, hvorpå der blev elueret, først med "Buffer A" in-25 deholdende 0,2 M NaCl og 10 mM CaC^ og dernæst med "Buffer A" indeholdende 0,5 M CaC^· 30 35
DK 162896 B
9
Faktor Faktor VIII:C
VIII:C (enheder Udbytte x rensning Fraktion (E/mg) i alt) % 5 - - - - -
Cryoprecipitat- opløsning 0,245 24,2 100 1
Ubundet 00 0 - 10 "Buffer A" + 0,31 NaCl + 10 mM CaCl2 vask 00 0 - 15 "Buffer A" + 0,4 M NaCl2 + 10 mM CaCl2 vask 1,18 4,1 17 4,8 "Buffer A" 20 +0,5 CaCl2 vask 8,4 17,6 73 34,3
Samling af de 2 fraktioner indeholdende en tilstrækkelig faktor VIII:C aktivitet ville have 90% af den anvendte faktor VIII:C ved en specifik aktivitet på 3,9 E/mg for 25 en 16 ganges rensning.
b. Rensning ved metoden af Austen 2,5 g cryoprecipitat blev gensuspenderet under anvendelse 30 af en vibromixer i 715 ml "Buffer B" (0,1 M lysin, 0,1 M natriumacetat, pH 5,5) og adsorberet 2 gange med "Resorp-tar" som under (a). pH for opløsningen, der på dette tidspunkt fundet til 6,5, blev sænket til 5,5 ved langsom tilsætning af 10%'s eddikesyre under god omrøring. Et 35 tungt, gelatinøst bundfald blev fjernet ved centrifugering (10 000 x g i 20 minutter) og passage gennem 2 lag osteklæde. 3,5 ml klaret cryoprecipitatopløsning blev på-
DK 162896 B
10 ført en 10 ml søjle af "AH-Sepharose" (Pharmacia) (10 x 0,55 cm), bragt i ligevægt med "Buffer B" ved en strømningshastighed på 12 ml/time. Søjlen blev vasket med "Buffer B", indtil absorbansen ved 280 nm for eluatet var 5 mindre end 0,1, derpå elueret med "Buffer B" indeholdende 0,2 M NaCl og endelig med "Buffer B" indeholdende 1 M NaCl*
Faktor
10 Faktor VIII:C
VIII:C (enheder Udbytte x rensning Fraktion (E/mg) i alt) %
Cryoprecipitat- 15 opløsning 0,20 22,8 100 1
Ubundet 00 0 - "Buffer B" 20 +0,2 NaCl vask 0,16 3,1 14 0,8 "Buffer B" * + 1 M CaCl vask 00 0 - 25 * Denne spids indeholdt til at begynde med ca. 25% af faktor VIII "C" aktiviteten påført søjlen, men den var meget ustabil og tabte al aktivitet efter 2 timers forløb ved stuetemperatur.
30 c. Rensning ved metoden af Faure et al.
3,8 g cryoprecipitat blev opløst under anvendelse af en vibromixer i 11 ml "Buffer C" (1% saccharose, 1% humant serumalbumin, 0,1 M lysin, 0,1 M natriumacetat, pH 5,5) 35 og adsorberer 2 gange med "Resorptar" som under (a). pH for opløsningen, som på dette tidspunkt var 6,4, blev sænket til 5,5 ved langsom tilsætning af 10%'s eddikesyre
DK 162896 B
11 under omrøring, og det resulterende tunge bundfald blev fjernet som under (b). 3,5 ml klaret cryoprecipitatopløs-ning blev påført en 10 ml søjle af "AH-Sepharose" (Pharmacia) (10 x 0,55 cm), bragt i ligevægt med "Buffer C", 5 ved en strømningshastighed på 12 ml/time. Søjlen blev vasket med "Buffer C" indtil absorbansen af eluatet var mindre end 0,1, med "Buffer C" indeholdende 0,2 M NaCl og endelig med "Buffer C" indeholdende 1 M NaCl.
10 Faktor VIII:C Udbytte
Fraktion (enheder ialt) %
Cryoprecipitatopløsning 24,7 100 15 Ubundet 0 0 "Buffer C" + 0,31 M NaCl vask 0 0 20 "Buffer C" + 1 M NaCl vask 7,0 28
Hverken specifik aktivitet eller rensningsniveau er meningsfuldt i dette eksempel på grund af den høje koncen-25 tration (10 mg/ml) af albumin, der er til stede i alle fraktioner.
EKSEMPEL 2 30 Dette eksempel viser fordelingen af andre proteiner af interesse - fibronectin, von Willebrand's faktor (faktor VIII:R) og fibrinogen - efter rensning af faktor VIII:C fra humant cryoprecipitat ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Rensningsproceduren var som beskrevet i eksem-35 pel 1 (a). Det udvundne i hver fraktion, som vist i det følgende, er udtrykt som en procentdel af mængden af det protein, der blev påført harpiksen.
DK 162896 B
12 Søjlehulrum
Cryo- + "Buffer A" "Buffer A" preci- + 0,3 H NaCl + 0,4 M NaCl "Buffer A" pitat + 10 mM CaC12 + 10 mM CaCl2 + 0,5 M CaCl2 5
Totalprotein 100 95 2 1
Fibronectin 100 +3 1 10 Fibrinogen 100 + 0,5 0,5
Faktor VIII: C 100 3 24 57
Von Willebrands- 15 faktor (VIII:R) 100 + 23 3
Faktor VIII:C
(enheder/mg) 0,18 0,007 2,0 9,1 20 + ikke bestemt. Da imidlertid 96% af det påførte protein blev elueret fra søjlen, og fibronectin og fibrinogen er til stede i høje koncentrationer i cryoprecipitatet, må disse proteiner eluere i høj grad i denne fraktion.
25 EKSEMPEL 3
Dette eksempel sammenligner fibronectin- og fibrinogen-indholdet af faktor VIII:C oprenset fra humant cryopreci-pitat ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen med et i han-30 delen tilgængeligt præparat med høj renhed af faktor VIII:C ("Factorate"®, Generation IIB, Armour Pharmaceutical) .
35
DK 162896 B
13
Fibro- Fibri-
Faktor nectin nogen
VIII:C ug/E ug/E
Fraktion (E/mg) FVIIIrC FVIII:C
5 - - - - "Factorate" Gen 11B 4,2 4 146 "Buffer A" + 0,4 M NaCl 10 + 10 mM CaCl2 2,0 75 143 "Buffer A" + 0,5 M CaCl2 9,1 11 36
Begge portioner 15 "AH-sepharose"-vaske- 4,4 30 68 væsken samlet EKSEMPEL 4 20 Dette eksempel viser anvendelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen til oprensning af faktor VIII:C fra humant plasma. Det viser også effektiviteten af proteolytiske inhibitorer, specielt thrombininhibitorer, såsom hirudin, ved forbedring af udbyttet af faktor VIII:C ved denne op-25 rensning.
Fast NaCl blev sat til humant plasma for at forøge dets ledningsevne til 30-35 mS/cm. I et gennemløb blev søjlen drevet uden brug af inhibitorer. I et andet gennemløb 30 blev benzamidin (0,5 M) og pancreatisk trypsininhibitor ("Trasylol"®, 1 mg/ml) tilsat til endelige koncentrationer på 1 mM og henholdsvis 0,01 mg/ml. I et tredje gennemløb blev hirudin (Calbiochem Col., 25 E/ml) tilsat i stedet til en endelig koncentration på 1 enhed/ml. 5 ml 35 plasma blev ført til en 4 ml (4 x 0,55 cm) søjle af "AH-Sepharose" (Pharmacia) bragt i ligevægt i "Buffer A" (20 mM imidazol, 0,1 M lysin, 0,02% azid, pH 6,8) indeholden-
DK 162896 B
14 de 0,3 M NaCl ved en strømningshastighed på 12 ml/time.
Hvis proteolytiske inhibitorer var blevet sat til plasmaet, blev de også sat til søjleelueringspufferne. Søjlen blev vasket med ligevægtspuffer (se eksempel 1), indtil 5 absorbansen ved 280 nm for eluatet var mindre end 0,02, og der blev derpå elueret med 0,5 M CaCl2 i "Buffer A”.
Faktor Faktor Faktor VIII:C VIII:C
X0 VIII:C (enheder Udbytte x rensning
Inhibitorer Fraktion_(E/mg) i alt)_%_
Plasma 0,014 2,8 100 1 15 Ingen J Ubunden "Buffer A" 0,001 0,2 9 i + 0,5 CaCl2 vask 0,44 1,1 39 32 s
Benzamid Ubunden "Buffer A" 0,001 0,1 4 + Trasylol \jr 0,5 CaCl2 vask 0,67 2,5 90 48 20 .
Hirudin I Ubunden "Buffer A" 0,001 0,21 8 ]+ 0,5 CaCl2 vask 0,60 2,0 72 43
Det ses, at selv uden inhibitorer oprenser fremgangsmåden 25 ifølge opfindelsen effektivt faktor VIII:C med en faktor på godt over 10:1, nemlig 20:1, 25:1, 30:1 eller bedre, afhængigt af den særlige fraktion, der samles. Med inhibitorer er rensningsfaktoren endnu højere og kan overskride 40:1. Ved en vilkårlig given oprensningsgrad er 30 udbyttet, dvs. mængde faktor VIII:C, der - føres til processen, som udvindes som oprenset produkt, højere end opnåeligt under anvendelse af til teknikkens stade hørende processer til oprensning til samme renhedsgrad. Udbytter på over 30% kan opnås selv uden inhibitorer, og 35 udbytter over 50% og så høje som 70-90% kan opnås med inhibitorer. Denne kombination af oprensning og udbytte er yderst fordelagtig og overraskende.
Claims (9)
1. Fremgangsmåde til oprensning af faktor VIII:C fra rå-5 materiale indeholdende faktor VIII:C og faktor VIII:R, kendetegnet ved, at man (a) tilvejebringer en vandig opløsning af råmaterialet, som har en pH-værdi på 5,5-8,0 og en ledningsevne på 10 25-35 mS/cm, (b) adsorberer faktor VIII:C og faktor VIII:R fra opløsningen over på aminohexylagarose, som er bragt i ligevægt ved den vandige opløsnings pH, (c) eluerer faktor VIII:R fra aminohexylagarosen og derpå (d) eluerer faktor VIII:C fra aminohexylagarosen.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at pH for råmaterialet er 6,0-7,5.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at pH for råmaterialet er 6,5-7,2. 25
4. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 1-3, kendetegnet ved, at aminohexylagarosen indeholder mindst ca. 10 umol aminohexylkæder pr. g.
5. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 1-4, kendetegnet ved, at råmaterialet er plasma, et plasmakoncentrat eller et cryoprecipitat, som indeholder AHF.
6. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 1-5, kendetegnet ved, at råmaterialet også indeholder fibronectin og/eller fibrinogen, og at fibronectinet DK 162896B og/eller fibrinogenet coelueres med faktor VIII:R.
7. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 1-6, kendetegnet ved, at en proteolytisk inhibitor 5 er til stede i trin (a), (b), (c) og (d) i en lille, men effektiv mængde, til at inhibere proteolyse af faktor VIII:C.
8. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 1-7, 10 kendetegnet ved, at faktor VIII: C elueres med en vandig puf ret opløsning indeholdende 0,3-0,5 M CaC^.
9. Farmaceutisk præparat til administrering for at afbøde symptomerne på hæmofili, kendetegnet ved, at 15 det indeholder en terapeutisk effektiv mængde af faktor VIII:C, der er blevet oprenset ved fremgangsmåden ifølge et vilkårligt af kravene 1-8. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/557,805 US4508709A (en) | 1983-12-05 | 1983-12-05 | Process for purifying factor VIII:C |
| US55780583 | 1983-12-05 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK575184D0 DK575184D0 (da) | 1984-12-04 |
| DK575184A DK575184A (da) | 1985-06-06 |
| DK162896B true DK162896B (da) | 1991-12-23 |
| DK162896C DK162896C (da) | 1992-05-11 |
Family
ID=24226953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK575184A DK162896C (da) | 1983-12-05 | 1984-12-04 | Fremgangsmaade til oprensning af factor viii:c samt farmaceutisk praeparat indeholdende denne |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4508709A (da) |
| EP (1) | EP0144957B1 (da) |
| JP (1) | JPS60136518A (da) |
| KR (1) | KR850004593A (da) |
| AT (1) | ATE60996T1 (da) |
| AU (1) | AU569129B2 (da) |
| CA (1) | CA1248449A (da) |
| DE (1) | DE3484179D1 (da) |
| DK (1) | DK162896C (da) |
| ES (1) | ES538912A0 (da) |
| FI (1) | FI844804A7 (da) |
| IE (1) | IE57644B1 (da) |
| IL (1) | IL73734A (da) |
| IN (1) | IN162586B (da) |
| MX (1) | MX7552E (da) |
| NO (1) | NO167627C (da) |
| NZ (1) | NZ210427A (da) |
| SG (1) | SG14992G (da) |
| ZA (1) | ZA849434B (da) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4614795A (en) * | 1982-08-05 | 1986-09-30 | University Of Rochester | Deglycosylated Human Factor VIII:C |
| DE3481109D1 (de) * | 1983-05-09 | 1990-03-01 | Novo Nordisk As | Antihaemophilie-faktor-viii-konzentrat und dessen herstellungsverfahren. |
| ZA852099B (en) * | 1984-03-26 | 1985-12-24 | Meloy Lab | Recombinant factor viii-c. |
| US4965199A (en) * | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
| DE3432083A1 (de) * | 1984-08-31 | 1986-03-06 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Pasteurisierte, isoagglutininfreie faktor viii-praeparation und verfahren zu ihrer herstellung |
| US5043428A (en) * | 1984-08-31 | 1991-08-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production |
| US4847362A (en) * | 1985-02-01 | 1989-07-11 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| US4952675A (en) * | 1985-02-01 | 1990-08-28 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| GB2178533B (en) * | 1985-07-22 | 1989-07-19 | Asahi Chemical Ind | Analytical method of enzyme precursors and device therefor |
| JPS63108000A (ja) * | 1986-05-15 | 1988-05-12 | Green Cross Corp:The | 第８因子の精製方法 |
| JPH0789951B2 (ja) * | 1986-06-18 | 1995-10-04 | 財団法人阪大微生物病研究会 | 遺伝子発現産物の精製法 |
| US4795806A (en) * | 1987-07-16 | 1989-01-03 | Miles Laboratories, Inc. | Phospholipid affinity purification of Factor VIII:C |
| NL8701915A (nl) * | 1987-08-14 | 1989-03-01 | Waander Riethorst | Adsorbensmateriaal en toepassing daarvan voor het isoleren van stollingsfaktoren. |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| DE3826792C1 (da) * | 1988-08-06 | 1989-07-06 | Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De | |
| ATE85221T1 (de) * | 1988-11-05 | 1993-02-15 | Octapharma Ag | Verfahren zur herstellung eines hochreinen, nicht infektioesen antihaemophiliefaktors mittels chromatographie. |
| FR2644064B1 (fr) * | 1989-02-17 | 1994-05-27 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication du facteur antihemophilique fviiic ayant une tres haute purete et facteur antihemophilique fviiic ainsi obtenu, ainsi que composition pharmaceutique le contenant |
| FR2665449B1 (fr) * | 1990-08-02 | 1995-04-14 | Aquitaine Developp Transf Sang | Procede de fabrication de facteur von willebrand ayant une tres haute purete, depourvu en majeure partie de facteur antihemophilique (fviiic), et facteur von willebrand ainsi obtenu, ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. |
| GB8913183D0 (en) * | 1989-06-08 | 1989-07-26 | Central Blood Lab Authority | Chemical products |
| DE3939346A1 (de) * | 1989-11-29 | 1991-06-06 | Behringwerke Ag | Arzneimitel zur subkutanen oder intramuskulaeren applikation enthaltend polypeptide |
| JPH0427865A (ja) * | 1989-12-21 | 1992-01-30 | Kurita Water Ind Ltd | 血液凝固因子用分離剤およびその製造方法 |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| US5278289A (en) * | 1991-11-12 | 1994-01-11 | Johnson Alan J | Antihemophilic factor stabilization |
| WO1995003332A1 (en) * | 1993-07-23 | 1995-02-02 | Baxter International Inc. | Activated human factor viii and method of preparation |
| US5576291A (en) * | 1993-09-13 | 1996-11-19 | Baxter International Inc. | Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4397841A (en) * | 1982-06-28 | 1983-08-09 | Monsanto Company | Production of blood coagulation factor VIII:C |
| DK525384D0 (da) * | 1984-11-05 | 1984-11-05 | Nordisk Insulinlab | Praeparat paa basis af faktor viii til behandling af haemofili a inhibitorpatienter samt fremgangsmaade til fremstilling af et saadan praeparat |
-
1983
- 1983-12-05 US US06/557,805 patent/US4508709A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-11-28 AU AU35982/84A patent/AU569129B2/en not_active Ceased
- 1984-11-29 CA CA000468986A patent/CA1248449A/en not_active Expired
- 1984-11-30 IN IN827/CAL/84A patent/IN162586B/en unknown
- 1984-12-03 EP EP84114693A patent/EP0144957B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-12-03 DE DE8484114693T patent/DE3484179D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-12-03 AT AT84114693T patent/ATE60996T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-12-04 ZA ZA849434A patent/ZA849434B/xx unknown
- 1984-12-04 NZ NZ210427A patent/NZ210427A/xx unknown
- 1984-12-04 DK DK575184A patent/DK162896C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-12-04 NO NO844837A patent/NO167627C/no not_active IP Right Cessation
- 1984-12-05 KR KR1019840007676A patent/KR850004593A/ko not_active Withdrawn
- 1984-12-05 FI FI844804A patent/FI844804A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1984-12-05 JP JP59255863A patent/JPS60136518A/ja active Granted
- 1984-12-05 IE IE3105/84A patent/IE57644B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-12-05 ES ES538912A patent/ES538912A0/es active Granted
- 1984-12-05 MX MX84101943U patent/MX7552E/es unknown
- 1984-12-05 IL IL73734A patent/IL73734A/xx not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-02-18 SG SG149/92A patent/SG14992G/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI844804A0 (fi) | 1984-12-05 |
| EP0144957A2 (en) | 1985-06-19 |
| EP0144957A3 (en) | 1987-09-30 |
| CA1248449A (en) | 1989-01-10 |
| DE3484179D1 (de) | 1991-04-04 |
| EP0144957B1 (en) | 1991-02-27 |
| NZ210427A (en) | 1988-09-29 |
| IE843105L (en) | 1985-06-05 |
| FI844804L (fi) | 1985-06-06 |
| DK575184A (da) | 1985-06-06 |
| DK575184D0 (da) | 1984-12-04 |
| NO167627B (no) | 1991-08-19 |
| AU3598284A (en) | 1985-06-13 |
| IN162586B (da) | 1988-06-11 |
| NO844837L (no) | 1985-06-06 |
| DK162896C (da) | 1992-05-11 |
| IL73734A0 (en) | 1985-03-31 |
| SG14992G (en) | 1992-04-16 |
| ES8600690A1 (es) | 1985-11-01 |
| AU569129B2 (en) | 1988-01-21 |
| JPH0535159B2 (da) | 1993-05-25 |
| NO167627C (no) | 1991-11-27 |
| IL73734A (en) | 1989-09-28 |
| US4508709A (en) | 1985-04-02 |
| ATE60996T1 (de) | 1991-03-15 |
| KR850004593A (ko) | 1985-07-25 |
| ES538912A0 (es) | 1985-11-01 |
| JPS60136518A (ja) | 1985-07-20 |
| IE57644B1 (en) | 1993-02-10 |
| FI844804A7 (fi) | 1985-06-06 |
| MX7552E (es) | 1989-09-25 |
| ZA849434B (en) | 1985-07-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK162896B (da) | Fremgangsmaade til oprensning af factor viii:c samt farmaceutisk praeparat indeholdende denne | |
| AU691993B2 (en) | Process for purification of factor VIII | |
| PL168353B1 (pl) | Sposób wytwarzania zatezonego, standaryzowanego ludzkiego c z y n n i k a von Willebranda o wysokiej czystosci PL PL PL PL PL PL PL | |
| CA2159702C (en) | High molecular and low molecular fractions of von willebrand factor | |
| LT3333B (en) | Chromatographic separation of plasma protein and concentrates obtained by this method | |
| US6005077A (en) | Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation | |
| SI9012034A (en) | Process for preparing a concentrate of blood coagulation factor viii - von willebrand factor complex from total plasma | |
| US5278289A (en) | Antihemophilic factor stabilization | |
| NO324659B1 (no) | Utvinning av von Willebrand-faktor ved kationebytterkromatografi samt preparat inneholdende slik faktor og anvendelse derav. | |
| JP2009161547A (ja) | 高度に精製された第ｖｉｉｉ因子コンプレックス | |
| US6579723B1 (en) | Method of recovering highly purified vWF or factor VIII/vWF-complex | |
| US4774323A (en) | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography | |
| JPH0580455B2 (da) | ||
| AU2011331208B2 (en) | A process for reduction and/or removal of FXI and FXIa from solutions containing said coagulation factors | |
| EP1062244B1 (en) | Improved methods for producing factor viii proteins | |
| US5006642A (en) | Purification of von Willebrand Factor by affinity chromatography | |
| CN111491949B (zh) | 用于制备具有血管性血友病因子(vwf)受控含量的含有因子viii(fviii)和血管性血友病因子的组合物的方法 | |
| JP3180957B2 (ja) | 安定な血液凝固ｖｉｉｉ因子の製造方法 | |
| EP2155784A1 (en) | Chromatography process for obtaining a fviii/vwf complex with different ratios between the two proteins, for use in haemophilia a treatment and in von willebrand disease | |
| HUE025551T2 (en) | A method of producing virus-inactivated FV concentrate starting from human plasma, which can be increased to industrial sizes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |