ES2248273T3 - Procedimiento para reducir la cantidad de enzimas. - Google Patents

Procedimiento para reducir la cantidad de enzimas.

Info

Publication number
ES2248273T3
ES2248273T3 ES01901673T ES01901673T ES2248273T3 ES 2248273 T3 ES2248273 T3 ES 2248273T3 ES 01901673 T ES01901673 T ES 01901673T ES 01901673 T ES01901673 T ES 01901673T ES 2248273 T3 ES2248273 T3 ES 2248273T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
xylanase
animal feed
enzyme
food
enz
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES01901673T
Other languages
English (en)
Inventor
Eddy Van Beek
Ingrid Sommers
Eric Peys
Benedikt Sas
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kemin Industries Inc
Original Assignee
Kemin Industries Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kemin Industries Inc filed Critical Kemin Industries Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2248273T3 publication Critical patent/ES2248273T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/189—Enzymes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Procedimiento para mejorar la degradación mediante una enzima exógena de la fibra detergente neutro en un alimento para animales, que comprende la etapa de añadir a un alimento para animales que contiene una enzima exógena un surfactivo seleccionado del grupo que consiste en lisolecitinas.

Description

Procedimiento para reducir la cantidad de enzimas.
1. Campo de la invención
La invención se refiere en general a un procedimiento para reducir la cantidad de enzimas necesaria cuando se utiliza en alimentos para animales e ingredientes de alimentos para animales y, más concretamente, al uso de lecitina o lisolecitina y, opcionalmente, una proteasa, mejorar la actividad de las enzimas añadidas para mejorar las propiedades de los alimentos para animales o ingredientes de alimentos para animales.
2. Antecedentes de la técnica anterior
En la solicitud de patente europea EP0743017A2, titulada "Application of phospholipases in animal feed", se describe un proceso para mejorar la eficacia en la utilización de alimentos y/o para estimular el crecimiento de los animales alimentados con una dieta que comprende una composición de una sustancia alimenticia y un aditivo fosfolipasa ya listo para su uso. El fosfolípido preferido es lecitina y la fosfolipasa preferida es fosfolipasa de mamíferos A2.
La Patente Europea EP0619079B1, titulada "Feed additives for ruminants", describe un aditivo alimenticio para rumiantes en el que unas substancias biológicamente activas se recubren con una composición que es estable en el rumen y permite la liberación de la sustancia biológicamente activa en los órganos digestivos del post-abomasum. En las substancias biológicamente activas se encuentran incluidas la lipasa, la fosfolipasa, la esterasa, etc.
La patente americana 5.759.537 describe un alimento para animales que contiene una pequeña cantidad de un lisofosfolípido que tiene propiedades de estimulación del crecimiento cuando se da a los animales.
El número de acceso 1999-00-s0627 de la base de datos de la FSTA (Sabbioini y otros, 1998) titulado "The effects of lysolecitinas-lipase in veal calf production" describe el uso de lisolecitinas y lipasa en la producción de lechales. El estudio de Sabbioini y otros (1998) no mostraba una mejora en el rendimiento cárnico en comparación con unos terneros de control.
WO96/36244 muestra una asociación de una fosfolipasa con lecitina en una composición de alimentos para animales.
El uso de enzimas en formulaciones de alimentos para animales, en particular para aves, es una práctica bien aceptada en la industria actual de producción animal altamente especializada. Se han utilizado enzimas para mejorar el valor nutritivo de formulaciones de alimentos que tienen elevados niveles de cereales de grano pequeño como el trigo y la cebada, además de ingredientes con alto contenido en fibra, tales como girasol, semilla de colza, guisantes y frijoles.
Existen también indicios de que combinaciones de múltiples enzimas tienen una eficacia mayor que enzimas individuales. Dados los numerosos procesos bioquímicos implicados en la capacidad del animal para digerir los nutrientes, puede esperarse que un sistema de enzimas múltiples juegue un papel más global en la digestión. La variación en el volumen global y la biodisponibilidad de los hidratos de carbono, las grasas, las proteínas, y los aminoácidos en estos substratos ha llevado a la formulación de varias enzimas diseñadas para liberar nutrientes de otro modo no disponibles.
Desafortunadamente, muchas enzimas resulta costoso. Podría obtenerse un ahorro sustancial si se desarrollara un procedimiento que aumentase la actividad o la eficacia de las enzimas exógenas añadidas a alimentos para animales de manera que se pudiera mantener el nivel deseado de eficacia mientras se reduce el nivel de inclusión de la enzima. La presente invención añade un biosurfactivo, en particular lecitina y/o lisolecitina, a formulaciones de alimento para animales para estimular el efecto de enzimas exógenas y así reducir el nivel de dichas enzimas que deben añadirse al alimento mientras se mantiene la eficacia de las enzimas en un mejor rendimiento del animal o en mantener el rendimiento del animal mientas se aumenta la cantidad de ingredientes menos costosos del alimento que contienen factores anti-nutritivos.
Descripción de la invención
La invención consiste en el uso de enzimas, tales como \alpha-galactosidasa, \beta-glucanasa, celulasa y xilanasa, y combinaciones de dichas enzimas en forma líquida o en seco, en combinación con lisolecitina y, opcionalmente, una proteasa, para mejorar la actividad de las enzimas o combinación de enzimas en la ruptura de la fibra detergente neutro en alimentos para animales o ingredientes de alimentos para animales para aumentar los nutrientes disponibles para el animal existentes en los alimentos para animales o ingredientes de alimentos para animales.
Sorprendentemente, si se utilizan surfactivos de tipo lisofosfolípido/fosfolípido puede realizarse una reducción de hasta un 50% de los enzimas utilizados en el alimento sin una degradación en el efecto deseado de los enzimas. La adición de la proteasa aumenta más la mayor actividad de los enzimas.
Descripción detallada de una realización preferida
La actividad de los enzimas se expresa en unidades de actividad enzimática. Procedimientos de ejemplo para la determinación de la actividad enzimática de la \alpha-amilasa, \beta-glucanasa, celulasa, proteasa y xilanasa son como sigue:
Alfa-amilasa- definición de unidades: cantidad de enzima que cataliza la hidrólisis de 1 micromol de enlaces glucosídicos por minuto a 37ºC. Se hace reaccionar la enzima con un substrato que consiste en un polímero de almidón azulado insoluble degradado que ha sido mezclado con seroalbúmina bovina y búfer y después formado en pastillas. El almidón es hidrolizado por la enzima, proporcionando fragmentos azules solubles que son cuantificados a través de la medición de la absorbencia a 620 nm.
Proteasa- definición de unidades: cantidad de enzima que solubiliza 1 microgramo de azocaseína por minuto. Se hace reaccionar la enzima con un substrato que consiste en una caseína azoica coloreada. La caseína azoica es hidrolizada por la enzima, liberando fragmentos de colorante en la solución que pueden ser cuantificados a través de la medición de la absorbencia a 440 nm.
Xilanasa- definición de unidades: cantidad de enzima que libera 1 micromol de equivalentes de xilosa por minuto. Se hace reaccionar la enzima con un beta glucano de cebada de viscosidad media, liberando azúcares reductores que se miden utilizando el método Somogyi-Nelson a 540 nm.
Celulasa- definición de unidades: cantidad de enzima que libera 1 micromol de equivalentes de glucosa por minuto. Se hace reaccionar la enzima con carboximetilcelulosa de viscosidad media, liberando azúcares reductores que se miden utilizando el método Somogyi-Nelson a 540 nm.
En los experimentos se utilizó una serie de formulaciones. Las formulaciones tienen las actividades enzimáticas tal como se describen a continuación:
ENZ-Maíz: 500 unidades/g xilanasa; 3300 unidades/g beta-glucanasa; 3800 unidades/g celulasa; 850 unidades/g alfa-amilasa; 20000 unidades/g proteasa; y 50 mili-unidades/g lipasa.
ENZ-Trigo: 50000 unidades/g xilanasa; 3600 unidades/g beta-glucanasa; 11000 unidades/g celulasa; 850 unidades/g alfa-amilasa; 10000 unidades/g proteasa; y 50 mili-unidades/g lipasa.
ENZ-Xilanasa: 60000 unidades/g xilanasa; 3500 unidades/g beta-glucanasa; 10000 unidades/g celulasa; 600 unidades/g alfa-amilasa; 2700 unidades/g proteasa; y 100 mili-unidades/g lipasa.
ENZ-Cebada: 100 unidades/g xilanasa; 6500 unidades/g beta-glucanasa; 7600 unidades/g celulasa; 1700 unidades/g alfa-amilasa; 1300 unidades/g proteasa; y 100 mili-unidades/g lipasa.
Los surfactivos utilizados son lecitina y/o lisolecitina. En particular, se utilizaron dos fuentes de lecitina y/o lisolecitina. Lysoprin es el nombre de un producto que vende comercialmente Lovesgrove Research Ltd. UK. Lysoprin es una lecitina cruda que, por medio de un tratamiento phospholipae A2, se enriquece enzimáticamente en lisofosfatidilcolina (LPC). Bolec MT es el nombre de un producto que vende comercialmente Unimills, B. V., Países Bajos. Es muy similar al Lysoprin excepto en que el Bolec MT tiene una hidrólisis de ácido fosfatídico y fosfatidiletanolamina en sus liso-formas y una concentración ligeramente mayor de fosfatidilinositol y fosfatidilcolina tal como se determina por comparación de los patrones de separación HPLC de los dos productos. Se determinó que el Lysoprin y el Bolec MT tenían aproximadamente un 33% de lisofosfolípidos al analizarlos utilizando el método descrito en Sas, B., Peys, E. y Helsen, M. 1999. Un método eficaz para la separación de clases de (liso)fosfolípidos por cromatografía líquida de alto rendimiento utilizando un detector evaporativo de luz dispersa. J. Chromatography A. 864:1:179-182.
Para determinar el efecto sobre la actividad enzimática de los sistemas surfactivo y surfactivo/proteasa de la presente invención, se realizaron pruebas tanto in vitro como in vivo.
Ensayos in vitro
Los ensayos con animales son laboriosos y llevan tiempo. Con el fin de predecir los resultados en ensayos con animales se desarrolla un procedimiento de ensayo in vitro que mide el efecto de las enzimas y las enzimas combinadas con los surfactivos y la proteasa de la presente invención sobre la fibra detergente neutro (NDF) del alimento para animales o del ingrediente del alimento para animales. El procedimiento se basa en el uso del alimento para animales que se propone para su uso en el ensayo con animales. Para tener un procedimiento estándar, se utiliza la fracción de NDF a partir del substrato alimenticio complejo. La degradabilidad de la NDF se mide en presencia de productos enzimáticos y combinaciones de enzimas con varias combinaciones y niveles de los sistemas surfactivo y surfactivo/proteasa para buscar un aumento en la actividad enzimática. El objetivo es modificar los sistemas surfactivo y surfactivo/proteasa de tal manera que el mejor resultado se obtenga en la degradabilidad de la fracción de NDF.
Tal como se utiliza en esta solicitud, la terminología NDF se emplea según las determinaciones de fibra Van Soest.
Protocolo
Para determinar la NDF de los alimentos y medir el efecto de las enzimas sobre esta parte extraída se siguieron dos procedimientos los cuales se exponen a continuación, a saber, la determinación de la NDF en alimentos y materias primas para alimentos, y la medición del efecto de enzimas sobre la NDF en alimentos y materias primas para alimentos.
Determinación de la NDF en alimentos y materias primas para alimentos
En el siguiente procedimiento de determinación de la NDF en alimentos y materias primas para alimentos se utilizó un búfer fosfato y un reactivo detergente neutro (ND). Para preparar el búfer fosfato, se disuelven 11,876 g de Na_{2}HPO_{4} en 1 litro de agua destilada (solución A) y se disuelven 9,078 g de KH_{2}PO_{4} en 1 litro de agua destilada (solución B). Se combinan 600 ml de solución A y 400 ml de solución B y se diluyen 10 litros con agua destilada. El pH de la solución se comprueba y se regula a 7,0 (\pm0,1) con NaOH o HCl si es necesario. Antes del uso, el búfer fosfato se calienta a 40ºC. El reactivo ND se prepara disolviendo o separado en agua destilada 186,1 g de Na_{2}EDTA\cdot2H_{2}O (o 146,1 g de EDTA (ácido libre) y 40,0 g de NaOH); 270,0 g de laurilsulfato sódico; 68,1 g de Na_{2}B_{4}O_{7}\cdot10H_{2}O; y 57,2 g de Na_{2}HPO_{4}\cdot2H_{2}O. Se combinan las cuatro soluciones preparadas y se añade 100,0 ml de 2-etoxi etanol. El pH de la solución se comprueba y se regula a 7,0 (\pm0,1) con NaOH o HCl si es necesario. El volumen final se regula a 10 litros con agua destilada.
Se prepara una muestra de alimento por triturado hasta que pasa a través de un tamiz de 1 mm. Se pesa una muestra de un 1g y se coloca en un crisol de filtración. Si la muestra de alimento contiene una cantidad importante de grasa, se lava tres veces con acetona utilizando un matraz Buchner y después se seca durante por lo menos 16 horas a temperatura ambiente o durante 30 minutos a 50ºC. El crisol se coloca en una máquina Dosifibre-Tecator (Foss) y se añade 100 ml del reactivo ND calentado a 90ºC. El elemento calefactor de la máquina Dosifibre-Tecator se activa, y se pone en marcha el temporizador cuando la solución está hirviendo en tres de las seis cámaras. Cuando el reactivo comienza a hervir, se añade 0,25 ml de Thermamyl 120L (NovoNordisk). El reactivo se mantiene en ebullición durante una hora. Si la formación de espuma es un problema, se añade una pequeña cantidad de 2-octanol. Después de que haya pasado una hora, el reactivo se bombea y el residuo se lava en agua caliente por lo menos cinco veces.
Se añade treinta ml del búfer fosfato (40ºC) al residuo junto con 1 ml de Thermamyl 120L y 0,25 ml de Alcalase (NovoNordisk). Se añaden otros 30 ml de búfer fosfato para asegurar un mezclado adecuado. La solución se incuba a 40ºC durante 15 minutos mientras se burbujea aire a través de la muestra aproximadamente cada tres minutos. Después se extrae el búfer y el residuo se lava tres veces con agua destilada y después tres veces con acetona. El crisol se coloca después en un horno de secado (104ºC) durante por lo menos 4 horas (si el crisol se seca durante más de 8 horas, la etapa de lavado con acetona puede omitirse). Después, se deja enfriar el crisol en un secador durante aproximadamente una hora y después se pesa. Posteriormente, el crisol se transfiere después a un horno de mufla ajustado a 550ºC durante dos horas. El horno se abre y se deja enfriar el crisol hasta que se encuentra aproximadamente a 150ºC después de lo cual se transfiere al secador para enfriarse a temperatura ambiente y después se pesa de nuevo.
La NDF se determina a través de la fórmula siguiente:
%NDF = \frac{\text{peso tras el secado - peso tras el lavado}}{\text{peso de la muestra}} x 100
Medición del efecto de las enzimas sobre la NDF en alimentos e ingredientes para alimentos
En el siguiente procedimiento de medición del efecto de enzimas sobre la NDF en alimentos e ingredientes para alimentos es necesario un búfer acetato además del búfer fosfato y el reactivo ND descrito anteriormente. El búfer acetato se prepara disolviendo 7,900 g de acetato sódico (NaC_{2}H_{3}O_{2}\cdot2H_{2}O) en 950 ml de agua destilada. El pH se regula utilizando ácido acético glacial a un pH de 4,8.
Se prepara una muestra de alimento por triturado hasta que pasa a través de un tamiz de 1 mm. Se pesa una muestra de un 1g y se coloca en un crisol de filtración. Si la muestra de alimento contiene una cantidad importante de grasa, se lava tres veces con acetona utilizando un matraz Buchner y después se seca durante por lo menos 16 horas a temperatura ambiente o durante 30 minutos a 50ºC. Se pesa medio gramo (0,5 g) de la muestra de alimento y se coloca en un vaso de precipitados de 100 ml, y se añaden 30 ml del búfer acetato. El vaso de precipitados se coloca en un agitador magnético y se agita. Se añade un crisol de filtración (Por 1) al vaso de precipitados y se añaden 10 ml de búfer acetato al crisol. El vaso de precipitados y el crisol se incuban, junto con las soluciones de productos enzimáticos y combinaciones de productos enzimáticos con los surfactivos de tipo lisofosfolípido/fosfolípido, tal como se ha indicado, durante 4 horas a 37ºC.
El crisol se coloca en una máquina Dosifibre-Tecator (Foss) y el búfer se elimina y se lava con agua destilada caliente, después se añade 100 ml del reactivo ND calentado a 90ºC. El elemento calefactor de la máquina Dosifibre-Tecator se activa, y se pone en marcha el temporizador cuando la solución está hirviendo en tres de las seis cámaras. Cuando el reactivo comienza a hervir, se añaden 0,25 ml de Thermamyl 120L (NovoNordisk). El reactivo se mantiene en ebullición durante una hora. Si la formación de espuma es un problema, se añade una pequeña cantidad de 2-octanol. Después de que haya pasado una hora, el reactivo se bombea y el residuo se lava en agua caliente por lo menos cinco veces.
El alimento utilizado en este estudio es un alimento de pollo que contiene un 39,0% de grano (maíz), un 20,0% de trigo, un 17,0% de harina de soja 48, un 8,7% de harina de girasol, un 5% de harina animal, un 5% de guisante, un 3,2% de grasa añadida y una premezcla de vitaminas/minerales.
Resultados y discusión
En las Tablas 1 y 2 se muestran los resultados como porcentaje de las NDF que se encontraban presentes en muestras de control como muestras de alimentos tratados con productos enzimáticos y combinaciones de productos enzimáticos con surfactivos de tipo lisofosfolípido/fosfolípido (tipo LPC/PC). Las incubaciones de estos productos se realizaron de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente.
Conclusiones
Los resultados muestran que cuando los productos enzimáticos se combinan con surfactivos de tipo LPC/PC, la degradabilidad de la NDF se mejora, que un exceso de proteasa proporciona una mejora de la degradabilidad de la NDF, y que los resultados pueden variar en función del producto enzimático particular utilizado. El ensayo in vitro podría ser utilizado para optimizar el sistema enzimático.
Si un producto enzimático estándar se complementa con un exceso de proteasa, la degradabilidad de la NDF se mejora, ayudando este exceso de actividad enzimática de la proteasa en el efecto estimulador cuando el producto enzimático se combina con el tipo de surfactivo LPC/PC, y el surfactivo S2, que contiene lisoformas, es mejor que el producto de lecitina cruda de S1.
La misma cantidad de degradabilidad de la NDF puede obtenerse si se substituye un 50% del producto enzimático por el tipo de surfactivo LPC/PC, la actividad enzimática de la proteasa es importante para el efecto estimulador del producto de combinación final (enzimas + surfactivo), y el exceso de enzima de proteasa solo no proporciona el beneficio adicional en la degradabilidad de la NDF.
Los resultados también indican que pueden conseguirse otras mejoras seleccionando el mejor tipo de surfactivo LPC/PC que, en este caso, es el producto totalmente convertido, S4.
TABLA 1 El efecto de diferentes enzimas y combinaciones de enzimas y surfactivos sobre la ruptura de la NDF
Enzima Surfactivo Proteasa Ruptura de la
NDF relativa
Control 100,00%
Avizyme^{1} 1500 500 Kg/T 88,95%
Quatrazyme^{2} 500 Kg/T 94,00%
ENZ-Xilanasa 500 Kg/T 92,55%
ENZ-Xilanasa 500 Kg/T 5 Kg/T 91,66%
ENZ-Xilanasa/S2^{3} 250 Kg/T 250 Kg/T 94,44%
ENZ-Xilanasa/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 88,38%
ENZ-Xilanasa/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 86,14%
ENZ-Cebada 500 Kg/T 5 Kg/T 94,32%
ENZ-Cebada/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 91,95%
^{1}FinnFeed, división de Danisco, Dinamarca
^{2}Endo-1,4 \beta xilanasa y endo-1,3(4) \beta-glucanasa producido por Aspergillus niger CNCM I-1517
^{3}Producto biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de Lysoprin en peso
TABLA 2 Efecto de diferentes enzimas y combinaciones de enzimas y surfactivos sobre la ruptura de la NDF
Enzima Surfactivo Proteasa Ruptura de la
NDF relativa
Control 100,00%
ENZ-Xilanasa 500 Kg/T 94,75%
ENZ-Xilanasa 500 Kg/T 5 Kg/T 93,79%
ENZ-Xilanasa/S2^{1} 250 Kg/T 250 Kg/T 98,84%
ENZ-Xilanasa/S1^{2} 250 Kg/T 250 Kg/T 97,29%
ENZ-Xilanasa/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 91,01%
ENZ-Xilanasa/S1 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 95,77%
ENZ-Xilanasa/S3^{3} 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 89,80%
ENZ-Xilanasa/ 250 Kg/T 5 Kg/T 97,11%
Tween^{4} 80 (0,5%)
ENZ-Xilanasa/S1/ 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 92,19%
Tween 80 (0,5%)
ENZ-Xilanasa/S4^{5} 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 89,28%
ENZ-Cebada 500 Kg/T 5 Kg/T 94,90%
ENZ-Cebada/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 94,90%
Proteasa 5 Kg/T 97,00%
ENZ-Xilanasa/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 0,5 Kg/T 96,60%
ENZ-Xilanasa/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 2,5Kg/T 94,10%
ENZ-Xilanasa/S2 250 Kg/T 250 Kg/T 5 Kg/T 93,50%
^{1} Producto biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de Lysoprin en peso
^{2} \begin{minipage}[t]{145mm}Surfactivo de tipo lecitina cruda derivado de sojas que contienen que contiene aproximadamente un 16% de lecitina en peso\end{minipage}
^{3} Producto biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de Bolec MT en peso
^{4} Emulgente de tipo ácido graso comestible comúnmente disponible de Zeneca.
^{5} \begin{minipage}[t]{145mm}Producto biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de lisolecitina en peso (Patente Americana 6.068.997)\end{minipage}
Ensayos in vivo (Campo)
En una granja de investigación, se realizaron ensayos con pollos para verificar el efecto de los productos enzimáticos con y sin factor estimulador de la presente invención. El objetivo de los ensayos de campo era estimular la actividad enzimática, lo que producía una mejora en el comportamiento del animal. Otro objetivo es analizar si el nivel de energía de una dieta reducida puede hacerse coincidir cuando se añade un producto enzimático a una dieta de control negativo.
\newpage
Experimento 1
Materiales y Procedimientos
Se selecciona una dieta de control positivo que tiene una energía metabolizable de 3150 kcal. Esta dieta consiste en 36,6% de grano (maíz), 20,0% de trigo, 25,1% de harina de soja 48, 5% de harina animal, 5% de grasa añadida, 3% de guisantes, 3% de harina de girasol 28 y una premezcla de vitaminas/minerales. Se selecciona una dieta de control negativo que tiene una energía metabolizable de 3000 kcal. Esta dieta consiste en 39,0% de grano (maíz), 20,0% de trigo, 17,0% de harina de soja 48, 8,7% de harina de girasol, 5% de harina animal, 5% de guisantes, 3,2% de grasa añadida y una premezcla de vitaminas/minerales.
El ensayo con pollos se lleva a cabo en unas jaulas metabólicas utilizando aves de raza Ross del día 14 al día 28. Los ensayos se dirigieron durante periodos de septiembre a diciembre y de abril a junio. Para cada grupo de prueba, se realizan 36 copias para obtener diferencias estadísticamente significativas. Se mide el consumo diario, el crecimiento diario y el factor de conversión del alimento (FCR). Los pesos iniciales (14 días) se comparan con los pesos finales (28 días).
Resultados y Discusión
Resultados mostrados en la Tabla 3 demuestran que cuando se mejoran los productos enzimáticos con un factor de estimulación, el comportamiento del animal es mejor que el grupo de control negativo y por lo menos similar al producto enzimático. Es importante notar que el último producto que contiene un factor de estimulación tiene sólo un 50% de la intensidad de la actividad enzimática.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 3
Parámetros de crecimiento control + control - E1 E2 E3 E4
Peso d14 (g) 240 241 241 243 241 242
Peso d28 (g) 938 847 853 878 863 865
Crecimiento diario (g) 49,7 43,2 43,6 45,4 44,3 44,5
Consumo diario 86,7 82,6 84,8 84,0 83,4 83,4
FCR 1,74 1,94 1,95 1,87 1,89 1,90
E1= 100% ENZ-cebada y 1% proteasa adicional
\begin{minipage}[t]{150mm} E2= 50% ENZ-cebada y proteasa extra y 50% de un producto biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de Lysoprin en peso \end{minipage}
E3= 100% ENZ-Xilanasa y 1% proteasa adicional
\begin{minipage}[t]{150mm} E4= 50% ENZ-Xilanasa y proteasa extra y 50% de un producto biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de Lysoprin en peso \end{minipage}
Experimento 2
Materiales y Procedimientos
Como producto enzimático, se seleccionó ENZ-Xilanasa. La principal actividad enzimática presente en este producto es la xilanasa. Esta enzima cataliza la ruptura de los pentosanos de trigo. Degradando este factor anti-nutritivo habrá disponibles más componentes nutritivos del alimento. Esto produciría una menor viscosidad del intestino y una mejor calidad de los residuos.
Se separaron novecientos pollos Ross macho sobre 30 corrales durante los primeros 14 días. Tras la fase de inicio se pusieron 15 aves por corral. Cada corral (de 0,8 metros cuadrados) contenía un comedero delante del corral y dos boquillas de bebida por separado en la cara posterior del corral. Agua y alimentos se suministraron sin límite.
Todas las aves recibieron un alimento inicial comercial para pollos desde el día 0 hasta el 14 y alimento de finalización de pollo a base de trigo del día 14 al día 43, ambos derivados de Joosen-Luyckx (Turnhout). La composición de las dietas se muestra en las Tablas 4 y 5. El alimento de finalización de pollo está formulado en un 97% de una composición óptima relativa a aminoácidos digeribles y energía. La razón de esta reformulación era crear un mayor margen para un posible efecto beneficioso de un tratamiento a mostrar.
A uno de los cinco tratamientos se le asignó un corral (doce corrales repetidos de 15 aves para cada tratamiento) utilizando una aleatorización de bloques. Los tratamientos consistieron en:
- Control negativo
- Alimento de control + ENZ-Xilanasa a 1 Kg/ton
- Alimento de control + ENZ-Xilanasa + adición de biosurfactivo S1 a 1 Kg/ton
- Alimento de control + ENZ-Xilanasa Lysoprin a 1 Kg/ton
- Alimento de control +ENZ-Xilanasa + adición de biosurfactivo que contiene aproximadamente un 16% de Bolec MT en peso a 1 Kg/ton.
En la casa de los pollos el programa de temperaturas comenzó en el día 0 a 35ºC disminuyendo 0,5ºC cada día y del día 28 en adelante 22ºC. La ventilación del techo se realizó por medio de un control de aire Custers utilizando tubos Delta situados debajo de las entradas de aire. El clima era semi-automatizado a través de un sistema Avecom 103. El ciclo de luz era de 3 horas de oscuridad y 1 hora de luz. Todas las aves se pesaron en los días 0, 14 y 43. El uso del alimento se midió en los días 14 y 43. La calidad de los residuos se observó en los días 14, 35 y 43.
Se analizaron los datos de actividad en vivo como un bloque aleatorizado con medios de corral como unidad estadística. El análisis estadístico se realizó con el Sistema SAS para Windows, versión 6.12 TS nivel 0020, autorizado a K. U. Leuven, Sitio 0004759002.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 4 Composición de harina de inicio de pollo
Ingredientes Análisis
Maíz amarillo 30,00 Proteína cruda 22,40
Soja 49 23,70 Grasa 8,03
Soyax - - - Fibra cruda 2,88
Trigo 28,30 Cenizas 5,68
Harina animal (50/12) 5,80 Ca 1,10
Grasa (de cerdo, de vaca) 5,00 P disponible 0,47
Harina de pescado 2,00 Lisina Dig. 1,15
Metionina y Lisina Met. + Cis. Dig. 0,82
Vitaminas, Minerales, ME (Kcal/Kg) 2987
Coccidiostático
TABLA 5 Composición de harina de finalización de pollo
Ingredientes Análisis
Trigo 57,93 PC 22,50
Soja 49 16,49 Grasa 8,97
Soyax 10,00 Fibra cruda 2,98
Harina de carne y hueso 7,00 Azúcar y almidón 40,91
50/12
Grasa animal 4,95 Ca 1,00
P disponible 0,49
Ácido linoléico 1,84
Vitaminas, Minerales, Lisina Dig. 1,04
Coccidiostático
Metionina y Lisina Met. + Cis. Dig. 0,77
Treonina Dig. 0,64
Triptófano Dig. 0,21
ME (Kcal/Kg) 3169 
\vskip1.000000\baselineskip
Resultados y Discusión
No existe ninguna diferencia observada en la calidad de los residuos entre los tratamientos en todas las fechas de observación. Sin embargo, generalmente hacia el final del ensayo, los residuos parecían ser más húmedos en todos los grupos en comparación con la situación al principio del ensayo.
En la Tabla 6 se muestra el efecto de diferentes tratamientos en el comportamiento de los pollos. Aunque el peso final, el consumo diario y el crecimiento diario no difieren estadísticamente entre sí, podemos observar una diferencia estadísticamente significativa en el FCR entre el grupo de control y el grupo D y E. Estos grupos contienen un biosurfactivo de tipo lisofosfolípidos/fosfolípidos.
Parece que la presencia de enzimas (en particular, la xilanasa) y su efecto puede influenciarse de una manera positiva cuando se combinan con un biosurfactivo. Debe estar presente un determinado nivel de la actividad enzimática apropiada para proporcionar esta respuesta positiva. Esto puede observarse en la diferencia numérica entre el grupo A y B.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 6 Peso vivo promedio (LW), consumo diario (DFI), crecimiento diario (DG) y factor de conversión del alimento (FCR) con su desviación estándar de grupos de tratamiento diferentes; valores corregidos para el peso inicial
Grupo A B C D E
FCR a d14 1,57\pm0,02a 1,57\pm0,03ab 1,58\pm0,02ab 1,64\pm0,02b 1,55\pm0,02a
FCR a d43 1,65\pm0,01b 1,64\pm0,01ab 1,65\pm0,01b 1,63\pm0,01a 1,62\pm0,01a
TABLA 6 (continuación)
Grupo A B C D E
LW(g) a d0 43,1\pm0,9 43,4\pm0,5 43,1\pm0,8 43,1\pm0,8 43,0\pm0,4
LW(g) a d14 298\pm4,3a 300\pm5,1a 292\pm4,4ab 285\pm4,3b 293\pm4,6ab
LW(g) a d43 2236\pm25,8ab 2276\pm30,2a 2189\pm25,8ab 2211\pm25,8ab 2215\pm27,4ab
DFI(g) a d14 28,6\pm0,4 28,8\pm0,5 28,0\pm0,4 28,2\pm0,4 27,7\pm0,4
DFI(g)a d43 84,1\pm0,9ab 85,2\pm1,1a 82,5\pm0,9ab 81,9\pm0,9b 82,1\pm1,0b
DG(g) a d14 18,2\pm0,3a 18,3\pm0,4a 17,7\pm0,3ab 17,3\pm0,3b 27,7\pm0,4
DG(g) a d43 51,0\pm0,6ab 52,0\pm0,7a 49,9\pm0,6b 50,4\pm0,6ab 51,5\pm0,6ab
Los medios de tratamiento en la misma fila que no comparten una misma letra difieren estadísticamente de manera significativa (P <0,05).
Algunos análisis in vitro se llevaron a cabo sobre el alimento de finalización de los pollos que se utilizó en este ensayo.
En un experimento de incubación modificado la fracción de NDF del alimento se dispuso directamente en contacto con las combinaciones enzima/biosurfactivo. Después se midió de nuevo el % de NDF. Los resultados se expresan en porcentaje de ruptura total.
En la Tabla 7 se muestran los resultados de este experimento. El grupo en el cual se utilizó Lysoprin fue el que se comportó mejor. Sin embargo, no se pudo observar ninguna diferencia importante entre este grupo y los grupos en los que se utilizó Bolec MT o cuando no se utilizó ningún biosurfactivo.
Claramente existe una diferencia importante entre el grupo de lecitina y los otros biosurfactivos.
El efecto de diferencias significativas entre el biosurfactivos también se observa en el experimento in vivo. Esto confirma estudios anteriores que mostraban una correlación positiva entre la degradación de NDF de alimentos de pollo
que se utilizaron en ensayos con animales y los resultados de los comportamientos de los animales en esos ensayos.
TABLA 7 Ruptura de NDF de alimento de finalización de pollos utilizado en el ensayo en presencia de ENZ-Xilanasa sin o con la adición de productos biosurfactivos
Ruptura NDF % N Ruptura NDF relativa %
CONTROL 8,10 +/- 0,08 2 100,00
ENZ-Xilanasa 6,72 +/- 0,28 3 82,96
CONTROL + S1 8,91 +/- 0,46 1 100,00
ENZ-Xilanasa + S1 8,14 +/- 0,12 3 91,36
CONTROL + S2 8,91 +/- 0,46 1 100,00
ENZ-Xilanasa + S2 7,34 +/- 0,37 3 82,38
CONTROL + S2 8,91 +1- 9,46 1 100,00
ENZ-Xilanasa + S2 7,54 +/- 0,28 3 84,62
Discusión
Este estudio demuestra que biosurfactivos tales como Bolec MT y Lysoprin proporcionan diferencias significativas comparadas con la lecitina cuando se utilizan en combinación con un producto enzimático como la ENZ-
Xilanasa.

Claims (10)

1. Procedimiento para mejorar la degradación mediante una enzima exógena de la fibra detergente neutro en un alimento para animales, que comprende la etapa de añadir a un alimento para animales que contiene una enzima exógena un surfactivo seleccionado del grupo que consiste en lisolecitinas.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado en que la enzima exógena presenta una actividad enzimática seleccionada del grupo que incluye actividades de \beta-glucanasa, celulasa y xilanasa.
3. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado en que dicho alimento para animales incluye aproximadamente entre un 10 por ciento de peso y aproximadamente un 55 por ciento en peso de un cereal de grano pequeño.
4. Procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado en que el citado cereal de grano pequeño se selecciona del grupo que incluye trigo y cebada.
5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado en que la citada enzima se añade a dicho alimento para animales en una cantidad para proporcionar actividad de xilanasa de entre aproximadamente 5.000 y aproximadamente 50.000 unidades/kilogramo de dicho alimento para animales.
6. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado en que dicho surfactivo se incluye en una proporción que comprende entre aproximadamente 0,025 y aproximadamente 0,200 gramos/kilogramo del alimento para animales.
7. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado en que dicho surfactivo está incluido en una proporción que comprende entre aproximadamente 0,025 y aproximadamente 0,200 gramos/kilogramo del alimento para animales.
8. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado en que la degradación de la fibra detergente neutro aumenta en por lo menos aproximadamente un 50% sobre la degradación de la fibra detergente neutro por una enzima exógena sólo.
9. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado en que la enzima exógena se selecciona del grupo que consiste en actividades \alpha-galactosidasa, \beta-glucanasa, celulasa y xilanasa, y mejorando además la degradación de la fibra detergente neutro mediante la adición de una proteasa exógena.
10. Procedimiento para reducir la cantidad de la enzima exógena necesaria para obtener un nivel preseleccionado de degradación de fibra detergente neutro en un alimento para animales, que comprende la etapa de añadir al alimento para animales una enzima exógena seleccionada del grupo que consiste en actividades à-galactosidasa, \beta-glucanasa, celulosa y xilanasa; una proteasa; y un surfactivo seleccionado del grupo que consiste en lisolecitinas, y en el que la cantidad de enzima exógena añadida se reduce en hasta aproximadamente un 50% sin una degradación de la fibra detergente neutro.
ES01901673T 1999-12-30 2001-01-02 Procedimiento para reducir la cantidad de enzimas. Expired - Lifetime ES2248273T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17394599P 1999-12-30 1999-12-30
US173945P 1999-12-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2248273T3 true ES2248273T3 (es) 2006-03-16

Family

ID=22634165

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES01901673T Expired - Lifetime ES2248273T3 (es) 1999-12-30 2001-01-02 Procedimiento para reducir la cantidad de enzimas.

Country Status (8)

Country Link
US (1) US7211281B2 (es)
EP (1) EP1250057B1 (es)
AT (1) ATE308896T1 (es)
AU (1) AU2755201A (es)
DE (1) DE60114766T2 (es)
DK (1) DK1250057T3 (es)
ES (1) ES2248273T3 (es)
WO (1) WO2001049129A1 (es)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6562366B2 (en) * 2001-04-20 2003-05-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Method to prevent the formation and enhance the breakdown of bezoars in animals and humans
US20040071685A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-15 Devin Houston Compositions and methods for increasing the bioavailability of plant polyphenols
US7718415B1 (en) 2003-09-23 2010-05-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Acetyl esterase producing strains and methods of using same
CA2560613C (en) * 2004-03-22 2015-11-24 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Oral pharmaceutical compositions of lipase-containing products, in particular of pancreatin, containing surfactants
HUE031042T2 (en) 2005-07-29 2017-06-28 Abbott Laboratories Gmbh Methods for producing pancreatin powder with low viral content
US11266607B2 (en) * 2005-08-15 2022-03-08 AbbVie Pharmaceuticals GmbH Process for the manufacture and use of pancreatin micropellet cores
US9198871B2 (en) * 2005-08-15 2015-12-01 Abbott Products Gmbh Delayed release pancreatin compositions
US10072256B2 (en) * 2006-05-22 2018-09-11 Abbott Products Gmbh Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample
US20090130063A1 (en) * 2007-11-15 2009-05-21 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample
US8603568B2 (en) 2010-01-15 2013-12-10 Kemin Industries, Inc. Hydrolyzed lecithin product to improve digestibility
GB201204430D0 (en) * 2012-03-14 2012-04-25 Univ Birmingham Dietary supplement and assay method

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4089978A (en) * 1976-03-30 1978-05-16 General Foods Corporation Pet food acceptability enhancer
AT377679B (de) * 1983-02-24 1985-04-25 Chemiefaser Lenzing Ag Verfahren zur herstellung von ballaststoff -angereicherten, joule-reduzierten backwaren
JPS62285749A (ja) * 1986-06-03 1987-12-11 日東製粉株式会社 パン類の製造方法
FI872147A7 (fi) * 1987-05-15 1988-11-16 Cultor Oy Kalarehu, menetelmä sen valmistamiseksi sekä ruokintamenetelmä.
JPH02273536A (ja) * 1989-04-13 1990-11-08 Yakult Honsha Co Ltd 界面活性剤およびその製造法
DE69000657T3 (de) * 1989-08-21 1997-01-23 Nestle Sa Emulgiermittel.
US5427802A (en) * 1991-10-09 1995-06-27 Cbp Resources, Inc. Process for enhancing the growth performance of edible meat-producing animals
DE69319929T2 (de) * 1993-04-07 1999-04-29 Lovesgrove Research Ltd., Machynlleth, Powys Tierfutter
JPH06339343A (ja) * 1993-04-08 1994-12-13 Ajinomoto Co Inc 反すう動物用飼料添加物
GB9416841D0 (en) * 1994-08-19 1994-10-12 Finnfeeds Int Ltd An enzyme feed additive and animal feed including it
US5514404A (en) * 1994-11-29 1996-05-07 Nabisco, Inc. Tenderized baked good production with reduced fat, low fat, or no added fat
EP0743017B1 (en) 1995-05-15 2004-09-29 DSM IP Assets B.V. Application of phospholipases in animal feed
NL1003096C2 (nl) * 1995-05-15 1996-11-19 Gist Brocades Bv Application of phospholipases in animal feed.

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001049129A1 (en) 2001-07-12
EP1250057B1 (en) 2005-11-09
DK1250057T3 (da) 2006-02-20
EP1250057A4 (en) 2003-03-19
DE60114766T2 (de) 2006-07-27
AU2755201A (en) 2001-07-16
ATE308896T1 (de) 2005-11-15
US20010046693A1 (en) 2001-11-29
DE60114766D1 (de) 2005-12-15
US7211281B2 (en) 2007-05-01
EP1250057A1 (en) 2002-10-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Effects of dietary supplementation of keratinase on growth performance, nitrogen retention and intestinal morphology of broiler chickens fed diets with soybean and cottonseed meals
Cowieson et al. Phytate-free nutrition: A new paradigm in monogastric animal production
Zyla et al. An in vitro procedure for studying enzymic dephosphorylation of phytate in maize-soyabean feeds for turkey poults
Fru-Nji et al. A feed serine protease improves broiler performance and increases protein and energy digestibility
Dosković et al. Enzymes in broiler diets with special reference to protease
Li et al. Effects of non‐starch polysaccharides enzyme, phytase and citric acid on activities of endogenous digestive enzymes of tilapia (Oreochromis niloticus× Oreochromis aureus)
Ciurescu et al. Efficacy of microbial phytase on growth performance, carcass traits, bone mineralization, and blood biochemistry parameters in broiler turkeys fed raw chickpea (Cicer arietinum L., cv. Burnas) diets
Lu et al. Impact of exogenous carbohydrases and phytase on growth performance and nutrient digestibility in broilers
Leslie et al. The effect of phytase and glucanase on the ileal digestible energy of corn and soybean meal fed to broilers
Félix et al. Effects of the inclusion of carbohydrases and different soybean meals in the diet on palatability, digestibility and faecal characteristics in dogs
ES2248273T3 (es) Procedimiento para reducir la cantidad de enzimas.
PL204039B1 (pl) Dodatek paszowy i jego zastosowanie oraz pasza
Brenes et al. Effect of enzyme addition on the nutritive value of high oleic acid sunflower seeds in chicken diets
Poernama et al. The effect of feeding phytase alone or in combination with nonstarch polysaccharides-degrading enzymes on broiler performance, bone mineralization, and carcass traits
Fan et al. Effects of β‐glucanase and xylanase supplementation on gastrointestinal digestive enzyme activities of weaned piglets fed a barley‐based diet
Cardoso et al. Temporal restriction of enzyme supplementation in barley-based diets has no effect in broiler performance
Bello et al. Supplementation of an all-plant-based inorganic phosphate-free diet with a novel phytase maintained tibia ash and performance in broilers under a commercial production setting
Brannan et al. Influence of incubation, diet, and sex on avian uncoupling protein expression and oxidative stress in market age broilers following exposure to acute heat stress
Rada et al. The effect of exogenous protease in broiler diets on the apparent ileal digestibility of amino acids and on protease activity in jejunum
US6174558B1 (en) Method for increasing breast meat yields in poultry
CN102630855A (zh) 一种肉鸡小麦型日粮
CN106387453A (zh) 种鸭产蛋高峰期配合饲料
Liu et al. Research note: A novel protease improves egg production and fecal nutrient utilization in laying hens fed corn-or wheat-based diet
Sherif Performance of broiler chicks fed plant protein diets supplemented with commercial enzymes
Abu-Tayyeb et al. The responses of exogenous enzymes (multi-enzymes) on the productivity and stage of production of Broilers fed vegetable-sourced diets