ES2248911T3 - Agentes antitromboticos. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) (o un promedicamento de éste o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o promedicamento de éste) tal como se define aquí, composiciones farmacéuticas de éste y su empleo como inhibidor del factor Xa, así como a los procedimientos para su preparación y a los compuestos intermedios de éstos.

Description

Agentes antitrombóticos.

Esta invención se refiere a heterociclos antitrombóticos que manifiestan actividad como inhibidores del factor Xa y, por consiguiente, son anticoagulantes útiles en mamíferos. En particular se refiere a heterociclos que tienen una actividad anticoagulante elevada, y actividad antitrombótica. Así, la invención se refiere a nuevos inhibidores del factor Xa, a composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos como principios activos, y al uso de los compuestos como anticoagulantes para la profilaxis y tratamiento de trastornos tromboembólicos tales como trombosis venosa, embolia pulmonar, trombosis arterial, en particular isquemia de miocardio, infarto de miocardio y trombosis cerebral, estados hipercoagulables generales y estados hipercoagulables locales, tales como después de angioplastia y operaciones de bypass coronario, y lesión tisular generalizada como se refiere al proceso inflamatorio. Además, los agentes antitrombóticos son útiles como anticoagulantes en aplicaciones in vitro.

El proceso de coagulación de la sangre, la trombosis, está provocado por una cascada proteolítica compleja que conduce a la formación de trombina. La trombina elimina proteolíticamente los péptidos de activación de las cadenas A\alpha y las cadenas B\beta del fibrinógeno, que es soluble en el plasma sanguíneo, iniciando la formación de fibrina insoluble. La formación de trombina a partir de protrombina está catalizada por el factor Xa.

Actualmente la anticoagulación se consigue mediante la administración de heparinas y cumarinas. El control farmacológico parenteral de la coagulación y la trombosis se basa en la inhibición de la trombina mediante el uso heparinas. Las heparinas actúan indirectamente sobre la trombina acelerando el efecto inhibidor de la antitrombina III endógena (el principal inhibidor fisiológico de la trombina). Debido a que los niveles de antitrombina III en plasma varían y debido a que la trombina unida al coágulo parece resistente a este mecanismo indirecto, las heparinas pueden ser un tratamiento ineficaz. Debido a que se cree que los ensayos de coagulación están relacionados con la eficacia y con la seguridad, los niveles de heparina se deben controlar con ensayos de coagulación (particularmente el ensayo del tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT)). Las cumarinas impiden la generación de trombina bloqueando la gamma-carboxilación post-traduccional en la síntesis de protrombina y otras proteínas de este tipo. Debido a su mecanismo de acción, el efecto de las cumarinas sólo se puede conseguir lentamente, 6-24 horas después de la administración. Además, no son anticoagulantes selectivos. Las cumarinas también requieren control con ensayos de coagulación (particularmente el ensayo del tiempo de trombina (PT)).

Recientemente, ha aumentado el interés en moléculas sintéticas pequeñas que manifiestan una inhibición de la trombina y del factor Xa potente y directa. Véase, Jeremy J. Edmunds y Stephen T. Rapundalo (Annette M. Doherty, Section Editor), Annual Reports in Medicinal Chemistry, (1996), 31, 51-60.

Aunque las heparinas y las cumarinas son anticoagulantes eficaces, aún no han aparecido fármacos comerciales basados en moléculas sintéticas pequeñas; y a pesar de la promesa continua de esta clase de compuestos, aún existe la necesidad de anticoagulantes que actúen selectivamente sobre el factor Xa o la trombina, y que, independiente de la antitrombina III, ejerzan una acción inhibidora poco después de la administración, preferentemente por vía oral, y que no interfieran con la lisis de los coágulos sanguíneos, necesaria para mantener la homeostasis.

La presente invención se refiere al descubrimiento de que los compuestos de la presente invención, como se definen a continuación, son potentes inhibidores del factor Xa que pueden presentar una biodisponibilidad elevada tras su administración oral.

Según la presente invención se proporciona un compuesto de fórmula I

1

en la que

A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6}, junto con los dos carbonos a los cuales están unidos, completan un anillo heteroaromático sustituido en el que

(a)

uno de A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} es N, y cada uno de los otros es CR^{3}, CR^{4}, CR^{5} o CR^{6}, respectivamente;

(b)

dos residuos adyacentes de A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} juntos forman S, y cada uno de los otros es CR^{3}, CR^{4}, CR^{5} o CR^{6}, respectivamente; o

(c)

A^{3} y A^{4} juntos forman un anillo benzo fusionado, y A^{5} y A^{6} juntos forman -NH-;

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en la que cada uno de R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} es hidrógeno, o uno o dos de R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} es independientemente cloro, bromo o metilo y los otros son hidrógeno;

L^{1} es -NH-CO- o -CO-NH- tal que -L^{1}-Q^{1} es -NH-CO-Q^{1} o -CO-NH-Q^{1};

Q^{1} es fenilo, 2-furanilo, 2-tienilo, 4-tiazolilo, 2-piridilo, 2-naftilo, 1,2-dihidrobenzofuran-5-ilo, 1,2-dihidrobenzofuran-6-ilo o 1,2-benzoisoxazol-6-ilo en los que el fenilo puede llevar un sustituyente 2-flúor o puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en la(s) posición(es) 3, 4 ó 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, el 2-furanilo o 2-tienilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 5, el 4-tiazolilo puede llevar un sustituyente amino en posición 2, el 2-piridilo puede llevar un sustituyente amino en posición 6, y el 1,2-benzoisoxazol-6-ilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 3; o -CO-Q^{1} es ciclopentenilcarbonilo o ciclohexenilcarbonilo;

R^{2} es -NH-CO-Q^{2B}, y

-Q^{2B} es

2

en la que R^{O} es hidrógeno, halo, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, benciloxi o alquiltio C_{1-4}, y R^{P} es 1-hidroxietilo, 1-hidroxi-1-metiletilo, 1-metoxi-1-metiletilo, 4-piperidinilo, 4-piridinilo, dimetilaminosulfonilo o -J-R^{q} en la que J es un enlace sencillo, metileno, carbonilo, oxo, -S(O)_{q}- (en la que q es 0, 1 ó 2), o -NR^{r}- (en la que R^{r} es hidrógeno o metilo); y R^{q} es alquilo C_{1-6}, fenilo, 3-piridilo o 4-piridilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

Un compuesto particular de fórmula I que inhibe el factor Xa es aquel en el que

Q^{1} es fenilo, 2-tienilo, 4-tiazolilo, 2-piridilo, 2-naftilo o 1,2-benzoisoxazol-6-ilo en los que el fenilo puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en la(s) posición(es) 3, 4 ó 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, el 2-tienilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 5, el 4-tiazolilo puede llevar un sustituyente amino en posición 2, el 2-piridilo puede llevar un sustituyente amino en posición 6, y el 1,2-benzoisoxazol-6-ilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 3;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

Adicionalmente, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I (o una sal) que inhibe el factor Xa como se describe en el presente documento como principio activo en la fabricación de un medicamento para su uso en la producción de un efecto anticoagulante o antitrombótico.

Adicionalmente, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I que inhibe el factor Xa que presenta cualquiera de las definiciones del presente documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno tromboembólico.

Una sal farmacéuticamente aceptable de un agente antitrombótico de la presente invención incluye una que sea una sal de adición ácida preparada a partir de un compuesto básico de fórmula I y un ácido que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable, así como una sal preparada a partir de un compuesto ácido de fórmula I y una base que proporciona un catión farmacéuticamente aceptable. Así, una sal de un nuevo compuesto de fórmula I como se proporciona en el presente documento preparada con un ácido o una base que da un contraión farmacéuticamente aceptable proporciona un aspecto particular de la invención. Los ejemplos de tales ácidos y bases se proporcionan a continuación.

Como aspecto adicional de la invención se proporciona una formulación farmacéutica que comprende, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un nuevo compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente aceptables) como se proporciona en cualquiera de las descripciones del presente documento.

En esta memoria descriptiva, se usan las siguientes definiciones, a menos que se describa otra cosa: Halo es flúor, cloro, bromo o yodo. Alquilo, alcoxi, etc. denotan cualquiera de los dos grupos lineales o ramificados; pero las referencias a un radical individual tal como "propilo" abarca solamente el radical de cadena lineal ("normal"), denotándose específicamente el isómero de cadena ramificada, tal como "isopropilo". Cuando dos residuos adyacentes forman un anillo benzo (fusionado), forman un radical bivalente cis,cis-buta-1,3-dien-1,4-diilo.

Se apreciará que ciertos compuestos de fórmula I (o sus sales, etc.) pueden existir en, y se puede aislar en, formas isoméricas, formas tautoméricas incluyendo, isómeros cis- o trans-, así como formas ópticamente activas, racémicas o diastereoméricas. Se debe entender que la presente invención engloba un compuesto de fórmula I en cualquiera de sus formas tautoméricas o como una de sus mezclas; o como una mezcla de diasterómeros, así como en forma de diasterómero individual, y que la presente invención engloba un compuesto de fórmula I como una mezcla de enantiómeros, así como en forma de enantiómero individual, cualquiera de cuyas mezclas o formas poseen propiedades inhibidoras frente al factor Xa, siendo muy conocido en la materia cómo preparar o aislar formas particulares y cómo determinar las propiedades inhibidoras frente al factor Xa mediante pruebas habituales incluyendo aquellas descritas a continuación.

Además, un compuesto de fórmula I (o sus sales, etc.) puede presentar polimorfismo o puede formar un solvato con agua o un disolvente orgánico. La presente invención también engloba cualquiera de tales formas polimórficas, cualquier solvato o cualquiera de sus mezclas.

A continuación se enumeran valores particulares para radicales, sustituyentes, e intervalos, solamente con fines de ilustración, y no excluyen otros valores definidos u otros valores dentro de los intervalos definidos para los radicales y sustituyentes.

Para un grupo alquilo o el resto alquilo de un grupo que contiene alquilo tal como, por ejemplo alcoxi, un valor particular para alquilo C_{1-2} es metilo o etilo, y más particularmente es metilo; para alquilo C_{1-4} es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, o t-butilo, y más particularmente es metilo, isopropilo, butilo, o t-butilo; para alquilo C_{1-6} es metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo, y más particularmente es metilo, butilo o hexilo. Un valor particular para halo es bromo o cloro, y más particularmente es cloro.

Un compuesto particular de fórmula I es una piridina en la que uno de A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} es N, y cada uno de los otros es CR^{3}, CR^{4}, CR^{5} o CR^{6}, respectivamente.

Otro compuesto particular de fórmula I es un tiofeno en el que los dos residuos adyacentes A^{5} y A^{6} juntos forman S, y A^{3} y A^{4} son CR^{3} y CR^{4}, respectivamente.

Otro compuesto particular de fórmula I es un indol en el que los dos residuos adyacentes A^{5} y A^{6} juntos forman -NH-, A^{3} y A^{4} juntos forman un anillo benzo fusionado.

Un compuesto particular adicional de fórmula I es una piridina de fórmula Ia

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3

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en la que A^{4} es N, y L^{1}, Q^{1} y R^{2} tienen cualquiera de los valores definidos en el presente documento.

Un valor particular para Q^{1} es 4-metoxifenilo.

Un valor particular para R^{2} es, por ejemplo, (4-t-butilbenzoil)amino, (4-metoxibenzoil)amino, o [4-(4-piridil)benzoil]amino.

Un compuesto particular de fórmula I como se describe en el presente documento es aquel en el que -L^{1}-Q^{1} es -NH-CO-Q^{1}.

Otro compuesto particular de fórmula I como se describe en el presente documento es aquel en el que -L^{1}-Q^{1} es -CO-NH-Q^{1}.

Un compuesto de fórmula I se puede preparar mediante procedimientos que incluyen procedimientos conocidos en materia química para la producción de cualquier compuesto de fórmula I conocido o de compuestos análogos estructuralmente o mediante un nuevo procedimiento descrito en el presente documento. Un procedimiento para la preparación de un nuevo compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente aceptables), nuevos procedimientos para la preparación de un compuesto de fórmula I y nuevos intermedios para la fabricación de un compuesto de fórmula I como se ha definido anteriormente proporcionan elementos adicionales de la invención y se ilustran mediante los siguientes procedimientos en los que los significados de los radicales genéricos son como se ha definido anteriormente, a menos que se especifique otra cosa. Se reconocerá que puede ser preferible o necesario preparar un compuesto de fórmula I en el que un grupo funcional se protege usando un grupo protector convencional, y a continuación eliminar el grupo protector para proporcionar el compuesto de fórmula I.

Así, se proporciona un procedimiento para la preparación de nuevo compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente aceptables) como se proporciona en cualquiera de las descripciones anteriores que se selecciona entre cualquiera de aquellos descritos en los ejemplos, incluyendo los siguientes.

(A) Acilación de una amina de fórmula II,

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usando un ácido correspondiente que termina con el grupo HO-CO- o uno de sus derivados activados. Los derivados activados típicos incluyen los haluros de ácido, ésteres activados, incluyendo ésteres de 4-nitrofenilo y aquellos derivados de reactivos acoplantes. Para la reacción de acilación puede ser preferible desprotonar la amina usando una base fuerte en condiciones anhidras, por ejemplo como se describe en el Ejemplo 2, Parte C.

(B) Para un compuesto de fórmula I en el que -L^{1}-Q^{1} es -NH-CO-Q^{1}, la acilación de una amina de fórmula III

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usando un ácido de fórmula HO-CO-Q^{1}, o uno de sus derivados activados. Las condiciones usadas pueden ser similares a aquellas del procedimiento (A), anteriormente.

(C) Para un compuesto de fórmula I en el que -L^{1}-Q^{1} es -CO-NH-Q^{1}, la acilación de una amina de fórmula H_{2}N-Q^{1} usando una [1,3]-oxacina de fórmula IV,

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en la que Q^{2} representa Q^{2B}.

Tras lo cual, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando un grupo funcional se protege usando un grupo protector, la eliminación del grupo protector.

Tras lo cual, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, se obtiene haciendo reaccionar la forma básica de un compuesto básico de fórmula I con un ácido dando un contraión fisiológicamente aceptable o la forma ácida de un compuesto ácido de fórmula I con una base dando un contraión fisiológicamente aceptable o por cualquier otro procedimiento convencional.

Un nuevo compuesto intermedio o material de partida tal como, por ejemplo, un nuevo compuesto de fórmula II, III o IV, etc., proporciona un aspecto adicional de la invención.

Como se ha mencionado anteriormente, un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I pero en el que se protege un grupo funcional puede servir como intermedio para un compuesto de fórmula I. Por consiguiente, tal intermedio protegido para el nuevo compuesto de fórmula I proporciona un aspecto adicional de la invención. Los grupos protectores son muy conocidos en la técnica, por ejemplo como se describe en T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis (1991). Además, el grupo protector puede ser una resina funcionalizada, por ejemplo como se describe en H.V. Meyers, y col., Molecular Diversity, (1995), 1, 13-20.

Como se ha mencionado anteriormente, la invención incluye una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto que inhibe el factor Xa definido por la fórmula I anterior. Un compuesto básico de esta invención posee uno o más grupos suficientemente básicos para reaccionar con cualquiera de una serie de ácidos inorgánicos u orgánicos dando un contraión fisiológicamente aceptable para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Los ácidos empleados habitualmente para formar sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables son ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y similares, y ácidos orgánicos tales como ácido p-toluensulfónico, ácido metanosulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromobencensulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, y similares. Así los ejemplos de tales sales farmacéuticamente aceptables son el sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butin-1,4-dioato, hexin-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilensulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, gamma-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metanosulfonato, propanosulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, mandelato, y similares. Las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables preferidas incluyen aquellas formadas con ácidos minerales tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico y ácido sulfúrico.

Para un compuesto de fórmula I que lleva una fracción ácida, tal como un grupo carboxi, una sal farmacéuticamente aceptable se puede preparar con una base que da un catión farmacéuticamente aceptable, que incluye sales de metales alcalinos (especialmente sodio y potasio), sales de metales alcalino-térreos (especialmente calcio y magnesio), sales de aluminio y sales de amonio, así como sales preparadas a partir de bases orgánicas fisiológicamente aceptables tales como trietilamina, morfolina, piperidina y trietanolamina.

Si no está disponible comercialmente, un material de partida necesario para la preparación de un compuesto de fórmula I se puede preparar mediante un procedimiento que se selecciona entre técnicas habituales en química orgánica, incluyendo transformación y sustitución aromática y heteroaromática, de técnicas que son análogas a las síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidos, y técnicas que son análogas a los procedimientos descritos anteriormente o los procedimientos descritos en los Ejemplos. Será evidente para alguien experto en la materia que están disponibles una variedad de secuencias para la preparación de los materiales de partida. Los materiales de partida que son nuevos proporcionan otro aspecto de la invención.

Los procedimientos selectivos de sustitución, protección y desprotección son muy conocidos en la técnica para la preparación de un compuesto tal como uno de fórmula II, III, IV o VI descrito anteriormente.

Generalmente, un compuesto básico de la invención se aísla mejor en forma de sal de adición ácida. Una sal de un compuesto de fórmula I formado con un ácido tal como uno de aquellos mencionados anteriormente es útil como sal farmacéuticamente aceptable para la administración del agente antitrombótico y para la preparación de una formulación del agente. Se pueden preparar y usar otras sales de adición ácida en el aislamiento y purificación de los compuestos.

Como se ha indicado anteriormente, los isómeros ópticamente activos y los diasterómeros de los compuestos de fórmula I también se consideran parte de esta invención. Tales isómeros ópticamente activos se pueden preparar a partir de sus respectivos precursores ópticamente activos mediante los procedimientos descritos anteriormente, o resolviendo las mezclas racémicas. Esta resolución se puede llevar a cabo por derivación con un reactivo quiral seguido de cromatografía o por cristalización repetida. La retirada del reactivo auxiliar quiral por procedimientos habituales da sustancialmente los isómeros ópticamente puros de los compuestos de la presente invención o sus precursores. Se pueden obtener detalles adicionales con respecto a las resoluciones en Jacques, y col., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons, 1981.

Los compuestos de la invención se cree que inhiben selectivamente el factor Xa sobre otras proteinasas y proteínas no enzimáticas involucradas en la coagulación de la sangre sin una interferencia apreciable con la capacidad lítica de los coágulos natural del cuerpo (los compuestos presentan un efecto inhibidor sobre la fibrinolisis bajo). Además, tal selectividad se cree que permite su uso con agentes trombolíticos sin una interferencia sustancial con la trombolisis y fibrinolisis.

La inhibición del factor Xa, la inhibición de la coagulación y el tratamiento de trastornos tromboembólicos contemplados por el presente procedimiento incluyen ambos tratamientos médicos terapéuticos y/o profilácticos según sea apropiado.

En una forma de realización adicional la invención se refiere al tratamiento, en un humano o un animal, de una dolencia en la que es necesaria la inhibición del factor Xa. Los compuestos de la invención se espera que sean útiles en mamíferos, incluyendo el hombre, en el tratamiento o profilaxis de la trombosis y la hipercoagulabilidad en sangre y tejidos. Los trastornos en los que los compuestos tienen una utilidad potencial son en el tratamiento o profilaxis de la trombosis o hipercoagulabilidad en sangre y tejidos. Los trastornos en los que los compuestos tienen una utilidad potencial, en el tratamiento y/o profilaxis, incluyen trombosis venosa y embolia pulmonar, trombosis arterial, tal como isquemia de miocardio, infarto de miocardio, angina inestable, ictus relacionado con la trombosis y trombosis arterial periférica. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en el tratamiento o profilaxis de trastornos (enfermedades) ateroescleróticos tales como enfermedad arterial coronaria, enfermedad arterial cerebral y enfermedad arterial periférica. Adicionalmente, se espera que los compuestos sean útiles junto con trombolíticos en el infarto de miocardio. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en la profilaxis para la reoclusión después de la trombolisis, angioplastia transluminal percutánea (ATPC) y operaciones de bypass coronario. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en la prevención de la retrombosis después de microcirugía. Adicionalmente, se espera que los compuestos sean útiles en el tratamiento anticoagulante junto con órganos artificiales y válvulas cardiacas. Adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en el tratamiento anticoagulante en hemodiálisis y coagulación intravascular diseminada. Una utilidad adicional esperada es la limpieza de catéteres y dispositivos mecánicos usados en pacientes in vivo, y como anticoagulante para la preservación de la sangre, plasma y otros productos sanguíneos in vitro. Todavía adicionalmente, se espera que los compuestos tengan utilidad en otras enfermedades en las que la coagulación de la sangre podría ser un proceso contributivo fundamental o una fuente de patologías secundarias, tales como cáncer, incluyendo metástasis, enfermedades inflamatorias, incluyendo artritis, y diabetes. El compuesto anticoagulante se administra oral o parenteralmente, por ejemplo por infusión intravenosa (iv), inyección intramuscular (im) o subcutáneamente (sc).

La dosis específica de un compuesto administrado según esta invención para obtener efectos terapéuticos y/o profilácticos se determinará, por supuesto, por las circunstancias particulares que rodean al caso, incluyendo, por ejemplo, el compuesto administrado, la velocidad de administración, la vía de administración, y la dolencia a tratar.

Una dosis diaria típica para cada una de las utilidades anteriores está entre 0,01 mg/kg aproximadamente y 1000 mg/kg aproximadamente. El régimen de dosificación puede variar, por ejemplo, para uso profiláctico se puede administrar una única dosis diaria o pueden ser apropiadas múltiples dosis tales como 3 ó 5 veces al día. En situaciones de cuidados críticos un compuesto de la invención se administra por infusión iv a una velocidad entre 0,01 mg/kg/h aproximadamente y 20 mg/kg/h y preferentemente entre 0,1 mg/kg/h aproximadamente y 5 mg/kg/h aproximadamente.

El uso de esta invención también se practica junto con un agente lítico de coágulos, por ejemplo, el activador de plasminógeno tisular (t-PA), el t-PA modificado, la estreptoquinasa o la uroquinasa. En los casos en los que se ha producido la formación de coágulos y se ha bloqueado una arteria o una vena, parcial o totalmente, normalmente se emplea un agente lítico de coágulos. Un compuesto de la invención se puede administrar antes de o junto con el agente lítico o después de su uso, y preferentemente además se administra junto con aspirina para prevenir la recurrencia de formación de coágulos.

El uso de esta invención también se practica junto con un antagonista del receptor de glicoproteínas de plaquetas (IIb/IIIa), que inhibe la agregación plaquetaria. Un compuesto de la invención se puede administrar antes de o junto con el antagonista IIb/IIIa o después de su uso para prevenir la formación o la recurrencia de la formación de coágulos.

El uso de esta invención también se practica junto con aspirina. Un compuesto de la invención se puede administrar antes de o junto con la aspirina o después de su uso para prevenir la formación o la recurrencia de la formación de coágulos. Como se ha indicado anteriormente, un compuesto de la presente invención preferentemente se administra junto con un agente lítico de coágulos y aspirina.

Esta invención también proporciona una composición farmacéutica para su uso en el procedimiento terapéutico descrito anteriormente. Una composición farmacéutica de la invención comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I que inhibe el factor Xa en asociación con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

El principio activo en tales formulaciones comprende entre el 0,1% y el 99% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se quiere decir que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los otros principios de la formulación y no deletéreos para su receptor.

Para la administración por vía oral el compuesto antitrombótico se formula en cápsulas de gelatina o comprimidos que pueden contener excipientes tales como agentes aglutinantes, lubricantes, agentes desagregantes y similares. Para la administración por vía parenteral el antitrombótico se formula en un diluyente farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, solución salina fisiológica (0,9%), dextrosa al 5%, solución de Ringer y similares.

El compuesto de la presente invención se puede formular en formulaciones de dosificación unitaria que comprenden una dosis entre 0,1 mg aproximadamente y 1000 mg aproximadamente. Preferentemente el compuesto está en forma de sales farmacéuticamente aceptables tal como, por ejemplo, la sal de sulfato, la sal de acetato o la sal de fosfato. Un ejemplo de una formulación de dosificación unitaria comprende 5 mg de un compuesto de la presente invención como sal farmacéuticamente aceptable en una ampolla estéril de cristal de 10 ml. Otro ejemplo de una formulación de dosificación unitaria comprende 10 mg aproximadamente de un compuesto de la presente invención como sal farmacéuticamente aceptable en 20 ml de solución salina isotónica contenida en una ampolla estéril.

Los compuestos se pueden administrar por una variedad de vías incluyendo oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Los compuestos de la presente invención preferentemente se formulan antes de su administración.

Las presentes composiciones farmacéuticas se preparan mediante procedimientos conocidos usando principios muy conocidos y fácilmente disponibles. Las composiciones de esta invención se pueden formular de manera que proporcionen una liberación rápida, sostenida, o retardada del principio activo después de la administración al paciente empleando procedimientos muy conocidos en la técnica. En la fabricación de las composiciones de la presente invención, el principio activo normalmente se mezclará con un vehículo, o se diluirá mediante un vehículo, o se meterá dentro de un vehículo que puede estar en forma de cápsula, bolsita, papel u otro contenedor. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúa como vehículo, excipiente o medio para el principio activo. Así, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, caramelos, bolsitas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, disoluciones, jarabes, aerosoles, (como sólido o en un medio líquido), cápsulas de gelatina duras y blandas, supositorios, disoluciones inyectables estériles, polvos empaquetados estériles, y similares.

Los siguientes ejemplos de formulación son solamente ilustrativos y no se pretende que limiten de ninguna manera el alcance de la invención. "Principio activo", por supuesto, significa un compuesto según la fórmula I o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables.

Formulación 1

Se prepararon cápsulas de gelatina dura usando los siguientes principios:

	Cantidad (mg/cápsula)
Principio activo	250
Fécula, seca	200
Estearato de magnesio	10
Total	460	mg

Formulación 2

Se prepararon unos comprimidos usando los siguientes principios:

	Cantidad (mg/comprimido)
Principio activo	250
Celulosa, microcristalina	400
Dióxido de silicio, gaseoso	10
Ácido esteárico	5
Total	665	mg

Los componentes se mezclaron y se comprimieron para formar comprimidos de 665 mg de peso cada uno.

Formulación 3

Se preparó una disolución en aerosol que contenía los siguientes componentes:

	Peso
Principio activo	0,25
Etanol	29,75
Propelente 22 (Clorodifluorometano)	70,00
Total	100,00

El compuesto activo se mezcló con etanol y la mezcla se añadió a una porción del propelente 22, se enfrió a -30ºC y se transfirió a un dispositivo de relleno. A continuación se introdujo la cantidad necesaria en un contenedor de acero inoxidable y se diluyó con el resto del propelente. A continuación se fijaron las unidades de válvula al contenedor.

Formulación 4

Los comprimidos, conteniendo cada uno 60 mg del principio activo, se prepararon como sigue:

Principio activo	60 mg
Fécula	45 mg
Celulosa microcristalina	35 mg
Polivinilpirrolidona (como una disolución en agua al 10%)	4 mg
Carboximetilalmidón sódico	4,5 mg
Estearato de magnesio	0,5 mg
Talco	1 mg
Total	150 mg

El principio activo, la fécula y la celulosa se pasaron a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 45 y se mezclaron completamente. La disolución acuosa que contenía la polivinilpirrolidona se mezcló con el polvo resultante, y la mezcla se pasó a continuación a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 14. Los gránulos producidos de esta manera se secaron a 50ºC y se pasaron a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 18. El carboximetilalmidón sódico, el estearato de magnesio y el talco, pasados previamente a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 60, se añadieron a continuación a los gránulos que, después de la mezcla, se comprimieron en una máquina de comprimidos para dar comprimidos de 150 mg de peso cada uno.

Formulación 5

Las cápsulas, cada una que contiene 80 mg del principio activo, se prepararon como sigue:

Principio activo	80 mg
Fécula	59 mg
Celulosa microcristalina	59 mg
Estearato de magnesio	2 mg
Total	200 mg

El principio activo, la celulosa, la fécula y el estearato de magnesio se mezclaron, se pasaron a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 45, y se echaron en cápsulas de gelatina duras en cantidades de 200 mg.

Formulación 6

Los supositorios, conteniendo cada uno 225 mg del principio activo, se prepararon como sigue:

Principio activo	225 mg
Glicéridos de ácidos grasos saturados	2000 mg
Total	2225 mg

El principio activo se pasó a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 60 y se suspendió en los glicéridos de ácidos grasos saturados previamente fundidos usando el mínimo calor necesario. A continuación la mezcla se echó en un molde de supositorios de una capacidad nominal de 2 g y se dejó enfriar.

Formulación 7

Las suspensiones, cada una que contiene 50 mg del principio activo por 5 ml de dosis, se prepararon como sigue:

Principio activo	50 mg
Carboximetilcelulosa sódica	50 mg
Jarabe	1,25 m
Disolución de ácido benzoico	0,10 ml
Aromatizante	q.v.
Colorante	q.v.
Agua purificada hasta el total	5 ml

El principio activo se pasó a través de un tamiz de malla de EE.UU. Nº 45 y se mezcló con la carboximetilcelulosa sódica y el jarabe hasta formar una pasta suave. La disolución de ácido benzoico, el aromatizante y el colorante se diluyeron con una porción de agua y se añadieron, con agitación. A continuación se añadió agua suficiente para producir el volumen requerido.

Formulación 8

Una formulación intravenosa se puede preparar como sigue:

Principio activo	100 mg
Solución salina isotónica	1000 mg

La disolución de los principios anteriores generalmente se administra intravenosamente a un sujeto a una velocidad de 1 ml por minuto.

La capacidad de un compuesto de la presente invención para ser un inhibidor eficaz y oralmente activo del factor Xa se puede evaluar en uno o más de los siguientes ensayos o en otros ensayos habituales conocidos por aquellos expertos en la materia.

La inhibición por un compuesto de la inhibición de una serin-proteasa del sistema de coagulación de la sangre en humanos o del sistema fibrinolítico, así como de la tripsina, se determina in vitro para la enzima particular midiendo su afinidad de unión al inhibidor en un ensayo en el que la enzima hidroliza un sustrato cromogénico particular, por ejemplo, como se describe en Smith, G.F.; Gifford-Moore, D.; Craft, T.J.; Chirgadze, N.; Ruterbories, K.J.; Lindstrom, T.D.; Satterwhite, J.H. Efegatran: A New Cardiovascular Anticoagulant. New Anticoagulants for the Cardiovascular Patient; Pifarre, R., Ed.; Hanley & Belfus, Inc.: Philadelphia, 1997; págs. 265-300. La afinidad de unión al inhibidor se mide como la constante de asociación aparente, Kass, que es la constante de equilibrio hipotética para la reacción entre la enzima y el compuesto inhibidor de prueba (I).

Enzima + I \leftrightarrow Enzima - I

Kass = \frac{[Enzima - I]}{[(Enzima - I)x(I)]}

De manera conveniente, las cinéticas de inhibición de la enzima se realizaron en placas de poliestireno de 96 pocillos y las velocidades de reacción se determinaron a partir de la velocidad de hidrólisis de los sustratos de p-nitroanilida apropiados a 405 nm usando un lector de placas Thermomax de Molecular Devices (San Francisco, CA). Se siguió el mismo protocolo para todas las enzimas estudiadas: 50 \mul de tampón (Tris 0,03 M, NaCl 0,15 M pH 7) en cada pocillo, seguido de 25 \mul de disolución de inhibidor (en metanol al 100%, o en metanol acuoso al 50% en v:v) y 25 \mul de disolución de enzima; en dos minutos, se añadieron 150 \mul de disolución acuosa del sustrato cromogénico (0,25 mg/ml) para comenzar la reacción enzimática. Las velocidades de las reacciones de hidrólisis del sustrato cromogénico dieron una relación lineal con las enzimas estudiadas de manera que se puede cuantificar la enzima libre en las mezclas de reacción. Los datos se analizaron directamente como velocidades mediante el programa Softmax para producir cálculos de [enzima libre] para las determinaciones de la Kass con uniones fuertes. Para las determinaciones de la Kass aparente, se usó factor Xa humano 1,34 nM para hidrolizar BzIle-Glu-Gly-Arg-pNA 0,18 mM; se usó trombina humana 5,9 nM o tripsina bovina 1,4 nM para hidrolizar BzPhe-Val-Arg-pNA 0,2 mM; se usó plasmina humana 3,4 nM con HD-Val-Leu-Lys-pNA 0,5 mM; se usó nt-PA humana 1,2 nM con HD-Ile-Pro-Arg-pNA 0,81 mM; y se usó uroquinasa 0,37 nM con piro-gfsGlu-Gly-Arg-pNA 0,30 mM.

La Kass se calcula para un intervalo de concentraciones de los compuestos de prueba y el valor medio se presenta en unidades de litros por mol. En general, un compuesto de fórmula I que inhibe el factor Xa de la presente invención presenta una Kass de 0,1 a 0,5 x 10^{6} L/mol o muy superior.

El inhibidor del factor Xa preferentemente debería evitar la fibrinolisis inducida por uroquinasa, activador de plasminógeno tisular (t-PA) y estreptoquinasa. Esto sería importante para el uso terapéutico de tal agente como un adjunto a la terapia trombolítica con estreptoquinasa, tp-PA o uroquinasa y para el uso de tal agente como agente antitrombótico que evite la fibrinolisis endógena (con respecto al t-PA y a la uroquinasa). Además de la ausencia de interferencias con la actividad amidasa de las proteasas fibrinolíticas, tal evitación de los sistemas fibrinolíticos se puede estudiar mediante el uso de coágulos de plasma humano y su lisis por los activadores de plasminógeno fibrinolíticos respectivos.

Materiales

Se obtuvo plasma de perro de perros de caza cruzados conscientes (de cualquiera de los dos sexos, Butler Farms, Clyde, Nueva York, EE.UU.) por punción venosa en citrato al 3,8%. Se preparó fibrinógeno a partir del plasma fresco de perro y se preparó fibrinógeno humano a partir de sangre humana conservada en ACD en la fracción I-2 según procedimientos y memorias descriptivas previas. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980); y Smith, y col., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano (98% de pureza/exento de plasmina) es de American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. El radiomarcaje de las preparaciones de fibrinógeno I-2 se realizó como se ha indicado previamente. Smith, y col., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). La uroquinasa se compró en Leo Pharmaceuticals, Dinamarca, con 2200 unidades Ploug/vial. La estreptoquinasa se compró en Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Somerville, Nueva Jersey.

Procedimientos - Efectos sobre la lisis de los coágulos de plasma humano por el t-PA

Se formaron coágulos de plasma humano en tubos micro test añadiendo 50 \mul de trombina (73 unidades NIH/ml) a 100 \mul de plasma humano que contenía 0,0229 \muCi de fibrinógeno marcado con ^{125}[I]. La lisis del coágulo se estudió recubriendo los coágulos con 50 \mul de uroquinasa o estreptoquinasa (50, 100, ó 1000 unidades/ml) e incubando durante 20 horas a temperatura ambiente. Después de la incubación los tubos se centrifugaron en una Beckman Microfuge. Se añadieron 25 \mul de sobrenadante a 1,0 ml de volumen de tampón Tris 0,03 M/NaCl 0,15 M para el recuento gamma. Se obtuvieron los controles de recuento con una lisis del 100% omitiendo la trombina (y sustituyendo el tampón). Los inhibidores del factor Xa se evaluaron para posibles interferencias con la fibrinolisis incluyendo los compuestos en las disoluciones de recubrimiento a unas concentraciones de 1, 5, y 10 \mug/ml. Se estimaron aproximaciones groseras de los valores de CI_{50} por extrapolaciones lineales a partir de los puntos de los datos hasta un valor que representaría el 50% de la lisis para esa concentración particular de agente fibrinolítico.

Actividad anticoagulante Materiales

Se obtuvieron plasma de perro y plasma de rata a partir de perros de caza cruzados conscientes (de cualquiera de los dos sexos, Butler Farms, Clyde, Nueva York, EE.UU.) o de ratas Sprague-Dawley macho anestesiadas (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianápolis, Indiana, EE.UU.) por punción venosa en citrato al 3,8%. Se preparó fibrinógeno humano a partir de sangre humana conservada en ACD como la fracción I-2 según procedimientos y memorias descriptivas previas. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980); y Smith, y col., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano también se compró con una pureza del 98% /exento de plasmina en American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Los reactivos de coagulación actina, tromboplastina, Innovin y plasma humano son de Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida. Se usó trombina bovina de Parke-Davis (Detroit, Michigan) para los ensayos de coagulación en plasma.

Procedimientos Determinaciones de anticoagulación

Los procedimientos del ensayo de coagulación son como se ha descrito previamente. Smith, y col., Thrombosis Research, 50, 163-174 (1988). Se usó un instrumento de coagulación CoAScreener (American LABor, Inc.) para todas las medidas del ensayo de coagulación. El tiempo de protrombina (PT) se midió añadiendo 0,05 ml de solución salina y 0,05 ml de reactivo tromboplastina-C o reactivo del factor tisular humano recombinante (Innovin) a 0,05 ml del plasma de prueba. El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) se midió mediante la incubación de 0,05 ml del plasma de prueba con 0,05 ml de reactivo de actina durante 120 segundos seguidos de 0,05 ml de CaCl_{2} (0,02 M). El tiempo de trombina (TT) se midió añadiendo 0,05 ml de solución salina y 0,05 ml de trombina (10 unidades NIH/ml) a 0,05 ml del plasma de prueba. Los compuestos de fórmula I se añadieron al plasma humano o animal en un amplio intervalo de concentraciones para determinar los efectos de la prolongación sobre los ensayos del APTT, PT, y TT. Las extrapolaciones lineales se realizaron para estimar las concentraciones necesarias para doblar el tiempo de coagulación para cada ensayo.

Animales

Se anestesiaron ratas de Sprague-Dawley macho (350-425 g, Harlan Sprague Dawley Inc., Indianápolis, IN) con xilacina (20 mg/kg, s.c.) y ketamina (120 mg/kg, s.c.) y se mantuvieron en una manta de agua caliente (37ºC). La vena yugular(es) se canuló para permitir las infusiones.

Modelo de derivación arterio-venosa

La vena yugular izquierda y la arteria carótida derecha se canularon con tubos de polietileno PE 60 de 20 cm de longitud. Se encajó por fricción entre las secciones más largas una sección central de 6 cm de un tubo mayor (PE 190) con un hilo de algodón (5 cm) en el lumen, para completar el circuito de derivación arterio-venoso. Se hizo circular la sangre a través de la derivación durante 15 minutos antes de retirar el hilo cuidadosamente y pesarlo. El peso del hilo húmedo se restó del peso total del hilo y del trombo (véase J.R. Smith, Br. J. Pharmacol., 77: 29, 1982).

Modelo de lesión arterial con FeCl_{3}

Se aislaron las arterias carótidas mediante una incisión cervical ventral en la línea media. Se colocó un termopar debajo de cada arteria y la temperatura del vaso se registró continuamente en un registrador de banda. Se colocó una vuelta del tubo (0,058 ID x 0,077 OD x 4 mm, Baxter Med. Grade Silicone), cortado longitudinalmente, alrededor de cada carótida directamente encima del termopar. Se disolvió FeCl_{3} hexahidratado en agua y la concentración (20%) se expresa sólo en términos del peso real del FeCl_{3}. Para lesionar la arteria e inducir trombosis, se introdujeron con una pipeta 2,85 \mul en la vuelta para lavar la arteria encima de la sonda del termopar. Se advirtió la oclusión arterial por un descenso rápido de la temperatura. El tiempo para la oclusión se presenta en minutos y representa el tiempo transcurrido entre la aplicación del FeCl_{3} y el rápido descenso en la temperatura en el vaso (véase K.D. Kurz, Thromb. Res., 60: 269, 1990).

Parámetros de coagulación

El tiempo de trombina en plasma (TT) y el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) se midieron con un fibrómetro. Se tomó una muestra de sangre de un catéter en la yugular y se recogió en una jeringuilla que contenía citrato sódico (3,8%, 1 parte en 9 partes de sangre). Para medir el TT, se mezcló plasma de rata (0,1 ml) con solución salina (0,1 ml) y trombina bovina (0,1 ml, 30 U/ml en tampón Tris; Parke Davis) a 37ºC. Para el APTT, el plasma (0,1 ml) y la disolución de APTT (0,1 ml, Organon Teknica) se incubaron durante 5 minutos (37ºC) y se añadió CaCl_{2} (0,1 ml, 0,025 M) al comenzar la coagulación. Los ensayos se realizaron por duplicado y se promediaron.

Índice de biodisponibilidad

Los estudios de biodisponibilidad se pueden realizar como sigue. Los compuestos se administraron en forma de disoluciones acuosas a ratas Fisher macho, intravenosamente (iv) a 5 mg/kg mediante inyección en la vena de la cola y oralmente (po) a animales en ayunas a 20 mg/kg por sonda nasogástrica. Se obtuvieron muestras seriadas de sangre a los 5, 30, 120, y 240 minutos después de la dosis tras la administración por vía intravenosa y a 1, 2, 4, y 6 horas después de la dosificación oral. El plasma se analizó para la concentración de fármaco usando un procedimiento por HPLC que utiliza cartuchos C8 Bond Elute (Varion) para la preparación de muestras y un gradiente con tampón de metanol/acetato de amonio 30 nM (pH 4) optimizado para cada compuesto. El porcentaje de biodisponibilidad oral se calculó mediante la siguiente ecuación:

% \ de \ biodisponibilidad \ oral = \frac{ABC \ po}{ABC \ iv} x \frac{Dosis \ iv}{Dosis \ po} x 100

en la que ABC es el área bajo la curva calculada a partir del nivel del compuesto en plasma durante el transcurso del experimento tras la dosificación oral (ABC po) e intravenosa (ABC iv).

Compuestos

Las disoluciones de compuesto se prepararon frescas diariamente en solución salina normal y se inyectaron en forma de bolo o se infusionaron comenzando 15 minutos antes y prosiguiendo a lo largo de toda la perturbación experimental que es de 15 minutos en el modelo de derivación arteriovenosa y de 60 minutos en el modelo de lesión arterial con FeCl_{3} y en el modelo de trombolisis espontánea. El volumen de inyección del bolo es de 1 ml/kg para la administración i.v., y 5 ml/kg para la administración p.o., y el volumen de infusión es de 3 ml/h.

Estadísticas

Los resultados se expresan como media +/- SEM. El análisis de varianza de un factor se usa para detectar diferencias estadísticamente significativas y a continuación se aplica el test de Dunnett para determinar qué medias son diferentes. El nivel de importancia para descartar la hipótesis nula de medias iguales es P < 0,05.

Animales

Se mantuvieron en ayunas durante toda la noche perros macho (Beagles; 18 meses-2 años; 12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, Nueva York 14516) y se les administró Prescription Diet certificada por Purina (Purina Mills, St. Louis, Missouri) 240 minutos después de la dosificación. El agua estaba disponible a voluntad. La temperatura ambiente se mantuvo entre 18-24ºC; humedad relativa del 45-50%; e iluminada entre las 6:00-18:00 horas.

Modelo farmacocinético

El compuesto de prueba se formuló inmediatamente antes de la dosificación disolviéndolo en solución salina estéril al 0,9% en una preparación de 5 mg/ml. A los perros se les dio una única dosis de 2 mg/kg del compuesto de prueba por sonda nasogástrica. Se tomaron muestras de sangre (4,5 ml) de la vena cefálica a las 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 y 6 horas después de la dosificación. Las muestras se recogieron en tubos Vacutainer con citrato y se mantuvieron en hielo antes de la reducción a plasma por centrifugación. Las muestras de plasma se analizaron por HPLC MS. Se registró la concentración del compuesto de prueba en plasma y se usó para calcular los parámetros farmacocinéticos: constante de velocidad de eliminación, Ke; aclaramiento total, Cl_{t}; volumen de distribución, V_{D}; tiempo de máxima concentración del compuesto de prueba en plasma, T_{máx}; máxima concentración del compuesto de prueba a T_{máx}, C_{máx}; semi-vida en plasma, t_{0,5}; y área bajo la curva, ABC; fracción del compuesto de prueba absorbida, F.

Modelo canino de trombosis de la arteria coronaria

La instrumentación y la preparación quirúrgica de los perros son como se describe en Jackson, y col., Circulation, 82, 930-940 (1990). Se anestesiaron perros de caza cruzados (6-7 meses de edad, de cualquiera de los dos sexos, Butler Farms, Clyde, Nueva York, EE.UU.) con pentobarbital sódico (30 mg/kg intravenosamente, i.v.), se intubaron, y se ventilaron con aire de la habitación. La capacidad pulmonar y la frecuencia respiratoria se ajustaron para mantener la PO_{2}, la PCO_{2}, y el pH sanguíneos dentro de los límites normales. Se insertaron electrodos de aguja subdérmicos para el registro de un ECG de la derivación II.

La vena yugular izquierda y la arteria carótida común se aislaron mediante una incisión mediolateral izquierda en el cuello. La presión sanguínea arterial (PAS) se midió continuamente con un transductor Millar calibrado previamente (modelo MPC-500, Millar Instruments, Houston, TX, EE.UU.) insertado en la arteria carótida. La vena yugular se canuló para la toma de muestras de sangre durante el experimento. Además, se canularon las venas femorales de las dos patas traseras para la administración del compuesto de prueba.

Se realizó una toracotomía en el quinto espacio intercostal, y el corazón se suspendió en un soporte pericardial. Se aisló un segmento de 1 a 2 cm de la arteria coronaria circumfleja izquierda (LCX) proximal a la primera bifurcación ventricular diagonal principal. Se insertó un electrodo anodal de cable de punta afilada del calibre 26 (recubierto con teflón, cable de cobre recubierto de plata del calibre 30) de 3-4 mm de longitud en la LCX y se puso en contacto con la superficie de la íntima de la arteria (confirmado al final del experimento). El circuito de estimulación se completó colocando el cátodo en una posición subcutánea (s.c.). Se colocó un oclusor ajustable de plástico alrededor de la LCX, sobre la región del electrodo. Se colocó una sonda de flujo electromagnético calibrada previamente (Carolina Medical Electronics, King, NC, EE.UU.) alrededor de la LCX proximal al ánodo para medir el flujo sanguíneo coronario (FSC). El oclusor se ajustó para producir una inhibición del 40-50% de la respuesta hiperémica del flujo sanguíneo observada 10 s después de la oclusión mecánica de la LCX. Todas las medidas hemodinámicas y del ECG se registraron y analizaron con un sistema de toma de datos (modelo M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, EE.UU.).

Formación de trombos y regímenes de administración del compuesto

La lesión electrolítica de la íntima de la LCX se produjo aplicando 100 \muA de corriente continua (DC) en el ánodo. La corriente se mantuvo durante 60 min y a continuación se detuvo, se hubiese ocluido el vaso o no. La formación del trombo prosiguió espontáneamente hasta que la LCX estuvo totalmente ocluida (determinada en forma de FSC cero y un incremento en el segmento S-T). La administración del compuesto se inició después del que el trombo de oclusión se dejara durante 1 hora. Se inició una infusión de 2 horas de los compuestos de la presente invención a dosis de 0,5 y 1 mg/kg/hora simultáneamente con la infusión de agente trombolítico (por ejemplo, activador del plasminógeno tisular, estreptoquinasa, APSAC). La reperfusión se siguió durante 3 horas después de la administración del compuesto de prueba. La reoclusión de las arterias coronarias después de la trombolisis con éxito se define en forma de FSC cero que persiste durante al menos 30 minutos.

Hematología y determinaciones del patrón de tiempo de sangrado

Se determinaron todos los valores de recuento de células sanguíneas, hemoglobina y hematocrito en una muestra de 40 \mul de sangre en citrato (3,8%) (1 parte de citrato:9 partes de sangre) con un analizador de hematología (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner. Mount View, CA, EE.UU.). El patrón de tiempos de sangrado gingival se determinó con un dispositivo del tiempo de sangrado Simplate II (Organon Teknica, Durham, N.C., EE.UU.). El dispositivo se usó para hacer dos incisiones horizontales en la encía de cualquiera de las dos mandíbulas superior o inferior izquierda del perro. Cada incisión es de 3 mm de ancho x 2 mm de profundidad. Se hicieron las incisiones, y se usó un cronómetro para determinar durante cuánto tiempo se produjo el sangrado. Se usó una gasa de algodón para absorber la sangre a medida que salía de la incisión. El patrón de tiempo de sangrado es el tiempo desde la incisión hasta la detención del sangrado. Los tiempos de sangrado se toman justo antes de la administración del compuesto de prueba (0 min), 60 min durante la infusión, a la conclusión de la administración del compuesto de prueba (120 min), y al final del experimento. Todos los datos se analizaron mediante el análisis de varianza de un factor (ANOVA) seguido del test de la t post hoc de Student-Neuman-Kuels para determinar el nivel de importancia. Se usaron medidas repetidas de ANOVA para determinar diferencias significativas entre los puntos de tiempo durante los experimentos. Se determinó que los valores fueran estadísticamente diferentes al menos a un nivel de p < 0,05. Todos los valores son la media \pm SEM. Todos los estudios se realizaron de acuerdo con los principios directrices de la American Physiological Society. Detalles adicionales con respecto a los procedimientos se describen en Jackson, y col., Cardiovasc. Pharmacol., (1993), 21, 587-599.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para describir adicionalmente la invención y no se deben interpretar como sus limitaciones.

Las abreviaturas, símbolos y términos usados en los ejemplos tienen los siguientes significados.

Ac = acetilo

AIBN = azobisisobutironitrilo

Anal. = análisis elemental

aq = acuoso

Bn o Bzl = bencilo

Boc = t-butiloxicarbonilo

Bu = butilo

n-BuLi = butil-litio

Calc. = calculado

conc. = concentrado

DCC = diciclohexilcarbodiimida

DMAP = 4-dimetilaminopiridina

DMF = dimetilformamida

DMSO = dimetilsulfóxido

EDC = clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida

eq = equivalente (molar)

Et = etilo

EtOAc = acetato de etilo

Et_{3}N = trietilamina

Et_{2}O = dietiléter

EtOH = etanol

FAB = bombardeo rápido de átomos (espectroscopia de masas)

Hex = hexanos

HOAt = 1-hidroxi-7-azabenzotriazol

HOBT = 1-hidroxibenzotriazol

HPLC = cromatografía líquida de alto rendimiento

HRMS = espectro de masas de alta resolución

i-PrOH = isopropanol

IR = espectro de infrarrojos

Me = metilo

MeI = yoduro de metilo

MeOH = metanol

MS-FD = espectro de masas de desorción por campo

NBS = N-bromosuccinimida

RMN = resonancia magnética nuclear

Ph = fenilo

i-Pr = isopropilo

RPHPLC = cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa

satd = saturado

SiO_{2} = gel de sílice

TBS = terc-butildimetilsililo

TFA = ácido trifluoroacético

THF = tetrahidrofurano

TIPS = triisopropilsililo

TLC = cromatografía de capa fina

tosilo = p-toluensulfonilo

ácido tríflico = ácido trifluorometanosulfónico

A menos que se indique otra cosa, los ajustes de pH y los lavados son con disoluciones acuosas ácidas o básicas. RMN ^{1}H indica que se obtuvo un espectro de RMN satisfactorio para el compuesto descrito. IR indica que se obtuvo un espectro de infrarrojos satisfactorio para el compuesto descrito.

Por motivos de uniformidad y claridad, una serie de compuestos se nombran como derivados de diamina sustituida.

Ejemplo 1 Preparación de 3-(4-terc-butilbenzoil)amino-N-(4-metoxifenil)-2-tiofencarboxamida

7

A. 3-(4-terc-butilbenzoil)amino-2-tiofencarboxilato de metilo

Una disolución de 3-amino-2-tiofencarboxilato de metilo (400 mg, 2,54 mmol) y piridina (0,226 ml, 2,80 mmol) en cloruro de metileno (12 ml) se trató con cloruro de 4-terc-butilbenzoilo (0,500 ml, 2,54 mmol). Después del consumo del material de partida, la mezcla se concentró sobre vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó una vez con agua, una vez con una disolución saturada de cloruro sódico, se secó (sulfato de magnesio), y se filtró. La concentración y purificación del residuo por cromatografía súbita (gel de sílice, hexanos/acetato de etilo) dieron 689 mg (85%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 317 (M^{+})

Análisis para C_{17}H_{19}NO_{3}S.

	Calc:	C, 64,33; H, 6,03; N, 4,42.
	Hallado:	C, 64,39; H, 5,98; N, 4,46.

B. Ácido 3-(4-terc-butilbenzoil)amino-2-tiofencarboxílico

Una disolución de 3-(4-terc-butilbenzoil)amino-2-tiofencarboxilato de metilo (9,67 g, 30 mmol) en 1,4-dioxano (75 ml) se trató con hidróxido sódico acuoso 2 N (75 ml). Después de 16 h, la mezcla se trató con ácido clorhídrico acuoso 5 N hasta que el pH fue \sim2. La mezcla se echó en acetato de etilo y las fases se separaron. La fase acuosa se lavó tres veces con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron, y se concentraron sobre vacío para dar 8,09 g (89%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 303 (M^{+})

Análisis para C_{16}H_{17}NO_{3}S.

	Calc:	C, 63,34; H, 5,65; N, 4,62.
	Hallado:	C, 63,56; H, 5,93; N, 4,32.

C. 2-[4-(terc-butil)fenil]-4-oxo-4H-tieno[3,2-d]-[1.3]oxacina

Una disolución de ácido 3-(4-terc-butilbenzoil)amino-2-tiofencarboxílico (8,1 g, 27 mmol) en cloruro de metileno (135 ml) se trató con cloruro de oxalilo (11,8 ml, 135 mmol). La mezcla se calentó lentamente para dar una disolución homogénea. Después de 2 h, la mezcla se concentró sobre vacío y el residuo se disolvió en cloruro de metileno (135 ml) y se trató con piridina (2,2 ml). Después de 1 h, la mezcla se concentró sobre vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó cuatro veces con agua, una vez con una disolución saturada de cloruro sódico, se secó (sulfato de magnesio), y se filtró. La concentración y purificación del residuo por cromatografía súbita (gel de sílice, hexanos/acetato de etilo) dieron 7,44 g (96%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 285 (M^{+})

Análisis para C_{16}H_{15}NO_{2}S.

	Calc:	C, 67,34; H, 5,30; N, 4,91.
	Hallado:	C, 67,51; H, 5,56; N, 4,76.

D. 3-(4-terc-butilbenzoil)amino-N-(4-metoxifenil)-2-tiofencarboxamida

Una disolución de 2-[4-(terc-butil)fenil]-4-oxo-4H-tieno[3,2-d]- [1.3]oxacina (60 mg, 0,21 mmol) y p-anisidina (26 mg, 0,21 mmol) en tolueno (1 ml) se trató con ácido p-toluensulfónico (4 mg) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 30 h. La mezcla se concentró sobre vacío y el residuo se purificó por cromatografía súbita (gel de sílice, hexanos/acetato de etilo) para dar 35 mg (41%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

MS-FD m/e: 408 (M^{+})

Análisis para C_{23}H_{24}N_{2}O_{3}S.

	Calc:	C, 67,62; H, 5,92; N, 6,86.
	Hallado:	C, 67,79; H, 5,84; N, 6,77.

Ejemplo 2 Preparación de N^{3}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{2}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

8

A. N^{3}-(terc-butoxicarbonil)-N^{2}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

Una disolución de N^{3}-(terc-butoxicarbonil)-2,3-piridindiamina (446 mg, 2,13 mmol) en tetrahidrofurano (7 ml) se trató con hexametildisilazida de potasio (894 mg, 4,48 mmol). Después de 0,1 h, la mezcla se trató con cloruro de p-anisoilo (0,365 ml, 2,13 mmol). Después de 0,5 h, la mezcla se echó en una disolución acuosa de cloruro amónico y acetato de etilo. La fase orgánica se lavó tres veces con agua, una vez con una disolución saturada de cloruro sódico, se secó (sulfato de magnesio), y se filtró. La concentración sobre vacío y la purificación del residuo por cromatografía súbita (gel de sílice, hexanos/acetato de etilo) dieron 250 mg (34%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

B. N^{2}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

Una disolución de N^{3}-(terc-butoxicarbonil)-N^{2}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina (350 mg, 1,02 mmol) en ácido acético (2 ml) a 0ºC se trató con eterato de trifluoro de boro (0,50 ml, 4,1 mmol). Después de 2 h, la mezcla se echó en bicarbonato sódico acuoso y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron, y se concentraron sobre vacío. La purificación del residuo por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo/cloruro de metileno) dieron 122 mg (49%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

C. N^{3}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{2}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

Una disolución de N^{2}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina (92 mg, 0,38 mmol) en tetrahidrofurano (1 ml) se trató con hexametildisilazida de potasio (160 mg, 0,80 mmol). Después de 0,25 h, la mezcla se trató con cloruro de 4- terc-butilbenzoilo. Después de 0,75 h, la mezcla se echó en una mezcla de una disolución acuosa de cloruro amónico y acetato de etilo. La fase orgánica se lavó dos veces con agua, una vez con una disolución saturada de cloruro sódico, se secó (sulfato de magnesio), y se filtró. La concentración sobre vacío y la purificación del residuo por cromatografía súbita (gel de sílice, cloruro de metileno/acetato de etilo) seguido de recristalización en acetato de etilo/hexanos dieron 31 mg (20%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

MS-FD m/e: 403 (M^{+})

Análisis para C_{24}H_{25}N_{3}O_{3}.

	Calc:	C, 71,44; H, 6,24; N, 10,41.
	Hallado:	C, 71,28; H, 6,33; N, 10,52.

Ejemplo 3 Preparación de N^{4}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

9

A. N^{4}-(4-terc-butiloxicarbonil)-3,4-piridindiamina

Una disolución de 3,4-piridindiamina (930 mg, 8,52 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) se trató con agua (20 ml) y carbonato potásico (2,35 g, 17,0 mmol) seguido de dicarbonato de di-terc-butilo (1,86 g, 8,52 mmol). Después de 0,75 h, la mezcla se echó en una mezcla de acetato de etilo y agua. La fase acuosa se saturó con cloruro sódico y se extrajo varias veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una disolución saturada de cloruro sódico, se secaron (sulfato de magnesio), y se filtraron. La concentración sobre vacío y la recristalización en hexanos/acetato de etilo dieron 950 mg (53%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 209 (M^{+})

Análisis para C_{10}H_{15}N_{3}O_{2}.

	Calc:	C, 57,40; H, 7,23; N, 20,08.
	Hallado:	C, 57,36; H, 7,19; N, 20,29.

B. N^{4}-(4-terc-butiloxicarbonil)-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

Una disolución de N^{4}-(4-terc-butiloxicarbonil)-3,4-piridindiamina (500 mg, 2,40 mmol) y piridina (0,213 ml, 2,63 mmol) en cloruro de metileno (12 ml) se trató con cloruro de p-anisoilo (408 mg, 2,40 mmol). Después de 0,75 h, la mezcla se echó en una mezcla de acetato de etilo e hidróxido sódico acuoso 1 N. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico saturado, se secó (sulfato de magnesio), y se filtró. La concentración sobre vacío y la recristalización del residuo, seguidas de cromatografía súbita (gel de sílice, hexanos/acetato de etilo) dieron 500 mg (60%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 343 (M^{+})

Análisis para C_{18}H_{21}N_{3}O_{4}.

	Calc:	C, 62,96; H, 6,16; N, 12,24.
	Hallado:	C, 62,18; H, 6,06; N, 11,68.

C. N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

Una disolución de N^{4}-(4-terc-butiloxicarbonil)-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina (600 mg, 1,75 mmol) en cloruro de metileno (8 ml) se trató con ácido trifluoroacético (1,35 ml, 17,5 mmol). Después de 6,5 h, la mezcla se concentró y el residuo se disolvió en agua y se trató con hidróxido sódico acuoso 5 N. El precipitado resultante se recogió por filtración dando 325 mg (76%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 243 (M^{+})

Análisis para C_{13}H_{13}N_{3}O_{2}.

	Calc:	C, 64,19; H, 5,39; N, 17,27.
	Hallado:	C, 63,92; H, 5,28; N, 17,15.

D. N^{4}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

Usando cloruro de 4-terc-butilbenzoilo y un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 2, Parte C, la N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina (300 mg, 1,23 mmol) dio 243 mg (49%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 403 (M^{+})

Análisis para C_{24}H_{25}N_{3}O_{3}.

	Calc:	C, 71,44; H, 6,25; N, 10,41.
	Hallado:	C, 71,28; H, 6,16; N, 10,28.

Ejemplo 4 Preparación de N^{3}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{4}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

\vskip1.000000\baselineskip

10

\vskip1.000000\baselineskip

A. N^{3}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{4}-(terc-butiloxicarbonil)-3,4-piridindiamina

Usando un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 3, Parte B, la N^{4}-(terc-butiloxicarbonil)-3,4-piridindiamina (450 mg, 2,15 mmol) dio 516 mg (65%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 369 (M^{+})

Análisis para C_{21}H_{27}N_{3}O_{3}.

	Calc:	C, 68,27; H, 7,37; N, 11,37.
	Hallado:	C, 68,46; H, 7,38; N, 11,19.

B. N^{4}-(4-terc-butilbenzoil)-3,4-piridindiamina

Usando un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 3, Parte C, la N^{3}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{4}-(terc-butiloxicarbonil)-3,4-piridindiamina (516 mg, 1,40 mmol) dio 324 mg (86%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 269 (M^{+})

Análisis para C_{16}H_{19}N_{3}O.

	Calc:	C, 71,35; H, 7,11; N, 15,60.
	Hallado:	C, 71,01; H, 7,06; N, 14,90.

C. N^{3}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{4}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

Una disolución de N^{4}-(4-terc-butilbenzoil)-3,4-piridindiamina (400 mg, 1,49 mmol), piridina (0,264 ml), y cloruro de p-anisoilo (0,254 ml, 1,49 mmol) en tolueno (12 ml) se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla se filtró y el filtrado se echó en una mezcla de acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó tres veces con agua, una vez con una disolución saturada de cloruro sódico, se secó, y se filtró. La concentración sobre vacío y la purificación del residuo por recristalización (metanol/acetato de etilo/hexanos) seguida de cromatografía súbita (gel de sílice, acetato de etilo/cloruro de metileno) dio 75 mg (13%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 403 (M^{+})

Análisis para C_{24}H_{25}N_{3}O_{3}.

	Calc:	C, 71,44; H, 6,24; N, 10,41.
	Hallado:	C, 69,90; H, 5,95; N, 10,25.

Ejemplo 5 Preparación de N^{2}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

11

A. N^{2}-(4-terc-butilbenzoil)-2,3-piridindiamina

Usando un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 3, Parte B, la N^{3}-(terc-butiloxicarbonil)-2,3-piridindiamina (1,00 g, 4,78 mmol) dio N^{2}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{3}-(terc-butiloxicarbonil)-2,3-piridindiamina (894 mg). Usando un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 2, Parte B, este material en bruto dio 400 mg (31%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

B. N^{2}-(4-terc-butilbenzoil)-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

Usando un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 3, Parte C, la N^{2}-(4-terc-butilbenzoil)-2,3-piridindiamina (80 mg, 0,30 mmol) dio 28 mg (23%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

MS-FD m/e: 403 (M^{+})

Análisis para C_{24}H_{25}N_{3}O_{3}.

	Calc:	C, 71,44; H, 6,25; N, 10,41.
	Hallado:	C, 71,51; H, 6,28; N, 10,31.

Ejemplo 6 Preparación de N^{4}-(4-metoxibenzoil)-N^{3}-[4-(4-piridil)-benzoil]-3,4-piridindiamina

12

A. 4-(4-piridil)benzoato sódico

Una disolución de clorhidrato de 4-cloropiridina (3,00 g, 20,0 mmol), ácido 4-carboxibencenoborónico (4,97 g, 30,0 mmol), una disolución acuosa de carbonato sódico 1 M (50 ml), dicloruro de 1,4-bis(difenilfosfino)butano de paladio (II) (300 mg, 0,70 mmol), y etanol (10 ml) en tolueno (40 ml) se calentó a reflujo durante 16 h. La mezcla se diluyó con metanol y se filtró a través de tierra diatomácea. El filtrado se concentró sobre vacío y el pH se ajustó a 14 mediante la adición de hidróxido sódico acuoso 1 N. Después de calentar el filtrado hasta ebullición, el material insoluble se retiró por filtración, y el filtrado resultante se dejó enfriar a temperatura ambiente. El precipitado resultante se recogió por filtración para dar 1,83 g (41%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

B. N^{4}-(terc-butiloxicarbonil)-N^{3}-[4-(4-piridil)benzoil]-3,4-piridindiamina

Una suspensión de 4-(4-piridil)benzoato sódico (425 mg, 1,92 mmol) en cloruro de metileno se trató con cloruro de oxalilo (0,840 ml, 9,60 mmol), seguido de dimetilformamida (0,01 ml). Después de 0,75 h, la mezcla se concentró sobre vacío. A continuación el residuo se disolvió en cloruro de metileno y se añadió gota a gota a una disolución de N^{4}-(terc-butiloxicarbonil)-3,4-piridindiamina (400 mg, 1,92 mmol) y piridina (0,31 ml) en cloruro de metileno (2 ml) y tetrahidrofurano (1 ml). Después de 16 h, la mezcla se echó en acetato de etilo e hidróxido sódico acuoso 1 N. La fase orgánica se lavó una vez con hidróxido sódico acuoso 1 N, una vez con una disolución saturada de cloruro sódico, se secó (carbonato potásico), y se filtró. El residuo se purificó por cromatografía súbita (gel de sílice, acetato de etilo/hexanos) para dar 75 mg (10%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 390 (M^{+})

Análisis para C_{22}H_{22}N_{4}O_{3}.

	Calc:	C, 67,68; H, 5,68; N, 14,35.
	Hallado:	C, 66,95; H, 6,03; N, 13,67.

C. N^{3}-[4-(4-piridil)benzoil]-3,4-piridindiamina

Usando un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 2, Parte B, la N^{4}-(terc-butiloxicarbonil)-N^{3}-[4-(4-piridil)benzoil]-3,4-piridindiamina (95 mg, 0,23 mmol) dio 55 mg (82%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H

D. N^{4}-(4-metoxibenzoil)-N^{3}-[4-(4-piridil)benzoil]-3,4-piridindiamina

Usando cloruro de 4-metoxibenzoilo y un procedimiento similar a aquel descrito para el Ejemplo 2, Parte C, la N^{3}-[4-(4-piridil)benzoil]-3,4-piridindiamina (55 mg, 0,19 mmol) dio 3,2 mg (4%) del compuesto del título.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 424 (M^{+}).

\newpage

Ejemplos 7-9

El siguiente procedimiento se usó en los Ejemplos 7-9:

A un vial de cristal pequeño con un tampón revestido de teflón se le añadió un compuesto 1,2-diaminoaromático (0,25 mmol aproximadamente) en tetrahidrofurano (3 ml), seguido de poli(4-vinilpiridina) (250 mg, 1 mmol) y cloruro de p-anisoilo (0,625 mmol). Después de agitar esta mezcla durante 24 h en un agitador de plataforma, se añadió poliestireno aminometilado (1 g, 1 mmol) y se prosiguió con la agitación durante otras 8 h. La disolución se filtró y se concentró sobre vacío, y el residuo se trituró con dietiléter. El sólido resultante se filtró y se secó sobre vacío para dar 50 mg aproximadamente del compuesto del título.

Ejemplo 7 5-bromo-6-metil-N^{2},N^{3}-bis(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

13

MS-FD m/e: 471 (M^{+}).

Ejemplo 8 N^{3},N^{4}-bis(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

14

MS-FD m/e: 377 (M^{+}).

Ejemplo 9 N^{2},N^{3}-bis(4-metoxibenzoil)-2,3-piridindiamina

15

MS-FD m/e: 377 (M^{+}).

Ejemplo 10 Preparación de 3-(4-metoxibenzoil)amino-N-(4-metoxifenil)-2-indolcarboxamida

16

A. Éster etílico del ácido 3-(4-metoxibenzoil)amino-2-indolcarboxílico

A una disolución del éster etílico del ácido 3-amino-2-indolcarboxílico (500 mg, 2,45 mmol) y trietilamina (272 mg, 2,70 mmol) en cloruro de metileno (5 ml) se añadió cloruro de anisoilo (418 mg, 2,45 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua. La fase orgánica se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1 N, se secó (sulfato sódico), se filtró, y se concentró sobre vacío para dar un sólido amarillo. La recristalización en hexano/acetato de etilo dio 780 mg (94%) del compuesto del título como un sólido amarillo.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 338 (M^{+})

Análisis para C_{19}H_{18}N_{2}O_{4}.

	Calc:	C, 67,44; H, 5,36; N, 8,28.
	Hallado:	C, 67,46; H, 5,35; N, 8,16.

B. Ácido 3-(4-metoxibenzoil)amino-2-indolcarboxílico

A una disolución del éster etílico del ácido 3-(4-metoxibenzoil)amino-2-indolcarboxílico (720 mg, 2,13 mmol) en tetrahidrofurano (7 ml) se añadió hidróxido sódico acuoso 5 N (2 ml). La mezcla resultante se agitó durante 10 h a temperatura ambiente. Se añadió una porción adicional de hidróxido sódico acuoso 5 N (5 ml) y la mezcla se calentó a 60ºC durante 5 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se agitó durante 10 h, se diluyó con agua, y se extrajo con dietiléter. La fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico concentrado y se extrajo con tres porciones frescas de acetato de etilo. Las fracciones combinadas de acetato de etilo se secaron (sulfato sódico), se filtraron, y se concentraron sobre vacío para dar 450 mg (68%) del compuesto del título como un sólido amarillo.

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 310 (M^{+})

Análisis para C_{17}H_{14}N_{2}O_{4}.

	Calc:	C, 65,80; H, 4,55; N, 9,03.
	Hallado:	C, 64,70; H, 4,66; N, 8,59.

C. 3-(4-metoxibenzoil)amino-N-(4-metoxifenil)-2-indolcarboxamida

A una disolución de p-anisidina (79 mg, 0,645 mmol) en cloruro demetileno (5 ml) se le añadió ácido 3-(4-metoxibenzoil)amino-2-indolcarboxílico (200 mg, 0,645 mmol), y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (247 mg, 1,29 mmol), y 4-dimetilaminopiridina (8,0 mg, 0,065 mmol). La disolución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. El precipitado resultante se recogió por filtración sobre vacío para dar 38 mg (14%) del compuesto del título como un sólido blanco.

\newpage

RMN ^{1}H, IR

MS-FD m/e: 415 (M^{+})

Análisis para C_{24}H_{21}N_{3}O_{4}.

	Calc:	C, 69,39; H, 5,10; N, 10,11.
	Hallado:	C, 68,68; H, 4,96; N, 10,15.

Ejemplo 11 Preparación de N^{4}-[(4-dimetilamino)benzoil]-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

17

A. Cloruro de 4-(dimetilamino)benzoilo

Una disolución de ácido 4-(dimetilamino)benzoico y cloruro de tionilo en cloruro de metileno se calentó a reflujo durante 4 h. Los disolventes volátiles se retiraron sobre vacío para dar 1,10 g de cloruro de 4-(dimetilamino)benzoilo. Este material se usó en las reacciones posteriores sin purificación.

B. N^{4}-[(4-dimetilamino)benzoil]-N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina

A una disolución de N^{3}-(4-metoxibenzoil)-3,4-piridindiamina (193 mg, 0,79 mmol) y cloruro de 4-(dimetilamino)benzoilo (183 mg, 1,00 mmol) en 5 ml de cloruro de metileno se le añadió 0,5 ml de piridina y una cantidad catalítica de 4-dimetilaminopiridina. La mezcla se agitó 16 h a temperatura ambiente en nitrógeno y a continuación se repartió entre cloruro de metileno y una disolución saturada de hidrogenocarbonato sódico. La porción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró sobre vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se añadió hexano hasta turbidez. La mezcla se sometió a sonicación induciendo la cristalización. El sólido se recogió por filtración y se secó sobre vacío para dar 306 mg (99%) del compuesto del título.

MS, pulverización iónica, m/e: 391 (p + 1).

Análisis para C_{22}H_{22}N_{4}O_{3}.

	Calc:	C, 67,58; H, 5,68; N, 14,35.
	Hallado:	C, 67,19; H, 6,01; N, 13,79.

Claims (14)

1. Un compuesto de fórmula I

18

en la que

A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6}, junto con los dos carbonos a los cuales están unidos, completan un anillo heteroaromático sustituido en el que

(a)

uno de A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} es N, y cada uno de los otros es CR^{3}, CR^{4}, CR^{5} o CR^{6}, respectivamente;

(b)

dos residuos adyacentes de A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} juntos forman S, y cada uno de los otros es CR^{3}, CR^{4}, CR^{5} o CR^{6}, respectivamente; o

(c)

A^{3} y A^{4} juntos forman un anillo benzo fusionado, y A^{5} y A^{6} juntos forman -NH-;

en la que cada uno de R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} es hidrógeno, o uno o dos de R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} es independientemente cloro, bromo o metilo y los otros son hidrógeno;

L^{1} es -NH-CO- o -CO-NH- tal que -L^{1}-Q^{1} es -NH-CO-Q^{1} o -CO-NH-Q^{1};

Q^{1} es fenilo, 2-furanilo, 2-tienilo, 4-tiazolilo, 2-piridilo, 2-naftilo, 1,2-dihidrobenzofuran-5-ilo, 1,2-dihidrobenzofuran-6-ilo o 1,2-benzoisoxazol-6-ilo en los que el fenilo puede llevar un sustituyente 2-flúor o puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en la(s) posición(es) 3, 4 ó 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, el 2-furanilo o 2-tienilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 5, el 4-tiazolilo puede llevar un sustituyente amino en posición 2, el 2-piridilo puede llevar un sustituyente amino en posición 6, y el 1,2-benzoisoxazol-6-ilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 3; o -CO-Q^{1} es ciclopentenilcarbonilo o ciclohexenilcarbonilo;

R^{2} es -NH-CO-Q^{2B}, y

-Q^{2B} es

19

en la que R^{O} es hidrógeno, halo, alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, benciloxi o alquiltio C_{1-4}, y R^{P} es 1-hidroxietilo, 1-hidroxi-1-metiletilo, 1-metoxi-1-metiletilo, 4-piperidinilo, 4-piridinilo, dimetilaminosulfonilo o -J-R^{q} en la que J es un enlace sencillo, metileno, carbonilo, oxo, -S(O)_{q}- (en la que q es 0, 1 ó 2), o -NR^{r}- (en la que R^{r} es hidrógeno o metilo); y R^{q} es alquilo C_{1-6}, fenilo, 3-piridilo o 4-piridilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

2. El compuesto de la reivindicación 1 en el que

Q^{1} es fenilo, 2-tienilo, 4-tiazolilo, 2-piridilo, 2-naftilo o 1,2-benzoisoxazol-6-ilo en los que el fenilo puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en la(s) posición(es) 3, 4 ó 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, el 2-tienilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 5, el 4-tiazolilo puede llevar un sustituyente amino en posición 2, el 2-piridilo puede llevar un sustituyente amino en posición 6, y el 1,2-benzoisoxazol-6-ilo puede llevar un sustituyente cloro o metilo en posición 3;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

3. El compuesto de la reivindicación 1 ó 2 en el que para un grupo alquilo o el resto alquilo de un grupo que contiene alquilo, alquilo C_{1-4} es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, o t-butilo; alquilo C_{1-6} es metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo, y halo es bromo o cloro.

4. El compuesto de la reivindicación 3 en el que para un grupo alquilo o el resto alquilo de un grupo que contiene alquilo, alquilo C_{1-4} es metilo, isopropilo, butilo, o t-butilo; alquilo C_{1-6} es metilo, butilo o hexilo, y halo es cloro.

5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 anteriores en el que el compuesto de fórmula I es una piridina en la que uno de A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} es N, y cada uno de los otros es CR^{3}, CR^{4}, CR^{5} o CR^{6}, respectivamente.

6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 anteriores en el que el compuesto de fórmula I es un tiofeno en el que los dos residuos adyacentes A^{5} y A^{6} juntos forman S, y A^{3} y A^{4} son CR^{3} y CR^{4}, respectivamente.

7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 anteriores en el que el compuesto de fórmula I es un indol en el que los dos residuos adyacentes A^{5} y A^{6} juntos forman -NH-, A^{3} y A^{4} juntos forman un anillo benzo fusionado.

8. El compuesto de la reivindicación 5 en el que A^{4} es N, y cada uno de R^{3}, R^{5} y R^{6} es hidrógeno.

9. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8 anteriores en el que Q^{1} es 4-metoxifenilo.

10. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-9 anteriores en el que R^{2} es (4-t-butilbenzoil)amino, (4-metoxibenzoil)amino, o [4-(4-piridil)benzoil]amino.

11. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 anteriores en el que -L^{1}-Q^{1} es -NH-CO-Q^{1}.

12. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 anteriores en el que -L^{1}-Q^{1} es -CO-NH-Q^{1}.

13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, o sus sales farmacéuticamente aceptables, como se reivindica en la reivindicación 1 en asociación con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

14. Un procedimiento para la preparación de un nuevo compuesto de fórmula I (o una de sus sales farmacéuticamente aceptables) como se proporciona en la reivindicación 1 que se selecciona entre

(A) acilación de una amina de fórmula II,

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usando un ácido correspondiente que termina con el grupo HO-CO- o uno de sus derivados activados;

(B) para un compuesto de fórmula I en el que -L^{1}-Q^{1} es -NH-CO-Q^{1}, la acilación de una amina de fórmula III

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usando un ácido de fórmula HO-CO-Q^{1}, o uno de sus derivados activados;

(C) para un compuesto de fórmula I en el que -L^{1}-Q^{1} es -CO-NH-Q^{1}, la acilación de una amina de fórmula H_{2}N-Q^{1} usando una [1,3]-oxacina de fórmula IV,

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en la que Q^{2} representa Q^{2B};

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tras lo cual, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando un grupo funcional se protege usando un grupo protector, la eliminación del grupo protector;

tras lo cual, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, se obtiene haciendo reaccionar la forma básica de un compuesto básico de fórmula I con un ácido dando un contraión fisiológicamente aceptable o la forma ácida de un compuesto ácido de fórmula I con una base dando un contraión fisiológicamente aceptable o por cualquier otro procedimiento convencional; y

en la que, a menos que se especifique otra cosa, L^{1}, Q^{1}, R^{2}, A^{3}, A^{4}, A^{5} y A^{6} tienen cualquiera de los valores definidos en la reivindicación 1.