ES2229268T3 - Transporte transepitelial de especies moleculares. - Google Patents

Transporte transepitelial de especies moleculares.

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ES2229268T3 ES96915101T ES96915101T ES2229268T3 ES 2229268 T3 ES2229268 T3 ES 2229268T3 ES 96915101 T ES96915101 T ES 96915101T ES 96915101 T ES96915101 T ES 96915101T ES 2229268 T3 ES2229268 T3 ES 2229268T3
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Abstract

SE DESCRIBE UNA PROTEINA RETICULANTE SINTETICA CAPAZ DE UNIR UNA MOLECULA O UNA ESPECIE MACROMOLECULAR A UN RECEPTOR DE TRANSCITOSIS PARA EL TRANSPORTE DE LA MOLECULA O LA ESPECIE MACROMOLECULAR A TRAVES DE UNA MEMBRANA MUCOSA, COMPRENDIENDO DICHA PROTEINA RETICULANTE UNA PRIMERA REGION DE UNION CAPAZ DE UNIRSE SELECTIVAMENTE A UN SITIO EN DICHA MOLECULA O ESPECIE MACROMOLECULAR A SER TRANSPORTADA Y UNA SEGUNDA REGION DE UNION CAPAZ DE UNIRSE SELECTIVAMENTE A DICHO RECEPTOR, EN DONDE LA PRIMERA REGION DE UNION ES EL SITIO DE UNION DE ANTIGENO DE UNA PRIMERA MOLECULA DE ANTICUERPO QUE TIENE ESPECIFICIDAD POR UN SITIO ANTIGENICO EN DICHA MOLECULA O ESPECIE MACROMOLECULAR A SER TRANSPORTADA Y LA SEGUNDA REGION DE UNION ES EL SITIO DE UNION DE ANTIGENO DE UNA SEGUNDA MOLECULA DE ANTICUERPO QUE TIENE ESPECIFICIDAD POR UN SITIO ANTIGENICO EN DICHO RECEPTOR DE TRANSCITOSIS.

Description

Transporte transepitelial de especies moleculares.
Esta invención se refiere al transporte transepitelial de especies moleculares, y se refiere concretamente a una proteína reticulante o bifuncional sintética que es capaz de unirse a una especie molecular, particularmente a una macromolécula tal como un anticuerpo, que no es capaz normalmente de ser secretado a través de la membrana, teniendo además el reticulante una región de unión capaz de unir el complejo macromolécula / reticulante así formado a los receptores de transcitosis presentes en células epiteliales (tales como las observadas en las membranas mucosas (mucosa)).
Antecedentes
Las células epiteliales son células que revisten una cavidad, o cubren una superficie y pueden formar una barrera selectiva para el intercambio de moléculas entre la luz de un órgano y un tejido subyacente. En muchos tipos de epitelios, la región extracitoplásmica de las células de conexión se fusiona junto con las uniones estrechas, que impiden la difusión paracelular de las macromoléculas.
El mecanismo principal de transporte de macromoléculas a través de las células con uniones estrechas es a través de transportadores vesiculares, en un proceso que se conoce como transcitosis. Normalmente, la molécula que se va a transportar mediante transcitosis se une primero a un receptor. El complejo receptor-ligando entra luego en la célula mediante endocitosis para formar una vesícula. Posteriormente se forman las vesículas transcitóticas, las cuales se exportan a la superficie de la célula contraria en donde se fusionan con la membrana plasmática y liberan sus contenidos en las secreciones. La transcitosis puede tener lugar en cualquier dirección, desde la superficie apical a la basolateral o desde la superficie celular basolateral a la apical.
La IgA es una inmunoglobulina que se encuentra en una gran variedad de secreciones de la mucosa, incluidas las secreciones gastrointestinal y respiratoria, y también la bilis. Tras la formación, la IgA secretora (slgA) se deposita sobre una célula epitelial superyacente, se transporta a través de la célula y se libera hacia las secreciones internas en donde la IgA forma la primera defensa inmunológica específica frente a las infecciones. El receptor que transporta la slgA (y también la IgM) se conoce como el receptor de inmunoglobulinas poliméricas (pIgR). En la ruta normal de secreción, la slgA interacciona con el pIgR sobre la superficie de las células epiteliales. El anticuerpo se interioriza y se transporta a través de la célula dentro una vesícula hacia la superficie apical. Al liberarse de la célula, el pIgR se escinde proteolíticamente, liberando un polipéptido conocido como el componente secretor (SC) que permanece unido al anticuerpo. El receptor es específico para las inmunoglobulinas poliméricas, tales como IgA e IgM, pero IgG no interaccionará con el receptor.
La inmunoglobulina G (IgG) es una inmunoglobulina distinta de IgA e IgM. Las inmunoglobulinas IgG tienen una masa molecular de aproximadamente 160.000 y constituyen el 85% de las inmunoglobulinas en los sueros de la mayoría de los individuos normales e hiperinmunes. La molécula consta de dos cadenas pesadas con una masa molecular cada una de ellas de aproximadamente 50.000 y dos cadenas ligeras con una masa molecular cada una de ellas de aproximadamente 25.000. Las proteínas de la clase IgG se pueden diferenciar en cuatro subclases, IgG-1 a IgG-4, cada una de las cuales tiene una cadena pesada distinta. Las preparaciones de IgG a partir de productos sanguíneos humanos se usan en el tratamiento clínico de una extensa variedad de enfermedades, y se usa en concreto para pacientes con inmunodeficiencia. La preparación de IgG se administra normalmente por vía intravenosa, pero también se puede administrar por vía intramuscular o por inyección subcutánea. Mientras que las preparaciones de IgG son eficaces en muchas circunstancias, debido a que la IgG no es capaz de ser secretada a través de las membranas de la mucosa, es por tanto menos capaz de funcionar como parte de la primera defensa inmunológica frente a una infección, por ejemplo, en el tracto digestivo y respiratorio.
Kraehenbuhl, J.P. et al. (1987) Adv. Exp. Med. Biol. 216B: 1053-1060 se refiere al transporte transepitelial mediado por receptor de anticuerpos secretores y al diseño de anticuerpos frente a la mucosa.
Sumario de la invención
Ampliamente establecida, la invención se refiere a novedosas proteínas complejas con una afinidad dual de unión (a) para un receptor de transcitosis en una membrana mucosa y (b) para una molécula o una especie macromolecular, proporcionándose la afinidad de unión mediante los sitios de unión al antígeno de las moléculas de anticuerpo apropiadas.
Descripción detallada de la invención
De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una proteína reticulante sintética capaz de unir una molécula o especie macromolecular a un receptor de transcitosis para el transporte de la molécula o la especie macromolecular a través de una membrana mucosa, comprendiendo dicha proteína reticulante una primera región de unión capaz de unirse de modo selectivo a un sitio de dicha molécula o especie macromolecular a transportar y una segunda región de unión capaz de unirse de modo selectivo a un sitio de dicho receptor de transcitosis, en el que la primera región de unión es el sitio de unión al antígeno de una primera molécula de anticuerpo y la segunda región de unión es el sitio de unión al antígeno de una segunda molécula de anticuerpo.
La proteína reticulante sintética según la invención puede comprender la primera molécula de anticuerpo completa o un fragmento funcional de la misma, unida de forma covalente a la segunda molécula de anticuerpo completa o un fragmento funcional de la misma, de tal modo que los respectivos sitios de unión al antígeno sean capaces de unirse a sus respectivos antígenos diana. Así, por ejemplo, la proteína reticulante sintética puede comprender la primera molécula de anticuerpo completa unida de forma covalente a la segunda molécula de anticuerpo completa, o puede comprender un fragmento de la primera molécula de anticuerpo unida de forma covalente a un fragmento de la segunda molécula de anticuerpo.
Se prefiere que la segunda región de unión de la proteína reticulante sea capaz de unirse de modo selectivo a un sitio del receptor de inmunoglobulinas poliméricas (pIgR), por ejemplo un sitio sobre la porción del componente secretor (SC) del pIgR.
Preferiblemente, la molécula a transportar es una macromolécula, tal como una proteína. Por comodidad, en el resto de la memoria descriptiva se refiere principalmente a "macromoléculas", que son las moléculas preferidas a transportar según la invención. Esto no se debería interpretar como una limitación para la presente invención al transporte transepitelial de macromoléculas. Se debe comprender que el término "macromolécula" incluye asociaciones o agregados de pequeñas macromoléculas, por ejemplo proteínas que están compuestas por dos o más subunidades que pueden estar unidas covalentemente o que se pueden mantener unidas mediante fuerzas no covalentes. Usando la invención, también es posible modificar otras moléculas, tales como fármacos o ácido nucleicos, de modo que sean capaces de experimentar transcitosis.
La proteína reticulante sintética de la presente invención representa una potente herramienta para conseguir el transporte de macromoléculas de un lado de una membrana al otro lado de la membrana, cuando la macromolécula no es capaz normalmente de ser secretada a través de esa membrana en condiciones fisiológicas.
Se pueden diseñar proteínas reticulantes específicas según la presente invención para unir una extensa variedad de diferentes moléculas; preferiblemente macromoléculas tales como proteínas. El reticulante de la presente invención es particularmente útil en permitir la transcitosis de anticuerpos, tal como la IgG, empleando un receptor de transcitosis tal como el receptor de inmunoglobulinas poliméricas (pIgR).
Durante su uso, la proteína reticulante contacta con una superficie de la molécula, preferiblemente una macromolécula, a transportar, para formar un complejo entre la proteína reticulante y la macromolécula, y después se introduce el complejo macromolécula / reticulante en un paciente, normalmente a través de la vía intravenosa. El complejo macromolécula / reticulante es capaz de ser secretado a través de los epitelios como consecuencia de la especificidad de unión de la proteína reticulante con un receptor de transcitosis, tal como el receptor de inmunoglobulinas poliméricas, en los epitelios. De forma alternativa, la proteína reticulante se puede infundir de modo que se una selectivamente a una molécula diana in vivo, dando lugar a una excreción específica de esa molécula diana, tal como una proteína, por una ruta de secreción a través del epitelio, gracias a la unión a un receptor de transcitosis, tal como el receptor de inmunoglobulinas poliméricas. El complejo macromolécula / reticulante es capaz de ser secretado a través de una membrana de la mucosa, gracias a su especificidad inherente por el receptor de
transcitosis.
La presente invención es particularmente útil cuando la macromolécula a transportar es una inmunoglobulina, en cuyo caso la primera región de unión de la proteína reticulante debe tener una especificidad de unión para un sitio sobre dicha inmunoglobulina.
En un aspecto preferido, la especie macromolecular a transportar es IgG y la primera región de unión tiene especificidad de unión para un sitio sobre la región constante de dicha IgG. Así, de acuerdo con un segundo aspecto de la invención, se proporciona una proteína reticulante sintética capaz de unir IgG a un receptor de transcitosis para el transporte de la misma a través de una membrana mucosa, comprendiendo dicha proteína reticulante la primera molécula de anticuerpo completa o un fragmento funcional de la misma, incluyendo al menos su sitio de unión al antígeno, unida de forma covalente a la segunda molécula de anticuerpo completa o un fragmento funcional de la misma, incluyendo al menos su sitio de unión al antígeno, en la que el sitio de unión al antígeno de la primera molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio antigénico en la región constante de la cadena pesada de IgG y el sitio de unión al antígeno de la segunda molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio antigénico en dicho receptor de transcitosis. Preferiblemente, el sitio de unión al antígeno de la segunda molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio del receptor de inmunoglobulinas poliméricas (plgR), por ejemplo un sitio sobre la porción del componente secretor (SC) del
plgR.
También se proporciona una composición farmacéutica, preferiblemente en forma inyectable, para su uso en el tratamiento de un paciente inmunodeficiente, comprendiendo una IgG donante y una cantidad de proteína reticulante sintética de acuerdo con el segundo aspecto de la invención suficiente para unir al menos una proporción de dicha IgG donante para la administración de IgG a un órgano interno definido por una membrana mucosa del paciente.
Este aspecto preferido de la invención proporciona un tratamiento mejorado para los pacientes inmunodeficientes que experimentan la terapia de IgG donantes. De manera específica, la composición farmacéutica, preferiblemente en forma inyectable, permite administrar IgG donantes con una amplia especificidad a las membranas de la mucosa que se aíslan normalmente de tal tratamiento. La composición farmacéutica se prepara simplemente por mezcla de la proteína reticulante con la IgG donante. Ya que todas las IgG donantes tendrán la misma región común en su estructura, la proteína reticulante se unirá a IgG con una amplia especificidad necesaria. Típicamente, la composición farmacéutica, comprenderá un equilibrio de IgG sin unir e IgG unida a la proteína reticulante. Las cantidades relativas de IgG unida y sin unir dependerán de la cantidad de la proteína reticulante en la composición. Las cantidades relativas reales dependerán del tratamiento que lleve el paciente, pero típicamente será tal que se una aproximadamente el 10-20% de la IgG a la proteína reticulante. Normalmente, la IgG total usada es aproximadamente 0,2 - 0,4 g/kg de peso corporal, al mes. La composición farmacéutica se inyecta preferiblemente por vía intravenosa o
subcutánea.
En otro aspecto preferido, la especie macromolecular a transportar es un autoanticuerpo, tal como un autoanticuerpo IgG y la primera región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio de la región variable de dicho autoanticuerpo. Así, de acuerdo con un tercer aspecto de la invención, se proporciona una proteína reticulante sintética capaz de unir un autoanticuerpo, preferiblemente un autoanticuerpo IgG, a un receptor de transcitosis para el transporte del mismo a través de una membrana mucosa, comprendiendo dicha proteína reticulante una primera molécula de anticuerpo completa o un fragmento funcional de la misma, incluyendo al menos su sitio de unión al antígeno, unida de forma covalente a una segunda molécula de anticuerpo completa o un fragmento funcional de la misma, incluyendo al menos su sitio de unión al antígeno, en la que el sitio de unión al antígeno de la primera molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio antigénico de la región variable de dicho autoanticuerpo y el sitio de unión al antígeno de segunda molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio antigénico de dicho receptor de transcitosis. Preferiblemente, el sitio de unión al antígeno de la segunda molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio del receptor de inmunoglobulinas poliméricas (plgR), por ejemplo un sitio sobre la porción del componente secretor (SC) del plgR.
También se proporciona una composición farmacéutica, preferiblemente en forma inyectable, para su uso en el tratamiento de un paciente que padece una enfermedad autoinmune que está provocada por un autoanticuerpo, comprendiendo una cantidad eficaz de proteína reticulante sintética, de acuerdo con el tercer aspecto de la invención como se ha definido antes, para unirse a dicho autoanticuerpo.
Este aspecto de la invención proporciona una terapia para determinadas enfermedades autoinmunes que están causadas por un autoanticuerpo, por ejemplo el lupus sistémico eritromatoso (LSE). El tratamiento del paciente con una composición farmacéutica en la que la proteína reticulante tiene afinidad por el autoanticuerpo específico, la posibilitará para ser eliminada y secretada de manera selectiva del cuerpo a través del conducto biliar del intestino, que tiene una membrana de la mucosa que incluye receptores de transcitosis. Se debe elegir la proteína reticulante para unirse de modo selectivo a los autoanticuerpos responsables de la enfermedad autoinmune, y no a otras IgG normales presentes en la circulación del paciente. Esto se puede conseguir al señalar la región variable de la IgG a eliminar, que será muy específica para los autoanticuerpos.
Las técnicas adecuadas para diseñar las proteínas reticulantes con la especificidad deseada se discuten a continuación.
Típicamente, se prepara la proteína reticulante identificando un primer anticuerpo o un fragmento funcional de anticuerpo capaz de unirse a la molécula o macromolécula en cuestión, e identificando un segundo anticuerpo o un fragmento funcional de anticuerpo que sea capaz de unirse a un sitio de un receptor de transcitosis contenido en la membrana mucosa a través de la cual se va a transportar la molécula, y combinando después el primer anticuerpo o el fragmento funcional del anticuerpo y el segundo anticuerpo o el fragmento funcional del anticuerpo para formar una única proteína reticulante en la que se mantengan las especificidades de unión de los anticuerpos
"originales".
Cuando se han identificado el primer y el segundo anticuerpos (o fragmentos de anticuerpo), se combinan para formar una única proteína reticulante que mantiene la especificidad de unión de cada uno de los anticuerpos originales. Esta combinación del primer y segundo anticuerpos o fragmentos de anticuerpo se puede conseguir por simple unión química de las dos moléculas mediante, por ejemplo, un enlace disulfuro. De manera alternativa, y preferida, se va a ligar el ADN que codifica cada uno de los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo para formar una única molécula de ADN que luego se pueda expresar en un huésped para producir una única proteína que contenga las regiones de unión de los polipéptidos previamente identificados.
Se considera altamente preferente que la proteína reticulante se construya a partir de los fragmentos funcionales del primer y segundo anticuerpo, que contienen cada uno al menos una parte sustancial de la(s) región(es) variable(s) derivadas de una o preferiblemente ambas cadenas ligera y pesada. Se prefieren tales fragmentos de anticuerpo porque ahora existen técnicas para la persona experta para expresar fragmentos funcionales de anticuerpos en una célula huésped que sean capaces de unirse de modo específico a sitios antigénicos sobre cualquier macromolécula deseada. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo preparados mediante estas técnicas se denominan fragmentos F_{v} y F_{ab}. El fragmento F_{v} es un heterodímero de sólo los dominios variables de la cadena pesada y la cadena ligera. Normalmente, las dos cadenas del fragmento F_{v} están unidas covalentemente mediante, por ejemplo, un conector peptídico para formar lo que se conoce como F_{v} de cadena única. En la presente invención se prefiere particularmente el uso de F_{v} de cadena única. El fragmento F_{ab} es similar al fragmento F_{v}, pero contiene además el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante de la cadena pesada. Normalmente, las cadenas del fragmento F_{ab} no están unidas covalentemente pero en cambio se mantienen unidas mediante fuerzas no covalentes. En el artículo titulado "Antibody Engineering: Advances from the use of Escherichia Coli Expression Systems", de Andreas Plückthun, Biotechnology, Vol. 9, págs. 545-551 (junio de 1991) se pueden encontrar más detalles respecto a la preparación y caracterización de los fragmentos de anticuerpo.
La identificación de fragmentos de anticuerpo adecuados, preferiblemente F_{v} de cadena única, se puede conseguir por una técnica en la que el fragmento funcional de anticuerpo se presenta sobre la superficie de un bacteriófago donde se puede seleccionar directamente con un antígeno. Esta técnica se describe en detalle en un artículo titulado "Phage Antibodies: will new ``coliclonal'' antibodies replace monoclonal antibodies", de David J. Chiswell et al, Tibtech, Vol.10, págs. 80-84 (marzo de 1992). En esta técnica, se aísla el ARNm celular y se prepara el ADNc. Las regiones variables de la cadena pesada y ligera de las moléculas de inmunoglobulina se amplifican mediante PCR usando cebadores específicos. Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera se unen a través de un conector peptídico flexible mediante corte y empalme con PCR. Los productos de PCR se cortan después con endonucleasa(s) de restricción adecuada(s) y se ligan en un vector fagómido que se ha cortado de manera similar. El vector fagómido se transforma después en un vector huésped adecuado tal como E. coli y, usando un fago auxiliar, se producen las partículas de fagómido que presentan la proteína de fusión.
Se puede preparar una genoteca de fagómidos que contiene partículas de fagómido que presentan una gama de fragmentos de anticuerpo y esta se analiza sistemáticamente después para identificar el fragmento del anticuerpo que presenta afinidad por (a) la molécula diana (preferiblemente una macromolécula) y (b) el pertinente receptor de transcitosis. Por tanto, se deduce que tales dianas deben poseer un sitio antigénico viable. Una vez que se han identificado las partículas de fagómido que presentan el fragmento deseado de anticuerpo, se purifica el ADN de cada una de ellas y se ligan las secuencias codificantes con una secuencia codificante para un pequeño conector peptídico. La construcción se puede ligar después en un vector adecuado, transformarse en una célula huésped y aislarse el fragmento del anticuerpo bivalente mediante procedimientos conocidos.
En un aspecto preferido de la presente invención, se sintetiza una proteína reticulante que tiene afinidad por la región constante de IgG y afinidad por el receptor de inmunoglobulinas poliméricas. Esta proteína reticulante es preferiblemente un fragmento de anticuerpo bivalente construido a partir de dos fragmentos F_{v} de cadena única, que se han identificado mediante las técnicas descritas antes por tener una afinidad de unión para la región constante de IgG y para el receptor de inmunoglobulinas poliméricas.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una macromolécula unida a una proteína reticulante según el primer aspecto de esta invención. Preferiblemente, la macromolécula es IgG, y la molécula reticulante comprende una región que tiene afinidad para el receptor de inmunoglobulinas poliméricas, así como afinidad por la región constante de IgG. La IgG puede ser policlonal o monoclonal. Preferiblemente es policlonal y se obtiene a partir de productos sanguíneos.
La proteína reticulante de la presente invención se puede usar para transportar otras macromoléculas, tales como fármacos, a través de una membrana mucosa.
La proteína reticulante se puede añadir también a un paciente para marcar macromoléculas específicas que se desean eliminar o absorber presentes en el paciente, por ejemplo inmunoglobulinas patológicas, o anticuerpos antinucleares y otros autoanticuerpos. La proteína reticulante se construye para unirse a regiones especificas características de la macromolécula a eliminar. Una vez unida a la molécula reticulante, el complejo macromolécula / reticulante es capaz de ser secretado a través del sistema de vías biliares.
El siguiente ejemplo ilustra la invención.
Ejemplo
En este ejemplo, se construye una proteína reticulante sintética que tiene afinidad por la región constante de IgG (una inmunoglobulina no secretora) y el receptor de inmunoglobulinas poliméricas, que es el principal receptor de transcitosis en la membrana mucosa.
Construcción de F_{v} de cadena única (scF_{v})
Se aislaron linfocitos de sangre periférica humana, se preparó el ARNm a partir de las células y se produjo la primera hebra de ADNc (Clackson T., D. Gussow & P.T. Jones (1992) en PCR: A practical Approach, Ed. McPherson M.J.P. Quirke & G.R. Taylor, IRL Press). Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera de las moléculas de inmunoglobulina se amplificaron mediante PCR usando los cebadores detallados en la tabla l. Las regiones variables de las cadenas ligera y pesada se unieron de forma aleatoria a través de un conector peptídico flexible ((Glicina, Serina)_{3}) mediante corte y empalme con PCR usando los conectores detallados en la tabla 2. Después se cortaron los productos de PCR con Sfi1 y Spe1 y se ligaron en un vector fagómido (pAC36) que se había cortado de forma similar. El vector fagómido se transformó en E. coli y, usando un fago auxiliar, se produjeron partículas de fagómido que expresan la proteína de fusión.
Detección sistemática de scFv
Se recogió el sobrenadante de E. coli transformado con el vector recombinante de fagómido. Contiene partículas de fagómido que expresan un intervalo de scF_{v}s: este sobrenadante se conoce como genoteca de fagómidos. Esta genoteca se analizó para la afinidad de expresión de scF_{v} para la región constante de la IgG y para el receptor polimérico de la Ig (plgR) mediante balanceo, como se describe, por ejemplo por Nissim, A, H.R. Hoogenboom, I.M. Tomlinson, G. Flynn, C. Midgley, D. Lane & G. Winter (1994) EMBO J. 13 692-698. De manera concisa, la molécula diana se recubrió sobre tubos de plástico y se añadió la genoteca de fagómidos. Tras la incubación, se retiraron los fagómidos sin unir mediante lavado y se eluyó el fagómido unido. Este procedimiento se repitió para el fagómido unido con una restricción creciente hasta que se aislaron las scF_{v} de especificidades deseadas.
Construcción de F_{v} Bivalente
Una vez que se aislaron los dos fagómidos que expresan scF_{v} de especificidad deseada, se purificó el ADN de cada uno. Las secuencias codificantes para scF_{v} se retiraron y se unieron con una secuencia codificante para un pequeño conector peptídico. La construcción se ligó después en un vector de expresión para E. coli. La F_{v} bivalente producida por E. coli se aisló a partir del sobrenadante usando técnicas estándar de purificación de proteínas.
Evaluación de la eficacia de transporte
La capacidad para transferir la IgG a través de las células epiteliales se puede medir usando una técnica descrita en Mazanec M.B., J.G. Nedrud, C.S. Kaetzel and M.E. Lamm (1993) Immunology Today 14. 430-434. La F_{v} bivalente se mezcla con un anticuerpo monoclonal humano específico para eritrocitos RhD positivos. La mezcla se pone luego en contacto con una capa de células epiteliales cultivadas que expresan plgR. Las células epiteliales se crecieron sobre una membrana permeable que divide el recipiente de cultivo y sólo mediante la interacción con el plgR se puede transportar la IgG hacia el compartimento apical del recipiente de cultivo. Al igual que dos anticuerpos monoclonales de diferentes isotipos específicos para eritrocitos RhD positivos, se pueden medir los niveles de IgG1 y IgG3 transportados mediante ensayos de aglutinación y por ELISA.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 1 Cebadores de PCR para la amplificación de las regiones variables de las cadenas ligera y pesada
2
TABLA 2 Cebadores de PCR para la unión de las regiones variables de la cadena pesada y ligera
1
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
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(1)
SOLICITANTE:
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(A)
NOMBRE: The National Blood Authority
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(B)
CALLE: Oak House, Reeds Crescent
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(C)
CIUDAD: Watford
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(D)
PROVINCIA: Hertfordshire
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(E)
PAÍS: RU
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(F)
CÓDIGO POSTAL (ZIP): WD1 1QM
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(A)
NOMBRE: Jacqueline Elizabeth Mary GILMOUR
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(B)
CALLE: The Beeches, Stinchcombe Hill
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(C)
CIUDAD: Dursley
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(D)
PROVINCIA: Gloucestershire
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(E)
PAÍS: RU
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(F)
CÓDIGO POSTAL (ZIP): GL11 6AQ
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(A)
NOMBRE: David Joseph Unsworth
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(B)
CALLE: 14 Elm Lane, Redland
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(C)
CIUDAD: Bristol
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(E)
PAÍS: RU
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(F)
CÓDIGO POSTAL (ZIP): ninguno
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(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Transporte transepitelial de especies moleculares
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 26
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
FORMA LEGIBLE EN COMPUTADORA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE DISPOSITIVO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
COMPUTADORA: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
PROGRAMA: PatentIn Release \mathsterling1.0, Versión \mathsterling1.25 (EPO)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CAGCTGCAGC TGCAGCAGTC TGG 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA. single
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CAGGTCAACC TGCAGGAGTC TGG 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GAGGTGCAGC TGCAGGAGTC TGG 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CAGGTGCAGC TGCAGGAGTC GGG 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CAGGTACAGC TGCAGCAGTC AGG 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 28 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CTTGGTGGRT GCTGAKGAGA CGCTGACC 
\hfill
28 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GACATCCAGC TGACCCAGTC TCC 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LENGTHS 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATATTCAGC TGACTCAGTC TCC 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GAAATTCAGC TGACGCAGTC TCC 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AGACTCTCCC CTGTTGAAGC TCTT 
\hfill
24 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AACCAGCCAT GGCCTCTGAG CTGACTCAGG ACCC 
\hfill
34 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AACCAGCCAT GGCCCAGTCT GTGTTGACGC AGCC 
\hfill
34 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AACCAGCCAT GGCCTCCTAT GTGCTGACTC AGCC 
\hfill
34 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 27 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TGAAGATTCT GTAGGGGCCA CTGTCTT 
\hfill
27 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 56 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCAGGAGGCG GAGGCTCTGG AGGAGGTGGC AGTGAGGTGC AGCTGCAGGA GTCTGG 
\hfill
56 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 56 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCAGGAGGCG GAGGCTCTGG AGGAGGTGGC AGTCAGGTGC AGCTGCAGCA GTCTGG 
\hfill
56 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 56 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCAGGAGGCG GAGGCTCTGG AGGAGGTGGC AGTCAGCTGC AGCTGCAGGA GTCGGG 
\hfill
56 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 56 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCAGGAGGCG GAGGCTCTGG AGGAGGTGGC AGTCAGGTAC AGCTGCAGCA GTCAGG 
\hfill
56 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 56 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCAGGAGGCG GAGGCTCTGG AGGAGGTGGC AGTCAGGTCA ACCTGCAGGA GTCTGG 
\hfill
56 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 36 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CGGACTAGTC TTGGTGGAGG CTGATGAGAC GGCGAC 
\hfill
36 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 36 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CGGACTAGTC TTGGTGGGGG CTGAGGAGAC GGCGAC 
\hfill
36 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCATTAGGCC TCGAGGGCCT CGAWATTCAG CTGACKCAG 
\hfill
39 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCATTAGGCC TCGAGGGCCT CGACATCCAG CTGACCCAG 
\hfill
39 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 53 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GAGCCTCCGC CTCCTGATCC GCCACCTCCG AAGACAGATG GTGCAGCCAC AGT 
\hfill
53 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 33 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID. SEC. Nº 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCATTAGGCC TCGAGGGCCT CCCAGCCATG GCC 
\hfill
33 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA ID SEC Nº: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 45 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
TIPO DE CADENA: única
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID SEC Nº: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AGAGCCTCCG CCTCCTGATC CGCCACCTCC CGAGGGGGCA GCCTT 
\hfill
45

Claims (19)

1. Una proteína reticulante sintética capaz de unir una molécula o especie macromolecular a un receptor de transcitosis para el transporte de la molécula o la macromolécula a través de una membrana mucosa, comprendiendo dicha proteína reticulante una primera región de unión capaz de unirse selectivamente a un sitio de dicha especie molecular o macromolecular a ser transportada y una segunda región de unión capaz de unirse selectivamente a un sitio sobre dicho receptor de transcitosis, en la que la primera región de unión es el sitio de unión al antígeno de una primera molécula de anticuerpo y la segunda región de unión es el sitio de unión al antígeno de una segunda molécula de
anticuerpo.
2. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 1, que comprende la primera molécula de anticuerpo completa o un fragmento de la misma unida de forma covalente a la segunda molécula de anticuerpo completa o un fragmento de ésta, de tal modo que los respectivos sitios de unión al antígeno sean capaces de unirse de modo selectivo a sus respectivos antígenos diana.
3. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 2, que comprende la primera molécula de anticuerpo completa unida de forma covalente a la segunda molécula de anticuerpo completa.
4. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 2, que comprende un fragmento de la primera molécula de anticuerpo unida de forma covalente a un fragmento de la segunda molécula de anticuerpo.
5. Una proteína reticulante sintética según cualquier reivindicación precedente, en la que la segunda región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio sobre el receptor de inmunoglobulinas poliméricas (pIgR).
6. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 5, en la que la segunda región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a la porción del componente secretor (SC) del pIgR.
7. Una proteína reticulante sintética según cualquier reivindicación precedente, en la que la molécula o especie macromolecular a transportar es una inmunoglobulina y la primera región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio sobre dicha inmunoglobulina.
8. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 7, en la que la molécula o especie macromolecular a transportar es IgG y la primera región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio de la región constante de dicha IgG.
9. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 7, en la que la molécula o especie macromolecular a transportar es un autoanticuerpo y la primera región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio de la región variable de dicho autoanticuerpo.
10. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 2, capaz de unir IgG a un receptor de transcitosis para el transporte de la misma a través de una membrana mucosa, en la que el sitio de unión al antígeno de la primera molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio antigénico de la región constante de la cadena pesada de IgG.
11. Una molécula reticulante sintética según la reivindicación 10, en la que el sitio de unión al antígeno de la segunda región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio sobre el receptor de inmunoglobulinas poliméricas (pIgR).
12. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 11, en la que el sitio de unión al antígeno de la segunda región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a la porción del componente secretor (SC) del pIgR.
13. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un paciente inmunodeficiente, que comprende IgG sérica aislada de un donante y una cantidad de una proteína reticulante sintética como la reivindicada en la reivindicación 10, 11 ó 12, suficiente para unirse al menos a una proporción de dicha IgG sérica, para la administración de IgG a un órgano interno definido por una membrana mucosa del paciente.
14. Una composición farmacéutica según la reivindicación 13, que está en forma inyectable.
15. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 2, capaz de unir un autoanticuerpo a un receptor de transcitosis para el transporte de la misma a través de una membrana mucosa, en la que el sitio de unión al antígeno de la primera molécula de anticuerpo es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio antigénico de la región variable de dicho autoanticuerpo.
16. Una molécula reticulante sintética según la reivindicación 15, en la que el sitio de unión al antígeno de la segunda región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a un sitio sobre el receptor de inmunoglobulinas poliméricas (pIgR).
17. Una proteína reticulante sintética según la reivindicación 16, en la que el sitio de unión al antígeno de la segunda región de unión es capaz de unirse de modo selectivo a la porción del componente secretor (SC) del pIgR.
18. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un paciente que padece una enfermedad autoinmune, que está causada por un autoanticuerpo, que comprende una cantidad de proteína reticulante sintética como la reivindicada en la reivindicación 15, 16 ó 17, eficaz para unirse a dicho autoanticuerpo.
19. Una composición farmacéutica según la reivindicación 18, que está en forma inyectable.
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