ES2204885T3 - Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas. - Google Patents

Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas.

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ES2204885T3 ES91309596T ES91309596T ES2204885T3 ES 2204885 T3 ES2204885 T3 ES 2204885T3 ES 91309596 T ES91309596 T ES 91309596T ES 91309596 T ES91309596 T ES 91309596T ES 2204885 T3 ES2204885 T3 ES 2204885T3
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Abstract

UN MEDIO DE CULTIVO BIOQUIMICAMENTE DEFINIDO PARA CULTIVAR LINEAS DE CELULAS DE OVARIOS DE HAMSTER CHINOS (OHC), QUE ESTA ESENCIALMENTE LIBRE DE PROTEINAS, LIPIDOS Y CARBOHIDRATOS AISLADAS DE UNA FUENTE ANIMAL, QUE CONSTA DE AGUA, UN REGULADOR DE OSMOLATILIDAD, UN TAMPON, UNA FUENTE DE ENERGIA, AMINO ACIDOS INCLUYENDO L-GLUTAMINA, UNA FUENTE INORGANICA O DE HIERRO RECOMBINANTE, Y UN FACTOR DE CRECIMIENTO RECOMBINANTE O SINTETICO, Y OPCIONALMENTE VITAMINAS Y CO-FACTORES DE IONES DE HIERRO METALICOS; TAMBIEN CELULAS ADAPTADAS PARA CRECER EN DICHO MEDIO DE CULTIVO.

Description

Medio de cultivo para células de ovario de hámster chino (CHO) y células CHO adaptadas.
La presente invención se refiere a un medio de cultivo definido bioquímicamente para cultivar líneas de células de ovario de hámster chino (OHC) y células adaptadas para crecer en el medio de cultivo.
Las líneas de células de ovario de hámster chino (OHC) fueron cultivadas, primeramente, por Puck (J. Exp. Med. 108, 945, 1958) a partir de una biopsia de un ovario de una hembra de hámster chino. De estas células originales, varios profesionales clonaron un cierto número de sub-líneas con varias deficiencias, una de las cuales, OHC-K1, carece de prolina y es diploide por el gen de la dihidrofolato reductasa (dhfr). A partir de esta línea de células se desarrolla una línea de células OHC dhfr (OHC DUK B11), (PNAS 77, 1980, 4216-4220) que se caracteriza por la pérdida de la función dhfr como consecuencia de una mutación en un gen dhfr y la subsiguiente pérdida del otro gen. Estas células son funcionalmente dhfr^{-}. Se han obtenido, como resultado, otras sub-líneas OHC DUK que también son fenotípicamente dhfr^{-}. Las células OHC que son dhfr^{-} no pueden crecer sin precursores de nucleótidos tales como timidina, hipoxantina, o los nucleosidos equivalentes.
En dichas células OHC se han expresado diversas proteínas que incluyen el gen XGPRT E. Coli (J. Mol. App. Gen. 1981, 1, 165-175), el activador de plasminógeno tipo-tejido humano (Mol. & Cell Biol. 5, 1750-1759, 1985), el interferón inmune (\gamma) humano (PNAS 80 pp 4654-4658), y el interferón beta humano (Molecular and Cellular Biology 4, 166-172, 1984). Una línea celular OHC dhfr^{-} se transfecta con un gen producto y un gen dhfr, lo cual permite la selección de transformantes de células OHC del fenotipo dhfr^{+}. La selección se lleva a cabo cultivando las colonias en medios carentes de timidina e hipoxantina, cuya ausencia impide que crezcan las células no transformadas. Las transformantes expresan normalmente niveles bajos del gen producto en virtud de la co-integración de ambos genes transfectados. Los niveles de expresión para el gen producto se pueden incrementar por amplificación, usando metotrexato. Este fármaco es un inhibidor directo de la enzima dhfr y permite el aislamiento de las colonias resistentes, las cuales han amplificado suficientemente su numero de copias del gen dhfr como para sobrevivir bajo estas condiciones. Puesto que los genes producto y dhfr están por lo general estrechamente relacionados en los transformantes originales, hay normalmente una amplificación concomitante que da como resultado un incremento de la expresión del gen producto deseado.
Un sistema diferente de selección y amplificación se proporciona mediante el marcador genético glutamina sintetasa (o GS), el cual se describe en el documento de patente WO87/04462. Las células OCH que han sido transfectadas con éxito con el gen que codifica la enzima GS y el gen del anticuerpo deseado se pueden seleccionar cultivando colonias en medio carente de glutamina y amplificando mediante la adición de metioninsulfoximina (Msx) como se describe en la solicitud PCT publicada con el número WO87/04462.
Las células OHC diseñadas (aquellas en las cuales una línea de células OHC se transfecta con un gen producto y un gen marcador genético) crecen normalmente en medios de cultivo que contienen suero. (Referencias: J. Mol. App. Gen. 1981, 1, 165-175; Mol. & Cell Biol. 5, 1750-1759, 1985; PNAS 80 pp 4654-4658; Molecular and Cellular Biology 4, 166-172, 1984). El suero de ternera fetal (SBF) es probablemente el suero mas ampliamente utilizado para el cultivo de células de mamíferos, aunque se usan otros sueros de mamíferos. Sin embargo, el uso de suero plantea una serie de problemas. El suero es un producto caro, el cual no es fácil de conseguir en las cantidades necesarias para la producción comercial. Es también un material bioquímicamente no definido. Se sabe que el suero contiene muchos componentes mayoritarios que incluyen albúmina y transferrina y también componentes minoritarios muchos de los cuales no han sido completamente identificados ni sus acciones determinadas, así pues el suero diferirá de lote a lote necesitando, posiblemente, análisis para determinar los niveles de los diversos componentes y sus efectos sobre las células. A menudo, el suero está contaminado con microorganismos tales como virus y micoplasma, muchos de los cuales pueden ser inofensivos pero representarán un factor adicional desconocido. Este problema se ha vuelto más serio en los últimos años con la Encefalopatía Espongiforme Bovina (ESB). A pesar de las mejoras en la detección precoz, es probable que las autoridades reguladoras exijan que los productos bovinos procedan de aquellas áreas que estén libres de infecciones (ESB).
Además, la presencia de proteínas animales en el medio de cultivo puede necesitar largos procedimientos de purificación, en particular la presencia de anticuerpos bovinos en la albúmina de suero bovino (ABS), hace la purificación del anticuerpo deseado expresado por la línea de células OHC recombinante, extremadamente difícil. Es posible eliminar el anticuerpo bovino del medio antes de usarlo, pero este y los productos de análisis adicionales requeridos, aumentan en gran medida el coste global de la producción del producto. Consecuentemente, se ha investigado mucho para encontrar un medio de cultivo desprovisto de componentes de procedencia animal que apoyara el crecimiento celular, especialmente de células OHC. Desgraciadamente, los problemas relacionados con la provisión de un medio de este tipo son numerosos en sí mismos. Las células OHC no crecen fácilmente en condiciones libres de suero. Además, la separación del suero puede eliminar también esos componentes que proporcionan protección celular y actividad desintoxicante.
Mendiaz et al (in vitro Cellular & Development Biology Vol.22, No.2, 1986) describen un medio de cultivo sin suero pero que no está libre de componentes de procedencia animal, para su uso en el cultivo de células OHC K1. El medio es una modificación del medio desarrollado por Ham (Microbiology 53, 288-293, 1965), el cual se conoce como "F12 de Ham". Otros ejemplos de medios se han basado en el medio F12 de Ham como por ejemplo el divulgado en EPA390327 y EP325190. Estos medios contienen transferrina como sustitutivo del suero, pero aunque la transferrina es un derivado de procedencia animal, el medio resultante no presenta los problemas de contaminación relacionados con el uso del suero. Un problema adicional que surge con el uso de medios desprovistos de suero es el de las células OHC recombinantes de apoyo que hacen posible el crecimiento y la expresión del producto. Los medios basados en el F12 de Ham que no se suplementan con suero, generalmente no son suficientemente enriquecedores para apoyar el crecimiento completo o la expresión.
Las células OHC diseñadas son también difíciles de crecer en suspensión. Es muy deseable alcanzar el crecimiento en suspensión cuando se usan células para expresar un producto tal como un anticuerpo. Para la producción de una proteína biológica a escala comercial es preferible poder apoyar el crecimiento en fermentadores que van desde vasos de vidrio de 1 litro a tanques de acero inoxidable de muchos miles de litros. Un medio adecuado debe poder mantener las células frente a simples fuerzas procedentes de impulsores de aspas o turbinas y de efectos de barboteado (es decir, suministro de aire, oxigeno y CO_{2} en forma de burbujas directamente al medio).
La presente invención, además, proporciona un medio de cultivo bioquímicamente definido para cultivar células de OHC diseñadas, que esta esencialmente libre de proteínas, lípidos e hidratos de carbono aislados de una fuente animal, que comprende agua, un regulador de osmolalidad, un tampón, una fuerte de energía, aminoácidos que incluyen L-glutamina, una fuerte inorgánica o de hierro recombinante y un factor de crecimiento sintético o recombinante y opcionalmente iones metálicos no ferrosos, vitaminas y cofactores.
Los componentes del medio son en su mayoría inorgánicos, sintéticos o recombinantes y como tales no se obtienen directamente de ninguna fuente animal. Algunos componentes se pueden obtener de una fuente bacteriana o vegetal. Los componentes recombinantes se preparan bajo altas condiciones de pureza para minimizar el riesgo de contaminación procedente de los tejidos de partida al pasar a las células utilizadas para producir los componentes. Se pueden emplear etapas de purificación adicionales para separar las proteínas de las células. De ese modo, se puede conseguir un medio que está esencialmente libre de todas las proteínas, lípidos e hidratos de carbono aislados a partir de una fuente animal. Los medios de cultivos preferidos de la invención no contienen proteínas, lípidos e hidratos de carbono aislados a partir de una fuente animal.
Es ventajoso mantener la osmolalidad en el intervalo 200-350 mOsm preferiblemente en el intervalo 290-350 mOsm. Los reguladores de osmolalidad son generalmente sales. Aquellas que se pueden usar en el medio incluyen ClNa, ClK, NO_{3}K.
Los tampones se usan en el medio para mantener el pH en el intervalo de 6,5-7,5, lo mas preferentemente alrededor de 7,0. Los tampones de uso en el medio incluyen carbonatos tales como CO_{3}HNa; también, cloruros, sulfatos y fosfatos tales como Cl_{2}Ca.2H_{2}O, SO_{4}Mg.7H_{2}O, PO_{4}H_{2}Na.2H_{2}O, o piruvato sódico, estando tales tampones generalmente presentes en una cantidad de 50-500 mg/litro. Otros tampones, tales como el ácido N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[2-etanosulfónico] conocido también como HEPES y el ácido 3-[N-morfolino]-propanosulfónico, también conocido como MOPS, están generalmente presentes en una cantidad de 1000-10.000 mg/litro.
La fuente de energía de uso en el medio está generalmente presente en una cantidad de 1000-10.000 mg/litro y es preferiblemente un monosacárido como por ejemplo manosa, fructosa, galactosa o maltosa, más preferiblemente glucosa, particularmente D-glucosa.
Los iones metálicos no ferrosos de uso opcional en el medio incluyen magnesio, cobre y zinc; también sodio, potasio y selenio. Los iones generalmente se añaden al medio en forma de sales tales como cloruros y sulfatos. Las cantidades son normalmente similares a aquellas proporcionadas en el medio ISCOVES presentado en la Tabla 1, pero evidentemente se pueden variar.
Las vitaminas y vitaminas cofactores enzimáticos (cofactores) de uso opcional en el medio incluyen vitamina B_{6} (piridoxina), vitamina B_{12} (cianocobalamina) y vitamina K (biotina), presentes en una cantidad de 10-30 mg/litro, vitamina B_{2} (riboflavina) presente en una cantidad de 0,1-10 mg/litro y vitamina B_{1} (tiamina), nicotinamida, vitamina B_{5} (D-pentotenato cálcico), ácido fólico, i-inositol generalmente presentes en una cantidad de 0,2-0,8 mg/litro.
En el medio basal se incluye un factor lipídico como cloruro, ácido lipoico, ácido oleico, fosfatidilcolina o metil lineoleato generalmente en una cantidad de 0,05-10 mg/litro. Se pueden añadir también compuestos que participan en la producción de lípidos, por ejemplo alcoholaminas como la etanolamina.
Es preferible incluir en el medio aminoácidos adicionales seleccionados de:
1
Se prefieren las formas puestas entre paréntesis.
Los aminoácidos son preferiblemente de origen sintético. Las cantidades que normalmente se incluyen varían para cada aminoácido, pero generalmente están en el intervalo de 10-150 mg/ml. Sin embargo, la L-glutamina está presente generalmente a mucha más alta concentración, preferiblemente en el intervalo de 400-600 mg/ml.
Puede ser ventajoso incluir en el medio un indicador de pH, por ejemplo sal sódica de rojo fenol, por ejemplo a 5-50 mg/litro.
El medio A como se presenta en la Tabla 1, es un ejemplo de un medio que proporciona las cantidades preferidas de agua, regulador de osmolalidad, tampón, fuente de energía, aminoácidos, iones metálicos no ferrosos, vitaminas y cofactores como base para un medio de cultivo según la invención. Este medio no contiene hipoxantina o timidina y esta comercialmente disponible de GIBCO Ltd., Unit 4, Cowley Mill Td. Est., Uxbridge UB8 2YG. Es similar a un medio de cultivo publicado (Iscoves and Melcher (1978) J.Exp.Med. 1. 47,923), pero no contiene albúmina de suero bovino, transferrina humana pura o lecitina de soja.
TABLA 1
2
3
La modificación de Iscoves DMEM N. and Melcher (1978), J. Exp. Med. 1.47, 923.
Es preferible añadir al medio selenio (opcionalmente en forma de selenito sódico), generalmente en una cantidad de 0,01-0,2 mg/litro ó ácido L-ascórbico generalmente en una cantidad de 20-50 mg/litro, para ayudar a minimizar los efectos tóxicos potenciales de los iones férricos o ferrosos, y el oxigeno. Además, el uso de agentes quelantes como citrato o ácido etilendiaminotetracético (EDTA) o un captador de radicales libres como alfa-tocoferol (vitamina E), es ventajoso para reducir el daño causado por los radicales libres.
Se pueden añadir al medio antibióticos tales como polimixina, neomicina, penicilina o estreptomicina para prevenir la contaminación bacteriana. Estos, normalmente se incluyen en cantidades de 10.000-100.000 UI/litro.
Los factores de crecimiento que se pueden añadir al medio basal son sintéticos o recombinantes e incluyen la insulina. Se pueden incluir otros factores tales como el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), tiroxina T_{3}, trombina, interleucinas tales como IL2 y IL6, progesterona, hidrocortisona y vitamina E. Para mejorar el crecimiento de las células se puede añadir ácido fólico, vitamina B6 y vitamina B12, las cuales están involucradas en la ruta del folato.
La hormona peptídica insulina (la cual en el presente contexto incluye análogos de la misma tal como Nucellin (marca registrada de Eli Lilly) se obtiene ventajosamente por técnicas de ADN recombinante, pero no se aísla a partir de una fuente animal. Preferentemente, se añade al medio en una cantidad de 5 \mug-5 mg/litro. Nucellin es la forma de insulina preferente para usar en la invención.
La fuente de hierro que no procede de animales que se usa para complementar el medio, es preferentemente inorgánica y se presenta en una cantidad de 0,25-5 mg/litro. Los ejemplos incluyen sales ferrosas y férricas tales como citrato férrico y sulfato ferroso. Los preferidos son las sales de quelatos tales como citrato férrico y citrato de amonio férrico. No obstante, se puede usar cualquier fuente de hierro que no esté aislada a partir de una fuente animal, por ejemplo, quelantes de hierro químicos o portadores de hierro de proteínas recombinantes.
La concentración de iones férricos y ferrosos se debe controlar cuidadosamente, al poder éstos contribuir a producir superóxidos y radicales libres en el medio, los cuales pueden dañar no sólo las células en sí, sino también componentes del medio y el producto final deseado.
También es preferible añadir al medio, un componente tal como putrescina, ventajosamente como una sal tal como ClH, la cual se sabe que juega un papel en el mantenimiento de la estructura del retículo endoplásmico y que ciertas líneas de células OHC la necesitan para mantener el crecimiento. Preferentemente, la putrescina o una sal de la misma se añade en una cantidad de 0,01-1,0 mg/litro.
Hasta la fecha, los medios sin suero divulgados contienen hipoxantina o timidina. Esto puede interrumpir la presión selectiva puesta en el sistema de amplificación y selección de dhfr, como se ha descrito anteriormente. El resultado puede ser la perdida del material genético que expresa el producto y los genes dhfr. Por lo tanto, en otro aspecto de la invención se ha proporcionado un medio de cultivo para el crecimiento de células OHC dhfr^{-} de diseño según la invención, esencialmente libre de hipoxantina y/o timidina.
El medio de cultivo de la presente invención apoya el crecimiento de células OHC y cuando se complementa con un agente adecuado tal como metotrexato para el sistema dhfr, normalmente en una cantidad 0,1-5,0 \muM, (o MSX para el sistema GS), permite una presión selectiva completa que se ejerce sobre las células. Se entenderá que la hipoxantina y la timidina, a concentraciones que son insuficientes para interrumpir la selección del sistema dhfr pueden estar presentes en el medio, pero no se prefiere la presencia de estos dos precursores nucleótidos para usar en la presente invención.
En fermentadores a gran escala, las células de mamíferos son particularmente susceptibles a las simples fuerzas que provienen del barboteo de los vasos con gases y de la mezcla con el impulsor. Para minimizar la ocurrencia de daño celular es ventajoso que el medio contenga un protector celular tal como polietilenglicol, alcoholes pilivinílicos o polioles plurónicos. De estos, se prefiere el poliol F68 Pluronic (marca registrada de BASF Wyandotte Corp) ya que a diferencia de los alcoholes polivinílicos, este no es una substancia tóxica y a diferencia de los polietilenglicoles no interfiere con la purificación aguas abajo.
Además, se pueden obtener mejoras en el crecimiento de células de OHC, suplementando el medio con un péptido digerido, hidrolizados o extractos, tales como Triptona, hidrolizado de caseína, extracto de levadura, o preferentemente peptona de soja digerida con papaína. Las cantidades preferidas son de 1%-0,025% p/v, más preferentemente 0.25% p/v.
Los medios de la invención para el cultivo células OHC recombinantes son capaces de apoyar el crecimiento y la secreción del producto a partir de tales células en suspensión en fermentadores a pequeña y gran escala, en cultivos estáticos y/o agitados. El medio de cultivo según la invención es también capaz de apoyar el crecimiento de células a densidad celular alta, particularmente más de 1 x 10^{5} células/ml hasta o más de 1,5 x 10^{6} células/ml y secreción de producto de 30 mg/l hasta más de 150 mg/l. El medio según la invención es también capaz de apoyar este crecimiento y la secreción de producto en múltiples pases que duran hasta ó más de 6 meses.
El medio se prefiere para la producción de todo tipo de anticuerpos naturales y alterados. La invención, por lo tanto, incluye la producción de anticuerpos humanos en los que las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera son homólogas con esas secuencias de anticuerpos producidas por linfocitos humanos in vivo, o in vitro mediante hibridomas. También, siempre que sean anticuerpos híbridos en los cuales la cadena pesada y ligera sean homólogas a un anticuerpo natural pero estén combinadas de una manera que no ocurriría de modo natural. Por ejemplo, un anticuerpo biespecífico tiene sitios específicos de unión antigénica para más de un antígeno. La región constante del anticuerpo puede estar vinculada a una u otra de las regiones de unión antigénica ó puede proceder de un anticuerpo adicional. Los anticuerpos alterados, por ejemplo anticuerpos híbridos, tienen regiones variables de un anticuerpo y regiones constantes de otro. De ese modo, los anticuerpos híbridos pueden ser especies/híbridos de especies ó clases/híbridos de clases. Tales anticuerpos híbridos pueden tener una o más modificaciones ulteriores para mejorar la capacidad de unión antigénica o para modificar el funcionamiento efector. Los anticuerpos injertados-CDR o los humanizados se incluyen dentro de la invención, en particular Campath 1H (EP328404) (Campath es una marca registrada de The Wellcome Foundation), así como anticuerpos compuestos, en los que partes de las regiones hipervariables, además de a las CDRs, se transfieren a la estructura humana. Se pueden alterar aminoácidos adicionales en la estructura o regiones constantes de tales anticuerpos. La invención, por otro lado, incluye la producción de fragmentos Fab, los cuales son mas o menos equivalentes a las porciones ramificadas Y de las cadenas pesada y ligera; esto incluye fragmentos incompletos o fragmentos que incluyen parte de la región Fc.
En un aspecto adicional de la invención se proporciona una célula OHC de diseño adaptada para crecer en un medio según la invención. En particular una célula OHC diseñada para expresar proteínas tales como un activador de plasminógeno tisular o anticuerpos como los definidos anteriormente. En particular la invención proporciona una línea de células OHC-dhfr transfectadas con un gen que codifica una proteína biológicamente activa y un gen marcador genético dhfr, adaptado para crecer en un medio de cultivo según la invención. La proteína es preferentemente un anticuerpo según se ha definido anteriormente.
Los ingredientes del medio de cultivo se pueden añadir en cualquier orden pero es preferible añadir la fuente de hierro y por último, en el momento en que se use, tirosina, para evitar la precipitación.
Las figuras anexas son solamente para ilustración.
La Figura 1 muestra el crecimiento de C1H 3D11* 44 en WCM5 (medio sin proteína) en un fermentador de 1 litro medido como número de células/ml en más de 90 días.
La Figura 2 muestra la producción de anticuerpos a partir de células C1H 3D11* 44 en WCM5 en un fermentador de 1 litro medido como microgramos de anticuerpo/ml en más de 80 días.
Ejemplo 1 Formulación para el medio WCM4
4
Este medio no contiene hipoxantina, timidina o ácido folínico, los cuales pueden interrumpir la selección del metotrexato. El medio contiene glicina, la cual no puede interrumpir por sí misma la selección. De ese modo, este medio mantiene la selección completa por resistencia del metotrexato.
Ejemplo 2 Formulación para Medio WCM5
5
Ejemplo 3 Producción a partir de C1H3D11*44 en WCM4 y crecimiento
Las células C1H 3D11* son células CHO DUKB11 genéticamente diseñadas (Urlaub and Chasin (1980)) PNAS 77, 7 pp 4216-4220). Las células CHO DUKB11 no pueden producir dihidrofolato reductasa (dhfr). Estas células fueron diseñadas para producir un anticuerpo IgG humanizado, Campath 1H (Winter et al., Nature, 1988, 322, 323-327), usando estructuras plásmidas para expresar las cadenas ligera y pesada del anticuerpo y el dhfr de ratón. La expresión se amplifica y se mantiene usando el folato antagonista del metotrexato. Las células C1H 3D11* que crecían en una monocapa en Iscoves + 10% FBS de Flow, sin aminoácidos esenciales, metotrexato 10^{-6}M y anticuerpos, eran aproximadamente confluentes en un 90%. Estas células se separaron del plástico con tripsina/versena, se lavaron en medio Iscoves sin suplementos, se centrifugaron y se resuspendieron a 5x10^{4}/ml en medio WCM4 + 0,25% de peptona + 0,1% de polietilenglicol (PEG) 10.000 + 0,5% de suero de ternera fetal (SBF) sin metotrexato (MTX). Se prepararon tres frascos de 25 cm^{2} con 10 ml de una suspensión de células + hipoxantina (H), timidina (T) o HT. Estos frascos se incubaron a 36,5ºC en un incubador con atmósfera de CO_{2} al 5%.
Después de 6 días, los frascos se mezclaron y se añadió igual volumen de WCM4 + MTX sin peptona o PEG, y se transfirieron a un frasco de 75 cm^{2}.
Estas células se usaron para sembrar una centrífuga Technner de 500 ml, se incubaron a 36,5ºC girando a 40 rpm. Las células continuaron creciendo sin suero durante un periodo de más de 5 meses y aunque se encontró que las células necesitaban un periodo de adaptación, la velocidad de crecimiento y la viabilidad mejoraron continuamente. El tiempo de duplicación de la población se calculó que era de 73,1 horas por encima de aproximadamente 7 semanas; este disminuyó a 47,4 horas por encima de los 20 días subsiguientes, después se estabilizó. La secreción de anticuerpos permaneció alta, con niveles por encima de 60\mug/ml. Se determinó que el número de copias del gen en estas células no disminuyó, según la intensidad de banda obtenida usando el análisis de transferencia Northem.
En fermentadores, estas células producen anticuerpos por encima de 70 \mum/ml y niveles alcanzados regularmente de 100 \mum/ml o más. A estas células se las denomina C1H 3D11*44.
Ejemplo 4 Crecimiento y producción de C1H 3D11*44 en WCM5 en un fermentador de un litro
Las células C1H 3D11*44 del ejemplo 3 que han estado creciendo sin suero más de 2 meses, se transfirieron a un fermentador SGi de 1 litro con una paleta angular de acero inoxidable que giraba a 70rpm. La temperatura se ajustó a 37ºC, dO_{2} al 10% y control de pH a 7-7,2. El fermentador se sembró en el día 0 con 0,22x10^{6} células/ml en WCM4 (Ejemplo 1), con 0,1% de polietilenglicol (PEG) 10.000 y 0,25% de peptona de soja, y se gaseó al máximo con O_{2}. Las células se pasaron periódicamente usando medio fresco y una tasa de división generalmente entre 1 a 2 y 1 a 4.
Sobre el día 33 el gaseado máximo se reemplazó por un barboteo intenso, el cual se puede esperar que cause más daño físico a las células.
Del día 50 en adelante se usó WCM5 (ejemplo 2) junto con peptona y PEG en vez de WCM4.
Sobre el día 53 el PEG se remplazó por 0,1% de Pluronic F68. El crecimiento resultante y los niveles de anticuerpos alcanzados se muestran en los gráficos adjuntos (Figuras 1 y 2), y demuestran la capacidad de la invención para permitir la producción de anticuerpos sin proteínas en fermentadores, por encima de 100\mug/ml.
Ejemplo 5 Crecimiento de CHO AJ19 MCB1 en WCM4 y comparación con CHO AJ19 MCB1 crecidas en medio que contiene suero
Las células de ovario de hamster chino CHO AJ19 MCB1, obtenidas a partir de células CHO DUK, (Urlaub & Chasin PNAS, 77, 7, pp4216-4220, 1980), se diseñaron genéticamente para producir tPA bajo la selección del metotrexato. Esta línea de células se había crecido habitualmente en un fermentador como un cultivo de suspensión que utilizaba un medio de cultivo normal que consiste en medio RPMI 1640 (GIBCO), suero de bovino adulto hidrolizado con ácido (Imperial) 2,5%, Triptona 0,5%, polimicina 50 UI/ml, neomicina 20 UI/ml, metotrexato (MTX) 50nM.
Se formuló el medio WCM4, para lo cual se añadió:
46B
Peptona de soja N-Z (Sigma P1265) al 0,25% p/v, Polietilenglicol (PEG) 20.000 (Serva, Carbowax 20M) al 0,1% p/v, MTX 1uM.
46C
Extracto de levadura (Sigma Y0500) al 0,25% p/v, PEG 20.000 al 0,1% p/v, MTX 1uM. En este medio el Iscoves en CM4 se remplazó por medio RPMI 1640 (ICN FLOW).
46D
Extracto de levadura al 0,25% p/v, PEG 20.000 al 0,1% p/v, 1uM MTX.
46E
Extracto de levadura al 0.25% p/v, PEG 20.000 al 0,1% p/v, suero de ternera fetal (Imperial) al 0,25%, 1uM MTX.
Los extractos de levadura, Peptona y PEG se prepararon como soluciones al 10% p/v con agua (unidad de producción de medios de Wellcome) y se filtraron a través de un filtro desechable (Gelman, Supor Vac) de 0,2um, después se diluyeron para su empleo. Las células se incubaron a 37ºC en un incubador humidificado que contenía 5% de CO_{2}.
Las células que crecían en medio de cultivo normal se precipitaron mediante centrifugación a 1.2000g +4ºC durante 5 minutos, se lavaron en RPMI 1640 sin suplementos y se precipitaron otra vez. Luego, las células se resuspendieron a 10^{5} cel/min en medio de cultivo normal (46A) y en otros medios (46B, 46C, 46D o 46E). Se sembraron placas de 24 pocillos (pocillos de 16mm Costar) con 1ml/pocillo y se incubaron a 37ºC en un incubador que contenía 5% de CO_{2}. Sobre los días 3, 4, 5 y 6 se contó un pocillo de cada una, usando un hemocitómetro y la exclusión de azul tripan. Se recogieron dos pocillos adicionales de cada una, se mezclaron y se precipitaron a 1.200g +4ºC durante 5 minutos. El sobrenadante se separó y se guardó a -20ºC. Estas muestras se analizaron más tarde por tPA. Sobre el día 6 solamente se recogieron muestras de 46A y 46D.
Resultados Actividades específicas tPA en varias tomas en bruto
El material en bruto producido en los cinco medios diferentes se examinó utilizando un ensayo ELISA validado por control de calidad para medir las concentraciones de antígeno tPA en \mug/ml utilizando la unión a un anticuerpo policlonal frente a tPA, y un ensayo de lisis de coágulo para medir la actividad tPA en UI/ml. Las actividades específicas se calcularon a partir de estos resultados (Tabla 2).
TABLA 2
6 
\newpage
Según la tabla anterior no había cambio de la actividad específica para los cinco materiales en bruto. El rendimiento de tPA a partir de medio B, C y D sin proteínas, fue casi igual al rendimiento de tPA a partir de medio de cultivo estándar en el grupo A y E.
Ejemplo 6 Crecimiento continuo de OHC AJ19MCBI en WCM4
Se precipitaron y lavaron como en el Ejemplo 5, células OHC AJ19MCBI en WCM4 que crecían en medio de cultivo normal y se resuspendieron a 7x10^{4}/ml en 500ml de medio 46B. Estas células se transfirieron a un frasco centrifugador Techne y se incubaron, como se ha indicado anteriormente, agitando a 40rpm. Las células se contaron a varios intervalos de tiempo y subcultivaron usando el mismo medio. Se tomó una muestra para el ensayo de tPA y se trató como en el Ejemplo 5.
La actividad específica de tPA en varios subcultivos de células
Se midió la actividad específica de los sobrenadantes procedentes de diferentes niveles de pases de crecimiento de células en WCM4 con peptona y PEG 20K al 0,1%, mediante combinación de ELISA y ensayo de lisis del coagulo. Las actividades especificas de los diferentes pases de células se resumen en la Tabla 3.
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 3
8
Durante un periodo de 48 días, de acuerdo a la tasa de división indicada anteriormente, una célula podía dividirse para dar 3,77x10^{8} células. Esto es equivalente a los 31,8 duplicados de población, con un tiempo de duplicación de 38 horas.
Los resultados de los experimentos dirigidos de los Ejemplos 5 y 6 demuestran que el medio sin suero de la presente invención es capaz de apoyar crecimientos de células y rendimientos tPA comparables a los alcanzados en los medios que contienen suero.

Claims (17)

1. Un método para cultivar células OHC recombinantes para obtener un producto, el cual comprende hacer crecer células OHC en un medio que está libre de proteínas, lípidos y carbohidratos aislados a partir de una fuente animal, que incluye transferrina y comprende
agua,
un regulador de osmolalidad para mantener la osmolalidad del medio dentro del intervalo de aproximadamente 200-350 mOsm, un tampón para mantener el pH del medio dentro del intervalo de aproximadamente 6,5-7,5
y una fuente de energía en el intervalo de 1000-10.000 mg/litro,
y además, un suplemento que comprende:
aminoácidos, incluyendo L-glutamina en el intervalo de 400-600 mg/l,
una fuente de hierro recombinante o inorgánica,
una fuente de lípidos en el intervalo de 0,05-10 mg/l
una insulina o análogo de insulina recombinante,
un potenciador del crecimiento celular que está involucrado en la ruta del folato, seleccionado a partir del grupo que consiste en ácido fólico, vitamina B6 y vitamina B12,
en el que dicho medio es capaz de sustentar tanto el crecimiento de células en suspensión a una densidad mayor de
1 x 10^{5} células/ml como la subsiguiente secreción del producto a partir de dichas células en ausencia de suero.
2. Un método según la reivindicación 1, en el que los medios comprenden además un péptido digerido, un hidrolizado o un extracto en el intervalo de 1%-0,025% p/v.
3. Un método según la reivindicación 2, en el que el péptido digerido, el hidrolizado o el extracto se seleccionan a partir del grupo que consiste en Triptona, hidroxilato de caseína, extracto de levadura o peptona de soja digerida con papaína.
4. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los medios comprenden además un factor seleccionado de uno cualquiera del grupo que consiste en PDGF, tiroxina T3, trombina, interleucinas tales como IL2 y IL6, progesterona, hidrocortisona y Vitamina E.
5. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los aminoácidos son uno o más seleccionados de:
L-Alanina
L-Arginina
L-Asparagina
Ácido L-aspártico
L-Cisteína
Ácido L-glutámico
Glicina
L-Histidina
L-Isoleucina
L-Leucina
L-Lisina
L-Metionina
L-Fenilalanina
L-Prolina
L-Serina
L-Treonina
L-Triptófano
L-Tirosina
L-Valina
6. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fuente de energía es un monosacárido.
7. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fuente de hierro recombinante o inorgánica se encuentra en el intervalo de 0,25-5 mg/l.
8. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además selenio o ácido L-ascórbico para ayudar a minimizar los efectos tóxicos potenciales de los iones ferrosos y férricos, y oxigeno.
9. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además agentes quelantes tales como citrato o ácido etilendiaminotetracético (EDTA) o un captador de radicales libres tal como \alpha-tocoferol (Vitamina E) para reducir el daño del radical libre.
10. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además antibióticos tales como polimixina, neomicina, penicilina, o estreptomicina en el intervalo de 10.000-100.000 UI/litro para prevenir la contaminación bacteriana.
11. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además putrescina o una sal de la misma en un intervalo de 0,01-1,0 mg/litro.
12. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además metotrexato.
13. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además un protector de células seleccionado a partir del grupo que consiste en polietilenglicol, alcoholes polivinílicos o polioles plurónicos.
14. Un método según la reivindicación 13, en el que el protector celular es Pluronic poliol F68.
15. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fuente de hierro del medio de cultivo se añade al medio de cultivo al final, para evitar la precipitación.
16. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el producto es un anticuerpo.
17. Un método según la reivindicación 16, en el que el producto es un anticuerpo anti-CDw52.
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Families Citing this family (215)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5292655A (en) * 1990-01-29 1994-03-08 Wille Jr John J Method for the formation of a histologically-complete skin substitute
GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
GB9022543D0 (en) * 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Antibody production
JPH0789908B2 (ja) * 1991-02-28 1995-10-04 倉敷紡績株式会社 動物細胞培養用無血清培地
DE4115722A1 (de) * 1991-05-14 1992-11-19 Boehringer Mannheim Gmbh Serumfreies medium zur kultivierung von saeugerzellen
GB9118664D0 (en) * 1991-08-30 1991-10-16 Celltech Ltd Cell culture
US6352707B1 (en) 1992-02-24 2002-03-05 Anton-Lewis Usala Transplant encapsulation in a hydrogel matrix to obscure immune recognition
US6231881B1 (en) * 1992-02-24 2001-05-15 Anton-Lewis Usala Medium and matrix for long-term proliferation of cells
IL102929A (en) * 1992-08-24 1996-11-14 Interpharm Lab Ltd Serum-free medium for mammalian cells
DE4313620A1 (de) * 1993-04-26 1994-10-27 Biotechnolog Forschung Gmbh Hamsterzellinien und Verfahren zur Glykoproteingewinnung
USH1532H (en) * 1993-11-03 1996-05-07 Genetics Institute, Inc. Adaption of mammalian cell lines to high cell densities
EP0653487A1 (de) * 1993-11-07 1995-05-17 Ferruccio Dr. Messi Serum- und proteinfrei wachsende Zellen
US5856179A (en) * 1994-03-10 1999-01-05 Genentech, Inc. Polypeptide production in animal cell culture
US5512477A (en) * 1994-04-21 1996-04-30 Genzyme Corporation Serum-free medium supplement
US5753489A (en) * 1994-11-10 1998-05-19 Immuno Ag Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture
US6146873A (en) * 1994-11-10 2000-11-14 Baxter Aktiengesellschaft Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media
US5756341A (en) * 1994-11-10 1998-05-26 Immuno Ag Method for controlling the infectivity of viruses
US5698433A (en) * 1994-11-10 1997-12-16 Immuno Ag Method for producing influenza virus and vaccine
US6656466B1 (en) 1995-06-06 2003-12-02 Genetech, Inc. Human tumor necrosis factor—immunoglobulin(TNFR1-IgG1) chimera composition
US5705364A (en) 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
US5721121A (en) * 1995-06-06 1998-02-24 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing a tumor necrosis factor receptor immunoglobulin chimeric protein
EP0891419A4 (en) 1996-03-12 2000-03-01 Life Technologies Inc NUTRIENT ADDITIVE FOR HEMATOPOETIC CELL CULTURES
US6180404B1 (en) * 1996-04-09 2001-01-30 The Board Of Trustees Of Southern Illinois University Cultural medium for maintaining neural cells in ambient atmosphere
AU4330597A (en) 1996-08-30 1998-03-19 Life Technologies, Inc. Serum-free mammalian cell culture medium, and uses thereof
US20040171152A1 (en) * 1996-10-10 2004-09-02 Invitrogen Corporation Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
US6103529A (en) * 1996-10-10 2000-08-15 Life Technologies, Inc. Animal cell culture media comprising peptides derived from rice
US6692961B1 (en) * 1996-10-11 2004-02-17 Invitrogen Corporation Defined systems for epithelial cell culture and use thereof
US20020012991A1 (en) * 1997-04-07 2002-01-31 Florence Chua Nee Ho Kit Fong Cell culture media for enhanced protein production
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6566118B1 (en) * 1997-09-05 2003-05-20 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
US6989264B2 (en) 1997-09-05 2006-01-24 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
WO1999057246A1 (en) * 1998-05-01 1999-11-11 Life Technologies, Inc. Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
US6528286B1 (en) * 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
US6406909B1 (en) * 1998-07-10 2002-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Serum-free medium for culturing animal cells
US7294481B1 (en) * 1999-01-05 2007-11-13 Immunex Corporation Method for producing recombinant proteins
CA2704600C (en) 1999-04-09 2016-10-25 Kyowa Kirin Co., Ltd. A method for producing antibodies with increased adcc activity
US20060286668A1 (en) * 1999-04-30 2006-12-21 Invitrogen Corporation Animal-cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
AT409379B (de) * 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
JO2291B1 (en) 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
DK1200561T3 (da) * 1999-08-05 2006-10-16 Baxter Ag Rekombinant stabil celleklon, dens fremstilling og anvendelse
EP1229125A4 (en) * 1999-10-19 2005-06-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING A POLYPEPTIDE
KR20010056451A (ko) * 1999-12-15 2001-07-04 윤재승 아르기닌이 강화된 동물세포 배양용 배지 조성물
US6811776B2 (en) 2000-12-27 2004-11-02 The Regents Of The University Of Michigan Process for ex vivo formation of mammalian bone and uses thereof
US20020099183A1 (en) * 2000-08-23 2002-07-25 Pluschkell Stefanie Beate Process for the preparation of neutrophil inhibitory factor
AU2001288280A1 (en) * 2000-08-23 2002-03-04 Corvas International, Inc. Process for the preparation of neutrophil inhibitory factor
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
AU2002233230B2 (en) 2000-12-20 2007-02-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Erythropoietin conjugates
US6506576B2 (en) 2001-03-14 2003-01-14 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Serum-and steroid-free culture media for cerebellar granule neurons
CA2466881A1 (en) * 2001-11-28 2003-06-05 Sandoz Gmbh Cell culture process
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7662925B2 (en) * 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US20070148171A1 (en) * 2002-09-27 2007-06-28 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
US20080254027A1 (en) * 2002-03-01 2008-10-16 Bernett Matthew J Optimized CD5 antibodies and methods of using the same
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20080260731A1 (en) * 2002-03-01 2008-10-23 Bernett Matthew J Optimized antibodies that target cd19
EP1500400A4 (en) 2002-04-09 2006-10-11 Kyowa Hakko Kogyo Kk MEDICAMENT WITH ANTIBODY COMPOSITION
EP2287288B1 (en) 2002-07-09 2012-11-07 Baxter International Inc. Animal protein free media for cultivation of cells
US7067279B1 (en) 2002-08-23 2006-06-27 Immunex Corporation Cell culture performance with betaine
US20060235208A1 (en) * 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
JP5116971B2 (ja) 2002-10-15 2013-01-09 インターセル アーゲー Ｂ群連鎖球菌の接着因子をコードする核酸、ｂ群連鎖球菌の接着因子、およびその使用
DE10255508A1 (de) * 2002-11-27 2004-06-17 Forschungszentrum Jülich GmbH Verfahren zur Kultivierung von Zellen zur Produktion von Substanzen
MXPA05006522A (es) † 2002-12-23 2006-02-17 Bristol Myers Squibb Co Mejora en la calidad de producto en procesos de cultivo en celulas de mamiferos para la produccion de proteina.
US20070275460A1 (en) * 2003-03-03 2007-11-29 Xencor.Inc. Fc Variants With Optimized Fc Receptor Binding Properties
US8388955B2 (en) * 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
GB0304799D0 (en) 2003-03-03 2003-04-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel method
US20090010920A1 (en) * 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
EP1622941A2 (en) * 2003-03-20 2006-02-08 ImClone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
GB2404665B (en) * 2003-08-08 2005-07-06 Cambridge Antibody Tech Cell culture
ATE359359T1 (de) * 2003-08-08 2007-05-15 Cambridge Antibody Tech Myeloma zellkultur in einem transferrin-freien medium mit niedrigem eisengehalt
MXPA06003028A (es) * 2003-09-18 2006-06-23 Raven Biotechnologies Inc Medios de cultivo de celulas.
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US8101720B2 (en) * 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
WO2005035740A1 (ja) * 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 無血清馴化したゲノム改変細胞
EP1670821A4 (en) * 2003-10-09 2006-11-29 Daewoong Co Ltd PROCESS FOR PURIFYING HUMAN THROMBOPOIETIN WITH HIGH SIALIC ACID CONTENT
KR101221862B1 (ko) * 2003-10-27 2013-01-14 와이어쓰 엘엘씨 하이드록시아파타이트 크로마토그래피를 사용한 고분자량응집체의 제거
EP1697520A2 (en) * 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
US7255288B2 (en) * 2004-03-08 2007-08-14 Wan Shan Chan Aroma therapy for fountain
EP1737890A2 (en) * 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
TWI364458B (en) 2004-08-27 2012-05-21 Wyeth Res Ireland Ltd Production of tnfr-lg
US7335491B2 (en) 2004-08-27 2008-02-26 Wyeth Research Ireland Limited Production of anti-abeta
US20060074225A1 (en) * 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
AU2011221414B2 (en) * 2004-10-29 2012-09-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited Animal Protein-Free Media for Cultivation of Cells
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
BRPI0517942B8 (pt) * 2004-11-02 2021-05-25 Ares Trading Sa processo para a produção do hormônio de crescimento humano recombinante (rhgh) e usos de um meio de cultura de células isento de soro
ES2361559T3 (es) 2004-11-02 2011-06-20 Ares Trading S.A. Medio de cultivo de células exento de suero para mamíferos.
US8273553B2 (en) * 2004-11-02 2012-09-25 Ares Trading S.A. Production of growth hormone in serum-free cell culture medium for mammalian cells
AU2005304624B2 (en) * 2004-11-12 2010-10-07 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20070135620A1 (en) * 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) * 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
EP1858925A2 (en) * 2005-01-12 2007-11-28 Xencor, Inc. Antibodies and fc fusion proteins with altered immunogenicity
EP1851305B1 (en) * 2005-02-11 2012-01-18 Novo Nordisk Health Care AG Production of a polypeptide in a serum-free cell culture liquid containing plant protein hydrolysate
JP2006310392A (ja) * 2005-04-26 2006-11-09 Toshiba Corp 電子ビーム描画方法及び電子ビーム描画装置
JP2008541746A (ja) * 2005-06-03 2008-11-27 ビオヴィトルム・アクチボラゲット（プブリクト） 新規プロセス
TWI369401B (en) * 2005-07-05 2012-08-01 Ares Trading Sa Serum-free culture medium for the production of recombinant gonadotropins
WO2007041635A2 (en) * 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
WO2007044616A2 (en) 2005-10-06 2007-04-19 Xencor, Inc. Optimized anti-cd30 antibodies
ES2474573T3 (es) * 2006-01-04 2014-07-09 Baxter International Inc Medio de cultivo celular sin oligop�ptidos
US20070190057A1 (en) 2006-01-23 2007-08-16 Jian Wu Methods for modulating mannose content of recombinant proteins
EP3255141B1 (en) 2006-07-13 2021-12-01 Wyeth LLC Production of antibodies with improved glycosylation pattern
PL2054074T3 (pl) 2006-08-04 2015-03-31 Prolong Pharmaceuticals Llc Zmodyfikowana erytropoetyna
PL2383297T3 (pl) 2006-08-14 2013-06-28 Xencor Inc Zoptymalizowane przeciwciała ukierunkowane na CD19
AU2007294731B2 (en) 2006-09-13 2014-04-17 Abbvie Inc. Cell culture improvements
EP2500416A1 (en) * 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
WO2008036688A2 (en) * 2006-09-18 2008-03-27 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target hm1.24
JP5175336B2 (ja) * 2007-04-16 2013-04-03 モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 細胞表面グリコシル化に関連する方法
WO2008128219A1 (en) 2007-04-16 2008-10-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Comparative analysis of protein conformations by using 2d noesy nmr spectra
WO2008128222A1 (en) * 2007-04-16 2008-10-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Analysis of phosphorylated glycans, glycopeptides or glycoproteins by imac
TW200902708A (en) 2007-04-23 2009-01-16 Wyeth Corp Methods of protein production using anti-senescence compounds
WO2008136398A1 (ja) * 2007-04-26 2008-11-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 高濃度アミノ酸含有培地を用いた細胞の培養方法
GB0710614D0 (en) * 2007-06-04 2007-07-11 Lonza Biologics Plc Mammalian expression vector with a highly efficient secretory signal sequence
CN101319200B (zh) * 2007-06-08 2010-05-19 中国科学院大连化学物理研究所 一种适用于微囊化cho细胞的无血清培养基及其应用
WO2008154014A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Amgen Inc. A method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
US7580304B2 (en) * 2007-06-15 2009-08-25 United Memories, Inc. Multiple bus charge sharing
ES2657055T3 (es) * 2007-08-09 2018-03-01 Wyeth Llc Uso de perfusión para mejorar la producción de un cultivo de células alimentado por lotes en biorreactores
PT2592148T (pt) 2007-10-12 2018-11-12 Hoffmann La Roche Expressão proteica de múltiplos ácidos nucleicos
HRP20150279T1 (hr) 2007-12-26 2015-05-08 Xencor, Inc. Fc inaäśice s promijenjenim vezanjem na fcrn
SG187397A1 (en) * 2007-12-27 2013-02-28 Baxter Int Cell culture processes
KR101594046B1 (ko) * 2008-01-09 2016-02-15 첼카 게엠베하 개선된 배양 배지 첨가제 및 이를 이용한 방법
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
SI4269578T1 (sl) 2008-03-06 2024-07-31 Halozyme, Inc. Sestava topne hialuronidaze
CA2716801A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Wyeth Llc Methods for identifying cells suitable for large-scale production of recombinant proteins
CN102007207B (zh) * 2008-04-18 2012-05-30 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 一种浓缩培养液及其使用方法
DE102008002210A1 (de) 2008-06-04 2009-12-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur fermentativen Herstellung von Erythropoietin
US8058407B2 (en) * 2008-10-31 2011-11-15 Wyeth Llc Purification of acidic proteins using ceramic hydroxyapatite chromatography
PT2356247E (pt) * 2008-11-12 2015-10-26 Baxalta Inc Método de produção de fator vii isento de soro e de insulina
EP2379710A1 (en) * 2008-12-19 2011-10-26 Schering Corporation Feed supplement for mammalian cell culture and methods of use
CA2743181A1 (en) 2008-12-19 2010-06-24 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to modified glycans
JP5764068B2 (ja) 2008-12-30 2015-08-12 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ アルキル−アミン−ｎ−オキシド（ＡＡＮＯｘ）を用いる細胞増殖を増強する方法
US8962274B2 (en) * 2009-02-27 2015-02-24 Novartis Ag Methods for selecting eukaryotic cells expressing a heterologous protein
EP2417248B1 (en) 2009-04-09 2019-05-22 Sartorius Stedim Cellca GmbH Method for improved single cell cloning
SG177613A1 (en) 2009-07-10 2012-03-29 Linzy O Scott Iii Methods and compositions for treating thyroid-related medical conditions with reduced folates
CN104962539B (zh) 2009-07-31 2019-09-17 百深公司 用于adamts蛋白表达的细胞培养基
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
EA022396B1 (ru) 2009-09-23 2015-12-30 Ратиофарм Гмбх Способ очистки рекомбинантного эритропоэтина человека (epo), эритропоэтин, очищенный данным способом, и фармацевтические композиции, содержащие такой эритропоэтин
SI2493922T1 (sl) 2009-10-26 2017-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za proizvodnjo glikoziliranega imunoglobulina
US9045536B2 (en) 2009-12-23 2015-06-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Cell line 3M
WO2011091078A2 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Xencor, Inc. Antibody fc variants with enhanced complement activity
CA2797356C (en) 2010-04-26 2020-12-29 Novartis Ag Improved cell culture medium
PL2563906T3 (pl) 2010-04-26 2018-04-30 Novartis Ag Sposób hodowli komórek cho
CN102234627B (zh) * 2010-04-30 2015-06-03 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种培养基添加剂及其应用
WO2012006594A1 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Baxter International Inc. Method of producing recombinant adamts13 in cell culture
SG187198A1 (en) 2010-08-05 2013-03-28 Amgen Inc Dipeptides to enhance yield and viability from cell cultures
WO2012091023A1 (ja) 2010-12-27 2012-07-05 協和発酵キリン株式会社 培地およびキレート剤を含む水溶液の調製方法
WO2012145682A1 (en) * 2011-04-21 2012-10-26 Amgen Inc. A method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
US9062106B2 (en) 2011-04-27 2015-06-23 Abbvie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
KR101591671B1 (ko) 2011-04-29 2016-02-04 바이오콘 리서치 리미티드 항체의 이질성을 감소시키는 방법 및 그 항체의 제조방법
CN103797110B (zh) 2011-07-12 2017-08-25 食品安全测试系统公司 沙门氏菌和大肠杆菌的培养基和培养方法以及用于检测沙门氏菌和大肠杆菌的方法
KR101602286B1 (ko) * 2011-07-13 2016-03-10 푸드체크 시스템스, 아이엔씨. 리스테리아를 배양하기 위한 배양 배지, 방법, 및 리스테리아를 검출하기 위한 방법
RU2663794C2 (ru) 2011-10-21 2018-08-09 Пфайзер Инк. Добавление железа для улучшения культивирования клеток
AU2013222188A1 (en) 2012-02-22 2014-09-11 Amgen Inc. Autologous mammalian models derived from induced pluripotent stem cells and related methods
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
DK2711426T3 (en) 2012-09-24 2015-07-13 Lonza Biologics Plc Expression vectors comprising chimeric cytomegalovirus promoter and enhancer sequences
HK1207960A1 (en) 2013-03-12 2016-02-19 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
ITTO20130493A1 (it) * 2013-06-14 2014-12-15 Determinants Of Metabolism Res Lab S R L Composizione per l'eliminazione di animali molesti infestanti
JP6190205B2 (ja) * 2013-08-08 2017-08-30 極東製薬工業株式会社 無タンパク質・無脂質培地馴化細胞株、その製造方法及び培地
JP6195191B2 (ja) * 2013-08-08 2017-09-13 極東製薬工業株式会社 無タンパク質・無脂質培地馴化細胞株を用いた組換えタンパク質の製造方法
WO2015031686A1 (en) 2013-08-30 2015-03-05 Amgen Inc. High titer recombinant aav vector production in adherent and suspension cells
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2016049363A1 (en) * 2014-09-24 2016-03-31 Los Alamos National Security, Llc Bio-assessment device and method of making the device
MX377591B (es) 2014-10-15 2025-03-10 Amgen Inc Elementos promotores y reguladores para mejorar la expresión de genes heterólogos en células hospederas.
JP6432774B2 (ja) * 2014-12-25 2018-12-05 江南化工株式会社 細胞賦活剤
WO2017118726A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Lonza Ltd Inhibition of protein degradation for improved production
US10119117B2 (en) 2016-01-28 2018-11-06 Nanogen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd Universal, glycosylation enhancer, completely chemically defined medium formulation
CN108925137A (zh) * 2016-02-22 2018-11-30 新加坡科技研究局 细胞培养基
US10689873B2 (en) 2016-03-10 2020-06-23 Lonza Ltd Customizable facility
WO2017156420A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Lonza Ltd Customizable facility
BR112018071107A2 (pt) 2016-04-14 2019-04-16 Lonza Ltd composições e métodos para a detecção de proteínas da célula hospedeira
TWI734775B (zh) 2016-04-26 2021-08-01 美商美國泰福生技股份有限公司 細胞培養基
WO2017191165A1 (en) 2016-05-03 2017-11-09 Lonza Ltd Modulation of lipid metabolism for protein production
IL263342B2 (en) 2016-06-10 2023-11-01 Lonza Ag Method for stabilizing proteins
SG11201900528PA (en) 2016-08-02 2019-02-27 Lonza Ag Customizable facility
JP2019533135A (ja) 2016-08-12 2019-11-14 ロンザ リミテッドＬｏｎｚａ Ｌｉｍｉｔｅｄ 宿主細胞タンパク質のプロテオーム解析
US11166915B2 (en) 2016-09-16 2021-11-09 Leukocare Ag Method for obtaining efficient viral vector-based compositions for vaccination or gene therapy
KR20190053908A (ko) 2016-09-16 2019-05-20 로이코케어 아게 가공 동안 바이오 의약품의 안정화를 위한 신규한 방법
CN106635958A (zh) * 2016-12-24 2017-05-10 严志海 一种中国仓鼠卵巢细胞培养基
JP7021245B2 (ja) 2017-03-10 2022-02-16 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 多重特異性抗体を生産するための方法
US12054733B2 (en) 2017-06-16 2024-08-06 Lonza Ltd Universal self-regulating mammalian cell line platform for the production of biologics
JP2020533983A (ja) 2017-09-15 2020-11-26 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 目的のポリペプチドのラージスケールの製造間のオンラインバイオマス静電容量モニタリング
CA3083236A1 (en) 2017-12-05 2019-06-13 Lonza Ltd Methods of assaying tropolone
EP3741853B1 (en) 2018-02-02 2023-11-22 Lonza Ltd. Methods of cell selection and modifying cell metabolism
JP7462566B2 (ja) 2018-03-16 2024-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー タンパク質生産の間の代謝酵素活性およびジスルフィド結合還元
US20190300841A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Bristol-Myers Squibb Company Control of cell growth through a temperature feedback loop
US12071607B2 (en) 2018-06-01 2024-08-27 Lonza Ltd. Midscale model for organic growth and phasing
US12497624B2 (en) 2018-07-13 2025-12-16 Lonza Ltd Methods for improving production of biological products by reducing the level of endogenous protein
WO2020028616A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Lonza Ltd Methods for manufacturing recombinant protein comprising a disulfide bond
CN110343666B (zh) * 2019-07-10 2023-05-30 通化东宝药业股份有限公司 一种cho细胞培养的补料培养基及其制备方法和应用
US20220403398A1 (en) 2019-11-14 2022-12-22 Lonza Ltd Methods of cell selection
SG11202110968VA (en) 2019-12-06 2021-10-28 Regeneron Pharma Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same
EP4130238A4 (en) * 2020-03-25 2024-05-15 Ajinomoto Co., Inc. HEPES-CONTAINING MEDIUM
AU2021268026A1 (en) 2020-05-08 2023-01-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. VEGF traps and mini-traps and methods for treating ocular disorders and cancer
KR20230124578A (ko) 2020-12-22 2023-08-25 암젠 인크 세포 배양 방법
WO2023045140A1 (zh) * 2021-09-26 2023-03-30 上海迈泰君奥生物技术有限公司 一种提高宿主细胞中抗体表达量的方法
CN113846051B (zh) * 2021-09-28 2023-12-01 无锡多宁生物科技有限公司 一种通用型化学成分限定cho细胞传代培养基及其应用
EP4680761A1 (en) 2023-03-14 2026-01-21 Sonnet BioTherapeutics, Inc. Methods of making recombinant il-12 albumin binding domain fusion proteins

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE65933C (de) Rheinische Gesellschaft für metall Ventileinrichtung für Spirituskocher
US4205126A (en) 1978-01-01 1980-05-27 Cartaya Oscar A Serum-free cell culture media
HU200615B (en) * 1982-05-05 1990-07-28 Genentech Inc Methods of preparing tissue plasiminogen activator derivative composition
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
FR2543158B1 (fr) 1983-03-24 1985-11-15 Inst Nat Sante Rech Med Milieu de culture de cellules animales sans serum, sans hormones et sans facteurs de croissance et procedes de culture primaire et d'obtention de lignees cellulaires utilisant ce milieu
US4767704A (en) * 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4777245A (en) 1984-01-06 1988-10-11 Genelabs Incorporated Non-human primate monoclonal antibodies and methods
EP0164813B1 (en) 1984-06-14 1991-10-09 Teijin Limited Method of cultivating animal or plant cells
JPS6125480A (ja) 1984-07-13 1986-02-04 Nitsusui Seiyaku Kk 細胞用の無血清合成培地
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
GB8531925D0 (en) 1985-12-31 1986-02-05 Bass Plc Propagation of yeast
GB8607679D0 (en) * 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
CA1297434C (en) 1986-04-14 1992-03-17 Kenji Murakami Method of producing peptides, recombinant plasmid for use in the same and animal cells transformed with the same
US4677704A (en) * 1986-04-22 1987-07-07 Huggins Richard A Cleaning system for static charged semiconductor wafer surface
DE3785086T2 (de) 1986-06-04 1993-07-08 Agency Ind Science Techn Zubereitung fuer zellkultur und ihre verwendung.
JPS637780A (ja) 1986-06-28 1988-01-13 Nippon Zenyaku Kogyo Kk 細胞への鉄供給方法
JP2520681B2 (ja) * 1986-08-04 1996-07-31 ザ ユニバーシティ オブ ニュー サウス ウェールズ 生合成のヒトの成長ホルモン製品
CS262822B1 (en) 1986-10-03 1989-04-14 Kovar Jan Synthetic medium for the cultivation of myelomic cells
US5045468A (en) 1986-12-12 1991-09-03 Cell Enterprises, Inc. Protein-free culture medium which promotes hybridoma growth
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP2749011B2 (ja) 1987-02-05 1998-05-13 鐘淵化学工業 株式会社 無血清培地で増殖継代可能な細胞およびその取得方法
JPS63196268A (ja) * 1987-02-10 1988-08-15 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 無血清培地で継代増殖可能な形質転換細胞、その育種方法およびその細胞による蛋白質の生産方法
DE3871206D1 (de) 1987-03-24 1992-06-25 Grace W R & Co Basisnaehrmedium fuer eine zellkultur.
CA1341235C (en) 1987-07-24 2001-05-22 Randy R. Robinson Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
JP2796547B2 (ja) 1987-09-11 1998-09-10 ジェネンテク，インコーポレイテッド 組換え細胞培養中でのポリペプチド発現の増大法
IL87737A (en) * 1987-09-11 1993-08-18 Genentech Inc Method for culturing polypeptide factor dependent vertebrate recombinant cells
JPH02438A (ja) * 1987-10-09 1990-01-05 Collaborative Res Inc 修飾した低分子量プラスミノーゲン活性化因子およびその製造方法
FI884924L (fi) 1987-10-28 1989-04-29 Oncogen Humanimmuglobulin som producerats med hybrid-dna-teknik.
DE3801236A1 (de) * 1988-01-18 1989-07-27 Boehringer Mannheim Gmbh Pentosansulfat-medium
US5846534A (en) 1988-02-12 1998-12-08 British Technology Group Limited Antibodies to the antigen campath-1
JP3121823B2 (ja) * 1988-02-12 2001-01-09 ビーティージー・インターナショナル・リミテッド 抗体におけるまたは抗体に関する改良
WO1990003429A1 (en) 1988-09-23 1990-04-05 Cetus Corporation Lipid microemulsions for culture media
CA1341552C (en) 1988-09-23 2007-10-02 Kenneth Alonso Method of producing human-human hybridomas, the production of monoclonal and polyclonal antibodies therefrom, and therapeutic use thereof
JPH0322972A (ja) * 1989-01-12 1991-01-31 Ajinomoto Co Inc 無血清培地
CA2010424A1 (en) * 1989-02-27 1990-08-27 Walter F. Prouty Tissue culture method
US5135866A (en) 1989-03-03 1992-08-04 W. R. Grace & Co.-Conn. Very low protein nutrient medium for cell culture
CA2001550A1 (en) * 1989-03-03 1990-09-03 Aaron H. Heifetz Very low protein nutrient medium for cell culture
GB8905669D0 (en) 1989-03-13 1989-04-26 Celltech Ltd Modified antibodies
EP0404003A3 (en) 1989-06-19 1991-10-16 Xoma Corporation Chimeric mouse-human km10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen
CA2066720A1 (en) 1989-09-19 1991-03-20 David M. Knight Method for improving human monoclonal antibody production
DE69028713T3 (de) 1989-12-27 2004-05-13 Centocor, Inc. Schimäre immunoglobuline für cd4-rezeptoren
US5122469A (en) * 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB9022543D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Antibody production
DE4115722A1 (de) 1991-05-14 1992-11-19 Boehringer Mannheim Gmbh Serumfreies medium zur kultivierung von saeugerzellen
EP0523949B1 (en) 1991-07-15 2003-06-25 The Wellcome Foundation Limited Production of antibodies
ES2196002T3 (es) 1991-07-25 2003-12-16 Idec Pharma Corp Anticuerpos recombinantes para terapia humana.
IL103418A (en) 1991-10-15 1997-11-20 Wellcome Found Therapeutic agent for the t-cell mediated inflammation of the joints and its production
US5429746A (en) 1994-02-22 1995-07-04 Smith Kline Beecham Corporation Antibody purification
AT407255B (de) 1997-06-20 2001-02-26 Immuno Ag Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons
KR20010069066A (ko) 2000-01-12 2001-07-23 이종원 저산소 농도하에서 생존이 가능하도록 하는 동물세포의배양방법
WO2003053462A2 (en) 2001-12-11 2003-07-03 Merck & Co., Inc. Staphylococcus aureus exopolysaccharide and process

Also Published As

Publication number Publication date
EP1221476A3 (en) 2003-09-17
EP0481791A2 (en) 1992-04-22
JPH0670757A (ja) 1994-03-15
EP1849862A2 (en) 2007-10-31
CA2053586C (en) 2003-07-29
JP2625302B2 (ja) 1997-07-02
DE69133589T2 (de) 2009-01-08
EP1849862A3 (en) 2008-02-13
DK0481791T3 (da) 2003-12-08
EP1221476B1 (en) 2008-01-02
CA2053586A1 (en) 1992-04-18
AU645615B2 (en) 1994-01-20
US5316938A (en) 1994-05-31
ES2298301T3 (es) 2008-05-16
DE69133303D1 (de) 2003-10-02
IE913559A1 (en) 1992-04-22
GB9022545D0 (en) 1990-11-28
ATE248217T1 (de) 2003-09-15
DE69133303T2 (de) 2004-06-24
US5633162A (en) 1997-05-27
DK1221476T3 (da) 2008-05-13
EP0481791A3 (en) 1992-07-08
USRE41974E1 (en) 2010-11-30
ATE382680T1 (de) 2008-01-15
ZA918249B (en) 1993-04-16
USRE39792E1 (en) 2007-08-21
DE69133589D1 (de) 2008-02-14
AU8591591A (en) 1992-05-07
NZ240248A (en) 1994-11-25
EP0481791B1 (en) 2003-08-27
EP1221476A2 (en) 2002-07-10

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