ES2208260T3 - Pseudopeptidos fosfinicos inhibidores de las metaloproteasas matriciales. - Google Patents
Pseudopeptidos fosfinicos inhibidores de las metaloproteasas matriciales.Info
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Abstract
Pseudopéptido fosfínico cuya fórmula es: en la cual R4 - R1 es un grupo que bloquea una función amina, escogido entre los grupos t-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, cinamoilo, pivaloilo, N-fluorenil-metoxicarbonilo, acetilo, benciloxiacetilo, fenilaminoacetilo, (m-clorofenil)aminoacetilo, (2-hidroxi-5-cloro-fenil)aminoacetilo, indolil-2-carbonilo, 4, 6-dicloro indolil-2-carbonilo, quinolil-2-carbonilo y 1-oxa-2, 4-dicloro-7-naftanelo carbonilo, en el que un residuo de aminoácido o de péptido cuya función amino terminal está bloqueada por un grupo bloqueante escogido entre los grupos t-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, cinamoilo, pivaloilo, N-fluorenil-metoxicarbonilo, acetilo, benciloxiacetilo, fenilaminoacetilo, (m-clorofenil)aminoa-cetilo, (2-hidroxi-5-cloro-fenil)aminoacetilo, indolil-2-carbonilo, 4, 6-dicloro indolil-2-carbonilo, quinolil-2-carbonilo y 1-oxa-2, 4-dicloro-7-naftanelo carbonilo; - R2 representa la cadena lateral de un ácido aminado, natural o no natural, escogido entre la alanina, la arginina, la asparagina, el ácido aspártico, la cisteína, la glutamina, el ácido glutámico, la glicina, la histidina, la isoleucina, la leucina, la norleucina, la lisina, la metionina, la fenilalanina, la prolina, la hidroxiprolina, la serina, la treonina, el triptofano, la tirosina, la valina, la nitrofenilalanina, la homoarginina, la tiazolidina y la deshidroprolina; - R3 representa: 1) la cadena lateral de un ácido aminado natural salvo Gly y Ala, no sustituida o sustituida por un grupo arilo, 2) un grupo aralquilo, o 3) un grupo alquilo de al menos 3 átomos de carbono; y - R4 representa un grupo dinitrobencilo o una cadena lateral de ácido aminado natural o no natural, escogido entre la alanina, la arginina, la asparagina, el ácido aspártico, la cisteína, la glutamina, el ácido glutámico, la glicina, la histidina, la isoleucina, la leucina, la norleucina, la lisina, la metionina, la fenilalanina, la prolina, la hidroxiprolina, la serina, la treonina, el triptofano, latirosina, la valina, la nitrofenilalanina, la homoarginina, la tiazolidina y la deshidroprolina.
Description
Pseudopéptidos fosfínicos inhibidores de las
metaloproteasas matriciales.
La presente invención tiene por objeto a los
pseudopéptidos fosfínicos, utilizables en particular como
inhibidores muy potentes y específicos de las metaloproteasas de
cinc matriciales (MMP), y en particular la MMP-11,
MMP-2, MMP-9 y
MMP-8. Por el contrario, estos pseudopéptidos
aparecen muy poco activos frente a los MMP-1 y
MMP-7. De esta forma, estos inhibidores ofrecen la
posibilidad de no bloquear "in vivo" más que a una
subfamilia de MMP, y se podría, pues, conseguir que fueran menos
tóxicos que los inhibidores de MMP de muy ancho espectro de
actividad.
Estos pseudopéptidos pueden tener aplicaciones en
el tratamiento de enfermedades caracterizadas por la sobreexpresión
de las proteasas matriciales, tales como la degeneración de tejidos
conjuntivos y articulares, las artritis reumatoides, las
osteoartritis, el aneurisma aórtico y el cáncer.
Sobre la base de estudios realizados "in
vivo" en animales, estos inhibidores fosfínicos parece que
pueden ser utilizados en compuestos farmacéuticos para bloquear el
crecimiento de tumores primarios o secundarios.
Las metaloproteasas de cinc matriciales (MMP)
representan una familia de enzimas capaces colectivamente de
exfoliar el conjunto de proteínas de la matriz extracelular.
Respecto de su función sobre las proteínas de la matriz
extracelular, estas enzimas ejercen una función muy importante
referida al desarrollo y al curso de los diferentes procesos de
remodelación tisular, como la involución de la glándula mamaria, la
cicatrización y la extravasión de células especializadas de la
respuesta inmunitaria.
Hoy en día se conocen hasta una quincena de
enzimas que pertenecen a la familia de las MMP:
| Matrixinas | |
| MMP-1 | Colagenasa intersticial |
| MMP-8 | Colagenasa de neutrófila |
| MMP-13 | Colagenasa 3 |
| MMP-18 | Colagenasa 4 |
| MMP-3 | Estromelisina 1 |
| MMP-10 | Estromelisina 2 |
| MMP-11 | Estromelisina 3 |
| MMP-2 | Gelatinasa-A |
| MMP-9 | Gelatinasa-B |
| MMP-12 | Metaloelastasa |
| MMP-14 | MT-1 MMP |
| MMP-15 | MT-2 MMP |
| MMP-16 | MT-3 MMP |
| MMP-17 | MT-4 MMP |
| MMP-7 | Matrilisina |
Las colagenasas aparecen como las únicas MMP que
son capaces de exfoliar el colágeno bajo forma fibrilar. Las
gelatinasas A y B se caracterizan por su capacidad de exfoliar el
colágeno de tipo IV, muy abundante a nivel de las membranas basales
y del colágeno en forma desnaturalizada. Las estromelisinas 1 y 2
serían responsables de la degradación de otras proteínas de la
matriz extracelular, como la fibronestina y diferentes
proteoglicanos. Las MT-MMP estarían implicadas
sobretodo en la activación de la gelatinasa A, y, por el hecho de su
localización membranaria, estas matrixinas ejercerían la función de
receptor membranario de la gelatinasa A. Debemos destacar que el
sustrato fisiológico de la estromelisina-3 no es
siempre conocido. Sin embargo, muchos trabajos sobre esta proteasa
que ha sido inicialmente caracterizada en tumores de seno, sugieren
que la estromelisina-3 es un importante factor de
desarrollo y supervivencia de los tumores.
Las MMP aparecen sobreexpresadas en diferentes
patologías del hombre, especialmente el cáncer. En esta patología,
la función de las MMP ha estado asociada desde hace tiempo a la
invasión de las células tumorales y a su capacidad de franquear
diferentes barreras para formar tumores secundarios. Más
recientemente, diferentes estudios han establecido que estas
proteasas ejercen ciertamente una función más fundamental en la
cancerogénesis, participando destacadamente en el crecimiento de los
tumores primarios. Entre diferentes hipótesis para explicar esta
función de las MMP, las más estudiadas referidas a su función
en:
- su capacidad para poder, por proteolisis de
proteínas de la matriz extracelular, liberar de esta matriz los
factores de crecimiento indispensables para el desarrollo y
supervivencia de los tumores, y
- la angiogénesis, necesaria para el crecimiento
de los tumores.
La implicación aparente de las MMP en el
crecimiento de los tumores ha llevado a diferentes equipos en todo
el mundo a interesarse por la función de compuestos capaces de
inhibir estas enzimas.
Diversos programas de síntesis sobre los
inhibidores de las MMP han sido iniciados desde hace varios años. En
esa época, las aplicaciones sobre los inhibidores de la MMP
encaraban sobre todo las enfermedades inflamatorias de los tejidos
conjuntivos. Sólo más recientemente se han desarrollado múltiples
programas sobre la aplicación de los inhibidores de MMP en
cancerología, como se ha descrito por Brown, Medical Oncology, 1997,
14, 1-10, (1). En efecto, como se ha recordado
anteriormente, los trabajos que demuestran que las MMP deben ser
consideradas como objetivos privilegiados para desarrollar nuevos
agentes anticancerígenos son relativamente recientes. A este
respecto, se puede significar que, en el año 1997, 67 patentes
referidas a la síntesis de los inhibidores de MMP han sido
registradas en todo el mundo, y que la mayoría se refiere a las
aplicaciones en cancerología, como se ha descrito por Beckett y
col., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents, 8, pág.
259-289 (2). En la mayor parte de estas patentes,
los compuestos sintetizados que pertenecen a la familia de los
derivados pseudo peptídicos que comportan una función de
hidroximato. Algunas patentes se refieren a compuestos
pseudopeptídicos que poseen funciones
carboxil-alquil, o tiol. En estos compuestos, las
funciones de hidroxamato, tiol, o carboxil-alquil
interactúan con el átomo de cinc presente en la base activa de las
MMP. Los compuestos más avanzados por su actividad anticancerosa has
sido desarrollados por la firma British Biotechnology. Dos
compuestos, el Batismatat BB94 y el Marimastat han sido objeto de
estudios clínicos en fases II y III en el hombre. Además, parece que
otras firmas (Roche, Bayer, Agouron, Novartis) han conducido
estudios clínicos en fases I y II sobre los inhibidores de MMP en
cancerología.
Así, ninguno de los compuestos susceptibles de
inhibir las MMP conocidas por las referencias (1) y (2) está
constituido por un pseudopéptido fosfínico.
El documento: Goulet y col., Bioorg. Med. Chem.
Lett. 4, 1994, pág. 1221-1224 (3), describe sin
embargo pseudopéptidos fosfínicos utilizables como inhibidor
selectivo de la estromelisina-1
(MMP-3), que incluyen la secuencia final:
Caldwell y col., Bioorg. Med. Chem. Letter 6,
1996, pág.323-328 (4), describen igualmente un
pseudopéptido fosfínico que es un inhibidor selectivo de la
estromelisina-1 (MMP-3), que incluye
la misma secuencia terminal que el pseudopéptido de la referencia
(3).
En estas referencias (3) y (4), se busca una
actividad frente a la MMP-3, mientras que en la
invención, se busca una actividad selectiva frente a las
MMP-11, MMP-2, MMP-9
y MMP-8. Por otra parte se debe remarcar que en la
presente invención, R\Rightarrow no es solamente un residuo
feniletilo. Y que además de ello, la invención demuestra que otros
sustituyentes en esta posición forman compuestos de poder inhibidor
reforzado.
Los documentos
FR-A-2 676 059 (5),
FR-A-2 689 764 (6) y
EP-A-0 725 075 (7) ilustran los
pseudopéptidos fosfínicos presentando una actividad inhibidora
frente a las colagenasas bacterianas y a las endopeptidasas de cinc
24.15 y 24.16.
El documento WO 98/03516 describe inhibidores de
metaloproteasas matriciales a base de fosfinato que responden a la
fórmula:
en la cual R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4},
R^{5}, R^{6} y R^{16} pueden representar agrupamientos muy
numerosos.
El documento WO 93/14112 describe derivados
peptídicos fosfínicos que responden a la fórmula:
en la cual X, Y, R_{1}, R_{2}, R_{3} y
R_{4} pueden tener significados muy diversos, que son útiles para
el tratamiento de enfermedades que ponga en cuestión a las
metaloproteinasas
matriciales.
La presente invención tiene precisamente por
objeto a los nuevos pseudopéptidos fosfínicos que presentan una
actividad inhibidora potente y específica frente a las
metaloproteasas de cinc matriciales MMP-11,
MMP-2, MMP-9 y
MMP-8.
Según la invención, el pseudopéptido fosfínico
responde a la fórmula:
en la
cual:
- R^{1} es un grupo que bloquea una función
amina, o un residuo de aminoácido o de péptido de función amino
terminal bloqueada, tal y como se ha definido en la reivindicación
1;
- R^{2} representa la cadena lateral de un
ácido aminado natural o no natural, tal y como se ha definido en la
reivindicación 1;
- R^{3} representa:
- 1.
- la cadena lateral de un ácido aminado natural salvo Gly y Ala, no sustituida o sustituida por un grupo arilo,
- 2.
- un grupo aralquilo, o
- 3.
- un grupo alquilo de al menos 3 átomos de carbono; y
- R^{4} representa una cadena lateral de ácido
aminado natural o no natural tal y como se define en la
reivindicación 1, o un grupo dinitrobencilo.
Este pseudopéptido de fórmula (I) es un
pseudo-tripéptido que posee una agrupación química
de tipo fosfínico que tiene por función quelatar el átomo de cinc de
las MMP. En este pseudo-tripéptido, la elección de
los grupos R^{2}, R^{3} y R^{4} permite asegurar la
interacción del tripéptido respectivamente con las
sub-bases S1, S1' y S2' de la MMP. Se supone que el
grupo R^{1} interactuará en la unión de las
sub-bases S3/S2.
En la definición dada anteriormente de los
pseudopéptidos de la invención, los términos "aminoácido"
utilizados para R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} en (5) se
refieren a los veinte á-aminoácidos hallados habitualmente en las
proteínas que son conocidos igualmente bajo el nombre de aminoácidos
estándar, y a sus análogos. Las cadenas laterales de estos
aminoácidos incluyen los grupos alquilo lineales y ramificados,
hidroxialquilo, carboxialquilo, aralquilo, aminoalquilo, carboxamida
alquilo, mercapto alquilo, fenilalquilo, hidroxifenilalquilo,
guanidinoalquilo, imidazolalquilo, indolilalquilo, y
pirrolidinilo.
A título de ejemplo de ácidos aminados
utilizables, podemos citar la alanina, la arginina, la asparagina,
el ácido aspártico, la cisteína, la glutamina, el ácido glutámico,
la glicina, la histidina, la isoleucina, la leucina, la norleucina,
la lisina, la metionina, la fenilalanina, la prolina, la
hidroxiprolina, la serina, la treonina, el triptófano, la tirosina,
la valina, la nitrofenilalanina, la homo-arginina,
la tiazolidina y la deshidroprolina.
Sin embargo, y en el caso de R^{3}, el ácido
aminado no puede ser Gly o Ala pues estos no presentan una
interacción suficiente con la sub-base S1' de las
MMP.
Preferentemente, el ácido aminado utilizado para
R^{3} es escogido entre Phe, Leu o bien entre residuos Ser, Cys en
los que la cadena lateral se ha sustituido por un grupo
arilalquilo.
Los grupos arilo susceptibles de ser utilizados
son aquellos que se derivan de un núcleo aromático monocíclico o
policíclico, sustituido eventualmente por grupos alquilo o alkoxi. A
título de ejemplo de los grupos arilo utilizables, se pueden citar
los grupos fenilo, naftilo, bencilo y alcoxibencilo como el
p-metoxibencilo.
R^{3} puede también representar un grupo
aralquilo. En este grupo aralquilo, el grupo arilo puede ser uno de
los mencionados anteriormente. La parte alquilo del grupo aralquilo
puede ser una cadena lineal o ramificada de 1 a 6 átomos de
carbono.
A título de ejemplo de grupos aralquilo
utilizables, se pueden citar los grupos de fórmulas:
siendo n un número entero de 1 a 4,
y
siendo p igual a 1 ó
2.
Los grupos alquilo utilizables para R^{3}
tienen al menos 3 átomos de carbono. Pueden ser lineales o
ramificados y tienen preferentemente un máximo de 7 átomos de
carbono. A título de ejemplo de los grupos alquilo utilizables, se
puede citar a los grupos CH_{3}-(CH_{2})_{6}- y
(CH_{3})_{2}-CH-CH_{2}-.
Preferentemente, R^{3} representa un grupo que
responde a una de las fórmulas siguientes:
Según la invención, R^{2} se ha escogido de
forma que interaccione con la sub-base S1 de las
MMP. Se obtienen buenos resultados cuando R^{2} representa el
grupo metilo o bencilo; preferentemente R^{2} es del grupo
bencilo, lo cual corresponde a la cadena lateral de Phe.
Según la invención, R^{4} se ha escogido de
forma que interaccione con la sub-base S2' de las
MMP. Se obtienen buenos resultados cuando R^{4} representa la
cadena lateral de Trp o un grupo dinitrobencilo (Dpa).
En el pseudopéptido de la invención, las cadenas
laterales R^{2}, R^{3} y R^{4} de los ácidos aminados pueden
ser en forma de L o D. También, el pseudopéptido puede estar
constituido por un solo isómero o por una mezcla de
4-diasteroisómeros proveniente de la presencia de
dos centros asimétricos a nivel de los
carbono-\alpha incluyendo los residuos R^{2} y
R^{3}. Aunque pueda convenir cualquier combinación de los ácidos
aminados, es preferible que el carbono asimétrico del ácido
aminado:
sea en forma de
L.
\newpage
Al contrario, tres o cuatro diasteroisómeros que
corresponden a las diferentes configuraciones de R^{2} y R^{3}
tienen actividades prácticamente equivalentes como inhibidores de
las MMP.
En los pseudopéptidos de la invención, R^{1}
puede representar diversos agrupamientos cuya naturaleza influya en
la afinidad del pseudopéptido frente a los diversos MMP.
R^{1} representa un "grupo que bloquea una
función amina". Estos términos incluyen los grupos
t-butoxi-carbonilo,
benciloxicarbonilo, cinamoila, pivalolilo y
N-(I-fluorenil-metoxicarbonilo)
Fmoc.
R^{1} representa los grupos bloqueantes
escogidos entre los grupos acetilo, benciloxiacetilo,
fenilaminoacetilo, (m-clorofenil) aminoacetilo,
(2-hidroxi-5-cloro-fenil)amino
acetilo, indolil-2-carbonilo,
4,6-dicloro-indolil-2-carbonilo,
quinolil-2-carbonilo y
1-oxa-2,4-dicloro-7-naftaleno
carbonilo, o incluso un residuo de aminoácido o de péptido cuya
función amina terminal está bloqueada por un grupo apropiado. A
título de ejemplo de tales residuos, se pueden citar los grupos
Z-Ala y Z-Leu en los cuales Z
representa el grupo benciloxicarbonilo.
Los pseudopéptidos de la invención pueden ser
preparados por procedimientos clásicos a partir de bloques
fosfínicos de fórmula:
en la cual Z representa el grupo
benciloxicarbonilo y Ad el grupo adamantilo, y del aminoácido
correspondiente a R^{4} por síntesis química en fase sólida según
los procedimientos descritos por Yotakis y col., J. Org. Chem.,
1996, 61, página 6601-6605 (8) y Jiracek y col., J.
Biol. Chem., 1995, 270, pág. 21701-21706 (9) y J.
Biol. Chem., 1996, 271, pág. 19606-19611
(10).
Los bloques fosfínicos de salida pueden ser
obtenidos por adición de Michael de un ácido fosfínico portador del
grupo R^{2}
sobre un acrilato que proporcione el grupo
R^{3}
con Et que representa el grupo
etilo.
Los acrilatos que proporcionan el grupo R^{3}
pueden ser sintetizados por vías diferentes, como se verá más
adelante.
Los pseudopéptidos de la invención pueden ser
utilizados para el tratamiento de enfermedades que representen una
sobreexpresión de las metaloproteasas de cinc matriciales.
Y también, la invención tiene todavía por objeto
una composición farmacéutica que inhiba al menos una metaloproteasa
de cinc matricial, que incluya al menos un pseudopéptido de fórmula
(I) tal como el que se ha definido en los párrafos anteriores.
\newpage
Preferentemente, esta composición inhibe una
metaloproteasa de cinc matricial escogida entre las
MMP-2, MMP-8, MMP-9
y MMP-11.
Esta composición está destinada al tratamiento de
una enfermedad caracterizada por la sobreexpresión de la proteasas
matriciales, tales como el cáncer.
La invención se refiere también a la utilización
de un pseudopéptido fosfínico de fórmula (I) como el que se ha
definido anteriormente, para la fabricación de un fármaco que inhiba
al menos una metaloproteasa de cinc matricial, en particular las
MMP-2, MMP-8, MMP-9
y MMP-11.
Otras características y ventajas de la invención
aparecerán mejor con la lectura de la descripción que sigue a
continuación, referida a los dibujos anexos.
La figura 1 es un esquema de síntesis de
pseudopéptidos conformes a la invención.
La figura 2 es un diagrama que ilustra la
eficacia antitumoral de un compuesto de la invención, que da el
volumen (medio) del tumor (en mm^{3}) en función del tiempo (en
días) después de la inyección de células cancerosas en ratones
testigo y en ratones tratados con el pseudopéptido de la
invención.
Los ejemplos 1 a 27 que siguen, ilustran la
fabricación de pseudopéptidos conformes a la invención.
En la figura 1, se ha representado el esquema de
síntesis de los pseudopéptidos de la invención, que pone en juego
una primera reacción para la fabricación de bloques fosfínicos 3 a
partir de un ácido fosfínico 1 portador del grupo R^{2} y de un
acrilato 2 proporcionando el grupo R^{3}, por adición de
Michael.
Después de la formación del bloque fosfínico 3,
se introduce un grupo adamantilo sobre la función hidroxifosfinilo
del bloque 4, después se elimina la función ester
C-terminal 5, y se efectúa una síntesis en fase
sólida del pseudopéptido por adición del ácido aminado deseado 6
sobre la función acida C-terminal.
En esta figura Z representa el grupo
benciloxicarbonilo.
Ejemplos del 1 al
5
Estos ejemplos ilustran la preparación de
acrilatos 2 que incluyen un grupo R^{3} con CH_{2} terminal por
el procedimiento siguiente:
Vista A
Esta síntesis corresponde al procedimiento
descrito por Eistetter y col. en J. Med. Chem., 25,
pág.109-113, 1982 (11).
Se describe a continuación esta síntesis en el
caso de que R^{3} represente los grupos ilustrados en la tabla
1.
A una solución de etóxido de sodio (10 mmol de
sodio en 11 ml de etanol absoluto), se añade en un periodo de 10
minutos, 10 mmol de malonato de dietilo. Se somete la solución a una
agitación a 50ºC, durante 1 hora, y después se añade gota a gota 10
mmol de bromuro requerido. Se somete la mezcla a una agitación
durante 6 horas a 50ºC, después se elimina el etanol bajo vacío y se
añade el éter dietílico. Se lava esta solución con agua, y con
salmuera y se seca en Na_{2}SO_{4} , y después se concentra para
obtener un residuo oleoso, que después de destilación da el diéster
cuya fórmula es:
con rendimientos del 40 al
65%.
A una solución de 10 mmol de diéster en 8 ml de
etanol, se añade una solución de KOH (10 mmol) en 8 ml de etanol, se
agita la mezcla durante 16 horas. Después de la evaporación del
disolvente orgánico, se trata el residuo con agua y se extrae con el
éster dietílico.
Se acidifica la fase acuosa con HC16N y se extrae
2 veces con el éster dietílico. Se secan las fases orgánicas sobre
Na_{2}SO_{4} y se las evapora para obtener los monoésteres cuya
fórmula es:
con rendimientos del 65 al
90%.
A una solución de monoéster en 0,8 ml de piridina
y 0,05 ml de piperidina, se añaden 6 mmol de paraformaldeido,
después se somete la mezcla a una agitación y a un calentamiento a
50-55ºC durante 3 horas. Después de añadir éter
dietílico, se lava la fase orgánica con agua y HC13N, después se
seca sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentra para obtener los
compuestos 2a a 2c de la tabla con los rendimientos indicados en
esta tabla.
Los puntos de fusión de los acrilatos 2a a 2e
obtenidos están detallados igualmente en la tabla 1.
En este ejemplo en el que R^{3} representa
CH_{2}R'^{3}, se realiza la síntesis del acrilato según la vía
de la síntesis siguiente:
Vía B
En este ejemplo, se utiliza esta vía de síntesis
para preparar el acrilato 2 en el cual R^{3} representa el grupo
CH_{3}(CH_{2})_{6}, o sea R'^{3} =
CH_{3}-(CH_{2})_{5}. Bajo atmósfera de argón, se añade
gota a gota una solución de bromuro de hexilo
CH_{3}(CH_{2})_{5} Br(1,65 g, 10 mmol) en
15 ml de éter dietílico absoluto a un frasco que contenga 0,22 g (11
mmol) de magnesio y del yodo I_{2} (catalítico) por un periodo de
90 minutos.
Se coloca la mezcla en reacción a contraflujo
durante una hora. Tras la adición de 0,18 mmol de CuI, se hace
decrecer la temperatura de la mezcla a -78ºC.
Se añade entonces lentamente una solución de 1,15
g (6,7 mmol) del compuesto:
en 10 ml de Et_{2}O: THF. Se agita la mezcla
durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después del tratamiento
de la mezcla con HCl 0,5N, NaHCO_{3} 5% y agua, se seca la capa
orgánica sobre Na_{2}SO_{4}. Se elimina el disolvente al vacío y
se purifica el residuo obtenido por cromatografía en columna
utilizando como eluyente una mezcla de éter de petróleo 40 a
60ºC/éter (13:1). Se obtiene así el compuesto 2f con un rendimiento
del 40%. Las características del compuesto 2f se detallan en la
tabla
1.
En este ejemplo, se prepara un acrilato 2 con
R_{3} = R'^{3} -CH_{2}- utilizando el procedimiento descrito
por Baldwin y col. J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1986, pág.
1339-1340, (12).
Esto corresponde al esquema de reacción
siguiente:
Vía C
Este procedimiento se utiliza para preparar el
acrilato 2g en el cual R^{3} representa el grupo cuya fórmula
es:
Se sitúa a contraflujo durante 12 horas una
mezcla de 1,9 g (10mmol) de bromometil acrilato de etilo y de 3,3 g
(20 mmol) de sal de sodio del ácido benceno sulfínico en 40 ml de
metanol. Se elimina el disolvente y se añade el éter dietílico. Se
lava la solución con agua, salmuera, se seca con Na_{2}SO_{4} y
se concentra para obtener 2 gramos de acrilato sulfínico
en forma de aceite, con un rendimiento del
80%.
A una mezcla de 2 g (8 mmol) de acrilato
sulfínico en 40 ml de benceno seco, se añade 4,7 g (16,4 mmol) de
hidruro de tri-n-butil estaño y 0,15
g (0,96 mmol) de 2,2'-azobisisobutironitrilo (AIBN).
Se sitúa la mezcla a contraflujo durante 1,5 horas, y después se
añade agua y se seca la capa orgánica extraída sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentra. Se purifica el producto bruto por
cromatografía en columna, utilizando como eluyente al éter del
petróleo (40 a 60ºC)/éter (9:1). Se obtiene 2,9 g de
alquiloestanano
con un rendimiento del
90%.
Se disuelve en 10 ml de benceno seco 1,47 g (3,6
mmol) de alquiloestanano y 0,39 g (1,8 mmol) de
2-bromoetil naftaleno. Después de añadir 0,064 g
(0,39 mmol) de AIBN, se sitúa la mezcla en reacción a contraflujo
durante 2 horas. Después de añadir agua, se separa la fase orgánica,
se la lava con agua, se seca sobre Na_{2}SO_{4} y se la
concentra eliminando la humedad. Se obtiene así 0,06 g del acrilato
2g incluido en la tabla 1, con un rendimiento del 13%, después de la
purificación del residuo en columna de cromatografía utilizando éter
del petróleo (40 a 60ºC)/éter (9:1) como eluyente.
Ejemplos 8 y
9
En estos ejemplos, se prepara un acrilato 2 en el
cual R^{3} corresponde a un átomo de azufre o un átomo de oxígeno,
según el siguiente esquema de síntesis:
En este esquema R^{3} corresponde a
RX-CH_{2} con X = S o O.
Se utiliza este procedimiento para preparar los
acrilatos 2h y 2i en los cuales R^{3} representa respectivamente
el grupo parametoxibenciltiometilo y el grupo benciltiometilo.
Se añade gota a gota una solución de 10 mmol de
tiol apropiado R-SH en 15 ml de metanol a una
solución agitada enfriada en un baño de hielo de 9 mmol de sodio en
20 ml de metanol durante un periodo de 30 minutos. Después de añadir
tiol, se concentra la mezcla en seco y se añade éter dietílico. Se
enfría la sal que precipita en un baño de hielo. Se filtra el
producto, se lava con Et_{2}O frío y se seca con P_{2}O_{5}
para obtener la sal de sodio con un rendimiento del 85 al 95%. A una
mezcla de 10 mmol de sal de sodio en suspensión en 40 ml de
Et_{2}O seco y enfriado en un baño de hielo, se añade gota a gota,
durante unos 45 minutos, una solución de bromometacrilato de etilo
(9 mmol) en 20 ml de éter dietílico. Se agita la solución durante 30
minutos a 0ºC y durante 1 ó 2 horas a temperatura ambiente. Se
diluye la mezcla en reacción con 20 ml de agua y se lava la capa
orgánica con agua, y después se seca sobre Na_{2}SO_{4} y se
evapora. Se purifican los compuestos 2h y 2i así obtenidos por
cromatografía en columna, utilizando como eluyente éter de peróleo
(40-60ºC) /Et_{2}O (8:2).
Los rendimientos se indican en la tabla 2.
En este ejemplo, se prepara el acrilato 2j en el
cual R^{3} corresponde a ROCH_{2} y representa el grupo de
fórmula
C_{6}H_{4}-CH_{2}-O-CH_{2},
siguiendo el esquema de reacción ilustrado más arriba, con R OH.
En un frasco bien seco, se añaden pequeños trozos
de sodio (10 mmol) a 20 ml de éter dietílico seco. Se añade a esta
mezcla reaccionante, una solución de 10 mmol de alcohol bencílico en
10 ml de éter dietílico durante 2 horas, bajo un flujo moderado. Se
sitúa la mezcla a contraflujo durante 6 horas suplementarias. Se
enfría en un baño de hielo el precipitado blanco obtenido, después
se filtra, se lava con éter dietílico seco y frío y se seca sobre
P_{2}O_{5} para obtener la sal de sodio con un rendimiento del
85 al 95%.
La reacción de esta sal con el bromometacrilato
de etilo y la purificación del compuesto obtenido se llevan a cabo
como se describe en el ejemplo 8.
El acrilato 2j obtenido está detallado en la
tabla 2.
Ejemplo 11 a
21
En estos ejemplos, se preparan bloques fosfínicos
3 con R^{2} y R^{3} según la tabla 3, utilizando el
procedimiento descrito por Yiotakis y col., J. Org. Chem. 61, 1996,
6601-6605 (8).
Este procedimiento conlleva en un primer momento
la reacción de Michael descrita en la figura 1. El ácido fosfínico 1
de salida (figura 1) ha sido preparado según el procedimiento
descrito por Baylis y col., J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 1984, pág.
2845-2853 (13).
Los acrilatos 2 han sido preparados en los
ejemplos 1 a 10. Para la preparación de los bloques fosfínicos, se
opera de la siguiente forma:
Se calienta a 110ºC, durante 1 hora, bajo
atmósfera de azogue, una suspensión de 1 mmol de ácido
N-benzoiloxicarbonilfosfínico 1 y de 5 mmol de
hexametildisilazano.
Se añade a continuación gota a gota 1,3 mmol del
acrilato 2 apropiado, durante 15 minutos. Se somete la mezcla en
reacción a agitación durante 3 horas suplementarias a 110ºC. Se deja
enfriar la mezcla a 70ºC y se añaden, gota a gota, 3 ml de etanol.
Tras enfriarse a temperatura ambiente, se concentra la mezcla en
reacción. Se purifica el residuo por cromatografía en columna
utilizando como eluyente una mezcla de cloroformo/metanol/ácido
acético (7 : 0,5 : 0,5). Se obtienen así los bloques fosfínicos del
3a al 3k con los rendimientos señalados en la tabla 3.
En esta tabla, se ha indicado en la columna
R^{3} que el acrilato 2 se utilizaba para la síntesis del grupo
fosfínico. La tabla 3 muestra igualmente el Rf de los bloques
obtenidos.
Ejemplos 22 y
23
En estos ejemplos, se sintetizan los bloques
fosfínicos 3l y 3m siguiendo las fórmulas mostradas en la tabla 3 de
la siguiente forma:
Se añaden 2,1 mmol de diisopropilamina y 2,1 mmol
de cloruro de trimetilsililo a una solución enfriada con hielo de 1
mmol de ácido fosfínico 1 en 2 ml de cloroformo.
Se somete la mezcla a agitación a temperatura
ambiente durante 3 horas. Tras enfriarla a 0ºC, se añaden 1,4 mmol
del acrilato de etilo 2 apropiado (2e o 2g), después se agita la
mezcla en reacción a temperatura ambiente durante 16 horas. Después
de añadir alcohol etílico gota a gota, se eliminan los disolventes
al vacío. Se obtienen los compuestos 3l ó 3m de la tabla 3 tras una
cromatografía en columna como en los casos de los ejemplos 11 a
21.
Los rendimientos y los Rf de los bloques
obtenidos se detallan en la tabla 3.
Los bloques 3b, 3d y del 3e al 3k tienen además
la particularidad de estar caracterizados por RMN del protón, del
carbono 13 y del fósforo. Los resultados obtenidos figuran en un
anexo.
En este ejemplo se preparan los compuestos 4a a
4m de la figura 1 a partir de los compuestos 3a a 3m siguiendo el
siguiente sistema operativo.
Se disuelven 10 ml de cloroformo, 1 mmol del
compuesto 3a a 3m y 1,2 mmol de bromuro de
l-adamantilo. Se sitúa la mezcla en reacción a
contraflujo. Se añaden a continuación 2 mmol de óxido de plata en
cinco partes iguales, durante un periodo de 50 minutos. Se sitúa la
solución a contraflujo durante 30 minutos suplementarios. Después de
haber eliminado los disolventes, se trata el residuo con éter
dietílico y se filtra con celita. Se concentran los filtrantes. Se
purifica el residuo mediante cromatografía en columna utilizando
como eluyente la mezcla cloroformo/isopropanol (9,8 : 0,2). Se
obtienen así los compuestos 4a a 4m con los rendimientos indicados
en la tabla 4, en la que se indican igualmente los Rf de estos
compuestos.
En este ejemplo, se sigue el modo operativo
descrito en la figura 1 para transformar los compuestos 4a a 4m en
compuestos 5a a 5m. Para ello, se opera de la siguiente forma.
Se añade gota a gota 1 ml de NaOH 4N a una
solución agitada de 1 mmol del compuesto 4a a 4m en 5,5 ml de
metanol. Se agita la mezcla en reacción durante 18 horas, y después
se elimina el disolvente. Se diluye el residuo con agua, después se
acidifica con HCl 0,5 N en un baño de hielo, se seca sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentra para obtener los compuestos 5a a 5m
en forma de sólido blanco, con los rendimientos indicados en la
tabla 5. En la tabla 5 se indican igualmente los Rf de estos
compuestos.
En este ejemplo, se preparan los pseudopéptidos
fosfínicos cuyas fórmulas se detallan en las tablas 5 a 7, a partir
de los bloques fosfínicos de la tabla 4, mediante síntesis en fase
sólida química Fmoc (fluorenilmetoxicarbonilo), según el
procedimiento descrito por Yotakis y col., 1996, J. Org. Chem. 61,
páginas 6601-6605 (8) y Jiracek y col. en J. Biol.
Chem. 1995, 270, páginas 21701-21706 (9) y en J.
Biol. Chem., 1996, 271, páginas 19606-19611
(10).
El compuesto 12 de la tabla 6 no forma parte de
la invención.
Se realizan los acoplamientos para la estrategia
"in situ" utilizando el
2-(1H-benzotriazol-1-yl-1,1,3,3-tetrametiluronio-hexafluorofosfato(HBTU)/diisopropiletilamina.
Las condiciones de acoplamiento son las siguientes: tres
equivalentes de derivado de Fmoc amino ácido y 4 equivalentes de
diisopropil etilamina en dimetilformamida añadidos a la resina y
dejando actuar durante 30 min. Para el acoplamiento de los bloques
fosfínicos:
se utilizan 1,5 equivalentes de
bloque.
Las condiciones de partición del grupo Fmoc son
50% de piperidina en el dimetilformamida durante 30 minutos. El
grupo Fmoc es el (fluoemilmetoxi) carbonilo.
En este ejemplo se realiza la síntesis de los
pseudopéptidos que figuran en la tabla 8 que conllevan R^{1} de
diferente naturaleza. Las condiciones de introducción del grupo
R^{1} se describen más abajo, según la naturaleza de ese
grupo.
En el caso de que R^{1} es un ácido que
conlleva un grupo índolo o quinolino (compuestos 30, 31, 32, 33 de
la tabla 8), el acoplamiento de R^{1} al péptido de fórmula
genérica
aún acoplado a la resina, ha sido realizado en
las siguientes condiciones: 3 equivalentes del ácido diluido en
pequeño volumen de
N-metil-pirolidona, 3 equivalentes
de HBTU (0,4 M), 10 equivalentes de diisopropiletilamina (1,2 M),
con un tiempo de acoplamiento de 45 minutos. La incorporación del
grupo R^{1} se sigue mediante un test de Kaiser. Cuando es
necesario, esta operación se debe repetir varias veces, hasta la
completa sustitución de la función
amina.
La incorporación del grupo R^{1} =
Ph-CH_{2}-O-CH_{2}-CO-
(compuesto 26) ha sido realizada a partir del derivado clorado en
correspondencia con las siguientes condiciones: el derivado clorado
(25 equivalentes, 0,5 M/diclorometano) y la diisopropiletilamina (25
equivalentes, 0,5 M/diclorometano) se añaden a la resina. La
reacción de acilación necesita 1/2 h.
Para la síntesis de los compuestos 27, 28 y 29 el
péptido
todavía acoplado a la resina, ha sido acilado
ante todo con el derivado
Br-CH_{2}-CO-Br en
las siguientes condiciones: el derivado bromado (25 equivalentes,
0,5 M/diclorometano) y la diisopropiletilemina (25 equivalentes, 0,5
M/diclorometano) se añaden a la resina, durante un tiempo de
reacción de 1/2 h. La segunda etapa corresponde a la alquilación de
los derivados de anilina correspondientes. Para hacerlo, el derivado
anilina (50 equivalentes/DMSO) se añade a la resina, durante un
tiempo de acoplamiento de
2,5h.
La partición de los péptidos de la resina, así
como la hidrólisis de las agrupaciones protectoras han sido
realizadas con la ayuda de una disolución de ácido trifluoracético
que contenga 2,5% de agua, 2,5% de tioanisol, 1,25% de tiofenol,
1,25% de etanoditiol y 1,25% de triisopropilsilano.
Todos los péptidos sintetizados en los ejemplos
26 y 27 han sido purificados por HPLC fase inversa con ayuda de
gradientes realizados con disoluciones acuosas, de acetonitrilo,
conteniendo 0,01% de ácido trifuoracético. En la mayoría de los
casos, se observan en los cromatogramas cuatro picos,
correspondientes a las cuatro formas de diasteroisómeros generados
por el protocolo de síntesis de estos compuestos fosfínicos. Todos
los péptidos fosfínicos purificados de esta manera han sido
controlados por espectroscopia de masa.
En este ejemplo, se examinan las constantes de
afinidad Ki de los pseudopéptidos de las tablas 5 a 8 frente a las
diferentes metaloproteasas matriciales MMP.
Las MMP utilizadas han sido producidas de forma
recombinante, en un sistema de expresión E.coli, y después
purificadas por diferentes tipos de cromatografías. A parte de la
estromelisina-3 (MMP-11), las MMP
producidas corresponden a secuencias humanas. La
estromelisina-3 utilizada en este estudio
corresponde a la forma murina.
La actividad de cada MMP ha sido determinada
utilizando dos sustratos sintéticos fluorogénicos. El recorte de
estos sustratos, que engendra una señal de fluorescencia
proporcional a la cantidad de sustrato separado, permite una
determinación precisa de los parámetros cinéticos. Los valores de
las constantes Km de los sustratos, tenidas en cuenta para
determinar el valor de los Ki, se facilitan en la siguiente tabla.
Las constantes de afinidad Ki han sido calculadas a partir de la
ecuación de Horowitz y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84,
pág. 6654-6658 (14), teniendo en cuenta la
dependencia del porcentaje de inhibición medido experimentalmente
según la concentración del inhibidor, en función de la concentración
de enzima y de sustrato.
Las experiencias han sido realizadas en un tampón
Tris/HCl 50 mM, pH 6,8, 10 mM CaCl_{2}, 25ºC.
| Tipo de MMP | Km \muM |
| MMP-11 | 0,2 |
| MMP-2 | 58 |
| MMP-9 | 13 |
| MMP-14 | 26 |
| MMP-1 | 93 |
| MMP-7 | 86 |
| MMP-8 | 60 |
Los resultados obtenidos están detallados en las
tablas 5 a 8.
La fórmula genérica de los inhibidores
sintetizados aquí indica que se trata de
pseudo-tripéptidos fosfínicos. Según la forma de
unión supuesta de estos compuestos con la base activa de las MMP,
estos inhibidores deben interactuar respectivamente con las
sub-bases S1, S1', y S2' de estas enzimas. El
agrupamiento R1 que figura en la mayor parte de los inhibidores
interactúa supuestamente en la unión de las
sub-bases S3/S2.
En la tabla 5, se ha verificado la influencia de
la naturaleza del residuo R^{3} en la eficacia del pseudopéptido
como inhibidor de las MMP.
La interacción de los inhibidores con la
sub-base S1', implicando al grupo R^{3} de los
compuestos, ha sido objeto de un estudio progresivo, ya que esta
sub-base supuestamente controla en gran medida la
selectividad de las interacciones
enzima-inhibidor.
El análisis de la tabla 5 demuestra que la medida
y la naturaleza del residuo R^{3} juega un papel crítico para la
afinidad de los compuestos: De esa manera, la actividad de los
inhibidores aparece multiplicada por un factor 30 en el caso de la
MMP-8, cuando el grupo R^{3} pasa de un residuo
bencilo a fenilpropilo (compuestos 7 y 9). Se observa que la mejora
de afinidad correspondiente a esta sustitución no es constante para
las diferentes MMP, sugiriendo que la sub-base S1'
de cada MMP puede ser sensible a la naturaleza del residuo R^{3}.
A este respecto, es interesante constatar que la
MMP-11 es la única MMP que prefiere un residuo
fenétilo, respecto de un residuo fenilpropilo (compuestos 8 y
9).
La comparación de los compuestos 9, 10 y 11 que
no se diferencian más que en un solo átomo (C, O, S) a nivel del
residuo R^{3}, sugiere la existencia de una interacción específica
entre el átomo de azufre en posición \gamma de R^{3} de los
inhibidores y la sub-base S1' de las MMP. Cualquiera
que sea la MMP, el compuesto 11 siempre es el más potente entre
estos tres inhibidores.
En la tabla 6, los inhibidores se caracterizan
por la presencia de un residuo fenil en R^{2}, en lugar de un
residuo metil (tabla 5). La comparación de las tablas 5 y 6 revela
que la presencia de un residuo bencilo permite aumentar globalmente
la afinidad de los inhibidores. En el caso específico de la
MMP-11, la sustitución metilo \rightarrowbencilo
conduce a un aumento de la afinidad mucho más importante para esta
MMP, que para las otras. Este resultado indica la preferencia de la
sub-base S1 de la MMP-11 por un
residuo bencilo, respecto de un residuo metilo.
La introducción de una mayor diversidad en
R^{3} en esta serie ha permitido delimitar mejor la influencia del
residuo en R^{3}. Esta serie demuestra que para obtener
inhibidores fosfínicos potentes frente a ciertas MMP, es preciso
introducir en la posición R^{3}, una cadena arilalquilo larga.
Así, el compuesto 18 es un ejemplo de inhibidor muy potente de la
MMP-8, MMP-11, MMP-2
y MMP-9.
Respecto a estos MMP, debemos señalar que los
inhibidores incluidos en este estudio aparecen menos potentes frente
a la MMP-14.
Además, y de forma general, estos pseudopéptidos
aparecen muy poco activos frente a las MMP-1 y
MMP-7.
Destacaremos que el compuesto 14 que posee un
residuo R^{3} feniletilo aparece muy potente sobre la
MMP-11, pero que es mucho menos activo sobre las
otras MMP.
La tabla 7 ilustra la importancia del residuo
triptofano a nivel de la posición R^{4}, así como de la
importancia de la configuración del residuo triptofano. El compuesto
24 indica que el residuo triptofano en estos inhibidores puede ser
reemplazado por otro residuo aromático Dpa (dinitrobencilo) en el
caso de la MMP-11 y de la MMP-8.
La tabla 8 ilustra el efecto de las diferentes
modificaciones a nivel del grupo R^{1} (tabla IV). El análisis de
los resultados indica que la naturaleza de R^{1} influencia la
afinidad de los compuestos frente a las diferentes MMP. El compuesto
31 es un ejemplo de inhibidor muy potente frente a la
MMP-11, presentando una cierta selectividad por esta
enzima. Los compuestos 34 y 35 representan ejemplos de inhibidores
potentes en los cuales R^{1} corresponde a un ácido aminado
natural.
En este ejemplo, se estudia la influencia de la
configuración de dos posiciones R^{2} y R^{3} sobre la eficacia
de los pseudopéptidos como inhibidores de las MMP.
La expresión síntesis utilizada en los ejemplos
precedentes para preparar los derivados fosfínicos de esta patente
conduce a la obtención de cada inhibidor en forma de mezcla de
cuatro diasteroisómeros, proviniendo de la
\hbox{presencia} de dos centros asimétricos a nivel de
los carbono alfa que llevan los residuos R^{2} y R^{3}. Con el
fin de evaluar la influencia de la configuración de estas dos
posiciones, el compuesto 15 ha sido resintetizado partiendo del
ácido aminado fenilalanina fosfínica ópticamente puro, de
configuración R o S. Cada síntesis conduce a una mezcla de dos
diasteroisómeros:
Z-(S)pHEy(PO_{2}CH_{2})(S)pPhe-Trp-NH_{2}
\ y \
Z-(S)pHEy(PO_{2}CH_{2})(R)pPhe-Trp-NH_{2}
o
Z-(R)pHEy(PO_{2}CH_{2})(S)pPhe-Trp-NH_{2}
\ y \
Z-(R)pHEy(PO_{2}CH_{2})(R)pPhe-Trp-NH_{2}
fácilmente separables por HPLC en fase inversa.
La tabla 9 presenta la actividad de los cuatro diasteroisómeros del
compuesto 15 frente a diferentes MMP. Es interesante remarcar que
para esta clase de compuestos fosfínicos, al menos tres
diasteroisómeros inhiben de forma casi equivalente a las diferentes
MMP. Esta propiedad, además de un medio de controlar la selectividad
de los inhibidores, podría ser también de relevante importancia en
referencia al metabolismo y a la fármaco-cinética,
dos parámetros que pueden ser sensibles en la estereoquímica de las
moléculas.
Los resultados de la caracterización por RMN del
protón, del carbono 13 y del fósforo de la fracción RI del compuesto
15 se facilitan en un anexo.
En este ejemplo, se mide la eficacia antitumoral
del compuesto 15 (fracción RI) de la tabla 9 (RXPO3).
El modelo de génesis tumoral utilizado para
comprobar los efectos de este inhibidor RXPO3 "in vivo"
consiste en un injerto subcutáneo de células malignas murinas C26 en
ratones singénicos (que poseen un fondo genético compatible con el
de las células inyectadas).
Las células C26 establecidas a partir de un
cáncer cólico de ratones Balb c (Corbett y col., 1975, Cancer Res,
35:2434-2439 (15) se cultivan hasta la
subconfluencia. Después de la tripsinización, las células se
centrifugan a 1000 g durante 10 minutos. El resto es lavado y vuelto
a poner en suspensión en PBS 1X. Un volumen de 200 ml, conteniendo 5
x 10^{4} células C26, es inyectado subcutáneamente en 2 lugares de
la espalda de ratones de 8 a 9 semanas de edad. El inhibidor se
solubiliza en PBS 1X y la administración de 150 mg de inhibidor en
un volumen de 150 ml se hace por vía intraperitoneal. El tratamiento
comienza el día de la inyección de células C26 y continúa a razón de
una inyección por día durante 25 días. Los volúmenes tumorales se
miden todos los días.
Tres experimentos idénticos e independientes de
génesis tumorales han sido realizados, según el protocolo precitado.
Los resultados obtenidos eran similares. Uno de ellos se explica a
continuación.
El experimento se ha realizado con 12 animales, 6
de los cuales han recibido un tratamiento (150 \mug de
inhibidor/ratón/día) y 6 que se utilizan como animales testigo (150
\mul PBS 1X). La figura 2 muestra los valores medios de los
volúmenes tumorales en función del tiempo transcurrido desde la
inyección de las células C26 (días 10 a 25).
Se observa que los tumores empiezan a aparecer el
día D10, y que sus volúmenes medios y medianos son siempre
inferiores en los animales tratados con el inhibidor RXPO3. Esta
diferencia de medida de los tumores es del orden del 50% del día D15
al día D20. A continuación, la eficacia del inhibidor aparece menor.
Estos resultados están de acuerdo con las recientes observaciones
hechas sobre otro modelo de génesis tumoral realizado en animales
salvajes o deficientes para la expresión de la
estromelisina-3 (MMP-11) y
mostrando que esta metaloproteasa matricial está implicada en las
etapas iniciales de implantación y favorece el desarrollo de los
tumores. Según este modelo, la eficacia de los inhibidores debe ser
máxima durante los primeros días de desarrollo del tumor.
[1] : Brown, Medical Oncology,
1997, 14, pág. 1-10.
[2] : Beckett y col., 1998, Exp.
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[3] : Goulet y col., Bioorg. Med.
Chem. Lett. 4, 1994, pág. 1221-1224.
[4] : Caldwell y col., Bioorg. Med.
Chem. Letter 6, 1996, pág. 323-328.
[5] : El documento
FR-A-2 676 059.
[6] : El documento
FR-A-2 689 764.
[7] : El documento
EP-A-0 725 075.
[8] : Yotakis y col., J. Org.
Chem., 1996, 61, pág. 6601-6605.
[9] : Jiracek y col., J. Biol.
Chem., 1995, 270, pág. 21701-21706.
[10] : J. Biol. Chem., 1996, 271,
pág. 19606-19611.
[11] : Eistetter y col., J. Med.
Chem., 25, pág. 109-113, 1982.
[12] : Baldwin y col., J. Chem. Soc.
Comm. 1986, pág. 1339-1340.
[13] : Baylis y col., J. Chem. Soc.
Perkin Trans I, 1984, pág. 2845-2853.
[14] : Horowitz y col., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 1987, 84, pág.
6654-6658.
[15] : Corbett y col., 1975, Cancer
Res, 35:2434-2439.
(Tabla pasa a página
siguiente)
- * Los compuestos 3a, 3c, 3l y 3m no forman parte de la presente invención.
- ^{(1)} en la mezcla hexano/acetato de etilo/ácido acético (3:3:0,2)
- ^{(2)} en la mezcla cloroformo/metano (9,5:0,5)
\newpage
Bloque 3b:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})hPheOET
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3d:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})Ser(Bn)Eot
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3e:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})Cys(Bn)Eot
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3f:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})hPheOEt
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3g:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})hPheOEt
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3h:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})hPheOEt
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3i:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})HeptOEt
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3j:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})Ser(Bn)Oet
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Bloque 3k:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})Cys(pOMeBn)Oet
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Compuesto 15:
ZAla\Psi(PO_{2}CpH_{2})pPheTrpNH_{2}
Fracción RI de la tabla
9
Claims (18)
1. Pseudopéptido fosfínico cuya fórmula es:
en la
cual
- R^{1} es un grupo que bloquea una función
amina, escogido entre los grupos t-butoxicarbonilo,
benciloxicarbonilo, cinamoilo, pivaloilo,
N-fluorenil-metoxicarbonilo,
acetilo, benciloxiacetilo, fenilaminoacetilo,
(m-clorofenil)aminoacetilo,
(2-hidroxi-5-cloro-fenil)aminoacetilo,
indolil-2-carbonilo,
4,6-dicloro
indolil-2-carbonilo,
quinolil-2-carbonilo y
1-oxa-2,4-dicloro-7-naftanelo
carbonilo, en el que un residuo de aminoácido o de péptido cuya
función amino terminal está bloqueada por un grupo bloqueante
escogido entre los grupos t-butoxicarbonilo,
benciloxicarbonilo, cinamoilo, pivaloilo,
N-fluorenil-metoxicarbonilo,
acetilo, benciloxiacetilo, fenilaminoacetilo,
(m-clorofenil)aminoacetilo,
(2-hidroxi-5-cloro-fenil)aminoacetilo,
indolil-2-carbonilo,
4,6-dicloro
indolil-2-carbonilo,
quinolil-2-carbonilo y
1-oxa-2,4-dicloro-7-naftanelo
carbonilo;
- R^{2} representa la cadena lateral de un
ácido aminado, natural o no natural, escogido entre la alanina, la
arginina, la asparagina, el ácido aspártico, la cisteína, la
glutamina, el ácido glutámico, la glicina, la histidina, la
isoleucina, la leucina, la norleucina, la lisina, la metionina, la
fenilalanina, la prolina, la hidroxiprolina, la serina, la treonina,
el triptofano, la tirosina, la valina, la nitrofenilalanina, la
homoarginina, la tiazolidina y la deshidroprolina;
- R^{3} representa:
1) la cadena lateral de un ácido aminado natural
salvo Gly y Ala, no sustituida o sustituida por un grupo arilo,
2) un grupo aralquilo, o
3) un grupo alquilo de al menos 3 átomos de
carbono; y
- R^{4} representa un grupo dinitrobencilo o
una cadena lateral de ácido aminado natural o no natural, escogido
entre la alanina, la arginina, la asparagina, el ácido aspártico, la
cisteína, la glutamina, el ácido glutámico, la glicina, la
histidina, la isoleucina, la leucina, la norleucina, la lisina, la
metionina, la fenilalanina, la prolina, la hidroxiprolina, la
serina, la treonina, el triptofano, la tirosina, la valina, la
nitrofenilalanina, la homoarginina, la tiazolidina y la
deshidroprolina.
2. Pseudopéptido según la reivindicación 1, en el
cual R^{2} representa el grupo metilo o bencilo.
3. Pseudopéptido según la reivindicación 1, en el
cual R^{3} representa la cadena lateral de un ácido aminado
escogido entre Phe y Leu o un residuo Ser o Cys cuya cadena lateral
se ha sustituido por un grupo arilquilo.
4. Pseudopéptido según la reivindicación 1, en el
cual R^{3} es un grupo aralquilo escogido entre los grupos de
fórmula:
siendo n un número entero del 1 al 4, y de
fórmula:
con p igual a 1 ó
2.
5. Pseudopéptido según la reivindicación 1 en el
cual R^{3} es un grupo que responde a una de las fórmulas
siguientes:
6. Pseudopéptido según la reivindicación 1, en el
cual R^{3} es el grupo cuya fórmula es:
7. Pseudopéptido según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el cual R^{4} representa el grupo cuya
fórmula es:
8. Pseudopéptido según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el cual R^{1} representa un grupo
escogido entre los grupos acetilo, benciloxiacetilo,
fenilaminoacetilo,
(m-clorofenil)aminoacetilo,
(2-hidroxi-5-cloro-fenil)aminoacetilo,
indolil-2-carbonilo,
4,6-dicloro
indolil-2-carbonilo,
quinolil-2-carbonilo y
1-oxa-2,4-dicloro-7-naftanelo
carbonilo.
9. Pseudopéptido según la reivindicación 1 que
responde a la fórmula:
en la cual Z es el grupo
benciloxicarbonilo.
10. Pseudopéptido según la reivindicación 9, en
el cual el carbono asimétrico del conjunto
tiene la configuración
L.
11. Composición farmacéutica para utilizar como
inhibidor de al menos una metaloproteasa de cinc matricial, que
incluye al menos un pseudopéptido, según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 10.
12. Composición según la reivindicación 11 en la
cual la metaloproteasa de cinc matricial se escoge entre las
MMP-2, MMP-8, MMP-9
y MMP-11.
13. Composición farmacéutica según una cualquiera
de las reivindicaciones 11 y 12, para el tratamiento de una
enfermedad caracterizada por la sobreexpresión de la
proteasas matriciales.
14. Composición según la reivindicación 13, para
el tratamiento del cáncer.
15. Utilización de un pseudopéptido fosfínico
según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la
fabricación de un medicamento que inhiba al menos una metaloproteasa
de cinc matricial.
16. Utilización según la reivindicación 15, en la
cual la metaloproteasa de cinc matricial se escoge entre las
MMP-2. MMP-8, MMP-9
y MMP-11.
17. Utilización según la reivindicación 15 ó 16,
en la cual el medicamento se destina al tratamiento de una
enfermedad caracterizada por la sobreexpresión de las
proteasas matriciales.
18. Utilización según la reivindicación 17, en la
cual la enfermedad es el cáncer.
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