ES2234591T3 - Esteres de l-carnitina o alcanoil l-carnitinas utiles como lipidos cationicos para la administracion intracelular de compuestos farmacologicamente activos. - Google Patents
Esteres de l-carnitina o alcanoil l-carnitinas utiles como lipidos cationicos para la administracion intracelular de compuestos farmacologicamente activos.Info
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Abstract
Constituidos de fórmula (I) en la que: n es un número entero entre 1 y 3; R es hidrógeno o alcanoílo, lineal o ramificado, con 2-6 átomos de carbono; R1 y R2, que pueden ser iguales o diferentes, representan una cadena acílica lineal saturada o insaturada, con 3-20 átomos de carbono; y X- es el anión de un ácido farmacológicamente aceptable.
Description
Ésteres de L-carnitina o alcanoil
L-carnitinas útiles como lípidos catiónicos para la
administración intracelular de compuestos farmacológicamente
activos.
La invención descrita en el presente documento se
refiere a una clase de nuevos ésteres de L-carnitina
y acil
L-carnitinas y su uso como lípidos catiónicos adecuados para favorecer la administración intracelular de constituidos farmacológicamente activos, facilitando su transporte transmembrana, o para promover su interacción con sitios de la membrana celular específicos (receptores).
L-carnitinas y su uso como lípidos catiónicos adecuados para favorecer la administración intracelular de constituidos farmacológicamente activos, facilitando su transporte transmembrana, o para promover su interacción con sitios de la membrana celular específicos (receptores).
La invención descrita en el presente documento
también se refiere a ésteres de L-carnitina y acil
L-carnitinas más conocidos, útiles para los mismos
propósitos que los nuevos constituidos anteriormente
mencionados.
Lo que se quiere decir aquí mediante el término
"administración intracelular" es la transfección celular con
polinucleótidos o plásmidos de origen natural o modificado, dotados
de actividad terapéutica (administración génica) o la introducción
de fármacos o péptidos inmunogénicos en las células.
Muchas de las sustancias farmacológicamente
activas, tales como, por ejemplo, polipéptidos y proteínas o
fármacos en general necesitan penetrar en las células para ejercer
sus efectos influyendo en las funciones celulares a nivel molecular
o subcelular. Para estas moléculas la membrana celular constituye
una barrera selectivamente impermeable. La membrana celular, de
hecho, desempeña una función protectora, impidiendo la entrada de
sustancias potencialmente tóxicas, pero también el paso de
constituidos con actividad terapéutica. La compleja composición de
la membrana celular incluye fosfolípidos, glicolípidos y proteínas;
su función está influida por los componentes citoplasmáticos tales
como Ca^{++} y otros iones, ATP, microfilamentos, microtúbulos,
enzimas y proteínas que unen Ca^{++}. La interacción entre los
componentes citoplasmáticos y estructurales de las células y la
respuesta a señales externas son responsables de la selectividad
mostrada por y entre los diversos tipos celulares diferentes. El
efecto barrera de las membranas se puede superar combinando
sustancias en complejos con formulaciones lípidas que reproducen la
composición de los lípidos de membrana de origen natural. Estos
lípidos son capaces de fusionarse con las membranas y de liberar las
sustancias combinadas con ellos en las células. Los complejos
lipídicos son capaces no sólo de facilitar la transferencia
intracelular por medio de su fusión con las membranas, sino que
también disminuyen la repulsión de cargas entre la membrana y la
molécula que tiene que penetrar en la célula. Los lípidos
anfipáticos, tales como los fosfolípidos de membrana, forman
vesículas lipídicas o liposomas en sistemas acuosos.
Los liposomas son vesículas en las cuales un
volumen acuoso está completamente encerrado mediante una o más
membranas compuestas de moléculas de lípidos, normalmente
fosfolípidos. Los fosfolípidos, que consisten en una cabeza
hidrófila y un par de cadenas de carbono (cola hidrófoba), son los
componentes principales de las membranas biológicas. En disolución
acuosa las colas hidrófobas se autoasocian para expulsar el agua,
mientras que las cabezas hidrófilas interaccionan con el medio,
formando espontáneamente poblaciones de vesículas de diámetros
variables. Los lípidos generalmente son bipolares, neutros o
aniónicos. Estas vesículas se pueden usar como vehículos de
fármacos, moléculas pequeñas, proteínas, nucleótidos y
plásmidos.
En los últimos años, los liposomas catiónicos,
una clase de vesículas cargadas positivamente preparadas a partir de
lípidos sintéticos, se han usado ampliamente para la transferencia
de material genético a las células. La carga negativa del ADN puede
interactuar con las cargas positivas de los lípidos catiónicos,
formando un complejo ADN-liposoma estable. La
simplicidad y versatilidad de esta tecnología ha hecho de los
liposomas un vehículo importante para la administración de genes
para terapia génica en pacientes humanos. Actualmente, la mayoría de
los vectores usados para terapia génica y aprobados por el NIH
Recombinant Advisory Committee incluye sistemas sintéticos y
víricos.
La infección vírica implica una serie de
mecanismos complejos para poder atacar una célula específica y
transportar el ADN al núcleo. El fundamento del uso de vectores
víricos para terapia génica se basa en la posibilidad de reemplazar
los genes víricos por genes que codifican una función terapéutica,
sin eliminar la capacidad de la partícula vírica de infectar las
células. Las limitaciones de la terapia vírica tienen que ver con
aquellos elementos víricos que pueden ser inmunogénicos, citopáticos
y recombinogénicos.
Están puestas grandes esperanzas en el uso de
lípidos catiónicos para terapia génica. Estos vectores poseen un
gran potencial comparados con aquellos de origen biológico, ya que
son mucho más seguros, menos tóxicos y también son capaces
incorporar genes de gran tamaño. Comparados con vectores de tipo
biológico, no obstante, tienen un bajo rendimiento de trascripción
génica intracelular. Se debería tener en cuenta, no obstante, que
el uso de dichos sistemas de transfección está en una etapa inicial
de investigación. Los lípidos catiónicos desempeñan un papel muy
importante en la formación de los complejos
ADN-lípido, en la interacción de
complejo-célula, en la fusión con la membrana, en la
liberación del ADN dentro de la célula y en la trascripción.
Hay ejemplos importantes de aplicaciones in
vivo de liposomas catiónicos. El primer ensayo clínico en
terapia génica se llevó a cabo introduciendo un vector de expresión
que contenía el gen HLA-B7 complejado a liposomas
humanos para el tratamiento del melanoma. Otra aplicación importante
se refiere al tratamiento de la fibrosis cística pulmonar por medio
de la administración a través de la vía pulmonar o como pulverizador
nasal del vector de expresión
SV-40C-FTR complejado a liposomas.
Actualmente están en marcha otros ensayos clínicos que implican el
uso de liposomas en terapia génica para cáncer.
Generalmente se identifican cuatro elementos
constituyentes en la estructura de los lípidos catiónicos: la cabeza
catiónica cargada positivamente, el espaciador, el lípido de anclaje
y el enlace de unión.
La cabeza catiónica es responsable de las
interacciones entre los liposomas catiónicos y el ADN, entre el
complejo ADN-liposoma y la membrana celular y los
otros componentes de la célula. Consiste en grupos mono- o
policatiónicos (dependiendo del número de cargas) que pueden estar
sustituidos de manera variable.
El espaciador es la parte de la molécula que
separa la cabeza catiónica de la cola hidrófoba y está implicado en
asegurar el contacto óptimo entre la cabeza catiónica y las cargas
negativas de los fosfatos del ADN.
El lípido de anclaje es la parte hidrocarbonada
no polar de la molécula y determina las propiedades físicas de la
doble capa lipídica, tales como su rigidez y su velocidad de
intercambio con los lípidos de la membrana.
Lo que se quiere decir mediante "enlace de
unión" es el enlace entre las cadenas hidrocarbonadas y el resto
de la molécula. Este enlace determina la estabilidad química y
biodegradabilidad de los lípidos catiónicos.
En los últimos años el uso de liposomas se ha
incrementado de manera constante en el sector de los cosméticos. El
éxito de los liposomas en este campo se debe al hecho de que estos
constituidos son muy bien tolerados por la piel. Se usan como
vehículos para componentes activos y como constituidos que favorecen
la absorción de estos últimos.
La bibliografía de patentes y científica es
abundante en referencias a la preparación y uso de liposomas; hay,
sin embargo, muy pocas referencias que describan el uso de derivados
de la carnitina útiles para la administración génica, mientras que
para la administración de fármacos no hay documentos disponibles que
se ocupen de técnicas conocidas para la preparación de constituidos
que se asemejen remotamente a aquellos de acuerdo con la invención
aquí des-
crita.
crita.
La solicitud de patente EP 0 279 887 describe el
uso de un derivado de la carnitina, es decir, fosfatidil carnitina,
opcionalmente en mezclas con otros fosfolípidos y lípidos
(colesterol, fosfatidil colina, fosfatidil serina), para la
preparación de liposomas.
En el ejemplo proporcionado en relación a la
preparación de liposomas, los liposomas de fosfatidil carnitina se
producen con propanolol incorporado, un fármaco conocido por ser
activo como agente antihipertensivo, anti-angínico y
antiarrítmico. El derivado carnitina se usa aquí a causa del
pronunciado tropismo miocardial de la carnitina. Este tropismo hace
posible evitar que los liposomas sean metabolizados por el hígado,
más que alcanzar el sitio diana deseado.
La presencia de fosfatidil carnitina también hace
posible administrar los liposomas oralmente, ya que son resistentes
a las lipasas intestinales.
En J. Med. Chem. 18 de junio de 1998;
41(13): 2207-2215, se describen una serie de
ésteres de L-carnitina útiles para la administración
génica, pero no se describen o se proponen como agentes útiles para
la administración de fármacos.
El documento WO 96/39193 describe nuevos agentes
farmacológicos dirigidos que están dirigidos para entrar en la
mitocondria a través del sistema
carnitina-acilcarnitina traslocasa, pero no se
sugiere de ellos que sean agentes útiles para la preparación de
liposomas.
El documento EP 559 625 B1 describe una serie de
ésteres de L-carnitina y acil
L-carnitinas dotadas de actividad relajante muscular
selectiva del tracto gastrointestinal.
En los últimos años los biólogos moleculares han
identificado numerosos defectos a nivel cromosómico que provocan
enfermedades hereditarias en pacientes humanos.
Un sector importante de la medicina moderna está
involucrado en el tratamiento de estas enfermedades hereditarias
con base genética mediante el uso de protocolos de terapia
génica.
Como ya se ha mencionado, los liposomas
catiónicos se usan ampliamente para la administración intracelular
de constituidos farmacológicamente activos, facilitando el
transporte transmembrana o promoviendo su interacción con sitios de
la membrana celular específicos (receptores).
Estos vectores poseen un gran potencial
comparados con aquellos de origen biológico, ya que son mucho más
seguros, menos tóxicos y también son capaces incorporar genes de
gran tamaño. Comparados con vectores de tipo biológico, no obstante,
tienen un bajo rendimiento de trascripción génica intracelular.
Además, la transferencia génica mediada por
lípidos catiónicos convencionales requiere que el plásmido de ADN y
los lípidos catiónicos se mantengan separados, y que su mezcla se
lleve a cabo inmediatamente antes de la transferencia génica.
Los intentos para estabilizar estos complejos
polinucleótidos hasta ahora han fracasado a la hora de dar
resultados alentadores; de hecho, permanecen estables solamente
durante un corto período.
En el campo de la terapia génica o administración
génica y administración de fármacos, hay por tanto una necesidad
claramente percibida de sistemas específicos de sitio reproducibles
y estables que también sean activos después de un periodo de tiempo
adecuado.
Ahora se ha encontrado que una clase de lípidos
catiónicos poderosamente activos en la promoción de la
administración intracelular de constituidos farmacológicamente
activos comprende los nuevos ésteres de L-carnitina
y acil L-carnitinas.
Estos nuevos constituidos son estables y
altamente selectivos debido a que son específicos de sitio a la hora
de alcanzar el órgano diana.
Esta característica los hace particularmente
útiles para el transporte de constituidos activos directamente al
sitio en el que pueden ejercer su actividad farmacológica.
Los constituidos de acuerdo con la invención aquí
descrita son constituidos con fórmula general (I):
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
n es un número entero entre 1 y
3;
R es hidrógeno o alcanoílo, lineal
o ramificado, con 2-6 átomos de
carbono;
R_{1} y R_{2}, que pueden ser
iguales o diferentes, representan una cadena acílica lineal saturada
o insaturada, con 3-20 átomos de carbono;
y
X^{-} es el anión de un ácido
farmacológicamente
aceptable.
Ejemplos de R son acetilo, propionilo, butirilo,
valerilo e isovalerilo.
Ejemplos de R_{1} y R_{2} son hexanoílo,
undecanoílo, miristoílo, palmitoílo u oleoílo.
Ejemplos preferidos de constituidos de acuerdo
con la invención son:
- -
- éster de bromuro de L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 770);
- -
- éster de bromuro de acetil L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 771);
- -
- éster de bromuro de propionil L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 772);
- -
- éster de bromuro de isobutiril L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 773);
- -
- éster de bromuro de isovaleril L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 774);
- -
- éster de bromuro de L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol (ST 810);
- -
- éster de bromuro de acetil L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol (ST 809);
- -
- éster de bromuro de propionil L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol (ST 808).
Lo que se quiere decir por un anión de un ácido
farmacológicamente aceptable es cualquier anión de un ácido que no
incremente los efectos secundarios o tóxicos no deseados.
Estos ácidos son muy conocidos por farmacólogos y
por expertos en tecnología farmacéutica.
Ejemplos de estos aniones, aunque no listados de
manera exhaustiva, son: cloruro; bromuro; yoduro; aspartato;
aspartato ácido; citrato; citrato ácido; tartrato; tartrato ácido;
fosfato; fosfato ácido; fumarato, fumarato ácido; glicerofosfato;
glucosa fosfato; lactato; maleato; maleato ácido; mucato; orotato;
oxalato; oxalato ácido; sulfato; sulfato ácido; tricloroacetato;
trifluoroacetato; metano sulfonato; pamoato y pamoato ácido.
Los constituidos de fórmula (I), en forma de
liposomas, son agentes útiles tanto para la administración de
plásmidos o nucleótidos de origen natural o modificados útiles en
terapia génica, o que codifican para un péptido o proteína útil como
una vacuna, y para la administración general de fármacos, tales
como, por ejemplo, fármacos anticancerígenos, agentes antivíricos,
agentes antibacterianos, antifúngicos, antiprotozoicos, fármacos
útiles para la terapia de enfermedades del sistema cardiovascular, o
péptidos inmunogénicos y otros fármacos útiles en terapia.
Los liposomas que contienen el constituido de
fórmula (I) se preparan por medio de técnicas convencionales, muy
conocidas para la persona que tenga conocimientos ordinarios en la
técnica; véase por ejemplo Allen T. M., Drugs 56,
747-756 (1998). Los liposomas de acuerdo con la
presente invención también se pueden preparar usando otros
componentes muy conocidos en la práctica de la tecnología con
liposomas. En una forma de realización de la presente invención, los
liposomas pueden contener lípidos adyuvantes, un término que es bien
comprendido en esta técnica. Ejemplos de lípidos adyuvantes son el
colesterol,
1-palmitoil-2-oleoil
fosfatidil colina o dioleoil fosfatidil colina.
Los liposomas de acuerdo con la presente
invención se presentan de manera adecuada en forma de composiciones.
En la forma de realización perteneciente a la administración de
constituidos farmacológicamente activos, las composiciones se
entiende que son farmacéuticas, que opcionalmente comprenden
vehículos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Los constituidos de fórmula (I), en forma de
liposomas, también pueden ser útiles en la preparación de
composiciones cosméticas, que comprenden el liposoma per se
como agente activo cosmético y para la administración de sustancias
con actividad cosmética, tales como, por ejemplo, agentes
hidratantes, nutrientes, sustancias para la limpieza facial, agentes
antiarrugas, agentes anticelulíticos y agentes antiestrías.
Los liposomas que comprenden los constituidos de
fórmula (I) se pueden administrar transdérmica, subcutánea,
intramuscular, intravenosa parenteral u oralmente, o en forma de
pulverizadores nasales o bucales.
El procedimiento para la preparación de los
constituidos de fórmula (I) de acuerdo con la invención está
representado en el siguiente diagrama de reacción, pretendiéndose
que este diagrama se aplique a toda la fórmula general (I). El
experto podrá obtener fácilmente todos los grupos representados por
R, R_{1} y R_{2}, ya que todos los reactivos necesarios están
disponibles comercialmente o descritos en la bibliografía y las
condiciones de reacción son aplicables de manera general a todo el
alcance de la presente invención, llevándose a cabo normalmente
cualquier modificación si fuese necesaria dentro de los
conocimientos generales comunes.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Con referencia al diagrama de reacción 1
anterior, la preparación de los constituidos de fórmula (I) de
acuerdo con la invención se ilustra aquí a continuación.
Se disolvió dihidroxiacetona (7 g, 0,078 mol) en
300 ml de cloroformo anhidro a 0ºC (temperatura externa) en flujo de
nitrógeno anhidro.
A la disolución así obtenida se añadió gota a
gota cloruro de palmitoílo (44 g, 0,16 mol) y piridina anhidra (15
ml).
La mezcla resultante, cuya temperatura se elevó
hasta temperatura ambiente, se mantuvo en agitación durante 24
horas.
A continuación la mezcla se extrajo en el orden
siguiente: con 300 ml de una disolución acuosa de ácido clorhídrico
al 0,5%, 300 ml de una disolución acuosa de bicarbonato sódico al 5%
y finalmente con 300 ml de agua.
La fase orgánica separada se deshidrató sobre
sulfato sódico anhidro, se filtró en un filtro de celulosa y se
concentró hasta sequedad, obteniendo el producto en bruto (1).
El producto puro (1) se obtuvo por cristalización
en 500 ml de alcohol etílico.
Se obtuvieron 30,4 g del producto (1).
Rendimiento: 73%
P.f. = 80-81ºC
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 0,9 (6H, t,
CH_{\underline{3}}CH_{2}-); 1,3 (48H, m,
(CH_{2})_{n=24}); 1,55 (4H, m,
-OCOCH_{2}CH_{\underline{2}}-); 2,4 (4H, t,
-OCOCH_{\underline{2}}-); 4,7 (4H, s,
-OCCH_{\underline{2}}-).
Se añadió agua (7,5 ml) al producto (1) (5 g, 9
mmol) lentamente, y se disolvió en tetrahidrofurano (125 ml) y
tolueno (25 ml) con agitación.
La temperatura de la suspensión blanca lechosa
obtenida se llevó hasta 5ºC (temperatura externa) y se añadió en
pequeñas fracciones borohidruro sódico (500 mg; 13 mmol). La
suspensión se mantuvo en agitación durante 30 minutos a 5ºC.
A continuación se añadió lentamente ácido acético
glacial hasta que se produjo efervescencia por la descomposición del
borohidruro sódico cesado en exceso, obteniendo finalmente una
disolución.
Se añadió cloroformo (100 ml) a la disolución,
obteniéndose la formación de un sistema bifásico.
La fase orgánica inferior que consistía en
CHCl_{3} se separó, extrayéndose en el orden siguiente: con agua
(25 ml), bicarbonato sódico (25 ml de disolución acuosa al 10%) y
agua (25 ml).
La disolución orgánica que contenía (2) se
deshidrató sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró hasta
sequedad, obteniéndose un producto ceroso.
El producto (2) se obtuvo por cristalización en
acetona del producto en bruto ceroso.
Se obtuvieron 4,8 g del producto (2).
Rendimiento: 94%.
P.f. = 71-72ºC
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 0,9 (6H, t,
CH_{\underline{3}}CH_{2}-); 1,3 (48H, m,
(CH_{2})_{n=24}); 1,55 (4H, m,
-OCOCH_{2}CH_{\underline{2}}-); 2,4 (4H, t,
-OCOCH_{\underline{2}}-); 4,2 (5H, m,
-CHCH_{\underline{2}}O-).
El producto (2) (2,5 g; 4,4 mmol) se solubilizó
en cloroformo anhidro (50 ml) en agitación y a 0ºC (temperatura
externa).
A la disolución así obtenida se añadió piridina
lentamente (0,42 ml) y 3 ml de una disolución de cloroformo que
contenía cloruro de bromoacetilo (0,43 ml; 5,2 mmol) gota a
gota.
La mezcla de reacción se mantuvo durante 30
minutos a 0ºC (temperatura externa) y durante 30 minutos a
temperatura ambiente.
A continuación la mezcla de reacción se trató en
el orden siguiente con: una disolución acuosa de ácido clorhídrico
al 1% (50 ml aproximadamente), una disolución acuosa de bicarbonato
sódico al 5% (50 ml aproximadamente) y agua.
El producto (3) se purificó por cristalización en
acetona, después de deshidratar la mezcla de reacción (con sulfato
sódico) y concentrar hasta sequedad.
Se obtuvieron 2,5 g del producto (3).
Rendimiento: 89%.
P.f. = 46-47ºC
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 0,9 (6H, t,
CH_{\underline{3}}CH_{2}-); 1,3 (48H, m,
(CH_{2})_{n=24}); 1,55 (4H, m,
-OCOCH_{2}CH_{\underline{2}}-); 2,4 (4H, t,
-OCOCH_{\underline{2}}-); 3,9 (2H, s,
-OCH_{\underline{2}}COO-); 4,2-4,4 (5H, m,
-CHCH_{\underline{2}}O-); 5,25 (1H, m,
-CHCH_{2}O-).
La sal interna de L-propionil
carnitina (0,95 g, 4,4 mmol) secada previamente sobre vacío a 40ºC
se suspendió en dimetilformamida anhidra (20 ml
aproximadamente).
El producto (3) (3 g, 4,7 mmol) se añadió a la
suspensión en fracciones pequeñas. La suspensión se calentó
lentamente hasta 38ºC y se mantuvo en estas condiciones hasta que se
obtuvo una disolución.
Después de 10 minutos la disolución se llevó a
0ºC durante 30 minutos. Se obtuvo un precipitado, que se filtró y se
lavó con etil éter y se disolvió en cloroformo (100 ml). La
disolución opalescente obtenida (30 ml) se filtró sobre Celite y se
concentró. A esta última disolución se añadió hexano (100 ml), y el
precipitado del producto (4) obtenido se filtró y se secó sobre
vacío a 35ºC.
Se obtuvieron 3,19 g del constituido del
título.
Rendimiento: 80%.
P.f. = 127-128ºC
[\alpha]^{25}_{D} = -3,9 (C =
cloroformo al 1%)
Análisis elemental de
C_{47}H_{88}BrNO_{10}
| C% | H% | N% | Br% | |
| Calculado | 62,23 | 9,78 | 1,54 | 8,81 |
| Hallado | 62,73 | 10,15 | 0,79 | 8,77 |
RMN ^{1}H (CDCl_{3}):
0,9-0,95 (6H, t,
CH_{\underline{3}}CH_{2}CH_{2}-);
1,1-1,2 (3H, t, CH_{3}CH_{2}CO);
1,2-1,4 (24H, m, (CH_{2})_{n=24});
1,5-1,6 (4H, m,
-OCCH_{2}CH_{\underline{2}}-); 2,3-2,4
(4H, t, -OCCH_{\underline{2}}CH_{2}-);
2,4-2,45 (4H, dd, -CHCH_{\underline{2}}O-);
2,95 (2H, d, -CH_{\underline{2}}COOCH_{2}
COO-); 3,5 (9H, s, N (CH_{3})_{3}); 4,2 (4H, m, -CH_{\underline{2}}OCOCH_{2}-); 4,35 (2H, m, -CH_{\underline{2}}N-); 4,65 (2H, dd, -OCH_{\underline{2}}CO-); 5,25 (1H, m, -OCH_{2}CHCH_{2}O-); 5,75 (1H, m, -CHCH_{2}N-).
COO-); 3,5 (9H, s, N (CH_{3})_{3}); 4,2 (4H, m, -CH_{\underline{2}}OCOCH_{2}-); 4,35 (2H, m, -CH_{\underline{2}}N-); 4,65 (2H, dd, -OCH_{\underline{2}}CO-); 5,25 (1H, m, -OCH_{2}CHCH_{2}O-); 5,75 (1H, m, -CHCH_{2}N-).
Ejemplos
2-7
Los siguientes constituidos se prepararon de la
misma manera que en el ejemplo precedente:
- -
- éster de bromuro de L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 770);
- -
- éster de bromuro de acetil L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 771);
- -
- éster de bromuro de isobutiril L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 773);
- -
- éster de bromuro de isovaleril L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol (ST 774);
- -
- éster de bromuro de L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol (ST 810);
- -
- éster de bromuro de acetil L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol (ST 809);
- -
- éster de bromuro de propionil L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol (ST 808).
Una forma de realización preferida de la
invención aquí descrita consiste en la preparación de liposomas con
fármacos anticancerígenos, y particularmente liposomas que actúan
como vehículos para camptotecinas, por ejemplo aquellos descritos en
el documento WO 97/31003. En una forma de realización más preferida,
la invención aquí descrita proporciona liposomas para la
administración de camptotecinas de fórmula general (IV):
en la que: R_{7} es un grupo
-C(R_{11})=N-O_{(n)}R_{10}, en la que
R_{10} es hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-}C_{5} o alquenilo
C_{1-}C_{5}, lineal o ramificado, o un grupo cicloalquilo
C_{3-}C_{10}, o un grupo cicloalquil (C_{3-}C_{10}) alquilo
(C_{1-}C_{5}) lineal o ramificado, o un arilo C_{6-}C_{14},
o un grupo aril (C_{6-}C_{14}) alquilo (C_{1-}C_{5}) lineal
o ramificado, o un heterociclo o un grupo
heterociclo-alquilo (C_{1-}C_{5}) lineal o
ramificado, dicho grupo heterociclo que contiene al menos un
heteroátomo seleccionado entre átomos de nitrógeno, opcionalmente
sustituido por un grupo alquilo (C_{1-}C_{5}), y/u oxígeno y/o
azufre; dichos grupos alquilo, alquenilo, cicloalquilo, arilo,
aril-alquilo, heterociclo y
heterociclo-alquilo estando opcionalmente
sustituidos con otros grupos seleccionados entre: halógeno,
hidroxilo, alquilo C_{1-}C_{5}, alcoxilo C_{1-}C_{5},
fenilo, ciano, nitro, -NR_{12}R_{13}, en la que R_{12} y
R_{13}, que pueden ser iguales o diferentes, son hidrógeno,
alquilo (C_{1-}C_{5}) lineal o ramificado, el grupo -COOH o uno
de sus ésteres farmacéuticamente aceptables; o el grupo
-CONR_{14}R_{15}, en la que R_{14} y R_{15}, que pueden ser
iguales o diferentes, son hidrógeno, alquilo (C_{1-}C_{5})
lineal o ramificado;
o
R_{10} es un residuo aroílo
C_{6}-C_{10}, opcionalmente sustituido por uno
o más grupos seleccionados entre: halógeno, hidroxilo, alquilo
C_{1-}C_{5} lineal o ramificado, alcoxilo C_{1-}C_{5}
lineal o ramificado, fenilo, ciano, nitro, -NR_{16}R_{17}, en
la que R_{16} y R_{17}, que pueden ser iguales o diferentes,
son hidrógeno, alquilo C_{1-}C_{5} lineal o ramificado;
R_{10} es un residuo
poliaminoalquilo;
o
R_{10} es un residuo
glicosilo;
n es el número 0 ó
1;
R_{11} es hidrógeno, alquilo C_{1-}C_{5}
lineal o ramificado, alquenilo C_{1-}C_{5} lineal o ramificado,
cicloalquilo C_{3}-C_{10}, cicloalquil
(C_{3}-C_{10}) alquilo (C_{1-}C_{5}) lineal
o ramificado, arilo C_{6}-C_{14}, aril
(C_{6}-C_{14}) alquilo (C_{1-}C_{5}) lineal
o ramificado;
R_{8} y R_{9}, que pueden ser iguales o
diferentes, son hidrógeno, hidroxilo, alcoxilo C_{1-}C_{5}
lineal o ramificado;
sus N_{1}-óxidos, isómeros únicos,
particularmente los isómeros syn y anti del grupo
-C(R_{11})=N-O_{(n)}R_{10}, sus
posibles enantiómeros, diasteroisómeros y mezclas relacionadas, sus
sales farmacéuticamente aceptables y sus metabolitos activos.
Los constituidos de fórmula (IV) se describen en
la solicitud de patente europea Nº 99830124.6, presentada el 9 de
marzo de 1999.
En lo que respecta a los constituidos de fórmula
(IV) en la que n es 1 y R_{10} es como se define anteriormente,
con la excepción del aroílo, estos constituidos se pueden preparar a
partir de 7-aldehído camptotecina (fórmula IVa,
R_{11} hidrógeno) o 7-ceto camptotecina (fórmula
IVa, R_{11} distinto de hidrógeno).
en la que R_{7} es el grupo
-C(R_{11})=O, y R_{11} es como se define en la fórmula
(IV), R_{8} y R_{9} es como se define en la fórmula (IV). El
constituido de fórmula (IVa) se hace reaccionar con el constituido
de fórmula (Va) R_{10}O-NH_{2}, en la que
R_{10} es como anteriormente, para dar constituidos de fórmula
(I), en la que R_{7} es el grupo
-C(R_{11})=N-O-R_{10},
R_{10} se define como en la fórmula (IV), excepto por el
aroílo.
La reacción se puede llevar a cabo con
procedimientos convencionales conocidos por expertos en la materia,
el procedimiento consiste en la formación normal de oximas.
Preferentemente, la relación molar de 7-aldehído o
7-ceto camptotecina a hidroxilamina debería estar en
el intervalo de 1:3 a 3:1. También se pueden usar las sales de
hidroxilamina pertinentes. La reacción se lleva a cabo en presencia
de una base, por ejemplo, una base inorgánica tal como carbonato
potásico, o una base orgánica, tal como trietilamina o
diazabiciclononano, usando disolventes polares, preferentemente
metanol o etanol, y llevando a cabo la reacción a un intervalo de
temperaturas entre temperatura ambiente y la temperatura del punto
de ebullición del disolvente, opcionalmente en presencia de agentes
deshidratantes, por ejemplo sulfato de sodio o de magnesio, tamices
moleculares. Si fuese necesario, la reacción también se puede llevar
a cabo en presencia de un catalizador, por ejemplo un ácido de
Lewis.
Alternativamente, los constituidos anteriormente
mencionados se pueden preparar a partir de la oxima del
7-aldehído camptotecina (obtenido como se describe
en Sawada y colaboradores, Chem. Phar. Bull. 39, 2574
(1991)), o la 7-cetona o a partir de la
7-acilcamptotecina correspondiente por reacción con
un haluro R_{10}-X, en la que X preferentemente es
yodo, en un disolvente polar, por ejemplo tetrahidrofurano o
alcoholes, y en presencia de una base, por ejemplo, hidruro sódico o
carbonato potásico.
En lo que respecta a los constituidos de fórmula
(IV) en la que n es 1 y R_{10} es aroílo, como se define en la
fórmula (IV), estos constituidos se pueden preparar a partir de la
7-oxima camptotecina, cuya preparación se describe
en el párrafo anterior, con cloruros de acilo
R_{10}-COCl, en disolventes polares, y en
presencia de una base, preferentemente piridina, o directamente en
piridina, como se describe por Cho y colaboradores, J. Org.
Chem. 62, 2230 (1997).
En lo que respecta a los constituidos de fórmula
(IV) en la que n es 0 y R_{10} es como se define anteriormente,
con la excepción del aroílo, los constituidos se pueden preparar a
partir de la 7-aldehído camptotecina (fórmula IVa,
R_{11} hidrógeno) o 7-ceto camptotecina (fórmula
IVa, R_{11} distinto de hidrógeno).
en la que R_{7} es el grupo
-C(R_{11})=O, y R_{11} es como se define en la fórmula
(IV), R_{8} y R_{9} son como se define en la fórmula (IV). El
constituido de fórmula (IVa) se hace reaccionar con el constituido
de fórmula (Vb) R_{10}-NH_{2}, en la que
R_{10} es como se define anteriormente, para dar constituidos de
fórmula (IV), en la que R_{7} es el grupo
-C(R_{11})=N-O-R_{10},
R_{10} se define como en la fórmula (IV), excepto por el aroílo.
La reacción se puede llevar a cabo con procedimientos
convencionales conocidos por expertos en tecnología farmacéutica, el
procedimiento consiste en la formación normal de iminas.
Preferentemente, la relación molar de 7-aldehído o
7-ceto camptotecina a imina debería estar en el
intervalo de 1:3 a 3:1. También se pueden usar las sales de amina
pertinentes. La reacción se lleva a cabo en presencia de una base,
por ejemplo, una base inorgánica tal como carbonato potásico, o una
base orgánica, tal como trietilamina o diazabiciclononano, usando
disolventes polares, preferentemente metanol o etanol, y llevando a
cabo la reacción a un intervalo de temperaturas entre temperatura
ambiente y la temperatura del punto de ebullición del disolvente,
opcionalmente en presencia de agentes deshidratantes, por ejemplo
sulfato de sodio o de magnesio, tamices moleculares. Si fuese
necesario, la reacción también se puede llevar a cabo en presencia
de un catalizador, por ejemplo un ácido de Lewis como se describe,
por ejemplo, por Moretti y Torre, Synthesis, 1970, 141; o
por Kobayashi y colaboradores, Synlett, 1977,
115).
La 7-aldehído camptotecina y la
7-oxima camptotecina se describen en la solicitud de
patente europea EP 0056692 y en el artículo anteriormente citado de
Sawada y colaboradores, Chem. Pharm. Bull. 39, 2574
(1991).
Los N_{1}-óxidos de los constituidos de fórmula
(IV) se preparan de acuerdo con procedimientos de oxidación de
nitrógenos heteroaromáticos conocidos, preferentemente por oxidación
con ácido acético o trifluoroacético y peróxido de hidrógeno, o por
reacción con peroxiácidos orgánicos (A. Albini y S. Pietra,
Heterocyclic N-oxides, CRC, 1991).
En lo que respecta a la importancia variable de
R_{10}, presente en los diferentes reactivos de fórmula V, estos
reactivos están disponibles comercialmente, o se pueden preparar de
acuerdo con procedimientos comunes a los de la bibliografía, a los
cuales puede recurrir un experto en el sector, como suplemento para
su propio conocimiento de la materia.
Las sales farmacéuticamente aceptables se
obtienen con procedimientos convencionales descritos en la
bibliografía, y que no necesitan de una descripción más
profunda.
Se disolvieron 500 mg (1,33 mmol) de
7-formilcamptotecina en 100 ml de etanol. Se
añadieron 15 ml de piridina y 638 mg (4 mmol) de clorhidrato de
O-bencilhidroxilamina. La disolución se calentó a
reflujo durante 5 horas. El disolvente se evaporó sobre vacío y el
residuo así obtenido se purificó por cromatografía súbita en gel de
sílice usando una mezcla 4:6 de hexano/acetato de etilo como
eluyente.
Rendimiento: 65%
P.f. = 200-205ºC dec.
El producto obtenido consiste en una mezcla 8:2
aproximadamente de los dos isómeros syn y anti
(isómero A: Rf 0,32; isómero B, Rf 0,19, en gel de sílice Merck 60
F254; eluyente: hexano:acetato de etilo 3:7).
HPLC: los análisis se llevaron a cabo en un
aparato equipado con una bomba cuaternaria (HP 1050) con un inyector
Rheodyne (bucle de 20 \mul) y un detector
diodo-array (HP 1050) corrido por el programa de
HPLC ChemStation. La obtención del espectro se hizo entre los 200 y
los 600 nm y los cromatogramas se tomaron a 360 y 400 nm.
Se usó una columna de fase inversa C18 (Rainin
C18, 25 x 0,4 cm, Varian) con una columna previa RP18. El análisis
se llevó a cabo con un gradiente de elución lineal, comenzando con
acetonitrilo:agua 30:70 a acetonitrilo al 100% en 20 minutos, con
una velocidad de flujo de 1 ml/min. Los tiempos de retención fueron:
12,51 min para el isómero B y 14,48 min para el isómero A.
RMN ^{1}H (300 MHz;
DMSO-d_{6}):\delta 0,88 (t,
H_{3}-18A+H_{3}-18B), 1,87 8m,
(H_{2}-19A+H_{2}-19B), 5,18 (s,
H_{2}-5B), 5,21 (8s, H_{2}-Ph
B), 5,30 (H_{2}-Ph A), 5,40 (s,
H_{2}-5A), 5,45 (s,
H_{2}-17A+H_{2}- 17B), 6,53 (s, -OH A+-OH B),
7,3-7,6 (m, Ar A+ Ar
B+H-14A+H-14B), 7,75 (m,
H-11A+H-11B),
7,85-7,95 (m,
H-10A+H-10B), 7,98 (dd,
H-12B), 8,18-8,27 (m,
H-12A+H-9B), 8,45 (s, CH=N B), 8,59
(dd, H-9A), 9,38 (s, CH=N A).
Masas m/z 481 (M^{+} 100) 374 (30) 330 (70) 300
(30) 273 (20) 243 (20) 91 (34).
Se disolvieron 400 mg (1,06 mmol) de
7-formilcamptotecina en 80 ml de etanol. Se
añadieron 12 ml de piridina y 400 mg (3,18 mmol) de clorhidrato de
O-t-butilhidroxilamina. La disolución se calentó a reflujo
durante 4 horas. El disolvente se evaporó sobre vacío y el residuo
así obtenido se purificó por cromatografía súbita en gel de sílice
usando una mezcla 4:6 de hexano/acetato de etilo como eluyente.
Se obtuvieron 322 mg (0,72 mmol) de sólido
amarillo.
Rendimiento: 68%
P.f. = 250ºC dec.
El producto obtenido consiste en una mezcla 8:2
aproximadamente de los dos isómeros syn y anti
(isómero A: Rf 0,31; isómero B, Rf 0,24, en gel de sílice Merck 60
F254; eluyente: hexano:acetato de etilo 3:7).
HPLC: los análisis se llevaron a cabo en un
aparato equipado con una bomba cuaternaria (HP 1050) con un inyector
Rheodyne (bucle de 20 \mul) y un detector
diodo-array (HP 1050) corrido por el programa de
HPLC ChemStation. La obtención del espectro se hizo entre los 200 y
los 600 nm y los cromatogramas se tomaron a 360 y 400 nm.
Se usó una columna de fase inversa C18 (Rainin
C18, 25 x 0,4 cm, Varian) con una columna previa RP18. El análisis
se llevó a cabo con un gradiente de elución lineal, comenzando con
acetonitrilo:agua 30:70 a acetonitrilo al 100% en 20 minutos, con
una velocidad de flujo de 1 ml/min. Los tiempos de retención fueron:
12,92 min para el isómero B y 14,61 min para el isómero A.
RMN ^{1}H (300 MHz;
DMSO-d_{6}):\delta 0,88 (t,
H_{3}-18A+H_{3}-18B), 1,30 (s,
t-but.B), 1,47 (s, t-but.A), 1,87 (m,
H_{2}-19A+H_{2}-19B), 5,18 (s,
H_{2}-5B), 5,37 (H_{2}-5A), 5,42
(s, H_{2}-17A+H_{2}-17B), 6,54
(s, -OH A+-OH B), 7,35 (s, H-14A), 7,36 (s,
H-14A), 7,69-7,83 (m,
H-11A+H-11B),
7,85-7,98 (m,
H-10A+H-10B), 8,07 (dd,
H-9B), 8,16-8,27 (m,
H-9A+H-12B), 8,40 (s, CH B), 8,62
(dd, H-12A), 9,31 (s, CH A).
Masas m/z 448 (M^{+} 28) 391 (40) 374 (100) 362
(40) 330 (34) 57 (17).
Los constituidos de acuerdo con la invención se
pueden usar para preparar liposomas multilamelares (MLV) y liposomas
unilamelares (SUV), ambos en forma de polvos secos y en forma de
suspensiones en disoluciones
acuosas.
acuosas.
Los constituidos de acuerdo con la invención,
preparados como se describe en los ejemplos 1-7, se
usan para preparar los liposomas de acuerdo con el siguiente
procedimiento. Se disuelve una cantidad adecuada del constituido en
cloroformo; la disolución se concentra sobre vacío hasta sequedad en
un evaporador rotatorio hasta que se obtiene una película de
lípidos. La película de lípidos se seca sobre alto vacío hasta que
las últimas trazas de disolvente remanente hayan sido eliminadas y a
continuación se disuelve en alcohol tert-butílico o con agua.
La disolución así obtenida se liofiliza, obteniendo un polvo suave y
seco.
Los polvos se hidratan con una cantidad adecuada
de disolución acuosa, obteniendo el liposoma del constituido usado,
que a continuación se compleja con el polinucleótido o con el
fármaco deseado.
Otro procedimiento de preparación de liposomas
consiste en la adsorción de una película de lípidos, que consiste en
un constituido de acuerdo con la invención en un disolvente, o en un
soporte inerte adecuado tal como sorbitol, manitol u otros
carbohidratos farmacológicamente aceptables. La mezcla se seca sobre
vacío, obteniendo un sólido que se puede hidratar fácil y muy
rápidamente antes de su uso.
Las preparaciones en forma de polvos secos
presentan la ventaja de ser estables durante largos periodos, y son
fáciles de usar.
Además, los constituidos de acuerdo con la
invención se pueden usar para preparar liposomas complejados con ADN
o con el fármaco deseado, en forma de polvos secos, de acuerdo con
el siguiente procedimiento. El constituido de acuerdo con la
invención se disuelve en alcohol tert-butílico o con agua;
la disolución así obtenida se mezcla con el ADN o el fármaco deseado
y la mezcla se liofiliza, obteniendo el complejo que podemos definir
como proliposoma-ADN o
proliposoma-fármaco, en forma de un polvo suave y
seco.
Los polvos así obtenidos (proliposomas) se pueden
usar para la preparación de composiciones farmacéuticas que se
pueden administrar mediante aerosoles, o que, alternativamente,
cuando se reconstituyen con agua, o con una disolución tampón
adecuada, se pueden administrar parenteral u oralmente.
Los liposomas complejados con ADN o con fármacos,
en forma sólida, también se pueden obtener con el procedimiento de
adsorción de la película de lípidos sobre un soporte inerte tal como
sorbitol, manitol u otros carbohidratos por medio del procedimiento
descrito anteriormente.
La formación de liposomas se probó por medio de
un procedimiento colorimétrico, usando un colorante soluble en agua,
de acuerdo con el siguiente procedimiento. Se obtuvo una disolución
acuosa del colorante soluble en agua Arsenazo III (P.m. = 776,37;
2,3 mg/ml).
Esta disolución se usó para hidratar las
películas de lípidos procedentes de la preparación anteriormente
mencionada en lugar del agua.
Se diluyó 100 veces con agua una alícuota de la
suspensión que contenía el liposoma que encapsulaba el
colorante.
Se usaron 2 ml de la suspensión de liposomas para
obtener la primera lectura de densidad óptica a 660 nm; la lectura
se obtuvo en relación a una mezcla igual definida como blanco. Se
añadieron 200 \mul de una disolución de CaCl_{2} (15 mg/ml; 100
mM) a la primera muestra, y se midió la densidad óptica a 660 nm
frente al blanco, al cual se añadieron 200 \mul de agua. El valor
de absorbancia obtenido se indicó como lectura 2. Proseguimos
añadiendo 100 \mul de una disolución de Triton
X-100 (5% v/v; concentración final del 0,26%) a la
muestra y 200 \mul de agua al blanco; la densidad óptica leída a
660 nm proporcionó el valor de la densidad óptica definida como
lectura 3. Para calcular el porcentaje de colorante encapsulado, se
usó la siguiente fórmula:
% de colorante
encapsulado = [Lectura 3 - Lectura 2] \times 100/ Lectura
3
El porcentaje de colorante encapsulado
proporciona una medida de la formación de liposomas y en promedio es
del 40% aproximadamente: la medida del tamaño de los liposomas se
realizó usando un Laser Light Scattering con un resultado
positivo.
Se disolvieron 20 mg (0,0234 mmol) de taxol y
1485 mg (1,638 mmol) de ST 772 en 20 ml de cloroformo.
La disolución se concentró hasta que se obtuvo
una película de lípidos sobre la superficie del matraz de
cristal.
Después de la eliminación de las últimas trazas
de cloroformo con una bomba de alto vacío, se añadieron 20 ml de
alcohol tert-butílico a la película de lípidos. Para obtener
una disolución clara, se tuvo que calentar hasta 60ºC. La
disolución se congeló inmediatamente a -70ºC con nitrógeno líquido
y se liofilizó durante 24 horas.
Para obtener la suspensión de liposomas SUV final
el producto liofilizado, hidratado con una disolución de PBS (20
ml), se sonicó durante 20 minutos a 0ºC.
A continuación se llevó a cabo la filtración
sobre un filtro de 400 nm para eliminar las trazas de titanio
liberado por la sonda del sonicador.
La estabilidad física de la preparación se probó
por medio de turbidimetría con el registro de una TDC (Time Drive
Curve) a 800 nm, a 20ºC, durante 6 horas.
Se registró una tendencia de turbidez constante,
indicativa de la estabilidad de la preparación, sin fenómenos de
precipitación.
Se obtuvieron liposomas MLV.
El liposoma y el plásmido de ADN se diluyeron
adecuadamente de manera separada en PBS. A continuación se añadió el
ADN al liposoma y el complejo liposoma-ADN se dejó
durante 30 minutos aproximadamente a 4ºC para facilitar la formación
de una interacción liposoma-ADN estable.
En los experimentos in vitro, se usó
1,2-dioleoíloxi-3-trimetil-amonio
propano (DOTAP) como lípido catiónico de referencia; se usaron 2,5
\mug de plásmido de ADN por 2 x 10^{5} células HeLa, la
concentración de liposomas era
9 \muM.
9 \muM.
En los experimentos in vivo, se usaron
ambos DOTAP y [2,3-(dioleoil)propil]trimetilamonio
(DOTMA) como lípidos catiónicos de referencia.
Las relaciones molares definidas en los
resultados se refieren a concentraciones nmol de los respectivos
lípidos catiónicos por mg de ADN.
En los experimentos de transfección in
vivo, se usaron 25 \mug de plásmido de ADN por animal.
El plásmido pCMVluc usado en estos experimentos
contenía el ADNc del gen de la luciferasa bajo el control
transcripcional del promotor de citomegalovirus (CMV).
La actividad de la proteína luciferasa se
determinó en células y tejidos usando el kit Boehringer Mannheim
(cat Nº 1669 893).
Las células se lavaron tres veces en PBS y a
continuación se retiraron de la placa con un raspador en tampón de
lisis (fosfato potásico 100 mM, pH 7,8; ditiotreitol - DTT 1 mM) y
se sometieron a tres ciclos consecutivos de congelación y
descongelación. Después de centrifugar en tubos Eppendorf de 1,5 ml,
el sobrenadante se usó para la prueba de luminiscencia no más de 5
horas después de la extracción de las proteínas. Las medidas de
emisión de luminiscencia se hicieron usando un luminómetro a 562 nm.
Después de congelar primero en N_{2} líquido seguido de molienda
fina para obtener un polvo, los tejidos se resuspendieron en tampón
de lisis y se incubaron durante 10-15 min en
hielo.
hielo.
A continuación las muestras se centrifugaron en
tubos Eppendorf de 2 ml y el sobrenadante se probó para su actividad
luciferasa.
El ADN celular se extrajo de acuerdo con el
procedimiento de lisis alcalina descrito por Sanbrook, Fritsch and
Maniatis en Molecular Cloning, 1989.
5 \mug del ADN extraído de las células se
preabsorbió sobre filtros de nylon (Boehringer) usando el aparato
bidimensional de Biorad. A continuación los filtros se prehibridaron
durante 4 horas a 65ºC con una disolución que contenía fosfato
sódico 0,5 M (NaPi), EDTA 1 mM, SDS al 7%. La sonda marcada con
^{32}P(alfa) se preparó usando el plásmido de ADN pCMVluc
como plantilla y el kit Amersham cebado aleatoriamente. El filtro se
hibridó en el mismo tampón de prehibridación durante 12 horas a 42ºC
usando 1 x 10^{6} CPM/ml. A continuación el filtro se sometió a 3
lavados de 10 minutos a 65ºC en tampón que contenía NaPi 40 mM, SDS
al 1%. El análisis autorradiográfico se llevó a cabo con la ayuda de
una cámara de fósforo que usa pantallas de fósforo activadas por
\beta-activación que se leen y se cuantifican por
medio de un sistema fotomultiplicador junto con un programa de
análisis de imágenes. La densitometría realizada en la bidimensional
se hizo usando un programa de análisis de imágenes
IP-LabGel.
Se llevaron a cabo una serie de pruebas de
transfección de plásmidos de ADN tanto in vitro como in
vivo.
Se usó cualquiera de los dos DOTAP y DOTMA como
lípidos catiónicos de referencia, cuya capacidad de transfección ha
sido ampliamente caracterizada y descrita por Abkenet y
colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci., EE.UU. 1993, 90,
6518. En los experimentos in vivo, se analizaron varias
relaciones molares diferentes de lípidos catiónicos a plásmidos de
ADN con el propósito de determinar la actividad de los lípidos
catiónicos y las respectivas concentraciones más eficaces para la
transfección génica. La capacidad de transfección de los diversos
liposomas se evaluó tanto in vitro como in vivo
usando el transportador del gen de la luciferasa contenido en el
plásmido pCMVluc, cuya actividad, en términos de unidades de
luminiscencia relativas (RLU) (descritas previamente) contribuye a
una cuantificación fácil.
Como alternativa, se evaluó la eficacia de la
transfección de una serie de liposomas catiónicos por medio de
análisis densitométrico (cámara de fósforo) de muestras de ADN
extraído de células transfectadas preabsorbidas sobre filtros de
nitrocelulosa (bidimensional) e hibridadas con marcadores de
plásmidos de ADN ^{32}P marcados, como se describe
previamente.
En este experimento, se evaluó la dependencia de
la eficacia de la transfección de hígado, pulmón y corazón sobre la
relación molar liposoma ST 983:ADN. Se probaron las siguientes
relaciones nm de liposoma por \mug de ADN: 12:1, 24:1, 36:1 y
48:1.
Grupos de 6 ratones Balb/c que pesaban 20 g
aproximadamente se trataron intravenosamente con las cantidades
anteriormente mencionadas de complejo liposoma-ADN
en volúmenes de 200 \mul de PBS y se sacrificaron 24 horas después
de la administración del complejo.
La actividad luciferasa extraída del tejido de
pulmón, corazón e hígado reveló una distribución de la luciferasa
predominantemente pulmonar a todas las relaciones molares
analizadas. De hecho, aproximadamente el 99% de la luciferasa total
extraída de los tres tejidos estaba localizada en los pulmones. La
relación molar liposoma:ADN de 12:1 demostró ser la mejor.
Las figuras 1 y 2 muestran la eficacia de la
transfección del plásmido de ADN del liposoma ST 772 en células
HeLa. Para este propósito, se llevó a cabo el análisis
densitométrico del ADN extraído de las células transfectadas con ST
272 y con DOTAP como lípido catiónico de referencia. Los resultados
del análisis de transferencia revelan cantidades de plásmido de ADN
del mismo orden de magnitud que las obtenidas con DOTAP.
Claims (28)
1. Constituidos de fórmula (I)
en la
que:
n es un número entero entre 1 y
3;
R es hidrógeno o alcanoílo, lineal
o ramificado, con 2-6 átomos de
carbono;
R_{1} y R_{2}, que pueden ser
iguales o diferentes, representan una cadena acílica lineal
saturada o insaturada, con 3-20 átomos de carbono;
y
X^{-} es el anión de un ácido
farmacológicamente
aceptable.
2. Constituido de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R se selecciona del grupo constituido por acetilo,
propionilo, butirilo, valerilo e isovalerilo.
3. Constituido de acuerdo con la reivindicación 1
en el que R_{1} y R_{2} se seleccionan del grupo constituido
por hexanoílo, undecanoílo, miristoílo, palmitoílo u oleoílo.
4. Constituido de acuerdo con la reivindicación
1, en el que X^{-} se selecciona del grupo constituido por
cloruro; bromuro; yoduro; aspartato; aspartato ácido; citrato;
citrato ácido; tartrato; tartrato ácido; fosfato; fosfato ácido;
fumarato, fumarato ácido; glicerofosfato; glucosa fosfato; lactato;
maleato; maleato ácido; mucato; orotato; oxalato; oxalato ácido;
sulfato; sulfato ácido; tricloroacetato; trifluoroacetato; metano
sulfonato; pamoato y pamoato ácido.
5. Constituido de acuerdo con la reivindicación
1, seleccionado del grupo constituido por:
- -
- éster de bromuro de L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol;
- -
- éster de bromuro de acetil L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol;
- -
- éster de bromuro de propionil L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3- dipalmitoil glicerol;
- -
- éster de bromuro de isobutiril L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol;
- -
- éster de bromuro de isovaleril L-carnitina con 2-hidroxiacetil-1,3-dipalmitoil glicerol;
- -
- éster de bromuro de L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol;
- -
- éster de bromuro de acetil L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol;
- -
- éster de bromuro de propionil L-carnitina con 1,3-dihexanoil-2-hidroxiacetil glicerol.
6. Uso de un constituido de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para la
preparación de liposomas.
7. Liposomas que comprenden un constituido de una
cualquiera de las reivindicaciones 1-5.
8. Liposomas de acuerdo con la reivindicación 7,
que además contienen lípidos adyuvantes.
9. Liposomas de acuerdo con la reivindicación 8,
en los cuales dicho lípido adyuvante se selecciona del grupo
constituido por colesterol,
1-palmitoil-2-oleoil
fosfatidil colina o dioleoil fosfatidil colina.
10. Uso de un liposoma de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 7-9, para la
preparación de una composición útil para el transporte de
constituidos farmacológicamente activos.
11. Uso de acuerdo con la reivindicación 10, en
el que el constituido farmacológicamente activo es un plásmido o
polinucleótido de origen natural o modificado.
12. Uso de acuerdo con la reivindicación 11, en
el que el plásmido o polinucleótido es útil en terapia génica.
13. Uso de acuerdo con la reivindicación 11, en
el que el plásmido o polinucleótido codifica para un péptido o
proteína útil como una vacuna.
14. Uso de acuerdo con la reivindicación 10, en
el que el constituido activo es un fármaco.
15. Uso de acuerdo con la reivindicación 14, en
el que dicho fármaco se selecciona del grupo constituido por agentes
anticancerígenos, antiangiogénicos, antivíricos, antibacterianos,
antifúngicos, antiprotozoicos, constituidos activos sobre el
sistema cardiovascular, o péptidos inmunogénicos.
16. Uso de acuerdo con la reivindicación 15, en
el que dicho fármaco es un agente anticancerígeno o
antiangiogénico.
17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en
el que dicho agente anticancerígeno se selecciona del grupo
constituido por taxol o un derivado camptotecina.
18. Uso de acuerdo con la reivindicación 17, en
el que dicho derivado de la camptotecina se selecciona del grupo
constituido por
- -
- 7-carbonitrilocamptotecina
- -
- 7-benciloxiiminometilcamptotecina, y
- -
- 7-butoxiiminometilcamptotecina.
19. Uso de acuerdo con las reivindicaciones
7-9 para la preparación de una composición
cosmética.
20. Composición farmacéutica que comprende un
liposoma de acuerdo con las reivindicaciones 7, 8 ó 9.
21. Composición de acuerdo con la reivindicación
20, en la cual dicho liposoma contiene un constituido
farmacológicamente activo.
22. Composición de acuerdo con la reivindicación
21, en la cual dicho constituido se selecciona del grupo constituido
por agentes anticancerígenos, antiangiogénicos, antivíricos,
antibacterianos, antifúngicos, antiprotozoicos, constituidos activos
sobre el sistema cardiovascular, o péptidos inmunogénicos.
23. Composición de acuerdo con la reivindicación
21, en la cual el constituido activo es un plásmido o polinucleótido
de origen natural o modificado.
24. Composición de acuerdo con la reivindicación
22, en la cual el plásmido o polinucleótido es útil en terapia
génica.
25. Composición de acuerdo con la reivindicación
22, en la cual el plásmido o polinucleótido codifica para un péptido
o proteína útil como una vacuna.
26. Composición cosmética que comprende un
liposoma de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones
7-9.
7-9.
27. Composición de acuerdo con la reivindicación
26, en la cual dicho liposoma contiene una sustancia con actividad
cosmética.
28. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 20-27, que se puede administrar
transdérmica, subcutánea, intramuscular, intravenosa parenteral u
oralmente, o en forma de pulverizadores nasales o bucales.
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Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7151191B2 (en) * | 2000-01-13 | 2006-12-19 | Emisphere Technologies, Inc. | Compounds and compositions for delivering active agents |
| DE10113446A1 (de) † | 2001-03-19 | 2002-09-26 | Schwarzkopf Gmbh Hans | Haarbehandlungsmittel mit Betainen |
| EP1530465B2 (en) | 2002-06-26 | 2015-12-16 | MediGene AG | Method of producing a cationic liposomal preparation comprising a lipophilic compound |
| PT2286795T (pt) * | 2002-06-26 | 2017-01-27 | Syncore Biotechnology Co Ltd | Processo de produção de uma preparação lipossomal catiónica que compreende um composto lipófilo |
| ITRM20040288A1 (it) * | 2004-06-11 | 2004-09-11 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso della 7-t-butossiimminometilcamptotecina per la preparazione di un medicamento per il trattamento delle neoplasie dell'utero. |
| GT200500310A (es) * | 2004-11-19 | 2006-06-19 | Compuestos organicos | |
| WO2006094203A1 (en) * | 2005-03-02 | 2006-09-08 | Northeastern University | Mitochondriotropic phospholipid vesicles |
| SA06270147B1 (ar) | 2005-06-09 | 2009-12-22 | نوفارتيس ايه جي | عملية لتخليق 5-(مثيل–1h–إيميدازول–1-يل )–3-(ثلاثي فلـورو مثيل)–بنزامـين |
| EP1915132A1 (en) * | 2005-08-10 | 2008-04-30 | Novartis AG | Microparticle compositions of the topoisomerase i inhibitor 7-tert-butoxyiminomethylcamptothecin |
| US20080213385A1 (en) * | 2005-08-10 | 2008-09-04 | Oskar Kalb | Formulations for 7- (T-Butoxy) Iminomethyl Camptothecin |
| US20100178325A1 (en) * | 2006-08-23 | 2010-07-15 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Amphiphilic nucleotide cochleate compositions and methods of using the same |
| KR20090115856A (ko) * | 2007-02-01 | 2009-11-09 | 시그마타우 인두스트리에 파르마슈티케 리우니테 에스.피.에이. | 캄포테신 유도체를 함유하는 약학적 조성물 |
| WO2008101173A2 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-21 | Cornell University | Biodegradable compositions and materials |
| WO2008144881A1 (en) * | 2007-05-28 | 2008-12-04 | Genesis Group Inc. | Biodegradable elastomers prepared by the condensation of an organic di-, tri- or tetra-carboxylic acid and an organic diol |
| MX2009013332A (es) | 2007-06-08 | 2010-01-25 | Mannkind Corp | Inhibidores de ire-1 alfa. |
| JP2011514809A (ja) | 2008-03-13 | 2011-05-12 | パーキンエルマー ラス インコーポレイテッド | 多重検出システムのための酵素基質 |
| EP2532649B1 (en) * | 2011-06-07 | 2015-04-08 | Incella GmbH | Amino lipids, their synthesis and uses thereof |
| WO2013032643A2 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Lipids capable of conformational change and their use in formulations to deliver therapeutic agents to cells |
| TWI773147B (zh) | 2013-03-15 | 2022-08-01 | 美商珀金埃爾默健康科技公司 | 關於用於溶酶體儲積症之測試的化合物及方法 |
| CA3016457A1 (en) | 2016-03-02 | 2017-09-08 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Sting activating nanovaccine for immunotherapy |
| CN110997624B (zh) * | 2017-06-06 | 2024-05-24 | 韦恩州立大学 | 与肉毒碱衍生的材料相关的方法和组合物 |
| CN115177608B (zh) * | 2022-07-26 | 2023-12-05 | 南方医科大学南方医院 | 长链酰基肉碱类化合物在制备预防和/或治疗肝癌的药物中的应用 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5008288A (en) * | 1986-01-06 | 1991-04-16 | Alfred Stracher | Carnitine directed pharmaceutical agents |
| US4866040A (en) * | 1986-01-06 | 1989-09-12 | Alfred Stracher | Aminocarnitine directed pharmaceutical agents |
| IT1230142B (it) * | 1989-05-03 | 1991-10-14 | Fidia Spa | Derivati della carnitina, processo per la loro preparazione e impiego in terapia umana |
| WO1991019726A1 (en) * | 1990-06-15 | 1991-12-26 | Wake Forest University | Ether lipid-nucleoside covalent conjugates |
| IT1248321B (it) * | 1991-05-15 | 1995-01-05 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri di acil l-carnitine con l'acido gamma-idrossibutirrico per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di epatopatie |
| IT1258370B (it) * | 1992-03-02 | 1996-02-26 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri della l-carnitina e di acil l-carnitine dotati di attivita' miorilassante selettiva sull'apparato gastro-intestinale e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| US5972600A (en) * | 1992-04-03 | 1999-10-26 | The Regents Of The University Of California | Separation of active complexes |
| IT1263013B (it) * | 1992-10-20 | 1996-07-23 | Avantgarde Spa | Esteri della l-carnitina e di alcanoil l-carnitine con l'acido glicolico o suoi esteri e composizioni farmaceutiche contenenti tali per il trattamento di affezioni cutanee. |
| US5552156A (en) * | 1992-10-23 | 1996-09-03 | Ohio State University | Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs |
| US5512671A (en) * | 1993-02-16 | 1996-04-30 | Wake Forest University | Ether lipid-nucleoside covalent conjugates |
| IT1261984B (it) * | 1993-06-22 | 1996-06-11 | Avantgarde Spa | Uso di esteri della l-carnitina o di acil l- carnitine con idrossiacidi per produrre composizioni farmaceutiche per il trattamento di affezioni cutanee. |
| CA2163860A1 (en) * | 1993-06-30 | 1995-01-12 | Chung C. Hsu | Method for preparing liposomes |
| IT1273987B (it) * | 1994-09-29 | 1997-07-14 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di esteri ftalidilidenici della carnitina e di alcanoil carnitine per il trattamento dello shock endotossico |
| US6008202A (en) * | 1995-01-23 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| US6316652B1 (en) * | 1995-06-06 | 2001-11-13 | Kosta Steliou | Drug mitochondrial targeting agents |
| AU707734B2 (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-15 | Regents Of The University Of California, The | Stabilization of polynucleotide complexes |
| US5811406A (en) * | 1995-06-07 | 1998-09-22 | Regents Of The University Of California | Dry powder formulations of polynucleotide complexes |
| IT1283955B1 (it) * | 1996-03-20 | 1998-05-07 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Bis alcanoil esteri della carnitina ad attivita' antibatterica, antimicotica ed antiprotozoaria. |
| JP2000516090A (ja) * | 1996-07-26 | 2000-12-05 | スローン―ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ | 遺伝子的免疫化のための方法と試薬 |
| US6056973A (en) * | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic liposome composition and method of preparation |
| US6071532A (en) * | 1996-10-15 | 2000-06-06 | Emory University | Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof |
| IT1299172B1 (it) * | 1998-05-06 | 2000-02-29 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Esteri perfluorurati di alcanoil l-carnitine utilizzabili quali lipidi cationici per l'immissione intracellulare di composti |
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