ES2233367T3 - Metodo hemisintetico e intermediarios del mismo. - Google Patents
Metodo hemisintetico e intermediarios del mismo.Info
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Abstract
El uso en la síntesis de un compuesto 21-Nuc con una estructura de fórmula (XIV) como material de partida. **(Fórmula)** donde al menos un anillo A o E es quinólico y el grupo Nuc a la posición 21 es un grupo que se puede transformar mediante un desplazamiento nucleofílico a un grupo 21-hidróxido, el compuesto 21-Nuc es un compuesto 21-nucleófilo de origen natural con la siguiente fórmula, o el compuesto 21-Nuc es un derivado de 21-Nuc de un compuesto de origen natura con la siguiente fórmula: **(Fórmula)**. **(Tabla)**.
Description
Método hemisintético e intermediarios del
mismo.
La presente invención trata de métodos
sintéticos, y en particular trata de métodos hemisintéticos.
La patente Europea 309,477 trata de las
ecteinascidinas 729, 743, 745, 759A, 759B y 770. Se sabe que los
compuestos ecteinascidinas tienen propiedades anti bacteriales y
otras propiedades útiles. La ecteinascidina 743 está sometida ahora
a ensayos clínicos como agente antitumoral.
La ecteinascidina 743 tiene una estructura del
complejo tris(tetrahidroisoquinolinfenol) de la fórmula (I)
siguiente:
Se prepara comúnmente al aislarse de extractos
del tunicate marino Ecteinascidin turbinata. El rendimiento
es bajo, y se han buscado procesos preparativos alternativos.
Se describe un proceso sintético para producir
los compuestos ecteinascidina en la patente americana 5,721,362. El
método reivindicado es largo y complicado, existiendo 38 ejemplos
que describe cada uno un paso en la secuencia sintética para llegar
a la ecteinascidina 743.
Se dirige la reivindicación 25 de la patente
americana 5,721,362 a un compuesto fenol intermediario de la
fórmula (11) dada, a la cual nos referimos también como el
Intermediario 11 o Int-11. Esta tiene la siguiente
estructura (II) bis(tetrahidroisoquinolinfenol):
donde el MOM es un sustituyente
metoximetilo y TBDPS es un sustituyente
3,5-t-butildifenilsililo.
A partir del intermediario 11 es posible
sintetizar otro interesante agente anti tumoral, la ftalascidina,
ver Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999.
La ftalascidina es un derivado
bis(tetrahidroisoquinolinfenol) de fórmula (III):
En la ecteinascidina 743, el puente 1,4 tiene la
estructura de la fórmula (IV):
Otras ecteinascidinas conocidas incluyen a los
compuestos con un sistema diferente del anillo cíclico puenteado,
como ocurre en la ecteinascidina 722 y 736, donde el puente tiene
la estructura de la fórmula (V):
Las ecteinascidinas 583 y 597, donde el puente
tiene la estructura de la fórmula (VI):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Y la ecteinascidina 594 y 596, donde el puente
tiene la estructura de la fórmula (VII):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La estructura completa de estos compuestos y de
relacionados se dan en el J. Am. Chem. Soc. (1996) 118,
9017-9023. Este artículo está incorporado como
referencia.
Se conocen compuestos adicionales que pierden un
sistema de anillo cíclico puenteado. Ellos incluyen a los
bis(tetrahidroisoquinolinquinona) safracin antibióticos
antitumorales-antimicrobiales y las saframicinas, y
los productos naturales marinos renieramicinas y xestomicina
aisladas de los cultivos de esponjas o microbios. Todos ellos
tienen una estructura de carbon dimérica común
tetrahidroisoquinolina. Estos compuestos se pueden clasificar en
cuatro tipos, los tipos I a IV, con respecto al patrón de oxidación
de los anillos aromáticos.
Las isoquinolinquinonas diméricas, de tipo I, es
un sistema de fórmula (VIII) que se presenta más comúnmente en esta
clase de compuestos, ver la siguiente tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1,5cm^{a} Las asignaciones son intercambiables
\hskip1,5cm^{b} Donde el grupo Q tiene la fórmula (IX):
Los anillos aromáticos de tipo I se observan en
las saframicinas A, B y C; G y H; y S se aislaron de
Streptomyces lavendulae como componentes minoritarios. Se
conoce, un derivado ciano de la saframicina A, llamado
cianoquinonamina del japonés Kokai JP-A2 59/225189
y 60/084288. Se produjeron por la S. lavendulae, por
biosíntesis directa con un suplemento adecuado del medio de
cultivo las saframicinas Y_{3}, Yd_{1}, Ad_{1}, y
Yd_{2},. Los dímeros de las saframicinas Y_{2b} y
Y_{2b-d} que se forman al unir el nitrógeno sobre
el C-25 de una unidad al C-14 de la
otra, se han producido también en medios de cultivo con suplemento
de S. lavendulae. Las saframicinas AR_{1}(=AH_{2},),
producto de la reducción microbiana de la saframicina A en el
C-25 se produjeron por el Rhodococcus
amidophilus, se preparó también por la reducción química no
estereoselectiva de la saframicina A con borohidruro de sodio como
una mezcla de epímeros 1:1 seguido por la separación cromatográfica
[el otro isómero AH_{1} es menos polar]. Se produjo el producto
de reducción adicional, de la saframicina AR_{3}, la
21-deciano-25-dihidro-saframicina
A, (= 25-dihidrosaframicina B) por la misma
conversión microbiana. Otro tipo de conversión microbiana de la
saframicina A utiliza especies Nocardia que produce saframicina B y
la reducción adicional por una especie Mycobacterium que produce la
saframicina AH^{1}Ac. Se prepararon los
25-O-acetatos de la saframicina
AH_{2} y AH_{1} también químicamente para estudios
biológicos.
Los compuestos de tipo I de fórmula (X) se
aislaron también de esponjas marinas, ver Tabla II.
Se aislaron las Renieramicinas
A-D del extracto antimicrobiano de una esponja, una
especie Reniera que se recoge en México, junto con las
isoquinolinas renierona monoméricas que se relacionan
biogenéticamente y compuestos relacionados. Se asignó inicialmente
la estructura de la Renieramicina A con la estereoquímica invertida
en los carbonos C-3, C-11, y
C-13. Sin embargo, el examen cuidadoso de los datos
de RMN ^{1}H para los nuevos compuestos relacionados, las
renieramicinas E y F, que se aislaron también de la misma esponja
que se recogió en Palau, mostró que la unión del anillo de las
renieramicinas era idéntico al de las saframicinas. Este resultado
condujo a la conclusión de que la estereoquímica asignada
anteriormente a las renieramicinas A-D debe ser la
misma que aquella de las saframicinas.
Se encontró en una esponja, la xestomicina, una
especie de Xestospongia que se recoge de aguas de Sri
Lancan.
Los compuestos de tipo II de fórmula (XI) con un
anillo de hidroquinona reducido incluyen a las saframicinas D y F,
que se aislaron de S. lavendulae, y las saframicinas
Mx-1 y Mx-2, que se aislaron de
Myxococcus xanthus. Ver la Tabla III.
Se encontró el esqueleto de tipo III en los
antibióticos safracinas A y B, que se aislaron de los cultivos
Pseudomonas fluorescens. Estos antibiótios de fórmula (XII)
consisten de una subunidad
tetrahidroisoquinolina-quinona y una subunidad
tetrahidroisoquinolinfenol.
Donde R^{21} es -H en la safracina A y es un
-OH en la safracina B.
Se aisló también de S. lavendulae, la
saframicina R, el único compuesto clasificado como esqueleto de
Tipo IV. Este compuesto de fórmula (XIII), consiste de un anillo
hidroquinona con una cadena lateral éster glicólico sobre uno de
los oxígenos fenólicos, se puede considerar un
pro-fármaco de la saframicina A debido a su
moderada toxicidad.
Todos estos compuestos que se conocen tienen un
sistema fusionado de cinco anillos de (A) a (E) como
se muestra en la siguiente estructura de fórmula (XIV):
Los anillos A y E son fenólicos en
las ecteinascidinas y en algunos otros compuestos, mientras que en
otros compuestos, en particular en las saframicinas, los anillos
A y E son quinólicos. En los compuestos conocidos,
los anillos B y D son tetrahidro, mientras el anillo
C es perhidro.
La necesidad continúa para los nuevos compuestos
activos con un sistema de cinco anillos fusionados de los
compuestos conocidos, y para rutas sintéticas alternativas a los
compuestos ecteinascidinas y los compuestos relacionados. Dichas
rutas sintéticas pueden proporcionar vías más económicas a los
agentes anti-tumorales conocidos, así como permitir
la preparación de nuevos compuestos activos.
En un aspecto, se dirige la presente invención al
uso de un compuesto conocido, la safracina B, referenciado también
como quinonamina, en la síntesis hemisintética.
La invención trata, más generalmente de un
proceso hemisintético para la formación de intermediarios,
derivados y estructuras relacionadas de ecteinascidinas u otros
compuestos tetrahidroisoquinolinfenol iniciando a partir de
alcaloides naturales bis(tetrahidroisoquinolina). Los
materiales de partida apropiados para el proceso
hemi-sintético incluyen las clases de antibióticos
saframicina y safracina disponibles a partir de diferentes caldos de
cultivo, y también las clases de compuestos reineramicina y
xestomicina disponibles a partir de esponjas marinas.
En particular, la presente invención proporciona
el uso en la síntesis de un compuesto 21-Nuc como
producto de partida con una estructura de fórmula (XIV):
Donde al menos un anillo A o E es
quinonico, y el grupo Nuc en la posición-21 es un
grupo que se puede transformar por desplazamiento nucleofílico en
un grupo 21-hidroxilo, siendo el compuesto
21-Nuc un compuesto nucleófilo-21
que se encuentra naturalmente de la siguiente fórmula, o siendo el
compuesto 21-Nuc un derivado de
21-Nuc de dicho compuesto que se encuentra
naturalmente de la siguiente fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
o
o
donde R^{21} es -H en la safracina A y es un
-OH en la safracina B;
En un aspecto relacionado, la presente invención
proporciona un método para preparar un compuesto de fórmula
(XVIIb):
donde:
R^{1} es un grupo aminometileno protegido o
derivado opcionalmente, un grupo hidroximetileno protegido o
derivado opcionalmente, y R^{4} es -H;
o
R^{1} y R^{4} forman juntos un grupo de
fórmula (IV), (V) (VI) o (VII):
R^{5} es -H o -OH;
R^{7} es -OCH_{3} y R^{8} es -OH o R^{7}
y R^{8} forman juntos un grupo
-O-CH_{2}-O;
R^{14a} y R^{14b} son ambos-H
o uno es -H y el otro es -OH, OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o
R^{14a} y R^{14b} forman juntos un grupo ceto;
R^{15} es -H o -OH;
R^{18} es -H o -OH;
R^{21} es -H, -OH o -CN;
y derivados;
a partir de un compuesto 21-ciano
de fórmula (XVIb):
donde:
R^{1} es un grupo amidometileno o un grupo
aciloximetileno;
R^{5} y R^{8} se eligen independientemente a
partir de -H, -OH o -OCOCH_{2}OH, o R^{5} y R^{8} son ambos
un grupo ceto y el anillo A es un anillo
p-benzoquinona;
R^{12} es -H, -CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3};
R^{14a} y R^{14b} son ambos-H
o uno es -H y el otro es -OH, OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o
R^{14a} y R^{14b} forman juntos un grupo ceto; y
R^{15} y R^{18} se eligen independientemente
de -H o -OH, o R^{15} y R^{18} son ambos un grupo ceto y el
anillo E es un anillo p-benzoquinona;
dado que al menos uno de los anillos A o
E es un anillo p-benzoquinona; las reacciones del
método comprenden como necesario:
- a)
- la conversión de un sistema quinona para el anillo E en el sistema fenol
- b)
- la conversión de un sistema quinona para el anillo A en el sistema fenol;
- c)
- la conversión del sistema fenol para el anillo A en un anillo dioximetilenfenol;
- d)
- la formación de un sistema de anillo spiro puenteado de fórmula (IV), (VI) o (VII) a través de la posición-1 y la posición-4 en el anillo B; y
- e)
- la derivación;
para dar el compuesto deseado de
fórmula
(XVIIb).
En un aspecto relacionado, la presente invención
proporciona un método para preparar un compuesto de fórmula
(XXIIb):
donde:
R^{1} es -CH_{2}NH_{2} o -CH_{2}OH, o una
versión protegida o derivada de dicho grupo y R^{4} es -H;
o
R^{1} y R^{4} forman juntos un grupo de
fórmula (IV), (VI) o (VII):
R^{5} es -OH o una versión derivada o protegida
de dicho grupo;
R^{12} es -H, -CH_{3} o CH_{2}CH_{3};
R^{14a} y R^{14b} son ambos-H
o uno es -H y el otro es -OH o una versión protegida o derivada de
dicho grupo, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} forman juntos un grupo ceto;
R^{15} es -H, -OH o una versión derivada o
protegida de dicho grupo;
R^{18} es -OH o una versión derivada o
protegida de dicho grupo; y
R^{21} es -H, -OH o -CN;
a partir de un compuesto 21-ciano
de fórmula (XVIb):
donde:
R^{1} es un grupo amidometileno o un grupo
aciloximetileno;
R^{5} y R^{8} se eligen independientemente de
-H, -OH o -OCOCH_{2}OH, o R^{5} y R^{8} son ambos un grupo
ceto y el anillo A es un anillo p-benzoquinona,
R^{12} es -H, -CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3};
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} forman juntos un grupo ceto; y
R^{15} y R^{18} se eligen independientemente
de -H o -OH, o R^{15} y R^{18} son ambos ceto y el anillo
E es un anillo p-benzoquinona;
dado que al menos uno de los anillos A o
E es un anillo p-benzoquinona; las reacciones del
método comprenden como necesario:
- a)
- la conversión de un sistema quinona para el anillo E en el sistema fenol
- b)
- la conversión de un sistema quinona para el anillo A en el sistema fenol;
- c)
- la conversión del sistema fenol para el anillo A en un anillo dioximetilenfenol;
- d)
- la formación de un sistema de anillo spiro puenteado de fórmula (IV), (VI) o (VII) a través de la posición-1 y la posición-4 en el anillo B; y
- e)
- la derivación;
para dar el compuesto deseado de
fórmula
(XXIIb).
Una fórmula general (XV) para los compuestos de
partida es como sigue:
donde:
R^{1} es un grupo amidometileno como es
-CH_{2}-NH-CO-CR^{25a}R^{25b}R^{25c}
donde R^{25a} y R^{25b} forman un grupo ceto o uno es
-OH,-NH_{2} o -OCOCH_{3} y el otro es -CH_{2}COCH_{3}, -H,
-OH o -OCOCH_{3}, dado que cuando R^{25a} es -OH o -NH_{2}
entonces R^{25b} no es -OH, y R^{25c} es -H,- CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3}, o R^{1} es un grupo aciloximetileno como es
-CH_{2}-O-CO-R,
donde R es -C(CH_{3})=CH-CH_{3} o
-CH_{3};
R^{5} y R^{8} se eligen independientemente de
-H, -OH o -OCOCH_{2}OH, o R^{5} y R^{8} son ambos un grupo
ceto y el anillo A es un anillo p-benzoquinona;
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} forman juntos un grupo ceto;
R^{15} y R^{18} se eligen independientemente
de -H o -OH, o R^{5} y R^{8} son ambos un grupo ceto y el
anillo A es un anillo p-benzoquinona; y
R^{21} es -OH o -CN.
Así, de acuerdo a la presente invención,
proporcionamos ahora rutas hemisintéticas para la producción de
intermediarios incluyendo al intermediario 11 y así para la
producción de los compuestos ecteinascidina así como para los
compuestos ftalascidina y adicionales. Cada una de las rutas
hemisintéticas comprende un número de pasos de transformación para
llegar al producto deseado. Cada paso es en sí mismo un proceso de
acuerdo con esta invención. La invención no se limita a las rutas
que se ejemplifican, y se pueden proporcionar rutas alternativas
al, por ejemplo, cambiar el orden de los pasos de transformación,
como sea apropiado.
En particular, esta invención involucra la
provisión de un producto de partida 21-ciano de
fórmula general (XVI):
donde R^{1}, R^{5}, R^{8},
R^{14a}, R^{14b}, R^{15} y R^{18} son como se
definieron.
Otros compuestos de fórmula (XVI) con diferentes
sustituyentes en la posición-21 pueden representar
también posibles productos de partida. En general, es un candidato
cualquier derivado capaz de producir por desplazamiento nucleofílico
del grupo 21-hidroxi de compuestos de fórmula (XV)
en donde R^{21} es un grupo hidroxilo. Los ejemplos de
sustituyentes-21 apropiados incluyen pero no están
limitados a:
un grupo mercapto;
un grupo tioalquilo (el grupo alquilo teniendo de
1 a 6 átomos de carbono);
un grupo tioarilo (el grupo arilo teniendo de 6 a
10 átomos de carbono y que siendo no sustituido o sustituido por 1
a 5 sustituyentes que se eligen de por ejemplo, un grupo alquilo
que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que tienen de 1
a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos mercapto y grupos
nitro);
un grupo amino;
un mono o dialquilamino (el o cada grupo alquilo
teniendo de 1 a 6 átomos de carbono):
un grupo mono o diaril amino (el o cada grupo
arilo es como se definió anteriormente en relación a los grupos
tioarilo);
un grupo \alpha-carbonilalquilo
de fórmula
-C(R^{a})(R^{b})-C(=O)R^{c},
donde
R^{a} y R^{b} se eligieron a partir de átomos
de hidrógeno; de grupos alquilo que tienen de 1 a 20 átomos de
carbono, grupos arilo (como se definió anteriormente en relación a
grupos tioarilo) y grupos aralquilo (en los que un grupo alquilo
que tiene de 1 a 4 átomos de carbono se sustituye por un grupo
arilo como se definió anteriormente en relación a los grupos
tioarilo), con la condición de que R^{a} o R^{b} sea un átomo
de hidrógeno;
R^{c} se eligió a partir de un átomo de
hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 20 átomos de carbono,
los grupos arilo (como se definió anteriormente en relación a los
grupos tioarilo), un grupo aralquilo (en el que un grupo alquilo
tiene de 1 a 4 átomos de carbono está sustituido por un grupo arilo
como se definió anteriormente en relación a los grupos tioarilo),
un grupo alcoxilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo
amino o un grupo mono o dialquilamino como se definió
anteriormente.
Así, en un aspecto más general, la presente
invención trata de un proceso donde el primer paso es formar un
21-derivado utilizando un reactivo nucleofílico. Nos
referimos a dichos compuestos como compuestos
21-Nuc.
Se requiere la presencia del grupo
21-ciano para algunos de los productos finales,
particularmente la ecteinascidina 770 y la ftalascidina, mientras
que para otros productos finales éste actúa como un grupo protector
que puede convertirse rápidamente en otro sustituyente como es el
grupo 21-hidroxilo de la ecteinascidina 743 o de la
21-hidroxiftalascidina. La adopción del compuesto
21-ciano como producto de partida estabiliza
efectivamente a la molécula durante los pasos sintéticos
siguientes, hasta que éste es eliminado opcionalmente. Otros
compuestos 21-Nuc pueden ofrecer ésta y otras
ventajas.
En un aspecto importante, la presente invención
consiste en el uso de un compuesto 21-ciano de la
fórmula general (XVI) en la preparación de compuestos bis- o
tris-(tetrahidroisoquinolinfenol). Los productos que se pueden
preparar incluyen a los intermediarios como es el intermediario 11,
y las ecteinascidinas y ftalascidinas, así como los compuestos
nuevos y conocidos de estructuras relacionadas.
Los productos de partida que se prefieren
incluyen a aquellos compuestos de fórmula (XV) donde R^{14a} como
R^{14b} son hidrógeno. Los productos de partida que se prefieren
también incluyen a los compuestos de fórmula (XV) o (XVI) donde
R^{15} es hidrógeno. Además, los productos de partida que se
prefieren incluyen a aquellos compuestos de fórmula (XV) o (XVI)
donde el anillo E es un anillo fenólico. Los productos de
partida incluyen además a los compuestos de fórmula (XV) o (XVI)
donde al menos uno, y mejor al menos dos o tres de R^{5},
R^{8}, R^{15} y R^{18} no es hidrógeno.
Los ejemplos de productos de partida apropiados
para esta invención incluyen la saframicina A, la saframicina B, la
saframicina C, la saframicina G, la saframicina H, la saframicina
S, la saframicina Y_{3}, la saframicina Yd_{1}, la saframicina
Ad_{1}, la saframicina Yd_{2}, la saframicina AH_{2}, la
saframicina AH_{2}Ac, la saframicina AH_{1}, la saframicina
AH_{1}Ac, la saframicina AR_{3}, la renieramicina A, la
renieramicina B, la renieramicina C, la renieramicina D, la
renieramicina E, la renieramicina F, la xestomicina, la saframicina
D, la saframicina F, la saframicina Mx-1, la
saframicina Mx-2, la safracina A, la safracina B y
la saframicina R. Los productos de partida que se prefieren tienen
un grupo ciano en la posición 21, para el grupo R^{21}.
En un aspecto que se prefiere particularmente, la
invención involucra un proceso de hemisíntesis en donde se aplican
los pasos de transformación a la safracina B:
La safracina B presenta un sistema de anillo muy
relacionado con las ecteinascidinas. Este compuesto tiene la misma
estructura pentaciclo y el mismo padrón de sustitución en el anillo
aromático de la derecha, el anillo E. La safracina B también
presenta similitudes muy cercanas a algunos de los intermediarios
sintéticos en la síntesis total de ET-743,
particularmente al intermediario 11. Se puede transformar dicho
intermediario en Et-743 utilizando un método bien
establecido. La conversión sintética de la safracina B en el
intermediario 11 proporcionará por lo tanto un método
hemi-sintético para obtener
ET-743.
Así, proporcionamos el intermediario 11 hecho a
partir de este compuesto safracina B, y los compuestos derivados
del intermediario 11, particularmente los compuestos
ecteinascidina. Proporcionamos además la ftalascidina hecha a
partir de la safracina B. La invención trata también de usar a la
safracina B en la producción del intermediario 11, los compuestos
ftalascidina, ecteinascidina y los otros intermediarios de la
invención. La invención trata también de compuestos descritos aquí
derivados de los otros productos de partida que se sugieren, y el
uso de aquellos compuestos en la producción de dichos
compuestos.
Los productos de partida que más se prefieren de
esta invención tienen un grupo 21-ciano. El
compuesto que comúnmente se prefiere más de la presente invención
es el compuesto de Fórmula 2. Este compuesto se obtiene directamente
a partir de la safracina B y es considerado un intermediario clave
en el proceso hemisintético.
En un aspecto relacionado, se obtiene la
cianosafracina B por fermentación de una cepa productora de
safracina B de Pseudomonas fluorescens, y estimulando el
caldo de cultivo utilizando el ión cianuro. La cepa que se prefiere
de Pseudomonas fluorescens es la cepa A2-2,
FERM BP-14, que se emplea en el procedimiento de EP
055,299. Una fuente apropiada del ión cianuro es el cianuro de
potasio. En un tratamiento típico, el caldo se filtra y se agrega el
exceso del ión cianuro. Después de un intervalo apropiado de
agitación, como es 1 hora, el pH se vuelve alcalino, por ejemplo a
pH 9,5 y una extracción orgánica da un extracto crudo que puede
además purificarse para dar la cianosafracina B.
Para evitar dudas, las estereoquímicas que se
indican en esta especificación de patente se basan a nuestro
entender en la estereoquímica correcta de los productos naturales.
Hasta que un error sea descubierto en la estereoquímica asignada,
entonces la corrección apropiada necesita hacerse en la fórmula que
se da en toda esta especificación de patente. Además, hasta el
punto que la síntesis sea capaz de modificación, esta invención se
extiende a sus estereoisómeros.
Los productos de esta invención son típicamente
de la fórmula (XVIIb):
donde:
R^{1} es un grupo aminometileno derivado u
opcionalmente protegido, un grupo hidroximetileno derivado u
opcionalmente protegido, como es el grupo R^{1} que se definió
por la fórmula (XV);
R^{4} es -H;
o
R^{1} y R^{4} forman juntos un grupo de
fórmula (IV), (V), (VI) o (VII):
R^{5} es -H o -OH;
R^{7} es -OCH_{3} y R^{8} es -OH o R^{7}
y R^{8} forman juntos un grupo
-O-CH_{2}-O;
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} forman juntos un grupo ceto; y
R^{15} es -H o -OH;
R^{21} es -H, -OH o -CN;
y los derivados que incluyen a los derivados
acilo de éstos especialmente donde R^{5} es acetiloxi u otro
grupo aciloxi de más de 4 átomos de carbono, y que incluye los
derivados donde el grupo -NCH_{3}- en la
posición-12 se reemplaza por -NH- o
-NCH_{2}CH_{3}, y los derivados donde el grupo -NH_{2}- en el
compuesto de fórmula (VI) es derivado opcionalmente.
En la fórmula (XVIIb), el grupo R^{1} es
típicamente aminometileno, amidometileno o R^{1} con R^{4}
forma un grupo (IV) o (V). Los grupos amidometileno apropiados
incluyen a aquellos de fórmula
-CH_{2}-NH-CO-CHCH_{3}-NH_{2},
derivados de alanina, y grupos similares derivados de otros
aminoácidos, en particular, ambos D y L, glicina, valina, leucina,
isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, metionina, cisteína,
aspartato, asparagina, ácido glutámico, glutamina, lisina,
arginina, prolina, serina, treonina, histidina e hidroxiprolina.
Una fórmula general para el grupo R^{1} es entonces
-CH_{2}-NH-aa, donde aa indica un
grupo acil aminoácido.
El grupo R^{1} se puede acetilar sobre un grupo
-NH_{2}, y por ejemplo se pueden formar los derivados
N-acilo a partir de grupos -CH_{2}NH_{2} y
-CH_{2}-NH-aa. Los derivados acilo
pueden ser derivados N-acilo o
N-tioacilo de ellos, así como amidas cíclicas. Los
grupos acilo pueden ser ilustrativamente grupos alcanoílo,
haloalcanoílo, arilalcanoílo, alquenoílo, heterociclilacilo,
aroílo, arilaroílo, haloaroílo, nitroaroílo, u otros grupos acilo.
Los grupos acilo pueden ser de fórmula -CO-R^{a},
donde R^{a} pueden ser diversos grupos como es el alquilo, el
alcoxilo, el alquileno, el arilalquilo, el arilalquileno, el acil
amino ácido, o heterociclilo, cada uno sustituido opcionalmente con
un halógeno, un ciano, un nitro, un carboxialquilo, un alcoxilo, un
arilo, un ariloxilo, un heterociclilo, un heterocicliloxi, un
alquilo, un amino o un amino sustituido. Otros agentes acilantes
incluyen a los isotiocianatos, como es el aril isotiocianato, en
particular el fenil isocianato.
Los grupos alquilo, alcoxilo o alquileno de
R^{a} tienen apropiadamente de 1 a 6 ó 12 átomos de carbono, y
pueden ser lineales, ramificados o cíclicos. Los grupos arilo son
típicamente el fenilo, el bifenilo o el naftilo. Los grupos
heterociclilo pueden ser aromáticos o parcialmente o completamente
insaturados y tienen apropiadamente de 4 a 8 átomos en el anillo,
de mayor preferencia 5 ó 6 átomos en el anillo, con uno o más
heteroátomos que se eligen a partir del nitrógeno, el azufre y el
oxígeno.
Sin ser exhaustivos, los grupos R^{a} típicos
incluyen al alquilo, el haloalquilo, el alcoxialquilo, el
haloalcoxialquilo, el arilalquileno, el haloalquilarilalquileno, el
acilo, el haloacilo, el arilalquilo, el aquenilo y el amino ácido.
Por ejemplo, R^{a}-CO- puede ser el acetilo, el
trifluoroacetilo, el 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo,
el isovalerilcarbonilo, el
trans-3-(trifluorometil)cinamoílcarbonilo, el
heptafluorobutirilcarbonilo, el decanoílcarbonilo, el
trans-cinamoílcarbonilo, el butirilcarbonilo, el
3-cloropropionilcarbonilo, el cinamoílcarbonilo, el
4-metilcinamoílcarbonilo, el
hidrocinamoílcarbonilo, o el
trans-hexenoílcarbonilo, o el alanilo, el arginilo,
el aspartilo, el asparagilo, el cistilo, el glutamilo, el
glutaminilo, el glicilo, el histidilo, el hidroxiprolilo, el
isoleucilo, el leucilo, el lisilo, el metionilo, el fenilalanilo,
el prolilo, el serilo, el treonilo, el tironilo, el triptofilo, el
tirosilo, el valilo, así como otros grupos acil amino ácidos menos
importantes, así como es el ftalimido u otras amidas cíclicas.
Se pueden encontrar otros ejemplos entre los
grupos protectores enlistados.
Los compuestos donde -CO-R^{a}
se deriva de un amino ácido e incluyen un grupo amino pueden por sí
mismos formar derivados acilo. Los comandos N-acilo
apropiados incluyen a los dipéptidos que forman en turno derivados
N-acilo.
En una variación que relaciona a los productos
intermediarios, el anillo A se modifica para incorporar el
sustrato que se muestra como fórmula (XX) o (XXI), que se discute
después.
En otra variación que relaciona a los
intermediarios, el grupo R^{1} puede ser
-CH_{2}O-CO-CFu-CH_{2}-S-Prot^{3},
derivado de un compuesto de fórmula (XIX), donde Prot^{3} y Fu
tienen el significado indicado. En tal caso, R^{7} y R^{8} del
grupo oximetilenoxi. El grupo R^{18} está usualmente protegido.
El R^{21} es ciano usualmente.
De preferencia R^{14a} y R^{14b} son
hidrógeno. De preferencia R^{15} es hidrógeno. Los derivados
O-acilo son apropiadamente derivados alifáticos
O-acilo, especialmente los derivados acilo de 1 a 4
átomos de carbono, y típicamente un grupo
O-acetilo, en particular en la
posición-5.
Los grupos protectores apropiados para los
fenoles y los grupos hidroxilo incluyen los éteres y los ésteres,
como es el alquilo, el alcoxialquilo, el ariloxialquilo, el
alcoxialcoxialquilo, el alquilsililalcoxialquilo, el
alquiltioalquilo, el ariltioalquilo, el azidoalquilo, el
cianoalquilo, el cloroalquilo, el heterocíclico, el arilacilo, el
haloarilacilo, el cicloalquilalquilo, el alquenilo, el
cicloalquilo, el alquilarilalquilo, el alcoxiarilalquilo, el
nitroarilalquilo, el haloarilalquilo, el
alquilaminocarbonilarilalquilo, el alquilsulfinilarilalquilo, el
alquilsililo y otros éteres, y el arilacilo, el carbonato de
arilalquilo, el carbonato alifático, el carbonato de
alquilsulfinilarilalquilo, el carbonato de alquilo, el carbonato de
aril haloalquilo, el carbonato de aril alquenilo, el carbamato de
arilo, el fosfinil alquilo, el alquilfosfinotioílo, el
arilfosfinotioílo, el sulfonato de aril alquilo y otros ésteres. Se
pueden sustituir dichos grupos opcionalmente con los grupos
previamente mencionados en R^{1}.
Los grupos protectores apropiados para las aminas
incluyen los carbamatos, las amidas, y otros grupos protectores,
como es el alquilo, el arilalquilo, el sulfo- o el
halo-aril alquilo, el haloalquilo, el
alquilsililalquilo, el arilalquilo, el cicloalquilalquilo, el
alquilarilalquilo, el heterociclilalquilo, el nitroarilalquilo, el
acilaminoalquilo, el nitroarilditioarilalquilo, el
dicicloalquilcarboxamidoalquilo, el cicloalquilo, el alquenilo, el
arilalquenilo, el nitroarilalquenilo, el heterociclilalquenilo, el
heterociclilo, el hidroxiheterociclilo, el ditioalquilo, el alcoxi o
el halo o el alquilsulfinil arilalquilo, el heterociclilacilo, y
otros carbamatos, y el alcanoílo, el haloalcanoílo, el
arilalcanoílo, el alquenoílo, el heterociclilacilo, el aroílo, el
arilaroílo, el haloaroílo, el nitroaroílo, y otras amidas, así como
el alquilo, el alquenilo, el alquilsililalcoxialquilo, el
alcoxialquilo, el cianoalquilo, el heterociclilo, el
alcoxiarilalquilo, el cicloalquilo, el nitroarilo, el arilalquilo,
el alcoxi- o hidroxi-arilalquilo, y muchos otros
grupos. Se pueden sustituir opcionalmente dichos grupos con los
grupos previamente mencionados en R^{1}.
Los ejemplos de dichos grupos protectores se dan
en las siguientes tablas.
La Safracina B incluye una cadena lateral
alanilo. En un aspecto de la invención, encontramos que la
protección del grupo amino libre con un grupo Boc puede
proporcionar grandes ventajas.
En particular, los productos ecteinascidina de
esta invención incluyen los compuestos de la fórmula (XVIII):
Donde R^{1} y R^{4} forman un grupo de
fórmula (IV), (V), (VI) o (VII):
Más particularmente un grupo (IV) o (V);
R^{21} es -H, -OH o -CN, más particularmente
-OH o -CN;
y los derivados de acilo de ellos, más
particularmente los derivados 5-acilo que incluyen
los derivados 5-acetilo.
En general, la conversión del compuesto de
partida 21-ciano a un producto ecteinascidina de,
por ejemplo, fórmula (XVIII) involucra:
a) la conversión si es necesario de un sistema
quinona para el anillo E en un sistema fenol
b) la conversión si es necesario de un sistema
quinona para el anillo A en un sistema fenol;
c) la conversión del sistema fenol para el anillo
A en el anillo dioximetilenfenol;
d) la formación del sistema de anillo espiro
puenteado de fórmula (IV), (VI) o (VII) a través de la
posición-1 y la posición-4 en el
anillo B; y
e) la derivación apropiada, como es la
acilación.
El paso (a), la conversión si es necesaria de un
sistema quinona para el anillo E en un sistema fenol, se
puede efectuar por los procedimientos de reducción convencional. Un
sistema de reactivo apropiado es el hidrógeno con un catalizador de
paladio sobre carbono, aunque se pueden emplear otros sistemas
reductores.
El paso (b), la conversión si es necesaria de un
sistema quinona para el anillo A en un sistema fenol es
análogo al paso (a), y no son necesarios más detalles.
El paso (c), la conversión del sistema fenol para
el anillo A en el anillo dioximetilenfenol, se puede
efectuar en varias formas, posiblemente a través del paso (b). Por
ejemplo, se puede de-metilar un anillo A
quinona en el sustituyente metoxilo en la
posición-7 y reducir a una dihidroquinona y ser
atrapado con un reactivo electrofílico como es el CH_{2}Br_{2},
el BrCH_{2}Cl, o un reactivo divalente similar que produce
directamente el sistema de anillo dioximetileno, o con un reactivo
divalente como es el tiocarbonildiimidazol que produce un sistema
de anillo sustituido dioximetileno que se puede convertir en el
anillo deseado.
El paso (d) se efectúa típicamente por la
sustitución apropiada en la posición-1 con un
reactivo puenteado que puede asistir la formación del puente deseado
formando un metiluro de quinona exendo en la
posición-4 y permitir al metiluro reaccionar con el
sustituyente-1 para provocar la estructura puente.
Los reactivos de puenteado que se prefieren son de la fórmula
(XIX)
donde Fu indica un grupo funcional
protegido, como es un grupo -NHProt^{4a} o -OProt^{4b},
Prot^{3} es un grupo protector, y la línea punteada muestra un
doble enlace
opcional.
Se forma adecuadamente el metiluro al introducir
primero un grupo hidroxilo en la posición-10 en la
unión de los anillos A y B para dar una estructura
parcial de fórmula (XX):
o de mayor preferencia una
estructura parcial de fórmula
(XXI):
donde el grupo R'' se elige del
grupo deseado de fórmula (IV), (V), (VI) o (VII). Para los dos
primeros de éstos grupos, el grupo R'' toma típicamente la forma
-CHFu-CH_{2}-SProt^{3}. Se
pueden eliminar y modificar entonces los grupos protectores como
sea apropiado para dar el compuesto
deseado.
Se proporciona un procedimiento típico para el
paso (d) en la patente americana 5,721,362 incorporado por
referencia. Se hace la referencia particular al pasaje en la
columna 8, paso (1) y el Ejemplo 33 de la patente americana, y los
pasajes relacionados.
La derivación en el paso (d) puede incluir la
acilación, por ejemplo con un grupo R^{a}-CO- así
como la conversión del grupo 12-NCH_{3} al
12-NH o el 12-NCH_{2}CH_{3}. Se
puede efectuar dicha conversión antes o después de los otros pasos,
utilizando los métodos disponibles.
A forma de ilustración, es ahora posible de
transformar la cianosafracina B compuesto de fórmula 2 en la
ET-743 resultando en una forma más sencilla y corta
para hacer ET-743 que los métodos previamente
descritos. Se puede transformar la cianosafracina B en el
intermediario 25;
y a partir de este derivado es
posible de introducir un número de derivados de cisteína que se
pueden transformar más tarde en ET-743. Los
derivados de cisteína que se prefieren se ejemplifican en los
siguientes dos
compuestos:
El análisis retrosintético para hacer
ET-743 utilizando el compuesto 29 se describe en el
esquema I.
Siguiendo el esquema I anterior es posible de
obtener ET-743 en 21 pasos lineales. Este método
transforma la cianosafracina B en el intermediario 25 a través de
una secuencia de reacciones que involucran esencialmente (1) la
eliminación del grupo metoxilo colocado en el anillo A, (2)
la reducción del anillo A y la formación del grupo
dioximetileno en un paso, (3) la hidrólisis de la función amida
colocada sobre el carbono 1, (4) la transformación del grupo amino
resultante en un grupo hidroxilo.
Además, el método evita la protección y la
desprotección de la función alcohol primario en la
posición-1 en el anillo B del compuesto 25
utilizando directamente un residuo cisteína 29 para formar el
intermediario 27. Se protege el derivado cisteína 29 en el grupo
amino con el grupo protector
\beta\beta\beta-tricloroetoxicarbonilo para
tener compatibilidad con los existentes grupos alilo y MOM. El
intermediario 27 se oxida y cicla directamente. Estas
circunstancias, junto con una diferente estrategia de desprotección
en los últimos estados de la síntesis hacen a la ruta nueva y más
dispuesta a su desarrollo industrial que el proceso de la patente
americana US 5,721,362.
La conversión del compuesto
2-ciano en el intermediario 25 involucra usualmente
los siguientes pasos (ver el esquema II):
la formación del compuesto protegido de fórmula
14 al reaccionar 2 con anhídrido tert-butoxicarbonilo;
la conversión de 14 en el compuesto
di-protegido de fórmula 15 al reaccionar con
bromometilmetiléter y diisopropiletilamina en acetonitrilo;
la eliminación selectiva del grupo metoxilo del
sistema quinona en 15 para obtener el compuesto de fórmula 16 al
reaccionar con una solución metanólica de hidróxido de sodio;
la transformación de 16 en el compuesto
dioximetileno de fórmula 18 al emplear la siguiente secuencia
preferida: (1) el grupo quinona del compuesto 16 es reducido con el
10% de Pd/C bajo atmósfera de hidrógeno; (2) el intermediario
hidroquinona se convierte en el compuesto dioximetileno de fórmula
17 al reaccionar con bromoclorometano y carbonato de cesio bajo
atmósfera de hidrógeno; (3) se transforma 17 en el compuesto de
fórmula 18 al proteger el grupo hidroxilo libre como un grupo
OCH_{2}R. Esta reacción se realizó con BrCH_{2}R y carbonato de
cesio, donde R puede ser arilo, CH=CH_{2}, OR' etc.
la eliminación del tert-butoxicarbonilo y
los grupos protectores metiloximetilo de 18 para producir el
compuesto de fórmula 19 al hacer reaccionar con una solución de HCl
en dioxano. Esta reacción también se realiza al mezclar 18 con una
solución de ácido trifluoroacético en diclorometano;
la formación del compuesto tiourea de fórmula 20
al reaccionar 19 con fenilisotiocianato;
la conversión del compuesto de fórmula 20 en el
compuesto amina de fórmula 21 al reaccionar con una solución de
cloruro de hidrógeno en dioxano;
la transformación del compuesto de fórmula 21 en
el derivado N-Troc 22 al reaccionar con cloroformato de
tricloroetilo y piridina,
la formación del compuesto hidroxilo protegido de
fórmula 23 al reaccionar 22 con bromometilmetil éter y
diisopropiletilamina;
la transformación del compuesto de fórmula 23 en
el derivado N-H 24 al reaccionar con ácido acético y
zinc;
la conversión del compuesto de fórmula 24 en el
compuesto hidroxilo de fórmula 25 al reaccionar con nitrito de
sodio en ácido acético. Alternativamente, se puede utilizar
tetróxido de nitrógeno en una mezcla de ácido acético y
acetonitrilo seguido por el tratamiento con hidróxido de sodio.
También, se puede utilizar nitrito de sodio en una mezcla de
anhídrido acético-ácido acético, seguido por el tratamiento con
hidróxido de sodio.
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La conversión del compuesto intermediario 25 en
el compuesto ET-743 utilizando el derivado de
cisteína 29 involucra usualmente los siguientes pasos (ver esquema
III):
la transformación del compuesto de fórmula 24 en
el derivado 30 al proteger la función hidroxilo primario con
(S)-N-
2,2,2-tricloroetoxicarbonil-S-(9H-fluoren-9-ilmetil)
cisteína 29;
la conversión del compuesto protegido de fórmula
30 en el derivado fenol 31 por ruptura del grupo alilo con hidruro
de tributil estaño y dicloropaladio-bis
(trifenilfosfina);
la transformación del compuesto fenol de fórmula
31 en el compuesto de fórmula 32 por oxidación con anhídrido
bencenselénico a baja temperatura;
la transformación del compuesto hidroxilo de
fórmula 32 en la lactona 33 al seguir la secuencia: (1) la reacción
del compuesto de fórmula 32 con 2 eq. de anhídrido tríflico y 5 eq.
de DMSO. (2) seguido por la reacción con 8 eq. de
diisopropiletilamina. (3) seguido por la reacción con 4 eq. del
alcohol t-butilo (4) seguido por la reacción con 7 eq. de
2-tert-butil-1,1,3,3-tetrametil
guanidina (5) seguido por la reacción con 10 eq. de anhídrido
acético;
la transformación del compuesto lactona 33 en el
compuesto hidroxilo 34 al eliminar el grupo protector MOM con
TMSI;
la ruptura del grupo
N-tricloroetoxicarbonilo del compuesto de fórmula 34
en el compuesto 35 por reacción con Zn/AcOH;
la transformación del compuesto amino 35 en el
correspondiente compuesto \alpha-ceto lactona 36
por reacción con cloruro de N-metil piridin
carboxaldehído seguido por DBU;
la formación de ET-770 al
reaccionar el compuesto de fórmula 36 con
3-hidroxi-4-metoxifeniletilamina;
la transformación de ET-770 en
ET-743 al hacer reaccionar con nitrato de plata en
una mezcla de AcN/H_{2}O.
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(Esquema pasa a página
siguiente)
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Esquema
III
La ruta descrita anteriormente para transformar
al intermediario 25 en ET-743 se puede modificar
convenientemente utilizando otros derivados de cisteína, por
ejemplo el compuesto 37 llamado ácido
2-metoximetiloxi-3-(9H-fluoren-9-ilmetil)-tio-propenoico.
Este compuesto ya tiene incorporado un grupo ceto en forma de un
enol éter, mientras que en los otros análogos de cisteína hay un
amino que tiene que ser transformado después en un grupo ceto a
través de una reacción de transaminación con un rendimiento
moderado del 55-60%. Por lo tanto utilizando el
compuesto 37 es posible de incrementar sustancialmente el
rendimiento de la síntesis lineal debido a que se evita el paso de
transaminación.
La conversión del compuesto intermediario 25 en
ET-743 utilizando el derivado de cisteína 37 se
puede hacer de forma similar y con los mismos reactivos que con el
derivado de cisteína 29 con la excepción de las transformaciones (f)
y (g). Se ejemplifica la secuencia de reacción en el siguiente
esquema (Esquema IV):
Se puede formar también el compuesto 38 al hacer
reaccionar el intermediario 12 descrito en la patente americana N
5,721,362 con el intermediario 37 proporcionando una mejora de la
ruta descrita en esa patente.
En la presente invención, una clase clave de
productos incluye a la ftalascidina y tiene la fórmula general
(XX):
donde R^{1} es un grupo
amidometileno; R^{5} es una oxi-cadena lateral
pequeña; y R^{21} es un grupo ciano o un grupo hidroxilo. Para la
ftalascidina, R^{1} es un grupo ftalimidometileno; R^{5} es un
grupo acetoxilo; y R^{21} es un grupo ciano. Otros grupos para
R^{1} incluyen a amidometilenos mono- y
di-N-sustituídos así como a otros
amidometilenos cíclicos, y otros grupos para R^{5} incluyen
además grupos acilo C_{1}-C_{4}, así como
grupos alquilo
C_{1}-C_{4}.
La conversión del compuesto
21-ciano a la ftalascidina o a un producto
relacionado de fórmula (XX) involucra usualmente los siguientes
pasos:
a) la conversión si es necesario de un sistema
quinona para el anillo E en un sistema fenol
b) la formación del grupo -R^{5} en la
posición-5 en el anillo A;
c) la formación del grupo R^{1} en la
posición-1 en el anillo B; y
d) la conversión si es necesario de un sistema
quinona para el anillo A en el sistema fenol;
e) la conversión del sistema fenol para el anillo
A en el anillo dioximetilenfenol.
Estos pasos tienen muchas similitudes con los
pasos dados para la formación de las ecteinascidinas. El paso (c)
involucra típicamente la formación de un grupo -CH_{2}NH_{2} en
la posición-1 y acilar éste.
Se puede hacer la ftalascidina utilizando los
intermediarios descritos en la conversión de la cianosafracina B en
el intermediario 25. Por ejemplo, los intermediarios 21 y 17 son
productos de partida apropiados para hacer la ftalascidina.
Como se muestra en el esquema V, el proceso para
la formación sintética de ftalascidina que inicia a partir del
intermediario 21 comprende los pasos secuenciales de:
La transformación de 21 en el compuesto de
fórmula 27 por reacción con anhídrido ftálico en diclorometano y
carbonildiimidazol.
La conversión de 27 en ftalascidina al hacer
reaccionar con el hidruro de tributilestaño y dicloro
paladio-bis(trifenilfosfina) o medio básico,
seguido por la reacción con cloruro de acetilo.
Esquema
V
Como se muestra en el esquema VI, el proceso para
la formación sintética de ftalascidina que inicia a partir del
intermediario 17 comprende los pasos secuenciales de:
la acetilación del grupo hidroxilo del compuesto
de fórmula 17 con cloruro de acetilo y piridina para dar el
compuesto intermediario acetilado de fórmula 42;
la eliminación de los grupos protectores
tert-butoxicarbonilo y metiloximetilo de 42 para producir el
compuesto de fórmula 43 al reaccionar con una solución de HCl en
dioxano. Se puede realizar también esta reacción al mezclar 42 con
una solución del ácido trifluoroacético en diclorometano;
la formación del compuesto de tiourea de fórmula
44 al reaccionar 43 con fenilisotiocianato;
la conversión del compuesto de fórmula 44 en el
compuesto amina de fórmula 45 al hacer reaccionar con una solución
de cloruro de hidrógeno en dioxano;
la transformación de 45 en ftalascidina por
reacción con anhídrido ftálico en diclorometano y
carbonildiimidazol.
Esquema
VI
El análisis retrosintético se describe en la
siguiente secuencia.
En la presente invención, una clase clave de
intermediarios incluye al intermediario 11 y tiene la fórmula
general de (XXI):
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donde Prot^{1} y Prot^{2} son
grupos protectores del hidroxilo, de preferencia diferentes. Para
el intermediario 11 por sí mismo, el grupo Prot^{1} es un grupo
metoximetilo, y Prot^{2} es un grupo
t-butildifenilsililo.
La conversión del compuesto
21-ciano al intermediario 11 o un intermediario
relacionado de fórmula (XXI) involucra usualmente los siguientes
pasos:
a) la conversión si es necesario de un sistema
quinona para el anillo E en un sistema fenol
b) la formación del grupo -OProt^{1} en la
posición 18, en el anillo E;
c) la formación del grupo
-CH_{2}-OProt^{2} en la
posición-1, en el anillo B; y
d) la conversión si es necesario de un sistema
quinona para el anillo A en el sistema fenol;
e) la conversión del sistema fenol para el anillo
A en el anillo dioximetilenfenol.
El paso (b), la formación del grupo -OProt^{1}
en la posición-18 en el anillo E, es una
reacción de protección típica para un grupo fenol, y no se
necesitan hacer comentarios especiales. Las condiciones apropiadas
se eligen dependiendo de la naturaleza del grupo protector. Los
otros pasos son similares a las otras reacciones.
El paso (b), la formación del grupo
-CH_{2}-OProt^{2} en la
posición-1 del anillo B, se realiza
normalmente al formar un grupo -CH_{2}NH_{2} en la
posición-1 y convertir entonces la función amino en
una función hidroxilo y protegerlo. Así, donde el grupo de partida
tiene un grupo R^{1} que es
-CH_{2}-NH-CO-CR^{25a}R^{25b}R^{25c}
entonces es importante eliminar el grupo N-acilo.
Donde el producto de partida tiene un grupo R^{1} que es
-CH_{2}-O-CO-R
entonces no es necesario un cambio para el producto ecteinascidina
donde el sustituyente R^{1} es el mismo. Para otros productos, es
importante eliminar el grupo O-acilo. Varios
procedimientos son apropiados para dichas
de-acilaciones. En una variación, se lleva a cabo en
un paso la de-acilación y la conversión a una
función hidroxilo. A partir de entonces, se puede acilar el grupo
hidroxilo o convertirse de otra forma para dar el grupo R^{1}
apropiado.
La patente U.S. de Nº 5,721,362 describe los
métodos sintéticos para hacer ET-743 a través de
una larga síntesis multietapas. Uno de los intermediarios de esta
síntesis es el intermediario 11. Utilizando la cianosafracina B como
producto de partida es posible de llegar al intermediario 11
proporcionando una forma mucho más corta de hacer dichos
intermediarios y por lo tanto mejorando el método para hacer
ET-743.
Se puede convertir la cianosafracina B en el
intermediario 25 por los métodos descritos anteriormente. A partir
del intermediario 25 es posible de llegar al intermediario 11
utilizando los pasos siguientes, que se observan en el esquema
VII.
la formación del compuesto hidroxilo protegido de
fórmula 26 al hacer reaccionar 25 con cloruro de
tert-butildife-
nilsililo en la presencia de una base;
nilsililo en la presencia de una base;
la ruptura final del grupo alilo con el hidruro
de tributil estaño y dicloropaladio-bis
(trifenilfosfina) en 26 que conduce a la formación del
intermediario 11.
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(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Esquema
VII
Una realización del proceso sintético de la
presente invención para transformar la safracina B en el
intermediario 11 es una modificación y extensión del esquema VIII y
comprende los pasos secuenciales de:
la conversión estereoespecífica del compuesto de
fórmula 1 (Safracina B) al compuesto de fórmula 2 por el reemplazo
selectivo de OH por CN al reaccionar con KCN en medio ácido;
la formación del compuesto tiourea de fórmula 3
al reaccionar el compuesto de fórmula 2 con el fenil
isotiocianato;
la conversión del compuesto tiourea de fórmula 3
en la acetamida de fórmula 5 por una hidrólisis en medio ácido
seguida por la adición de anhídrido acético. Se puede aislar el
compuesto intermediario amina de fórmula 4 al neutralizar la
hidrólisis en medio ácido con bicarbonato de sodio, pero este
intermediario es altamente inestable, y es transformado rápidamente
en una imina cíclica de 5 miembros, llamado el compuesto 6;
la formación del compuesto protegido de fórmula 7
al reaccionar con el éter bromometilmetilo y diisopropiletilamina
en diclorometano;
La de-metilación selectiva del
grupo metoxilo del sistema quinona del compuesto de fórmula 7 en el
compuesto de fórmula 8 al reaccionar con una solución metanólica de
hidróxido de sodio;
la transformación del compuesto de fórmula 8 en
el compuesto dioximetileno de fórmula 9 por la siguiente secuencia
preferida: (1) el grupo quinona del compuesto 8 se reduce con 10%
de Pd/C bajo atmósfera de hidrógeno; (2) se convierte el
intermediario hidroquinona en el compuesto dioximetileno de fórmula
9 al reaccionar con bromoclorometane y carbonato de cesio bajo
atmósfera de hidrógeno; (3) se transforma el compuesto de fórmula 9
en el compuesto de fórmula 10 al proteger el grupo hidroxilo libre
como un grupo OCH_{2}R, al reaccionar con BrCH_{2}R y carbonato
de cesio, donde R puede ser el arilo, CH=CH_{2}, OR' etc.;
la conversión del grupo acetamida del compuesto
de fórmula 10 en el correspondiente grupo hidroxilo de fórmula 11
por reacción con tetróxido de nitrógeno en una mezcla de ácido
acético y acetato acético seguido por el tratamiento con hidróxido
de sodio; se puede utilizar alternativamente nitrito de sodio en
una mezcla de anhídrido acético-ácido acético, seguido por el
tratamiento con hidróxido de sodio; alternativamente el grupo
acetamida del compuesto de fórmula 10 se puede convertir en el
grupo amina primario al reaccionar con hidrazina o con Boc_{2}O,
DMAP seguido por hidrazina; se puede convertir dicha amina primaria
en el correspondiente grupo hidroxilo (compuesto de fórmula 11) por
una conversión oxidativa de la amina primaria en el correspondiente
aldehído con
4-formil-1-metilpiridinio
bencensulfonato u otro ion piridinio, seguido por DBU u otro
tratamiento con base y posterior hidrolización, y seguido por la
reducción del aldehído al correspondiente grupo hidroxilo con
hidruro de aluminio y litio u otro agente reductor;
la formación del compuesto protegido de fórmula
26 al reaccionar con cloruro de t-butildifenilsililo y
dimetilaminopiridina en diclorometano;
la transformación del compuesto sililado de
fórmula 26 en el intermediario 11 por desprotección del grupo
protector OCH_{2}R, al reaccionar bajo condiciones reductivas o
ácidas. Los procedimientos típicos son con paladio negro bajo
atmósfera de hidrógeno o TFA acuoso, o hidruro de tributil estaño y
dicloro paladio bis (trifenilfosfina).
Aún en otra modificación preferida, se puede
transformar el compuesto ciano de Fórmula 2 en el intermediario 11
utilizando una extensión del esquema II, que involucra los pasos
adicionales de:
la formación del compuesto hidroxilo protegido de
fórmula 26 al reaccionar 25 con cloruro de
tert-butildifenilsililo en la presencia de una base;
la ruptura final del grupo alilo con hidruro de
tributil estaño y dicloropaladio -bis (trifenilfosfina) en 26 que
conduce a la formación del intermediario 11.
Es posible transformar la cianosafracina B en un
número de intermediarios y derivados con potencial actividad
terapéutica antitumoral. Estos intermediarios se pueden iniciar a
partir de los compuestos ya descritos, o utilizando rutas
alternativas.
Los intermediarios descritos aquí contienen al
compuesto 47, y a un número de derivados amida hechos al utilizar
los compuestos 45 ó 43.
En el esquema VIII se describe la formación del
compuesto 47 utilizando la siguiente secuencia:
la formación del compuesto tiourea de fórmula 3
al reaccionar el compuesto de fórmula 2 con fenil
isotiocianato;
la conversión del compuesto tiourea de fórmula 3
en la acetamida de fórmula 5 por una hidrólisis en medio ácido
seguido por la adición de anhídrido acético. Se puede aislar el
compuesto intermediario amina de fórmula 4 al neutralizar la
hidrólisis en medio ácido con bicarbonato de sodio, pero este
intermediario es altamente inestable, y se transforma rápidamente
en una imina cíclica de cinco miembros, llamada compuesto 6;
la formación del compuesto protegido de fórmula 7
al reaccionar con bromometilmetil éter y diisopropiletilamina en
diclorometano;
la demetilación selectiva del grupo metoxilo del
sistema quinona del compuesto de fórmula 7 en el compuesto de
fórmula 8 al reaccionar con una solución metanólica de hidróxido de
sodio;
la transformación del compuesto de fórmula 8 en
el compuesto dioximetileno-de fórmula 10 por la
secuencia preferida siguiente: (1) el grupo quinona del compuesto 8
se reduce con 10% de Pd/C bajo atmósfera de hidrógeno; (2) el
intermediario hidroquinona se convierte en el compuesto
dioximetileno de fórmula 9 al reaccionar con bromoclorometano y
carbonato de cesio bajo atmósfera de hidrógeno; (3) se transforma
el compuesto de fórmula 9 en el compuesto de fórmula 10 al proteger
el grupo hidroxilo libre como un grupo aliloxi, al reaccionar con
bromuro de alilo y carbonato de cesio;
la transformación del compuesto de fórmula 9 en
el derivado acetilo 46 al reaccionar con cloruro de acetilo en
piridina;
la transformación del compuesto de fórmula 46 en
el compuesto desprotegido 47 por reacción con ácido clorhídrico en
dioxano.
En el esquema VIII se describe la formación del
compuesto 47 utilizando la secuencia siguiente: formación de la
tiourea de Fórmula 3 haciendo reaccionar el compuesto de Fórmula 2
con isocianato de fenilo; transformando la tiourea de Fórmula 3 en
la acetamida de Fórmula 5 mediante una reacción de hidrólisis en
medio ácido seguido de la adición de anhídrido acético; la amina
intermedia de Fórmula 4 puede aislarse deteniendo la reacción de
hidrólisis con bicarbonato de sodio, pero este intermedio es
altamente inestable, y se transforma rápidamente en una imina
cíclica de cinco miembros, que recibe el nombre de compuesto 6;
formando el compuesto protegido de Fórmula 7 mediante la reacción
con bromometilmetil éter y diisopropiletilamina en diclorometano;
eliminando de forma selectiva el metilo del grupo metoxi de la
quinona del compuesto de Fórmula 7 para obtener el compuesto de
Fórmula 8 mediante la reacción con una solución metanólica de
hidróxido de sodio; transformando el compuesto de Fórmula 8 en el
compuesto metilenedioxi de Fórmula 10 mediante la siguiente
secuencia preferida: (1) se reduce el grupo quinona del compuesto 8
es reduced con Pd/C 10% bajo una atmósfera de nitrógeno; (2) se
convierte el intermedio hidroquinona en el compuesto
metilen-dioxi de Fórmula 9 haciéndolo reaccionar con
bromoclorometano y carbonato de cesio bajo una atmósfera de
nitrógeno; (3) se transforma el compuesto de Fórmula 9 en el
compuesto de Fórmula 10 protegiendo el grupo hidroxilo libre como
un grupo aliloxi, mediante la reacción con un bromuro de alilo y
carbonato de cesio; transformando el compuesto de Fórmula 9 en el
derivado acetilo 46 mediante la reacción con cloruro de acetilo en
piridina; transformando el compuesto de Fórmula 46 en el compuesto
desprotegido 47 haciéndolo reaccionar con ácido clorhídrico en
dioxano.
Esquema
VIII
Otros derivados intermedios amida de utilidad se
pueden obtener empezando a partir del intermedio 45 ya descrito
utilizando el siguiente esquema:
El segundo paso es opcional. Este proceso es una
parte importante de la invención, en particular cuando el grupo R
es un grupo R^{a} tal como se ha definido previamente. Además, el
Esquema VIII puede ampliarse fácilmente para permitir la
preparación de compuestos de Fórmula (XXIII), mediante la inclusión
en los reactivos iniciales de un grupo distinto en la posición 5,
que puede ser un grupo dirigido directamente al producto o bien un
grupo que pueda ser eliminado o modificado de cualquier otra forma
para obtener así el producto deseado.
\newpage
Esquema
IX
A partir del compuesto 45 se pueden obtener un
grupo de análogos a través de la siguiente secuencia: acilación del
grupo amino del compuesto de Fórmula 45 mediante un amplio rango de
derivados acilo para dar las correspondientes amidas, donde los
grupos acilo preferidos son acetilo, cloruro de cinamoílo, cloruro
de p-trifluorocinamoílo, isovalerilo cloruro
fenilisotiocianato o aminoácidos, o bien los otros ejemplos que se
han dado previamente de grupos R^{a}CO-, transformando el grupo
CN en un grupo OH mediante la reacción con nitrato de plata en una
mezcla de AcN/H_{2}O. Otros derivados intermedios de amida útiles
se fabrican empezando a partir del intermedio 43 descrito
previamente utilizando el siguiente esquema:
Esquema
X
A partir del compuesto 43 se puede obtener otro
grupo de derivados interesantes utilizando la secuencia
siguiente:
(a) acilación en el grupo amino del compuesto de
Fórmula 43 mediante un amplio rango de derivados acilo para dar las
correspondientes amidas, donde los grupos acilo preferidos son
acetilo, cloruro de cinamoílo, cloruro de
p-trifluorocinamoílo, cloruro de isovalerilo u
aminoácidos, o los otros ejemplos que se han dado previamente de
grupos R^{a}CO-.
(b) transformando el grupo CN en un grupo OH
mediante reacción con nitrato de plata en una mezcla
AcN/H_{2}O.
A la luz de las explicaciones previas, se puede
ver que la presente invención proporciona nuevos compuestos
intermedios. Los intermedios son de Fórmula (XXIIb)
donde: R^{1} es -CH_{2}NH_{2}
o -CH_{2}OH, o bien una versión protegida o derivatizada de tales
grupos y R^{4} es -H; o R^{1} y R^{4} forman conjuntamente un
grupo de Fórmula (IV), (VI) o
(VII):
R^{5} es -OH o bien una versión protegida o
derivatizada de tal grupo; R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o
bien uno es -H y el otro es -OH o bien una versión protegida o
derivatizada de tal grupo, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o
R^{14a} y R^{14b} conjuntamente forman un grupo ceto; R^{12}
es -H-, -CH_{3}- o -CH_{2}CH_{3}-;
R^{15} es -OH o bien una versión protegida o
derivatizada de tal grupo; y R^{18} es -OH o bien una versión
protegida o derivatizada de tal grupo.
R^{18} es -OH o una versión protegida o
derivatizada de tal grupo; y
R^{21} es -H, -OH o -CN.
En uno de los ejemplos de realización,
preferiblemente al menos uno de entre R^{1}, R^{5}, R^{14a}
R^{14b}, R^{15} o R^{18} es un grupo protegido o
derivatizado.
En una variante de esta invención, el grupo
R^{1} no es un sustituyente
3,5-t-butildifenilsililo y/o el
grupo R^{18} no es un grupo metoximetilo.
Preferiblemente R^{1} es -CH_{2}NH_{2} o
-CH_{2}OH, o bien una versión protegida o derivatizada de tales
grupos y R^{4} es -H;
o R^{1} y R^{4} conjuntamente forman el
grupo:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preferiblemente R^{14a} y R^{14b} son ambos
-H.
Una clase preferida de intermedios incluye el
compuesto que identificamos como compuesto 25, de fórmula:
Así pues, la clase preferida tiene una fórmula
general en la cual el grupo MOM se reemplaza por cualquier otro
grupo protector.
Otros intermedios preferidos incluyen los
compuestos que identificamos como compuestos 45 y 47. Se pueden
preparar fácilmente otros derivados N-acilo a
partir del compuesto 45, que son parte importante de esta invención.
Los grupos acilo apropiados incluyen aquellos que se han mencionado
anteriormente.
Los correspondientes compuestos
21-hidroxi también son útiles y se hallan entre los
compuestos activos que hemos encontrado.
Hemos encontrado además que ciertos compuestos de
la invención que preparamos inicialmente como intermedios tienen
una actividad excepcional en el tratamiento de diversos tipos de
cáncer, como leucemia, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de
riñón y melanoma.
Así pues, la presente invención proporciona un
método para el tratamiento de cualquier mamífero, en especial un
humano, afectado de cáncer, que comprende la administración al
individuo afectado de una cantidad efectiva terapéuticamente de un
compuesto de la invención, o una de sus composiciones
farmacéuticas.
La presente invención también trata sobre
preparaciones farmacéuticas, que contienen como ingrediente activo
un compuesto o compuestos de la invención, así como de sus procesos
de preparación.
Entre los ejemplos de composiciones farmacéuticas
se incluyen cualquier sólido (tabletas, pastillas, cápsulas,
gránulos, etc.) o líquido (soluciones, suspensiones o emulsiones)
de composición apropiada, o bien administraciones oral, tópica o
parenteral, y pueden contener el compuesto puro o bien en
combinación con cualquier vehículo u otro compuesto activo desde el
punto de vista farmacológico. Cuando estas composiciones se
administran por vía parenteral, se puede necesitar que sean
estériles.
La administración de los compuestos o
composiciones de la presente invención se puede llevar a cabo
mediante cualquier método apropiado, como infusión intravenosa,
preparaciones orales, y administración intraperitoneal e
intravenosa. Preferimos que se utilicen períodos de infusión de
hasta 24 horas, preferiblemente de 2-12 horas,
prefiriéndose en especial 2-6 horas. Se prefieren
en particular los períodos de infusión cortos que permiten que el
tratamiento se lleve a cabo sin que sea necesario pasar la noche en
el hospital. Sin embargo, el período de infusión puede ser de 12 a
24 horas o incluso más largo si así se requiere. La infusión se
puede realizar a intervalos apropiados de por ejemplo de 2 a 4
semanas. Las composiciones farmacéuticas que contienen los
compuestos de la invención se pueden suministrar mediante
encapsulación en liposomas o nanoesferas, en formulaciones de
liberación sostenida o mediante otros métodos de suministración
estándar.
La dosificación correcta de los compuestos
variará de acuerdo con cada formulación, modo de aplicación y el
lugar concreto, huésped y tumor que están siendo tratados. Otros
factores como edad, peso corporal, sexo, dieta, tiempo de
administración, velocidad de excreción, condición del huésped,
combinación de fármacos, sensibilidad de reacción y gravedad de la
enfermedad deberán tomarse en cuenta. La administración se puede
llevar a cabo de forma continua o bien de forma periódica dentro de
la dosis máxima tolerada.
Los compuestos y composiciones de esta invención
se pueden utilizar en combinación con otros fármacos para
proporcionar así una terapia combinada. Los otros fármacos pueden
formar parte de la misma composición, o bien proporcionarse como
una composición separada, para su administración simultánea o bien
en momentos distintos. La identidad de los otros fármacos no se haya
limitada en ninguna forma en particular, y los vehículos apropiados
incluyen:
a) fármacos con efectos antimitóticos, en
especial aquellos que están dirigidos a los elementos del
citoesqueleto, incluyendo moduladores de los microtúbulos como
taxanos (como taxol, paclitaxel, taxotere, docetaxel),
podofilotoxinas o alcaloides de vinca (vincristine,
vinblastine);
b) fármacos antimetabolito como
5-fluorouracil, cytarabine, gemcitabine, análogos
de purina como pentostatin, metotrexato);
c) agentes alquilantes como mostazas de nitrógeno
(como ciclofosfamida orifosfamida);
d) fármacos dirigidos al ADN como las
antraciclinas adriamicina, doxorubicina, farmorubicina o
repirubicina;
e) fármacos dirigidos a las topoisomerasas como
etoposide;
f) hormonas y amonistas o antagonistas de
hormonas como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifen y compuestos
relacionados) y andrógenos, flutamida, leuprorelina, goserelina,
cyprotrone o octreotide;
g) fármacos dirigidos a mecanismos de
transducción de señal en células tumorales, incluyendo derivados de
anticuerpos como herceptin;
h) fármacos alquilantes como los fármacos de
platino (cis-platino, carboplatino, oxaliplatino,
paraplatino) o nitrosoureas;
i) fármacos que pueden potencialmente afectar la
metástasis de tumores como inhibidores de la metaloproteinasa de la
matriz;
j) agentes de terapia génica y antisentido;
k) anticuerpos terapéuticos;
l) otros compuestos bioactivos de origen marino,
en especial thedidemninas como aplidina;
m) análogos de esteroides, en particular
dexametasona;
n) fármacos anti-inflamatorios,
en particular dexametasona; y
o) fármacos anti-eméticos, en
particular dexametasona.
La presente invención también se extiende a la
utilización de los compuestos de la invención en un método de
tratamiento, y a la utilización de los compuestos en la preparación
de una composición para el tratamiento del cáncer.
Cultivos Celulares. Las células se mantuvieron en
una fase de crecimiento logarítmico en Medio Esencial Mínimo Eagle,
con Sales Equilibradas de Earle, con L-glutamina
2.0 mM, con aminoácidos no esenciales, sin bicarbonato de sodio
(EMEM/neaa); con un suplemento de Suero Fetal Bovino (FCS) 10%,
bicarbonato de sodio 10^{-2} M y penicilina-G +
sulfato de estreptomicina 0.1g/l.
Se ha llevado a cabo un procedimiento de
exploración sencillo para determinar y comparar la actividad
antitumoral de estos compuestos, utilizando una forma adaptada del
método descrito por Bergeron et al (1984). Se ha empleado la
línea de células tumorales P-388 (cultivo de
suspensión de un neoplasma linfoide de ratón DBA/2),
A-549 (cultivo monocapa de un carcinoma de pulmón
humano), HT-29 (cultivo monocapa de un carcinoma de
colon humano) y MEL-28 (cultivo monocapa de un
melanoma humano).
Las células P-388 se sembraron en
pocillos de 16 mm a razón de 1x10^{4} células por pocillo en
alícuotas de 1 ml de MEM 5FCS que contenían la concentración de
fármaco indicada. Un grupo separado de cultivos fue sembrado sin el
fármaco como grupo de control, para asegurar que las células
permanecían en una fase exponencial de crecimiento. Todas las
mediciones se llevaron a cabo por duplicado. Después de tres días
de incubación a 37ºC, 10% de CO_{2} en una atmósfera húmeda al
98%, se determinó de forma aproximada el valor de IC_{50}
comparando el crecimiento en los pocillos que contenían el fármaco
con el crecimiento en los pocillos utilizados como control.
Se sembraron A-549,
HT-29 y MEL-28 en pocillos de 16 mm
a razón de 2x10^{4} células por pocillo en alícuotas de 1 ml de
MEM 10FCS que contenían la concentración de fármaco indicada. Un
grupo separado de cultivos fue sembrado sin el fármaco como grupo
de control, para asegurar que las células permanecían en una fase
exponencial de crecimiento. Todas las mediciones se llevaron a cabo
por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, 10% de
CO_{2} en una atmósfera húmeda al 98%, los pocillos se tiñeron
con Cristal Violeta 0.1%. Se determinó de forma aproximada el valor
de IC_{50} comparando el crecimiento en los pocillos que
contenían el fármaco con el crecimiento en los pocillos utilizados
como control.
\newpage
- 1.
- Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline. Robert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot y Carl W. Porter. Antineoplastic y antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984, 121 (3), 848854.
- 2.
- Alan C. Schroeder, Robert G. Hughes, Jr. y Alexander Bloch. Effects of Acyclic Pyrimidine Nucleoside Analoges. J. Med. Chem. 1981,24 1078-1083.
A partir de estos datos de actividad y otras
consideraciones, se puede observar que los compuestos activos de
esta invención incluyen una clase preferida de compuestos con la
fórmula general (XXIII):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
donde R^{1} es como se ha
definido anteriormente para la fórmula (XVIIb) y es preferiblemente
un grupo aminometileno derivatizado de volumen
moderado;
R^{5} es como se ha definido anteriormente para
la fórmula (XVIIb) y es preferiblemente un grupo hidroxilo
derivatizado de poco volumen;
R^{12} es como se ha definido anteriormente y
es preferiblemente -CH_{3}- y
R^{21} es un grupo hidroxilo o un grupo
ciano.
De forma apropiada, R^{1} es un grupo
hidrofóbico y que, de este modo, carece de grupo amino, hidroxi u
otra función hidrofílica libre. Típicamente R^{1} es un grupo
-CH_{2}-NH-CO-R^{a},
donde R^{a} es tal como se ha definido pero preferiblemente tiene
una longitud de cadena lineal de menos de 20 átomos, más
preferiblemente menos de 15 ó 10 átomos, donde un grupo
1,4-fenil se cuenta como una longitud de cadena de
cuatro átomos y se aplican consideraciones similares a otros grupos
cíclicos (por ejemplo, un grupo 1,2-ciclohexil tiene
una longitud de cadena de dos), y la cadena lineal de menos de 10,
15 ó 20 átomos puede estar sustituida. En particular, los datos
subieren que se ha de encontrar un equilibrio entre no tener tal
grupo R^{a}-CO- y el tener un grupo grande y
voluminoso.
En una variación, preferimos que R^{1} se halle
libre de grupos cíclicos, en especial de grupos aromáticos. En una
variación relacionada, la presente invención no prepara los
compuestos que se describen en el artículo Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 96, 3496-3501,1999, que se incorpora aquí como
referencia. Nuestros grupos preferidos para R^{1} excluyen los
correspondientes sustituyentes CH_{2}R_{2} que se muestran en
la Tabla 1 de ese artículo, de forma específica los grupos A, B, C
y D para R_{2}.
R^{5} es preferiblemente un grupo acetilo.
En unos compuestos preferidos de forma especial,
se acetila el grupo R^{1} sobre la función -NH_{2}, y, por
ejemplo, se pueden formar los derivados N-acilo a
partir de los grupos -CH_{2}NH_{2} y
-CH_{2}-NH-aa. Los derivados
acilo pueden ser sus derivados N-acilo o
N-tioacilo. Los grupos acilo pueden tener la
fórmula -CO-R^{a}, donde R^{a} es tal como se ha
definido y se escoge de forma que cumpla con los criterios
indicados. Entre los grupos acilo apropiados se incluyen alanilo,
arginilo, aspartilo, asparragilo, cistilo, glutamilo, glutaminilo,
glicilo, histidilo, hidroxiprolilo, isoleucilo, leucilo, lisilo,
metionilo, fenilalanilo, prolilo, serilo, treonilo, tironilo,
triptofilo, tirosilo, valilo, así como otros grupos acilo derivados
de aminoácidos. Se prefiere que tales grupos acilo derivados de
aminoácidos estén derivatizados en el grupo amino para
proporcionarles hidrofobicidad.
En una variación, el grupo R^{1} es un grupo
hidroximetileno derivatizado. Se aplican consideraciones similares
a las aplicadas al grupo aminometileno derivatizado.
Se muestra a continuación un proceso importante
de acuerdo con esta invención que refleja los compuestos
activos:
donde R^{5} en el producto final
es tal como se ha definido para el compuesto (XXIII) y puede ser
distinto en el compuesto inicial y convertirse como parte del
proceso,
R^{18} es un grupo hidroxilo en el producto
final pero puede ser un grupo hidroxilo en el compuesto inicial y
convertirse como parte del proceso,
R^{12} en el producto final puede ser el mismo
que en el compuesto inicial o puede convertirse como parte del
proceso,
R^{21} en el producto final es tal como se ha
definido y si se puede formar un grupo hidroxi a partir de un grupo
ciano como parte del proceso,
R^{a} es tal como se ha definido, y puede
acilarse adicionalmente como parte del proceso para dar un producto
final con un grupo R^{a} acilado tal como se ha mostrado.
R^{5} es preferiblemente acetilo u otro grupo
acilo pequeño en el compuesto inicial y no se transforma durante la
reacción. R^{18} es preferiblemente un grupo hidroxilo en el
compuesto inicial y no se transforma durante la reacción. R^{12}
es preferiblemente -CH_{3}- en el compuesto inicial y no se
transforma durante la reacción. R^{21} en el compuesto final es
tal como se ha definido y si se puede formar un grupo hidroxilo a
partir de un grupo ciano como parte del proceso. R^{a} en el
compuesto final es preferiblemente tal como se ha definido respecto
al compuesto de fórmula (XXIII).
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción:
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción:
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción en la cual un grupo R^{1} que es aminometileno se
transforma en un grupo hidroximetileno.
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción en la cual un compuesto con un grupo R^{1} que es
hidroximetileno se hace reaccionar con un reactivo de fórmula
(XIX)
donde Fu indica un grupo funcional
protegido, Prot^{3} es un grupo protector, y la línea de puntos
muestra un doble enlace
opcional.
Otro método importante de esta invención incluye
la reacción para la preparación de un compuesto
21-ciano de Fórmula (XVI), que comprende la reacción
de un compuesto de Fórmula (XV):
donde R^{1}, R^{5}, R^{8},
R^{14a}, R^{14b}, R^{15} y R^{18} son tal como se ha
definido y R^{21} es un grupo hidroxilo, con una fuente de iones
cianuro, para dar el compuesto 21-ciano
deseado.
Además, pueden imaginarse procesos que utilicen
otros compuestos que contengan nucleófilos para producir compuestos
similares de Fórmula (XVI) en los cuales la posición 21 se halla
protegida por otro grupo nucleófilo, un grupo
21-Nuc. Por ejemplo, se puede obtener un compuesto
21-Nuc de Fórmula (XVI) con un sustituyente
alquilamino en la posición 21 haciendo reaccionar el compuesto de
Fórmula (XV) en el cual R^{21} es un grupo hidroxilo con una
alquilamina apropiada. También puede obtenerse un compuesto
21-Nuc de Fórmula (XVI) con un sustituyente
alquiltio en la posición 21 haciendo reaccionar el compuesto de
Fórmula (XV) en el cual R^{21} es un grupo hidroxilo, con un
alcanotiol apropiado. De forma alternativa, se puede obtener un
compuesto 21-Nuc de Fórmula (XVI) con un
sustituyente \alpha-carbonilalquilo en la posición
21 haciendo reaccionar el compuesto de Fórmula (XV) en el cual
R^{21} es un grupo hidroxilo con un compuesto carbonilo
apropiado, típicamente en presencia de una base. También son
posibles otras rutas sintéticas para otros compuestos
21-Nuc.
Otra reacción importante para esta invención
implica el tratamiento de uno de los compuestos
21-ciano de esta invención para convertirlo en un
compuesto 21-hidroxilo. Tales compuestos tienen
propiedades in vivo interesantes.
A una solución de 2 (21.53 g, 39.17 ml) en etanol
(200 ml), se añadió tert-butoxicarbonilo anhídrido
(7.7 g, 35.25 ml) y la mezcla se agitó durante 7 h a 23ºC.
Seguidamente, la reacción se concentró al vacío y el residuo se
purificó mediante cromatografía en columna flash (SiO_{2}, hexano:
acetato de etilo 6: 4) para dar 14 (20.6 g, 81%) en la forma de un
sólido de color amarillo.
Rf: 0.52 (acetato de etilo: CHCl_{3} 5:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.49
(s, 1H), 6.32 (bs, 1H), 5.26 (bs, 1H), 4.60 (bs, 1H), 4.14 (d, J=
2.4 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.81 (d, J= 4.8
Hz, 1H), 3.7 (s, 3H), 3.34(brd, J= 7.2 Hz, 1H),
3.18-3.00 (m, 5H), 2.44 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.29
(s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.82 (s, 3H),
1.80-1.65(m, 1H), 1.48 (s, 9H), 0.86 (d, J=
5.7 Hz, 3H).
^{3}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta 185.5,
180.8, 172.7, 155.9, 154.5, 147.3, 143.3, 141.5, 135.3, 130.4,
129.2, 127.5, 120.2, 117.4, 116.9, 80.2, 60.7, 60.3, 58.5, 55.9,
55.8, 54.9, 54.4, 50.0, 41.6, 40.3, 28.0, 25.3, 24.0, 18.1, 15.6,
8.5.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{43}N_{5}0_{8}: 649.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 650.3.
A una solución agitada de 14 (20.6 g, 31.75 mmol)
en CH_{3}CN (159 ml), se añadieron diisopropiletilamina (82.96
ml, 476.2 mmol), bromuro de metoximetileno (25.9 ml, 317.5 mmol) y
dimetilaminopiridina (155 mg, 1.27 mmol) a 0ºC. La mezcla se agitó
a 23ºC durante 24h. La reacción se enfrió a 0ºC con HC1 acuoso 0.1N
(750 ml) (pH = 5), y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 400 ml).
La fase orgánica se secó (sulfato de sodio) y se concentró al
vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna
flash (SiO_{2}, gradiente hexano: acetato de etilo 4: 1 a hexano:
acetato de etilo 3: 2) para dar 15 (17.6 g, 83%) en la forma de un
sólido de color amarillo.
Rf: 0.38 (hexano: acetato de etilo 3: 7).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.73
(s, 1H), 5.35 (bs, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.50 (bs, 1H), 4.25 (d, J=
2.7 Hz, 1H), 4.03 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.84 (bs, 1H),
3.82-3.65 (m, 1H), 3.69(s, 3H), 3.56 (s, 3H),
3.39-3.37 (m, 1H), 3.20-3.00 (m,
5H), 2.46 (d, J= 18 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.85 (s,
3H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.29 (s, 9H), 0.93 (d, J=
5.1 Hz, 3H).
^{3}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta 185.4,
180.9, 172.4, 155.9, 154.5, 149.0, 148.4, 141.6, 135.1, 7, 59.7,
58.4, 57.5, 56.2, 55.9, 55.0, 54.2, 50.0, 41.5, 39.9, 28.0, 25.2,
24.0, 18.1, 15.6, 8.5.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{47}N_{5}O_{9}: 693.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 694.3.
A un recipiente que contenía 15 (8 g, 11.5 mmol)
en metanol (1.6 1) se añadió una solución acuosa de hidróxido de
sodio 1M (3.2 1) a 0ºC. La reacción se agitó durante 2h a esta
temperatura y seguidamente, se enfrió con HCl 6M a pH = 5. La
mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 11) y las capas
orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se
concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (SiO_{2}, gradiente CHCl_{3} a
CHCl_{3}: acetato de etilo 2: 1) para dar 16 (5.3 mg, 68%).
Rf: 0.48 (CH_{3}CN: H_{2}O 7:3,
RP-C18) ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
6.73 (s, 1H), 5.43 (bs, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.54 (bs, 1H), 4.26 (d,
J= 1.8 Hz, 1H), 4.04 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 3.84 (bs, 1H),
3.80-3.64 (m, 1H), 3.58 (s, 3H),
3.41-3.39(m, 1H), 3.22-3.06
(m, 5H), 2.49 (d, J= 18.6 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H),
2.30-2.25 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.87 (s, 3H),
1.45-1.33 (m, 1H),1.19 (s, 9H), 1.00 (br d, J= 6.6
Hz 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
184.9, 180.9, 172.6, 154.7, 151.3, 149.1, 148.6, 144.7, 132.9,
116.8, 99.1, 79.4, 59.8, 58.6, 57.7, 56.2, 55.6, 54.9, 54.5, 50.1,
41.6, 40.1, 28.0, 25.3, 24.4, 18.1, 15.7, 8.0.
*ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{45}N_{5}O_{9} : 679.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 680.3
A una solución desgasificada del compuesto 16
(1.8 g, 2.64 mmol) en DMF (221 ml) se añadió Pd/C 10% (360 mg) y se
agitó bajo H_{2} (presión atmosférica) durante 45 min. La
reacción se filtró a través de celite bajo atmósfera de argón a un
recipiente que contenía Cs_{2}CO_{3} anhidro (2.58 g, 7.92
ml).
Seguidamente, se añadió bromoclorometano (3.40 ml
52.8 ml), y el tubo se selló y se agitó a 100ºC durante 2h. La
reacción se enfrió, se filtró a través de celite y se lavó con
CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se concentró y se secó (sulfato
de sodio) para dar 17 en la forma de un aceite de color marrón que
se utilizó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Rf: 0.36 (hexano: acetato de etilo 1: 5,
SiO_{2}).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.68
(s, 1H), 6.05 (bs, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.40 (bs, 1H),
5.31-5.24 (m, 2H), 4.67 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 4.19 (d,
J= 2.7 Hz, 1H), 4.07 (bs, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.67
(s, 3H), 3.64-2.96 (m, 5H), 2.65 (d, J=18.3 Hz,1H),
2.33 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.01-1.95
(m, 1H), 1.28 (s, 9H), 0.87 (d, J= 6.3 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
172.1, 162.6, 154.9, 149.1, 145.7, 135.9, 130.8, 130.7, 125.1,
123.1, 117.8, 100.8, 99.8, 76.6, 59.8, 59.2, 57.7, 57.0, 56.7,
55.8, 55.2, 49.5, 41.6, 40.1, 36.5, 31.9, 31.6, 29.7, 28.2, 26.3,
25.0, 22.6, 18.2, 15.8, 14.1, 8.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{47}N_{5}O_{9}: 693.34. Encontrado
(M+H)^{+}: 694.3.
A un recipiente que contenía una solución de 17
(1.83 g, 2.65 mmol) en DMF (13 ml), se añadieron Cs_{2}CO_{3}
(2.6 g, 7.97 mmol), y bromuro de alilo (1.15 ml, 13.28
mmol)a 0ºC. La mezcla resultante se agitó a 23ºC durante 1h.
La reacción se filtró a través celite y se lavó con
CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se secó y se concentró (sulfato
de sodio). El residuo se purificó mediante cromatografía en columna
flash (SiO_{2}, CHCl_{3}: acetato de etilo 1: 4) para dar 18
(1.08 mg, 56%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.36 (CHCl_{3}: acetato de etilo 1 :
3).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.70
(s, 1 H), 6.27-6.02 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.83 (s,
1H), 5.37 (dd, J_{1}= 1.01 Hz, J_{2}= 16.8 Hz, 1H), 5.40 (bs,
1H), 5.25 (dd, J_{1}= 1.0 Hz, J_{2}= 10.5 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H),
4.91 (bs, IH), 4.25-4.22 (m, 1H), 4.21 (d, J= 2.4
Hz, 1H), 4.14-4.10 (m, 1H), 4.08 (d, J=2.4 Hz, 1H),
4.00 (bs, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.56-3.35
(m, 2H), 3.26-3.20 (m, 2H),
3.05-2.96 (dd, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}=18 Hz, 1H),
2.63 (d, J=18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.09 (s, 3H),
1.91-1.80 (m, 1H), 1.24 (s, 9H), 0.94 (d, J= 6.6
Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
172.0, 154.8, 148.8, 148.6, 148.4, 144.4, 138.8, 133.7, 130.9,
117.4, 112.8, 112.6, 101.1, 99.2, 73.9, 59.7, 59.3, 57.7, 56.9,
56.8, 56.2, 55.2, 40.1, 34.6, 31.5, 28.1, 26.4, 25.1, 22.6, 18.5,
15.7, 14.0, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{39}H_{51}N_{5}O_{9}: 733.4. Encontrado
(M+H)^{+}: 734.4.
A una solución de 18 (0.1 g, 0.137 mmol) en
dioxano (2 ml), se añadió HCl / dioxano 4.2 M (1.46 ml) se añadió y
la mezcla se agitó durante 1.2 h a 23ºC. La reacción se enfrió a
0ºC con bicarbonato de sodio acuoso saturado (60 ml) y se extrajo
con acetato de etilo (2x70 ml). La capa orgánicas se secaron
(sulfato de sodio) y se concentraron al vacío para dar 19 (267 mg,
95%) en la forma de un sólido de color blanco que se utilizó en las
reacciones siguientes sin purificación adicional.
Rf: 0.17 (acetato de etilo: metanol 10:
1,SiO_{2}).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.49
(s, 1H), 6.12-6.00 (m, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.86 (s,
1H), 5.34(dd, J= 1.0 Hz, J= 17.4 Hz, 1H), 5.25 (dd, J= 1.0
Hz, J= 10. 2 Hz, 1H), 4.18-3.76 (m, 5H), 3.74 (s,
3H), 3.71-3.59 (m, 1H), 3.36-3.20
(m, 4H), 3.01-2.90 (m, 1H), 2.60 (d, J= 18.0 Hz,
1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.11 (s, 3H),
1.97-1.86 (m, 1H), 0.93 (d, J= 8.7 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
175.5, 148.4, 146.7, 144.4, 142.4, 138.9, 133.7, 131.3, 128.3,
120.8, 117.9, 117.4, 113.8, 112.4, 101.1, 74.2, 60.5, 59.1, 56.5,
56.1, 56.3, 56.0, 55.0, 50.5, 41.6, 39.5, 29.5, 26.4, 24.9, 21.1,
15.5, 9.33.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{39}N_{5}O_{6}: 589. Encontrado (M+H)^{+}:
590.
A una solución de 19 (250 mg, 0.42 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (1.5 ml), se añadió isocianato de fenilo (0.3 ml,
2.51 mmol) y la mezcla se agitó a 23ºC durante 1h. La reacción se
concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía
en columna flash (SiO_{2}, gradiente Hexano a 5: 1 hexano:
acetato de etilo) para dar 20 (270 mg, 87%) en la forma de un sólido
de color blanco.
Rf: 0.56 (CHCl_{3}: acetato de etilo 1: 4).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.00
(bs, 1H), 7.45-6.97 (m, 4H), 6.10 (s, 1H),
6.08-6.00 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.82
(s, 1H), 5.40 (dd, J= 1.5 Hz, J= 17.1 Hz, 1H), 3.38 (bs, 1H), 5.23
(dd, J= 1.5 Hz, J= 10.5 Hz, 1H), 4.42-4.36 (m, 1H),
4.19-4.03 (m,5H), 3.71 (s, 3H),
3.68-3.17 (m, 4H), 2.90 (dd, J=7.8 Hz, J= 18.3 Hz,
1H), 2.57 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s,
3H), 1.90 (dd, J= 12.3 Hz, J= 16.5 Hz, 1H), 0.81 (d, J= 6.9 Hz,
3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
178.4, 171.6, 148.6, 146.8, 144.3, 142.7, 138.7, 136.2, 133.6,
117.4, 116.7, 112.6, 112.5, 101.0, 74.0, 60.6, 59.0, 57.0, 56.2,
56.1, 55.0, 53.3, 41.4, 39.7, 26.3, 24.8, 18.3, 15.5, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{39}H_{44}N_{6}O_{6}S: 724.8 Encontrado
(M+H)^{+}: 725.3.
A una solución de 20 (270 mg, 0.37 mmol) en
dioxano (1 ml), se añadió HCl / dioxano 4.2N (3.5 ml) y la reacción
se agitó a 23ºC durante 30 min. Seguidamente, se añadieron acetato
de etilo (20 ml) y H_{2}O (20 ml) y se decantó la capa orgánica.
La fase acuosa se basificó con bicarbonato de sodio acuoso saturado
(60 ml) (pH = 8) a 0ºC y seguidamente, se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se
secaron (sulfato de sodio), y se concentraron al vacío. El residuo
se purificó mediante cromatografía en columna flash (SiO_{2},
acetato de etilo: metanol 5: 1) para dar el compuesto 21 (158 mg,
82%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.3 (acetato de etilo: metanol 1: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.45
(s, 1H), 6.12-6.03 (m, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.85 (s,
1H), 5.38 (dd, J1= 1.2 Hz, J2= 17.1 Hz, 1H), 5.24 (dd, J_{1}= 1.2
Hz, J_{2}= 10.5 Hz, 1H), 4.23-4.09 (m, 4H), 3.98
(d, J= 2.1 Hz, 1H), 3.90 (bs, 1H), 3.72 (s, 3H),
3.36-3.02 (m, 5H), 2.72-2.71 (m,
2H), 2.48 (d, J= 18.0 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s,
3H), 1.85 (dd, J_{1}= 11.7 Hz, J_{2}= 15.6Hz, 1H)).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
148.4, 146.7, 144.4, 142.8, 138.8, 133.8, 130.5, 128.8, 121.5,
120.8, 118.0, 117.5, 116.9, 113.6, 112.2, 101.1, 74.3, 60.7, 59.9,
58.8, 56.6, 56.5, 55.3, 44.2, 41.8, 29.7, 26.5, 25.7, 15.7, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{34}N_{4}O_{5}: 518.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 519.2.
A una solución de 21 (0.64 g, 1.22 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (6.13 ml), se añadieron piridina (0.104 ml, 1.28
mmol) y 2,2,2-tricloroetil cloroformiato (0.177 ml,
1.28 mmol) a -10ºC. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 1
h y seguidamente, la reacción se enfrió mediante la adición de HCl
0.1 N (10 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 10 ml). La
capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al
vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna
flash (SiO_{2}, (hexano: acetato de etilo 1: 2) para dar 22 (0.84
g, 98%) en la forma de una espuma de color blanco.
Rf: 0.57 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.50
(s, 1H), 6.10-6.00 (m, 1H), 6.94 (d, J= 1. 5 Hz,
1H), 5.87 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.37 (dq, J_{1}= 1.5
Hz, J_{2}= 17.1 Hz, 1H), 5.26 (dq, J_{1}= 1.8 Hz, J_{2}= 10.2
Hz, 1H), 4.60 (d, J= 12 Hz, 1H), 4.22-4.10 (m, 4H),
4.19 (d, J= 12 Hz, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.75 (s, 3H),
3.37-3.18 (m, 5H), 3.04 (dd, J_{1}= 8.1 Hz,
J_{2}= 18 Hz, 1H), 2.63 (d, J= 18 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.26 (s,
3H), 2.11 (s, 3H), 1.85 (dd, J_{1}= 12.3 Hz, J_{2}= 15.9
Hz,1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
154.3, 148.5, 146.7, 144.5, 142.8, 139.0, 133.8, 130.7, 128.7,
117.7, 116.8, 112.7, 101.2, 77.2, 74.3, 60.7, 59.9, 57.0, 56.4,
55.3, 43.3, 41.7, 31.6, 26.4, 25.3, 22.6, 15.9, 14.1, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{35}Cl_{3}N_{4}O_{7}: 694.17. Encontrado
(M+H)^{+}: 695.2.
A una solución de 22 (0.32 g, 0.46 mmol) en
CH_{3}CN (2.33 ml), se añadieron diisopropiletilamina (1.62 ml,
9.34 mmol), bromometil metil éter (0.57 ml, 7.0 mmol) y
dimetilaminopiridina (6 mg, 0.046 mmol) a 0ºC. La mezcla se calentó
a 30ºC durante 10 h. Seguidamente, la reacción se diluyó con
diclorometano (30 ml) y se virtió en una solución acuosa de HCl a
pH = 5 (10 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y
el solvente se eliminó bajo presión reducida para dar un residuo
que se purificó mediante cromatografía en columna flash (SiO_{2},
hexano: acetato de etilo 2: 1) para dar 23 (0.304 g, 88%) en la
forma de una espuma de color blanco.
Rf: 0.62 (hexano: acetato de etilo 1: 3).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.73
(s, 1H), 6.10 (m, 1H), 5.94 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.88 (d, J= 1.5 Hz,
1H), 5.39 (dq, J_{1}= 1.5 Hz, J_{2}= 17.1 Hz, 1H), 5.26 (dq,
J_{1}= 1.8 Hz, J_{2}= 10.2 Hz,1H), 5.12 (s, 2H), 4.61 (d, J= 12
Hz, 1H), 4.55 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 4.25 (d, J= 12 Hz, 1H),
4.22-4.11 (m, 4H), 4.03 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.58
(s, 3H), 3.38-3.21 (m, 5H), 3.05 (dd, J/= 8.1
Hz,J2= 18 Hz, 1H), 2.65 (d, J= 18 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.23 (s,
3H), 2.12 (s, 3H), 1.79 (dd, J_{1}= 12.3 Hz, J_{2}= 15.9 Hz,
1H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
154.3, 148.6, 148.4, 144.5, 139.0, 133.6, 130.6, 130.1, 125.07,
124.7, 124.0, 121.1, 117.7, 112.6, 101.2, 99.2, 77.2, 74.4, 74.1,
59.8, 59.8, 57.7, 57.0, 56.8, 56.68, 55.3, 43.2, 41.5, 26.4, 25.2,
15.9, 9.3.
ESI-MSm/z: Calculado para
C_{34}H_{39}Cl_{3}N_{4}O_{8}: 738.20. Encontrado
(M+H)^{+}: 739.0.
A una suspensión de 23 (0.304 g, 0.41 mmol) en
ácido acético acuoso 90% (4 ml), se añadió zinc en polvo powder
zinc (0.2 g, 6.67 mmol) y la reacción se agitó durante 7 horas a
23ºC. La mezcla se filtró a través celite que se lavó con
CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se lavó con una solución acuosa
saturada de bicarbonato de sodio (pH = 9) (15 ml) y se secó sobre
sulfato de sodio. El disolvente se eliminó bajo presión reducida
para dar 24 (0.191 g, 83%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.3 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.68
(s, 1H), 6.09 (m, 1H), 5.90(d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.83 (d, J=
1.5 Hz, 1H), 5.39 (dq, J_{1} = 1.5 Hz, J_{2}= 17.1 Hz, 1H),
5.25 (dq, J_{1}= 1.5 Hz, J_{2}= 10.2 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H),
4.22-4.09 (m, 3H), 3.98 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 3.89
(m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.37-3.17 (m,
3H), 3.07 (dd, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}= 18 Hz, 1H), 2.71 (m, 2H),
2.48 (d, J= 18 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.17 (s, 3H),
1.80 (dd, J_{1} = 12.3 Hz, J_{2}= 15.9 Hz,1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
148.5, 148.2, 144.3, 138.7, 133.7, 130.7, 129.9, 125.0, 123.9,
59.7, 58.8, 57.6, 57.0, 56.2, 55.2, 44.2, 41.5, 31.5, 26.4, 25.6,
22.5, 16.7, 14.0, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{3l}H_{38}N_{4}O_{6} : 562.66. Encontrado
(M+H)^{+}: 563.1.
A una solución de 24 (20 mg, 0.035 mmol), en
H_{2}O (0.7 ml) y THF (0.7 ml), se añadieron NaNO_{2} (12 mg,
0.17 mmol) y AcOH acuoso 90% (0.06 ml) a 0ºC y la mezcla se agitó a
0ºC durante 3h. Después de diluir con CH_{2}Cl_{2} (5 ml), la
capa orgánica se lavó con agua (1 ml), se secó sobre sulfato de
sodio y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (SiO_{2}, hexano: acetato de etilo
2: 1) para dar 25 (9.8 mg, 50%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.34 (hexano: acetato de etilo 1: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.71
(s, 1H), 6.11 (m, 1H), 5.92 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.87 (d, J= 1.5 Hz,
1H), 5.42 (dq, J_{1}= 1.5 Hz, J_{2}= 17.1 Hz, 1H), 5.28 (dq,
J_{1}= 1.5 Hz, J_{2}= 10.2 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H),
4.26-4.09 (m, 3H), 4.05 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 3.97
(t, J= 3.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.67- 3.32 (m, 4H), 3.58 (s, 3H),
3.24 (dd, J_{1}= 2.7 Hz, J_{2}= 15.9 Hz, 1H), 3.12 (dd,
J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}= 18.0 Hz, 1H), 2.51 (d, J= 18 Hz, 1H), 2.36
(s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.83 (dd, J_{1}= 12.3Hz,
J_{2}= 15.9 Hz,1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
148.7, 148.4, 138.9, 133.7, 131.1, 129.4, 125.1, 123.9, 120.7,
117.6, 117.5, 113.2, 112.3, 101.1, 99.2, 74.0, 63.2, 59.8, 59.7,
57.9, 57.7, 57.0, 56.5, 55.2, 41.6, 29.6, 26.1, 25.6, 22.6, 15.7,
9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{37}N_{3}O_{7}: 563.64. Encontrado
(M+H)^{+}: 564.1.
Se añadió el compuesto inicial (2.0 g, 5.90 mmol)
a una suspensión de hidruro sódico (354 mg, 8.86 mmol) en THF (40
ml) a 23ºC, a continuación la suspensión se trató con cloroformiato
de alilo (1.135 ml, 8.25 mmol) a 23ºC y seguidamente se sometió a
reflujo durante 3 horas. La suspensión se enfrió, se filtró a
fondo, se lavó el sólido con acetato de etilo (100 ml), y el
filtrado se concentró. El aceite en bruto se mezcló con hexano (100
ml) y se mantuvo a 4ºC durante toda la noche.
Seguidamente, el disolvente se decantó y la pasta
de color amarillo pálido se trató con CH_{2}Cl_{2} (20 ml), y
se precipitó con hexano (100 ml). Después de 10 minutos, se decantó
de nuevo el disolvente.
Se repitió la operación hasta que apareció un
sólido de color blanco. El sólido blanco se filtró a fondo y se
secó para dar compuesto 29 (1.80 g, 65%) en la forma de un sólido
de color blanco.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.74 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.62 (d, J= 6.9 Hz,
2H), 7.33 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 7.30 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 5.71 (d, J=
7.8 Hz, 1H), 4.73 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 4.59 (m, 1H), 4.11 (t, J= 6.0
Hz, 1H), 3.17 (dd, J= 6.0 Hz, J= 2.7 Hz, 2H), 3.20 (dd, J= 5.4 Hz,
J= 2.1 Hz, 2H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 173.6, 152.7, 144.0, 139.7, 137.8, 126.0,
125.6, 123.4, 118.3, 73.4, 52.4, 45.5, 35.8, 33.7.
ESI-MSm/z: Calculado para
C_{20}H_{18}Cl_{3}NO_{4}S: 474.8. Encontrado
(M+Na)^{+}: 497.8.
Una mezcla del compuesto 25 (585 mg, 1.03 mmol) y
del compuesto 29 (1.47 mg, 3.11 mmol) se hiza azeotrópica con
tolueno anhidro (3 x 10 ml). A una solución de 25 y 29 en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (40 ml) se añadió DMAP (633 mg, 5.18 mmol)
y EDC-HCI (994 mg, 5.18 mmol) a 23ºC. La mezcla de
reacción se agitó a 23ºC durante 3 horas. La mezcla se repartió con
una solución saturada de bicarbonato de sodio (50 ml) y se
separaron las capas. La capa acuosa se lavó con CH_{2}Cl_{2}
(50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de
sodio, se filtraron y se concentraron. El crudo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (acetato de etilo/hexano 1: 3) para
obtener 30 (1.00 g, 95%) en la forma de un sólido de color amarillo
cremoso pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.72 (m, 2H), 7.52 (m, 2H), 7.38 (m, 2H),
7.28 (m, 2H), 6.65 (s, 1H), 6.03 (m, 1H), 5.92 (d, J= 1.5 Hz, 1H),
5.79 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.39 (m, 1H), 5.29 (dq, J= 10. 3 Hz, J= 1.
5 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.73 (d, J= 11.9 Hz, 1H), 4.66 (d, J= 11.
9 Hz, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.36-3.96 (m, 9H), 3.89
(t, J= 6.4 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.33 (m, 1H), 3.20
(m, 2H), 2.94 (m, 3H), 2.59 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.23 (s, 3H),
2.02 (s, 3H), 1.83 (dd, J= 16.0 Hz, J= 11.9 Hz, 1H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 169.7, 154.0, 148.8, 148.4, 145.7, 144.5,
140.9, 139.0, 133.7, 130.9, 130.6, 127.6, 127.0, 124.8, 124.6,
124.1, 120.8, 119.9, 118.2, 117.7, 117.3, 112.7, 112.1, 101.3,
99.2, 74.7, 73.9, 64.4, 59.8, 57.7, 57.0, 56.8, 55.4, 53.3, 46.7,
41.4, 36.5, 34.7, 31.5, 26.4, 24.9, 22.6, 15.7, 14.0, 9.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{51}H_{53}Cl_{3}N_{4}O_{10}S : 1020.4. Encontrado
(M+H)^{+}: 1021.2.
A una solución de 30 (845 mg, 0.82 mmol), ácido
acético (500 mg, 8.28 mmol) y (PPh_{3})_{2}PdCl_{2}
(29 mg, 0.04 mmol) en 20 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro a 23ºC, se
añadió, gota a gota, Bu_{3}SnH (650 mg, 2.23 mmol). La mezcla de
reacción se agitó a esta temperatura durante 15 min., "bubbling
was" (NOTA: NO LI TROBO CAP SENTIT A AQUESTA EXPRESSIÓ: QUÉ ÉS
EL QUE ES BOMBOLLEJA? PROBABLEMENT HI HAGI UN ERROR DE TRANSCRIPCIÓ
EN L'ORIGINAL).
El crudo se enfrió con agua (50 ml) y se extrajo
con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se secaron
sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El crudo se
purificó mediante cromatografía en columna flash (acetato de etilo
/ hexano en gradiente desde 1: 5 a 1: 3) para obtener el compuesto
31 (730 mg, 90%) en la forma de un sólido de color amarillo cremoso
pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.72 (m, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.37 (m, 2H),
7.30 (m, 2H), 6.65 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.74 (s,
1H), 5.36 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 5.20 (d, J=
9.0,1H), 4.75 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.48 (d, J= 11.9
Hz, 1H), 4.08 (m, 4H), 3.89 (m, 1H), 3.86, (t, J= 6.2 Hz, 1H), 3.70
(s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.38 (m, 1H), 3.25 (m, 1H),
3.02-2.89 (m, 4H), 2.67 (s, 1H), 2.61 (s, 1H), 2.51
(dd, J= 14.3 Hz, J= 4.5 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.95
(s, 3H), 1.83 (m, 1H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 168.2, 152.5, 148.1, 146.2, 144.4, 144.3,
139.6, 134.6, 129.7, 129.6, 126.2, 125.6, 123.4, 123.3, 121.6,
118.5, 116.3, 110.7, 110.2, 105.1, 99.4, 98.5, 75.2, 73.3, 61.7,
58.4, 57.9, 56.3, 56.1, 55.1, 54.7, 53.9, 51.9, 45.2, 40.1, 35.6,
33.3, 24.8, 23.3., 14.5, 7.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{48}H_{49}Cl_{3}N_{4}O_{10}S: 980.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 981.2.
A una solución de 31 (310 mg, 0.32 mmol), en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (15 ml) a -10ºC se añadió una solución de
anhídrido bencenoselenínico 70% (165 mg, 0.32 mmol), en
CH_{2}Cl_{2} anhidro (7 ml), a través de una cánula, manteniendo
la temperatura a -10ºC. La mezcla de reacción se agitó a -10ºC
durante 5 min. Se añadió una disolución saturada de bicarbonato de
sodio (30 ml) mientras se mantenía la reacción a esta
temperatura.
La capa acuosa se lavó con más CH_{2}Cl_{2}
(40 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio, se
filtraron y se concentraron. El crudo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (acetato de etilo / hexano en
gradiente desde 1: 5 a 1: 1) para obtener 32 (287 mg,91%, HPLC:
91.3%) en la forma de un sólido de color amarillo cremoso pálido y
como mezcla de dos isómeros (65: 35), que se utilizaron en el
siguiente paso.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta (Mezcla de isómeros) 7.76 (m, 4H), 7.65 (m,
4H), 7.39 (m, 4H), 7.29 (m, 4H), 6.62 (s, 1H), 6.55 (s, 1H),
5.79-5.63 (m, 6H), 5.09 (s, 1H), 5.02 (d, J= 6.0
Hz, 1H), 4.99 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.80-4.63 (m,
6H), 4.60 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.38 (d, J= 12.8 Hz, J= 7.5 Hz,1H),
4.27 (dd, J= 12.8 Hz, J= 7.5 Hz, 1H), 4.16-3.90 (m,
10H), 3.84 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.49 (s, 3H),
3.33-2.83 (m, 14H), 2.45-2.18 (m,
2H), 2.21 (s, 6H), 2.17 (s, 6H), 1.77 (s, 6H), 1.67 (m, 2H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta (Mezcla de isómeros) 168.6, 168.4, 158.6,
154.8, 152.8, 152.5, 147.3, 147.2, 146.8, 144.1, 144.0, 140.8,
139.7, 137.1, 129.8, 129.3, 128.4, 128.7, 126.5, 125.5, 123.7,
123.6, 123.5, 123.4, 122.2, 121.3, 118.3, 115.8, 115.5, 110.2,
106.9, 103.5, 5, 59.3, 58.9, 58.4, 56.7, 56.3, 56.2, 55.4, 55.2,
55.1, 54.9, 54.7, 54.3, 54.1, 53.8, 52.8, 45.5, 40.5, 40.0, 39.8,
35.8, 35.5, 33.9, 33.7, 30.1, 28.8, 24.2, 24.1, 21.2, 14.5, 14.4,
12.7, 6.0, 5.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{48}H_{49}Cl_{3}N_{4}O_{11}S: 996.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 997.2.
Se flameó dos veces el recipiente de reacción, se
purgó con vacío/argón varias veces y se mantuvo bajo atmósfera de
argón durante la reacción. A una solución de DMSO (39.1 \mul,
0.55 mmol, 5 equivalentes) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (4.5 ml) se
añadió gota a gota anhídrido tríflico (37.3 \mul, 0.22 mmol, 2
equivalentes) a -78ºC. La mezcla de reacción se agitó a 78ºC
durante 20 minutos, seguidamente se añadió una solución de 32 (110
mg, 0.11 mmol, HPLC: 91.3%) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (1 ml para
la adición principal y 0.5 ml para lavado) a -78ºC, a través de una
cánula. Durante la adición la temperatura se mantuvo a -78ºC en
ambos recipientes y el color cambió de amarillo a marrón.
La mezcla de reacción se agitó a -40ºC durante 35
minutos. Durante este periodo de tiempo la solución pasó de
amarilla a verde oscuro. Una vez transcurrido este tiempo, se
añadió ^{i}Pr_{2}NEt (153 \mul, 0.88 mmol, 8 equivalentes)
gota a gota y la mezcla de reacción se mantuvo a 0ºC durante 45
minutos, y el color de la solución se volvió marrón durante este
periodo de tiempo. Seguidamente se añadieron
t-butanol (41.6 \mul, 0.44 mmol, 4 equivalentes) y
2-^{i}Butil-1,1,3,3-tetrametilguanidina
(154.6 \mul, 0.77 mmol, 7 equivalentes) gota a gota y la mezcla
de reacción se agitó a 23ºC durante 40 minutos. Una vez
transcurrido este tiempo, se añadió anhídrido acético (104.3 ml,
1.10 ml, 10 equivalentes) gota a gota y la mezcla de reacción se
mantuvo a 23ºC durante una hora más. Seguidamente la mezcla de
reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml) y se lavó con una
solución saturada acuosa de NH_{4}Cl (50 ml), bicarbonato de
sodio (50 ml), y cloruro de sodio (50 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se
concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en
columna flash (eluyente: acetato de etilo / hexano gradiente desde
1: 3 a 1: 2) para dar compuesto 33 (54 mg, 58%) en la forma de un
sólido de color amarillo pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 6.85 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H),
5.20 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 5.14 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 5.03 (m, 1H),
4.82(d, J= 12.2,1H), 4.63 (d, J= 12.0 Hz,1H), 4.52 (m, 1H),
4.35-4.17 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.45
(m, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H),
2.12 (m, 2H), 2.03 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 168.5, 167.2, 152.7, 148.1, 147.1, 144.5,
139.6, 139.1, 130.5, 6, 97.8, 73.3, 60.5, 59.4, 59.2, 58.3, 57.6,
57.4, 56.1, 53.3, 53.1, 40.6, 40.0, 31.0, 22.2, 18.9, 14.4,
8.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{39}Cl_{3}N_{4}O_{11}S: 842.1. Encontrado
(M+H)^{+}: 843.1.
A una solución de 33 (12 mg, 0.014 mmol) en
diclorometano seco (1.2 ml) y acetonitrilo de graduación HPLC (1.2
ml) a 23ºC se añadió yoduro sódico (21 mg, 0.14 mmol) y cloruro de
trimetilsililo recién destilado (sobre hidruro calcio a presión
atmosférica) (15.4 mg, 0.14 mmol).
La mezcla de reacción se volvió de color naranja.
Después de 15 min la solución se diluyó con diclorometano (10 ml) y
se lavó con una solución acuosa saturada recién preparada de
Na_{2}S_{2}O_{4} (3 x 10 ml). La capa orgánica se secó sobre
sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se obtuvo el compuesto
34 (13 mg, rendimiento cuantitativo) en la forma de un sólido de
color amarillo pálido que se utilizó sin posterior
purificación.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 6.85 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.99 (s, 1H),
5.27 (d, J= 5.8 Hz,1H), 5.14 (d, J= 5.3 Hz,1H), 5.03 (d, J= 11.9 Hz,
1H), 4.82 (d, J= 12.2,1H), 4.63 (d, J= 13.0 Hz,1H), 4.52 (m, 1H),
4.34 (m, 1H), 4.27 (bs, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s,
3H), 3.44 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 2.91(m, 2H), 2.32 (s, 3H),
2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.03 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{35}N_{4}O_{10}S: 798.1. Encontrado
(M+H)^{+}: 799.1.
A una solución de 34 (13 mg, 0.016 mmol) en una
mezcla of ácido acético / H_{2}O (90: 10,1 ml) se añadió polvo de
zinc (5.3 mg, 0.081 mmol) a 23ºC. La mezcla de reacción se calentó
a 70ºC durante 6 h. Una vez transcurrido este tiempo, se enfrió a
23ºC, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml) y se lavó con una
solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (15 ml) y una
solución acuosa de Et_{3}N (15 ml). La capa orgánica se secó
sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo se
purificó mediante cromatografía en columna flash con
sílice-NH_{2} (eluyente: acetato de etilo / hexano
gradiente desde 0: 100 a 50: 50) para dar el compuesto 35 (6.8 mg,
77% para los dos pasos) en la forma de un sólido de color amarillo
pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 6.51 (s, 1H), 6.03 (dd, J= 1.3 Hz, J= 26.5
Hz, 2H), 5.75 (bs, 1H), 5.02 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.25
(m, 2H), 4.18(d, J= 2.5 Hz, 1H), 4.12 (dd, J= 1.9 Hz, J=
11.5 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.26 (t, J= 6.4 Hz, 1H),
2.88 (m, 2H),2. 30-2.10 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.28
(s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.02 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 174.1, 168.4, 147.8, 145.4, 142.9, 140.8,
140.1, 131.7, 130.2, 129.1, 128.3, 120.4, 118.3, 117.9, 113.8,
111.7, 101.7, 61.2, 59.8, 59.2, 58.9, 54.4, 53.8, 54.4, 41.3, 41.5,
34.1, 23.6, 20.3, 15.5, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{34}N_{4}O_{8}S: 622.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 623.2.
A una solución de 36 (49 mg, 0.08 mmol) y
2-[3-hidroxi-4-metoxifenil]etilamina
(46.2 mg, 0.27 mmol) en etanol (2.5 ml) se añadió sílica gel (105
mg) a 23ºC. La mezcla de reacción se agitó a 23ºC durante 14 h. Se
diluyó con hexano y se vertió en una columna de cromatografía
(acetato de etilo / hexano desde 1/3 a 1/1) para dar
Et-770 (55 mg, 90%) en la forma de un sólido de
color amarillo pálido.
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 6.60 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.45 (s, 1H),
6.05 (s, 1H), 5.98 (s, 1 H), 5.02 (d, J= l 1.4 Hz,1H), 4.57 (bs,
1H), 4.32 (bs, 1H), 4.28 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.18 (d, J= 2. 5 Hz,
1H), 4.12 (dd, J= 2.1 Hz, J= 11.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.62 (s,
3H), 3.50 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.10 (ddd, J= 4.0 Hz,
J= 10.0Hz, J= 11.0 Hz, 1H), 2.94 (m, 2H), 2.79 (m, 1H), 2.61 (m,
1H), 2.47 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.20
(s, 3H), 2.09 (m, 1H), 2.04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{42}N_{4}O_{10}S: 770.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 771.2
A una solución de 21 (22 mg, 0.042 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.8 ml) se añadió anhídrido ftálico (6.44 mg,
0.042 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23ºC.
Seguidamente, se añadió carbonildiimidazol (1 mg, 0.006 mmol) y la
mezcla se agitó a 23ºC durante 7h. Seguidamente, se añadió
carbonildiimidazol (5.86 mg, 0.035 mmol) y la reacción se agitó a
23ºC durante otras 17 h. La solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2}
(15 ml) y se lavó con HCl 0.1N (15 ml). La capa orgánica se secó
sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente se eliminó bajo
presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en
columna flash (SiO_{2}, hexano: acetato de etilo 2: 1) para dar 27
(26.4 mg, 96%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.58 (acetato de etilo).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}):
7.73-7.64 (m, 4H), 6.40 (s, 1H),
6.12-6.01 (m, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.58 (d, J= 1.5
Hz, 1H), 5.37 (dd, J_{1}= 1.8Hz, J_{2} = 17.4 Hz), 5.23 (dd,
J_{1}= 1.8 Hz, J_{2}= 10.5 Hz, 1H), 5.12 (d, J= 1.5 Hz, 1H),
4.22-4.15 (m, 3H), 4.08 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 3.68 (s,
3H), 3.59-3.55 (m 2H), 3.35 (d, J= 8.1 Hz, 1H),
3.27-3.16 (m, 2H), 3.05 (dd, J_{1}= 8.1 Hz,
J_{2}= 18.3 Hz, 1H), 2.64 (d, J= 18. 0Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24
(s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.80 (dd, J_{1}= 11.4, J_{2}= 15Hz,
1H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
167.7, 148.9, 146.4, 144.2, 142.6, 139.5, 134.0, 133.5, 132.0,
131.0, 128.3, 123.0, 121.3, 120.9, 118.1, 117.5, 116.8, 113.6,
112.4, 100.8, 74.5, 60.6, 60.5, 57.7, 56.6, 55.6, 55.5, 42.3, 41.7,
26.6, 25.5, 15.9, 9.46.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{37}H_{35}N_{4}O_{7}: 648. 79. Encontrado
(M+H)^{+}: 649.3.
A una solución de 27 (26 mg, 0.041 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (11 ml), se añadieron ácido acético (11 ml),
(PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (2.36 mg) y Bu_{3}SnH (28 ml,
0.10 mmol) a 23ºC. Después de agitar a esta temperatura durante 2 h
la reacción se vertió en una columna flash (SiO_{2}, gradiente Hex
a hexano: acetato de etilo 2: 1) para dar 28 (24.7 mg, 99%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.33 (hexano: acetato de etilo 2: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.75-7.70 (m, 2H), 7.69-7.65 (m,
2H), 6.39 (s, 1H), 5.82 (bs, 1H), 5.50 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.0 (d,
J= 1.5 Hz, 1H), 4.45 (bs, 1H), 4.23-4.19 (m, 2H),
4.104.09 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.60-3.48 (m, 2H),
3.36-3.33 (m, 1H), 3.26-3.20 (m,
1H), 3.14-3.08 (m, 1H), 3.98 (d, J= 14.4 Hz, 1H),
2.61 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.06 (s, 3H),
1.85 (dd, J_{1}= 12 Hz, J_{2}= 15.3 Hz);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
167.8, 146.4, 145.1, 143.9, 142.7, 137.1, 133.5, 131.9, 130.8, 5,
57.8, 56.6, 55.5, 55.2, 42.6, 41.5, 25.6, 25.5, 15.8, 8.9.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{34}H_{32}N_{4}O_{7}: 608.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 609.2.
A una solución de 28 (357 mg, 0.58 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (3 ml), se añadieron cloruro de acetilo (41.58
\mul, 0.58 mmol) y piridina (47.3 \mul, 0.58 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 1h y seguidamente, la solución
se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (15
ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y
el disolvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se
purificó mediante cromatografía en columna flash
(RP-18, CH_{3}CN : H_{2}O 60: 40) para dar
ftalascidina (354 mg, 94%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.37 (CH_{3}CN: H_{2}O 7: 3,
RP-18).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.72-7.68 (m, 2H), 7.67-7.63 (m,
2H). 6.38 (s, 1H), 5.69 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J= 1.2Hz, 1H),
5.30 (bs, 1H), 4.25-4.21 (m, 2H), 4.02 (d, J= 2.1
Hz, 1H), 3.64-3.62 (m, 5H), 3.33 (d, J= 8.4 Hz,
1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 3.02 (dd, J_{1}=8. 1 Hz,
J_{2}= 18 Hz, 1H), 2.76 (dd, J_{1}= 1.8 Hz, J_{2} = 15.6 Hz,
1H), 2.63 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s,
3H), 2.0 (s, 3H), 1.73 (dd, J_{1}= 12.0 Hz, J_{2} = 15.3 Hz,
1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
168.5, 167.6, 146.2, 144.2, 142.5, 141.0, 140.5, 133.4, 131.8,
130.7, 128.2, 120.9, 120.8, 117.9, 116.4, 113.6, 101.1, 60.4, 60.0,
57.0, 56.3, 55.6, 5, 25.2, 20.2, 15.7, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{34}N_{4}O_{8}: 650. Encontrado (M+H)^{+}:
651.2.
A una solución de 17 (300 mg, 0.432 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 ml), se añadieron cloruro de acetilo (30.7
\mul, 0.432 mmol) y piridina (34.9 \mul, 0.432 mmol) a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente y
seguidamente la solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y se
lavó con HCl 0.1 N (15 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato
de sodio, se filtró, y el disolvente se eliminó bajo presión
reducida para dar 42 (318 mg, 100%) en la forma de un sólido de
color blanco que se utilizó en las siguientes reacciones sin
purificación adicional.
Rf: 0.5 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.66
(s, 1H), 5.93 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.42 (t,
J= 6.6 Hz, 1H), 5.07 (d, J= 5.7 Hz,1H), 4.98 (d, J= 5.7 Hz,1H),
4.16 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 4.11 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 3.98 (bs, 1H),
3.73-3.61 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), (m, 1H), 3.50 (s,
3H), 3.33 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H),
2.97-2.87 (m, 1H),
2.75-2.70(d, J= 16.8 Hz, 1H), 2.26 (s, 6H),
2.16 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.70 (dd, J_{1}= 11.7 Hz, J_{2}=
15.6Hz, 1H), 1.33 (s, 9H), 0.59 (d, J= 6. 0 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta 172,
168.3, 162.3, 148.2, 144.4, 140.4, 140.2, 130.9, 130.5, 125.3,
123.4, 120.8, 117.6, 112.7, 111.7, 101.4, 99.1, 79.2, 59.5, 58.8,
57.5, 57.4, 56.4, 55.5, 55.0, 41.3, 39.0, 28.2, 26.4, 24.6, 19.9,
18.4, 15.4.9.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{49}N_{5}O_{10}: 735.82. Encontrado
(M+H)^{+}: 736.3.
A una solución de 42 (318 mg, 0.432 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2.16 mmol), se añadió ácido trifluoroacético (1.
33 ml, 17.30 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 3.5 h a
23ºC. La reacción se enfrió a 0ºC con bicarbonato de sodio acuoso
saturado (60 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 70 ml). Las
capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se
concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (SiO_{2}, acetato de etilo:
metanol 20 : 1) para dar 43 (154 mg, 60%) en la forma de un sólido
de color blanco.
Rf: 0.22 (acetato de etilo: metanol 5 : 1).
^{1}H RMN (300 MHZ, CDCl_{3}): \delta 6. 47
(s, 1H), 6.22 (bs, 1H), 5.95 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.88(d, J=
1.2 Hz, 1H), 4.08-4.06 (m, 2H), 4.01 (bs, 1H), 3.69
(s, 3H), 3.49 (d, J= 3. 6Hz, 1H), 3.33 (d, J= 8.1 Hz, 1H),
3.26-3.22 (m, 1H), 2.95 (dd, J_{1}= 8.1 Hz,
J_{2}= 18 Hz, 1H), 2.80-2.76 (m, 2H), 2.58 (d,
J=18Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.96 (s,
3H), 1.77 (dd, J_{1}= 12.3 Hz, J_{2} = 15.6 Hz, 1H), 0.90 (d,
J=6.9 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
174.8, 169.0, 146.8, 144.4, 142.8, 140.5, 140.2, 131.1, 55. 1,
50.2, 41.6, 39.5, 26.8, 26.3, 24.9, 20.2, 15.4, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{31}H_{37}N_{5}O_{7} : 591.65. Encontrado
(M+H)^{+} : 592.3.
A una solución de 43 (154 mg, 0.26 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (1.3 ml), se añadió isocianato de fenilo (186
\mul, 1.56 mmol) y la mezcla se agitó a 23ºC durante 2 h. La
reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (SiO_{2}, gradiente Hexano a
hexano: acetato de etilo 1: 1) para dar 44 (120 mg, 63%) en la
forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0. 41 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.17
(s, 1H), 7.49-7.44 (m, 3H),
7.31-7.24 (m, 3H), 7.05 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 5.98
(d, J= 1.2 Hz,1H), 5.87 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.52 (bs, 1H), 4.54 (t,
J= 6.6 Hz, 1H), 4.15 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 4.03 (d, J= 2.7 Hz, 2H),
3.80 (bs, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.40 (bs, 1H), 3.32 (d, J= 7.8 Hz,
1H), 3.16 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 2.82-2.61 (m, 3H),
2.29 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.80 (dd,
J_{1}= 12. 0 Hz, J_{2} = 15.9 Hz, 1H), 0.62 (d, J= 6.0 Hz,
3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
178.5, 171.9, 168.7, 146.7, 144.5, 142.6, 140.6, 140.3, 136.3,
131.0, 129.9, 128.9, 126.7, 124.4, 120.9, 120.6, 117.7, 116.6,
112.7, 111.9, 101.4, 60.4, 58.7, 57.5, 56.1, 55.7, 53.3, 41.4, 38.8,
26.3, 24.4, 20.2, 18.1, 15.3, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{42}N_{6}O_{7}S: 726.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 727.3.
A una solución de 44 (120 mg, 0.165 mmol) en
dioxano (0.9 ml), se añadió HCl / dioxano 5.3 N (1.8 ml) y la
reacción se agitó a 23ºC durante 2.5 h. Seguidamente, se añadieron
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y H_{2}O (5 ml) a esta reacción y se
decantó la capa orgánica. La fase acuosa se basificó con
bicarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) (pH = 8) a 0ºC y
seguidamente, se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2x15 ml). Los
extractos orgánicos combinados se secaron (sulfato de sodio), y se
concentraron al vacío para dar 45 (75 mg, 87%) en la forma de un
sólido de color blanco que se utilizó en las reacciones siguientes
sin purificación adicional.
Rf: 0.23 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.43
(s, 1H), 5.94 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.87 (d, J= 1.2Hz, 1H), 4.10 (d,
J= 2.1 Hz, 1H), 3.98 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 3.91 (bs, 1H), 3.69 (s,
3H), 3.34-3.25 (m, 2H), 3.05 (dd, J_{1}= 1.8 Hz,
J_{2}= 8.1 Hz, 1H), 2.80-2.73 (m, 3H), 2.46 (d,
J= 18 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.98 (s,
3H), 1.79 (dd, J_{1}= 12.6 Hz, J_{2}= 16.2 Hz, 1H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
168.7, 146.7, 144.4, 142.9, 140.4, 130.4, 128.9, 121.1, 120.8,
117.8, 116.8, 113.6, 111.5, 101.4, 67.6, 60.5, 59.8, 58.4, 56.6,
55.8, 55.3, 43.6, 41.8, 31.3, 25.6, 20.2, 15.6, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{28}H_{32}N_{4}O_{6}: 520.58. Encontrado
(M+H)^{+}: 521.3.
A una solución de 45 (10 mg, 0.02 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml) se añadió anhídrido ftálico (2.84 mg,
0.02 mmol) y La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23ºC.
Seguidamente, se añadió carbonildiimidazol (0.5 mg, 0.003 mmol) y la
mezcla se agitó a 23ºC durante 7 h. Seguidamente, se añadió
carbonildiimidazol (2.61 mg, 0.016 mmol) y la reacción se agitó a
23ºC durante otras 17 h. La solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2}
(10 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (5 ml). La capa orgánica se secó
sobre sulfato de sodio, se filtró, y el disolvente se eliminó bajo
presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en
columna flash (RP-18, CH_{3}CN: H_{2}O 60: 40)
para dar ftalascidina (11.7 mg, 93%) en la forma de un sólido de
color blanco.
Rf: 0. 37 (CH_{3}CN: H_{2}O 7 : 3,
RP-18).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.72-7.68 (m, 2 H), 7.67-7.63 (m, 2
H), 6.38 (s, 1H), 5.69 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J= 1.2 Hz, 1H),
5.30 (bs, 1H), 4.25-4.21 (m, 2 H), 4.02 (d, J= 2.1
Hz, 1H), 3.64-3.62 (m, 5H), 3.33 (d, J= 8.4 Hz,
1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 3.02 (dd, J_{1}= 8.1 Hz,
J_{2}= 18 Hz, 1H), 2.76 (dd, J_{1}= 1.8 Hz, J_{2}= 15.6 Hz,
1H), 2.63 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.21 (s,
3H), 2.0 (s, 3H), 1.73 (dd, J_{1}= 12.0 Hz, J_{2}= 15.3 Hz,
1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
168.5, 167.6, 146.2, 144.2, 142.5, 141.0, 140.5, 133.4, 116.4,
113.6, 101.1, 60.4, 60.0, 57.0, 56.3, 55.6, 55.4, 41.6, 41.5, 26.5,
25.2, 20.2, 15.7, 9.4.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{34}N_{4}O_{8}: 650. Encontrado (M+H)^{+}:
651.2.
A una solución de 25 (18 mg, 0.032 mmol) en DMF
(0.05 ml), se añadieron DMAP cat. (0.5 mg, 0.004 mmol), imidazol (5
mg, 0.08 mmol) y cloruro de tert-Butildifenilsililo (12.5
\mul, 0.048 mmol) a 0ºC y la mezcla de reacción se agitó durante
6 h a 23ºC. Se añadió agua (10 ml) a 0ºC y se extrajo la fase
acuosa con hexano: acetato de etilo 1: 10 (2 x 10 ml). La capa
orgánica se secó (sulfato de sodio), se filtró, y el disolvente se
eliminó bajo presión reducida. El crudo se purificó mediante
cromatografía en columna flash (SiO_{2}, hexano: acetato de etilo
3: 1) para dar 26 (27 mg, 88%) en la forma de un sólido de color
blanco.
Rf: 0.29 (hexano: acetato de etilo 3: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.61-7.58 (m, 2 H), 7.42-7.28 (m,
8H), 6.71 (s, 1H), 6.19-6.02 (m, 1H), 5.78 (d, J=
1.2 Hz, 1H), 5.64 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.40 (dd, J_{1} = 1.2 Hz,
J_{2}= 17.1 Hz, 1 H), 5.27 (dd, J_{1}= 1.2 Hz, J_{2}= 10.2
Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 h), 4.45 (d, J= 2. 4 Hz, 1 H), 4.24 (d, J= 2.1
Hz, 1H), 4.17-4.06 (m, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.64 (dd,
J_{1}= 2.4 Hz, J_{2}= 9.9 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H),
3.42-3.21 (m, 4H), 3.10 (dd, J_{1} = 8.1 Hz,
J_{2}= 17.7 Hz, 1H), 2.70 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2,26
(s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.08-1.89 (m, 1H), 0.87 (s,
9H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
148.5, 148.3, 148.1, 144.0, 139.0, 135.6, 135.4, 133.8, 133.1,
132.6, 130.5, 130.3, 129.6, 129.4, 127.5, 127.4, 125.1, 124.3,
121.6, 118.5, 117.5, 112.9, 111.7, 100.8, 99.2, 74.0, 67.7, 61.5,
59.6, 59.0, 57.7, 57.1, 55.4, 41.6, 29.6, 26.6, 25.5, 18.8, 15.8,
9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{47}H_{55}N_{3}O_{7}Si: 801.3. Encontrado
(M+H)^{+}: 802.3.
A una solución de 26 (7 mg, 0.0087 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.15 ml), se añadieron ácido acético (2.5 \mul,
0.044 mmol), (PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (0.5 mg, 6.96 x
10^{-4} mmol) y Bu_{3}SnH (3.5 \mul, 0.013 mmol) a 23ºC. La
mezcla de reacción se agitó a esa temperatura durante 1 h. La
solución se diluyó con una mezcla of hexano: acetato de etilo 5: 1
(0.5 ml) y se vertió en una columna flash (SiO_{2}, gradiente 5:
1 a 1:1 hexano: acetato de etilo) dando ET-11 (5
mg, 75%) en la forma de un sólido de color blanco.
Rf: 0.36 (hexano: acetato de etilo 1: 5,
sílice).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7.56
(m, 2 H), 7.41-7.25 (m, 8H), 6.67 (s, 1H), 5.72 (d,
J= 1.0 Hz, 1H), 5.58 (d, J= 1.0 Hz, 1 H), 5.51 (s, 1H), 5.38 (d,
J=5. 75Hz, 1H), 5.16 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.57 (d, J= 2. 9 Hz, 1H),
4.21(m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.68
(dd, J_{1}= 2.1 Hz, J_{2}= 10.4 Hz, 1H),
3.38-3.26 (m, 3H), 3.11 (dd, J_{1}= 2.5 Hz,
J_{2}= 15.7 Hz, 1H), 3.01 (dd, J_{1}= 8.9 Hz, J_{2}= 17.9 Hz,
1H), 2.70 (d, J= 17.9 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.06 (s,
3H), 1.89 (dd, J_{1}= 12.1 Hz, J_{2}= 15.7 Hz, 1H), 0.9 (s,
9H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
149.0, 147.4, 145.3, 144.3, 136.3, 135.7, 135.4, 133.2, 130.9,
130.5, 129.6, 129.5, 127.5, 125.0, 118.6, 112.5, 112.1, 105.7,
100.5, 99.8, 68.5, 61.5, 59.7, 58.8, 57.7, 56.9, 56.5, 41.7, 26.6,
25.5, 18.9, 15.8, 14.2, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{44}H_{51}N_{3}O_{7}Si: 761. Encontrado
(M+H)^{+}: 762.
Se agitó una solución de 2 (3.0 g, 5.46 mmol) e
isocianato de fenilo (3.92 mL, 32.76 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (27
ml) a 23ºC durante 1.5 h. La mezcla de reacción se repartió entre
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y H_{2}O (5 ml). La capa orgánica se
secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo se
purificó mediante cromatografía en columna flash (SiO_{2},
gradiente Hex a 2: 3 hexano: acetato de etilo) para dar 3 (3.29 g,
88%) en la forma de un sólido de color amarillo.
Rf: 0.27 (ACN: H_{2}O 3: 2,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7.77
(bs, 1H), 7.42-7.11 (m, 5H), 6.65 (d, 1H), 6.29 (s,
1H), 5.6-5.5 (m, 1H), 4.19-4.14 (m,
2 H), 4.08 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.87-3.65 (m,
6H), 3.77 (s, 3H), 3.37-2.98 (m, 8H), 2.50 (d, 1H),
2.31 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.96 (d, 1H), 1.87 (s, 3H),
1.81-1.75 (m, 1H), 0.96 (d, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
185.7, 180.9, 178.9, 172.0, 155.7, 147.1, 143.2, 142.4, 136.0,
135.1, 130.5, 129.9, 129.3, 128.5, 126.9, 124.4, 120.2, 117.4,
116.3, 77.1, 60.9, 58.6, 56.2, 55.8, 55.0, 54.6, 53.5, 41.7, 40.3,
25.1, 24.5, 18.4, 15.8, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{40}N_{6}O_{6}S: 684.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 685.2.
Se sometió a agitación una solución de 3 (0.143
g, 0.208 mmol) en HCl 6.5 M /dioxano (150 ml) a 23ºC durante 6h.
Después, se añadió tolueno (3 ml) a esta reacción y se decantó la
capa orgánica. Se dividió el residuo entre bicarbonato de sodio
acuoso saturado (3 ml) y CHCl_{3} (3x3 ml). Se secaron y se
concentraron las capas orgánicas para obtener el compuesto del
título en forma de una mezcla de 4 y 6 (4: 6 90:10) que lentamente
cicla a 6.
Rf: 0.4 (acetato de etilo: metanol 5:1,
sílice);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.45
(s, 1H), 4.16 (m, 1H), 4.02 (d, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.79 (m, 2 h),
3.75 (s, 3H), 3.35 (m, 1H), 3.20-3.00 (m, 3H), 2.87
(d, 1H), 2.75 (d, 1H), 2.43 (d, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.30 (s, 3H),
1.93 (s, 3H), 1.72-1.5 (m, 3H);
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{26}H_{30}N_{4}O_{5}: 478.5. Encontrado
(M+H)^{+}: 479.2.
Se sometió a agitación una solución de 3 (0.143
g, 0.208 mmol) en HCl 6.5M /dioxano (150 ml) a 23ºC durante 1h. La
evaporación del solvente dio como resultado un residuo que se
purificó por cromatografía en columna de flash (acetato de
etilo/metanol/trietilamina 100: 25: 0.1) obteniéndose 6 (80 mg, 83%)
en forma de un sólido amarillo.
Rf: 0.26 (ACN: H_{2}O 3: 2,
RP-C18);
^{1}H RMN (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.46
(s, 1H), 5.9 (bs, 1H), 4.67 (dd, J=18.3 Hz, J=7.8 Hz, 1H), 4.24
(d,1H), 4.16 (s, 3H), 3.93 (d, J=2.7 Hz, 1H), 3.8 (m, 2h), 3.77 (s,
3H), 3.45 (m, 2h), 3.08(dd, J=17.9 Hz, J=3.6 Hz, 1H), 2.78
(m, 1H), 2.55 (d, 1H), 2.3 (m, 1H), 2.3 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.90
(s, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
186.2, 162.1, 154.9, 146.9, 145.3, 143.0, 130.1, 129.4, 128.1,
125.0, 121.4, 116.4, 116.2, 66.6, 60.7, 60.1, 59.6, 58.8, 55.6,
54.9, 41.9, 25.3, 24.7, 15.7, 8.9.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{26}H_{28}N_{4}O_{4}: 460.5. Encontrado
(M+H)^{+}: 461.1.
Se añadió HCl 5.3M en dioxano (34 ml) a una
solución de 3 (2.38 g, 3.47 mmol) en dioxano(5 ml) y se
sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 45 minutos. Después,
se añadió Ac_{2}O (51 ml, 539.5 mmol) y se sometió la mezcla a
agitación durante 4h. Se enfrió la reacción a 0ºC y se dividió entre
Na_{2}CO_{3} acuoso saturado (300 ml) y acetato de etilo (300
ml) a esta temperatura. La fase orgánica se secó sobre sulfato de
sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo por
cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, gradiente de
CH_{2}Cl_{2} a CH_{2}Cl_{2}: acetato de etilo 1: 2)
obteniéndose 5 (1.75 g, 97%) en forma de un sólido amarillo.
Rf: 0.53 (ACN: H_{2}O 3: 2,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.51
(s, 1H), 5.98 (bs, 1H), 4.84 (dd,1 H), 4.17 (d, 1H), 4.00 (d, 1H),
3.99 (s, 3H), 3.85 (bs, 1H), 3.81(m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.70
(d, 1H), 3.23(m, 1H), 3.11 (dd, 1H), 3.09 (m, 1H), 2.93 (m, 2
h), 2.44 (d,1H), 3.67 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.70 (s, 3H),
1.60-1.50 (m, 2h), 1.29 (s, 3H);
^{13}CRMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta 185.9,
180.8, 169.9, 160.2, 156.2, 147.0, 143.1, 140.4, 136.1, 130.6,
129.6, 127.9, 120.4, 117.2, 61.0, 60.7, 58.6, 56.1, 55.7, 55.1,
54.3, 41.8, 41.1, 25.7, 23.9, 22.2, 15.7, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{28}H_{32}N_{4}O_{6}: 520.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 521.1.
Se añadieron diisopropiletilamina (11.71 ml,
67.23 mmol), DMAP (20 mg, 0.17 mmol) y metileter de bromometilo
(4.11 ml, 50.42 mmol) a una solución de 5 (1.75 g, 3.36 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (17 ml) a 0ºC. Después de 6 h a 23ºC, se dividió
la reacción entre CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y bicarbonato de sodio
acuoso saturado (25 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de
sodio y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el crudo por cromatografía en columna de flash
(RP-18, CH_{3}CN/H_{2}O 1/1) obteniéndose 7
(1.32 g, 70%) en forma de un sólido amarillo.
Rf: 0.34 (ACN: H_{2}O 2: 3,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.74
(s, 1H), 5.14 (s, 2 h), 4.82 (m, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.00 (s, 3H),
4.0 (m, 1H), 3.83 (m, 2 h), 3.7 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.4 (m, 1H),
3.2-2.95(m, 6H), 2.43 (d, 1H), 2.37 (s, 3H),
2.22 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.5-1.4 (m, 2 h), 1.31
(s, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
185.9, 180.7, 169.6, 156.2, 148.9, 148.5, 140.3, 136.2, 131.3,
99.5, 99.2, 60.9, 59.7, 58.8, 57.7, 56.4, 55.7, 55.0, 54.2, 51.0,
41.6, 41.0, 40.5, 25.5, 23.9, 22.3, 19.3, 15.6, 14.6, 8.6.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{36}N_{4}O_{7}: 564.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 565.3.
Se añadió hidróxido de sodio 1M (130 ml) a una
solución de 7 (0.37 g, 0.65 mmol) en metanol (74 ml) a 0ºC. Se
sometió la reacción a agitación durante 15 minutos y después, se
neutralizó a 0ºC con HCl 6M hasta pH= 5. Se extrajo la mezcla con
acetato de etilo (3 x 50 ml) y se secaron las capas orgánicas
combinadas sobre sulfato de sodio y se concentraron al vacío. Se
purificó el residuo por cromatografía en columna de flash
(RP-C18 CH_{3}CN: H_{2}O 1/ 1) obteniéndose 8
(232 mg, 65%) en forma de un aceite amarillo.
Rf: 0.5 (ACN: H_{2}O 3: 2,
RP-C18);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.75
(s, 1H), 5.15 (s, 2 h), 4.86 (m, 1H), 4.26 (d, 1H), 4.01 (d, 1H),
3.88-3.81 (m, 2 h), 3.70 (s, 3H), 3.58 (s, 3H),
3.39(m, 1H), 3.27-3.21(m, 1H),
3.18-3.08(m, 2 h),
3.03-2.97(m, 1H), 2.47 (d, 1H), 2.37 (s,
3H), 2.22 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.51. 46 (m, 2 h), 1.33 (s,
3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
185.3, 180.6, 175.9, 170.1, 151.5, 148.9, 148.6, 143.3, 133.7,
131.5, 129.9, 124.7, 123.5, 117.1, 117.0, 99.2, 59.8, 58.7, 57.8,
56.3, 55.3, 54.9, 54.3, 41.5, 40.7, 29.6, 25.5, 24.4, 22.2, 20.7,
15.7, 8.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{34}N_{4}O_{7}: 550.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 551.2.
A una solución desgasificada del compuesto 8 (240
mg, 0.435 mmol) en DMF (30 ml) se añadió Pd/C al 10% (48 mg) y se
sometió la reacción a agitación bajo H_{2} (presión atmosférica)
durante 1h. Se filtró la reacción sobre celite bajo argón a un tubo
Schlenk, en forma de una solución incolora, que contenía
Cs_{2}CO_{3} anhídrido (240 mg, 0.739 mmol). Después, se añadió
bromoclorometano (0.566 ml, 8.71 mmol). Se selló el tubo y se
sometió a agitación a 90ºC durante 3 h. Se enfrió la reacción y se
filtró a través de celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2}. Se
concentró la capa orgánica y secó (sulfato de sodio) para obtener 9
en forma de un aceite marrón que se utilizó en el siguiente paso
sin purificación adicional.
Rf: 0.36(SiO_{2}, hexano: acetato de
etilo 1: 5);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.71
(s, 3H), 5.89 (d,1H), 5.81 (d,1H), 5.63 (bs, 1H), 5.33 (d,1H), 5.17
(d,1 H), 4.97 (m, 1H), 4.20 (d, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.99 (m, 1H),
3.68 (m, 1H), 3.65 (s, 6H), 3.59-3.47 (m, 4H),
3.37-3.27 (m, 2 h), (m, 2 h), 2.62 (d,1H), 2.32 (s,
3H), 2.20 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.72 (m, 1H), 1.36 (s, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
169.8, 149.1, 147.4, 145.5, 136.2, 130.9, 130.8, 125.0, 122.9,
117.7, 112.6, 111.8, 106.4, 100.8, 99.8, 59.8, 58.9, 57.7, 56.6,
56.4, 55.5, 55.2, 41.6, 40.1, 29.6, 25.9, 25.0, 22.6, 15.6, 8.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{36}SiN_{4}O_{7}: 564.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 565.3.
A un matraz que contenía 9 (245 mg, 0.435ml) en
DMF (4 ml), se añadieron carbonato de cesio (425 mg, 1.30 mmol) y
bromuro de alilo (376 \mul, 4.35 mmol) a 0ºC y se sometió la
mezcla a agitación a 23ºC durante 1h. Se filtró la reacción sobre
celite y se dividió entre CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y H_{2}O (10
ml). Se secó la fase orgánica (sulfato de sodio) y se concentró a
presión reducida para obtener un residuo que se purificó por
cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, CHCl_{3}: acetato
de etilo 1: 2) obteniéndose 10 en forma de un aceite amarillo (113
mg, 43%).
Rf: 0. 36 (hexano: acetato de etilo 1: 5);
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.74
(s, 1H), 6.3-6.0 (m, 1H), 5.94 (d, 1H), 5.87 (d,
1H), 5.43-5.36 (m, 2 h), 5.22 (s, 2 h), 5.00 (m,
1H), 4.22 (m, 1H), 4.17-4.01 (m, 1H), 3.98 (m, 2
h), 3.71-3.67 (m, 1H), 3.69 (s, 3H),
3.62-3.51 (m, 3H), 3.58 (s, 3H),
3.39-3.37 (m, 1H), 3.31-3.26 (m,
3H), 3.09 (dd, 1H), 2.56 (d, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11
(s, 3H), 2.24-2.10 (m, 1H),
1.82-1.73 (m, 1H), 1.24 (bs, 3H);
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
169.4, 148.8, 148.3, 139.1, 133.7, 130.9, 130.3, 125.2, 120.2,
117.7, 113.1, 112.6, 101.3, 99.3, 74.1, 59.7, 59.3, 57.8, 57.0,
56.1, 56.1, 55.2, 41.6, 41.0, 40.9,5, 15.6, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{33}H_{4}N_{4}O_{7}: 604.7. Encontrado
(M+H)^{+}: 605.3.
A una solución de 9 (22 mg, 0.039 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.2 ml), se añadieron cloruro de acetilo (2.79
ml, 0.039 mmol) y piridina (3.2 ml, 0.039 mmol) a 0ºC. Se sometió
la mezcla de reacción a agitación durante 1h y después, se diluyó
la solución con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (5
ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y
se eliminó el solvente bajo presión reducida para obtener 46 (22
mg, 93%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.4 (hexano: acetato de etilo 1: 5).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.74
(s, 1H), 5.97 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.91 (d, J=0.9 Hz, 1H), 5.12 (d,
J=5.7 Hz, 2 h), 5.04 (d, J=5. 7Hz, 1H) 4.90(t, J=6 Hz, 1H),
4.17 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.05 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.71
(s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.50-3.44 (m, 2 h),
3.38-3.36 (m, 1H), (m, 1H), 3.00 (dd, J=7.8 Hz, J2=
18.0 Hz, 1H), 2.79 (d, J=12.9 Hz, 1H), 2.60 (d, J=18.0 Hz, 1H),
2.35 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.68 (dd,
J_{2}=15.6 Hz, 1H) J_{1}=11.7 Hz.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{38}N_{4}O_{8}: 606.67: Encontrado
(M+H)^{+}: 607.3.
A una solución de 46 (8 mg, 0.013 mmol) en
dioxano (0. 1 ml), se añadió HCl 5.3 N /dioxano (0.5 ml) y se
sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 1h. Después, se
diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con 0.0192
ml) y se añadió piridina (1.55 ml, 0.0192 mmol) a 0ºC.
Se sometió la mezcla de reacción a agitación
durante 1h y después, se diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (5
ml) y se lavó con HC1 0.1 N (3 ml). Se secó la capa orgánica sobre
sulfato de sodio, se filtró, y se eliminó el solvente bajo presión
reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en columna de
flash (SiO_{2}, Hexano: acetato de etilo 1: 2) para obtener 48
(11 mg, 95%) en forma de un sólido blanco.
Rf:0.4 (hexano:acetato de etilo 1:5).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.51
(s, 1H), 5.97 (d, J=1.2 Hz, 1Hz), 5.91 (d, J=1.2 Hz, 1H), 4.97 (bs,
1H), 4.11 (bs, 1H), 4.04-4.02 (m, 2h), 3.75 (s,
3H), 3.65 (d, J=2.1 Hz, 2h), 3.56-3.30 (m, 2h), 3.04
(dd, J_{1}=7.5 Hz, J_{2}=18 Hz,1H), 2.80 (d, J=14.4 Hz, 1H);
2.59 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, 3H),
1.76 (dd, J_{1}=12.0 Hz, J_{2}=15.9 Hz, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.25
(s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{30}H_{34}N_{4}O_{7}: 562.61. Encontrado
(M+H)^{+}: 5633.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 45 (10 mg, 0.0192 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de isovalerilo
(3.98 ml, 0.0192 ml) y piridina (1.55 ml, 0.0192 ml) a 0ºC. La
mezcla de reacción se sometió a agitación durante 1h y después, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl 0.1
N (3 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y el solvente se eliminó bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash(SiO_{2},
Hex: acetato de etilo 1: 2) para obtener 48 (11 mg, 95%) en forma
de un sólido blanco.
Rf:0.12 (Hexano: acetato de etilo 1:2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.50
(s, 1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.02 (t, J=5.4 Hz,
1H), 4.10 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.06 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 4.02 (d, J=
2.7 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.76-3.71 (m, 1H),
3.86-3.28 (m, 3H), 3.04 (dd, J_{1}= 8.1 Hz,
J_{2}= 18.3 Hz,1H), 2.78 (d, J=15.9 Hz, 1H), 2.55 (d, J=18 Hz,
1H), 2.32(s, 6H), 2.26 (s, 3H), 1.98 (s, 3H),
1.84-1.68 (m, 2 h), 1.36 (d, J=7.2 Hz, 2h), 0.69
(d, J=6.6 Hz, 3H), 0.62 (d, J=6.6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{33}H_{40}N_{4}O_{7}: 604.69. Encontrado
(M+H)^{+}: 605.3.
A una solución de 45 (10 mg, 0.0192 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de isovalerilo
(3.98 ml, 0.0192 ml) y piridina (1.55 ml, 0.0192 ml) a 0ºC. Se
sometió la mezcla de reacción a agitación durante 1h y después, la
solución se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl 0.1
N (3 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, Hex:
acetato de etilo 1: 2) para obtener 49 (12.4 mg, 96%) en forma de
un sólido blanco.
Rf: 0.7 (acetato de etilo: metanol 10: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.50
(s, 1H), 5.98 (d, J= 1.5Hz, 1H), 5.91 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.73 (s,
1H), 5.08 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.10 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 4.05 (m,
1H), 4.01 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.65-3.61 (m, 1H),
3.40-3.27(m, 3H), 3.03 (dd, J_{1}= 8.1 Hz,
J_{2}= 18. 6 Hz, 1H), 2.78 (d, J=13.2 Hz, 1H), 2.57 (d, J=18.3
Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.25(s, 3H), 1.99 (s,
3H), 1.79 (dd, J_{1}= 12.0 Hz, J_{2}= 16.5 Hz, 1H),
1.73-1.42 (m, 4H), 1.33-1.18 (m,
10H), 1.03(m, 2 h), 0.87 (t, J= 6.6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{5}ON_{4}O_{7}: 674.83. Encontrado
(M+H)^{+}: 675.5.
A una solución de 45 (14.5 mg, 0.0278 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de
trans-3-trifluorometil cinamoilo
(4.76 ml, 0.0278 mmol) y piridina (2.25 ml, 0.0278 mmol) a 0ºC. Se
sometió la mezcla de reacción a agitación durante 1h y después, se
diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl
0.1 N (3ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, Hex:
acetato de etilo 1: 1) para obtener 50 (18.7 mg, 94%) en forma de
un sólido blanco.
Rf: 0.64 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CH_{3}OD): \delta
7.74-7.55 (m, 4H), 7.23 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 6.34
(s, 1H), 6.12 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 5.96 (d,
J= 0. 9 Hz, 1H), 4.39 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.07-4.05
(m, 1H), 3.81 (bs, 1H), 3.46-3.51 (m, 3H), 3.42 (s,
3H), 3.09 (br d, J= 12.0 Hz, 1H), 2.94-2.85 (m, 2h),
2.74 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.02 (s, 3H),
1.80 (s, 3H), 1.84-1.75 (m, 1H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
168.7, 165.3, 146.5, 144.7, 142.6, 140.6, 138.0, 135.9, 131.0,
130.9, 129.1, 128.6, 125.8, 125.7, 124.5, 124.4, 122.7, 121.2,
117.8, 116.5, 113.0, 112.0, 101.7, 60.4, 59.1, 56.5, 56.4, 55.6,
55.3, 41.8, 40.3, 26.6, 25.1, 20.3, 15.4, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{38}H_{37}F_{3}N_{4}O_{7}: 718.72. Encontrado
(M+H)^{+}: 719.3.
A una solución de 43 (33 mg, 0.0557 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml), se añadieron cloruro de isovalerilo
(6.79 ml, 0.0557 mmol) y piridina (4.5 \mul, 0.0557 mmol) a 0ºC.
Se sometió la mezcla de reacción a agitación durante 1h y después,
se diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl
0.1 N (3 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, Hex:
acetato de etilo 1: 2) para obtener 51 (34 mg, 91%) en forma de un
sólido blanco.
Rf: 0.09 (Hex: acetato de etilo 1: 2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.46
(s, 1H), 6.10 (bs, 1H), 5.99 (d, J= 0.9Hz, 1H), 5.90 (d, J= 0.9 Hz,
1H), 5.30 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.10-4.05 (m, 3H),
3.81 (bs, 1H), 3.74(s, 3H), 3.54 (bs, 1H), (m, 1H),
3.29-3.21 (m, 1H), 3.00 (dd, J_{1}= 8.0 Hz,
J_{2}= 18.0 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.00 (s, 3H),
1.95-1.90 (m, 3H), 0.87 (d, J=6.6 Hz, 6H), 0.76 (d,
J=6.0 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{45}N_{5}O_{8}: 675.77. Encontrado
(M+H)^{+}: 676.3.
A una solución de 43 (33 mg, 0.0557 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml), se añadieron cloruro de
trans-3-trifluorometil cinamoilo
(9.52 \mul, 0.0557 mmol) y piridina (4.5 ml, 0.0557 mmol) a 0ºC.
Se sometió la mezcla de reacción a agitación durante 1h y después,
se diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl
0.1 N (3 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, Hex:
acetato de etilo 1: 2) para obtener 52 (40 mg, 92%) en forma de un
sólido blanco.
Rf: 0.21 (hexano: acetato de etilo 1: 2).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD): \delta
7.74-7.47 (m, 4H), 6.49 (s, 1H), 6.40 (d, J= 15.6
Hz, 1H), 6.00 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.47 (t,
J= 6 Hz, 1H), 4.12-4.09 (m, 3H), 3.93 (bs, 1H),
3.71 (s, 3H), 3.59-3.58 (m, 1H), 3.38 (d, J=7.8 Hz,
1H), 3.29 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}=
18.3 Hz, 1H), 2.79-2.78 (m, 1H), 2.65 (d, J=18.3 Hz,
1H) 2.29 (s, 6H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H),
1.84-1.80 (m, 1H), 0.85-0.84 (m,
3H).
^{13}C RMN(75 MHz, CDCl_{3}): \delta
171.9, 168.8, 164.4, 146.9, 144.6, 143.0, 140.5, 140.5, 139.3,
135.7, 131.1, 131.0, 129.4, 129.1, 126.0, 124.1, 124.0, 122.4,
121.1, 120.7, 120.6, 117.7, 116.9, 112.8, 112.0, 101.6, 60.6, 59.3,
57.1, 56.3, 55.9, 55.2, 49.0, 41.7, 49.9, 26.5, 25.1, 20.2, 18.4,
15.7, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{41}H_{42}F_{3}N_{5}O_{8}: 789.8. Encontrado
(M+H)^{+}: 790.3.
A una solución de 43 (10 mg, 0.0169 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.2 ml) se añadió trifluoroacético anhídrido
(2.38 \mul, 0.0169 mmol) a 23ºC. Se sometió la mezcla de reacción
a agitación durante 5h y después, se diluyó la solución con
CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (3 ml). Se secó la
capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y se eliminó el
solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo por
cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, Hex: acetato de etilo
3: 2) para obtener 53 (10.7 mg, 93%) en forma de un sólido
blanco.
Rf: 0.57 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.45
(s, 1H), 6.00 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.87
(bs, 1H), 5.32 (bs, 1H), 4.12 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 4.08 (d, J= 1.8
Hz, 1H), 3.78-3.56 (m, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.40 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.25 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 3.00 (dd, J_{1}= 8.4 Hz,
J_{2}= 18.0 Hz, 1H), 2.77 (dd, J_{1}= 2.1 Hz, J_{2}= 15.9 Hz,
1H), 2.68 (d, J= 18.6 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s,
3H), 2.00 (s, 3H), 1.75 (dd, J_{1}= 11.4 Hz, J_{2}= 15.9 Hz,
1H), 0.69 (d, J= 6.3 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
170.1, 168.6, 156.0, 147.0, 144.6, 143.0, 140.6, 140.4, 131.0,
116.8, 112.4, 112.1, 101.6, 60.5, 59.0, 57.1, 56.3, 55.6, 55.2,
48.7, 41.6, 39.4, 26.5, 24.9, 20.2, 17.8, 15.4, 9.2.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{33}H_{36}F_{3}N_{5}O_{8}: 687.63. Encontrado
(M+H)^{+}: 688.66.
A una solución de 19 (11 mg, 0.0169 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.2 ml) se añadió trifluoroacético anhídrido
(2.38 ml, 0.0169 mmol) a 23ºC. Se sometió la mezcla de reacción a
agitación durante 5 h y después, se diluyó la solución con
CH_{2}Cl_{2} (5 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (3 ml). Se secó la
capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y se eliminó el
solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo por
cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, Hex: acetato de etilo
3: 2) para obtener 54 (10.7 mg, 93%) en forma de un sólido
blanco.
Rf: 0.6 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7.33
(d, J= 6.3 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.04 (m, 1H), 5.95 (d, J= 1.5 Hz,
1H), 5.84 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.32 (m, 2 h), 5.21 (m, 1H), 4.11 (m,
4H), 3.73 (s, 3H), 3.64 (m, 2 h), 3.51 (m, 1H), 3.37 (d, J=7.8 Hz,
1H), 3.22 (m, 2 h), 3.03 (dd, 1H, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}= 18.3 Hz,
1H), 2.60 (d, J= 18. 3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.08
(s, 3H), 1.86 (dd, J = 12Hz, J_{2}= 16.2 Hz, 1H), 0.82 (d, J= 7.2
Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
170.0, 156.0, 148.4, 147.1, 144.3, 143.0, 138.7, 133.8, 130.5,
117.5, 117.0, 113.5, 112.5, 112.4, 101.1, 74.1, 66.8, 60.4, 59.3,
56.9, 56.6, 56.3, 55.4, 48.7, 41.6, 40.1, 26.2, 25.0, 17.6, 15.4,
9.1.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{39}F_{3}N_{5}O_{7}: 685.69. Encontrado
(M+H)^{+}: 686.3.
A una solución de 54 (100 mg, 0.415 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (4 ml), se añadieron ácido acético (40 ml),
(PPh_{3})_{2}PdCl_{2} (8.4 mg, 0.012 mmol) y
Bu_{3}SnH (157 ml, 0.56 mmol) a 23ºC. Después de someter la
reacción a agitación a esta temperatura durante 2 h la reacción se
vertió a una columna de flash (SiO_{2}, gradiente de Hexano a
hexano: acetato de etilo 2: 1) para obtener 55 (90 mg, 96%) en
forma de un sólido blanco.
Rf: 0.6 (hexano: acetato de etilo 1: 2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7.55
(d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.90 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.82 (d,
J= 1.2 Hz, 1H), 5.37 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.15 (d, J= 2.1 Hz, 1H),
4.04 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.66-3.53 (m,
2 h), 3.37-3.31 (m, 2 h), 3.19-3.15
(d, J= 11.7 Hz, 1H), 3.08-3.00 (m, 2 h), 2.56 (d,
J=18.3 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.91 (dd,
J_{1}=12.0 Hz, J_{2}= 15.6 Hz, 1H), 0.84 (d, J= 6.9 Hz,
3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
170.1, 156.3, 147.3, 144.9, 144.4, 143.3, 136.7, 130.7, 129.3,
117.4, 114.4, 112.1, 107.7, 101.0, 85.8, 60.5, 59.3, 56.5, 56.4,
56.2, 55.2, 48.9, 41.6, 40.9, 25.7, 25.3, 18.0, 15.6, 8.7.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{35}F_{3}N_{5}O_{7}: 645.63. Encontrado
(M+H)^{+}: 646.2.
A una solución de 17 (200 mg, 0.288 ml) en
CH_{2}Cl_{2} (1.44 ml), se añadió ácido trifluoroacético (888
\mul, 11.53 mmol) y se sometió la mezcla de reacción a agitación
durante 4h a 23ºC. La reacción se neutralizó a 0ºC con bicarbonato
de sodio acuoso saturado (60 ml) y se extrajo con acetato de etilo
(2 x 70 ml). Se secaron las capas orgánicas combinadas (sulfato de
sodio) y se concentraron al vacío para obtener 56 (147 mg, 93%) en
forma de un sólido blanco que se utilizó en las subsiguientes
reacciones sin purificación adicional.
Rf: 0.19 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 6.48
(s, 1H), 5.88, d, J= 0.9 Hz, 1H), 5.81 (d, J=0. 9Hz, 1H), 4. 35 (d,
J= 2.4 Hz, 1H), 4.15 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 3.99-3.98
(m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.52-2.96 (m, 7H), 2.68 (d,
J= 18. 3 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.85
(dd, J_{1}= 11.7 Hz, J_{2}= 15.6 Hz, 1H), 0.91 (d, J= 6.6 Hz,
3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CD_{3}OD): \delta
173.2, 149.1, 145.6, 144.9, 138.0, 132.2, 130.6, 121.4, 119.6,
117.4, 114.3, 109.2, 102.5, 82.3, 60.4, 58.4, 58.3, 57.8, 56.6,
50.1, 42.3, 41.6, 27.8, 26.2, 19.5, 15.5, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{35}N_{5}O_{6}: 549.62. Encontrado
(M+H)^{+}: 550.3.
A una solución de 56 (10 mg, 0.018 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.4 ml), se añadió isotiocianato de fenilo (13
\mul, 0.109 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC
durante 1.5 h. Se concentró la mezcla al vacío y se purificó el
residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, gradiente
de hexano a hexano: acetato de etilo 1:1) para obtener 57 (8 mg,
65%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.57 (acetato de etilo: metanol 10:1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 7.88
(bs, 1H), 7.41-7.36 (m, 2 h),
7.27-7.22 (m, 1H), 7.02-7.00 (d, J=
7.8 Hz, 2 h), 6.71 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 6.17 (bs, 1H),
5.93 (d, J=1.2 Hz, 1H), 5.83 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.55 (bs, 1H),
5.20-5.17 (m, 1H), 4.16 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 4.05
(bs, 1H), 4.02 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H),
3.75-3.71 (m, 1H), 3.35 (d, J= 7.8 Hz, 1H),
3.28-3.19 (m, 2 h), 3.12-2.97 (m, 2
h), 2.50 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.21 (s, 3H),
2.15-2.09 (dd, J_{1}= 11.4 Hz, J_{2}= 15.9 Hz,
1H), 1.95 (s, 3H), 0.88 (d, J=6.9 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
178.5, 171.7, 147.2, 145.0, 144.3, 143.3, 137.0, 135.7, 130.6,
130.4, 129.6, 127.5, 124.3, 120.6, 117.7, 117.2, 115.3, 112.1,
108.3, 100.9, 60.9, 59.5, 56.7, 56.5, 56.2, 55.2, 54.1, 41.7, 41.1,
26.3, 25.4, 18.5, 15.8, 9.0.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{36}H_{40}N_{6}O_{6}S: 684.81. Encontrado
(M+H)^{+}: 685.3.
A una solución de 57 (45 mg, 0.065 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0. 5 ml), se añadieron cloruro de acetilo (4.67
ml, 0.065 mmol) y piridina (5.3 \mul, 0.065 ml) a 0ºC. Se sometió
la mezcla de reacción a agitación durante 3h y después, se diluyó
la solución con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (5
ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y
se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó el
residuo por cromatografía en columna de flash
(RP-18, CH_{3}CN: H_{2}O 40: 60) para obtener 58
(14 mg, 28%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.34 (CH_{3}CN: H_{2}O 7: 15).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 11.90
(d, J= 6.6 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 3H),
7.18-7.15 (m, 2 h), 6.58 (s, 1H), 6.00 (d, J= 1.2
Hz, 1H), 5.89 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.37 (t, J= 4.8 Hz,
1H), 4.48 (m, 1H), 4.23 (bs, 1H), 4.07 (bs, 2h),
3.85-3.75 (m, 1H), 3.70 (s, 3H),
3.46-3.41 (m, 2h), 3.24-3.20 (m,
1H), 3.00-2.95 (m, 1H), 2.87-2.75
(m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, 3H),
1.85 (dd, J= 11.4 Hz, J=15.6 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 0.82 (d, J= 6.0
Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
182.6, 174.3, 171.0, 146.6, 144.6, 142.7, 142.3, 140.7, 140.2,
131.3, 129.8, 129.3, 128.9, 121.5, 120.4, 117.3, 116.6, 112.8,
112.0, 111.3, 101.5, 60.5, 59.0, 57.6, 56.2, 55.9, 55.3, 55.1, 41.6,
39.4, 27.8, 26.5, 24.8, 20.2, 17.1, 15.5, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{44}N_{6}O_{8}S: 768.88. Encontrado
(M+H)^{+}: 769.2.
A una solución de 57 (130 mg, 0.189 mmol) en
dioxano (1 ml), se añadió HCl 5.3 N/dioxano (1.87 ml) y se sometió
la reacción a agitación a 23ºC durante 4 h. Después, se añadieron
CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y H_{2}O (10 ml) a esta reacción y se
decantó la capa orgánica. Se basificó la fase acuosa con
bicarbonato de sodio saturado (60 ml) (pH = 8) a 0ºC y después, se
extrajo con acetato de etilo (2x50 ml). Se secaron los extractos
orgánicos combinados (sulfato de sodio), y se concentró al vacío
para obtener 59 (63 mg, 70%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.15 (acetato de etilo: metanol 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.67
(s, 1H), 5.99 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 5.91(d, J= 1.2 Hz, 1H),
5.10 (bs, 1H), 4.32 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.25 (dd, J_{1}= 3.6 Hz,
J_{2}= 9.3 Hz, 1H), 3.7 (s, 3H), 3.71-3.64 (m,
2h), 3.50 (dd, J_{1}= 2.4 Hz, J_{2}=15.9 Hz, 1H),
3.42-3.37 (m, 2h), 3.16 (dd, J_{1}=3.6 Hz,
J_{2}= 12.9 Hz, 1H), 2.57 (dd, J_{1}= 9.3 Hz, J_{2}= 12.9 Hz,
1H), 2.27 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.91 (dd, J_{1}= 12.0 Hz,
J_{2}= 15.9 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{26}H_{30}N_{4}O_{6}: 478.5. Encontrado
(M+H)^{+}: 479.3.
A una solución de 43 (20 mg, 0.0338 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de cinamoilo (5.63
mg, 0.0338 mmol) y piridina (2.73 ml, 0.0338 mmol) a 0ºC. Se
sometió la mezcla de reacción a agitación durante 1 h y después, se
diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl
0.1 N (5 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, EtOAc:
MeOH 20: 1) para obtener 60 (22 mg, 90%) en forma de un sólido
blanco.
Rf: 0.56 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 7.51 (s, 1H),
7.50-7.47 (m, 2H), 7.36-7.35 (m,
2H), 6.43 (s, 1H), 6.36 (brd, J= 15.9 Hz, 2H), 6.01 (d, J= 1.5 Hz,
1H), 5.90 (brd, J= 1.5 Hz, 2H), 5.42 (t, J= 6.0 Hz 1H),
4.12-4.07 (m, 3H), 3.96-3.95 (m,
1H), 3.73 (bs, 3H), 3.58 (bs, 2H), 3.39 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 3.25 (d,
J= 11.7 Hz, 1H), 3.0 (dd, J_{1}= 7.5 Hz, J_{2}= 17.7 Hz, 1H),
2.78 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 2.67 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 2.29 (s, 6H),
2.23 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.82 (dd, J_{1}= 11.4Hz, J_{2}=
15.6 Hz, 1H), 0.83 (d, J=6.0 Hz, 3H).
^{13}C RMN (75 MHz, CDCl_{3}): \delta
172.0, 165.0, 146.9, 144.6, 143.1, 141.0, 140.5, 134.8, 131.0,
129.7, 129.1, 128.8, 127.8, 125.5, 123.8, 123.0, 121.1, 120.5,
117.7, 116.9, 112.8, 112.0, 101.9, 60.6, 59.2, 57.1, 56.4, 55.9,
55.3, 48.8, 41.7, 40.0, 26.5, 25.1, 20.3, 18.5, 15.7, 9.3.
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{40}H_{43}N_{5}OS: 721.8. Encontrado (M+H)^{+}:
722.3.
A una solución de 45 (19 mg, 0.0364 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de
heptafluorobutirilo (5.44 \mul, 0.0364 mmol) y piridina (2.95 ml,
0.0364 mmol) a 0ºC. Se sometió la mezcla de reacción a agitación
durante 1 h y después, se diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2}
(10 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (5 ml). Se secó la capa orgánica
sobre sulfato de sodio, se filtró, y se eliminó el solvente bajo
presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 20: 1) para obtener 61
(11.7 mg, 45%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.76 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.46
(s, 1H), 6.12 (bs, 1H), 5.98 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.93 (d, J= 1.2
Hz, 1H), 5.72 (bs, 1H), 4.13-4.11 (m, 2H), 4.0 (d,
J= 2.4 Hz, 1H), 3.98-3. 96 (m, 1H), 3.73 (s, 3H),
3.39 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 3.39-3.28 (m, 2H), 3.09
(dd, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}= 18.0 Hz, 1H), 2.80 (d, J= 16.2 Hz,
1H), 2.46 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.32 (s, 6H), 2.21 (s, 3H), 1.99 (s,
3H), 1.80 (dd, J_{1}= 12.0 Hz, J_{2}= 16.2 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{31}F_{7}N_{4}O_{7}: 716.6. Encontrado
(M+H)^{+}: 717.2.
A una solución de 43 (24 mg, 0.04 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de butilrilo (4.15
\mul, 0.04 mmol) y piridina (3.28 \mul, 0.04 mmol) a 0ºC. Se
sometió la mezcla de reacción a agitación durante l h y después, se
diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl
0.1 N (5 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, EtOAc:
MeOH 20: 1) para obtener 62 (24 mg, 90%) en forma de un sólido
blanco.
Rf: 0.35 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.47
(s, 1H), 6.10 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 6.0 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 1.5 Hz, 1H), 5.86 (bs, 1H), 5.31 (d, J= 6.9 Hz, 1H),
4.11-4.06 (m, 3H),
3.85-3.81(m, 1H), 3.75 (s, 3H),
3.59-3.53 (m, 2H), 3.38 (d, J= 7,5 Hz, 1H),
3.27-3.22 (m, 1H), 3.0 (dd, J_{1}=7.8 Hz, J_{2}=
17.4 Hz, 1H), 2.79 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 2.63 (d, J= 17.7 Hz, 1H),
2.3 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.80 (dd, J_{1}= 12.0 Hz, J_{2}= 15.9
Hz, 1H), 1.58 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 0.89 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.76 (d,
J= 6.6 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{35}H_{43}N_{5}O_{8}: 661.64. Encontrado
(M+H)^{+}: 662.3.
A una solución de 43 (19 mg, 0.0364 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de cianomaiolo
(2.95 \mul, 0.0364 mmol) a 0ºC. Se sometió la mezcla de reacción
a agitación durante 1 h y después, se diluyó la solución con
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (5 ml). Se secó la
capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y se eliminó el
solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo se purificó
por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 20:
1) para obtener 63 (20.1 mg, 85%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.65 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.39-7.29 (m, 5H), 6.42, (s, 1H), 6.01 (d, J= 1.5
Hz, 1H), 5.92 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.24 (t, J= 6.8 Hz,
1H), 4.12-4.08 (m, 3H), 3.66-3.64
(m, 2H), 3.58 (bs, 3H), 3.36 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 3.29 (d, J= 12.0
Hz, 1H), 2.98 (dd, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}= 18 Hz, 1H), 2.33 (s,
6H), 2.29 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.84 (dd, J_{1}= 12.0 Hz,
J_{2}= 15.9 Hz,1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{37}H_{38}N_{4}O_{7}: 650.72.
Encontrado(M+H)^{+}: 651.2.
\vskip1.000000\baselineskip
A solución de 43 (20 mg, 0.0338 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de
3-cloropropionilo (3.22 \mul, 0.0338 mmol) y
piridina (2.73 \mul, 0.0338 mmol) a 0ºC. Se sometió la mezcla de
reacción a agitación durante 1h y después, se diluyó la solución
con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl 0.1 N (5 ml). Se
secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró, y se
eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó el residuo
por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 20:
1) para obtener 64 (20.5 mg, 89%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.32 (EtOAc: Hexano 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) 6.48 (s, 3H),
6.28 (m, 1H), 5.99 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.91 (d, J= 1.2 Hz, 1H),
5.86 (bs, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.08-4.07 (m, 3H),
3.75 (s, 3H), 3.72-3.53 (m, 5H), 3.39 (d, J= 8.1 Hz,
1H), 3.24 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 3.00 (dd, J_{1}= 8.1 Hz, J_{2}=
18.0 Hz, 1H), 2.79 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 2.50 (t, J= 6.3 Hz, 2H),
2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.79 (dd,
J_{1}= 12.3 Hz, J_{2}= 14.8 Hz, 1H), 0.81 (d, J= 6.3 Hz,
3H).
Una solución de 43 (19 mg, 0.0364 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (0.3 ml), se añadieron cloruro de butirilo (3.78
\mul, 0.0364 mmol) y piridina (2.95 \mul, 0.0364 mmol) a 0ºC.
Se sometió a agitación la mezcla de reacción durante 1h y después,
se diluyó la solución con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con HCl
0.1 N (5 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se
filtró, y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se purificó
el residuo por cromatografía en columna de flash (SiO_{2}, EtOAc:
MeOH 20: 1) para obtener 64 (19 mg, 87%) en forma de un sólido
blanco.
Rf: 0.60 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) 6.50 (s, 1H),
5.98 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H),
5.01 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 4.10-4.09 (m, 1H), 4.06
(d, J= 2.1 Hz, 1H), 4.03-4.02 (m, 1H), 3.76 (s, 3H),
3.67-3.60 (m, 1H), 3.42-3.35 (m,
2H), 3.29 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 3.02 (dd, J_{1}= 7.8 Hz, J_{2}=
17.7 Hz, 1H), 2.79 (d, J= 14.1 Hz, 1H), Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31
(s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.78 (dd, J_{1}= 12.0 Hz, J_{2}= 15.9
Hz, 1H), 1.63 (s, 3H), 1.531.46 (m, 2H), 1.28-1.16
(m, 2H), 0.68 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{38}N_{4}O_{7}: 590.67. Encontrado
(M+H)^{+}: 591.2.
A una solución de 50 (31.7 mg, 0.044 mmol) en
CH_{3}CN/H_{2}O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (225 mg,
1.32 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 17
h. Después se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuosa
saturada (10 ml) a 0ºC y se sometió la mezcla a agitación durante
15 minutos, se filtró sobre celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2}
(20 ml). Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se
concentró al vacío. Se purificó el residuo por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 5: 1) para obtener 66 (16
mg, 51%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.26 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.66-7.42 (m, 4H), 7.20 (bs, 1H), 6.44 (s, 1H),
5.97 (b, J= 1.2 Hz, 1H), 5.90 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.76 (bs, 1H),
5.28 (bs, 1H), 4.54 (bs, 1H), 4.43 (bs, 1H), 4.00 (bs, 1H),
3.68-3.57 (m, 4H), 3.47 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 3.40
(d, J= 11.7 Hz, 1H), 3.17 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 2.92 (dd, J_{1}=
8.1 Hz, J_{2}= 17.7 Hz, 1H), 2.74 (d, J= 17.1 Hz, 1H), 2.48 (d, J=
18.6 Hz, 1H), 2.32 (s, 6H), 2.28 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.76 (dd,
J_{1}= 12.0 Hz, J_{2}= 16.2 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{37}H_{38}F_{3}N_{3}O_{8}: 709. Encontrado
(M^{+}-17): 692.3.
A una solución de 53 (57 mg, 0.0828 mmol) en
CH_{3}CN/H_{2}O (1.5 mL/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (650 mg,
3.81 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 24
h. Después, se añadió salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuosa
saturada (10 ml) a 0ºC y se sometió la mezcla a agitación durante
15 minutos, se filtró sobre celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2}
(20 ml). Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se
concentró al vacío. Se purificó el residuo por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 5: 1) para obtener 67 (28
mg, 50%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.28 (EtOAc: MeOH 10: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.47
(s, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 5.35 (bs, 1H), 4.51 (bs, 1H),
4.41 (bs, 1H), 4.12-4.05 (m, 1H), 4.00 (d, J= 2.7
Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.64 (bs, 1H), 3.46 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 3.34
(d, J= 11.4 Hz, 1H), 3.18 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 2.95 (dd, J_{1}=
8.4 Hz, J_{2}= 18.3 Hz, 1 H), 2.70 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 2.48 (d,
J= 17.7 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.98 (s,
3H), 1.68 (dd, J_{1}= 12 Hz, J_{2}= 15.6 Hz, 1H), 0.86 (d, J=
6.3 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{32}H_{37}F_{3}N_{4}O_{9}: 678.66. Encontrado
(M^{+}-17): 661.2.
A una solución de 48 (32 mg, 0.0529 mmol) en
CH_{3}CN/H_{2}O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (270 mg,
1.58 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 24
h. Después, se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso
saturado (10 ml) 0ºC y se sometió la mezcla a agitación durante 15
minutos, se filtró sobre celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20
ml). Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se
concentró al vacío. Se purificó el residuo por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 5: 1) para obtener 68 (18
mg, 56%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.40 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.50
(s, 1H), 5.95 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.88 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 5.23 (d,
J= 6.9 Hz,1H), 4.45 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.01 (d, J=
2.4 Hz, 1H), 3.78 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.41-3.37
(m, 1H), 3.17-3.15 (m, 1H), 2.96 (dd, J_{1}= 7.8
Hz,= 18.0Hz, 1H), 2.70 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 2.40 (d, J= 18.0 Hz,
1H), 2.30 (s, 6H), 2.27 (s, 3H), 1.761.65 (m, 1H),
1.35-1.25 (m, 2H), 0.89-0.82 (m,
1H), 0.69 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.58 (d, J= 6.6 Hz, 3H).
A una solución de 51 (27 mg, 0.04 mmol) en
CH_{3}CN/H_{2}O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (204 mg,
1.19 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 24
h. Después, se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso
saturado (10 ml) a 0ºC y se sometió la mezcla a agitación durante 15
minutos, se filtró sobre celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20
ml). Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se
concentró al vacío. Se purificó el residuo por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 5: 1) para obtener 69 (10
mg, 38%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.38 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN(300 MHz, CDCl_{3}): \delta
6.48 s, 1H), 6.16 (bs, 1H), 5.98 (d, J= 1.5 Hz,1H), 5.89 (d, J= 1.5
Hz, 1H), 5.33 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.40 (m, 1H),
4.11-4.09 (m, 1H), 4.00 (d, J= 2.6Hz, 1H), 3.78 (s,
3H), 3.41-3.32 (m, 3H), 3.18 (d, J= 8.4 Hz, 1H),
2.94 (dd, J_{1}= 8.4 Hz, J_{2}= 18.3 Hz,1H), 2.70 (d, J= 14.4
Hz, 1H), 4.45 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.27
(s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.00-1.86 (m, 3H), 1.73 (m,
1H), 0.87 (d, J= 6.3 Hz, 6H).
A una solución de 63 (15 mg, 0.023 mmol) en
CH_{3}CN/H_{2}O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (118 mg,
0.691 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC durante 24
h. Después, se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} acuoso
saturado (10 ml) 0ºC y se sometió la mezcla a agitación durante 15
minutos, se filtró sobre celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20
ml). Se decantó la solución y se secó la capa orgánica y se
concentró al vacío. Se purificó el residuo por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, EtOAc: MeOH 5: 1) para obtener 70
(20.1 mg, 85%) en forma de un sólido blanco.
Rf: 0.43 (EtOAc: MeOH 5: 1).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta
7.38-7.28 (m, 5H), 6.48 (s, 1H), 5.98 (d, J=1.5 Hz,
1H), 5.91 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.75 (bs, 1H), 5.38 (brd, 1H), 5.30
(bs, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.02 (d, J=2.7 Hz, 1H),
3.78-3.65 (m, 5H), 3.46-3.40 (m,
2H), 3.17 (d, J=7.8 Hz, 1H), 2.94 (dd, J_{1}=7.8 Hz, J_{2}=17.7
Hz, 1H), 2.73 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.45 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.31 (s,
6H), 2.28 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.77 (dd, J_{1}=12.0 Hz,
J_{2}=15.3 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 65 (25 mg, 0.042 mmol) en
CH_{3}CN/H_{2}O (1.5 ml/0.5 ml), se añadió AgNO_{3} (215.56
mg, 1.269 mmol) y se sometió la reacción a agitación a 23ºC durante
24 h. Después, se añadieron salmuera (10 ml) y NaHCO_{3} (10 ml)
a 0ºC y se sometió la mezcla a agitación durante 15 minutos, se
filtró sobre celite y se lavó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml). Se
decantó la solución y se secó la capa orgánica y se concentró al
vacío. Se purificó el residuo por cromatografía en columna de flash
(SiO_{2}, EtOAc: MeOH 5: 2) para obtener 71 (16 mg, 65%) en forma
de un sólido blanco.
Rf: 0.0.5 (EtOAc: MeOH 5: 2).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.50
(s, 1H), 5.95 (d, J=1.5 Hz, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.19 (bs, 1H), 4.45
(d, J=3.3 Hz, 1H), 4.37 (bs, 1H), 4.11 (brd, J=4.8 Hz, 1H), 4.01
(d, J=2.1 Hz, 1H), 3.76 (s, 1H), 3.71-3.69 (m, 1H),
3.49-3.35 (m, 1H), 3.24 (d, J=13.5 Hz, 1H), 3.15
(d, J=9.3 Hz, 1H), 2.95 (dd, J_{1}=8.1 Hz, J_{2}=17.7 Hz, 1H),
2.70 (d, J=15.6 Hz, 1H), 2.40 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H),
2.29 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.75-1.66
(m, 1H), 1.52-1.17 (m, 2H), 0.66 (t, J=7.2 Hz,
3H).
Se inoculó medio de siembra YMP3 que contenía
glucosa al 1%; extractos de ternera al 0.25%;
bacto-peptona al 0.5%; NaCl al 0.25%; CaCO_{3} al
0.8% con un 0.1% de un stock vegetativo congelado de
microorganismos, cepa A2-2 de Pseudomonas
fluorescens, y se incubó en un agitador rotativo (250 rpm) a 27ºC.
Después de 30 h de incubación, se añadió el cultivo de siembra a un
fermentador en un recipiente agitado con una producción de medio
compuesto por dextrosa al 2%; manitol al 4%, levadura de cerveza
seca al 2% (VitalevorX Biolux, Belgium);
(NH_{4})_{2}SO_{4} al 1%; K_{2}HPO_{4} al 0.04%;
KCl al 0.8%; FeCl_{3}al 0.001%; L-Tyr al 0.1%;
CO_{3}Caal 0.8%; PPG-2000 al 0.05%; silicona
anti-espuma al 0.2% (ASSAF-100,
RHODIA UK). La esterilización se llevó a cabo a 122ºC a los 30
minutos. El volumen inoculado era del 2% (v/v). La temperatura era
de 27ºC (0 a 16 h) y de 24ºC de las 16h hasta el final del proceso
(41 horas). La presión de oxígeno disuelto era superior al 25%. Se
controló el pH a 6.0 con ácido sulfúrico concentrado desde las 28
horas hasta el final del proceso. La sobrepresión era de 0.5 bar.
Se añadió manitol al 1% o sorbitol desde las 16 h hasta el final
del proceso (durante 2 días) y al 2% durante los tres días del
proceso de fermentación.
Después de 41 ó 64 horas, se debe extraer el
caldo de fermentación para recuperar la B safracina o tratar el
caldo clarificado con KCN para recuperar la B-ciano
safracina.
Una clarificación o filtración del caldo de
fermentación a pH 6 elimina los sólidos. El caldo clarificado se
ajustó a pH 9.5 con hidróxido de sodio diluido y se extrajo dos
veces con acetato de etilo 2:1 (v/v), cloruro de metileno o acetato
de butilo. La extracción se llevó a cabo en un recipiente agitado
durante 20', la temperatura de la mezcla se mantuvo a de 8 a
10ºC.
Se separaron las dos fases mediante una
centrifugadora líquido-líquido. Se secó la fase
orgánica con sulfato de sodio anhídrido o congelado y después se
filtró para eliminar el hielo. Se evaporó esta fase orgánica (capa
de acetato de etilo) hasta la obtención de un extracto de aceite
crudo.
Una clarificación o filtración del caldo de
fermentación a pH 6 elimina los sólidos. El caldo clarificado se
ajustó a pH 3.9 con ácido acético concentrado. Se añadieron 0.5
gramos por litro de KCN al caldo clarificado y se incubó a 20ºC
durante 1 hora con agitación. Después, se bajó la temperatura a 15ºC
y se ajustó el pH a 9.5 con hidróxido de sodio diluido y se extrajo
con acetato de etilo 2:1.5 (v/v). Se llevó a cabo la extracción en
un recipiente agitado durante 20 minutos, se mantuvo la temperatura
de la mezcla de 8 a 10ºC. Se separaron las dos fases mediante una
centrifigadora líquido-líquido. Se secó la fase
orgánica con sulfato de sodio anhídrido. Se evaporó esta fase
orgánica (capa de acetato de etilo) hasta obtener un extracto de
aceite crudo. Se purificó este extracto por cromatografía en
columna de flash (SiO_{2}, gradiente 20: 1 a 10: a 5: 1 acetato
de etilo: metanol) para obtener cuantitativamente el compuesto 2 en
forma de un sólido amarillo brillante.
Rf: 0.55 (acetato de etilo: metanol 5: 1);
t_{R}= 19.9 minutos [HPLC, Delta Pack C4, 5 \mum, 300 A,150x3
mm, \lambda=215 nm, flujo= 0.7 ml/min, temp=50ºC, grad.:
CH_{3}CN-aq. NaOAc (10mM) 85%-70% (20')];
^{1}H RMN (300 Mhz, CDCl_{3}): \delta 6.54
(dd, J = 4.4Hz, J_{2}=8. 4Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 4.12 (d, J= 2.4
Hz, 1H), 4.04 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.87 (bs, 1H), 3.65
(ddd, J_{1}= 1.5 Hz, J_{2}= 8.7 Hz, J_{3}= 9.9 Hz, 1H), 3.35
(br. D, J = 8.4 Hz, 1H), 3.15-2.96 (m, 4H), 2.92 (q,
J=7.2 Hz, 1H), 2.47 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.18 (s, 3H)
1.83 (s, 3H), 1.64 (ddd, J_{1}= 2.7 Hz, J_{2}= 11.1 Hz,
J_{3}= 14.1 Hz, 1H), 0.79 (d, J= 7.2 Hz, 3H);
^{13}C RMN (75 Mhz, CDCl_{3}): \delta 186.0
(q), 175.9 (q), 156.2 (q), 146.8 (q), 142.8 (q), 140.7 (q), 136.6
(q), 130.5 (q), 128.8 (q), 127.0 (q), 120.5 (s), 117.4 (q), 116.5
(q), 60.8 (t), 60.4 (s), 58.7 (t), 56.2 (s),55.7 (s), 54.8 (s),
54.8 (s), 54.4 (s), 50.0 (s), 41.6 (t), 39.8 (d), 25.2 (d), 24.4
(d), 21.2 (t), 15.5 (t), 8.4 (t).
ESI-MS m/z: Calculado para
C_{29}H_{35}N_{5}O_{6}: 549.6. Encontrado
(M+Na)^{+}: 572.3.
Se vertió un medio (50 l) compuesto de dextrosa
(2%), manitol (4%), levadura de cerveza seca (2%), sulfato de
amonio (1%), fosfato de potasio secundario (0.04%), cloruro de
potasio (0.8%), cloruro de hierro (III) 6-hidratado
(0.001%), L-tirosina (0.1%), carbonato de calcio
(0.8%), poli-(propilenglicol) 2000 (0.05%) y ASSAF 1000
anti-espuma (0.2%) a un recipiente fermentador con
75 l de capacidad total y, después de la esterilización, se inoculó
con un cultivo de siembra (2%) de cepa A2-2 (FERM
BP-14) y se llevó a cabo el cultivo aireado bajo
agitación a de 27ºC a 24ºC durante 64 horas (aireación de 75 l por
minuto y agitación de 350 a 500 rpm). Se controló el pH mediante
alimentación automática del ácido sulfúrico diluido de las 27 horas
hasta el final del proceso. Se añadió manitol al 2% de las 16 horas
hasta el final del proceso. El medio de cultivo (45 l) obtenido,
después de la eliminación de las células por centrifugación, se
ajustó a pH 9.5 con hidróxido de sodio diluido, se extrajo con 25
litros de acetato de etilo dos veces. Se llevó a cabo la agitación
de la mezcla en un recipiente agitado a 8ºC durante 20 minutos. Se
separaron las dos fases mediante una centrifugadora
líquido-líquido. Las fases orgánicas se congelaron
a -20ºC y se filtraron para eliminar el hielo y se evaporaron hasta
la obtención de 40 g de un extracto de aceite oscuro. Después de la
introducción del grupo cianida y de la purificación, se obtuvieron
3.0 gramos de B-ciano safracina.
Se vertió un medio (50 l) compuesto de dextrosa
(2%), manitol (4%), levadura de cerveza seca (2%), sulfato de
amonio (1%), fosfato de potasio secundario (0.02%), cloruro de
potasio (0.2%), cloruro de hierro (III) 6-hidratado
(0.001%), L-tirosina (0.1%), carbonato de calcio
(0.8%), poli-(propilenglicol) 2000 (0.05%) y ASSAF 1000
anti-espuma (0.2%) a un recipiente fermentador con
75 l de capacidad total y, después de la esterilización, se inoculó
con cultivo de siembra (2%) de cepa A2-2 (FERM
BP-14) y se llevó a cabo el cultivo aireado bajo
agitación a de 27ºC a 24ºC durante 41 horas (aireación de 75 l por
minuto y agitación de 350 a 500 rpm). Se controló el pH mediante la
alimentación automática de ácido sulfúrico diluido desde las 28
horas hasta el final del proceso.
Se añadió manitol al 1% desde las 16 horas hasta
el final del proceso. El medio de cultivo (45 l) obtenido, después
de la eliminación de las células por centrifugación, se ajustó a pH
3.9 con 200 ml de ácido acético concentrado. Se añadieron 25 gramos
de cianido de potasio al 97% y después de 1 hora de agitación a
20ºC, se ajustó el pH a 9.5 con 1500 ml de una solución de hidróxido
de sodio al 10%. Después, se extrajo con 35 litros de acetato de
etilo. La mezcla se llevó a cabo en un recipiente agitado a 8ºC
durante 20 minutos. Se separaron las dos fases mediante una
centrifugadora líquido-líquido. La fase orgánica se
secó mediante sulfato de sodio anhídrido y se evaporó hasta la
obtención de 60 g un extracto de aceite oscuro crudo.
Después de la cromatografía, se obtuvieron 4.9
gramos de B-ciano safracina.
European Patent 309,477.
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Claims (53)
1. El uso en la síntesis de un compuesto
21-Nuc con una estructura de fórmula (XIV) como
material de partida.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
donde al menos un anillo A o E es
quinólico y el grupo Nuc a la posición 21 es un grupo que se puede
transformar mediante un desplazamiento nucleofílico a un grupo
21-hidróxido, el compuesto 21-Nuc es
un compuesto 21-nucleófilo de origen natural con la
siguiente fórmula, o el compuesto 21-Nuc es un
derivado de 21-Nuc de un compuesto de origen natura
con la siguiente
fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
o
o
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
o
donde R^{21} es -H en safracina A
y -OH en safracina
B;
o
2. Un método para preparar un compuesto de
fórmula (XVIIb):
donde:
R^{1} es un grupo aminometileno opcionalmente
protegido o derivatizado, un grupo hidroximetileno derivatizado u
opcionalmente protegido; y R^{4} es -H;
o
R^{1} y R^{4} juntos forman un grupo de
fórmula (IV), (V) (VI) o (VII):
R^{5} es -H o -OH;
R^{7} es -OCH_{3} y R^{8} es -OH o R^{7}
y R^{8} juntos forman un grupo
-O-CH_{2}-O;
R^{12} es -H, -CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3};
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} juntos forman un grupo aceto;
R^{15} es -H o -OH;
R^{18} es -H o -OH;
R^{21} es -H, -OH o -CN;
y derivados;
de un compuesto 21-ciano de
fórmula (XVIb):
donde:
R^{1} es un grupo amidometileno o un grupo
aciloximetileno;
R^{5} y R^{8} se seleccionan de forma
independiente de -H, -OH o -OCOCH_{2}OH, o R^{5} y R^{8} son
ambos aceto y el anillo A es un anillo
p-benzoquinona;
R^{12} es -H, -CH_{3} o -CH_{2}CH_{3}
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} juntos forman un grupo aceto; y
R^{15} y R^{18} se seleccionan
independientemente de -H o -OH, o R^{15} y R^{18} son ambos
aceto y el anillo E es un anillo p-benzoquinona;
siempre y cuando al menos uno de los anillos A o
E sea un anillo p-benzoquinona;
las reacciones del método que comprenda si se
requiere:
- a)
- la conversión del sistema quinona para el anillo E al sistema fenol
- b)
- la conversión del sistema quinona para el anillo A al sistema fenol;
- c)
- la conversión del sistema fenol para el anillo A a un anillo metilendioxifenol;
- d)
- la formación de un anillo espiro puente de fórmula (IV), (VI) o (VII) a través de la posición 1 y la posición 4 en el anillo B; y
- e)
- la derivatización;
para obtener el compuesto deseado
de fórmula
(XVIIb).
3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2,
en que el paso de convertir un sistema quinona para el anillo E a
un sistema fenol se efectúa mediante reducción, utilizando
hidrógeno con un catalizador de carbono-paladio.
4. Un método de acuerdo con la reivindicación 2 ó
3, en que el paso b) de convertir un sistema quinona para el anillo
A a un sistema fenol se efectúa mediante reducción utilizando
hidrógeno con un catalizador carbono-paladio.
5. Un método de acuerdo con la reivindicación 4,
que consista al menos de los pasos b), c) y e).
6. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 5, en que R^{1} y R^{4} juntos
forman un grupo de fórmula (IV), (V), (VI) o (VII), y el paso d) de
formación de un sistema de anillo espiro unido a través de la
posición 1 y la posición 4 en el anillo B se lleve a cabo mediante
la sustitución en la primera posición con un reactivo formador de
puentes, formando un metido quinona exendo en la posición 4, y
reaccionando el metide con el sustituyente 1 para formar es sistema
anillo espiro con un puente.
7. Un método de acuerdo con la reivindicación 6,
en que el reactivo formador de puentes presente la fórmula
(XIX)
donde Fu indica un grupo funcional
protegido, Prot^{3} es un grupo protector, y la línea discontinua
indica un enlace doble
opcional.
8. Un método de acuerdo con la reivindicación 7,
en que Fu es un grupo -NHProt^{4a} o OProt^{4b}, donde
Prot^{4a} es un grupo protector amino, y Prot^{4b} es un grupo
protector hidróxido.
9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8,
en que el reactivo formador de puentes es Int-29 o
Int-37:
10. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 6 a la 9, en que la formación del metide
incluye la introducción de un grupo hidróxido en la posición 10 y
en la unión entre el anillo A y B para obtener una estructura
parcial de fórmula (XX):
en que el grupo R'' se selecciona
para la formación del grupo deseado de fórmula (IV), (V), (VI) o
(VII).
11. Un método de acuerdo con la reivindicación
10, en que la introducción de un grupo hidróxido en la posición 10
en la unión entre el anillo A y B da como resultado una estructura
parcial de fórmula (XXI):
en que el grupo R'' es tal y como
se
define.
12. Un método de acuerdo con la reivindicación 10
ó 11, en que el grupo R'' es
-CHFu-CH_{2}-SProt^{3}, donde Fu
es un grupo funcional protegido y Prot^{3} es un grupo protector
tiol.
13. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 12, en que el paso e) de
derivatización implica acilación.
14. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 13, en que el compuesto
21-ciano de fórmula (XVIb) se obtiene mediante la
introducción de un grupo 21-ciano a la saframicina
A, saframicina B, saframicina C, saframicina G, saframicina H,
saframicina S, saframicina Y_{3}, saframicina Yd_{1},
saframicina Ad_{1}, saframicina Yd_{2}, saframicina AH_{2},
saframicina AH_{2}Ac, saframicina AH_{1}, saframicina
AH_{1}Ac, saframicina AR_{3}, renieramicina A, renieramicina B,
renieramicina C, renieramicina D, renieramicina E, renieramicina F,
xestomicina, saframicina D, saframicina F, saframicina
Mx-1, saframicina Mx-2, saframicina
A, o saframicina B, o es saframicina R.
15. Un método de acuerdo con la reivindicación
14, en que el compuesto 21-ciano de fórmula (XVIIb)
es cianosaframicina B, el compuesto (2) de fórmula:
16. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 15, en que R^{5} en el compuesto de
fórmula (XVIIb) es un alcanoilóxido de 1a 5 átomos de carbono.
17. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 16 en que R^{5} es acetilóxido.
18. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 17, en que R^{12} es -CH_{3}.
19. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 18, en que R^{14a} y R^{14b} en
el compuesto de fórmula (XVIIb) son hidrógeno.
20. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 19, en que R^{15} en el compuesto
de fórmula (XVIIb) es hidrógeno.
21. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 20, en que R^{18} en el compuesto
de fórmula (XVIIb) es un hidróxido.
22. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 21, en que R^{21} en el compuesto
de fórmula (XVIIb) es -OH o -CN.
23. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 22, en que R^{7} y R^{8} en el
compuesto de fórmula (XVIIb) juntos forman un grupo
-O-CH_{2}-O-.
24. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 23, en que R^{1} y R^{4} en el
compuesto de fórmula (XVIIb) forman juntos un grupo de fórmula
(IV), (V), (VI) o (VII):
25. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 24, en que R^{1} en el compuesto de
fórmula (XVIIb) es un grupo aminometileno opcionalmente protegido o
derivatizado, un grupo hidroximetileno opcionalmente protegido o
derivatizado; y R^{4} es -H.
26. Un método de acuerdo con la reivindicación
25, en que R^{1} en el compuesto de fórmula (XVIIb) es un grupo
-CH_{2}NH_{2} o -CH_{2}-NH-aa,
donde aa es un grupo aminoácido acilo.
27. Un método de acuerdo con la reivindicación
26, en que el compuesto de fórmula (XVIIb) es un derivado
N-acilo del grupo R^{1} en -CH_{2}NH_{2} o
-CH_{2}-NH-aa.
28. Un método de acuerdo con la reivindicación
16, en que R^{1} en el compuesto de fórmula (XVIIb) es un
derivado N-acilo donde el grupo acilo es de fórmula
-CO-R^{a}, donde R^{a} es un alquilo, alcóxido,
alquileno, arilalquilo, arilalquileno, aminoácido acilo, o
heterocíclolo; cada uno opcionalmente sustituido por halo, ciano,
nitro, carboxialquilo, alcóxido, arilo, arilóxido, heterociclilo,
heterociclilóxido, alquilo, amino o amino sustituido; o el grupo
acilo es aa.
29. Un método de acuerdo con las reivindicación
26, 27, 28 en que uno o más grupos aa están presentes y es alanilo,
arginilo, aspartilo, asparagilo, cistilo, glutamilo, glutaminilo,
glicilo, histidilo, hidroxiprolilo, isoleucilo, leucilo, lisilo,
metionilo, fenilalanilo, prolilo, serilo, treonilo, tironilo,
triptofilo, tirosilo, valilo, u otro grupo aminoácido acilo.
30. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 29, en que en cualquier reacción uno
o más grupos sustituyentes están protegidos por un grupo
protector.
31. Un método para preparar un compuesto de
fórmula (XXIIb):
en
que
R^{1} es -CH_{2}NH_{2} o -CH_{2}OH, o una
versión protegida o derivatizada de este grupo y R^{4} es -H;
o
R^{1} y R^{4} juntos forman un grupo de
fórmula (IV),(V), (VI) o (VII):
R^{5} es -OH o una versión protegida o
derivatizada de este grupo;
R^{12} es -H, -CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3};
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH o una versión protegida o derivatizada de este
grupo, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y R^{14b}
juntos forman un grupo aceto;
R^{15} es -OH o una versión protegida o
derivatizada de este grupo;
R^{18} es -OH o una versión protegida o
derivatizada de este grupo; y
R^{21} es -H, -OH o -CN;
de un compuesto 21-ciano de la
siguiente fórmula(XVIb):
donde
R^{1} es un grupo amidometileno o
aciloximetileno;
R^{5} y R^{8} se eligen independientemente de
-H, -OH, o -OCOCH_{2}OH, o R^{5} y R^{4} son ambos aceto y el
anillo A es un anillo de p-benzoquinona;
R^{12} es -H, -CH_{3} o
-CH_{2}CH_{3};
R^{14a} y R^{14b} son ambos -H o uno es -H y
el otro es -OH, -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}, o R^{14a} y
R^{14b} juntos forman un grupo aceto; y
R^{15} y R^{18} se eligen independientemente
de -H o -OH, o R^{15} y R^{18} son ambos aceto y el anillo E es
un anillo de p-benzoquinona;
a no ser que al menos uno de los anillos A o E
sea un anillo de p-benzoquinona;
las reacciones del método comprenden si se
requiere:
- a)
- la conversión del sistema quinona para el anillo E al sistema fenol
- b)
- la conversión del sistema quinona para el anillo A al sistema fenol;
- c)
- la conversión del sistema fenol para el anillo A a un anillo metilendioxifenol;
- d)
- la formación de un anillo espiro puente de fórmula (IV), (VI) o (VII) a través de la posición 1 y la posición 4 en el anillo B; y
- e)
- la derivatización;
para obtener el compuesto deseado
de fórmula
(XXIIb).
32. Un método de acuerdo con la reivindicación
31, en que en el compuesto de fórmula (XXIIb), R^{5} es -OH,
R^{14a} y R^{14b} son H, R^{15} es H y R^{18} es OH.
33. Un método de acuerdo con la reivindicación
31, en que el compuesto de fórmula (XXIIb) es ecteinascidina 743 o
ectainascidina 770.
34. Un método de acuerdo con la reivindicación
33, en que el compuesto de fórmula (XXIIb) es ecteinascidina
743:
35. Un método de acuerdo con la reivindicación
31, donde el producto sea de fórmula (XXIII):
donde
R^{1} es un grupo aminometileno derivatizado de
masa moderada;
R^{5} es un grupo hidróxido derivatizado de
baja masa;
R^{12} es -CH_{3}; y
R^{21} es un grupo hidróxido o ciano;
36. Un método de acuerdo con la reivindicación
35, en que R^{1} es un grupo hidrofóbico.
37. Un método de acuerdo con la reivindicación
36, donde R^{1} es un grupo
-CH_{2}-NH-CO-R^{a},
donde R^{a} tiene una largada de cadena lineal de menos de 20
átomos.
38. Un método de acuerdo con la reivindicación
37, donde R^{a} tiene una longitud de cadena lineal de al menos
15 átomos.
39. Un método de acuerdo con la reivindicación
38, donde R^{a} tiene una longitud de cadena lineal de al menos
10 átomos.
40. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 35 a la 39, en que R^{5} es un grupo
acetilo.
41. Un método de acuerdo con la reivindicación
35, en que el compuesto de fórmula (XVIIb) es ftalascidina de
fórmula (III):
42. Un método de acuerdo con la reivindicación 26
donde aa es alanilo.
43. Un método de acuerdo con la reivindicación
42, en que el grupo alanilo está protegido con un grupo
butoxicarbonilo.
44. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 43, que incluya la reacción:
en que R^{1} y R^{18} son tal y
como se
define.
45. Un método de acuerdo con la reivindicación
44, donde R^{18} es un grupo OH protegido.
46. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones de la 2 a la 45, que incluya la reacción:
donde R^{1} y R^{18} son tal y
como se
definen.
47. Un método de acuerdo con la reivindicación
anterior, que incluya una reacción en la que un compuesto con un
grupo R^{1} aminometileno se convierta a un compuesto con un
grupo R^{1} hidroximetileno.
48. Un compuesto de fórmula
donde R^{1} es un grupo
aminometileno protegido o derivatizado; y R^{18} es un grupo OH
protegido.
49. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
48, que sea de fórmula:
50. Un compuesto de fórmula
donde R^{1} es un grupo
aminometileno derivatizado o protegido; y R^{18} es un grupo
R^{18}
protegido.
51. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
50, que sea de fórmula:
52. Un compuesto de fórmula:
donde R^{1} es un grupo
aminometileno opcionalmente protegido o derivatizado; y R^{18} es
un grupo OH
protegido.
53. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
52, que sea de fórmula:
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|---|---|---|---|
| GB9911345 | 1999-05-14 | ||
| GBGB9911345.8A GB9911345D0 (es) | 1999-05-14 | 1999-05-14 | |
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| GB9918178 | 1999-08-02 | ||
| GB9923632 | 1999-10-06 | ||
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