ES2247357T3 - Amidas sustituidas, sulfonamidas y ureas utiles para inhibir la actividad de la cinasa. - Google Patents

Amidas sustituidas, sulfonamidas y ureas utiles para inhibir la actividad de la cinasa.

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ES2247357T3
ES2247357T3 ES02749842T ES02749842T ES2247357T3 ES 2247357 T3 ES2247357 T3 ES 2247357T3 ES 02749842 T ES02749842 T ES 02749842T ES 02749842 T ES02749842 T ES 02749842T ES 2247357 T3 ES2247357 T3 ES 2247357T3
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Abstract

Un compuesto, incluidos los enantiómeros, estereoisómeros y tautómeros del mismo, así como las sales farmacéuticamente aceptables o los solvatos de dicho compuesto, en el que dicho compuesto tiene la estructura general mostrada en la fórmula I: Fórmula I m es un entero de 0 a 4; n es un entero de 1 a 6; R¿ es alquilo C1-C4; R1 es: O R3 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C4 de cadena lineal y alquilo C1-C4 ramificado; R2 se selecciona del grupo que consiste en -(CH2)p-NH-C(=NH)NH2, -(CH2)p-R4, y -(CH2)q-Ar1, en las que p es un entero de 1 a 4; q es 0 ó 1; R4 es cicloalquilo C5-C7, y Ar1 se selecciona del grupo que consiste en:

Description

Amidas sustituidas, sulfonamidas y ureas útiles para inhibir la actividad de la cinasa.
Campo de la invención
La presente invención describe nuevos compuestos amida sustituidos, específicamente carboxamidas, sulfonamidas y compuestos de urea, que tienen unas propiedades inhibidoras de enzimas, particularmente para inhibir las proteínas tirosina cinasas.
Antecedentes de la invención
Los nuevos compuestos de la presente invención pueden tener un valor terapéutico general para el tratamiento de tales enfermedades como el cáncer, incluidos el cáncer de huesos, el cáncer de colon y el cáncer de mama; los trastornos de inmunodeficiencia y la diabetes; la aterosclerosis, la osteoporosis, la leucemia y otras enfermedades como la arteriopatía coronaria, la insuficiencia cardíaca congestiva, la insuficiencia renal y enfermedades del sistema nervioso central, en las que los compuestos ejercen un efecto beneficioso. Se ha encontrado que los compuestos de la invención inhiben la proteína tirosina cinasa Src, un miembro de la familia Src.
La familia Src consiste en nueve miembros -Src, Yes, Fgr, Yrk, Fyn, Lyn, Hck, Lck y Blk- que comparten la misma estructura de dominios. El dominio único del extremo amino contiene un sitio de miristilación y frecuentemente un sitio de palmitoilación. Está seguido de los dominios reguladores SH3 y SH2, un dominio catalítico que es bilobulado y tiene un sitio activo metido entre los dos lóbulos, y una cola reguladora en el extremo carboxilo que contiene el resto de tirosina regulador distintivo (Tyr527 en Src). La actividad de la cinasa se reduce cuando dicho resto está fosforilado y unido al dominio SH2. Los dominios SH2 y SH3 se unen a péptidos ricos en fosfortirosilos y prolina, respectivamente: por medio de estas interacciones, participan en la regulación intra- e intermolecular de la actividad de la cinasa, así como en la localización y en el reconocimiento del sustrato.
Existen abundantes pruebas de que la fosforilación de las tirosinas desempeña un papel crucial en muchos procesos reguladores de las células [Fahad Al-Obeidi et al., Biopolymers (Peptide Science) 47, 197-223 (1998)]. Los investigadores han encontrado que la alteración funcional de las cinasas da lugar a muchas enfermedades. Así, se ha hecho un gran esfuerzo dirigido a intentar desarrollar inhibidores potentes y selectivos para estas enzimas.
La proteína tirosina-cinasa Src desempeña un papel importante en la osteoporosis y otras osteopatías. La "osteoporosis" se define como una enfermedad ósea sistémica que se caracteriza por una disminución de la masa ósea y un deterioro microarquitectónico del tejido óseo, lo que da lugar a un aumento de la fragilidad ósea y de la propensión a las fracturas (W. A. Peck, et al. Am. J. Med. 94, 646, (1993) Informe de la conferencia). Se estima que la osteoporosis causa 1,5 millones de fracturas anualmente con un coste médico total de 13 800 millones de dólares (Nacional Osteoporosis Foundation, agosto 1997). Los sitios más típicos para tales fracturas son la cadera, la columna vertebral, la muñeca y las costillas. También se estima que una de cada dos mujeres y uno de cada ocho hombres tendrá una fractura relacionada con la osteoporosis en su vida. La osteoporosis se asocia más comúnmente con la posmenopausia y la pérdida de tejido óseo relacionada con la edad. Además, la osteoporosis se puede producir como consecuencia de la administración de diversos fármacos y enfermedades como los corticoesteroides, los anticonvulsivos, el alcohol, síndromes de hipoabsorción, cirrosis biliar primaria, mieloma, talasemia, hipertiroidismo, síndrome de Cushing, síndrome de Turner e hiperparatiroidismo primario. Los fármacos utilizados para el tratamiento de la osteoporosis generalmente se clasifican como antirresortivos o estimuladores de la formación. En el tejido óseo normal, hay un equilibrio entre la formación de hueso por los osteoblastos y la resorción del hueso por los osteoclastos. Cuando se altera el equilibrio de este procedimiento en marcha, la resorción del hueso puede exceder la formación del hueso, lo que da lugar a una osteopenia cuantitativa. La mayoría de los tratamientos han implicado los que actúan por medio de la inhibición de la resorción ósea, como complementos de calcio, estrógeno, calcitonina y vitamina D [L. Riggs, West. J. Med., 154, 63 (1991)].
Ejemplos de tratamientos que actúan por medio de la estimulación de la formación ósea son el fluoruro de sodio y la dosificación baja e intermitente de la hormona paratiroidea (M. Missbach et al. Rech. Chimie Med. julio, 1997, London).
Varios informes han descrito pruebas convincentes de que la proteína tirosina cinasa (PTK) p60c-Src (a veces denominada c-Src) desempeña un papel decisivo en la función osteoclásica (M. Missbach et al. ibid). Se describió que, in vitro, los inhibidores de la cinasa de c-Src pueden reducir la resorción ósea osteoclásica (Ibid). Los osteoclastos son células de la médula ósea responsables de la destrucción o de la remodelación ósea. Una vez que un osteoclasto entra en contacto con la superficie ósea, se adhiere estrechamente al hueso, se aplana y comienza el procedimiento de secretar sustancias que da lugar a la disolución del hueso. Esta acción fundamental de los osteoclastos depende de la cinasa Src. En este caso, queda claro que, al menos, una de las funciones de la cinasa Src es regular los cambios citoesqueléticos implicados en establecer el cercano interfaz entre célula y hueso, y en polarizar la secreción celular hacia la superficie ósea. Así, los animales modificados genéticamente para que carezcan de la cinasa Src muestran unas anomalías que indican una incapacidad general para reabsorber el hueso.
Además, los osteoclastos derivados de estos animales son incapaces de aplastarse contra el hueso ni tampoco pueden disolverlo. De manera concordante con estos resultados, se ha demostrado que pequeñas moléculas inhibidoras de la cinasa Src son útiles para antagonizar la osteopenia en modelos animales de osteoporosis, como la hipercalciemia inducida por la IL-1 y la osteopenia en las ratas ovariectomizadas. Los inhibidores de la cinasa Src servirían para tratar trastornos marcados por una resorción ósea inapropiada como la osteoporosis. La patente internacional WO 00/44018 describe 2-amino-6-anilinopurinas que inhiben la proteína tirosina cinasa pp60c-src y que se pueden usar para tratar la osteoporosis.
Compendio de la invención
La presente invención proporciona nuevas carboxamidas, sulfonamidas y ureas que presentan una actividad inhibidora contra la osteoporosis y la relacionada pérdida de tejido óseo. En una realización, esta invención proporciona nuevos compuestos de carboxamida que presentan una actividad inhibidora terapéuticamente deseable. Las carboxamidas de la invención tienen la estructura general mostrada en la fórmula I, incluidos los enantiómeros, los estereoisómeros y los tautómeros de la misma, o las sales farmacéuticamente aceptables o los solvatos de dicho compuesto, teniendo dicho compuesto la estructura general mostrada en la fórmula I:
Fórmula I
1
en la que:
m es un entero de 0 a 4;
n es un entero de 1 a 6;
R' es un alquilo C_{1}-C_{4};
R_{1} es:
2
R_{3} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{4} de cadena lineal y alquilo C_{1}-C_{4} ramificado;
R_{2} se selecciona del grupo que consiste en ; -(CH_{2})_{p}-R_{4}; y -(CH_{2})_{q}-Ar_{1}, donde p es un entero de 1 a 4; q es 0 ó 1; R_{4} es cicloalquilo C_{5}-C_{7}; y Ar_{1} se selecciona del grupo que consiste en:
3
donde R_{5} es -NH_{2} o fenilo.
En otra realización, esta invención proporciona nuevos compuestos sustituidos de urea y de sulfonamida que presentan una actividad inhibidora contra la osteoporosis y la pérdida de tejido óseo relacionada. Los compuestos de la invención tienen la estructura general mostrada en la fórmula II, incluidos los enantiómeros, los estereoisómeros y los tautómeros de la misma, así como sus sales farmacéuticamente aceptables o sus solvatos:
Fórmula II
4
donde R_{1} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal; alquilo C_{1}-C_{6} ramificado; -(CH_{2})_{p}
-Ar_{1}; y -(CH_{2})_{p}-R_{4}, donde p es 1 ó 2;
Ar_{1} es fenilo o naftilo opcionalmente sustituido con un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificado; y
R_{4} es cicloalquilo C_{5}-C_{7};
R_{2} se selecciona del grupo que consiste en:
5
6
7
R_{5} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal; alquilo C_{1-}C_{6} ramificado;
R_{3} es -(CH_{2})_{q}-Ar_{2} o -(CH=CH)-fenilo, en la que q es un entero de 0 a 4; y Ar_{2} se selecciona del grupo que consiste en:
8
X es:
9
Y se selecciona del grupo que consiste en:
10
con la condición de que cuando Y es uno cualquiera de los restos:
11
R_{1} es H.
Cuando se usan en la presente invención, a menos que se definan de otro modo, los términos siguientes tienen los significados dados:
"alquilo" (incluidas las porciones alquilo de los alcoxi inferiores) representa una cadena lineal o ramificada de hidrocarburo saturado que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6;
"arilo" representa un grupo carbocíclico que tiene de 6 a 14 átomos de carbono y que tiene, al menos, un anillo bencenoide, en el que todos los átomos de carbono aromáticos disponibles sustituibles del grupo carbocíclico se pretende que sean posibles puntos de anexión. Los grupos arilo preferidos incluyen 1-naftilo, 2-naftilo e indanilo, y particularmente fenilo y fenilo sustituido;
"aralquilo" representa un resto que contiene un grupo arilo unido a través de un alquilo inferior;
"alquilarilo" representa un resto que contiene un alquilo inferior unido a través de un grupo arilo;
"cicloalquilo" representa un anillo carbocíclico saturado que tiene de 3 a 8 átomos de carbono, preferiblemente 5 ó 6, opcionalmente sustituidos.
"heterocíclico" representa, además de los grupos heteroarilo definidos más abajo, grupos orgánicos cíclicos saturados e insaturados que tienen, al menos, un átomo de O, S y/o N que interrumpen una estructura de anillo carbocíclico que consiste en un anillo o dos anillos fusionados, donde cada anillo tiene 5, 6 ó 7 átomos y puede tener o no dobles enlaces que carecen de electrones pi deslocalizados, cuya estructura de anillo tiene de 2 a 8 átomos de carbono, preferiblemente de 3 a 6 átomos de carbono, p. ej., 2- o 3-piperidinilo, 2- o 3-piparazinilo, 2- o 3-morfolinilo o 2- o 3-tiomorfolinilo;
"halógeno" representa flúor, cloro, bromo y yodo;
"heteroarilo" representa un grupo orgánico cíclico que tiene, al menos, un átomo de O, S, y/o N que interrumpe una estructura de anillo carbocíclico y que tiene un número suficiente de electrones pi deslocalizados para proporcionar un carácter aromático, teniendo el grupo heterocíclico aromático de 2 a 14 átomos de carbono, preferiblemente de 4 ó 5 átomos de carbono, p. ej., 2-, 3- o 4-piridilo, 2- o 3-furilo, 2- o 3-tienilo, 2-, 4- o 5-tiazolilo, 2- o 4-imidazolilo, 2-, 4- o 5-pirimidinilo, 2-pirazinilo, o 3- o 4-piridazinilo, etc. Los grupos heteroarilo preferidos son 2-, 3- y 4-piridilo; tales grupos heteroarilo también pueden estar opcionalmente sustituidos.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" es una sal de adición de ácido orgánico o inorgánico no tóxica de los compuestos de base representados por las fórmulas I y II.
Incluidos dentro del alcance de la presente invención están los estereoisómeros, diastereómeros e isómeros geométricos individuales de fórmula I y II y los enantiómeros de las mismas. El término "esteroisómeros" es un término general para todos los isómeros de moléculas individuales que difieren sólo en la orientación de sus átomos en el espacio. Incluye isómeros geométricos (cis/trans) e isómeros de compuestos con más de un centro quiral que no son imágenes especulares de cualquier otro (diastereómeros). El término "enantiómero" o "enantiomérico" se refiere a una molécula que no se puede superponer sobre su imagen especular y, por lo tanto, es ópticamente activa, en la que el enantiómero rota el plano de la luz polarizada en una dirección y su imagen especular rota el plano de la luz polarizada en la dirección opuesta. El término "mezcla racémica" o "modificación racémica" se refiere a una mezcla de enantiómeros a partes iguales y que es ópticamente inactiva. Tal y como se usan dentro de la presente invención, los prefijos "(+)" y "(-)" se utilizan para designar el signo de rotación del plano de la luz polarizada por el compuesto, donde (+) significa que el compuesto es dextrógiro y (-) indica que el compuesto es levógiro. Para los aminoácidos, se pueden usar las designaciones L/D o R/S como se describe en IUPAC-IUB Joint Comisión on Biochemical Nomenclature, Eur. J. Biochem, 138, 9-37 (1984).
Otra característica de la invención se refiere a las composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo un compuesto de fórmula I (o su sal, solvato o isómeros) o de fórmula II (o su sal, solvato o isómeros) junto con un vehículo o excipiente aceptable.
La invención también proporciona métodos para administrar a un paciente que padece una o más de las enfermedades mencionadas anteriormente, una cantidad inhibidora terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o de fórmula II, o composiciones farmacéuticas que comprendan un compuesto de fórmula I o fórmula II.
Descripción detallada de la invención
En una realización, la presente invención proporciona nuevos compuestos de la fórmula I o fórmula II mostrados anteriormente, en los que los distintos símbolos son como se definieron. A continuación se enumeran por su nombre y estructura los compuestos amida representativos de la invención que exhiben una excelente actividad inhibidora de la cinasa Src y que pertenecen a la fórmula I.
\newpage
Nombres y fórmulas estructurales 1) N-[4-amidinobenzoil]-N-[3-fenoxibencil]-3-(4-bifenil)-alanil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
Alfa-[[4-(aminoiminometil) benzoil][(3-fenoxi-fenil)metil]amino]-n-(2-amino-2-oxoetil)-1,1'-bifenil-4-propanamida
Estructura: 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
12 
\vskip1.000000\baselineskip
2) N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi) bencil]-ciclohexilalanil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
3-(aminoiminometil)-n-[1-[[(2-amino-2-oxoetil)amino]carbonil]-2-ciclohexiletil]-n-[[3-[4-(1,1-dimetiletil)fenoxi]fenil]metil]benzamida
Estructura: 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
13 
\newpage
3) N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi) bencil]-4-aminofenilalanil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
4-amino-alfa-[[3-(aminoiminometil)benzoil][[3-[4-(1,1-dimetiletil)fenoxi]fenil]metil]amino]-n-(2-amino-2-oxoetil)bencenopropanamida
Estructura: 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
14 
\vskip1.000000\baselineskip
4) N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi)bencil]-1-nafttilalanil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
4-amino-alfa-[[3-aminoiminometil)benzoil][[3-[4-(1,1-dimetiletil)fenoxi]fenil]metil]amino]-n-(2-amino-2-oxoetil)-1-naftalenopropanamida
Estructura: 
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15 
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5) N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi) bencil]-arginil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
3-(aminoiminometil)-n-[4-[(aminoiminometil)amino]-1-[[(2-amino-2-oxoetil)amino]carbonil]butil]-n-[[3-[4-(1,1-dimetiletil)fenoxi]fenil]metil]benzamida
Estructura: 
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16 
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6) N-[amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi) bencil]-triptanil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
4-amino-alfa-[[4-(aminoiminometil)benzoil][[3-[4-(1,1-dimetiletil)fenoxi]fenil]metil]amino]-n-(2-amino-2-oxoetil)1h-indol-3-propanamida
Estructura: 
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17 
\newpage
7) N-[4-amidinobenzoil]-N-[4-bifenilmetil]-3-(4-bifenil)alanil-glicil-amida
Nombre de la IUPAC:
Alfa-[[4-(aminoiminometil)benzoil][[[1,1'-bifenil]-4-il]metil]amino]-n-(2-amino-2-oxoetil)-1,1'bifenil-4-propanamida
Estructura: 
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18 
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Los compuestos de urea representativos de la fórmula II de la invención que muestran una excelente actividad inhibidora de la cinasa Src se enumeran a continuación por sus nombre y estructura.
8) 4-ciclohexil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil]piperazina
Nombre de la IUPAC:
Alfa-[[[[4-(4-ciclohexil-1-piperazinil)-3-[(1-oxo-4-fenilbutil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]-2-naftalenopropanamida
Estructura: 
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19 
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9) 4-ciclohexil-1-[[2-cinamoilamino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil]piperazina
Nombre de la IUPAC:
Alfa-[[[[4-(4-ciclohexil-1-piperazinil)3-[(1-oxo-3-fenil-2-propenil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]-2-naftalenopropanamida
Estructura: 
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20 
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10) Nombre común: 4-ciclohexil-1-[[2-cinamoilamino]-4-[(1-aminocarbonil-3-fenil)propilamino]carbonilaminofenil]piperazina
Nombre de la IUPAC:
Alfa-[[[[4-(4-(ciclohexil-1-piperazinil)-3-[(1-oxo-3-fenil-2-propenil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]bencenobutanamida
Estructura: 
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21 
\newpage
11) 4-ciclohexil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[(1-aminocarbonil-3-fenil)propilamino]carbonilaminofenil]piperazina
Nombre de la IUPAC:
Alfa-[[[[4-(4-ciclohexil-1-piperazinil)-3-[(1-oxo-4-fenilbutil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]bencenobutanamida
Estructura: 
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22 
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12) 4-ciclohexil-1-[[2-cinamoilamino]-4-[(1-aminocarbonil-2-ciclohexiletilamino)carbonilaminofenil]piperazina
Nombre de la IUPAC:
2-[alfa-[[[[4-(4-ciclohexil-1-piperazinil)-3-[(1-oxo-3-fenil-2-propenil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]]-3-(ciclohexil)propanamida
Estructura: 
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\vskip1.000000\baselineskip
23 
\newpage
13) 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]-carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
2-[alfa-[[[[4-[hexahidro-4-(4-piperidinilcarbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il]-3-[(1-oxo-5-fenilpentil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]-3-[naft-2-il]propanamida
Estructura: 
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\vskip1.000000\baselineskip
24 
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14) 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(benzofuranoil)amino]-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
2-[alfa-[[[[4-[hexahidro-4-(4-piperidinilcarbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il]-3-[(1-oxo-1-benzofuran-2-il]amino]fenil]amino]carbonil]amino]]-3-(naft-2-il)-propanamida
Estructura: 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
25 
\newpage
15) 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(2-benzofuranoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-ciclohexiletilamino]carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
2-[alfa-[[[[4-[hexahidro-4-(4-piperidinilcarbonil)-1h-1,4-diacepin-1-il]-3-[(1-oxo-1-benzofuran-2-il)amino]fenil]amino]carbonil]amino]]-3-ciclohexil-propanamida
Estructura: 
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26 
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16) 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[2-[(2-benzofuranoil)amino]-4-[[(4-aminocarbonil)ciclohexilmetilamino]carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
4-[alfa-[4-[[[[[4-[hexahidro-4-(4-piperidinil-carbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il]-3-[(1-oxo-1-benzofuran-2-il)amino]fenil]amino] carbonil]amino]metil]]-ciclohex-1-il-formamida
Estructura: 
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\vskip1.000000\baselineskip
27 
\newpage
17) 4-(metilaminometil)carbonil-1-[2-[(2-benzo-furanoil)amino]-4-[[(4-aminocarbonil)ciclohexilmetilamino] carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
4-[alfa-[4[[[[[4-[hexahidro-4-(4-[[[metil]amino]metil]carbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il]-3-[(1-oxo-1-benzofuran-2-il)amino]fenil]amino]carbonil]amino]metil]]ciclohex-1-il-formamida
Estructura: 
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\vskip1.000000\baselineskip
28 
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18) 4-(pirrolidin-2-il)carbonil-1-[2-[(2-benzo-furanoil)amino]-4-[[(4-aminocarbonil)ciclohexil-metil-amino] carbonilamino] fenil] homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
4-[alfa-[[[[4-[hexahidro-4-(2-pirrolidinil-carbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il]-3-[(1-oxo-1-benzofuran-2-il)amino]fenil]amino] carbonil]amino]metil]]-ciclohex-1-il-formamida
Estructura: 
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29 
\newpage
19) 4-(piperidin-1-il)-1-[2-[(2-benzofuranoil)amino]-4-[[4-aminocarbonil)ciclohexilmetilamino]carbonilaminofenil]piperidina
Nombre de la IUPAC:
4-[alfa-[4-[[[[[4-[4-(piperidin-1-il)-1-piperidinil]-3-[(1-oxo-1-benzofuran-2-il)amino]fenil]amino]carbonil]amino]metil]]-ciclohex-1-il-formamida
Estructura: 
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30 
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20) 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-ciclohexiletilamino]carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
N-[5-[[[[1-(carboxi)-1-(ciclohexil-metil)]amino]-carbonil]amino]-2-[hexahidro-4-(4-piperidinil-carbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il-]fenil]benceno-butanamida
Estructura: 
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31 
\newpage
21) 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[(1-aminocarbonil-2-(naft-2-il))etilamino]-carbonilaminofenil]homopiperazina
Nombre de la IUPAC:
2-[alfa-[[[[4-[hexahidro-4-(4-piperidinilcarbonil)-1h-1,4-diazepin-1-il]-3-[(1-oxo-4-fenil-butil)amino]fenil]amino]carbonil]amino]]-3-(naft-2-il)-propanamida
Estructura:
100
Los compuestos de sulfonamida representativos de la invención que muestran una excelente actividad inhibidora de la cinasa Src de la fórmula II se enumeran a continuación por sus nombre y estructura.
22) N-(1-aminocarbonil-2-metilpropil)-2-[(4-fenilmetil)piperidin-1-il]-5-[(2-pirrolidinocarbonil)amino]fenilsulfonamida
Nombre la IUPAC:
Alfa-2-[[[[2-(4-bencil)-1-piperidinil]-5-[(pirrolidin-2-il)carbonilamino]fenil]sulfonil]amino]-3-metilbutanamida
Estructura:
32
23) N-(1-aminocarbonil-2-metilpropil)-2-[(4-fenilmetil)piperidin-1-il]-5-[(2-piperidino-carbonil)amino]fenilsulfonamida
Nombre de la IUPAC:
Alfa-2-[[[[2-(4-bencil)-1-piperidinil]-5-[(piperidin-4-il)carbonilamino]fenil]sulfonil]amino]-3-metilbutanamida
Estructura: 
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101 
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24) 1-[2-[N-(2-aminocarbonil-3-metilbutil)sulfonamido]-5-[2-cinamoilamino]]fenil-4-ciclohexilpiperazina
Nombre de la IUPAC:
Alfa-2-[[[2-(4-ciclohexil-1-piperazinil)-5-[(1-oxo-3-fenil-2-propenil)carbonilamino]fenil]sulfonil]amino]-3-metilbutanamida
Estructura: 
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102 
\newpage
25) N-[[(4-aminocarbonil)ciclohexilmetil]amino]-[2-[(4-fenilmetil)piperidin-1-il]-5-[(2-pirrolidino-carbonil)amino]fenil]sulfonamida
Nombre de la IUPAC:
4-[2-[[[[[2-[(4-bencil)-1-piperidinil]-5-[(pirrolidin-2-il)carbonilamino]fenil]sulfonil]amino]metil]]-ciclohex-1-il-formamida
Estructura:
103
Los compuestos de la invención pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos orgánicos e inorgánicos. Ejemplos de ácidos adecuados para esta formación de sales son ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido cítrico, ácido oxálico, ácido malónico, ácido salicílico, ácido málico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido benzoico, ácido hidroxibenzoico, ácido fenilacético, ácido cinámico, ácido salicílico, ácido 2-fenoxibenzoico, ácido p-toluenosulfónico y ácidos sulfónicos como el ácido metanosulfónico y el ácido 2-hidroxietanosulfónico y otros ácidos minerales y carboxílicos que conocen bien los expertos en la técnica y sales metálicas de ácidos como el monohidrogenoortofosfato de sodio y el hidrogenosulfato de potasio. Tales sales pueden existir en forma hidratada o sustancialmente anidra. Las sales se preparan haciendo entrar en contacto la forma de base libre con suficiente cantidad del ácido deseado para producir una sal de la manera convencional. Las formas de base libre se pueden regenerar haciendo tratar la sal con una disolución acuosa diluida adecuada de la base como un hidróxido de sodio, carbonato de potasio, y bicarbonato de sodio y amonio acuosos diluidos. Las formas de base libre difieren algo de sus correspondientes formas de sales en determinadas propiedades físicas, como la solubilidad en los disolventes polares, pero las sales son, por lo demás, equivalentes a sus correspondientes formas de base libre para propósitos de esta invención.
Según los sustituyentes en los compuestos de la invención, se puede ser capaz de formar sales también con bases. Así, por ejemplo, si hay sustituyentes de ácido carboxílico en la molécula (p. ej., el compuesto 21 en la lista mencionada anteriormente), se pueden formar sales con bases inorgánicas así como orgánicas como, por ejemplo, NaOH, KOH, NH_{4}OH, hidróxido de tetraalquilamonio y similares.
Como se mencionó anteriormente, la invención incluye también tautómeros, enantiómeros y otros estereoisómeros de los compuestos. Tales variaciones se encuentran dentro del alcance de la invención.
Otra realización de la invención describe un método para fabricar las carboxamidas, ureas y sulfonamidas sustituidas descritas anteriormente. Los compuestos se pueden preparar por varios procedimientos que se conocen en la técnica de la química orgánica sintética. Un método útil para preparar los compuestos de la fórmula I se ilustra con un esquema más abajo en conexión con el compuesto número 7 mencionado anteriormente. En general, este procedimiento se menciona como esquema A dentro de la presente invención e implica: a) unir un aminoácido a un soporte de polímero funcionalizado adecuado, b) acoplar otro aminoácido sustituido adecuadamente a éste, c) hacer reaccionar la estructura acoplada con un aldehído para formar una base Schiff que, luego, d) se reduce a la correspondiente amina que, a su vez, se convierte en una amida haciéndolo reaccionar, por ejemplo, con un ácido clorhídrico, cuyo producto se puede e) convertir a una tioamida que, a su vez, f) se metila y g) se convierte en el grupo amidino. Luego, el producto se retira del soporte de fase sólida, como se entenderá a partir de la siguiente exposición.
En el esquema A se ilustra específicamente el caso de la N-[4-aminobenzoil]-N-[bifenilmetil]-3-(bifenil)alanil-glicil-amida:
33
Esquema A
34
En el esquema A, todos los sustituyentes, a menos que se indique de otra manera, son como se han definido anteriormente. Los reactivos y las sustancias de partida están fácilmente disponibles para cualquier experto en la técnica o se pueden preparar mediante los métodos convencionales. La sustancia de partida (1) en el esquema A es una sustancia en fase sólida funcionalizada con aminos, que para los propósitos de síntesis se modificó con una molécula conectora (fórmula III), que permite escindir el producto de la síntesis del soporte sólido (resina). Un ejemplo de tal conector es el conector de Rink ácido (p-[R,S]-\alpha-(9H-fluoren-9-il)metoxiformamido]-2,4-dimetoxibencil]-fenoxiacético (Bernatowicz et al., Tetrahedron Lett. 30, 4645 (1989)). También se pueden utilizar resinas disponibles comercialmente con el conector deseado ya unido.
35
La conexión del conector de Rink a una fase sólida adecuada se lleva a cabo haciendo reaccionar un soporte sólido funcionalizado con aminos con un resto ácido de la molécula del conector mediante técnicas estándares de síntesis de péptidos que se conocen bien en la técnica para proporcionar un enlace amida, como se muestra en el ejemplo 1. Tal reacción se puede llevar a cabo utilizando procedimientos de acoplamiento estándares como, por ejemplo, los descritos en Stewart and Young, Solid phase peptide synthesis, 2ª ed., Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, Ed., The peptides: analysis, synthesis, biology, vol. 1, 2, 3, 5 y 9, Academic Press, Nueva York, 1980-1987; Bodanszky, Peptide Chemistry: a practical textbook, Springer-Verlag, Nueva York (1988); y Bodanszky et al. The practice of peptide synthesis, Springer Verlag, Nueva York (1984). Si se necesita un reactivo de acoplamiento (activador), se puede seleccionar un reactivo de acoplamiento adecuado de diciclohexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC), 1-etoxicarbonil-2-etoxi-1,2-dihidroquiolina (EEDQ), hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI), anhídrido n-propanofosfónico (PPA), cloruro de N,N-bis(2-oxo-3-oxazolidinil)amidofosforilo (BOP-CI), difenilfosforil-azida, (DPPA), reactivo de Castro (BOP), sales de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HBTU), dióxido de 2,5-difenil-2,3-dihidro-3-oxo-4-hidroxitiofeno (reactivo HOTDO de Steglich) y 1,1'carbonildiimidazol (CDI). El reactivo de acoplamiento se puede utilizar solo o en combinación con aditivos como 4-dimetilaminopiridina (DMPAP), N-hidroxibenzotriazol (HOBt), N-hidroxibenzotriazina (HOOBt), N-hidroxisuccinimida (HOSu) o 2-hidroxipiridina. Las reacciones de acoplamiento se pueden realizar en una disolución (fase líquida) o en fase sólida.
Como se usa en la presente invención, el término "soporte de fase sólida" no se limita a un tipo específico de soporte. Hay disponibles un gran número de soportes y cualquier experto en la técnica los conoce. Los soportes de fase sólida incluyen geles de sílice, resinas, películas de plástico modificadas, perlas de cristal, algodón, perlas de plástico, geles de alúmina, polisacáridos y similares. Se puede seleccionar un soporte de fase sólida adecuada en función del uso final deseado y la adecuación para varios protocolos sintéticos. Por ejemplo, para la síntesis de péptidos, el soporte de fase sólida puede hacer referencia a resinas como la resina de p-metilbenzhidrilamina (pMBHA) (de Peptides International, Louisville, Kentucky), poliestireno (p. ej., resina de PAM disponible de Bachem Inc. (Torance, CA, EEUU), co-dinivil-benceno con estireno injertado con poli(dimetilacrilamida) (p, ej., resina POLYHIPE®, disponible de Aminotech, Nepean, Ontario, Canadá), resina de poliamida (p. ej., resina de Spar, disponible de Advanced Chemtech, Louisville, KY, EEUU), resina de poliestireno insertada con polietilenglicol (disponible de TentaGel®, Rapp Polymere, Tubingen, Alemania), resina de polidimetilacrilamida (disponible de Milligen/Biosearch, Burlington, MA, EEUU) o Sepharose (disponible de Pharmacia Corporation, Estocolmo, Suecia).
El resto de aminoácido puede llevar grupos protectores anteriormente a la reacción de acoplamiento. Ejemplos de grupos protectores adecuados incluyen los siguientes: 1) del tipo acilo como formilo, trifluoracetilo, ftalilo y p-toluenosulfonilo; 2) del tipo carbamato aromático como benciloxicarbonilo (Cbz o Z) y benciloxi-carbonilos sustituidos, 1-(p-bifenil)-1-metiletoxi-carbonilo, y 9-fluorenilmetiloxi-carbonilo (Fmoc); 3) del tipo carbamato alifático como terc-butiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropil-metoxicarbonilo y aliloxicarbonilo; 4) del tipo carbamato de alquilo cíclico como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; 5) del tipo alquilo como trifenil-metilo y bencilo, 6) trialquilsilano como trimetil-silano; y 7) del tipo que contiene tiol como feniltio-carbonilo y ditiasucinoílo. El grupo protector preferido es Boc o Fmoc.
Si se necesitan proteger determinados grupos funcionales o cadenas laterales sobre el resto de aminoácido durante la reacción de acoplamiento para evitar la formación del enlace indeseado, los grupos protectores adecuados que se pueden utilizar para este propósito se enumeran en Greene, Protective groups in Organic chemistry, John Wiley & Sons, Nueva York (1981) y The peptides: analysis, synthesis, biology, vol. 3, Academic Press, Nueva York (1981). Los expertos en la técnica se darán cuenta del hecho de que la selección y el uso de grupos protectores apropiados dependen de la estructura global del compuesto aminoacídico y de la presencia de cualquier otro grupo protector en ese compuesto. La selección de tal grupo protector puede ser especialmente importante si no se debe retirar durante la desprotección del otro grupo protector.
Los aminoácidos adecuados para la reacción de acoplamiento se enumeran en la tabla 1 junto con el símbolo de cada aminoácido.
TABLA 1
Aminoácido Símbolo
Alanita Ala o A
Arginina Arg o R
Asparraginas Asn o N
Ácido aspártico Asp o D
Cisteína Cys o C
Glutamina Gln o Q
Ácido glutámico Glu o E
Glicina Gly o G
Histidina His o H
Isoleucina Ile o I
Leucina Leu o L
Lisina Lys o K
Metionina Met o M
Fenilalanina Phe o F
Prolina Pro o P
Serina Ser o S
Treonina Thr o T
Triptófano Trp o W
Tirosina Tyr o Y
Valina Val o V
Más específicamente, un soporte de fase sólida como, por ejemplo, una resina de RAM-PS desprotegida se trata típicamente con 3 equivalentes del resto de aminoácido y 3 equivalentes de 1-hidroxibenzotriazol en un disolvente orgánico adecuado, como una N,N-dimetilformamida. Luego, se añaden 3 equivalentes de diisopropilcarbodiimida y la mezcla se agita durante aproximadamente 30 minutos a cinco horas. La amida que se produce se puede aislar y purificar mediante técnicas bien conocidas o la sustancia bruta se puede someter a la desprotección tal
cual.
La amida producida en la etapa descrita anteriormente se desprotege en condiciones que no escinden el soporte de fase sólida del compuesto en crecimiento. Tales condiciones se conocen bien en la técnica. Así, cuando se utiliza el grupo protector Boc, los métodos de elección son ácido trifluoroacético tanto puro como en diclorometano, o HCl en dioxano o en acetato de etilo. Luego, la sal de amonio resultante se neutraliza previamente al acoplamiento o in situ con disoluciones básicas como tampones acuosos, o aminas terciarias en diclorometano o en dimetilformamida. Cuando se utiliza el grupo protector Fmoc, los reactivos de elección son piperidina o piperidina sustituida en dimetilformamida, pero se puede utilizar cualquier amina secundaria o disoluciones básicas acuosas. Por lo general, la desprotección se lleva a cabo a una temperatura entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente temperatura ambiente. Por ejemplo, la amida bruta descrita anteriormente se puede tratar con piperidina al 30% en N,N-dimetilformamida durante aproximadamente 20 minutos a aproximadamente una hora, tras lo cual, se filtra la mezcla de reacción para proporcionar el compuesto desprotegido.
Para el compuesto desprotegido en la fase sólida, un compuesto protegido con los aminos adecuadamente protegidos que tenga una función carboxílica libre (por ejemplo, bifenilalanina protegida por Fmoc en el esquema A) para formar el producto unido a la fase sólida. Por ejemplo, se pueden combinar 1 equivalente del compuesto desprotegido con 3 equivalentes de Fmoc-bifenilalanina y 3 equivalentes de 1-hidroxibenzotriazol y un activador adecuado (por ejemplo, 3 equivalentes de DIC) en un disolvente orgánico adecuado, como N,N-dimetilformamida. El compuesto formado unido a bifenilalanina se escinde del grupo Fmoc y, luego, se hace reaccionar con un aldehído adecuado, como, por ejemplo, 4-fenilbenzaldehído, para producir la correspondiente base de Schiff. Luego, la base de Schiff se reduce, por ejemplo, con borohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio y similares, para formar la correspondiente amina que, después, se convierte en amida al hacerla reaccionar con, por ejemplo, un cloruro ácido, en este caso, 4-cloruro de cianobenzoilo. La amida se puede convertir en la tioamida que se metila y, luego, se convierte en el grupo amidino. A continuación, el producto se escinde del soporte de fase sólida para producir el compuesto
7.
Los compuestos de la fórmula II donde X es una urea se pueden preparar como se describe en el esquema B:
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema B
36 
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El esquema B se puede explicar con la síntesis de un compuesto de fórmula II donde R_{1} es 2-naftilmetilo, R_{2} es ciclohexilpiperanizilo, R_{3} es 3-fenilpropilo, X es -NH-CO-, Y es COHN_{2} y n es 1. Ese compuesto es el compuesto 8 identificado más arriba: 4-ciclohexil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino)]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil]piperazina.
37
Así, se acopla un soporte de fase sólida con un aminoácido protegido, en este caso, Fmoc-2-naftilalanina en presencia de un activador como, por ejemplo, 1-hidroxibenzotriazol y DIC. Luego, se desprotege y se hace reaccionar con 4-fluoro-3-nitrofenilisocianato y, después, el producto fluorado se hace reaccionar con 4-ciclohexilpiperazina para introducir el grupo R_{2}. A continuación, el grupo nitro se reduce con cloruro de estaño a la amina, que se convierte en la 4-fenilbutil-amida al hacerla reaccionar con ácido 4-fenilbutírico mediante la activación con HOAt y DIC. La escisión del soporte sólido produce el compuesto 8 deseado. Los otros compuestos de urea se sintetizan de forma similar, por medio de la selección adecuada de los reactivos sustituidos en R_{1}, R_{2} y R_{3}.
La síntesis de un compuesto de la fórmula II donde X es sulfonamida es similar a la mostrada en el esquema B, salvo que en la etapa de introducción del fluoronitrofenil-isocianato se utiliza el cloruro de sulfonil-fluoronitrobenceno adecuado. Así, la sustitución del isocianato en la descripción anterior con cloruro de sulfonil-2-fluoro-5-nitrobenceno produciría el compuesto de sulfonamida deseado.
El aislamiento del compuesto en varias etapas del esquema de reacción se puede lograr tras la escisión del soporte sólido mediante técnicas estándares como, por ejemplo, filtración, evaporación del disolvente y similares. La purificación del producto, intermediario o similar también se puede realizar por técnicas estándares como retrocristalización, destilación, sublimación, cromatografía, conversión a un derivado adecuado que se puede retrocristalizar y convertir posteriormente al compuesto de partida, y similares. Estas técnicas las conocen bien los expertos en la técnica.
Se pueden analizar así la composición y la pureza de los compuestos preparados, así como caracterizarlos por téc-
nicas analíticas estándares como, por ejemplo, análisis elemental, RMN, espectroscopia de masas y espectros de IR.
En otra realización, esta invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención descritos anteriormente como un ingrediente activo. Generalmente, las composiciones farmacéuticas comprenden adicionalmente un diluyente de excipiente farmacéuticamente aceptable, un excipiente o un vehículo (que colectivamente se refieren en la presente invención como "sustancias excipientes"). Debido a su actividad terapéutica contra la osteoporosis y la pérdida de tejido óseo, tales composiciones farmacéuticas poseen utilidad en tratar esas enfermedades.
Aún en otra realización, la presente invención describe métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la fórmula I y la fórmula II como un ingrediente activo. En las composiciones farmacéuticas y los métodos de la presente invención, el ingrediente o los ingredientes activos generalmente se administrarán en una mezcla con sustancias excipientes adecuados que se seleccionan adecuadamente en relación con la forma pretendida de administración, a saber, comprimidos orales, cápsulas (tanto rellenadas con un sólido, un semisólido como con un líquido), polvos para constitución, geles orales, elixires, gránulos dispersables, jarabes, suspensiones y similares, y en consonancia con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para la administración oral en forma de comprimidos o cápsulas, el componente activo del fármaco se puede combinar con cualquier excipiente inerte no tóxico por vía oral farmacéuticamente aceptable, como lactosa, almidón, sacarosa, celulosa, estereato de magnesio, fosfato de dicalcio, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas) y similares. Además, cuando se desee o se necesite, a la mezcla también se le pueden incorporar los aglutinantes adecuados, lubricantes, agentes desintegradores y colorantes adecuados. Los polvos y los comprimidos pueden comprender de aproximadamente del 5 a aproximadamente el 95% de la composición de la invención. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas como acacia, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los lubricantes, se pueden mencionar para el uso en estas formas de dosificación, ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metilcelulosa, goma guar y similares.
También se pueden incluir cuando sea apropiado edulcorantes y aromatizantes y conservantes. Algunos de los términos mencionados anteriormente, a saber, desintegrantes, diluyentes, lubricantes, aglutinantes y similares se discuten en detalle más adelante.
Adicionalmente, las composiciones de la presente invención se pueden formular en la forma de liberación sostenida para proporcionar la liberación a ritmo controlado de uno cualquiera o varios de los componentes o ingredientes activos para optimizar los efectos terapéuticos, a saber, actividad antihistamínica y similares. Las formas farmacéuticas adecuadas para la liberación sostenida incluyen comprimidos de capas múltiples que contienen capas con diferentes velocidades de desintegración o matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas de los componentes activos y moldeados en forma de comprimido o de cápsulas que contienen tales matrices poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas.
Las preparaciones en forma líquida incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo, se pueden mencionar agua o disoluciones de agua-propilenglicol para inyecciones por vía parenteral o adiciones de edulcorantes y chupetes para disoluciones, suspensiones y emulsiones orales. Las preparaciones en forma líquida también pueden incluir disoluciones para administración intranasal.
Las preparaciones en aerosol adecuadas para la inhalación pueden incluir disoluciones y sólidos en forma de polvo, que pueden estar en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable como un gas inerte comprimido, p. ej., nitrógeno.
Para preparar supositorios, se derrite primero una cera de baja fusión como una mezcla de acil-gliceroles como mantequilla de cacao, y el ingrediente activo se dispersa de manera homogénea allí dentro mediante agitación o una mezcla similar de mezclar. Luego, la mezcla fundida homogénea se vierte en unos moldes del tamaño conveniente, se deja enfriar y, por lo tanto, solidificar.
También se incluyen preparaciones en forma sólida que se pretende que se conviertan, brevemente tras el uso, en preparaciones en forma líquida para la administración oral o parenteral. Tales formas líquidas incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones.
Los compuestos de la invención también se pueden administrar por vía transcutánea. Las composiciones transcutáneas toman la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y se pueden incluir en un parche transcutáneo de matriz o de tipo reservorio, como suele ser convencional en la técnica para este propósito.
Preferiblemente, el compuesto se administra oralmente.
Preferiblemente, la preparación farmacéutica es una forma farmacéutica unitaria. En esta forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias de tamaño adecuado que contienen cantidades adecuadas de los componentes activos, p. ej., una cantidad eficaz para lograr el propósito adecuado.
La cantidad de la composición activa de la invención en una dosis unitaria de preparación generalmente se puede variar o ajustar de aproximadamente 1,0 miligramo a aproximadamente 1000 miligramos, preferiblemente de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 950 miligramos, más preferiblemente de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 500 miligramos, y típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 250 miligramos, según el uso particular. La dosis real empleada puede variar según la edad del paciente, el sexo, el peso y la gravedad de la enfermedad a tratar. Estas técnicas las conocen bien los expertos en la técnica.
Generalmente, la forma farmacéutica oral humana que contiene los ingredientes activos se puede administrar 1 ó 2 veces al día. La cantidad y la frecuencia de la administración se regularán según el discernimiento del médico clínico encargado. Una pauta posológica de la dosis diaria generalmente recomendada para la administración oral puede ir de aproximadamente 1,0 miligramo a aproximadamente 1000 miligramos por día, en dosis simples o divididas.
El término "cápsula" se refiere a un contenedor especial o receptáculo hecho de metilcelulosa, alcoholes de polivinilo o gelatinas o almidón desnaturalizados para retener o contener composiciones que comprenden los ingredientes activos. Las cápsulas de cáscara dura normalmente están fabricadas de mezclas de gelatinas de piel de cerdo y hueso en gel de una resistencia relativamente elevada. La propia cápsula puede contener pequeñas cantidades de colorantes, medios de opacificación, plastificantes y conservantes.
El término "comprimido" se refiere a una forma farmacéutica sólida comprimida o moldeada que contiene los ingredientes activos con los diluyentes adecuados. El comprimido se puede preparar por compresión de mezclas o de granulaciones obtenidos por granulación húmeda, granulación seca o por compactación.
El término "gel oral" se refiere a los ingredientes activos dispersos o solubilizados en una matriz semisólida hidrofílica.
El término "polvos para constitución" se refiere a las mezclas de polvos que contienen los ingredientes activos y los diluyentes adecuados que se pueden suspender en agua o en zumos.
El término "diluyente" se refiere a las sustancias que normalmente forman la mayor proporción de la composición o de la forma farmacéutica. Se consideran diluyentes adecuados los azúcares como lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y patatas; y celulosas como la celulosa microcristalina. La cantidad del diluyente en la composición puede ir de aproximadamente 10 a aproximadamente el 90% en peso de la composición total, preferiblemente de aproximadamente 25 a aproximadamente el 75%, más preferiblemente de aproximadamente 30 a
aproximadamente el 60% en peso, incluso más preferiblemente de aproximadamente 12 a aproximadamente el 60%.
El término "desintegrante" se refiere a las sustancias añadidas a la composición para ayudarla a romperse en pedazos (desintegrarse) y liberar los medicamentos. Entre los desintegrantes adecuados se incluyen almidones; almidones modificados "solubles en agua fría" como almidón de carboximetil de sodio; gomas naturales y sintéticas como la judía del saltamontes, karaya, guar, tragacanto y agar; derivados de la celulosa como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio; celulosas microcristalinas y celulosas microcristalinas interconectadas como croscarmelosa de sodio; alginatos como ácido algínico y alginato de sodio; arcillas como las bentonitas; y mezclas efervescentes. La cantidad del desintegrante en la composición puede ir de aproximadamente 2 a aproximadamente el 15% en peso de la composición, más preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente el 10% en peso.
El término "aglutinante" se refiere a las sustancias que unen o "pegan" las partículas del polvo y los hacen cohesivos para formar gránulos, que así sirven como el "adhesivo" en la formulación. Los aglutinantes añaden una resistencia cohesiva a la ya disponible en el diluyente o en el formador de volumen. Los aglutinantes adecuados incluyen azúcares como la sacarosa; almidones derivados de trigo, arroz, maíz y patata; gomas naturales como acacia, gelatina o tragacanto; derivados de algas como ácido algínico, alginato de sodio y alginato de calcio y amonio; sustancias celulósicas como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio e hidroxipropilmetilcelulosa; polivinilpirrolidona; e inorgánicos como el silicato de aluminio de magnesio. La cantidad del aglutinante en la composición puede ir de aproximadamente 2 a aproximadamente el 20% en peso de la composición, más preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente el 10% en peso, incluso más preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente el 6% por peso.
El término "lubricante" se refiere a una sustancia añadida a la forma farmacéutica para permitir que el comprimido, los gránulos, etc., después de que se haya comprimido, se libere del molde o colorante mediante la reducción de la fricción o el desgaste. Los lubricantes adecuados incluyen los estereatos metálicos como estereato de magnesio, estereato de calcio o estereato de potasio; ácido esteárico; ceras de alto punto de fusión; y lubricantes solubles en agua como cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicoles y d'I-leucina. Normalmente, los lubricantes se añaden en la última etapa antes de la compresión, ya que deben estar presentes en la superficie de los gránulos y entre ellos y en las partes de la prensa del comprimido. La cantidad del lubricante en la composición puede ir de aproximadamente 0,2 a aproximadamente el 5% en peso de la composición, preferiblemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente el 2%, más preferiblemente de aproximadamente 0,3 a aproximadamente el 1,5% en peso.
El término "deslizante" se refiere a sustancias que previenen el aterronamiento y mejoran las características de flujo de las granulaciones, por lo que el flujo es suave e uniforme. La cantidad del deslizante en la composición puede variar de aproximadamente el 0,1% a aproximadamente el 5% en peso de la composición total, preferiblemente de aproximadamente el 0,5 a aproximadamente el 2% en peso.
El término "colorante" se refiere a los excipientes que proporcionan color a la composición o la forma farmacéutica. Estos excipientes pueden incluir colorantes aptos para el consumo y colorantes aptos para el consumo absorbidos en un absorbente adecuado como arcilla u óxido de aluminio. La cantidad del coloreante puede variar de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 5% en peso de la composición, preferiblemente de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 1%.
El término "biodisponibilidad" se refiere al ritmo y al grado en los que el ingrediente farmacéutico activo o del resto terapéutico se absorbe en la circulación sistémica a partir de una forma farmacéutica administrada en comparación con un estándar o control.
Se conocen métodos convencionales para preparar comprimidos. Estos métodos incluyen métodos secos como la compresión directa o la compresión de la granulación producida por compactación, o métodos húmedos u otros procedimientos especiales. También se conocen bien métodos convencionales para fabricar otras formas de administración como, por ejemplo, cápsulas, supositorios y similares.
Otra realización de la invención describe el uso de las composiciones farmacéuticas descritas anteriormente para el tratamiento de enfermedades como, por ejemplo, la osteoporosis y la osteopenia.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar adicionalmente la presente invención. Aparecen sólo con propósitos ilustrativos; así, el alcance de la invención no se considera limitado de ningún modo.
Ejemplos
A menos que se mencione otra cosa, las siguientes abreviaturas tienen los significados mencionados en los ejemplos de más abajo:
DCC = diciclohexilcarbodiimida
NaBH(OAc)_{3} = triacetoxiborohidruro de sodio
FMOC = 9-fluorenilmetiloxicarbonil
DCE = 1,2-dicloroetano
DIEA = diisopropiletilamina
Cha = ciclohexilalanina
NaI(1) = 1-naftilalanina
TEOF = trietilortoformiato
TIPS = triisopropisilano
NaI(1) = 1-naftialanina
Bip = 4-bifenilalanina
Boc = terc-butiloxicarbonilo
Pip = piperidina
HoAc = ácido acético
TFA = ácido trifluoroacético
Py = piridina
DIC = diisopropilcarbodiimida
MeOH = metanol
NaBH_{4} = borohidruro de sodio
NaBH_{3}CN = cianoborohidruro de sodio
p-TsOH = ácido p-toluenosulfónico
DMF = N,N-dimetilformamida
THF = tetrahidrofurano
DMSO = dimetilsulfóxido
DCM = diclorometano que también se puede mencionar como cloruro de metileno
LAH = hidruro de aluminio y litio
HOAt = 1-hidroxi-7-azabenzotriazola
HOBt = 1-hidroxibenzotriazol
HRMS = espectrometría de masas de gran resolución
HPLC = cromatografía líquida de gran resolución
RMN = resonancia magnética nuclear
LRMS = espectrometría de masas de baja resolución
nM = nanomolar
Adicionalmente, "kg" se refiere a kilogramos, "g" se refiere a gramos; "mg" se refiere a miligramos; "\mug" se refiere a microgramos; "m^{2}/g" se refiere a metros cuadrados por gramo y se utiliza como una medida del área de la superficie de la partícula; "mmol" se refiere a milimoles; "L" se refiere a litros; "mL" se refiere a mililitros; "\muL" se refiere a microlitros; "cm" se refiere a centímetros; "M" se refiere a molar, "mM" se refiere a milimolar; "\muM" se refiere a micromolar; "nM" se refiere a nanomolar; "N" se refiere a normal; "ppm" se refiere a partes por millón; "\delta" se refiere a partes por millón bajo el campo del tetrametilsilano, "ºC" se refiere a grados Celsius, "ºF" se refiere a grados Fahrenheit, "mm Hg" se refiere a milímetros de mercurio; "kPa" se refiere a kilipascales; "lpp" se refiere a libras por pulgadas cuadradas; "rpm" se refiere a revoluciones por minuto; "pe" se refiere a punto de ebullición; "pf" se refiere a punto de fusión; "des" se refiere a descomposición; "h" se refiere a horas; "min" se refiere a minutos; "s" se refiere a segundos; "R_{f}" se refiere a factor de retención; y "R_{t}" se refiere a tiempo de retención.
Los ejemplos 1-7 pertenecen a la síntesis de los compuestos de fórmula I.
Procedimientos generales de síntesis
Los sustancias de partida usadas en la síntesis se obtuvieron de vendedores de productos químicos como Aldrich, Sigma, Fluka, Nova Biochem y Advanced Chemtech. Durante la síntesis, la grupos funcionales de los derivados de aminoácidos utilizados se protegieron mediante grupos bloqueantes para prevenir las reacciones secundarias durante las etapas de acoplamiento. Ejemplos de grupos protectores adecuados y su uso se describen en The Peptides, citada más arriba, 1981 y en vol. 9, Udenfriend y Meienhofer (eds, 1987).
La síntesis general de péptidos en fase sólida se utilizó para producir los compuestos de la invención. Tales métodos se describen, por ejemplo, en Steward y Young, Solid Phase Peptide Síntesis (Freeman & Co., San Francisco, 1969).
A menos que se indique de otra manera, los péptidos se sintetizaron sobre RAM^{TM} Polystirene Resin (Rapp Polymere, Tübingen, Alemania). Como alternativa a esto, el conector sensible a los ácidos, el ácido p-[(R,S)-\alpha-[1-(9H-fluoren-9-il)metoxiformamido]-2,4-dimetoxibencil]fenoxiacético (Knorr Linker, Bernatowick et al., Tetr. Lett. 30 (1989) 4645), se puede acoplar a cualquier amino funcionalizado. El soporte sólido o los compuestos deseados se pueden sintetizar sobre una resina de poliestireno interconectada con divinilbenceno al 1% modificado con un conector sensible a ácidos (resina Rink) (Rink, Tetr. Lett. 28 (1987) 3787; Sieber, Tetr. Lett. 28 (1987) 2107). El acoplamiento se realizó utilizando N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC) en presencia de una cantidad equivalente de HOBt. Todos los acoplamientos se realizaron con N,N-dimetilformamida (DMF) a temperatura ambiente (TA). La finalización del acoplamiento se controló con el ensayo con ninhidrina. Se realizó un segundo acoplamiento (doble) donde el acoplamiento en el primer caso fue incompleto.
La desprotección del grupo Fmoc se realizó utilizando piperidina al 50% en DMF durante 2 + 15 min. La cantidad de FMOC liberado se determinó a partir de la absorbancia a 302 nm de la disolución tras la desprotección, el volumen de los lavados y el peso de la resina utilizada en la síntesis.
La resina del compuesto al final de la síntesis se lavó sucesivamente con DMF y DCM y luego, el péptido se escindió y se desprotegió mediante una mezcla TFA/TIPS (99/1) durante 2 horas, a menos que se especifique de otra manera. La resina se lavó con DCM y el lavado de DCM se combinó con el releasato de TFA. La disolución se evaporó, el producto se volvió a disolver en una mezcla de agua y acetonitrilo y se liofilizó.
El compuesto secado se sometió a purificación por HPLC utilizando un gradiente adecuado de TFA al 0,1% en agua y acetonitrilo (ACN). Tras recoger el pico que contenía el producto sintético pretendido, la disolución se liofilizó y el compuesto se sometió a un procedimiento de identificación, que incluyó espectrometría de masas (MS) y/o RMN con electroespray para confirmar que se había sintetizado el compuesto correcto.
Para el análisis por HPLC, se analizó una muestra del producto utilizando un sistema de HPLC de Beckman (que consiste en 126 Solvent Deliver System, 166 Programmable Detector Module 507e Autosampler, controlado por la Data Station con el software Gold Nouveau) y una columna de 4,6 x 250 nm de YMC ODS-AM a 230 nm y una velocidad de flujo de 1 ml/min.
Para la purificación del producto, una muestra del compuesto liofilizado bruto se disolvió en una mezcla de TFA acuoso al 0,1% que contenía ACN del 10% al 50%. Normalmente, la disolución del producto se filtró a través de una jeringuilla conectada a un filtro "ACRODISC" 13 CR PTFE de 0,45 \mum (Gelman Sciences; Ann Arbor MI). Un volumen apropiado de la disolución del compuesto filtrado se inyectó en una columna C18 semipreparativa (columna YMC ODS-A (20 x 250 nm), YMC, Inc., Wilmington, NC). La velocidad del flujo de un gradiente o mezcla isocrática de un tampón de TFA al 0,1% y ACN (de calidad para HPLC) como un eluyente se mantuvo utilizando un HPLC "SYSTEM GOLD" de Beckman (Beckman, System Gold, Programmable Solvent Module 126 y Programmable Detector Module 166 controlado por software "SYSTEM GOLD"). La elución del compuesto se controló mediante detección de UV a 230 nm. Tras identificar el pico correspondiente para el compuesto que se está sintetizando mediante MS, el compuesto se recogió, se liofilizó y se ensayó su actividad biológica. El MS se realizó utilizando un instrumento VG Platform (Fisons Instruments) en modo ES+. Para la RMN, normalmente las muestras se midieron en DMSO-d_{6} (Aldrich) mediante un instrumento Bruker Avance DPX 300.
Ejemplo 1 N-[4-amidinobenzoil]-N-[3-fenoxibencil]-3-(4-bifenil)-alanil-glicil-amida
38
Siguiendo de forma general el procedimiento descrito más arriba como esquema A, se lavó el poliestireno-RAM (0,74 mmol/g de sustitución, malla 100-200, Rapp Polymere, Tubingen, Alemania, 0,5 g) con DMF y el grupo protector Fmoc se escindió con una disolución al 50% de piperidina en DMF (dos veces 10 minutos, 5 ml cada una). Luego, la resina se lavó con DMF. El Fmoc-Gly-OH (3 eq) activado con DIC/HOBt (3 eq cada uno) en DMF (3 ml) se acopló a la resina durante una noche y la finalización se comprobó con un ensayo con ninhidrina. Tras la desprotección del grupo Fmoc, el intermediario unido a la resina se hizo reaccionar con Fmoc-4-bifenil-alanina (3 eq, en 3 ml de DMF) activada con DIC/HOBt (3 eq cada uno) durante una noche. El grupo de Fmoc se desprotegió como se describió anteriormente y la resina se lavó con DMF. Se lavó la resina con DCM, y se añadió una disolución de 3-fenoxibenzaldehído (7 eq) en 5 ml de TEOF/DCM (4:1) y la reacción se llevó a cabo durante 6 horas, se lavó la resina con DCM (3 veces) y se redujo la base de Schiff formada se redujo con 5 ml de una disolución de NaBH_{3}CN durante una noche. Esto se preparó mezclando 1 M de NaBH_{3}CN en THF (disponible comercialmente) con DCE/MeOH/AcOH (80:18:2) en una proporción de 1:4. Después, la resina reducida se lavó con MeOH, DMF, DIEA al 10% en DMF, DMF y DCE. La amina unida a la resina se hizo reaccionar con 5 eq de cloruro de 4-cianobenzoilo en 5 ml de DCE con 5 eq de DIEA durante una noche. Luego, la resina se lavó con DCE, DMF, con una mezcla de piridina/Et_{3}N (2:1) y se trató con 8 ml de una disolución saturada de H_{2}S en piridina/Et_{3}N (2:1). Tras 5 horas, se retiró la disolución y se repitió el procedimiento. Después de una noche en reposo, se lavó la resina con acetona. La tioamida resultante se convirtió en tioimidato al hacerla reaccionar con yoduro de metilo en acetona (4 ml de una disolución al 20%, durante una noche). La resina se lavó con acetona y MeOH, se añadió una disolución de 20 eq de acetato de amonio en metanol que contenía 20 eq de ácido acético y se mantuvo a 50ºC durante 3 horas. Luego, la resina se lavó con MeOH, DMF y DCM. El producto se escindió mediante TFA (TIPS al 1%). Se purificó el producto bruto mediante HPLC preparativa. Análisis de MS: calculado 625,3 (M), encontrado 626,2 (MH)^{+}.
Ejemplo 2 Preparación de 3-amidinobenzoil-(3-(4-terc-butilfenoxi)bencil)-ciclohexililalanil-glicil-amida
39
El compuesto del título se sintetizó utilizando Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Cha-OH, 3-(4-terc-butilfenoxi)benzaldehído y cloruro de 3-cianobenzoílo según los procedimientos descritos en el ejemplo 1. Análisis de MS: calculado 611,4 (M), encontrado 612,3 (MH)^{+}.
Ejemplo 3 N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi)bencil]-4-aminofenilalanil-glicil-amida 
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El compuesto del título se sintetizó utilizando Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phe(4-NH-Boc)-OH, 3-(4-terc-butilfenoxi)benzaldehído y cloruro de 3-cianobenzoílo según los procedimientos descritos en el ejemplo 1. Análisis de MS: calculado 620,3 (M), encontrado 621,3 (MH)^{+}.
Ejemplo 4 N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi)bencil]-1-naftilalanil-glicil-amida 
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El compuesto del título se sintetizó utilizando Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Na1(1)-OH, 3-(4-terc-butilfenoxi)benzaldehído y cloruro de 3-cianobenzoílo según los procedimientos descritos en el ejemplo 1. Análisis de MS: calculado 655,3 (M), encontrado 656,2 (MH)^{+}.
Ejemplo 5 N-[3-amidinobenzoil]-N-[3-(4-terc-butilfenoxi)bencil]-arginil-glicil-amida 
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El compuesto del título se sintetizó utilizando Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg(Boc)2-OH, 3-(4-terc-butilfenoxi)benzaldehído y cloruro de 3-cianobenzoílo según los procedimientos descritos en el ejemplo 1. Análisis de MS: calculado 614,3 (M), encontrado 615,2 (MH)^{+}.
Ejemplo 6 4-amidinobenzoil-(3-(4-terc-butilfenoxi)fenoxibencil)-triptanil-glicil-amida 
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El compuesto del título se sintetizó utilizando Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, 3-(4-terc-butilfenoxi)benzaldehído y cloruro de 4-cianobenzoílo según los procedimientos descritos en el ejemplo 1. Análisis de MS: calculado 644,3 (M), encontrado 645,2 (MH)^{+}.
Ejemplo 7 N-[4-amidinobenzoil]-N-[4-bifenilmetil]-3-(4-bifenil)alanil-glicil-amida
44
El compuesto del título se sintetizó utilizando Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Bip-OH, 4-fenilbenzaldehído y cloruro de 4-cianobenzoílo según los procedimientos descritos en el ejemplo 1. Análisis de MS: calculado 609,3 (M), encontrado 610,2 (MH)^{+}.
Los ejemplos 8-15 describen la síntesis de los compuestos de fórmula II en la que X es un resto de urea.
Ejemplo 8 4-ciclohexil-1-{[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil}piperazina
45
Siguiendo de forma general el procedimiento descrito anteriormente en conexión con el esquema B, se empapó la resina comercial Polystyrene-RAM (0,74 mmol/g) (Rapp Polymere, Tubingen, Alemania, 0,25 g) en diclorometano, se lavó con DMF y se trató durante 30 minutos con una mezcla de piperidina y DMF (1:1 v/v). La resina se lavó con DMF (5x), DCM (5x) y DMF (3 x) y, luego, se acopló con 0,5 mmol de Fmoc-(L)-2-naftilalanina, 1-hidroxibenzotriazol y diisopropil-carbodiimida en 3 ml de DMF durante una noche. La resina se lavó con DMF (5x) y, de nuevo, se trató con piperidina/DMF durante 30 minutos. Tras el lavado como se describió anteriormente, se llevó a cabo el acoplamiento con 0,5 mmol de 4-fluoro-3-nitrofenilisocianato en 2 ml de DMF durante una noche. La resina se lavó con DMF (5x) y se trató con 3 ml de una disolución de 0,5 molar de 1-ciclohexilpiperazina en DMF durante 3 horas a 60ºC. Después del lavado con DMF (10x), el grupo nitro se redujo agitando la resina con 4 ml de una disolución molar de cloruro de estaño dihidrato en DMF durante 24 horas. La resina se lavó con DMF (5x), MeOH (5x), DCM (5x), DMF que contenía 5% de diisopropiletilamina (1x) y DMF (3x). El acoplamiento final con 1 mmol de ácido 4-fenil-butírico, 1-hidroxi-7-azabenzotriazol y diisopropilcarbodiimida en 3 ml de DMF se realizó durante una noche. Tras un lavado exhaustivo de la resina con DMF, metanol y DCM y el posterior secado, se escindió con 3 ml de ácido trifluoroacético al 95%. La disolución de TFA se evaporó y el resto se combinó con los lavados de la resina con metanol. La evaporación produjo el compuesto del título bruto que se purificó mediante HPLC preparativa usando el gradiente estándar acetonitrilo/-agua + TFA al 0,1% y una columna Vydac C-18. La muestra pura tuvo un ión M+1 en 661,3 en el espectro de masas y fue homogénea en la HPLC con un tiempo de retención de 26,95 minutos.
Ejemplo 9 4-ciclohexil-1-{[2-cinamoilamino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil}piperazina 
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46 
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Éste se preparó mediante el método del ejemplo 8, utilizando ácido trans-cinámico en la etapa de final acoplamiento para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 645,3 y un tiempo de retención de 26,88 minutos.
Ejemplo 10 4-ciclohexil-1-{[2-cinamoilamino]-4-[(1-aminocarbonil-3-fenil)propilamino]carbonilaminofenil}piperazina 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 8, utilizando Fmoc-homofenilalanina en la etapa inicial del acoplamiento para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 609,3 y un tiempo de retención de 25,78 minutos.
Ejemplo 11 4-ciclohexil-1-{[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[(1-aminocarbonil-3-fenil)propilamino]carbonilaminofenil}piperazina 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 8, utilizando Fmoc-homofenilalanina en la etapa inicial del acoplamiento para obtener el compuesto del título con M+1 en 625,3 y un tiempo de retención de 26 minutos.
Ejemplo 12 4-ciclohexil-1-{[2-cinamoilamino]-4-[(1-aminocarbonil-2-ciclohexil)-etil-amino]carbonilaminofenil}piperazina 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 8, utilizando Fmoc-ciclohexilalanina en la etapa inicial del acoplamiento para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 601,3 y un tiempo de retención de 26,72 minutos.
Ejemplo 13 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-{[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil}homopiperazina
50
Siguiendo de forma general el procedimiento mostrado anteriormente en el esquema B, la resina comercial Polystyrene-RAM (0,74 mmol/g) (Rapp Polymere, Tubingen, Alemania, 0,25 g) se empapó en diclorometano, se lavó con DMF y se trató durante 30 minutos con una mezcla de piperidina y DMF (1:1 v/v). La resina se lavó con DMF (5x), DCM (5x) y DMF (3x) y, luego, se acopló con 0,5 mmol de Fmoc-(L)-2-naftilalanina, 1-hidroxibenzotriazol y diisopropilcarbodiimida en 3 ml de DMF durante una noche. La resina se lavó con DMF (5x) y, de nuevo, se trató con piperidina/DMF durante 30 minutos. Tras el lavado como se describió anteriormente, se llevó a cabo el acoplamiento con 0,5 mmol de 4-fluoro-3-nitrofenilisocianato en 2 ml de DMF durante una noche. La resina se lavó con DMF (5x) y se trató con 3 ml de una disolución 0,5 molar de homopiperazina en DMF durante 2 horas a 60ºC. La resina se lavó con DMF (10x) y se acopló con 0,5 mmol de ácido Boc-isonipecótico, HOBt y DIC en 2,5 ml de DMF durante una noche. La resina se lavó con DMF (10x) y se redujo con 4 ml de una disolución molar de cloruro de estaño dihidrato en DMF durante 24 horas. La resina se lavó con DMF (5x), MeOH (5x), DCM (5x), DMF que contenía el 5% de diisopropil-etilamina (1x) y DMF (3x). El acoplamiento final con 1 mmol de ácido fenilbutírico, 1-hidroxi-7-azabenxotriazol y diisopropilcarbodiimida en 3 ml de DMF se realizó durante una noche. Después de un lavado extensivo de la resina con DMF, metanol y DCM y un posterior secado, se escindió con 3 ml de ácido trifluoroacético al 95%. La disolución de TFA se evaporó y el residuo se combinó con los lavados de la resina con metanol. La evaporación produjo el compuesto bruto del título, que se purificó por HPLC preparativa utilizando el gradiente estándar acetonitrilo/-agua + TFA al 0,1% y una columna Vydac C-18. La muestra pura tuvo un ión M+1 en 704,3 en el espectro de masa y fue homogénea en la HPLC con un tiempo de retención de 24,12 minutos.
Ejemplo 14 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-{[2-(2-benzofuranoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-(2-naftil)etilamino]carbonilaminofenil}homopiperazina
51
Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando ácido 2-benzofuran-carboxílico en la etapa del acoplamiento final para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 702,1 y un tiempo de retención de 25,5 minutos.
Ejemplo 15 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-{[2-benzofuranoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-ciclohexiletilamino]carbonilaminofenil}homopiperazina 
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52 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando Fmoc-ciclohexialanina en la etapa inicial del acoplamiento y ácido 2-benzofurancarboxílico para la etapa de acilación final para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 658,3 y un tiempo de retención de 25,64 minutos.
Ejemplo 16 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[2-[2-benzofuranoil)amino]-4-[[(4-aminocarbonil)ciclohexilmetilamino]carbonilaminofenil]-homopiperazina 
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53 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando ácido Fmoc-trans-4-aminometilciclohexanocarboxílico en la etapa inicial del acoplamiento y ácido 2-benzofurancarboxílico para la acilación final para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 643,4 y un tiempo de retención de 21,84 minutos.
Ejemplo 17 4-(metilaminometil)carbonil-1-[2-[(2-benzofuranoil)amino]-4-[[(4-aminocarbonil)ciclohexilmetilamino]carbonilaminofenil]homopiperazina 
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54 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando ácido Fmoc-trans-4-aminometilciclohexanocarboxílico en la etapa inicial del acoplamiento y Bac-sarcosina para proteger la homopiperazina y el ácido 2-benzofurancarboxílico para la acilación final para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 603,3 y un tiempo de retención de 21,35 minutos.
Ejemplo 18 4-(pirrolidin-2-il)carbonil-1-[2-[(2-benzofuranoil)amino]-4-[[(4-aminocarbonil)ciclohexilmetilamino]carbonilamino]fenil]homopiperazina 
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55 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando ácido Fmoc-trans-4-aminometilciclohexanocarboxílico en la etapa inicial del acoplamiento, Boc-prolina para proteger la homopiperazina y el ácido 2-benzofurancarboxílico para la acilación final para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 629,3 y un tiempo de retención de 22,12 minutos.
Ejemplo 19 4-(piperidin-1-il)-1-[2-[(2-[benzofuranoil)amino]-4-[[(4-amino-carbonil)ciclohexilmetilamino]carbonilaminofenil]-piperidina 
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56 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando ácido Fmoc-trans-4-aminometilciclohexanocarboxílico en la etapa inicial del acoplamiento, 4-(1-piperidil)piperidina para desplazar el flúor y el ácido 2-benzofurancarboxílico para la acilación final para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 600,3 y un tiempo de retención de 22,5 minutos.
Ejemplo 20 4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[1-aminocarbonil-2-ciclohexiletilamino]carbonilaminofenil]homopiperazina 
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57 
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Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando Fmoc-L-ciclohexilalanina en la etapa inicial del acoplamiento y ácido Boc-isonipecótico para proteger la homopiperazina para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 659,4 y un tiempo de retención de 23,97 minutos.
Ejemplo 21 [4-(piperidin-4-il)carbonil-1-[[2-(4-fenilbutanoil)amino]-4-[(1-aminocarbonil-2-(naft-2-il))etilamino]-carbonilaminofenil]homopiperazina
58
Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 13, utilizando Fmoc-homofenilalanina en la etapa inicial del acoplamiento para obtener el compuesto del título con ión M+1 en 668,4 y un tiempo de retención de 22,88 minutos.
Los ejemplos 22 a 25 describen la síntesis de los compuestos de sulfonamida según los compuestos de la presente invención.
Ejemplo 22 N-(1-aminocarbonil-2-metilpropil)-2-[(4-fenilmetil)piperidin-1-il]-5-[(2-pirrolidinocarbonil)amino]fenilsulfonamida
59
Siguiendo de forma general los procedimientos descritos anteriormente, la resina comercial Polystyrene-RAM (0,74 mmol/g) (Rapp Polymere, Tubingen, Alemania, 0,25 g) se empapó en diclorometano, se lavó con DMF y se trató durante 30 minutos con una mezcla de piperidina y DMF (1:1 v/v). La resina se lavó con DMF (5x), DCM (5x) y DMF (3x) y, luego, se acopló con 0,5 mmol de Fmoc-(L)-valina, 1-hidroxibenzotriazol y diisopropilcarbodiimida en 3 ml de DMF durante una noche. La resina se lavó con DMF (5x) y, de nuevo, se trató con piperidina/DMF durante 30 minutos. Después del lavado con DMF (5x) y DCM (10x), se llevó a cabo el acoplamiento con 0,5 mmol de cloruro de 2-fluoro-5-nitrofenilsulfonilo en 2 ml de DCM y 1 mmol de lutidina durante una noche. La resina se lavó con DCM (5x) y DMF (5x) y se trató con 3 ml de una disolución 0,5 molar de 4-bencil-piperidina en DMF durante 24 horas a temperatura ambiente. Tras el lavado con DMF (10x), el grupo nitro se redujo agitando la resina con 4 ml de una disolución de 0,5 molar de cloruro de estaño en DMF/ácido acético 1:1 durante 72 horas. La resina se lavó con DMF (5x), MeOH (5x), DCM (5x), DMF que contenía el 5% de diisopropiletilamina (1x) y DMF (3x). El acoplamiento final con 1 mmol de ácido 2-pirrolidinacarboxílico, 1-hidroxi-7-azabenzotriazol y diisopropilcarbodiimida en 3 ml de DMF se realizó durante una noche. Después de lavar intensamente la resina con DMF, metanol y DCM, y el posterior secado, se escindió con 3 ml de ácido trifluoroacético al 95%. La disolución de TFA se evaporó y el resto se combinó con los lavados de la resina con metanol. La evaporación produjo el compuesto bruto del título, que se purificó mediante HPLC preparativa usando el gradiente estándar acetonitrilo/agua + TFA al 0,1% y una columna Vydac C-18. La muestra pura tuvo un ión M+1 en 542,3 en el espectro de masas y fue homogénea mediante HPLC con un tiempo de retención de 26,7 minutos.
Ejemplo 23 N-(1-aminocarbonil-2-metilpropil)-2-[(4-fenilmetil)piperidin-1-il]-5-[(4-piperidinocarbonil)amino]fenilsulfonamida
60
Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 22, utilizando ácido 4-piperidinacarboxílico en la etapa final del acoplamiento para obtener el compuesto del título con un ión M+1 en 556,3 en el espectro de masas y un tiempo de retención en la HPLC de 26,2 minutos.
Ejemplo 24 1-[2-[N-(2-aminocarbonil-3-metilbutil)sulfonamido]-5-[2-cinamoilamino]]fenil-4-ciclohexilpiperazina
61
Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 22, utilizando 1-ciclohexilpiperazina para el reemplazo del flúor y el ácido cinámico para la etapa final de acilación para obtener el compuesto del título con un ión M+1 en 568,3 en el espectro de masas y un tiempo de retención en la HPLC de 24,63 minutos.
Ejemplo 25 N-[[4-aminocarbonil)ciclohexilmetil]amino]-[2-[(4-fenilmetil)piperidin-1-il]-5-[(2-pirrolidonocarbonil)-amino]fenil]sulfonamida
62
Este compuesto se preparó mediante el método del ejemplo 22, utilizando el ácido trans-4-aminometilcilohexanocarboxílico protegido con Fmoc para la primera reacción de acoplamiento para obtener el compuesto del título con un ión M+1 en 582,3 en el espectro de masas y un tiempo de retención en la HPLC de 25,31 minutos.
Actividad de la proteína tirosina cinasa
La actividad de los compuestos 1 a 25 arriba mencionados se analizó en relación con la proteína tirosina cinasa Src mediante el método fluorimétrico descrito en Measurement of the protein tyrosine kinase activity of c-Src using time-resolved fluorometry of Europium chelates, de Braunwalder, A. F. et al., en Analytical Biochemistry 238, 159-164 (1996), utilizando las sustancias y los procedimientos adicionales especificados más abajo.
Método de análisis general para la cinasa Src Materiales
Costar 384 limpio, si tratar, placas de gran capacidad de unión.
Sigma poly (Glu, Tyr) 4:1, MW medio 35 000
Cinasa Src (p60^{C-Src})
ATP de Sigma (solución madre 1,5 mM H_{2}O).
Tampón MES: MES a 30 mM (pH 6,8)
MgCl_{2} a 10 mM
Tampón MBI: (MES + BSA a 0,4 mg/ml + IGEPAL al 0,003%)
Anticuerpo antifosfotirosina marcado con Eu de Wallac (CR04-100)
Disolución de recubrimiento:
Na_{2}CO_{3} (pH 9,6) a 22,5 mM
NaHCO_{3} a 27,5 mM
NaCl al 0,9%
Tampón de dilución del anticuerpo: (MES + BSA al 3%)
Disolución de lavado de DELFIA® (TTBS):
NaCl a 0,5 M
Tris (pH 7,4) a 20 mM
Tween 20 al 0,15%
Disolución de realce de DELFIA
Método
Las placas se recubrieron con poli (Glu, Tyr) a 0,1 mg/ml en una disolución de recubrimiento, a razón de 35 \mul/pocillo. Se dejó reposar durante una noche a temperatura ambiente. Luego, las capas se lavaron 3 veces con MES (100 \mul/lavado).
Condiciones de la reacción de la cinasa Procedimiento (enumerado por orden de adición)
100 \mul de ATP 200 mM
80 nl del compuesto de prueba a 5 mM en DMSO
10 \mul de una dilución 1:400 de Src en MBI
Condiciones finales de la reacción
Cinasa Src 1:8000
Compuesto de la colección (DMSO al 0,4%) a 20 \muM
ATP a 100 \muM
20 \mul de volumen para el análisis
15 minutos a temperatura ambiente
La reacción se detuvo mediante aspiración y, luego, se lavó 3 veces con MES (100 \mul/lavado). Se añadieron 20 \mul, del anticuerpo a 0,4 ng/\mul en el tampón de dilución del anticuerpo (final = 8 ng Ac/pocillo) y, luego, se incubaron durante 30 min a TA. La disolución del anticuerpo se retiró por aspiración y, después, se lavó 3 veces con una disolución de lavado 1X DELFIA. Se añadieron 20 \mul de la disolución de realce de DELFIA y se leyeron las placas en un lector de placas Victor de Wallac en modo de fluorescencia resuelta por tiempo, mediante una longitud de onda de excitación de 340 nm y la de emisión de 615 nm.
La actividad inhibidora de la cinasa Src de los compuestos, dada como IC50 (\muM) se enumera en la tabla 2.
TABLA 2
N.^{o} del compuesto Actividad (\muMol, análisis Delfia. IC50)
Ejemplo 1 22
Ejemplo 2 23
Ejemplo 3 45
Ejemplo 4 18
Ejemplo 5 12,5
Ejemplo 6 14
Ejemplo 7 13
Ejemplo 8 8,5
Ejemplo 9 17
Ejemplo 10 15,5
Ejemplo 11 11
Ejemplo 12 18,5
Ejemplo 13 13
Ejemplo 14 2,75
Ejemplo 15 6,5
Ejemplo 16 36
Ejemplo 17 37
TABLA 2 (continuación)
N.^{o} del compuesto Actividad (\muMol, análisis Delfia. IC50)
Ejemplo 18 19
Ejemplo 19 22
Ejemplo 20 28
Ejemplo 21 22
Ejemplo 22 14
Ejemplo 23 12
Ejemplo 24 42
Ejemplo 25 27,5
A partir de los resultados de la prueba y del conocimiento sobre los compuestos descritos en las referencias de la sección "Antecedentes de la invención", al experto en la técnica le resultará evidente que los compuestos de la invención tienen utilidad en las condiciones de tratamiento en las que se desea la actividad inhibidora selectiva de una cinasa Src.

Claims (32)

1. Un compuesto, incluidos los enantiómeros, estereoisómeros y tautómeros del mismo, así como las sales farmacéuticamente aceptables o los solvatos de dicho compuesto, en el que dicho compuesto tiene la estructura general mostrada en la fórmula I:
Fórmula I
63
en la que:
m es un entero de 0 a 4;
n es un entero de 1 a 6;
R' es alquilo C_{1}-C_{4};
R_{1} es:
64
R_{3} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{4} de cadena lineal y alquilo C_{1}-C_{4} ramificado;
R_{2} se selecciona del grupo que consiste en -(CH_{2})_{p}-NH-C(=NH)NH_{2}, -(CH_{2})_{p}-R_{4}, y -(CH_{2})_{q}-Ar_{1}, en las que p es un entero de 1 a 4; q es 0 ó 1; R_{4} es cicloalquilo C_{5}-C_{7}, y Ar_{1} se selecciona del grupo que consiste en:
65
en la que R_{5} es -NH_{2} o fenilo.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 0 y n es 1.
3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es
66
en la que R_{3} es tal y como se define en la reivindicación 1.
4. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{1} es:
67
en la que R_{3} es tal y como se define en la reivindicación 1.
5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es -(CH_{2})_{p}-NHC(=NH)NH_{2}, en la que p es tal y como se define en la reivindicación 1.
6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es -(CH_{2})_{p}-R_{4}, en la que p y R_{4} son tal y como se definen en la reivindicación 1.
7. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es -(CH_{2})_{q}-Ar_{1}, en la que Ar_{1} es:
68
en la que R_{5} y q son tal y como se definen en la reivindicación 1.
8. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es -(CH_{2})_{q}-Ar_{1}, en la que Ar_{1} es:
69
en la que q es tal y como se define en la reivindicación 1.
9. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} es -(CH_{2})_{q}-Ar_{1}, en la que Ar_{1} es:
70
10. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el resto:
71
está unido al anillo aromático en meta respecto al carbonilo de dicho anillo.
11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el resto:
72
está unido al anillo aromático en para respecto al carbonilo de dicho anillo.
12. Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo un compuesto de la reivindicación 1.
13. Un compuesto, incluidos enantiómeros, estereoisómeros y tautómeros del mismo, así como las sales farmacéuticamente aceptables o los solvatos de dicho compuesto, en el que dicho compuesto tiene la estructura general mostrada en la fórmula II:
Fórmula II
73
en la que R_{1} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal; alquilo C_{1}-C_{6} ramificado; -(CH_{2})_{p}-Ar_{1}; y -(CH_{2})_{p}-R_{4}, en las que p es 1 ó 2;
Ar_{1} es fenilo o naftilo opcionalmente sustituido con un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificado; y
R_{4} es cicloalquilo C_{5}-C_{7};
R_{2} se selecciona del grupo que consiste en:
74
75
76
R_{5} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal; alquilo C_{1}-C_{6} ramificado;
R_{3} es -(CH_{2})_{q}-Ar_{2} o -(CH=CH)-fenilo, en la que q es un entero de 0 a 4; y Ar_{2} se selecciona del grupo que consiste en:
77
X es:
78
Y se selecciona del grupo que consiste en:
79
con la condición de que cuando Y es uno cualquiera de los restos:
80
entonces R_{1} es H.
14. El compuesto de la reivindicación 13, en el que X es:
\vskip1.000000\baselineskip
81 
\vskip1.000000\baselineskip
15. El compuesto de la reivindicación 13, en el que X es:
--- 
\melm{\delm{\dpara}{O}}{S}{\uelm{\dpara}{O}}
---
16. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{1} es H.
17. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{1} es un alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o un alquilo C_{1}-C_{6} ramificado.
18. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{1} es -(CH_{2})_{p}-Ar_{1}, en el que p y Ar_{1} son como se definen en la reivindicación 13.
19. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{1} es -(CH_{2})_{p}-R_{4}, en la que p y R_{4} son como se definen en la reivindicación 13.
20. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{2} es:
82
21. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{2} es:
83
22. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{2} es:
84
en la que R_{5} es como se define en la reivindicación 13.
23. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{2} es:
85
24. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{2} es:
86
25. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{2} es:
87
26. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{3} es -(CH_{2})_{q}-Ar_{2}, en la que q y Ar_{2} son como se ha definido.
27. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{3} es -(CH=CH)-fenilo.
28. El compuesto de la reivindicación 13, en el que Y es:
88
29. El compuesto de la reivindicación 13, en el que Y es:
89
30. El compuesto de la reivindicación 13, en el que Y es:
90
31. El compuesto de la reivindicación 13, en el que R_{1} es isopropilo o isobutilo.
32. Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo un compuesto de la reivindicación 13.
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