ES2248380T3

ES2248380T3 - Agentes antitromboticos.

Info

Publication number: ES2248380T3
Application number: ES01961622T
Authority: ES
Inventors: Douglas Wade Beight; John Joseph Masters; Jason Scott Sawyer; Robert Theodore Shuman; Michael Robert Wiley; Ying Kwong Yee
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2000-08-17
Filing date: 2001-08-06
Publication date: 2006-03-16
Anticipated expiration: 2021-08-06
Also published as: DE60114640T2; US20040010017A1; WO2002014308A1; EP1311501A1; US6924296B2; AU2001282871A1; DE60114640D1; ATE308540T1; EP1311501B1

Abstract

Un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) en la que uno de R1 y R2 es Q1; el otro de R1 y R2 es Q2; en la que Q1 es 2-piridinilo (que puede llevar un sustituyente metilo, metoxi, metiltio, fluoro o cloro en la posición 5) o 3-piridinilo (que puede llevar un sustituyente metilo, fluoro o cloro en la posición 6); o Q1 es fenilo que puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en las posiciones 3, 4 o 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, dimetilamino, amino, hidroxi y 3, 4- metilendioxi, y además, el fenilo puede llevar un sustituyente 2-cloro o 2-fluoro; o Q1 es en la que -E-G-NH- es -CH2-CH2-NH-, -C(Ra)=CH-NH-, -C(Ra)=N-NH-, -N=CH-NH- o -N=N-NH- en las que Ra es hidrógeno, fluoro, cloro, bromo o metilo; Q2 es en las que Rm es alquilo (C1-C4), ciclohexilo, 4- tetrahidropiranilo, fenilo, 4-piridilo o 2-pirimidinilo; cuando R2 es Q1, entonces R3 es H, COOH,N- (metil)bencenosulfonilamino o fenilo (que puede estar sustituido en la posición 3 o 4 con metilo, cloro o fluoro) y R4 es H; y cuando R2 es Q2, entonces R3 es H y R4 es H, COOH, metilo, N-(metil)bencenosulfonilamino, fenilo no sustituido o fenilo (que puede estar sustituido en la posición 3 o 4 con metilo, cloro o fluoro; o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

Description

Agentes antitrombóticos.

Esta solicitud reivindica al beneficio de la Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº 60/225.926, presentada el 17 de agosto de 2000.

Esta invención se refiere a compuestos aromáticos antitrombóticos que muestran actividad como inhibidores del factor Xa y, por consiguiente, que son anticoagulantes útiles en mamíferos. En particular, se refiere a compuestos aromáticos que tienen una elevada actividad anticoagulante y actividad antitrombótica. De esta manera, esta invención se refiere a nuevos inhibidores del factor Xa, a composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos como ingredientes activos y al uso de los compuestos como anticoagulantes para la profilaxis y tratamiento de trastornos tromboembólicos tales como trombosis venosa, embolia pulmonar, trombosis arterial, en particular isquemia miocárdica, infarto de miocardio y trombosis cerebral, estados hipercoagulables generales y estados hipercoagulables locales, tales como después de operaciones de angioplastia y de derivación coronaria y lesión generalizada de tejido cuando se relaciona con el proceso inflamartorio. Además, los derivados antitrombóticos son útiles como anticoagulantes en aplicaciones in vitro.

El procedimiento de coagulación sanguínea, la trombosis, se activa mediante una cascada proteolítica compleja que conduce a la formación de trombina. La trombina retira proteolíticamente los péptidos de activación de las cadenas A\alpha y de las cadenas B\beta del fibrinógeno, que es soluble en el plasma sanguíneo, iniciando la formación de fibrina insoluble. La formación de trombina a partir de protrombina se cataliza por el factor Xa.

En la actualidad, la anticoagulación se consigue mediante administración de heparinas y coumarinas. El control farmacológico parenteral de la coagulación y la trombosis se basa en la inhibición de trombina mediante el uso de heparinas. Las heparinas actúan indirectamente en la trombina acelerando el efecto inhibidor de la antitrombina III (el principal inhibidor fisiológico de la trombina). Como los niveles de antitrombina III varían en plasma y como la trombina unida a coagulación parece resistente a este mecanismo indirecto, las heparinas pueden ser un tratamiento ineficaz. Como se cree que los ensayos de coagulación están asociados con eficacia y seguridad, los niveles de heparina deben controlarse con ensayos de coagulación (particularmente, el ensayo del tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT)). Las coumarinas impiden la generación de trombina bloqueando la gamma-carboxilación post-traduccional en la síntesis de protrombina y otras proteínas de este tipo. Debido a su mecanismo de acción, el efecto de las coumarinas sólo se puede desarrollar lentamente, 6-24 horas después de la administración. Además, no son anticoagulantes selectivos. Las coumarianas también necesitan un control con ensayos de coagulación (particularmente el ensayo del tiempo de protrombina (PT)).

El documento WO 00/39118 describe amidas aromáticas antitrombóticas que muestran actividad como inhibidores del factor Xa.

Recientemente, ha aumentado el interés por pequeñas moléculas sintéticas que muestran gran inhibición directa de trombina y factor Xa. Véase, Joseph P. Vacca (Annette M. Doherty, Section Editior), Annual Reports in Medicinal Chemistry, (1998), 33, 81-90.

Aunque las heparinas y coumarinas son anticoagulantes eficaces, todavía no se ha sacado ningún fármaco comercial de las pequeñas moléculas sintéticas; y a pesar de la continua promesa de esta clase de compuestos, sigue existiendo la necesidad de anticoagulantes que actúen selectivamente en el factor Xa o en la trombina, y que, independientemente de la antitrombina III, ejerzan una acción inhibidora poco tiempo después de la administración, preferiblemente por vía oral, y no interfiera con la lisis de coágulos de sangre, requerida para mantener la hemostasis.

La presente invención se refiere al descubrimiento de que los compuestos de la presente invención, como se define más adelante, son potentes inhibidores del factor Xa que pueden tener una gran biodisponibilidad después de la administración oral.

De acuerdo con la invención, se proporciona un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo)

1

en la que

uno de R^{1} y R^{2} es Q^{1}; el otro de R^{1} y R^{2} es Q^{2};

en la que

Q^{1} es 2-piridinilo (que puede llevar un sustituyente metilo, metoxi, metiltio, fluoro o cloro en la posición 5) o 3-piridinilo (que puede llevar un sustituyente metilo, fluoro o cloro en la posición 6); o

Q^{1} es fenilo que puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en las posiciones 3, 4 ó 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, dimetilamino, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, y además, el fenilo puede llevar un sustituyente 2-cloro o 2-fluoro; o

Q^{1} es

2

en la que

-E-G-NH- es -CH_{2}-CH_{2}-NH-, -C(R^{a})=CH-NH-, -C(R^{a})=N-NH-, -N=CH-NH- o -N=N-NH- en las que R^{a} es hidrógeno, fluoro, cloro, bromo o metilo;

Q^{2} es

3

en las que R^{m} es alquilo (C_{1}-C_{4}), ciclohexilo, 4-tetrahidropiranilo, fenilo, 4-piridilo o 2-pirimidinilo;

cuando R^{2} es Q^{1}, entonces R^{3} es H, COOH, N-(metil)bencenosulfonilamino o fenilo (que puede estar sustituido en la posición 3 ó 4 con metilo, cloro o fluoro) y R^{4} es H; y

cuando R^{2} es Q^{2}, entonces R^{3} es H y R^{4} es H, COOH, metilo, N-(metil)bencenosulfonilamino, fenilo no sustituido o fenilo (que puede estar sustituido en la posición 3 o 4 con metilo, cloro o fluoro;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

Un compuesto particular de fórmula I es un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo)

4

en la que

uno de R^{1} y R^{2} es Q^{1}; el otro de R^{1} y R^{2} es Q^{2};

en la que

Q^{1} es fenilo que puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en las posiciones 3, 4 o 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, y además, el fenilo puede llevar un sustituyente 2-cloro o 2-fluoro; o

Q^{1} es

5

en la que

Q^{2} es

\vskip1.000000\baselineskip

6

cuando R^{2} es Q^{1}, entonces R^{3} es H, COOH, N-(metil)bencenosulfonilamino o fenilo (que puede estar sustituido en la posición 3 o 4 con metilo, cloro o fluoro) y R^{4} es H; y

cuando R^{2} es Q^{2}, entonces R^{3} es H y R^{4} es H, COOH, metilo, N-(metil)bencenosulfonilamino, fenilo no sustituido o fenilo que puede estar sustituido en la posición 3 o 4 con metilo, cloro o fluoro;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

Como se usa en este documento, la expresión de un compuesto de fórmula I o la expresión un compuesto de la invención incluye el compuesto y cualquier profármaco convencional del mismo, así como sales farmacéuticamente aceptables de dicho compuesto o profármaco.

Una sal farmacéuticamente aceptable de un agente antitrombótico de la presente invención incluye uno que es una sal de adición de ácidos preparada a partir de un compuesto básico de fórmula I y un ácido que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable, así como una sal que se prepara a partir de un compuesto ácido de fórmula I y una base que proporciona un catión farmacéuticamente aceptable. Por lo tanto, una sal de un compuesto nuevo de fórmula I como se proporciona en este documento preparado con un ácido o una base que da un contraión farmacéuticamente aceptable proporciona un aspecto particular de la invención. Los ejemplos de dichos ácidos y bases se proporcionan en este documento a continuación.

Como aspecto adicional de la invención se proporciona una formulación farmacéutica que comprende junto con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) como se proporciona en cualquiera de las descripciones en este documento.

Además, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I (o sal) inhibidor del factor Xa como se describe en este documento como ingrediente activo en la fabricación de un medicamento para usar en la producción de un efecto anticoagulante o antitrombótico.

Además, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I inhibidor del factor Xa que tiene cualquiera de las definiciones en este documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno tromboembólico.

En esta memoria descriptiva, se usan las siguientes definiciones, a menos que se describa otra cosa: Halo es bromo, cloro o fluoro. Alquilo, alcoxi, etc. denotan grupos tanto lineales como ramificados; aunque la referencia a un radical individual tal como "propilo" abarca solo el radical de cadena lineal ("normal"), denotándose específicamente un isómero de cadena ramificada tal como "isopropilo".

Los valores particulares se muestran a continuación para los radicales, sustituyentes, e intervalos, sólo para ilustración, y no excluyen otros valores definidos u otros valores dentro de intervalos definidos para los radicales y sustituyentes.

Para un grupo alquilo o la porción alquilo de un grupo que contiene alquilo tal como, por ejemplo alcoxi, un valor particular para alquilo (C_{1}-C_{4}) es metilo, etilo, isopropilo, o 2-butilo; y más particularmente es etilo, isopropilo, o 2- butilo. Un valor particular para halo es fluoro o cloro, y más particularmente es fluoro.

Un valor particular para Q^{1} es 5- o 6-indolilo. Un valor más particular para Q^{1} es 6-indolilo. Un valor particular para Q^{2} es 1-(4- piridinil)piperin-4-ilo. Cuando R^{2} es Q^{1}, los valores particulares para R^{3} son H o COOH, y más particularmente H, y para R^{4} es H. Cuando R^{2} es Q^{2}, un valor particular para R^{4} es H y para R^{3} es H.

Un compuesto de fórmula I más particular es uno en el que uno de R^{1} y R^{2} es Q^{1} y el otro de R^{1} y R^{2} es Q^{2};

Q^{1} es

7

en la que

-E-G-NH- es -CH_{2}=CH_{2}-NH-;

Q^{2} es

8

en la que R^{m} es 4-piridilo;

cuando R^{2} es Q^{1}, entonces R^{3} es H o COOH y R^{4} es H; y

cuando R^{2} es Q^{2}, entonces R^{3} es H y R^{4} es H.

Otro compuesto de fórmula I más particular es uno en el que

R^{1} es Q^{2};

R^{2} es Q^{1};

Q^{1} es 6-indolilo;

Q^{2} es 1-(4-piridinil)piperin-4-ilo;

R^{3} es H; y

R^{4} es H.

Un compuesto de fórmula I aún más particular es uno en el que

R^{1} es Q^{1};

R^{2} es Q^{2};

Q^{1} es 6-indolilo;

Q^{2} es 1-(4-piridinil)piperin-4-ilo;

R^{3} es H; y

R^{4} es H.

Se apreciará que ciertos compuestos de fórmula I (o sales o profármacos, etc.) pueden existir en, y aislarse en, formas isoméricas, incluyendo formas tautoméricas, isómeros cis y trans, así como formas ópticamente activas, racémicas o diastereoméricas. Se entenderá que la presente invención abarca un compuesto de fórmula I en cualquiera de las formas tautoméricas o en forma de una mezcla de las mismas; o en forma de una mezcla de diastereómeros, así como en forma de un diastereómero individual, y que la presente invención abarca un compuesto de fórmula I en forma de una mezcla de enantiómeros, así como en forma de un enantiómero individual, cualquiera de dichas mezclas o formas posee propiedades inhibidoras contra el factor Xa, conociéndose bien en la técnica cómo preparar o aislar las formas particulares y cómo determinar las propiedades inhibidoras contra el factor Xa mediante ensayos convencionales que incluyen los descritos más adelante.

Además, un compuesto de fórmula I (o sal o profármaco, etc.) puede mostrar polimorfismo o puede formar un solvato con agua u un disolvente orgánico. La presente invención también abarca cualquier forma polimórfica, cualquier solvato o cualquier mezcla de los mismos.

Un compuesto de fórmula I puede prepararse mediante procedimientos que incluyen procedimientos conocidos en la técnica química para la producción de cualquier compuesto conocido de fórmula I o de compuestos estructuralmente análogos o mediante un nuevo procedimiento descrito en este documento. Un procedimiento para la preparación de un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo), nuevos procedimientos para la preparación de un compuesto de fórmula I y nuevos intermedios para la fabricación de un compuesto de fórmula I definido anteriormente proporcionan más características de la invención y se ilustran mediante los siguientes procedimientos en los que los significados de los radicales genéricos son como se han definido anteriormente, a menos que se especifique otra cosa. Se reconocerá que puede preferirse o ser necesario preparar un compuesto de fórmula I en la que un grupo funcional se protege usando un grupo protector convencional, y después retirar el grupo protector para proporcionar el compuesto de fórmula I.

De esta manera, se proporciona un procedimiento para preparar un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) que se proporciona en cualquiera de las descripciones anteriores que se selecciona entre cualquiera de los descritos en los ejemplos, incluyendo los siguientes.

(A) Para un compuesto de fórmula I en el que R^{1} es Q^{1}, acilar el grupo amino de un compuesto correspondiente de fórmula II

9

usando un ácido correspondiente de fórmula Q^{2}-COOH (III) o un derivado activado del mismo.

Para un ácido carboxílico, un derivado activado típico incluye un éster (particularmente un éster de alquilo inferior tal como un éster de metilo o etilo), un haluro ácido (particularmente el cloruro ácido), y un éster o anhídrido activado (incluyendo el éster de 4-nitrofenilo y un éster o anhídrido activado derivado de un reactivo de acoplamiento).

La acilación puede completarse, por ejemplo, usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1, Parte D.

(B) Para un compuesto de fórmula I en el que R^{2} es Q^{1}, acilar el grupo amino de un compuesto correspondiente de fórmula IV

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usando un ácido correspondiente de fórmula Q^{2}-COOH (III) o un derivado activado del mismo, por ejemplo, usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 1, Parte D.

En lo sucesivo, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando un grupo funcional se protege usando un grupo protector, se retira el grupo protector.

En lo sucesivo, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando se requiere una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, ésta se obtiene haciendo reaccionar la forma básica de un compuesto básico de fórmula I con un ácido que proporciona un contraión fisiológicamente aceptable o la forma ácida de un compuesto ácido de fórmula I con una base que proporciona un contraión fisiológicamente aceptable o la forma ácida de un compuestos ácido de fórmula I con una base que proporcionad un contraión fisiológicamente aceptable.

Como se ha mencionado anteriormente, la invención incluye una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto inhibidor del factor Xa definido por la fórmula I anterior. Un compuesto básico de esta invención posee uno o más grupos funcionales suficientemente básicos para reaccionar con cualquiera de un número de ácidos inorgánicos y orgánicos que proporcionan un contraión fisiológicamente aceptable para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Son ácidos comúnmente empleados para formar sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y similares, y ácidos orgánicos tales como ácido p-toluenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromobencenosulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético y similares. De esta manera, son ejemplos de tales sales farmacéuticamente aceptables sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato monohidrogenofosfato, dihidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formiato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butin-1,4-dioato, hexin-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, sulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, gamma-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metanosulfonato, propanosulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, mandelato y similares. Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables preferidas incluyen las formadas con ácidos minerales tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico y ácido sulfúrico.

Para un compuesto de fórmula I que tiene un resto ácido, tal como un grupo carboxi, una sal farmacéuticamente aceptable puede fabricarse con una base que proporcione un catión farmacéuticamente aceptable, que incluye sales de metales alcalinos (especialmente sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (especialmente calcio y magnesio), sale de aluminio y sales amónicas, así como sales fabricadas a partir de bases orgánicas fisiológicamente aceptables tales como trietilamina, morfolina, piperidina y trietanolamina.

Si no está disponible en el mercado, un material de partida necesario para la preparación de un compuesto de fórmula I puede prepararse mediante un procedimiento que se selecciona entre las técnicas convencionales de la química orgánica, incluyendo sustitución y transformación aromática y heteroaromática, a partir de técnicas que son análogas a las síntesis de compuestos conocidos estructuralmente similares, y técnicas que son análogas a los procedimientos descritos anteriormente o a procedimientos descritos en los Ejemplos. Será obvio para un especialista en la técnica que están disponibles diversas secuencias para la preparación de los materiales de partida.

Los materiales de partida que son nuevos proporcionan otro aspecto de la invención.

Un ejemplo es un compuesto de fórmula II

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en la que Q^{1} y R^{4} tienen los valores que se han definido anteriormente.

Otro ejemplo es un compuesto de fórmula IV

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en la que Q^{1}, R^{3} y R^{4} tienen los valores que se han definido anteriormente.

Los procedimientos selectivos de sustitución, protección y desprotección se conocen bien en la técnica para la preparación de un compuesto tal como uno de fórmula II y IV analizado anteriormente.

Generalmente, un compuesto básico de la invención se aísla mejor en forma de una sal de adición de ácidos. Una sal de un compuesto de fórmula I formada con un ácido tal como uno de los mencionados anteriormente es útil como sal farmacéuticamente aceptable para la administración del agente antitrombótico y para la preparación de una formulación del agente. En el aislamiento y purificación de los compuestos pueden prepararse y usarse otras sales de adición de ácidos.

Como se ha indicado anteriormente, los isómeros y diastereómeros ópticamente activos de los compuestos de fórmula I también se consideran como parte de esta invención. Tales isómeros ópticamente activos pueden prepararse a partir de sus respectivos precursores ópticamente activos mediante los procedimientos descritos anteriormente, o resolviendo las mezclas racémicas. Esta resolución puede realizarse por derivatización con un reactivo quiral seguido de cromatografía o cristalización repetida. La retirada del auxiliar quiral mediante procedimientos convencionales proporciona isómeros sustancial y ópticamente puros de los compuestos de la presente invención o de sus precursores. Otros detalles con respecto a las resoluciones pueden obtenerse en Jacques y col., Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley and Sons, 1981.

Se cree que los compuestos de la invención inhiben selectivamente el factor Xa sobre otras proteinasas y proteínas no enzimáticas implicadas en la coagulación sanguínea sin interferencia apreciable con la capacidad de lisis de coágulos naturales del cuerpo (los compuestos tienen un bajo efecto inhibidor sobre la fibrinolisis). Además, se cree que tal selectividad permite el uso con agentes trombolíticos sin interferencia sustancial con la trombolisis y fibrinolisis.

La invención en otro de sus aspectos proporciona un uso de una dosis eficaz (inhibidora de la coagulación) de un compuesto de fórmula I para la fabricación de un medicamento para inhibir la coagulación en un mamífero.

La inhibición del factor Xa, la inhibición de la coagulación y el tratamiento de un trastorno tromboembólico contemplado por el presente procedimiento incluye tratamiento médico terapéutico y/o profiláctico según sea apropiado.

También, se proporciona un compuesto de fórmula I (o sal) que tiene cualquiera de las definiciones en este documento para usarlo como agente antitrombótico.

Además, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I que tiene cualquiera de las definiciones en este documento para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno tromboembólico.

La invención se refiere al tratamiento, en un ser humano o animal, de una afección en la que se requiere la inhibición del factor Xa. Se espera que los compuestos de la invención sean útiles en mamíferos, incluyendo seres humanos, en el tratamiento o profilaxis de la trombosis e hipercoagulabilidad en la sangre y en los tejidos. Los trastornos en los que los compuestos tienen una gran utilidad son en el tratamiento o profilaxis de trombosis e hipercoagulabilidad en sangre y tejidos. Los trastornos en los que los compuestos tienen una gran utilidad, en el tratamiento y/o profilaxis, incluyen trombosis venosa y embolia pulmonar, trombosis arterial, tal como isquemia miocárdica, infarto de miocardio, angina inestable, apoplejía basada en trombolisis y trombosis arterial periférica. Además, se espera que los compuestos tengan utilidad en el tratamiento o profilaxis de trastornos (enfermedades) ateroescleróticos, tales como enfermedad arterial coronaria, enfermedad arterial cerebral y enfermedad arterial periférica. Además, se espera que los compuestos sean útiles junto con trombolíticos en el infarto de miocardio. Además, se espera que los compuestos tengan utilidad en la profilaxis para la reoclusión después de la trombolisis, angioplastia transluminal percutánea (PTCA) y operaciones de derivación coronaria. Además, se espera que los compuestos tengan utilidad en la prevención de retrombosis después de la microcirugía. Además, se espera que los compuestos sean útiles en el tratamiento anticoagulante con respecto a órganos artificiales y válvulas cardíacas. Además, se espera que los compuestos tengan utilidad en el tratamiento anticoagulante en hemodiálisis y coagulación intravascular diseminada. Otra utilidad esperada es en el aclarado de catéteres y dispositivos mecánicos usados en pacientes in vivo y como anticoagulante para la conservación de la sangre, el plasma y otros productos sanguíneos in vitro. Además, se espera que los compuestos tengan utilidad prevista en otras enfermedades en las que la coagulación de la sangre puede ser un procedimiento de contribución fundamental o una fuente de patología secundaria, tal como cáncer, incluyendo metástasis, enfermedades inflamatorias, incluyendo artritis, y diabetes. El compuesto anticoagulante se administra por vía oral o parenteral, por ejemplo, por infusión intravenosa (iv), inyección intramuscular (im) o por vía subcutánea (sc).

La dosis específica de un compuesto administrado de acuerdo con esta invención para obtener efectos terapéuticos y/o profilácticos se determinará, por supuesto, por las circunstancias particulares que rodean al caso, incluyendo, por ejemplo, el compuesto administrado, la velocidad de administración, la vía de administración y la afección a tratar.

Una dosis diaria típica para cada una de las utilidades anteriores está entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 1000 mg/kg. El régimen de dosificación puede variar, por ejemplo para uso profiláctico puede administrarse una única dosis diaria o pueden ser apropiadas múltiples dosis tales como 3 ó 5 veces al día. En situaciones de cuidados intensivos un compuesto de la invención se administra por infusión iv a una velocidad entre aproximadamente 0,01 mg/kg/h y aproximadamente 20 mg/kg/h y preferiblemente entre aproximadamente 0,1 mg/kg/h y aproximadamente 5 mg/kg/h.

El uso de esta invención también se realiza junto con un agente de lisis de coágulos, por ejemplo, activador de plasminógeno de tejido (t-PA), t-PA modificado, estreptoquinasa o uroquinasa. En los casos en los que se produce la formación de coágulos y se bloquea una arteria o una vena, parcial o totalmente, se emplea normalmente un agente de lisis de coágulos. Un compuesto de la invención puede administrarse antes de o junto con el agente de lisis o después de su uso, y preferiblemente se administra junto con aspirina para prevenir la reaparición de la formación de coágulos.

El uso de esta invención también se practica junto con un antagonista del receptor de glicoproteína plaquetaria (IIb/IIIa), que inhibe la agregación de plaquetas. Un compuesto de la invención puede administrarse antes de o junto con el antagonista de IIb/IIIa o después de su uso para prevenir la aparición o reaparición de la formación de coágulos.

El uso de esta invención también se practica junto con aspirina. Un compuesto de la invención puede administrarse antes de o junto con aspirina o después de su uso para prevenir la aparición o reaparición de la formación de coágulos. Como se ha indicado anteriormente, se administra preferiblemente un compuesto de la presente junto con un agente de lisis de coágulos y aspirina.

Esta invención también proporciona una composición farmacéutica para uso en el procedimiento terapéutico descrito anteriormente. Una composición farmacéutica de la invención comprende una cantidad inhibidora eficaz del factor Xa de un compuesto de fórmula I conjuntamente con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

El ingrediente activo en tales formulaciones comprende del 0,1 por ciento al 99,9 por ciento en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los demás ingredientes de la formulación y no nocivo para el receptor del mismo.

Para la administración oral, el compuesto antitrombótico se formula en cápsulas o comprimidos de gelatina que pueden contener excipientes tales como aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes y similares. Para la administración parenteral, el agente antitrombótico se fórmula en un diluyente farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, solución salina fisiológica (al 0,9 por ciento), dextrosa al 5 por ciento, solución de Ringer y similares.

El compuesto de la presente invención puede formularse en formulaciones de dosificación unitaria que comprenden una dosis entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1000 mg. Preferiblemente, el compuesto está en forma de una sal farmacéuticamente aceptable tal como por ejemplo la sal sulfato, sal acetato o una sal fosfato. Un ejemplo de una formulación de dosificación unitaria comprende 5 mg de un compuesto de la presente invención en forma de una sal farmacéuticamente aceptable en una ampolla de vidrio estéril de 10 ml. Otro ejemplo de una formulación de dosificación unitaria comprende aproximadamente 10 mg de un compuesto de la presente invención en forma de una sal farmacéuticamente aceptable en 20 ml de solución salina isotónica contenida en una ampolla estéril.

Los compuestos pueden administrarse mediante diversas vías incluyendo oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Los compuestos de la presente invención se formulan preferiblemente antes de la administración.

Las presentes composiciones farmacéuticas se preparan mediante procedimientos conocidos usando ingredientes bien conocidos y fácilmente disponibles. Las composiciones de esta invención pueden formularse de forma que proporcionen una liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos en la técnica. En la fabricación de las composiciones de la presente invención, el ingrediente activo normalmente se mezclará con un vehículo, o se diluirá con un vehículo, o se incluirá en un vehículo que puede estar en forma de una cápsula, sello, papel u otro recipiente. Cuando el vehículo sirve como diluyente, éste puede ser un material sólido, semi-sólido o líquido que actúe como vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. De estas manera, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, píldoras, polvos, grageas, sellos, obleas, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, (en forma de un sólido o en un medio líquido), cápsulas de gelatina duras y blandas, supositorios, soluciones inyectables estériles, polvos envasados estériles y similares.

Los siguientes ejemplos de formulación son únicamente ilustrativos y no pretenden limitar de forma alguna el alcance de la invención. "Ingrediente activo", por supuesto, significa un compuesto de acuerdo con la fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Formulación 1

Se preparan cápsulas de gelatina duras usando los siguientes ingredientes:

	Cantidad
	(mg/cápsula)
Ingrediente activo	250 \; \;
Almidón, secado	200 \; \;
Estearato de magnesio	10 \; \;
Total	\overline{460 \ mg}

Formulación 2

Se prepara un comprimido usando los siguientes ingredientes:

	Cantidad
	(mg/comprimido)
Ingrediente activo	250 \; \;
Celulosa, microcristalina	400 \; \;
Dióxido de silicio, de pirólisis	10 \; \;
Ácido esteárico	5 \; \;
Total	\overline{665 \ mg}

Los componentes se mezclan y se comprimen para formar comprimidos que pesan cada uno 665 mg.

Formulación 3

Se prepara una solución en aerosol que contiene los siguientes componentes:

	Peso
Ingrediente activo	0,25
Etanol	29,75
Propulsor 22 (Clorodifluorometano)	70,00
Total	\overline{100,00}

El compuesto activo se mezcla con etanol y la mezcla se añade a una porción del propulsor 22, enfriado a -30ºC y se transfiere a un dispositivo de carga. Después, se introduce la cantidad requerida en un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el resto del propulsor. Después, se ajustan las unidades de válvula al recipiente.

Formulación 4

Se fabrican comprimidos, conteniendo cada uno 60 mg de ingrediente activo, como se indica a continuación:

Ingrediente activo	60 mg
Almidón	45 mg
Celulosa microcristalina	35 mg
Polivinilpirrolidona (en forma de solución al 10% en agua)	4 mg
Carboximetil almidón sódico	4,5 mg
Estearato de magnesio	0,5 mg
Talco	1 mg
Total	\overline{150 mg}

El ingrediente activo, el almidón y la celulosa se pasan a través de un tamiz de malla U.S. Nº 45 y se mezcla meticulosamente. La solución acuosa que contiene polivinilpirrolidona se mezcla con el polvo resultante y después la mezcla se pasa a través de un tamiz de malla U.S. Nº 14. Los gránulos producidos de esta forma se secan a 50ºC y se pasan a través de un tamiz de malla U.S. Nº 18. Después, el carboximetil almidón sódico, estearato de magnesio y talco pasados previamente a través de un tamiz de malla U.S. Nº 60 se añaden a los gránulos que, después de mezclar, se comprimen en una máquina de comprimidos para producir comprimidos que pesan cada uno 150 mg.

Formulación 5

Se fabrican cápsulas, conteniendo cada una 80 mg de ingrediente activo, como se indica a continuación:

Ingrediente activo	80 mg
Almidón	59 mg
Celulosa microcristalina	59 mg
Estearato de magnesio	2 mg
Total	\overline{200 mg}

El ingrediente activo, celulosa, almidón y estearato de magnesio se mezclan, se pasan a través de un tamiz de malla U.S. Nº 45 y se introducen en cápsulas de gelatina duras en cantidades de 200 mg.

Formulación 6

Se fabrican supositorios, conteniendo cada uno 225 mg de ingrediente activo, como se indica a continuación:

Ingrediente activo	225 mg
Glicéridos de ácidos grasos saturados	2.000 mg
Total	\overline{2\mbox{.}225 \ mg}

El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz de malla U.S. Nº 60 y se suspende en los glicéridos de ácidos grasos saturados fundidos previamente usando el calor mínimo necesario. Después, la mezcla se vierte en un molde de supositorio de 2 g de capacidad nominal y se deja enfriar.

Formulación 7

Se fabrican suspensiones, conteniendo cada una 50 mg de ingrediente activo por 5 ml de dosis, como se indica a continuación:

Ingrediente activo	50 mg
Carboximetilcelulosa sódica	50 mg
Jarabe	1,25 ml
Solución de ácido benzoico	0,10 ml
Aroma	q.v.
Color	q.v.
Agua purificada hasta total	5 ml

El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz de malla U.S. Nº 45 y se mezcla con carboximetil celulosa sódica y jarabe para formar una pasta lisa. La solución de ácido benzoico, el aroma y el color se diluyen con una porción del agua y se añade con agitación. Después se añade suficiente agua para producir el volumen requerido.

Formulación 8

Puede prepararse una formulación intravenosa como se indica a continuación:

Ingrediente activo	100 mg
Solución salina isotónica	1.000 ml

La solución de los ingredientes anteriores se administra por vía intravenosa a un sujeto a una velocidad de 1 ml por minuto.

La capacidad de un compuesto de la presente invención para ser un inhibidor eficaz y oralmente activo del factor Xa puede evaluarse en uno o más de los siguientes ensayos o en otros ensayos convencionales conocidos para los especialistas en la técnica.

La inhibición por un compuesto de la invención de una serina proteasa del sistema de coagulación sanguínea humano o del sistema fibrinolítico, así como de tripsina, se determina in vitro para la enzima particular midiendo su afinidad de unión del inhibidor en un en sayo en el que la enzima hidroliza un sustrato cromogénico particular, por ejemplo como se describe en Smith, G. F.; Gifford-Moore, D.; Craft, T. J.; Chirgadze, N.; Ruterbories, K. J.; Lindstrom, T. D.; Satterwhite, J. H. Efegatran: A New Cardiovascular Anticoagulant. New Anticoagulants for the Cardiovascular Patient; Pifarre, R., Ed.; Hanley y Belfus, Inc.: Filadelfia, 1997; págs. 265-300. La afinidad de unión del inhibidor se mide como la constante de asociación aparente Kass que es la constante de equilibrio hipotética para la reacción entre la enzima y el compuesto inhibidor de ensayo (I).

Enzima + I

100

Enzima - I

Kass = \frac{[Enzima - I]}{[(Enzima) \ x \ (I)]}

Convenientemente, la cinética de inhibición enzimática se realiza en placas de poliestireno de 96 pocillos y las velocidades de reacción se determinan a partir de la velocidad de hidrólisis de los sustratos de p-nitroanilina apropiados a 405 nm usando un lector de placas Thermomax de Molecular Devices (San Francisco, CA). Se sigue el mismo protocolo para todas las enzimas estudiadas: 50 \mul de tampón (Tris 0,03 M, NaCl 0,15 M pH 7) en cada pocillo, seguido de 25 \mul de solución inhibidora (en metanol al 100%, o en metanol acuoso al 50% v:v) y 25 \mul de solución enzimática; en un período de dos minutos, se añaden 150 \mul de solución acuosa de sustrato cromogénico (0,25 mg/ml) para empezar la reacción enzimática. Las velocidades de las reacciones de hidrólisis de sustrato cromogénico proporcionan una relación lineal con las enzimas estudiadas de forma que la enzima libre puede cuantificarse en las mezclas de reacción. Los datos se analizan directamente según las velocidades por el programa Softmax para producir cálculos [sin enzima] para las determinaciones de Kass de unión fuerte. Para las determinaciones de Kass aparentes, se usa factor Xa humano 1,34 nM para hidrolizar BzIle-Glu-Gly-Arg-pNa 0,18 mM; se usa trombina humana 5,9 nM o tripsina bovina 1,4 nM para hidrolizar BzPhe-Val-Arg-pNA 0,2 nM; se usa plasmina humana 3,4 nM con HD-Val-Leu-Lys-pNA 0,5 mM; se usa nt-PA humana 1,2 nM con HD-Ile-Pro-Arg-pNA 0,81 mM; y se usa uroquinasa 0,37 nM con piro-gfsGlu-Gly-Arg-pNA 0,30 mM.

Kass se calcula para un intervalo de concentraciones de compuestos de ensayo y el valor medio se indica en unidades de litro por mol. En general, un compuesto inhibidor del factor Xa de fórmula I de la presente invención muestra una Kass de 0,1 a 0,5 x 10^{6} l/mol o mucho mayor. Por ejemplo, se midió un valor de Kass de 2,12 x 10^{6} l/mol para el compuesto del Ejemplo 1.

El inhibidor del factor Xa debe ahorrar preferiblemente la fibrinolisis inducida por uroquinasa, el activador del plasminógeno de tejidos (t-PA) y la estreptoquinasa. Esto será importante para el uso terapéutico de tal agente como un auxiliar para la terapia trombolítica con estreptoquinasa, tp-PA o uroquinasa y para el uso de un agente tal como agente antitrombótico de ahorro de la fibrinólisis endógena (con respecto a t-PA y uroquinasa). Además de la falta de interferencia con la actividad amidasa de las proteasas fibrinolíticas, tal ahorro del sistema fibrinolítico puede estudiarse mediante el uso de coágulos en plasma humano y sus lisis mediante los respectivos activadores del plasminógeno fibrinolíticos.

Materiales

El plasma de perro se obtiene de perros de caza de raza mixta conscientes (cualquier sexo, Butler Farms, Clyde, Nueva York, Estados Unidos) mediante venopunción en citrato al 3,8%. El fibrinógeno se prepara a partir de plasma de perro reciente y el fibrinógeno humano se prepara a partir de sangre humana ACD del día en la fracción I-2 de acuerdo con procedimientos y especificaciones previos. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980); y Smith, y col., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano (98% puro/sin plasmina) es de American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. El radiomarcaje de las preparaciones de fibrinógeno I-2 se realiza como se ha indicado previamente. Smith, y col., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). La uroquinasa se adquiere en Leo Pharmaceuticals, Dinamarca, en forma de 2200 unidades Ploug/vial. La estreptoquinasa se adquiere en Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Somerville, New Jersey.

Procedimientos - Efectos en la Lisis de Coágulos en Plasma Humano por t-pA

Se forman coágulos en plasma humano en microtubos de ensayo añadiendo 50 \mul de trombina (73 unidades NIH/ml) a 100 \mul de plasma humano que contiene 0,0229 \muCi de fibrinógeno marcado con yodo 125. La lisis del coágulo se estudia solapando los coágulos con 50 \mul de uroquinasa o estreptoquinasa (50, 100, o 1000 unidades/ml) e incubando durante 20 horas a temperatura ambiente. Después de la incubación, los tubos se centrifugan en un Beckman Microfuge. Se añaden 25 \mul de sobrenadante a un volumen de 1,0 ml de tampón Tris 0,03 M/NaCl 0,15 M para el recuento gamma. Los controles de recuento en 100% de lisis se obtienen omitiendo la trombina (y tampón de sustitución). Los inhibidores del factor Xa se evalúan por una posible interferencia con la fibrinolisis incluyendo los compuestos en las soluciones revestidas en concentraciones de 1, 5, y 10 \mug/ml. Las aproximaciones aproximadas de los valores de CI_{50} se estiman por extrapolaciones lineales desde los datos a un valor que representará el 50% de la lisis para esa concentración particular de agente fibrinolítico.

Actividad Anticoagulante Materiales

El plasma de perro y el plasma de rata se obtienen de perros de caza de raza mixta conscientes (cualquier sexo, Butler Farms, Clyde, Nueva York, Estados Unidos) o de ratas Sprague-Dawley macho anestesiadas (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, Indiana, Estados Unidos) por venopunción en citrato al 3,8%. El fibrinógeno se prepara a partir de sangre humana ACD del día como la fracción I-2 de acuerdo con procedimientos y especificaciones previos. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980); y Smith, y col., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). El fibrinógeno humano también se adquiere con una pureza del 98%/sin plasmina en American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Los reactivos de coagulación actina, tromboplastina, innovina y plasma humano son de Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida. La trombina bovina de Parke-Davis (Detroit, Michigan) se usa para ensayos de coagulación en plasma.

Procedimientos Determinaciones de anticoagulación

Los procedimientos de ensayos de cogulación son como se han descrito previametne. Smith, y col., Trombosis Research, 50, 163-174 (1988). Se usa un instrumento de coagulación CoAScreener (American LABor, Inc.) para todas las mediciones de ensayos de coagulación. El tiempo de protrombina (PT) se mide añadiendo 0,05 ml de solución salina y 0,05 ml de reactivo Tromboplastina-C o reactivo del factor de tejido humano recombinante (Innovina) a 0,05 ml de plasma de ensayo. El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) se mide por incubación de 0,05 ml de plasma de ensayo con 0,05 ml de reactivo de actina durante 120 segundos seguido de 0,05 ml de CaCl_{2} (0,02 M). El tiempo de trombina (TT) se mide añadiendo 0.05 ml de solución salina y 0.05 ml de trombina (10 unidades NIH/ml) a 0.05 ml de plasma de ensayo. Los compuestos de fórmula I se añaden a plasma humano o animal en un amplio intervalo de concentraciones para determinar los efectos de prolongación en los ensayos APTT, PT y TT. Se realizan extrapo-
laciones lineales para estimar las concentraciones requeridas para doblar el tiempo de coagulación para cada ensayo.

Animales

A las ratas Sprague Dawley macho (350-425 g, Harlan Sprague Dawley Inc., Indianapolis, IN) se les anestesia con xilazina (20 mg/kg, s.c.) y quetamina (120 mg/kg, s.c.) y se mantienen en una manta de agua caliente (37ºC). Se cánula la(s) vena(s) yugular(es) para permitir las infusiones.

Modelo de Derivación Arterio-Venosa

La vena yugular izquierda y la arteria carótida derecha se canulan con 20 cm de longitud de un tubo de polietileno PE 60. Una sección de centro de 6 cm de un tubo más grande (PE 190) con un hilo de algodón (5 cm) en el lumen, se ajusta por fricción entre las secciones más largas para completar el circuito de derivación arterio-venosa. La sangre se hace circular a través de la derivación durante 15 minutos antes de retirar cuidadosamente y pesar el hilo. El peso de un hilo húmedo se resta del peso total del hilo y del trombo (véase J.R. Smith, Br J Pharmacol, 77:29, 1982).

Modelo de FeCl_{3} de lesión arterial

Las arterias carótidas se aíslan mediante una incisión cervical ventral en la línea media. Se coloca un termopar debajo de cada arteria y se registra continuamente la temperatura del vaso en un registrador de gráficos de tiras. Un manguito de tubo (0,058 ID x 0,077 OD x 4 mm, Baxter Med. Grade Silicone), cortado longitudinalmente, se coloca alrededor de cada carótida directamente encima del termopar. Se disuelve hexahidrato de FeCl_{3} en agua y la concentración (20 por ciento) se expresa en términos del peso real de sólo FeCl_{3}. Para lesionar la arteria e inducir trombosis, se pipetean 2,85 \mul en el manguito para lavar la arteria encima de la sonda del termopar. La oclusión arterial se indica por una rápida bajada de la temperatura. El tiempo para la oclusión se proporciona en minutos y representa el tiempo transcurrido entre la aplicación de FeCl_{3} y la rápida bajada de la temperatura del vaso (véase K.D. Kurz, Thromb. Res., 60:269, 1990).

Parámetros de Coagulación

El tiempo de trombina en plasma (TT) y el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) se miden con un fibrómetro. Se toman muestras de sangre de un catéter yugular y se recoge en una jeringa que contiene citrato sódico (3,8%, 1 parte por 9 partes de sangre ). Para medir TT, el plasma de rata (0,1 ml) se mezcla con solución salina (0,1 ml) y trombina bovina (0,1 ml, 30 U/ml en tampón TRIS; Parke Davis) a 37ºC. Para APTT, el plasma (0,1 ml) y la solución APTT (0,1 ml, Organon Teknika) se incuban durante 5 minutos (37ºC) y se añade CaCl_{2} (0,1 ml, 0.025 M) para iniciar la coagulación. Los ensayos se hacen por duplicado y se calcula la media.

Índice de Biodisponibilidad

Los estudios de biodisponibilidad pueden realizarse como se indica a continuación. Los compuestos se administran como soluciones acuosas a ratas Fisher macho, por vía intravenosa (iv) a 5 mg/kg mediante inyección en la vena de la cola y por vía oral (po) a animales en ayunas a 20 mg/kg mediante sonda. Las muestras de sangre en serie se obtienen 5, 30, 120 y 240 minutos después de la dosis siguiendo administración intravenosa y 1, 2, 4 y 6 horas después de la dosificación oral. El plasma se analiza con respecto a la concentración de fármaco usando un procedimiento de HPLC que implica cartuchos C8 Bond Elute (Varion) para la preparación de la muestra y un gradiente de tampón de metanol/acetato amónico 30 nM (pH 4) optimizado para cada compuesto. El % de biodisponibilidad se calcula mediante la siguiente ecuación:

% \ Biodisponibilidad \ oral = \frac{AUC \ po}{AUC \ iv} \ X \ \frac{Dosis \ iv}{Dosis \ po} \ X \ 100

donde AUC es el área bajo la curva calculado a partir del nivel de plasma del compuesto durante el tiempo que transcurre el experimento después de administración oral (AUC po) e intravenosa (AUC iv).

Compuestos

Las soluciones de compuesto se preparan diariamente en solución salina normal y se inyectan en embolada o administran por infusión empezando 15 minutos antes y continuando durante la perturbación experimental que es de 15 minutos en el modelo de derivación arteriovenosa y de 60 minutos en el modelo de FeCl_{3} de lesión arterial y en el modelo de trombolisis espontánea. El volumen de inyección en embolada es de 1 ml/kg para i.v. y de 5 ml/kg para p.o., y el volumen de infusión es de 3 ml/hr.

Estadísticas

Los resultados se expresan como medias +/- SEM. Se usa un análisis de varianza de una vía para detectar diferencias estadísticamente significativas y después se aplica el ensayo de Dunnett para determinar qué medias son diferentes. El nivel de importancia para el rechazo de hipótesis nula de medias iguales es P<0,05.

Animales

Se deja en ayunas a perros macho (Beagles; 18 meses - 2 años; 12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, Nueva York 14516) durante una noche y se les proporciona una dieta de prescripción certificada de purina (Purina Mills, St. Louis, Missouri) 240 minutes después de la dosificación. El agua está disponible ad libitum. La temperatura ambiente se mantiene entre 66-74ºF; 45-50 por ciento de humedad relativa; y un ciclo de luz de 0600-1800 horas.

Modelo Farmacocinético

El compuesto de ensayo se formula inmediatamente antes de la dosificación por disolución en solución salina estéril al 0,9% para una preparación de 5 mg/ml. A los perros se les administra una única dosis de 2 mg/kg de compuesto de ensayo por sonda oral. Se toman muestras de sangre (4,5 ml) de la vena cefálica 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 y 6 horas después de la dosificación. Las muestras se recogen en tubos Vacutainer citados y se mantienen en hielo antes de la reducción a plasma por centrifugación. Las muestras de plasma se analizan por EM HPLC. La concentración en plasma del compuesto de ensayo se registra y se usa para calcular los parámetros farmacocinéticos: constante de velocidad de eliminación, Ke; aclaramiento total, Clt; volumen de distribución, V_{D}; tiempo de concentración máxima del compuesto de ensayo en plasma, Tmax; concentracion máxima del compuesto de ensayo de Tmax, Cmax; semivida en plasma, t0,5; y área bajo la curva, A.U.C.; fracción del compuesto de ensayo absorbido, F.

Modelo Canino de Trombosis de Arteria Coronaria

La preparación e instrumentación quirúrgica de los perros es como se describe en Jackson, y col., Circulation, 82, 930-940 (1990). A perros de caza de raza mixta (de 6-7 meses, cualquier sexo, Butler Farms, Clyde, Nueva York, Estados Unidos) se les anestesia con pentobarbital sódico (30 mg/kg por vía intravenosa, i.v.), se intuban y ventilan con aire. El volumen tidal y las velocidades de respiración se ajustan para mantener el PO2, PCO_{2} y pH sanguíneo en límites normales. Se insertan electrodos de aguja subdérmica para registrar una derivación II ECG.

La vena yugular izquierda y la artería carótida común se aíslan mediante una incisión mediolateral en el lado izquierdo en el cuello. La presión de la sangre arterial (ABP) se mide continuamente con un transductor Millar precalibrado (modelo MPC-500, Millar Instruments, Houston, TX, Estados Unidos) insertado en la arteria carótida. La vena yugular se canula para tomar muestras de sangre durante el experimento. Además, las venas femorales de ambas patas traseras se canulan para la administración del compuesto de ensayo.

Se realiza una toracotomía en el lado izquierdo en el quinto espacio intercostal, y el corazón se suspende en un soporte pericárdico. Un segmento de 1 a 2 cm de la arteria coronaria circunfleja izquierda (LCX) se aísla cerca de la primera ramificación ventricular diagonal principal. Un electrodo anódico de cable con punta de aguja del calibre 26 (recubierto con Teflón, cable de cobre plateado del calibre 30) de 3-4 mm de longitud se inserta en la LCX y se pone en contacto con la superficie de la capa íntima de la arteria (confirmado al final del experimento). El circuito de estimulación se completa colocando el cátodo en un sitio subcutáneo (s.c.). Se coloca un oclusor de plástico ajustable alrededor de la LCX, sobre la región del electrodo. Se coloca una sonda de flujo electromagnética precalibrada (Carolina Medical Electronics, King, NC, Estados Unidos) alrededor de la LCX que está próxima al ánodo para medir el flujo sanguíneo coronario (CBF). El oclusor se ajusta para producir una inhibición del 40-50 por ciento de la respuesta del flujo sanguíneo hiperémico observada después de 10 segundos de oclusión mecánica de la LCX. Todas las medidas hemodinámicas y ECG se registran y se analizan con un sistema de adquisición de datos (modelo M3000, Modular Instruments, Malvern, PA. Estados Unidos).

Formación de Trombos y Regímenes de Administración de Compuestos

Se produce lesión electrolítica de la capa íntima de la LCX aplicando 100 \muA de corriente continua (CC) al ánodo. La corriente se mantiene durante 60 minutos y después se interrumpe independientemente de si el vaso se ha ocluido o no. La formación de trombos se desarrolla de forma espontánea hasta que la LCX está totalmente ocluida (determinado como CBF cero y un aumento en el segmento S-T). La administración de compuestos se inicia después de dejar envejecer el trombo oclusor durante 1 hora. Una infusión de 2 horas de los compuestos de la presente invención en dosis de 0,5 y 1 mg/kg/hora se inicia simultáneamente con una infusión de agente trombolítico (por ejemplo, activador de plasminógeno de tejido, estreptoquinasa, APSAC). Se prosigue con reperfusión durante 3 horas después de la administración del compuesto de ensayo. La reoclusión de las arterias coronarias después de trombolisis satisfactoria se definen como CBF cero que persiste durante al menos 30 minutos.

Hematología y determinaciones del tiempo de sangrado mediante plantilla

Los recuentos de células de sangre entera, hemoglobina y los valores de hematocritos se determinan en una muestra de 40 \mul de sangre citada (3,8%) (1 parte citrato:9 partes sangre) con un analizador hematológico (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner. Mount View, CA, Estados Unidos). Los tiempos de sangrado mediante plantilla en la encía se determinan con un dispositivo de tiempo de sangrado Simplate II (Organon Teknika Durham, N.C., Estados Unidos). El dispositivo se usa para hacer 2 incisiones horizontales en la encía de la mandíbula superior o inferior izquierda del perro. Cada incisión es de 3 mm de ancho x 2 mm de profundidad. Se hacen las incisiones y se usa un cronómetro para determinar durante cuánto tiempo se produce el sangrado. Se usa una gasa de algodón para absorber la sangre que sale de la incisión. El tiempo de sangrado mediante plantilla es el tiempo desde la incisión hasta la interrupción del sangrado. Los tiempos de sangrado se toman justo antes de la administración del compuesto de ensayo (0 minutos), a los 60 minutos en la infusión, al final de la administración del compuesto de ensayo (120 minutos) y al final del experimento.

Todos los datos se analiza por análisis de varianza de una vía (ANOVA) seguido de un ensayo post Hoc t Student-Neuman-Kuels para determinar el nivel de significancia. Se usan medidas ANOVA repetidas para determinar diferencias significativas entre puntos temporales durante los experimentos. Se determina que los valores son estadísticamente diferentes al menos al nivel de p<0.05. Todos los valores son media \pm SEM. Todos los estudios se realizan de acuerdo con los principios directores de la American Physiological Society. Otros detalles con respecto a los procedimientos se describen en Jackson, y col., J. Cardiovasc. Pharmacol., (1993), 21, 587-599.

Las abreviaturas, símbolos y términos usados en los ejemplos tienen los siguientes significados.

Boc = t-butiloxicarbonilo

Calc. = calculado

Cbz = benciloxicarbonilo

DCC = diciclohexilcarbodiimida

DMF = dimetilformamida

DMSO = dimetilsulfóxido

EtOAc = acetato de etilo

Et_{2}O = éter dietílico

EtOH = etanol

Fmoc = 9-fluorenilmetoxi-carbonilo

Fmoc-OSu = N-succinimidil carbonato de 9-fluorenilmetilo

HOAC = ácido acético

HOAt = 1-hidroxi-7-azabenzotriazol

HOBT = 1-hidroxibenzotriazol

HPLC = Cromatografía líquida de alta resolución

EM = Espectro de masas

RP-HPLC = Cromatografía Líquida de Alta Resolución en Fase Inversa

TFA = ácido trifluoroacético

THF = tetrahidrofurano

TLC = cromatografía en capa fina

Se proporcionan los siguientes Ejemplos para describir adicionalmente la invención y no se pretende considerarlos como limitaciones de la misma.

Los valores R_{f} en los ejemplos se determinan mediante cromatografía en capa fina con gel de sílice (Kieselgel 60 F-254) en los siguientes sistemas:

(A) Cloroformo-Metanol-Ácido Acético (135:15:1);

(B) Cloroformo-Alcohol Metílico (9:1);

(C) Cloroformo-Acetato de Etilo (8:2);

(D) Cloroformo-Acetato de Etilo (1:1).

Ejemplo 1 Preparación de 3-[(6-Indolil)carbonil]amino-1-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carbonil]pirrolidina Sal Clorhidrato

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13

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A. 1-Cbz-3-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina

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14

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A una solución de 3-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina (5,0 g, 26,8 mmol) en THF (40 ml) se le añadió trietilamina (3,7 ml, 26,8 mmol), seguido de la adición de cloroformiato de bencilo (3,8 ml, 26,8 mmol) lentamente. Después la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N (100 ml), ácido cítrico 1,5 N (100 ml), y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a sequedad al vacío dando el compuesto del título (7,13 g, 83%).

TLC R_{f} (C) 0,41;

EM 321 (M+H)^{+};

Análisis para C_{17}H_{24}N_{2}O_{4}:

Calculado: C, 63,73; H, 7,55; N, 8,74;

Encontrado: C, 64,01, H, 7,39, N, 8,71.

B. 1-Cbz-3-[(6-indolil)carbonil]aminopirrolidina

15

El compuesto anterior de la Parte A (3,15 g, 9,8 mmol) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (30 ml) y anisol (3,0 ml), y se agitó a 0ºC durante 20 min. La reacción se concentró al vacío sin calentamiento, y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 3,07 g de la sal de amina en TFA.

La sal de amina (3,07 g) se disolvió en EtOAc (200 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo. El sólido (0,6 g, 2,72 mmol) se disolvió en DMF (20 ml) y se agitó a temperatura ambiente. A la solución se le añadió ácido indol-6-carboxílico (0,71 g, 2,72 mmol), HOBt (0,37 g, 2,72 mmol), y DCC (0,56 g, 2,72 mmol). La reacción se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. El precipitado resultante se retiró por filtración, y las aguas madre se concentraron al vacío hasta dar un aceite. El aceite se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (0,53 g, 53%).

TLC R_{f} (D) 0,21;

EM 364 (M+H)^{+};

Análisis para C_{21}H_{21}N_{3}O_{3}:

Calculado: C, 69,41; H, 5,82; N, 11,56;

Encontrado: C, 69,37, H, 6,08, N, 11,50.

C. 1-Cbz-3-[[1-(t-butiloxicarbonil)indol-6-il]carbonil]-aminopirrolidina

16

El compuesto sólido bruto amorfo de la Parte B (0,99 g, 2,72 mmol) se disolvió en CH_{3}CN (20 ml) y CH_{2}Cl_{2} (5 ml). A la solución se le añadió 4-dimetilaminopiridina (0,33 g, 2,72 mmol), diisopropiletilamina (0,47 ml, 2,72 mmol), y dicarbonato de di-terc-butilo (0,66 ml, 2,86 mmol). Después la mezcla de reacción se agitó durante 24 horas, la mezcla de reacción se concentró al vacío hasta dar un aceite. El aceite se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (1,25 g, 99%).

TLC R_{f} (D) 0,62;

EM 464 (M+H)^{+};

Análisis para C_{26}H_{29}N_{3}O_{5}:

Calculado: C, 67,37; H, 6,31; N, 9,07;

Encontrado: C, 67,66; H, 6,26; N, 9,22.

D. Clorhidrato de 3-[(6-indolil)carbonil]amino-1-[[1-(4-piridinilpiperidin-4-il]carbonil]pirrolidina

El compuesto sólido bruto amorfo de la Parte C (1,25 g, 2,69 mmol), disuelto en etanol (100 ml) y HCl 1 N (2,7 ml, 2,69 mmol), se hidrogenó en presencia de catalizador de Pd al 5%/C (0,30 g) a temperatura y presión ambiente. Una vez completada la reacción, el catalizador se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se secó durante una noche. El sólido se trituró con Et_{2}O, se filtró y se secó dando 3-[[1-(t-butiloxicarbonil)indol-6-il]carbonilamino]pirrolidina sal clorhidrato (0,93 g).

En un matraz diferente se suspendió ácido [1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carboxílico (0,76 g, 3,69 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml), y se añadió cloruro de tionilo (0,4 ml, 5,53 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 2 h, y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se añadió a una solución que contenía la sal clorhidrato anterior (0,93 g), diisopropiletilamina (0,43 ml, 2,46 mmol), y piridina (3 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. La solución resultante se concentró al vacío y se secó durante una noche dando un aceite (2,53 g). El aceite (2,53 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (20 ml), anisol (2,0 ml) y se agitó a 0ºC (30 min). La reacción se concentró al vacío sin calentamiento, y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 1,65 g del compuesto del título. Los 1,65 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 5% al 40%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron dando el compuesto del título puro en forma de un sólido blanco (0,747 g, 56%).

EM 418 (M+H)^{+}.

Ejemplo 2 Preparación de 3S-[(6-Indolil)carbonil]amino-1-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carbonil]pirrolidina Sal Diclorhidrato

17

A. Ácido 1-t-butiloxicarbonilindol-6-carboxílico

18

A una suspensión de ácido indol-6-carboxílico (2,5 g, 15,5 mmol) en CH_{3}CN (5 ml) y DMF (20 ml) se le añadió 4-dimetilaminopiridina (1,9 g, 15,5 mmol), diisopropiletilamina (2,7 ml, 15,5 mmol), y dicarbonato de di-terc-butilo (3,7 ml, 16,3 mmol). Después la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente, el disolvente de reacción se retiró al vacío; y el residuo se suspendió en NaHCO_{3} 1 N (100 ml) y Et_{2}O (100 ml). La fase acuosa se separó y se extrajo con Et_{2}O (2 X 200 ml). La fase acuosa se acidificó hasta pH 2,5 con HCl 5 N y se extrajo con EtOAc (500 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a sequedad al vacío dando el compuesto del título (2,35 g, 58%).

TLC R_{f} (B) 0,49;

EM 262 (M+H)^{+};

Análisis para C_{14}H_{15}NO_{4}:

Calculado: C, 64,36; H, 5,79; N, 5,36;

Encontrado: C, 66,69, H, 5,43, N, 6,23.

B. 1-Cbz-3S-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina

19

A una solución de 3S-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina (5,0 g, 26,8 mmol) en THF (40 ml) se le añadió trietilamina (3,7 ml, 26,8 mmol), seguido de la adición de cloroformiato de bencilo (3,8 ml, 26,8 mmol) lentamente. Después la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} 1 N (100 ml), ácido cítrico 1,5 N (100 ml), y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a sequedad al vacío dando el compuesto del título (7,13 g, 83%).

TLC R_{f} (C) 0,41;

EM 321 (M+H)^{+};

Análisis para C_{17}H_{24}N_{2}O_{4}:

Calculado: C, 63,73; H, 7,55; N, 8,74;

Encontrado: C, 64,01, H, 7,39, N, 8,71.

C. 1-Cbz-3S-[[1-(t-butiloxicarboxi)indol-6-il]carbonil]aminopirrolidina

20

A una solución del compuesto de la Parte B (6,95 g, 21,7 mmol) en HOAc glacial (40 ml) se le añadió anisol (4 ml), y se burbujeó HCl gaseoso en la reacción durante 20 min. El disolvente de reacción se retiró al vacío y el residuo se trituró con Et_{2}O (200 ml). El sólido se filtró y se secó dando 5,7 g de sal clorhidrato de 1-Cbz-3S-aminopirrolidina.

A una solución de la sal clorhidrato (0,49 g, 1,91 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió ácido 1-t-butiloxicarbonilindol-6-carboxílico (0,5 g, 1,91 mmol), diisopropiletilamina (0,33 ml, 1,91 mmol), HOBt (0,26 g, 1,91 mmol), y DCC (0,4 g, 1,91 mmol). La reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. El precipitado resultante se retiró por filtración, y las aguas madre se concentraron al vacío hasta dar un aceite. El aceite resultante se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (0,87 g, 98%).

TLC R_{f} (D) 0,64;

EM 464 (M+H)^{+}.

D. Diclorhidrato de 3S-[(6-indolil)carbonil]amino-1-[[1-(4-piridinil)-piperidin-4-il]carbonil]pirrolidina

El compuesto sólido bruto amorfo de la Parte C (0,69 g, 1,49 mmol), disuelto en etanol (80 ml) y HCl 1 N (1,5 ml, 1,53 mmol), se hidrogenaron en presencia de catalizador Pd al 10%/C (0,35 g) a temperatura y presión ambiente. Una vez completada la reacción, el catalizador se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se secó durante una noche. El sólido se trituró con Et_{2}O, se filtró y se secó dando la sal clorhidrato (0,44 g).

En un matraz diferente se suspendió el compuesto ácido [1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carboxílico (0,18 g, 0,86 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml), y se le añadió cloruro de tionilo (0,94 ml, 1,29 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 2 h y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se añadió a una solución que contenía la sal clorhidrato (0,21 g, 0,57 mmol), diisopropiletilamina (0,1 ml, 0,57 mmol), y piridina (2 ml). La reacción se agitó durante 48 h a temperatura ambiente. La solución resultante se concentró al vacío y se secó durante una noche dando un aceite (0,63 g). El aceite (0,63 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (10 ml), anisol (1,0 ml) y se agitó a 0ºC (30 min). La reacción se concentró al vacío sin calentamiento y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico y se secó al vacío dando 0,34 g del compuesto del título. Los 0,34 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 5% al 35%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron dando el compuesto del título puro en forma de un sólido blanco (0,095 g, 37%).

EM 418 (M+H)^{+};

Análisis para C_{24}H_{27}N_{5}O_{2}-2 HCl:

Calculado: C, 58,78; H, 5,96; N,14, 28;

Encontrado: C, 60,95, H, 6,31, N, 14,71.

Ejemplo 3 Preparación de 3R-[(6-Indolil)carbonil]amino-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carbonil] pirrolidina Sal Diclorhidrato

21

A. Ácido 1-t-butiloxicarbonilindol-6-carboxílico

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 2A.

B. 1-Cbz-3R-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina

22

\vskip1.000000\baselineskip

A una solución de 1-Cbz-3R-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina (5,0 g, 26,8 mmol) en THF (40 ml) se le añadió trietilamina (3,7 ml, 26,8 mmol), seguido de la adición de cloroformiato de bencilo (3,8 ml, 26,8 mmol) lentamente. Después la mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} 1 N (100 ml), ácido cítrico 1,5 N (100 ml), y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a sequedad al vacío dando el compuesto del título (7,39 g, 86%).

TLC R_{f} (C) 0,41;

EM 321 (M+H)^{+};

Análisis para C_{17}H_{24}N_{2}O_{4}:

Calculado: C, 63,73; H, 7,55; N, 8,74;

Encontrado: C, 63,51, H, 7,43, N, 8,65.

C. 1-Cbz-3R-[[1-(t-butiloxicarbonil)indol-6-il]-carbonil]aminopirrolidina

23

A una solución del compuesto de la Parte B (7,21 g, 22,5 mmol) en HOAc glacial (40 ml) se le añadió anisol (4 ml), y se burbujeó HCl gaseoso en la reacción durante 20 min. El disolvente de reacción se retiró al vacío, y el residuo se trituró con Et_{2}O (200 ml). El sólido se filtró y se secó dando 5,9 g de sal clorhidrato de 1-Cbz-3R-aminopirrolidina. A una solución de la sal clorhidrato (0,49 g, 1,91 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió el compuesto de la Parte A (0,5 g, 1,91 mmol), diisopropiletilamina (0,33 ml, 1,91 mmol), HOBt (0,26 g, 1,91 mmol), y DCC (0,4 g, 1,91 mmol). La reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. El precipitado resultante se retiró por filtración, y las aguas madre se concentraron al vacío hasta dar un aceite. El aceite resultante se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (0,88 g, 99%).

TLC R_{f} (D) 0,64;

EM 464 (M+H)^{+}.

D. Diclorhidrato de 3 R-[3-[(6-indolil)carbonil]amino-1-[1-(4-piridinil)-piperidin-4-il]carbonil]pirrolidina

El compuesto sólido bruto amorfo de la Parte C (0,71 g, 1,53 mmol), disuelto en etanol (80 ml) y HCl 1 N (1,5 ml, 1,53 mmol), se hidrogenó en presencia de catalizador de Pd al 10%/C (0,28 g) a temperatura y presión ambiente. Una vez completada la reacción, el catalizador se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se secó durante una noche. El sólido triturado con Et_{2}O, se filtró y se secó dando la sal clorhidrato de 3R-[(1-t-butiloxicarbonil)indol-6-ilcarbonil]aminopirrolidina (0,43 g).

En un matraz diferente se suspendió el compuesto ácido [1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carboxílico (0,18 g, 0,86 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml), y se le añadió cloruro de tionilo (0,94 ml, 1,29 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 2 h, y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se añadió a una solución que contenía la sal clorhidrato anterior (0,21 g, 0,57 mmol), diisopropiletilamina (0,1 ml, 0,57 mmol), y piridina (2 ml). La reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. La solución resultante se concentró al vacío y se secó durante una noche dando un aceite (0,58 g). El aceite (0,58 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (15 ml) y anisol (1,5 ml), y se agitó a 0ºC (30 min). La reacción se concentró al vacío sin calentamiento y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico y se secó al vacío dando 0,31 g del compuesto del título. Los 0,31 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 5% al 35%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron dando el compuesto del título puro en forma de un sólido blanco (0,078 g, 3%).

EM 418 (M+H)^{+};

Análisis para C_{24}H_{27}N_{5}O_{2}-2 HCl:

Calculado: C, 59,96; H, 5,96; N, 14,28;

Encontrado: C, 59,96, H, 6,29, N, 14,57.

Ejemplo 4 Preparación de Diclorhidrato de 3-[(5-bencimidazolil)carbonil]amino-1-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carbonil]pirrolidina

\vskip1.000000\baselineskip

24

\vskip1.000000\baselineskip

A. Ácido 1-t-butiloxicarbonilbencimidazol-5-carboxílico

\vskip1.000000\baselineskip

25

\vskip1.000000\baselineskip

A una suspensión de ácido bencimidazol-5-carboxílico (5,0 g, 30,8 mmol) en DMF (50 ml) se le añadió 4-dimetilaminopiridina (3,77 g, 30,8 mmol), diisopropiletilamina (5,37 ml, 30,8 mmol), y dicarbonato de di-terc-butilo (7,5 ml, 32,4 mmol). La mezcla de reacción se calentó inicialmente a 60ºC durante 30 min y entonces se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante 24 h. El disolvente de reacción se retiró al vacío y el residuo se suspendió en NaHCO_{3} 1 N (100 ml) y Et_{2}O (100 ml). La fase acuosa se separó y se extrajo con Et_{2}O (2 X 200 ml). La fase acuosa se acidificó hasta pH 2,8 con HCl 5 N y se extrajo con EtOAc (500 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se concentró a sequedad al vacío dando el compuesto del título (5,6 g, 70%).

TLC R_{f} (B) 0,52;

EM 263 (M+H)^{+}.

B. 1-Cbz-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina

El compuesto del título puede prepararse de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1A.

C. 1-Cbz-3-[[1-(t-butiloxicarbonil)bencimidazol-5-il]-carbonil]aminopirrolidina

26

A una solución del compuesto de la Parte B (6,95 g, 21,7 mmol) en HOAc glacial (40 ml) se le añadió anisol (4 ml), y se burbujeó HCl gas en la reacción durante 20 min. El disolvente de reacción se retiró al vacío, y el residuo se trituró con Et_{2}O (200 ml). El sólido se filtró y se secó dando 5,7 g de la sal clorhidrato de 1-Cbz-3-aminopirrolidina.

A una solución de la sal clorhidrato (0,49 g, 1,91 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió ácido 1-t-butiloxicarbonilbencimidazol-5-carboxílico (0,5 g, 1,91 mmol), diisopropiletilamina (0,33 ml, 1,91 mmol), HOBt (0,26 g, 1,91 mmol), y DCC (0,4 g, 1,91 mmol). La reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. El precipitado resultante se retiró por filtración, y las aguas madre se concentraron al vacío hasta dar un aceite. El aceite resultante se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (0,78 g, 88%).

TLC R_{f} (B) 0,64;

D. Diclorhidrato de 3-[(5-bencimidazolil)carbonil]amino-1-[[1-(4-pirdinil)piperidin-4-il]carbonil]pirrolidina

El sólido bruto amorfo del compuesto de la Parte C (0,75 g, 1,61 mmol), disuelto en etanol (80 ml) y HCl 1 N (1,6 ml, 1,61 mmol), se hidrogenó en presencia de catalizador de Pd al 5%/C (0,53 g) a temperatura y presión ambiente. Una vez completada la reacción, el catalizador se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se secó durante una noche. El sólido se trituró con Et_{2}O, se filtró y se secó dando la sal clorhidrato de 3-[[1-(t-butiloxi-carbonil)bencimidazol-5-il]carbonil]aminopirrolidina (0,44 g).

En un matraz diferente se añadieron CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y cloruro de tionilo (0,94 ml, 1,29 mmol) a ácido 1-(4-piridinil)piperidin-4-ilcarboxílico (0,18 g, 0,86 mmol) suspendido en CH_{2}Cl_{2} (10 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h y el disolvente se retiró al vacío. El aceite resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (20 ml); y se le añadió la sal clorhidrato (0,21 g, 0,57 mmol) anterior, seguido de diisopropil etil amina (0,1 ml, 0,57 mmol) y piridina (3 ml). La reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente, y el disolvente se retiró al vacío dando un sólido pardo (0,49 g).

El sólido (0,49 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (15 ml), anisol (1,5 ml) y se agitó a 0ºC durante 20 min. La reacción se concentró al vacío sin calentamiento y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 0,49 g del compuesto del título bruto. Los 0,49 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 2% al 25%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron dando el compuesto del título puro en forma de un sólido blanco (0,073 g, 9%).

EM 419 (M+H)^{+};

Análisis para C_{23}H_{26}N_{6}O_{2}\cdot2 HCl\cdot1,5 H_{2}O:

Calculado: C, 53,29; H, 6,03; N, 16,21;

Encontrado: C, 53,30, H, 6,15, N, 16,00.

Ejemplo 5 Preparación de Diclorhidrato 3-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]-carbonil]amino-1-[(6-indolil)carbonil]pirrolidina

27

A. Ácido 1-t-butiloxicarbonilindol-6-carboxílico

B. 1-Cbz-3-(t-butiloxicarbonil)aminopirrolidina

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1A.

C. 1-Cbz-3-[(9-fluorenil)metoxicarbonil]aminopirrolidina

28

A una solución del compuesto de la Parte B (6,95 g, 21,7 mmol) en HOAc glacial (40 ml) se le añadió anisol (4 ml) y se burbujeó HCl gas en la reacción durante 20 min. El disolvente de reacción se retiró al vacío, y el residuo se trituró con Et_{2}O (200 ml). El sólido se filtró y se secó dando 5,7 g de la sal clorhidrato de 1-Cbz-3-aminopirrolidina. A una solución de la sal clorhidrato (1,5 g, 5,8 mmol) en dioxano (20 ml) se le añadió agua (20 ml), Fmoc-OSu (1,97 g, 5,84 mmol) y carbonato sódico (0,61 g, 5,84 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se diluyó con EtOAc (200 ml). La solución resultante se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (2,6 g, 99%).

TLC R_{f} (C) 0,44;

EM 443 (M+H)^{+};

Análisis para C_{27}H_{26}N_{2}O_{4}:

Calculado: C, 73,29; H, 5,92; N, 6,33;

Encontrado: C, 73,27, H, 6,01, N, 6,50.

D. 3-[(Fluorenil)metoxicarbonil]amino-1-[[1-(t-butiloxi-carbonil)indol-6-il]carbonil]pirrolidina

29

El sólido compuesto de la Parte C (2,58 g, 5,8 mmol), disuelto en etanol (125 ml) y HCl 1 N (5,8 ml, 5,8 mmol), se hidrogenó en presencia de catalizador de Pd al 5%/C (0,7 g) a temperatura y presión ambiente. Una vez completada la reacción, el catalizador se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se secó durante una noche. El sólido triturado con Et_{2}O, se filtró y se secó dando la sal clorhidrato de 3-[(fluorenil)metoxicarbonil]amino-pirrolidina (1,65 g).

A una solución de la sal clorhidrato (0,66 g, 1,91 mmol) en DMF (20 ml) se le añadió el compuesto de la Parte A (0,5 g, 1,91 mmol), diisopropiletilamina (0,33 ml, 1,91 mmol), HOBt (0,26 g, 1,91 mmol), y DCC (0,4 g, 1,91 mmol). La reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. El precipitado resultante se retiró por filtración, y las aguas madre se concentraron al vacío hasta dar un aceite. El aceite resultante se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO_{3} 1 N, agua, ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (0,73 g, 69%).

TLC R_{f} (D) 0,40.

E. Diclorhidrato de 3-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carbonil]amino-1-[(6-indolil)carbonil]pirrolidina

El compuesto sólido bruto amorfo de la Parte D (0,7 g, 1,27 mmol) se disolvió en piperidina al 20% en DMF (20 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 25 min. Una vez completada la reacción la solución se concentró al vacío. El sólido se trituró con hexano, se filtró y se secó dando 1-[1-(t-butiloxicarbonil)indol-6-ilcarbonil]-3-aminopirrolidina libre (0,39 g).

En un matraz diferente se suspendió el compuesto ácido [1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carboxílico (0,21 g, 1,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml), y se le añadió cloruro de tionilo (0,11 ml, 1,5 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo (2 h) y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se añadió a una solución que contenía la base libre (0,22 g, 0,67 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (15 ml) y piridina (3 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 48 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se secó durante una noche dando un aceite (0,49 g).

El aceite (0,49 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (20 ml), anisol (2,0 ml) y se agitó a 0ºC durante 25 min. La reacción se concentró al vacío sin calentamiento y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 0,49 g del compuesto del título. Los 0,49 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 5% al 40%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron dando el compuesto del título puro en forma de un sólido blanco (0,050 g, 2%).

EM 418 (M+H)^{+};

Análisis para C_{24}H_{27}N_{5}O_{2}\cdot2 HCl\cdot0,5 H_{2}O:

Calculado: C, 57,72; H, 6,05; N, 14,02;

Encontrado: C, 57,14, H, 5,76, N, 13,76.

Ejemplo 6 Preparación de 3S-[(6-Indolil)carbonil)]amino-1-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]metoxicarbonil]pirrolidina

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30

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A. Ácido 1-t-butiloxicarbonilindol-6-carboxílico

El compuesto del título se preparó mediante los procedimientos descritos en el Ejemplo 2A.

B. 1-Cbz-3S-(t-Butiloxicarbonil)aminopirrolidina

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 2B.

C. 1-Cbz-3S-[[1-(t-Butiloxicarbonil)indol-6-il]carbonil]aminopirrolidina

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 2C.

D. 3S-[(6-Indolil)carbonil)]amino-1-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]metoxicarbonil]pirrolidina

El compuesto sólido bruto amorfo de la Parte C (0,69 g, 1,5 mmol), disuelto en etanol (80 ml) y HCl 1 N (1,5 ml, 1,5 mmol) se hidrogenó en presencia de catalizador de Pd al 10%/C (0,3 g) a temperatura y presión ambiente. Una vez completada la reacción, el catalizador se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se secó durante una noche. El sólido se trituró con Et_{2}O, se filtró y se secó dando la sal clorhidrato de 3S-[[1-(t-butiloxicarbonil)- indol-6-il]carbonil]aminopirrolidina (0,44 g).

En un matraz diferente a CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se le añadió fosgeno (20% en tolueno, 0,28 ml, 0,55 mmol), y la solución se agitó a temperatura ambiente. Se añadió 1-(4-piridinil)-piperidina-4-metanol (0,11 g, 0,55 mmol) suspendido en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 min; después se le añadió la sal clorhidrato (0,2 g, 0,55 mmol) anterior, seguida de trietilamina (0,08 ml, 0,55 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h, y el disolvente se retiró al vacío dando un sólido pardo (0,47 g).

El sólido (0,47 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (15 ml) y anisol (1,5 ml), y se agitó a 0ºC durante 25 min. La mezcla de reacción se concentró al vacío sin calentamiento, y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 0,38 g del compuesto del título. Los 0,38 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 2% al 30%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron dando el compuesto del título puro en forma de un sólido blanco (0,044 g, 2%).

EM 448 (M+H)^{+};

Análisis para C_{25}H_{29}N_{5}O_{3}\cdot2 HCl:

Calculado: C, 57,69; H, 6,00; N,13,46;

Encontrado: C, 57,50, H, 6,05, N, 13,16.

Ejemplo 7 Preparación de Ácido (2S,4S)-4-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]-carbonil]amino-1-[(6-indolil)carbonil]pirrolidina-2-carboxílico

31

A. Ácido 1-t-butiloxicarbonilindol-6-carboxílico

B. Ácido (2S,4S)-4-[[(9-Fluorenil)metoxi]carbonil]amino-[[1-(t-butiloxicarbonil)indol-6-il]carbonil]pirrolidina-2-carboxílico

32

Se puso ácido (2S,4S)-4-(Fmoc-amino)-1-Boc-pirrolidina-2-carboxílico (0,5 g, 1,1 mmol) en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (20 ml) y anisol (2,0 ml), y se agitó a 0ºC durante 20 min. La reacción se concentró al vacío sin calentamiento, y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando (0,5 g,97%) de la sal bruta en TFA del ácido (2S,4S)-4-(Fmoc-amino)pirrolidina-2-carboxílico.

En un matraz diferente se suspendió el compuesto del Ejemplo 7, Parte A (0,14 g, 0,54 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml), y se le añadió piridina (0, 044 ml, 0,54 mmol). A la mezcla de reacción se le añadió cloruro de oxalilo (0,47 ml, 0,54 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 min. El disolvente de reacción se retiró al vacío. El aceite resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y DMSO (10 ml) y se añadió a una solución de la sal TFA anterior (0,25 g, 0,55 mmol), CH_{2}Cl_{2} (5 ml), y piridina (0,13 ml, 1,6 mmol). Después la mezcla de reacción se agitó durante 4 h, el disolvente de reacción se retiró al vacío. El aceite resultante se disolvió en EtOAc (250 ml) y se lavó secuencialmente con ácido cítrico 1,5 N, y agua. La fase orgánica se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío hasta dar un sólido amorfo del compuesto del título bruto (0,13 g, 39%).

C. Ácido (2S,4S)-4-[[1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carbonil]-mino-1-[(6-indolil)carbonil]pirrolidina-2-carboxílico

El sólido bruto amorfo del compuesto de la Parte B (0,13 g, 0,22 mmol) se disolvió en piperidina al 20% en DMF (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 25 min. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 0,08 g de ácido (2S,4S)-4-amino-1-[1-(t-butiloxicarbonil)indol-il]carbonilpirrolidina-2-carboxílico bruto.

En un matraz diferente se suspendió el compuesto ácido [1-(4-piridinil)piperidin-4-il]carboxílico (0,07 g, 0,32 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml), y se le añadió cloruro de tionilo (0,04 ml, 0,48 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 h y el disolvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y se añadió a una solución que contenía la amina anterior (0,08 g, 0,21 mmol) y piridina (3 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. La solución resultante se concentró al vacío y se secó durante una noche dando un aceite (0,08 g). El aceite (0,08 g) se puso en un matraz que contenía ácido trifluoroacético (15 ml), anisol (1,5 ml) y se agitó a 0ºC durante 30 min. La mezcla de reacción se concentró al vacío sin calentamiento y se le añadió éter dietílico (100 ml). El sólido resultante se filtró, se lavó con éter dietílico, y se secó al vacío dando 0,2 g del compuesto del título. Los 0,2 g de producto bruto se purificaron usando una columna cromatográfica de 5 x 25 cm con resina C18, y se usó un gradiente de concentraciones en aumento de HCl al 0,01%/CH_{3}CN (del 2% al 40%) para eluir el producto de la columna. Las fracciones se recogieron y se combinaron en base al perfil analítico por RP-HPLC y se liofilizaron para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,006 g, 6%).

Claims

1. Un compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo)

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33

en la que

uno de R^{1} y R^{2} es Q^{1}; el otro de R^{1} y R^{2} es Q^{2};

en la que

Q^{1} es fenilo que puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en las posiciones 3, 4 o 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, dimetilamino, amino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, y además, el fenilo puede llevar un sustituyente 2-cloro o 2-fluoro; o

Q^{1} es

34

en la que

Q^{2} es

35

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

2. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo)

36

en la que

uno de R^{1} y R^{2} es Q^{1}; el otro de R^{1} y R^{2} es Q^{2};

en la que

Q^{1} es fenilo que puede llevar uno, dos o tres sustituyentes en las posiciones 3, 4 o 5 seleccionados independientemente entre halo, ciano, carbamoilo, aminometilo, metilo, metoxi, difluorometoxi, hidroximetilo, formilo, vinilo, dimetilamino, hidroxi y 3,4-metilendioxi, y además, el fenilo puede llevar un sustituyente 2-cloro o 2-fluoro; o

Q^{1} es

37

en la que

Q^{2} es

38

cuando R^{2} es Q^{2}, entonces R^{3} es H y R^{4} es H, COOH, metilo, N-(metil)bencenosulfonilamino, fenilo no sustituido o fenilo que puede estar sustituido en la posición 3 ó 4 con metilo, cloro o fluoro;

o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula I.

3. El compuesto de la reivindicación 1 ó 2 en el que para un grupo alquilo o la porción alquilo de un grupo que contiene alquilo, alquilo (C_{1}-C_{4}) es metilo, etilo, isopropilo o 2-butilo; y halo es bromo, cloro o fluoro.

4. El compuesto de la reivindicación 3 en el que para un grupo alquilo o la porción alquilo de un grupo que contiene alquilo (C_{1}-C_{4}) es etilo, isopropilo o 2-butilo; y halo es fluoro o cloro.

5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 2-4 en la que uno de R^{1} y R^{2} es Q^{1} y el otro de R^{1} y R^{2} es Q^{2};

Q^{1} es

39

en la que

-E-G-NH- es -CH_{2}=CH_{2}-NH-;

Q^{2} es

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40

en la que R^{m} es 4-piridilo;

cuando R^{2} es Q^{1}, entonces R^{3} es H o COOH y R^{4} es H; y

cuando R^{2} es Q^{2}, entonces R^{3} es H y R^{4} es H.

6. El compuesto de la reivindicación 2 en el que

R^{1} es Q^{2};

R^{2} es Q^{1};

Q^{1} es 6-indolilo;

Q^{2} es 1-(4-piridinil)piperin-4-ilo;

R^{3} es H; y

R^{4} es H.

7. El compuesto de la reivindicación 2 en el que

R^{1} es Q^{1};

R^{2} es Q^{2};

Q^{1} es 6-indolilo;

Q^{2} es 1-(4-piridinil)piperin-4-ilo;

R^{3} es H; y

R^{4} es H.

8. La sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 que es una sal de adición de ácidos preparada a partir de un compuesto básico de fórmula I y un ácido que proporciona un anión farmacéuticamente aceptable o una sal que se prepara a partir de un compuesto ácido de fórmula I y una base que proporciona un catión farmacéuticamente aceptable.

9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 junto con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

10. Un procedimiento para preparar un nuevo compuesto de fórmula I (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo)

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41

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de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 que se selecciona entre

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42

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43

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usando un ácido correspondiente de fórmula Q^{2}-COOH (III) o un derivado activado del mismo;

donde, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando un grupo funcional se protege usando un grupo protector, retirar el grupo protector;

donde, para cualquiera de los procedimientos anteriores, cuando se necesita una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, se obtiene haciendo reaccionar la forma básica de un compuesto básico de fórmula I con un ácido dando un contraión fisiológicamente aceptable o la forma ácida de un compuesto ácido de fórmula I con una base dando un contraión fisiológicamente aceptable ;

y donde, a menos que se especifique otra cosa, Q^{1}, Q^{2}, R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen los valores definidos en la reivindicación 1 ó 2.

11. Un compuesto de fórmula II

44

en la que Q^{1} y R^{4} tienen los valores descritos en la reivindicación 2.

12. Un compuesto de fórmula IV

45

en la que R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen los valores descritos en la reivindicación 2.

13. Un compuesto de fórmula I (o sal) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para usar como agente antitrombótico.