ES2236028T3 - Sulfonamidas y sus derivados que modulan la actividad de la endotelina. - Google Patents

Sulfonamidas y sus derivados que modulan la actividad de la endotelina.

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ES2236028T3 ES00988434T ES00988434T ES2236028T3 ES 2236028 T3 ES2236028 T3 ES 2236028T3 ES 00988434 T ES00988434 T ES 00988434T ES 00988434 T ES00988434 T ES 00988434T ES 2236028 T3 ES2236028 T3 ES 2236028T3
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula IV: o derivados o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde: X es S; R1 es alquilo C1-C6; R2 es alquilo C1-C6; cada uno de R3 y R4 es hidrógeno; R5 es alquilo C1-C6 o -(CH2)xC(O)(CH2)yCH3; R6 es alquilo C1-C6; -(CH2)xC(O)(CH2)yCH3, o heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N; R7 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alcoxi C1-C6, S(O)2NHR50 y OS(O)2NR38R39; donde cada uno de R38 y R39 se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C1-C6; cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14; R50 es hidrógeno o alquilo C1-C6; Y es O; R8 es CONR38R39, CN, heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N, alquilsulfonilo, haluro, pseudohaluro, hidroxialquilo, C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3 o C(=N-OR38)(CH2)yCH3; R9 es H; cada uno de Y1 e Y2 es independientemente carbono o nitrógeno; a es 1 si Y2 es carbono; a es 0 si Y2 es nitrógeno; b es 1 si Y1 es carbono; b es 0 si Y1 es nitrógeno; y W es NH.

Description

Sulfonamidas y sus derivados que modulan la actividad de la endotelina.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos que modulan la actividad de la familia de endotelina de péptidos. En particular, la invención se refiere al uso de sulfonamidas y derivados de sulfonamidas como agonistas y antagonistas de endotelina.
Antecedente de la invención
El endotelio vascular libera una diversidad de sustancias vasoactivas, incluyendo el péptido vasoconstrictor derivado del endotelio, endotelina (ET), (véase, por ejemplo, Vanhoutte et al., (1986) Annual Rev. Physiol. 48: 307-320; Furckgott y Zawadski (1980) Nature 288: 373-376). El endotelio, que se identificó originalmente en el cultivo sobrenadante de células endoteliales aórticas porcinas (véase, Yanagisawa et al., (1988) Nature 332: 411-415), es un potente péptido vasoconstrictor del aminoácido veintiuno. Es un vasopresor muy potente conocido y se produce por numerosos tipos de células, incluyendo las células del endotelio, traquea, riñón y cerebro. La endotelina se sintetiza como precursor preproendotelina de doscientos y trescientos aminoácidos que contiene una secuencia de señales que se escinde por una proteasa endógena para producir un péptido de treinta y ocho (humano) o treinta y nueve (porcino) aminoácidos. Este intermedio, denominado endotelina grande, se procesa in vivo para la forma biológicamente activa madura de una enzima conversora de endotelina putativa (ECE) que parece ser una proteasa neutra dependiente de metal (véase, por ejemplo, Kashiwabara et al., (1989) FEBS Lttrs. 247: 337-340). La escisión se requiere para la inducción de respuestas fisiológicas (véase, por ejemplo, von Geldern et al., (1991) Peptide Res. 4: 32-35). En las células endoteliales porcinas, el intermedio de treinta y nueve aminoácidos, endotelina grande, se hidroliza en el enlace Trp^{21}-Val^{22} para generar la endotelina-1 y un fragmento de extremo C. Una escisión similar se produce en células humanas en el intermedio de treinta y ocho aminoácidos. Se han identificado tres isopéptidos de endotelina distintos, endotelina-1, endotelina-2 y endotelina-3, que muestran una potente actividad vasoconstrictora.
La familia de tres isopéptidos endotelina-1, endotelina-2 y endotelina-3 se codifica por una familia de tres genes (véase, Inoute et al., (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2803-2867; véase, también Saida et al., (1989) J. Biol. Chem. 264: 14613-14616). Las secuencias de nucleótidos de los tres genes humanos se conservan altamente dentro de la región que codifica los péptidos de 21 aminoácidos maduros y las porciones de extremo C de los péptidos son idénticas. La endotelina-2 es (Trp^{6}, Leu^{7}) endotelina-1 y la endotelina-3 es (Thr^{2}, Phe^{4}, Thr^{5}, Tyr^{6}, Lys^{7}, Tyr^{14}) endotelina-1. Estos péptidos se conservan altamente, de esta manera, al final del extremo C. La liberación de las endotelinas desde las células endoteliales cultivadas se modula por una diversidad de estímulos químicos y físicos y parece regularse en el nivel de transcripción y/o traslación. La expresión del gen que codifica la endotelina-1 se aumenta con estímulos químicos, incluyendo adrenalina, trombina e ionóforo Ca^{2+}. La producción y liberación de endotelina desde el endotelio se estimula por angiotensina II, vasopresina, endotoxina, ciclosporina y otros factores (véase Brooks et al., (1991) Eur. J. Pharm. 194: 115-117) y se inhibe mediante óxido nítrico. Las células endoteliales parecen segregar factores relajantes derivados del endotelio de vida corta (EDRF), incluyendo óxido nítrico o una sustancia relacionada (Palmer et al., (1987) Nature 327: 524-526), cuando se estimula por agentes vasoactivos, tales como acetilcolina y bradiquinina. La vasoconstricción inducida por endotelina también se atenúa por el péptido natriurético auricular (ANP).
Los péptidos de endotelina muestran numerosas actividades biológicas in vitro e in vivo. La endotelina provoca una vasoconstricción fuerte y sostenida in vivo en ratas y en preparaciones de músculo liso vascular aislado; también provoca la liberación de eicosanoides y del factor de relajante de derivado del endotelio (EDRF) a partir de lechos vasculares percondensados. La administración intravenosa de endotelina-1 y la adición in vitro a tejidos musculares lisos vasculares y otros produce efectos presores y contracción de larga duración, respectivamente (véase, por ejemplo, Bolger et al., (1991) Can. J. Physiol. Pharmacol. 69: 406-413). En fibras vasculares aisladas, por ejemplo, la endotelina-1 es un agente contráctil potente (EC_{50} = 4 x 10^{-10} M), de actuación lenta pero persistente. in vivo, una dosis unitaria eleva la presión sanguínea en aproximadamente veinte a treinta minutos. La vasoconstricción inducida por endotelina no se afecta mediante antagonistas para neurotransmisores conocidos o factores hormonales, pero se suprime con antagonistas del canal de calcio. El efecto de los antagonistas del canal de calcio, sin embargo, es probablemente el resultado de la inhibición del influjo de calcio, ya que el influjo de calcio parece requerirse para la respuesta contráctil de larga duración a la endotelina.
La endotelina también media en la liberación de renina, estimula la liberación de ANP e induce una acción inotrópica positiva en el atrio de cobaya. En el pulmón, la endotelina-1 actúa como un potente broncoconstrictor (Maggi et al., (1989) Eur. J. Pharmacol. 160: 179-182). La endotelina aumenta la resistencia vascular renal, disminuye el flujo sanguíneo renal y disminuye la velocidad de filtrado glomerular. Es un potente mitógeno para las células mesangiales glomerulares e invoca la cascada de fosfoinostidas en tales células (Simonson et al., (1990) J. Clin. Invest. 85: 790-797).
Hay sitios específicos de unión de alta afinidad (constantes de disociación en el intervalo de 2-6 x 10^{-10} M) para las endotelinas en el sistema vascular y en otros tejidos, incluyendo el intestino, corazón, pulmones, riñones, bazo, glándulas adrenales y cerebro. Las uniones no se inhiben con catecolaminas, péptidos vasoactivos, neurotoxinas o antagonistas del canal de calcio. La endotelina se une e interactúa con sitios receptores que son distintos de otros receptores autonómicos y canales de calcio dependientes del voltaje. Los estudios de unión competitiva indican que hay múltiples clases de receptores con diferentes afinidades para los isopéptidos de endotelina. Las sarafotoxinas, un grupo de toxinas de péptidos del veneno de la serpiente Atractaspis eingadensis que provoca un grave vasoespasmo coronario en las víctimas de mordedura de serpiente, tienen una homología estructural y funcional con al endotelina-1 y se unen competitivamente a los mismos receptores de la membrana cardiaca (Kloog et al., (1989) Trends Pharmacol. Sci. 10: 212-214).
Se han identificado dos receptores distintos de endotelina, denominados ET_{A} y ET_{B}, y se han aislado clones de ADN que codifican cada receptor (Arai et al., (1990) Nature 348: 730-732; Sakurai et al., (1990) Nature 348: 732-735). Basándose en las secuencias de aminoácidos para las proteínas que se codifican por el ADN clonado, parece que cada receptor contiene siete dominios con tramo de trans-membrana y muestra similitud estructural con las proteínas de membrana acopladas a proteína G. El ARN mensajero que codifica ambos receptores se ha detectado en una diversidad de tejidos, incluyendo corazón, pulmón, riñón y cerebro. La distribución de los subtipos de receptores es específica del tejido (Martin et al., (1989) Biochem. Biophys. Rers. Commun. 162: 130-137). Los receptores de ET_{A} parecen ser selectivos para la endotelina-1 y son predominantes en tejidos cardiovasculares. Los receptores de ET_{B} son predominantes en tejidos no cardiovasculares, incluyendo el sistema nervioso central y el riñón, e interactúan con los tres isopéptidos de endotelina (Sakurai et al., (1990) Nature 348: 732-734). Además, los receptores de ET_{A} se encuentran en el músculo liso vascular, se unen a la vasoconstricción y se han asociado con enfermedades cardiovasculares, renales y del sistema nervioso central; mientras que los receptores de ET_{B} se encuentran en el endotelio vascular, se unen a la vasodilatación (Takayanagi et al., (1991) FEBS Lttrs. 282: 103- 106) y se han asociado con trastornos broncoconstrictivos.
En virtud de la distribución de los tipos de receptores y de la afinidad diferencial de cada isopéptido para cada tipo de receptor, la actividad de los isopéptidos de endotelina varía en diferentes tejidos. Por ejemplo, la endotelina-1 inhibe la endotelina-1 marcada con ^{125}I que se une en tejidos cardiovasculares de cuarenta a setecientas veces más potentemente que la endotelina-3 La endotelina-1 marcada con ^{125}I que se une en tejidos no cardiovasculares, tales como el riñón, glándula adrenal y cerebelo, se inhibe en la misma proporción por la endotelina-1 que por la endotelina-3, lo que indica que los receptores de ET_{A} predominan en tejidos cardiovasculares y los receptores de ET_{B} predominan en tejidos no cardiovasculares.
Los niveles en plasma de endotelina se elevan en ciertos patologías (véase, por ejemplo, la Solicitud PCT internacional WO 94/27979 y la Patente de Estados Unidos Nº 5.382.569, cuyas descripciones se incorporan en este documento en su totalidad como referencia). Los niveles en plasma de endotelina-1 en individuos saludables, que se mide por radioinmunoensayo (RIA), son de aproximadamente 0,26-5 pg/ml. Los niveles en sangre de endotelina-1 y su precursor, endotelina grande, se elevan en choque, infarto de miocardio, angina vasoespástica, insuficiencia renal y en una diversidad de trastornos de tejido conectivo. En pacientes que padecen hemodiálisis o transplante de riñón o sufren de choque cardiogénico, se ha observado infarto de miocardio o niveles de hipertensión pulmonar de 35 pg/ml (véase Stewart et al., (1991) Annals Internal Med. 114: 464-469). Como la endotelina es probablemente un factor local, más que sistémico regulador, es probable que los niveles de endotelina en la interacción endotelio/músculo liso sean mucho mayores que los niveles en circulación.
También se han medido niveles elevados de endotelina en pacientes que padecen de enfermedad cardiaca isquémica (Yasuda et al., (1990) Amer. Heart J. 119: 801-806, Ray et al., (1992) Br. Heart. J. 67: 383-386). La inmunoreactividad a endotelina circulante y de tejido se aumenta más de dos veces en pacientes con ateroesclerosis avanzada (Lerman et al., (1991) New Engl. J. Med. 325: 997-1001). La inmunoactividad de endotelina aumentada también se ha asociado con la enfermedad de Buerger (Kanno et al., (1990) J. Amer. Med. Assoc. 264: 2868) y el fenómeno de Raynaud (Zamora et al., (1990) Lancet 336 114-1147). Se observaron niveles de endotelina en circulación aumentados en pacientes que padecían de angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA) (Tahara et al., (1991) Metab. Clin. Exp. 40: 1235-1237; Sanjay et al., (1991) Circulation 84 (Supl. 4): 726) y en individuos (Miyauchi et al., (1992) Jpn. J. Pharmacol. 58: 247P; Stewart et al., (1991) Ann. Internal Medicine 114: 646-469) con hipertensión pulmonar. De esta manera, hay un dato clínico que soporta la correlación entre los niveles aumentados de endotelina y numerosos patologías.
Agonistas y antagonistas de endotelina
Como la endotelina se asocia con ciertas patologías y está implicada en numerosos efectos fisiológicos, son de interés los compuestos que puedan interferir con o potenciar las actividades asociadas con endotelina, tales como la interacción del receptor de endotelina y la actividad vasoconstrictora. Se han identificado compuestos que muestran actividad antagonista de endotelina. Por ejemplo, se ha identificado un producto de fermentación de Streptomyces misakiensis, denominado BE-18257B, como antagonista del receptor de ET_{A}. BE-18257B es un pentapéptido cíclico, ciclo(D-Glu-L-Ala-allo-D-Ile-L-Leu-D-Trp), que inhibe la endotelina-1 marcada con ^{125}I que se une en tejidos cardiovasculares de una manera dependiente de la concentración (IC_{50} 1,4 \muM en músculo liso aórtico, 0,8 \muM en membranas ventriculares y 0,5 \muM en células de músculo liso aórticas cultivadas), pero falla en la inhibición de la unión a los receptores en tejidos en los que predominan los receptores de ET_{B} en concentraciones superiores a 100 \muM. Se han sintetizado pentapéptidos cíclicos relacionados con BE-18257B, tales como ciclo(D-Asp-Pro-D-Val-Leu-D-Trp) (BQ-12), y muestran que inhiben la actividad como antagonistas del receptor de ET_{A} (véase la Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa y col.; véase también el documento EP A1 0 436 189 para BANYU PHARMACEUTICAL CO., LTD (7 de octubre de 1991)). Los estudios que miden la inhibición mediante estos péptidos cíclicos de endotelina-1 que se une a los receptores específicos del endotelio indican que estos péptidos cíclicos se unen preferentemente a receptores de ET_{A}. Se han identificado otros antagonistas de ET_{A} peptídicos y no peptídicos (véanse, por ejemplo, los documentos 5.352.800, 5.334.598, 5.352.659, 5.248.807, 5.240.910, 5.198.548, 5.187.195, 5.082.838). Éstos incluyen otros pentapéptidos cíclicos, aciltripéptidos, análogos de hexapéptidos, ciertos derivados de antraquinona, ácidos indanocarboxílicos, ciertas N-pirimidilbencenosulfonamidas, ciertas bencenosulfonamidas y ciertas naftalenosulfonamidas (Nakajima et al., (1991) J. Antiobiot. 44: 1348-1356; Miyata et al., (1992) J. Antibiot. 45: 74-8; Ishikawa et al., (1992) J. Med. Chem. 35: 2139-2142; Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.; documentos EP A1 0 569 193; EP A1 0 558 258; EP A1 0 436 189 para BANAYU PHARMACEUTICAL CO., LTD (7 de octubre de 1991); Solicitud de Patente Canadiense 2.067.288; Solicitud de Patente Canadiense 2.071.193; Patente de Estados Unidos Nº 5.208.243; Patente de Estados Unidos Nº 5.270.313; Patente de Estados Unidos Nº 5.612.359, Patente de Estados Unidos Nº 5.514.698, Patente de Estados Unidos Nº 5.378.715; Cody et al., (1993) Med. Chem. Res. 3: 154-162; Miyata et al. (1992) J. Antibiot 45: 1684-1685; documento EP A1 0 496 452; Clozel et al., (1993) Nature 365: 759-761; Solicitud de Patente Internacional WO93/08799; Nishikibe et al., (1993) Life Sci. 52: 717-724; y Benigni et al., (1993) Kidney Int. 44: 440-444). También se describen numerosas sulfonamidas que son antagonistas del péptido de endotelina en las Patentes de Estados Unidos Nº 5.464.853, 5.594.021, 5.591.761, 5.571.821, 5.514.691, en la solicitud PCT Internacional Nº 96/31492 y en la solicitud PCT Internacional Nº WO 97/27979. En general, los compuestos identificados tienen actividades en ensayos in vitro como antagonistas de ET_{A} en concentraciones en el orden de aproximadamente 50-100 \muM o menos. Un número de tales compuestos también han mostrado poseer actividad en modelos animales in vivo.
Antagonistas y agonistas de endotelina como agentes terapéuticos
Se ha reconocido que los compuestos que muestran actividad en concentraciones IC_{50} o EC_{50} en el orden de 10^{-4} o menos en ensayos convencionales in vitro que ensayan la actividad antagonista o agonista de endotelina tienen utilidad farmacológica (véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 5.352.800, 5.334.598, 5.352.659, 5.248.807, 5.240.910, 5.198.548, 5.187.195 y 5.082.838). En virtud de su actividad, tales compuestos se consideran útiles para el tratamiento de hipertensión tal como insuficiencia periférica circulatoria, enfermedad cardiaca tal como angina de pecho, cardiomiopatía, arteriosclerosis, infarto de miocardio, hipertensión pulmonar, vasoespasmo, restenosis vascular, enfermedad de Raynaud, apoplejía cerebral tal como espasmo arterial cerebral, isquemia cerebral, espasmo cerebral de fase tardía posterior a hemorragia subaraquinoide, asma, broncoconstricción, insuficiencia renal, particularmente insuficiencia renal post-isquémica, nefrotoxicidad por ciclosporina tal como insuficiencia renal aguda, colitis así como otras enfermedades inflamatorias, choque endotóxido provocado por o asociado con endotelina y otras enfermedades en las que está implicada la endotelina.
En vista de los numerosos efectos fisiológicos de la endotelina y de su asociación con ciertas enfermedades, se cree que la endotelina juega un papel crítico en estas afecciones patofisiológicas (véase, por ejemplo, Saito et al., (1990) Hypertension 15: 734-738; Tomita et al., (1989) N. Engl. J. Med. 321: 1127; Kurihara et al., (1989) J. Cardiovasc. Pharmacol. 13 (Supl. 5): S13-S17); Doherty (1992) J. Med. Chem. 35: 1493-1508; Morel et al., (1989) Eur. J. Pharmacol. 167: 427-428). Un conocimiento más detallado sobre la función y estructura de la familia de péptidos de endotelina debería proporcionar una mejor comprensión sobre la progresión y tratamiento de tales afecciones.
Para ayudar a entender mejor y a desarrollar tratamientos para trastornos mediados o relacionados con endotelina, existe una necesidad para identificar compuestos que modulen o alteren la actividad de la endotelina. La identificación de los compuestos que modulan la actividad de endotelina, tales como aquellos que actúan como agonistas antagonistas o agonistas específicos, puede no sólo ayudar a elucidar la función de endotelina, sino que también puede producir compuestos terapéuticamente útiles. En particular, los compuestos que interfieren específicamente con la interacción de péptidos de endotelina con los receptores de ET_{A} y ET_{B} deberían ser útiles para identificar características esenciales de péptidos de endotelina, deberían ayudar en el diseño de agentes terapéuticos y deberían ser útiles como agentes terapéuticos específicos para enfermedades. Como se ha indicado anteriormente, muchos de los compuestos, particularmente los compuestos de sulfonamidas, son potentes antagonistas de endotelina, y, de esta manera, son candidatos clínicos ideales. Para el uso clínico, se necesitan compuestos potentes optimizados para actividad in vivo así como formulaciones estables y formulaciones adecuadas para varias vías de administración.
Por lo tanto, es un objeto de este documento proporcionar compuestos que tengan la capacidad de modular la actividad biológica para uno o más de los isopéptidos de endotelina y que muestran actividad in vivo. Otro objeto es proporcionar compuestos que tengan uso como antagonistas de endotelina específicos in vivo. También es un objeto el uso de los compuestos que interactúan específicamente con o inhiben la interacción de péptidos de endotelina con receptores de ET_{A}. También es un objeto de este documento proporcionar formulaciones de tales compuestos útiles para el tratamiento de enfermedades mediadas por endotelina. Estos compuestos deberían ser útiles como agentes terapéuticos para el tratamiento de trastornos y enfermedades mediados por endotelina.
Sumario de la invención
Se proporcionan sulfonamidas, formulaciones de sulfonamidas y métodos para modular la interacción de un péptido de endotelina con receptores de ET_{A} y/o ET_{B}. En particular, se proporcionan sulfonamidas, formulaciones de sulfonamidas y métodos para inhibir la unión de un péptido de endotelina a receptores de ET_{A} o ET_{B}. De acuerdo con la presente invención, se proporciona un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
Los compuestos de la presente invención muestran una potencia, selectividad, eficacia, biodisponibilidad, vida media in vivo y/o estabilidad superior comparados con los compuestos en los que el grupo arilo tiene más de dos sustituyentes hidrógeno, mientras que evita los efectos toxicológicos asociados con hidrofobicidad. Además, estos compuestos muestran buenos perfiles en ensayos de toxicidad in vitro e in vivo convencionales.
Se muestra en este documento que la administración in vivo se desea para conseguir el mejor grado de hidrofilicidad de la sulfonamida proporcionada en este documento con el fin de reducir las propiedades hemolíticas potenciales de los compuestos.
Los compuestos para uso en las formulaciones y métodos proporcionados en este documento son sulfonamidas que tienen la fórmula general I.
Ar^{2} --- SO_{2} --- 
\delm{N}{\delm{\para}{H}}
--- Ar^{1}
y los derivados o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Ar^{1} es un 3- o 5-isoxazolilo que tiene la fórmula II:
1
en la que cada uno de R^{1} y R^{2} es un alquilo C_{1}-C_{6}.
Ar^{2} es un tiofeno que tiene la fórmula:
2 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que M es -C(Y)-W-; W es NH; Y es O; R^{8} es CONR^{38}R^{39}, CN, heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados entre O y N, alquilsulfonilo, haluro, pseudohaluro, hidroxialquilo, C(O)(CH_{2})_{x}S(O)_{2}(CH_{2})_{y}CH_{3} o (C=N-OR^{38})(CH_{2})_{y}NH_{3};
cada uno de R^{3} y R^{4} es hidrógeno;
cada uno de Y^{1} e Y^{2} son independientemente carbono o nitrógeno;
a es 1 si Y^{2} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno y b es 1 si Y^{1} es carbono y a es 0 si Y^{1} es nitrógeno;
R^{5} es alquilo C_{1}-C_{6} o (CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3};
R^{6} es alquilo C_{1}-C_{6}, (CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}; o heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados entre O y N;
R^{7} es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo C_{1}-C_{6}, S(O)_{2}NHR^{50} u OS(O)_{2}NR^{38}R^{39};
R^{9} es H;
donde cada uno de R^{38} y R^{39} se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6}; cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14; y R^{50} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6}.
En todas las realizaciones de este documento, X es S.
En ciertas realizaciones, los compuestos se seleccionan con la condición de que como mucho dos de R^{7} y R^{9} son hidrógeno.
En otras realizaciones, los compuestos se seleccionan con la condición de que R^{8} no es COOH, CONH_{2} o fenilo.
De los compuestos descritos en este documento, se prefieren aquellos que inhiben o aumentan una actividad mediada por endotelina en aproximadamente 50% en concentraciones de menos de 10 \muM. Los más preferidos son aquellos que inhiben o aumentan una actividad mediada por endotelina en aproximadamente 50% en concentraciones de menos de aproximadamente 1 \muM, más preferiblemente menos de aproximadamente 0,1 \muM, aún más preferiblemente menos de aproximadamente 0,01 \muM y aún más preferiblemente menos de aproximadamente 0,001 \muM. Se aprecia que, como se describe a continuación, la concentración IC_{50} determinada en los ensayos in vitro es una función no lineal de la temperatura de incubación. Los valores preferidos indicados en este documento se refieren a los ensayos que se realizan a 4ºC. Cuando se realizan los ensayos a 24ºC, se observan concentraciones IC_{50} algo mayores (véase la Tabla 1). Por consiguiente, las concentraciones IC_{50} preferidas son aproximadamente 10 veces superiores. Además, entre estos compuestos, se prefieren aún más aquellos que muestran la mayor biodisponibilidad y estabilidad, que se determina usando modelos animales convencionales.
También entre los compuestos más preferidos para el uso en los métodos proporcionados en este documento están aquellos que son selectivos para ET_{A}, es decir, que interactúan con los receptores de ET_{A} a concentraciones sustancialmente inferiores (a una IC_{50} de al menos aproximadamente 10 veces menos, preferiblemente 100 veces menos) que cuando interactúan con receptores de ET_{B}. En particular, se prefieren los compuestos que interactúan con ET_{A} con una IC_{50} de menos de aproximadamente 10 \muM, preferiblemente menos de 1 \muM, más preferiblemente menos de 0,1 \muM pero con ET_{B} con una IC_{50} de más de aproximadamente 10 \muM o compuestos que interactúan con ET_{B} con una IC_{50} de menos de aproximadamente 10 \muM, preferiblemente menos de 10 \muM, más preferiblemente menos de 0,1 \muM, pero con ET_{A} con una IC_{50} de más de aproximadamente 10 \muM.
También son de interés los derivados farmacéuticamente aceptables, incluyendo sales, ésteres, ácidos y bases, solvatos, hidratos y profármacos de las sulfonamidas. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo, pero sin limitación, sales de amina, tales como, pero sin limitación, N,N'-dibenciletilenodiamina, cloroprocaína, colina, amoniaco, dietanolamina y otras hidroxialquilaminas, etilenodiaminas, N-metilglucamina, procaína, N-bencilfenetilamina, 1-para-clorobencil-2-pirrolidin-1'-ilmetilbencimidazol, dietilamina y otras alquilaminas, piperazina, tris(hidroximetil)aminoetano, sales de metales alcalinos, tales como, pero sin limitación, litio, potasio y sodio, sales de metales alcalinotérreos, tales como, pero sin limitación, bario, calcio y magnesio, sales de metales de transición, tales como, pero sin limitación, cinc y otras sales de metales, tales como, pero sin limitación, hidrogenofosfato sódico y fosfato disódico, preferiblemente sales sódicas, más preferiblemente la sal sodio y también incluyendo, pero sin limitación, sales de ácidos minerales, tales como, pero sin limitación, clorhidratos y sulfatos, sales de ácidos orgánicos, tales como, pero sin limitación, acetatos, lactatos, malatos, tartratos, citratos, ascorbatos, succinatos, butiratos, valeratos y fumaratos. Se prefieren las sales de metales alcalinos, particularmente sales sódicas. Las sales más preferidas son las sales sódicas.
También se proporcionan formulaciones farmacéuticas para administración mediante una vía medio apropiados que contienen concentraciones eficaces de uno o más de los compuestos proporcionados en este documento o los derivados farmacéuticamente aceptables, tales como sales, ésteres, ácidos y bases, solvatos, hidratos y profármacos, de las sulfonamidas, preferiblemente las sales, más preferiblemente las sales sódicas, que incluyen, pero sin limitación, sales sódicas y sales de hidrogenofosfato sódico, más preferiblemente la sal sódica, de los mismos que liberan cantidades eficaces para el tratamiento de hipertensión, apoplejía, enfermedades cardiovasculares, enfermedades cardiacas incluyendo infarto de miocardio, hipertensión pulmonar, hipertensión pulmonar neonatal, hipertensión mediada por eritropoyetina, enfermedades respiratorias, enfermedades inflamatorias incluyendo asma, broncoconstricción, enfermedades oftalmológicas incluyendo glaucoma y perfusión retinal inadecuada, enfermedades gastroentéricas, insuficiencia renal, choque endotóxico, trastornos menstruales, afecciones obstétricas, quemaduras, laminitis, disfunción eréctil, menopausia, osteoporosis y trastornos metabólicos óseos, trastornos climactéricos incluyendo sofoco, patrones de coagulación anormales, incomodidad urogenital e incidencia aumentada de enfermedad cardiovascular y otros trastornos asociados con al reducción de la función ovárica en mujeres de mediana edad, pre-eclampsia, control y manejo del parto durante el embarazo, choque anafiláctico, choque hemorrágico, trastornos de óxido nítrico atenuados y otras enfermedades en las que se implican las respuestas fisiológicas mediadas por endotelina o que implican vasoconstricción o cuyos síntomas pueden aminorarse mediante la administración de un antagonista o agonista de endotelina.
Las formulaciones son composiciones adecuadas para la administración mediante cualquier vía deseada e incluyen soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, comprimidos dispersables, píldoras, cápsulas, polvos, polvos secos para inhalación, formulaciones de liberación sostenida, aerosoles para liberación nasal y respiratoria, parches para liberación transdérmica y cualquier otra vía adecuada. Las composiciones deberían ser adecuadas para la administración oral, administración parenteral por inyección, incluyendo subcutáneamente, intramuscularmente o intravenosamente o en forma de una solución o emulsión acuosa u oleosa inyectable, administración transdérmica y otras vías seleccionadas.
Se proporcionan polvos liofilizados de los derivados de sulfonamida, métodos para la preparación de los mismos y formulaciones que contienen formas reconstituidas de los polvos liofilizados. También se proporcionan viales y ampollas y jeringas y otros recipientes adecuados que contienen los polvos.
Las formulaciones preferidas incluyen un polvo liofilizado estéril que contiene sales farmacéuticamente aceptables, preferiblemente sales sódicas, más preferiblemente una sal sódica, de una sulfonamida, y también incluyen cápsulas y comprimidos. Las cantidades y concentraciones eficaces son eficaces para aminorar cualquiera de los síntomas de cualquiera de los trastornos.
En una realización, las formulaciones son sólidos liofilizados que contienen una o más sales, preferiblemente sales de hidrogenofosfato sódico o de sodio, más preferiblemente sales sódicas, de uno o más compuestos sulfonamida de fórmula I y también contienen uno o más de los siguientes: un tampón, tal como fosfato sódico o potásico, o citrato; un agente solubilizante, tal como LABRASOL (polietilenglicol-glicéridos capricos caprílicos 8 comercializado por Gattefosse SA, Francia), DMSO, bis(trimetilsilil)acetamida, etanol, propilenglicol (PG) o polivinilpirrolidona (PVP); y un azúcar u otro carbohidrato, tales como sorbitol o dextrosa.
En otras realizaciones, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, preferiblemente cápsulas o comprimidos. En una realización preferida, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, preferiblemente cápsulas o comprimidos, que contienen 10-100%, preferiblemente 50-95%, más preferiblemente 75-85%, más preferiblemente 80-85%, en peso, de una o más sales, preferiblemente sales de hidrogenofosfato sódico o de sodio, más preferiblemente las sales sódicas, de uno o más compuestos sulfonamida de fórmula I; aproximadamente 0-25%, preferiblemente 8-15%, de un excipiente o un aglutinante, tal como lactosa o celulosa microcristalina; aproximadamente 0 a 10%, preferiblemente aproximadamente 3-7%, de un disgregante, tal como un almidón modificado o polímero de celulosa, particularmente una carboximetilcelulosa sódica reticulada, tal como croscarmelosa sódica (La croscarmelosa sódica NF está disponible en el mercado bajo el nombre AC-DI-SOL, FMC Corporation, Filadelfia, PA) o un almidón glicolato sódico; y 0-2% de un lubricante, tal como estearato de magnesio, talco y estearato de calcio. El disgegante, tal como croscarmelosa sódica o almidón glicolato sódico, proporciona disolución rápida de la matriz celulósica para la liberación inmediata del agente activo después de la disolución del polímero de recubrimiento. En todas las realizaciones, la cantidad precisa de ingrediente activo y los ingredientes auxiliares pueden determinarse empíricamente y es una función de la vía de administración y del trastorno que se trate.
Las formas sólidas para la administración en forma de comprimidos también se contemplan en este documento. Se entiende que las cantidades precisas y la composición de las mismas pueden determinarse empíricamente por el especialista.
Se proporcionan métodos que usan tales compuestos y formulaciones para modular la interacción de un péptido de endotelina con receptores de ET_{A} y/o ET_{B}. Los métodos se realizan poniendo en contacto los receptores con una o más de las sulfonamidas, o los derivados farmacéuticamente aceptables de las mismas, particularmente las sales de las mismas, antes de, a la vez o posteriormente al contacto de los receptores con un péptido de endotelina.
Se proporcionan métodos para inhibir la unión de un péptido de endotelina con un receptor de endotelina. Estos métodos se practican poniendo en contacto el receptor con uno o más de los compuestos, o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos, particularmente las sales de los mismos, simultáneamente, antes de o posteriormente al contacto del receptor con un péptido de endotelina.
Se proporcionan métodos para el tratamiento de trastornos mediados por endotelina, incluyendo, pero sin limitación, hipertensión, asma, choque, hipertensión ocular, glaucoma, perfusión retinal inadecuada y otras afecciones que se median de alguna manera por un péptido de endotelina, o para el tratamiento de un trastorno que implica vasoconstricción o que se aminora mediante la administración de un antagonista o agonista de endotelina.
En particular, se proporcionan métodos para tratar trastornos mediados por endotelina administrando cantidades eficaces de las sulfonamidas, o los derivados farmacéuticamente aceptables de las sulfonamidas. En particular, se proporcionan métodos para tratar trastornos mediados por endotelina, incluyendo hipertensión, trastornos cardiovasculares, enfermedades cardiacas que incluyen infarto de miocardio, hipertensión pulmonar, hipertensión pulmonar neonatal, hipertensión mediada por eritropoyetina, enfermedades respiratorias y enfermedades inflamatorias, incluyendo asma, broncoconstricción, enfermedades oftalmológicas que incluyen glaucoma y perfusión retinal inadecuada, enfermedades gastroentéricas, insuficiencia renal, choque endotóxico, trastornos menstruales, afecciones obstétricas, quemaduras, laminitis, disfunción eréctil, menopausia, osteoporosis y trastornos metabólicos óseos, trastornos climactéricos incluyendo sofocos, patrones de coagulación anormales, incomodidad urogenital e incidencia aumentada de enfermedad cardiovascular, y otros trastornos asociados con la reducción de la función ovárica en mujeres de mediana edad, pre-eclampsia, control y manejo del parto durante el embarazo, trastornos de óxido nítrico atenuados, choque anafiláctico, choque hemorrágico y otras enfermedades en las que se implican las respuestas fisiológicas mediadas por endotelina, administrando cantidades eficaces de uno o más de los compuestos proporcionados en este documento en vehículos farmacéuticamente aceptables. Los métodos preferidos de tratamiento son métodos para el tratamiento de hipertensión e insuficiencia renal.
Los métodos más preferidos de tratamiento son aquellos en los que se usa al menos un compuesto que inhibe la interacción de endotelina-1 con receptores de ET_{A} a una IC_{50} de menos de aproximadamente 10 \muM, y preferiblemente menos de aproximadamente 5 \muM, más preferiblemente menos de aproximadamente 1 \muM, aún más preferiblemente menos de 0,1 \muM y aún más preferiblemente menos de 0,05 \muM. Otros métodos preferidos son aquellos que usan formulaciones que contienen sales farmacéuticamente aceptables de uno o más de los compuestos que son selectivos de ET_{A} o sales farmacéuticamente aceptables de uno o más de los compuestos que son selectivos de ET_{B}. Los métodos en los que los compuestos son selectivos de ET_{A} son para el tratamiento de trastornos tales como hipertensión, que requieren vasodilatación; y los métodos en los que los compuestos son selectivos para ET_{B} son para el tratamiento de trastornos tales como asma, que requieren broncodilatación.
En la práctica de los métodos, las cantidades eficaces de las formulaciones que contienen concentraciones terapéuticamente eficaces de los compuestos formulados para aplicación oral, intravenosa, local y tópica para el tratamiento de hipertensión, enfermedades cardiovasculares, enfermedades cardiacas, incluyendo infarto de miocardio, enfermedad respiratoria, incluyendo asma, enfermedades inflamatorias, enfermedades oftalmológicas incluyendo glaucoma y perfusión retinal inadecuada, enfermedades gastroentéricas, insuficiencia renal, vasoconstricción renal mediada por inmunosupresores, vasoconstricción mediada por eritropoyetina, choque de endotoxina, choque anafiláctico, choque hemorrágico, hipertensión pulmonar, hipertensión pulmonar neonatal, laminitis, disfunción eréctil, trastornos de óxido nítrico atenuados, menopausia, osteoporosis y trastornos metabólicos óseos, trastornos climactéricos incluyendo sofocos, patrones de coagulación anormales, incomodidad urogenital e incidencia aumentada de enfermedad cardiovascular, y otros trastornos asociados con la reducción de la función ovárica en mujeres de mediana edad, pre-eclampsia, control y manejo del parto durante el embarazo, y otras enfermedades en las que se implican las respuestas fisiológicas mediadas por endotelina de uno o más de estos trastornos. Las cantidades son eficaces para aminorar o eliminar uno o más síntomas de los trastornos.
También se proporcionan métodos para la identificación y aislamiento de los subtipos de receptores de endotelina. En particular, se proporcionan métodos para detectar, distinguir y aislar receptores de endotelina usando los compuestos descritos. En particular, se proporcionan métodos para detectar, distinguir y aislar receptores de endotelina usando los compuestos proporcionados en este documento.
Además, también se proporcionan métodos para identificar compuestos que son adecuados para el uso en el tratamiento de enfermedades particulares basándose en su afinidad preferencial para un subtipo particular de receptor de endotelina.
Se proporcionan artículos de fabricación que contienen material de empaquetado, un compuesto proporcionado en este documento, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, que es eficaz para aminorar los síntomas de un trastorno mediado por endotelina, antagonizar los efectos de endotelina o inhibir la unión de un péptido de endotelina con un receptor de ET con una IC_{50} de menos de aproximadamente 10 \muM, dentro del material de empaquetado, y una marca que indica que el compuesto, o el derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, se usa para aminorar los síntomas de un trastorno mediado por endotelina, antagonizar los efectos de la endotelina o inhibir la unión de un péptido de endotelina con un receptor de ET.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas Definiciones
A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicas y científicos usados en este documento tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por un especialista en la técnica al que pertenece esta invención. Todas las patentes y publicaciones indicadas en este documento se incorporan como referencia.
Como se usa en este documento, péptidos de endotelina (ET) incluyen péptidos que tienen sustancialmente la secuencia de aminoácidos de endotelina-1, endotelina-2 o endotelina-3 y que actúan como potentes péptidos vasoconstrictores endógenos.
Como se usa en este documento, una afección mediada por endotelina es una afección que se provoca por la actividad anormal de endotelina o uno de los compuestos que inhibe la actividad de endotelina tiene uso terapéutico. Tales enfermedades incluyen, pero sin limitación, hipertensión, enfermedad cardiovascular, asma, enfermedades inflamatorias, enfermedad oftalmológica, trastornos menstruales, afecciones obstétricas, enfermedad gastroentérica, insuficiencia renal, hipertensión pulmonar, choque de endotoxina, choque anafiláctico o choque hemorrágico. Las afecciones mediadas por endotelina también incluyen afecciones que dan como resultado de la terapia con agentes, tales como eritropoyetina e inmunosupresores, que elevan los niveles de endotelina.
Como se usa en este documento, una cantidad eficaz de un compuesto para tratar una enfermedad particular es una cantidad que es suficiente para aminorar, o de alguna manera reducir los síntomas asociados con la enfermedad. Tal cantidad puede administrarse en forma de una dosificación unitaria o puede administrarse de acuerdo con un régimen, mientras que sea eficaz. La cantidad puede curar la enfermedad pero, típicamente, se administra con el fin de aminorar los síntomas de la enfermedad. Típicamente, se requiere la administración repetida para conseguir la aminoración deseada de los síntomas.
Como se usa en este documento, un agonista de endotelina es un compuesto que potencia o muestra una actividad biológica asociada con o poseída por un péptido de endotelina.
Como se usa en este documento, un antagonista de endotelina es un compuesto, tal como un fármaco o un anticuerpo, que inhibe la vasoconstricción estimulada por endotelina y la contracción y otras respuestas fisiológicas mediadas por endotelina. El antagonista puede actuar interfiriendo con la interacción de la endotelina con un receptor específico de endotelina o interfiriendo con la respuesta fisiológica a o bioactividad de un isopéptido de endotelina, tal como vasoconstricción. De esta manera, como se usa en este documento, un antagonista de endotelina interfiere con la vasoconstricción estimulada por endotelina u otra respuesta o interfiere con la interacción de una endotelina con un receptor específico de endotelina, tales como los receptores de ET_{A}, que se ensaya mediante ensayos conocidos por los especialistas en la técnica.
La eficacia de los agonistas y antagonistas potenciales puede ensayarse usando métodos conocidos por los especialistas en la técnica. Por ejemplo, la actividad agonista de endotelina puede identificarse por su capacidad para estimular la vasoconstricción de los segmentos de anillo de vena portal o arteria torácica de rata aislados (Borges et al. (1989) "Tissue selectivity of endothelin" Eur. J. Pharmacol. 165: 223-230). La actividad antagonista de endotelina puede ensayarse por la capacidad para interferir con la vasoconstricción inducida por endotelina. Los ensayos ejemplares se establecen en los Ejemplos. Como se ha indicado anteriormente, los intervalos de concentración IC_{50} preferidos se establecen con respecto a los ensayos en los que se incuba el compuesto de ensayo con las células que tienen el receptor de ET a 4ºC. Se identifican los datos presentados para los ensayos en los que la etapa de incubación se realiza a menos de los 24ºC preferidos. Se entiende que para propósitos de comparación, estas concentraciones son un poco superiores a las concentraciones determinadas a 4ºC.
Como se usa en este documento, la biodisponibilidad o la disponibilidad oral se refiere a la velocidad y extensión de la absorción. Los métodos para determinar la biodisponibilidad o la disponibilidad oral se conocen bien por los especialistas en la técnica. Por ejemplo, la biodisponibilidad o la disponibilidad oral de cualquiera de los compuestos descritos en este documento puede determinarse empíricamente mediante la administración del compuesto aun animal, seguido de la toma de muestras sanguíneas durante el tiempo y la medición de la concentración sanguínea del compuesto. La vida media en vivo (t_{1/2}) se define como el tiempo que tarda la concentración del compuesto en la sangre en reducirse a la mitad. Las estimaciones del área bajo la curva para la administración intravenosa pueden usarse para estimar el área bajo la curva para la administración oral, produciendo los datos de biodisponibilidad. Véase, por ejemplo, Milo Gibal (1991) Biopharmaceutics and Pharmacology, 4ª edición (Lea and Sediger).
Como se usa en este documento, la eficacia se refiere al efecto máximo que puede producirse por un compuesto. La eficacia puede determinarse por métodos conocidos por los especialistas en la técnica. Por ejemplo, puede determinarse mediante las propiedades del compuesto y su sistema receptor-efector y se refleja en el punto de inflexión de la curva de efecto de concentración. La eficacia en vivo se refiere a la eficacia que se determina en un modelo animal. Por ejemplo, la eficacia en vivo de los compuestos descritos en este documento puede determinarse mediante hipertensión pulmonar inducida por hipoxia en rata. Véase, por ejemplo, DiCarlo et al., (1995) Am. J. Physiol. 269: L690-L697.
Como se usa en este documento, decir que n compuesto que muestra un buen perfil en ensayos de toxicidad en vitro o en vivo convencionales significa que el compuesto demuestra una tolerabilidad relativa mejorada a los antagonistas de endotelina conocidos. En particular, como se describe en este documento, los compuestos que muestran valores IC_{50} superiores para la inhibición de enzimas P450, en particular, enzimas CP4502C9, 2C19 y 3A4, muestran buenos perfiles en ensayos de toxicidad en vitro convencionales. Los compuestos para los que se requiere una dosis inferior para conseguir una inhibición del 50% de la presión arterial pulmonar media (MPAP) aumentan en un modelo de hipoxia agudo en vivo muestran buenos perfiles en vivo.
Como se usa en este documento, la actividad biológica o bioactividad de endotelina incluye cualquier actividad inducida, potenciada o influenciada por endotelina en vivo También incluye la capacidad de unirse a receptores particulares y de inducir una respuesta funcional, tal como vasoconstricción. Puede ensayarse mediante ensayos en vivo o ensayos en vitro, tales como los ejemplificados en este documento. Las actividades relevantes incluyen, pero sin limitación, vasoconstricción, vasorrelajación y broncodilatación. Por ejemplo, los receptores de ET_{B} parecen expresarse en células endoteliales vasculares y pueden mediar la vasodilatación y otras de tales respuestas; mientras que los receptores de ET_{A}, que son específicos de endotelina-1, aparecen en el músculo liso y se relacionan con la vasoconstricción. Cualquier ensayo conocido por los especialistas en la técnica para medir o detectar tal actividad puede usarse para ensayar tal actividad (véase, por ejemplo, Spokes et al., (1989) J. Cardiovasc. Pharmacol. 13 (Supl. 5): S191-S192; Spinella et al., (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7443-7446; Cardell et al., (1991) Neurochem. Int. 18: 571-574); y los Ejemplos de este documento).
Como se usa en este documento, el IC_{50} se refiere a una cantidad, concentración o dosis de un compuesto de ensayo particular que consigue una inhibición del 50% de una respuesta máxima, tal como unión de endotelina a receptores de tejido, en un ensayo que mide tal respuesta.
Como se usa en este documento, EC_{50} se refiere a una dosis, concentración o cantidad de un compuesto de ensayo particular que elicita una respuesta dependiente de la dosis al 50% de la expresión máxima de una respuesta particular que se induce, provoca o potencia por el compuesto de ensayo particular.
Como se usa en este documento, una sulfonamida que es selectiva para ET_{A} se refiere a sulfonamidas que muestran una IC_{50} que es menor de aproximadamente 10 veces menos con respecto a los receptores de ET_{A} que con respecto a los receptores de ET_{B}.
Como se usa en este documento, una sulfonamida que es selectiva de ET_{B} se refiere a sulfonamidas que muestran una IC_{50} que es menor de aproximadamente 10 veces menos con respecto a los receptores de ET_{B} que con respecto a los receptores de ET_{A}.
Como se usa en este documento, las sales farmacéuticamente aceptables, ésteres, hidratos, solvatos u otros derivados de los compuestos incluyen cualquiera de tales sales, ésteres y otros derivados que pueden prepararse por los especialistas en esta técnica usando métodos conocidos para tal derivación y que producen compuestos que pueden administrarse a animales o seres humanos sin efectos tóxicos sustanciales y que son farmacéuticamente activos o son profármacos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos, incluyendo, pero sin limitación, sales sódicas, sales potásicas, sales de litio, sales de calcio y sales de magnesio; sales de metales de transición, tales como sales de cinc, sales de cobre y sales de aluminio; sales de contraiones policatiónicos, tales como, pero sin limitación, sales amónicas y amónicas sustituidas y sales de aminas orgánicas, tales como hidroxialquilaminas y alquilaminas; sales de ácidos minerales, tales como, pero sin limitación, clorhidratos y sulfatos, sales de ácidos orgánicos, tales como, pero sin limitación, acetatos, lactatos, malatos, tartratos, citratos, ascorbatos, succinatos, butirato, valerato y fumaratos. También se contemplan en este documento los ésteres correspondientes.
Como se usa en este documento, la referencia a "sales sódicas" se refiere a sales de cualquier compuesto sódico en el que el contraión incluye Na^{+} y puede incluir otros iones, tales como HPO_{4}^{2-}; la referencia a una "sal sódica" (mejor que sales sódicas) se refiere específicamente a una sal en la que el contraión es Na^{+}.
Como se usa en este documento, tratamiento significa cualquier manera en la que los síntomas de las afecciones, trastornos o enfermedades se aminoran o alteran de forma beneficiosa. El tratamiento también abarca cualquier uso farmacéutico de las composiciones de este documento, tales como agentes contraceptivos.
Como se usa en este documento, aminoración de los síntomas de un trastorno particular mediante la administración de una composición farmacéutica particular se refiere a cualquier disminución, permanente o temporal, duradera o transitoria que pueda atribuirse o asociarse con la administración de la composición.
Como se usa en este documento, sustancialmente puro significa suficientemente homogéneo para parecer libre de impurezas fácilmente detectables como se determina mediante métodos convencionales de análisis, tales como cromatografía de capa fina (TLC), electroforesis sobre gel y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), usados por los especialistas en la técnica para ensayar tal pureza, o suficientemente puro de forma que la purificación adicional no alteraría de forma detectable las propiedades físicas y químicas, tales como actividades enzimáticas y biológicas, de la sustancia. Los métodos para la purificación de los compuestos para producir compuestos sustancial y químicamente puros se conocen por los especialistas en la técnica. Un compuesto sustancial y químicamente puro puede ser, sin embargo, una mezcla de estereoisómeros. En tales casos, la purificación adicional podría aumentar la actividad específica del compuesto.
Como se usa en este documento, la actividad biológica se refiere a las actividades en vivo de un compuesto o las respuestas fisiológicas que dan como resultado después de la administración en vivo de un compuesto, composición u otra mezcla. La actividad biológica, de esta manera, abarca los efectos terapéuticos y la actividad farmacéutica de tales compuestos, composiciones y mezclas.
Como se usa en este documento, la estabilidad aumentada de una formulación significa que el porcentaje de componente activo presente en la formulación, como se determina mediante ensayos conocidos por los especialistas en la técnica, tales como cromatografía líquida de alta resolución, cromatografía de gas, y similares, en un periodo de tiempo dado después de la preparación de la formulación es significativamente superior al porcentaje de componente activo presente en otra formulación en el mismo periodo de tiempo después de la preparación de la formulación. En este caso, se dice que la formulación formadora posee una estabilidad aumentada relativa a la formulación posterior.
Como se usa en este documento, un profármaco es un compuesto que, después de la administración en vivo, se metaboliza o se convierte de otra manera en la forma biológica, farmacéutica o terapéuticamente activa del compuesto. Para producir un profármaco, el compuesto farmacéuticamente activo se modifica de tal forma que el compuesto activo se regenerará mediante procesos metabólicos. El profármaco puede diseñarse par alterar la estabilidad metabólica o las características de transporte de un fármaco, para enmascarar los efectos secundarios o la toxicidad, para mejorar el sabor del fármaco o para alterar otras características o propiedades de un fármaco. En virtud del conocimiento de los procesos farmacodinámicos y el metabolismo del fármaco en vivo, de los especialistas en la técnica, cuando se conoce un compuesto farmacéuticamente activo, puede diseñar profármacos del compuesto (véase, por ejemplo, Nogrady (1985) Medicinal Chemistry. A Biochemical Approach. Oxford University Press, New York, páginas 388-392). Por ejemplo, el succinil-sulfatiazol es un profármaco de 4-amino-N-(2-tiazolil)bencenosulfonamida (sulfatiazol) que muestra características de transporte alteradas.
Como se usa en este documento, isoéster de ácido significa un grupo que se ioniza significativamente a pH fisiológico. Los ejemplos de isoésteres de ácido incluyen sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo o heteroarilsulfonilcarbamoílo.
Como se usa en este documento, halo o haluro se refiere a átomos de halógeno; F, Cl, Br e I.
Como se usa en este documento, pseudohaluros son compuestos que se comportan sustancialmente de manera similar a los haluros. Tales compuestos pueden usarse de la misma manera y tratarse de la misma manera que los haluros (X, donde X es un halógeno, tal como Cl o Br). Los pseudohaluros incluyen, pero sin limitación, cianuro, cianato, tiocianato, selenocianato y azida.
Como se usa en este documento, alquilo significa un grupo hidrocarburo alifático que es de cadena lineal o ramificada que tiene preferiblemente aproximadamente de 1 a 12 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo preferidos son alquilo C_{1}-C_{6} que son alquilos que contienen de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo C_{1}-C_{6}, tales como metilo, etilo o propilo se unen a una cadena alquilo lineal. El grupo alquilo puede estar no sustituido o sustituido independientemente con uno o más grupos, tales como, pero sin limitación: halo, carboxi, formilo, sulfo, sulfino, carbamoílo, amino o imino. Los grupos alquilo ejemplares incluyen metilo, etilo, propilo, ácido metanólico, ácido etanólico, ácido propanoico, ácido etanosulfínico y ácido etanosulfónico.
Como se usa en este documento, el término inferior describe grupos alquilo, alquenilo y alquinilo que contienen aproximadamente 6 átomos de carbono o menos. También se usa para describir grupos arilo o grupos heteroarilo que contienen 6 o menos átomos de carbono en el anillo. Alquilo inferior, alquenilo inferior y alquinilo inferior se refiere a cadenas de carbono que tienen menos de aproximadamente 6 carbonos. En las realizaciones preferidas de los compuestos proporcionados en este documento que incluyen porciones alquilo, alquenilo o alquinilo incluyen porciones alquilo inferior, alquenilo inferior y alquinilo inferior.
Como se usa en este documento, alquenilo inferior significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene un doble enlace carbono-carbono y que puede ser de cadena lineal o ramificada y que tiene de 2 a 10 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquenilo preferidos tienen de 2 a 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo C_{1}-C_{6} o alquenilo C_{1}-C_{6} se unen a una cadena alquenilo lineal. El grupo alquenilo puede estar no sustituido o sustituido independientemente con uno o más grupos, tales como halo, carboxi, formilo, sulfo, sulfino, carbamoílo, amino e imino. Los grupos alquenilo ejemplares incluyen etenilo, propenilo, carboxietenilo, carboxipropenilo, sulfinoetenilo y sulfonoetenilo.
Como se usa en este documento, alquinilo significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene un triple enlace carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado y que tiene de 2 a 10 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo C_{1}-C_{6}, alquenilo o alquinilo se une a una cadena alquinilo lineal. Un grupo alquinilo ejemplar es etinilo.
Como se usa en este documento, arilo significa un sistema de anillos hidrocarburo monocíclicos o multicíclicos que contienen de 3 a 15 ó 16 átomos de carbono, preferiblemente de 5 a 10. Los grupos arilo incluyen, pero sin limitación, grupos tales como fenilo, fenilo sustituido, naftilo, naftilo sustituido, donde el sustituyente es alquilo C_{1}-C_{6}, halógeno o alcoxi inferior. Los grupos arilo preferidos son grupos arilo inferiores que contienen menos de 7 carbonos en la estructura del anillo.
Como se usa en este documento, la nomenclatura arilo, alcoxi, carbonilo, etc. se usa como se entiende generalmente por los especialistas en la técnica. Por ejemplo, como se usa en este documento, alquilo se refiere a cadenas de carbono saturadas que contienen uno o más carbonos; las cadenas pueden ser lineales o ramificadas o incluir porciones cíclicas o ser cíclicas. Como se usa en este documento, alicíclico se refiere a grupos arilo que son cíclicos.
Como se usa en este documento, cicloalquilo se refiere a cadenas de carbonos cíclicas saturadas; cicloalquenilo y cicloalquinilo se refieren a cadenas de carbonos cíclicas que incluyen al menos un doble o triple enlace insaturado, respectivamente. Las porciones cíclicas de las cadenas de carbono pueden incluir un anillo o dos o más anillos condensados.
Como se usa en este documento, cicloalquenilo significa un sistema de anillos monocíclicos o multicíclicos no aromáticos que contiene un doble enlace carbono-carbono y que tiene de 3 a 10 átomos de carbono. Los anillos cicloalquenilo monocíclicos ejemplares incluyen ciclopentenilo o ciclohexenilo; se prefiere ciclohexenilo. Un anillo cicloalquenilo multicíclico ejemplar es norbornilenilo. El grupo cicloalquenilo puede estar independientemente sustituido con uno o más halo o alquilo.
Como se usa en este documento, "haloalquilo" se refiere a un radical alquilo C_{1}-C_{6} en el que uno o más de los átomos de hidrógeno se reemplazan con halógeno incluyendo, pero sin limitación, clorometilo, trifluorometilo, 1-cloro-2-fluoroetilo y similares.
Como se usa en este documento, "haloalcoxi" se refiere a RO- donde R es un grupo haloalquilo.
Como se usa en este documento, "carboxamida" se refiere a grupos de fórmula R_{p}CONH_{2} donde R se selecciona entre alquilo o arilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6} o arilo inferior y p es 0 ó 1.
Como se usa en este documento, "alquilaminocarbonilo" se refiere a -C(O)NHR donde R es hidrógeno, alquilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6} o arilo, preferiblemente arilo inferior.
Como se usa en este documento, "dialquilaminocarbonilo" como se usa en este documento se refiere a -C(O)NR'R donde R' y R se seleccionan independientemente entre alquilo o arilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6} o arilo inferior; "carboxamida" se refiere a grupos de fórmula NR'COR.
Como se usa en este documento, "alcoxicarbonilo" como se usa en este documento se refiere a C(O)OR donde R es alquilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6} o arilo, preferiblemente arilo inferior.
Como se usa en este documento, "alcoxi" y "tioalcoxi" se refiere a RO- y RS-, donde R es alquilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6} o arilo, preferiblemente arilo inferior.
Como se usa en este documento, "haloalcoxi" se refiere a RO- donde R es un grupo haloalquilo.
Como se usa en este documento, "aminocarbonilo" se refiere a -C(O)NH_{2}.
Como se usa en este documento, "alquilaminocarbonilo" se refiere a -C(O)NHR donde R es alquilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6} o arilo, preferiblemente alquilo inferior.
Como se usa en este documento, "alcoxicarbonilo" se refiere a -C(O)OR donde R es alquilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6}.
Como se usa en este documento, cicloalquilo se refiere cadenas de carbono cíclicas saturadas; cicloalquenilo y cicloalquinilo se refieren a cadenas de carbono cíclicas que incluyen al menos un triple enlace insaturado. Las porciones cíclicas de las cadenas de carbono pueden incluir un anillo o dos o más anillos condensados.
Como se usa en este documento, alquilenodioxi significa un grupo -O-alquil-O- en el que el grupo alquilo es como se ha descrito anteriormente. Un análogo de reemplazamiento de alquilenodioxi significa un alquilenodioxi en el que uno o ambos de los átomos de oxígeno se reemplazan con un átomo o grupo que se comporta de forma similar tal como S, N, NH, Se. Un grupo alquilenodioxi de reemplazamiento ejemplar es etileno-bis(sulfandiilo). Alquilenotioxioxi es -S-alquil-O-, -O-alquil-S- y alquilenoditioxi es -S-alquil-S.
Como se usa en este documento, heteroarilo significa un sistema de anillo monocíclico aromático o condensado donde uno o más de los átomos de carbono en el sistema de anillo se reemplaza con un elemento diferente de carbono, por ejemplo nitrógeno u oxígeno. Similarmente a los "grupos arilo", los grupos heteroarilo pueden estar no sustituidos o sustituidos con uno o más sustituyentes. Los grupos heteroarilo ejemplares incluyen pirazinilo, pirazolilo, tetrazolilo, furanilo, (2-, 3- o 4)-piridilo, imidazolilo, pirimidinilo, isoxazolilo, quinolinilo, indolilo, isoquinolinilo, oxazolilo y 1,2,4-oxadiazolilo. Los grupos heteroarilo incluyen anillos que contienen nitrógeno de 5 miembros, tales como pirimidinilo.
Como se usa en este documento, alcoxicarbonilo significa un grupo alquil-C-CO. Los grupos alcoxicarbonilo ejemplares incluyen metoxi- y etoxicarbonilo.
Como se usa en este documento, carbamoílo significa -CONH_{2}. Como con todos los grupos descritos en este documento, estos grupos pueden estar no sustituidos o sustituidos. Carbamoílo sustituido incluye grupos tales como -CONR^{38}R^{39} donde R^{38} y R^{39} se seleccionan independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6}.
Como se usa en este documento, cualquier derivado de N-(3,4-dimetil-5-isoxazolilo), N-(4,5-dimetil-3-isoxazolilo) correspondiente se refiere a compuestos en los que Ar^{2} es el mismo que el compuesto indicado específicamente, pero Ar^{1} es N-(3,4-dimetil-5-isoxazolilo) o N-(4,5-dimetil-3-isoxazolilo).
Como se usan en este documento, las abreviaturas para cualquier grupo protector, aminoácidos y otros compuestos, a menos que se indique otra cosa, están de acuerdo con su uso común, abreviaturas reconocidas o la IUPAC-IUB Commision on Biochemical Nomenclature (véase (1972) Biochem. 11: 942-944).
A. Compuestos para uso en el tratamiento de enfermedades mediadas por endotelina
Se proporcionan compuestos, composiciones y métodos para tratar enfermedades mediadas por endotelina que usan los compuestos de fórmula I. En particular, los compuestos proporcionados en este documento son tienilo sustituido con arilo, sulfonamidas, preferiblemente tetra- o pentasustituidas. Las sulfonamidas particularmente preferidas son N-isoxazolil-tiofeno-sulfonamidas en las que el tiofeno está sustituido con un grupo arilo que tiene sólo uno o dos sustituyentes hidrógeno. Si el grupo arilo está tetrasustituido, preferiblemente se sustituye en la posición 1, 2, 4 y 6 y uno de estos sustituyentes será un grupo polar, tal como hidroxilo, acetoxi, carboxilo, sulfonilo, acilo, heteroarilo, oxima, haluro, pseudohaluro y carboxamida. Si el grupo arilo está sustituido en las posiciones 2, 4 y 6 con grupos no polares, tales como grupos alquilo, más específicamente grupos metilo, entonces el grupo arilo está preferiblemente penta- o hexasustituido. En los grupos arilo pentasustituidos, el cuarto sustituyente es el engarce al tiofeno, y el quinto sustituyente es preferiblemente un grupo polar, tal como hidroxilo, acetoxi, carboxilo, sulfonilo, acilo, heteroarilo, oxima, haluro, pseudohaluro y carboxamida.
Los compuestos descritos en este documento muestran una buena biodisponibilidad, vida media en vivo relativamente larga, buena tolerabilidad y buena eficacia en modelos animales en vivo y otros modelos adecuados.
En las realizaciones descritas con detalle en este documento, Ar^{1} es u n 3- o 5-isoxazolilo y las sulfonamidas tienen la fórmula III:
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o los derivados o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde cada uno de R^{1} y R^{2} se selecciona independientemente entre alquilo C_{1}-C_{6}.
W es NH,
Y es O,
M es -C(Y)-W-
cada uno de R^{3} y R^{4} es hidrógeno,
cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno;
a es 1 si Y^{2} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno; b es 1 si Y^{1} es carbono; b es 0 si Y^{1} es nitrógeno.
R^{5} es alquilo C_{1}-C_{6} o - (CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3};
R^{6} es alquilo C_{1}-C_{6} o - (CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}; o heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados entre O y N.
R^{7} es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo C_{1}-C_{6}, S(O)_{2}NHR^{50} u OS(O)_{2}NR^{38}R^{39};
R^{39} es H;
donde cada uno de R^{38} y R^{39} se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14; y R^{50} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6}; y
X es S.
En todas las realizaciones, X es S.
En una realización, M es preferiblemente -C(Y)-W- y los compuestos para el uso en las composiciones y métodos proporcionados en este documento tienen la fórmula IV:
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o los derivados o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde R^{1}-R^{9}, X, Y, W, Y^{1}, Y^{2}, a y b son como se han definido anteriormente.
En estas realizaciones, los compuestos son preferiblemente de fórmula IV, donde X es S, R^{1} es alquilo C_{1}-C_{6}; R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6}; cada uno de R^{3} y R^{4} es hidrógeno; R^{5} es alquilo C_{1}-C_{6} o -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}; R^{6} es alquilo C_{1}-C_{6}; -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}, o heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N; R^{7} es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alcoxi C_{1}-C_{6}, S(O)_{2}NHR^{50} y OS(O)_{2}NR^{38}R^{39};
donde cada uno de R^{38} y R^{39} se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14, y R^{50} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6};
Y es O; y R^{8} es CONR^{38}R^{39}, CN, heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N, alquilsulfonilo, haluro, pseudohaluro, hidroxialquilo, C(O)(CH_{2})_{x}S(O)_{2}(CH_{2})_{y}CH_{3} o C(=N-OR^{38})(CH_{2})_{y}
CH_{3};
R^{9} es H; cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno; a es 1 si Y^{2} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno; b es 1 si Y^{1} es carbono; b es 0 si Y^{1} es nitrógeno; y W es NH.
En las realizaciones particulares, los compuestos de fórmula IV son 3-sulfonamidas 2-sustituidas que tienen la fórmula V:
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y los derivados o sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, donde X es S; R^{1} es alquilo C_{1}-C_{6}; R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6}; cada uno de R^{3} y R^{4} es hidrógeno; R^{5} es alquilo o -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}; R^{6} es alquilo C_{1}-C_{6}, -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3} o heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N; R^{7} se selecciona entre hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, S(O)_{2}NHR^{50} y OS(O)_{2}NR^{38}R^{39};
donde cada uno de R^{38} y R^{39} se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6}; cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14; y R^{50} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6};
Y es O; R^{8} es CONR^{38}R^{39}, CN, heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N, alquilsulfonilo, haluro, pseudohaluro, hidroxialquilo, C(O)(CH_{2})_{x}S(O)_{2}(CH_{2})_{y}CH_{3} o C(=N-OR^{38})(CH_{2})_{y}
CH_{3};
R^{9} es H; cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno; a es 1 si Y^{2} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno; b es 1 si Y^{1} es carbono; b es 0 si Y^{1} es nitrógeno; y W es NH.
En realizaciones más preferidas, los compuestos son de fórmula V, en la que R^{1} es alquilo C_{1}-C_{6}; preferiblemente Me. En estas realizaciones, R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6}, preferiblemente Me; y cada uno de R^{3} y R^{4} es H.
En las realizaciones descritas con detalle en este documento, los compuestos son de fórmula V, en la que R^{5} es Me o acetilo, preferiblemente Me; R^{6} es Me, acetilo o 2-oxazolilo, preferiblemente Me; R^{7} es H, Me, OSO_{2}NMe_{2}, OCH_{2}-ciclopropilo, hidroxi o SO_{2}NH-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolilo), preferiblemente H;
Y es O; y R^{8} es C(O)CH_{2}SO_{2}CH_{3}, CN, C(O)N(Me)(CH_{2}-t-Bu), SO_{2}Me, 2-oxazolilo, SO_{2}-isopropilo, SO_{2}-n-propilo, CH(OH)Me, C(O)NMe_{2}, C(=N-OMe)Me o Cl o
Y y R^{8} juntos forman -CO-N= o -CO-C(CN)=;
R^{9} es H; cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno, preferiblemente carbono; a es 1 si Y^{1} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno; b es 1 si Y^{1} es carbono; b es 0 si Y^{1} es nitrógeno; y W es NH.
De esta manera, en las realizaciones preferidas, los compuestos son de fórmula V, en la que X es S; R^{1} es Me, R^{2} es Me; R^{3}, R^{4} y R^{9} son H; Y es O, W es NH; y cada uno de Y^{1} e Y^{2} son carbono. En estas realizaciones, los compuestos son tiofeno-sulfonamidas que tienen la fórmula VI:
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o los derivados o sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, donde R^{1} es Me; R^{5} es Me o acetilo, preferiblemente Me; R^{6} es Me, acetilo o 2-oxazolilo, preferiblemente Me; R^{7} es H, Me, OSO_{2}NMe_{2}, OCH_{2}-ciclopropilo, hidroxi o SO_{2}NH-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolilo), preferiblemente H; y R^{8} es C(O)CH_{2}SO_{2}CH_{3}, CN, C(O)N(Me)(CH_{2}-t-Bu), SO_{2}Me, 2-oxazolilo, SO_{2}-isopropilo, SO_{2}-n-propilo, -CH(OH)Me, C(O)NMe_{2}, C(=N-OMe)Me o Cl.
En las realizaciones más preferidas de este documento, R^{1}, R^{5} y R^{6} son Me; R^{7} es hidrógeno.
En otra realización, los compuestos tienen la fórmula I en la que cada uno de Y^{1} e Y^{2} es nitrógeno. En esta realización, cada uno de a y b es preferiblemente 0; y las otras variables son como se han definido anteriormente. En las realizaciones preferidas, R^{5}, R^{6} y R^{8} son alquilo, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6}, más preferiblemente Me; Y es O; y W es NH. En realizaciones más preferidas, cada uno de R^{3} y R^{4} es H; y X es S. De esta manera, los compuestos de esta realización son N-(5-isoxazolil)-2- o 3-(5-pirimidinilaminocarbonil)tiofeno-sulfonamidas.
Los compuestos preferidos de las realizaciones anteriores incluyen N-(2-acetil-4,6-dimetilfenil)-3-{[{3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida, N-{2-ciano-3,4,6-trimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida.
También son de interés los derivados farmacéuticamente aceptables, incluyendo sales, ésteres, ácidos y bases, solvatos, hidratos y profármacos de las sulfonamidas. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables, particularmente sales de metales alcalinos, más preferiblemente sales sódicas.
La Tabla 1 muestra las actividades de ET_{A} de los compuestos preferidos de la presente invención.
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Los compuestos proporcionados en este documento también muestran propiedades farmacocinéticas mejoradas comparados con antagonistas de endotelina conocidos (véase la Tabla 2 a continuación). Como se muestra en la Tabla 2, los compuestos proporcionados en este documento poseen una disponibilidad oral y selectividad aumentadas comparados con antagonistas de endotelina conocidos. Por ejemplo, la N-(2-acetil-4,6-dimetil-fenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofeno-carboxamida muestra una biodisponibilidad oral de 148,1%, mientras que N-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)-2-{[3,4-(metilenodioxi)-6-metilfenil)acetil]-tiofeno-3-sulfonamida posee una biodisponibilidad oral de 43,6%. Además, N-(2-acetil-4,6-dimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida muestra una selectividad para el antagonismo de receptores de ET_{A} sobre receptores de ET_{B} de 441,000, mientras que N-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)-2-{[3,4-(metilenodioxi)-6-metil-fenil)acetil]-tiofeno-3-sulfonamida posee una selectividad de 20.950 en el mismo ensayo.
La Tabla 2 también proporciona datos que demuestran la tolerabilidad mejorada, tanto en vitro como en vivo, de los compuestos proporcionados en este documento, comparados con antagonistas del receptor de endotelina conocidos. Véase el Ejemplo 24. Por ejemplo, la N-(2-acetil-4,6-dimetilfenil)-3-{((3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida tiene valores IC_{50} de 7,6, 126,3 y 28,0 en ensayos en vitro que miden la inhibición de las enzimas CP4502C9, 2C19 y 3A4, respectivamente, mientras que N-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)-2-{[3,4-(metilenodioxi)-6-metilfenil)acetil]-tiofeno-3-sulfonamida posee valores IC_{50} de 0,03, 0,2 y 0,09, respectivamente, en los mismos ensayos. Además, N-(2-acetil-4,6-dimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida muestra una inhibición de 50% de la presión arterial pulmonar media (MPAP) que se aumenta en vivo en aproximadamente 1 mg/kg en un modelo de hipoxia agudo, mientras que N-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)-2-{[3,4-(metilenodioxi)-6-metilfenil)acetil]-tiofeno-3-sulfonamida muestra una inhibición de 50% de MPAP aumentada en 2,5 mg/kg en el mismo ensayo. Se proporcionan otros datos en la Tabla 2.
De esta manera, los compuestos proporcionados en este documento poseen propiedades farmacocinéticas mejoradas y una tolerabilidad mejorada que se demuestra mediante ensayos en vivo e en vitro, comparados con antagonistas del receptor de endotelina conocidos.
TABLA 2 
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TABLA 2 (continuación) 
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TABLA 2 (continuación)
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B. Preparación de los compuestos
La preparación de algunos de los compuestos anteriores y de otros compuestos que poseen las actividades requeridas se establece en los Ejemplos. Los compuestos cuya síntesis no se ejemplifica de forma explícita pueden sintetizarse por modificación rutinaria de uno o más métodos descritos con detalle en los Ejemplos sustituyendo los reactivos fácilmente disponibles apropiados.
Muchos de los compuestos descritos en este documento son derivados de 3-sulfamoil-2-arilaminocarboniltiofeno. En general, estos compuestos pueden prepararse acoplando el ácido 3-sulfamoiltienilcarboxílico apropiado con una anilina sustituida o no sustituida.
Los ácidos 3-sulfamoiltienilcarboxílicos pueden prepararse mediante una diversidad de métodos conocidos por los especialistas en la técnica. En general, la mayoría de las síntesis implican la condensación de un cloruro de carboalcoxitienilsulfonilo con un aminoisoxazol en piridina seca o en tetrahidrofurano (THF) e hidruro sódico. La posterior hidrólisis del grupo carboalcoxi proporciona los ácidos deseados. Los cloruros de sulfonilo y aminoisoxazoles pueden obtenerse en el mercado o sintetizarse de acuerdo con los métodos descritos en los Ejemplos o usando otros métodos disponibles para los especialistas en la técnica (véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 4.659.369, 4.861.366 y 4.753.672).
Por ejemplo, los cloruros de tienilsulfonilo pueden prepararse mediante los siguientes métodos. Un precursor de 3-sulfamoiltiofeno puede bromarse en la posición 2 por reacción con, por ejemplo, bromo o N-bromosuccinimida. El posterior intercambio de metal-halógeno con un alquillitio, por ejemplo, n-butillitio, y la reacción con dióxido de carbono proporciona el ácido deseado. Como alternativa, un derivado de ácido 2-tienilcarboxílico puede sulfonarse en la posición 3 por reacción con, por ejemplo, trióxido de azufre en ácido sulfúrico. La conversión del ácido sulfónico resultante en un cloruro de sulfonilo (por reacción con pentacloruro de fósforo, tricloruro de fósforo, oxicloruro de fósforo, cloruro de tionilo o cloruro de oxalilo) seguido de la reacción con la amina apropiada proporciona el derivado de ácido sulfamoiltienilcarboxílico deseado. El cloruro de sulfonilo intermedio también puede prepararse directamente por reacción del derivado de ácido tienilcarboxílico con ácido clorosulfónico.
Las N-(alquilisoxazolil)sulfonamidas pueden prepararse condensando un aminoisoxazol con un cloruro de sulfonilo en piridina seca con o sin el catalizador 4-(dimetilamino)piridina. Las N-(3,4-dimetil-5-isoxazolil)sulfonamidas y N-(4,5-dimetil-3-isoxazolil)sulfonamidas pueden prepararse a partir del aminodimetilisoxazol correspondiente, tal como 5-amino-3,4-dimetilisoxazol. Por ejemplo, N-(3,4-dimetil-5-isoxazolil)-2-(carbometoxi)tiofeno-3-sulfonamida puede prepararse a partir de cloruro de 2-metoxicarboniltiofeno-3-sulfonilo y 5-amino-3,4-dimetil-isoxazol en piridina seca.
Estas sulfonamidas también pueden prepararse a partir del cloruro de sulfonilo correspondiente y el aminoisoxazol en piridina con o sin una cantidad catalítica de 4-dimetilaminopiridina (DMAP). En algunos casos, el compuesto bis-sulfonilo se obtiene como producto principal o exclusivo. Los productos bis-sulfonados pueden hidrolizarse fácilmente en la sulfonamida usando hidróxido sódico acuoso y un co-disolvente adecuado, tal como metanol o tetrahidrofurano, generalmente a temperatura ambiente.
Las anilinas sustituidas pueden sintetizarse por nitración del benceno sustituido con el precursor apropiado con, por ejemplo, una mezcla de ácido nítrico y sulfúrico, o tetrafluoroborato de nitronio. La reducción del compuesto nitro aromático resultante con, por ejemplo, polvo de cinc, la hidrogenación catalítica, cloruro de estaño o cualquier otro método conocido por los especialistas en la técnica, produce la anilina deseada.
El acoplamiento del ácido tienilcarboxílico con la anilina puede realizarse por conversión del ácido en el acilimidazol correspondiente (por reacción con, por ejemplo, carbonildiimidazol) o cloruro de acilo (por reacción con, por ejemplo, cloruro de oxalilo o cloruro de tionilo), seguido de la reacción con la anilina para dar los compuestos arilaminocarboniltiofeno deseados.
Algunos de los compuestos descritos en este documento son derivados de 3-sulfamoil-2-bencilaminocarboniltiofeno. En la preparación de estos compuestos, la anilina de la preparación anterior se reemplaza con una bencilamina. Las bencilaminas apropiadas pueden sintetizarse por reacción del haluro de bencilo correspondiente con azida, seguido de reducción de la bencilazida resultante mediante, por ejemplo, hidrogenación catalítica o tratamiento con una trialquil- o triarilfosfina.
Otros compuestos descritos en este documento son derivados de 3-sulfamoil-2-arilacetiltiofeno. Estos compuestos pueden generarse por adición de un haluro de bencilmagnesio apropiado a un derivado de ácido 3-sulfamoil-2-tienilcarboxílico, tal como una N-metil-N-metoxiamida. Esta amida puede prepararse por reacción con N-metil-N-metoxiamina.
Ciertos compuestos descritos en este documento pueden prepararse mediante el método indicado en el Esquema I:
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donde R^{1} es alquilo C_{1}-C_{6}, prefiriéndose metilo.
Para los compuestos de fórmula A, se toma R^{60} con CO para formar un ácido carboxílico o un derivado. En este caso, R^{60} es preferiblemente OR^{4} donde R^{4} es alquilo inferior o alcoxialquilo, prefiriéndose metilo o metoximetilo, o cualquier otro grupo consistente con la química deseada.
Para los compuestos de fórmulas C o D, R^{60} es OR^{4}, OH, halógeno u otro grupo activante de ácido carboxílico consistente con las transformaciones químicas deseadas, prefiriéndose especialmente cloro.
Para los compuestos de fórmulas D y E, Ar puede ser cualquier anillo aromático o heterocíclico, prefiriéndose benceno y pirimidina.
Los profármacos y otros derivados de los compuestos adecuados para la administración a seres humanos también pueden diseñarse y prepararse mediante métodos conocidos por los especialistas en la técnica (véase, por ejemplo, Norgady (1985) Medical Chemistry A Biochemical Approach. Oxford University Press, New York, páginas 388-392).
Los compuestos descritos en este documento se han sintetizado y ensayado para los ensayos de actividad en vitro, en algunos casos, en modelos animales en vivo. Los análisis por resonancia magnética nuclear (RMN), espectrometría de masas, espectroscopia de infrarrojos y cromatografía líquida de alta resolución indican que los compuestos sintetizados tienen estructuras consistentes con las esperadas para tales compuestos y generalmente son mayores de una pureza de 95%. Todos los compuestos ejemplificados o descritos en este documento muestran actividad como antagonistas de endotelina.
C. Evaluación de la bioactividad de los compuestos
Están disponibles procedimientos fisiológicos, farmacológicos y bioquímicos convencionales para ensayar los compuestos para identificar aquellos que poseen cualquier actividad biológica de un péptido de endotelina o la capacidad de interferir con o inhibir péptidos de endotelina. Los compuestos que muestran actividades en vitro, tales como la capacidad de unirse a receptores de endotelina o de completar con uno o más de los péptidos de endotelina para unirse a receptores de endotelina pueden usarse en los métodos de aislamiento de receptores de endotelina y los métodos para distinguir las especificidades de los receptores de endotelina, y son candidatos para el uso en los métodos de tratamiento de los trastornos mediados por endotelina.
De esta manera, pueden identificarse otros compuestos de fórmulas I y II, además de los identificados específicamente en este documento, que son antagonistas o agonistas de endotelina usando tales ensayos de selección.
1. Identificación de los compuestos que modulan la actividad de un péptido de endotelina
Los compuestos se ensayan para la capacidad de modular la actividad de endotelina-1. Se conocen numerosos ensayos por los especialistas en la técnica para evaluar la capacidad de los compuestos para modular la actividad de endotelina (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.; documento EP A1 0 436 189 para BANYU PHARMACEUTICAL CO., LTD. (7 de octubre de 1991); Borges et al. (1989) Eur. J. Pharm. 165: 223-230; Filep et al. (1991) Biochem. Biophys. Res. Commun. 177: 171-176). Los estudios en vitro pueden corroborarse con estudios en vivo (véanse, por ejemplo, las Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.; documento EP A1 0 436 189 para BANYU PHARMACEUTICAL CO., LTD. (7 de octubre de 1991)) y por lo tanto evaluarse la actividad farmacéutica. Tales ensayos se describen en los Ejemplos de este documento e incluyen la capacidad de completar la unión a receptores de ET_{A} y ET_{B} presentes en las membranas aisladas de las líneas celulares que se han alterado por ingeniería genética para expresar los receptores de ET_{A} y ET_{B} en sus superficies celulares.
Las propiedades de un antagonista potencial pueden ensayarse como una función de su capacidad para inhibir una actividad inducida por endotelina en vitro usando un tejido particular, tal como vena y aorta portal de rata así como útero de rata, traquea y vas deferens (véase, por ejemplo, Borges, Von Grafenstein, H. y Knight, D. E., "Tissue selectivity of endothelin", Eur. J. Pharmacol 165: 223-230, (1989)). La capacidad para actuar como un antagonista de endotelina en vivo puede ensayarse en ratas hipertensas, ratones ddy u otros modelos animales conocidos (véase, Kaltenbronn et al. (1990) J. Med. Chem, 33: 838-845, véase también la Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.; y el documento EP A1 0 436 189 para BANYU PHARMACEUTICAL CO. LTD (7 de octubre de 1991); véase también Bolger et al. (1983) J. Pharmacol. Exp. Ther. 225: 291-309). Usando los resultados de tales estudios animales, puede evaluarse la eficacia farmacéutica y pueden determinarse las dosis farmacéuticamente eficaces. Un agonista potencial también puede evaluarse usando ensayos en vitro e en vivo conocidos por los especialistas en la técnica.
La actividad de endotelina puede identificarse mediante la capacidad de un compuesto de ensayo para estimular la constricción de la aorta torácica de rata aislada (Borges et al. (1989) "Tissue selectivity of endothelin" Eur. J. Pharmacol. 165: 223-230). Para realizar el ensayo, el endotelio se raspa y se montan segmentos de anillo bajo tensión en un baño de tejido y se tratan con endotelio en presencia del compuesto de ensayo. Se registran los cambios de tensión inducidos por el endotelio. Pueden generarse curvas de respuesta a la dosis y usarse para proporcionar información con respecto a la potencia inhibidora relativa del compuesto de ensayo. Pueden usarse otros tejidos, incluyendo corazón, músculo esquelético, riñón, útero, traque y vas deferens para evaluar los efectos de un compuesto de ensayo particular sobre la contracción del tejido.
Los antagonistas específicos del isotipo de endotelio pueden identificarse mediante la capacidad de un compuesto de ensayo para interferir con el endotelio que se une a diferentes tejidos o células que expresan subtipos de receptores de endotelina diferentes, o para interferir con los efectos biológicos de la endotelina o de un isotipo de endotelina (Takayanagi et al. (1991) Reg. Pep. 32: 23-37, Panek et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 183: 566-571). Por ejemplo, los receptores de ET_{B} se expresan en células endoteliales vasculares, posiblemente mediando en la liberación de prostaciclina y del factor de relajación derivado del endotelio (De Nucci et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 9797). Los receptores de ET_{A} no se detectan en células de endotelio cultivadas, que expresan los receptores de ET_{B}.
La unión de los compuestos o la inhibición de la unión del endotelio a los receptores de ET_{B} puede ensayarse midiendo la inhibición de la liberación de prostaciclina mediada por endotelina-1, que se mide mediante su metabolito principal estable, 6-ceto PGF_{1\alpha}, a partir de células cultivadas de endotelio aórtico bovino (véase, por ejemplo, Filep et al. (1991) Biochem. and Biophys Res. Commun. 177: 171-176). De esta manera, la afinidad relativa de los compuestos para los diferentes receptores de endotelina puede evaluarse determinando las curvas de respuesta a la dosis inhibidora usando tejidos que difieren en el subtipo de receptor.
Usando tales ensayos, se han determinado y pueden ensayarse las afinidades relativas de los compuestos para los receptores de ET_{A} y para los receptores de ET_{B}. Se seleccionan aquellos que poseen las propiedades deseadas, tales como inhibición específica de la unión de endotelina-1. Los compuestos seleccionados que muestran actividades deseables pueden ser terapéuticamente útiles y se ensayan para tales usos usando los ensayos descritos anteriormente a partir de los cuales puede evaluarse la eficacia en vivo (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.248.807; Patente de Estados Unidos Nº 5.240.910; Patente de Estados Unidos Nº 5.198.548; Patente de Estados Unidos Nº 5.187.195; Patente de Estados Unidos Nº 5.082.838; Patente de Estados Unidos Nº 5.230.999; Solicitudes Canadienses publicadas Nº 2.067.288 y 2071193; Solicitud de Gran Bretaña publicada Nº 2.259.450; Solicitud PCT Internacional Publicada Nº WO 93/08799; Benigi et al. (1993) Kidney International 44: 440-444; y Nirei et al. (1993) Life Sciences 52: 1869-1874). Los compuestos que muestran actividades en vitro que se correlacionan con la eficacia en vivo se formularán después en composiciones farmacéuticas y se usarán como agentes terapéuticos.
Los compuestos también pueden ser útiles en los métodos para identificar y aislar los receptores específicos de endotelina y ayudar en el diseño de compuestos que sean antagonistas o agonistas de endotelina más potentes o que sean más específicos para un receptor de endotelina particular.
2. Aislamiento de receptores de endotelina
Se proporciona un método para identificar los receptores de endotelina. En la práctica de este método, uno o más de los compuestos se unen a un soporte y se usan en métodos de purificación de afinidad de receptores. Seleccionando los compuestos con especificidades particulares, pueden identificarse distintas subclases de receptores de ET.
Uno o más de los compuestos pueden unirse a una resina apropiada, tal como Affi-gel, covalentemente o mediante otro engarce, mediante métodos conocidos por los especialistas en la técnica para la unión de endotelina a tales resinas (véase Schvartz et al. (1990) Endocrinology 126: 3218-3222). Los compuestos enlazados pueden ser aquellos que son específicos para los receptores de ET_{A} o ET_{B} u otra subclase de receptores.
La resina se pre-equilibra con un tampón adecuado generalmente a un pH fisiológico (de 7 a 8). Una composición que contiene receptores disueltos de un tejido seleccionado se mezcla con la resina a la que se une el compuesto y los receptores se eluyen selectivamente. Los receptores pueden identificarse ensayándose para la unión a un isopéptido de endotelina o análogo o mediante otros métodos por los que se identifican y caracterizan proteínas. La preparación de los receptores, la resina y el método de elución pueden realizarse por modificación de protocolos convencionales conocidos por los especialistas en la técnica (véase, por ejemplo, Schvartz et al. (1990) Endocrinology 126: 3218-3222).
Se proporcionan otros métodos para distinguir el tipo de receptor basados en la afinidad diferencial para cualquiera de los compuestos de este documento. También puede usarse cualquiera de los ensayos descritos en este documento para medir la afinidad de los compuestos seleccionados para los receptores de endotelina para distinguir los subtipos de receptores basándose en la afinidad para los compuestos particulares proporcionados en este documento. En particular, un receptor desconocido puede identificarse como un receptor de ET_{A} o ET_{B} midiendo la afinidad de unión del receptor desconocido para un compuesto proporcionado en este documento que tiene una afinidad conocida para uno receptor sobre el otro. Tal interacción preferencial es útil para determinar la enfermedad particular que puede tratarse con un compuesto preparado como se ha descrito en este documento. Por ejemplo, los compuestos con una afinidad elevada para los receptores de ET_{A} y poca o ninguna afinidad para los receptores de ET_{B} son candidatos para el uso como agentes hipertensivos; sin embargo, los compuestos que interactúan preferentemente con los receptores de ET_{B} son candidatos para el uso como agentes anti-asma.
D. Formulación y administración de las composiciones
En este documento se proporcionan formulaciones de las sulfonamidas. Las formulaciones son composiciones diseñadas para la administración de los derivados farmacéuticamente aceptables, particularmente sales de los compuestos sulfonamida proporcionados en este documento. A causa de las características de estabilidad superior observadas de las sales, comparadas con las formas neutras, tales sales, particularmente las sales sódicas, son particularmente adecuadas para la administración oral y parenteral. Tales composiciones incluyen soluciones, suspensiones, comprimidos, comprimidos dispersables, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida y cualquier otra formulación adecuada. Preferiblemente, las composiciones tomarán la forma de una píldora o comprimido. Los métodos para la fabricación de comprimidos, cápsulas y otras de tales formulaciones se conocen por los especialistas en la técnicas (véase, por ejemplo, Ansel, H. C. (1985), Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4ª edición, páginas 126-163).
En las formulaciones, se mezclan concentraciones eficaces de uno o más derivados farmacéuticamente aceptables con un vehículo farmacéutico adecuado. Preferiblemente, los compuestos sulfonamida se derivan en las sales correspondientes, preferiblemente sales sódicas, antes de la formulación, como se ha descrito anteriormente. Las concentraciones de las sales de los compuestos en las formulaciones son eficaces para liberar una cantidad, después de la administración, que aminora los síntomas de la enfermedad mediada por endotelina. Típicamente, las composiciones se formulan para administración de dosis unitarias. Para formular una composición, la fracción en peso del compuesto se disuelve, suspende, dispersa o mezcla de otra forma en un vehículo seleccionado a una concentración eficaz tal que la afección que se trata se alivia o aminora. Los vehículos farmacéuticos adecuados para la administración de los compuestos proporcionados en este documento incluyen cualquier vehículo adecuado conocido por los especialistas en la técnica por ser adecuado para el modo de administración particular.
Además, los compuestos pueden formularse en forma de un solo ingrediente farmacéuticamente activo en la composición o pueden combinarse con otros ingredientes activos. Las suspensiones liposomales, incluyendo liposomas dirigidos a tejido, también pueden se adecuados como vehículos farmacéuticamente aceptables. Éstos pueden prepararse de acuerdo con métodos conocidos por los especialistas en la técnica. Por ejemplo, las formulaciones de liposomas pueden prepararse como se describe en la Patente de Estados Unidos Nº 4.522.811.
El compuesto activo en forma de sal, preferiblemente en forma de una sal sódica, se incluye en el vehículo farmacéuticamente aceptable en una cantidad suficiente para ejercer un efecto terapéuticamente útil en ausencia de efectos secundarios indeseables sobre el paciente que se trata. La concentración terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente ensayando los compuestos en sistemas en vitro e en vivo conocidos (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.; documento EP A1 0 436 189 para BANYU PHARMACEUTICAL CO., LTD (7 de octubre de 1991); Borges et al. (1989) Eur. J. Pharm. 167: 223-230; Filep et al. (1991) Biochem. Biophys. Res. Commun. 177: 171-176) y después las se extrapolan de la misma las dosis para seres humanos.
La concentración de la sal sódica del compuesto activo en la composición de fármaco dependerá de la absorción, inactivación y velocidad de excreción del compuesto activo, de las características fisicoquímicas del compuesto, el dispositivo de dosificación y la cantidad administrada así como de otros factores conocidos por los especialistas en la técnica. Por ejemplo, la cantidad que se libera es suficiente para tratar los síntomas de hipertensión. Se espera que las cantidades eficaces para tratar trastornos mediados por endotelina sean superiores a la cantidad del compuesto sulfonamida que se administraría para tratar infecciones bacterianas.
Típicamente, una dosis terapéuticamente eficaz debería producir una concentración en suero de ingrediente activo de aproximadamente 0,1 ng/ml a aproximadamente 50-100 \mug/ml. Las composiciones farmacéuticas deberían proporcionar típicamente una dosis de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 2000 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal al día. Las formas unitarias de dosificación farmacéuticas se preparan para proporcionar de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg y preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo esencial o una combinación de los ingredientes esenciales por forma de dosificación unitaria.
El ingrediente activo puede administrarse de una vez, o puede dividirse en un número de dosis menores que se administran en intervalos de tiempo. Se entiende que la dosis precisa y la duración del tratamiento es una función de la enfermedad que se trate y puede determinarse empíricamente usando protocolos de ensayo conocidos o mediante extrapolación a partir de datos de ensayo en vivo o en vitro. Debe notarse que las concentraciones y valores de dosificación también pueden variar con la gravedad de la afección que se alivia. Se entiende además que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específicos deberían ajustarse durante el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y con el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de concentración establecidos en este documento son únicamente ejemplares y no pretenden limitar el alcance o práctica de las composiciones reivindicadas.
Los derivados farmacéuticamente aceptables preferidos incluyen ácidos, sales, ésteres, hidratos, solvatos y formas de profármaco. Los derivados se seleccionan para que una forma más estable que el compuesto neutro correspondiente. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables. Las sales más preferidas incluyen sales de metales alcalinos, particularmente sales sódicas, tales como, pero sin limitación, una sal de dihidrogenofosfato sódico y una sal sódica, más preferiblemente la sal sódica.
De esta manera, las concentraciones o cantidades eficaces de uno o más de los compuestos proporcionados en este documento o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos se mezclan con un vehículo farmacéutico adecuado para la administración sistémica, tópica o local para formar las composiciones farmacéuticas. Los compuestos se incluyen en una cantidad eficaz para aminorar o tratar el trastorno mediado por endotelina para el que se contempla el tratamiento. La concentración del compuesto activo en la composición dependerá de la absorción, inactivación, velocidades de excreción del compuesto activo, del dispositivo de dosificación, cantidad administrada y formulación particular así como de otros factores conocidos por los especialistas en la técnica.
Las composiciones pretenden administrarse mediante una vía adecuada, que incluye oral, parenteral, rectal y tópicamente y localmente dependiendo del trastorno que se trate. Por ejemplo, para el tratamiento de trastornos oftálmicos, tales como glaucoma, se contempla al formulación para inyección intraocular y también intravítrea. Para la administración oral, se prefieren presentemente cápsulas y comprimidos. Para la administración parenteral, se prefiere la reconstitución de un polvo liofilizado, preparado como se ha descrito en este documento. Los compuestos en forma de líquido, semi-líquido o sólido se formulan de una manera adecuada para cada vía de administración. Los modos preferidos de administración incluyen modos de administración parenteral y oral.
Las soluciones o suspensiones usadas para aplicación parenteral, intradérmica, subcutánea o tópica pueden incluir cualquiera de los siguientes componentes: un diluyente estéril, tal como agua para inyección, solución salina, aceite fijado, polietilenglicol, glicerina, propilenglicol u otro disolvente sintético; agentes antimicrobianos, tales como alcohol bencílico y metilparabenos; antioxidantes, tales como ácido ascórbico y bisulfito sódico; agentes de quelación, tales como ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA); tampones, tales como acetatos, citratos y fosfatos; y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sódico o dextrosa. Las preparaciones parenterales pueden encerrarse en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiples o unitarias fabricados de vidrio, plástico u otro material adecuado.
En los casos en los que los compuestos muestran una solubilidad insuficiente, pueden usarse métodos para disolver los compuestos. Tales métodos se conocen por los especialistas en la técnica e incluyen, pero sin limitación, el uso de co-disolventes, tales como dimetilsulfóxido (DMSO), el uso de tensioactivos, tales como tween, o disolución en bicarbonato sódico acuoso. Los derivados de los compuestos, tales como profármacos de los compuestos, también pueden usarse en la formulación de las composiciones farmacéuticas eficaces.
Después del mezclado o adición de la sal sódica de el/los compuesto(s) sulfonamida, la mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsión o similar. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, incluyendo el modo de administración deseado y la solubilidad del compuesto en el vehículo seleccionado. La concentración eficaz es suficiente para aminorar los síntomas de la enfermedad, trastorno o afección tratado y puede determinarse empíricamente.
Las formulaciones se proporcionan para administración a seres humanos y animales en formas de dosificación unitarias, tales como comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles y soluciones o suspensiones orales, y emulsiones de aceite-agua que contienen cantidades adecuadas de los compuestos, particularmente las sales farmacéuticamente aceptables, preferiblemente las sales sódicas, de los mismos. Los compuestos farmacéutica y terapéuticamente activos y los derivados de los mismos se formulan típicamente y se administran en formas de dosificación unitarias o formas de dosificación múltiples. Las formas de dosificación unitarias que se usan en este documento se refieren a unidades físicamente discretas adecuadas para seres humanos y sujetos animales y empaquetadas individualmente como se conoce por los especialistas en la técnica. Cada dosis unitaria contiene una cantidad predeterminada del compuesto terapéuticamente activo suficiente para producir el efecto terapéutico deseado, junto con el vehículo o diluyente farmacéutico requerido. Los ejemplos de formas de dosificación unitarias incluyen ampollas y jeringas empaquetadas individualmente, comprimidos o cápsulas. Las formas de dosificación unitarias pueden administrarse en fracciones o múltiplos de las mismas. Una forma de dosificación múltiple es una pluralidad de formas de dosificación unitarias idénticas empaquetadas en un único contenedor que se administra en forma de dosis unitaria segregada. Los ejemplos de formas de dosificación múltiples incluyen viales, frascos de comprimidos o cápsulas o botellas de pintas o galones. Además, la forma de dosificación múltiple es un múltiplo de dosis unitarias que no se segregan en paquete.
La composición puede contener junto con el ingrediente activo: un diluyente tal como lactosa, sacarosa, fosfato dicálcico o carboximetilcelulosa; un lubricante, tal como estearato de magnesio, estearato de calcio y talco; y un aglutinante tal como almidón, gomas neutras, tales como goma arábiga, gelatina, glucosa, molasas, polivinilpirrolidona, celulosas y derivados de las mismas, povidona, crospovidonas y otros de tales aglutinantes conocidos por los especialistas en la técnica. Las composiciones líquidas farmacéuticamente administrables pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo, dispersando o mezclando de otra forma un compuesto activo que se ha definido anteriormente un adyuvantes farmacéuticos opcionales en un vehículo, tales como, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol y similares, para formar de esta manera una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica que se administra también puede contener menos cantidades de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes o agentes solubilizantes, agentes tamponantes del pH y similares, por ejemplo, acetato, citrato sódico, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitano, trietanolamina, acetato sódico, oleato de trietanolamina y otros de tales agentes. Los métodos actuales para preparar tales formas de dosificación se conocen, o serán obvios, por los especialistas en la técnica; por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 15ª edición, 1975. La composición o formulación que se administrar, en cualquier caso, contendrá una cantidad del compuesto activo en una cantidad suficiente para aliviar los síntomas del sujeto tratado.
Pueden prepararse formas de dosificación o las composiciones que contienen el ingrediente activo en el intervalo de 0,005% a 100% haciendo el balance a partir del vehículo no tóxico. Para la administración oral, se forma una composición no tóxica farmacéuticamente aceptable mediante la incorporación de cualquier excipiente empleado normalmente, tal como, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, talco, derivados de celulosa, croscarmelosa sódica, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio o sacarina sódica. Tales composiciones incluyen soluciones, suspensiones, comprimidos, cápsulas, polvos y formulaciones de liberación sostenida, tales como, pero sin limitación, implantes y sistemas de liberación microencapsulados, y polímeros biocompatibles y biodegradables, tales como colágeno, vinilacetato de etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, poliortoésteres, ácido poliacético y otros. Los métodos para la preparación de estas formulaciones se conocen por los especialistas en la técnica. Se contempla que las composiciones pueden contener 0,001%-100% del ingrediente activo, preferiblemente 0,1-85%, típicamente 75-95%.
La sales, preferiblemente las sales sódicas, de los compuestos activos pueden prepararse con vehículos que protegen al compuesto frente a la eliminación rápida en el cuerpo, tales como formulaciones de liberación retardada o recubrimientos.
Las formulaciones pueden incluir otros compuestos activos para obtener las combinaciones de propiedades deseadas. Los compuestos de fórmula I, o las sales derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos que se describen en este documento, también pueden administrarse ventajosamente para propósitos terapéuticos o profilácticos con otro agente farmacológico conocido en la técnica general para ser de valor en el tratamiento de una o más de las enfermedades o condiciones médicas indicadas anteriormente en este documento, tales como bloqueantes beta-adrenérgicos (por ejemplo atenolol), un bloqueante del canal de calcio (por ejemplo nifedipina), un inhibidor de la enzima conversora de angiotensina(ACE) (por ejemplo lisinopril), un diurético (por ejemplo furosemida o clorhidrotiazidsa), un inhibidor de la enzima conversora de endotelina (ECE) (por ejemplo, fosforamidona), un inhibidor de endopeptidasa neutro (NEP), un inhibidor de HMGCoA reductasa, un donante de óxido nítrico, un anti-oxidante, un vasodilatador, un agonista de dopamina, un agente neuroprotector, un esteroide, un beta-agonista, un anti-coagulante o un agente trombolítico. Se entiende que tal terapia de combinación constituye un aspecto más de las composiciones y métodos de tratamiento proporcionados en este documento.
1. Formulaciones para administración oral
Las formas de dosificación farmacéuticas orales son sólidas, gel o líquidas. Las formas de dosificación sólidas son comprimidos, cápsulas, gránulo y polvos de carga. Los tipos de comprimidos orales incluyen comprimidos, pastillas masticables y comprimidos que pueden recubrirse entéricamente, recubiertos de azúcar o recubiertos de película. Las cápsulas pueden ser cápsulas de gelatina duras o blandas, mientras que los gránulos y polvos pueden proporcionarse en forma no efervescente o efervescente con la combinación de otros ingredientes conocidos por los especialistas en la técnica.
En ciertas realizaciones, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, preferiblemente cápsulas o comprimidos. Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trociscos y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante; un diluyente; un agente disgregante; un lubricante; un emoliente; un agente edulcorante; y un agente aromatizante.
Los ejemplos de aglutinantes incluyen celulosa microcristalina, goma de tragacanto, solución de glucosa, mucílago de goma arábiga, solución de gelatina, sacarosa y pasta de almidón. Los lubricantes incluyen talco, almidón, estearato de magnesio o calcio, licopodio y ácido esteárico. Los diluyentes incluyen, por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón, caolín, sal, manitol y fosfato dicálcico. Los emolientes incluyen, pero sin limitación, dióxido de silicio coloidal. Los agentes disgregantes incluyen croscarmelosa sódica, almidón glicolato sódico, ácido algínico, almidón de maíz, almidón de patata, bentonita, metilcelulosa, agar y carboximetilcelulosa. Los agentes colorantes incluyen, por ejemplo, cualquiera de los tintes FD y C solubles en agua certificados y aprobados y las mezclas de los mismos; y tintes FD y C insolubles en agua suspendidos en hidrato de alúmina. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, lactosa, manitol y agentes edulcorantes artificiales tales como ciclamato sódico y sacarina, y cualquier número de aromatizantes secos en nebulización. Los agentes aromatizantes incluyen aromatizantes naturales extraídos de plantas tales como frutas y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación placentera, tales como, pero sin limitación, menta y salicilato de metilo. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitano, monolaurato de dietilenglicol y éter de polioxoetilenlauralo. Los recubrimientos entéricos incluyen ácidos grasos, grasas, ceras, laca, laca amoniacal y ftalatos de acetato de celulosa. Los recubrimientos de película incluyen hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, polietilenglicol 4000 y ftalato de acetato de celulosa.
Si se desea la administración oral, la sal del compuesto podría proporcionarse en una composición que se proteja del medio ácido del estómago. Por ejemplo, la composición puede formularse en un recubrimiento entérico que mantenga su integridad en el estómago y libere el compuesto activo en el intestino. La composición también puede formularse junto con un antácido u otro ingrediente de ese tipo.
Cuando la forma de dosificación unitaria es una cápsula, ésta puede contener, además del material del tipo anterior, un vehículo líquido tal como un aceite graso. Además, las formas de dosificación unitarias pueden contener otros materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, recubrimientos de azúcar y otros agentes entéricos. Los compuestos también pueden administrarse en forma de un componente de un elixir, suspensión, jarabe, cera, espolvoreado, goma de mascar o similar. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, tintes y colorantes y aromatizantes.
Los materiales activos también pueden mezclarse con otros materiales activos que no afecten a la acción deseada, o con materiales que complementen la acción deseada, tales como antácidos, bloqueantes de H2 y diuréticos. Por ejemplo, si el compuesto se usa para tratar el asma o hipertensión, puede usarse con otros broncodilatadores y agentes antihipertensivos, respectivamente. El ingrediente activo es un compuesto o sal del mismo que se ha descrito anteriormente. Pueden incluirse concentraciones superiores, hasta aproximadamente 98% en peso del ingrediente activo.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables incluidos en los comprimidos son aglutinantes, lubricantes, diluyentes, agentes disgregantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes y agentes humectantes. Los comprimidos recubiertos entéricos, a causa del recubrimiento entérico, resisten a la acción del ácido del estómago y se disuelven o disgregan en los intestinos neutro o alcalino. Los comprimidos recubiertos de azúcar se son comprimidos compactados a los que se les aplican diferentes capas de sustancias farmacéuticamente aceptables. Los comprimidos recubiertos de película son comprimidos compactados que se han recubierto con un polímero u otro recubrimiento adecuado. Los comprimidos compactados múltiples son comprimidos comparados fabricados mediante más de un ciclo de compresión utilizando las sustancias farmacéuticamente aceptables mencionadas anteriormente. También pueden usarse agentes colorantes en las formas de dosificación anteriores. Los agentes aromatizantes y edulcorantes se usan en comprimidos compactados, comprimidos recubiertos de azúcar, compactados múltiples y masticables. Los agentes aromatizantes y edulcorantes son especialmente útiles en la formación de comprimidos masticables y pastillas.
Las formas de dosificación oral líquidas incluyen soluciones acuosas, emulsiones, suspensiones, soluciones y/o suspensiones reconstituidas a partir de gránulos no efervescentes y preparaciones efervescentes reconstituidas a partir de gránulos efervescentes. Las soluciones acuosas incluyen, por ejemplo, elixires y jarabes. Las emulsiones son de aceite en agua o de agua en aceite.
Los elixires son preparaciones hidroalcohólicas transparentes y edulcoradas. Los vehículos farmacéuticamente aceptables usados en los elixires incluyen disolventes. Los jarabes son soluciones acuosas concentradas de azúcar, por ejemplo, sacarosa, y pueden contener un conservante. Una emulsión es un sistema de dos fases en el que un líquido se dispersa en forma de pequeños glóbulos a lo largo de otro líquido. Los vehículos farmacéuticamente aceptables usados en las emulsiones son líquidos no acuosos, agentes emulsionantes y conservantes. Las suspensiones usan agentes de suspensión farmacéuticamente aceptables y conservantes. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos no efervescentes, para reconstituirse en una forma de dosificación oral líquida, incluyen diluyentes, edulcorantes y agentes humectantes. La sustancia farmacéuticamente aceptable usada en los gránulos efervescentes, para reconstituirse en una forma de dosificación oral líquida, incluyen ácidos orgánicos y una fuente de dióxido de carbono. Los agentes colorantes y aromatizantes se usan en todas las formas de dosificación anteriores.
Los disolventes incluyen glicerina, sorbitol, alcohol etílico y jarabe. Los ejemplos de conservantes incluyen glicerina, metil y propilparabeno, ácido benzoico, benzoato sódico y alcohol. Los ejemplos de líquidos no acuosos utilizados en las emulsiones incluyen aceite mineral y aceite de semilla de algodón. Los ejemplos de agentes emulsionantes incluyen gelatina, goma arábiga, tragacanto, bentonita y tensioactivos tales como monooleato de polioxietilenosorbitano. Los agentes de suspensión incluyen carboximetilcelulosa sódica, pectina, tragacanto, goma Veegum y goma arábiga. Los diluyentes incluyen lactosa y sacarosa. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, jarabes, glicerina y agentes edulcorantes artificiales tales como ciclamato sódico y sacarina. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitano, monolaurato de dietilenglicol y polioxietilen lauril éter. Los ácidos orgánicos incluyen ácido cítrico y ácido tartárico. Las fuentes de dióxido de carbono incluyen bicarbonato sódico y carbonato sódico. Los agentes colorantes incluyen cualquiera de los tintes FD y C solubles en agua certificados y aprobados, y mezclas de los mismos. Los agentes aromatizantes incluyen aromas naturales extraídos de plantas tales como frutas, y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación placentera al gusto.
Para un forma de dosificación sólida, la solución o suspensión, en por ejemplo carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos, se encapsula preferiblemente en una cápsula de gelatina. Tales soluciones, y la preparación y encapsulación de las mismas, se describen en las Patentes de Estados Unidos N 4.328.245; 4.409.239; y 4.410.545. Para una forma de dosificación líquida, la solución, por ejemplo en polietilenglicol, puede diluirse con una cantidad suficiente de un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo agua, para medirse fácilmente para la administración.
Como alternativa, las formulaciones orales líquidas o semi-sólidas pueden prepararse disolviendo o dispersando el compuesto activo o la sal en aceites vegetales, glicoles, triglicéridos, ésteres de propilenglicol (por ejemplo, carbonato de propileno) y otros de tales vehículos, y encapsulando estas soluciones o suspensiones en cáscaras de cápsulas de gelatina duras o blandas. Otras formulaciones útiles incluyen las indicadas en las Patentes de Estados Unidos Nº 28.819 y 4.358.603.
En una realización, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, preferiblemente cápsulas o comprimidos. En una realización preferida, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, preferiblemente cápsulas o comprimidos, que contienen 10-100%, preferiblemente 50-95%, más preferiblemente 75-85%, aún más preferiblemente 80-85%, en peso, de una o más sulfonamidas o sales de sulfonamida, preferiblemente sales de hidrogenofosfato sódico o sales sódicas, más preferiblemente las sale sódicas, de uno o más compuestos sulfonamida de fórmula I; aproximadamente 0-25%, preferiblemente 8-15%, de un diluyente o aglutinante, tal como lactosa o celulosa microcristalina; aproximadamente de 0 a 10%, preferiblemente aproximadamente 0-7%, de un disgregante, tal como un almidón modificado o polímero de celulosa, particularmente una carboximetilcelulosa sódica reticulada, tal como croscarmelosa sódica (la croscarmelosa sódica NF está disponible en el mercado bajo el nombre AC-DI-SOL, FMC Corporation, Philadelphia, PA) o almidón glicolato sódico; y 0-2% de un lubricante, tal como estearato de magnesio, talco y estearato de calcio. El disgregante, tal como croscarmelosa sódica o almidón glicolato sódico, proporciona una rápida ruptura de la matriz celulósica para la liberación inmediata del agente activo después de la disolución del polímero de recubrimiento. En todas las realizaciones, la cantidad precisa del ingrediente activo y de los ingredientes auxiliares puede determinarse empíricamente y es una función de la vía de administración y del trastorno que se trate.
En una realización ejemplar, las formulaciones son cápsulas que contienen aproximadamente 50%-100%, preferiblemente aproximadamente 70-90%, más preferiblemente aproximadamente 80-90%, aún más preferiblemente aproximadamente 83% de una o más sales sódicas de uno o más compuestos sulfonamida de fórmula I; aproximadamente 0-15%, preferiblemente aproximadamente 11% de un diluyente o un aglutinante, tal como lactosa o celulosa microcristalina; aproximadamente 0-10%, preferiblemente aproximadamente 5% de un disgregante, tal como croscarmelosa sódica o almidón glicolato sódico; y aproximadamente 0 a 5%, preferiblemente aproximadamente 1% de un lubricante, tal como estearato de magnesio. Las formas sólidas par administración en forma de comprimidos también se contemplan en este documento.
En una realización ejemplar preferida, las formulaciones son cápsulas que contienen 83% de una o más sales sódicas de uno o más compuestos sulfonamida; 11% de celulosa microcristalina; 5% de un disgregante, tal como Croscarmelosa sódica o almidón glicolato sódico; y 1% de estearato de magnesio.
Las realizaciones anteriores también pueden formularse en forma de un comprimido, que puede recubrirse opcionalmente. Los comprimidos contendrán las composiciones descritas en este documento.
En todas las realizaciones, las formulaciones en comprimidos y cápsulas pueden recubrirse como se conoce por los especialistas en la técnica con el fin de modificar o sostener la disolución del ingrediente activo. De esta manera, por ejemplo, pueden recubrirse con un recubrimiento convencional digerible entéricamente, tal como fenilsalicilato, ceras y ftalato de acetato de celulosa.
2. Soluciones y emulsiones inyectables
La administración parenteral, generalmente caracterizada por inyección, por vía subcutánea, intramuscular o intravenosa, también se contempla en este documento. Las preparaciones inyectables pueden prepararse en formas convencionales, en forma de soluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección, o en forma de emulsiones. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol o etanol. Además, si se desea, las composiciones farmacéuticas que se administran también pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes tamponantes del pH, estabilizantes, mejoradores de la solubilidad y otros agentes de ese tipo, tales como por ejemplo, acetato sódico, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina y ciclodextrinas. La implantación de un sistema de liberación lenta o de liberación sostenida, de tal forma que se mantenga un nivel de dosificación constante (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 3.710.795) también se contempla en este documento. El porcentaje de compuesto activo contenido en tales composiciones parenterales depende enormemente de la naturaleza específica del mismo, así como de la actividad del compuesto y de las necesidades del sujeto.
La administración parenteral de las formulaciones incluye administraciones intravenosa, subcutánea e intramuscular. Las preparaciones para administración parenteral incluyen soluciones estériles preparadas para inyección, productos solubles de polvo seco, tales como los polvos liofilizados descritos en este documento, preparados para combinarse con un disolvente justo antes del uso, incluyendo comprimidos hipodérmicos, suspensiones estériles preparadas para inyección, productos insolubles de polvo estéril para combinarse con un vehículo justo antes del uso y emulsiones estériles. Las soluciones pueden ser acuosas o no acuosas.
Si se administran por vía intravenosa, los vehículos adecuados incluyen solución salina fisiológica o solución salina tamponada con fosfato (PBS) y soluciones que contienen agentes densificantes y solubilizantes, tales como glucosa, polietilenglicol y polipropilenglicol y mezclas de los mismos.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables usados en las preparaciones parenterales incluyen vehículos acuosos, vehículos no acuosos, agentes antimicrobianos, agentes isotónicos, tampones, antioxidantes, anestésicos locales, agentes de suspensión y dispersión, agentes emulsionantes, agentes secuestrantes o quelantes y otras sustancias farmacéuticamente activas.
Los ejemplos de vehículos acuosos incluyen Inyección de Cloruro Sódico, Inyección de Ringers, Inyección de Dextrosa Isotónica, Inyección de Agua Estéril, Inyección de Ringers Lactada y Dextrosa. Los vehículos parenterales no acuosos incluyen aceites fijados de origen vegetal, aceite de semilla de algodón, aceite de maíz, aceite de sésamo y aceite de cacahuete. Los agentes antimicrobianos en concentraciones bacterioestáticas o fungiestáticas deberían añadirse a preparaciones parenterales empaquetadas en contenedores multi-dosis que incluyen fenoles, cresoles, mercuriales, alcohol bencílico, clorobutano, esteres de ácido metil y propil-p-hidroxibenozoico, timerosal, cloruro de benzalconio y cloruro de bencetonio. Los agentes isotónicos incluyen cloruro sódico y dextrosa. Los tampones incluyen fosfato y citrato. Los antioxidantes incluyen bisulfato sódico. Los anestésicos locales incluyen clorhidrato de procaína. Los agentes de suspensión y dispersión incluyen carboximetilcelulosa sódica, hidroxipropilmetilcelulosa y polivinilpirrolidona. Los agentes emulsionantes incluyen Polysorbato 80 (Tween 80). Un agente secuestrante o quelante de iones de metal incluye EDTA. Los vehículos farmacéuticos también incluyen alcohol de etilo, polietilenglicol y propilenglicol para vehículos miscibles en agua e hidróxido sódico, ácido clorhídrico, ácido cítrico o ácido láctico para el ajuste del pH.
La concentración del compuesto farmacéuticamente activo se ajusta para que una inyección proporcione una cantidad eficaz para producir el efecto farmacológico deseado. La dosis exacta depende de la edad, peso y afección del paciente o animal como se conoce en la técnica.
Las preparaciones parenterales de dosis unitaria se empaquetan en una ampolla, un vial o una jeringa con una aguja. Todas las preparaciones para administración parenteral deberían se estériles, como se conoce y se practica en la técnica.
De forma ilustrativa, la infusión intravenosa o intraarterial de una solución acuosa estéril que contiene un compuesto activo es un modo eficaz de administración. Otra realización es una solución o suspensión acuosa u oleosa que contiene un material activo inyectado según sea necesario para producir el efecto farmacológico deseado.
Los inyectables se diseñan para administración local y sistémica. Típicamente, una dosis terapéuticamente eficaz se formula para que contenga una concentración de al menos aproximadamente 0,1% p/p hasta aproximadamente 90% p/p o más, preferiblemente más de 1% p/p del compuesto activo para el/los tejido(s) tratado(s). El ingrediente activo puede administrarse de una vez, o puede dividirse en un número de dosis más pequeñas para administrarse en intervalos de tiempo. Se entiende que la dosis precisa y la duración del tratamiento es una función del tejido que se trata y puede determinarse empíricamente usando protocolos de ensayo conocidos o por extrapolación de los datos de ensayo en vitro e en vivo. Debe notarse que los valores de concentraciones y dosis pueden variarse también con la edad del individuo tratado. También se entiende que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específicos deberían ajustarse durante el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las formulaciones, y que los intervalos de concentración establecidos en este documento son únicamente ejemplares y no pretenden limitar el alcance o práctica de las formulaciones reivindicadas.
El compuesto puede suspenderse en forma micronizada u otra forma adecuada o puede derivarse para producir un producto activo más soluble o para producir un profármaco. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, incluyendo el modo de administración deseado y la solubilidad del compuesto en el vehículo seleccionado. La concentración eficaz e suficiente para aminorar los síntomas e la afección y puede determinarse empíricamente.
En muchos casos, las soluciones de sales sódicas, incluyendo la sal sódica y las sales de hidrogenofosfato sódico muestran, comparadas con el compuesto neutro. Estas sales también muestran una solubilidad mejorada sobre el compuesto neutro en medio acuoso. Se descubrió que la sal sódica, en ciertas formulaciones acuosas, era tan estable como la sal de hidrogenofosfato sódico.
3. Polvos liofilizados
De particular interés en este documento son los polvos liofilizados, que pueden reconstituirse para la administración en forma de soluciones, emulsiones y otras mezclas. También pueden reconstituirse y formularse en forma de sólidos o geles.
En las realizaciones particulares, se proporcionan formulaciones de hidrogenofosfato sódico o sodio, preferiblemente sodio, sales de los compuestos de sulfonamida que poseen una estabilidad aumentada relativa a las formulaciones de sulfonamidas neutras. Específicamente, se proporciona la formulación de sales sódicas de sulfonamida en forma de un polvo liofilizado estéril. Se descubrió que estos polvos tenían una estabilidad aumentada en relación con las formulaciones de las sulfonamidas neutras.
El polvo liofilizado estéril se prepara disolviendo la sal sódica en una solución de tampón fosfato sódico que contiene dextrosa u otro excipiente adecuado. La posterior filtración estéril de la solución seguido de la liofilización en condiciones convencionales conocidas por los especialistas en la técnica proporciona la formulación deseada. Brevemente, el polvo liofilizado se prepara disolviendo dextrosa, sorbitol, fructosa, jarabe de maíz, xilitol, glicerina, glucosa, sacarosa u otro agente adecuado, aproximadamente 1-20%, preferiblemente aproximadamente 5 a 15%, en un tampón adecuado, tal como citrato, fosfato sódico o potásico u otro tampón de ese tipo conocido por los especialistas en la técnica, típicamente, a aproximadamente pH neutro. Después, se añade a la mezcla resultante una sal seleccionada, preferiblemente la sal sódica de la sulfonamida (aproximadamente 1 g de la sal por 10-100 g de la solución tampón, típicamente aproximadamente 1 g/30 g), preferiblemente a aproximadamente la temperatura ambiente, más preferiblemente a aproximadamente 30-35ºC y se agita hasta que se disuelve. La mezcla resultante se diluye añadiendo más tampón (para que la concentración resultante de la sal disminuya en aproximadamente 10-50%, típicamente aproximadamente 15-25%). La mezcla resultante se filtra o se trata estéril para retirar las partículas y garantizar la esterilidad, y se proporciona en viales para liofilización. Cada vial contendrá una dosis unitaria (100-500 mg, preferiblemente 250 mg) o dosis múltiples de la sal sulfonamida. El polvo liofilizado puede almacenarse en condiciones apropiadas, tales como de aproximadamente 4ºC a temperatura ambiente. Los detalles de un procedimiento ejemplar se establecen en los Ejemplos.
La reconstitución de este polvo liofilizado con agua para inyección proporciona una formulación para uso en la administración parenteral de sales sódicas de las sulfonamidas. Para reconstitución, se añaden aproximadamente 1-50 mg, preferiblemente 5-35 mg, más preferiblemente aproximadamente 9-30 por ml de agua estéril u otro vehículo adecuado. La cantidad precisa depende de la indicación tratada y del compuesto seleccionado. Tal cantidad puede determinarse empíricamente.
En una realización, las formulaciones contienen sólidos liofilizados que contienen una o más sales de hidrogenofosfato sódico o sódicas, preferiblemente sódicas, de uno o más de los compuestos sulfonamida de fórmula I y también contienen uno o más de los siguientes:
un tampón, tal como fosfato sódico o potásico, o citrato:
un agente solubilizante, tal como LABRASOL, DMSO, bis(trimetilsilil)acetamida, etanol, propilenglicol (PG) o polivinilpirrolidona (PVP); y
un azúcar, tal como sorbitol o dextrosa.
En realizaciones más preferidas, las formulaciones contienen una o más sales de hidrogenofosfato sódico o sódicas, preferiblemente sódicas, de uno o más de los compuestos sulfonamida de fórmula I; un tampón, tal como fosfato sódico o potásico, o citrato; y un azúcar, tal como sorbitol o dextrosa.
En las realizaciones más preferidas, las formulaciones contienen una o más sales sódicas de uno o más compuestos sulfonamida de fórmula I; un tampón de fosfato sódico; y dextrosa.
4. Administración tópica
Las mezclas tópicas se preparan como se ha descrito para la administración local y sistémica. La mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsiones o similares y se formulan en forma de cremas, geles, pomadas, emulsiones, soluciones, elixires, lociones, suspensiones, tintes, pastas, espumas, aerosoles, irrigaciones, nebulizaciones, supositorios, vendajes, parches dérmicos o cualquier otra formulación adecuada para administración tópica.
Las sales sódicas y otros derivados de los compuestos pueden formularse en forma de aerosoles para aplicación tópica, tal como por inhalación (véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 4.044.126, 4.414.209 y 4.364.923, que describen aerosoles para liberación de un esteroide útil para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, particularmente asma). Estas formulaciones para administración en el tracto respiratorio pueden estar en forma de un aerosol o solución para un nebulizador, o en forma de un polvo microfino para insuflación, solo o junto con un vehículo inerte tal como lactosa. En tal caso, las partículas de la formulación tendrán típicamente diámetros de menos de 50 micras, preferiblemente menos de 10 micras.
Las sales sódicas de los compuestos pueden formularse para aplicación local o tópica, tal como para aplicación tópica en la piel y membranas mucosas, tales como en el ojo, en forma de geles, cremas y lociones y para aplicación en el ojo para aplicación intracisternal o intraespinal. La administración tópica se contempla para liberación transdérmica y también para administración en los ojos o mucosa, o para terapias de inhalación. También pueden administrarse soluciones nasales del compuesto activo solo o junto con otros excipientes farmacéuticamente aceptables.
Estas soluciones, particularmente aquellas deseadas para uso oftálmico, pueden formularse en forma de soluciones isotónicas al 0,01%-10%, pH de aproximadamente 5-7, con sales apropiadas.
5. Artículos de fabricación
Finalmente, los derivados, particularmente las sales, ácidos, ésteres y profármacos, preferiblemente las sales sódicas, de los compuestos pueden empaquetarse en forma de artículos de fabricación que contienen material de empaquetado, una sal, ácido, éster o profármaco, preferiblemente una sal sódica, de un compuesto proporcionado en este documento, que es eficaz para antagonizar los efectos de endotelina, aminorar los síntomas de un trastorno mediado por endotelina o inhibir la unión de un péptido de endotelina con un receptor de ET con una IC_{50} de menos de aproximadamente 10 \muM, dentro del material de empaquetado, y una marca que indica que el compuesto o sal del mismo se usa para antagonizar los efectos de endotelina, tratar trastornos mediados por endotelina o inhibir la unión de un péptido de endotelina con un receptor de ET.
Los artículos de fabricación proporcionados en este documento contienen materiales de empaquetado. Los materiales de empaquetado para uso en productos farmacéuticos de empaquetado se conocen bien por los especialistas en la técnica. Véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 5.323.907, 5.052.558 y 5.033.352. Los ejemplos de materiales de empaquetado farmacéuticos incluyen, pero sin limitación, lotes de ampollas, frascos, tubos, inhaladores, bombas, bolsas, viales, contenedores, jeringas, frascos y cualquier material de empaquetado adecuado para la formulación seleccionada y el modo de administración y tratamiento deseados. Una gran cantidad de formulaciones de los compuestos y composiciones proporcionados en este documento se contemplan como una diversidad de tratamientos para cualquier trastorno en el que se implica PAI, particularmente PAI-1, como mediador o contribuidor de los síntomas o causas.
6. Formulaciones para otras vías de administración
Dependiendo de la afección que se trate también se contemplan en este documento otras vías de administración, tales como aplicación tópica, parches transdérmicos y administración rectal.
Por ejemplo, las formas de dosificación farmacéuticas para administración rectal son supositorios rectales, cápsulas y comprimidos para efecto sistémico. Los supositorios rectales que se usan en este documento significa cuerpos sólidos para inserción en el recto que se funden o ablandan a temperatura corporal liberando uno o más ingredientes farmacológica o terapéuticamente activos. Las sustancias farmacéuticamente aceptables utilizadas en los supositorios rectales son bases o vehículos y agentes para aumentar el punto de fusión. Los ejemplos de bases incluyen manteca de cacao (aceite de teobroma), glicerina-gelatina, carbocera, (polioxietilenglicol) y mezclas apropiadas de mono-, di- y triglicéridos de ácidos grasos. Pueden usarse combinaciones de las diversas bases. Los agentes para aumentar el punto de fusión de los supositorios incluyen espermaceti y cera. Los supositorios rectales pueden prepararse mediante el método de compresión o por moldeo. El peso típico de un supositorio rectal es de aproximadamente 2 a 3 g.
Los comprimidos y cápsulas para administración rectal se fabrican usando la misma sustancia farmacéuticamente aceptable y mediante los mismos métodos que para las formulaciones para administración oral.
Los siguientes ejemplos se incluyen únicamente para propósitos ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la invención.
Ejemplo 1 Preparación del compuesto 7: N-(2-acetil-4,6-dimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida
Etapa 1
Preparación del compuesto 1 
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21 
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A un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con una barra agitadora magnética se le añadieron 20,0 g de 5-amino-3,4-dimetilisoxazol, 50 ml de piridina y 2,0 g (cantidad catalítica) de dimetilaminopiridina. La mezcla se enfrió en un baño de hielo mientras se añadían en porciones 21,5 g de cloruro de 2-carboximetil-3-tiofenosulfonilo. El matraz se cerró herméticamente, el baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mayor parte de la piridina se retiró por evaporación rotatoria y los materiales residuales se repartieron entre acetato de etilo y HCl 2 N. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x). Los extractos combinados se lavaron con HCl diluido (2 x), salmuera (2 x) y después se secaron sobre sulfato de magnesio. La filtración y la condensación por evaporación rotatoria produjeron 23,2 g del compuesto 1 en forma de un aceite.
Etapa 2A
Preparación del compuesto 2 
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22 
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A un matraz de fondo redondo de 1 l equipado con una barra agitadora magnética y embudo de goteo se le añadieron 23,1 g del compuesto 1, 500 ml de cloruro de metileno y 28,4 g de diisopropilamina. La reacción se enfrió en un baño de hielo y se le añadieron gota a gota 6,0 ml de bromometil metil éter. El baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. En este punto, se añadieron 200 ml de agua y la reacción se agitó durante 30 min. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo (2 x) con cloruro de metileno. Después, las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl 0,5 N, agua, bicarbonato sódico saturado y salmuera y finalmente se secaron sobre sulfato de magnesio. La filtración y la evaporación rotatoria produjeron un aceite que se purificó de nuevo por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo al 25-30%/hexano como eluyente para producir 21,5 g del compuesto 2 en forma de un aceite.
Etapa 2B
Preparación del compuesto 3 
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23 
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A un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con una barra agitadora magnética se le añadieron 21,4 g del compuesto 2, 120 ml de tetrahidrofurano y 120 ml de hidróxido sódico 1 N. La reacción se agitó rápidamente hasta que se completó la reacción (aproximadamente 3-4 h). La mayor parte del tetrahidrofurano se retiró por evaporación rotatoria y los materiales residuales se mezclaron con 50 ml de agua. Después, esta mezcla se acidificó mediante la adición de 130 ml de HCl 1 N y después se extrajo con 200 ml (2 x) de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con agua (50 ml) y después con salmuera (50 ml) y finalmente se secaron con sulfato de magnesio. La filtración y la condensación por evaporación rotatoria produjeron 20,1 g del compuesto 3 en forma de un aceite amarillo que solidificó tras el reposo.
Etapa 2C
Preparación del compuesto 4 
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24 
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A un matraz de fondo redondo de 1 l equipado con una barra agitadora magnética y embudo de goteo se le añadieron 19,7 g del compuesto 3, 200 ml de cloruro de metileno y 5 gotas de piridina. Se añadió gota a gota una solución de 128 ml de cloruro de oxalilo en 100 ml de cloruro de metileno. Después, el embudo de goteo se reemplazó por un condensador de reflujo y la reacción se calentó a suave reflujo durante 3 h, después de lo cual se condensó por evaporación rotatoria para producir 20,9 g del compuesto 4 en forma de un sólido pardo. Este material se usó directamente en la Etapa 3 sin purificación adicional.
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Etapa 3
Preparación del compuesto 6
25
A un matraz de fondo redondo de 1 l equipado con una barra agitadora magnética y embudo de goteo se le añadieron 18,5 g de 2-acetil-4,6-dimetilanilina (5) y 150 ml de cloruro de metileno. A esto se le añadió gota a gota una solución de 20,7 g del compuesto 4 disuelto en 350 ml de cloruro de metileno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y después se condensó por evaporación rotatoria. A los materiales residuales se les añadieron 200 ml de éter y la mezcla se filtró. La torta de filtro se lavó con 3 x 100 ml de éter. Los filtrados combinados se lavaron con 3 x 100 ml de HCl 1 N seguido de 100 ml de agua, bicarbonato sódico sat. y salmuera. Después, la solución se secó con sulfato de magnesio, se filtró y se condensó por evaporación rotatoria para producir un material semi-cristalino. Este material se trituró con 200 ml de éter para producir 23,7 g del compuesto 6 en forma de un sólido blanco.
Etapa 4A
Preparación del compuesto 7
26
A un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con una barra agitadora magnética y condensador de reflujo se le añadieron 23,7 g del compuesto 6, 180 ml de metanol y 90 ml de HCl conc. La mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. El calentamiento se continuó y la mezcla se agitó y se enfrió con un baño de hielo. Después de aproximadamente 30 min la mezcla se filtró y la torta de filtro se lavó con una mezcla de agua y metanol para producir 18,3 g del compuesto 7. Este material se recristalizó en acetato de etilo/hexano para dar 16,8 g de material en forma de un sólido blanco: p.f. 158-160ºC.
Etapa 4B
Preparación de la sal sódica del compuesto 7
27
A 16,8 g del compuesto 7 disuelto en 800 ml de acetato de etilo y 200 ml de tetrahidrofurano se le añadieron 100 ml de bicarbonato sódico saturado. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con 2 x 100 ml más de bicarbonato sódico sat. Los lavados de bicarbonato combinados se extrajeron de nuevo con acetato de etilo y las soluciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se condensaron por evaporación rotatoria para producir una espuma. Este material se disolvió en 300 ml de agua y la solución resultante se filtró y se liofilizó para producir 15,5 g de la sal sódica del compuesto 7 en forma de un sólido blanco.
Ejemplo 2 Preparación del compuesto 9: N-{2-ciano-3,4,6-trimetilfenil}-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida
28
Se preparó N-(2-ciano-3,4,6-trimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida
mediante el procedimiento del Ejemplo 1 con la excepción de que se sustituyó 2-acetil-4,6-dimetilanilina por 2-ciano-3,4,6-trimetilanilina (8) en la Etapa 3.
Ejemplo 3 Preparación del compuesto 16: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]-sulfonil}-N-(3,4,6-trimetil-2-propanoilfenil)-2-tiofenocarboxamida
Etapa 1
Preparación del compuesto 10: ácido 3{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxílico 
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29 
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A un matraz de fondo redondo de 500 ml que contenía 46,5 g de éster metílico del ácido 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxílico se le añadieron 250 ml de hidróxido sódico 1 N. La mezcla se agitó hasta que no quedó material de partida. La solución de reacción se acidificó con ácido clorhídrico 2 N y el acetato de etilo se extrajo (3 x 100 ml). Los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se condensaron por evaporación rotatoria para producir 42,5 g del compuesto 10 en forma de un sólido.
Etapa 2A
Preparación del compuesto 11: metoximetil-éster del ácido 3{[{4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-metoximetil-2-tiofenocarboxílico 
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30 
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A un matraz de fondo redondo de 2 l equipado con una barra agitadora magnética y embudo de goteo se le añadieron 42,5 g del compuesto 10, 500 ml de cloruro de metileno y 40,1 g de diisopropiletilamina. La mezcla de reacción se enfrió con un baño de hielo y se le añadieron gota a gota 21,5 ml de bromometil metil éter. El baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se añadieron 200 ml de agua y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con 100 ml de cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 50 ml de HCl 0,5 N, agua, bicarbonato sódico sat. y salmuera y después, finalmente, se secaron con sulfato de magnesio. La mezcla se filtró y el filtrado se condensó por evaporación rotatoria para producir un aceite que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo al 25-30%/hexano como eluyente para producir 38,1 g del compuesto 11 en forma de un aceite.
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Etapa 2B
Preparación del compuesto 12 
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31 
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A un matraz de fondo redondo de 1 l equipado con una barra agitadora magnética se le añadieron 38 g del compuesto 11, 250 ml de tetrahidrofurano y 250 ml de hidróxido sódico 1 N. La reacción se agitó rápidamente hasta que se completó la reacción (aproximadamente 4 h). La mayor parte del teetrahidrofurano se retiró por evaporación rotatoria y los materiales residuales se mezclaron con 50 ml de agua. Después, esta solución se acidificó mediante la adición de 260 ml de HCl 1 N. Después, esta mezcla se extrajo dos veces con 200 ml de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con 50 ml de agua y salmuera y después se secaron con sulfato de magnesio. La filtración y la condensación por evaporación rotatoria produjeron 30,8 g del compuesto 12 en forma de un aceite amarillo que solidificó tras el reposo.
Etapa 2C
Preparación del compuesto 13 
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32 
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A un matraz de fondo redondo de 1 l equipado con una barra agitadora magnética y embudo de goteo se le añadieron 30 g del compuesto 12, 200 ml de cloruro de metileno y 5 gotas de piridina. Se añadió gota a gota una solución de 29,2 g de cloruro de tionilo en 200 ml de cloruro de metileno. Después, el embudo de goteo se reemplazó por un condensador de reflujo y la reacción se calentó a suave reflujo durante 4 h. Después, la reacción se condensó por evaporación rotatoria para producir 31,4 g del compuesto 13 en forma de un sólido pardo. Este material se usó directamente en la Etapa 3 sin purificación adicional.
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Etapa 3
Preparación del compuesto 15 
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33 
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A un matraz de fondo redondo de 1 l equipado con una barra agitadora magnética y embudo de goteo se le añadieron 19,8 g del compuesto (14) y 150 ml de cloruro de metileno. A esto se le añadió gota a gota una solución de 20,0 g del compuesto 13 disuelto en 350 ml de cloruro de metileno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y después se condensó por evaporación rotatoria. A los materiales residuales se les añadieron 200 ml de éter y la mezcla se filtró. La torta de filtro se lavó con 100 ml de éter seguido de 2 x 200 ml de acetato de etilo caliente. Los lavados combinados se lavaron con 3 x 100 ml de HCl 1 N seguido de 100 ml de agua, bicarbonato sódico sat. y salmuera. Después, la solución se secó con sulfato de magnesio, se filtró y se condensó por evaporación rotatoria para producir un material semi-cristalino. Este material se trituró con 100 ml de éter para producir 20,1 g del compuesto 15 en forma de un sólido blanco.
Etapa 4
Preparación del compuesto 16 
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34 
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Mediante el procedimiento del Ejemplo 1, Etapa 4A, el compuesto 15 se convirtió en el compuesto 16, un sólido, p.f. 166-170ºC.
Ejemplo de referencia 4
Preparación del compuesto 18: 3-{{(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-[2-(1-hidroxietil)-4,6-dimetilfenil]-2-tiofenocarboxamida 
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35 
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A una solución de 100 mg del compuesto 17 (sal sódica) en agua se le añadieron 100 mg de borohidruro sódico. Después de 3 h, se añadieron 100 mg más de borohidruro sódico y la solución se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se mezcló con una solución en exceso de amoniaco saturado y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Los extractos se lavaron con una solución saturada de bicarbonato sódico y se evaporaron para dar el compuesto 18 (sal Na) en forma de un sólido, p.f. 147-154ºC.
Ejemplo de referencia 5
Preparación del compuesto 20: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]-sulfonil}-N-{2-t(dimetilamino}carbonil]-4, 6-dimetilfenil)-2-tiofenocarboxamida 
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36 
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El compuesto 20 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-[(dimetilamino)carbonil]-4,6-dimetilanilina (19) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 20 se obtuvo en forma de un sólido blanco.
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Ejemplo de referencia 6
Preparación del compuesto 22: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-{2,4-dimetil-6-[(metiloxi)etanimidoil]fenil}-2-tiofenocarboxamida 
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37 
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El compuesto 17 se hizo reaccionar con metoxiamina (21) en solución de etanol para producir el compuesto 22 en forma de un sólido blanco; p.f. 140-145ºC.
Ejemplo de referencia 7
Preparación del compuesto 24: 3-{[(3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenil)carbonil]amino}-2,4, 6-trimetilfenil-N,N-dimetilsulfamato 
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38 
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A una solución enfriada con hielo de 700 mg de 3-{{{4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-{3-hidroxi-2,4,6-trimetilfenil}-2-tiofenocarboxamida (23) en 15 ml de dimetilformamida se le añadieron 247 mg de t-butóxido potásico. Después de un corto periodo de tiempo, se añadieron 317 mg de cloruro de dimetilaminosulfonilo. Cuando se juzgó que la reacción se había completado, se diluyó con agua y se acidificó con ácido clorhídrico 1 N. Esta mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml) y los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se evaporaron para producir el compuesto 24 en forma de un sólido blanco; p.f. 169-174ºC.
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Ejemplo de referencia 8
Preparación del compuesto 26: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-{3-[ciclopropilmetil)oxi]-2,4,6-trimetilfenil}-2-tiofenocarboxamida 
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39 
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A una solución enfriada con hielo de 700 mg de 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-{3-hidroxi-2,4,6-trimetilfenil}-2-tiofenocarboxamida (23) en 15 ml de dimetilformamida se le añadieron 247 mg de t-butóxido potásico. Después de un corto periodo de tiempo, se añadieron 135 mg de bromuro de ciclopropilmetilo (25). Cuando se juzgó que la reacción se había completado, se diluyó con agua, se acidificó con ácido clorhídrico 1 N. Esta mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml) y los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se evaporaron para producir el compuesto 26 en forma de un sólido blanco; p.f. 155-158ºC.
Ejemplo de referencia 9
Preparación del compuesto 28: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-(2,4,6-trimetil-5-pirimidinil)-2-tiofenocarboxamida 
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El compuesto 28 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 5-amino-2,4,6-trimetilpirimidina (27) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 28 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 170-175ºC.
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Ejemplo de referencia 10
Preparación del compuesto 30: N-(2-acetil-3,4,6-trimetilfenil}-3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida 
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El compuesto 30 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-acetil-3,4,6-trimetilanilina (29) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 30 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 223-225ºC.
Ejemplo de referencia 11
Preparación del compuesto 32: 3-{{(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-(2-ciano-3,4,6-trimetilfenil)-2-tiofenocarboxamida 
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42 
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El compuesto 32 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-ciano-3,4,6-trimetilanilina (31) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 32 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 218-220ºC.
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Ejemplo de referencia 12
Preparación del compuesto 34: N-(2-cloro-4,6-dimetilfenil)-3-{[{4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida 
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43 
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El compuesto 34 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-cloro-4,6-dimetilanilina (33) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 34 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 174-176ºC.
Ejemplo de referencia 13
Preparación del compuesto 38; 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-(4,6-diacetil-3-hidroxi-2-propilfenil-2-tiofenocarboxamida 
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44 
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El compuesto 36 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 4,6-diacetil-3-hidroxi-2-propilanilina (35) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 36 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 163-167ºC.
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Ejemplo de referencia 14
Preparación del compuesto 38: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino)sulfonil}-N-{2,4-dimetil-6-[2-(metilsulfonil)acetil]fenil}-2-tiofenocarboxamida
45
El compuesto intermedio 53 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2,4-dimetil-6-(2-cloroacetil)anilina (37) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. Una solución de 400 mg del compuesto 53 y 1,2 g de metanosulfonato sódico en 10 ml de dimetilformamida se agitó a temperatura ambiente. Cuando se juzgó que la reacción se había completado, la reacción se diluyó con agua, se acidificó con ácido clorhídrico 2 N y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se condensaron por evaporación rotatoria para producir el compuesto 38 en forma de un sólido; p.f. 172-175ºC.
Ejemplo de referencia 15
Preparación del compuesto 40: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-{2,4-dimetil-6-{[metil(2,2-dimetilpropil)amino]carbonil}fenil)-2-tiofenocarboxamida
46
El compuesto 40 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-{[metil-(2,2-dimetilpropil)amino]carbonil}-4,6-dimetilanilina (39) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 40 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 174-176ºC.
Ejemplo de referencia 16
Preparación del compuesto 42: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil)-N-[2,4-dimetil-6-(metilsulfonil)fenil]-2-tiofenocarboxamida
47 
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El compuesto 42 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2,4-dimetil-6-(metilsulfonil)anilina (41) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 42 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 208-210ºC.
Ejemplo de referencia 17
Preparación del compuesto 44: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-[2,4-dimetil-6-(1,3-oxazol-2-il)fenil]-2-tiofenocarboxamida
48 
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El compuesto 44 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2,4-dimetil-6-(1,3-oxazol-2-il)anilina (43) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 44 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 176-178ºC.
Ejemplo de referencia 18
Preparación del compuesto 46: 3-{[(4-cloro-5 isoxazolil)amino]sulfonil}-N-[2-{2-propilsulfonil)-4,6-dimetilfenil]-2-tiofenocarboxamida 
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El compuesto 46 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-(2-propilsulfonil)-4,6-dimetilanilina (45) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 48 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 190-192ºC.
Ejemplo de referencia 19
Preparación del compuesto 48: 3-{[{4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-[2,4-dimetil-6-(propilsulfonil)fenil]-2-tiofenocarboxamida 
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50 
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El compuesto 48 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2,4-dimetil-6-(propilsulfonil)anilina (47) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 48 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 152-155ºC.
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Ejemplo de referencia 20
Preparación del compuesto 50: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-(2-etil-4,6-dimetilfenil)-2-tiofenocarboxamida
51
El compuesto 50 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2-etil-4,6-dimetilanilina (49) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 50 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 152-154ºC.
Ejemplo 21 Preparación del compuesto 52: 3-{[(4-cloro-3-metil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-N-[2,6-dimetil-4-(1,3-oxazol-2-il)fenil]-2-tiofenocarboxamida
52
El compuesto 52 se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 3 con la excepción de que se usó 2,6-dimetil-4-(1,3-oxazol-2-il)anilina (51) en la Etapa 3 en lugar del compuesto 12. El compuesto 52 se obtuvo en forma de un sólido blanco; p.f. 205-207ºC.
Ejemplo 22 Formulaciones de sales sódicas de sulfonamida A. Formulación de sales sódicas de sulfonamida para administración intravenosa
Se prepara tampón fosfato añadiendo 3200 ml de agua estéril para inyección, USP, a un cilindro graduado de 4 l. Se añade fosfato sódico dibásico heptahidrato, USP (21,44 g) al agua estéril y la mezcla se agita durante 5 minutos o hasta que se ha disuelto el sólido. Se añade fosfato sódico monobásico, USP (11,04 g) y la mezcla se agita hasta que se disuelven los sólidos. La solución se diluye hasta 4,0 l y se agita. Se añaden 3000 g de tampón de fosfato sódico a un vaso de precipitación de ocho litros. Se añade dextrosa, USP (200,0 g) y la mezcla se calienta a 30-35ºC en un baño de agua y se agita hasta que se forma la solución completa. Se añade una sal sódica de sulfonamida (100,0 g) con mezclado eficaz. Esta mezcla se agita durante un mínimo de diez minutos o hasta que se forma una solución. La solución se retira del baño de agua después de que se disuelve la sal sódica. La solución se diluye a 4000 g con tampón de fosfato sódico y se agita durante cinco minutos. Esta solución se filtra estéril usando un filtro Durapore Millipak 200 con pre-tamaño de 0,22 micras. La solución filtrada se rellena en viales estériles y se liofiliza en condiciones convencionales. Los viales se tapan. Después, el producto liofilizado se reconstituye con 9,4 ml o 19,4 ml de agua para inyección, para dar una concentración final de 25 mg/ml o de 12,5 mg/ml, respectivamente.
B. Formulación de sales sódicas de sulfonamida para administración oral
Estas formulaciones pueden prepararse por métodos conocidos por los especialistas en la técnica (véase, por ejemplo, Ansel Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms (4ª edición) 1985 (Lea & Febiger)). En general, los comprimidos pueden prepararse por granulación húmeda o seca de los ingredientes, seguido de compresión. Como alternativa, los ingredientes combinados pueden formarse en comprimidos por compresión directa. En la preparación de cápsulas, la sal sódica de sulfonamida combinada, excipiente (diluyente), aglutinante, agente disgregante y lubricante se rellenan directamente en la cáscara de la cápsula. La cantidad óptima de ingredientes activos e inertes en estas formulaciones puede determinarse empíricamente por métodos conocidos por los especialistas en la técnica. En general, la cantidad de ingrediente activo (es decir, sal sódica de sulfonamida) será suficiente para proporcionar una dosis terapéuticamente eficaz del ingrediente activo. La dosis terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente ensayando los compuestos en ensayos in vitro e in vivo conocidos (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.; el documento EP A1 0 436 139 para BANYU PHARMACEUTICAL CO., LTD (7 de octubre de 1991); Borges et al. (1989) Eur. J. Pharm. 165: 223-230; Filep et al. (1991) Biochem. Biophys. Res. Commun. 177: 171-176) y después se extrapolan de los mismos las dosis para seres humanos.
Ejemplo 23 Ensayos para identificar compuestos que muestran actividad antagonista y/o agonista de endotelina
Los compuestos que son antagonistas potenciales de endotelina se identifican ensayando su capacidad para competir con ET-1 marcado con ^{125}I para unirse a receptores de ET_{A} o receptores de ET_{B} humanos presentes en membranas celulares aisladas. La eficacia del compuesto de ensayo como antagonista o agonista de la respuesta biológica del tejido de endotelina también pueden ensayarse midiendo el efecto sobre la contracción inducida por endotelina de los anillos aórticos torácicos de rata aislados. La capacidad de los compuestos para actuar como antagonistas o agonistas de receptores de ET_{B} puede ensayarse ensayando la capacidad de los compuestos para inhibir la liberación de prostaciclina inducida por endotelina-1 a partir de células endoteliales aórticas bovinas cultivadas.
A. Ensayo de inhibición de la unión endotelial - Unión Nº 1: Inhibición de la unión a receptores ET_{A}
Las células TE 671 (Nº de acceso ATCC: HTB 139) expresan receptores ET_{A}. Se hicieron crecer estas células hasta confluencia en matraces T-175. Se recogieron las células de múltiples matraces por raspado, se combinaron y se centrifugaron durante 10 min a 190 X g. Se resuspendieron las células en solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía EDTA 10 mM usando un homogeneizador Tenbroek. Se centrifugó la suspensión a 4ºC a 57.800 X g durante 15 min, se resuspendió el precipitado en 5 ml de tampón A (tampón HEPES 5 mM, pH 7,4 que contenía aprotinina (100 KIU/ml)) y después congeló y descongeló una vez. Se añadieron 5 ml de Tampón B (Tampón HEPES 5 mM, pH 7,4 que contenía MnCl_{2} y desoxirribonucleasa Tipo 1 al 0,001%), se mezcló la suspensión por inversión y después se incubó a 37ºC durante 30 minutos. Se centrifugó la mezcla a 57.800 Xg como se ha descrito anteriormente, se lavó el sedimento dos veces con tampón A y después se resuspendió en tampón C (tampón HEPES 30 mM, pH 7,4 que contenía aprotinina (100 KIU/ml)) para dar una concentración proteica final de 2 mg/ml y se almacenó a -70ºC hasta su uso.
Se diluyó la suspensión de membrana con tampón de unión (tampón HEPES 30 mM, pH 7,4 que contenía NaCl 150 mM, MgCl_{2} 5 mM, Bacitracina al 0,5%) a una concentración de 8 \mug/50 \mul. Se añadió ^{125}I-endotelina-1 (3.000 cpm, 50 ml) a 50 \mul de: (A) endotelina-1 (para unión no específica) para dar una concentración final de 80 nM; (B) tampón de unión (para unión total); o (C) un compuesto de ensayo (concentración final de 1 nM a 100 \muM). Se añadió la suspensión de membrana (50 \mul), que contenía hasta 8 \mug de proteína de membrana, a cada (A), (B), o (C). Se agitaron las mezclas, y se incubaron a 4ºC durante 16-18 horas, y después se centrifugaron a 4ºC durante 25 min a 2.500 X g. Como alternativa, la incubación se realizó a 24ºC. Cuando se incuba a 24ºC, las concentraciones IC_{50} son de 2 a 10 veces mayores que cuando la incubación se realiza a 4ºC. Esto de tenerse en cuenta cuando se comparan las concentraciones IC_{50} entre compuestos proporcionados en este documento.
El sobrenadante, que contenía radiactividad no unida, se decantó y se contó el sedimento en un contador gamma multipocillo Genesys. Se calculó el grado de inhibición de unión (D) de acuerdo con la siguiente ecuación:
% \ D = 100 - \frac{(C) - (A)}{(B) - (A)} \ X \ 100
Cada ensayo generalmente se realizó por triplicado.
B. Ensayo de inhibición de unión endotelial - Unión Nº 2: Inhibición de la unión a receptores ET_{B}
Se transfectaron células COS7 con ADN que codifica el receptor ET_{B}. Las células resultantes, que expresan el receptor ET_{B} humano, se hicieron crecer hasta confluencia en matraces T-150. La membrana se preparó como se ha descrito anteriormente. El ensayo de unión se realizó como se ha descrito anteriormente usando la preparación de membrana diluida con tampón de unión a una concentración de 1 \mug/\mul.
Brevemente, las células COS7, descritas anteriormente, que se han transfectado con ADN que codifica el receptor ET_{B} y expresan el receptor ET_{B} humano en sus superficies, se hicieron crecer hasta confluencia en matraces T-175. Se recogieron células de múltiples matraces por raspado, se combinaron y se centrifugaron durante 10 min a 190 X g. Se resuspendieron las células en solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía EDTA 10 mM usando un homogeneizador Tenbroek. Se centrifugó la suspensión a 4ºC a 57.800 X g durante 15 min, se resuspendió el sedimento en 5 ml de tampón A (tampón HEPES 5 mM, pH 7,4 que contenía aprotinina (100 KIU/ml)) y después se congeló y descongeló una vez. Se añadieron cinco ml de Tampón B (Tampón HEPES 5 mM, pH 7,4 que contenía MnCl_{2} 10 mM y desoxiribonucleasa Tipo 1 al 0,001%), se mezcló la suspensión por inversión y después se incubó a 37ºC durante 30 minutos. Se centrifugó la mezcla a 57.800 Xg como se ha descrito anteriormente, se lavó el sedimento dos veces con tampón A y después se resuspendió en tampón C (tampón HEPES 30 mM, pH 7,4 que contenía aprotinina (100 KIU/ml)) para dar una concentración proteica final de 2 mg/ml.
El ensayo de unión se realizó como se ha descrito anteriormente usando la preparación de membrana diluida para dar 1 \mug/50 \mul de tampón.
C. Ensayo para la actividad frente a contracción inducida por endotelina de anillos aórticos torácicos de rata
La eficacia del compuesto de ensayo como antagonista o agonista de la respuesta tisular biológica de endotelina también se evalúa midiendo el efecto en la contracción inducida por endotelina de anillos aórticos torácicos de rata (véase, por ejemplo, Borges et al. (1989) Eur. J. Pharmacol. 165: 223-230) o midiendo la capacidad para contraer el tejido cuando se añade solo.
Los compuestos a ensayar se preparan como soluciones madre 100 \muM. Si es necesario efectuar disolución, los compuestos primero se disuelven en una cantidad mínima de DMSO y se diluyen con NaCl 150 mM. Como DMSO puede provocar la relajación del anillo aórtico, se ensayaron soluciones de control que contenían concentraciones variadas de DMSO.
Se extirpa la porción torácica de la aorta de una rata adulta, se raspa el endotelio por frotamiento suavemente y después se corta en segmentos del anillo de 3 mm. Se suspenden los segmentos en una precarga de 2 g en un baño de órganos de 10 ml cargado con solución de Krebs - Henseleit saturada con una mezcla gaseosa de un 95% de O_{2} y un 5% de CO_{2} (NaCl 118 mM, KCl 4,7 mM, MgSO_{4} 1,2 mM, KH_{2}PO_{4} 1,2 mM, NaHCO_{3} 25 mM, CaCl_{2} 2,5 mM, D-glucosa 10 mM).
Hay una correlación entre la actividad como antagonista de la contracción del anillo aórtico torácico inducida por endotelina y la actividad como inhibidor de la unión de endotelina a receptores de endotelina. El pA_{2} es una función lineal del log de la IC_{50}.
D. Ensayo para identificar compuestos que tienen actividad agonista y/o antagonista frente a receptores ET_{B} 1. Estimulación de liberación de prostaciclina
Como la endotelina-1 estimula la liberación de prostaciclina de células endoteliales aórticas bovinas cultivadas, los compuestos que tienen actividad agonista o antagonista se identifican por su capacidad para inhibir la liberación de prostaciclina inducida por endotelina-1 de dichas células endoteliales midiendo 6-ceto PGF_{1\alpha} sustancialmente como se describe en Filep et al. (1991) Biochem. Biophys. Res. Común. 177 171-176. Las células aórticas bovinas se obtienen de aorta bovina tratada con colagenasa, se siembran en placas de cultivo, se hacen crecer en Medio 199 suplementado con suero de ternera fetal al 15% inactivado por calor, y L-glutamina (2 mM), penicilina, estreptomicina y fungizona, y se subcultivan al menos cuatro veces. Después las células se siembran en placas de seis pocillos en el mismo medio. Ocho horas antes del ensayo, después de que las células alcancen confluencia, se reemplaza el medio. Después se cultivan las células con a) medio solo, b) medio que contiene endotelina-1 (10 nM), c) compuesto de ensayo solo, y d) compuesto de ensayo + endotelina-1 (10 nM).
Después de una incubación de 15 min, se retira el medio de cada pocillo y se midieron las concentraciones de 6-ceto PGF_{1\alpha} por inmunoensayo directo. La producción de prostaciclina se calcula como la diferencia entre la cantidad de 6-ceto PGF_{1\alpha} liberada por las células estimuladas con la endotelina-1 menos la cantidad liberada por células no estimuladas tratadas de manera idéntica. Los compuestos que estimulan la liberación de 6-ceto PGF_{1\alpha} tienen actividad agonista y los que inhiben la liberación de 6-ceto PGF_{1\alpha} de endotelina-1 tienen actividad antagonista.
2. Inhibición de contracción inducida por sarafotoxina 6c
La sarafotoxina 6c es un antagonista de ET_{B} específico que contrae las bandas del fondo del estómago de rata. La eficacia de los compuestos de ensayo para inhibir esta contracción inducida por sarafotoxina 6c de las bandas del fondo del estómago de rata se usa como medida de la actividad antagonista de ET_{B}. Se suspenden dos aislados de bandas del fondo del estómago de rata en 1 g cargado en un baño orgánico de 10 ml cargado con solución de Krebs -
Henseleit que contiene ciclo(D-Asp-Pro-D-Val-Leu-D-Trp) 10 \muM (BQ-123; véase, Patente de EEUU Nº 5.114.918 para Ishikawa et al.), indometacina 5 \muM, y saturada con un mezcla gaseosa de 95% de O_{2}/5% de CO_{2}. Se midieron los cambios en la tensión isométricamente y se registraron usando un Grass Polygraph acoplado a un transductor de fuerza. Se añade sarafotoxina 6c cumulativamente a una banda mientras que la segunda banda se preincuba durante 15 min con un compuesto de ensayo antes de la adición de dosis cumulativas de sarafotoxina 6c. Se examinan los efectos de los compuestos de ensayo en la curva de respuesta a la concentración para sarafotoxina 6c.
E. Modelo de rata hipertensa para la sal de acetato de desoxicorticosterona (DOCA) para evaluar la actividad in vivo de compuestos seleccionados
Los compuestos seleccionados descritos en este documento se han ensayado para la actividad en el modelo de rata hipertensa para la sal de acetato de desoxicorticosterona (DOCA). Para realizar estos ensayos, se prepararon 47 mg (DOCA) que contenían implantes de elastómero MDX4-4210 silástico de acuerdo con el método de Ornmsbee et al. ((1973) the J. Pharm. Sci. 62:255-257). Brevemente, DOCA se incorpora en implantes de goma de silicona para liberación sostenida. Para preparar los implantes se incorpora el DOCA en una goma de silicona no polimerizada, se añade catalizador y se echa la mezcla en una forma hemicilíndrica.
Se nefrectomizaron unilateralmente ratas Sprague Dawley (de 7-8 semanas de edad) con anestesia de quetamina y se colocaron los implantes de DOCA en el abdomen dorsal lateral del animal. Se dejó recuperarse a las ratas durante tres semanas. Durante la recuperación se les permitió el libre acceso a pienso para ratas normal y solución de bebida con NaCl al 0,9% en lugar de agua potable. Las ratas desarrollaron hipertensión en 3 semanas.
Se usaron todos los animales en los ensayos entre 21 y 30 días después de la cirugía. La presión sanguínea arterial media en estos animales variaba de 165-200 mm Hg.
En el día de la experimentación, se insertaron catéteres de anestesia con Brevital en la arteria femoral derecha para la medida de la presión sanguínea, y en la vena femoral derecha para la administración de un compuesto seleccionado. Se colocaron los animales en un contenedor y se les dejó recuperarse durante un mínimo de 60 min o hasta que se registrara una presión sanguínea arterial media uniforme. En ese momento, se administró el compuesto seleccionado o vehículo de control por vía intravenosa, en forma de infusión de 60 minutos, o por vía oral por sonda oral. Se registró continuamente la presión sanguínea durante 10 horas más.
F. Efecto de la administración intravenosa en las respuesta de presión inducidas por ET-1 en ratas bloqueadas autónomamente, conscientes; un modelo para evaluar actividad in vivo de compuestos seleccionados
Se anestesiaron ratas macho Sprague Dawley (250-450 g) (Brevital 50 mg/kg, IP) y se colocaron cánulas en la arteria femoral para medir la presión arterial media (MAP) y en la vena femoral para la administración intravenosa de fármaco. Se colocaron los animales en un contenedor y se les dejó recuperar la consciencia. Treinta minutos después se les administró bloqueo autónomo (nitrato de metil atropina, 3 mg/kg, IV, seguido de propanolol, 2 mg/kg, IV). Una hora después de que los animales recibieran una inyección en embolada de vehículo (0,5 ml) seguido de treinta minutos después por administración intravenosa en embolada de ET-1 (Control, 1 \mug/kg). Después de la recuperación de esta estimulación, se administraron los compuestos de ensayo por administración intravenosa en embolada (0,5 ml) y se re-estimularon con ET-1 treinta minutos después. Los resultados se expresan como el porcentaje de inhibición de la respuesta a la presión inducida por ET-1 después de la administración del compuesto de ensayo comparada con la respuesta a la presión inducida por la estimulación con ET-1 de control. En algunos casos se administró una tercera estimulación con ET-1 noventa minutos después de la administración del compuesto de ensayo.
G. Resultados 1. In vitro
Se han medido las IC_{50} para cada compuesto de los Ejemplos anteriores para receptores los ET_{A} y ET_{B}. Casi todos los compuestos tienen una IC_{50} de menos de 10 \muM para cada receptor ET_{A} y ET_{B} o ambos. Muchos de los compuestos tienen una IC_{50} menor de aproximadamente 10 \muM, otros tienen una IC_{50} menor de aproximadamente 1 \muM y algunos de los compuestos tienen una IC_{50} menor de aproximadamente 0,1 \muM. Numerosos compuestos tienen una IC_{50} para receptores ET_{A} que es sustancialmente menor (10 a 100 veces o más) que para los receptores ET_{B}, y, de este modo, son selectivos para receptores ET_{A}. Otros de los compuestos son selectivos para ET_{B}.
2. En vivo
Se han ensayado compuestos seleccionados, tales como N-(2-acetil-4,6-dimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida, en el modelo de rata hipertensa, y fueron eficaces para disminuir la presión sanguínea.
Ejemplo 24 Ensayos para evaluar las propiedades toxicológicas de los compuestos A. Ensayos de la enzima Citocromo P450
Se realizaron ensayos in vitro para determinar la concentración de los compuestos proporcionados en este documento requeridos para la inhibición del 50% del metabolismo del sustrato (IC_{50}) por diferentes enzimas de Citocromo P450 humano (2C9, 2C19, 3A4) usando ensayos de enzima citocromo P450 recombinante humana, desarrollados por Gentest Corporation. Estos ensayos contienen Gentest Supersomes^{TM} (enzima Citocromo P450 humana específica, coexpresada con reductasa P450 y Citocromo b_{5}), un sistema de regeneración de NADPH, sustrato y un intervalo de concentración de los compuestos proporcionados en este documento. El producto fluorescente fue la medida de punto final para estos ensayos. Se calcularon las IC_{50} usando una ecuación logística de cuatro parámetros con la parte inferior fijada a una inhibición del 0% y la parte superior a una inhibición del 100%. (Los valores son la media de IC_{50} \pm SD cuando n es mayor de I.)
i. Condiciones de ensayo generales
Los ensayos se dirigieron en placas de microtitulación de 96 pocillos usando ensayos fluorométricos desarrollados por Gentest Corporation. Se usaron los 12 pocillos en cada fila para una curva de inhibición. Los pocillos 1 a 8 contenían diluciones 1:3 en serie del compuesto de ensayo. Los pocillos 9 a 12 no contenían inhibidor y los pocillos 11 y 12 contenían blancos para fluorescencia de fondo (la solución de parada se añadió antes que la enzima). Todas las curvas de concentración se realizaron por duplicado. Las incubaciones se iniciaron por la adición de enzima y sustrato a la mezcla de reacción precalentada. Después de un periodo de incubación específico, se paró la reacción por la adición de solución de parada. La producción de metabolito por pocillo de determinó midiendo la fluorescencia usando un lector de placa de fluorescencia. Los procedimientos experimentales detallados para cada enzima se enumeran a continuación. Véase, en líneas generales, Metodología para un método de alta capacidad de procesado para medir la inhibición de Citocromo P450 (Gentest Corporation, Technical Bulletin); Crespi, C. L.; Miller, V.P.; y Penman, B.W. (1997) Anal. Biochem. 248: 188-190; y Geungerich, F.P. (1997) Adv. Pharm. 43: 7-35.
ii. Ensayo de CYP2C9
Se incubó a 37ºC durante 45 minutos una mezcla de reacción de 0,2 ml por pocillo que contenía 2 pmol de CYP2C9 (P258), NADP^{+} 1,3 mM, glucosa-6-fosfato 3,3 mM, cloruro de magnesio 3,3 mM, 0,4 U/ml de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y 7-metoxi-4-trifluorometilcumarina 75 \muM en fosfato potásico 25 mM (pH 7,4). Se diluyó en serie sulfafenazol, un inhibidor convencional de CYP2C9, de la concentración más alta de 10 \muM y funcionó como control positivo. Se diluyó en serie el compuesto de ensayo de la concentración más alta de 100 \muM. Después de la incubación, se paró la reacción por la adición de 75 \mul de solución de parada (80% acetonitrilo /20% base tris 0,5 M) y se midió la fluorescencia por pocillo usando un lector de placa fluorescente Spectra Fluor (Tecan) o Cytofluor 2350 (Millipore). Se usó una longitud de onda de excitación de 409 nm (ancho de banda de 30 nm) y una longitud de onda de emisión de 535 nm (ancho de banda de 25 nm), o una longitud de onda de excitación de 400 nm (ancho de banda de 30 nm) y una longitud de onda de emisión de 460 nm (ancho de banda de 40 nm), respectivamente.
iii. Ensayo de CYP2C19
Se incubó a 37ºC durante 45 minutos una mezcla de reacción de 0,2 ml por pocillo que contenía 1 pmol de CYP2C19 (P259), NADP^{+} 1,3 mM, glucosa-6-fosfato 3,3 mM, cloruro de magnesio 3,3 mM, 0,4 U/ml de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y 4-ciano-7-etoxicumarina 25 \muM en fosfato potásico 50 mM (pH 7,4). Se diluyó en serie tranilcipromina, un inhibidor convencional de CYP2C19, de la concentración más alta de 500 \muM y funcionó como control positivo. Se diluyó en serie el compuesto de ensayo de la concentración más alta de 100 \muM. Después de la incubación, se paró la reacción por la adición de 75 \mul de solución de parada (80% acetonitrilo /20% base tris 0,5 M) y se leyó la fluorescencia por pocillo en 1 hora usando un lector de placa fluorescente Spectra Fluor (Tecan). Se usó una longitud de onda de excitación de 409 nm (ancho de banda de 30 nm) y una longitud de onda de emisión de 535 nm (ancho de banda de 25 nm).
iv. Ensayo de CYP3A4
Se incubó a 37ºC durante 30 minutos una mezcla de reacción de 0,2 ml por pocillo que contenía 4 pmol de CYP3A4 (P202), NADP^{+} 1,3 mM, glucosa-6-fosfato 3,3 mM, cloruro de magnesio 3,3 mM, 0,4 U/ml de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, Pluronic F68 al 0,01%, y éter bencílico de resorufin 50 \muM en fosfato potásico 200 mM (pH 7,4). Se diluyó en serie cetoconazol, un inhibidor convencional de 3A4, de la concentración más alta de 5 \muM y funcionó como control positivo. Se diluyó en serie el compuesto de ensayo de la concentración más alta de 100 \muM. Después de la incubación, se paró la reacción por la adición de 75 \mul de solución de parada (80% acetonitrilo /20% base tris 0,5 M) y se midió la fluorescencia por pocillo en 1 hora usando un lector de placa fluorescente Spectra Fluor (Tecan). Se usó una longitud de onda de excitación de 530 nm (ancho de banda de 30 nm) y una longitud de onda de emisión de 580 nm (ancho de banda de 4 nm).
v. Análisis
Se calculó la media para cada compuesto de los valores de fluorescencia de los pocillos duplicados para cada concentración individual, los cuatro pocillos donde no se había añadido compuesto de ensayo (este es inhibición del 0%), y los cuatro pocillos de "blanco de parada" (estos pocillos representan "el fondo" ya que la reacción se paró antes de la adición de enzima).
El % de inhibición se calculó de la siguiente manera:
100 - \frac{\text{(media de valor de fluorescencia individual} - fondo) \ x \ 100}{{(inhibición \ 0% - fondo)}}
Se construyeron curvas de concentración frente al % de inhibición en Prism (GraphPad, Inc.). Los datos se analizaron usando la rutina "Superior e Inferior Fijado". La ecuación fue:
Y-O + 100/(1 + 10((Log \ IC_{50}-X)+Pendiente)
En la que:
X es el logaritmo de la concentración.
Y es la respuesta (% de inhibición) y el inicio a 0% y va hasta 100% con una forma sigmoidea.
Esta ecuación es idéntica a la "ecuación logística de cuatro parámetros".
vi. Resultados
En la Tabla 2 se presentan las medias de IC_{50} de los compuestos de ensayo en diferentes formaciones de metabolito mediadas por enzima CYP. Se validaron los valores de ensayo usando un inhibidor conocido para cada CYP analizada (control positivo). Se consideraron válidos los ensayos para incluirlos en la Tabla 2 si el valor IC_{50} del control positivo estaba en una desviación típica de la media histórica de los controles positivos para esa CYP. Se excluyeron los experimentos donde la IC_{50} de control positivo caen fuera de una desviación típica.
B. Protocolos de hipoxia
Se consiguió la exposición hipóxica (10,0 \pm 0,5% de O_{2}) colocando las ratas en un recipiente de Plexiglas (Manostat, Brooklyn, Nueva York, EEUU). Se gasificó la cámara añadiendo N_{2} a la cámara de manera intermitente a partir de una reserva de N_{2} líquido. Una torre de lavado de CO_{2} Baralyme (Allied Health Care Products, St Louis, Missouri, EEUU) mantuvo la concentración de CO_{2} <0,2%. La humedad relativa en la cámara se mantuvo <70% con CaSO_{4} anhidro. Se usó ácido bórico para mantener los niveles de NH_{3} en la cámara a un mínimo. Véase, Milton et al. (2000) Pulm. Pharm. Ther. 13:87-97.
i. Protocolo de hipoxia aguda
En el experimento inicial, se evaluaron los efectos de un compuesto de ensayo en la presión arterial pulmonar (MPAP) de ratas expuestas posteriormente a hipoxia aguda de 90 min de duración. Se canularon una arteria y vena femoral con anestesia de pentobarbital sódico (50 mg/kg ip) y se canuló la arteria pulmonar por medio de la vena yugular derecha con una técnica de pecho cerrado. Se conectaron todos los catéteres a tubos de polietileno (PE 20), y se exteriorizaron en la parte trasera del cuello mediante un cable de acero inoxidable (0,018 pulgadas (0,5 mm) de diámetro) insertado por vía subcutánea. Dos días después, se registraron las MPAP a través de las cánulas arteriales femoral y pulmonar mediante transductores acoplados a un registrador poligráfico. Una vez se obtuvieron trazos estables, las ratas impedidas conscientes se expusieron a hipoxia (10% de O_{2}, 1 atm) y se registraron los efectos de la hipoxia en este parámetro durante un periodo de 90 min. Se incorporaron un protocolo de prevención de compuesto de ensayo (infusión de 5 mg/kg iv durante un periodo de 10 min que termina 10 min antes del comienzo de la hipoxia) y un protocolo de intervención de compuesto de ensayo (infusión de 5 mg/kg iv durante un periodo de 10 min que comienza 50 min después del comienzo de la hipoxia) en el diseño experimental.
ii. Resultados
La exposición aguda a hipoxia normobárica se asoció con un aumento bifásico en MPAP del nivel basal de 19 mm Hg a 24,5 mm Hg en 5 min, seguido de una disminución a 21 mm Hg durante los siguientes 10 min, después un retroceso a los niveles máximos de \sim 25 mm Hg durante la exposición hipóxica restante. La presión pulmonar regresa rápidamente hacia los valores basales cuando este grupo se devuelve a aire normal al final del experimento. Como se muestra en la Tabla 2, los compuestos proporcionados en este documento son eficaces para inhibir la vasoconstricción inducida por hipoxia a dosificaciones inferiores que las dosificaciones requeridas para antagonistas de endotelina conocidos.
Como las modificaciones resultarán evidentes para los especialistas en la técnica, se pretende que esta invención se limite sólo al alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (29)

1. Un compuesto que tiene la fórmula IV:
53
o derivados o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde:
X es S;
R^{1} es alquilo C_{1}-C_{6};
R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6};
cada uno de R^{3} y R^{4} es hidrógeno;
R^{5} es alquilo C_{1}-C_{6} o -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3};
R^{6} es alquilo C_{1}-C_{6}; -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}, o heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N;
R^{7} es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alcoxi C_{1}-C_{6}, S(O)_{2}NHR^{50} y OS(O)_{2}NR^{38}R^{39};
donde cada uno de R^{38} y R^{39} se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14;
R^{50} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6};
Y es O;
R^{8} es CONR^{38}R^{39}, CN, heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N, alquilsulfonilo, haluro, pseudohaluro, hidroxialquilo, C(O)(CH_{2})_{x}S(O)_{2}(CH_{2})_{y}CH_{3} o C(=N-OR^{38})(CH_{2})_{y}CH_{3};
R^{9} es H;
cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno;
a es 1 si Y^{2} es carbono;
a es 0 si Y^{2} es nitrógeno; b es 1 si Y^{1} es carbono;
b es 0 si Y^{1} es nitrógeno; y W es NH.
2. El compuesto de la reivindicación 1, donde:
X es S; cada uno de R^{3} y R^{4} es H; cada uno de Y^{1} e Y^{2} es carbono; y cada uno de a y b es 1.
3. El compuesto de la reivindicación 1, donde el compuesto tiene la fórmula V:
54
y derivados o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, donde:
X es S;
R^{1} es alquilo C_{1}-C_{6};
R^{2} es alquilo C_{1}-C_{6};
cada uno de R^{3} y R^{4} es hidrógeno;
R^{5} es alquilo C_{1}-C_{6} o -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3};
R^{6} es alquilo C_{1}-C_{6}; -(CH_{2})_{x}C(O)(CH_{2})_{y}CH_{3}, o heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N;
R^{7} se selecciona entre el grupo compuesto por hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alcoxi C_{1}-C_{6}, S(O)_{2}NHR^{50} y OS(O)_{2}
NR^{38}R^{39};
donde cada uno de R^{38} y R^{39} se selecciona independientemente entre hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
cada uno de x e y es independientemente de 0 a 14;
R^{50} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6};
Y es O;
R^{8} es CONR^{38}R^{39}, CN, heteroarilo de 5 miembros que contiene de uno a dos heteroátomos seleccionados entre O y N, alquilsulfonilo, haluro, pseudohaluro, hidroxialquilo, C(O)(CH_{2})_{x}S(O)_{2}(CH_{2})_{y}CH_{3} o C(=N-OR^{38})(CH_{2})_{y}CH_{3};
R^{9} es H;
cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno;
a es 1 si Y^{2} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno;
b es 1 si Y^{1} es carbono; b es 0 si Y^{1} es nitrógeno; y
W es NH.
4. El compuesto de la reivindicación 3, donde R^{1} es Me; y R^{2} es Me.
5. El compuesto de la reivindicación 3, donde:
R^{5} es Me o acetilo;
R^{6} es Me, acetilo o 2-oxazolilo;
R^{7} es H, Me, OSO_{2}NMe_{2}, OCH_{2}-ciclopropilo, hidroxi o SO_{2}NH-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolilo);
Y es O; y R^{8} es C(O)CH_{2}SO_{2}CH_{3}, CN, C(O)N(Me) (CH_{2}-t-Bu), SO_{2}Me, 2-oxazolilo, SO_{2}-isopropilo, SO_{2}-n-propilo, CH(OH)Me, C(O)NMe_{2}, C(=N-OMe)Me o Cl o
(ii) Y y R^{8} juntos forman -CO-N= o -CO-C(CN)=;
R^{9} es H;
cada uno de Y^{1} e Y^{2} es independientemente carbono o nitrógeno, preferiblemente carbono;
a es 1 si Y^{1} es carbono; a es 0 si Y^{2} es nitrógeno;
b es 1 si Y^{1} es carbono; b es 0 si Y^{1} es nitrógeno; y
W es NH.
6. El compuesto de la reivindicación 3, donde:
X es S;
R^{1} es Me;
R^{2} es Me;
R^{3}, R^{4} y R^{9} son H;
Y es O;
W es NH; y
cada uno de Y^{1} e Y^{2} es carbono.
7. El compuesto de la reivindicación 6, donde el compuesto tiene la fórmula VI:
55
o derivados o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, donde:
R^{1} es Me;
R^{5} es Me o acetilo;
R^{6} es Me, acetilo o 2-oxazolilo;
R^{7} es H, Me, OSO_{2}NMe_{2}, OCH_{2}-ciclopropilo, hidroxi o SO_{2}NH-(4-cloro-3-metil-5-isoxazolilo); y
R^{8} es C(O)CH_{2}SO_{2}CH_{3}, CN, C(O)N(Me)(CH_{2}-t-Bu), SO_{2}Me, 2-oxazolilo, SO_{2}-isopropilo, SO_{2}-n-propilo, -CH(OH)Me, C(O)NMe_{2}, C(=N-OMe)Me o Cl.
8. El compuesto de la reivindicación 7, donde R^{1}, R^{5} y R^{6} son Me; y R^{7} es hidrógeno.
9. El compuesto de la reivindicación 1 que es N-(2-ciano-3,4,6-trimetilfenil)-3-{[(3,4-dimetil-5-isoxazolil)amino]sulfonil}-2-tiofenocarboxamida o derivados o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
10. El compuesto de la reivindicación 1, donde cada uno de Y^{1} e Y^{2} es nitrógeno.
11. El compuesto de la reivindicación 10, donde cada uno de a y b es preferiblemente 0.
12. El compuesto de la reivindicación 10, donde R^{5} y R^{6} son alquilo C_{1}-C_{6}; Y es O; y W es NH.
13. Una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la reivindicación 1.
14. La sal de la reivindicación 13 que es una sal sódica.
15. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 o derivados farmacéuticamente aceptables del mismo en un vehículo farmacéuticamente aceptable, siendo la cantidad eficaz para mejorar los síntomas de una enfermedad mediada por endotelina.
16. La composición de la reivindicación 15 que se formula para administración de dosificación sencilla o múlti-
ple.
17. Un artículo fabricado, que comprende un material de envasado y un compuesto o derivados farmacéuticamente aceptables del mismo de la reivindicación 1 contenidos en el interior del material de envasado, siendo el compuesto eficaz para antagonizar los efectos de la endotelina, mejorar los síntomas de un trastorno mediado por endotelina, o inhibir la unión de un péptido de endotelina a un receptor ET con una IC_{50} de menos de aproximadamente 1 \muM, e incluyendo el material de envasado una etiqueta que indica que la sulfonamida o el derivado de la misma se usa para antagonizar los efectos de la endotelina, inhibir la unión de la endotelina a un receptor de endotelina o tratar un trastorno mediado por endotelina.
18. La composición farmacéutica de la reivindicación 15, donde el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende una solución tamponadora de fosfato sódico que contiene un azúcar.
19. La composición farmacéutica de la reivindicación 18, donde el compuesto es una sal de metal alcalino farmacéuticamente aceptable.
20. Un polvo liofilizado, que comprende una sal del compuesto de la reivindicación 1.
21. El polvo liofilizado de la reivindicación 20 producido mediante un proceso, que comprende:
(a) disolver una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de sulfonamida en una solución tamponadora de fosfato sódico que contiene un azúcar o carbohidrato;
(b) filtrar en condiciones estériles la solución resultante; y
(c) liofilizar la solución filtrada en condiciones estándar para producir un polvo estéril.
22. El polvo de la reivindicación 21, donde el azúcar o carbohidrato contiene dextrosa.
23. Un artículo fabricado, que comprende el material de envasado y el polvo de la reivindicación 20, contenido en el interior del material de envasado, siendo eficaz el compuesto para antagonizar los efectos de la endotelina, mejorar los síntomas de un trastorno mediado por endotelina, o inhibir la unión de un péptido de endotelina a un receptor ET con una IC_{50} de menos de aproximadamente 1 \muM, e incluyendo el material de envasado una etiqueta que indica que la sulfonamida o el derivado de la misma se usa para antagonizar los efectos de la endotelina, inhibir la unión de la endotelina a un receptor de endotelina o tratar un trastorno mediado por endotelina.
\newpage
24. Una combinación que comprende:
un vial estéril que contiene el polvo liofilizado de la reivindicación 20.
25. La combinación de la reivindicación 24, donde el vial estéril contiene una cantidad del polvo que es para administración de una sola dosis.
26. La combinación de la reivindicación 24, donde el vial estéril contiene también una cantidad de agua estéril para inyección; y la concentración final de la sal sódica de sulfonamida está entre aproximadamente 1 y 250 mg/ml.
27. La composición farmacéutica de la reivindicación 15 que se formula como un comprimido o cápsula.
28. La composición de la reivindicación 27, que comprende adicionalmente un recubrimiento entérico.
29. La composición de la reivindicación 28, donde el recubrimiento se selecciona entre ftalato de acetato de celulosa, polietilenglicol, polioxietilensorbitán, aceite de ricino, pseudolátex de etilcelulosa, salicilato de fenilo, estearato de n-butilo, ácido esteárico y cera de carnuba.
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