ES2109899T3 - Metodo, composiciones y kits para aumentar la biodisponibilidad oral de agentes farmaceuticos. - Google Patents

Abstract

SE PRESENTAN UN METODO PARA AUMENTAR LA BIODISPONIBILIDAD TRAS LA ADMINISTRACION ORAL DE UN AGENTE OBJETIVO FARMACOLOGICAMENTE ACTIVO, EN PARTICULAR DE UN AGENTE ANTITUMORAL O ANTINEOPLASTICO QUE PRESENTA UNA BIODISPONIBILIDAD ORAL POBRE O INCONSISTENTE (EJ. PACLITAXEL, DOCETAXEL O ETOPOSIDO), QUE CONSISTE EN LA COADMINISTRACION ORAL A UN PACIENTE MAMIFERO DEL AGENTE OBJETIVO Y DE UN AGENTE INTENSIFICADOR DE LA BIODISPONIBILIDAD ORAL (EJ., CICLOSPORINA A, CICLOSPORINA D, CICLOSPORINA F O CETOCONAZOL). EL AGENTE INTENSIFICADOR SE PUEDE ADMINISTRAR ORALMENTE DE 0,5 A 24 HORAS ANTES DE LA ADMINISTRACION ORAL DE UNA O MAS DOSIS DEL AGENTE OBJETIVO, AL TIEMPO SUSTANCIALMENTE CON EL AGENTE OBJETIVO O TANTO ANTES COMO AL TIEMPO SUSTANCIALMENTE CON EL AGENTE OBJETIVO. UN METODO PARA EL TRATAMIENTO DE PACIENTES MAMIFEROS QUE PADECEN ENFERMEDADES QUE RESPONDEN A AGENTES OBJETIVO CON UNA BIODISPONIBILIDAD POBRE, ASI COMO FORMAS DE DOSIFICACION ORAL QUE CONTIENEN TALES AGENTES OBJETIVO, COMBINACION DEFORMAS DE DOSIFICACION ORAL QUE CONTIENEN AGENTES INTENSIFICADORES DE LA BIODISPONIBILIDAD Y KITS DE AGENTES OBJETIVO QUE CONTIENEN FORMAS DE DOSIFICACION DEL AGENTE INTENSIFICADOR Y OBJETIVO E INFORMACION SOBRE LA DOSIFICACION PARA LA COADMINISTRACION DE LA MISMA.

Description

Método, composiciones y kits para aumentar la biodisponibilidad oral de agentes farmacéuticos.

1. Campo de la invención

La invención se refiere a métodos, composiciones y kits para mejorar la biodisponibilidad oral de agentes farmacéuticos que son mal absorbidos desde el tracto gastrointestinal, y a métodos de tratamiento de pacientes por la administración por vía oral de dichos agentes. Un aspecto de la invención se refiere al uso de ciclosporinas para mejorar la biodisponibilidad oral de paclitaxel y taxanos relacionados.

2. Descripción de la técnica anterior

Muchos valiosos compuestos farmacológicamente activos no pueden ser administrados eficazmente por vía oral debido a la mala absorción general desde el tracto gastrointestinal. Por consiguiente, todos estos agentes farmacéuticos se administran, generalmente por las vías intravenosa (a veces abreviadamente IV en lo sucesivo) o intramuscular, requiriendo la intervención de un médico u otro profesional sanitario, comportando molestias considerables y traumas locales potenciales al paciente e incluso requiriendo la administración en un hospital con intervención quirúrgica en el caso de ciertas infusiones intravenosas.

Se ha especulado sobre el hecho de que, en algunos casos, la mala biodisponibilidad de un fármaco después de la administración por vía oral es el resultado de la actividad de un transportador de multifármacos, una P-glicoproteína unida a una membrana, que actúa como una bomba de transporte o flujo saliente (en lo sucesivo eflujo) dependiente de energía para disminuir la acumulación intracelular del fármaco extruyendo los compuestos xenobióticos desde la célula. Esta P-glicoproteína ha sido identificada en los tejidos normales del endotelio secretor, tales como el revestimiento biliar, el borde en cepillo del túbulo próximo en el riñón y la superficie luminal del intestino, y las células endoteliales vasculares que revisten la barrera hematoencefálica, la placenta y los testículos.

Se cree que la bomba de eflujo de la P-glicoproteína evita que ciertos compuestos farmacéuticos atraviesen las células de la mucosa del intestino delgado y, por consiguiente, sean absorbidos en la circulación general. Se ha demostrado que diversos agentes farmacológicos conocidos no citotóxicos inhiben la P-glicoproteína, incluyendo la ciclosporina A (conocida también como ciclosporina), verapamilo, tamoxifeno, quinidina y fenotiazinas entre otros. Muchos de estos estudios estaban destinados a conseguir mayor acumulación de fármacos citotóxicos en el interior de las células tumorales. En efecto, se han realizado pruebas clínicas para estudiar los efectos de la ciclosporina sobre la farmacocinética y toxicidad del paclitaxel (Fisher et al., Proc Am. Soc. Clin. Oncol., 13: 143, 1994); doxorubicina (Bartlett et al., J. Clin. Onc. 12:835-842, 1994); y etopósido (Lum et al., J. Clin. Onc. 10:1635-42, 1992), todos los cuales son agentes anti-cáncer que se sabe que están sometidos a multirresistencia a fármacos (abreviadamente MDR por la expresión inglesa multidrug resistence). Estas pruebas mostraron que los pacientes que recibieron ciclosporina por vía intravenosa antes de, o junto con, los fármacos anti-cáncer tenían mayores niveles en sangre de estos fármacos, debido presumiblemente a la eliminación reducida en el organismo, y presentaban la toxicidad esperada a niveles de dosificación sustancialmente menores. Estos hallazgos tienden a indicar que la administración concomitante de ciclosporina suprimía la acción de MDR de la P-glicoproteína, permitiendo mayores acumulaciones intracelulares de los agentes terapéuticos. Para un estudio general de las implicaciones farmacológicas para el uso clínico de los inhibidores de la P-glicoproteína, véase Lum et al., Drug Resist. Clin. Onc. Hemat., 9:319-336 (1995); Schinkel et al., Eur. J. Cancer, 31A: 1295-1298 (1995).

En los estudios antes citados referentes al uso de ciclosporina para aumentar los niveles en sangre de agentes farmacéuticos sometidos a resistencia mediada por P-glicoproteína, los agentes activos y la ciclosporina se administraron por vía intravenosa. No se hacía ninguna sugerencia en estas publicaciones a que la ciclosporina u otras sustancias que se creía que inhibían la bomba de eflujo de la P-glicoproteína pudieran ser administradas por vía oral (a veces abreviadamente PO en las Tablas, por la expresión latina per os) para aumentar sustancialmente la biodisponibilidad de los fármacos anti-cáncer administrados por vía oral y otros agentes farmacéuticos que son mal absorbidos por si mismos desde el intestino sin producir efectos secundarios altamente tóxicos. En realidad, en el artículo de revisión de 1995 antes citado, Lum et al. mostraron que la administración por vía IV concomitante de inhibidores de MDR y agentes quimioterapéuticos sometidos a MDR aumentó los niveles de toxicidad y agravó los efectos secundarios graves de los pacientes. Schinkel et al. advirtieron brevemente que MDR1 y P-glicoproteína son abundantes en las células de la mucosa intestinal, y que esto puede afectar a la biodisponibilidad oral de los fármacos sustratos de P-glicoproteína, pero ni sugerían ni ello implicaba que la administración por vía oral de agentes supresores de la MDR podía mejorar la biodisponibilidad de los agentes no disponibles por vía oral. Además, igual que Lum et al., Schinkel et al. advirtieron que los inhibidores de la P-glicoproteína pueden aumentar drásticamente la toxicidad en pacientes con quimioterapia y por consiguiente, deben usarse con precaución.

En una publicación anterior, Schinkel et al. mostraron que se aumentó la absorción de ivermectina ingerida por vía oral en ratones homocigóticos durante la rotura del gen MDR1 en comparación con ratones normales, lo que demuestra que la P-glicoproteína desempeñaba un papel importante en la reducción de la biodisponibilidad de este agente (Cell, 77: 491-502, 1994). Además, este estudio también mostró que la penetración de vinblastina en diversos tejidos aumentó en los ratones mutantes.

Ninguno de los estudios publicados proporcionó un régimen para implementar la administración eficaz por vía oral de fármacos que por otra parte eran malamente biodisponibles, por ejemplo, indicando los respectivos intervalos de dosificación y la programación de la administración específicos para fármacos dianas específicos y agentes potenciadores de la biodisponibilidad o demostrando que los agentes inhibidores de la MDR son más adecuados para promover la absorción por vía oral de cada fármaco diana o clase de fármacos.

Los métodos descritos en la técnica para aumentar la absorción desde el intestino de fármacos que hasta ahora han sido sólo administrados por vía parenteral, se centra generalmente en el uso de agentes potenciadores de la permeación y de la solubilidad como agentes promotores, o la co-administración por perfusión intraluminal en el intestino delgado o por vía intravenosa de inhibidores de P-glicoproteína, por ejemplo, Leu et al., Cancer Chemother. Pharmacol., 35: 432-436, 1995 (la perfusión o infusión intravenosa de quinidina suprime el eflujo de etopósido al lumen del tracto G.I. desde la sangre). Pero estos métodos adolecen de numerosos inconvenientes. Los agentes potenciadores de la solubilidad y de la permeabilidad son con frecuencia poco prácticos o ineficaces para la administración por vía oral en las dosis requeridas y pueden interferir con la actividad farmacológica del fármaco diana. La administración por vía parenteral de los inhibidores de P-glicoproteína en dosis terapéuticas (o casi-terapéuticas) a seres humanos puede tener graves consecuencias clínicas. En el caso de la quinidina, por ejemplo, la administración intravenosa puede provocar arritmias, vasodilatación periférica, trastorno gastrointestinal y similares.

En la solicitud PCT WO 95/20980 publicada (publicada el 10 de agosto de 1995) Benet et al. describen un método propuesto para aumentar la biodisponibilidad de compuestos farmacéuticos hidrófobos administrados por vía oral. Este método comprende administrar por vía oral dichos compuestos al paciente conjuntamente con un biopotenciador que comprende un inhibidor de una enzima citocromo P450 3A o un inhibidor del transporte por membrana mediado por P-glicoproteína. Benet et al., sin embargo, no proporcionan prácticamente medios para identificar que agentes potenciadores de la biodisponibilidad aumentarán la disponibilidad de compuestos farmacéuticos “diana” específicos, ni indican las cantidades de dosificación, programas o regímenes de administración específicos de los agentes potenciadores o dianas. En efecto, aunque la solicitud de Benet recoge docenas de potenciales agentes potenciadores (inhibidores de P450 3A) y fármacos dianas (sustratos de P450 3A), la única combinación de agente potenciador y diana apoyada por cualquier prueba experimental en la solicitud es ketoconazol como potenciador y ciclosporina A como fármaco diana.

Cuando se describen las características generales de los compuestos que pueden usarse como biopotenciadores por reducción de la actividad del transporte de P-glicoproteína, Benet et al. indican que son compuestos hidrófobos que general, pero no necesariamente, comprenden dos anillos aromáticos co-planares, un grupo nitrogenado cargado positivamente o un grupo carbonilo - una clase que incluye un enorme número de compuestos, la mayoría de los cuales no proporciona la actividad potenciadora de la absorción deseada en el caso de agentes dianas específicos. Además, las clases de agentes dianas descritas por Benet et al. incluyen la mayoría de los agentes farmacéuticos recogidos en Physicians' Desk Reference. Estos criterios de inclusión no tienen ningún valor para los profesionales de la medicina que buscan métodos seguros, prácticos y eficaces para la administración por vía oral de agentes farmacéuticos específicos.

Otro defecto del estudio de Benet et al. es la norma aplicada para determinar si ha mejorado la biodisponibilidad de un fármaco que es mal absorbido por administración por vía oral. Benet et al. indican que cualquier agente inhibidor de la P-glicoproteína que, cuando está presente en el intestino a una concentración dada, reduce el transporte transmembranal de rodamina 123 por P-glicoproteína en las vesículas de la membrana con bordes en cepillo o en las células que contienen P-glicoproteína en un 10% o más, puede ser considerado un agente biopotenciador a dicha concentración y puede usarse en la práctica de su invención. Pero un aumento de sólo 10% de la absorción desde el intestino de un agente no absorbible de otro modo es inadecuado para que este agente sea terapéuticamente valioso para cualquier fin. En realidad, bajo las directrices de la Federal Food and Drug Administration, dos formulaciones farmacéuticas que contienen el mismo ingrediente activo, pero difieran en sus niveles de biodisponibilidad en -20%/+25%, son consideradas todavía bioequivalentes debido a que para la mayoría de los fármacos una diferencia de -20%/+25% en la concentración del ingrediente activo en la sangre no es clínicamente significativa. Approved Drug Products with Therapeutic Equivalence Evaluations (Dept of HHS, 14th ed. 1994). Cuando la FDA establece que dos formulaciones farmacéuticas son bioequivalentes, los médicos y farmacéuticos las consideran sustituibles unas
por otras.

En general, Benet et al. no proporcionan enseñanzas que pudieran ser seguidas por personas expertas en las técnicas médica y farmacéutica para identificar combinaciones de fármacos biopotenciadores/diana adecuados ni para diseñar regímenes y programas de tratamiento específicos que hicieran que los agentes dianas fueran terapéuticamente eficaces tras la administración por vía oral.

Por tanto, se requiere, y no ha sido proporcionado por la técnica anterior, un método seguro y eficaz para aumentar la disponibilidad general por administración por vía oral de los fármacos que se administran normalmente sólo por vía parenteral debido a que no son absorbidos suficiente o consistentemente cuando se administran por la vía oral.

Sumario de la invención

Sorprendentemente, se ha descubierto ahora y verificado experimentalmente que pueden usarse ciertos agentes que evidentemente inhiben la actividad de transporte del fármaco por la P-glicoproteína, particularmente las ciclosporinas, para aumentar sustancialmente la biodisponibilidad oral de agentes farmacéuticos no disponibles o de otro modo malamente disponibles, por ejemplo, los fármacos anti-cáncer paclitaxel (denominado anteriormente taxol), así como sus análogos y derivados, y etopósido.

La presente invención se refiere al aumento de la biodisponibilidad oral de agentes farmacéuticos que son mal absorbidos o no absorbidos en absoluto desde el tracto gastrointestinal o intestino por la pre-administración y/o administración simultánea a un sujeto por vía oral de uno o una combinación de agentes que se sabe que son eficaces para inhibir la bomba de transporte del fármaco por P-glicoproteína. Si se usa pre-administración, el agente o agentes potenciadores de la biodisponibilidad deben ser administrados en cantidades suficientes y en un periodo de tiempo suficientemente corto antes de la administración del fármaco cuya biodisponibilidad hay que aumentar (el " fármaco diana" o " agente diana") de modo que un nivel suficiente del agente potenciador permanezca en el sitio de absorción en el momento de la administración del agente diana para inhibir eficazmente la actividad de la P-glicoproteína u otras sustancias transportadoras de múltiples fármacos.

La presente invención se refiere en un aspecto al uso de un agente potenciador de la biodisponibilidad oral en la fabricación de un medicamento para aumentar la biodisponibilidad de un taxano tras la administración por vía oral en combinación con dicho taxano.

En un segundo aspecto, la invención se refiere al uso de un agente potenciador de la biodisponibilidad oral en la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente mamífero afectado por una enfermedad sensible a un taxano tras la administración por vía oral en combinación con dicho taxano.

En un tercer aspecto, la invención se refiere al uso de un taxano en la fabricación de un medicamento para administración por vía oral en combinación con un agente potenciador de la biodisponibilidad oral para conseguir el aumento de la biodisponibilidad del taxano.

En un cuarto aspecto, la invención se refiere al uso de un taxano en la fabricación de un medicamento para administración por vía oral en combinación con un agente potenciador de la biodisponibilidad oral para tratar a un paciente mamífero afectado por una enfermedad sensible a un taxano.

En un quinto aspecto, la invención se refiere a una composición adecuada para administración por vía oral, que comprende cantidades eficaces de un taxano, y un agente potenciador de la biodisponibilidad oral, en la que el taxano consigue niveles de actividad terapéutica cuando dicha composición se administra por vía oral a un paciente mamífero.

En un sexto aspecto, la invención se refiere a un kit que comprende una forma farmacéutica oral que contiene un agente potenciador de la biodisponibilidad oral y una forma farmacéutica oral que contiene un taxano, o una forma farmacéutica oral en combinación que contiene tanto el agente potenciador como el taxano, en el que tras la co-administración por vía oral del taxano y el agente potenciador, se consiguen niveles de actividad terapéutica del taxano.

Como se presentó originalmente, la presente solicitud describía que el agente potenciador de la biodisponibilidad puede seleccionarse del grupo que consiste en ciclosporinas A a Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium, ketoconazol, dexverapamilo, amiodarona, nifedipino, reserpina, quinidina, nicardipino, ácido etacrínico, propafenona, amilorida, alcaloides del cornezuelo del centeno, cefoperazona, tetraciclina, cloroquina, fosfomicina, ivermectina, tamoxifeno, VX-710, VX-853, genisteína e isoflavonoides relacionados, calfostina, ceramidas, morfina, congéneres de la morfina, otros opiáceos y antagonistas de los opiáceos. La firma solicitante ha dividido ahora voluntariamente la presente solicitud entre las invenciones en la que el agente potenciador de la biodisponibilidad oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste en ciclosporinas A-Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium, e invenciones en las que el agente potenciador de la biodisponibilidad no es una ciclosporina seleccionada de este grupo.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel en muestras de suero tomadas en un periodo de 6 - 8 horas de tres grupos de ratas: a un grupo se administró sólo paclitaxel por vía intravenosa, a un segundo grupo se administró sólo paclitaxel por vía oral y a un tercer grupo se administró paclitaxel por vía oral con dosis de ciclosporina A (denominada de aquí en adelante ciclosporina o CsA) por vía oral antes e inmediatamente después de la dosis de paclitaxel.

La Figura 2 es una gráfica que compara los niveles de paclitaxel en suero tomado de dos de los tres grupos de ratas reflejados en la Fig. 1: el grupo al que se administró sólo paclitaxel por vía oral y el grupo al que se administró paclitaxel por vía oral con dosis anteriores y concomitantes de ciclosporina por vía oral.

La Figura 3 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel en muestras de plasma tomadas durante un periodo de 24 horas de dos grupos de ratas: a un grupo (A) al que se administró ciclosporina por vía oral una hora antes de la combinación de ciclosporina más paclitaxel por vía oral y al segundo grupo (F) al que se administró sólo ciclosporina por vía oral una hora antes de paclitaxel por vía oral.

La Figura 4 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel en muestras de plasma de dos grupos de ratas: a un grupo (G) se administró paclitaxel por vía IV 3 horas después de una dosis por vía oral de ciclosporina y al segundo grupo (H) se administró sólo paclitaxel por vía IV.

La Figura 5 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo (Grupo A) se administró únicamente paclitaxel radiomarcado por vía IV, a un segundo grupo (Grupo B) se administró únicamente paclitaxel radiomarcado por vía oral y a un tercer grupo (Grupo C) se administró paclitaxel radiomarcado por vía oral con dosis de ciclosporina oral antes e inmediatamente después de la dosis de paclitaxel.

La Figura 6 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de las ratas individuales del Grupo B (definido con relación a la Figura 5).

La Figura 7 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de las ratas individuales del Grupo C (definido con relación a la Figura 5).

La Figura 7A es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad total y el paclitaxel inalterado detectados en muestras de sangre entera tomadas de un grupo de 10 ratas durante un periodo de 24 horas, habiéndole sido administrado a dicho grupo paclitaxel radiomarcado (9 mg/kg) por vía oral con dosis de ciclosporina por vía oral (5 mg/kg) antes e inmediatamente después de la dosis de paclitaxel.

La Figura 7B es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad total y los metabolitos 1, 2 y 3 de paclitaxel detectados en muestras de sangre entera tomadas del grupo de 10 ratas definido con relación a la Figura 7A durante un periodo de 24 horas.

La Figura 8 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: al primer grupo se administró 10 mg/kg de verapamilo por vía oral como agente potenciador, al segundo grupo se administró progesterona por vía oral como agente potenciador y al tercero se administró dipiridamol por vía oral como agente potenciador, habiéndosele administrado a cada grupo una dosis por vía oral del mismo agente potenciador una hora más tarde inmediatamente después de una dosis oral de paclitaxel radiomarcado.

La Figura 9 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del primer grupo definido con relación a la Figura 8 (al que se administró 10 mg/kg de verapamilo por vía oral), un grupo de ratas al que se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas al que se administró ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 10 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del segundo grupo definido con relación a la Figura 8 (al que se administró progesterona por vía oral), un grupo de ratas al que se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas al que se administró ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 11 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del tercer grupo definido con relación a la Figura 8 (al que se administró dipiridamol por vía oral), un grupo de ratas al que se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas que recibieron ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 12 ilustrativa es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo se administró 100 mg/kg de verapamilo por vía oral^{1} como agente potenciador, a un segundo grupo se administró acetato de megestrol (comercializado como MEGACE® por Bristol-Myers Squibb Oncology) por vía oral como agente potenciador y a un tercer grupo se administró ketoconazol por vía oral como agente potenciador, habiéndosele administrado a cada grupo la misma dosis oral del mismo agente potenciador una hora más tarde inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 13 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del primer grupo definido con relación a la Figura 12 (al que se administró 100 mg/kg de verapamilo por vía oral), un grupo de ratas al que se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas al que se administró ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

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La Figura 14 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del segundo grupo definido con relación a la Figura 12 (al que se administró acetato de megestrol por vía oral), un grupo de ratas al que se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas al que se administró ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado oral.

La Figura 15 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del tercer grupo definido con relación a la Figura 12 (al que se administró ketoconazol por vía oral), un grupo de ratas al que se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas que recibieron ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 16 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del primer grupo definido con relación a la Figura 8 (al que se administró 10 mg/kg de verapamilo), el primer grupo definido con relación a la Figura 12 (al que se administró 100 mg/kg de verapamilo), un grupo de ratas que recibieron sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas que recibieron ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 17 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas durante un periodo de 24 horas de las ratas del segundo grupo definido con relación a la Figura 8 (al que se administró progesterona por vía oral), el segundo grupo definido con relación a la Figura 12 (al que se administró acetato de megestrol por vía oral), un grupo de ratas que recibieron sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y un grupo de ratas que recibieron ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 17A es una gráfica que refleja la comparación de curvas dosis- respuesta en un grupo de ratas que recibieron ciclosporina por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral con un grupo de ratas que recibieron ketoconazol por vía oral una hora antes y de nuevo inmediatamente después de paclitaxel radiomarcado por vía oral. La Figura 17B es una comparación de los valores de AUC_{0-24} (área bajo la curva en 24 horas) determinados con relación a los dos mismos grupos de ratas.

La Figura 18 ilustrativa es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo se administró sólo etopósido radiomarcado por vía IV, a un segundo grupo se administró sólo etopósido radiomarcado por vía oral y a un tercer grupo se administró etopósido radiomarcado por vía oral con dosis de ciclosporina por vía oral antes e inmediatamente después de la dosis de etopósido, siendo la escala de ordenadas de 0 a 1 equivalentes de etopósido en ppm en sangre entera.

La Figura 19 ilustrativa es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de los tres grupos de ratas definidos con relación a la Figura 18, siendo la escala de ordenadas de 0 a 0,2 equivalentes de etopósido radiomarcado en ppm en sangre entera.

La Figura 20 es una gráfica que refleja el % medio acumulativo de dosis de radiactividad detectada en las heces y orina de tres grupos de ratas durante un periodo de 168 horas: a un grupo se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía IV, a un segundo se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y a un tercer grupo se administró paclitaxel radiomarcado por vía oral con dosis de ciclosporina por vía oral antes e inmediatamente después de la dosis de paclitaxel.

La Figura 21 es una gráfica de barras que refleja los valores medios en ppm de equivalentes de paclitaxel detectados en sangre y plasma de los tres grupos de ratas definidos con relación a la Figura 20 durante 168 horas (7 días) después de la administración de paclitaxel.

La Figura 22 es una gráfica de barras que refleja los valores medios en ppm de equivalentes de paclitaxel detectados en diversos tejidos (hígado, riñón, testículos y cuerpo abierto en canal sin vísceras) de los tres grupos de ratas definidos con relación a la Figura 20 durante 168 horas (7 días) después de la administración de paclitaxel.

La Figura 23 es una gráfica de barras que refleja los valores medios en ppm de equivalentes de paclitaxel detectados en diversos tejidos (músculos, páncreas, huesos, pulmones y vesículas seminales) de los tres grupos de ratas definidos con relación a la Figura 20 durante 168 horas (7 días) después de la administración de paclitaxel.

La Figura 24 es una gráfica de barras que refleja los valores medios en ppm de equivalentes de paclitaxel detectados en diversos tejidos (cerebro, corazón, tracto G.I., bazo y próstata) de los tres grupos de ratas definidos con relación a la Figura 20 durante 168 horas (7 días) después de la administración de paclitaxel.

La Figura 25 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo se administró ciclosporina D por vía oral tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, a un segundo grupo se administró ciclosporina G por vía oral tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, y a un tercer grupo se administró ciclosporina A tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 26 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo se administró ketoconazol por vía oral tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis oral de paclitaxel radiomarcado, a un segundo grupo se administró una dosis combinada de ciclosporina A y ketoconazol por vía oral tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, y a un tercer grupo se administró ciclosporina A tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 27 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo se administró captopril por vía oral tanto dos horas antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, a un segundo grupo se administró ciclosporina A tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral y a un tercer grupo se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 28 muestra el perfil de radiactividad de un extracto para HPLC de plasma de las ratas en el Grupo C definido con relación a la Figura 5.

La Figura 29 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de cuatro grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo se administraron 10 mg/kg de ciclosporina D por vía oral tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, a un segundo grupo se administraron 10 mg/kg de ciclosporina F por vía oral tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, a un tercer grupo se administraron 5 mg/kg de ciclosporina D tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral, y a un cuarto grupo se administraron 5 mg/kg de ciclosporina F tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

La Figura 30 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de los tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo (Grupo A) se administró únicamente docetaxel radiomarcado (“Taxotere”) por vía IV, a un segundo grupo (Grupo B) se administró únicamente docetaxel radiomarcado por vía oral y a un tercer grupo (Grupo C) se administró docetaxel radiomarcado por vía oral con dosis de ciclosporina por vía oral antes e inmediatamente después de la dosis de docetaxel, siendo las ordenadas de dicha gráfica de 0-12,0 equivalentes medios de docetaxel en ppm.

La Figura 31 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de los tres grupos de ratas definidos como en la Figura 30, pero siendo las ordenadas de dicha gráfica de 0-2,0 equivalentes medios de docetaxel en ppm.

La Figura 32 es una gráfica que refleja los niveles de radiactividad detectados en muestras de sangre entera tomadas de tres grupos de ratas durante un periodo de 24 horas: a un grupo (Grupo A) se administró únicamente paclitaxel radiomarcado por vía IV, a un segundo grupo (Grupo 8) se administró sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y a un tercer grupo (Grupo C) se administró paclitaxel radiomarcado por vía oral con dosis de ciclosporina por vía oral antes e inmediatamente después de la dosis de paclitaxel.

La Figura 33 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel radiomarcado inalterado detectados en muestras de sangre entera tomadas de los tres grupos de ratas definidos con relación a la Figura 32 durante 1-24 horas después de la dosis.

La Figura 34 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel radiomarcado inalterado detectados en muestras de sangre entera tomadas 0-12 horas después de la dosis de las ratas del Grupo A definido con relación a la Figura 32 y de un cuarto grupo de ratas (Grupo D) al que se administró paclitaxel radiomarcado por vía IV con dosis de ciclosporina por vía oral antes e inmediatamente después de la dosis de paclitaxel, siendo las ordenadas de dicha gráfica de 0-30 ppm de paclitaxel.

La Figura 35 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel radiomarcado inalterado detectados en muestras de sangre entera tomadas 1-12 horas después de la dosis de las ratas del Grupo A definido con relación a la Figura 32 y del Grupo D definido con relación a la Figura 34, siendo las ordenadas de dicha gráfica de 0,000-5,000 ppm de paclitaxel.

Las Figs. 36-41 son esquemas de procesos de la extracción y reparto de radiactividad del material reunido (homogeneizado) de diversos órganos de las ratas de los Grupos A y C, respectivamente, definidos con relación a la Figura 32.

La Figura 42 es una gráfica que refleja los niveles de paclitaxel detectados en muestras de plasma tomadas a intervalos de tiempo especificados de un grupo de diez ratas el tercer y cuarto días de un régimen en el que se administraron dos veces al día una dosis (5 mg/kg) de ciclosporina por vía oral y, una hora más tarde, la combinación de la misma dosis de ciclosporina por vía oral más paclitaxel por vía oral (3 mg/kg).

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere en general a aumentar la absorción por vía oral y la biodisponibilidad tras la administración por vía oral de taxanos. Las realizaciones preferidas de la invención se refieren a: (a) aumentar la biodisponibilidad oral de agentes anti-tumorales del grupo del taxano, in particular paclitaxel (usualmente comercializado como TAXOL® by Bristol-Myers Squibb Oncology Division) y sus derivados; otros taxanos; el análogo semi-sintético del paclitaxel denominado docetaxel (N-desbenzoil-N-terc.butoxicarbonil-10-desacetil-paclitaxel), producido bajo la marca registrada TAXOTERE® por Rhone-Poulenc Rorer S.A.; (b) formas farmacéuticas y kits de taxanos administración por vía oral de taxanos hasta ahora administradas sólo por vía parenteral; y (c) tratamiento de pacientes con cáncer con dichas formas farmacéuticas orales o sus combinaciones.

Las frases "biodisponibilidad oral" y "biodisponibilidad tras la administración por vía oral" como se usan en la presente memoria se refieren a la disponibilidad general (es decir, niveles en sangre/plasma) de una cantidad dada de fármaco administrado por vía oral a un paciente.

Paclitaxel es un producto diterpénico natural aislado del árbol tejo del Pacífico (Taxus brevifolia). Es un miembro de la familia del taxano de tipo terpénico. Se aisló primeramente en 1971 por Wani et al. (J. Am. Chem. Soc., 93:2325, 1971), quien caracterizó su estructura por métodos químicos y cristalográficos de rayos X. Un mecanismo de su actividad se refiere a la capacidad del paclitaxel de unirse a la tubulina, inhibiendo con ello el crecimiento de las células cancerosas. Schiff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol. Chem., 256:10435-10441 (1981).

El paclitaxel ha sido aprobado en EE.UU. para uso clínico en el tratamiento de cáncer de ovario resistente (Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583,1991; McGuire et al., Ann. lntern. Med., 111:273, 1989). Es eficaz para quimioterapia para diversos tipos de neoplasmas incluyendo de pecho (Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797, 1991) y también ha sido aprobado para el tratamiento de cáncer de pecho. Es un candidato potencial para el tratamiento de neoplasmas en la piel (Einzig et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46) y de carcinomas de cabeza y cuello (Forastire et al. Sem. Oncol., 20:56, 1990). El compuesto también muestra potencial para el tratamiento de poliquistocis renal (Woo et al., Nature, 368:750, 1994), cáncer de pulmón y malaria.

El paclitaxel es sólo ligeramente soluble en agua y esto ha creado problemas significativos en el desarrollo de formulaciones adecuadas inyectables y de infusión útiles para la terapia anticáncer. Se han desarrollado algunas formulaciones de paclitaxel para inyección intravenosa utilizando CREMOPHOR E® (aceite de ricino polietoxilado) como vehículo del fármaco debido a la insolubilidad en agua del paclitaxel. Por ejemplo, el paclitaxel usado en pruebas clínicas bajo el amparo del NCI (Nacional Cancer Institute de EE.UU.) ha sido formulado en CREMOPHOR EL® al 50% y alcohol deshidratado al 50%. Sin embargo, el CREMOPHOR EL® cuando se administra por vía intravenosa, es por si mismo tóxico y produce vasodilatación, respiración fatigosa, letargia, hipotensión y muerte en perros. También se cree responsable de reacciones de tipo alérgico observadas durante la administración del paclitaxel.

En un intento de aumentar la solubilidad del paclitaxel y desarrollar formulaciones clínicas más seguras, se han realizado estudios dirigidos a sintetizar análogos del paclitaxel en donde la posición 2' y/o 7 se derivativa con grupos que podrían aumentar la solubilidad en agua. Estos esfuerzos han proporcionado compuestos pro-fármacos que son más solubles en agua que el compuesto precursor y que por activación exhiben actividades citotóxicas. Un importante grupo de dichos pro-fármacos incluye las sales de 2'-onio de paclitaxel y docetaxel, particularmente las sales mesilato de 2'-metilpiridinio (2'-MPM).

El paclitaxel se absorbe muy malamente cuando se administra por vía oral (menor que 1%); véase Eiseman et al., Second NCI Workshop on Taxol and Taxus (Sept. 1992); Stuffness et al. in Taxol Science and Applications (CRC Press 1995). Eiseman et al. indican que el paclitaxel tiene una biodisponibilidad de 0% tras la administración por vía oral, y Stuffness et al. Informan que la dosificación por vía oral con paclitaxel no parecía posible, puesto que no se encontró evidencia de actividad antitumoral tras la administración por vía oral de hasta 160 mg/kg/día. Además, no se ha desarrollado un método eficaz para facilitar la administración eficaz de paclitaxel por vía oral (es decir, un método de aumentar la biodisponibilidad oral de paclitaxel) o de otros taxanos o análogos del paclitaxel por vía oral, tales como docetaxel que exhibe actividad antitumoral. Por esta razón, el paclitaxel no ha sido administrado hasta ahora por vía oral a pacientes humanos, y ciertamente no en el curso de tratar enfermedades sensibles al
paclitaxel.

El docetaxel ha llegado a estar comercialmente disponible como TAXOTERE® en forma parenteral para el tratamiento de cáncer de pecho. Hasta la fecha no se han encontrados referencias en la literatura científica a la absorción por vía oral del docetaxel en animales o pacientes.

El etopósido es un derivado semisintético de la podofilotoxina y se usa en el tratamiento de ciertas enfermedades neoplásicas usadas en el tratamiento, particularmente cánceres de células germinales (por ejemplo, cánceres testiculares) y cánceres del pulmón de células pequeñas (Loehrer, Sem. Onc., 19, no. 6, supp. 14, pp. 48-52, 1992). Esta disponible en una forma de dosificación para la vía oral (cápsulas VEPESID®, Bristol-Myers Squibb Oncology) pero no es absorbido bien consistentemente por vía oral, (el valor medio de la biodisponibilidad oral para cápsulas de etopósido es aproximadamente 50%).

Las ciclosporinas son un grupo de oligopéptidos cíclicos no polares (algunas de las cuales tienen actividad inmunosupresora) producidas por el género Tolypyctadium, incluyendo, e.g. Tolypycladium inflatum Garns, (anteriomente denominada Trichoderma polysporum), Tolypycladium terricola y otros hongos imperfectos. El constituyente principal, la ciclosporina A (ciclosporina o CsA) ha sido identificado junto con otros varios metabolitos, por ejemplo, ciclosporinas B a Z, algunas de las cuales exhiben sustancialmente menos actividad inmunosupresora que la ciclosporina A. También se han preparado cierto número de análogos sintéticos y semisintéticos. Véase generalmente Jegorov et al., Phytochemistry, 38: 403-407 (1995). La presente invención comprende análogos de ciclosporinas naturales, semi-sintéticos y sintéticos.

Las ciclosporinas son undecapéptidos cíclicos neutros, lipófilos con pesos moleculares de aproximadamente 1200. Se usan por vía intravenosa u oral como inmunosupresores, principalmente para trasplantes de órganos y otros determinados estados. Las ciclosporinas, particularmente la ciclosporina (ciclosporina A) son inhibidores conocidos de la bomba de eflujo la P-glicoproteína, así como de ciertas enzimas degradantes P450, pero hasta la fecha no se han desarrollado regímenes eficaces para aplicar esta propiedad clínicamente hasta el punto de factibilidad clínica y comercial o aprobación reglamentaria.

Desde un punto de vista mecanístico, la ciclosporina administrada por vía oral tiene el potencial de inhibir la bomba de P-glicoproteína en el intestino delgado superior que es el sitio en el que se absorben la mayoría de los fármacos. Con la administración intravenosa de un fármaco que es altamente metabolizado como le sucede a la ciclosporina, no es posible que aparezca intacto en esa región del intestino en la que normalmente se absorben los fármacos. Después de la administración parenteral, la ciclosporina es extraída por el hígado y entra en la vesícula bilial y el intestino distal a esta zona de óptima absorción. Uno de los sorprendentes descubrimientos de la invención es que la inmunosupresión observada con ciertas ciclosporinas no está inextricablemente asociada a la mejora en la biodisponibilidad oral de los agentes terapéutico. Así, la ciclosporina F aumenta la biodisponibilidad oral del paclitaxel incluso cuando, de acuerdo con los informes de la literatura médica, no presenta actividad inmunosupresora. Stewart et al., Transplantation Proceedings, 20:(Supp. 3) 989-992 (1988); Granelli-Piperno et al., Transplantation, 46:53S-60S (1988).

El ketoconazol es un derivado del imidazol antifúngico ampliamente utilizado que también se ha usado en cierto grado en el tratamiento del carcinoma de próstata. El ketoconazol ha mostrado, como una de sus actividades, invertir la MDR en células de carcinoma KB humano altamente resistentes (Siegsmund et al., J. Urology, 151: 485-491, 1994), pero también puede inhibir las enzimas citocromo P-450 metabolizantes de fármacos.

Ahora se ha descubierto que muchos agentes farmacéuticos con defectuosos perfiles de absorción por vía oral puede administrarse eficazmente por vía oral con suficiente absorción general para exhibir niveles de actividad terapéutica cuando dichos agentes se co-administran por vía oral con una dosis oral de ciertas ciclosporinas u otros agentes que se sabe que inhiben la multirresistencia a fármacos, la actividad del transporte de fármacos de la bomba intracelular P-glicoproteína, así como ciertos agentes potenciadores cuya capacidad para inhibir el transporte de P-glicoproteína aún no ha sido determinada. Otro descubrimiento sorprendente de nuestra invención es que bajo ciertas condiciones, la administración por vía oral conduce a un perfil farmacocinético más favorable, mejor penetración en los tejidos y mayor volumen de distribución del agente terapéutico diana.

Hemos observado en estudios en animales que ciertos agentes supresores de la multirresistencia a fármacos, tales como ciclosporina y ketoconazol, cuando se administran por vía oral e inmediatamente después y/o antes de fármacos tales como paclitaxel, aumentan la absorción de estos fármacos desde el intestino en un grado inesperado y sorprendente, dando como resultado que se consigan niveles terapéuticos. Sin embargo, no está absolutamente claro que estos resultados se consigan debido a la supresión de la bomba de P-glicoproteína.

Otra posible explicación para el aumento de biodisponibilidad observado del paclitaxel es que puede haber interacción al nivel de las enzimas metabolizantes del fármaco para la ciclosporina y paclitaxel. Se sabe que ambos agentes son altamente metabolizados por el sistema citocromo P-450 (por ejemplo, P450 3A), que está concentrado en el hígado, así como en el intestino delgado. Es concebible que la ciclosporina que se administró primeramente pueda haber inhibido estas enzimas de modo que el paclitaxel, que es no polar y lipófilo, pueda ser absorbido. En ausencia de esta inhibición local, el paclitaxel sería metabolizado a metabolitos más polares que no atravesarían las células de la mucosa. El fracaso en demostrar una interacción farmacocinética entre ciclosporina y paclitaxel cuando se administró ciclosporina 3 horas antes de la administración de paclitaxel por vía intravenosa sugiere que el sitio de interacción era el lúmen del intestino. Esta interpretación teórica incluso no explica nuestro sorprendente descubrimiento de que ciertos inhibidores de la P-glicoproteína (por ejemplo, ciclosporinas y ketoconazol) aumentan en un alto grado la biodisponibilidad oral de fármacos específicos dianas, mientras que otros agentes de los que se sabe que son inhibidores activos de la P-glicoproteína exhiben poca actividad como potenciadores de la absorción por vía oral para los mismos fármacos dianas.

Esta inhibición teorizada del metabolismo intestinal del agente diana tendría poco o ningún efecto en aumentar los niveles generales en sangre cuando el agente diana se administra por vía intravenosa. Además, puesto que el efecto primario del agente potenciador de la absorción por vía oral puede ser un efecto local en el lúmen del intestino, las dosis subterapéutica debe ser eficaz en conseguir el efecto deseado. Esto es una consideración importante en el caso de agentes potenciadores, tales como las ciclosporinas que tienen una potente actividad inmunosupresora y pueden presentar problemas de toxicidad si se administran a altos niveles de dosis. Nuestra observación de que las ciclosporinas no inmunosupresoras, tales como la ciclosporina F, incluso pueden funcionar como potenciador oral es de gran valor clínico.

Es importante advertir que aunque aportamos hipótesis en lo que se refiere a los mecanismos de acción que subyacen a nuestra invención, realmente no sabemos el(los) mecanismo(s) responsable(s) de los hallazgos sorprendentes descritos en la presente memoria; y esto no impide a un experto en la técnica llevar a la práctica la invención descrita.

El método de la invención para aumentar la biodisponibilidad oral de un agente terapéutico diana con mala biodisponibilidad oral (biodisponibilidad media de 50% o menos) comprende la administración por vía oral de un agente potenciador de la absorción o biodisponibilidad oral a un paciente mamífero (humano o animal) simultáneamente con, o antes de, o tanto simultáneamente, con y antes de la administración por vía oral para aumentar la cantidad y duración de la absorción del agente diana intacto en la corriente sanguínea.

Los agentes potenciales administrados por vía oral que pueden usarse de acuerdo con la invención incluyen los siguientes:

Ciclosporinas, incluyendo ciclosporinas A a Z, pero particularmente ciclosporina A (ciclosporina), ciclosporina F, ciclosporina D, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, PSC-833, SDZ-NIM 811^{2} (ambos de Sandoz Pharmaceutical Corp.), y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium. Las estructuras de las ciclosporinas A-Z se describen en la Tabla 1 más adelante.

La clase de agentes terapéuticos dianas administrados por vía oral cuya absorción por vía oral se aumenta por los agentes potenciadores incluye, los siguientes:

Paclitaxel, otros taxanos, docetaxel y derivados y profármacos de todos los anteriores, particularmente sus sales 2'-MPM y otras sales de 2'-metilpiridinio.

TABLA 1 Ciclosporinas A-Z

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1

\newpage

Ciclosporina	Aminoácidos
Cy-	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
CyA	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyB	Mebmt	Ala	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyC	Mebmt	Thr	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyD	Mebmt	Val	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyE	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	Val
CyF	Desoxi-	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
	Mebmt
CyG	Mebmt	Nva	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyH	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	D-Mev
CyI	Mebmt	Val	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyK	Desoxi-		Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
	Mebmt
CyL	Bmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyM	Mebmt	Nva	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyN	Mebmt	Nva	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyO	Mebmt	Nva	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyP	Mebmt	Thr	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyQ	Mebmt	Abu	Sar	Val	Val	Leu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyR	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyS	Mebmt	Thr	Sar	Val	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyT	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	Leu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyU	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyV	Mebmt	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	Leu	Val
CyW	Mebmt	Nva	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	Leu	MeLeu	MeVal
CyX	Mebmt	Nva	Sar	MeLeu	Val	Leu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
CyZ	Ácido	Abu	Sar	MeLeu	Val	MeLeu	Ala	D-ala	MeLeu	MeLeu	MeVal
	MeAmino
	octílico

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El intervalo de dosificación del agente potenciador que ha de ser co-administrado con el agente diana de acuerdo con la invención es aproximadamente 0,1 a aproximadamente 15 mg/kg de peso corporal del paciente. La “co-administración” del agente potenciador comprende la administración sustancialmente simultánea con el agente diana (menos que 0,5 horas antes, menos que 0,5 horas después o conjuntamente), desde aproximadamente 0,5 a aproximadamente 24 horas antes de la administración del agente diana, o ambos, es decir, con una o más dosis del mismo o de diferentes agentes potenciadores administrados al menos 0,5 horas antes y una dosis dada sustancial y simultáneamente con (junto con o inmediatamente antes o después) el agente diana. Adicionalmente, la "co-administración" comprende administrar más de una dosis de agente diana en las 24 horas después de una dosis de agente potenciador. En otras palabras, el(los) agente(s) potenciador(es) no necesitan administrarse de nuevo antes o con cada administración de agente diana, sino que puede(n) ser administrado(s) intermitentemente durante el curso del
tratamiento.

El intervalo de dosificación de los agentes dianas administrados por vía oral puede variar de fármaco a fármaco basándose en su índice terapéutico, los requerimientos del estado que se trate, el estado del sujeto y similares. El método de la invención hace posible administrar paclitaxel por vía oral variando desde aproximadamente 20 mg/m^{2} a aproximadamente 1000 mg/m^{2} (basado el área superficial del cuerpo del paciente) o aproximadamente 2-30 mg/kg (basado en el peso corporal del paciente) en forma de una dosis diaria única o dividida (2-3), y mantienen los niveles en plasma de paclitaxel en seres humanos en el intervalo de 50-500 ng/ml durante períodos prolongados de tiempo (por ejemplo, 8-12 horas) después de cada dosis oral. Estos niveles son al menos comparables a los conseguidos con terapia de infusión de taxol de 96 horas por vía intravenosa (que causa al paciente gran inconveniente, malestar, pérdida de tiempo, infección potencial, etc.). Además, dichos niveles en plasma de paclitaxel son más que suficientes para proporcionar las actividades farmacológicas deseadas del fármaco diana, por ejemplo, inhibición del desensamblamiento de la tubulina (que ocurre a niveles de aproximadamente 0,1 \muM, o aproximadamente 85 ng/ml) e inhibición de la isoprenilación de proteínas (que ocurre a niveles de aproximadamente 0,03 \muM, o aproximadamente 25 ng/ml) que están directamente relacionados con sus efectos antitumorales inhibiendo las funciones de los oncogenes y otras proteínas transductoras de señal que desempeñan un papel importante en la regulación del crecimiento celular.

En algunos casos puede ser adecuado administrar al sujeto una dosis de carga inicial superior del agente diana para conseguir los máximos niveles en sangre, seguido por dosis de mantenimiento inferiores.

Pueden administrarse conjuntamente dos o más agentes potenciadores diferentes y/o dos o más agentes dianas diferentes, alternativa o intermitentemente en todos los diversos aspectos del método de la invención.

La presente invención también comprende métodos de tratar pacientes mamíferos afligidos con cánceres, tumores, sarcoma de Kaposi, malignidades, proliferación incontrolada de tejidos o células secundaria a daño de tejidos, y cualesquiera otras enfermedades sensibles a paclitaxel, taxanos, docetaxel, profármacos y derivados de todos los anteriores, paclitaxel 2'-MPM, y docetaxel 2'-MPM con formas farmacéuticas administradas por vía oral que comprenden uno o más de dichos agentes. Entre los tipos de carcinoma que pueden tratarse particularmente de un modo eficaz con paclitaxel, docetaxel, otros taxanos y sus profármacos por vía oral están carcinoma hepatocelular y metástasis de hígado, y cánceres del tracto gastrointestinal, páncreas y pulmón. Ejemplos de estados morbosos no cancerosos que pueden tratarse eficazmente con los agentes administrados por vía oral de acuerdo con la presente invención están la proliferación incontrolada de tejidos o células secundaria a daño de tejidos, poliquistosis renal y malaria, incluyendo parásitos de malaria resistentes a cloroquina y pirimetamina (Pouvelle et al., J. Clin. Invest., 44: 413-417, 1994).

Los agentes antitumorales que hasta ahora se administraban sólo por vía parenteral pueden ser administrados ahora de acuerdo con la invención por vía oral con suficiente biodisponibilidad para proporcionar concentraciones en sangre farmacológicamente activas que serán particularmente eficaces en el tratamiento de pacientes con tumores primarios y metástasis. Los ingredientes activos penetrarán en el intestino como resultado de la administración anterior y/o concomitante de los inhibidores de MDR u otros potenciadores y se absorberán rápidamente por la circulación portal, proporcionando una mayor concentración local inicial de los agentes quimioterapéuticos en el hígado (una concentración local mucho mayor que la que se consigue corrientemente con la terapia de infusión por vía intravenosa) que en la circulación sistémica general o en muchos otros órganos en siete días. Además, debe advertirse que niveles superiores de paclitaxel en el hígado después de la administración por vía oral pueden no reflejarse en aumento de niveles en plasma debido al alto efecto del primer paso del hígado. El método de la invención, al producir selectivamente altas concentraciones en sangre de agentes antitumorales, es particularmente valioso en el tratamiento de cánceres de hígado (por ejemplo, carcinoma hepatocelular y metástasis de hígado), cánceres gastrointestinales (por ejemplo, de colon, rectal) y cánceres de pulmón.

Similarmente, después de la administración por vía oral de acuerdo con la presente invención se encuentran superiores niveles de paclitaxel después de veinticuatro horas (por análisis de distribución en tejidos) en el tracto gastrointestinal, páncreas y pulmón en comparación con la circulación general y la mayoría de los otros órganos. Este hecho hace que el paclitaxel administrado por vía oral sea de gran valor en el tratamiento de cánceres del tracto gastrointestinal, páncreas y pulmón.

Las Figuras 21-24 son especialmente sorprendentes y dignas de atención. Nuestra invención, en ciertos casos, proporciona un método para conseguir concentraciones locales en tejidos comparables y algunas veces más altas de paclitaxel por la vía oral que por la vía intravenosa. Esto es consistente con un mayor volumen de distribución del agente terapéutico. Además, se ha demostrado que la administración por vía oral de un agente potenciador antes e inmediatamente después de un agente diana (en el caso de ciclosporina y paclitaxel, véase la Figura 20) que produce una mayor concentración del agente diana en la orina que incluso la administración por vía intravenosa. Esto debe hacer que el tratamiento de elección sea la co-administración del agente potenciador con el agente diana en el caso de pacientes con tumores o metástasis en el tracto génitourinario.

Aparte de la concentración local superior a la previamente conseguida de los ingredientes activos en el hígado, la distribución en plasma y tejidos de los agentes dianas activos administrados por vía oral con los agentes potenciadores adecuados como es proporcionada por la presente invención es notable y sorprendentemente similar a la observada por administración intravenosa. Una serie de estudios con animales experimentales mostró que los niveles de paclitaxel en estado estacionario en plasmas se consiguieron por co-administración por vía oral con CsA en el tercer día del régimen. Los niveles del agente diana conseguidos en estado estacionario fueron comparables a los conseguidos en pacientes mediante una infusión intravenosa de 96 horas de paclitaxel. Se encontró una tasa de respuesta del 27% en pacientes que fracasaban con taxano con cáncer metastásico de pecho tratados con una infusión continua de 96 horas cada tres semanas (Seidman et al., J. Clin. Oncol., 14:1877, 1996). Se cree que pueden conseguirse resultados similares con métodos de tratamiento de la presente invención, sin las molestias, inconvenientes y riesgos de las infusiones prolongadas por vía intravenosa.

Además, y de un modo bastante significativo, la concentración en la fase de eliminación en la sangre de paclitaxel y los otros agentes antitumorales enumerados anteriormente, cuando son administrados por vía oral como se proporciona en la presente memoria, es aproximadamente igual a la conseguida por la administración intravenosa, y estos altos niveles, terapéuticamente eficaces, pueden mantenerse tanto como 8-12 horas después de cada administración. Este aumento en la excreción urinaria del fármaco después de la administración por vía oral en presencia de CsA no sólo justifica la mejor absorción por vía oral del paclitaxel, sino que también proporciona más fármaco que se aporta al trato génitourinario para el tratamiento de cánceres.

Las formas farmacéuticas orales de los agentes dianas cuya biodisponibilidad se aumenta por la co-administración de los agentes potenciadores pueden ser las formas de comprimidos, cápsulas, comprimidos en forma de cápsulas, cápsulas de gelatina, píldoras, líquidos (por ejemplo, soluciones, suspensiones o elixires), pastillas para chupar y cualesquiera formas farmacéuticas orales conocidas en las técnicas farmacéuticas. Las preparaciones líquidas pueden incluir, por ejemplo, paclitaxel o otro taxano en un vehículo que comprende CREMOPHOR EL u otro aceite de ricino etoxilado, alcohol y/o un mono-oleato de sorbitán polioxietilado (por ejemplo, TWEEN® 80, ICI Americas, Inc.). Cada forma farmacéutica incluye una cantidad eficaz de un agente diana (por ejemplo, cantidades eficaces de agentes antitumorales o antineoplásticos) e ingredientes farmacéuticamente inertes, por ejemplo, excipientes, vehículos, cargas, aglutinantes, disgregantes, disolventes, agentes solubilizantes, edulcorantes, agentes colorantes y cualesquiera otros ingredientes inactivos convencionales que están regularmente incluidos en las formas de dosificación farmacéuticas para administración por vía oral. Muchas de dichas formas farmacéuticas y vehículos para la vía oral se exponen inmediatamente después de las listas de ingredientes inactivos para los mismos en Remington's Pharmaceutical Sciences, l7th edition (1985). Cada forma farmacéutica también contiene una cantidad farmacológicamente eficaz de, por ejemplo, una cantidad reductora de tumor o antineoplástica de uno de los fármacos diana.

Las cantidades precisas de los fármacos dianas en las formas farmacéuticas para la vía oral variarán dependiendo de la edad, el peso, la enfermedad y el estado del paciente. Por ejemplo, las formas farmacéuticas del paclitaxel pueden contener cantidades suficientes de paclitaxel para proporcionar una dosis diaria de aproximadamente 20-1000 mg/m^{2} (basado en el área de la superficie corporal del paciente) o aproximadamente 2-30 mg/kg (basado en el peso corporal del paciente) en forma de dosis diarias solas o divididas.

Al establecer un régimen de tratamiento para un paciente particular tratado con las formas farmacéuticas que contienen el fármaco diana para vía oral de la invención, es necesario tener en cuenta el aumento de la biodisponibilidad proporcionado la administración por vía oral concomitante y/o previa de los agentes potenciadores.

Con la administración por vía oral pueden evitarse los altos máximos (picos) en sangre que son responsables de algunas de las toxicidades.

Los programas de dosificación para el método de tratamiento de la presente invención, por ejemplo, el tratamiento de enfermedades sensibles al paclitaxel con formas farmacéuticas de paclitaxel para vía oral co-administradas con agentes potenciadores, pueden ser ajustados análogamente para tener en cuenta las características de los pacientes y el estado de la enfermedad. Los programas de dosificación preferidos de paclitaxel por vía oral son: (a) la administración diaria a un paciente que lo necesite de 1-3 dosis igualmente divididas que proporcionen aproximadamente 20-1000 mg/m^{2} (basado en el área superficial del cuerpo), siendo continuada dicha administración diaria durante 1-4 días consecutivos cada 2-3 semanas, o (b) la administración durante aproximadamente un día cada semana. El programa anterior es comparable al uso de una infusión de paclitaxel de 96 horas cada 2-3 semanas, que se considera por algún régimen de tratamiento intravenoso preferido.

La administración por vía oral de potentes agentes quimioterapéuticos de acuerdo con la invención puede disminuir realmente los efectos secundarios tóxicos en muchos casos en comparación con la terapia intravenosa actualmente utilizada. En lugar de producir una concentración repentina y altamente rápida en los niveles de sangre, como es usualmente el caso con la infusión intravenosa, la absorción del agente activo a través de la pared intestinal (favorecida por los agentes potenciadores), proporciona una aparición más gradual en los niveles de sangre, un mantenimiento en estado estacionario estable de dichos niveles en el intervalo ideal, o en un valor próximo a dicho intervalo, durante un largo periodo de tiempo.

Según otro aspecto de la invención se proporcionan formas farmacéuticas para vía oral en combinación que contienen cantidades fijas de al menos un agente potenciador y al menos un agente diana. Por ejemplo, dichas formas farmacéuticas pueden consistir en comprimidos, cápsulas, comprimidos en forma de cápsulas, cápsulas de gelatina, píldoras, líquidos, pastillas para chupar y cualesquiera otras formas farmacéuticas que contienen como ingredientes activos una cantidad eficaz de un agente potenciado de la biodisponibilidad por vía oral y un agente antitumoral o anti-neoplástico, así como ingredientes inactivos adecuados. Uno de dichos productos en combinación incluye de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 15 mg/kg de uno o más de ciclosporinas A, D, C, F y G, dihidro-CsA, dihidro-CsC y acetil-CsA junto con aproximadamente 20 a aproximadamente 1000 mg/m^{2} (basados en el área superficial media del cuerpo del paciente) de paclitaxel, docetaxel, otros taxanos o derivados de paclitaxel o docetaxel, tales como paclitaxel 2'-MPM o docetaxel 2'-MPM.

La co-administración de agentes potenciadores con los fármacos dianas favorece no sólo la biodisponibilidad oral de dichos agentes, sino que también facilita su uso en el tratamiento de tumores en sitios altamente protegidos por la MDR, por ejemplo, los testículos y el cerebro. Otro aspecto de la presente invención es, por tanto, un método de administrar fármacos antitumorales a los sitios de los tumores protegidos por la MDR a través de la co-administración por vía oral de agentes potenciadores y agentes antitumorales, haciendo posible tratar tumores cerebrales, tales como glioblastoma multiforme.

Todavía otro aspecto de la presente invención es un método de administrar un metabolito de paclitaxel activo a un sitio de la enfermedad a niveles terapéuticos para tratar enfermedades sensibles al paclitaxel. Han sido identificados los principales metabolitos in vivo del paclitaxel, particularmente los siguientes metabolitos hidroxilados del paclitaxel A, B y C:

2

En ciertos ensayos in vitro, se ha encontrado que el metabolito B mostrado anteriormente (también denominado en la bibliografía metabolito M4) tiene un superior índice terapéutico (relación de nivel de concentración tóxica a nivel de concentración eficaz) que el paclitaxel en algunas líneas celulares de tumores humanos. La invención posiblemente también facilita el aporte de mayores cantidades de metabolito B y otros metabolitos activos de paclitaxel a los sitios tumorales debido a que tras la administración por vía oral la totalidad del paclitaxel administrado pasará a través del hígado y experimentan metabolismo por microsomas del hígado, proporcionando más de cada metabolito en la circulación general que el conseguido por la administración intravenosa.

Un aspecto adicional de la invención se refiere a kits para ser usados en el tratamiento de pacientes mamíferos que sufren estados sensibles a cualesquiera agentes diana farmacológicamente activos cuya absorción por vía oral y biodisponibilidad se aumenta por un agente potenciador. Estos kits incluyen una o más formas farmacéuticas orales de al menos un agente potenciador y uno o más o más formas farmacéuticas orales de al menos un agente diana, o uno o más formas de dosificación que comprenden ambos.

A modo de ilustración, un kit de la invención puede incluir uno o más comprimidos, cápsulas, tabletas en forma de cápsulas, cápsulas de gelatina o formulaciones líquidas que contienen ciclosporina o ketoconazol, y uno o más comprimidos, cápsulas, comprimidos de forma de cápsulas, cápsulas de gelatina o formulaciones líquidas que contienen paclitaxel o etopósido en cantidades de dosificación de los intervalos antes descritos. Tales kits pueden usarse en hospitales, clínicas, consultas de médicos o los hogares de los pacientes para facilitar la co-administración de los agentes potenciador y diana. Los kits también deben incluir un prospecto impreso con información para la co-administración de los agentes potenciador y diana.

Los kits antes citados también pueden incluir combinaciones de diferentes agentes potenciadores y/o combinaciones de agentes dianas. Por ejemplo, un kit puede incluir formas farmacéuticas orales que contienen respectivamente una ciclosporina y ketoconazol como agentes potenciadores, con paclitaxel sólo como agente diana o con una combinación de paclitaxel y otro fármaco antitumoral. El segundo agente diana debe ser un fármaco (como paclitaxel) que exhiba mala biodisponibilidad oral pero con co-administración de agentes potenciadores puede conseguir niveles en sangre terapéuticamente eficaces tras la administración por vía oral. El agente diana puede co-existir con el agente potenciador en la misma forma farmacéutica o puede estar en una forma farmacéutica separada.

Los siguientes ejemplos ilustran diversos aspectos de la invención y demuestran los aumentos inesperados y muy sustanciales conseguidos en la absorción por vía oral de agentes dianas. Sin embargo, no ha de entenderse que estos ejemplos limitan la invención de ningún modo a agentes potenciadores o dianas específicos, intervalos de dosificación, métodos de ensayo u otros parámetros que deben que deben usarse exclusivamente para llevar a la práctica la invención.

Ejemplo 1

Dieciocho (18 ratas) Sprague Dawley sanas, que pesaban todas 225-275 gramos y de una edad de aproximadamente seis a ocho semanas, se dividieron al azar en tres grupos de seis animales. El primer grupo de seis ratas recibió una sola administración intravenosa de paclitaxel a una dosis de 9 mg/kg. El segundo grupo recibió una sola dosis de paclitaxel de 9 mg/kg por vía oral. El tercer grupo recibió una sola dosis de ciclosporina de 5 mg/kg por vía oral, y una hora más tarde el mismo grupo recibió una dosis por vía oral de 5 mg/kg de ciclosporina y 9 mg/kg de paclitaxel.

Se recogieron muestras de sangre de la vena caudal de cada rata 0,5, 1, 2, 3, 4 y 6 horas después de la dosis de paclitaxel. En el caso de las ratas tratadas por vía intravenosa del primer grupo, se tomó una muestra de sangre adicional ocho horas después de la dosis de paclitaxel. Se centrifugaron las muestras individuales y se separó el suero. Para cada intervalo de tiempo, las seis muestras por grupo se reunieron para producir una sola muestra representativa. Todas las muestras se analizaron en cuanto al paclitaxel inalterado CL/EM (cromatografía de líquidos /espectro de masas) con un límite inferior de cuantificación de 50 pg/ml.

Los resultados del estudio se ilustran gráficamente en las Figuras 1 y 2. La Figura compara los tres grupos de ratas, mientras que la Figura 2 compara solamente el segundo y tercer grupos que recibieron paclitaxel por vía oral. Puede observarse que en ausencia de ciclosporina, la biodisponibilidad del paclitaxel en el suero fue menos que 1% pero subió a 6-7% en el tercer grupo que recibió ciclosporina una hora antes de una dosis combinada de ciclosporina/paclitaxel.

La siguiente Tabla 2 expone los datos referentes a los valores del área bajo la curva (AUC) determinados para los tres grupos de ratas. Estos datos indican que el valor del AUC a las seis horas en el caso del tercer grupo de ratas que recibieron tanto ciclosporina como paclitaxel era casi ocho veces el valor del AUC del segundo grupo de ratas que sólo recibieron paclitaxel por vía oral.

TABLA 2

Biodisponibilidad absoluta del paclitaxel
AUC_{0-6 \ horas} IV	AUC_{0-6 \ horas} PO	F absoluto
(ng.h/ml)	(ng.h/ml)
9230*	80	0,9%
*Valor de AUC que no incluye el punto de muestra de 1 hora
** F = [AUC_{PO}/AUC_{IV}] \times 100.
Interacción del paclitaxel con ciclosporina
AUC_{0-6 \ horas} IV	AUC_{0-6 \ horas} PO con	F relativo***
(ng.h/ml)	ciclosporina (ng.h/ml)
80*	529	786%
*** F = [AUC_{PO}/AUC_{IV}] \times 100.

Ejemplo 2

Cuarenta (40) ratas Sprague Dawley sanas con las mismas características que las usadas en el estudio descrito en el Ejemplo 1 se dividieron al azar en cuatro grupos de diez en cada grupo A, F, G y H. La siguiente Tabla indica el tratamiento proporcionado a cada uno de los grupos de ensayo y los intervalos de tiempo para cada administración de dosis.

TABLA 3

Grupo	Nº de ratas	Tiempo	Tratamiento	Dosis	Vía de
		(horas)		(mg(kg)	administración
A	10	0	ciclosporina	5	oral
		1	paclitaxel	9	oral
		1	ciclosporina	5	oral
F	10	0	ciclosporina	5	oral
		1	paclitaxel	9
G	10	0	ciclosporina	5	IV
		3	paclitaxel	9
H	10	0	paclitaxel	9	IV

Se recogieron muestras de sangre de la vena caudal de cada rata a 0,25, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 y 24 horas después de la administración de paclitaxel. Después de un tratamiento apropiado de las muestras y la creación de una muestra reunida para cada grupo, el plasma de cada muestra se analizó en cuanto al paclitaxel inalterado.

Las Figuras 3 y 4 ilustran gráficamente los resultados de este estudio. En la Figura 3 se muestra una comparación entre los niveles de concentración conseguidos frente al tiempo en el Grupo A, que recibió una pre-dosis de ciclosporina y una dosis combinada de paclitaxel-ciclosporina una hora más tarde, y el Grupo F, que recibió una pre-dosis de ciclosporina y luego sólo paclitaxel por vía oral una hora más tarde. La Figura 4 refleja una comparación entre los resultados conseguidos con los grupos G y H, los cuales recibieron ambos paclitaxel por vía IV pero recibiendo el grupo G una pre-dosis de ciclosporina por vía oral tres horas antes del paclitaxel. Como se indica en la Figura 4, los dos grupos exhibían esencialmente niveles idénticos de paclitaxel en plasma a los mismos intervalos de
tiempo.

La Tabla 4 expone los datos de AUC para los cuatro grupos de ratas de este estudio. Aunque los valores del AUC para los Grupos G y H eran esencialmente los mismos, el valor del AUC para el Grupo A fue 25-30% superior al del Grupo F, indicando el valor de proporcionar tanto pre-tratamiento con ciclosporina como co-administración de ciclosporina con paclitaxel.

TABLA 4 Biodisponibilidad de paclitaxel en plasma

Tratamiento	AUC_{0-6 t}	F (%)
IV	(Grupo H)	24280	-
IV + CsA Oral^{a}	(Grupo G)	24137	99,4
Oral + CsA*	(Grupo F)	10967	4,5
Oral + CsA**	(Grupo A)	1393	5,7
^{a} \hskip0.9cm 3 horas antes del paclitaxel
** \hskip0.7cm pretratamiento de 1 hora con CsA
*** \hskip0.5cm pretratamiento de 1 hora y simultáneamente con paclitaxel.

Ejemplo 3

Dieciocho (18) ratas Sprague Dawley sanas con las mismas características que las usadas en el estudio descrito en el Ejemplo 1 se dividieron al azar en tres grupos de seis ratas, Grupos A, B y C. Al Grupo A se administró paclitaxel radiomarcado por vía IV; el Grupo B recibió paclitaxel ^{3}H-radiomarcado por vía oral; y Grupo C recibió una dosis oral de ciclosporina seguida una hora más tarde por una dosis combinada por vía oral de ciclosporina y paclitaxel radiomarcado.

Se recogieron muestras de sangre de las venas caudales de cada rata a los mismos intervalos de tiempos que los descritos en el Ejemplo 2. Las muestras se mantuvieron en la forma de sangre entera. Además, de cada rata se tomaron muestras de orina 4-24 horas después de la dosis de paclitaxel. Las muestras de sangre y orina se analizaron en cuanto a radiactividad.

Una comparación de los niveles de paclitaxel en las muestras de sangre entera de los Grupos A, B y C se expone en la Figura 5. Las comparaciones de los niveles para los miembros individuales de los Grupos B y C se exponen en las Figuras 6 y 7, respectivamente.

En este estudio, la absorción por vía oral de radiactividad (expresada como equivalentes de paclitaxel) en sangre entera fue aproximadamente 10% en ausencia de ciclosporina (Grupo B) y aproximadamente 40% con administración concomitante de ciclosporina (Grupo C). Esto se determinó midiendo el AUC de la radiactividad de la sangre después de la administración de paclitaxel radiomarcado por vías intravenosa y oral. La biodisponibilidad de paclitaxel no se determinó formalmente en este estudio debido a que requeriría analizar el fármaco inalterado en cada punto de tiempo. Aunque en un punto de tiempo la radiactividad se extrajo del plasma y después por HPLC estándar pareció que al menos 32% de la radiactividad en el plasma era de paclitaxel inalterado. El perfil de radiactividad del extracto de plasma por HPLC de los animales del Grupo C, que demuestra predominantemente un pico (que es paclitaxel), se muestra en la Figura 28. En la Tabla 5 siguiente se exponen los valores de AUC, C_{max}, T_{max}, y otros datos generados en este estudio.

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TABLA 5 Radiactividad total para paclitaxel en sangre/orina y % de radiactividad extraída de paclitaxel en sangre

Parámetro farmacocinético	IV(A)	PO(B)	PO+CsA**(C)
AUC_{0-24} (\mug eq- \times h/ml)	32,8	3,2	12,1
C_{max}(\mug eq/ml)	ND	0,21	0,82
T_{max}(h)	- - -	2	5
% de dosis en orina (4-24 h)	2,2	1,9	8,3
% de paclitaxel*	ND	7,8***	32***
*% como paclitaxel a partir de la radiactividad extraída en la muestra de 4 horas.
**CsA administrada 1 hora antes y simultáneamente con paclitaxel.
***Estas cifras son estimaciones inferiores basadas en el método de extracción incompleta.

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TABLA 5A Absorción de radiactividad total después de administración por vía oral de ^{3}H-paclitaxel con/sin ciclosporina A (CsA) en ratas (n = 10)

Parámetro farmacocinético	Paclitaxel	Paclitaxel por	Paclitaxel oral +
	por vía IV	vía oral	CsA
AUC_{0-24horas} (\mug eq. \times h/ml)	23,8	1,4	8,1
AUC_{0-infinito} (\mug eq. \times h/ml)	27,4	4,5	15,0
F (%) basado en AUC_{0-24horas}	- - -	5,9	34,0
F (%) basado en AUC_{0-infinito}	- - -	16,4	54,7
Dosis de paclitaxel = 9 mg/kg
CsA (5 mg/kg 1 hora antes de, y concomitantemente, con paclitaxel)
F = AUC_{oral}/AUC_{IV}.

TABLA 5B Parámetros farmacocinéticos de paclitaxel después de la administración por vía oral con/sin ciclosporina A (CsA) en ratas (n = 10)

Parámetro farmacocinético	Dosis IV	Dosis PO	PO + CsA
AUC_{0-24horas} (\mug eq- \times h/ml)	20,43	0,314	4,27
AUC_{0-infinito} (\mug eq- \times h/ml)	21,02	0,349	5,41
F (%)	- - -	1,7	25,7
CL (%) (ml/h/kg)	429	440	430
V (ml/kg)	4236	5029	5958
t^{1/2} (hora)	6,8 (r^{2} = 0,95)	8,1 (r^{2} = 0,78)	9,6 (r^{2} = 0,96)
CL = F* Dosis/AUC
Dosis = 9 mg/kg
F = AUC_{oral}/AUC_{IV}.

En ratas que fueron tratadas de la manera descrita en el Ejemplo 3 se determinó, el AUC para la radiactividad total. Basándose en la relación AUC_{oral}/AUC_{IV-infinito}, la absorción por vía oral en presencia de ciclosporina subió a 54,7% comparada con a 16,4% en ausencia de ciclosporina (Tabla 5A). Usando un análisis similar para paclitaxel inalterado en sangre, la biodisponibilidad del paclitaxel fue 25,7% en presencia de ciclosporina y 1,7% en ausencia de ciclosporina (Tabla 5B). La eliminación del cuerpo fue sorprendentemente similar entre los tres grupos de tratamiento. El volumen de distribución de paclitaxel aumentó aproximadamente 50% más en el grupo que recibió ciclosporina y paclitaxel por vía oral comparado con el grupo del paclitaxel por vía IV.

En los ejemplos 4-5 se utilizó el siguiente estudio de diseño: Ratas Sprague Dawley con las mismas características que las usadas en el Ejemplo 1 se dividieron en tres grupos de tres ratas machos cada uno. Todas las ratas fueron dejadas en ayunas 12-14 horas antes de la dosificación. Al final del periodo de ayuno, a las ratas que recibían agentes potenciadores se les administraron dichos agentes, y una hora mas tarde recibieron una dosis de ^{3}H-paclitaxel radiomarcado (9 mg/kg) con dosis concomitantes de agente potenciador. A las ratas que no recibieron agentes potenciadores se les administró el paclitaxel radiomarcado después del ayuno.

Se recogió sangre de cada animal a 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 y 24 horas después de la dosificación de paclitaxel. Se recogió orina de 4-24 horas después de la dosis. Luego se determinó la radiactividad total en sangre y orina para cada rata y para cada grupo se calcularon los valores medios.

Ejemplo 4

(No forma parte de la invención)

A tres grupos de ratas se les administró, respectivamente, 10 mg/kg de verapamilo por vía oral, 5 mg/kg de progesterona por vía oral y 10 mg/kg de dipiridamol por vía oral como agentes potenciadores, tanto solos como una hora más tarde con una dosis de paclitaxel por vía oral. En la Figura 8 se expone una comparación gráfica del perfil de la concentración de sangre entera frente al tiempo (medida como equivalentes de concentración frente al tiempo) determinada para los tres grupos. Los datos reflejan resultados aproximadamente similares con el uso de verapamilo y dipiridamol como agentes potenciadores, con una biodisponibilidad marcadamente inferior a la conseguida con progesterona.

La Figura 9 expone una comparación gráfica entre el perfil de concentración-tiempo de paclitaxel determinado para el grupo de ratas al que se la administró verapamilo (10 mg/kg) como agente potenciador con los valores determinados en un estudio previo para animales a los que se administró sólo paclitaxel por vía oral (9 mg/kg) y otro grupo al que se administró ciclosporina por vía oral (5 mg/kg) ambos una hora antes y de nuevo inmediatamente después de una dosis de paclitaxel por vía oral (9 mg/kg). El grupo que recibía ciclosporina consiguió niveles en sangre mucho mayores que los otros grupos a través de un periodo casi completo de 24 horas.

Las Figuras 10 y 11 representan comparaciones gráficas paralelas a las de la Figura 9, pero con los valores del grupo administrado con progesterona mostrado en la Figura 10 y el del grupo del dipiridamol mostrado en la Figura 11 en lugar del grupo del verapamilo de la Figura 9.

Ejemplo 5

(No forma parte de la invención)

A tres grupos de ratas se administró, respectivamente, 100 mg/kg de verapamilo por vía oral, 5 mg/kg de acetato de megestrol por vía oral y 50 mg/kg de ketoconazol por vía oral como agentes potenciadores, tanto solos como una hora más tarde con una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral. En la Figura 12 se expone una comparación gráfica del perfil de concentración de sangre entera-tiempo (medido como equivalentes de concentración frente al tiempo) determinada para los tres grupos. Los datos reflejan resultados aproximadamente similares para verapamilo y acetato de megestrol como agentes potenciadores, con una biodisponibilidad marcadamente superior conseguida con el ketoconazol en las primeras 12 horas.

La Figura 13 expone una comparación gráfica entre el perfil de concentración-tiempo de la radiactividad determinado para el grupo de ratas al que se administró verapamilo (100 mg/kg) como agente potenciador con los valores determinados en un estudio previo para animales a los que se había administrado sólo paclitaxel por vía oral (9 mg/kg) y otro grupo al que se había administrado ciclosporina por vía oral (5 mg/kg) tanto una hora antes como inmediatamente después de una dosis de paclitaxel radiomarcado por vía oral (9 mg/kg).

Las Figuras 14 y 15 representan comparaciones gráficas paralelas a las de la Figura 13, pero con los valores para el grupo al que había administrado acetato de megestrol mostrado en la Figura 14 y el grupo del ketoconazol mostrado en la Figura 15 en lugar del grupo del verapamilo de la Figura 13.

La Figura 16 muestra comparaciones gráficas entre los perfiles de concentración-tiempo de la radiactividad determinados para el grupo de ratas al que se había administrado 10 mg/kg de verapamilo en el Ejemplo 4 y el grupo al que se había administrado 100 mg/kg de verapamilo en el Ejemplo 5.

La Figura 17 muestra comparaciones gráficas entre los perfiles de concentración- tiempo de la radiactividad determinados para el grupo de ratas al que se había administrado 5 mg/kg de progesterona en el Ejemplo 4 y el grupo al que se había administrado 5 mg/kg de acetato de megestrol en el Ejemplo 5.

En ambas Figuras 16 y 17 también se muestra los mismos perfiles reflejados en la Figuras 13-15 para grupos de estudio que reciben sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral y paclitaxel radiomarcado por vía oral inmediatamente después y una hora después de 5 mg/kg de ciclosporina.

Se realizo la exploración de los datos de dosis-respuesta para la ciclosporina. Aumentando la dosis a 10 mg/kg y 20 mg/kg una hora antes y concomitantemente con paclitaxel dio como resultado la absorción por vía oral de radiactividad a aproximadamente 45%. Esto puede contrastarse con los hallazgos para el ketoconazol en el cual se dieron dosis de hasta 50 mg/kg una hora antes y concomitantemente con paclitaxel y dio como resultado ningún aumento adicional en la absorción por vía oral de radiactividad (véanse las Figuras 17A y 17B).

Los parámetros farmacocinéticos medios para los grupos de estudio de animales discutidos en los Ejemplos 4 y 5 se recogen en la tabla 6^{3} .

Los datos generados por los estudios de los Ejemplos 4 y 5 y reflejados en la Tabla 6 y las Figuras 8-17B indican claramente la eficacia de la ciclosporina como un agente potenciador de la biodisponibilidad oral y su superioridad tanto a bajas como a altas dosis de verapamilo, progesterona o acetato de megestrol, particularmente en las primeras 12 horas después de la dosificación de paclitaxel. Dichos datos también indican que el ketoconazol, aunque no es tan eficaz
como la ciclosporina, también tiene una actividad significativa en promover la absorción por vía oral de paclitaxel.

TABLA 6 Parámetros farmacocinéticos medios para NP951202 y NP960101

Protocolo de	Tratamiento	Dosis/Vía	AUCO-24	F%	t^{1/2}	C_{max}
estudio		(mg/kg)	(ugxh/ml)		(hora)	(\mug*eq/ml)
NP951001
	Paclitaxel	9/IV	32,04		20,15	37
	solamente
	Paclitaxel	9/PO	3,24	10,1	18,86	0,21
	solamente
	Ciclosporina	5/PO(c),	12,02	37,5	14,51	0.82
		9/PO(P)
		5/PO(C)

\newpage

TABLA 6 (continuación)

Protocolo de	Tratamiento	Dosis/Vía	AUCO-24	F%	t^{1/2}	C_{max}
estudio		(mg/kg)	(ugxh/ml)		(hora)	(\mug*eq/ml)
NP951202
	Verapamilo	10/PO(V),	6,34	19,8	24,4	0.78)
		9/PO(P)
		10/PO(V)
	Progesterona	5/PO(Pro),	3,78	11,8	20,0	0,26
		9/PO(P)
		5/PO(Pro)
	Dipiridamol	10/PO(D),	6,18	19,3	26,6	0,46)
		9/PO(P)
		10/PO(D)
NP960101
	Verapamilo	100/PO(V),	NA	NA	NA	0,44
	(animales	9/PO(P)
	muertos)	100/PO(V)
	Magace	5/PO(M),	5,19	16,2	23,1	0,44
		9/PO(P)
		5/PO(M)
	Ketoconazol	50/PO(K),	8,03	25,1	9,23	0,69
		9/PO(P)
		50/PO(K)

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Ejemplo ilustrativo 6

Tres grupos de tres ratas machos cada uno se dejaron en ayunas 16-18 horas antes de la dosificación. Al final del periodo de ayuno a un grupo de ratas se administró una dosis oral de 5 mg/kg de ciclosporina. Una hora más tarde, a dicho grupo se administró 5 mg/kg de ciclosporina por vía oral con 1 mg/kg de etopósido ^{3}H-radiomarcado por vía oral. A los otros dos grupos se administró después del ayuno solamente 1 mg/kg de ^{3}H-etopósido por vía intravenosa y 1 mg/kg ^{3}H-etopósido por vía oral, respectivamente. Los métodos para la recogida de sangre y orina y para determinar la radiactividad total fueron los mismos que en los Ejemplos 4 y 5, excepto que la sangre se extrajo en dos intervalos adicionales del grupo que recibió etopósido por vía IV, a 0,033 y 0,25 horas. Los datos resultantes se recogen en la Tabla 7.

Las Figuras 18 y 19 muestran gráficamente el perfil medio de concentración-tiempo de etopósido determinado para los tres grupos de estudio. En la Figura 18 la escala de ordenadas va de 0-1 equivalentes de concentración de etopósido (ppm), mientras que en la Figura 19 la escala de ordenadas va de 0-0,2 equivalentes de etopósido (ppm) para ilustrar más claramente las diferencias entre los valores conseguidos para los tres grupos.

Los datos expuestos en la Tabla 7 y en las Figuras 18 y 19 demuestran la eficacia de la ciclosporina como agente potenciador de la biodisponibilidad oral para etopósido, particularmente en las primeras 12 horas después de la dosificación.

TABLA 7 Parámetros farmacocinéticas medios para NP960102

Protocolo	Tratamiento	Dosis/Vía	AUCO-24	F%	t^{1/2}	C_{max}
de estudio		(mg/kg)	(\mugxh/ml)			(\mug*eq/ml)
NP960102
Grupo A	Etopósido	1/IV	1,08		26,5	2,16
	solamente
Grupo B	Etopósido	1/PO	0,61	56,5	19,1	0,03
	solamente
Grupo C	CsA,	5/PO(C),	1,04	96,3	18,1	0,12
	etopósido +	1(PO)
	CsA	5(PO(C)

Ejemplo ilustrativo 7

En otra serie de estudios, tres grupos de tres ratas machos cada uno se dejaron en ayunas 16-18 horas antes de la dosificación. Al final del periodo de ayuno a un grupo de ratas se administró una dosis oral de ketoconazol (2 mg/kg). Una hora más tarde se administró a dicho grupo 2 mg/kg de ketoconazol por vía oral con 1 mg/kg de etopósido ^{3}H-radiomarcado por vía oral. Los otros dos grupos se trataron de la misma manera excepto que se administraron 10 y 50 mg/kg de ketoconazol, respectivamente, después de ayuno antes y justamente después de ^{3}H-etopósido por vía oral. Los métodos de recogida de sangre y de determinación de la radiactividad total fueron los mismos que en los Ejemplos 4 y 5. Los datos resultantes se exponen en la Tabla 7A. Así, en contraste con el efecto que tenía la ciclosporina sobre la absorción por vía oral casi el doble de radiactividad derivada de paclitaxel, el ketoconazol administrado en un amplio intervalo de dosis no aumentó la absorción por vía oral de etopósido comparado con el etopósido sólo.

TABLA 7A

Grupo A	Etopósido + ketoconazol	1/EO(2/Keto)	0,54	50,39	0,026	1	47,8
Grupo B	Etopósido + ketoconazol	1/EO(10/Keto)	0,69	63,95	0,032	24	-91,5
Grupo C	Etopósido + ketoconazol	1/EO(50/Keto)	0,64	58,91	0,060	4	38,1

Ejemplo 7

Se realizó un estudio del balance de excreción para paclitaxel en ratas. Tres grupos de 4-5 ratas machos se dejaron en ayunas 12-14 horas antes de la dosificación. Al final del periodo de ayuno a un grupo de ratas se administró una dosis de 5 mg/kg de ciclosporina por vía oral. Una hora más tarde, a dicho grupo se administró 5 mg/kg de ciclosporina por vía oral con 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral. A los otros dos grupos se administró después del ayuno solamente 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía IV y 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral.

De cada animal se recogieron la orina y las heces a los intervalos siguientes: 0-2, 2-4, 4-8, 8-12, 12-24, 24-36, 36-48, 48-72, 72-96, 96-120, 120-144, y 144-168 horas después de la dosis. La recogida de tejido se realizó 168 horas después de la dosis. El método para determinar la radiactividad total fue el mismo que en los Ejemplos 4 y 5.

La Figura 20 muestra una comparación gráfica del porcentaje acumulativo medio de dosis de paclitaxel detectada en las heces y orina de los animales de ensayo en el periodo de 168 horas. El grupo de ratas al que se había administrado ciclosporina tanto antes como con el paclitaxel por vía oral exhibió un porcentaje de dosis marcadamente inferior en heces que los otros dos grupos y un porcentaje significativamente mayor de dosis en orina, lo que indica que sustancialmente más del paclitaxel por vía oral se difundía a través de la pared intestinal y entraba en la circulación general de los animales en el grupo tratado con ciclosporina. Además, el hecho de que el porcentaje de dosis en orina fuera significativamente mayor para las ratas a las que se había administrado ciclosporina y paclitaxel por vía oral en comparación con el grupo del paclitaxel por vía IV indica que la administración por vía oral concomitante hacía que una mayor concentración de radiactividad pasara a través del tracto genitourinario.

Las Figuras 21-24 son gráficos de barras que reflejan los valores medios en ppm de paclitaxel detectado en una variedad de tejidos recogidos de las ratas en los tres grupos de estudio, el Grupo A que representa los animales a los que se había administrado paclitaxel por vía IV, el Grupo B que representa los animales a los que se había administrado paclitaxel por vía oral y el Grupo C que representa el grupo tratado con ciclosporina. Estos gráficos muestran que los niveles de paclitaxel encontrados en los diversos tejidos de las ratas en el Grupo C eran aproximadamente comparables con los niveles observados en las ratas del Grupo A que recibió paclitaxel por vía IV, excepto en el hígado en donde el nivel de paclitaxel era más de dos veces tan alto que en el grupo tratado con ciclosporina como en el grupo al que se había administrado paclitaxel por vía IV. Los niveles detectados en los tejidos de las ratas del Grupo B (administrado por vía oral con sólo paclitaxel) eran bastante bajos, en la mayoría de los casos mucho menor que la mitad de los niveles en cualquiera de los otros grupos.

Los datos que resultan de este estudio se recogen en las Tablas 8 y 9.

TABLA 8 Estudio del balance de excreción para paclitaxel en ratas

Radiactividad en orina, heces y tejidos expresada como % de la dosis (Valores medios)
Muestra	Grupo A	Grupo B	Grupo C
Orina	9,160	6,660	18,350 \hskip0,2cm
Heces	79,660 \hskip0,2cm	84,410 \hskip0,2cm	61,250 \hskip0,2cm
Tejidos	1,710	0,600	1,430
Total	90,530 \hskip0,2cm	91,670 \hskip0,2cm	81,030 \hskip0,2cm

TABLA 9 Estudio del balance de excreción para paclitaxel en ratas

Residuos radioactivos en tejidos expresados como ppm (valores medios)
Muestra	Grupo A	Grupo B	Grupo C
Cerebro	0,101	0,029	0,096
Corazón	0,085	0,025	0,088
Pulmón	0,143	0,030	0,136
Hígado	0,237	0,074	0,566
Riñón	0,180	0,032	0,119
Músculo	0,079	0,025	0,080
Tracto GI	0,083	0,021	0,055
Testículos	0,346	0,037	0,217
Páncreas	0,078	0,018	0,080
Cuerpo abierto en
canal sin vísceras	0,143	0,053	0,099
Hueso	0,035	0,007	0,034
Bazo	0,101	0,024	0,083
Próstata	0,081	0,022	0,090
Vesículas
seminales	0,121	0,024	0,094
Sangre	0,112	0,034	0,106
Plasma	0,126	0,038	0,124

Ejemplo 9

Se realizó en ratas otro estudio de distribución en tejidos para paclitaxel. Dos grupos de 10 ratas machos cada una se dejaron en ayunas 12-14 horas antes de la dosificación. Al final del periodo de ayuno a un grupo de ratas se administró una dosis de 5 mg/kg de ciclosporina por vía oral. Una hora más tarde, a dicho grupo se administró 5 mg/kg de ciclosporina por vía oral con 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral. Al otro grupo se administró después del ayuno solamente 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía IV.

La recogida de tejido se realizó a las 24 horas después de la dosis. El método para determinar la radiactividad total fue el mismo que en los Ejemplos 4 y 5.

La Tabla 9A refleja los valores en ppm de radiactividad derivada de paclitaxel detectados en una variedad de tejidos recogidos de las ratas en los dos grupos de estudio. Un grupo que representa los animales a los que había administrado paclitaxel por vía IV y el segundo grupo que representa los animales a los que se había administrado paclitaxel con ciclosporina dada 1 hora antes e inmediatamente después del paclitaxel. Los niveles de paclitaxel encontrados en los diversos tejidos de las ratas tratadas con ciclosporina eran aproximadamente comparables a los niveles observados en las ratas a las que había dado paclitaxel por vía IV, excepto en el bazo, páncreas y tracto gastrointestinal en donde el nivel de paclitaxel era aproximadamente dos veces tan alto en el grupo tratado con ciclosporina como en el grupo al que se había administrado paclitaxel por vía IV.

Una comparación de las concentraciones de paclitaxel inalterado en diversos órganos después de sólo paclitaxel por vía IV comparadas con el paclitaxel por vía oral dada en presencia de ciclosporina se muestra en la Tabla 9B. En los pulmones y tracto gastrointestinal se encontraron concentraciones superiores de paclitaxel inalterado después de la administración por vía oral, comparadas con la vía IV de administración.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 9A Relación de equivalentes de paclitaxel en ppm entejados para los Grupos C y A (Valores medios)

Tejido	Dosis oral con CsA	Dosis IV	Relación
Cerebro	0,267	0,284	0,94
Corazón	1,166	0,576	2,02
Pulmón	2,076	1,230	1,69
Hígado	4,328	3,685	1,17
Riñón	2,325	1,259	1,85
Músculo	0,951	0,639	1,49
Tracto GI	11,282	5,673	1,99
Testículos	0,435	0,804	0,54
Páncreas	1,999	0,911	2,19
Cuerpo abierto en
canal sin vísceras	1,043	0,858	1,22
Huesos	1,057	0,612	1,73
Bazo	3,089	1,180	2,62
Próstata	2,212	1,660	1,33
Vesículas seminales	1,891	2,693	0,70
Sangre	0,373	0,401	0,93
Plasma	0,370	0,347	1,07

TABLA 9B Extracción de radiactividad de diversos tejidos

Grupo	Tejido	ppm de ^{3}H	% de ^{3}H	Paclitaxel	% de ^{3}H
		en tejido	caracterizado	en ppm	caracterizado
			por HPLC		como paclitaxel
IV	Hígado	3,7	75,9	1,34	36,2
	Pulmón	1,3	79,5	0,82	63,1
	Tracto GI	5,4	78,1	1,55	28,7
Oral con	Hígado	4,5	75,5	0,93	20,7
CsA	Pulmón	2,3	91,3	1,42	61,7
	Tracto GI	10,6	91,4	5,17	48,8
1,0 ppm	Hígado	1,0	102,7	0,77	77,0
Spike

Ejemplo 10

Se siguió el método de los Ejemplos 4 y 5, pero a los tres grupos de tres ratas machos cada uno se administró por vía oral respectivamente dosis de 5 mg/kg ciclosporina D, ciclosporina G y ciclosporina A, tanto solos como una hora más tarde inmediatamente después de una dosis oral de 9 mg/kg paclitaxel radiomarcado por vía. La Figura 25 muestra una comparación gráfica de los perfiles de concentración en sangre entera-tiempo para la radiactividad determinada en estos tres grupos de ensayo. Aunque todas las tres ciclosporinas mostraron actividad sustancial en promover la absorción por vía oral de paclitaxel, la ciclosporina D, que tiene la menor actividad inmunosupresora (Jeffery, Clin. Biochem, 24:15-21 (1991)), de las tres ciclosporinas ensayadas, exhibió la mayor actividad potenciadota de la biodisponibilidad.

Ejemplo 11

Se realizó un cierto número de estudios en los que se siguió el método usado en los Ejemplos 4 y 5, y a los grupos de tres ratas machos se administró por vía oral 5 - 10 mg/kg de diversas ciclosporinas solas y luego de nuevo una hora más tarde inmediatamente después una dosis de 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral. La Tabla 10 muestra una comparación del AUC y % de absorción de estos estudios, cada uno identificado por un número de protocolo que comienza con el prefijo "NP".

TABLA 10 AUC & % de absorción de diversas ciclosporinas

Protocolo	Ciclosporina	Dosis (mg/kg)	AUC_{0-24}	Absorción, %
			(\mug*eq.h/ml)
NP 960507	A	2 \times 5	13,91	42,1
960503	A	2 \times 10	10,17	33,6
960503	A	2 \times 20	14,63	48,3
NP 960507	Acetil-A	2 \times 5	8,39	25,4
960507	C	2 \times 5	11,39	34,5
960507	E	2 \times 5	5,96	18,0
960507	H	2 \times 5	6,00	18,1
960507	U	2 \times 5	5,02	15,2

TABLA 10 (continuación)

Protocolo	Ciclosporina	Dosis (mg/kg)	AUC_{0-24}	Absorción, %
			(\mug*eq.h/ml)
NP 960103	D	2 \times 5	15,92	48,2
960103	G	2 \times 5	13,22	40,0
NP 960704	D	2 \times 10	14,23	43,1
960704	F	2 \times 10	11,99	36,3
NP 960605	F	2 \times 5	8,99	27,2
960605	Dihidro A	2 \times 5	8,5	25,7
NP 960801	Leu^{4}	2 \times 5	7,38	24,6
960801	Dihidro-C	2 \times 5	13,09	45,1

Ejemplo 12

Se siguió el método de los Ejemplos 4 y 5, pero a cada uno de los tres grupos de ratas machos se administró por vía oral una dosis de 5 mg/kg de ciclosporina A, 50 mg/kg de ketoconazol y 5 mg/kg de ciclosporina A más 50 mg/kg de ketoconazol respectivamente, tanto solos como una hora más tarde inmediatamente después una dosis de 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral. Una comparación gráfica de los resultados conseguidos se muestra en la Figura 26. El grupo que recibió la combinación de ketoconazol y ciclosporina A inesperadamente exhibió niveles de radiactividad en sangre significativamente superiores, en casi el periodo completo de 24 horas, a los de los grupos que recibieron solamente uno de estos agentes potenciadores.

Ejemplo 13

Se siguió el método de los Ejemplos 4 y 5, pero a los tres grupos de tres ratas machos cada uno se administró por vía oral respectivamente una dosis de 100 mg/kg de captopril, tanto solo como dos horas más tarde inmediatamente después una dosis de 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral, una dosis de 5 mg/kg de ciclosporina sola y de nuevo una hora más tarde inmediatamente después una dosis de 9 mg/kg de paclitaxel radiomarcado por vía oral, y una dosis de 9 mg/kg de sólo paclitaxel radiomarcado por vía oral. En la Figura 27 se muestra una comparación gráfica de los resultados obtenidos.

Los estudios antes descritos produjeron varios hallazgos previamente desconocidos e inesperados que son todos de un gran significado para el manejo clínico de muchas enfermedades, particularmente varios tipos de cáncer.

1. Ciertos inhibidores de MDR (P-glicoproteína), así como otros agentes no counidos como inhibidores de MDR pueden administrarse por vía oral para aumentar eficazmente la biodisponibilidad oral de agentes de tratamiento que hasta ahora se han administrado solamente por vía parenteral debido a que no se podían alcanzar niveles terapéuticos en sangre por administración por vía oral.

2. La co-administración de los agentes potenciadores de la invención con fármacos dianas que tienen mala biodisponibilidad oral puede conseguir niveles prolongados en sangre de los fármacos dianas comparables a los conseguidos con terapia de infusión por vía IV, pero con una subida inicial menos abrupta en niveles de sangre y por tanto con menos probabilidad de efectos secundarios tóxicos.

3. La co-administración por vía oral de los agentes potenciadores y los fármacos diana aumenta la concentración proporcionada del agente diana en el hígado, pulmón y tracto gastrointestinal en comparación con la administración por vía IV, haciendo al nuevo método de administración particularmente útil en el tratamiento de tumores de hígado y metástasis.

4. Administrar un agente potenciador por vía oral antes de la administración de dosis orales concomitantes de agente potenciador y fármaco diana aumenta la biodisponibilidad oral del fármaco diana hasta un grado significativamente superior al de la co-administración de los agentes potenciadores y diana sin administración pre-administración de agente potenciador. Esto da como resultado niveles en plasma del fármaco diana que alcanzan los niveles terapéuticos.

5. Las ciclosporinas, particularmente las ciclosporinas A, D y F, son agentes mucho más eficaces para aumentar la biodisponibilidad de agentes antitumorales que los inhibidores de MDR, tales como verapamilo y progesterona. El ketoconazol tiene una actividad potenciadora de la biodisponibilidad oral clínicamente significativa, pero menor que las ciclosporinas.

En general, los diversos aspectos de la invención facilitan y hacen práctico por primera vez la administración de formas farmacéuticas orales de agentes farmacéuticos ampliamente usados, particularmente fármacos anti-cáncer, tales como taxanos relacionados con el paclitaxel que hasta ahora sólo podían administrarse eficazmente o fiablemente por infusión por vía IV. El uso de tales formas farmacéuticas orales en el manejo clínico de cánceres promoverá el confort del paciente, la conveniencia, el cumplimiento y la seguridad, y dará como resultado ahorro de costes a los pacientes, hospitales y entidades aseguradoras médicas gubernamentales y privadas.

Además, las enseñanzas de la invención expuesta en la presente memoria proporcionan información referente a la selección de los agentes diana y potenciadores, así como programación en el tiempo, planes y dosificación. Esta información y los métodos y composiciones de la invención proporcionan a los profesionales clínicos métodos para niveles terapéuticos prolongados de fármacos que requiere estrechos intervalos de concentraciones de fármaco, al mismo tiempo que evitan picos y valles innecesarios y frecuentemente peligrosos en los niveles de concentración en sangre. Además, el aumento de volumen de la distribución de paclitaxel en presencia de ciclosporina sugiere que más fármaco estaría disponible para la actividad antitumoral.

Aparte de la multirresistencia a fármacos resultante de la P-glicoproteína codificada por el gen MDR1, hay otro gen, que se ha encontrado recientemente, que confiere un fenotipo de multirresistencia a fármacos en ciertos sistemas de laboratorio: el gen para la proteína asociada a la multirresistencia a fármacos, MRP (por ejemplo, Zaman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:8822-8826, 1994).

Se sabe menos acerca de este nuevo gen y su producto proteínico, una nueva glicoproteína unida a membrana de 190 kd. Aunque tanto el gen MRP como el gen MDR1 codifican glicoproteínas de membrana que pueden actuar como transportadores de múltiples fármacos, hay diferencias en función, sustratos probables, y significado del pronóstico entre estos dos genes. Por ejemplo la expresión del gen MRP pero no la del gen MDR1 es un buen marcador de desenlace clínico en pacientes con neuroblastomas. La función putativa de las proteínas relacionadas con la MRP es servir como bomba de eflujo para los S-conjugados con glutation. Por tanto, las moléculas que experimentan conjugación con glutation serían susceptibles a la acción del sistema relacionado con la MRP.

La biodisponibilidad oral de agentes farmacológicamente activos (o exposición del tumor a dichos agentes) que están sometidos a resistencia a proteínas relacionadas con la MRP puede aumentarse co-administrando por vía oral inhibidores de MRP. La realización preferida de este método de aumentar la biodisponibilidad oral es la administración por vía oral de uno o más inhibidores de MRP antes de la co-administración por vía oral de uno o más inhibidores de MRP y uno o más agentes dianas sometidos a resistencia relacionada con la MRP.

Ejemplos de agentes dianas de este tipo incluyen (pero sin limitación) diversos taxanos. Ejemplos de inhibidores de MRP que pueden aumentar la biodisponibilidad oral de los agentes diana incluyen, pero sin limitación, ciclosporinas, ketoconazol y los fármacos experimentales VX-710 y VX-853 (Verted Pharmaceuticals, Inc., Cambridge, MA). Las estructuras de VX-710 y VX 853, así como de muchos compuestos relacionados, están descritas en la patente de EE.UU. Nº 5.192.773.

Otro método de mejorar la biodisponibilidad de agentes sometidos a resistencia relacionada con la MRP es co-administrar con dichos agentes glutation o sustancias que forman productos conjugados con el glutation las cuales interferirían con el funcionamiento del sistema MRP y mejorarían la absorción de los agentes dianas desde el intestino, o aumentarían la exposición general de los agentes sometidos a transporte relacionado con MRP.

Todavía otros sistema capaz de conferir multirresistencia a fármacos es la denominada proteína relacionada con la resistencia en el pulmón (abreviadamente LRP por la expresión inglesa Lung Resistance-Related Protein (LRP), debido a que fue identificada primeramente en una línea celular de cáncer de pulmón multirresistente a fármacos. Esta proteína es la principal proteína estructural del denominado aparato de bóveda, una partícula de ribonucleoproteína citoplasmática muy abundante, que se ha conservado desde el moho de los fangos hasta el hombre. La inhibición de este sistema también puede afectar positivamente a la biodisponibilidad de ciertos agentes. La LRP se encuentra en su mayor expresión en células epiteliales con funciones secretorias y excretoras, así como en células expuesta crónicamente a agentes xenobióticos, tales como células de revestimiento bronquiales e intestinales (Scheffer et al., Nature Medicine, 1; 578-582, 1955). Por tanto este sistema, podría servir como diana para mejorar la biodisponibilidad oral.

Así pues se mostrado que se proporcionan métodos, composiciones y kits que consiguen los diversos objetos de la invención y que están bien adaptados para satisfacer las condiciones de uso práctico.

Claims (53)

1. Uso de un agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral en la fabricación de un medicamento para aumentar la biodisponibilidad de un taxano tras la administración por vía oral en combinación con dicho taxano, en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste en ciclosporinas A - Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium.

2. Uso de un agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral en la fabricación de un medicamento para tratar un paciente mamífero afligido con una enfermedad sensible a un taxano tras administración por vía oral en combinación con dicho taxano, en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste en ciclosporinas A - Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium.

3. Uso de un taxano en la fabricación de un medicamento para administración por vía oral en combinación con un agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral para lograr un aumento de la biodisponibilidad del taxano, en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste en ciclosporinas A - Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium.

4. Uso de un taxano en la fabricación de un medicamento para administración por vía oral en combinación con un agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral para tratar un paciente mamífero afligido con una enfermedad sensible a un taxano, en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste en ciclosporinas A - Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el taxano se selecciona del grupo que consiste en paclitaxel, docetaxel, y sus sales, metabolitos, análogos, derivados y profármacos farmacéuticamente aceptables.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el taxano es un metabolito de paclitaxel.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el metabolito de paclitaxel está representado por la fórmula:

3

en donde R_{1} representa hidrógeno o hidroxilo y R_{2} representa hidrógeno o hidroxilo, con la condición de que cuando R_{2} representa hidrógeno, R_{2} representa hidroxilo.

8. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el agente potenciador es para administración bien sea:

a) 0,5-24 horas antes,

b) menos de 0,5 horas, junto con o menos 0,5 horas después, o

c) tanto 0,5-24 horas antes como de nuevo 0,5 horas antes, junto con o menos que 0,5 horas después, de la administración del taxano.

9. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el paciente es un ser humano.

10. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el taxano y el agente potenciador son para administración en formas farmacéuticas separadas para vía oral.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el taxano y el agente potenciador son para administración conjunta en una forma farmacéutica en combinación para vía oral.

12. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 8, en donde el taxano es paclitaxel.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el agente potenciador es ciclosporina A.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el medicamento es para la administración de 0,1 a 15 mg/kg de ciclosporina A basado en el peso corporal del paciente.

15. El uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el medicamento comprende paclitaxel y ciclosporina A, y en donde el medicamento es para administración una vez a la semana.

16. El uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el medicamento comprende paclitaxel, y en donde el medicamento es para administración en una dosis dividida.

17. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 8, en donde el taxano es docetaxel.

18. El uso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el agente potenciador es ciclosporina A.

19. El uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el medicamento es para administración de 0,1 a 20 mg/kg de ciclosporina A basado en el peso corporal del paciente.

20. El uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el medicamento es para la administración de aproximadamente 15 mg/kg de ciclosporina A.

21. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde dos o más dosis del taxano son para administración después de una sola dosis del agente potenciador.

22. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4 en donde el medicamento es para administración de 20-1.000 mg/m^{2} del taxano basado en el área superficial del cuerpo del paciente.

23. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el medicamento es para administración de 2-30 mg/kg de taxano basado en el peso corporal del paciente, y en donde el taxano es paclitaxel.

24. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 o 4, en donde el medicamento es para administración de 0,1 a 15 mg/kg del agente potenciador basado en el peso corporal del paciente.

25. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el medicamento está en una forma farmacéutica seleccionada del grupo que consiste en comprimidos, cápsulas, comprimidos en forma de cápsulas, píldoras, pastillas para chupar y soluciones líquidas, suspensiones y elixires.

26. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, en donde el taxano es paclitaxel, y en donde el paclitaxel está en una formulación que comprende además un aceite de ricino polietoxilatado, alcohol o mono-oleato de sorbitán polioxietilado.

27. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad es un cáncer, tumor, crecimiento neoplástico o proliferación de tejido o celular incontrolada secundaria a daño de tejido.

28. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en cánceres de células germinales, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de pecho, cáncer de pulmón, carcinomas de cabeza y cuello, carcinoma hepatocelular, metástasis de hígado, cánceres de tracto génitourinario y gastrointestinal, sarcoma de Kaposi, poliquistosis renal y malaria.

29. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pecho, cáncer de ovario, cáncer del tracto gastrointestinal y cánceres de pulmón.

30. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad es cáncer de pecho.

31. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad es cáncer de pulmón.

32. El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad es cáncer del tracto gastrointestinal.

33 El uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 4, en donde la enfermedad es cáncer de ovarios.

34. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 30 a 33, en donde el taxano es paclitaxel y el agente potenciador de la biodisponibilidad es ciclosporina A.

35. El uso de acuerdo con la reivindicación 34, en donde el medicamento es para la administración al paciente de 0,1 a 15 mg/kg de ciclosporina A.

36. El uso de acuerdo con la reivindicación 35, en donde el medicamento comprende paclitaxel y ciclosporina A, y en donde el medicamento es para administración por vía oral aproximadamente una vez por semana.

37. El uso de acuerdo con la reivindicación 36, en donde el medicamento comprende paclitaxel, y en donde el medicamento es para administración en una dosis dividida.

38. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 30 a 33, en donde el taxano es docetaxel.

39. El uso de acuerdo con la reivindicación 38, en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad es ciclosporina A.

40. El uso de acuerdo con la reivindicación 38, en donde el medicamento es para administración al paciente de 0,1 a 20 mg/kg de ciclosporina A.

41. El uso de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el medicamento es para administración al paciente de aproximadamente 15 mg/kg de ciclosporina A.

42. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 14, 19, 22, 23, 24, 35, 40 y 41, en donde el paciente es un ser humano.

43. Una composición adecuada para administración por vía oral, que comprende cantidades eficaces de un taxano, y un agente potenciador de la biodisponibilidad oral, en donde el taxano consigue niveles de actividad terapéutica cuando dicha composición se administra por vía oral a un paciente mamífero, y en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste de ciclosporinas A - Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro-ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium.

44. La composición de acuerdo con la reivindicación 43, en donde el taxano se selecciona del grupo consistente en paclitaxel, docetaxeI, y sus sales, análogos, metabolitos, derivados y profármacos farmacéuticamente aceptables.

45. La composición de acuerdo con la reivindicación 43, en donde el taxano es paclitaxel.

46. La composición de la reivindicación 43, en donde el taxano es docetaxel.

47. La composición de las reivindicaciones 45 y 46, en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad oral es ciclosporina A.

48. La composición de la reivindicación 43, que está en una forma farmacéutica seleccionada del grupo consistente en comprimidos, cápsulas, comprimidos en forma de cápsula, píldoras, pastillas para chupar y soluciones líquidas, suspensiones y elixires.

49. Un kit que comprende una forma farmacéutica para vía oral, que contiene un agente potenciador de la biodisponibilidad oral y una forma farmacéutica para vía oral que contiene un taxano, o una forma farmacéutica en combinación para vía oral que contiene tanto el agente potenciador como el taxano, en donde tras la co-administración por vía oral del taxano y el agente potenciador, se consiguen niveles actividad terapéutica del taxano, y en donde el agente potenciador de la biodisponibilidad por vía oral es una ciclosporina seleccionada del grupo que consiste en ciclosporinas A-Z, (Me-Ile-4)-ciclosporina, dihidro-ciclosporina A, dihidro- ciclosporina C, acetil-ciclosporina A, y oligopéptidos relacionados producidos por especies del género Tolypocladium.

50. El kit de la reivindicación 49, que comprende además un folleto que contiene información impresa de la dosificación para la co-administración del agente potenciador y el taxano.

51. El kit de la reivindicación 49, en donde el agente potenciador y el taxano están contenidos en formas farmacéuticas separadas de dosificación por vía oral.

52, El kit de la reivindicación 49, que comprende la forma farmacéutica en combinación para dosificación por vía oral.

53. El kit de la reivindicación 49, en donde el taxano es paclitaxel.

54. El kit de la reivindicación 49, en donde el taxano es docetaxel.

55. El kit de las reivindicaciones 53 ó 54, en donde el agente potenciador es ciclosporina A.