DK166825B1 - Antitumor-platinkomplekser og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt farmaceutiske midler indeholdende disse - Google Patents

Description

DK 166825 B1 «· i

Den foreliggende opfindelse angår en række hidtil ukendte komplekser af 4-koordineret, divalent platin med et cyklisk urinstofderivat. Sådanne komplekser har værdifuld antitumorvirkning med bedre opløselighed end kendte antitumor-5 platinforbindelser og -komplekser. Opfindelsen angår ocså en fremgangsmåde til fremstilling af disse komplekser og farmaceutiske midler, der indeholder dem.

Cancersygdomme er et betydningsfuldt lægeligt problem, men er 10 ofte vanskelige at helbrede. Hovedårsagen til dette er, at forskellene mellem tumorceller og normale celler generelt er ekstremt små med det resultat, at forbindelser, som er toksiske over for tumorceller, også er toksiske over for normale celler. Kemoterapibehand1 i ngen af cancersygdomme beror gene-15 relt på meget begrænsede forskelle mellem svulstcellers og normale cellers følsomhed over for antitumormidler.

Forskellige platinforbindelser vides at have antitumorvirkninger. Fx har cisplatin [Rosenberg et al., Nature 222, 385 20 (1965) og The Merck Index, 10. udgave (1983) monografi 2289] med held været benyttet til behandling af svulster, og malonato-(l,2-diaminocyclohexan)platin(II) [fx US-patentskrift nr. 4.169.846 og Kidani et al., Gann, 71, 637-643 (1980)] har været foreslået til sådan anvendelse. Begge de ovennævnte pla-25 tinkomplekser har en vis strukturel lighed med forbindelserne ifølge opfindelsen. Selv om det strukturelt har mindre lighed med forbindelserne ifølge opfindelsen, er et andet platinkompleks, der for nyligt er blevet tilgængeligt til behandling af svulster, carboplatin [Drugs of the Future, bind 8, nr. 6, s. 30 489-491 (1983)]. De fleste af de kendte platinkomplekser in klusive de ovenfor omtalte har imidlertid en høj nyretoksicitet og en dårlig opløselighed i vand, hvilket gør det vanskeligt at bringe dem til at indgå i en passende doseringsform.

35 Der er fundet frem til en hidtil ukendt række platinkomplekser, som har god anti svulstvirkning, men relativt få bivirkninger, såsom nyretoksicitet og benmarvsundertrykkelse, og som har en god opløselighed i vand.

2 DK 166825 B1

Forbindelserne ifølge opfindelsen er 4-koordinerede, divalente planti nkomplekser med cykliske urinstofderivater med formlen ( I ) :

L J

15 der er ejendommelige ved, at A betegner en alky1engruppe med 2 eller 3 carbonatomer, L1 og er ens eller forskellige og hver betegner vand, en nitration, en halogeni di on, en perchloration, en sulfation, en carbonation, en hydroxidion, en methoxidion eller en ethoxid-20 ion, eller L.I og l_2 tilsammen betyder en nitration, en chlo-ridion, en sulfation, en hydroxidion, en ethoxidion, en perchloration eller en carbonation eller en gruppe med formlen (II) : 25 ( HN^ <“> 30 hvori A er som ovenfor defineret, XP~ betegner en anion med valensen P, og 35 n er 0, 1, 2 el 1 er 3.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved omsætning af et p1 at inkomp1eks med formlen (III): DK 166825 B1 r*

O

Γ hu, Y1 n1 © CX X, i«'®'.', 10 hvori XP" er som ovenfor defineret, n' er 0, 1 eller 2, og Y og Y' er ens eller forskellige og hver betegner vand, en nitration, en hydroxidion eller en perchloration, eller Y og Y’ 15 er knyttet til hinanden til dannelse af en sulfat- eller c a r -bonation eller en gruppe med formlen (IV):

H

2° /2y\

Vv-O ,ivi 25 med en forbindelse med formlen (V):

H

N-v

30 Q=C^ A M

H

hvori A er som ovenfor defineret.

Opfindelsen angår fremdeles et middel omfattende et antitumor-middel og en farmaceutisk acceptabel bærer eller et farmaceu- 35 4 DK 166825 B1 tisk acceptabelt fortyndingsmiddel , hvori antitumormidlet er valgt blandt forbindelser med formlen (I).

Forbindelserne ifølge opfindelsen har mindst én ligand, som er 5 et cyklisk uri nstofder i vat med formlen (II) og afhængigt af betydningerne af l_l og 1.2 kan have to sådanne ligander, ΐ denne ligand eller i disse ligander antages det, at tilknytningen til et af platinatomerne sker via -NH-gruppens nitrogenatom, og at tilknytningen til det andet platinatom sker via 10 nitrogen- eller oxygenatomet i gruppen 0----C----N.

Gruppen 0----C----N kan betegne en gruppe med formlen 0 = C-N“ eller 0"-C=N eller en resonanshybrid af disse to strukturer, hvori den negative ladning er fordelt gennem gruppen.

15 A betegner en alkylengruppe med 2 eller 3 carbonatomer, hvilken gruppe kan være en gruppe med lige eller forgrenet kæde. Al ky1engruppens to "frie" valenser kan være og er fortrinsvis knyttet til forskellige carbonatomer, eller også kan de være 20 knyttet til det samme carbonatom (i hvilket tilfælde gruppen undertiden omtales som en "alkyliden"-gruppe) . Gruppen repræsenteret ved A er fortrinsvis en α,ω-alkylengruppe med en lige kæde indeholdende 2 eller 3 carbonatomer, hvilken kæde er u-substitueret eller har mindst en alkylsubstituent, forudsat at 25 det samlede antal carbonatomer i nævnte kæde og nævnte alkylsubstituent eller -substituenter ikke overstiger 3. Eksempler på sådanne grupper indbefatter·.

-(ch2)2“' CHj-CH·«, -CH(CH3)CH2- 0g -(0113)3-. Af disse foretrækkes grupperne med formlen -(0113)2 °S -(CH2}3-.

30 Når Li eller L2 betegner en neutral ligand, er denne fortrinsvis et vandmolekyle, H2O. Når Li eller L2 hver betegner en monovalent eller divalent anion, er denne anions natur ikke afgørende for opfindelsen, forudsat at den resulterende 35 forbindelse er farmaceutisk acceptabel, d.v.s. at den ikke har formindsket virkning (eller uacceptabelt formindsket virkning) eller forøget toksicitet (eller uacceptabelt forøget toksicit- 5 DK 166825 B1 et) sammenlignet med stamforbindel sen med vand som ligand. Eksempler på sådanne an i oner indbefatter sådanne uorganiske an-ioner som nitrat-, halogenid- (fx chlorid-, bromid- eller jodid-), perchlorat-, sulfat-, carbonat- eller hydroxidan ion-5 er, og sådanne organiske anioner som methoxid- eller ethox i danionerne. Det foretrækkes især, at L1 og L2, som kan være ens eller forskellige, hver betegner en nitrat-, chlorid-, hydroxid-, methoxid- eller efnoxidanion eller H2O. Alternativt kan L.1 og L2 tilsammen betegne en enkelt af de oven for 10 nævnte anioner, og eksempler på sådanne er de samme som de anførte, når Li og L2 separat repræsenterer sådanne anioner. Foretrukne anioner, som ll-og L2 tilsammen kan betegne, indbefatter nitrat-, chlorid-, sulfat-, hydroxid-, methoxid- og ethoxi dan i oner. Foretrukne er også forbindelserne, hvori Li og 15 L2 ti Isammen betegner den ovenfor nævnte gruppe med formlen (ID- Når forbindelsen ifølge opfindelsen indeholder en anion XP-, er denne anions natur ikke afgørende for opfindelsen, forudsat 20 at den som ovenfor forklaret i relation til Li og L2 er farmaceutisk acceptabel. Eksempler på sådanne anioner, som XP“ kan betegne, indbefatter nitrat-, perchlorat-, sulfat- og carbo-natanionerne, fortrinsvis nitrat- og sulfatanionerne.

25 Værdien afhænger fuldstændigt af naturen af liganderne il og L2, eftersom fire positive ladninger tilvejebringes af de to di valente platinioner, og en enkelt negativ ladning tilvejebringes af gruppen med formlen (II), der er vist i formlen (I), således at der bliver ialt tre positive ladninger til-30 bage, der skal afbalanceres v.h.a. Li, L2 og XP“. Når fx l! og L2 begge betegner monovalente anioner, er η 1. Når Li betegner en neutral ligand, og L2 betegner en monovalent anion, er n 2. Når Li og L2 begge betegner neutrale ligander, er n 3, og når den ene af Li og L2 betegner en divalent anion, og den 35 anden betegner en monovalent anion, er n 0.

Det vil fremgå, at en række forskellige isomerer af forbindelserne ifølge opfindelsen er mulige, afhængigt af konfigura- 6 DK 166825 B1 tionen af de to cyclohexandiaminmo1eky1 er i komplekset. Hver cvclohexandiaminligand kan fx være cis-isomeren, trans-isomeren eller en blanding af disse, og de to cyclohexandia-minligander i molekylet kan være den samme isomer eller for-5 skellige isomerer. I tilfælde af trans-isomererne, er optisk aktivitet mulig, og disse isomerer kan være d-enantiomeren, 1-enantiomeren eller et racemat.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan syntetiseres ved omsæt-10 ning af en forbindelse med formlen (III), d.v.s. en forbindelse med formlen (111 a) :

In1®

16 (^Y i*PØ>«'/P (JIM

20 hvori n' og XP- er som ovenfor defineret, og Z og Z* er ens eller forskellige og hver betegner en neutral ligand (fx vand) eller en anion (fx et nitrat, hydroxid eller en perchlorat-anion) eller Z og Z' er knyttet til hinanden til dannelse af en anion (fortrinsvis en sulfat- eller carbonatanion), eller 25 en forbindelse med formlen (111 b): Η Ί2© “ Πν><"!ΐΊ Y Xnh2A^ 2/p

H

35 (III bl (hvori XP" er som ovenfor defineret) med den ovenfor nævnte forbindelse med formlen (V).

7 DK 166825 B1

Foretrukne måder at udføre disse reaktioner- på er nedenfor anført som metoderne A, B oa C.

Metode A 5

Cis-dichlor-(l,2-diaminocyclohexan)platin(II) omsættes med 2 ækvivalenter sølvnitrat eller 1 ækvivalent sølvsulfat til opnåelse af én forbindelse med formlen (111 a) , hvori Z og 1' begge betegner vandmolekyler, og XP~ betegner en nitrat- eller 10 sulfatan i on, d.v.s. cis-diaqua-(l,2-diaminocyclohexan)platin-(Il)nitrat eller -sulfat. Tilsvarende forbindelser med formlen (Illa), hvori XP~ betegner andre anioner, kan fremstilles ved anvendelse af et andet tilsvarende sølvsalt. Reaktionen udføres fortrinsvis i vandig opløsning. Reaktionstemperaturen er 15 ikke særlig kritisk, og det findes derfor hensigtsmæssigt at udføre reaktionen ved ca. stuetemperatur.

Den resulterende forbindelse med formlen (Illa) omsættes derpå med det cykliske a 1 kylenuri nstofderi vat med formlen (V). Det 20 foretrækkes at anvende fra 0,5 til 4 ækvivalenter af nævnte forbindelse med formlen (V) per ækvivalent af nævnte forbindelse med formlen (Illa). Reaktionen gennemføres fortrinsvis ved ca. neutralitet, og dette kan opnås ved tilsætning af en egnet base. Basens natur er ikke afgørende, forudsat at den 25 ikke generer reaktionen. En passende base er et alkalimetalhy- droxid, fx natriumhydroxid, som fortrinsvis anvendes som en ca. 1 N vandig opløsning. Reaktionen vil finde sted over et bredt temperaturinterval, og den nøjagtigt valgte temperatur er ikke særligt afgørende. Det foretrækkes at udføre reak-30 tionen ved en temperatur i intervallet fra 0 til 100°C, mere foretrukket fra stuetemperatur til 60°C og fortrinsvis under omrøring. Den til reaktionen krævede tid kan variere i vidt omfang afhængigt af mange faktorer, især reagensernes natur og reaktionstemperaturen. Ved en temperatur inden for det ovenfor 35 anførte brede interval vil imidlertid et tidsrum fra 1 time til 40 dage normalt være tilstrækkeligt, medens et tidsrum fra 10 timer til 30 dage normalt vil være tilstrækkeligt ved en temperatur i det mere foretrukne interval.

8 DK 166825 B1

Den således opnåede resulterende forbindelse med formlen (I) kan skilles fra reaktionsblandi ngen v.h.a. enhver egnet proces. Reaktionsblandingen kan fx koncentreres ved inddamp-ning under formindsket tryk, og et organisk opløsningsmiddel 5 kan derpå tilsættes til udfældning af den ønskede forbindelse med formlen (I). Det organiske opløsningsmiddels natur er ikke afgørende, selv om det foretrækkes at anvende et med vand blandbart organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol (fx methanol, ethanol eller isopropanol) eller en ether (såsom 10 diethylether). Det resulterende præcipitat kan opsamles, fx v.h.a. filtrering, til opnåelse af den ønskede forbindelse med formlen (I). Om ønsket kan dette præcipitat renses yderligere v.h.a. kromatografi, fx ved anvendelse af en ionbytterharpiks, såsom "Diaion" (varemærke) CHP 20P eller "Sephadex" (varemær- 15 ke).

Metode B

En vandig opløsning af cis-diaqua-(l,2-di am i nocyclohexan)pia-20 ti η (11)ni trat fremstilles som beskrevet i metode A, og vandet afdampes derpå under formindsket tryk til opnåelse af c is-dinitrato-(1,2-diaminocyclohexan)pi at i η (11), d.v.s. forbindelsen med formlen (Illa), hvori Z og Zr begge betegner nitratan i oner. Forbindelser, hvori Z og Z' betegner andre an- 25 ioner, kan fremstilles på tilsvarende måde ud fra andre salte end nitratet. Den resulterende forbindelse suspenderes i vand og omsættes derpå med et cyklisk a 1 ky1enuri nstof (V) i nærværelse af en base (fortrinsvis natriumhydroxid) på den i metode A beskrevne måde. Forbindelsen (V) anvendes fortrinsvis i en 30 mængde fra 0,5 til 4 ækvivalenter, og basen anvendes fortrinsvis i en mængde på ca. 1 ækv. per ækv. c is-dinitrato-(1,2-diami nocyclohexan)platin(II) .

Metode C 35

En vandig opløsning af cis-di aqua-(1,2-diaminocyc1ohexan)pia-tin(II)nitrat eller -sulfat fremstilles som beskrevet i metode 9 DK 166825 B1 A. Et a 1ka1 ihydrox id (fortrinsvis et a 1ka1 i meta 1hydroxid, såsom natriumhydroxid) sættes til denne vandige opløsning, fortrinsvis i en mængde på et ækv. per ækv. af nitratet eller sulfatet. Man lader derpå den resulterende blanding reagere 5 til opnåelse af den tilsvarene forbindelse med formlen (Illb), d.v.s. bis[hydroxy-cis-(l,2-diaminocyclohexan)platin(II)]ni-trat eller -sulfat. Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, og det foretrækkes generelt at udføre reaktionen ved ca. stuetemperatur. Den til reaktionen krævede tid kan variere 10 i vidt omfang, men et tidsrum fra 1 time til 14 timer vil normalt være tilstrækkeligt. Den ønskede forbindelse med formlen (Illb) opnås derpå ved afdampning af vand fra reaktionsblandingen. En vandig opløsning af produktet opnås (enten ved ufuldstændig fjernelse af vand eller ved tilsætning af vand), 15 og denne omsættes derpå med et cyklisk alkylenurinstofderivat med formlen (V), fortrinsvis i en mængde fra 0,5 til 4 ækv. per ækv. platinkompleks. Reaktionen vil finde sted over et bredt temperatur interval, men generelt findes det hensigtsmæssigt at anvende en temperatur i intervallet fra stuetemperatur 20 til 50°C. Den til reaktionen krævede tid kan variere i vidt omfang afhængigt af mange faktorer, men især reaktionstemperaturen. Et tidsrum fra 1 til 20 dage vil normalt være tilstrækkeligt. Derefter kan reaktionsblandingen behandles som beskrevet i metode A til opnåelse af den ønskede forbindelse.

25

Forbindelserne ifølge opfindelsen har udvist fortrinlig anti-svulstvirkning, som kan sidestilles med eller er bedre end virkningen af cisplatin og carboplatin. Det har endvidere ganske uventet vist sig, at forbindelserne ifølge opfindelsen 30 endog er effektive over for en cisplatinresistent stamme af museleukæmi L1210. Forbindelserne ifølge opfindelsen viser sig endvidere at have overraskende begrænsede bivirkninger, såsom nyretoksicitet og benmarvsundertrykkel se, og de har en meget høj opløselighed i vand, hvilket gør dem meget lette at admi-35 nistrere.

Der er ingen særlig begrænsning med hensyn til administrationsvejen, men til anvendelse som et carcinostatisk middel DK 166825 Bl 10 administreres platinkomplekserne ifølge opfindelsen fortrinsvis parenteralt, fx som injektioner. Dosen kan variere afhængigt af patientens alder, legemsvægt og tilstand samt af svulstens natur og alvorlighed, men det foretrækkes generelt at 5 administrere forbindelsen i en mængde fra 10 mg til flere g per dag til voksne menneskepatienter, generelt som delte doser.

Opfindelsen illustreres yderligere v.h.a. de følgende eksemp-10 ler. Fremstilling af et af udgangsmaterialerne, der anvendes i disse eksempler er beskrevet i det følgende fremstillingseksempel .

Fremsti 11 i ng 15 bis[hydroxo-ci s-(trans-(l}-l,2-diami nocyclohexan)pianti η{11}] — nitrat ,.· r I ]!®

25 I

L h J

10 g cis-dichlor-(trans-(1)-1,2-di aminocyc1ohexan)p1 at i η (11) 30 blev suspenderet i 200 ml vand, hvorpå 8,55 g sølvnitrat blev sat til suspensionen. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 5 dage og det uopløselige materiale blev filtreret fra v.h.a. et "Celite" (varemærke) filterhjælpemiddel. Filtratet, som til at begynde med havde en pH-værdi på 2,18, blev indstillet til 35 en pH-værdi på 7,00 ved tilsætning af en 1 N vandig opløsning af natriumhydroxid. Blandingen omrørtes derpå natten over ved stuetemperatur, hvorefter vandet afdampedes under formindsket 11 DK 166825 B1 tryk, indtil krystaller af ti telforbinde1 sen udfældedes. Den første udfældning resulterede i 7,28 g krystaller. Disse blev fraskilt, og afdampning af vand fortsattes til opnåelse af yderligere 2,38 g krystaller, 5

Kernemagnetisk resonansspektrum (400 MHz, D2O) δ ppm: 0,91 (4H, multiplet); 1,03 (4H, multiplet); 10 1,33 (4H, multiplet); 1,78 (4H, multiplet); 2,0-2,16 (4H, multiplet).

Eksempel 1 15

Hydroxo(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-(l)-I,2- diaminocyclohexan)platin(II)]nitrat H "12© 20 g

C J /Pt\ /Pt\ X 1 mP

HH-1 0,871 g ethyl enur i nstof blev sat til 270 ml af en vandig opløsning indeholdende 5,5 g bi s[hydroxo-ci s-(trans(1)-1,2-30 diaminocyclohexan)platin(II)]nitrat, der var fremstillet som beskrevet i eksemplet fremstilling, og den resulterende opløsning omrørtes ved 28°C i 10 dage under en nitrogenstrøm. Ved afslutningen af dette tidsrum fraf i 11reredes uopløseligt materiale i reakt i onsbi and i ngen, og vandet afdampedes derpå 35 under formindsket tryk til koncentrering af den vandige opløsning til et volumen på ca. 10 ml. 100 ml ethanol blev sat til den koncentrerede, vandige opløsning, og det resulterende 12 DK 166825 B1 præcipitat blev opsamlet ved filtrering. Hele dette præcipitat (1,8 g) blev påført på en kromatografisøjle indeholdende ca. 500 ml "Diaion" CHP 20P-harpiks, og søjlen blev elueret med vand. Eluatet blev frysetørret til opnåelse af 0,6 g af titel-5 forbindelsen som et farveløst pulver.

Ca. 400 ml diethylether blev sat til filtratet, der opnåedes efter fjernelse af præcipitatet af den ovenfor omtalte titelforbindelse. Det resulterende præcipitat (2,4 g) blev på-10 ført på den samme sejle indeholdende "Diaion" CHP 20P-harpiks og elueret med vand. Eluatet frysetørredes til opnåelse af yderligere 0,8 g af titelforbi ndel sen som et farveløst pulver.

Kernemagneti sk resonansspektrum (400 MHz, D2O) 15 δ ppm: 0,93 (4H, triplet), 1,02 (2H, kvartet), 1.06 (2H, dublet), 1,36 (4H, dublet), 20 1,77-1,83 (4H, multiplet), 2,01 (2H, triplet), 2.07 (IH, triplet af dubletter), 2,10 (IH, triplet af dubletter), 3,17 (2H, multiplet), 25 3,73 (2H, multiplet).

Infrarødt absorpt i onsspektrum (KBr) vmaxcm~'*': 3430, 3200, 3100, 2940, 1693, 1615.

30 Massespektrum (m/z)-. 780 (M-NO3), 717 (780-HN03).

Eksempel 2

Hyroxo(ethylenurinstof-N,C)-bis[cis-(trans-(d)-l,2-35 diaminocyclohexan)platin(II)]nitrat DK 166825 B1 i 3 r H 12© 5 /v'NV / \ θ 1 /Pt\ /P,\ I J 2I,03° 10 [ HN- 170 ml af en vandig opløsning indeholdende 3,43 g bis[hydroxo-cis-(trans-(d)-l,2-diannnocyclohexan)-platin(II)]nitrat (fremstillet på lignende måde som det i eksemplet Fremstilling 15 beskrevne) og 0,547 g ethylenurinstof blev omsat, og produktet behandledes som beskrevet i eksempel 1 til opnåelse af 0,9 g af titelforbi ndel sen som et farveløst pulver. Det kernemagnetiske resonansspektrum og det infrarøde spektrum var identiske med spektrerne for det som beskrevet i eksempel 1 opnåede 20 produkt.

Eksempel 3

Hydroxo(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(cis~l,2-diaminocylo-25 hexan ) pi at i η (11)]ni trat r H "12© 30 ^\Vh2 \ [ if /Ptx · /ptx J 2NO3®

Xhh2"""^ 35 L hn— 14 DK 166825 B1 0. 39 g ethylenurinstof blev sat til 200 ml af en vandig opløsning indeholdende 2,79 g bis[hydroxo-cis-(cis-l,2-diaminocyclohexan)platin(II)]nitrat (fremstillet på lignende måde som det i eksemplet Fremstilling beskrevne), og den re- 5 suiterende blanding blev omrørt ved 28°C i 13 dage under en nitrogenstrøm. Det uopløselige materiale i reaktionsblandingen filtreredes fra, og vandet afdampedes derpå under formindsket tryk til inddampn ing af den vandige opløsning til et volumen på ca. 100 ml. Denne koncentrerede opløsning frysetørredes til 10 opnåelse af et pulver. 4 ml vand og 100 ml ethanol blev sat til pulveret, og uopløseligt materiale opsamledes derpå ved filtrering. 600 ml diethylether blev sat til filtratet, og det resulterende præcipi tat- opsaml edes ved filtrering og blev kombineret med det forinden opsamlede uopløselige materiale. Det 15 resulterende kombinerede pulver blev påført på en søjle inde holdende ca. 500 ml "Diaion" CHP 20P-harpiks og søjlen elue-redes med vand. Det resulterende eluat blev frysetørret til opnåelse af titelforbi ndel sen som et farveløst pulver.

20 Infrarødt absorptionspektrum (KBr) Pmaxcm: 3430, 3200, 1690, 1615.

Eksempel 4 25 Hydroxo(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-(l)-l,2- diaminocyclohexan)platin(II)]nitrat 1,2 g ethylenuri nstof blev sat til 150 ml af en vandig opløsning indeholdende 10 mmol c i s-(trans-(1)-1,2-diaminocvclo-30 hexan)diaquaplatin(II)nitrat, og derpå tilsattes en tilstræk kelig mængde 1 N vandig opløsning af natriumhydroxid til indstilling af opløsningen pH-værdi til 7. Opløsningen omrørtes derpå ved 23°C i 10 dage, hvorpå den blev behandlet på samme måde som beskrevet i eks. 1 til opnåelse af 0,8 g af titelfor-35 bindeisen. Det kernemagnetiske resonansspektrum og det infra røde spektrum for det resulterende produkt var identisk med spektrerne for produktet, der blev opnået som beskrevet i eks.

1.

15 DK 166825 B1

Eksempel 5

Hoved mod hoved bis(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans~(l)- 1,2-diaminocyclohexan)pi at i η (11)]ni trat og hoved mod hale 5 bis(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-(l)-l,2-diaminocyclo-hexan)platin(II)]nitrat HH-—i -| 2© ” /‘Λ< nh2

C i /Pt\ /P,\ X J

15 L HH-1 HH-1 Ί 2©

20 I

PtC 1 2K03U

25 [ I

1-NH

Li (i) 6,8 g ethylenuri nstof blev sat til 400 ml af en vandig opløsning indeholdende 7,51 g bis[hydroxo-cis-(trans-(1)-1,2-30 di aminocyc1ohexan)p1 at i η (11) ]nitrat (der var fremstillet som beskrevet i eksemplet Fremstilling), og den resulterende blanding omrørtes under opvarmning deraf til 50 0 C i 16 timer. Ved afslutningen af dette tidsrum blev uopløseligt materiale i reaktionsblandingen filtreret fra, og vandet i filtratet af -35 dampedes under formindsket tryk til opnåelse af ca. 15 ml af en inddampet opløsning. Ca. 100 ml ethanol og ca. 500 ml d i -ethylether blev sat til denne inddampede opløsning, og præci- 16 DK 166825 B1 pitatet, som dannedes, blev opsamlet ved filtrering. Præcipi-tatet blev påført på en kromatograf i søjle indeholdende ca. 1 1 "Diaion" CHP 20P-harpiks og søjlen elueredes med vand. De to isomerer af titelforbindelsen (hoved mod hoved- og hoved mod 5 hale-isomererne) blev elueret separat, og de separate eluater frysetørredes. Der opnåedes 0,9 g isomer (1) fra den første eluering, medens 1,3 g isomer (2) opnåedes fra den anden elueri ng. Det er indtil videre i kke blevet identificeret, hvilken isomer, der er den ene eller den anden.

10

Isomer (1)

Kernemagnetisk resonansspektrum (400 MHz, D2O) 6 ppm: 15 0,93 (4H, triplet), 1,03 (2H, kvartet), 1,06 (2H, kvartet), 1,37 (4H, dublet), 1.80 (4H, dublet), 20 2,05 (4H, multiplet), 3,13 (4H, multiplet), 3,62 (4H, multiplet).

Isomer (2) 25

Kernemagnetisk resonansspektrum (400 MHz, D2O) δ ppm: 0,95 (4H, triplet), 1,05 (4H, multi pi et) , 30 1,35 (4H, dublet), 1.80 (4H, multiplet), 1,99 (IH, multiplet), 2,20 (3H, multiplet), 3,23 (4H, multiplet), 35 3,90 (4H, multiplet).

(i i) 0,34 g ethyl enur i nstof blev sat til 10 ml af en vandig opløsning indeholdende 1 mmol cis-(trans-(1)-di aminocyc1 o- 17 DK 166825 B1 hexan)diaquaplatin(II)nitrat, og derpå blev en til strække 1 i g mængde 1 N vandig opløsning af natriumhydroxid tilsat til indstilling af opløsningens pH-værdi til 7. Den resulterende opløsning omrørtes ved 28°C i 1 dag og blev derpå omrørt ved 5 5 0 e C i 16 timer. Reaktionsblandingen blev derpå behandlet på samme måde som i eks. 5 (i) ovenfor til opnåelse af 0,8 g isormer (1) og 0,12 g isomer (2), der har samme fysiske egenskaber som produkterne ifølge eks. 5 (i).

10 Eksempel 6

Hoved mod hoved bis(ethylenurinstof-N,0-)-bis[cis-(trans-(d}- 1,2-di aminocyc1ohexan)pi at i η (11)]ni trat og hoved mod hale bis(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-(d)-l,2-diaminocyclo- 15 hexan)p1 at i η (11)]ni t rat hk-1 Ί 2® ^ JH, n/X,/ JH2v ..

20 rv" h\ / R

I /X Il 2N03U

25 L HN—* 30 Γ HH-1 l2@ 30 /NH2V-1 ©

>C Xt TI 2N03O

*--HH

18 DK 166825 B1 (i) Den i eks. 5 (i) beskrevne procedure blev gentaget, men under anvendelse af bis[hydroxo-cis-(trans-(d)-l,2-diamino-cyc1ohexan)p1 ati η (11)]nitrat som udgangsmaterialet, til opnåelse af to isomerer af titelforbindelsen, hvorhos disse i so-5 raerers kernemagnetiske resonansspektrer er identiske med spek trerne for de respektive isomerer, der er opnået som beskrevet i eks . 5 (i) .

(i i) Den i eks. 5 (ii) beskrevne procedure blev gentaget, men 10 under anvendelse af en vandig opløsning indeholdende 1 mmol cis-(trans-(d)-l,2-diaminocyclohexan)diaquaplatin(II)nitrat som udgangsmateriale, til opnåelse af de samme to isomerer, som ovenfor er omtalt i eks. 6 (i).

15 Eksempel 7 680 mg sølvnitrat opløstes i 14 ml vand, og derpå blev 760 mg cis-dichlor(trans-l,2-diaminocyclohexan)platin(II) sat til opløsningen. Opløsningen blev omrørt natten over ved stuetem-20 peratur, medens den blev beskyttet mod lys v.h.a. aluminiumfolie. Ved afslutningen af dette tidsrum blev det resulterende præcipitat af sølvchlorid filtreret fra, og 344 mg ethylen-uri nstof blev derpå sat til det resulterende filtrat. En tilstrækkelig mængde 1 N vandig natriumhydroxidop1øsning blev 25 derpå sat til blandingen til indstilling af dens pH-værdi til 7. Blandingen omrørtes derpå ved stuetemperatur i 12 timer, hvorpå den blev inddampet ved afdampning under formindsket tryk til opnåelse af 3 ml af en koncentreret vandig opløsning. 70 ml ethanol og 60 ml diethylether blev sat til denne koncen-30 trerede opløsning, og det dannede præcipitat opsamledes ved filtrering til opnåelse af 435 mg af et platin-ethylurinstof-kompleks i form af et farveløst pulver. Dette kompleks er en blanding af dl-forbi ndel sen svarende til forbindelsen ifølge eks. 1 og dl-forbi ndel ser svarende til de to isomerer af for-35 bindeisen ifølge eks. 5.

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr) Vmaxcm~‘: 3200, 3100, 1690, 1630, 1390, 1130.

19 DK 166825 B1

Eksempel 8 312 mg sølvsulfat og 380 mg cis-dich1 or(trans-1,2-diaminocyc-lohexan)platin(II) blev suspenderet i 7 ml vand, og suspen-5 sionen omrørtes over et oliebad, som holdtes på en badtemperatur på 50°C i 4 dage, medens reaktionsblandingen beskyttedes mod lys v.h.a. aluminiumfolie. Det udfældede sølvchlorid blev filtreret fra, hvorpå 172 mg ethylenurinstof blev sat til filtratet. En tilstrækkelig mængde I N vandig natriumhydroxid-10 opløsning blev tilsat til indstilling af reaktionsblandingens pH-værdi til 7. Blandingen omrørtes derpå ved 50°C i 10 timer. Ved afslutningen af dette tidsrum inddampedes reaktionsblandingen ved afdampning under formindsket tryk til opnåelse af ca. 2 ml af en koncentreret vandig opløsning. 15 ml ethanol og 15 50 ml diethylether blev sat til denne koncentrerede opløsning til dannelse af et olieagtigt præcipitat. Isopropanol blev sat til det olieagtige præcipitat, og det resulterende pulverformede præcipitat blev derpå opsamlet ved filtrering til opnåelse af 376 mg af sulfatet af et ethylenurinstof-platin-20 kompleks i form af et farveløst pulver. Dette kompleks er en blanding af sulfaterne af dl-forbindelsen svarende til forbindelsen ifølge eks. 1 og af d1-forbi ndelserne svarende til de to isomerer af forbindelsen ifølge eks. 5.

25 Infrarødt absorptionsspektrum (KBr) vmaxcm_l: 3200, 3080, 1690, 1630, 1180.

Eksempel 9 30 Hydroxo(propylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-(d)-l,2- d i ami nocyclohexan)platin(II)]nitrat 35 20 DK 166825 B1 Γ Η -|2θ * Θ

10 L HNv^J

100 mg propylenurinstof blev sat til en vandig opløsning indeholdende 390 mg bi s[hydroxo-ci s-(trans-(d)-1,2-diaminocyclo-hexan)p1 at i η (11)1 ni trat (fremstillet på lignende måde som det 15 i eksemplet Fremstilling beskrevne), og man lod den resulterende blanding henstå ved 40^0 i en måned. Ved afslutningen af dette tidsrum afdesti lieredes vand fra reaktionsblandingen under formindsket tryk, og resten blev påfyldt på en kromatografisøjle indeholdende ca. 50 ml "Diaion" CHP 20P-harpiks. Søj-20 len elueredes derpå med vand, og eluatet frysetørredes til opnåelse af 302 mg af titelforbindelsen.

Kernemagnetisk resonansspektrum (270 MHz, D£0) δ ppm: 25 0,8-1,3 (8H, multiplet), 1,3-1,6 (8H, multiplet), 1,75-2,0 (4H, multiplet), 2,2-2,45 (2H, multiplet), 2,9-3,0 (2H, multiplet), 30 3,4-3,5 (2H, triplet).

Biologisk virkning

Ved de følgende forsøg var de benyttede forsøgsdyr 8 til 9 35 uger gamle hunmus tilhørende CDF^-stammen, der hver vejede 20-25 g. L1210 standardleukæmicellerne blev leveret af dr. T. Yamamoto fra the Institute of Medical Science, University og 21 DK 166825 B1

Tokyo, Japan, medens den c isp1 at inresi stente LI 21 O-cel 1e1 i nie (L1210/CDDP) blev leveret af dr. T. Tashiro fra the Cancer Chemotherapy Centre, Japanese Foundation for Cancer Research, Tokyo, Japan. Den cisplatinresistente cellelinies cisplatinre-5 sistensgrad i henseende in vitro følsomhed var 40 gange så stor som L1210-stamcel1 el iniens følsomhed.

Forsøg 1 10 CDF^-mus blev podet intraperi tonealt med L1210 celler (105 cel 1er/mus). Forbindelsen ifølge opfindelsen (forbindelsen fremstillet som beskrevet i eks. 1) og carboplatin blev hver opløst i 5¾ v/v vandig mannitol, medens cisplatin blev opløst i en 5% v/v opløsning af mannitol i fysiologisk saltvand.

15 Hvert lægemiddel blev injiceret intraperi tonealt på dagene 1 og 4 efter tumor implantation. Antallet af mus i hver forsøgsgruppe var 6.

Stigningen i levetid (ILS) blev beregnet som følger: 20 ILS* = [{St/Su) - 1] X 100 hvori: 25 S-t = vægtet mediantal af dages overlevelse for behandlede mus, og

Su = vægtet mediantal af dages overlevelse for ubehandlede mus.

30 Resultaterne er vist i tabel 1.

Forsøg 2

Procedurerne beskrevet i forsøg 1 blev gentaget nøjagtigt med 35 den undtagelse, at tumorcellerne var cisplatinresistente L1210/CDDP celler. Resultaterne er vist i tabel 2.

22 DK 166825 B1

Tabel 1 'Forbindelse Dosis Vægtændring Med.S.T. ILS Overleven-5 (mg/kg) (g) (dage) (*) de. på dag 42 1) 2) 3)

Ubehandlet 10 kontrol +1.9 8.4 - 0/6

Forbindelse 5 +2.6 9.0 7 0/6 ifølge 10 +2.8 11.0 31 0/6 15 eks. 1 20 +2.2 16.0 90 0/6 40 +0.4 35.0 317 2/6 80 +0.2 >41.7 >396 3/6 2Q 160 -3.0 >41.7 >396 3/6 240 - >41.9 >399 4/6 (2/6 .toksisk) 320 - 4.8 -43 0/6 25 (5/6, toksisk:) carboplatin 5 +1.3 9.0 7 0/6 10 +2.0 9.0 7 0/6 30 20 +0.8 9.0 7 0/6 40 +0.4 9.2 10 0/6 80 -0.5 10.3 23 0/6 35 DK 166825 Bl 23

Tabel 1 (fortsat) i 1 I - " i - i i 5 Forbindel- Dosis Vægtændring Med.S.T. ILS Overlévende se (mg/kg) (g) (da9a> (») da9 42 1) 2) 3) 10 cisplatin 0.625 +1.6 9.1 8 0/6 1.25 +2.5 9.7 15 0/6- 2.5 +1.7 13.3 58 0/6 5 -3.5 39.0 364 2/6 15 10 -5.5 10.3 23 0/6 (6/6. ) 20

Bemærkninger: oc 1) Ændring i legemsvægt fra dag 1 til dag 7

ώ O

2) Middeloverlevelsestid (dage) 3) Stigning i levetid 30 35 24 DK 166825 B1

Tabel 2 - S-- -r 5 Forbindelse Dosis Legemsvægt- Middelo- ILS(%) åverleven- (mg/kg) spring fra vexlevel·· de på dag dag 1 til sestid, 30 dag'7 dage 10 Ubehandlet - +2.6 9.1 - 0/12 kontrol

Forbindelse 5 +2.4 10.8 19 0/6 15 ifølge 10 +2.3 13.3 46 1/6 eks. 1 20 +2.2 20.0 120 2/6 40 -0.3 >30.0 >230 6/6 80 -0.5 >30.0 >230 6/6 20 160 -1.8 >30.0 >230 6/6 carboplatin 30 +1.2 9.9 9 0/6 60 -0.6 9.8 8 0/6 25 cisplatin 2.5 +1.0 9.3 2 0/5 5.0 -1.9 9.9 9 0/6 30 ----- 35

Claims (18)

1. Forbindelse med formlen (I): 5 T®

0 I /"Η2γ^| ΡΘ 10 l 1 /pk r /pt\ X ’n/p ^ ! "2·^ 15 kendetegnet ved, at A betegner en al kylengruppe med 2 eller 3 carbonatomer, 1.1 og L2 er ens eller forskellige og hver betegner vand, en nitration, en halogenidion, en perchloration, en sulfation, en 20 carbonation, en hydroxid i on, en methoxidion eller en ethoxid-ion, eller L1 og L2 tilsammen betyder en nitration, en chlo-ridion, en sulfat i on, en hydroxid i on, en ethoxidion, en perchloration eller en carbonation eller en gruppe med formlen (ID : (

30 HH Ίί <n> hvori A er som ovenfor defineret,

35 XP~ betegner en anion med valensen p, og n er 0, 1, 2 eller 3. DK 166825 B1

2. Forbindelse ifølge krav 1, k e n d e t e g n e t ved, at L1 og L2 betegner vand.

3. Forbindelse ifølge kravene 1 eller 2, kendeteg-5 net ved, at XP“ betegner en nitration, en perchloration, en sulfation eller en carbonation.

4. Forbindelse ifølge kravene 1 eller 2, k e n d e t e g -net ved, at XP~ betegner en nitration eller en sulfation. 10

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 1.1 og L2 tilsammen betegner en hydroxidion.

6. Forbindelse ifølge krav 1, k e n d e t e g n e t ved, at

15 Li og L2 tilsammen betegner nævnte gruppe med formlen (II).

7. Hydroxo(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-{l)-l,2-diami-nocyclohexan)platin(II)]nitrat.

8. Hydroxo(et hylen urinstof-N,0)-b i s[c i s-{trans-(d)-l,2~dianii- nocyclohexan)platin(II)]nitrat.

9. Hydroxo(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(cis-l,2-diaminocyc-lohexan)platin(II)]r. itrat. 25

10. Bis(ethylenurinstof-N,0)-bis[cis-(trans-(l)-l,2-diamino-cyclohexan)platin(II)]nitrat.

111 Bis(ethylenurinstof-N,G)-bis[cis-(trans-(d)-l,2-diamino-30 cyclohexan)platin(IT)]nilrat.

12. Hydroxo{propy1enuri ns tof-N,0-)-bi s[cis-(trans-(d)-1,2-di-ami nocyclohexan)platin(II)]nitrat.

13. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbi ndel se ifølge ethvert af kravene 1 til 12, kendetegnet ved, at den omfatter omsætning af et platinkompleks med formlen (III): DK 166825 B1 >PI@ • ΓΎ 'X', m xy'_ 10 hvori XP_ er som defineret i krav 1, n' er 0, 1 eller 2, og Y og Y' er ens eller forskellige og hver betegner vand, en nitration, en hydroxid i on eller en perchloration, eller Y og Y' 15 er forbundet med hinanden til dannelse af en sulfat- eller carbonation eller en gruppe med formlen (IV): H 20 /0\ 25 med en forbindelse med formlen (V) - H 30 / \ 0=c<f A (V) H 35 hvori A er som defineret i krav 1.

14. Farmaceutisk middel omfattende et antitumormiddel og en farmaceutisk acceptabel bærer eller et farmaceutisk accepta- DK 166825 B1 belt fortyndingsmiddel, kendetegnet ved, at antitumormidlet er mindst én forbindelse ifølge ethvert af kravene 1 til 12. 5 10 15 20 25 30 35