ES2243783T3 - Derivados de sulfona apropiadas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y alergias. - Google Patents

Abstract

Según un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) para la producción de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en las que está implicada la sobreproducción de CD23s. La invención proporciona también una composición farmacéutica para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en los que está implicada la sobreproducción de CD23s, que comprende un compuesto de fórmula (I) y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo. Los trastornos inflamatorios particulares incluyen trastornos del SNC tales como enfermedad de Alzheimer, esclerosis múltiple y demencia multiinfarto, así como la secuela mediada por inflamación de apoplejía ytraumatismo cerebral. Los presentes inventores han encontrado sorprendentemente que el compuesto de la invención es un inhibidor altamente potente y selectivo del procesamiento de CD23, teniendo poca o ninguna actividad como inhibidor de metaloproteasas de matriz. Ha de entenderse que las sales farmacéuticamente aceptables, solvatos y otros derivados farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (I) están también incluidos en la presente invención. Las sales de los compuestos de fórmula (I) incluyen, por ejemplo, sales de adición de ácido derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos, tales como clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, p-toluenosulfonatos, fosfatos, sulfatos,

Description

Derivados de sulfona apropiadas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y alergias.

Esta invención se refiere a nuevos inhibidores de la formación de CD23 humana soluble y a su uso en el tratamiento de afecciones asociadas a un exceso de producción de CD23 soluble (CD23s), tales como enfermedades autoinmunes y alergias.

CD23 (el receptor de baja afinidad de IgE FceRII, Blast 2) es una proteína integral de tipo II de 45 kDa expresada en la superficie de una serie de células maduras, incluyendo linfocitos B y T, macrófagos, células asesinas naturales, células de Langerhans, monocitos y plaquetas (Delespesse et al., Adv. Immunol., 49 [1991], 149-191). Existe también una molécula similar a CD23 en eosinófilos (Grangette et al., J. Immunol., 143 [1989], 3580-3588). CD23 se ha implicado en la regulación de la respuesta inmune (Delespesse et al., Immunol. Rev., 125 [1992], 77-97). La CD23 humana existe en forma de dos isoformas reguladas diferencialmente, a y b, que difieren sólo en los aminoácidos de la terminación intracelular N (Yokota, et al., Cel, 55 [1988], 611-618). En el hombre, la isoforma constitutiva se encuentra sólo en linfocitos B, mientras que el tipo b, inducible por IL-4, se encuentra en todas las células capaces de expresar CD23.

Es sabido que la CD23 intacta unida a célula (CD23i) experimenta escisión de la superficie celular, conduciendo a la formación de una serie de fragmentos solubles bien definidos (CD23s), que se producen como resultado de una secuencia compleja de eventos proteolíticos, cuyo mecanismo se comprende escasamente aún (Bourget et al., J. Biol. Chem. 269 [1994], 6927-6930). Aunque aún no probado, se postula que los fragmentos solubles mayores (Mr 37, 33, 29 y 25 kDa) de estos eventos proteolíticos, todos los cuales retienen el dominio C-terminal de lectina común a CD23i, ocurren secuencialmente mediante la formación inicial del fragmento de 37 kDa (Letellier et al., J. Exp. Med., 172 [1990], 693-700). Una ruta de escisión intracelular alternativa conduce a un fragmento estable de 16 kDa que difiere en el dominio C-terminal de CD23i (Grenier-Brosette et al., Eur. J. Immunol., 22 [1992], 1573-1577).

Se han adscrito varias actividades a la CD23i unida a membrana en seres humanos, todas las cuales han mostrado desempeñar un papel en la regulación de IgE. Las actividades particulares incluyen: a) presentación de antígeno, b) citotoxicidad de eosinófilo mediada por IgE, c) alojamiento de células B en centros germinales de nódulos linfáticos y bazo, y d) regulación negativa de la síntesis de IgE (Delespesse et al., Adv. Immunol., 49, [1991], 149-191). Los tres fragmentos de CD23 soluble de mayor peso molecular (Mr 37, 33 y 29 kDa) tienen propiedades de citoquina multifuncional que parecen desempeñar un papel importante en la producción de IgE. Por tanto, la formación excesiva de CD23s se ha implicado en la sobreproducción de IgE, la marca de enfermedades alérgicas tales como asma extrínseca, rinitis, conjuntivitis alérgica, eccema, dermatitis atópica y anafilaxia (Sutton y Gould, Nature, 366, [1993], 421-428).

Otras actividades biológicas atribuidas a CD23s incluyen la estimulación del crecimiento de células B y la inducción de la liberación de mediadores de monocitos. Por tanto, se han observado niveles elevados de CD23s en el suero de pacientes que tienen leucemia linfocítica crónica de células B (Sarfati et al., Blood, 71 [1988], 94-98), y en los fluidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoide (Chomarat et al., Arthritis and Rheumatism, 36 [1993], 234-242). Que hay un papel para la CD23 en la inflamación se ha sugerido por una serie de fuentes. En primer lugar, se ha reseñado que CD23s se une a receptores extracelulares que, cuando se activan, están implicados en eventos de inflamación mediados por célula. Por tanto, se ha reseñado que CD23s activa directamente la liberación de TNF, IL-1 e IL-6 de monocito (Armant et al., vol. 180, J. Exp. Med., 1005-1011 (1994)). Se ha reseñado que CD23 interacciona con las moléculas de adhesión a integrina-B2, CD11b y CD11c, en monocito/macrófago (S. Lecoanet-Henchoz et al., Immunity, vol. 3; 119-125 (1995)) que desencadenan la liberación de NO_{2}^{-}, peróxido de hidrógeno y citoquina (IL-1, IL-6 y TNF). Finalmente, IL-4 o IFN inducen la expresión de CD23 y su liberación en forma de CD23s por monocitos humanos. El ligamiento del receptor CD23 unido a membrana a complejos inmunes IgE/anti-IgE o mAb anti-CD23 activa la producción de AMPc e IL-6 y la formación de tromboxano B2, demostrando un papel mediado por receptor de CD23 en la inflamación.

Debido a estas diversas propiedades de CD23, los compuestos que inhiben la formación de CD23s deberían tener acciones duales de a) potenciar la inhibición por realimentación negativa de la síntesis de Ig al mantener los niveles de CD23i sobre la superficie de células B, y b) inhibir las actividades inmunoestimulantes de citoquina de los fragmentos solubles de mayor peso molecular (Mr 37, 33 y 29 kDa) de CD23s. Además, la inhibición de la escisión de CD23 debería mitigar la activación de monocito inducida por CD23s y la formación de mediador, reduciendo así la respuesta inflamatoria.

Los documentos WO 99/06361 (Abbott) y WO 00/12478 (Zeneca Limited) describen un intervalo de compuestos que incluye hidroxamatosulfonilo y compuestos de sulfonamida, para uso como inhibidores de metaloproteinasa.

El documento WO 99/38843 (Darwin Discovery Limited) da a conocer un alcance genérico de compuestos útiles en el tratamiento de, entre otras, afecciones mediadas por enzimas implicadas en la segregación de CD23, que cubre compuestos de fórmula (A):

1

en la que B, R^{1} y R^{2} se seleccionan de un intervalo de grupos orgánicos.

El documento PCT EP01/05798 (SmithKline Beecham p.l.c.) da a conocer compuestos útiles en el tratamiento y la profilaxis de afecciones mediadas por enzimas implicadas en la segregación de CD23, que cubre compuestos de fórmula (B):

2

en la que R es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo; y R^{1} es biciclilo o heterobiciclilo.

Según la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I):

3

Según un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) para la producción de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en las que está implicada la sobreproducción de CD23s.

La invención proporciona también una composición farmacéutica para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en los que está implicada la sobreproducción de CD23s, que comprende un compuesto de fórmula (I) y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo.

Los trastornos inflamatorios particulares incluyen trastornos del SNC tales como enfermedad de Alzheimer, esclerosis múltiple y demencia multiinfarto, así como la secuela mediada por inflamación de apoplejía y traumatismo cerebral.

Los presentes inventores han encontrado sorprendentemente que el compuesto de la invención es un inhibidor altamente potente y selectivo del procesamiento de CD23, teniendo poca o ninguna actividad como inhibidor de metaloproteasas de matriz.

Ha de entenderse que las sales farmacéuticamente aceptables, solvatos y otros derivados farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (I) están también incluidos en la presente invención.

Las sales de los compuestos de fórmula (I) incluyen, por ejemplo, sales de adición de ácido derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos, tales como clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, p-toluenosulfonatos, fosfatos, sulfatos, acetatos, trifluoroacetatos, propionatos, citratos, maleatos, fumaratos, malonatos, succinatos, lactatos, oxalatos, tartratos y benzoatos.

Las sales pueden formarse también con bases. Dichas sales incluyen sales derivadas de bases inorgánicas u orgánicas, por ejemplo, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio o potasio, y sales de amina orgánica tales como sales de morfolina, piperidina, dimetilamina o dietilamina.

Los compuestos de la invención pueden prepararse mediante el uso de cualquier procedimiento convencional adecuado.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar compuestos de fórmula (I) como se definen anteriormente en la presente memoria, comprendiendo dicho procedimiento:

(a) desproteger un compuesto de fórmula (II):

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en la que P es un grupo protector seleccionado de bencilo, tetrahidropiranilo o p-metoxibencilo, o

(b) formilar un compuesto de fórmula (III):

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5

o

(c) oxidar un compuesto de fórmula (X):

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6

Los compuestos de fórmulas (II), (III) y (X) son nuevos y forman un aspecto adicional de la invención.

Los siguientes esquemas de reacción ilustran los procedimientos que pueden utilizarse para preparar compuestos de fórmula (I).

Esquemas de reacción

Se muestra en el esquema 1 un procedimiento para preparar compuestos de fórmula (I). El tiol (VIII) puede prepararse a partir del correspondiente haluro, tal como el bromuro (IX), utilizando los procedimientos descritos por Choi y Yoon, Synthesis, 1995, 373, y convertirse en (VII) mediante reacción con una halometilcetona adecuada, tal como bromometilcetona en presencia de una base tal como trietilamina. La cetona (VII) puede hacerse reaccionar con una hidroxilamina adecuadamente protegida en O. Por ejemplo, cuando el grupo protector (P) es bencilo, puede utilizarse la reacción con O-bencilhidroxilamina en condiciones estándar para preparar la oxima (VI), que puede reducirse a (V) con un agente reductor adecuado, por ejemplo, borohidruro de sodio o cianoborohidruro de sodio en ácido acético. La formilación de (V) utilizando anhídrido fórmico y acético seguido de oxidación con ácido meta-cloroperbenzoico proporciona (II), que puede desprotegerse en condiciones adecuadas.

Esquema 1

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7

Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse también como se describe en el esquema 2. La cetona (VII) puede hacerse reaccionar con hidroxilamina en condiciones estándar, proporcionando una oxima (XII) que, tras reducción con un agente reductor adecuado tal como cianoborohidruro de sodio en ácido acético, proporciona la hidroxilamina (XI), que puede formilarse mediante tratamiento con anhídrido fórmico y acético seguido de carbonato de potasio y metanol, y oxidarse como se describe anteriormente para el esquema 1.

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Esquema 2

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El compuesto de la presente invención puede prepararse en forma de una mezcla de isómeros o de un isómero individual. El isómero individual puede prepararse mediante cualquier procedimiento apropiado, por ejemplo, pueden prepararse estereoisómeros individuales mediante síntesis química estereoespecífica partiendo de sustratos quirales o separando mezclas de enantiómeros o mezclas de diastereómeros utilizando procedimientos conocidos, tales como HPLC preparativa quiral. Por ejemplo, la separación de compuestos de fórmula (I) que son racémicos en enantiómeros individuales puede conseguirse mediante la conversión en un derivado de éster adecuado, tal como el derivado de ácido O-metilmandélico, seguido de separación utilizando procedimientos cromatográficos estándar y después desprotección.

En un aspecto preferido, la invención proporciona un compuesto de fórmula (IA):

9

En otro aspecto preferido, la invención proporciona un compuesto de fórmula (IB):

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Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse en forma quiral pura utilizando el procedimiento descrito en el esquema 3. Por ejemplo, en la preparación de compuestos de fórmula (IA), puede convertirse un aminoalcohol (XIXA) quiral protegido adecuadamente en el correspondiente tioacetato (XVIIIA) en condiciones de Mitsunobu, por ejemplo, utilizando trifenilfosfina o tributilfosfina en combinación con azodicarboxilato de di-terc-butilo o azodicarboxilato de dietilo. El tioacetato (XVIIIA) puede convertirse in situ en un tiol, y desde allí en el sulfuro (XVIIA). Como alternativa, el grupo alcohol en (XIXA) puede convertirse en un grupo saliente tal como un tosilato o bromuro, y hacerse reaccionar con el tioacetato o tiol apropiado, tales como quinolin-3-ilmetanotiol o tioacetato, en presencia de una base adecuada tal como hidróxido de sodio, proporcionando (XVIIA). La oxidación de (XVIIA) a la sulfona (XVIA) puede llevarse a cabo con un agente oxidante adecuado tal como MCPBA, seguido de desprotección. La desprotección en condiciones estándar, tales como ácido trifluoroacético o cloruro de hidrógeno en dioxano, proporciona (XVA), que puede convertirse en (XIVA) y oxidarse a la oxaziridina (XIIIA) utilizando procedimientos establecidos, por ejemplo, ácido meta-perbenzoico. La conversión de la oxaziridina (XIIIA) en (IIIA) se lleva a cabo preferiblemente utilizando ácido clorhídrico. La formilación de (IIIA) puede llevarse a cabo utilizando metodología de formilación estándar, tal como reacción con anhídrido fórmico y acético.

Esquema 3

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Se muestra en el esquema 4 un procedimiento alternativo para preparar compuestos de fórmula (IIIA) en forma quiral pura. La amina quiral (XVA) puede alquilarse con bromuro de cianometilo o yoduro de cianometilo, proporcionando la cianometilamina (XXA), que se convierte en (IIIA) utilizando los procedimientos descritos por Tokuyama et al., Synthesis, 2000, 9, 1299.

Esquema 4

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Como alternativa, la amina (XVA) puede oxidarse directamente con peróxido de benzoílo, proporcionando una benzoilhidroxilamina (XXIA) como se muestra en el esquema 5, utilizando el procedimiento descrito por Phanstiel, J. Org. Chem., 1997, 62, 8104. Este último compuesto puede formularse con anhídrido fórmico y acético y después desprotegerse, por ejemplo, con amoniaco en metanol, proporcionando (IA)

Esquema 5

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Los compuestos de fórmula (IB) pueden sintetizarse de manera análoga a partir de los precursores quirales apropiados.

Los compuestos de fórmula (III) pueden prepararse también utilizando la ruta mostrada en el esquema 6. El alcohol (XXIV) puede obtenerse mediante reducción de la cetona (VII) en condiciones estándar, por ejemplo, borano en THF. Cuando es apropiado, el alcohol (XXIV) puede prepararse mediante reacción del haloalcohol (XXVI) con (XXV). La oxidación a la sulfona (XXIII) puede llevarse a cabo como se describe anteriormente, seguido de eliminación utilizando cloruro de metanosulfonilo y trietilamina, o condiciones de Mitsunobu, proporcionando (XXII). La adición de hidroxilamina a la sulfona insaturada (XXII) proporciona (III).

Esquema 6

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Las halometilcetonas pueden obtenerse mediante bromación de una metilcetona utilizando bromo en metanol, como se describe por Gaudry y Marquet Org. Synth., 1976, 55, 24. Como alternativa, pueden obtenerse bromometilcetonas a partir de las correspondientes diazocetonas mediante reacción con bromuro de halógeno utilizando procedimientos estándar. Los compuestos de fórmula (IX) pueden obtenerse mediante procedimientos estándar, por ejemplo, mediante bromación de 3-metilquinolina con N-bromosuccinimida en tetracloruro de carbono. La bromación de precursores que contienen quinolina con N-bromosuccinimida se lleva a cabo preferiblemente en presencia de un ácido tal como ácido acético. Como alternativa, el quinolin-3-ilmetanol puede convertirse en un compuesto de fórmula (IX) utilizando procedimientos estándar de halogenación, por ejemplo, utilizando pentacloruro de fósforo o cloruro de tionilo, o mediante conversión en el mesilato, seguido de tratamiento con bromuro de litio en acetona.

Los precursores protegidos de aminoalcohol están comercialmente disponibles o pueden prepararse mediante rutas estándar, por ejemplo, a partir de los correspondientes aminoácidos como se describen por Ho et al., Tet. Lett., 1993, 34(41), 6513.

Los derivados adecuados de aminoácidos pueden prepararse a partir de precursores de aziridina, por ejemplo, como se describe por Nakajima et al., Bull. Soc. Chim. Japan, 1982, 55, 3049.

Los materiales de partida y otros reactivos están disponibles comercialmente o pueden sintetizarse mediante procedimientos bien conocidos y convencionales.

Se prefiere que los compuestos se aíslen en forma sustancialmente pura.

Como se indica en la presente memoria, un inhibidor de la formación de CD23 humana soluble tiene propiedades médicas útiles. Preferiblemente, los compuestos activos se administran en forma de composiciones farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones se adaptan preferiblemente para administración oral. Sin embargo, pueden adaptarse a otros modos de administración, por ejemplo, en forma de un pulverizador, aerosol u otro procedimiento convencional para inhalación, para tratar trastornos del tracto respiratorio; o administración parenteral para pacientes que padecen insuficiencia cardiaca. Otros modos alternativos de administración incluyen administración sublingual o transdérmica.

Las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pastillas masticables, supositorios, polvos reconstituibles o preparaciones líquidas, tales como soluciones o suspensiones orales o parenterales estériles.

Para obtener consistencia en la administración, se prefiere que la composición de la invención esté en forma de una dosis unitaria.

Las formas de presentación de dosis unitaria para administración oral pueden ser comprimidos y cápsulas, y pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricanes de compresión, por ejemplo, estearato de magnesio; disgregantes, por ejemplo, almidón, polivinilpirrolidona, glicolato sódico de almidón o celulosa microcristalina; o agentes humectantes farmacéuticamente aceptables tales como laurilsulfato de sodio.

Las composiciones orales sólidas pueden prepararse mediante procedimientos convencionales de mezclado, relleno o formación de comprimidos. Pueden utilizarse operaciones de mezclado repetidas para distribuir el agente activo por estas composiciones empleando grandes cantidades de cargas. Por supuesto, dichas operaciones son convencionales en la técnica. Los comprimidos pueden ser recubiertos según procedimientos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal, en particular con un recubrimiento entérico.

Las preparaciones líquidas orales pueden estar en forma, por ejemplo, de emulsiones, jarabes o elixires, o pueden presentarse en forma de un producto seco para reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo, sorbitol, jarabe, metilcelulosa, gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio, grasas hidrogenadas comestibles; agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo, aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos tales como ésteres de glicerina, propilenglicol o alcohol etílico; conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico; y si se desea, agentes aromatizantes o colorantes
convencionales.

Para administración parenteral, las formas de dosificación unitaria fluidas se preparan utilizando el compuesto y un vehículo estéril y, dependiendo de la concentración utilizada, pueden suspenderse o disolverse en el vehículo. Al preparar soluciones, el compuesto puede disolverse en agua para inyecciones y esterilizarse por filtración antes de rellenar un vial o ampolla adecuado y sellar. Ventajosamente, pueden disolverse en el vehículo coadyuvantes tales como un anestésico local, un conservante y agentes de tamponación. Para potenciar la estabilidad, la composición puede congelarse después de rellenar el vial y retirar el agua a vacío. Las suspensiones parenterales se preparan sustancialmente de la misma manera, excepto porque el compuesto se suspende en el vehículo en lugar de disolverse, y la esterilización no puede realizarse por filtración. El compuesto puede esterilizarse mediante exposición a óxido de etileno antes de suspenderlo en el vehículo estéril. Ventajosamente, se incluye en la composición un tensioactivo o agente humectante para facilitar la distribución uniforme del compuesto.

Las composiciones de esta invención pueden presentarse también adecuadamente para administración al tracto respiratorio en forma de una aspiración de un aerosol o solución para un nebulizador, o en forma de polvo microfino para insuflación, solo o en combinación con un vehículo inerte tal como lactosa. En dicho caso, las partículas de compuesto activo tienen adecuadamente diámetros menores de 50 micrómetros, preferiblemente menores de 10 micrómetros, por ejemplo, diámetros en el intervalo de 1-50 micrómetros, 1-10 micrómetros ó 1-5 micrómetros. Cuando sea apropiado, pueden incluirse pequeñas cantidades de otros antiasmáticos y broncodilatadores, por ejemplo, aminas simpaticomiméticas tales como isoprenalina, isoetarina, salbutamol, fenilefrina y efedrina; derivados de xantina tales como teofilina y aminofilina, y corticosteroides tales como prednisolona y estimulantes adrenales tales como
ACTH.

Las composiciones pueden contener de 0,1 a 99% en peso, preferiblemente de 10-60% en peso, del material activo, dependiendo del procedimiento de administración. Es un intervalo preferido para administración inhalada 10-99%, especialmente 60-99%, por ejemplo, 90, 95 ó 99%.

Las formulaciones en polvo microfino pueden administrarse adecuadamente en un aerosol en forma de una dosis medida o mediante un dispositivo adecuado activado por la respiración.

Las formulaciones adecuadas de aerosol de dosis medida comprenden propelentes convencionales, codisolventes tales como etanol, tensioactivos tales como alcohol oleílico, lubricantes tales como alcohol oleílico, desecantes tales como sulfato de calcio y modificadores de la densidad tales como cloruro de sodio.

Las soluciones adecuadas para un nebulizador son soluciones esterilizadas isotónicas, opcionalmente tamponadas por ejemplo a entre pH 4-7, que contienen hasta 20 mg/ml de compuesto, pero más generalmente 0,1 a 10 mg/ml, para uso con equipo estándar de nebulización.

La cantidad eficaz dependerá de la eficacia relativa de los compuestos de la presente invención, de la gravedad del trastorno que se esté tratando y del peso del paciente. Adecuadamente, una forma de dosificación unitaria de una composición de la invención puede contener de 0,1 a 1000 mg de un compuesto de la invención (0,001 a 10 mg por inhalación), y más habitualmente de 1 a 500 mg, por ejemplo 1 a 25 ó 5 a 500 mg. Dichas composiciones pueden administrarse de 1 a 6 veces al día, más habitualmente de 2 a 4 veces al día, de tal manera que la dosis diaria sea de 1 mg a 1 g para un humano adulto de 70 kg y, más particularmente, de 5 a 500 mg. Es decir, en el intervalo de aproximadamente 1,4 x 10^{-2} mg/kg/día a 14 mg/kg/día y, más particularmente, en el intervalo de aproximadamente 7 x 10^{-2} mg/kg/día a 7 mg/kg/día.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención, pero no la limitan en modo alguno.

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Preparación 1

Clorhidrato de 3-clorometilquinolina

Etapa 1

3-Quinolilmetanol

Se enfrió a 0ºC quinolin-3-carboxaldehído (13,18 g) en etanol (260 ml), seguido de la adición en porciones de borohidruro de sodio (1,62 g). Se mantuvo la temperatura a 0ºC durante 15 min, seguido de la adición de HCl 6 N (28 ml), durante dicho tiempo se mantuvo la temperatura de la reacción a entre 0-5ºC. Se neutralizó después la solución con NaOH 1 M. Se destiló la mezcla de reacción bruta hasta sequedad, para retirar el etanol, y se repartió el residuo entre agua y AcOEt. Se secó después la capa de AcOEt (MgSO_{4}), se absorbió sobre gel de sílice y se sometió a cromatografía (gel de sílice ultrarrápido, gradiente en etapas: 0-100% AcOEt/hexano), proporcionando el compuesto del subtítulo en forma de un sólido blanco (9,58 g).

Etapa 2

Clorhidrato de 3-clorometilquinolina

Se suspendió 3-quinolilmetanol (9,85 g) en benceno seco (200 ml) y se agitó, seguido de la adición de cloruro de tionilo (14,69 ml). Se obtuvo un precipitado amarillo inmediato. Se mantuvo la agitación a ta durante 2 h. Se separó por filtración un sólido amarillo claro y se secó, proporcionando el compuesto del subtítulo (13 g).

Ejemplo 1 N-[(2S,3R)-3-Metoxi-1-(quinolin-3-ilmetanosulfonil)butan-2-il]hidroxiformamida

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Etapa 1

Ácido (2S,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutanoico

Se trató una solución enfriada con hielo de ácido (2S,3R)-2-amino-3-metoxibutanoico (1,04 g) en solución de 1,4-dioxano (10 ml) e hidróxido de sodio 1 M (7,82 ml) con dicarbonato de di-terc-butilo (1,88 g). Se dejó que la mezcla alcanzase la temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Se lavó la solución con hexano (3 x 5 ml), se acidificó con ácido cítrico al 5% durante una noche y se extrajo con acetato de etilo (25 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}) y se evaporó, proporcionando el compuesto del subtítulo (1,81 g). ^{1}H \delta(CDCl_{3}) 5,3 (1H, m), 4,35 (1H, m), 3,98 (1H, d, J= 6,5 Hz), 3,39 (3H, s), 1,46 (9H, s), 1,21 (3H, d, J= 6,5 Hz).

Etapa 2

(2R,3R)-2-N-terc-Butoxicarbonilamino-3-metoxibutanol

Se trató una solución agitada de ácido (2S,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutanoico (1,75 g) en THF seco (20 ml) a -10ºC con N-metilmorfolina (0,83 ml) y cloroformiato de isobutilo (0,98 ml). Después de 30 minutos, se filtró la mezcla y se volvió a enfriar en hielo. Se añadió una solución de borohidruro de sodio (0,285 g) en agua (5 ml) y se agitó la mezcla durante 1 h. Después de acidificación a pH 3 con ácido clorhídrico 1 M, se extrajo la mezcla con acetato de etilo (20 ml). Se lavó el extracto con agua (2 x 10 m), salmuera saturada (10 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó, proporcionando el compuesto del subtítulo (1,2 g). ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 5,1 (1H, m), 3,59-3,75 (4H, m), 3,33 (3H, s), 1,45 (9H, t), 1,18 (3H, d, J= 6,8 Hz).

Etapa 3

Tioacetato de (2S,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutilo

Se trató gota a gota con azodicarboxilato de diisopropilo (2,07 ml) una solución enfriada con hielo de trifenilfosfina (2,75 g) en THF (40 ml), y se agitó durante 30 min. Se añadió gota a gota una solución de (2R,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutanol (1,15 g) y ácido tioacético (0,75 ml) en THF (10 ml). Se dejó que la reacción alcanzase la ta durante una noche, y se evaporó. Se extrajo el residuo con hexano (150 ml), se evaporó y se sometió a cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, gradiente en etapas: 0-5% AcOEt/MDC), proporcionando el compuesto del subtítulo (1,24 g). ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 4,82 (1H, d ancho), 3,66 (1H, m), 3,42 (1H, m), 3,31 (3H, s), 2,96-3,18 (2H, m), 2,32 (3H, s), 1,42 (9H, s), 1,13 (3H, d, J= 6,3 Hz).

Etapa 4

(2S,3R)-2-(N-terc-Butoxicarbonilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano

Se trató gota a gota con hidróxido de sodio 1 M (5,7 ml) una mezcla agitada de tioacetato de (2S,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutilo (1,05 g) y clorhidrato de 3-clorometilquinolina (0,61 g) en metanol (50 ml) a ta, y se agitó durante una noche. Se evaporó la mezcla a bajo volumen y se diluyó con una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (10 ml). Después de la extracción con MDC (2 x 10 m), se secaron los extractos combinados (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se sometió el residuo a cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, gradiente en etapas: 15-30% AcOEt/MDC), proporcionando el compuesto del subtítulo (1,31 g). EM (ión IQPA +ve) 377 (MH^{+}); ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 8,9 (1H, m), 8,1 (2H, m), 7,79 (1H, d, J= 8 Hz), 7,69 (1H, t, J= 8 Hz), 7,56 (1H, t, J= 8 Hz), 4,87 (1H, d ancho), 3,91 (2H, s), 3,68 (2H, m), 3,27 (3H, s), 2,55 (2H, m), 1,46 (9H, s), 1,15 (3H, d, J= 6,3 Hz).

Etapa 5

(2S,3R)-2-(N-terc-Butoxicarbonilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano

Se trató con ácido 3-cloroperoxibenzoico al 50% (2,1 g) una solución enfriada con hielo de (2S,3R)-2-(N-terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfanil)butano (1,3 g) en MDC (20 ml), y se agitó la mezcla durante 1 h. Se inactivó la mezcla de reacción con tiosulfato de sodio al 10% (10 ml), seguido de una solución saturada de bicarbonato de sodio (10 ml). Después de 5 min, se recogió la fase orgánica, se secó (MgSO_{4}) y se evaporó. Se cristalizó el residuo con mezclas de acetato de etilo-hexano, proporcionando el compuesto adecuado (1 g). EM (ión IQPA +ve): 397 (MNa^{+}); ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 8,9 (1H, m), 8,3 (1H, d, J= 2 Hz), 8,1 (1H, d, J= 8 Hz), 7,83 (1H, d, J= 8 Hz), 7,75 (1H, t, J= 8 Hz), 7,53 (1H, d, J= 8 Hz), 5,04 (1H, ancho), 4,6 (2H, m), 4,2 (1H, m), 3,71 (1H, m), 3,31 (3H, s), 3,17 (2H, m), 1,55 (9H, m), 1,19 (3H, d, J= 6,3 Hz).

Etapa 6

Diclorhidrato de (2S,3R)-2-amino-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano

Se trató una solución agitada de (2S,3R)-2-(N-terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano (1 g) en MDC (10 ml) a ta con cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (10 ml). Después de 1 h, se evaporó la mezcla, proporcionando el compuesto del subtítulo (0,93 g). EM (ión IQPA +ve) 309 (MH^{+}), ^{1}H-RMN \delta(DMSO-d_{6}) 9,04 (1H, m), 8,71 (1H, s), 8,3 (3H, s ancho), 8,2 (2H, m), 7,91 (1H, t, J= 8 Hz), 7,78 (1H, t, J= 8 Hz), 5,08 (2H, m), 3,3-3,88 (4H, m), 3,31 (3H, s), 1,7 (2H, m), 1,19 (3H, d, J= 6,3 Hz).

Etapa 7

(2S,3R)-2-(N-Cianometilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetano-sulfonil)butano

Se calentó a reflujo durante 16 h una mezcla de diclorhidrato de (2S,3R)-2-amino-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano (0,93 g), bromoacetonitrilo (0,41 ml) y N-etildiisopropilamina (1,7 ml) en acetonitrilo (15 ml), se enfrió y se evaporó. Se repartió el residuo entre MDC (15 ml) y una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (15 ml). Se recogió la fase orgánica y se reextrajo la acuosa con MDC (15 ml). Se secaron las fases combinadas de MDC (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se sometió a cromatografía ultrarrápida el residuo (gel de sílice, gradiente en etapas: 70-100% AcOEt/hexano), proporcionando el compuesto del subtítulo (0,59 g). EM (ión IQPA +ve) 348 (MH^{+}); ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 8,91 (1H, m), 8,3 (1H, d, J= 2 Hz), 8,14 (1H, d, J= 8 Hz), 7,87 (1H, d, = 8 Hz), 7,78 (1H, t, J= 8 Hz), 7,60 (1H, t, J= 8 Hz), 4,55 (2H, s), 3,4-3,88 (4H, m), 3,33 (3H, s), 2,93-3,28 (2H, m), 2,18 (1H, m), 0,93 (3H, d, J= 6,3 Hz).

Etapa 8

(2S,3R)-N-[3-Metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butan-2-il]hidroxilamina

Se trató una solución enfriada con hielo de (2S,3R)-3-metoxi-2-(N-cianometilamino)-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano (590 mg) en MDC (20 ml) con ácido 4-toluenosulfónico monohidratado (50 mg) y ácido 3-cloroperoxibenzoico al 70% (281 mg). Después de 45 minutos, se inactivó la reacción con tiosulfato de sodio al 10% (5 ml), seguido de una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (5 ml). Después de 5 min, se recogió la fase orgánica y se reextrajo la acuosa con MDC (10 ml). Se secaron las fases combinadas de MDC (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se redisolvió el residuo en metanol (10 ml), se trató con ácido 4-toluenosulfónico monohidratado y clorhidrato de hidroxilamina (2,36 g), y se calentó a 60ºC durante 1,5 h. Se evaporó la solución enfriada, después se disolvió en agua (5 ml) y una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (5 ml). Después de la extracción con MDC (2 x 5 ml), se secaron los extractos combinados (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se sometió a cromatografía ultrarrápida el residuo (gel de sílice, gradiente en etapas: 80-100% acetato de etilo en hexano) proporcionando el compuesto del subtítulo (305 mg). EM (ión IQPA+ve) 325 (MH^{+}); ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 8,91 (1H, m), 8,32 (1H, d, J= 2Hz), 8,14 (1H, d, J= 8 Hz), 7,85 (1H, d, J= 8 Hz), 7,76 (1H, t, J= 8 Hz), 7,6 (1H, t, J= 8 Hz), 4,83 (1H, ancho), 4,58 (2H, m), 3,0-3,7 (4H, m), 3,38 (3H, s), 0,92 (3H, d, J= 6,3 Hz).

Etapa 9

N-[(2S,3R)-3-Metoxi-1-(quinolin-3-ilmetanosulfonil)butan-2-il]-N-hidroxiformamida

Se disolvió (2S,3R)-N-[3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)-2-butil]hidroxilamina (300 mg) en una solución premezclada de anhídrido acético (2 ml) y ácido fórmico (6 ml), y se dejó reposar una noche. Se evaporó la reacción y después se reevaporó con cloroformo (2 x 5 ml). Se redisolvió el residuo en metanol (5 ml), se trató con carbonato de potasio (639 mg), se agitó durante 45 min y después se evaporó. Se redisolvió el residuo en agua (5 ml) y se ajustó e pH a 7 con ácido clorhídrico 1 M. Después de la extracción con MDC (2 x 5 ml), se secaron los extractos combinados (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se sometió a cromatografía el residuo (gel de sílice lavado con ácido, 3% de MeOH/DMC), proporcionando el compuesto del título (232 mg). EM (ión IQPA +ve): 353 (MH^{+}); ^{1}H-RMN \delta[(CD_{3})_{2}
SO] 9,9 y 9,7 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 8,83 (1H, m), 8,38 (1H, d, J= 2 Hz), 8,32 y 8,0 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 8,03 (2H, m), 7,81 (1H, t, J= 8 Hz), 7,66 (1H, t, J= 8 Hz), 4,85 y 4,22 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 4,76 (2H, m), 3,7-3,33 (3H, m), 3,25 (3H, s), 1,15 (3H, diastereoisómeros m).

Ejemplo 2 N-[(2R,3S)-3-Metoxi-1-(quinolin-3-ilmetanosulfonil)butan-2-il]hidroxiformamida

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Se preparó el compuesto del ejemplo 2 a partir de ácido (2R,3S)-2-amino-3-metoxibutanoico utilizando un procedimiento similar al descrito en el ejemplo 1.

Procedimientos de ensayo biológico

Procedimiento 1

Se investigó la capacidad de los compuestos de ensayo de inhibir la liberación de CD23 soluble mediante el uso del siguiente procedimiento:

Ensayo de actividad de escisión de CD23 de membrana de células RPMI 8866

Se purifican membranas plasmáticas de células RPMI 8866, una línea de células B transformadas por el virus de Epstein-Barr humano (Sarfati et al., Immunology 60 [1987], 539-547) que expresan altos niveles de CD23, utilizando un procedimiento de extracción acuosa. Se disgregan las células resuspendidas en tampón de homogeneización (HEPES 20 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, MgCl_{2} 1,5 mM, DTT 1 mM) mediante cavitación con N_{2} en una bomba Parr, y se recupera la fracción de membrana plasmática mezclada con otras membranas mediante centrifugación a 10.000 x g. Se resuspende el sedimento ligero en fosfato de potasio 0,2 M, pH 7,2 utilizando 2 ml por 1-3 g de células húmedas, y se desecha el sedimento nuclear. Se fraccionan adicionalmente las membranas mediante reparto entre dextrano 500 (6,4% p/p) y polietilenglicol (PEG) 5000 (6,4% p/p) (ref.) a sacarosa 0,25 M en un total de 16 g por 10-15 mg de proteínas de membrana [Morre y Morre, BioTechniques 7, 946-957 (1989)]. Se separan las fases mediante una breve centrifugación a 1000 x g y se recoge la fase de PEG (superior), se diluye 3-5 veces con tampón fosfato de potasio 20 mM pH 7,4, y se centrifuga a 100.000 x g para recuperar las membranas en esa fase. Se resuspende el sedimento en solución salina tamponada con fosfato, que consiste en membranas plasmáticas enriquecidas 3-4 veces, así como algunas otras membranas celulares (por ejemplo, lisosomas, Golgi). Se dividen en alícuotas las membranas y se almacenan a -80ºC. El fraccionamiento a 6,6% de dextrano/PEG proporciona membranas plasmáticas enriquecidas 10 veces.

Se incuban las membranas fraccionadas a 37ºC durante tiempos de hasta 4 horas para producir fragmentos de CD23, que se separan de la membrana mediante filtración en placas de filtro Durapore de 0,2 micrómetros (Millipore) después de inactivar el ensayo con un inhibidor de MMP no selectivo, por ejemplo, la preparación 1 5 \muM del documento WO 95/31457 (sal de sodio de [4-(N-hidroxiamino)-2-(R)-isobutil-3(S)-(2-tiofentiometil)succinil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida, preparada según el procedimiento descrito en el ejemplo 11 del documento WO 90/05719). Se determina la CD23s liberada de la membrana utilizando el kit EIA de The Binding Site (Birmingham, RU) o uno similar utilizando un mAb MHM6 anti-CD23 [Rowe et al., Int. J. Cancer, 29, 373-382 (1982)] u otro mAb anti-CD23 como anticuerpo de captura en un EIA sándwich. Se mide la cantidad de CD23 soluble formada por 0,5 \mug de proteína de membrana en un volumen total de 50 \mul de solución salina tamponada con fosfato mediante EIA, y se compara con la cantidad formada en presencia de diversas concentraciones de inhibidores. Los inhibidores se preparan en soluciones de agua o dimetilsulfóxido (DMSO), y la concentración final no es mayor de 2%. Se determinan las CI_{50} mediante ajuste de curva como la concentración a la que se observa un 50% de inhibición de la producción de CD23s respecto a la diferencia en CD23s entre los controles incubados sin inhibidor.

Resultados

El compuesto del ejemplo 1 mostró un valor de CI_{50} de 0,02 \muM.

El compuesto del ejemplo 2 mostró un valor de CI_{50} de 0,04 \muM.

Procedimiento 2

Se investigó la capacidad de los compuestos de ensayo de inhibir metaloproteasas de matriz utilizando los siguientes procedimientos.

Ensayo de inhibición de colagenasa

Se determinó la potencia de los compuestos que actúan como inhibidores de colagenasa mediante el procedimiento de Cawston y Barrett (Anal Biochem., 99, 340-345, 1979), incorporado a la presente memoria como referencia, en el que se incubó una solución 1 mM del inhibidor que se está ensayando, o diluciones de la misma, a 37ºC durante 18 h con colágeno y colagenasa recombinante humana de fibroblastos sinoviales clonados, expresados y purificados de E. coli (tamponados con Tris 150 mM, pH 7,6, que contiene cloruro de calcio 15 mM, 0,05% de Brij 35, cloruro de sodio 200 mM y 0,02% de azida de sodio). Se acetiló el colágeno como el colágeno bovino de tipo 1 con ^{3}H preparado mediante el procedimiento de Cawston y Murphy (Methods in Enzimology, 80, 711, 1981). Se centrifugaron las muestras para sedimentar el colágeno no digerido y se retiró una alícuota del sobrenadante radiactivo para ensayo en un contador de centelleo como medida de la hidrólisis. Se comparó la actividad colagenasa en presencia de inhibidor 1 mM, o dilución del mismo, con la actividad en un control desprovisto de inhibidor, y los resultados se reseñan como la concentración que afecta al 50% de la colagenasa (CI_{50}).

Resultados

El compuesto del ejemplo 1 mostró un valor de CI_{50} >10 \muM en el procedimiento 2.

Ensayos de inhibición general de MMP

Se determinó la inhibición de la actividad metaloproteasa de matriz utilizando un ensayo de inactivación de fluorescencia con sustrato apropiado. Por ejemplo, se determinó la actividad MMP utilizando MMP activada utilizando tripsina, según Lark et al., Connective Tissue Res., 25, 52 (1990). Se incuba la MMP a temperatura ambiente en una placa de microvaloración en un volumen total de 100 \mul, que contiene TrisCl 0,15 M, CaCl_{2} 15 mM, NaCl 0,2 M, pH 7,6 (tampón de ensayo); inhibidor a concentraciones de hasta 100 \muM, con no más de 2% de concentración final de DMSO, sustrato 10 \muM (tal como SDP-3815-PI para MMP-1, Peptides International). La concentración de MMP es <10 nM, y se determina empíricamente con el sustrato apropiado, dando al menos un aumento de 20 veces en la emisión de fluorescencia en 30 min. La longitud de onda de excitación fluorescente fue de 355 nm, la longitud de onda de emisión de 400-460 nm, y los puntos de datos se recogen para generar una pendiente (cambio de fluorescencia con el tiempo). Se calcula el porcentaje de inhibición para cada concentración a partir de la pendiente a tiempo cero, y los valores de CI_{50} a partir de la dependencia de la concentración. MMP-1, 2, 3, 7, 9, 13, 14 pueden ensayarse todas de la misma manera, utilizando sustratos comercialmente disponibles reseñados por ser eficaces para cada enzima. Las enzimas se obtuvieron de Calbiochem y se activaron utilizando el mismo procedimiento de
tripsina.

Resultados

El compuesto del ejemplo 1 mostró un valor de CI_{50} >10 \muM frente a MMP-3 y un valor de CI_{50} de 2,6 \muM frente a MMP-13.

El compuesto del ejemplo 2 mostró un valor de CI_{50} de 3 \muM frente a MMP-13.

Abreviaturas

Bn: bencilo

AcOEt: acetato de etilo

h: hora

min: minutos

MCPBA: ácido meta-cloroperbenzoico

MDC: diclorometano

ta: temperatura ambiente

THF: tetrahidrofurano.

Claims (9)

1. Un compuesto de fórmula (I):

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2. Un compuesto de fórmula (IA):

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3. Un compuesto de fórmula (IB):

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4. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la producción de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos en los que está implicada la sobreproducción de CD23s.

5. Una composición farmacéutica para el tratamiento o la profilaxis de trastornos en los que está implicada la sobreproducción de CD23s, que comprende un compuesto según las reivindicaciones 1 a 3 y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo.

6. Un procedimiento para preparar un compuesto según la reivindicación 1 a 3, comprendiendo dicho procedimiento:

(a) desproteger un compuesto de fórmula (II):

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en la que P es un grupo protector; o

(b) formilar un compuesto de fórmula (III):

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21

o (c) oxidar un compuesto de fórmula (X):

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22

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7. Un compuesto de fórmula (II):

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23

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en la que P es un grupo protector seleccionado de bencilo, tetrahidropiranilo o p-metoxibencilo.

8. Un compuesto de fórmula (III):

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24

\newpage

9. Un compuesto de fórmula (X):

25