ES2151467T3

ES2151467T3 - Arilureas para el tratamiento de enfermedades inflamatorias o inmunomoduladoras.

Info

Publication number: ES2151467T3
Application number: ES98923600T
Authority: ES
Inventors: Gerald Ranges; William Scott; Michael Bombara; Deborah Rauner; Aniko Redman; Roger Smith; Holger Paulsen; Jinshan Chen; David Gunn; Joel Renick
Original assignee: Bayer AG; Bayer Corp
Current assignee: Bayer AG; Bayer Corp
Priority date: 1997-05-23
Filing date: 1998-05-21
Publication date: 2005-03-01
Anticipated expiration: 2018-05-21
Also published as: DE69826695T2; CA2290520C; ATE277612T1; EP1019040A4; JP2001526687A; ES2151467T1; HK1026144A1; EP1019040B1; DE69826695D1; CA2290520A1; WO1998052558A1; PT1019040E; JP4344960B2; AU7585498A; DE1019040T1; EP1019040A1

Abstract

Un método para el tratamiento de una enfermedad, distinta del cáncer, mediada por p38, que comprende administrar un compuesto de fórmula I **fórmula I** en la cual A es arilo C6-12 o heteroarilo C5-12 opcionalmente sustituido; B es **fórmula II** R1 es H o alquilo C1-4; R2 y R3 son cada uno independientemente halógeno, -COOR1 , -CN, -CONR7 R8, o-CH2NHR9; R5 es alquilo C3-5; R6 es alquilo C1-6; R7 es hidrógeno; R8 es metilo; R9 es hidrógeno, metilo o -CO-R10 ; y R10 es hidrógeno o metilo opcionalmente sustituido con NR62 o COOR6.

Description

Arilureas para el tratamiento de enfermedades inflamatorias o inmunomoduladoras.

Esta invención se refiere al uso de un grupo de arilureas para uso como medicamentos para tratar enfermedades inflamatorias o inmunomoduladoras mediadas por citoquinas y mediadas por enzimas proteolíticas.

Antecedentes de la invención

Dos clases de moléculas efectoras que son críticas para la progresión de la artritis reumatoide son las citoquinas pro-inflamatorias y las proteasas degradantes de los tejidos. Recientemente, se ha descrito una familia de quinasas que es instrumental en el control de la transcripción y traducción de los genes estructurales que codifican estas moléculas efectoras.

La familia de quinasas MAP está constituida por una serie de serina/treonina-quinasas dirigidas por prolina y estructuralmente relacionadas que son activadas por factores de crecimiento (tales como EGF) y ésteres de forbol (ERK), o por IL-1, TNF\alpha o por estrés (p38, JNK). Las quinasas MAP son responsables de la activación de una gran diversidad de factores de transcripción y proteínas implicados(as) en el control transcripcional de la producción de citoquinas. Un par de nuevas proteína-quinasas implicadas en la regulación de la síntesis de citoquinas ha sido descrito recientemente por un grupo de SmithKline Beecham (Lee et al. Nature 1994, 372, 739). Estas enzimas se aislaron sobre la base de su afinidad para fijarse a una clase de compuestos, denominados CSAIDs (fármacos anti-inflamatorios supresivos de citoquinas) por SKB. Se ha demostrado que los CSAIDs, piridinil-imidazoles, tienen actividad inhibidora de las citoquinas tanto in vitro como in vivo. Las enzimas aisladas, CSBP-1 y -2 (proteína de fijación de CSAID 1 y 2) han sido clonadas y expresadas. Un homólogo murino para CSBP-2, p38, ha sido consignado también (Han et al. Science 1994, 265, 808).

Estudios iniciales sugerían que los CSAIDs funcionan por interferir con sucesos de traducción de m-RNA durante la biosíntesis de las citoquinas. Se ha demostrado que la inhibición de p38 inhibe tanto la producción de citoquinas (v.g., TNF\alpha, IL-1, IL-6, IL-8; Lee et al. N.Y. Acad. Sci. 1993, 696, 149) como la producción de enzimas proteolíticas (v.g., MMP-1, MMP-3; Ridley et al. J. Immunol. 1997, 158, 3165) in vitro y/o in vivo.

Estudios clínicos han relacionado la producción y/o señalización de TNF\alpha con numerosas enfermedades que incluyen artritis reumatoide (Maini, J. Royal Coll. Physicians London 1996, 30, 344). Adicionalmente, niveles excesivos de TNF\alpha han sido implicados en una gran diversidad de enfermedades inflamatorias y/o inmunomoduladoras, que incluyen fiebre reumática aguda (Yegin et al. Lancet 1997, 349, 1170), resorción ósea (Pacifici et al. J. Clin. Endocrinol. Metabol. 1997, 82, 29), osteoporosis postmenopáusica (Pacifici et al. J. Bone Mineral Res. 1996, 11, 1043), sepsis (Blackwell et al. Br. J. Anaesth. 1996, 77, 110), sepsis gram-negativa (Debets et al. Prog. Clin. Biol. Res. 1989, 308, 463), choque séptico (Tracey et al. Nature 1987, 330, 662; Girardin et al. New England J. Med. 1988, 319, 397), choque endotóxico (Beutler et al. Science 1985, 229, 869; Ashkenasi et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1991, 88, 10535), síndrome de choque tóxico (Saha et al. J. Immunol. 1996, 157, 3869; Lina et al. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1996, 13, 81), síndrome de la respuesta inflamatoria sistémica (Anon. Crit. Care Med. 1992, 20, 864), enfermedades intestinales inflamatorias (Stokkers et al. J. Inflamm. 1995-6, 47, 97) con inclusión de la enfermedad de Crohn (van Deventer et al. Aliment. Pharmacol. Therapeu. 1996, 10 (Suppl. 2), 107; van Dullemen et al. Gastroenterology 1995, 109, 129) y colitis ulcerosa (Masuda et al. J. Clin. Lab. Immunol. 1995, 46, 111), reacciones de Jarisch-Herxheimer (Fekade et al. New. England J. Med. 1996, 335, 311), asma (Amrani et al. Rev. Malad. Respir. 1996, 13, 539), síndrome de dificultad respiratoria de los adultos (Roten et al. Am. Rev. Respir. Dis. 1991, 143, 590; Suter et al. Am. Rev. Respir. Dis. 1992, 145, 1016), enfermedades fibróticas pulmonares agudas (Pan et al. Pathol. Int. 1996, 46, 91), sarcoidosis pulmonar (Ishioka et al. Sarcoidosis Vasculitis Diffuse Lung Dis. 1996, 13, 139), enfermedades respiratorias alérgicas (Casale et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 15, 35), silicosis (Gossart et al. J. Immunol. 1996, 156, 1540; Vanhee et al. Eur. Respir. J. 1995, 8, 834), neumoconiosis de los mineros del carbón (Borm et al. Am. Rev. Respir. Dis. 1988, 138, 1589), lesión alveolar (Horinouchi et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 14, 1044), insuficiencia hepática (Gantner et al. J. Pharmacol. Exp. Therap. 1997, 280, 53), enfermedad hepática durante inflamación aguda (Kim et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 1402), hepatitis alcohólica grave (Bird et al. Ann. Intern. Med. 1990, 112, 917), malaria (Grau et al. Immunol. Rev. 1989, 112, 49; Taverne et al. Parasitol. Today 1996, 12, 290) con inclusión de malaria por Plasmodium falciparum (Perlmann et al. Infect. Immunit. 1997, 65, 116) y malaria cerebral (Rudin et al. Am. J. Pathol. 1997, 150, 257), diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM; Stephens et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 971; Ofei et al. Diabetes 1996, 45, 881), insuficiencia cardiaca congestiva (Doyama et al. Int. J. Cardiol. 1996, 54, 257; McMurray et al. Br. Heart J. 1991, 66, 356), lesión subsiguiente a enfermedad cardiaca (Malkiel et al. Mol. Med. Today 1996, 2, 336), ateroesclerosis (Parums et al. J. Pathol. 1996, 179, A46), enfermedad de Alzheimer (Fagarasan et al. Brain Res. 1996, 723, 231; Aisen et al. Gerontology 1997, 43, 143), encefalitis aguda (Ichiyama et al. J. Neurol. 1996, 243, 457), lesión cerebral (Cannon et al. Clin. Care Med. 1992, 20, 1414; Hansbrough et al. Surg. Clin. N. Am. 1987, 67, 69; Marano et al. Surg. Gynecol. Obstetr. 1990, 170, 32), esclerosis múltiple (M.S.; Coyle, Adv. Neuroimmunol. 1996, 6, 143; Matusevicius et al. J. Neuroimmunol. 1996, 66, 115) con inclusión de desmielinación y pérdida de oligodendrocitos en la esclerosis múltiple (Brosnan et al. Brain Pathol. 1996, 6, 243), cáncer avanzado (MucWierzgon et al. J. Biol. Regulators Homeostatic Agents 1996, 10, 25), enfermedades malignas linfoides (Levy et al. Crit. Rev. Immunol. 1996, 46, 31), pancreatitis (Exley et al. Gut 1992, 33, 1126) con inclusión de complicaciones sistémicas en la pancreatitis aguda (Mckay et al. Br. J. Surg. 1996, 83, 919), curación deteriorada de las heridas en infecciones, inflamaciones y cáncer (Buck et al. Am. J. Pathol. 1996, 149, 195), síndromes mielodisplásticos (Raza et al. Int. J. Hematol. 1996, 63, 265), lupus eritematoso sistémico (Maury et al. Arthritis Rheum. 1989, 32, 146), cirrosis biliar (Miller et al. Am. J. Gasteroenterolog. 1992, 87, 465), necrosis intestinal (Sun et al. J. Clin. Invest. 1988, 81, 1328), psoriasis (Christophers, Austr. J. Dermatol. 1996, 37, S4), lesión por radiaciones (Redlich et al. J. Immunol. 1996, 157, 1705), y toxicidad subsiguiente a la administración de anticuerpos monoclonales tales como OKT3 (Brod et al. Neurology 1996, 46, 1633). Los niveles de THF\alpha han sido relacionados también con reacciones de rechazo inverso (Piguet et al. Immunol. Ser. 1992, 56, 409) con inclusión de la lesión por reperfusión de la isquemia (Colletti et al. J. Clin. Invest. 1989, 85, 1333) y rechazos de aloinjertos que incluyen los de riñón (Maury et al. J. Exp. Med. 1987, 166, 1132), hígado (Imagawa et al. Transplantation 1990, 50, 219), corazón (Bolling et al. Transplantation 1992, 53, 283), y piel (Stevens et al. Transplant. Proc. 1990, 22, 1924), rechazo de aloinjertos de pulmón (Grossman et al. Immunol. Allergy Clin. N. Am. 1989, 9, 153) con inclusión de rechazo crónico de aloinjertos de pulmón (bronquitis obliterante; LoCicero et al. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 1990, 99, 1059), así como complicaciones debidas a reemplazamiento total de la cadena (Cirino et al. Life Sci. 1996, 59, 86). THF\alpha ha sido relacionado también con enfermedades infecciosas (revisión: Beutler et al. Crit. Care Med. 1993, 21, 5423; Degre Biotherapy 1996, 8, 219) con inclusión de tuberculosis (Rook et al. Med. Malad. Infect. 1996, 26, 904), infección por Helicobacter pylori durante la enfermedad de úlcera péptica (Beales et al. Gastroenterology 1997, 112, 136), enfermedad de Chaga's resultante de infección por Trypanosoma cruzi (Chandrasekar et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996, 223, 365), efectos de la toxina de tipo Shiga resultantes de la infección por E. Coli (Harel et al. J. Clin. Invest. 1992, 56, 40), los efectos de la enterotoxina A resultantes de la infección por Staphylococcus (Fischer et al. J. Immunol. 1990, 144, 4663), infección por meningococos (Waage et al. Lancet 1987, 355; Ossege et al. J. Neurolog. Sci. 1996, 144, 1), e infecciones por Borrelia burgdorferi (Brandt et al. Infect. Immunol. 1990, 58, 983), Treponema pallidum (Chamberlin et al. Infect. Immunol. 1989, 57, 2872), citomegalovirus (CMV; Geist et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1997, 16, 31), virus de la gripe (Beutler et al. Clin. Res. 1986, 34, 491A), virus Sendai (Goldfield et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1989, 87, 1490), virus de la encefalomielitis de Theiler (Sierra et al. Immunology 1993, 78, 329), y el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV; Poli. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1990, 87, 782; Vyakaram et al. AIDS 1990, 4, 21; Badley et al. J. Exp. Med. 1997, 185, 55).

Dado que la inhibición de p38 conduce a la inhibición de la producción de TNF\alpha, los inhibidores de p38 serán útiles en el tratamiento de las enfermedades arriba enumeradas.

Cierto número de enfermedades están mediadas por la actividad excesiva o indeseada de metaloproteasas (MMP) destructoras de la matriz o por un desequilibrio en la relación de las MMPs a los inhibidores tisulares de las metaloproteinasas (TIMPs). Éstas incluyen osteoartritis (Woessner et al. J. Biol. Chem. 1984, 259, 3633), artritis reumatoide (Mullins et al. Biochem. Biophys. Acta 1983, 695, 117; Woolley et al. Arthritis Rheum. 1977, 20, 1231; Gravallese et al. Arthritis Rheum. 1991, 34, 1076), artritis séptica (Williams et al. Arthritis Rheum. 1990, 33, 533), metástasis de tumores (Reich et al. Cancer Res. 1988, 48, 3307; Matrisian et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1986, 83, 9413), enfermedades periodontales (Overall et al. J. Periodontal Res. 1987, 22, 81), ulceración corneal (Burns et al. Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 1989, 30, 1569), proteinuria (Baricos et al. Biochem. J. 1988, 254, 609), trombosis coronaria causada por rotura de la placa ateroesclerótica (Henney et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1991, 88, 8154), enfermedad aórtica aneurismal (Vine et al. Clin. Sci 1991, 81, 233), epidermólisis bullosa distrófica (Kronberger et al. J. Invest. Dermatol. 1982, 79, 208), pérdida degenerativa de cartílago subsiguiente a lesión articular traumática, osteopenias mediadas por actividad de MMP, enfermedad de la articulación tempero-mandibular, y enfermedades desmielinantes del sistema nervioso (Chantry et al. J. Neurochem. 1988, 50, 688).

Dado que la inhibición de p38 conduce a la inhibición de la producción de MMP, los inhibidores de p38 serán útiles en el tratamiento de las enfermedades arriba enumeradas.

Los inhibidores de p38 son activos en modelos animales de producción de TNF\alpha, que incluyen un modelo de producción de TNF\alpha por lipopolisacáridos (LPS) murinos. Los inhibidores de p38 son activos en cierto número de modelos estándar animales de enfermedades inflamatorias, que incluyen edema inducido por carragenano en las patas de la rata, edema inducido por ácido araquidónico en las patas de la rata, peritonitis inducida por ácido araquidónico en el ratón, resorción de los huesos largos de la rata fetal, artritis murina inducida por colágeno tipo II, y artritis inducida por adyuvante de Freund en la rata. Así pues, los inhibidores de p38 serán útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por una o más de las citoquinas y/o enzimas proteolíticas mencionadas anteriormente.

La necesidad de nuevas terapias es esencialmente importante en el caso de las enfermedades artríticas. El principal efecto incapacitante de osteoartritis, artritis reumatoide y artritis séptica es la pérdida progresiva de cartílago articular y con ello de la función normal de las articulaciones. Ningún agente farmacéutico comercializado es capaz de prevenir o ralentizar esta pérdida de cartílago, aunque se han administrado fármacos antiinflamatorios no esteroidales (NSAIDs) para controlar el dolor y la hinchazón. El resultado final de estas enfermedades es la pérdida total de función de la articulación, que es tratable únicamente por cirugía de reemplazamiento articular. Los inhibidores de p38 detendrán o invertirán la progresión de la pérdida de cartílago y harán innecesaria la intervención quirúrgica o la
retardarán.

Han aparecido varias patentes que reivindican poli-arilimidazoles y/o compuestos que contienen poliarilimidazoles como inhibidores de p38 (por ejemplo, Lee et al., documento WO 95/07922; Adams et al. WO 95/02591; Adams et al. WO 95/13067; Adams et al. WO 95/31451). Se ha comunicado que los arilimidazoles se complejan a la forma férrica del citocromo P450_{cam} (Harris et al. Mol. Eng. 1995, 5, 143, y las referencias citadas en dicho lugar), lo que causa preocupación en el sentido de que estos compuestos pueden presentar toxicidad relacionada con su estructura (Howard-Martin et al. Toxicol. Pathol. 1987, 15, 369). Por consiguiente, persiste necesidad de inhibidores de p38 mejorados.

Sumario de la invención

Esta invención proporciona compuestos, descritos generalmente como aril-ureas, que incluyen análogos tanto arílicos como heteroarílicos, que inhiben los sucesos mediados por p38 e inhiben por tanto la producción de citoquinas (tales como TNF\alpha, IL-1 e IL-8) y enzimas proteolíticas (tales como MMP-1 y MMP-3). La invención proporciona también el uso de los compuestos de acuerdo con la presente invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o inmunomoduladora, preferiblemente en la cual la enfermedad está mediada por una citoquina o proteasa regulada por p38. Ejemplos de tales citoquinas incluyen TNF\alpha, IL-1 e IL-8. Ejemplos de tales proteasas incluyen colagenasa (MMP-1) y estromelisina (MMP-3).

De acuerdo con ello, estos compuestos son agentes terapéuticos útiles para enfermedades inflamatorias y/o inmunomoduladoras agudas y crónicas tales como artritis reumatoide, osteoartritis, artritis séptica, fiebre reumática, resorción ósea, osteoporosis postmenopáusica, sepsis, sepsis gram-negativa, choque séptico, choque endotóxico, síndrome de choque tóxico, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, enfermedades intestinales inflamatorias con inclusión de enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, reacciones de Jarisch-Herxheimer, asma, síndrome de dificultad respiratoria de los adultos, enfermedades fibróticas pulmonares agudas, sarcoidosis pulmonar, enfermedades respiratorias alérgicas, silicosis, neumoconiosis de los mineros del carbón, lesión alveolar, insuficiencia hepática, enfermedad hepática durante la inflamación aguda, hepatitis alcohólica grave, malaria con inclusión de malaria por Plasmodium falciparum y malaria cerebral, diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM), fallo cardiaco congestivo, deterioro subsiguiente a enfermedad cardiaca, ateroesclerosis, enfermedad de Alzheimer, encefalitis aguda, lesión cerebral, esclerosis múltiple (MS), con inclusión de desmielinación y pérdida de oligodendrocitos en la esclerosis múltiple, cáncer avanzado, enfermedades malignas linfoides, metástasis de tumores, pancreatitis, con inclusión de complicaciones sistémicas en la pancreatitis aguda, curación deteriorada de las heridas en infecciones, inflamaciones y cáncer, enfermedades periodontales, ulceración corneal, proteinuria, síndromes mielodisplásticos, lupus eritematoso sistémico, cirrosis biliar, necrosis intestinal, psoriasis, lesión por radiaciones, toxicidad subsiguiente a la administración de anticuerpos monoclonales tales como OKT3, reacciones de rechazo inverso con inclusión de la lesión por reperfusión de la isquemia y rechazos de aloinjertos con inclusión de rechazos de aloinjertos de riñón, hígado, corazón, y piel, rechazo de aloinjertos pulmonares con inclusión del rechazo crónico de aloinjerto pulmonar (bronquitis obliterante) así como complicaciones debidas al reemplazamiento total de la cadera, y enfermedades infecciosas con inclusión de tuberculosis, infección por Helicobacter pylori durante la enfermedad de úlcera péptica, enfermedad de Chaga's resultante de la infección por Trypanosoma cruzi, efectos de la toxina de tipo Shiga resultante de infección por E. coli, efectos de la enterotoxina A resultante de infección por Staphylococcus, infección meningocócica, e infecciones de Borrelia burgdorferi, Treponema pallidum, citomegalovirus, virus de la gripe, virus de la encefalomielitis de Theiler, y el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV).

De acuerdo con ello, la presente invención está dirigida a un compuesto de Fórmula I,

1

en la cual

A: es arilo C_{6-12} o heteroarilo C_{5-12}, cada uno de ellos opcionalmente sustituido, v.g. por alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, halógeno, -OH, -OR^{1}, -NR^{1}_{2};

B: es 2

R^{1}: es H o alquilo C_{1-4};

R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente halógeno, -COOR^{1}, -CN, -CONR^{7}R^{8}, o -CH_{2}NHR^{9};

R^{5}: es alquilo C_{3-5;}

R^{6}: es alquilo C_{1-6};

R^{7}: es hidrógeno;

R^{8}: es metilo;

R^{9}: es hidrógeno, metilo o -CO-R^{10}; y

R^{10}: es hidrógeno o metilo sustituido opcionalmente con NR^{6}_{2} o COOR^{6},

para uso como medicamento.

Adicionalmente, el compuesto de Fórmula I puede ser utilizado para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o inmunomoduladora. La enfermedad puede estar mediada por p38, v.g., mediada por una o más citoquinas o enzimas proteolíticas producidas y/o activadas por un proceso mediado por p38.

En la Fórmula I, los grupos heteroarilo A adecuados incluyen, pero sin carácter limitante, anillos aromáticos de 5-10 átomos de carbono o sistemas de anillos que contienen 1-2 anillos, al menos uno de los cuales es aromático, en los cuales uno o más, v.g., 1-4 átomos de carbono en uno o más de los anillos pueden estar reemplazados por átomos de oxígeno, nitrógeno o azufre. Cada anillo tiene típicamente 5-6 átomos. Por ejemplo, A puede ser 2- o 3-tienilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o -5-ilo, 7-indolilo, u 8-quinolinilo, o fenilo que puede estar adicionalmente sustituido, 2- o 3-tienilo, 1,3,4-tiadiazolilo, etc. Por ejemplo, A puede ser 4-metilfenilo, 4-fluorofenilo, 5-metil-2-tienilo, 4-metil-2-tienilo o 5-ciclopropil-1,3,4-tiadiazol-2-ilo.

Grupos alquilo adecuados y porciones alquilo de grupos, v.g. alcoxi, etc. a todo lo largo de esta memoria incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, etc., con inclusión de todos los isómeros de cadena lineal y ramificados tales como isopropilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, etc.

Grupos cicloalquilo adecuados incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc.

Grupos arilo adecuados incluyen, por ejemplo, fenilo y 1- y 2-naftilo.

Grupos halógeno adecuados incluyen F, Cl, Br, y/o I, siendo posible desde una sola sustitución a per-sustitución (es decir en la cual todos los átomos H de un grupo están reemplazados por un átomo de halógeno), siendo también posible la sustitución mixta de tipos de átomos de halógeno en un resto dado.

Compuestos preferidos de Fórmula I incluyen aquéllos en los cuales R^{2} o R^{3} es -COOR^{1} o -CONR^{7}R^{8}; R^{1} es alquilo C_{1-4}; R^{7} es H; y R^{8} es metilo, y aquéllos en los cuales R^{5} es isopropilo o terc-butilo.

La invención se refiere también a compuestos per se, de Fórmula II

3

en la cual

A: es arilo C_{6-12} o heteroarilo C_{5-12}, cada uno de ellos opcionalmente sustituido, v.g. con alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, halógeno, -OH, -OR^{1}, -NR^{1}_{2};

B: es 4

R^{1}: es H o alquilo C_{1-4};

R^{2}: es -COOR^{1}, -CONR^{7}R^{8}, o -CH_{2}NHR^{9};

R^{5}: es alquilo C_{3-5;}

R^{6}: es alquilo C_{1-6};

R^{7}: es H;

R^{8}: es metilo;

R^{9}: es hidrógeno, metilo o -CO-R^{10}; y

con las salvedades de que A no es naftilo insustituido; y si A es fenilo insustituido,

R^{2}: es -COOR^{1} o -COONR^{7}R^{8}, R^{1} es alquilo C_{2-4}, y R^{5} es isopropilo o terc-butilo.

La invención se refiere también a compuestos de Fórmula III

5

en la cual

A: es arilo C_{6-12} o heteroarilo C_{5-12}, sustituido cada uno opcionalmente, v.g., con alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, halógeno, -OH, -OR^{1}, -NR^{1}_{2};

B: es 6

R^{1}: es H o alquilo C_{1-4};

R^{3}: es -COOR^{1}, -CONR^{7}R^{8}, o -CH_{2}NHR^{9};

R^{5}: es alquilo C_{3-5;}

R^{6}: es C_{1-6}-alquilo;

R^{7}: es H;

R^{8}: es metilo;

R^{9}: es hidrógeno, metilo o -CO-R^{10}; y

con las salvedades de que

(a): A no es naftilo insustituido;

(b): si A es fenilo insustituido, entonces R^{3} es -COOR^{1} o -CONR^{7}R^{8}, y R^{5} es isopropilo o terc-butilo; y

(c): si R^{5} es isopropilo, entonces A no es fenilo sustituido con halógeno, o -OR^{1}.

La invención se refiere adicionalmente a compuestos de Fórmula IV

7

en la cual

A: es arilo C_{6-12} o heteroarilo C_{5-12}, cada uno de ellos opcionalmente sustituido, v.g., con alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, halógeno, -OH, -OR^{1}, -NR^{1}_{2};

B: es 8

R^{1}: es H o alquilo C_{1-4};

R^{2}: es -COOR^{1}, -CONR^{7}R^{8}, o -CH_{2}NHR^{9};

R^{5}: es alquilo C_{3-5;}

R^{6}: es alquilo C_{1-6};

R^{7}: es H;

R^{8}: es metilo;

R^{9}: es hidrógeno, metilo o -CO-R^{10}; y

con la salvedad de que si A es fenilo insustituido, R^{2} es COOR^{1} o -CONR^{7}R^{8}, R^{1} es alquilo C_{2-4}, y R^{5} es isopropilo o terc-butilo.

La invención incluye adicionalmente compuestos de Fórmula V

9

en la cual

B: es 10

R^{1}: es H o alquilo C_{1-4};

R^{2}: es -COOR^{1}, -CONR^{7}R^{8}, o -CH_{2}NHR^{9};

R^{5}: es alquilo C_{3-5;}

R^{6}: es alquilo C_{1-6};

R^{7}: es H;

R^{8}: es metilo;

R^{9}: es hidrógeno, metilo o -CO-R^{10}; y

R^{10}: es hidrógeno o metilo sustituido opcionalmente con NR^{6}_{2} o COOR^{6}.

La presente invención está dirigida también a sales farmacéuticamente aceptables de Fórmula I. Sales farmacéuticamente aceptables adecuadas son bien conocidas por los expertos en la técnica e incluyen sales básicas de ácidos inorgánicos y orgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido sulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido fenilacético, y ácido mandélico. Adicionalmente, sales farmacéuticamente aceptables de Fórmula I pueden formarse con un catión farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, en el caso en que un grupo sustituyente comprende un resto carboxi. Cationes adecuados farmacéuticamente adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica, e incluyen cationes alcalinos (tales como Li^{+}, Na^{+} o K^{+}), cationes alcalino-térreos (tales como Mg^{+2}, Ca^{+2} o Ba^{+2}), el catión amonio, y cationes orgánicos, con inclusión de amonio sustituido alifático y aromático, y cationes amonio cuaternario tales como los procedentes de trietilamina, N,N-dietilamina, N,N-diciclohexilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina, 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (DABO), 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non5-eno (DBN) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU).

Los compuestos de Fórmulas I-V, o bien son conocidos en la técnica, o se pueden preparar mediante el uso de reacciones y procedimientos químicos conocidos. Sin embargo, se presentan los métodos preparativos generales siguientes para ayudar a un experto en la técnica a sintetizar los inhibidores de la invención, presentándose ejemplos particulares más detallados en la sección experimental.

Métodos preparativos generales

Pueden generarse 5-alquil-3-aminotiofeno-2-carboxilatos de metilo por la reacción de tioglicolato de metilo con 2-alquil-2-cloroacrilonitrilo en presencia de una base, preferiblemente NaOMe (Ishizaki et al., JP 6025221, Método A). La formación de urea puede implicar tratamiento de la amina así formada con un isocianato, o un equivalente de isocianato (Método A), o la conversión de la amina en un isocianato o un equivalente de isocianato por tratamiento con fosgeno o un equivalente de fosgeno, seguido por reacción con una segunda amina (Método B).

Método A

11

Método B

12

Si uno o más de los grupos arilo está(n) sustituido(s) con NO_{2}, o su equivalente, este resto puede reducirse sea utilizando hidrogenación catalítica, v.g. con H_{2} y paladio sobre carbono, o por utilización de un reactivo hidruro (v.g., KBH_{4}) con CuCl, para dar la amina correspondiente (Método C).

Método C

13

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La transesterificación de la urea puede tener lugar en un disolvente alcohólico utilizando un catalizador ácido de Lewis, v.g. alcóxido de titanio (Método D).

Método D

14

Alternativamente, la protección de la amina, v.g., como el carbamato de terc-butilo, seguido por saponificación del éster, proporciona el ácido carboxílico amino-protegido correspondiente (Método E). La formación del éster puede emplear uno de una gran diversidad de protocolos estándar, v.g. acoplamiento mediado por carbodiimida, dependiendo del grupo protector de la amina. Finalmente, la desprotección, utilizando por ejemplo una fuente de ácido tal como HCl o ácido trifluoroacético para el carbamato de terc-butilo, seguida por formación de urea, como se ilustra en el Método A o el Método B, generará análogos de ésteres.

Método E

15

Los análogos de amidas pueden generarse de manera similar a la descrita en el Método E. La protección de la amina, v.g. como el bencil-carbamato, seguida por formación de amida, v.g. utilizando una amina en presencia de cianuro como catalizador, da la amida protegida (Método F). La desprotección, por ejemplo con HBr/ácido acético o hidrogenación catalítica para el bencil-carbamato, seguida por formación de urea como se ilustra en el Método A, generará análogos de amidas.

Método F

16

La saponificación de los ésteres 3-aminotiofeno-2-carboxilato (v.g. con KOH) proporciona el ácido carboxílico que, por tratamiento con fosgeno o un equivalente de fosgeno, da la 2H-tieno[3,2-d]oxazina-2,4(1H)-diona (Método R). La reacción de la tieno-oxazina con una aril-amina proporciona luego la 2-carboxitienil-urea sustituida. La activación, v.g. con SOCl_{2}, seguida por tratamiento con un alcohol, proporciona el éster correspondiente. Alternativamente, el tratamiento del compuesto intermedio activado con una amina primaria o secundaria proporciona la amida correspondiente.

Método R

17

Los análogos amídicos pueden generarse también por tratamiento directo del éster metílico con un amiduro de aluminio (Método G), seguido por formación de urea como se ilustra en el Método A.

Método G

18

La generación de análogos de ácidos carboxílicos puede realizarse por hidrólisis de los ésteres correspondientes. Por ejemplo, la hidrogenación catalítica del bencil-éster C-2, v.g. utilizando H_{2} y paladio sobre carbono, proporciona el ácido tiofeno-2-carboxílico (Método H).

Método H

19

Las ureas que contienen amidas primarias pueden reducirse a los análogos aminometílicos utilizando, por ejemplo, una solución de BH_{3}\cdotTHF (Método I). La amina así generada puede funcionalizarse luego en caso deseado. La formación de amida puede realizarse utilizando cloruros de ácido o su equivalente, o mediante protocolos de acoplamiento estándar. Por ejemplo, la amina puede acoplarse con una glicina amino-protegida, v.g. N-BOC-glicina, en presencia de un catalizador de carbodiimida, v.g. DCC, seguido por la eliminación estándar del grupo protector, utilizando por ejemplo una fuente de ácido tal como HCl o ácido trifluoroacético para el terc-butil-carbamato (Método I).

Método I

20

Las aminas adecuadas (A-NH_{2}, donde A es como en las Fórmulas I-V) pueden estar disponibles comercialmente, o se pueden generar por cualquier reacción de formación de aminas, tal como el uso de cualquier variación de la transposición de Schmidt. Así, por ejemplo, un ácido carboxílico puede tratarse con un equivalente de fosgeno, tal como cloroformiato de etilo, y una fuente de azida para generar el isocianato (Método J). El isocianato puede tratarse con agua para proporcionar la amina correspondiente, o hacerse reaccionar directamente con una segunda amina para proporcionar una urea (Método J).

Método J

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21

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La litiación de 2-alquilfuranos, utilizando por ejemplo n-BuLi, seguida por extinción del 2-furil-litio con CO_{2} proporciona el ácido furan-2-carboxílico (Método K). La formación de dianión, utilizando por ejemplo n-BuLi, seguida por reacción con tosil-azida, y tratamiento posterior con un equivalente de diazometano, da el azido-éster. Finalmente, análogos furánicos de 5-alquil-3-aminotiofeno-2-carboxilatos de metilo pueden generarse por reducción de la azida, por ejemplo con H_{2} y paladio sobre carbono (Método K). Los análogos aminofuránicos pueden convertirse en ureas de una manera similar a la ilustrada en el Método A o el Método B.

Método K

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22

Los ésteres 5-alquil-3-aminofuran-2-carboxilato pueden generarse también por la reacción de glicolato de metilo con 2-alquil-2-cloroacrilonitrilo en presencia de una base (Método L-1). Alternativamente, los ésteres de 5-alquil-3-aminofuran-2-carboxilato pueden generarse a partir de \alpha-cianocetonas (Método L-2). Por ejemplo, el tratamiento de una \alpha-cianocetona con un glicolato de alquilo en condiciones de Mitsunobu (v.g. trifenilfosfina y un azodicarboxilato de dialquilo) proporciona el \beta-ciano-enol-éter. El tratamiento del enol-éter con una base adecuada, tal como KOBu-t, NaH, o 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-undec-3-eno (DBU), genera luego el aminofurano deseado. Los análogos aminofuránicos pueden convertirse en ureas de manera similar a la ilustrada en el Método A o el Método B.

Método L-1

23

Método L-2

24

Los análogos amídicos de los ácidos aminofurancarboxílicos pueden generarse por tratamiento directo del éster metílico (a partir de L-1 o L-2) con un amiduro de aluminio (Método M), seguido por formación de urea como se ilustra en el Método A.

Método M

25

La esterificación del ácido pirrol-2-carboxílico seguida por alquilación de Friedel-Crafts, proporciona el análogo de 5-alquilo (Método N-1). La nitración electrófila del pirrol con ácido nítrico en ácido sulfúrico proporciona una mezcla separable del compuesto nitrado en posición 3 que se muestra a continuación y el análogo dinitrado en 3,4 (Método N-1). La reducción del grupo nitro, por ejemplo utilizando hidrógeno y paladio sobre carbono, proporciona la amina, que puede convertirse en la urea de una manera similar a la ilustrada en el Método B (Método N-1), o por tratamiento con un isocianato (Método N-2).

Método N-1

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Método N-2

27

Como se muestra en el Método N-3, los análogos amídicos de pirroles pueden generarse por conversión del ácido 5-alquil-3-nitropirrol-2-carboxílico en la amida correspondiente utilizando condiciones de acoplamiento estándar (v.g. 1-(3-dimetilaminopropil)-3-carbodiimida, EDCI), seguido por reducción del grupo nitro y formación de urea, como se ilustra en los Métodos N-1 y N-2.

Método N-3

28

El 3-nitropirrol generado en el Método N-1 puede tratarse también con agentes de alquilación para formar el N-alquil-3-nitropirrol (Método O). La reducción del resto nitro y la formación de urea proceden de una manera similar a la ilustrada en el Método N-1.

Método O

29

Los 5-terc-butil-2-aminotiofeno-3-carboxilatos de metilo se pueden generar por la reacción de cianoacetato de metilo con 3,3-dimetilbutilaldehído en presencia de azufre elemental (Gewald et al. Chem. Ber. 1966, 99, 94, Método E). La formación de urea puede o bien implicar el tratamiento de la amina así formada con un isocianato, o un equivalente de isocianato (Método B), o la conversión de la amina en un isocianato o un equivalente de isocianato por tratamiento con fosgeno (Método Q) o un equivalente de fosgeno (Métodos S y T), seguido por reacción con una segunda amina.

Método P

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Método Q

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Métodos S y T

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Análogamente, la formación de la 3-carbamoil-2-tienilamina seguida por tratamiento con un isocianato proporciona la urea correspondiente (Método U).

Método U

33

La invención incluye también composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmulas I-V, y un vehículo fisiológicamente aceptable.

Los compuestos se pueden administrar por vías oral, tópica, parenteral, por inhalación o pulverización o por vía rectal en formulaciones de dosis unitarias. La expresión "administración por inyección" incluye inyecciones intravenosas, intramusculares, subcutáneas y parenterales, así como el uso de técnicas de infusión. Uno o más compuestos pueden estar presentes en asociación con uno o más vehículos no tóxicos farmacéuticamente aceptables y, si se desea, otros ingredientes activos.

Las composiciones propuestas para uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método adecuado conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas. Tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo constituido por diluyentes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes a fin de proporcionar preparaciones agradables al paladar. Las tabletas contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de tabletas. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granulantes y desintegradores, por ejemplo, almidón de maíz, o ácido algínico; y agentes aglomerantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden carecer de recubrimiento o pueden estar recubiertas por técnicas conocidas para retardar la desintegración y adsorción en el tracto gastrointestinal y proporcionar con ello una acción prolongada durante un periodo más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Estos compuestos se pueden preparar también en forma sólida, que se libera fácilmente.

Las formulaciones para uso oral pueden presentarse también como cápsulas de gelatina dura en las cuales el ingrediente activo está mezclado con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en las cuales el ingrediente activo está mezclado con agua o un medio aceitoso, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de parafina o aceite de oliva.

Pueden utilizarse también suspensiones acuosas que contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropil-metilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga; agentes dispersantes o humectantes pueden ser un fosfátido existente naturalmente, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo poli(oxietileno-estearato), o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetileno-oxietanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol tales como monooleato de polioxietilen-sorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilen-sorbitán. Las suspensiones acuosas pueden contener también uno o más conservantes, por ejemplo p-hidroxibenzoato de etilo, o de n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.

Los polvos dispersables y gránulos adecuados para preparación de una suspensión acuosa por adición de agua proporcionan el ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservantes. Agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión se ilustran por los ya mencionados anteriormente. Pueden estar presentes también excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes.

Los compuestos se pueden encontrar también en la forma de formulaciones líquidas no acuosas, v.g. suspensiones aceitosas que se pueden formular por suspensión de los ingredientes activos en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de cacahuete, o en un aceite mineral tal como aceite de parafina. Las suspensiones aceitosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Pueden añadirse agentes edulcorantes tales como los expuestos anteriormente, y agentes saborizantes para proporcionar preparaciones orales agradables. Estas composiciones pueden conservarse por adición de un anti-oxidante tal como ácido ascórbico.

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden encontrarse también en la forma de emulsiones de aceite en agua. La fase aceitosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo aceite de parafina o mezclas de éstos. Agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas existentes naturalmente, por ejemplo goma arábiga o goma tragacanto, fosfátidos existentes naturalmente, por ejemplo soja, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilen-sorbitán). Las emulsiones pueden contener también agentes edulcorantes y saborizantes.

Los jarabes y elixires pueden formularse con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propilen-glicol, sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones pueden contener también un emoliente, un conservante y agentes saborizantes y colorantes.

Los compuestos se pueden administrar también en la forma de supositorios para administración rectal del fármaco. Estas composiciones pueden prepararse por mezcla del fármaco con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a la temperaturas ordinarias, pero líquido a la temperatura rectal y que por consiguiente fundirá en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao y polietilen-glicoles.

Para todos los regímenes de uso descritos en esta memoria para los compuestos de Fórmula I-V, el régimen de dosificación oral diario será preferiblemente desde 0,01 a 200 mg/kg de peso corporal total. La dosis diaria para administración por inyección, con inclusión de inyecciones intravenosas, intramusculares, subcutáneas y parenterales, y el uso de técnicas de infusión, será preferiblemente desde 0,01 a 200 mg/kg de peso corporal total. El régimen de dosificación diaria rectal será preferiblemente desde 0,01 a 200 mg/kg de peso corporal total. El régimen de dosificación diaria tópica será preferiblemente desde 0,1 a 200 mg administrados entre 1 y 4 veces al día. El régimen de dosificación diario por inhalación será preferiblemente desde 0,01 a 10 mg/kg de peso corporal total.

Los expertos en la técnica apreciarán que el método particular de administración dependerá de una diversidad de factores, todos los cuales se consideran rutinariamente cuando se administran los productos terapéuticos. Será apreciado también por un experto en la técnica que el nivel de dosis específico para un paciente dado depende de una diversidad de factores, que incluyen actividad específica del compuesto administrado, edad, peso corporal, salud, sexo, dieta, hora y vía de administración, tasa de excreción, etc. Será apreciado adicionalmente por los expertos en la técnica que el curso óptimo del tratamiento, es decir, el modo de tratamiento y el número diario de dosis de un compuesto de las Fórmulas I-V, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, dado para un número definido de días, puede ser averiguado por los expertos en la técnica utilizando ensayos convencionales de curso del tratamiento.

Los ejemplos siguientes se dan únicamente para propósitos ilustrativos.

Ejemplos

Todas las reacciones se efectuaron en material de vidrio secado a la llama o secado al horno bajo una presión positiva de argón seco o nitrógeno seco, y se agitaron magnéticamente a no ser que se indique otra cosa. Los líquidos y soluciones sensibles se transfirieron por la vía de una jeringuilla o cánula, y se introdujeron en los recipientes de reacción a través de tapones de goma. A no ser que se indique otra cosa, la expresión "concentración a presión reducida" se refiere al uso de un evaporador rotativo Buchi a aproximadamente 15 mmHg. Se realizaron concentraciones matraz-a-matraz utilizando un aparato con tubo de bolas Aldrich, y en estos casos las temperaturas se refieren también a temperaturas del horno.

Todas las temperaturas se dan en grados Celsius (ºC) sin corregir. A no ser que se indique otra cosa, todas las partes y porcentajes se expresan en volumen.

Se utilizaron reactivos y disolvente de calidad comercial sin purificación ulterior, excepto que el tetrahidrofurano (THF) y el 1,2-dimetoxietano (DME) se destilaron dos veces sobre potasio, el dietil-éter se destiló a partir de cetil-benzofenona sódica, y el CH_{2}Cl_{2} se destiló a partir de CaH_{2}.

La cromatografía en capa delgada (TLC) se realizó sobre placas de gel de sílice 60A F-254 Whatman® 60A F-254 de 250 \mum pre-recubiertas con respaldo de vidrio. La visualización de las placas se efectuó por una o más de las técnicas siguientes: (a) iluminación ultravioleta, (b) exposición a vapores de yodo, (c) inmersión de la placa en una solución al 10% de ácido fosfomolíbdico en etanol seguida por calentamiento, (d) inmersión de la placa en una solución de sulfato de cerio seguida por calentamiento, y/o (e) inmersión de la placa en una solución etanólica ácida de 2,4-dinitrofenilhidrazina seguida por calentamiento. La cromatografía en columna (cromatografía súbita) se realizó utilizando gel de sílice EM Science® de malla 230-400. La cromatografía rotativa se realizó utilizando placas de SiO_{2} previamente coladas (Alltech®) en un instrumento Harrison Research Chromatotron.

Los puntos de fusión (pf) se determinaron utilizando un aparato de punto de fusión Thomas-Hoover o un aparato de punto de fusión automático Mettler FP66, y están sin corregir. Los espectros infrarrojos por transformada de Fourier se obtuvieron utilizando un espectrofotómetro Mattson 4020 Galaxy Series. Los espectros de resonancia magnética nuclear (NMR) del protón (^{1}H) se midieron con un espectrómetro General Electric GN-Omega 300 (300 MHz) con Me_{4}Si (d 0,00) o disolvente protonizado residual (CHCl_{3} \delta 7,26; MeOH \delta 3,30; DMSO \delta 2,49) como patrón. Se midieron los espectros NMR (^{13}C) de carbono con un espectrómetro General Electric GN-Omega 300 (75 MHz) con disolvente (CDCl_{3}, \delta 77,0; MeOD-d_{3} \delta 49,0; DMSO-d_{6} \delta 39,5) como patrón. Los espectros de masas de baja resolución (MS) y los espectros de masas de alta resolución (HRMS) se obtuvieron, o bien como espectros de masas por impacto de electrones (EI), o como espectros de masas por bombardeo con átomos rápidos (FAB). Los espectros de masas por impacto de electrones (EI-MS) se obtuvieron con un espectrómetro de masas Hewlett Packard 5989A equipado con una Sonda de Ionización Vacumetrics Desorption Chemical para introducción de la muestra. La fuente de iones se mantuvo a 250ºC. La ionización por impacto de electrones se realizó con una energía electrónica de 70 eV y una corriente de captura de 300 \muA. Los espectros de masas de iones secundarios con cesio líquido (FAB-MS), una versión actualizada del bombardeo de átomos rápidos, se obtuvieron utilizando un espectrómetro Kratos Concept 1-H. Los espectros de masas de ionización química (CI-MS) se obtuvieron utilizando una máquina MS Hewlett Packard (5989A) con metano o amoniaco como el gas reactivo (1 x 10^{-4} Torr a 2,5 x 10^{-4} Torr). La sonda de ionización química con desorción (DCI) por inserción directa (Vaccumetrics, Inc.) se hizo aumentar desde 0-1,5 amperios en 10 segundos y se mantuvo a 10 amperios hasta que desaparecieron totalmente las trazas de la muestra (\sim 1-2 min). Los espectros se barrieron desde 5 a 800 amu a 2 s por barrido. Los espectros de masas por pulverización electrónica HPLC (HPLC ES-MS) se obtuvieron utilizando un equipo de HPLC Hewlett-Packard 1100 una bomba cuaternaria, un detector de longitud de onda variable, una columna C-18, y un espectrómetro de masas por atrapamiento iónico Finnigan LCQ, con ionización por pulverización electrónica. Los espectros se barrieron desde 120 a 800 amu utilizando un tiempo de iones variable de acuerdo con el número de iones en la fuente. Los espectros de cromatografía de gases-espectrometría de masas iónicas selectivas (GC-MS) se obtuvieron con un cromatógrafo de gases Hewlett-Packard 5890 equipado con una columna de metil-silicona HP-1 (recubrimiento 0,33 mM; 25 m x 0,2 mm) y un Detector Selectivo de Masas Hewlett Packard 5971 (energía de ionización 70 eV). Los análisis elementales fueron realizados por Robertson Microlit Labs, Madison NJ.

Todos los compuestos exhibían espectros NMR, LRMS y análisis elementales o HRMS consistentes con las estructuras asignadas.

Lista de abreviaturas y acrónimos

AcOH	Ácido acético
CI	Ionización química
DMAP	4-(N,N-dimetilamino)piridina
DMF	N,N-dimetilformamida
DME	1,2-dimetoxietano
DMSO	Dimetil-sulfóxido
EDCI	1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida

EI	Impacto de electrones
Et_{3}N	Trietilamina
Et_{2}O	Dietil-éter
EtOAc	Acetato de etilo
EtOH	Etanol
FAB	Bombardeo de átomos rápidos
GC-MS	Cromatografía de gases-espectrometría de masas
hex	N-hexano
FTIR	Infrarrojo por transformada de Fourier
HPLC ES-MS	Cromatografía líquida de alta presión- espectro de masas por pulverización electrónica
HRMS	Espectro de masas de alta resolución
KOAc	Acetato de potasio
LRMS	Espectro de masas de baja resolución
MeOH	Metanol
NaOMe	Metóxido de sodio
Éter pet.	Éter de petróleo (intervalo de ebullición 30-60^{o}C)
THF	Tetrahidrofurano
Ti(OEt)_{4}	Tetraetoxititanio(IV)
TMSCl	Cloruro de trimetilsililo
TLC	Cromatografía en capa delgada
TMSCHN	(Trimetilsilil)diazometano

Métodos generales para la síntesis de urido-heterociclos

Método A

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-isopropil-3-tienil)-N'-(fenil)urea (Ejemplo 1)

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Paso 1

A una solución de NaOMe (14 g) en MeOH (1 l) se añadió tioglicolato de metilo (22,3 ml). La mezcla se agitó durante 5 min, se añadió luego una solución de 3-cloro-4-metil-2-pentenonitrilo (32,4 g) en MeOH (200 ml) y la solución se calentó a la temperatura de reflujo durante 90 min. Después de enfriar a 20ºC, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con una solución 1 N de HCl, se secó (MgSO_{4}), y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (EtOAc/hexano) para proporcionar 3-amino-5-isopropiltiofeno-2-carboxilato de metilo (8,0 g, 16%).

Paso 2

A una solución de 3-amino-5-isopropiltiofeno-2-carboxilato de metilo (0,050 g, 0,25 mmol) en tolueno (1 ml) se añadió isocianato de fenilo (0,024 ml, 0,25 mmol, 1,0 equiv) y la mezcla resultante se calentó a la temperatura de reflujo durante 6 h, y se enfrió luego a 20ºC, durante lo cual cristalizó N-(2-carbometoxi-5-isopropil-3-tienil)-L'-(fenil)urea (0,014 g, 18%) a partir de la solución: pf 108-10ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,3 (d, 6H), 3,1 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 6,7 (br s, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,3 (m, 3H), 7,83 (s, 1H); EI-LRMS m/z 318 (M^{+}).

Compuesto seleccionado sintetizado utilizando el Método A:

N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metil-fenil)urea (Ejemplo 5): pf 124-6ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,34 (s, 9H), 2,30 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,48 (brs, 1H), 7,87 (s, 1H), 9,67 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 20,8, 31,7 (3C), 35,2, 51,6, 104,9, 117,2, 121,4 (2C), 129,7 (2C), 134,0, 135,1, 145,9, 152,2, 164,4, 165,0.

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Método B

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-fluorofenil)urea (Ejemplo 54)

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Paso 1

A una solución de fosgeno (1,93 M en tolueno, 7,9 ml, 15,2 mmol, 3,0 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se añadió una solución de 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (1,08 g, 5,07 mmol) y piridina (1,6 ml, 20,3 mmol, 4,0 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a la temperatura ambiente y se agitó a dicha temperatura durante 30 min. La suspensión resultante se concentró a presión reducida para dar una mezcla de isocianato de 2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienilo e hidrocloruro de piridinio como un sólido amarillo. Isocianato de 2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienilo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,36 (s, 9H), 3,89 (s, 3H), 6,55 (s, 1H). La mezcla se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior.

Paso 2

El isocianato de 2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienilo preparado en el método B, Paso 1 se disolvió en THF anhidro (100 ml). Se añadió 4-fluoroanilina (1,13 g, 10,1 mmol, 2,0 equiv) y la solución resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla resultante se diluyó con CHCl_{3} (200 ml), y se lavó luego con una solución 1 N de HCl (2 x 100 ml) y una solución saturada de NaCl (100 ml). Las capas acuosas reunidas se extrajeron de nuevo con CHCl_{3} (100 ml). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida para dar un sólido amarillo-pardo (1,61 g), que se recristalizó (CH_{2}Cl_{2}) para dar N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-fluorofenil)urea como un sólido blanco (1,34 g, 75% en dos pasos): pf 160-2ºC; TLC (20% EtOAc/hexano) R_{f} 0,45; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,33 (s, 9H), 3,77 (s, 3H), 7,01 (dd, J = 8,8, 8,5 Hz, 2H), 7,34-7,39 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 9,68 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 31,7 (3C), 35,2, 51,6, 105,1, 115,9 (d, J_{C-F} = 22,0 Hz, 2C), 117,1, 123,2 (d, J_{C-F} = 7,3 Hz, 2C), 133,7 (d, J_{C-F} = 2,4 Hz, 1C), 145,8, 148,6, 152,2, 159,6 (d, J_{C-F} = 244,1 Hz, 1C), 164,7, 165,1; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 351 (M+H, 33%).

Compuestos seleccionados sintetizados utilizando el Método B:

N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-metil-fenil)urea (Ejemplo 9): pf 70-2ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,4 (s, 9H), 2,4 (s, 3H), 3,8 (s, 3H), 6,75 (br s, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,2-7,3 (m, 3H), 7,8 (s, 1H), 9,7 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 347 (m+H, 56%).

N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(5-ciclo-propil-2-tiadiazolil)urea (Ejemplo 16): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,20-140 (m, 4H), 1,40 (s, 9H), 2,25-2,35 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 7,75 (s, 1H), 10,00 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 381 (M+H, 18%).

Método C

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2-aminofenil)urea (Ejemplo 11)

36

La N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2-nitrofenil)urea se sintetizó de una manera análoga a la descrita en el Método B.

Una suspensión de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2-nitrofenil)urea (0,078 g, 0,21 mmol) y 10% Pd/C (0,010 g) en MeOH (15 ml) se agitó bajo H_{2} (1 atm) durante 18 h a 20ºC. Se añadió Celite® y se filtró la suspensión. La solución resultante se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía súbita (gradiente desde 20% EtOAc/hexano a 50% EtOAc/hexano) para proporcionar N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2-aminofenil)urea como una espuma (0,060 g, 83%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}, espectro parcial) \delta 1,4 (s, 9H), 3,6 (s, 3H), 6,8-7,3 (m, 4H), 7,8 (s, 1H), 9,6 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 348 (M+H, 34%).

Método D

Síntesis de N-(2-carboetoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 6)

37

Una solución de Ti(OEt)_{4} (0,10 ml, 0,476 mmol, 11,8 equiv), N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,014 g, 0,040 mmol), y EtOH (10 ml) se calentó a la temperatura de reflujo durante 36 h. La mezcla resultante se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El aceite residual se disolvió en EtOAc y se purificó por cromatografía súbita (gradiente desde 10% EtOAc/hexano a 20% EtOAc/hexano) para proporcionar N-(2-carboetoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)-urea (0,0086 g, 59%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,30 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 2,30 (s, 3H), 4,24 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,30 (br s, 1H), 7,86 (s, 1H), 9,68 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 14,3, 20,8, 31,8 (3C), 35,2, 60,6, 105,1, 117,2, 121,0 (2C), 129,7 (2C), 133,8, 135,8, 145,9, 152,1, 164,2, 164,8.

Método E

Síntesis de N-(2-(carbo-1-prop-2-eniloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 8)

38

Paso 1

A una solución de 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (10,0 g, 47 mmol) y DMAP (6,57 g, 47 mmol, 1,0 equiv) en piridina (188 ml) a 0ºC se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (11,3 g, 51,7 mmol, 1,1 equiv). Se dejó calentar la solución en piridina a la temperatura ambiente, y se agitó durante 6 días. La mezcla resultante se concentró a presión reducida para dar un sólido anaranjado, que se separó entre CH_{2}Cl_{2} (250 ml) y una solución 1 M de H_{3}PO_{4} (100 ml). La fase orgánica se lavó con una solución saturada de NaHCO_{3} (100 ml) y una solución saturada de NaCl (100 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. El sólido anaranjado claro resultante se recristalizó (EtOH/H_{2}O) para dar 3-(N-carbo-terc-butoxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo como un sólido blanquecino (12,00 g, 82%): TLC (10% EtOAc) R_{f} 0,65; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 1,51 (s, 9H), 3,84 (s, 3H), 7,68 (s, 1H), 9,35 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 28,6 (3C), 32,0 (3C), 35,4, 51,8, 81,1, 105,2, 116,6, 145,7, 152,4, 164,5, 165,0.

Paso 2

A una solución de 3-(N-carbo-terc-butoxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (10,7 g, 34,1 mmol) en una mezcla 2:1:1 de THF, MeOH y H_{2}O (340 ml) se añadió NaOH (4,09 g, 102,3 mmol, 3,0 equiv). La solución resultante se calentó a 60ºC durante 18 h, se enfrió a la temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se separó entre H_{2}O (500 ml) y EtOAc (250 ml). La fase acuosa se ajustó a pH 2 con una solución de HCl al 10%, y se extrajo luego con EtOAc (2 x 400 ml). La fase orgánica se lavó con una solución saturada de NaCl (250 ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a presión reducida para proporcionar ácido 3-(N-carbo-terc-butoxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxílico como un sólido anaranjado (6,6 g, 65%). Este material se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior. Una muestra analítica del ácido carboxílico se purificó ulteriormente: pf 187-8ºC, TLC (10% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) R_{f} 0,17; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,40 (s, 9H), 1,54 (s, 9H), 7,73 (s, 1H), 9,19 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 28,2 (3C), 31,8 (3C), 35,4, 81,3, 104,6, 116,7, 146,7, 151,9, 166,6, 169,3; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 300 (M+H, 30%).

Paso 3

A una solución de ácido 3-(N-carbo-terc-butoxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxílico (0,20 g, 0,67 mmol), alcohol alílico (0,042 g, 0,73 mmol, 1,1 equiv) y DMAP (0,008 g, 0,07 mmol, 10%) en CH_{3}Cl_{2} (2 ml) se añadió EDCI\cdotHCl (0,14 g, 0,73 mmol, 1,1 equiv). La mezcla en CH_{2}Cl_{2} se agitó a la temperatura ambiente durante 3 días, se diluyó con CH_{2}Cl_{2}, se lavó con una solución 1N de HCl (5 ml) y una solución saturada de NaHCO_{3} (5 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a presión reducida para proporcionar 3-(N-carbo-terc-butoxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de alilo (0,15 g, 65%) como un aceite incoloro; TLC (50% CH_{2}Cl_{2}/hexano) R_{f} 0,63; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,37 (s, 9H), 1,50 (s, 9H), 4,74 (ddd, J = 5,5, 1,5, 1,5 Hz, 2H), 5,26 (dd, J = 10,3, 1,5 Hz, 1H), 5,37 (dd, J = 17,3, 1,5 Hz, 1H), 5,87-5,98 (m, 1H), 7,68, 9,35; ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 28,2 (3C), 31,8 (3C), 35,2, 64,9, 80,8, 104,9, 116,4, 118,1, 132,0, 145,6, 152,1, 164,0, 164,4.

Paso 4

Se disolvió 3-(N-carbo-terc-butoxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de alilo (0,14 g, 0,41 mmol) en solución de HCl en dioxano (4 N, 11,0 ml, 4,1 mmol, 10 equiv). La solución resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 5 días, se diluyó con CHCl_{3} (5 ml), se lavó con una solución 1 N de HCl (5 ml) y una solución saturada de NaCl (5 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a presión reducida. El residuo se filtró a través de un bloque de SiO_{2} con ayuda de una solución al 10% de EtOAc/CH_{2}Cl_{2} para dar 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de alilo como un aceite amarillo (0,088 g, 95%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,32 (s, 9H), 4,72 (ddd, J = 4,1, 1,5, 1,5 Hz, 2H), 5,21 (ddd, J = 10,3, 2,9, 1,5 Hz, 1H), 5,36 (ddd, J = 17,3, 3,1, 1,5, 1H), 5,42 (br s, 2H), 5,92-6,03 (m, 1H), 6,34 (s, 1H). Este material se utilizó sin purificación ulterior.

Paso 5

A una solución de 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de alilo (0,088 g, 0,39 mmol) y piridina (0,12 g, 1,56 mmol, 4,0 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (4 ml) a 0ºC se añadió una solución de fosgeno en tolueno (1,93 M, 0,6 ml, 1,17 mmol, 3,0 equiv). Se dejó que la mezcla de reacción se calentara lentamente a la temperatura ambiente, y se agitó durante 2 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en THF anhidro (4 ml), se añadió 4-metilanilina (0,083 g, 0,78 mmol, 2,0 equiv), y la solución resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla de THF se diluyó con CHCl_{3} (10 ml) y la solución resultante se lavó con una solución 1 N de HCl (10 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (gradiente desde hexano a 10% EtOAc/hexano) para dar N-(2-(carbo-1-prop-2-eniloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea como un sólido blanco (0,087 g, 60%): pf 52-62ºC, TLC (10% EtOAc/hexano) R_{f} 0,34; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,36 (s, 9H), 2,32 (s, 3H), 4,69 (dt aparente, J = 5,5, 1,5 Hz, 2H), 5,25 (dd, J = 10,3, 1,5 Hz, 1H), 5,35 (dd, J = 16,9, 1,5 Hz, 1H), 5,87-5,98 (m, 1H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,88 (s, 1H), 9,68 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 20,8, 31,7 (3C), 35,2, 65,0, 104,9, 117,2, 118,2, 121,3 (2C), 129,7 (2C), 131,9, 134,0, 135,0, 146,1, 151,2, 164,3, 165,6; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 373 (M+H, 13%).

Compuestos seleccionados sintetizados utilizando el Método E:

N-(2-(Carbo-1-propiloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 7): pf 72-86ºC, TLC (10% EtOAc/
hexano) R_{f} 0,34; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,28 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 2,31 (s, 3H), 5,11 (sept, J = 6,3 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,85 (s, 1H), 9,76 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 20,8, 21,9 (2C), 31,8 (3C), 35,2, 68,2, 105,6, 117,2, 121,2 (2C), 129,7 (2C), 133,8, 135,1, 145,7, 152,1, 163,9, 164,4; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 375 (M+H 70%).

N-(2-(carbo-1-propiloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 53): pf 59-66ºC, TLC (10% EtOAc/
hexano) R_{f} 0,38; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 0,96 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 1,69 (hex aparente, J = 7,4 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 4,14 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,86 (s, 1H), 9,71 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 10,3, 20,8, 22,0, 31,7 (3C), 35,2, 66,1, 105,3, 117,2, 121,2 (2C), 129,7 (2C), 133,9, 135,0, 145,7, 152,1, 164,2, 164,8; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 375 (M+H 36%).

Método F

Síntesis de N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 22)

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Paso 1

Una solución de 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (20,0 g, 93,9 mmol), cloroformiato de bencilo (80,4 ml, 563 mmol), Na_{2}CO_{3} (1,10 g, 9,93 mmol), tolueno (400 ml) y agua (50 ml) se calentó a la temperatura de reflujo durante 18 h. Las materias volátiles se eliminaron a presión reducida. El aceite resultante se disolvió en EtOAc, se lavó con agua y una solución concentrada de NaCl, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida para proporcionar 3-(N-carbobenciloxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo como un aceite bruto con rendimiento cuantitativo.

Paso 2

A una solución saturada de metilamina en MeOH (200 ml) en un recipiente con tapón roscado se añadió 3-(N-carbobenciloxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (13,6 g, 39,2 mmol) y NaCN (0,98 g, 20 mmol). El recipiente se cerró herméticamente y la mezcla de reacción se calentó a 50ºC durante 8 h. La solución resultante se vertió en agua (500 ml) y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua y una solución concentrada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a presión reducida. El material bruto se purificó por cromatografía súbita (EtOAc/hexano) proporcionando N-(metil-3-(N-carbobenciloxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxamida (2,76 g, 20%).

Paso 3

Se disolvió N-(metil-3-(N-carbobenciloxiamino)-5-terc-butiltiofeno-2-carboxamida (2,76 g, 8 mmol) en una solución 1:1 v/v de 48% HBr y AcOH (100 ml) y se calentó a 30ºC durante 24 h. La solución ácida se enfrió y se ajustó a pH 4 con una solución saturada de NaHCO_{3}. Se añadió metilamina (4 ml, 2 M en THF) y la mezcla resultante se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se concentró a presión reducida para proporcionar N-metil-3-amino-5-terc-butiltienil-2-carboxamida (0,092 g, 54%).

Paso 4

Una solución de N-metil-3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxamida (0,60 g, 2,83 mmol) e isocianato de 4-metilfenilo (0,36 ml, 2,83 mmol) en tolueno (2 ml) se calentó a la temperatura de reflujo durante 18 h. La solución resultante se concentró a presión reducida y el sólido resultante se purificó por cromatografía súbita (EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) proporcionando N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,42 g, 44%): pf 202-4ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,31 (s, 3H), 2,91 (d, J = 4,9 Hz, 3H), 5,59 (bs, 1H), 7,11 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,90 (s, 1H), 10,53 (s, 1H).

Método G

Síntesis de N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-fluorofenil)urea (Ejemplo 25)

40

Paso 1

Una suspensión de hidrocloruro de metilamina (9,51 g, 141 mmol, 3,1 equiv) en tolueno anhidro (600 ml) a 0ºC se trató con AlMe_{3} (2M en tolueno, 70 ml, 141 mmol, 3,1 equiv) durante 10 min. La solución resultante se agitó a 0ºC durante 1 h y se dejó calentar luego a la temperatura ambiente, después de lo cual se agitó durante 40 min. Se añadió 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (9,87 g, 46 mmol) a la solución de amiduro de aluminio. La mezcla resultante se calentó a la temperatura de reflujo durante 3 días, se enfrió a 0ºC, y se añadió gota a gota una solución 6 N de HCl. La mezcla extinguida se alcalinizó con una solución de KOH al 20% (95 ml). La suspensión resultante se repartió entre H_{2}O (300 ml) y EtOAc (300 ml), y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 300 ml). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida para proporcionar N-metil-3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxamida como un sólido verde-amarillo (9,47 g, 97%): pf 230-1ºC; TLC (20% EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) R_{f} 0,23; ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,28 (s, 9H), 2,63 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 6,29 (br s, 2H), 6,37 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,22 (q, J = 4,0 Hz, 1H).

Paso 2

Una suspensión de N-metil-3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxamida (7,63 g, 36 mmol) e isocianato de 4-fluorofenilo (4,93 g, 36 mmol, 1,0 equiv) en tolueno anhidro (100 ml) se calentó a la temperatura de reflujo durante 3 h, durante cuyo tiempo la mezcla se clarificó y generó luego un precipitado nuevo, que se filtró mientras estaba caliente. Los sólidos resultantes se lavaron con hexano y se secaron a presión reducida para proporcionar N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butiltienil)-N'-(4-fluoro-fenil)urea (10,2 g, 81%): pf 203-4ºC; TLC (5% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) R_{f} 0,61; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,34 (s, 9H), 2,73 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 7,07-7,13 (m, 2H), 7,49-7,54 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,96 (q, J = 4,4 Hz, 1H), 9,88 (s, 1H), 10,46 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 25,8, 31,6 (3C), 34,5, 107,4, 115,2 (d, J_{C-F} = 22,0 Hz, 2C) 117,3, 120,1 (d, J_{C-F} = 7,3 Hz, 2C), 136,1 (d, J_{C-F} = 2,4 Hz, 2C), 143,1, 151,6, 157,4 (d, J_{C-F} = 238,1 Hz, 1C), 158,0, 164,3; EI-LRMS m/z (abundancia relativa) 349 (M^{+}, 13%).

Compuestos seleccionados sintetizados utilizando el Método G:

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-etil-fenil)urea (Ejemplo 23): pf 101-4ºC; TLC (20% EtOAc\cdothe-
xano) R_{f} 0,18; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,20 (t, J = 7,7 Hz, 3H), 1,20 (s, 9H), 2,59 (q, J = 7,7 Hz, 2H), 2,88 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 5,64 (br d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,42 (br m, 1H), 7,90 (s, 1H), 10,54 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 15,6, 26,3, 28,2, 31,8 (3C), 35,0, 106,8, 118,1, 120,2 (2C), 128,3 (2C), 135,9, 139,5, 144,5, 152,1, 159,5, 165,6; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 360 (M+H, 14%).

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-isopro-pilfenil)urea (Ejemplo 24): pf 113-20ºC; TLC (20%
EtOAc\cdothexano) R_{f} 0,20; ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,17 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 1,35 (s, 9H), 2,73 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 2,82 (sept, J = 7,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,93 (br q, J = 4,8 Hz, 1H), 9,75 (s, 1H), 10,40 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 15,8 (2C), 25,9, 27,5, 31,6 (3C), 34,5, 107,3, 118,5 (2C), 127,8 (2C), 137,2, 137,5, 143,2, 151,6, 157,9, 164,3; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 374 (M+H, 50%).

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2,4-dimetilfenil)urea (Ejemplo 27): pf 195-6ºC; ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,32 (s, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,71 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 6,93 (br d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,98 (br s, 1H), 7,27 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,89 (q, J = 4,0 Hz, 1H), 8,96 (s, 1H), 10,31 (s, 1H); EI-LRMS m/z (abundancia relativa) 359 (M^{-}, 7%).

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-cloro-4-metilfenil)urea (Ejemplo 28): pf 178-9ºC; ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,31 (s, 9H), 2,24 (s, 3H), 2,72 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 7,19-7,24 (m, 2H), 7,73 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,97 (br q, J = 4,3 Hz, 1H), 9,96 (s, 1H), 10,49 (s, 1H); EI-LRMS m/z (abundancia relativa) 379 (M^{+}, 30%), 381 (M^{+}+2, 14%).

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-fluoro-4-metilfenil)urea (Ejemplo 29): pf 182-3ºC; ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,32 (s, 9H), 2,13 (d, J_{F-H} = 1,5 Hz, 3H), 2,70 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 7,08-7,12 (m, 2H), 7,42 (dd, J = 1,8, 12,5 Hz, 2H), 7,76 (s, 1H), 7,95 (q, J = 4,8 Hz, 1H), 9,94 (s, 1H), 10,45 (s, 1H); FAB- LRMS m/z (abundancia relativa) 364 (M+H, 10%).

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-cloro-4-fluorofenil)urea (Ejemplo 30): pf 203-4ºC; ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,34 (s, 9H), 2,72 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 7,31-7,35 (m, 2H), 7,77 (s, 1H), 7,84 (dm, J = 5,9 Hz, 1H), 7,99 (br q, J = 4,4 Hz, 1H), 10,06 (s, 1H), 10,54 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 359 (M+H, 52%), 386 (M+2+H, 22%).

Método H

Síntesis de N-(2-carboxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 4)

41

La N-(2-carbobenciloxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea se sintetizó como se describe en el Método D.

A una solución de N-(2-carbobenciloxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,19 g, 0,40 mmol) en EtOH (19 ml) se añadió 10% Pd/C (0,010 g). La suspensión resultante se trató con H_{2} (52 psi (3,64 kg/cm^{2})) en un aparato de sacudidas Parr® durante 18 h. La suspensión se filtró a través de un pequeño bloque de Celite® y se concentró a presión reducida para proporcionar N-(2-carboxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,12 g, 90%): ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 13 (s, 9H), 2,2 (s, 3H), 7,1 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,8 (s, 9H); FAB-LRMS m/z 333 (M+H).

Método I

Síntesis de N-(2-(N-glicilaminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 51)

42

Paso 1

La N-(2-carbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea se sintetizó de una manera análoga a la descrita en el Método F.

A una solución de BH_{3}\cdotTHF (1,8 ml, 1 M en THF) se añadió una solución de N-(2-carbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea en THF (3 ml) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 48 h. Después de enfriar a la temperatura ambiente, se añadió una solución concentrada de ácido clorhídrico, y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con una solución saturada de Na_{2}CO_{3} y una solución saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4}), y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía (SiO_{2}, 0,1% NH_{4}OH/10% MeOH CH_{2}Cl_{2} para proporcionar N-(2-aminometil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,18 g, 85%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,34 (s, 3H), 3,81 (s, 2H), 6,72 (s, 1H), 7,29 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,87 (s, 1H); FAB-LRMS m/z 318 (M+H).

Paso 2

A una solución de N-(2-aminometil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,20 g, 0,63 mmol) y N-carbo-terc-butoxiglicina (0,11 g, 0,63 mmol, 1,0 equiv) en THF (2 ml) a la temperatura ambiente se añadieron diciclohexilcarbodiimida (0,13 g, 0,63 mmol, 1,0 equiv) y 1-hidroxibenzotriazol monohidratado (0,008 g, 0,06 mmol, 10%). La mezcla resultante se dejó en agitación durante 18 h, se diluyó con EtOAc (5 ml), y se lavó con una solución saturada de NaCl. La capa orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (gradiente desde 30% EtOAc/hexano a 50% EtOAc/hexano) para proporcionar N-(2-(N-(N-carbo-terc-butoxiglicil)aminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,12 g, 40%, ejemplo 52): pf 174-176ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,27 (m, 3H), 4,38 (m, 2H), 6,67 (bs, 1H), 6,89 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 8,58 (bs, 1H); FAB-LRMS a m/z 475 (M+H).

Paso 3

A una solución de N-(2-(N-(N-carbo-terc-butoxi-glicil)aminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfen-il)urea
(0,050 g, 0,105 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) a la temperatura ambiente, se añadió ácido trifluoroacético (0,50 ml, 6,49 mmol, 62 equiv). La mezcla resultante se agitó durante 3 h, se lavó con una solución saturada de NaHCO_{3}, se secó (MgSO_{4}), y se concentró a opresión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (para CH_{2}Cl_{2} hasta 20% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) para dar N-(2-(N-glicil-aminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,019 g, 48%): pf 93-6ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,14 (s, 9H), 2,08 (s, 3H), 3,89 (s, 2H), 4,34 (br s, 3H), 6,67 (s, 1H), 6,87 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,3 (m, 2H).

Compuestos seleccionados sintetizados utilizando el Método I:

N-(2-(N-Acetilaminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 50): pf 203-5ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}/
d^{6}-DMSO) \delta 1,3 (s, 9H), 1,9 (s, 3H), 2,2 (s, 3H), 4,3 (d, 2H), 7,0 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,3 (m, 2H), 8,6 (br s, 1H); FAB-LRMS m/z 360 (M^{+}H).

Método J

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metil-2-tienil)urea (Ejemplo 15)

43

Paso 1

Una solución de 3-metiltiofeno (5 ml, 51,75 mmol), persulfato de sodio (18,48 g, 77,6 mmol) y acetato de paladio (5,81 g, 25,88 mmol) en ácido acético (500 ml) se calentó a la temperatura de reflujo. Se borboteó una corriente lenta de monóxido de carbono a través de la solución durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a 20ºC y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2}. Se añadió Celite® y la solución se filtró, se pasó luego a través de un bloque de gel de sílice, y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc y se extrajo con una solución 2 N de KOH. La capa acuosa se lavó con EtOAc, se ajustó el pH a cero con una solución concentrada de HCl y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con una solución saturada de NaCl y se concentró a presión reducida para dar una mezcla de ácido 3-metiltiofeno-2-carboxílico y ácido 4-metiltiofeno-2-carboxílico (1,86 g, 25%).

Paso 2

A una solución de una mezcla de ácido 3-metiltiofeno-2-carboxílico y ácido 4-metiltiofeno-2-carboxílico (1,11g, 7,81 mmol) y trietilamina (1,3 ml, 9,38 mmol) en acetona (75 ml) a -15ºC se añadió lentamente cloroformiato de etilo (1,12 ml, 11,72 mmol). La solución en acetona se agitó durante 15 min y se añadió una solución de NaN_{3} (0,86 g, 13,3 mmol) en agua (15 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min, se diluyó luego con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con una mezcla 1:1 v/v de una solución saturada de NaCl y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (EtOAc/hexano) para dar una mezcla de azidoésteres (0,91 g, 70%) que se utilizaron en el paso inmediatamente siguiente sin purificación adicional.

Paso 3

La mezcla de azidoésteres (0,120 g, 0,72 mmol) se disolvió en tolueno (3 ml) y se calentó a 100ºC durante 5 h, después de lo cual se enfrió a 20ºC. Se añadió 3-amino-5-terc-butiltiofeno-2-carboxilato de metilo (0,11 g, 0,50 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 95ºC durante 18 h. Se enfrió la mezcla de reacción a 20ºC y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (EtOAc/hexano) seguido por HPLC en fase normal (CH_{2}Cl_{2}), para proporcionar N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metil-2-tienil)urea (0,082 g, 46%) y N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-metil-2-tienil)urea (0,018 g, 10%). N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-metil-2-tienil)urea: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,35 (s, 9H), 2,15 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 6,45 (bs, 2H), 6,85 (d, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,85 (s, 1H), 9,70 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 353 (M+H, 88%). N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metil-2-tienil)urea: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,35 (s, 9H), 2,20 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 6,55 (bs, 2H), 7,80 (br s, 1H), 7,85 (s, 1H), 9,80 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 353 (M+H, 30%).

Compuesto seleccionado sintetizado utilizando el Método J:

N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(5-metil-2-tienil)urea (Ejemplo 14): pf 118-20ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,35 (s, 9H), 2,40 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 6,55 (bs, 2H), 7,90 (s, 1H), 8,10 (bs, 1H), 9,75 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 353 (M+H, 56%).

Método K

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 32)

44

Paso 1

A una solución de 2-terc-butilfurano (4,5 g, 36 mmol) en THF anhidro (60 ml) a -78ºC bajo N_{2} se añadió n-butil-litio (1,6 M en hexano, 25 ml, 40 mmol, 1,1 equiv) gota a gota. Después de 30 min, se reemplazó el baño de refrigerante con un baño de hielo y la mezcla se agitó a 0ºC durante 1 h. Se borboteó CO_{2} seco, generado a partir de hielo seco y secado sobre una torre de Na_{2}SO_{4} anhidro, a través de la mezcla de reacción durante 20 min a -78ºC y luego a 0ºC. La mezcla de reacción se acidificó a pH 1 con una solución 1 M de HCl, y se extrajo luego con EtOAc. La capa orgánica se lavó con una solución concentrada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida para dar ácido 5-terc-butilfuran-2-carboxílico como un sólido amarillo pálido (4,2 g, 69%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,29 (s, 9H), 6,11 (d, 1H, J = 3,3 Hz), 7,19 (d, 1H, J = 3,3 Hz), 11,0 (br s, 1H).

Paso 2

Una solución de ácido 5-terc-butilfuran-2-carboxílico (2,0 g, 11,9 mmol) en THF anhidro (30 ml) se enfrió a
-78ºC bajo N_{2}, y se añadió luego gota a gota n-butil-litio (1,6 M en solución en hexano, 15,6 ml, 25 mmol, 2,1 equiv). Después de 30 min, se añadió gota a gota TsN (2,3 g, 11,9 mmol, 1,1 equiv) en THF anhidro (3 ml) por medio de una cánula, seguido por una porción de THF anhidro para lavado (3 ml). La solución amarilla se dejó calentar a 0ºC durante 2 h, se añadieron luego 6 g de KOAc (6 g, 60 mmol, 5 equiv) y la suspensión se agitó rápidamente a la temperatura ambiente durante 14 h. La mezcla se diluyó con Et_{2}O y se extrajo con agua. La fase acuosa se acidificó a pH 1 con una solución 1 M de HCl, y se extraj o luego concienzudamente con EtOAc. La fase orgánica se lavó con una solución concentrada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a presión reducida. El aceite rojo resultante se diluyó con Et_{2}O (150 ml) y MeOH (20 ml) y se trató luego con TMSCHN_{2} (2,0 M en hexano, 45 ml, 90 mmol). Después de 30 min, se concentró la mezcla, y el aceite se purificó por cromatografía súbita (10% EtOAc/hexano) para dar un aceite incoloro (1,72 g). El análisis del producto por ^{1}H NMR indicó una mezcla aproximadamente 2:3 de 3-azido-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo y 5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo, que se eluían juntos. 3-Azido-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,25 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 5,99 (s, 1H); FTIR (puro) 2965 (s), 2118 (s), 1723 (s) cm^{-1}. La mezcla se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior.

Paso 3

Una mezcla de 3-azido-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo y 5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo (1,72 g) y 10% Pd/C (0,50 g) en Cellosolve (30 ml) se llevó a vacío y se purgó tres veces sucesivamente con H_{2}. La mezcla de reacción se agitó luego mediante sacudidas bajo H_{2} (40 psi (2,81 kg/cm^{2})) durante 1 h, se diluyó con EtOAc y se filtró a través de un pequeño bloque de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida, y se purificó luego por cromatografía súbita (20% EtOAc/hexano) para dar 5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo (0,73 g, 34%) seguido por 3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo (0,59 g, 25% de rendimiento a partir de ácido 5-terc-butilfuran-2-carboxílico). 3-Amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,29 (s, 9H), 4,24 (br s, 2H), 5,76 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 28,3, 32,8, 50,5, 98,3, 124,1, 144,9 (br), 160,5, 168,1, 178,7; FTIR (puro) 3330-2950 (br, s), 2850 (m), 1680 (s), 1637 (s), 1537 (s), 1346 (s), 1131 (s) cm^{-1}.

Se añadió rápidamente fosgeno (1,93 M en tolueno, 1,3 ml, 2,5 mmol, 10 equiv) a una solución de 3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo (0,050 g, 0,25 mmol) y piridina anhidra (1,0 ml) en tolueno anhidro (5 ml) a la temperatura ambiente. Después de 30 min, la suspensión de color anaranjado se concentró a presión reducida, se cargó luego sucesivamente con tolueno seco (1 ml) y se concentró (2 x). Finalmente, se añadió tolueno anhidro (3 ml) seguido por p-toluidina (0,100 g, 0,93 mmol, 3,7 equiv). La mezcla de color anaranjado se agitó durante una noche, se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución 1 M de HCl y una solución concentrada de NaCl, se secó luego (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita para N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,080 g, 96%) como un aceite amarillo pálido: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,28 (s, 9H), 2,30 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 7,02 (s, 1H), 7,11 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,87 (br s, 1H), 8,68 (br s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 20,6, 28,3 (3C), 33,0, 51,0, 100,1, 121,4 (2C), 126,0, 129,5 (2C), 134,0, 134,8, 137,7, 152,5, 160,5, 168,2; FTIR (puro) 3400-3200 (br, m), 2966 (s), 1676 (s), 1622 (s), 1536 (s), 1306 (s), 1097 (m) cm^{-1}.

Método L-1

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45

Paso 1

Se preparó 3-cloro-4,4-dimetil-2-pentenonitrilo siguiendo un procedimiento de la bibliografía (Hatcher et al. J. Heterocycl. Chem. 1989, 26, 1575). Se añadió lentamente POCl_{3} (22,4 ml, 0,24 mol, 2,4 equiv) a una solución mantenida a 0ºC de DMF (20,2 ml, 0,26 mmol, 2,6 equiv) manteniendo la temperatura por debajo de 20ºC. El sólido de color rosado resultante se calentó a 40ºC, se añadió pinacolona (12,5 ml, 0,10 mol) a la solución roja resultante, y esta mezcla se calentó a 55ºC durante 2 h y a 75ºC durante 2 h. Se añadió NH_{2}OH\cdotHCl (16,7 g, 0,24 mol, 2,4 equiv) a la mezcla a 75ºC lentamente (porciones inferiores a 100 mg: PRECAUCIÓN, desprendimiento de gas y formación de espuma).

La solución resultante se calentó a 85ºC durante 2 h, y se dejó luego enfriar a la temperatura ambiente durante una noche. El gel amarillo resultante se separó entre H_{2}O (500 ml) y EtOAc (300 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con una solución saturada de NaCl, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida para dar 3-cloro-4,4-dimetil-2-pentenonitrilo como un aceite pardo (13,2 g, 93%); ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,23 (s, 9H), 5,56 (s, 1H); GC-LRMS m/z (abundancia relativa) 143 (28%), 145 (11%). Este material se utilizó en el paso inmediatamente siguiente sin purificación ulterior.

Paso 2

A una suspensión de NaH (5,98 g, 0,24 mol, 2,6 equiv) en DME anhidro (82 ml) a 0ºC se añadió glicolato de metilo (23,0 g, 0,26 mol, 2,8 equiv) durante 20 min. La mezcla se agitó durante 1 h a la temperatura ambiente y se añadió una solución de 3-cloro-4,4-dimetil-2-penteno-nitrilo (13,1 g, 0,091 mol) en DME (100 ml). La solución resultante se calentó a 85ºC durante 42 h, se enfrió a la temperatura ambiente, y se trató con H_{2}O (100 ml). La mezcla resultante se separó entre H_{2}O (200 ml) y EtOAc (300 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con una solución saturada de NaCl, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se concentraron a presión reducida. El aceite residual se purificó por cromatografía súbita (300 g SiO_{2}, gradiente desde 50% CH_{2}Cl_{2}/hexano al 30% EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) para dar 3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo como un sólido amarillo (2,98 g, 17%): pf 91-2ºC; TLC (20% EtOAc/hexano) R_{f} 0,36; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,26 (s, 9H), 3,84 (s, 3H), 4,54 (br s, 2H); 5,75 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 28,5 (3C), 33,0, 50,7, 98,5, 128,8, 131,0, 160,7, 168,3.

Paso 3

A una solución de fosgeno (1,23 M en tolueno, 9,7 ml, 18,6 mmol, 3,0 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml) a 0ºC se añadió una solución de 3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de metilo (1,23 g, 6,2 mmol) y piridina (1,97 g, 24,9 mmol, 4,0 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a la temperatura ambiente y formó rápidamente un precipitado. La suspensión resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 1 h, y se concentró luego a presión reducida para dar isocianato de 2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furilo e hidrocloruro de piridinio. Isocianato de 2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furilo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,25 (s, 9H), 4,85 (s, 3H), 5,90 (s, 1H). La mezcla se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior.

Paso 4

El isocianato de 2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furilo preparado en el Paso 3 se disolvió en tolueno anhidro (40 ml), se añadió p-toluidina (2,05 g, 6,2 mmol, 1,0 equiv), y la solución resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla toluénica se concentró a presión reducida, y se diluyó luego con CHCl_{3} (150 ml). La solución orgánica se lavó con una solución 1 N de HCl (2 x 100 ml) y una solución saturada de NaCl (100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (100 g SiO_{2}, gradiente desde hexano a 10% EtOAc/hexano) para dar N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-metilfenil)urea como un sólido amarillo (0,71 g, 35): pf 78-9ºC; TLC (20% EtOAc/hexano) R_{f} 0,46; ^{1}H NMR \delta 1,28 (s, 9H), 2,33 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 7,03 (s, 1H), 7,10 (br s, 1H), 7,15 (dd, J = 8,5 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,60 (brs, 1H); ^{13}C NMR \delta 20,8, 28,5 (3C), 33,2 (5C), 100,3, 121,7 (brs, 2C), 126,2, 129,8 (br s, 2C), 134,3 (br s), 135,0, 137,5 (br s), 152,6, 160,8, 168,5; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 331 (M+H, 64%).

Método L-2

Síntesis de 3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de etilo

46

Paso 1

Una solución a 0ºC de trifenilfosfina (2,72 g, 10,4 mmol, 1,3 equiv) en THF anhidro (50 ml) se trató con azodicarboxilato de dietilo (1,81 g, 10,4 mmol, 1,3 equiv), glicolato de etilo (1,08 g, 10,4 mmol, 1,3 equiv) y 4,4-dimetil-3-oxopentanonitrilo (1,00 g, 8,0 mmol). La solución resultante se dejó calentar a la temperatura ambiente, se agitó durante 15 h y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (11 cm x 22 cm SiO_{2}, gradiente desde 5% EtOAc/hexano a 8% EtOAc/hexano) para proporcionar (Z)-4,4-dimetil-3-(etoxicarbonilmetoxi)pentenonitrilo (1,36 g, 80%) como un aceite incoloro: TLC (5% EtOAc/hexano) R_{f} 0,26; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,12 (s, 9H), 1,28 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 4,24 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 4,55 (s, 1H), 5,00 (s, 2H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 13,9, 27,8, 38,2, 61,5, 67,1, 67,3, 117,0, 167,1, 180,7; CI-LRMS m/z (abundancia relativa) 212 (M+H, 100%). Análisis calculado para C_{11}H_{17}NO_{3}: C, 62,54; H, 8,11; N, 6,63. encontrado: C, 62,57; H, 7,90; N, 6,47.

Paso 2

A una suspensión de hidruro de sodio (62 mg, 2,6 mmol, 1,1 equiv) en THF anhidro (50 ml) se añadió (Z)-4,4-dimetil-3-(etoxicarbonilmetoxi)pentenonitrilo (0,50 g, 2,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h, se trató con una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (2 ml), y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (50 g SiO_{2}, 10% EtOAc/hexano) para proporcionar 3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxilato de etilo (0,44 g, 88%) como un sólido blanco; pf 44-45ºC; TLC (10% EtOAc/hexano) R_{f} 0,19; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,26 (s, 9H), 1,36 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 4,32 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 4,51 (br s, 2H); 5,75 (s, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 212 (M+H, 100%). Análisis calculado para C_{11}H_{17}NO_{3}: C, 62,54; H, 8,11; N, 6,63. Encontrado; C, 62,48; H, 8,06; N, 6,61.

Compuesto seleccionado sintetizado utilizando el Método L-1 o L-2:

N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-fluorofenil)urea (Ejemplo 33): pf 81-2ºC; TLC (20% EtOAc/hexano) R_{f} 0,37; ^{1}H NMR \delta 1,28 (s, 9H), 3,82 (s, 3H), 6,99 (s, 1H), 7,04 (td aparente, J = 8,6, 2,2 Hz, 2H), 7,30-7,39 (m, 2H), 8,63 (brs, 1H); ^{13}C NMR \delta 28,5 (3C), 33,3, 51,4, 100,2, 116,0 (t, J_{C-F} = 22,0 Hz, 2C), 123,0 (br d, J_{C-F} = 4,9 Hz, 2C), 126,3, 133,5 (d, J_{C-F} = 3,7 Hz, 1C), 152,3, 159,8 (d, J_{C-F} = 242,9 Hz, 1C), 168,6; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 335 (M+H, 60%).

N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(2,3-dicloro-fenil)urea (Ejemplo 34): pf 195-7ºC; TLC (20% EtOAc/
hexano) R_{f} 0,58; ^{1}H NMR \delta 1,31 (s, 9H), 3,89 (s, 3H), 6,99 (s, 1H), 7,20-7,22 (m, 2H), 7,29 (s, 1H), 8,08 (dd, J = 6,4, 3,5 Hz, 1H), 8,76 (br s, 1H); ^{13}C NMR \delta 28,5 (3C), 33,3, 51,5, 100,1, 113,3, 119,7, 125,0, 126,5, 127,6, 132,9, 136,4, 137,5, 150,9, 161,1, 168,5; EI-LRMS m/z (abundancia relativa) 385 (M^{+}, 100%), 387 (M^{+}+2, 71%), 389 (M^{+}+4, 13%).

Método M

Síntesis de N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-fluorofenil)urea (Ejemplo 36)

47

Paso 1

Una suspensión de hidrocloruro de metilamina (1,03 g, 15,2 mmol, 3,0 equiv) en tolueno anhidro (60 ml) a 0ºC se trató con AlMe_{3} (2 M en tolueno, 7,6 ml, 15,2 mmol, 3,0 equiv). La solución resultante se agitó a 0ºC durante 30 min y se dejó calentar a la temperatura ambiente durante 40 min. Se añadió luego a la solución de amiduro de aluminio 3-amino-5-terc-butil-2-furancarboxilato de metilo (1,00 g, 5,1 mmol). La mezcla resultante se calentó a la temperatura de reflujo durante 20 h, se enfrió a la temperatura ambiente, y se añadió gota a gota una solución 6 N de HCl. La mezcla extinguida se alcalinizó con una solución 1 N de NaOH (aproximadamente 100 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con una solución saturada de NaCl, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se concentraron a presión reducida para proporcionar N-metil-3-amino-5-terc-butil-2-furancarboxamida como un sólido amarillo (0,90 g, 91%): TLC (20% EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) R_{f} 0,26; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,23 (s, 9H), 2,93 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 4,51, (br s, 1H), 5,73 (s, 1H).

Paso 2

A una solución de N-metil-3-amino-5-terc-butilfuran-2-carboxamida (0,15 g, 0,76 mmol) en tolueno anhidro (2 ml) a la temperatura de reflujo se añadió lentamente isocianato de 4-fluorofenilo (0,10 g, 076 mmol, 1,0 equiv). La solución resultante se dejó en agitación a la temperatura de reflujo durante 14 h, se enfrió a la temperatura ambiente, y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (15 g SiO_{2}, gradiente desde 50% CH_{2}Cl_{2}/hexano a 100% CH_{2}Cl_{2}, luego a 20% EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butilfuril)-N'-(4-fluorofenil)urea (0,16 g, 61%): pf 109-11ºC, TLC (30% EtOAc/CH_{2}Cl_{2}) R_{f} 0,21; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,29 (s, 9H), 2,89 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 6,02 (br q, J = 4,8 Hz, 1H), 6,98 (td aparente, J = 16,6, 4,1 Hz, 2H), 7,01 (s, 1H), 7,34-7,39 (m, 2H), 8,05 (br s, 1H), 9,14 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 25,5, 18,7 (3C), 33,1, 100,7, 115,6 (d, J_{C-F} = 23,2 Hz, 2C), 121,5 (d, J_{C-F} = 7,3 Hz, 2C); 128,3, 134,5 (br s), 152,4, 158,9 (d, J_{C-F} = 242,9 Hz, 1C), 161,6, 165,8; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 334 (M+H, 100%).

Compuesto seleccionado sintetizado utilizando el Método M:

N-(2-Metilcarbamoil-5-terc-butilfuril)-N'-(4-metilfenil)-urea (Ejemplo 35): pf 190-3ºC; TLC (30% EtOAc/ CH_{2}
Cl_{2}) R_{f} 0,25; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,29 (s, 9H), 2,30 (s, 3H), 2,92 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 5,99 (br q, J = 4,8 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,56 (br s, 1H), 9,12 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 20,8, 25,4, 28,7 (3C), 33,8, 100,7, 120,1 (2C), 128,4, 129,7 (2C), 133,1, 134,5, 135,7, 152,3, 161,6, 165,6; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 330 (M+H, 100%).

Método N-1

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metil-fenil)urea (Ejemplo 38)

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Paso 1

A una solución de ácido pirrol-2-carboxílico (6,28 g, 56,5 mmol) en MeOH anhidro (100 ml) bajo N_{2} a la temperatura ambiente, se añadió TMSCl (17,9 ml, 141 mmol, 2,5 equiv) en una sola porción. Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se redisolvió en CH_{2}Cl_{2}, se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para dar pirrol-2-carboxilato de metilo como un sólido semicristalino de color canela (4,62 g, 65%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 3,86 (s, 3H), 6,29 (br q, 1H), 6,92 (br m, 1H), 6,96 (br m, 1H), 9,30 (br s, 1H). Este material se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior.

Paso 2

A una solución de pirrol-2-carboxilato de metilo (0,30 g, 2,42 mmol) en 1,2-dicloroetano anhidro (12 ml) bajo N_{2} a la temperatura ambiente se añadió AlCl_{3} (0,710 g, 5,33 mmol, 2,2 equiv) en una sola porción. Se añadió 2-cloro-2-metilpropano (0,26 ml, 2,42 mmol, 1,0 equiv) en una sola porción por medio de una jeringuilla. Después de 2 h, la reacción se extinguió vertiéndola lentamente en una solución saturada de NaHCO_{3}. La suspensión blanca resultante se extrajo con Et_{2}O (2 x). Las capas orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida para dar un sólido blanquecino (0,40 g), que se purificó por cromatografía súbita (60% CH_{2}Cl_{2}/hexano) para dar 5-terc-butilpirrol-2-carboxilato de metilo como un sólido amorfo blanco (0,36 g, 81%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,31 (s, 9H), 3,83 (s, 3H), 6,00 (t, J = 3,3 Hz, 1H), 6,81 (t, J = 3,3 Hz, 1H), 8,82 (br s, 1H).

Paso 3

A una mezcla heterogénea de 5-terc-butilpirrol-2-carboxilato de metilo (1,65 g, 9,10 mmol) en H_{2}SO_{4} concentrado (19 ml) bajo N_{2} a temperatura ambiente se añadió ácido nítrico fumante (0,57 ml, 13,6 mmol, 1,5 equiv) en una sola porción por medio de una jeringuilla. Después de 1 h, la mezcla de reacción se vertió en agua con hielo y la mezcla resultante se ajustó cuidadosamente a pH 7 con Na_{2}CO_{3} sólido. La mezcla resultante se extrajo con Et_{2}O (2 x), se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó utilizando cromatografía súbita (70% CH_{2}Cl_{2}/hexano) para dar 5-terc-butil-3,4-dinitropirrol-2-carboxilato de metilo (0,27 g) seguido por 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo (0,44 g). La repetición del sometimiento de las fracciones mixtas a las condiciones de cromatografía súbita proporcionó 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo adicional (0,22 g, 0,66 g total, 32% de rendimiento total). 5-terc-Butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,33 (s, 9H), 3,93 (s, 3H), 6,56 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 9,22 (br s, 1H). 5-terc-Butil-3,4-dinitropirrol-2-carboxilato de metilo: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,52 (s, 9H), 3,91 (s, 3H), 9,17 (br s, 1H).

Paso 4

Una mezcla de 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo (0,014 g, 0,062 mmol) y 10% Pd/C (3 mg) en MeOH seco (1 ml) se llevó a vacío y se purgó con H_{2} tres veces sucesivamente, después de lo cual se agitó mediante sacudidas en atmósfera de H_{2} (35 psi (2,46 kg/cm^{2})) durante 1 h, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se filtró a través de un pequeño bloque de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida para dar 3-amino-5-terc-butilpirrol-2-carboxilato de metilo como un aceite amarillo brillante (0,012 g, 100%). ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,26 (s, 9H), 3,82 (s, 3H), 5,52 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,89 (br s, 2H). Este material se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior.

Paso 5

A una solución de 3-amino-5-terc-butilpirrol-2-carboxilato de metilo (12 mg, 0,062 mmol) y piridina anhidra (0,25 ml, 3,06 mmol, 49,4 equiv) en tolueno anhidro (1 ml) se añadió rápidamente fosgeno (1,93 M en tolueno, 0,32 ml, 0,62 mmol, 10 equiv). Después de 30 min, la suspensión anaranjada se concentró a presión reducida, se cargó luego sucesivamente con tolueno anhidro (1 ml) y se concentró (2 x). Finalmente, se añadió tolueno (2 ml) seguido por p-toluidina (10 mg, 0,094 mmol). La mezcla se calentó a 90ºC durante 3 h, y se concentró luego a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa (2 placas, 20 x 20 cm x 0,25 mm, 2% MeOH/CH_{2}Cl_{2}). La banda principal activa en UV se aisló y el producto se extrajo de la sílice utilizando 5% MeOH/CH_{2}Cl_{2} para dar N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metilfenil)urea como un sólido amorfo amarillo pálido (0,016 g, 80%): ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,23 (s, 9H), 2,20 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 6,54 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,61 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 10,85 (br d, J = 2,2 Hz, 1H); ^{13}C NMR (MeOD, CDCl_{3}, espectro parcial) \delta 19,7, 29,0 (3C), 31,5, 50,0, 97,4, 105,9, 119,6 (2C), 128,9 (2C), 132,2, 136,2, 147,6, 153,5, 161,9; FTIR (KBr) 3341 (f), 2947 (m), 1676 (f), 1583 (f), 1548 (f), 1456 (f), 1279 (f), 1208 (f), 1094 (f); cm^{-1}; FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 330 (M+H, 47%).

Compuesto seleccionados sintetizados utilizando el Método N-1:

N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(fenil)urea (Ejemplo 37): ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,23 (s, 9H), 3,78 (s, 3H), 6,54 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,26 (dd, J = 2,6, 8,8 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,76 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 10,95 (br d, J = 1,8 Hz, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 384 (M+H, 93%).

N-(2-Carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea (Ejemplo 39): ^{1}H NMR (d^{6}-DMSO) \delta 1,23 (s, 9H), 3,78 (s, 3H), 6,55 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 7,4, 8,5 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 8,66 (s, 1H), 9,60 (s, 1H), 10,88 (br d, J = 1,5 Hz, 1H); FAB-LRMS m/z (abundancia relativa) 316 (M+H, 95%).

Método N-2

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea (Ejemplo 73)

49

A una solución de 3-amino-5-terc-butilpirrol-2-carboxilato de metilo (0,99 g, 5,00 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (50 ml) a la temperatura ambiente se añadió una solución de isocianato de 2,3-diclorofenilo (0,948 g, 5,00 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y la mezcla resultante se dejó en agitación durante una noche. El precipitado blanco resultante formado durante la noche se separó y se lavó con CH_{2}Cl_{2} para dar la urea deseada (1,39 g, 67%) como un polvo blanco: pf 200-201ºC; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 1,23 (s, 9H), 3,78 (s, 3H), 6,50 (d, J = 2,95 Hz, 1H), 7,26-7,30 (m, 2H), 7,88-7,91 (m, 1H), 9,12 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 10,91 (br s, 1H); FAB-LRMS m/z 384 (M+H). Análisis calculado para C_{17}H_{19}N_{3}O_{3}Cl_{2}: C, 53,14; H, 4,98; N, 10,94. Encontrado: C, 53,03; H, 4,79; N, 10,86.

Método N-3

Síntesis de N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 113)

50

Paso 1

Se preparó 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo como se describe en el Método N-1, Paso 3. A una solución de 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo (10,38 g, 45,9 mmol) en una mezcla THF-MeOH-H_{2}O (1,0:1,0:0,5, 250 ml) a la temperatura ambiente se añadió una solución 1N de NaOH (92 ml, 92 mmol) por medio de una pipeta. El color de la mezcla de reacción cambió de verde a rojo. La mezcla se calentó a la temperatura de reflujo, se mantuvo durante 3 horas, se enfrió a la temperatura ambiente, y se concentró a vacío. El residuo se acidificó utilizando una solución de ácido cítrico al 10% y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). La capa orgánica se lavó con una solución saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. El residuo se trituró con hexanos para dar ácido 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxílico (9,70 g, 99%) como un polvo verde: ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 1,24 (s, 9H), 6,41 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 12,19 (br s, 1H), 13,50 (br s, 1H).

Paso 2

A una solución de ácido 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxílico (2,01 g, 9,5 mmol) en una solución de THF anhidro y DMF anhidra (3:1, 100 ml) a 0ºC se añadió N-metilmorfolina (2,1 ml, 19 mmol, 2,0 equiv), seguida por metilamina (2 M en THF, 5,93 ml, 11,1 mmol, 1,25 equiv) y EDCI\cdotHCl (2,85 g, 14,9 mmol, 1,57 equiv). La mezcla resultante se dejó calentar a la temperatura ambiente y se agitó a dicha temperatura durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con H_{2}O (100 ml), se acidificó luego con una solución de ácido cítrico al 10%, y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con una solución saturada de NaCl, se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por cromatografía súbita (15% CH_{2}Cl_{2}/hex) para dar 2-(N-metilcarbamoil) -5-terc-butil-3-nitropirrol (1,40 g, 66%) como un sólido amarillo: ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 1,29 (s, 9H), 2,76 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 6,36 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,59-8,60 (m, 1H), 12,19 (br s, 1H).

Paso 3

A una solución de 2-(N-metilcarbamoil)-5-terc-butil-3-nitropirrol (1,0 g, 0,4 mmol) en EtOAc (50 ml) en atmósfera de Ar se añadió 10% Pd/C (50 mg). La mezcla se llevó a vacío y se puso luego bajo una atmósfera estática de H_{2} (1 atm) durante 24 h. La suspensión resultante se filtró a través de un pequeño bloque de Celite® con ayuda de EtOAc, y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 2-(N-metilcarbamoil)-3-amino-5-terc-butilpirrol (0,61 g, 70%): ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 1,16 (s, 9H), 2,66 (d, J = 4,41 Hz, 3H), 4,89 (br s, 2H), 5,27 (d J = 2,58 Hz, 1H), 7,14-7,16 (m, 1H), 9,52 (br s, 1H).

Paso 4

A una solución de 2-(N-metilcarbamoil)-3-amino-5-terc-butilpirrol (0,14 g, 0,70 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) a la temperatura ambiente se añadió isocianato de p-tolilo (0,088 ml, 0,70 mmol, 1,0 equiv) y la mezcla resultante se dejó en agitación a la temperatura ambiente durante una noche. El precipitado resultante se separó y se lavó con CH_{2}Cl_{2} para dar N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,17 g, 74%) pf 164-166ºC; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) \delta 1,23 (s, 9H), 2,19 (s, 3H), 2,75 (d, J = 4,41 Hz, 3H), 6,49 (d, J = 2,57 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,46 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 8,46 Hz, 2H), 7,60-7,63 (m, 1H), 9,45 (s, 1H), 9,50 (s, 1H), 10,17 (br s, 1H); FAB-LRMS m/z 329 (M+H).

Método O

Síntesis de N-(N-metil-2-carbometoxi-5-terc-butil-3-nitropirrolil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 40)

51

Paso 1

A una solución fría (0-10ºC) de 5-terc-butil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo (0,100 g, 0,44 mmol), bromuro de benciltributilamonio (0,16 mg, 0,44 mmol, 1 equiv), y sulfato de dimetilo (46 \mul, 0,49 mmol, 1,1 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (1 ml) se añadió una solución de NaOH al 50% (0,21 g, 2,65 mmol, 6 equiv). Después de 5 min, se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2}, se lavó con agua y una solución de NH_{4}OAC al 10% (2 x), se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró a presión reducida para dar un aceite amarillo brillante. El aceite se purificó por cromatografía súbita (70% CH_{2}Cl_{2}/hexano) para dar 5-terc-butil-1-metil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo como un aceite amarillo pálido que solidifica al dejarlo en reposo (0,061 g, 62%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 6,47 (s, 1H).

Paso 2

Se redujo 5-terc-butil-1-metil-3-nitropirrol-2-carboxilato de metilo de una manera similar a la descrita en el Método N, Paso 4 para dar 3-amino-5-terc-butil-1-metilpirrol-2-carboxilato de metilo como un aceite (0,059 g, 100%, rendimiento bruto): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,33 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 4,34 (br s, 2H), 5,48 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 29,7, 31,9, 34,7, 50,6, 95,7, 107,4, 142,3, 149,0, 162,2.

Paso 3

A una solución de 3-amino-5-terc-butil-1-metilpirrol-2-carboxilato de metilo (0,059 g, 0,280 mmol) y piridina seca (1 ml) en tolueno anhidro (2 ml) se añadió rápidamente fosgeno (1,93 M en tolueno, 1,45 ml, 2,80 mmol, 10 equiv). Se añadió tolueno anhidro adicional (3 ml) para favorecer la agitación de la mezcla heterogénea. Después de 30 min, la suspensión anaranjada se concentró a presión reducida, se cargó luego sucesivamente con tolueno anhidro (1 ml) y se evaporó (2 x). Por último, se añadió tolueno (3 ml) seguido por p-toluidina (0,11 mg, 1,04 mmol, 3,7 equiv). La mezcla homogénea resultante se agitó durante una noche, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con una solución 1M de HCl. La capa acuosa se extrajo de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (2 x). Las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (10% a 25% EtOAc/hexano) para dar N-(N-metil-2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metil-2-tienil)urea como un sólido amarillo pálido (0,066 g, 69%): ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 1,35 (s, 9H), 2,31 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 6,80 (s, 1H), 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,26 (d aparente, J = 8,4 Hz, 3H), 8,81 (br s, 1H): ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 29,8 (3C), 31,4, 32,1, 35,0, 50,4, 98,8, 108,8, 122,0 (2C), 129,5 (2C), 133,8, 134,0, 135,3, 148,6, 153,0, 162,0; FTIR (KBr) 2364 (f), 2335 (f), 1659 (m), 1579 (m), 1542 (m), 1354 (d), 1232 (d) cm^{-1}.

Método P

Síntesis de N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 44)

52

Paso 1

A una solución de cianoacetato de metilo (4,00 g, 40,4 mmol), azufre (1,29 g, 40,4 mmol) y DMF (20 ml) a la temperatura ambiente se añadió Et_{3}N (3,04 ml, 21,8 mmol). Se añadió 3,3-dimetilbutiraldehído (5,08 g, 40,4 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h antes de verterla en agua (200 ml). Los sólidos se separaron por filtración y el filtrado se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se filtró a través de un bloque de gel de sílice y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía súbita para proporcionar 2-amino-5-terc-butiltiofeno-3-carboxilato de metilo (4,19 g, 49%).

Paso 2

Se condensó 2-amino-5-terc-butiltiofeno-3-carboxilato de metilo con isocianato de 4-metilfenilo de una manera similar a la descrita en el Método A, Paso 2 para producir N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metil-fenil)urea (0,029 g, 18%): pf 109-111ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,34 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 6,75 (bs, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,16 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 10,37 (s, 1H).

Compuesto seleccionado sintetizado utilizando el Método P:

N-(3-Carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(fenil)urea (Ejemplo 43): pf 80-2ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,36 (s, 9H), 3,83 (s, 3H), 6,73 (br s, 1H), 6,84 (s, 1H), 7,16 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,37 (t aparente, J = 7,4 Hz, 2H), 7,52 (dd, J = 8,1, 1,5 Hz, 2H), 10,43 (br s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 32,2 (3C), 34,2, 51,7, 109,9, 117,0, 121,3 (2C), 124,8, 129,4 (2C), 137,7, 146,0, 149,6, 151,8, 166,4; EI-LRMS m/z 333 (M^{+}).

Método Q

Síntesis de N-(3-carbometoxi-5-isopropil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 42)

53

Se sintetizó 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxilato de metilo de una manera análoga a la descrita en el Método P, Paso 1.

A una solución de 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxilato de metilo (0,20 g, 1,00 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (10 ml) se añadió fosgeno (1,93 M en tolueno, 2,1 ml, 4,01 mmol, 4,0 equiv) y piridina anhidra (0,32 ml, 4,01 mmol, 4,0 equiv). La mezcla en CHCl_{3} se dejó calentar a la temperatura ambiente y se agitó luego durante 3 h. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en tolueno anhidro (10 ml) y se añadió p-toluidina (0,11 mg, 1,00 mmol, 1,0 equiv). La mezcla resultante se agitó durante una noche, y se separó luego entre EtOAc (50 ml) y H_{2}O (50 ml). La fase orgánica se lavó con una solución 1 M de HCl (2 x 25 ml), una solución saturada de NaHCO_{3} (2 x 20 ml) y una solución saturada de NaCl (2 x 25 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía rotativa CH_{2}Cl_{2}, seguido por HPLC preparativa (SiO_{2}, 10% EtOAc/hexano) para dar N-(3-carbometoxi-5-isopropil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,15 g, 45%): pf 49-51ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,29 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 2,34 (s, 3H), 3,02 (sept d, J = 6,4, 1,1 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 6,81 (s, 1H), 6,96 (br s, 1H), 7,17 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 10,4 (s, 1H); FAB-LRMS m/z 333 (M+H).

Compuesto seleccionado sintetizado utilizando el Método Q:

N-(3-Carbometoxi-5-isopropil-2-tienil)-N'-(fenil)urea (Ejemplo 41): pf 64-5ºC; ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,29 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 3,02 (sept d, J = 6,8, 1,1 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 6,82 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,07 (br s, 1H), 7,16 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,37 (t aparente, J = 7,9 Hz, 2H), 7,46 (dd, J = 8,8, 1,5 Hz, 2H), 10,4 (s, 1H); FAB-LRMS m/z 319 (M+H).

Método R

Síntesis de N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3,4-diclorofenil)urea (Ejemplo 66)

54

Paso 1

Una mezcla de 5-terc-butil-3-aminotiofeno-2-carboxilato de metilo (6,39 g, 30,0 mmol) y KOH (5,04 g, 90,0 mmol) en MeOH acuoso (1:1; 40 ml) se agitó a 80-90ºC durante 6 h y la solución clara resultante se concentró a presión reducida. El residuo amarillo gomoso se disolvió en H_{2}O (500 ml), se trató con una solución de fosgeno (20% en tolueno; 60 ml) gota a gota durante 2 horas y se agitó a la temperatura ambiente durante una noche. Los sólidos amarillos resultantes se separaron por filtración, se trituraron con acetona (30 ml), y se secaron a presión reducida para proporcionar 7-terc-butil-2H-tieno[3,2-d]oxazina-2,4(1H)-diona (4,25 g, 63%): ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,48 (s, 1H), 6,75 (s, 1H); FAB-MS m/z (abundancia relativa) 226 ((M+H)^{+}, 100%).

Paso 2

A una solución de 7-terc-butil-2H-tieno[3,2-d]oxazina-2,4(1H)-diona (0,18 g, 0,80 mmol) en THF (6 ml) se añadió 3,4-dicloroanilina (0,14 g, 0,86 mmol). La mezcla resultante se agitó a 70ºC durante 4 h, se trató con resina Dowex 50WX2 (0,060 g) y resina de poli(4-(4-hidroximetilfenoxi)metilestireno) (0,4 g) y se agitó a 70ºC durante 30 minutos adicionales. La suspensión resultante se filtró, y el filtrado se concentró a presión reducida para dar N-(2-carboxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3,4-diclorofenil)urea (0,061 g, 20%): HPLC ES-MS m/z (abundancia relativa) 386

\hbox{((M+H) ^{+} ).}

Método S

Síntesis de N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(3-metilfenil)urea (Ejemplo 122)

55

Paso 1

A una solución de cloroformiato de triclorometilo (difosgeno; 7,0 g, 35,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) se añadió 2-amino-5-terc-butiltiofeno-3-carboxilato de metilo (5,0 g, 23,5 mmol) y piridina (2,8 g, 35,3 mmol). La mezcla de reacción se calentó a la temperatura de reflujo durante 10 h, se filtró a través de un pequeño bloque de sílice, y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en tolueno y la solución resultante se concentró a presión reducida para dar 3-metoxicarbonil-5-terc-butiltiofeno-2-isocianato contaminado con un producto secundario. 3-Metoxicarbonil-5-terc-butiltiofeno-2-isocian-ato: ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 1,34 (s, 9H), 3,88 (s, 3H), 6,95 (s, 1H). Producto secundario: ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) d 1,37 (s, 9H), 3,89 (s, 3H), 6,88 (s, 1H), 10,92 (br s, 1H). Este material se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior.

Paso 2

Una solución de 3-metoxicarbonil-5-terc-butiltiofeno-2-isocianato en tolueno (0,16 M, 2,5 ml, 0,4 mmol) se añadió a 3-metilanilina (0,053 g, 0,5 mmol). La mezcla resultante se agitó a 60ºC durante 4 h, se enfrió a la temperatura ambiente, y se trató luego con una solución 2M de H_{2}SO_{4} (0,7 ml). Se añadió EtOAc (4 ml) y la mezcla se agitó enérgicamente. La mezcla se pasó a través de un cartucho de filtración (0,8 g de Extrelute® y 3 g de gel de sílice) con ayuda de EtOAc (8 ml), se concentró luego a presión reducida (Speedvac: 2 h a 43ºC; 1 h a 60ºC) para proporcionar N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(3-metilfenil)urea (0,11 g, 80%): ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 1,35 (s, 9H), 2,36 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 6,82 (s, 1H), 6,93-7,01 (m, 2H), 7,13-7,29 (m, 2H), 7,35 (br s, 1H), 10,44 (s, 1H).

Método T

Síntesis de N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-dimetilaminofenil)urea (Ejemplo 142)

56

Una solución de 3-metoxicarbonil-5-terc-butiltiofeno-2-isocianato en tolueno (0,16 M, 2,5 ml, 0,4 mmol) se añadió a 4-(N,N-dimetilamino)anilina (0,054 g, 0,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 60ºC durante 4 h, y se concentró luego a presión reducida (Speedvac: 2h a 43ºC; 1 h a 60ºC). El producto bruto se purificó por cromatografía súbita (SiO_{2}, EtOAc/éter de petróleo) para proporcionar N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-dimetilaminofenil)urea (0,099 g, 66%): ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 1,35 (s, 9H), 3,0 (br s, 6H), 3,75 (s, 3H), 6,6-7,0 (m, 3H), 7,1-7,5 (m, 3H), 10,25 (br s, 1H).

Método U

Síntesis de N-(3-carbamoil-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (Ejemplo 119)

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57

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Paso 1

Una mezcla de \alpha-cianoacetamida (1,68 g, 20 mmol), azufre (0,64 g, 20 mmol) y 3,3-dimetilbutanal (2,0 g, 20 mmol) en MeOH (20 ml) se calentó a la temperatura de reflujo y se añadió morfolina (1,74 g, 20 mmol) en el transcurso de 10 min. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 8,5 h, y se concentró luego a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía súbita (50% EtOAc/50% éter de petróleo) para dar 2-amino-5-terc-butiltiofeno-3-carboxamida (2,94 g, 74%): ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,3 (s, 9H), 5,48 (br s, 4H), 6,37 (s, 1H).

Paso 2

Una solución de 2-amino-5-terc-butiltiofeno-3-carboxamida (0,14 g, 0,7 mmol) e isocianato de p-tolilo (0,093 g, 0,7 mmol) en tolueno (5 ml) se agitó a 60ºC durante una noche. La mezcla de reacción se separó entre agua (10 ml) y EtOAc (10 ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc (3 x 10 ml), y las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución saturada de NaCl (25 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía (SiO_{2}; gradiente desde 20% EtOAc/80% éter de petróleo a 30% EtOAc/70 éter de petróleo) para dar N-(3-carbamoil-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea (0,092 g, 40%): ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 1,38 (s, 9H), 2,32 (s, 3H), 5,58 (br s, 2H), 6,53 (s, 1H), 7,13 (d aparente, 2H), 7,35 (d aparente, 2H), 7,45 (br, 1H), 11,23 (br s,
1H).

Los compuestos siguientes se han sintetizado de acuerdo con los métodos generales indicados anteriormente:

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(Tabla pasa a página siguiente)

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TABLA 1 3-Urido-Tiofenos

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59

TABLA 1 (continuación)

60

TABLA 1 (continuación)

61

TABLA 1 (continuación)

62

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TABLA 2 3-Urido-Furanos

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64

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TABLA 3 3-Urido-Pirroles

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TABLA 3 (continuación)

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TABLA 3 (continuación)

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TABLA 3 (continuación)

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72

TABLA 4 2-Urido-Tiofenos

73

74

TABLA 4 (continuación)

75

76

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TABLA 4 (continuación)

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78

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TABLA 5 2-aminometil-3-Urido-Tiofenos

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80

Ejemplos biológicos Ensayo de la quinasa P38

Las propiedades inhibidoras in vitro de los compuestos se determinaron utilizando un ensayo de inhibición de la quinasa p38. La actividad de p38 se detectó utilizando un ensayo de quinasas in vitro realizado en placas de microtitulación de 96 pocillos. Se mezcló p38 humana recombinante (0,5 \mug/ml) con sustrato (proteína básica mielina, 5 \mug/ml) en tampón de quinasa (Hepes 25 mM, MgCl_{2} 20 mM y NaCl 150 mM) y compuesto. Se añadió 1 \muCi/pocillo de ATP marcado con ^{33}P (10 \muM) a un volumen final de 100 \mul. La reacción se llevó a cabo a 32ºC durante 30 min y se paró con una solución 1M de HCl. La cantidad de radiactividad incorporada en el sustrato se determinó por atrapamiento del sustrato marcado sobre papel de filtro de fibra de vidrio cargado negativamente utilizando una solución de ácido fosfórico al 1%, y se leyó con un contador de centelleo. Los controles negativos incluyeron sustrato más ATP solo.

Todos los compuestos ilustrados exhibían valores CI_{50} de p38 comprendidos entre 1 nM y 10 \muM.

Producción de TNF\alpha inducida por LPS en los ratones

Las propiedades inhibidoras in vivo de compuestos seleccionados se determinaron utilizando un modelo de producción de TNF\alpha in vivo inducida por LPS en murinos. Ratones BALB/c (Charles River Breeding Laboratories; Kingston, NY), divididos en grupos de diez, se trataron con vehículo o compuesto por la vía indicada. Al cabo de 1 hora, se administró por vía intraperitoneal (i.p.) la endotoxina (100 \mug de lipopolisacárido (LPS) de E. coli). Al cabo de 90 minutos se practicó la eutanasia a los animales por asfixia con dióxido de carbono y se obtuvo plasma de animales individuales por punción cardiaca, pasándolo a tubos heparinizados. Las muestras se clarificaron por centrifugación a 12.000 x g durante 5 min a 4ºC. Los sobrenadantes se decantaron a tubos nuevos, que se guardaron en caso necesario a -20ºC. Los niveles de TNF\alpha en suero se midieron utilizando un estuche comercial de murinos TNF ELISA (Genzyme).

Los ejemplos que anteceden pueden repetirse con éxito similar empleando las sustancias reaccionantes y/o las condiciones de operación de esta invención descritas genérica o específicamente en sustitución de las utilizadas en los ejemplos que anteceden.

Claims

1. Un compuesto de fórmula I

81

en la cual

A: es arilo C_{6-12} o heteroarilo C_{5-12} opcionalmente sustituido;

B: es 82

R^{1}: es H o alquilo C_{1-4};

R^{5}: es alquilo C_{3-5};

R^{6}: es alquilo C_{1-6};

R^{7}: es hidrógeno;

R^{8}: es metilo;

R^{9}: es hidrógeno, metilo o -CO-R^{10}; y

R^{10}: es hidrógeno o metilo opcionalmente sustituido con NR^{6}_{2} o COOR^{6}

para uso como medicamento.

2. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o inmunomoduladora.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual la enfermedad está mediada por una citoquina o proteasa regulada por p38.

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual A es arilo C_{6-12} o heteroarilo C_{5-12} opcionalmente sustituido con alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, halógeno, -OH, -OR^{1}, o -NR^{1}_{2}.

5. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual R^{5} es isopropilo o terc-butilo.

6. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual A es fenilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o -5-ilo, 7-indolilo, u 8-quinolinilo, sustituido cada uno de ellos opcionalmente con alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, halógeno, -OH, -OR^{1}, o -NR^{1}_{2}.

7. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual A es 4-metilfenilo, 4-fluorofenilo, 5-metil-2-tienilo, 4-metil-2-tienilo, o 5-ciclopropil-1,3,4-tiadiazol-2-ilo.

8. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual R^{2} o R^{3} es -COOR^{1} o CH_{2}NHR^{9}, y R^{1} es alquilo C_{1-4}, R^{7} es H, y R^{8} es alquilo C_{1-10}.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual el compuesto de fórmula I está presente en una cantidad eficaz para inhibir p38.

10. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el cual la enfermedad está mediada por TNF\alpha, MMP-1, MMP-3, IL-1, IL-6, o IL-8.

11. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual la enfermedad es artritis reumatoide, osteoporosis, asma, choque séptico, enfermedad inflamatoria del intestino, o el resultado de reacciones de rechazo inverso.

12. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual el compuesto es N-(2-carbometoxi-5-isopropil-3-tienil)-N'-(fenil)urea; (N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-fluorofenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-metilfenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-
tienil)-N'-(5-ciclopropil-2-tiadiazolil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2-aminofenil)urea; N-(2-car-
boetoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-(carbo-1-prop-2-eniloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-(carbo-2-propiloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-(carbo-1-propiloxi)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-fluorofenil)urea; N-(2-metilcarbamoil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-etilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-isopropil-fenil)urea; N-(2-metilcarbamoil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(2,4-dimetilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(3-cloro-4-metilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil)-5-terc-
butil-3-tienil)-N'-(3-fluoro-4-metilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil)-5-terc-butil(3-tienil)-N'-(3-cloro-4-fluorofenil)
urea; N-(2-carboxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-(N-glicilaminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-(N-(N-carbo-terc-butoxiglicil)aminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-(N-acetilaminometil)-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(4-metil-2-
tienil)urea; o N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-tienil)-N'-(5-metil-2-tienil)urea.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual el compuesto es N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-fluorofenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-furil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea; N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-furil)-N'-(4-fluorofenil)urea; o N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butilfuril)-N'-(4-metilfenil)-urea.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual el compuesto es N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(fenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea; o N-(N-metil-2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(5-metil-2-tienil)urea.

15. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual el compuesto es N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(fenil)urea; N-(3-carbometoxi-5-isopropil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)urea; o N-(3-carbometoxi-5-isopropil-2-tienil)-N'-(fenil)urea.

16. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el cual el compuesto es N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-furil)-N'-(3,4-diclorofenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(3,4-diclorofenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(1-naftil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(2-naftil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(3-cloro-4-fluorofenil)urea; N-(2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(3-cloro-4-metilfenil)urea; N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-pirrolil)
-N'-(2,3-diclorofenil)urea; N-(2-metilcarbamoil-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(1-naftil)-urea; N-(N-metil-2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(1-naftil)urea; N-(N-metil-2-carbometoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea; N-(N-metil-2-carbo-metoxi-5-terc-butil-3-pirrolil)-N'-(4-metilfenil)urea; N-(N-metil-2-carbometoxi-5-terc-butil-3-
pirrolil)-N'-(fenil)urea; N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(3-metilfenil)urea; N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(2,3-diclorofenil)urea; N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(2,3-dicloro-4-hidroxifenil)urea; N-(3-carbometoxi-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(3-metoxifenil)urea; o N-(3-carbamoil-5-terc-butil-2-tienil)-N'-(4-metilfenil)
urea.