ES2209468T3

ES2209468T3 - Piridino aripiperacinas sustituidas utiles en el tratamiento de la hiperplasia prostatica benigna.

Info

Publication number: ES2209468T3
Application number: ES99934281T
Authority: ES
Inventors: Gee-Hong Kuo; William V. Murray; Catherine P. Prouty
Original assignee: Ortho McNeil Pharmaceutical Inc
Current assignee: Janssen Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1998-02-20
Filing date: 1999-02-19
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2019-02-19
Also published as: CZ294136B6; TW565555B; EP1054868B1; DE69911582T2; WO1999042448A1; NO20004141D0; KR20010041115A; CZ20003044A3; IL137954A; CN1121390C; NZ506462A; AU3302599A; ZA991315B; DK1054868T3; TR200003220T2; IL137954A0; NO20004141L; AU766398B2; KR100591028B1; PL342339A1

Abstract

Un compuesto de Fórmula I, en la que R1 es hidrógeno, halógeno, alcoxi C1-5, hidroxilo o alquilo C1-5; R2 es alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido, en el que los sustituyentes del alquilo se seleccionan de manera independiente de uno o más halógenos, fenilo, fenilo sustituido, en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C1-5, alcoxi C1-5 y trihaloalquilo C1-5, fenilalquilo C1-5, o fenilalquilo C1-5 sustituido en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C1-5, halógeno, alcoxi C1-5 y trihaloalquilo C1-5, R3 es hidrógeno, hidroxilo o alcoxi C1-5, si la línea discontinua está ausente o es oxígeno, si la línea discontinua está presente. R4 es hidrógeno o alquilo C1-5, fenilalquilo C1-5 o fenilalquilo C1-5 sustituido en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros delgrupo constituido por alquilo C1-5, alcoxi C1-5 y trihaloalquilo C1-5, R5 es alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido en el que los sustituyentes del alquilo se seleccionan de manera independiente de uno o más halógenos, fenilo, fenilo sustituido en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C1-8, hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo C1-8, alquilo C1-8 sustituido en el que los sustituyentes del alquilo se seleccionan de manera independiente de uno o más halógenos.

Description

Piridino arilpiperacinas sustituidas útiles en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a una serie de derivados de piridino arilpiperazina, a las composiciones farmacéuticas que los contienen, así como a los métodos para su uso. Los compuestos de la invención inhiben de manera selectiva la unión al receptor adrenérgico \alpha1_{a}, receptor que se ha implicado en la hiperplasia prostática benigna. Además, los compuestos de la invención reducen la presión intrauretral en un modelo in vivo. Por tanto los compuestos son potencialmente útiles para el tratamiento de esta enfermedad.

Antecedentes

La hiperplasia prostática benigna (BPH, abreviadamente en inglés "benign prostatic hyperplasia"), un aumento no maligno de la próstata, es el tumor más habitual en varones. Aproximadamente el 50% de todos los varones mayores de 65 años tienen cierto grado de BPH y la tercera parte de estos varones tiene síntomas clínicos coherentes con una obstrucción de la salida de la vejiga (Hieble y Caine, 1986). En los Estados Unidos, las enfermedades de próstata, tanto benignas como malignas, son responsables de más cirugía que las enfermedades de cualquier otro órgano en varones de más de cincuenta años de edad.

Existen dos componentes de la BPH, un componente estático y otro dinámico. El componente estático se debe al aumento de la glándula prostática, que puede dar como resultado la compresión de la uretra y la obstrucción del flujo urinario desde la vejiga. El componente dinámico se debe al incremento en el tono del músculo liso del cuello de la vejiga y de la misma próstata (lo que interfiere con el vaciado de la vejiga) y que se regula a través del los receptores adrenérgicos alfa 1 (\alpha1-ARs). El tratamiento médico disponible para BPH se dirige a esos componentes en diferentes grados y las elecciones terapéuticas están en expansión.

Las opciones de tratamiento quirúrgico se dirigen al componente estático de BPH e incluyen la resección transuretral de la próstata (TURP), incisión transuretral de la próstata (TUIP), prostatectomía abierta, dilatación mediante balón, hipertermia, tubos expansibles y ablación con láser. La TURP es el tratamiento preferido para pacientes con BPH, habiéndose realizado, aproximadamente, 320.000 TURP en los Estados Unidos en 1990 con un coste estimado de 2,2 billones de dólares (Weis y col., 1993). Aunque es un tratamiento eficaz para la mayoría de los varones con BPH sintomática, aproximadamente entre el 20 y 25% de los pacientes no presentan una mejoría satisfactoria a largo plazo (Lepor y Rigaud, 1990). Entre las complicaciones se incluyen eyaculación retrógrada (70-75% de los pacientes), impotencia (5-10%), infecciones del tracto urinario postoperatorias (5-10%) y cierto grado de incontinencia urinaria (2-4%) (Mebust y col., 1989). Más aún, el índice de segundas operaciones es del 15-20% en varones controlados durante 10 años o más (Wennberg y col., 1987).

Además de los enfoques quirúrgicos, existen varias terapias con fármacos que se dirigen al componente estático de esta dolencia. Finasteride (Proscar®, Merck) es una de tales terapias que está indicada para el tratamiento de BPH sintomático. Este fármaco es un inhibidor competitivo de la enzima 5\alpha- reductasa, que es la responsable de la conversión de testosterona en dihidrotestosterona, en la glándula prostática (Gormley y col., 1992). La dihidrotestosterona parece ser el mayor mitógeno para el crecimiento prostático y los agentes que inhiben la 5\alpha-reductasa reducen el tamaño de la próstata y mejoran el flujo urinario a través de la uretra prostática. Aunque el finasteride es un potente inhibidor de la 5\alpha-reductasa y provoca un descenso marcado en las concentraciones de dihidrotestosterona en el suero y en los tejidos, sólo es moderadamente eficaz en el tratamiento de BPH sintomático (Oesterling, 1995). Los efectos del finasteride tardan de 6 a 12 meses en ser evidentes y para muchos varones la mejora clínica es mínima (Barry, 1997).

Se ha tratado el componente dinámico de BPH mediante el uso de agentes bloqueantes del receptor adrenérgico (bloqueantes del \alpha1-AR) que actúan disminuyendo el tono de la musculatura lisa en el mismo interior de la glándula prostática. Se han investigado una diversidad de bloqueantes del \alpha1-AR (terazosina, prazosina, doxazosina) para el tratamiento de la obstrucción sintomática de la salida de la vejiga debido a la BPH, siendo terazosina (Hytrin, Abbott) el más extensamente estudiado. Aunque los bloqueantes del \alpha1-AR se toleran bien, aproximadamente el 10-15% de los pacientes desarrollan un episodio clínicamente adverso (Lepor, 1995). Los efectos indeseables de todos los miembros de esta categoría son similares, siendo la hipotensión postural el efecto secundario experimentado más habitualmente (Lepor y col., 1992). En comparación con los inhibidores de la 5\alpha-reductasa, los agentes bloqueantes del \alpha1-AR presentan un inicio de acción más rápido (Steers, 1995). Sin embargo, su efecto terapéutico, medido como mejora en la calificación de los síntomas y de la velocidad punta del flujo urinario, es moderado (Oesterling, 1995).

El uso de antagonistas del \alpha1-AR en el tratamiento de BPH se refiere a su capacidad para disminuir el tono del músculo liso prostático, consiguiendo un alivio de los síntomas obstructivos. Los receptores adrenérgicos que se encuentran en todo el cuerpo juegan un papel dominante en el control de la presión sanguínea, congestión nasal, función prostática y otros procesos (Harrison y col., 1991). Sin embargo, existen varios subtipos de receptores \alpha1-AR clonados: \alpha1_{a}-AR, \alpha1_{b}-AR y \alpha1_{d}-AR (Bruno y col., 1991; Forray y col., 1994; Hirasawa y col., 1993; Ramarao y col., 1992; Schwinn y col., 1995; Weinberg y col., 1994). Varios laboratorios han caracterizado los \alpha1-ARs en la próstata humana mediante unión funcional de ligandos radiactivos, así como mediante técnicas de biología molecular (Forray y col., 1994: Hatano y col., 1994; Marshall y col., 1992; Marshall y col., 1995; Yamada y col., 1994). Estos estudios proporcionan evidencias que apoyan el concepto de que el subtipo \alpha1_{a}-AR comprende la mayoría de los \alpha1-ARs de la musculatura lisa de la próstata humana y media en la contracción de dicho tejido. Estos hallazgos sugieren que el desarrollo de un antagonista selectivo del subtipo \alpha1_{a}-AR podría dar como resultado un agente terapéuticamente eficaz para el tratamiento de BPH que reduce los efectos secundarios.

Resumen de la invención

Los compuestos de esta invención se unen de manera selectiva al receptor \alpha1_{a}-AR, antagonizan la actividad de dicho receptor y son selectivos para el tejido prostático frente al tejido aórtico. Como tales, representan un tratamiento viable para la BHP sin los efectos secundarios asociados con los antagonistas del \alpha1-AR conocidos.

La invención incluye compuestos de Fórmula I

1

en la que

R_{1} es hidrógeno, halógeno, alcoxi C_{1-5}, hidroxilo o alquilo C_{1-5};

R_{2} es alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6} sustituido

en el que los sustituyentes del alquilo se seleccionan de manera independiente de uno o más halógenos,

fenilo,

fenilo sustituido,

en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C_{1-5}, alcoxi C_{1-5} y trihaloalquilo C_{1-5},

fenilalquilo C_{1-5},

o fenilalquilo C_{1-5} sustituido

en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C_{1-5}, halógeno, alcoxi C_{1-5} y trihaloalquilo C_{1-5},

R_{3} es hidrógeno, hidroxilo o alcoxi C_{1-5}, si la línea discontinua está ausente o es oxígeno, si la línea discontinua está presente.

R_{4} es hidrógeno, alquilo C_{1-5}, fenilalquilo C_{1-5} o fenilalquilo C_{1-5} sustituido

R_{5} es alquilo C_{1-6},

alquilo C_{1-6} sustituido

fenilo,

fenilo sustituido

en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C_{1-8}, hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo C_{1-8},

alquilo C_{1-8} sustituido

alcoxi C_{1-5}, amino, alquilamino C_{1-5}, dialquilamino C_{1-5}, alquilcarbonilo C_{1-5}, alcoxicarbonilo C_{1-5}, arilcarbonilo, nitrilo, aminosulfonilo, alquilsulfonilo C_{1-5}, fenilsulfonilo y fenilsulfonilo sustituido

en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C_{1-8}, halógeno, hidroxilo y nitro;

fenilalquilo C_{1-5}

fenilalquilo C_{1-5} sustituido

en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alquilo C_{1-8}, halógeno, hidroxilo, alquilo C_{1-8}, alquilo C_{1-8} sustituido

alcoxi C_{1-5}, amino, alquilamino C_{1-5}, dialquilamino C_{1-5}, alquilcarbonilo C_{1-5}, alcoxicarbonilo C_{1-5} y nitro,

X es oxígeno, azufre o NH;

las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos;

y esteroisómeros, mezclas racémicas, así como los enantiómeros de los mismos.

La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que contienen una dosis eficaz de compuestos de Fórmula 1. La presente invención proporciona además un compuesto de la invención o composición farmacéutica de la invención para su uso en el tratamiento de la hiperplasia benigna o enfermedades asociadas con el receptor adrenérgico \alpha1_{a}.

Descripción detallada de la invención

Los términos usados en la descripción de la invención se usan habitualmente y son conocidos por los expertos en la técnica. Sin embargo, se definen los términos que pudieran tener otros significados. "HBSS" se refiere a la solución salina equilibrada de Hank. "Independientemente" significa que cuando hay más de un sustituyente, los sustituyentes pueden ser diferentes. El término "alquilo" se refiere a grupos alquilo de cadena lineal, cíclica y ramificada y "alcoxi" se refiere a O-alquilos, siendo el alquilo como se define anteriormente. "DMAP" se refiere a dimetilaminopiridina, "HOBT" se refiere al hidrato de hidroxibenzotriazol y "EDCI" se refiere al clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. El término "HATU" se refiere al hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio y el símbolo "Ph" se refiere al fenilo y "arilo" incluye a los anillos aromáticos, únicos o fusionados, como fenilo y naftilo. El símbolo "ES" se refiere a la electropulverización y el símbolo "MS" se refiere al espectro de masas. Algunos de los compuestos de Fórmula I incluyen un átomo de carbono quiral. Por tanto, estos compuestos pueden prepararse como estereoisómeros, mezclas racémicas o enantiómeros puros. Todos los esteroisómeros, enantiómeros puros y mezclas racémicas se considera que están dentro del alcance de esta invención.

Los compuestos de la invención pueden preparase mediante los siguientes esquemas, produciéndose en algunos esquemas más de una realización de la invención. En estos casos, la elección del esquema es un asunto particular que entra en las capacidades de los químicos.

Puede prepararse un compuesto de Fórmula I en el que X es NH, R_{1} es hidrógeno, R_{2} es fenilo, R_{3} es hidroxilo, R_{4} es hidrógeno y R_{5} es 3-trifluorometilfenilo usando el Esquema 1. Se calienta 1-azido-3-(p-toluensulfoniloxi)propan-2-ol, 1a, a aproximadamente 100ºC con un derivado de piperazina apropiadamente sustituido, 1b, durante aproximadamente 2-5 días para proporcionar la azida 1c. Esta azida se trata con Pd/C e H_{2} (344,75 kPa) en un disolvente inerte durante 16 h para proporcionar la amina libre, 1d. Esta amina se trata con un derivado de piridina 3-acil-2-sustituido, como cloruro de 2-[(3-trifluorometilfenil)amino]-3-piridincarbonilo, 1e, DMAP y N,N-diisopropiletilamina en cloruro de metileno a aproximadamente temperatura ambiente durante 2-16 horas para proporcionar el compuesto deseado de Fórmula 1. Este esquema puede usarse para preparar diversos compuestos de Fórmula I. Por ejemplo, para preparar los compuestos en los que R_{1} y R_{2} varían, simplemente sustituir el 1b ilustrado por cualquier piperazina sustituida conocida. Aunque el producto ilustrado se preparó a partir de la azida racémica 1a, los enantiómeros puros de esta azida son conocidos y se pueden usar en este esquema. Para preparar compuestos en los que R_{5} es distinto del fenilo sustituido, sustituir el derivado de acilpiridina, 1e, por otra acilpiridina. Por ejemplo, para preparar un compuesto en el que R_{5} es fenilmetilo, sustituir el 1e ilustrado por cloruro de 2-[(fenilmetil)amino]-3-piridincarbonilo. Para preparar los compuestos en los que X sea diferente de NH, sustituir la acilpiridina sustituida con amino por una piridina sustituida con un tio o un oxi. Por ejemplo, para preparar un compuesto en el que X es azufre, R_{1} es hidrógeno, R_{2} es fenilo, R_{3} es hidroxilo, R_{4} es hidrógeno y R_{5} es fenilo, sustituir el 1e ilustrado por cloruro del ácido 2-(feniltio)piridina-3-carboxílico.

Para preparar los compuestos en los que R_{3} es alcoxi C_{1-5}, sustituir la sustancia de partida 1c por 1-[1-azido-2-metoxipropan-1-il]-4-[2-isopropoxifenil] piperazina y continuar con el resto de las etapas del esquema.

Los compuestos en los que R_{3} es carbonilo pueden prepararse tratando los productos del Esquema 1 con un agente oxidante como el reactivo de Swern (formado a partir de cloruro de oxalilo y DMSO) a -78ºC a temperatura ambiente, a lo largo de 30 minutos a 1 hora.

Esquema 1

2

El Esquema 2 puede usarse para preparar compuestos de Fórmula 1 en los que X es azufre, R_{1} es fluoro, R_{2} es etilo, R_{3} es hidrógeno, R_{4} es hidrógeno y R_{5} es 4-clorofenilo. Se trata un derivado de piperazina apropiadamente sustituida, 2a, con 3-bromopropilamina protegida con N-BOC y carbonato de cesio en acetonitrilo a reflujo durante 16 h para proporcionar el derivado de piperazina sustituida, 2b. Este derivado se convierte en la amina libre, 2c, mediante tratamiento con TFA y cloruro de metileno a temperatura ambiente a lo largo de 2-6 h. El derivado 2c se acopla con un derivado de acilpiridina sustituida, 2d, usando DMAP y N,N-diisopropiletilamina en cloruro de metileno a aproximadamente temperatura ambiente durante 2-6 h para proporcionar el compuesto deseado de Fórmula I. Como se describe en el Esquema 1, el Esquema 2 puede modificarse para proporcionar muchos compuestos de Fórmula I.

Esquema 2

3

Otro procedimiento para preparar los compuestos de la invención se ilustra mediante el Esquema 3. El tratamiento del derivado 2c y el ácido 2-cloronicotínico con HOBT, DMAP, EDCI, DCI y N,N-diisopropiletilamina en cloruro de metileno a aproximadamente temperatura ambiente durante 2-6 horas proporciona la cloropiridina 3a. El tratamiento de este derivado con un alcohol aromático tal como 3b proporciona un compuesto de la invención en el que X es oxígeno, R_{1} es fluoro, R_{2} es etilo, R_{3} es hidrógeno, R_{4} es hidrógeno y R_{5} es 4-metilfenilo.

\newpage

Esquema 3

4

Para producir los compuestos de la invención en los que R_{4} es distinto del hidrógeno puede usarse el Esquema 4. El grupo amino de los productos intermedios 2c puede tratarse con un aldehído 4a tal como benzaldehído para proporcionar la imina 4b. Este producto intermedio puede reducirse con NaBH_{4} a temperatura ambiente para proporcionar la monoamina 4c. Esta amina se acopla con un derivado de acilpiridina sustituido, usando DMAP y N,N-diisopropiletilamina en cloruro de metileno a aproximadamente temperatura ambiente durante 2-6 horas para proporcionar el compuesto deseado de Fórmula I. Como se describe en los ejemplos previos, el Esquema 4 puede modificarse para proporcionar diversos compuestos de Fórmula I. Por ejemplo, para producir un compuesto en el que R3 es hidroxilo, sustituir 2c por el producto intermedio 1d y continuar con el resto de las etapas del Esquema 4.

\newpage

Esquema 4

5

Para producir enantiómeros puros de los compuestos de Fórmula I en los que R_{3} es hidroxilo, puede usarse el Esquema 5. Puede tratarse la (S)(+) epiclorhidrina (97% de exceso de enantiómeros) con bencilamina en un disolvente orgánico adecuado tal como hexano a aproximadamente temperatura ambiente durante 48-72 horas para proporcionar el compuesto hidroxilado 5a. Este producto intermedio puede tratarse con un agente reactivo BOC tal como dicarbonato de di-tert-butilo y una base orgánica tal como trietilamina en un disolvente inerte como THF a aproximadamente 0ºC a aproximadamente temperatura ambiente a lo largo de 10 a 24 horas para proporcionar el derivado N-protegido 5b. Este producto intermedio puede tratarse con un derivado de piperazina, 5c, una base tal como hidróxido de potasio, en un disolvente alcohólico tal como metanol a aproximadamente 0ºC a aproximadamente temperatura ambiente a lo largo de 1 a 3 días para proporcionar el derivado acoplado 5d. Este compuesto puede desprotegerse mediante tratamiento con un ácido tal como TFA a aproximadamente temperatura ambiente a lo largo de 18 a 24 horas para proporcionar la amina libre 5e. Esta amina puede desbencilarse usando un catalizador de paladio y formato de amonio en un disolvente alcohólico tal como EtOH a aproximadamente 45-60ºC a lo largo de 20 h para proporcionar la amina primaria 5f. Esta amina puede acoplarse con ácidos del tipo 5g usando agentes de acoplamiento de péptidos tales como HATU para proporcionar un compuesto de Fórmula I. Como se describe en el Esquema I, el Esquema 5 puede modificarse para proporcionar diversos compuestos de Fórmula I.

Esquema 5

6

Aunque los compuestos reivindicados son útiles como antagonistas del \alpha1_{a}-AR, algunos compuestos son más activos que otros y son o bien preferidos o bien particularmente preferidos. Los compuestos preferidos de la invención incluyen compuestos en los que:

\newpage

R_{1}: es halógeno o hidroxilo,

R_{2}: es fenilo,

R_{3}: es alcoxi C_{1-5},

R_{4}: es alquilo C_{1-5},

R_{5}: es alquilo C_{1-5} y

X: es azufre

Los compuestos particularmente preferidos de fórmula I incluyen compuestos en los que:

R_{1}: es hidrógeno,

R_{2}: es alquilo C_{1-6},

R_{3}: es hidroxilo o hidrógeno,

R_{4}: es hidrógeno

R_{5}: es fenilo y fenilo sustituido con alquilo C_{1-5},

X: es oxígeno

Como indica la actividad biológica, los compuestos de Fórmula I pueden usarse en composiciones farmacéuticas para tratar pacientes (seres humanos y otros mamíferos) con trastornos relacionados con la inhibición de la actividad del receptor adrenérgico \alpha1_{a}. La vía preferida es la administración oral, sin embargo, las dosis orales de los compuestos varían de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg por día; el intervalo óptimo de dosis es aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 mg/kg/por día. Las dosis en infusión pueden variar de aproximadamente 0,001 a 1 mg/kg/min de inhibidor, mezclado con un vehículo farmacéutico a lo largo de un periodo de tiempo que varía de algunos minutos a algunos días y pueden administrarse mediante infusión intravenosa.

Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse usando excipientes farmacéuticos y técnicas de composición ordinarios. Las formas de dosificación orales pueden ser elixires, jarabes, cápsulas, comprimidos y similares. El vehículo sólido típico es una sustancia inerte como lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, manitol y similares; y los excipientes líquidos orales típicos incluyen etanol, glicerol, agua y similares. Todos los excipientes pueden mezclarse según sea necesario con desintegrantes, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y similares usando técnicas ordinarias conocidas por los expertos en la técnica de preparar formas de dosificación. Las formas de dosificación parenteral pueden prepararse usando agua u otro vehículo estéril.

Típicamente, los compuestos de Fórmula I se aíslan y usan como bases libres, sin embargo, los compuestos pueden aislarse y usarse en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de tales sales incluyen las de los ácidos bromhídrico, yodhídrico, clorhídrico, perclórico, sulfúrico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, mandélico, metansulfónico, hidroetansulfónico, bencensulfónico, oxálico, pamoico, 2-naftalensulfónico,
p-toluensulfónico, ciclohexansulfámico y sacárico.

Con el fin de ilustrar la invención se incluyen los siguientes ejemplos:

Ejemplos preparativos Ejemplo 1

7

La sal de fumarato de 1-(2-isopropoxifenil)-piperazina (3,91 g, 12 mmol) se basificó con NaOH _{(ac)} 20% (100 ml) y se extrajo con cloruro de metileno. Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para proporcionar un aceite (2,74 g). Se agitó una mezcla del aceite con 1-azido-3- (p-toluensulfoniloxi)propan-2-ol (3,25 g, 12 mmol, Antonin Holy, Collect. Czech. Chem. Comm. 1989, 54(2), 446) a 100ºC durante 36 h. La mezcla enfriada se diluyó con agua y se extrajo con éter, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 1 en forma de un sólido marrón claro (2,95 g, 76%): MS (ES) m/z: 320 (MH^{+}); Anal Calc. para C_{16}H_{25}N_{5}O_{2}: C, 60,17; H, 7,89; N, 21,93. Encontrado: C, 60,45; H 7,83; N, 22,01.

Ejemplo 2

8

Se añadió HCl 10% (6 ml) a una mezcla del compuesto 1 (2,43 g, 7,6 mmol) y Pd/C 10% (1,22 g) en MeOH (60 ml) y la mezcla se hidrogenó con H_{2} (344,75 kPa) en un agitador Parr durante 16 horas a 20ºC. La mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se concentró. El residuo se basificó con NaOH _{(ac)} 20% y se extrajo con cloruro de metileno. Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para proporcionar el compuesto 21 en forma de un aceite amarillento (2,2 g, 95%): MS (ES) m/z: 294 (MH^{+}).

Ejemplo 3

9

Se agitó una mezcla del compuesto 2 (100 mg, 0,341 mmol), cloruro de 2-fenoxipiridina-3-carbonilo (81 mg, 0,341 mmol), DMAP (cat.) y N,N-diisopropiletilamina (0,23 ml) en cloruro de metileno (2 ml) a 20ºC durante 16 h. La mezcla se concentró, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica combinada se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar 116 mg (69%) del compuesto 3 en forma de una espuma: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,59 (d, J = 6,3 Hz, 1 H); 8,32 (brs,
1 H); 8,20 (d, J = 3,1 Hz, 1 H); 7,44 ( m, 2 H); 7,21 (M, 4 H); 6,87 (m, 4 H); 4,57 (m, 1 H); 3,98 (M, 1 H); 3,75 (m,
1 H); 3,5 (m, 1 H); 3,06 (m, 4 H); 2,79 (m, 2 H), 2,48 (m, 4 H), 1,33 (d, J = 5,9 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 491 (MH^{+}).

Ejemplo 4

10

Se disolvió bromhidrato de 3-bromopropilamina (5g, 22,8 mmol) en NaOH 10% (50 ml), se extrajo con cloruro de metileno y se concentró. A la base libre en cloruro de metileno se añadió (Boc)_{2}O (5,23g, 23,9 mmol) y esta mezcla se agitó a 20ºC durante 4 h. La fase de cloruro de metileno se lavó con H_{2}O, se diluyó con ácido cítrico (6%), NaHCO_{3} y solución saturada de NaCl, se secó y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar la amina protegida (4,84g, 89%). La sal de fumarato de 1-(2-isopropoxifenil)-piperazina (5,1 g, 15 mmol) se basificó con NaOH _{(ac)} 20% (100 ml), se extrajo con cloruro de metileno, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para proporcionar un aceite amarillo (3,15 g). Se calentó a reflujo durante toda la noche una mezcla del aceite, la amina protegida (3,42g, 14,3 mmol) y Cs_{2}CO_{3} (4,66g, 14,3 mmol) en CH_{3}CN (50 ml). El sólido se filtró y el filtrado se evaporó. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 4 (4,4 g, 81%): MS (ES) m/z: 378 (MH^{+}).

Ejemplo 5

11

El compuesto 4 (0,185 g, 0,53 mmol) se disolvió en TFA 25% / cloruro de metileno (5 ml) y se agitó durante 1,5 h. El disolvente se eliminó y la sal de TFA se lavó con tolueno (3X) y seguidamente se basificó con NaOH _{(ac)} 20% seguido de extracción con cloruro de metileno (3X), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para proporcionar un aceite. Este aceite se disolvió en cloruro de metileno (4 ml), diisopropilamina (0,34g, 2,64 mmol), una cantidad catalítica de DMAP y cloruro de 2-fenoxipiridina-3-carbonilo (0,12 g, 0,53 mmol). La reacción se agitó a 20ºC durante 2 h en atmósfera de N_{2} y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 5 (0,2 g, 80%): RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,61 (dd,
J = 7,5, 2,0 Hz, 1 H); 8,20 (dd, J = 4,9 2,0 Hz, 1 H); 8,05 (m, 1 H); 7,46 ( m, 2 H); 7,29 (d, J = 7,4 Hz, 1 H); 7,15 (m, 3H); 6,88 (m, 4 H); 4,56 (m, 1 H); 3,59 (q, J = 6,3 Hz, 2 H); 3,03 (m, 4 H); 2,56 (m, 4 H); 2,49 (t, J = 7,0 Hz, 2 H); 1,87 (m, 2 H), 1,32 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 475 (MH^{+}).

Ejemplo 6

12

La sal de fumarato de 1-(2-isopropoxifenil)-piperazina (112,5 g, 345 mmol) se basificó con NaOH _{(ac)} 20% (500 ml), se extrajo con cloruro de metileno (3x), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para proporcionar aproximadamente 70g de aceite. Se agitó una mezcla del aceite y p-toluensulfonato de (2S)-3-azido-2-hidroxipropilo (91 g, 335 mmol, Kristina Juricova, Collect. Czech. Chem. Comm. 1995, 60, 237) a 100ºC en NMP con trietilamina (70g, 690 mmol) durante 30 h. La mezcla se enfrió, se diluyó con agua y se extrajo con éter (3 x 500 ml). Los extractos combinados se lavaron de nuevo con NaCl (saturado) (100 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) y se recristalizó (cloruro de metileno/hexanos) para proporcionar 70,6 g (66%) del compuesto 6 (98,8% de exceso de enantiómeros, análisis mediante columna Chiracel AD) en forma de sólido blanquecino: [\alpha]^{25} _{D} -3,6º (C = 1, CH_{3}OH); RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,91 (m, 4 H); 4,59 (m, 1 H); 3,93 (M, 1 H); 3,67 (amplio, 1 H); 3,42 (dd, J = 12,6 3,8 Hz, 1 H); 3,23 (dd, J = 12,6 5,4 Hz, 1 H); 3,12 (m, 4 H), 2,83 (m, 2 H), 2,53 (m, 3H); 2,42 (dd, J = 12,2 3,8 Hz, 1 H); 1,34 (d, J = 6,0 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 320 (MH^{+}).

Ejemplo 7

13

Se añadió HCl 10% (6 ml) a una mezcla del compuesto 6 (15 g, 47 mmol) y Pd/C 10% (4 g) en MeOH (100 ml). Se hidrogenó la mezcla con H_{2} (344,75 kPa) en un agitador Parr durante 21 horas a 20ºC. La mezcla se filtró a través de celite y se concentró el filtrado. El residuo se basificó NaOH _{(ac)} 20% (75 ml), se extrajo con cloruro de metileno (3x), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para proporcionar el compuesto 7 (14 g, \sim100%) en forma de un aceite amarillento: [\alpha]^{25} _{D} +23,6º (c = 1, CHCl_{3}); RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,91 (m, 4 H); 4,59 (m, 1 H); 3,76 (m, 1 H); 3,12 (m,
4 H), 2,83 (dd, J = 12,7 3,7 Hz, 2 H); 2,82 (m, 1 H); 2,25-2,68 (m, 8 H); 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 294 (MH^{+}).

Ejemplo 8

14

Se disolvió piperazina 7 (8g, 27,3 mmol) en una mezcla de diisopropiletilamina (14,1g, 109,2 mmol) y cloruro de metileno (100 ml). La solución amarillenta clara resultante se añadió lentamente a una solución de cloruro de metileno (50 ml), ácido 2-fenoxinicotínico (5,87g, 27,3 mmol), EDCI (5,24g, 27,3 mmol), HOBT (3,69g, 27,3 mmol) y DMAP (50 mg, cat.) a 20ºC y se agitó durante 18 h. Se añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con éter (3x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaCl _{(sat)}, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (SiO_{2}, cloruro de metileno/acetona) para proporcionar el compuesto 8 (8,4 g, 62%) en forma de una espuma blanca: [\alpha]^{25} _{D} +14,8º (c = 1, CHCl_{3}); RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,60 (dd,
J = 7,5 2 Hz, 1 H); 8,31 (brs, 1 H), 8,22 (dd, J = 4,7 2 Hz, 1 H); 7,43 (brt, J = 7,7 Hz, 2 H); 7,14-7,30 (m, 4 H); 6,87 (m, 4 H); 4,58 (m, 1 H); 3,97 (M, 1 H); 3,75 (m, 1 H); 3,51 (m, 1 H); 3,06 (m, 4 H); 2,80 (m, 2 H), 2,49 (m, 4 H); 1,33 (d, J = 6,0 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 491 (MH^{+}).

Ejemplo 9

15

Se disolvió una mezcla del compuesto 2 (900mg, 3,07 mmol), ácido 2-cloronicotínico (485mg, 3,07 mmol), EDCI (589mg, 3,07 mmol), HOBT (414mg, 3,07 mmol) y DMAP (cat.) y N,N-diisopropiletilamina (2 ml) en cloruro de metileno (20 ml) y se agitó durante 20 h a 20ºC. La mezcla se concentró, se diluyó con agua y se extrajo con éter. La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar 580 mg (44%) del compuesto 9 en forma de una espuma blanca: MS (ES) m/z: 433 (MH^{+}).

Ejemplo 10

16

Se agitó una mezcla del compuesto 9 (43 mg, 0,1 mmol), 4-metoxifenol (124 mg, 1 mmol) y carbonato de cesio (65 mg, 0,2 mmol), en NMP (1 ml) a 110ºC durante 20 h. La mezcla resultante se enfrió, se añadió agua y esta mezcla se extrajo con éter. El extracto se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 10 (36 mg, 69%) en forma de una espuma blanca: MS (ES) m/z: 521 (MH^{+}).

Ejemplo 11

17

Se agitó una mezcla del compuesto 2 (100mg, 0,341 mmol), ácido niflúmico (96 mg, 0,341 mmol), EDCI (65 mg, 0,341 mmol), HOBT (46 mg, 0,34 mmol), DMAP (cat.) y N,N-diisopropiletilamina (0,23 ml) en cloruro de metileno (2 ml) durante 20 h a 20ºC. La mezcla se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 11 (101 mg, 53%) como una espuma: MS (ES) m/z: 558 (MH^{+}).

Ejemplo 12

18

Se agitó una mezcla del compuesto 2 (100mg, 0,341 mmol), ácido 2-(4-clorofeniltio)piridina-3-carboxílico (91 mg, 0,341 mmol), EDCI (65 mg, 0,341 mmol), HOBT (46 mg, 0,34 mmol), DMAP (cat.) y N,N-diisopropiletilamina (0,23 ml) en cloruro de metileno (2 ml) durante 20 h a 20ºC. La mezcla se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 12 (128 mg, 70%) en forma de una espuma: MS (ES) m/z: 541 (MH^{+}).

Ejemplo 13

19

Se agitó una mezcla del compuesto 2 (100mg, 0,341 mmol), ácido 2-metoxinicotínico (52 mg, 0,341 mmol), EDCI (65 mg, 0,341 mmol), HOBT (46 mg, 0,34 mmol), DMAP (cat.) y N,N-diisopropiletilamina (0,23 ml) en cloruro de metileno (2 ml) durante 20 h a 20ºC. La mezcla se concentró. Se añadió K_{2}CO_{3} _{(ac)} 3% y se extrajo con éter, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 13 (32 mg, 22%) en forma de una espuma: MS (ES) m/z: 429 (MH^{+}).

Ejemplo 14

20

Se disolvió el compuesto 1 (0,8g, 2,5 mmol) en 50 ml de THF anhidro. La solución se enfrió hasta 0ºC y se añadieron 2 equivalentes de NaH 60% (0,2g, 5,0 mmol). La solución se agitó durante 10 minutos y se añadieron 1,5 equivalentes de CH_{3}I (0,53 g, 3,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 2 h. Se añadieron NaH (0,1 g, 2,5 mmol) y 1 equivalente de CH_{3}I (0,15 ml) y la mezcla se agitó durante otras 2 h. La reacción se inactivó con NH_{4}Cl saturado, se evaporó el disolvente y la fase acuosa se lavó con cloruro de metileno (3x), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto A (0,69 g, 83%): MS (ES) m/z: 334 (MH^{+}).

Ejemplo 15

21

Se añadió HCl 10% (0,3 ml) a una mezcla del compuesto 14 (0,64 g, 1,9 mmol) y Pd/C 10% (0,13 g) en MeOH (5 ml) y la mezcla se hidrogenó con H_{2} (344,75 kPa) en un agitador Parr durante toda la noche. La mezcla se filtró a través de celite y se concentró el filtrado. Se basificó el residuo con NaOH 20% y se extrajo con cloruro de metileno (3x). Las extractos orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para proporcionar un aceite amarillo con rendimiento cuantitativo. MS (ES) m/z: 308 (MH^{+}).

Ejemplo 16

22

Se disolvió el compuesto 15 (0,15 g, 0,49 mmol) en cloruro de metileno (4 ml) y se añadió diisopropiletilamina (0,25 g, 1,95 mmol). A esta solución se añadió una mezcla de HATU (0,185 g, 0,49 mmol) y ácido 2-fenoxinicotínico (0,11 g, 0,49 mmol). La reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente en atmósfera de N_{2}, se evaporó el disolvente y se disolvió el residuo en EtOAc. Esta solución se lavó con K_{2}CO_{3} 3%, se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (SiO_{2}, cloruro de metileno / acetona = 10:1, 8:1, 6:1, 4:1) para proporcionar el compuesto 16 (0,16 g, 64%) en forma de un aceite: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,61 (dd, J = 7,4 Hz, 1 H); 8,27 (brs, 1 H), 8,23 (m, 1 H); 7,44 (m, 2 H); 7,26 (m, 1 H); 7,17 (m, 3 H); 6,87 (m, 4 H); 4,58 (m, 1 H); 3,92 (M, 1 H); 3,55 (m, 2 H); 3,42 (s, 3 H); 3,03 (brs, 4 H); 2,54 (m, 6 H); 1,33 (d, J = 6,0 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 308 (MH^{+}).

Ejemplo 17

23

Se disolvió cloruro de oxalilo (0,03 g, 0,22 mmol) en 0,3 ml de cloruro de metileno. Se añadió gota a gota a esta solución una mezcla de DMSO (0,035 ml, 0,49 mmol) en cloruro de metileno (3,0 ml) a -78ºC. La mezcla se agitó a -78ºC durante 1 h. Se añadió lentamente una solución del compuesto 3 (68414, 0,1 g, 0,2 mmol) en cloruro de metileno (0,4 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min y se añadió lentamente TEA (0,14 ml, 1,02 mmol). La mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente, se añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno. Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para proporcionar el compuesto 17 (13,2 mg, 13%): RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,69 (brs, 1 H); 8,61 (dd, J = 7,6 Hz, 1 H); 8,23 (dd, J = 4,6 Hz, 1 H); 7,46 (m,
2 H); 7,28 (m, 3 H); 7,15 (m, 1 H); 6,89 (m, 4 H); 4,57 (m, 3 H); 3,35 (s, 2 H); 3,15 (brs, 4 H); 2,70 (brs, 4 H); 1,33 (d, J = 5,97 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 489 (MH^{+}).

Ejemplo 18

24

Se disolvió piperazina 7 (150 mg, 0,51 mmol) en una mezcla de diisopropiletilamina (0,35 ml) y cloruro de metileno (2 ml). Se añadieron a la solución anterior de cloruro de metileno, cloruro de 2-(4-metilfenoxi)piridina-3- carbonilo (126 mg, 0,51 mmol) y DMAP (cat.). La mezcla se agitó a 20ºC durante 16 h y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice) para proporcionar el compuesto 18 (146 mg, 57%) en forma de una espuma: MS (ES) m/z: 505 (MH^{+}).

Ejemplo 19

25

Una mezcla de (S)-(+)-epiclorhidrina (10 g, 108,1 mmol, Aldrich, 97% de exceso de enantiómeros) y bencilamina (11,57 g, 108,1 mmol) en hexano (40 ml) se agitó a 20ºC durante 62 h. Precipitó un sólido blanco. Se añadió más hexano (\sim350 ml), se agitó durante 20 min y se sonicó para romper los grandes trozos de sólido blanco. El sólido blanco se recogió mediante filtración, se lavó con hexano y se secó al vacío para proporcionar 19,8 g (92%) de sólido blanco. El sólido blanco se recristalizó a partir de EtOAc/hexano para proporcionar 17,76 g (82%) de 1 en forma de un sólido blanco cristalino; RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,31 (m, 5 H); 3,88 (m, 1 H); 3,79 (m, 2 H); 3,53 (d, J = 5,3 Hz, 2 H); 2,89 (m, 2 H), 2,81 (dd, J = 12,4 4,1 Hz, 1 H); 2,69 (dd, J = 12,2 7,9 Hz, 1 H); MS (ES) m/z: 200 (MH^{+}); Anal Calc. para C_{10}H_{14}NOCl: C, 60,15; H, 7,07; N, 7,01. Encontrado: C, 60,10; H 7,02; N, 6,92.

Ejemplo 20

26

Se disolvieron Boc_{2}O (11 g, 50,1 mmol) y trietilamina (10,12 g, 100 mmol) en THF (25 ml) y se enfrió hasta 0ºC. Se añadió la amina 19 (10 g, 50,1 mmol) en porciones y se agitó durante 20 h, mientras la temperatura ascendió hasta 20ºC durante toda la noche. El disolvente se concentró in vacuo y se añadió agua. La mezcla se extrajo con éter (3x), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El residuo bruto se recristalizó a partir de EtOAc / hexano para proporcionar 9,9 g (66%) de 20 en forma de un sólido cristalino blanco. El filtrado se concentró (3,1 g, como aceite) y se purificó más producto mediante cromatografía en columna (columna corta, 8 cm de altura de SiO_{2}, EtOAc / hexano como disolvente). El aceite se recristalizó en EtOAc / hexano para proporcionar otros 2,78 g de 20 (18%) en forma de sólido blanco cristalino: [\alpha]^{25} _{D} = -10,20º (c = 1, CHCl_{3}); RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,22-7,36 (m, 5 H); 4,52 (m,
2 H); 4,30 (brs, 0,5 H); 3,93 (m, 1 H); 3,36-3,97 (m, 4 H); 1,47 (s, 9 H); MS (ES) m/z: 322 (M+Na);. Anal Calc. para C_{15}H_{22}NO_{3}Cl: C, 60,10; H, 7,40; N, 4,67. Encontrado: C, 60,26; H 7,42; N, 4,63.

Ejemplo 21

27

Se disolvió KOH (11,23 g, 200,5 mmol) en metanol (280 ml), se añadió la sal de fumarato de 1-(2-isopropoxifenil)-piperazina (10,9 g, 33,4 mmol) y se agitó a 20ºC durante 20 min y a continuación se enfrió hasta 0ºC. Se añadió la amina 20 protegida en Boc (10g, 33,4 mmol) a la solución de metanol a 0ºC y se agitó durante 20 h mientras la temperatura ascendía hasta 20ºC, durante toda la noche. Se eliminó el disolvente, se añadió agua y la mezcla se extrajo con éter (3x), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (columna corta, 8 cm de altura de SiO_{2}, EtOAc / hexano como disolvente) para proporcionar 10,22 g (63%) de 3 (\sim100% de exceso de enantiómeros, Chiralpak OD 4,6 x 250 mm, 1 ml/min, 254 nm, fase móvil: 90/10/0,1 de hexano/IPA/dietilamina 0,1%) en forma de un aceite amarillento: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-7,35 (m, 5 H); 6,91 (m, 4 H); 4,68 (d,
J = 15,6 Hz, 1 H); 4,59 (m, 3 H); 3,95 (m, 1 H); 3,35 (m, 2 H); 3,11 (m, 4 H), 2,75 (m, 2 H), 2,54 (m, 2 H), 2,38 (m,
2 H), 1,45 (m, 9 H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 484 (MH^{+}).

Ejemplo 22

28

Se agitó a 20ºC durante 18 h una mezcla del compuesto 21 (233 mg, 0,48 mmol) y TFA 25%/cloruro de metileno (3 ml). El disolvente se concentró in vacuo y el residuo se basificó con NaOH_{(ac)} 20%, e extrajo con cloruro de metileno (3x), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para proporcionar 174 mg (\sim95%) de 22 en forma de un aceite. Usado directamente sin más purificación; MS (ES): 384 (MH^{+}).

Ejemplo 23

29

Se añadió formato de amonio (151 mg, 2,4 mmol) a una mezcla del compuesto 22 (\sim154 mg, 0,4 mmol) y Pd/C 10% (154 mg) en EtOH (3 ml) y se agitó durante 20 h a 55-60ºC. La mezcla se filtró a través de celite y se lavó con metanol. El filtrado se concentró. El producto se purificó mediante columna corta (5 cm de altura de SiO_{2}) para proporcionar 63 mg (524%) de 23 en forma de un aceite: [a]^{25}_{D} = +23,6º (c = 1, CHCl_{3}); RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,91 (m, 4 H), 4,59 (m, 1 H), 3,76 (m, 1 H), 3,12 (m, 4 H), 2,83 (d d, J = 12,7, 3,7 Hz, 2 H), 2,82 (m, 1 H), 2,25-2,68 (m, 8 H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ES): 294 (MH^{+}).

Ejemplos biológicos

La actividad biológica y la selectividad de los compuestos de la invención se demostró mediante los siguientes ensayos. El primer ensayo analizó la capacidad de los compuestos de Fórmula I para unirse a los receptores de membrana \alpha1_{a}-AR, \alpha1_{b}-AR y \alpha1d-AR.

Ejemplo 24

Se han publicado las secuencias de ADN de los tres subtipos clonados del \alpha1-AR humano. Además, los ADNc se han expresado tanto de manera transitoria en células COS como de manera estable en diversas líneas celulares de mamífero (HeLa, LM(tk-), CHO, fibroblastos rat-1) y se ha mostrado que retienen la actividad de unión de ligandos radiactivos y la capacidad de acoplarse con la hidrólisis de fosfoinosítidos. Se ha usado la información acerca de la secuencia de ADN publicada para diseñar cebadores para usar en la amplificación mediante RT-PCR de cada subtipo, para obtener ADNc clonado. Se obtuvo ARN poli A+ humano a partir de fuentes disponibles comercialmente e incluía muestras de hipocampo y próstata; fuentes que se habían citado en la bibliografía. En la selección primaria se usó un ensayo de unión ligandos radiactivos que empleaba preparaciones de membrana de células que expresaban los ADNc de los receptores clonados. Están comercialmente disponibles ligandos marcados con radiactividad con actividad de unión a los tres subtipos (no selectiva) ([125I]-HEAT, [3H]prazosina).

Cada subtipos del receptor \alpha1 se clonó a partir de ARN poli A+ mediante el método estándar de la reacción en cadena de la polimerasa por transcripción inversa (RT-PCR, abreviadamente en inglés "reverse transcription- polymerase chain reaction"). Se usaron las siguientes fuentes de ARN poli A+ para la clonación de los subtipos del receptor \alpha1: \alpha1_{a}-AR, hipocampo y próstata humanos; \alpha1_{b}-AR, hipocampo humano; \alpha1_{d}-AR, hipocampo humano. Los ADNc rotantes se clonaron en el vector de expresión en mamíferos pcDNA3 (Invitrogen Corp., San Diego, CA). Cada ADN se secuenciaron para verificar y detectar cualquier posible mutación introducida durante el proceso de amplificación. Cualquier desviación en la secuencia del consenso publicado de cada subtipo del receptor se corrigió mediante mutagénesis dirigida.

Las células COS se transfectaron con los tres subtipos del \alpha1-AR (a, b, c) usando un procedimiento estándar DEAE-dextrano con un choque de cloroquina. En este procedimiento, se sembraron 3,5 x 10^{6} células en cada placa de cultivo tisular (100 mm) y se transfectaron con 10 \mug de ADN. Tras aproximadamente 72 horas después de la transfección, se recogieron las células y se prepararon las membranas de COS. Las células COS transfectadas procedentes de 25 placas (100 mm) se rasparon y se resuspendieron en 15 ml de tampón TE (Tris-HCl 50 mM, EDTA 5 mM, pH 7,4). La suspensión se rompió con un homogeneizador. A continuación, se centrifugó a 1000xg durante 10 minutos a 40ºC. El sobrenadante se centrifugó a 34.500xg durante 20 minutos a 4ºC. El sedimento se resuspendió en 5 ml de tampón TNE (Tris-HCl 50 mM, NaCl 150 mM, EDTA 5 mM, pH 7,4). La preparación de membrana resultante se dividió en partes alícuotas y se almacenaron a -70ºC. La concentración de proteínas se determinó después de la solubilización de las membranas con Triton X-100.

Se evaluó la capacidad de cada compuesto para enlazarse con cada uno de los subtipos del \alpha1-AR mediante un ensayo de unión al receptor. Se usó, como ligando marcado con radiactividad, un ligando del \alpha1-AR no selectivo, [125l]-HEAT. Cada pocillo de una placa de 96 pocillos recibió: 140 \mul de TNE, 25 \mul de [125l]-HEAT diluido en TNE (50.000 cpm; concentración final 50 pM), 10 \mul del compuesto de ensayo diluido en DMSO (concentración final 1 pM-10 \muM), 25 ml de la preparación de membrana de las células COS que expresan uno de los tres subtipos del
\alpha1-AR (0,05-0,2 mg proteína de membrana). La placa se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente y las mezclas de reacción se filtraron a través de un filtro de placa Packard GF/C Unifilter. El filtro de placa se secó durante 1 hora en un horno de vacío. Se añadió líquido de centelleo (25 ml) a cada pocillo y el filtro de placa se contó en un contador de centelleo Packard Topcount. Los datos se analizaron usando el programa GraphPad Prism.

La Tabla A enumera los valores de IC_{50}, expresados en concentración nanomolar, para los compuestos seleccionados de la invención, en todos los subtipos del receptor.

30

31

La actividad antagonista y la selectividad de los compuestos de la invención por tejidos prostáticos frente a tejidos aórticos, así como sus antagonistas, se demostró como sigue. Se examinaron las respuestas contráctiles del tejido prostático de rata y de los tejidos aórticos de rata en presencia y ausencia de compuestos antagonistas. Como indicación de la selectividad del antagonismo, se compararon los efectos de los compuestos de ensayo en la contractibilidad del músculo liso vascular (\alpha1_{b}-AR y \alpha1_{d}-AR) con los efectos en el músculo liso prostático (\alpha1_{a}-AR). Se obtuvieron tiras de tejido prostático y anillos aórticos a partir de ratas macho derivadas de Long evans que pesaban 275 gramos, sacrificadas mediante dislocación cervical. El tejido prostático se colocó bajo tensión de 1 gramo en un baño de 10 ml que contenía solución salina tamponada con fosfato pH 7,4, a 32ºC y se determinó la tensión isométrica mediante transductores de fuerza. El tejido aórtico se colocó bajo tensión de 2 gramos en un baño de 10 ml que contenía solución salina tamponada con fosfato pH 7,4, a 37ºC. Se determinó la capacidad del compuesto de ensayo de reducir la respuesta contráctil inducida por norepinefrina en un 50% (IC_{50}). El compuesto 3 inhibió la respuesta contráctil en el tejido aórtico con un IC_{50} de 4,74 \muM y en el tejido prostático con un IC_{50} de 0,143 \muM. El compuesto 35 inhibió la respuesta contráctil en el tejido aórtico con un IC_{50} de 8,5 \muM y en el tejido prostático con un IC_{50} de 0,18 \muM.

Ejemplo 26

Se ensayaron compuestos seleccionados de la invención en su capacidad de antagonizar el incremento inducido por fenilefrina (PE, abreviadamente en inglés "phenylephrine") de la presión intrauretral en perros. La selectividad de estos compuestos se demostró comparando su efecto sobre el incremento inducido por PE de la presión arterial media (MAP, abreviadamente en inglés "mean arterial pressure") en el perro.

Se anestesiaron y cateterizaron perros macho "Beagle" para determinar la presión intrauretral (IUP, abreviadamente en inglés "intraurethral pressure") en la uretra prostática. Se determinó la presión arterial media (MAP) usando un catéter colocado en la arteria femoral. Inicialmente, se administraron intravenosamente a los perros seis dosis mayores (de 1 a \leq 32 mg/kg) de fenilefrina (PE) para establecer una curva de respuesta frente a dosis del agonista de control. Se registraron la IUP y la MAP siguiendo cada dosis hasta que la IUP regresó a la línea base. A continuación, se suministró a los perros una dosis mayor intravenosa del compuesto antagonista, seguido de dosis intravenosas de exposición a PE ascendentes, como en la una curva de respuesta frente a dosis del agonista de control. Se registraron las medidas de la IUP y la MAP tras cada exposición a PE. El compuesto antagonista se ensayó en un intervalo de dosis de 3 a 300 \mug/kg, con incrementos semilogarítmicos. El intervalo entre dosis del antagonista fue, al menos, de 45 min y se llevaron a cabo tres experimentos para cada compuesto de ensayo. El gráfico siguiente ilustra las reducciones en la IUP y la MAP en porcentajes promedio para el compuesto 8.

32

Bibliografía

M. Barry & C. Roehborn, Management of Benign Prostatic Hyperplasia, 48 Annu. Rev. Med. 177-89 (1997),

Bruno JF, Whittaker J, Song J., and Berelowitz M. (1991) Molecular cloning and sequencing of a cDNA encoding a human \alpha1 A adrenergic receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 179: 1485-1490.

Forray C, Bard JA, Wetzel JM, Chiu G, Shapiro E, Tang R, Lepor H, Hartig PR, Weinshank RL, Branchek TA, and Gluchowski C (1994) The \alpha1-adrenergic receptor that mediates smooth muscle contraction in human prostate has the pharmacological properties of the cloned human \alpha1 c subtype. Mol. Pharmacol. 45: 703-708.

Gormley G, Stoner E, Bruskewitz RC et al. (1992) The effect of finasteride in men with benign prostatic hyperplasia. N. Engl. J. Med. 327: 1185-1191.

Hatano A, Takahashi H, Tamaki M, Komeyama T, Koizumi T, and Takeda M (1994) Pharmacological evidence of distinct \alpha1-adrenoceptor subtypes mediating the contraction of human prostatic urethra and peripheral artery. Br. J. Pharmacol. 113: 723-728.

Harrison JK, Pearson WR, and Lynch KR (1991) Molecular characterization of \alpha1- and \alpha2-adrenoceptors. Trends Pharmacol. Sci. 12: 62-67.

Hieble JP and Caine M (1986) Etiology of benign prostatic hyperplasia and approaches to pharmacological management. Fed. Proc. 45: 2601 - 2603.

Hirasawa A, Horie K, Tanaka T, Takagaki K, Murai M, Yano J, and Tsujimoto G (1993) Cloning, functional expression and tissue distribution of human cDNA for the \alpha 1 c-adrenergic receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 195: 902-909.

Lepor H and Rigaud G (1990) The efficacy of transurethral resection of the prostate in men with moderate symptoms of prostatism. J. Urol. 143: 533537.

Lepor H, Auerbach S, Puras-Baez A et al. (1992) A randomized, placebo-controlled multicenter study of the efficacy and safety of terazosin in the treatment of benign prostatic hyperplasia. J. Urol. 148: 1467-1474.

Lepor H (1995) \alpha-Blockade for benign prostatic hyperplasia (BPH) J. Clin. Endocrinol. Metab. 80: 750-753.

Marshall I, Burt RP, Andersson PO, Chapple CR, Greengrass PM, Johnson GI, and Wyllie MG (1992) Human \alpha1c-adrenoceptor: functional characterization in prostate. Br. J. Pharmacol. 107(Proc. Suppl. Dec.): 327P.

Marshall l, Burt RP, and Chapple CR (1995) Noradrenaline contractions of human prostate mediated by \alpha 1 A- (\alpha 1 c-) adrenoceptor subtype. Br. J. Pharmacol. 115: 781-786.

Mebust WK, Holtgrewe HL, Cockett ATK, and Peters PC (1989) Transurethral prostatectomy: immediate and postoperative complications. A cooperative study of 13 participating institutions evaluating 3.885 patients. J. Urol., 141: 243-247.

Oesterling JE (1995) Benign prostatic hyperplasia. Medical and minimally invasive treatment options. N. Engl. J. Med. 332: 99-109.

Ramarao CS, Kincade Denker JM, Perez DM, Gaivin RJ, Riek RP, and Graham RM (1992) Genomic organization and expression of the human \alpha1 B-adrenergic receptor. J. Biol. Chem. 267: 21936-21945.

Schwinn DA, Johnston GI, Page SO, Mosley MJ, Wilson KH, Worman NP, Campbell S, Fidock MD, Furness LM, Parry-Smith DJ, Peter B, and Bailey DS (1995) Cloning and pharmacological characterization of human alpha-1 adrenergic receptors: sequence corrections and direct comparison with other species homologues. JPET 272:
134-142.

William D. Steers & Burkhart Zorn, Benign Prostatic Hyperplasia, in Disease-a-Month (M. Greenbeerger et al. Eds., 1995).

Weinberg DH, Trivedi P, Tan CP, Mitra S, Perkins-Barrow A, Borkowski D, Strader CD, and Bayne M (1994) Cloning, expression and characterization of human \alpha adrenergic receptors \alpha1A, \alpha1B, and \alpha1C. Biochem. Biophys. Res. Commun. 201: 1296-1304.

Weis KA, Epstein RS, Huse DM, Deverka PA and Oster G (1993) The costs of prostatectomy for benign prostatic hyperplasia. Prostate 22: 325-334.

Wennberg JE, Roos N, Sola L, Schori A, and Jaffe R (1987) Use of claims data systems to evaluate health care outcomes: mortality and reoperation following prostatectomy. JAMA 257: 933-936.

Yamada S, Tanaka C, Kimura R, and Kawabe K (1994) Alpha 1 adrenoceptors in human prostate: characterization and binding characteristics of alpha 1-antagonists. Life Sci. 54: 1845-1854.

Claims

1. Un compuesto de Fórmula I

33

R_{1} es hidrógeno, halógeno, alcoxi C_{1-5}, hidroxilo o alquilo C_{1- 5};

R_{2} es alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6} sustituido,

fenilo,

fenilo sustituido,

fenilalquilo C_{1-5},

o fenilalquilo C_{1-5} sustituido

R_{3} es hidrógeno, hidroxilo o alcoxi C_{1-5}, si la línea discontinua está ausente o

es oxígeno, si la línea discontinua está presente.

R_{4} es hidrógeno o alquilo C_{1-5}, fenilalquilo C_{1-5} o fenilalquilo C_{1-5} sustituido

R_{5} es alquilo C_{1-6},

alquilo C_{1-6} sustituido

fenilo,

fenilo sustituido

alquilo C_{1-8} sustituido

fenilalquilo C_{1-5},

fenilalquilo C_{1-5}sustituido

alcoxi C_{1-5}, amino, alquilamino C_{1-5}, dialquilamino C_{1-5}, alquilcarbonilo C_{1-5}, alcoxicarbonilo C_{1-5}, arilcarbonilo y nitro;

X es oxígeno, azufre o NH;

sales farmacéuticamente aceptables del mismo;

y esteroisómeros, mezclas racémicas, así como los enantiómeros del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{3} es oxígeno, hidrógeno o hidroxilo.

3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que R_{1} es hidrógeno, halógeno o hidroxilo, R_{2} es fenilo o alquilo C_{1-6}, R_{4} es alquilo C_{1-5}. o hidrógeno, R_{5} es alquilo C_{1-5}, fenilo o fenilo sustituido y X es azufre u oxígeno.

4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que R_{1} es hidrógeno, R_{2} es alquilo C_{1-5}, R_{3} es hidroxilo, R_{4} es hidrógeno, R_{5} es fenilo sustituido y X es oxígeno.

5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es hidrógeno, R_{2} es i-propilo, R_{3} es hidroxilo o hidrógeno, R_{4} es hidrógeno, R_{5} es fenilo o fenilo sustituido en el que los sustituyentes del fenilo se seleccionan de manera independiente de uno o más miembros del grupo constituido por alcoxi C_{1-5}, halógeno, dialquilamino C_{1-5}, alquilo C_{1-5} y alquilo C_{1-5} sustituido con halógeno y X es oxígeno.

6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es hidrógeno, R_{2} es i-propilo, R_{3} es hidroxilo, R_{4} es hidrógeno, R_{5} es fenilo, X es oxígeno y la estereoquímica del carbono quiral es S.

7. Una composición farmacéutica que contiene una dosis eficaz de un compuesto de Fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que la dosis eficaz de un compuesto de Fórmula I es 0,1 a 25,0 mg/kg.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que la dosis eficaz de un compuesto de Fórmula I es 0,01 a 1,0 mg/kg.

10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9 para su uso en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna o las enfermedades asociadas con el receptor adrenérgico \alpha-1_{a}.