ES2242243T3

ES2242243T3 - Preparado de combinacion para el tratamiento de la demencia, que contiene al menos un compuesto que tiene actividad inhibidora de la acetilcolinesterasa o muscarinica y un compuesto que aumenta los niveles de adenosina endogena extracelular.

Info

Publication number: ES2242243T3
Application number: ES98102620T
Authority: ES
Inventors: Hans-Peter Dr. Schubert; Hildegard Dr. Nimmesgern; Karl Dr. Rudolphi
Original assignee: Aventis Pharma Deutschland GmbH
Current assignee: Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Priority date: 1997-02-26
Filing date: 1998-02-16
Publication date: 2005-11-01
Anticipated expiration: 2018-02-16
Also published as: PL325074A1; MY120530A; NZ329839A; HRP980097B1; EP0867192A3; EE9800075A; EE03387B1; CA2230350C; HU9800396D0; ATE295738T1; CZ298367B6; ID19941A; HUP9800396A3; SK24098A3; RU2194508C2; IL123453A; HUP9800396A1; AU5627398A; KR100517186B1; HRP980097A2

Abstract

UN PREPARADO COMBINADO QUE CONTIENE UN COMPUESTO QUE MUESTRA UNA ACCION INHIBIDORA DE LA ACETILCOLINAESTERASA O UN EFECTO MUSCARINERGO Y UN COMPUESTO QUE AUMENTA EL NIVEL DE ADENOSINA EXTRACELULAR ENDOGENA, ES IDONEO PARA EL TRATAMIENTO DE LA DEMENCIA.

Description

Preparado de combinación para el tratamiento de la demencia, que contiene al menos un compuesto que tiene actividad inhibidora de la acetilcolinesterasa o muscarínica y un compuesto que aumenta los niveles de adenosina endógena extracelular.

La invención se refiere a preparados de combinación farmacéuticos para el tratamiento de la demencia en virtud de enfermedades neurodegenerativas que van acompañadas de una decadencia de neuronas colinérgicas y de un déficit colinérgico (Tohgi et al., Neurosci. Lett. 177 (1994), páginas 1939-1942). Estos preparados de combinación compensan el déficit colinérgico mediante un refuerzo de la transducción de señales dependiente de Ca^{2+} desencadenada a través de la estimulación de receptores muscarínicos. Un refuerzo de este tipo puede alcanzarse evidentemente mediante efectos cooperativos de adenosina, a saber mediante una combinación de sustancias que aumentan la concentración extracelular de adenosina con agonistas de receptores muscarínicos o inhibidores de la acetilcolinesterasa (inhibidores de ACHE).

La estrategia farmacológica principalmente seguida hasta ahora para la terapia de demencias seniles es la conservación de una activación muscarínica de receptores mediante la administración de agonistas muscarinógenos o de inhibidores de ACHE que aumentan la concentración de la acetilcolina (ACH) endógena en el receptor. Es dudoso si, en el caso de una destrucción progresiva de sistemas de neuronas colinérgicas, se puede ciertamente alcanzar un aumento del nivel de ACH suficiente para una función celular, según la regla, por inhibición de ACHE. Además, los inhibidores de ACHE muestran, en el caso de una especificidad deficiente, considerables efectos secundarios. por lo tanto, sería deseable una potenciación del efecto inducido por receptores muscarínicos de concentraciones insuficientes de ACH por parte de otros mecanismos, y podría ser la base para el desarrollo de una terapia de combinación correspondiente.

Es conocido que la ACH no solo afecta a las funciones de células nerviosas, sino también de células glia (astrocitos) (Messamore et al., Neuroreport, 5 (1994), páginas 1473-1476). Dado que reacciones patológicas de las células glia juegan evidentemente Un importante papel en la patofisiología de la demencia (Akiyama et al., Brain Res. 632 (1993), páginas 249-259), se eligieron astrocitos cultivados como sistema de modelo in vitro. La influencia de la liberación intracelular de Ca^{2+} desencadenada por receptores muscarínicos se investigó con ayuda del método de formación de imágenes por fluorescencia dinámico.

Se encontró que Cl-adenosina potencia, de forma dependiente de la concentración, la liberación intracelular de Ca^{2+} muscarinógena en astrocitos cultivados de rata (véanse las figuras 1 a 3; Tablas 1 y 2). Así, ya en presencia de 1 \muM de Cl-adenosina se mide una potenciación de aproximadamente 30 veces del aumento intracelular de Ca^{2+} desencadenado por ACH. Este efecto no era inhibible por parte de un antagonista de receptor de ACH nicotínico, pero podía ser bloqueado por un antagonista de receptor muscarínico (Tabla 3). Asimismo, la Cl-adenosina potenciaba la liberación intracelular de Ca^{2+} desencadenada por el agonista muscarinógeno oxotremorina-M (Tabla 4). Una gran parte de los experimentos para detectar el efecto potenciador de Cl-adenosina (n > 200) se lleva a cabo una concentración de ACH de 100 nM. A esta baja concentración, ACH es por sí sola ineficaz. También Cl-adenosina sola es ineficaz a lo largo del intervalo de concentraciones sometido a ensayo (3 nM a 3 \muM). Experimentos de dosis-efecto para la determinación de la concentración de Cl-adenosina necesaria para el desencadenamiento de una señal de Ca^{2+} en cooperación con ACH 100 nM dan como resultado un efecto potenciador a concentraciones micromolares de Cl-adenosina. La concentración umbral se encuentra en 1 \muM. Dado que Cl-adenosina corresponde en su afinidad por el receptor a la adenosina endógena (Daly et al., Life Sci., 28 (1981), páginas 2083-2097), esto quiere decir que, de manera correspondiente, también es suficiente un aumento del nivel de adenosina extracelular desde el intervalo de concentraciones nanomolar fisiológico (Ballarin et al., Acta Physiol. Scand, 142 (1991), páginas 97-103) hasta 1 \muM, con el fin de hacer eficaces concentraciones de ACH por debajo del umbral en el receptor muscarínico.

A partir de estos resultados experimentales resulta que el perjuicio de la función colinérgica inducida a través de receptores muscarínicos en el caso de demencia se puede mejorar mediante un incremento de la concentración extracelular de adenosina. Esto último debería ser posible mediante una aplicación acoplada de un inhibidor de la absorción de adenosina, tal como propentofilina (Parkinson et al., Gem. Pharmacol. 25 (1994), páginas 1053-1058). Un aumento farmacológico de la concentración extracelular de adenosina también debería permitir una menor dosificación del inhibidor de ACHE o del agonista del receptor muscarínico eventualmente utilizado en una terapia de combinación, lo que reduciría el riesgo de efectos secundarios indeseados.

Por lo tanto, la invención se refiere a un preparado de combinación, que contiene al menos

1.: un compuesto que presenta un efecto inhibidor de la acetilcolinesterasa que muestra un efecto muscarinógeno, elegido del grupo de tetrahidroaminoacridina, 1-bencil-4-[(5,6-dimetoxi-1-indanon)-2-il]-metil-piperidina y milamelina,

2.: un compuesto que aumenta el nivel de adenosina extracelular endógeno, elegido del grupo de derivados de xantina de la fórmula I

1

y/o sales fisiológicamente compatibles del compuesto de la fórmula I, en donde R^{1} representa

a): oxoalquilo con 3 a 8 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede ser lineal o ramificada,

b): hidroxialquilo con 1 a 8 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede ser lineal o ramificada y cuyo grupo hidroxi representa una función alcohol primaria, secundaria o terciaria, o

c): alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede ser lineal o ramificada,

R^{2} representa

a): un átomo de hidrógeno o

b): alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede ser lineal o ramificada,

R^{3} representa

a): un átomo de hidrógeno,

b): alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede ser lineal o ramificada,

c): alquilo con 1 a 6 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos está interrumpida por un átomo de oxígeno,

d): oxoalquilo con 3 a 8 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede ser lineal o ramificada.

Preferiblemente, se utilizan compuestos de la fórmula I, en donde

R^{1} representa

a): oxoalquilo con 4 a 6 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos es lineal, o

b): alquilo con 3 a 6 átomos de carbono,

R^{2} representa alquilo con 1 a 4 átomos de carbono,

R^{3} representa

a): alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, o

b): oxoalquilo con 3 a 6 átomos de carbono.

3.: Un soporte farmacéutico,

: con un aumento supraaditivo del efecto muscarínico en el caso de enfermedades neurodegenerativas para la aplicación simultánea, separada o escalonada en el tiempo.

De manera particularmente preferida, se utiliza 1-(5-oxohexil)-3-metil-7-n-propil-xantina.

Sales fisiológicamente compatibles adecuadas de los derivados de xantina de la fórmula I son, por ejemplo, sales de metales alcalinos, alcalinotérreos o de amonio, incluidas aquellas de bases de amonio orgánicas fisiológicamente compatibles.

La preparación del compuesto de la fórmula I se efectúa en condiciones estándares de manera conocida (documentos US 4.289.776, US 4.833.146, US 3.737.433).

Las sustancias de partida de las reacciones son conocidas o se pueden preparar fácilmente según métodos conocidos por la bibliografía. Por el término "supraaditivo" se entienden efectos que son mayores que la suma de los efectos individuales.

Preparados de combinación preferidos contienen propentofilina y l-bencil-4-[(5,6-dimetoxi-1-inandon)-2-il]-metil-piperidina.

El preparado de combinación de acuerdo con la invención se adecúa, por ejemplo, para el tratamiento de la demencia, en particular la demencia senil.

El preparado de combinación de acuerdo con la invención también puede abarcar envases de combinación o composiciones, en las que los componentes están situados uno junto a otro y, por lo tanto, pueden ser aplicados en el mismo cuerpo humano o animal simultáneamente, por separado o en forma escalonada en el tiempo.

El preparado de combinación de acuerdo con la invención puede presentarse como unidad de dosificación en forma de formas medicamentosas, tales como cápsulas (incluidas microcápsulas que, por lo general, no contienen ningún soporte farmacéutico), comprimidos (grageas y píldoras) o supositorios, en donde, en el caso de utilizar cápsulas, el material de la cápsula adopta la función del soporte y el contenido puede presentarse, por ejemplo, en forma de polvo, gel, emulsión, dispersión o solución. Sin embargo, es particularmente ventajoso y sencillo preparar formulaciones orales (perorales) con los dos componentes de principio activo 1) y 2), que contienen las cantidades calculadas de los principios activos junto con cualquier soporte farmacéutico deseado. También puede emplearse una correspondiente formulación (supositorio) para la terapia rectal. Asimismo, es posible la aplicación transdermal en forma de pomadas o cremas, y la inyección parenteral (intraperitoneal, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intramuscular), o la infusión de soluciones o la aplicación oral de soluciones que contienen las combinaciones de acuerdo con la invención. Pomadas, pastas, cremas y polvos pueden contener, junto a los principios activos, las sustancias de soporte usuales, por ejemplo grasas animales y vegetales, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, silicona, bentonitas, talco, óxido de zinc, lactosa, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicato de calcio o polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias.

Los comprimidos, las píldoras o los cuerpos de granulado pueden prepararse según procedimientos usuales, tales como procedimientos de compresión, inmersión o de lecho fluidizado o formación de grageas en caldera, y contienen agentes de soportes y otros coadyuvantes usuales, tales como gelatina, agarosa, almidón (por ejemplo almidón de patata, maíz o trigo), celulosa, tal como etilcelulosa, dióxido de silicio, diferentes azúcares, tales como lactosa, carbonato de magnesio y/o fosfatos de calcio. La solución de grageado consiste habitualmente en azúcar y/o jarabe de almidón y contiene, la mayoría de las veces, también gelatina, goma arábiga, polivinilpirrolidona, ésteres de celulosa sintéticos, sustancias tensioactivas, plastificantes, pigmentos y aditivos similares de manera correspondiente al estado de la técnica. Para la preparación de las formas medicamentosas puede utilizarse cualquier agente regulador del flujo, lubricante o deslizante usual, tal como estearato de magnesio, y agentes separadores.

Preferiblemente, los preparados tienen la forma de comprimidos de envolvente/núcleo o comprimidos de varias capas, encontrándose el componente activo 2 en la envolvente o en el núcleo o en una capa, mientras que el componente activo 1 se encuentra en el núcleo o en la envolvente o en otra capa. Los componentes de principios activos también pueden presentarse en forma de liberación retardada o pueden estar adsorbidos al material de liberación retardada o incluidos en el material de liberación retardada (por ejemplo, uno a base de celulosa o resina de poliestireno, por ejemplo hidroxietilcelulosa). También se puede alcanzar una liberación retardada de los principios activos proveyendo la correspondiente capa o el compartimiento de revestimientos usuales, insolubles en los jugos gástricos.

La dosificación a aplicar depende, naturalmente, de diferentes factores, tales como del ser a tratar (es decir hombre o animal), la edad, el peso, el estado general de salud, el grado de gravedad de los síntomas, la enfermedad a tratar, eventuales enfermedades concomitantes, (caso de que esté presente) del tipo del tratamiento concomitante con otros medicamentos, o de la periodicidad del tratamiento. Las dosificaciones se administran, por lo general, varias veces al día y, preferiblemente, una a tres veces al día. Las cantidades utilizadas de principio activo individual se orientan en este caso a la dosis diaria aconsejada del respectivo principio activo individual y, por lo general, han de estar en el preparado de combinación en 10% a 100% de la dosis diana aconsejada, preferiblemente en 20% a 80%, en particular en 50%. La terapia adecuada con las combinaciones de acuerdo con la invención consiste, por consiguiente, por ejemplo en la administración de una dosificación individual de los preparados de combinación de acuerdo con la invención, consistente en

1) 100 mg a 600 mg, de preferencia de 200 mg a 400 mg de propentofilina, en particular 300 mg de propentofilina, y

2) 2 mg a 20 mg, de preferencia 5 mg a 10 mg de 1-bencil-4-[(5,6-dimetoxi-1-inandon)-2-il]-metil-piperidina, dependiendo la cantidad, de forma natural, del número de las dosificaciones individuales y también de la enfermedad a tratar, y pudiendo consistir una dosificación individual también en varias unidades de dosificación administradas al mismo tiempo.

Ejemplos farmacológicos Cultivos de astrocitos

Los cultivos de astrocitos de la corteza proceden de la corteza cerebral de embriones de ratas Wistar de 19-20 días de edad que fueron retirados del cuerpo de la madre después de sacrificarla bajo narcosis con éter. Después de la disección del cerebro, se filtró con succión con una pipeta tejido de la corteza y se recogió en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DEM) con adición de suero de ternero fetal al 15%. Después de la filtración a través de papel lenticular, la suspensión de células se trasplantó a portaobjetos de vidrio (revestidos con polietilenimina) y se cultivó en condiciones estándares en la incubadora en frascos de cultivo, con un cambio del medio dos veces por semana. Después de aproximadamente 7 días, se recolectaron las células y, después de la tripsinización (con el fin de eliminar células nerviosas), se trasplantó de nuevo en una concentración de 5 x 10^{4} células/cm^{2} y se cultivó durante otras 6-8 días hasta el comienzo del ensayo. Estos cultivos consistían, en más del 95%, en astrocitos que presentaban una reacción inmune positiva para el marcador de astrocitos GFAP (proteína fibrilar glia ácida).

Experimentos de formación de imágenes por fluorescencia para la medición de la concentración intracelular de Ca^{2+} y su influencia experimental

Al comienzo del ensayo (6-8 días después del trasplante renovado), los astrocitos cultivados se cargaron con un marcador de fluorescencia de Ca^{2+}, a saber por incubación con éster fura-2-acetoximetílico 5 \muM (sondas moleculares) en BHKR (solución de Krebs-Ringer tamponada con Hepes, bicarbonatada) a 37ºC durante 1 hora. Después de la carga, los soportes de vidrio que contenían los astrocitos cultivados se transfirieron a una cámara de medición y se instalaron sobre el microscopio de fluorescencia invertida perteneciente al lugar de medición de la formación de imágenes por fluorescencia (Zeiss Axiavert 100, objetivo Zeiss Fluar 40 x). Aquí, la cámara se perfundió durante la duración del ensayo (por norma general, 20-30 min) de forma continua con BHKR controlada en temperatura (37ºC) a un caudal de 600 \mul/min. La medición se efectuó con el sistema de formación de imágenes por fluorescencia FUCAL (T.I.L.L Photonics GmbH, Planegg), midiéndose, después de la excitación por dos longitudes de onda de excitación a 340 y 380 nm, la fluorescencia emitida por encima de la longitud de onda de 420 nm con ayuda de una cámara CCD (CS 90, Theta System, Grôbenzell) y calculándose la correspondiente concentración de Ca^{2+}. Las mediciones se efectuaron a intervalos de tiempo de 12 s en cada caso antes, durante y después de la adición de las diferentes sustancias de ensayo al medio perfundido. Las modificaciones de la concentración intracelular de Ca^{2+} se determinaron en el plano de la célula individual, a saber en diferentes ventanas de medición establecidas en cada caso de forma adecuada.

Las diferentes sustancias de ensayo (acetilcolina u oxotremorina en presencia o ausencia de Cl-adenosina) se añadieron al medio de perfusión, por norma general, durante un intervalo de tiempo de 1 minuto. Dado que los aumentos intracelulares de Ca^{2+} desencadenados eran transitorios, las modificaciones de las concentraciones intracelulares de Ca^{2+} registradas en las tablas y curvas de resultados, se refirieron a los valores pico medidos en cada caso.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1

2

La Tabla 1 muestra que la curva de dosis-efecto del aumento intracelular de Ca^{2+} desencadenado por ACH en astrocitos, con la acción simultánea de Cl-adenosina 1 \muM, es desplazada considerablemente hacia la izquierda. En este caso, el nivel de ACH ha de ser únicamente de 100 nM, con el fin de crear una señal de Ca^{2+} de igual magnitud, para la que sería necesaria una concentración de ACH treinta veces mayor (más de 3 \muM) en ausencia de un efecto de adenosina cooperante. El aumento de adenosina crítica necesario para este efecto cooperante se encuentra en un intervalo que debería alcanzarse farmacológicamente por la terapia con el bloqueador de la absorción de adenosina propentofilina.

TABLA 2

3

La Tabla 2 muestra concentraciones de Cl-adenosina necesarias para una movilización de Ca^{2+} en presencia de ACH 100 nM.

TABLA 3 Efecto de antagonistas del receptor de acetilcolina nicotínico (hexametonio) y del receptor de acetilcolina muscarínico (pFHHSiD) sobre el aumento de la concentración intracelular de Ca^{2+} por acetilcolina 100 nM y Cl-adenosina 1 \muM en astrocitos de la corteza cultivados

Sustancia de ensayo	Aumento de Ca^{2+}	[% del testigo]
Hexametonio 10 \muM	90,7 \pm 6,26	n=13
pFHHSiD 50 nM	53,9 \pm 7,2	n=19
pFHHDSiD 200 nM	22 \pm 4,7	n=5
\begin{minipage}[t]{145mm} pFHHSiD (hidrocloruro de hexahidro-sila-difenidol, análogo a p-fluoro); fabricante: RBI (Research Biochemicals International).\end{minipage}

Valores medios \pm EMT en porcentaje del aumento intracelular de Ca^{2+}, que se consiguió en ausencia de los antagonistas por parte de acetilcolina 100 nM y Cl-adenosina 1 \muM (valor testigo = 100%). Como valor testigo se midió un aumento intracelular de Ca^{2+} de 98,4 \pm 6,4 nM (n=125).

La Tabla 3 muestra que el efecto de ACH potenciado por Cl-adenosina representa un efecto de ACH representativo e inducido a través de receptores muscarínicos que es antagonizado por un bloqueador de receptores muscarínicos, pero no por un bloqueador de receptores nicotínicos.

TABLA 4 Efecto de Cl-adenosina y del agonista del receptor de acetilcolina muscarínico oxotremorina-M el contenido intracelular de Ca^{2+} en astrocitos de la corteza cultivados

Agonistas del receptor de acetilcolina	Aumento de Ca^{24'} [nM]
Oxotremorina-M 100 nM	3,3 \pm 5,7
Oxotremorina 100 nM + Cl-adenosina 1 \muM	93,3 \pm 23,7
Valores medios + EMT (n=6)

La Tabla 4 muestra que Cl-adenosina potencia también la señal de Ca^{2+} desencadenada por un agonista de receptores muscarínico.

La figura 1 muestra los resultados de un experimento de formación de imágenes por fluorescencia típico, tal como se describe en la página 9. ACH 100 nM, así como Cl-adenosina, empleados por sí solos, son ineficaces. Su combinación conduce a un aumento drástico de la concentración de Ca^{2+} intracelular dentro de los astrocitos. Los experimentos llevados a cabo en medio exento de Ca^{2+} muestran, por el contrario, un aumento escaso pero todavía masivo intracelular de Ca^{2+} dentro de los astrocitos cuando se emplean juntos ACH y Cl-adenosina; esto demuestra que el Ca^{2+} intracelular se moviliza.

La figura 2 muestra un experimento de formación de imágenes por fluorescencia típico, tal como se describe en la página 9, en que la curva de dosis-efecto del aumento intracelular de Ca^{2+} desencadenado por ACH en astrocitos, con la acción simultánea de Cl-adenosina 1 \muM, es desplazada considerablemente hacia la izquierda. En este caso, el nivel de ACH ha de ser únicamente de 100 nM, con el fin de producir una señal de Ca^{2+} de igual magnitud, para la que sería necesaria una concentración de ACH treinta veces mayor (más de 3 \muM) en ausencia de un efecto de adenosina cooperante.

La figura 3 muestra los resultados de un experimento de formación de imágenes por fluorescencia típico, tal como se describe en la página 9, en el que se determina las concentraciones de Cl-adenosina necesarias para una movilización de Ca^{2+} en presencia de ACH 100 nM.

Claims

1. Preparado de combinación, que contiene al menos

1): un compuesto que presenta un efecto inhibidor de la acetilcolinesterasa que muestra un efecto muscarinógeno, elegido del grupo de tetrahidroaminoacridina, 1-bencil-4-[(5,6-dimetoxi-1-indanon)-2-il]-metil-piperidina y milamelina,

2): un compuesto que aumenta el nivel de adenosina extracelular endógeno, elegido del grupo de derivados de xantina de la fórmula I

4

y/o sales fisiológicamente compatibles del compuesto de la fórmula I, en donde

R^{1} representa

a): oxoalquilo con 3 a 8 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede sen lineal o ramificada,

R^{2} representa

a): un átomo de hidrógeno o

b): alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, cuya cadena de carbonos puede sen lineal o ramificada,

R^{3} representa

a): un átomo de hidrógeno,

3): un soporte farmacéutico

: con un aumento supraaditivo del efecto muscarínico en el caso de enfermedades neurodegenerativas, para la aplicación simultánea, separada o escalonada en el tiempo.

2. Preparado de combinación según la reivindicación 1, caracterizado porque los compuestos en él contenidos son propentofilina y 1-bencil-4-[(5,6-dimetoxi-l-inandon)-2-il]-metil-piperidina.

3. Uso del preparado de combinación según las reivindicaciones 1 ó 2 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, en particular la demencia senil.