DK165436B

DK165436B - Dyrefoder

Info

Publication number: DK165436B
Application number: DK053691A
Authority: DK
Inventors: Irwin Boyden Wood; John Anthony Pankavich; Guy Thomas Carter; Margaret Jennings Torrey; Michael Greenstein
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1984-06-05
Filing date: 1991-03-25
Publication date: 1992-11-30
Also published as: JPH0776223B2; DK165119B; IE58100B1; DK248885A; AU588811B2; ES543948A0; DE3519834C2; DK165210B; DK53691A; JP2524688B2; EP0170006A2; DE3519834A1; DK165461C; DK248885D0; HUT43637A; ES8703159A1; DK165210C; AU4328385A; EP0170006A3; JPS6110589A

Description

Den foreliggende opfindelse angår et hidtil ukendt dyrefoder til forebyggelse, behandling eller bekæmpelse af helmintiske, arthropodectoparasitiske og acaride infektioner hos kødproducerende dyr, herunder 5 fjerkræ, hvilket dyrefoder er ejendommeligt ved, at det omfatter en fortærbar, fast bærer og en profylaktisk, terapeutisk eller pharmaceutisk effektiv mængde fermenteringsvæske eller helmæsk fra fermenteringen af mikroorganismen Streptomyces cyaneogriseus, underart noncyano-10 genus, betegnet LL-F28249, med deponeringsnummer NRRL nr. 15773. En sådan fermenteringsvæske eller helmæsk indeholder de antibiotiske forbindelser betegnet LL-F28249a, β, ύ , <5, €, η, θ, ζ, t, κ, λ, μ, ν og ω.

De ovenfor beskrevne sygdomme afstedkommer ikke 15 blot ødelæggende virkninger, men udgør også alvorlige økonomiske problemer og tab for landbrugerne, der avler kødproducerende dyr, såsom svin, får, kvæg, geder, kaniner og fjerkræ. Desuden er sådanne sygdomme årsag til stor bekymring, når det drejer sig om selskabsdyr som 20 heste, hunde og katte. Disse sygdomme har været kendt i mange år, og der findes præparater til behandling og/-eller forebyggelse af sådanne sygdomme.

Således omtales i USA patentskrift nr. 3.950.360 visse antibiotiske stoffer, der fås ved dyrkning af en 25 Streptomyces mikroorganisme, idet disse forbindelser er anvendelige som insekticider og acaracider. Men i relation til de karakteristika, der identificerer en sådan mikroorganisme, er den foreliggende mikroorganisme distinkt. Endvidere angår en hel serie USA patentskrifter 30 visse forbindelser, der fremstilles ved fermentering af Streptomyces avermitilis, en organisme, der klart adskiller sig fra den foreliggende (USA patentskrifterne nr. 4.171.314, 4.199.569, 4.206.205, 4.310.519 og 4.333.925). USA patentskrift nr. 4.423. 209 angår en fremgangsmåde 35 til omdannelse af nogle af disse mindre ønskelige komponenter til de mere foretrukne. Imidlertid er mikroorga-

DK 165436 B

2 nismen Streptomyces cyaneogriseus, underart noncyanoge-nus, NRRL 15773, en nyopdaget og ikke tidligere dyrket mikroorganisme.

Mikroorganismen betegnes i det følgende LL- 5 F28249.

Stammen henhører under slægten Streptomyces på basis af morfologi og cellekemi (indhold af L-isomeren i diaminopimelinsyre). Stammens morfologi og fysiologiske data placerer den i nærheden af S. cyaneogriseus, 10 repræsenteret ved ISP 5534 (ATCC 27426). Derpå foretages sammenligninger mellem dannelsen af grå opløselige luftmyceliumpigmenter på medier (Tabel I) og spiralformede kæder af glatte konidier (3-25 sporer pr. kæde). Den foreliggende stamme er negativ over for blåt opløseligt 15 pigment, hvor sammenligningsstammen ISP 5534 er positiv.

Stammerne har lignende reaktioner ved ISP-carbonhydrat-udnyttelsesprøverne, der er positive over for arabinose, fructose, glucose, rhamnose og xylose, men er negative over for inositol, mannitol, raffinose og saccharose 20 (ISP 5534 let positiv). Imidlertid er stammerne forskellige på flere punkter (tabel II) ud af 53 ved Gor-donprøverne. Disse forskelle understøtter teorien om dannelsen af en underart af S. cyaneogriseus for den foreliggende mikroorganismes vedkommende, 25 1 35

O

3

Tabel I

Sammenligning af LL-F 28249 og ISP 5534 på ISP-morfologi-prøvemedier (numrene er fra NBS-ISCC)

Medium_LL-F 28249_ISP 5534_ 5 Gær-malt A.m.^ middelgrå lys til middelgrå (ISP 2) (265) (264-265) V.m. lys brunlig (75) lysbrunlig-hvid til dyb gulbrun sortagtig blå (188) S.p. lysebrun lysebrun to Uorgani- A.m. lys olivengrå (112) middelgrå (265) ske sal- til middelgrå (265) te sti- V.m. dyb grå til sort grå-purpuragtig blå velse (266-267) (204) (ISP 4) S.p. grålig-gullig- intet 15 brun

Glycerol A.m. 263 (hvid) til gul- 263 (hvid) til lyse- aspara- lig-grå (93) grå (264) gin V.m. sort (267) til lys grå-purpuragtig blå (ISP 5) olivenbrun (96) (203-204) 20 S.p. let brunlig lys gullig-grå

Havremel A.m. gulgrå (93) intet (ISP 3) V.m. farveløs farveløs _S.p. let gullig intet 1) A.m. - luftmycelium 25 V.m. - vegetativt mycelium S.p. - opløseligt pigment 1 35

O

4

DK 165436 B

Tabel II

Sammenligning af LL-F 28249 med ISP 5534 (Gordonprøver)_ _LL-F 28249 ISP 5534_ 5 Dyrket på/ved

Salicin + - 10° - + 45° +

Produktion af 10 urease + -

Decarboxylering af mucate - +

Syreproduktion raffinose - + 15 saccharose - +

Begge stammer har følgende reaktioner;

Positiv Hydrolyse af casein, hypoxanthin, xanthin, tyrosin, adrenin, kartoffelstivelse, gelatine bg 20 esculin.

Produktion af phosphatase Følsomhed over for lysozym

Decarboxylering af acetat, citrat, lactat, ma-lat, oxalat og propionat 25 Syreprodukt ud fra arabinose, cellobiose, dek- strin, fructose, galactose, glucose, glycerol, lactose, mannose, α-methyl-D-glucosid, rhamnose, salicin og trehalose.

Negativ Produktion af nitratreduktase 30

Decarboxylering af benzoat og tartrat Syre ud fra adonitol, dulcitol, erythritol, inositol, mannitol, sorbitol, β-methyl-D-xylosid.

Vækst på 5% NaCl.

35 5

Det er således opfindelsens formål at tilvejebringe et nyt dyrefoder til forebyggelse, behandling eller bekæmpelse af helmintiske, arthropod-ektoparasiti-ske og acaride infektioner hos kødproducerende dyr, 5 såsom fjerkræ, kvæg, får, svin og kaniner.

Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus-kultu-ren (LL-F28249 deponeret under NRRL nr. 15773), som ved fermentering producerer forbindelserne LL-F 28249 a, β, nr, S, e, η, θ, ζ, c, κ, λ, μ, υ og u, blev isoleret ud 10 fra eukalyptussand i det sydlige Australien.

Det har overraskende vist sig, at fermenteringsvæsken eller helmæsken fra denne fermentering har antibiotisk virkning over for helmintiske, arthropod-ekto-parasitiske og acaride infektioner hos kødproducerende 15 dyr.

Strukturen og stereokemien i LL-F28249 α-ω er ikke fuldt klarlagt, men de foreslåede strukturer er vist nedenfor. Komponent LL-F28249 ω er beslægtet med Hondamycin (Albimycin), der er omtalt i The Journal of 20 Antibiotics 22, nr. 11, 521-526 (1969).

OH

CK3 25 R3 Y "3 1 °^‘ 30 jl OH ! ,Xa T ch3 •OR 2 LL-F28249a-u 35

X

6

DK 165436 B

OOOOOOOOOOOO

o ii ii n ii it n · :i ιι o n ii

IXXXXXXXXXXXX

«υαυυυυυυυυυυ t xxxxxx xxxxx

OOOCJOOXOUOOO CQ 1 1 I I I « O I I I I I

« xxxxxx n xxxxx couoooooooooo

III I I I I I I

N N N !N N N N N CM

O X X X XXXXX X

e: o o o υ υ υ υ u o

•fill I I I I I I

u”> O O O OOOOO O

CC I I I I I I I I I

X

o o cm cn en

a£ X XX

o a a in zz cs: o xx <n —f» c3 cncncncnencnencMcnencnen χΰυυυουΰδυυυυ cn

X

o m <n cn en cn en cn cm cn cn en <£υυυΰχοΰΰοουυ m en en cn cn

C-J XX XXX

eixxuoxxxxxooo

CM CM CM CM CM CM CM

λ λ /% n /—/—s cn cn cn cn cn en enen

X X X X X X X X

o ο ο ο ο ο ου —' en cn cn w cm '-c '-c 'w en w άΓυυο-οοουουοου oco.>-‘oukj>C’cD -* u ·< a.

p C'O'C'O'O'O'O'O'C'C'O'O' 5 'Τ'Τ'Τ'ΤΜΓΜΓ'Τ'ΤΜΓ'σΜΓΜΓ

P CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM

" cococococooocoaococococo

X CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM

^ϋ·Ιΐι[ΐ.(ΐ<[ΐι&ι(ΐ.[ΐ.Εΐ<Ι«[ΐ<[ΐ· g I I I I I I I I I I I I

7

DK 165436 B

0 OH

>^CH3

iH3 I

CH

5 CH3 CHj

H3C T

0 ^^^«3

OH

15 LL-F28 24 9v oh Λ rr v 2° Jss^^CfN,^x^NNs^S.

l^0 ®3 J 83<i^p'CH3 .0

26 r 0=S

J II .ch3

O OH O I

ΌΗ

30 / \ I I I

HO7 0H3 CH3 CH3 CH3 LL-F28249oj 35 8

DK 165436B

O

På tegningen viser fig. 1 et karakteristisk ultraviolet absorptions spektrum af forbindelsen betegnet LL-F28249a, NRRL 15773, c 5 fig. 2 et karakteristisk infrarødt absorptions spektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249a, NRRL 15773, fig. 3 et karakteristisk proton-kernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249fl, NRRL 15773, i CDCl^-opløsning, 10 fig. 4 et karakteristisk carbon-13-kernemagne- tisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249a, NRRL 15773, i CDCl3-opløsning, fig. 5 et karakteristisk elektronånslagsmas-sespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249a, NRRL 15 15773, fig. 6 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F282493, NRRL 15773, fig. 7 et karakteristisk infrarødt absorptions- 20 spektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249£, NRRL 15773, fig. 8 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249g, NRRL 15773, i CDC1-, 25 ^ fig. 9 et karakteristisk elektrorånslagsmassespektrum for forbindelsen betegnet LL-F282490,

P

NRRL 15773, fig. 10 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 ,

Qrv · NRRL 15773, fig. 11 et karakteristisk infrarødt absorptionsspektrum for forbindelsen LL-F-28249^, NRRL 15773, fig. 12 et karakteristisk protonkernemagnetisk

resonnansspektrum for forbindelsen LL-F28249 , NRRL

35 Ύ 15773, i CDC13, O 9 fig. 13 et karakteristisk carbon-13-kernemag-netisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 / NRRL· 15773, i CDC1-., fig. 14 et karakterisk elektronenslagsmas-5 sespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, fig. 15 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249t4), NRRL 15773, 10 fig. 16 et karakteristisk infrarødt absorp tionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249W, NRRL 15773, fig. 17 et karakteristisk protonkernemagne-tisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-15 F28249<0, NRRL 15773, i CDC13, fig. 18 et karakteristisk kernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249&J, NRRL 15773, i CDC13, fig. 19 et karakteristisk elektroncinslags-2o massespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249{j, NRRL 15773, fig. 20 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, 25 fig. 21 et karakteristisk protonkernemagne- tisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249<$, NRRL 15773, i CDC13, fig. 22 et karakteristisk elektronanslags-massespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, 30 NRRL 15773, fig. 23 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249£, NRRL 15773, fig. 24 et karakteristisk protonkernemagne-35 tisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F-28249^, NRRL 15773, i CDC13, o 10

DK 165436 B

fig. 25 et karakteristisk elektronanslagsmassespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249£, NRRL 15773, fig. 26 et karakteristisk ultraviolet absorp-5 tionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249£, NRRL 15773, fig. 27 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, i CDC13, 10 fig. 28 et karakteristisk elektronånslags- massespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, fig. 29 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 , 15 NRRL 15773, ^ fig. 30 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 , NRRL 15773 i CDC13, fig. 31 et karakteristisk elektronanslags-20 massespektrum for forbindelsen betegnet LL-28249 , NRRL 15773, ^ fig. 32 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, 25 fig. 33 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, i CDC13, fig. 34 et karakteristisk elektronans lagsmassespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249g, 30 NRRL 15773, fig. 35 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249(, NRRL 15773, fig. 36 et karakteristisk protonkernemagnetisk 35 resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^ , NRRL 15773, i CDC13, 11 o fig. 37 et karakteristisk elektron'anslags-massaspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249(_, NRRL 15773, fig. 38 et karakteristisk carbon-13 kernemag-5 netisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249p, NRRL 15773, i CDCl^ opløsning, fig. 39 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^*, NRRL 15773, 10 fig. 40 et karakteristisk infrarødt absorptions spektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, fig. 41 et karakteristisk elektronanslagsmassespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249|{, NRRL 15 15773, fig. 42 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249j(·, NRRL 15773, fig. 43 et karakteristisk carbon-13 kernemag-20 netisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249]C, NRRL 15773, fig. 44 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^., NRRL 15773, 25 fig. 45 et karakteristisk infrarødt absorptions spektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, fig. 46 et karakteristisk elektronenslagsmassespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 30 15773, fig. 47 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773, fig. 48 et karakteristisk carbon-13 kernemagne-tisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773,

DK 165436 B

12 fig. 49 et karakteristisk ultraviolet absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 u, NRRL 15773, ^ fig. 50 et karakteristisk infrarødt absorptions-

5 spektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 , NRRL

/u 15773, ' fig. 51 et karakteristisk elektronknslagsmassespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 , NRRL 15773, ^ 10 fig. 52 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249 , NRRL 15773, ^ fig. 53 et karakteristisk ultraviolet absorp-tionsspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249}, 15 NRRL 15773, fig. 54 et karakteristisk infrarødt absorptionsspektrum for forbindelsen betegnet F28249^, NRRL 15773, fig. 55 et karakteristisk elektronanslags-massespektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 20 15773, fig. 56 et karakteristisk protonkernemagnetisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249), NRRL 15773, og fig. 57 et karakteristisk carbon-13 kernemagne-25 tisk resonnansspektrum for forbindelsen betegnet LL-F28249^, NRRL 15773.

Dyrefoderet ifølge opfindelsen fremstilles i reglen ved omhyggelig iblanding af ca. 0,00001 til ca.

0,01 vægt% af den ovenfor beskrevne væske eller mæsk 30 med et næringsmæssigt afbalanceret foder som f.eks. det i de nedenstående eksempler beskrevne foder.

Når væsken eller mæsken anvendes til forebyggelse eller bekæmpelse af helminter, arthropod-ektopara-sitter og acarider, fremstilles først en dyrefoder-35 -forblanding. Forblandingen indeholder i reglen en forholdsvis stor procentdel af fermenteringsvæsken eller 13 helmæsken og blandes i reglen med dyrets foder umiddelbart før indgift. Om ønsket kan foderforblandingen også anvendes som topdressing på dyrets dagsration.

Foderforblandinger eller -koncentrater, der kan 5 benyttes ved udøvelse af den foreliggende opfindelse, kan fremstilles ved iblanding af ca. 0,1 til 5,0 vægt% fermenteringsvæske eller mæsk med ca. 99,9 til 95 vægt% af et passende bærestof eller fortyndingsmiddel.

Bærere, der er egnet til fremstilling af foder-10 suppleringssammensætninger, omfatter følgende: lucernemel, sojabønnemel, bomuldsfrøoliemel, hørfrøoliemel, na-triumchlorid, calciumcarbonat, calciumsulfat, majsmel, sukkerrørsmelasse, urinstof, benmel, majskolbemel, risskalmel og lignende. Bæreren fremmer en i det væsentli-15 ge ensartet fordeling af det aktive stof i det færdige foder, hvori tilskuddet blandes. Det udfører således en vigtig funktion ved at sikre en passende fordeling af det aktive stof, dvs. ca. 0,1 til 100 ppm deraf, i hele foderet. Dette svarer til 0,00001 til 0,01 vægt% 20 aktivt stof i det færdige foder. I praksis tilsættes et halvt til flere kg forblanding pr. ton foder for at opnå det ønskede niveau af fermenteringsvæske eller mæsk i det færdige foder.

Hvis tilskuddet eller forblandingen anvendes 25 som topdressing til foderet, hjælper det ligeledes med til at sikre ensartet fordeling af det aktive stof over den øverste del af det supplerede foder.

I praksis er i reglen en mængde fermenterings-væske eller helmæsk på fra ca. 0,02 mg/kg/dag til ca.

30 3,0 mg/kg/dag effektivt til bekæmpelse af parasitinfek tioner hos kvæg, får og svin. Til længere tids brug kan der anvendes mængder helt ned til 0,002 mg/kg legems-vægt/dag.

Også i praksis indgives en mængde fra ca. 0,1 35 rog/kg til 100 mg/kg til dyr inficeret med helminter.

O

14

DK 165436 B

De fysisk-kemiske data for Q, * & r£f · 6'Κιλ' u' °9co"komponenterne af LL-F28249 er beskrevet nedenfor: LL-F28249 : -α 5 (1) Molekylevægt: 612 (FAB-MS) .

(2) Molekyleformel: C36H52Og: (3) Specifik optisk rotation: [a]^6 = +133 + 3° (C 0,3, acetone).

(4) ultraviolet absorptions spektrum: som vist i fig.

10 1/ UVC^30H = 244 nm (¢ 28.000).

ΙΠ3.Χ (5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig.

2 (KBr- skive): 3439, 2960, 2925, 1714, 1454, 1374, 1338, 1171, 1120, 996 og 967 cm-1.

(6) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl.,): •s 15 som vist i fig. 3.

(7) Carbon-13-kernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl^): som vist i fig. 4 og beskrevet i tabel III.

(8) Elektron’anslagsmassespektrum: som vist i 20 fig. 5 med nøjagtige massemålinger og foreslå- ede grundstofsammensætninger som vist i tabel IV. LL-F28249^: (1) Molekylevægt: 584 (FAB-MS).

(2) Molekyle formel: C^H^gOg.

25 (3) Specifik optisk rotation: [a]^ = +125° (C 0,30, acetone).

(4) Ultravioletabsorptionsspektrum: som vist i fig.

6, UVCH30H = 244 nm ( p, 25.600). max ^ (5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig. 7 30 (KBr-skive): 3520, 2910, 1735, 1717, 1450, 1375, 1335, 1180, 1170, 1119, 993 og 727 cm"1.

(6) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDClg): som vist i fig. 8.

(7) Carbon-13 kernemagnetisk resonnansspektrum 35 (CDC13): som vist i fig. 38 og beskrevet i tabel IVA:

O

15 (8) Elektron'anslagsmassespektrum: som vist i fig. 9 med nøjagtige massemålinger og foreslået grundstofsammensætning ervist i tabel 7. LL-F28249 : 5 (1) Molekylevægt: 598 (FAB-MS).

(2) Molekyleformel: C^H^Og.

(3) Specifik optisk rotation: [a]^* = +150 + 4° (C 0,3, acetone).

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum: som vist i 10 fig. 10, UV^30H = 244 nm ( ^ 27.100).

(5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig.

11 (KBr-skive): 3510, 2910, 1735, 1715, 1452, 1375, 1338, 1182, 1172, 1119 og 995 cm"1.

(6) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl^): 15 som vist i fig. 12.

(7) Carbon-13-kernemagnetisk resonnansspektrum (CDClg) : som vist i fig. 13 og beskrevet i tabel VI .

(8) Elektronanslaqsmassespektrum: som vist i 20 fig. 14 med nøjagtige massemålinger og fore slået grundstofsammensætning er vist i tabel VII. LL-F28249,,,: (1) Molekylevægt: 806 (FAB-MS).

(2) Molekyleformel: C45H74°i2* 25 (3) Specifik optisk rotation: Γα]^ = -49 + 3° (C 0,35, methanol).

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum som vist i fig. 15, UVCH30H = 225 nm ( & 27.400) 3 max 232 nm ( £, 25.700) .

30 (5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig.

16 (KBr-skive): 3480, 2965, 2935, 2880, 1703, 1647, 1458, 1380, 1292, 1223, 1135, 1098 og 984 cm 1, (6) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDClg): 35 som vist i fig. 17.

DK 165436 B

o 16 (7) Carbon-13 kernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl^): som vist i fig. 18 og beskrevet i tabel VIII.

(8) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig.

5 19 med nøjagtige massemålinger og foreslåede grundstofsammensætninger vist i tabel ‘Ix· LL-F28249^: (1) Molekylevægt: 616 (EI-MS) .

(2) Molekyleformel: C^H^O^.

10 (3) HPLC-retentionsvolumen på 14,0 ml i systemet vist i tabel x.

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): som vist i fig. 20.

(5) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl^) : 15 som vist i fig. 21.

(6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig. 23.

LL-F28249c: (1) Molekylevægt: 598 (EI-MS).

(2) Molekyleformel: C35H5ø°g· 20 (3) HPLC-retentionsvolumen på 14,8 ml i systemet vist i tabel li.

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): som vist i fig. 23.

(5) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl^): 25 som vist i fig. 24.

(6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig. 25.

LL-F28249^.: (1) Molekylevægt: 598 (EI-MS).

30 (2) Molekyleformel: (3) HPLC-retentionsvolumen på 16,0 ml i systemet vist i tabel X.

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): som vist i fig. 26.

35 (5) Protonkernemagnetisk resonnansspektrum (CDCl^) : som vist i fig. 27.

o 17 (6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig.

23.

LL-F28249 : - (1) Molekylevægt: 612 (EI-MS).

5 (2) Molekyleformel: C^gH^Og* (3) HPLC-retentionsvolumen på 23,5 ml i systemet vist i tabel X.

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): som vist i fig. 29.

10 (5) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDC13): som vist i fig. 30.

(6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig. 31.

LL-F28249«: -0 15 (1) Molekylevægt: 626 (EI-MS).

(2) Molekyleformel: C^yH^Og.

(3) HPLC-retentionsvolumen på 24,5 ml i systemet vist i tabel X.

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): 20 som vist i fig. 32.

(5) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^): som vist i fig. 33.

(6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig. 34.

25 LL-F28249 ^: (1) Molekylevægt: 626 (EI-MS).

(2) Molekyle formel: (3) HPLC-retentionsvolumen på 26,0 ml i systemet vist i tabel X.

30 (4) Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): som vist i fig. 35.

(5) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^): som vist i fig. 36.

(6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fiq.

35 37.

O

18

DK 165436 B

LL-F28249 (1) Molekylevægt: 584 (EI-MS).

(2) Molekyleformel: C35H52°7* (3) Specifik optisk rotation: [a]^* = +189° (C 0,165, S acetone).

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum: som vist i fig.

39 UVCH30H = 241 nm (E 20.400).

max (5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig.

40 (KBr-jskivei) · 10 (6) Elektron’anslagsmassespektrum: som vist i fig.

41.

(7) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDCl3): som vist i fig. 42.

(8) Carbon-13 kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^): 15 som vist i fig. 43 og beskrevet i tabel XI.

LL-F28249 (1) Molekylevægt: 626 (FAB-MS) .

(2) Molekyleformel: C^Ht^Og.

(3) Specifik optisk rotation: [a]^ = +145° (C 0,23, 20 acetone).

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum: som vist i fig.

44 ϋνΞ=3°Η = 244 nm (E 30.000).

luaX

(5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig.

45 (KBr-skive;.

25 (6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig.

fig. 46.

(7) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDClg): som vist i fig. 48.

(8) Carbon-13 kernemagnetisk resonansspektrum 30 (CDClg): som vist i fig. 48 og beskrevet i ta bel XII.

LL-F28249 : (1) ifølekylevægt: 612 (EI-MS) .

(2) Molekyleformel: C37H56°7· 35 (3) Ultraviolet absorptionsspektrum: som vist i fig. 49 UV^30H = 241 nm (E 16.800).

19 o (4) Infrarødt absorptionsspéktrum: som vist i fig. 50 (KBr-skive) .

(5) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i fig. 51.

5 (6) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^): som vist i fig. 52.

LL-F28249V: (1) Molekylevægt: 592 (EI-MS).

(2) Molekyleforme1: C^gH^gO^.

10 (3) Specifik optisk rotation: [a]^ = +131° (C

0,325, actone).

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum: som vist i fig. 53 UVCH30H = 256 (E 20.500), 358 (Ξ 8.830).

(5) Infrarødt absorptionsspektrum: som vist i fig.

15 54 (KBr-skive).

(6) Elektronanslagsmassespektrum: som vist i (7) Protonkernemagnetisk resonansspektrum (CDClg): som vist i fig. 56.

(8) Carbon-13 kernemagnetisk resonansspektrum 20 (CDClg): som vist i fig. 57 og beskrevet i ta bel Xj.Il.

25 1 35

DK 165436B

20 tr

C

C -H

f! ^ cm n N n cm to *n ro m m <*> n §ssss=sxssssssssa:a:'s £_3οουυοουυαυυυυυυυ o

« -H •P ω XI 3 CO

4J

»P

•H _

Jkf ΟΟΓ'Μ’Γ·'·»'·*?''·—<OC^f^'C3®CNC><nC' O

Q] C r tN t> ·· e"* ♦— ·-» ·- *— ♦-*» ♦-*· »-s. *— ·“* *- ·ν.

[l>rsatnwou3 vo-* tn^cooicMCvcrtt··» «-< ^ £XVOVDM,”'3,M"''Tir1{-)mflCNCNCN'-H~^—< »i

TO

•H

H

3 0) CTi «

NT

CM

00

CM

« C .

I O

i-5 Χιβσ\θ«·Η<Μ<'η·'ϊ,ιηΐ'3Γ-03σ\ο—^fN<"n P] i-I^^CNCMCMCMCNCMCNCMCMCMnmrOn Π <o H p u H o Η Ή tn d Η l0 ·Η <y -μ -ti XJ CO ω

tO Ό -ØL

B I i—I

kic a

S c -H <M CM O

s o p o* s c er c s er* s s: s crcrssss SZ i -30) o O U U U OCJOUOm co O 3 .-i

r-i J-| 4-* · U

l « *H Q

C -P u O TO p

X} XI - <U

P 3 CO H

3 TO S C (0

U — B O C

Η X5 Cr>

P (0 P -H

*P P tO M

•Η ρη P—f O

•^2 ^rco-rrr'<^itMC£)rofnop'CMrnr~cntn τ d) ^ ·__. ^ *— ·- *χ·^·-.*- *-Φ·Ρ-Ρ t=r'>CM(7>r'r-r'-omoco<no®u3C\co ® | Ρω •S Pr^^,c^<^«*i<*icncM(M-H<j\ær^p*covD voB 5»

CUCB

•HD. P P D

B ip 0) O

0) -P 3 « <u c0

P > O

<D Χί -P

cn C II — « M- a σ c 5·*(Νη·*ΤΐηνΟΓ^ΟΟβΓΝΟ«"ΗίΝ«Ή*ΓΐΛνΟ — — — XI ^4 <-4 ~4 »H Η (Μ ΓΠ

P

tO

υ

O

21

Tabel IV

Massemålinger ved stærk opløsning for LL-F28249q __m/z_Grundstofsammensætning 612y3705 c36h52°8 594;3543 C36H50O7 576^3472 C36H4806 484^3211 C30H44°5 482^2648 ^29^38^6 466^ 3097 C3øH4204 448^2987 ^-30^40^3 442^2375 C26H34°6 15 425^2327 ^-26^33^5 354^2181 c23h30°3 314^1877 c20h26°3 278^1144 ^-15^18^5 20 265Ti786 C16H2s03 248^1405 ^-15^20^3 247^1705 c16h23°2 237^1838 c15h25°2 25 219;1740 C15H23° 151; 0753 C9HU02 1 35

O

22

DK 165436 B

Tabel IVA

Carbon-13 NMR-data for LL-F28249„ -p

Kemisk skift Kemisk skift

Carbon_(ppm)_Carbon_(ppm)_ 5 1 173, 3 18 68;3 2 142r6 19 67^8 3 139;5 20 67,7 10 4 137,7 21 48T4 5 137,3 22 45,7 6 133;9 23 41,0 7 123, 8 24 40,8 15 8 123.4 25 36,1 9 120.3 26 35,° ** i j 10 120, 2 27 34,7 11 118.0 28 22.3

20 ; J

12 99, 7 29 19;8 13 80,2 30 15.5 14 79,4 31 13,8 25 15 76,7 32 13,1 16 69,2 33 10 , 8 17 68,6 1 35 4 Længere fremme fra TMS, CDCl^-opløsning *4 To uopløste signaler

O

23

Tabel V

Massemålinoer ved stærk opløsning for LL-F28249α

P

m/z_Grundstofsammensætning 5 .584,3388 C34H48°8 • 566;3306 C34H4607 456,2864 C28H40O5 442,2391 C26H3406 10 438,2780 C28H3804

425j2331. c26h330S

354,2187 C23H3o03 314,1858 C20H26O3

15 278,1168 C15H180S

237,1491 C14H2103 219,1380 C14H1902 209,1534 C13H2102

191.1418 C13HlgO

20 ' 151j. 0750 C9HU02 25 1 35 24

DK 165436 B

O

Tabel VI

Carbon-13 NMR-data for LL-F28249..

1) Ύ

Kemisk skift Kemisk skift

Carbon_(ppm)_Carbon_(ppm)_ 5 1 173,6 19 68,3 2 142,4 20 67,9 3 139 j 9 21 57,7 4 137,3 22 48,5 5 136,0 23 45,8 10 6 134,0 24 41,2 7 123,8 25 40,8 8 123,6 26 36,2 9 120,4 27 36,1 10 119,6 28 36;0 15 11 118,5 29 34,8 12 99,8 30 22,3 13 80,5 31 19,9 14 77,8 32 15,5 15 77,0 33 13,8 20 16 76,8 34 13,1 17 69,3 35 10,8 18 68,6 25 1) Længere fremme fra TMS, CDCl^-opløsning. 1 35

O

25

Tabel VII

.'/lassemåling ved stærk opløsning for LL-F28249^ m/z_Grundstofsammensætning 5 598^ 3543 C35H50O8 580;3422 ^35^14307 562,3292 C35H45O5 A96;282A C30H40O6 10 484,2440 C28H36O7 478,2687 C3£}H3g05 456,2576 C27H3606 438,2772 C28H38O4 15 425^ 2341 C26H33O5 420,2651 C28H36°3 354,2199 ^23^30^3 314,1875 C20H26O3 292,1307 Ci6H2o05 on 288,2075 ^19^28^2 248,1397 C15H20°3 237,1490 ^14^21^3 219,1382 ^4^902 25 209,1544 C13H21^2

191,1435 C13H19O

151,0759 C9H11O2 1 35

O

26

DK 165436 B

Tabel VIII

Carbon-13-NMR-data for LL-F28249^

Kemisk skift1 2 Kemisk skift

Carbon_(ppm)_Carbon_(ppm)_ 5 1 220,7 23 42,22 2 219 j 6 24 40,4 3 165,2 25 38,3 4 148.7 26 37,6 5 133,1 27 36,1 10 6 132,3 28 34,8 7 132 ^1 29 33,5 8 130,2 30 30,1 9 122,3 31 26,6 10 100,0 32 25,4 15 11 82,9 33 24,5 12 75,9 34 23,0 13 73,0 35 21,1 14 72.7 36 17,9 15 72,6 37 14,3 20 16 72,1 38 14,2 17 69.0 39 12.1 i 1 18 67,3 40 11,5 19 63,6 41 10,9 20 51,4 42 8f 7 25 2 1 46,2 4 3 8,3 22 45,7 44 5,7 35 Længere fremme fra TMS, CDCl3~opløsning 2

To uopløste signaler 30

O

27

DK 165436 B

Tabel IX

Masssemåling ved stærk opløsning for LL-F28249 .. .........—-----CO

m/z_Grundstofsammensætning 5 462;3350 C28H46°5 444^3237 C28H44O4 425,2534 C23H3 7Ο7 407^2439 C23H35O6 10 406r3046 C25H42O4 387 j 2895 C25H39O3 337^2010 Οχ 9H29O5 297 5 2031 C17H29O4 279,1944 C χ 7H2 7Ο3 261j18 51 C17H25O2 253,1797 C15H25O3 235,1697 Ci5H23O2 224 j17 54 ^14^24^2 20 209,1530 C13H2i02

207,1744 C14H23O

184,1458 ^11^20^2 179,1048 C1χΗι5Ο2 25 173,1205 C9H17O3 167 ^1051 C1qH15Ο2 155;1069 ^9^15^2 1 35

Tabel X

O

28

DK 165436 B

HPT.C-retentionsvoluminer for LL-F28249a, g, e> g, n, q .og'· , 5 Forbindelse Retentionsvolumen* (ml) LL-F28249 α 19,8 LL-F28249 6 14;0 LL-F28249 ε 14;8 LL-F28249 ζ 16,0 10 LL-F28249η 23,5 LL-F28249θ 24,5 LL-F28249 , 26.0 ' i 15 * Systemet omfatter en kolonne 3/9 mm x 30 cm pak ket med C^g omvendt-fase-pakning fremkaldt med methanol/vand = 80:20 ved 1,0 ml/minut, påvisning sker ved absorbans ved 254 nm.

20 25 1 35 o 29

Tabel XI

Carbon-13-NMR-data for LL-F28249,,

_ F

Kemisk skift Kemisk Skift

Carbon_(ppm)_Carbon_(ppm) 5 1 173,9 19 56,7 2 140,7 20 48,4 3 138,3 21 47,7 4 136,6 22 41,1 5 136 ^5 23 40,6 10 6 133,8 14 37,1 7 124,7 25 36,3 8 124,4 26 36,0 9 123,8 27 35,9 10 120,1 28 34,6 15 11 118,5 29 22,0 12 99,7 30 19,3 13 77,2 31 16,0 14 76,6** 32 13,8 15 76,5 33 13,3 20 16 69,3 34 13,1 17 68,6 35 10,7 18 67,3 25 * Længere fremme fra TMS, CDCl3-opløsning.

** Sammenfaldende med CDCl^-signaler. 1 35

O

DK 165436B

30

Tabel XII

Carbon-13-NMR-data for LL-F28249j

Kemisk skift* Kem±Sk Skift

Carbon (ppm) Carbon (ppm) 5 1 173;6 19 68T3 2 14275 20 67,9 3 ' 139,8 21 57,3 4 137,4- 22 48,6 10 5 137, 2 23 45,8 6 136,0 24 41.2 I / 7 130 , 7 25 40,9 8 123,6 26 36.1 ** 15 N 1

9 120 , 3 27 36TC

.10 119,7 28 34,9 11 118,6. 29 26,9 20 12 99,8 30 23,0 ** 13 80,5 31 22,4 14 77,7 32 20.0 i / 15 77,6 33 15,7 25 16 76,7 34 14,0 17 69,3 35 11,1 18 68,6 30 * Længere fremme fra TMS, CDCl^-opløsning.

** To uopløste signaler.

35

O

31

Tabel XIII

Carbon-13-NMR-data for LL-F28249^

Kemisk skift* Kemisk skift

Carbon_(ppm)_ carbon_(ppm)- 5 1 167,4 18 69,4 2 150,5 19 68,7 3 142,9 20 68,3 4 142,0 21 48,4 10 5 137j. 2 ** 22 41,0 ** 6 132j1 23 35,9 7 130,7 24 35,6 8 125.8 25 35,5 15 ' 9 125,5 26 34r 4 10 12412 27 29,7 11 ' 123 , 7 28 26,8 20 12 123,2 29 22,9 13 121,3 30 22,8 14 118,0 31 22,1 15 100,0 32 15f 3 25 16 76,7 33 13,9 17 74.6 34 11,0 3Q * Længere fremme fra TMS, CDCl^-opløsning.

** To uopløste signaler.

35

O

32

DK 165436 B

Tabel XIV

Chromatografiske data * TLC HPLC -retentionstid

Komponent relativ Rf_(minutter) 5 α 1,00 13T8 ' β 0^797 9,3 γ 1,42 12,6 6 0,758 10,4 10 e 1.06 10,9 ζ 1,12 11,5 η 1,03 16,2 15 θ V7 1773 l 1.27 18,2 ic 1,83 24,7 X 1,56 19,1 20 μ 1,92 38T 0 v 1,95 42,3 ω · 0.212 7,1 25 * "Analtech Silica Gel GHLF250yU" fremkaldt med ethyl- acetat/methylenchlorid = 1:3, påvisning ved forkulning med I^SO^.

"Altex Ultrasphere ODS" 5yU 4,6 mm x 25 cm fremkaldt med 85% methanol i vand ved 1,0 ml/minut, påvist ved 30 absorbans ved 254 nm 35 33

Mikroorganismen Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus, NRRL 15773, opbevares i the Culture Collection of Medical Research Division, American Cyanamid Company, Pearl River, New York, som kultur nr. LL-F28249.

5 En levende kultur af denne nye mikroorganisme er blevet indleveret hos the Patent Culture Collection Laboratory, Northern Regional Research Center, U.S. Department of Agriculture, Peoria, Illinois 61604 og er indgået i dets permanente samling. Den er frit tilgængelig for offent-10 ligheden under deponeringsnummer NRRL 15773. .

Almindelige fermenteringsbetingelser

Dyrkning af Streptomyces cyaneogriseus noncyane-ogenus, NRRL 15773, kan foregå i en lang række forskellige flydende dyrkningsmedier. Medier, der kan anvendes, 15 omfatter en assimilerbar carbonkilde, såsom dekstrin, saccharose, melasse, glycerol etc., en assimilerbar nitrogenkilde, såsom protein, proteinhydrolysat, polypep-tider, aminosyrer, majsstøbevæske etc., og uorganiske anioner og kationer, såsom kalium, natrium, ammonium, 20 calcium, sulfat, carbonat, phosphat, chlorid, etc. Sporelementer såsom bor, molybdæn, kobber etc. tilføres som urenheder fra andre bestanddele i medierne. Beluftning i tanke og kolber sker ved at tvangstilføre steril luft gennem eller på overfladen af fermenteringsmediet. Yder-25 ligere bevægelse i tankene sker med et mekanisk skovlhjul. Der kan, om nødvendigt, tilsættes et antiskummemid- del, såsom siliconeolie.

Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere belyst ved hjælp af eksempler.

30

Eksempel 1

Fremstilling af podestof

Et typisk medium, der anvendes til dyrkning af de forskellige stadier podestof, fremstilles efter føl-35 gende opskrift: o 34

DK 165436 B

Dekstrose 1,0%

Dekstrin 2,0% Gærekstrakt 0,5% NZ-amin 0,5% 5 Calciumcarbonat 0,1%

Vand op til 100,0%

Mediet steriliseres. En portion på 100 ml af dette sterile medium i en kolbe . inokuleres med mycelie-afskrab fra en skråtstillet agar af Streptomyces cyaneo-10 griseus noncyanogenus NRRL 15773. Mediet rystes derpå kraftigt på en roterende ryster i 48-72 timer ved 28°C, hvilket giver primært podestof. Dette primære podestof anvendes derpå til at pode en liter af ovennævnte sterile medium, som derpå dyrkes aerobt ved 28°C i 48 timer, 15 hvorved man får sekundært podestof.

Eksempel 2

Fermentering 20 Der fremstilles et fermenteringsmedium med føl gende sammensætning:

Dekstrin 1,0%

Sojapepton 1,0%

Melasse 2,0% 25 Calciumcarbonat 0,1%

Vand op til 100,0%

Dette medium steriliseres, og derpå inokuleres en portion på 30 liter med 1 liter af det sekundære podestof fremstillet som beskrevet i eksempel 1. Fer- 30 menteringen sker ved 30°C med en steril luftstrøm på 30 2 liter/minut, modtryk 1,56 kg/cm og omrøring med et skovlhjul, der roterer med 500 omdr/min. i 91 timer, på hvilket tidspunkt mæsken høstes.

35 35

Eksempel 3

Fermentering i stor målestok

Et podestof af Streptomyces cyaneogriseus non-cyanogenus, NRKL 15773, fremstilles som beskrevet i ek-5 sempel 1, idet der anvendes 100 ml primært podestof til fremstilling af 10 liter sekundært podestof.

Der foretages to gange 300 liters fermentering som beskrevet i eksempel 2, idet der anvendes 10 liter af ovennævnte sekundære podestof til hver 300 liter fer-10 menteringsmedium. Efter 118 timer høstes mæsken.

Eksempel 4

In-vivo anthelmintisk aktivitet hos helmæsk fra fermentering LL-F28249. NRRL 15773 15 Dette in-vivo-system skal påvise potentiel anthelmintisk aktivitet hos helmæsken. Prøver af helmæsk fra fermentering af LL-F28249, NRRL 15773 blandes i foder med koncentrationer fra 0,0031% til 2,0% (31 ppm til 20.000 ppm). Foderet gives til Gerbillus-mus infi-20 ceret med 400 3.st.-larver af Trichostrongylus colubri-formis. Foderet gives ad libitum, begyndende når infektionen er 7 dage gammel, i ½ til 4 dage, hvorefter Gerbillusmusene obduceres. Indvoldene fjernes og anbringes i vand i en inkubator ved 45°C i 2 timer, så at parasit-25 terne kan udvandre fra vævet. Hver behandlings effektivitet bestemmes ved at opgøre antallet af T. colubrifor-mis, der er tilbage, sammenlignet med en ubehandlet kontrol. Resultaterne af disse eksperimenter, der er anført i tabel XV nedenfor, viser den anthelmintiske 30 aktivitet hos helmæsk fra fermentering af LL-F28249, når det indgives i foder.

36

DK 165436 B

Ό 0 g in o o o H cm o in co CD 'O« cn æ +) tn rH 3 3 Ψ

X I

1 tn tn

CO 3 -H

r·» cH tn iH o o O o o in ή ·* *· Ό ** * rH Λ in oo o o H CM CO rH in o

•JO) rH (β rH

os o u OS o 2 w

O -P

V. X ^ o\ E ' C) rj-tnrjoo x o o ΓΜ -H 4J " *· C·*·" 00 £ -H o CO 0)00 ί> cm h jj m ® o o

>< pq 0 -rH ^ C I—I H

I «η H Q>

i—i ,J] *H

o *H >d Ό Λ Λ id ω tj nj Ρ 2 E-< in ·“* * i4 ο Μ ο ο ο o U J) " - *

v· t£j O O O O

05 cn η ο ο ο o

fg 3 Pm m rH CM I—I

e 'll

fH

(D cn σ> 0 E \

-H 5h Qic#> CTidP

+i α E

4J in — · —' ·

φ o +> 4J

p x · x ax -hu ο 0) *H<1) > -rH c 4h tn uh -rl 5-1 Ο 4H 0 Ή

4J Eh « H Q H

Λί id ^ ^ +) -μ -0) Q) tn μ h -HQ) 0) 4J tn tn

C »31 -Η -H

*H CM X 1-t X Ή

E oo in *h tn -H

rH CM rø Si fti X

0) i E 0» E Dj X h o o μ I H tH rH >,

d J 0) I-H 0) rH

< ^ 33 ^ 33 —

Claims

1. Dyrefoder til forebyggelse, behandling eller bekæmpelse af helmintiske, arthropodectoparasitiske eller acaride infektioner hos kødproducerende dyr, 5 kendetegnet ved, at det omfatter en fortærbar, fast bærer og en profylaktisk, terapeutisk eller pharma-ceutisk effektiv mængde fermenteringsvæske eller helmæsk fra fermenteringen af mikroorganismen Streptomyces cya-neogriseus noncyanogenus med deponeringsnummer NRRL 10 15773.

2. Dyrefoder ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den effektive mængde fermenteringsvæske eller helmæsk udgør fra ca. 0,00001 til ca. 5 vægt% af 15 foderet.