EA005405B1 - Применение опухолевых клеток, трансфицированных днк, кодирующей lag-3 или cd4, для производства лекарственного препарата для профилактики или лечения злокачественных опухолей - Google Patents
Применение опухолевых клеток, трансфицированных днк, кодирующей lag-3 или cd4, для производства лекарственного препарата для профилактики или лечения злокачественных опухолей Download PDFInfo
- Publication number
- EA005405B1 EA005405B1 EA200200565A EA200200565A EA005405B1 EA 005405 B1 EA005405 B1 EA 005405B1 EA 200200565 A EA200200565 A EA 200200565A EA 200200565 A EA200200565 A EA 200200565A EA 005405 B1 EA005405 B1 EA 005405B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cells
- tumor
- lac
- mice
- mca
- Prior art date
Links
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 57
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 title abstract description 6
- 101100510617 Caenorhabditis elegans sel-8 gene Proteins 0.000 title 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 29
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 74
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 3
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims 1
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 abstract 2
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 89
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 13
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 11
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 4
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N Chromium-51 Chemical compound [51Cr] VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000016844 Immunoglobulin-like domains Human genes 0.000 description 2
- 108050006430 Immunoglobulin-like domains Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000850434 Homo sapiens V-type proton ATPase subunit B, brain isoform Proteins 0.000 description 1
- 101000670953 Homo sapiens V-type proton ATPase subunit B, kidney isoform Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N Methylcholanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC4=CC=C(C)C(CC5)=C4C5=C3C=CC2=C1 PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100033476 V-type proton ATPase subunit B, brain isoform Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000145 adjuvantlike effect Effects 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- -1 fluorescein isocyanate Chemical class 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 230000012177 negative regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000002311 subsequent effect Effects 0.000 description 1
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001000 thyrotroph Anatomy 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- YNDXUCZADRHECN-JNQJZLCISA-N triamcinolone acetonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(C)(C)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O YNDXUCZADRHECN-JNQJZLCISA-N 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005851 tumor immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к применению опухолевых клеток, трансфицированных ДНК, кодирующей по меньшей мере один лиганд МНС класса II, для производства лекарственного препарата для профилактики или лечения патологического состояния у млекопитающего, вовлекающего антиген-специфичный иммунный ответ, где патологическое состояние представляет собой злокачественную опухоль и лиганд МНС класса II представляет собой LAG-3 или CD4 или производное, мутантную форму или фрагмент LAG-3 или CD4, полученные, как раскрыто в описании.
Description
Настоящее изобретение относится к области профилактики или лечения патологических состояний, вовлекающих антиген-специфичный иммунный ответ.
В настоящее время установлено, что белки, кодируемые участком МНС (главный комплекс гистосовместимости) класса II, вовлечены во многие стороны иммунных реакций, включая взаимодействие между различными типами лимфоидных клеток, таких как лимфоциты и антиген-презентирующие клетки. Различные исследования также продемонстрировали, что и другие механизмы, не связанные с участием молекул ί.Ό4. участвуют в проявлении эффекторной функции Т-хелперов.
Ген активации лимфоцитов-3 (ЬАС-3), экспрессируемый СЬ-4 и СО8-позитивными активированными Т-клетками человека, равно как и инактивированными клетками ΝΚ, кодирует состоящий из 503 аминокислот полипептид, относящийся к мембранным белкам I типа, включающий четыре внеклеточных иммуноглобулиноподобных домена (1§8Р) [1], являющийся лигандом молекул МНС класса II [2]. Анализ этой аминокислотной последовательности позволил выявить отчетливые сегменты идентичности по сравнению с аминокислотными последовательностями, обнаруживаемыми в соответствующих участках СЭ4, хотя общий уровень гомологии аминокислотных последовательностей СЭ4 и ЬАС-3 человека практически не превосходит контрольный уровень (примерно 20%-ная идентичность последовательностей полипептидов). Также имеется несколько внутренних участков гомологии последовательностей в молекуле ЬАС-3 между доменами 1 (Ό1) и 3 (Ό3), равно как и между доменами 2 (Ό2) и 4 (Ό4): это подтверждает, что ЬАС-3 эволюционировал так же, как и СЭ4, по пути дупликации соответствующих генов, при том, что предковой являлась структура с двумя доменами ЦМ [1]. Кроме того, гены ЬАС-3 и СЭ4 локализованы очень близко друг к другу в дистальной части короткого плеча хромосомы 12 [3]. Таким образом, гены (и белки) ЬАС-3 и СЭ4 могут быть определены как «двоюродные братья» в составе суперсемейства иммуноглобулиноподобных белков [2].
Как и СЭ4, ЬАС-3 человека включает Ц-подобные внеклеточные домены, при том, что в доменах 2 и 4 имеются мотивы \УхС: однако, отличием от СЭ4 является присутствие дополнительной выпетленной последовательности в составе 1-го домена (распознаваемой моноклональным антителом 17В4) и цитоплазматического богатого пролином мотива (ЕР-повторы) в составе ЬАС-3 человека (НЬАС-3). Недавно ген активации лимфоцитов-3 мыши (шЬАС-3) был клонирован и был обнаружен приблизительно 70%ный уровень гомологии с БЬАС-3: в частности, имеется тот же богатый пролином цитоплазматический хвост.
Антиген-специфичная стимуляция СО4-позитивных Т-клеточных клонов в присутствии моноклонального антитела против ЬАС-3 приводит к усилению клеточной пролиферации и выработки цитокинов [5]. Была подтверждена регуляторная роль БЬАС-3 в активации СЭ4-несущих Т-лимфоцитов за счет перекрестного связывания молекул МНС класса II, экспрессируемых Т-клетками, с химерными белками ЬАС-3/Ц [6]. Взаимодействие между ЬАС-3 и молекулами МНС класса II подавляет сигналы, передаваемые молекулами МНС класса II, экспрессируемыми СО4-позитивными Т-лимфоцитами (ослабление пролиферации клеток и выработки цитокинов): это подтверждает, что и ЬАС-3, и МНС класса II являются эффекторными молекулами механизма негативной регуляции иммунных ответов, опосредуемых Тхелперными лимфоцитами. Для химерного белка НЬАС-3/Ц было показано связывание чужеродных молекул МНС класса II (мыши и обезьяны). Кроме того, предполагается, что шЬАС-3 опосредует позитивный сигнал в эффекторных клетках: на это указывает то, что трансгенные мыши, несущие нулевую мутацию в гене ЬАС-3, характеризуются нарушением в пуле клеток ΝΚ [7].
Линии опухолевых клеток мышей, методами генной инженерии измененных таким образом, чтобы экспрессировать мембранные (В7.1, В7.2, СО95Ь и др.) или секретируемые молекулы (интерлейкин-2, интерлейкин-12 и др.), часто используют в исследованиях иммунных ответов или противоопухолевых проявлений. Такой подход показывает, что многие опухолевые клетки являются потенциально антигенными [9] и становятся иммуногенными тогда, когда они экспрессируют какие-либо молекулы. Полученные в эксперименте у мышей опухоли классифицируют как иммуногенные тогда, когда, после однократной инъекции сингенным мышам нереплицирующихся клеточных вакцин, эти мыши вырабатывают эффективный иммунный ответ против последующих летальных воздействий. Опухоли, которые не обеспечивают сохранения такой остаточной имуногенности, определяются как слабоиммуногенные или неиммуногенные.
Противоопухолевые иммунные ответы, в первую очередь, опосредуются Т-лимфоцитами [12]. Недавние исследования подтвердили дефицит в презентировании антигенов и прилигровании Т-клеток, что создает проблемы для практического воплощения идеи универсальной противоопухолевой вакцины. Действительно, было установлено, что трансфекция опухолевых клеток генами, кодирующими различные цитокины, такие как ГЬ-2, ГЬ-4, ГЬ-12 или СМ-С8Е, или генами, кодирующими костимуляторные молекулы, такие как В7, не только приводит к первичному отторжению модифицированных клеток, но и часто обеспечивает защитный иммунитет против последующих воздействий немодифицированными опухолевыми клетками [13].
Функциональные антиген-презентирующие клетки (АРС) способны принимать, процессировать и презентировать антиген Т-лимфоцитам в контексте костимуляторных сигналов, необходимых для акти
- 1 005405 вации Т-лимфоцитов, что приводит к оптимальному презентированию антигена. В частности, достоверно установлено, что позитивные по молекулам МНС класса II дендритные клетки играют принципиальную роль в процессировании и презентировании антигенов в иммунной системе. Заявители высказали гипотезу, в соответствии с которой опухолевая иммуногенность должна возрастать, если опухоль удастся модифицировать так, чтобы она непосредственно направляла АРС организма-хозяина, такие как макрофаги и дендритные клетки. Действительно, было сообщено о том, что перекрестное связывание молекул МНС класса II, специфически экспрессируемых такими клетками, с использованием моноклонального антитела или суперантигена, опосредует сигналы, приводящие к выработке ΤΝΕα и [Щ-12 [14, 15]. Ранее было сообщено, что ген активации лимфоцитов-3 (ЬЛС-3), находящийся в составе локуса СЭ4 [1, 6], кодирует белок, который связывается с молекулами класса II главного комплекса гистосовместимости человека и мыши с большим уровнем аффинности по сравнению с СЭ4 [17, 6].
Заявители настоящего изобретения исследовали, может ли экспрессия ЬЬАС-3, СЭ4 человека (11СЭ4) и шЬЛС-3 на трех МНС класса 11-положительных опухолях мыши (слабоиммуногенная саркома МСА-205 и неиммуногенная аденокарцинома Τδ/Λ+Κ,ΕΝί,Α) опосредовать иммунный ответ таким образом, чтобы отторгать опухоль у мыши с индуцированием системного иммунитета.
В результате, заявители установили, что ЬАС-3 человека или мыши в случае его экспрессии в виде мембранного белка в линии клеток солидной опухоли или в случае его инокуляции мышам в виде растворимого белка индуцирует формирование иммунитета к наиболее злокачественным опухолям мыши. Иммунитет оказался зависимым от Т-лимфоцитов и антиген-специфичным.
Авторы также исследовали роль СЭ4 и обнаружили, что СЭ4 человека (ЙСЭ4) также индуцирует системный противоопухолевый ответ.
Индуцированный иммунитет, как было установлено, опосредуется Т-лимфоцитами, поскольку такой же противоопухолевый ответ был выявлен у мутантных мышей линии иибе, у которых из-за аплазии гипофиза отсутствуют Т-лимфоциты.
Противоопухолевый эффект был также обнаружен, когда были использованы различные линии опухолевых клеток, проявляющих различные варианты собственной иммуногенности, равно как и различные линии мышей, экспрессирующих различные гены комплекса МНС.
Кроме того, индуцируемые белками ЬЬАС-3 и 11СЭ4 эффекты были обнаружены тогда, когда линии опухолевых клеток, экспрессирующих ЬЬАС-3 и 11СЭ4. были инъецированы в отличающемся участке по сравнению с местом исходной инокуляции у линий опухолевых клеток дикого типа.
Далее, системное введение растворимого ЬЬАС-3 напрямую индуцирует подавление роста опухоли ίη νίνο.
Все обозначенные выше результаты показывают, что ЬАС-3 и СЭ4 способны обусловливать антиген-специфичный, опосредуемый Т-лимфоцитами иммунный ответ и могут быть использованы в иммунотерапии с целью предотвращения развития злокачественных опухолей в популяциях, характеризующихся соответствующим риском или, в более общем смысле, для любых иммунотерапевтических целей, которые основываются на антиген-специфичном, опосредованном Т-клетками иммунном ответе, а также показывают, что ЬАС-3 также применим в качестве средства для подавления роста опухоли ίη νίνο.
Далее заявители продемонстрировали, что растворимый ЬАС-3 в случае введения одновременно с антигеном, по отношению к которому вырабатывается иммунный ответ, способен функционировать в качестве вакцинного адъюванта.
Такое проявление может быть объяснено улучшением презентирования данного антигена специальными АРС (дендритными клетками и макрофагами), расположенными под кожей, что опосредуется молекулами МНС класса II.
Следовательно, поскольку индукция СЬ8'-Т-клеточного иммунитета вовлечена в вирусные (например, ВИЧ-СПИД, гепатит или герпес) и внутриклеточные паразитарные и бактериальные (например, проказа, туберкулез) инфекции и злокачественные опухоли, ЬАС-3 может быть, в частности, использован для терапевтической вакцинации против патогенных агентов, связанных с этими заболеваниями, равно как и для лечения злокачественных опухолей.
В соответствии с одним из аспектов настоящее изобретение касается использования лиганда молекул МНА класса II и лигандов подобных молекул для производства лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения патологических состояний, вовлекающих антиген-специфичный иммунный ответ, предпочтительно антиген-специфичный, опосредуемый Т-лимфоцитами иммунный ответ.
В первом варианте молекулой, связывающейся с МНС класса II, является белок ЬАС-3, равно как и его производные, способные связываться с лигандом ЬАС-3, входящим в МНС.
В контексте настоящего изобретения под производными ЬАС-3 подразумеваются мутанты, варианты и фрагменты ЬАС-3, а именно растворимые фрагменты ЬАС-3, которые сохраняют способность самого ЬАС-3 связываться с молекулами МНС класса II.
Таким образом, могут быть использованы следующие формы ЬАС-3:
полный белок ЬАС-3;
растворимый фрагмент полипептида ЬАС-3, включающий по крайней мере один из четырех внеклеточных иммуноглобулиноподобных доменов, а именно растворимая часть ЬАС-3, включающая внекле
- 2 005405 точный сегмент, протяженный от 23-й аминокислоты до 448-й аминокислоты последовательности ЬАС-3, представленной в заявке на выдачу патента Франции № 90-00-126;
фрагмент ЬАС-3, включающий по сути полные первый и второй домены;
фрагмент ЬАС-3, включающий по сути полные первый и второй домены или все четыре домена, такие, которые определены в международной патентной заявке \¥О 95/30750, такой фрагмент, как мутантный вариант растворимого ЬАС-3 или его фрагмент, включающий внеклеточные домены Ό1 и Ό2, включающие замену аминокислоты по одному из следующих положений:
73-е положение, в котором аргинин заменен на глутаминовую кислоту;
75- е положение, в котором аргинин заменен на аланин или глутаминовую кислоту;
76- е положение, в котором аргинин заменен на глутаминовую кислоту; или сочетание одной или нескольких таких замен;
30-е положение, в котором аспарагиновая кислота заменена на аланин;
56-е положение, в котором гистидин заменен на аланин;
77- е положение, в котором тиразин заменен на фенилаланин;
88-е положение, в котором аргинин заменен на аланин;
103-е положение, в котором аргинин заменен на аланин;
109-е положение, в котором аспарагиновая кислота заменена на глутаминовую кислоту;
115-е положение, в котором аргинин заменен на аланин;
или делеция участка, находящегося между 54-м и 66-м положениями, или сочетание двух или большего числа таких замен;
такие мутантные варианты описаны в ΡΝΑ8 (Ргос. ΝαΙΙ. Асаб. 8οί. И8А - июнь 1997 [4]);
или физиологический вариант ЬАС-3, включающий растворимый белок с молекулярной массой 52 кДа при наличии в нем доменов Ό1, Ό2 и Ό3.
В соответствии со вторым вариантом настоящего изобретения белком, связывающимся с МНС класса II, является СЭ4 или его производное, способное связываться с лигандом СЭ4 из состава молекул МНС класса II.
Производные СЭ4 таковы же, которые были определены для производных ЬАС-3. Т.е. они являются мутантными вариантами и фрагментами СЭ4, а именно растворимыми (не связанными с мембраной) фрагментами СЭ4, которые сохраняют способность СЭ4 связываться с молекулами МНС класса II.
ЬЛС-3 и СЭ4, а именно НЬЛС-3 и 11СЭ4 или их производные, такие, которые были определены выше, могут быть введены в качестве рекомбинантных составляющих, экспрессирующих такие молекулы, например, в составе трансфицированных клеток или рекомбинантных вирусов.
Настоящее изобретение относится к применению клеток, таких как опухолевые клетки, трансфицированных молекулой ДНК, кодирующей по крайней мере один лиганд молекул МНА класса II, такой как СЭ4 или ЬЛС-3, или их производные, для производства лекарственного средства, предпочтительно лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения патологических состояний, связанных с антиген-специфичным иммунным ответом, таким как антиген-специфичный, опосредованный Т-лимфоцитами иммунный ответ, или для лечения таких патологий, как злокачественные опухоли.
Трансфицированные клетки предпочтительно являются клетками млекопитающих, а в частности опухолевыми клетками млекопитающих.
В соответствии с предпочтительным вариантом белок, связывающийся с молекулами МНС класса II, а именно СЭ4 или ЬАС-3 или их производные, вводят в свободном виде, а именно в растворимой форме, путем системного введения, например, с помощью подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекций.
Лекарственное средство в соответствии с настоящим изобретением может быть использовано в качестве вакцины для профилактики заболеваний, связанных с антиген-специфичным иммунным ответом, предпочтительно с опосредованным Т-лимфоцитами иммунным ответом.
В этом случае его вводят вместе с подходящим наполнителем наряду с одним или несколькими антигенами, против которого (которых) формируется данный иммунный ответ. Антиген может быть инактивированным или ослабленным инфекционным началом или очищенным антигеном, например, полученным методами конструирования рекомбинантных белков, таким как антиген инфекционного агента или опухолевый антиген, которые предпочтительно способны обусловливать опосредованный Тлимфоцитами иммунный ответ.
Вакцина может быть использована для предотвращения возникновения у субъекта инфекционного заболевания, такого как вирусное, бактериальное или паразитарное заболевание, если соответствующий инфекционный агент обусловливает формирование специфичного иммунного ответа, предпочтительно иммунного ответа, опосредованного Т-лимфоцитами.
Вакцина может быть использована для лечения пациента от инфекционного заболевания, такого, которое упоминалось выше, связанного с опосредованным Т-лимфоцитами иммунным ответом, а именно иммунным ответом, опосредованным СО8-позитивными Т-клетками.
- 3 005405
Примеры заболеваний, связанных с формированием опосредованного Т-лимфоцитами иммунного ответа, представлены в нижеследующей таблице._________________________
| Тип патогена | Возбудитель | Заболевания |
| Вирусы | ВИЧ | ВИЧ-инфекция |
| НВУ, НСУ | Гепатиты | |
| Η3ν, СМУ, ННУ | Саркома Капоши, отторжения | |
| при трансплантациях | ||
| Внутриклеточные | Ь1зЬег1а | Листериоз |
| бактерии | МусоЬасЬегха | Проказа, туберкулез |
| Внутриклеточные | Р1а5той1ит | Малярия |
| паразиты | И т.д. | |
| Онкогены | Большинство карцином, | |
| И т.д. | меланом, лейкозов |
В этих случаях антиген распределяется по клеткам и соответствующие пептиды загружаются на молекулы МНС класса I и презентируются на поверхности таких клеток, где они распознаются 008несущими Т-клетками. Данные, полученные заявителями, показывающие, что молекулы ЬАС-3/1д индуцируют эффективный Т-клеточный иммунный ответ у животных и стимулируют незрелые дендритные клетки и макрофаги ίη νίΐτο, отчетливо подтверждают, что белок ЬАС-3 является адъювантом Т-клеток в ситуациях, когда он взаимодействует с молекулами МНС класса II на специальных клетках АРС.
Вакцина может быть также использована для защиты субъекта от злокачественной опухоли, причем как солидной опухоли, так и лейкоза.
Также вакцина может быть использована для лечения пациента от злокачественной опухоли.
В этом случае белок, связывающийся с молекулами МНС класса II, а именно ЬАС-3 или ί.Ό4. вводят субъекту (реципиенту) подкожно или внутрикожно или в форме назального аэрозоля наряду с одним или несколькими антигенами, способными обусловливать иммунный ответ, предпочтительно опосредованный Т-лимфоцитами иммунный ответ. Антиген может быть пептидом, липопротеином, рекомбинантным белком или молекулой ДНК, кодирующей такие антигены.
Противоопухолевая вакцина может быть привита в популяциях, характеризующихся рисками, которые определяют генотипически (профилактическая вакцина), или пациентам (лечебная вакцина), у которых имеется опухоль или имеется высокая степень риска ее рецидива после хирургического вмешательства.
Если вакцина используется в качестве стандартной (профилактической) вакцины или лечебного препарата, она может быть введена в виде голой плазмиды [19], включающей последовательность ДНК, кодирующей ЬАС-3 или 004, предпочтительно помещенную под контроль сильного промотора.
Также предпочтительным является наличие в составе плазмиды ДНК, кодирующей антиген, по отношению к которому формируется иммунный ответ.
Нижеследующие примеры характеризуют активность ЬАС-3 и 0Ό4 в связи с профилактикой или лечением патологических состояний, вовлекающих опосредованный Т-лимфоцитами иммунный ответ.
Для лучшего понимания настоящего изобретения можно обратиться к прилагающимся фигурам, где фиг. 1 показывает средний размер опухолей у мышей С57ВЬ/6, зараженных опухолевыми клетками МСА-205 дикого типа (МСА ^Т), опухолевыми клетками МСА-205, трансфицированными 110Ό4 (МСА ЙСО4), опухолевыми клетками МСА-205, трансфицированными 11БАС-3 (МСА ЬЬАС-3);
фиг. 2 показывает результаты (средний размер опухолей), полученные после повторной стимуляции тех же мышей опухолевыми клетками МСА дикого типа в минимальной опухолеродной дозе;
фиг. 3 показывает результаты (средний размер опухолей), полученные после повторной стимуляции тех же мышей сторонней линией опухолевых клеток МС38;
фиг. 4 показывает результаты (средний размер опухолей), полученные при использовании другой линии мышей (ВАЬВ/е) и другой линии опухолевых клеток (Т8/А) как дикого типа (Т8/А дикий тип), так и трансфицированных 110Ό4 (Т8/А ЙСО4) или 11БАС-3 (Т8/А ЬЬАС-3);
фиг. 5 показывает результаты (средний размер опухолей), полученные на существующих опухолях, на которые воздействовали различными дозами клеток МСА, экспрессирующих 11БАС-3;
фиг. 6 показывает результаты (средний размер опухолей), полученные с использованием растворимого ЬАС-3, вводимого наряду с клетками МСА (МСА \\1 - дикий тип; МСА \\1 + 25 мкг ЬАС-3, и МСА \\1 + 250 мкг ЬАС-3);
фигура сбоку от рамки фиг. 6 отображает долю мышей, у которых развилась опухоль;
фиг. 7 и 8 показывают данные об экспрессии ЬАС-3 на мембране инфильтрующихся в опухоль лимфоцитов (ТГЬк у 5 пациентов (Р1-Р5), у которых имеется карцинома почечных клеток (РСС));
фиг. 9 демонстрирует отторжение 11ЬАС-3 -позитивных опухолевых клеток, опосредуемое СО8позитивными лимфоцитами;
а: ЕАС8-анализ (с помощью клеточного флуоресцентного сортера) экспрессии СО8 инфильтрующимися в опухоли лимфоцитами (ИОЛ) у контрольных мышей (МСА-205 дикого типа) по сравнению с ИОЛ мышей варианта МСА-205 + 11БАС-3;
- 4 005405
Ь: СО8-позитивные Т-лимфоциты участвуют в контроле роста опухоли Т8/А ЬЬАС-3. Мышам внутрибрюшинно инъецировали 200 мкг очищенного СЭ4- или СЭ8-специфичного моноклонального антитела в дни -3, -2, -1, +4 и +8. Опухолевые клетки Т8/А дикого типа или Т8/А ЬЬАС-3 (МТЭ) были инъецированы подкожно в 0-й день. Данные показаны как средние ± среднее квадратичное отклонение (з.е.) по 5 мышам в каждой группе отдельного эксперимента. Эти эксперименты были проведены в двух повторностях и были получены сходные результаты;
с: увеличенная активность противоопухолевых СТЬ у мышей, которые проявляют отторжение клеток ЬЬАС-3/Т8/А. Мышам вводили подкожные трансплантаты 50 тыс. клеток ЬЬАС-3/Т8/А, а затем проводили их повторную стимуляцию на 30-й день с использованием 250 тыс. исходных клеток Т8/А. Селезенки были взяты на 60-й день жизни безопухолевых мышей, и спленоциты культивировали в течение 6 дней с отмеченными клетками-мишенями, которые были облучены. Цитолитическая активность в отношении отмеченных клеток-мишеней была протестирована в стандартном 4-часовом тесте с выходом радиоактивного хрома-51 при различных соотношениях эффектор:мишень (Е:Т). Показаны результаты эксперимента на 2 особях мышей. Эти эксперименты были осуществлены в двух повторностях на 4 особях и были получены сходные результаты;
фиг. 10 показывает данные (средний размер опухоли) по мышам (20 особей линии С57ВЬ/6), которым трансплантировали клетки МТЭ, сингенных опухолевым клеток МСА-205, которым проводили однократное введение вакцины, содержащей ЬАС-3/1д. На 6-й день были сформированы 4 группы по 5 мышей, которым проводили однократное подкожное введение вакцины (200 мкл). Антиген привносили жестко облученными (100 Гр) клетками МСА-205.
Эксперименты, иллюстрирующие данные примеры, были проведены с использованием следующих материалов и методов.
Материалы и методы
1. Линии опухолевых клеток.
Использованные линии опухолевых клеток, позитивные по классу I и негативные по классу II МНС, были такими: слабоиммуногенная, индуцированная метилхолантреном линия саркомных клеток МСА205 (сингенная мышам линии С57ВЬ/6 Н-2Ь); иммуногенная линия клеток почечной карциномы ΚΕΝΤΆ; и неиммуногенная линия клеток недифференцированной спонтанной аденокарциномы молочной железы Т8/А (обе сингенны мышам линии ВАЬВ/с Н-2'1). Линия клеток карциномы толстой кишки МС38 (сингенная мышам линии С57ВЬ/6) была использована в экспериментах по повторной стимуляции в качестве контрольной опухоли. Клетки поддерживали при 37°С во влажной атмосфере воздуха при 10% СО2 в полной среде (культуральная среда ΚΡΜΙ-1640 с добавлением глутамина, пирувата натрия, пенициллина и стрептомицина, 10% освобожденной от эндотоксинов околоплодной сыворотки теленка и 0,05 мМ 2-βмеркаптоэтанола). Для экспериментов по иммунному окрашиванию и в экспериментах ίη νίνο клетки отбирали из соответствующих культуральных емкостей с фосфатным буфером, содержащем 1 мМ ЭДТА. Перед проведением подкожной инъекции клетки промывали трижды холодным фосфатным буфером (1х) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки не культивировали на протяжении более 2 недель.
2. Мыши.
Самки мышей линии С57ВЬ/6 в возрасте 6 или 8 недель были приобретены в фирме 1ЕЕКА-СКЕЭО ЬаЬ. (Ьуоп, Франция). Самки мышей линии ВАЬВ/с в возрасте 4 или 8 недель были приобретены в фирме ΙΑΝνίΕΚ ЬаЬ. (Франция). Все мыши содержались в условиях, свободных от конкретных патогенов. Самки мышей линии пибе были приобретены в виварии ΙηκΙίΙι,ιΙ СиЛатс Коиззу и содержались в защищенной микросреде.
3. Генетические конструкции.
кДНК ЬЬАС-3, шЬАС-3 и 11СЭ4 были клонированы в вектор, несущий ген гигромициновой резистентности (клонирующими свитами являлись ХЬа1-сайт для ЬЬАС-3 и 11СЭ4 и Хйо1-сайт для шЬАС-3), при помещении под контроль промотора 8Κα [18]. В качестве негативного контроля использовали клонирование кДНК ЬЬАС-3 в противоположной ориентации. Все линии опухолевых клеток (2,5 млн клеток) использовали для трансфекции путем электропорации с использованием устройства Еигодейес (Бельгия): клетки МСА-205 при 200 В, клетки Т8/А и ΚΕNСΑ при 300 В, при сопротивлении 1500 мкФ и неограниченном сопротивлении шунта. Трансфектанты селектировали в присутствии гигромицина-В (81дша); трансфектанты МСА-205 при концентрации 100 мкг/мл, а трансфектанты клеток ΚΕNСΑ и Т8/А при 200 мкг/мл. Резистентные клетки, экспрессировавшие трансфицированные молекулы, были идентифицированы с использованием цитофлуориметра Е1Ие (СоиЙег, Н1а1еай, ЕЬ, США) и клонированы путем ограничивающего разведения. В данном анализе использовали лучший клон для каждой из конструкций в случае каждой линии опухолевых клеток.
4. Цитофлуориметрический анализ.
Резистентные клетки, экспрессирующие трансфицированные молекулы, были окрашены путем непрямой иммунофлуоресценции с использованием насыщающих количеств очищенных или взятых из асцитной жидкости моноклональных антител. Вначале клетки инкубировали с моноклональными антителами: 17В4 (антитело, специфичное в отношении ЬЬАС-3) [2], ОКТ4 (антитело, специфичное в отно
- 5 005405 шении 11004), использовавшаяся в качестве негативного контроля преиммунная сыворотка кролика (обозначалась как РИ5) и иммунная сыворотка кролика к тЬАС-3 (обозначена как !8). Экспрессию молекул классов I и II МНС мыши на опухолях выявляли с использованием следующих моноклональных антител: 34-1-23 - в отношении Н-2 Кб и Ό2; 28-8-68 - в отношении Н-2 КЬ и ЭЬ: 14-4-48 (в отношении Еб); М50114 (в отношении Ш и ГЕ).
Затем клетки промывали и инкубировали с соединенной с МТС (флуоресцинизотиоцианат) козьей антимышиной сывороткой (САМ Сои1Гег) или соединенной с МТС козьей антикроличьей сывороткой (САК 8ои111егп Вю1ес11по1од1е5 Шс.). Для анализа присутствия инфильтрующихся клеток или восполнения клеток на периферии опухоли некоторые мыши были забиты, а их опухоли размацерированы. Клетки окрашивали путем прямой иммунофлуоресценции с использованием 17В4-НТС или следующих моноклональных антител (РЬагтшдеп): анти-тСО4-РЕ (Ь3Т4), анти-тСЭ8 (Ьу-2 и Ьу3.2), анти-тNΚ (2В4) и анти-тСО22 (ЬуЬ-8.2). Клетки отсортировывали с использованием цитофлуориметра ЕШе (СоиНег).
Позитивные клеточные линии затем клонировали путем ограничивающего разведения ЬАС-3 позитивных или СО4-позитивных клонов, а полученные клоны были заморожены для проведения дальнейшего анализа.
Для создания растворимых молекул ЬАС-3 внеклеточные домены в составе ЬЬАС-3 и тЬАС-3 были присоединены к Ес-сегментам иммуноглобулинов ЫдС! и т[дС2а, соответственно, в соответствии с описанным ранее [6]. Итоговые рекомбинантные белки - НЬЛС-Л/Ц и тЬДС-Л/Ц - были получены в клетках СНО и очищены на колонках с протеином А.
5. Эксперименты с опухолями ίη νί\Ό.
5.1. Достижение роста опухолей и вакцинация.
Внедрение линий опухолевых клеток было осуществлено подкожно с использованием минимальной опухолеродной дозы (МОД) - 20 тыс. клеток на 1 мышь для линии МСА-205, 50 тыс. клеток для линии Т8/А и 100 тыс. клеток для линии КЕNСА, - или с использованием 5-кратной МОД. Мышам, у которых не развивалась опухоль в течение 30 дней после проведения инъекции, проводили повторную стимуляцию исходной линией опухолевых клеток (5-кратная МОД). Клетки МС38 (карцинома толстой кишки) были использованы в количестве 100 тыс. для индукции контрольной опухоли у мышей линии С57ВЬ/6, которые отторгали опухоль Т8/А. Опухолевые клетки инъецировали согласованным по возрасту, ранее не подвергавшимся каким-либо подобным воздействиям мышам линии С57ВЬ/6 и ВАЬВ/с.
Рост опухолей контролировали 2-3 раза в неделю путем измерения двух линейных параметров опухоли (перпендикулярных друг к другу) с использованием штангенциркуля. В день проведения анализа опухоли ίη у1уо клетки анализировали цитофлуориметрически и ставили тест на пролиферацию ίη убго.
5.2. Модели лечения опухолей.
В 0-й день линии опухолевых клеток дикого типа были инокулированы подкожно в левый бок (МОД). В 0-й, 3-й или 6-й день ЬАС-3-позитивные опухолевые клетки инъецировали в правый бок (МОД или 5-кратная МОД) с целью определения противоопухолевого действия на нетрансфицированные клетки, расположенные в удаленной части тела. Рост опухолей контролировали так же, как это было описано выше.
5.3. Для цитометрического анализа мышей инокулировали подкожно 5-кратной МОД опухолевых клеток в соответствии с описанным выше. На 8-й день опухоли размецерировали и тестировали с использованием моноклональных антител СО3-РЕ, СО4-РЕ, СО8-РЕ, СО80-ЕГТС, СО86-ЕТТС, 2В4-РЕ (клетки ΝΚ), СЭ22-РЕ (В-клетки) или ЬЬАС-3-ЕТТС с использованием цитофлуориметра Е111е (Со111ег).
5.4. Для истощения лимфоцитов мышам внутрибрюшинно вводили 200 мкг очищенного [18] антиСЭ4 (УТ8 191.1.2) или анти-СЭ8 (УТ8 169.4.2.1) моноклонального антитела в дни -3, -2, -1, +4 и +8. Опухолевые клетки дикого типа или ЬЬАС-3-Т8/А были инокулированы подкожно на 0-й день (МОД). Цитофлуориметрический анализ контрольных мышей, получавших такие дозы моноклональных антител, показал более чем 95%-ную редукцию маркерной мишени в селезенке (данные в заявку не включены).
6. Исследования ίη νίΙΐΌ.
Для тестирования цитотоксичности были сформированы опухоль-специфичные кратковременные культуры СТЬ на основе смешанной лимфоцитарной культуры опухолевых клеток. Вкратце, 30 млн спленоцитов были отобраны на 30-й день у мышей, которые отторгли образовавшиеся опухоли. Эти клетки были простимулированы 3 млн облученных исходных опухолевых клеток в полной среде в течение 4 дней и затем добавляли 50 ед./мл рекомбинантного интерлейкина-2 человека (Се1и5) на 2 дня. Эффекторные функции спленоцитов были протестированы на 6-й день в стандартном 4-часовом тесте на выход радиоактивного хрома-51 (при соотношении эффектор:мишень от 25:1 до 200:1) против помеченных клеток-мишеней, аутологичных опухолевых клеток, сторонней саркомной линии Н-2'1 ^ЕШ-164 и ΝΚ-чувствительной клеточной линии УАС. Эффективность лизиса в трех повторностях была подсчитана как {[разность вредных экспериментального и спонтанного излучений в имп./мин]/[разность средних максимального и спонтанного излучений в имп./мин]}х100. Авторы определяли лизис как специфичный тогда, когда был лизис мышиных спленоцитов, отторгавших опухолевые клетки, за вычетом лизиса внеэкспериментальных спленоцитов мыши.
- 6 005405
Результаты
Пример 1. Поверхностная экспрессия 11С.П4. НЬ-ЛС-3. тЬАС-3 и молекул МНС в линиях опухолевых клеток.
Трансфицированные опухолевые клоны были окрашены в соответствии с описанным в разделе 2.2 и проанализированы с целью сравнения уровней экспрессии 11С.П4. ЬЬАС-3 и тЬАС-3. В данном анализе использовали для каждой из конструкций по одному клону, показавшему наилучшие результаты. Среди линий опухолевых клеток наивысший уровень молекул МНС класса I экспрессировали клетки Τδ/А, а наименьший уровень экспрессии молекул МНС класса I - клетки МСА-205. Каких-либо существенных различий в уровне экспрессии молекул МНС класса I при сравнении исходных и трансфицированных клонов опухолевых клеток обнаружено не было.
Пример 2. Формирование опухолевых моделей и вакцинация: сравнение действия ЬСЭ4 и ЬЬАС-3.
Данные эксперименты были проведены с целью определения опухолеродности клеток после их трансфицирования клетками МСА-205, Τδ/А, как показано на фиг. 1 и 4, и КЕЙСА. Индукция противоопухолевого иммунитета Ь АС-3-позитивной опухоли сравнивали с исходными линиями опухолевых клеток.
Клетки МСА-205, Τδ/А и КЕЙСА дикого типа эффективно пролиферировали в случае, когда их подкожно имплантировали либо сингенным мышам линий С57ВЬ/6 и ВАТВ/с, либо мутантным мышам пибе/пибе. Опухолевые клетки, проявлявшие стабильную трансфицированность клонами ЬЬАС-3 в обратной ориентации, определенную в процессе гигромицинового отбора, характеризовались сходными параметрами роста.
Животные, которым вводили МСА-ЬАС-3, отторгали опухоль. Животные, которым вводили МСАСИ4, проявляли низкую интенсивность роста опухоли по сравнению с животными, которым вводили клетки МСА дикого типа. 2 особи (из 5) полностью отторгали опухоль (фиг. 1).
Сходные результаты были получены в анализе тЬАС-3 (данные в заявку не включены).
Эти результаты указывают на то, что эктопическая экспрессия ЬЬАС-3, тЬАС-3 и ЬСИ4 повышает иммуногенность линии саркомных клеток МСА и предотвращает образование опухоли у МСАтрансфектанта, т. е. она обусловливает формирование иммунитета против злокачественной опухоли у мыши.
Сходные результаты были получены в анализе опухолевых клеток Τδ/А у мышей линии ВАТВ/с (фиг. 2).
Сходные результаты также были получены при анализе опухолевых клеток КЕЙСА у сингенных мышей линии ВАТВ/с.
Таким образом, противоопухолевое действие выявляется в различных линиях мышей, экспрессирующих разные гены главного комплекса гистосовместимости (МНС);
при использовании различных линий опухолевых клеток (проявляющих разный уровень собственной иммуногенности - Τδ/ААМСА).
Мыши линии пибе (пи/пи) были инокулированы опухолевыми клетками МСА дикого типа, МСА ЬЬАС-3 и МСА ЬСИ4: рост трансфектантов характеризовался сходными параметрами.
Это подтверждает тот факт, что системный, долговременный, опухоль-специфичный, обусловливаемый молекулами ЬЬАС-3 или ЬСИ4 иммунитет является опосредуемым Т-лимфоцитами [которые отсутствуют у мышей пибе].
Мышам, которые ранее были инокулированы клетками МСА дикого типа, МСА рЬАС-3 и МСА 11СЭ4 и спустя 30 дней не характеризовались развитием опухоли, проводили повторную стимуляцию (1кратную) 5-кратной дозой МОД опухолевых клеток или сторонней линией клеток МС38 карциномы толстой кишки.
Полученные результаты показаны на фиг. 2 и 3.
После повторной стимуляции рост МСА дикого типа оказался замедленным у выживающих животных, которым вводились клетки МСА ЬАС-3 и клетки МСА СЭ4 (фиг. 2).
Никакой из этих эффектов не был обнаружен у мышей, повторно простимулированных сторонними опухолевыми клетками МС38 (фиг. 3).
Это указывает на то, что эктопическая экспрессия и ЬЬАС-3, и 11СЭ4 обладает адъювантоподобным действием и индуцирует долговременный антиген-специфичный иммунитет по отношению к исходному немодифицированному типу опухоли.
Пример 3. Лечение опухолей МСА-205 дикого типа у мышей С57ВЬ/6 с использованием МСА ЬЬАС-3.
В этом эксперименте были использованы 3 группы по 5 особей в каждой из них.
Каждую группу инокулировали в один бок клетками МСА дикого типа, а через 3 дня - либо клетками МСА дикого типа (группа 1), клетками МСА ЬЬАС-3 в количестве 200 тыс. клеток (группа 2), либо клетками МСА ЬЬАС-3 в количестве 1 млн клеток (группа 3).
Размер исходной опухоли измеряли в каждой группе особей в течение 30 дней. Данные приведены на фиг. 5.
- 7 005405
Инъекция клетками МСА БЬАС-3 задерживала рост опухоли в дозозависимом режиме.
Этот эксперимент подтверждает наличие системного эффекта ЬАС-3 в отношении роста опухоли и указывает на то, что ЬАС-3 представляет собой лекарственное средство, действующее в отношении опухолей плотных тканей.
Пример 4. Лечение опухолей МСА-205 дикого типа у мышей С57ВЬ/6 с использованием растворимого ЬАС-3.
группы по 5 мышей в каждой были одновременно инокулированы клетками МСА дикого типа, суспендированными либо в фосфатном буфере (группа 1), либо в фосфатном буфере, содержащем растворимый белок ЬАС-3 человека (8ЙЬАС-3 Ό1Ό4) в количестве либо 25 мкг (группа 2), либо 250 мкг (группа 3).
Размер опухолей измеряли в каждой группе на протяжении 30 дней.
Полученные данные представлены на фиг. 6.
Введение БЬАС-3 Ό1Ό4 индуцировало замедление роста опухоли в зависимом от дозы режиме.
Полученные данные показывают, что системное введение растворимого ЬЬАС-3 напрямую обусловливает подавление роста опухоли ίη νίνο.
Пример 5. Экспрессия ЬАС-3 ίη νίνο на поверхности опухолевых лимфоцитов (НЬ) человека, инфильтрующихся в карциному почечных клеток (ЯСС).
В организме человека ЬАС-3 экспрессируется в тканях (например, в воспаленных вторичных лимфоидных органах), но не на поверхности моноядерных клеток циркулирующей крови (РВМС) [3], причем даже таких, как активированные ίη νίνο РВМС, позитивные по антигенам С.Н25 и СЭ69. На более высоком уровне ЬАС-3 экспрессирован на поверхности активированных, ограниченных по классу I МНС, С'.Н8-позитивных клетках по сравнению с ограниченными по классу II МНС, СН4-позитивными клетками [3], а индукция экспрессии ЬАС-3 интерлейкином-12 или еще более мощным сочетанием интерлейкинов рЬЗ+ГЬП] оказывается более существенной на клетках СЭ4+ по сравнению с клетками С.Н4+. Белок ЬАС-3 является слабоэкспрессирующимся активационным антигеном как ίη νίίτο, так и ίη νίνο, и иногда бывает затруднительно оценить количественно и качественно параметры флуоресцентного мечения свежеприготовленных опухолевых тканей. Поскольку ЬАС-3 может взаимодействовать с антиген-презентирующими клетками опухолей человека, позитивными по молекулам МНС класса II, заявители оценивали его экспрессию в группе опухолей, для которых известна ассоциированность с Тлимфоцитами, с применением иммуногистохимических методик (процедура АРААР). Экспрессия ЬАС-3 была обнаружена во всех тестированных инфильтрующихся опухолевых лимфоцитах (ТГЬ), включая 5 меланом, 10 почечных аденокарцином и 7 β-клеточных лимфом.
пациентов были обследованы по экспрессии ЬАС-3 в инфильтрующихся опухолевых лимфоцитах в случаях наличия карциномы почечных клеток.
В экспериментах с цитофлуориметрическим тестированием были использованы размацерированные опухолевые ткани. Экспрессия ЬАС-3 была исследована в популяции лимфоцитов, определяемой по ее размеру и степени гранулярности. Погибшие клетки были исключены из анализа после их выявления с помощью окрашивания йодистым пропидием. Клетки НЬ положительно окрашивались моноклональным антителом 17В4, специфичным в отношении эпитопа в составе внеклеточной петли полипептида ЬАС-3.
Полученные результаты представлены на фиг. 7 для пациентов Р1-Р3 и на фиг. 8 для пациентов Р4 и Р5.
Для всех пациентов этой группы был выявлен сдвиг пика флуоресценции, что указывает на связывание антитела 17В4 на поверхности этих лимфоцитов.
Таким образом, у всех пациентов клетки НЬ действительно экспрессировали ЬАС-3 при наличии существенной доли (30%) ВСС-ПЬ у независимых пациентов.
Во всех выборках для С'.Н8-позитивных Т-лимфоцитов было обнаружено экспрессирование ЬАС-3 (в пределах 11-48%) при большем уровне экспрессии и Т-лимфоцитов С.Н8+.
С другой стороны, моноядерные клетки периферической крови были негативными по ЬАС-3 у этих же пациентов: это показывает, что экспрессия ЬАС-3 на поверхности лимфоцитов является процессом, родственным Т-клеточной активации в опухолях.
Более того, при использовании теста ТИФА (твердофазный иммуноферментный анализ) было показано, что высокие концентрации (около 1 нг/мл) растворимого ЬАС-3 обнаруживаются в крови раковых больных.
Эти данные показывают, что белок ЬАС-3 является молекулой, вовлеченной в естественно встречающийся противоопухолевый ответ у человека, и, соответственно, подтверждает применение ЬАС-3 в бустинге иммунологического контроля за опухолевыми клетками у человека.
Пример 6. Опосредование первичного отторжения С'.Н8-позитивными Т-лимфоцитами.
Отторжение трансфектантов МСА-205 БЬАС-3 и ТБ/А БЬАС-3 было зависимым от Т-лимфоцитов, поскольку отторжение вовсе не наблюдалось у дефицитных по Т-клеткам (безтимусных) мышей пи/пи. После инъекции 5-кратной МОД таких клеток опухоли по 10 мм в диаметре образовывались на 8-й день: размацерированные опухолевые клетки и инфильтрующиеся в опухоль лимфоциты анализировали методом ЕАС8. Опухоли дикого типа, равно как и трансфектанты по ЬАС-3, оказывающиеся исходно нега
- 8 005405 тивными по антигенам СЭ80 и СЭ86, сохраняли негативность по этим поверхностно-клеточным маркерам после инокуляции, в то время как ЬАС-3 стабильно выявлялся в опухолях НЬАС-3 при использовании моноклонального антитела 17В4, специфичного по отношению к ЬАС-3 (данные в заявку не включены). В 8-дневных опухолях-эксплантантах доля СИ8-позитивных клеток составила примерно 31% в опухолях МСА-205 НЬАС-3 по сравнению с 4% в опухолях МСА-205 (фиг. 9а), в то время как никаких различий не было выявлено при анализе наборов клеток ί.Ό4+, В или ΝΚ. Сходные результаты были получены в анализе опухолей Т8/А (данные в заявку не включены). Наконец, относительный вклад СЭ4- и СИ8-позитивных Т-лимфоцитов в формирование противоопухолевого ответа был проанализирован путем истощения мышей по этим клеточным комплексам. Как показано на фиг. 9Ь, введение СЭ8специфичного моноклонального антитела в момент инокуляции дозой МОД НЬАС-3/Т8/А предотвращает отторжение опухолевых клеток НБАС-3/Т8/А. Участие СИ4-позитивных хелперных Т-лимфоцитов подтверждается конкретным эффектом, наблюдаемым при использовании моноклонального антитела, специфичного в отношении СЭ4 (фиг. 9Ь).
Пример 7. Усиление опухоль-специфичного СТЬ-ответа действием НЬАС-3.
Для дальнейшего выяснения механизма противоопухолевой активности ЬАС-3 авторы оценивали воздействие этого белка на образование цитотоксических Т-лимфоцитов (клеток СТЬ), способных уничтожать неиммуногенные клетки Т8/А. Спленоциты были собраны у мышей, которым имплантировали опухоль НБАС-3/Т8/А и которые были способны отторгать опухолевые клетки дикого типа при 5-кратной дозе МОД в экспериментах по повторной стимуляции, и были повторно простимулированы ίη νίίΓΟ на 6 дней облученными клетками Т8/А. Активность клеток СТЬ была определена в спленоцитах мышей, которым были имплантированы опухолевые клетки НЬАС-3 (фиг. 9с), в то время как спленоциты животных, вообще еще не вовлекавшихся в эксперимент, не проявляли цитотоксической активности совсем (данные в заявку не включены). Активность СТЬ, по-видимому, оказывается селективной в отношении неиммуногенных клеток Т8/А, поскольку сингенные саркомные клетки ХУЕНН равно как и ΝΚчувствительные клетки УАС, не лизировались (фиг. 9с).
Пример 8. Лечение сформировавшихся опухолей.
Авторы изобретения показали, что контроль за ростом опухоли может быть обеспечен путем использования растворимой молекулы ЬАС-3, берущейся в качестве вакцинного адъюванта. Однократная инъекция смеси антигена (облученные опухолевые клетки) наряду с бустерным фактором (шЬАС-3/Ц - 1 или 0,1 мкг) оказывается эффективной (фиг. 10).
Предполагается, что ίη νίνο молекулы растворимого ЬАС-3 могут передавать сигнал клеткам островков Лангерганса (или любым антиген-презентирующим клеткам, находящимся в вакцинном сайте) через молекулы класса II главного комплекса гистосовместимости (МНС) об эффективном включении СО8-позитивных Т-лимфоцитов.
Библиография [1] . ТпеЬе1 е! а1., 1990, I. Ехр. Меб., 171, 1393-1405.
[2] . Ва1хегак е! а1., 1992, I. Ехр. Меб., 176, 327-337.
[3] . Ниагб е! а1., 1994, [ттипо8епе11С5, 39, 213.
[4] . Ниагб е! а1., 1997, Ргос. N6. Асаб. 8с1. И8А, 91, 5744-5749.
[5] . Ниагб е! а1., 1994, Еиг. I. ]ттипо1., 24, 3216-3221.
[6] . Ниагб е! а1., 1996, Еиг. I. Iттиηο1., 26, 1180-1186.
[7] . М|уахак| е! а1., 1996, 8с1епсе, 272, 408.
[8] . Апдеут е! а1., 1997, НИет., I. Сапсег,...
[9] . Ьищит е! а1., 1992, Се11, 71, 1093.
[10] . ТакеЬе е! а1., 1988, I. Мо1. Се11. Вю1., 8, 466.
[11] . Сокдгоуе е! а1., 1991, Се11., 66, 1051.
[12] . Кекб£о Ν.Ρ. & ХУипбегНсН ЬК., 1995, Вю1оду о£ Се11и1аг Iттиηе Кекропкек: Вю1одюа1 ТНегару о£ Сапсег, ебк. УГОеУба, 8.Не11тап & 8.КокепЬегд, Ырршсоб, РН11абе1рЫа, рр. 3-37.
[13] . Рагбо11 И.М., 1995, Аппи. Κν. ]ттипо1., 13, 399-415.
[14] . Уабе У.Р., Ьауоик! I., 8а1атего I., Апбге Р., УаНк Т.Н., СатЫег ЬС., 1993, Iттиηο1. Тобау, 14, 539-542.
[15] . КосН Р., 81апх1 и., .1еппе\уеИ1 Р., .Тапке Κ., НеиДег С., Катрдеп Е., Котат Ν., 8сНи1ег С., 1996, I. Ехр. Меб., 184, 741-746.
[16] . Вгипк|ие1 Ό., Вопе Ν., ТпеЬе1 Р., 1997, Iттиηοдеηе!^ск, 47, 96-98.
[17] . Ниагб В., Рпдеп! Р., Тоигшег М., Вгишдие1 Ό., ТпЬе1 Р., 1995, Еиг. I. Тттипок, 25, 2718-2721.
[18] . МсК1ппеу М.М. & Рагкшкоп А., 1987, I. Iттиηο1. Мебюбк, 96, 271-273.
[19] . Т1С|Не Н., Согг М., Котап М., Ка/ Е., 1998, Iттиηο1. Тобау, 19, 89-96.
Claims (5)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение опухолевых клеток, трансфицированных ДНК, кодирующей по меньшей мере один лиганд МНС класса II, для производства лекарственного препарата для профилактики или лечения пато- 9 005405 логического состояния у млекопитающего, вовлекающего антиген-специфичный иммунный ответ, где патологическое состояние представляет собой злокачественную опухоль и лиганд МНС класса II представляет собой ЬЛС-3 или СЭ4 или производное, мутантную форму или фрагмент ЬЛС-3 или СЭ4. полученные, как раскрыто в описании.
- 2. Применение по п.1, отличающееся тем, что антиген-специфичный иммунный ответ опосредован Т-лимфоцитами.
- 3. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что опухолевые клетки представляют собой клетки солидной опухоли.
- 4. Применение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что СЭ4 представляет собой СЭ4 человека.
- 5. Применение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что ЬЛС-3 представляет собой ЬЛС-3 человека.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97401800A EP0893507A1 (en) | 1997-07-25 | 1997-07-25 | Use of MHC class II ligands (CD4 and LAG-3) as adjuvant for vaccination and of LAG-3 in cancer treatment |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200200565A1 EA200200565A1 (ru) | 2002-10-31 |
| EA005405B1 true EA005405B1 (ru) | 2005-02-24 |
Family
ID=8229825
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200000161A EA003740B1 (ru) | 1997-07-25 | 1998-07-23 | Применение лиганда мнс класса ii, представляющего собой lag-3 или производное, мутантную форму или растворимый фрагмент lag-3, для приготовления иммунотерапевтического лекарственного средства |
| EA200300092A EA200300092A1 (ru) | 1997-07-25 | 1998-07-23 | Применение лигандов молекул мнс класса ii в качестве адъювантов для вакцинации и lag-3 в лечении злокачественных опухолей |
| EA200200565A EA005405B1 (ru) | 1997-07-25 | 1998-07-23 | Применение опухолевых клеток, трансфицированных днк, кодирующей lag-3 или cd4, для производства лекарственного препарата для профилактики или лечения злокачественных опухолей |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200000161A EA003740B1 (ru) | 1997-07-25 | 1998-07-23 | Применение лиганда мнс класса ii, представляющего собой lag-3 или производное, мутантную форму или растворимый фрагмент lag-3, для приготовления иммунотерапевтического лекарственного средства |
| EA200300092A EA200300092A1 (ru) | 1997-07-25 | 1998-07-23 | Применение лигандов молекул мнс класса ii в качестве адъювантов для вакцинации и lag-3 в лечении злокачественных опухолей |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6410509B1 (ru) |
| EP (3) | EP0893507A1 (ru) |
| JP (1) | JP4723722B2 (ru) |
| KR (1) | KR100603075B1 (ru) |
| CN (1) | CN1184320C (ru) |
| AT (2) | ATE478956T1 (ru) |
| AU (1) | AU753738B2 (ru) |
| BR (1) | BR9811037A (ru) |
| CA (2) | CA2732570C (ru) |
| DE (2) | DE69841866D1 (ru) |
| DK (1) | DK1002108T3 (ru) |
| EA (3) | EA003740B1 (ru) |
| EE (1) | EE200000039A (ru) |
| ES (1) | ES2262242T3 (ru) |
| IL (2) | IL134212A0 (ru) |
| NO (1) | NO20000378L (ru) |
| PT (1) | PT1002108E (ru) |
| UA (1) | UA75322C2 (ru) |
| WO (1) | WO1999004810A2 (ru) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1295895B1 (en) * | 2001-09-19 | 2011-08-10 | Institut Gustave Roussy | Peptides and proteins binding to glu-pro motifs, therapeutical compositions containing the same and applications thereof |
| US20060240024A1 (en) | 2003-02-28 | 2006-10-26 | The Johns Hopkins University | T cell regulation |
| KR20050082389A (ko) * | 2004-02-18 | 2005-08-23 | 메덱스젠 주식회사 | 직렬 연쇄체를 갖는 면역접합체를 포함하는 장기이식합병증 치료용 약제학적 조성물 |
| FR2868781B1 (fr) | 2004-04-13 | 2008-02-22 | Immutep | Composition de vaccin comprenant un ligand cmh de classe ii couple a un antigene, procede de preparation et utilisations |
| EP1777523A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-04-25 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | An in vitro method for the prognosis of progression of a cancer and of the outcome in a patient and means for performing said method |
| EP2044949A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-04-08 | Immutep | Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response |
| WO2011031139A1 (en) | 2009-09-09 | 2011-03-17 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | An ataq protein or a part thereof as a vaccine |
| SA110310855B1 (ar) | 2009-11-13 | 2014-09-16 | Laboratories Leti S L Unipersonal | استخدام مصدر l3 و/ أو l5 كلقاح أو كوسيلة تشخيصية لمرض طفيلي |
| JP5986576B2 (ja) | 2010-11-10 | 2016-09-06 | ラボラトリオス レティ，エセ．エレ． | 新規アジュバント |
| GB201322626D0 (en) | 2013-12-19 | 2014-02-05 | Immutep S A | Combined preparations for the treatment of cancer |
| CA2935423C (en) | 2014-01-24 | 2023-11-07 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibody molecules to pd-1 and uses thereof |
| CN103751778B (zh) * | 2014-01-28 | 2016-09-28 | 复旦大学 | 3′-脱氧腺苷在制备广谱疫苗增效的免疫佐剂中的应用 |
| WO2015138920A1 (en) | 2014-03-14 | 2015-09-17 | Novartis Ag | Antibody molecules to lag-3 and uses thereof |
| US10537626B2 (en) | 2014-10-07 | 2020-01-21 | Cytlimic Inc. | HSP70-derived peptide, pharmaceutical composition for treating or preventing cancer using same, immunity inducer, and method for producing antigen presenting cell |
| US9827308B2 (en) | 2014-12-10 | 2017-11-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Mini-intronic plasmid DNA vaccines in combination with LAG3 blockade |
| GB201500374D0 (en) | 2015-01-09 | 2015-02-25 | Immutep S A | Combined preparations for the treatment of cancer |
| JP6898225B2 (ja) | 2015-03-09 | 2021-07-07 | サイトリミック株式会社 | Ｇｐｃ３由来のペプチド、これを用いた癌の治療又は予防のための医薬組成物、免疫誘導剤、及び抗原提示細胞の製造方法 |
| EP3797794A1 (en) * | 2015-04-07 | 2021-03-31 | Cytlimic Inc. | Medicine comprising a toll like receptor 3 agonist and a lag-3 protein |
| EP3294324A1 (en) | 2015-05-13 | 2018-03-21 | Agenus Inc. | Vaccines for treatment and prevention of cancer |
| EP3744340A3 (en) | 2015-07-16 | 2021-03-03 | Biokine Therapeutics Ltd. | Compositions and methods for treating cancer |
| ES2878188T3 (es) | 2015-07-29 | 2021-11-18 | Novartis Ag | Terapias de combinación que comprenden moléculas de anticuerpos contra LAG-3 |
| US10265379B2 (en) | 2015-09-16 | 2019-04-23 | Annabelle Rodriguez Oquendo | Use of recombinant lymphocyte activation gene-3 as a companion therapeutic for patients at risk for cardiovascular disease and other chronic inflammatory diseases |
| EP3349790A1 (en) | 2015-09-18 | 2018-07-25 | Rijksuniversiteit Groningen | Long chain inulin for stimulating an immune response |
| AU2017342189B2 (en) | 2016-10-11 | 2023-09-21 | Nec Corporation | Medicine |
| CN108204958A (zh) * | 2016-12-19 | 2018-06-26 | 伊缪泰普有限公司 | 结合测定 |
| KR20210005646A (ko) | 2018-04-26 | 2021-01-14 | 아게누스 인코포레이티드 | 열쇼크 단백질-결합 펩티드 조성물 및 그의 이용 방법 |
| US20230057310A1 (en) * | 2018-09-27 | 2023-02-23 | Genocea Biosciences, Inc. | Treatment methods |
| JP2020138940A (ja) | 2019-02-28 | 2020-09-03 | テルモ株式会社 | 治療方法 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989002922A1 (en) * | 1987-10-02 | 1989-04-06 | Genentech, Inc. | Adheson variants |
| WO1990001870A1 (en) * | 1988-08-22 | 1990-03-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | Retroviral vectors expressing soluble cd4; a gene therapy for aids |
| EP0385909A2 (en) * | 1989-03-03 | 1990-09-05 | MicroGeneSys, Inc. | A kit or composition for the prevention or treatment of HIV-1 infections |
| EP0394827A1 (en) * | 1989-04-26 | 1990-10-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides |
| WO1991010682A1 (fr) * | 1990-01-08 | 1991-07-25 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Proteines produites par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques |
| WO1995021528A1 (en) * | 1994-02-14 | 1995-08-17 | The General Hospital Corporation | Targeted cytolysis of hiv-infected cells by chimeric cd4 receptor-bearing cells |
| WO1995030750A2 (fr) * | 1994-05-06 | 1995-11-16 | Institut Gustave Roussy | Fractions polypeptidiques solubles de la proteine lag-3; procede de production; composition therapeutique; anticorps anti-idiotype |
| WO1996004386A1 (en) * | 1994-08-05 | 1996-02-15 | Warner-Lambert Company | Method of using transdominant negative retroviral integrase in the treatment of retroviral infection |
| WO1996017874A1 (en) * | 1994-12-07 | 1996-06-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Monoclonal antibody fragments having immunosuppressant activity |
| WO1996020215A2 (en) * | 1994-12-23 | 1996-07-04 | Laboratoires Om S.A. | Use of mhc-ii binding and/or mhc-ii mimicking molecules for the prevention and/or treatment of inflammatory diseases |
| WO1997024132A1 (en) * | 1995-12-28 | 1997-07-10 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Allogeneic paracrine cytokine tumor vaccines |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02231083A (ja) * | 1988-08-31 | 1990-09-13 | Eisai Co Ltd | 組換ナチュラルキラー細胞活性化因子 |
| WO1994016737A1 (en) * | 1993-01-26 | 1994-08-04 | Weiner David B | Compositions and methods for delivery of genetic material |
| SE510135C2 (sv) * | 1994-05-05 | 1999-04-19 | Berol Nobel Ab | Vattenhaltig suspension av en cellulosaeter, sätt för dess framställning samt komposition |
-
1997
- 1997-07-25 EP EP97401800A patent/EP0893507A1/en not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-07-23 EA EA200000161A patent/EA003740B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-07-23 CN CNB988075474A patent/CN1184320C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 AT AT06008545T patent/ATE478956T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-07-23 CA CA2732570A patent/CA2732570C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 PT PT98945090T patent/PT1002108E/pt unknown
- 1998-07-23 UA UA2000020976A patent/UA75322C2/uk unknown
- 1998-07-23 AT AT98945090T patent/ATE324455T1/de active
- 1998-07-23 DK DK98945090T patent/DK1002108T3/da active
- 1998-07-23 EA EA200300092A patent/EA200300092A1/ru unknown
- 1998-07-23 DE DE69841866T patent/DE69841866D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 AU AU92547/98A patent/AU753738B2/en not_active Expired
- 1998-07-23 EP EP98945090A patent/EP1002108B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 EA EA200200565A patent/EA005405B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-07-23 EE EEP200000039A patent/EE200000039A/xx unknown
- 1998-07-23 DE DE69834330T patent/DE69834330T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 IL IL13421298A patent/IL134212A0/xx unknown
- 1998-07-23 BR BR9811037-3A patent/BR9811037A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-07-23 EP EP06008545A patent/EP1698701B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 CA CA2293805A patent/CA2293805C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 WO PCT/EP1998/004621 patent/WO1999004810A2/en not_active Ceased
- 1998-07-23 JP JP2000503862A patent/JP4723722B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 ES ES98945090T patent/ES2262242T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-23 KR KR1020007000265A patent/KR100603075B1/ko not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-24 IL IL134212A patent/IL134212A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-01-25 NO NO20000378A patent/NO20000378L/no not_active Application Discontinuation
- 2000-01-27 US US09/492,113 patent/US6410509B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-01-10 US US10/041,600 patent/US7109026B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989002922A1 (en) * | 1987-10-02 | 1989-04-06 | Genentech, Inc. | Adheson variants |
| WO1990001870A1 (en) * | 1988-08-22 | 1990-03-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | Retroviral vectors expressing soluble cd4; a gene therapy for aids |
| EP0385909A2 (en) * | 1989-03-03 | 1990-09-05 | MicroGeneSys, Inc. | A kit or composition for the prevention or treatment of HIV-1 infections |
| EP0394827A1 (en) * | 1989-04-26 | 1990-10-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides |
| WO1991010682A1 (fr) * | 1990-01-08 | 1991-07-25 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Proteines produites par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques |
| WO1995021528A1 (en) * | 1994-02-14 | 1995-08-17 | The General Hospital Corporation | Targeted cytolysis of hiv-infected cells by chimeric cd4 receptor-bearing cells |
| WO1995030750A2 (fr) * | 1994-05-06 | 1995-11-16 | Institut Gustave Roussy | Fractions polypeptidiques solubles de la proteine lag-3; procede de production; composition therapeutique; anticorps anti-idiotype |
| WO1996004386A1 (en) * | 1994-08-05 | 1996-02-15 | Warner-Lambert Company | Method of using transdominant negative retroviral integrase in the treatment of retroviral infection |
| WO1996017874A1 (en) * | 1994-12-07 | 1996-06-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Monoclonal antibody fragments having immunosuppressant activity |
| WO1996020215A2 (en) * | 1994-12-23 | 1996-07-04 | Laboratoires Om S.A. | Use of mhc-ii binding and/or mhc-ii mimicking molecules for the prevention and/or treatment of inflammatory diseases |
| WO1997024132A1 (en) * | 1995-12-28 | 1997-07-10 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Allogeneic paracrine cytokine tumor vaccines |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| BAIXERAS E. ET AL.: "CHARACTERIZATION OF THE LYMPHOCYTE ACTIVATION GENE 3-ENCODED PROTEIN. A NEW LIGAND FOR HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN CLASS II ANTIGENS", JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. 176. August 1992, pages 327-337, XP000677772, see the whole document * |
| DRANOFF ET AL.: "Prospects for the immunotherapy of cancer using genetically modified tumour cells", KLINISCHE PHARMAKOLOGIE, vol. 9, September 1992, pages 22-29, XP002058638, see the whole document * |
| HUARD ET AL.: "Cellular expression and tissue distribution of the human LAG-3-encoded protein, an MHC class II ligand", IMMUNOGENETICS, vol. 39. 1994, page 213-217, XP002058640, see the whole document * |
| HUARD ET AL.: "T cell major histocompatibility complex class II molecules downregulate CD4+ T cell clone responses following LAG-3 binding", EUR. J. IMMUNOLOG., vol. 26, 1996, pages 1180-1186, XP000672293, see the whole document * |
| HUARD ET AL.: "T cell MHC class II molecules downregulate T cell proliferation following LAG-3 binding", 9TH INTERNATIONAL CONGRESS OF IMMUNOLOGY: SAN FRANCISCO, CALIFORNIA, USA, XP002050654, July 23-29, 1995, page 216, abstract no. 1282 * |
| WAHREN B.: "Gene vaccines", IMMUNOTECHNOLOGY, vol. 2, no. 2, June 1996, page 77-83, XP004052672, see the whole document * |
| WILLIAMS ET AL.: "Genetic infection induces protective in vivo immune responses", DNA AND CELL BIOLOGY, vol. 12, no. 8, 1993, page 675-683, XP002058639, see the whole document * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA003740B1 (ru) | Применение лиганда мнс класса ii, представляющего собой lag-3 или производное, мутантную форму или растворимый фрагмент lag-3, для приготовления иммунотерапевтического лекарственного средства | |
| Matulonis et al. | B7-1 is superior to B7-2 costimulation in the induction and maintenance of T cell-mediated antileukemia immunity. Further evidence that B7-1 and B7-2 are functionally distinct | |
| Kündig et al. | Fibroblasts as efficient antigen-presenting cells in lymphoid organs | |
| Prigent et al. | Lymphocyte activation gene‐3 induces tumor regression and antitumor immune responses | |
| US8586023B2 (en) | Cell capable of expressing exogenous GITR ligand | |
| JP2002504334A (ja) | Ｏｘ−４０レセプター結合因子又はそれをコードする核酸を含む組成物並びに抗原特異的免疫応答を増強するための方法 | |
| CN109320615B (zh) | 靶向新型bcma的嵌合抗原受体及其用途 | |
| US20090143291A1 (en) | Tumor antigen based on products of the tumor suppressor gene wt1 | |
| WO1998026747A2 (en) | Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases | |
| Chen et al. | Rejection of K1735 murine melanoma in syngeneic hosts requires expression of MHC class I antigens and either class II antigens or IL-2. | |
| Kaufman et al. | Strategies for cancer therapy using carcinoembryonic antigen vaccines | |
| Bronte et al. | Effective genetic vaccination with a widely shared endogenous retroviral tumor antigen requires CD40 stimulation during tumor rejection phase | |
| US20070275049A1 (en) | Anti-tumor molecular vacine and method of making thereof | |
| KR20020001865A (ko) | 면역반응을 증강시키기 위한 가용성 공동자극 분자의 용도 | |
| US20030212027A1 (en) | Vaccine formulations and methods for immunizing an individual against shed antigen specific B cells | |
| US6514493B1 (en) | cDNA clone for tumor rejection antigen gp110 and tumor peptide vaccine | |
| Bubenik et al. | Tumour vaccines expressing IL-2, CD80, and IL-2 plus CD80 gene | |
| MXPA99012024A (en) | Use of mhc class ii ligands as adjuvant for vaccination and of lag-3 in cancer treatment | |
| Duggan et al. | Interferon-Alfa as a Vaccine Adjuvant | |
| Flores | Gene therapy of cancer: genetically-modified tumor cells as vaccines to augment antitumor immune responses | |
| WO1999053931A9 (en) | Tumor cells with increased immunogenicity and uses thereof | |
| MXPA00008176A (en) | Compositions containing an ox-40 receptor binding agent or a nucleic acid encoding the same and methods for enhancing antigen-specific immune response | |
| HK1126246A (en) | Compositions containing an ox-40 receptor binding agent or a nucleic acid encoding the same and methods for enhancing antigen-specific immune response |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |