DK164202B

DK164202B - Farmaceutiske praeparatformer til topisk anvendelse indeholdende interferon-alfa og fremgangsmaade til deres fremstilling

Info

Publication number: DK164202B
Application number: DK058387A
Authority: DK
Inventors: Helmut Franz
Original assignee: Thomae Gmbh Dr K
Priority date: 1986-02-05
Filing date: 1987-02-04
Publication date: 1992-05-25
Also published as: CA1295242C; FI86144C; HUT43494A; GR3002270T3; NO870441D0; FI86144B; AU601712B2; FI870457A0; DE3603444A1; ZA87793B; DK58387A; DK164202C; HU196560B; NO169638C; NO169638B; AU6829287A; NZ219169A; EP0231816A2; ES2028796T3; DE3770280D1

Description

DK 164202 B

Opfindelsen angår farmaceutiske præparatformer til topisk anvendelse indeholdende interferon-α samt fremgangsmåde til fremstilling af sådanne præparatformer, med stabilisering af det deri indeholdte interferon-a.

5 Human-interferoner og interferoner bliver alt efter deres biologiske og kemiske egenskaber og deres syntesested i almindelighed opdelt i tre grupper, der betegnes med interferon-a, interferon-β og inter-feron-γ, forkortet til IFN-a, IFN-'f3 og IFN-γ. Syn-10 tesestedet for INF-a, som den foreliggende opfindelse angår, er leucocytterne, der efter stimulation eller induktion med tilsvarende induktorer (f.eks. vira eller poly I* poly C)) syntetiserer og frigør IFN-a. Bakterier transformeret med egnede DNA-sekvenser kan 15 syntetisere IFN-a, der har en biologisk aktivitet analog med det genuine humane IFN-a, hvilket har den fordel, at der kan vindes højrenset og i det væsentlige for forureninger frie proteiner i forholdsvis store mængder, hvilke proteiner kan benyttes til 20 klinisk anvendelse, f.eks. over for forskellige virusinfektioner og malignomer.

Alle kendte interferoner virker antiviralt, antiproliferativt og - omend i forskellig grad -immunmodulerende. Mens de til at begynde med blev er-25 kendt som antivirale midler, er man i dag opmærksom på deres terapeutiske nytte også som antineoplastiske mid ler.

Hvad angår virkningskvalitet og bivirkningsgrad er anvendelsesvejen af særlig betydning. Netop 30 ved den systemiske anvendelse af interferoner imponerer ulemperne, idet de ikke blot når og påvirker det tilsigtede væv, men også sunde, ikke-inficerede eller ikke-transformerede celler eller organer, og derfor frembringer bivirkninger, der kan stå i ve-35 jen for en intravenøs eller intramuskulær anvendelse. Endvidere har den systemiske anvendelse ikke altid vist den ønskede effektivitet. I enkelte tilfælde kan en direkte injektion ganske vist være mu-

DK 164202 B

2 lig, men f.eks. ved virus- eller tumor-betingede maligne sygdomme eller andre med interferon behandlelige sygdomme, der er tilgængelige for en udvendig eller lokal behandling (f.eks. hud, øjne, næse), 5 foretrækkes sædvanligvis topisk anvendelse af interferon eller af IFN-α, som opfindelsen angår. I nyeste tid er fra forskellig side rapporteret om topisk anvendelse af human-leukocyt-interferon, synonymt med IFN-α, og der er overraskende påvist en høj succes-10 kvote ved forskellige maligne sygdomme (f.eks. Ikic et al., Lancet, p. 1022-1024, 1981, bind I; Ikic et at., Lancet p. 1025-1027, 1981, bind I). Det kan forventes, at den topiske anvendelse af interferon-a til behandling af forskellige virale eller tumor-be-15 tingede sygdomme i fremtiden vil få stigende medicinsk betydning.

Ud fra forskellige synspunkter er den topiske anvendelse af IFN-α såvel som alment af interferoner forbundet med betydelige vanskeligheder. I for-20 oindelse med formulering af farmaceutiske præparater må det kræves, at det biologisk . aktive IFN-α får en tilstrækkelig høj stabilitet til, at det kan virke over et tilstrækkeligt langt tidsrum både ved stuetemperatur og ved legemstemperatur, henholdsvis at 25 det forbliver virksomt "in situ" over et passende tidsrum på flere timer. Det er kendt, at IFN-α er et meget temperatur-instabilt protein. Betydelige aktivitetstab på op til 80% er observeret inden for få uger ved 4°C for en human-leukocyt-interfe-30 ron-holdig gel, der som gelkomponent indeholdt car-boxymethylcellulose (Moller B.R. et al., Obstetrics & Gynecology 6_2, 625-629, 1983), og som blev anvendt til topisk behandling af carcinoma in situ i cervix.

3

DK 164202 B

De således nødvendige stabilitetsgivende komponenter skal være således beskafne, at de hverken medfører intolerancereaktioner på anvendelsesstedet, tænkelige som følge af virkning af biologisk aktive 5 fremmedstoffer, eller generer penetrationen af IFN-a eller hindrer diffusionen.

I den senere tid er der benyttet forskellige komponenter til stabilisering af interferon, idet Estis, Evans og Testa har benyttet hydroxyethylcel-10 lulose som bæremateriale til fremstilling af inter-feronholdige geler eller salver, men kun kunne hindre betydelige aktivitetstab af IFN-a, IFN-B eller IFN-γ under anvendelsesrealistiske betingelser ved tilsætning af en proteaseinhibitor (EP-A-0 152 345).

15 Det er velkendt, at det til fremstilling af geler af denne eller anden art bedst egnede middel er hydroxyethylcellulose, bl.a. på grund af dets varmestabilitet, og dette middel er også kommercielt tilgængeligt.

20 Den særlige fordel ved hydroxyethylcellulose til fremstilling af en IFN-a-holdig matrix sammenlignet med andre bærere ligger i, at det ikke koagulerer eller gelerer ved vands kogepunkt, er godt vandopløseligt, og at viskositeten af en så-25 dan opløsning stiger med aftagende temperatur.

En stabilisering af interferon eller af IFN-a med alene hydroxyethylcellulose og ved fysiologiske temperaturer kan ikke opnås. Det er også velkendt, at ikke-højrensede og således forurenede protein-30 præparater - såsom interferon - under egnede hydrolysebetingelser udsættes for proteaser. Andre forsøg på at bibringe interferoner, der er indeholdt i farmaceutiske præparater, en passende stabilitet er gennemført af Akagi, Miura og Hoshino (EP-A-0 150 35 067) med polysaccharider, der er kemisk forskellige fra hydroxyethylcellulose, såsom dextran og hydroxy- 4

DK 164202 B

ethylstivelse under tilsætning af humant serumalbumin, af mono- eller disaccharider eller af aminosyrer, idet der er beskrevet præparater fortrinsvis til den parenterale, systemiske anvendelsesvej 5 via intravenøs eller intramuskulær injektion. Endvidere har Terano, ligeledes for et injicerbart farmaceutisk interferon-præparat, beskrevet en stabilisering af interferon i vandig opløsning alene på basis af en kemisk modificeret gelatine, med 10 henblik på at erstatte humant serumalbumin som kendt interferon-stabiliserende middel til injektion (EP-A-0 162 332). Det har længe været kendt, at gelatine per se har en på interferon stabiliserende effekt (Sedmak, J.J. og Grossberg, S.E., Tex. Rep.

15 Biol. Med. 4J_, 274-279, 1982), og at gelatine og kemisk modificerede derivater deraf på nogle andre biologiske proteiner har en vis stabiliserende effekt (f.eks. DE-A- 1 118 732, EP-A-0 156 242).

Til stabilisering af interferon i geler, sal-20 ver, suppositorier, sprayprodukter osv. til topisk anvendelse er også omtalt forskellige sukkeralkoholer, såsom glycerol, erythritol, arabitol, xylitol, sorbitol og mannitol, samt forskellige sukkersyrer, såsom iduronsyre, galacturonsyre og andre uronsyrer, 25 ascorbinsyre og salte deraf samt forskellige organiske puffersystemer, såsom citratpuffer, succinat-puffer, tartratpuffer, fumaratpuffer, glyconatpuf-fer, oxalatpuffer, lactatpuffer og acetatpuffer, i forbindelse med forskellige farmaceutiske bærestof-30 fer, såsom voksarter, natriumcarboxymethylcellulose, carboxyvinylderivater og vand (EP-A-0 080 879).

Disse sidstnævnte såvel som de foran omtalte interferon-stabiliserende komponenter samt navnlig sammensætningerne af de farmaceutiske præparater 5

DK 164202 B

og deres anvendelsesmåde (f.eks. EP-A-0 162 332) er fundamentalt forskellige fra den foreliggende opfindelse og kan ikke sammenlignes med denne.

Den foreliggende opfindelse har haft til op-5 gave at tilvejebringe en bærermatrix for højrenset interferon-α, specielt for rekombinant fremstillet IFN-α, hvilken matrix i det mindste skal opfylde de ovenfor omtalte krav, og som endvidere skal udvise en såvel i fremstillingsteknisk som i økonomisk hen-1q seende så gunstig, dvs. så simpel sammensætning som mulig, uden at have skadelig indvirkning på en krævet optimal aktivitet af det i bærermatricen indeholdte biologisk aktive IFN-α til topisk anvendelse, idet man her må erindre , at IFN-α og interferoner 15 alment er kendt for at være instabile proteiner, f.eks. over for fysiske påvirkninger, både på "nøgen" form og inkorporeret i andre gelmatricer (se f.eks. Moller et al., ovenfor).

Det har nu overraskende vist sig, at man ved at 2Q forene hydroxyethylcellulose, hydroxypropylmethylcellu-lose eller blandinger deraf, med gelatine i bestemte blandingsforhold, kan tilvejebringe en bærer og stabilisator for IFN-α, der ikke blot opfylder de ovenfor beskrevne fordringer, men yderligere bibringer IFN-α en 25 særlig stabil biologisk aktivitet og således på bedste måde er egnet til topisk anvendelse af højrenset, navnlig ved rekombinant DNA-teknologi fremstillet IFN-α. Et sådant bærer/stabilisatorkompleks er ydermere fordelagtigt frit for humant serumalbumin, der som bekendt navnlig 2o ve^ topisk anvendelse over længere tidsperioder kan medføre fra lokale immunreaktioner og op til allergisk betingede skavanker.

Som nedenfor illustreret (Eksempel 6) opnår man kun ved den samtidige anvendelse af de nævnte cellulose-2,- derivater og gelatine den overraskende høje lagerstabilitet for de IFN-a-holdige præparater, idet stabiliteten kraftigt aftager, når en af disse komponenter mangler.

DK 164202 B

e

Anderledes udtrykt udøver cellulosekomponenten i det dannede kompleks med gelatine en overraskende synergis-tisk stabiliserende effekt på det i præparatet ifølge opfindelsen indeholdte IFN-a.

5 I overensstemmelse hermed er præparatformerne ifølge opfindelsen ejendommelige ved, at de som bærer og stabilisator for interferon-α indeholder 1. Hydroxyethylcellulose, hydroxypropylmethylcel-lulose, eller blandinger deraf, og 10 2, gelatine, surt eller alkalisk oplukket, samt yderligere som antiadhæsionsmiddel anionaktive, kationaktive eller neutrale overfladeaktive stoffer, og eventuelt yderligere sædvanlige hjælpestoffer ; 15 og fremgangsmåden til fremstilling af de omhandlede præparatformer er ejendommelig ved, at man til fremstilling af en hydrogel opløser gelatine, i en mængde svarende til en andel på 0,1 til 2,0 vægt% af det færdige produkt, i vand ved temperaturer op til 80°C, til denne opløs-20 ning sætter antiadhæsionsmiddel og de ønskede øvrige., hjælpestoffer, derefter til opløsningen sætter hydroxyethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose eller en blanding deraf, og at man efter afkøling af opløsningen til stuetemperatur heri homogent fordeler interferon-α i 25 en mængde svarende til en andel på 1:10^ til 1*10 IE/100 g færdigt produkt og aftapper denne blanding sterilt.

Foretrukne udførelsesformer for præparaterne ifølge opfindelsen ses i underkravene 2-10, og en foretrukket 30 udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er, til fremstilling af omhandlede præparatformer til intra-vaginal anvendelse, ejendommelig ved det i krav 12's kendetegnende del angivne.

35 7

DK 164202 B

De omhandlede, topisk anvendelige farmaceutiske præparatformer for IFN-α anvendes fortrinsvis som virusstatika, hvorhos den terapeutiske anvendelse foregår i det dermale, nasale, ophthalmiske 5 og intravaginale område, f.eks. ved Herpes labialis,

Herpes genitalis inklusive Papilloma-infektioner, vorter og ved Herpes Zoster-infektioner. Anvendelsesomfanget omfatter også den topiske behandling af pa-racanceroser og canceroser (cancerbetingede tilstande), jø Eksempler på de i præparatformerne ifølge opfin delsen anvendte andre sædvanlige aktive stoffer er puffere og salte, fugtighedsbevarende stoffer, konserve-• ringsmidler, penetrationsfremmende stoffer og bærere.

Som bærer og stabilisator for IFN-α benyttes som nævnt hydroxyethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose eller blandinger deraf sammen med gelatine, surt eller alkalisk oplukket. Som foretrukket bærer og stabilisator for IFN-α anvendes hydroxyethylcellulose med en substitutionsgrad på 2,5 i bestemte blandingsforhold på 2ø altid 0,1 til 2 vægt% og gelatine i en mængde på 0,1-10 vægt%, baseret på det færdige produkt. Herved opnås en særlig stabilisering specielt af IFN-α, som eksempelvis demonstreret ved de gennemførte forsøg vedrørende stabiliseringsforhold og ved de i fig. 1 til 3 viste kurve-25 forløb, der omfatter et forsøgstidsrum på 14 uger ved lagertemperatur på -10, +4 og +21°C.

Som antiadhæsionsmiddel til bedre spredning af gelerne og som antiadhæsivt filtreringshjælpestof kan der benyttes anionaktive, kationaktive samt 3ø neutrale overfladeaktive stoffer, fortrinsvis poly-ethoxylerede sorbitanestre, såsom polysorbat 20, 60, 80. Som uorganiske og organiske pufferopløsninger har det vist sig velegnet at anvende en af følgende puffere, udvisende en for IFN-a-præparater optimal 35 pH-værdi i området fra 6,0 til 7,4: Natriumphos-phat-puffer, kaliurohydrophosphat-natriumdihydro-phosphat-puffer samt citronsyrephosphat-puffer, ka- 8

DK 164202 B

lium-natrium-glutamat-phosphat-puffer og succinat-puffer.

Til de omhandlede IFN-a-holdige præparatformer egner sig fugtighedsbevarende stoffer, såsom 5 glycerol, 1,2-propylenglycol, sorbit, butylenglycol samt polyoler (f.eks. polyethylenglycol 400).

Egnede hudvenlige konserveringsstoffer er f.eks. p-hydroxybenzoesyrestre (Nipa®-estre), fortrinsvis p-hydroxybenzoesyremethylester, endvidere 1Q benzoesyre, sorbinsyre, chlorhexidindigluconat, ben-zalkoniumchlorid og hexadecyltrimethylammoniura-bromid (cetrimoniumbromid).

Et egnet, med IFN-a-2 kompatibelt penetrationsfremmende middel er op til 50 vægt% dimethylsulfo-15 xid (DMSO).

Som bærer er til ikke-alkoholiske hydroge-ler vand bedst egnet.

Egnede farmaceutiske former til topisk anvendelse på hud, i øjet eller i næsen eller andre 2o legemshulheder er f.eks. hydrogeler. Disse indeholder i almindelighed 0,1 til 2,0 vægt% af såvel gelatine som af cellulosederivater, idet forholdene må være afstemt efter hinanden alt efter ønsket viskositet.

Ved fremstilling af vaginalkugler må andelen af ge-25 latine forøges op til 10 vægt%, ligeledes i afhængighed af den ønskede viskositet.

I de følgende eksempler er detaljeret beskrevet fremstillingen af topisk anvendelige farmaceutiske prsparatformer til stabilisering af det 20 deri indeholdte IFN-α, hvilke præparater ifølge opfindelsen hovedsageligt er sammensat af cellulosederivater og gelatine, antiadhæsionsmidler samt af det deri indeholdte aktive stof IFN-α og forskellige tilsætningsstoffer.

35 9

DK 164202 B

I eksemplerne betyder:

Nipagin® M = p-Hydroxybenzoesyremethylester,

Polysorbat 20 = Polyoxyethylen(20)sorbitanmono- _ laurat (Tween 20), 5

Polysorbat 60 = Polyoxyethylen(20)sorbitanmono- ® stearat (Tween 60),

Polysorbat 80 = Polyoxyethylen(20)sorbitanmono- oleat (Tween^eO), ^ Benzalkonium- = Blanding af alkyldimethylbenzyl- chlorid ammoniumchlorider med alkylgrup- per med 8 til 18 C-atomer,

Centrimonium- = Hexadecyltrimethylammoniumbromid, bromid 8 15 3,2 x 10 I.E. Interferon-a-2 svarer til 1 mg af dette stof.

Eksempel 1 (Hydrogel) I 100 g gelstof var indeholdt:

20 IFN-a-2 1 x 108 IE

Nipagin® M 0,20 g •k

Gelatine, Bloom 160-200 0,50 g

NaCl 0,48 g KC1 0,012 g 25 NaH2P04 x 2 1i o 0,0593 g K2HP04 x 3 H20 0,0407 g

Glutaminsyre-Na x H20 0,0636 g

Polysorbat 20 0,1 g

Hydroxyethylcellulose (f.eks.

30 Natrosol® 250 HX) 1,75 g

Vand, deioniseret til 100 g 96,7944 g

Bloom-værdien er et mål for styrken af en gel (se f. eks. Hagers Handbuch der Pharmazeutischen Praxis Vil, 35 216-217 (Springer Verlag 1977).

10

DK 164202 B

Fremstillingen af IFN-a-2-hydrogelen foregår ved, at Nipagin®opløses i 80°C varmt vand, og opløsningen derefter afkøles til rumtemperatur (RT), idet gelatinen under afkølingsfasen indføres i op-5 løsningen. Efter fuldstændig opløsning af gelatinen tilsættes ved stuetemperatur successivt til denne opløsning NaCl, KC1, NaH-2P04 x 2 H20, K2HP04 x 3 EjO, gluta-minsyre-Na x H20 samt polysorbat 20. Efter påfølgende sterilfiltrering indstrøes mikrobiologisk ren 10 hydroxyethylcellulose, og opløsningen bliver under omrøring atter opvarmet til 80°C. Efter afkøling til stuetemperatur bliver under forsigtig omrøring den saltsure, 1% polysorbat-holdige IFN-o-2-opløsning, bestående af et i 0,01 N HC1 opløst IFN-a-2-lyofilisat, til-15 sat og fordelt homogent. Aftapningen af denne blanding foregår under Laminar-Air-Flow-betingelser til sterile aluminiumtuber.

Eksempel 2 (Hydrogel) 20 I 100 g gelstof er indeholdt: IFN-ct-2 1 x 1010 I.E.

Hydroxyethylcellulose (f.eks. Natrosol® 250 HX) 2, 0 g

Gelatine, Bloom 160 - 200 0, 1 g 25 NaCl 0,35 g

Na2HP04 x 2H20 0,16 g KH2P04 0,09 g 1,2-Propylenglycol 10,00 g

Polysorbat 80 0,1 g 30 Benzalkoniumchlorid 90 % 0,02 g

Vand, deion. til 100 g 11

DK 164202 B

Fremstillingen af IFN-a-hydrogelen foregår ved, at benzalkoniumchloridet ved 30°C opløses i vandet, hvorefter propylenglycol tilsættes ved stuetemperatur, og gelatine indføres i opløsningen. Efter fuldstændig 5 opløsning af gelatinen tilsættes successivt ved stuetemperatur NaCl, Na2HP04 x 2H20, KH2P0^ samt polysorbat 80.

Efter sterilfiltrering indstrøes mikrobiologisk ren hydroxyethylcellulose, og opløsningen bliver under omrøring opvarmet 20 minutter ved 80°C. Efter afkø-10 ling til RT bliver under forsigtig omrøring den saltsure, polysorbatholdige IFN-a-2-opløsning, bestående af et i 0,01 N HC1 og 0,1% polysorbat 80 opløst IFN-a-2-lyofilisat, tilsat og fordelt homogent. Aftapningen af denne blanding foregår under Laminar-15 Air-Flow-betingelser til sterile aluminiumtuber.

Eksempel 3 (Hydrogel) I 100 g gel-stof er indeholdt: IFN-a-2 1 x 106 I.E.

20 Hydroxyethylcellulose (f.eks. Natrosol@ 250 HX) 1,0 g

Gelatine, Bloom 160 - 200 1,0 g

Polysorbat 20 0,1 g

Glycerol 5,0 g 25 Ravsyre 0,24 g

Chlorhexidindigluconat 0,05 g 1N-NaOH (til pH 6,0)

Vand, deion til 100,0 g

Fremstillingen af IFN-a-2-hydrogelen foregår 30 ved, at chlorhexidindigluconat, glycerol og gelatine bringes i opløsning ved ca. 30°C. Derefter tilsættes ravsyre, pH indstilles på 6,0 med NaOH, og polysorbat 20 tilsættes.

12

DK 164202 B

Derefter indstrøes mikrobiologisk ren hydro-xyethylcellulose, og opløsningen bliver under omrøring opvarmet 20 minutter ved 80°C. Efter afkøling til RT bliver under forsigtig omrøring den salture, 5 polysorbat-holdige IFN-a-2-opløsning tilsat og fordelt homogent. Aftapningen foregår som i eksemplerne 1 og 2.

Eksempel 4 (Hydrogel som næsegel) 10 I 100 g gelstof er indeholdt; IFN-ct-2 1 X 108 I.E.

Hydroxypropylmethylcellulose (f.eks. Methocel Premium) 0,1 g

Polysorbat 60 0,1 g 15 Gelatine, Bloom 160 - 200 0,5 g

Sorbitopløsning 70 % 2,0 g

Citronsyre x H20 0,130 g

Na2HP04 x 2 H20 0,30 g

NaCl 0,5 g 20 Benzalkoniumchlorid 90 % 0,02 g

Vand, deion. til 100 g

Fremstillingen af IFN-a-2-hydrogelen foregår ved, at hydroxypropylmethylcellulosen under omrøring opløses i 40°C varmt vand. Derefter afkøles til stuetemperatur, 25 og under afkølingsfasen indføres gelatine i opløsningen. Efter endt opløsning tilsættes successivt benzalkoniumchlorid, sorbitopløsning, citronsyre,di-Na-hydrophosphat, NaCl og polysorbat 60. I den færdige gel bliver ved stuetemperatur under omrøring den saltsure, 30 1% polysorbatholdige IFN-a-2-opløsning indført og fordelt homogent. Aftapningen foregår under Laminar-Air-Flow-betingelser til sterile aluminiumtuber.

13

Eksempel 5 (ovula) I 100 g ovula-masse er indeholdt: 8 IFN-a-2 1 x 10 I.E.

5 Hydroxyethylcellulose 0,1 g

Gelatine, Bloom 160 - 200 10,0 g

Na2HP04 x 2H20 0,16 g KH2 P04 0,09 g

Polysorbat 20 0,1 g 10 Glycerol 57,0 g

Vand, deion. til 100 g

Fremstillingen af denne IFN-a-2-ovula foregår ved, at hydroxyethylcellulosen sammen med gelatinen ved ca. 40-50°C opløses i glycerol-vandblan-15 dingen, der allerede indeholder Na2HP04 x 2H20, KH2P04 samt polysorbat. I den endnu viskose tilstand (ved ca. 37-40°C) bliver den 1% polysorbat-holdige saltsure (0,001N) IFN-a-2-opløsning forsigtigt indrørt, og opløsningen udhældes straks til størkning 20 i egnede, afkølede forme.

Eksempel 6 (Stabilitetstests, hydrogel uden gelatine- versus med gelatine-tilsætning).

I 100 g gelstof er indeholdt: 25 IFN-a-2 1 x 108 I.E. 1 x 108 i.e.

Nipagin^ M 0,2 g 0,2 g

Gelatine, Bloom 160-200 - 0,5 g

NaCl 0,48 g 0,48 g KC1 0,012 g 0,012 g 30 Na2HP04 x 2H20 0,086 g o,086 g

DK 164202 B

14 KH2P04 x 3H20 0,012 g 0,012 g

Polysorbat 20 0,1 g 0,1 g

Hydroxyethylcellulose 2,0 g 2,0 g (f.eks. Natrosol° 250 HX) 5 Vand, deion. til 100 g

De punkterede kurver i fig. 1-3 viser stabilitetsforløbet for en IFN-a-2-hydrogel med ovennævnte sammensætning uden gelatinetilsætning, og de fuldt optrukne kurver viser sammen med gelatine-tilsætning, 10 og med gelen indfyldt i aluminiumtuber. Hvert punkt viser middelværdien for 6 bestemmelser. Bestemmelserne gennemførtes med ELISA-testen.

I fig. 1 er vist stabilitetsforløbet ved minus 10°C-lagring, i fig. 2 ved plus 4°C-lagring 15 og i fig. 3 ved plus 21°C-lagring.

Stabilitetsforholdene fulgtes over et tidsrum på 14 uger (=3 1/2 måned). Herved blev det overraskende fastslået, at stabilitetsforskellene blev tydeligere ved stigende lagertemperatur. Ved addi-20 tion af de biologiske stabilitetsresultater over det totale tidsrum på 14 uger og tilvejebringelse af det aritmetiske gennemsnit (x) af værdierne (n = 11) fandtes det i følgende tabel viste billede, idet en værdi på10,0 svarende til 10® I.E. IF5J-a-2 pr. 100 g 25 blev sat til 100% aktivitet.

Lager- Hydrogel uden Hydrogel med Dif- tempe- gelatine- gelatinetil- feren- ratur tilsætning sætning ce -10°C x (11) = 8,49 (= -15%) x (11) = 9,72 (= -3%) 12% 30 + 4°C x (11) = 7,52 (= -25%) x (11) = 9,97 (=+/-0) 25% +21°C x (11) = 5,67 ( = -43%) x (11) = 8,87 (=-11%) 32% 15

Af denne tabel kan tydeligt aflæses den stabiliserende virkning af kombinationen af hydroxyethyl-cellulose og gelatine. Ved en lagring i køleskab (= plus 4°C) kunne der praktisk taget ikke konstateres 5 nogen aftagen i aktivitet efter 3 1/2 måned for præparatet med gelatine-tilsætning, hvorimod præparatet uden gelatinetilsætning viste et fald på ca.

25%. Køleskabstemperatur er således en praktikabel lagring for et handelspræparat. Ved en lagring ved 10 21°C kunne der for præparatet uden gelatine-tilsæt ning inden for lagringstidsrummet på 3 1/2 måned konstateres et aktivitetstab til næsten det halve af udgangsværdien, hvorimod det omhandlede præparat med hydroxyethylcellulose og gelatine inden for 15 nævnte tidsrum kun viste et aktivitetstab på 11%, hvilket svarer til en relativ stabilitetsforøgelse for IFN-a-2 på over 30%.

Et yderligere lagringsforsøg med en varighed på 44 uger (10 måneder) med en præparatform ifølge 20 Eksempel 1, indfyldt i aluminiumtuber med indvendig beskyttelseslak, viste ved ELISA-test ved en lagertemperatur på 4°C og 21°C intet aktivitetstab sammenlignet med begyndelsesværdien.

Lagertem- Hydrogel ifølge Eksempel 1 25 peratur Begyndelsesværdi Slutværdi efter 10 måneder + 4°C x (6) 9,6 x (6) 11,0 + 21°C x (6) 9,6 x (6) 9,6

Claims

1. Hydroxyethylcellulose, hydroxypropylmethylcel-lulose, eller blandinger deraf, og 2. gelatine, surt eller alkalisk oplukket, samt yderligere som antiadhæsionsmiddel anionaktive, 10 kationaktive eller neutrale overfladeaktive stoffer, og eventuelt yderligere sædvanlige hjælpestoffer.

1. Farmaceutiske præparatformer til topisk anvendelse indeholdende interferon-a, kendetegnet ved, at de som bærer og stabilisator for interferon-a 5 indeholder

2. Præparatformer ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de er hydrogeler.

3. Præparatformer ifølge krav 2, kendeteg net ved, at de som bærer og stabilisator indeholder hydroxyethylcellulose og gelatine, idet andelen af hydroxyethylcellulose er 0,1 til 2,0 vægt% beregnet på det færdige produkt.

4. Præparatformer ifølge krav 2, kendeteg net ved, at de som bærer og stabilisator indeholder hydroxypropylmethylcellulose og gelatine, hver i en andel på 0,1 til 2,0 vægt% beregnet på det færdige produkt.

5. Farmaceutiske præparatformer ifølge krav 2, 25 kendetegnet ved, at de som bærer og stabilisator indeholder hydroxyethylcellulose og gelatine, idet andelen af gelatine, beregnet på det færdige produkt, andrager fra 0,1 til 10 vægt%.

6. Præparatformer ifølge et hvilket som helst af 30 kravene 1-5, kendetegnet ved, at antiadhæ- sionsmidlet består af polyethoxylerede sorbitanestre.

7. Præparatformer ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6, kendetegnet ved, at det deri indeholdte interferon-α er vundet fra en cellekultur, 35 der er transformeret med en for human-interferon-α kodende DNA-sekvens.

8. Præparatformer ifølge et hvilket som helst af kravene 1-7, kendetegnet ved, at de som yderligere hjælpestoffer indeholder et puffersystem til et pH-område på 6,0-7,4, fugtighedsbevarende stoffer, hud- 5 venlige konserveringsstoffer, interferon-a-kompatible penetrationsfremmende stoffer og en bærer.

9. Præparatformer ifølge krav 8, kendetegnet ved, at de som fugtighedsbevarende stoffer indeholder glycerol, 1,2-propylenglycol, sorbitol, butylengly- 10 col, en polyol, såsom polyethylenglycol 400, eller en blanding deraf.

10. Farmaceutiske præparatformer ifølge krav 8, kendetegnet ved, at det interferon-a-kompatible penetrationsfremmende middel er op til 50 vægt% 15 dimethylsulfoxid.

11. Fremgangsmåde til fremstilling af farmaceutiske præparatformer ifølge krav 1 til topisk anvendelse, med stabilisering af det deri indeholdte interferon-a, kendetegnet ved, at man til fremstilling af 20 en hydrogel opløser gelatine, i en mængde svarende til en andel på 0,1 til 2,0 vægt% af det færdige produkt, i vand ved temperaturer op til 80°C, til denne opløsning sætter antiadhæsionsmiddel og de ønskede øvrige hjælpestoffer, derefter til opløsningen sætter hydroxy-25 ethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose eller en blanding deraf, og at man efter afkøling af opløsningen til stuetemperatur heri homogent fordeler interferon-α i 5 10 en mængde svarende til en andel på 1-10 til 1*10 IE/100 g færdigt produkt og aftapper denne blanding 30 sterilt.

12. Fremgangsmåde til fremstilling af farmaceutiske præparatformer ifølge krav 1 til intravaginal anvendelse, kendetegnet ved, at man a) i en vand-glycerolblanding, der indeholder et 35 antiadhæsionsmiddel samt eventuelt salte, puffermidler og konserveringsmidler, ved temperaturer op til 60°C opløser hydroxyethylcellulose i en mængde på 0,1 til 2,0 vægt% sammen med gelatine i en mængde op til 10 DK 164202 B vægt%, at man derefter b) forsigtigt ved en temperatur på 40 til 50°C heri indrører en polysorbatholdig saltsur IFN-a-opløs-ning, og at man 5 c) straks udhælder denne opløsning i egnede forme.