ES2252995T3

ES2252995T3 - Procedimientos de produccion de esteres de micofenolato.

Info

Publication number: ES2252995T3
Application number: ES99964770T
Authority: ES
Inventors: Anindya Sircar; Anand Khedkar; Madhav Kulkarni; Shrikumar Suryanarayan; Madhavan Sridharan; Poorpanapranja Acharaya; Ganesh Samvasivam; Ramakrishnan Melarkode
Original assignee: Biocon Ltd
Current assignee: Biocon Ltd
Priority date: 1998-12-09
Filing date: 1999-12-09
Publication date: 2006-05-16
Anticipated expiration: 2019-12-09
Also published as: WO2000034503A2; CA2354554C; EP1137795B1; ATE307892T1; DK1137795T3; WO2000034503A3; US6709846B1; CA2354554A1; DE69928002D1; EP1137795A2; AU3073200A; DE69928002T2; IN188985B

Abstract

Un método para la producción de micofenolato mofetilo, que consiste en la reacción del ácido micofenólico con un exceso molar de 2- morfolinoetanol en un solvente orgánico junto con una enzima y en presencia de agua a una temperatura de entre 20 y 55 grados C y un pH de 3 a 8, durante un período de hasta 120 h.

Description

Procedimientos de producción de ésteres micofenolato.

Esta invención se relaciona con un procedimiento mejorado para la fabricación de Micofenolato Mofetilo por un método bioquímico utilizando enzimas o químicamente sin usar catalizador alguno.

Antecedentes

El micofenolato mofetilo de fórmula I es el éster morfolinoetílico del ácido micofenólico ("MPA").

Fórmula I

El micofenolato mofetilo es un inmunosupresor. Deriva del ácido micofenólico, que se aisló de un hongo y fue químicamente modificado para mejorar la absorción oral. El micofenolato mofetilo, en su sal farmacéuticamente aceptable, es usado como agente inmunosupresor y como agente antiinflamatorio, antitumoral y antivírico.

La ruta de síntesis química para la fabricación del micofenolato mofetilo ya existe. Se ha descrito una ruta de condensación con un haluro de ácido para sintetizar el micofenolato mofetilo en EE.UU. 4.753.935, la cual requiere dos etapas y tiene una alta impureza dimérica (2%), necesitando, entre otras, una etapa de recristalización adicional. Los expertos en el campo de las reacciones de esterificación apreciarán que las enseñanzas convencionales para la síntesis de un éster a través de la reacción de un ácido y un alcohol requieren el uso de un catalizador químico para conseguir rendimientos aceptables. Más aún, la reacción catalítica conlleva el coste añadido del catalizador y las etapas adicionales de su adición y separación de la mezcla de reacción. Se ha descrito también la esterificación directa del ácido micofenólico sin catalizador en EE.UU. 5.247.083, donde la reacción es llevada a cabo en presencia de un solvente orgánico inerte.

Se ha descubierto sorprendentemente que se pueden obtener buenos rendimientos de micofenolato mofetilo sin el inconveniente de los métodos antes descritos, sin el uso de un tercer solvente orgánico y sin el uso de catalizadores químicos. Se ha visto también que es posible producir micofenolato mofetilo en condiciones muy suaves usando enzimas, en presencia de agua y solventes orgánicos y sin otros catalizadores químicos. Estos procedimientos reducen las posibilidades de reacciones colaterales no deseadas y conducen a productos más puros.

Resumen de la invención

La presente invención se relaciona con métodos para producir micofenolato mofetilo por:

(i): reacción del ácido micofenólico y un exceso molar de 2-morfolinoetanol en un solvente orgánico junto con una enzima y una cantidad apropiada de agua;

(ii): reflujo del ácido micofenólico con un gran exceso de 2-morfolinoetanol en ausencia de cualquier otro solvente orgánico o de catalizador.

Descripción detallada de la invención

Esta invención se relaciona con un procedimiento para la conversión de ácido micofenólico y 2-morfolinoetanol en micofenolato mofetilo.

Según un método de esta invención, se añaden los substratos, MPA y 2-morfolinoetanol, en un solvente orgánico o una mezcla de más de un solvente orgánico, se añade agua al sistema para ajustar el contenido acuoso y el pH en el microambiente, se añade enzima a este sistema, se incuba la mezcla a una temperatura de entre 20 y 55 grados C, se lleva a cabo la reacción durante un tiempo de hasta 120 h y se analiza el producto esterificado por un método de HPLC.

Se usa el MPA en un rango de concentración del 0,03 al 5%. Se usa el 2-morfolinoetanol en 1 a 15 equivalentes molares con respecto al MPA. Se añaden el MPA y el 2-morfolinoetanol al solvente orgánico o mezcla de más de un solvente orgánico, donde el solvente orgánico es un alcano C6-C12, tal como isooctano, n-hexano, ciclohexano, heptano u octano, o un alcohol C2-C12, tal como etanol, propanol, 2-propanol, hexanol, octanol o isopropanol. Se añade un surfactante al solvente orgánico o a la mezcla de solventes orgánicos, cuyo surfactante es bis(etilhexil)sulfosuccinato de sodio (Aerosol OT o AOT), bromuro de cetiltrimetilamonio o cloruro de trimetiloctilamonio (TOM-AC). Se ajusta el contenido acuoso (Wo), que es la razón molar del agua con respecto al surfactante, a un valor de 1 a 30. Se ajusta el pH del microambiente en un rango de 3 a 8 usando tampón, tal como tampón acetato o fosfato. La enzima usada para la bioconversión es una hidrolasa, que puede ser una lipasa, cutinasa, esterasa o proteasa de origen microbiano, animal o vegetal. Se añade la enzima en solvente orgánico en ausencia o presencia de un surfactante. Se lleva a cabo la reacción a una temperatura de 20 a 55 grados C. El período de tiempo de la reacción es de hasta 120 h. Se analiza el producto esterificado por un método de HPLC.

Otro método para producir micofenolato mofetilo consiste en calentar o someter a reflujo el MPA (ácido micofenólico) con un gran exceso de 2-morfolinoetanol en ausencia de cualquier otro solvente orgánico o catalizador. Se calienta el MPA y se somete eventualmente a reflujo con un gran exceso de 2-morfolinoetanol a una temperatura de entre 80 y 150 grados C. Se lleva a cabo la reacción durante un período de tiempo de 6 a 120 h.

Estos dos métodos son ilustrados con los ejemplos siguientes, que no pretenden ser limitantes.

Ejemplo 1

Se preparó una solución 50 mM de AOT en 10 ml de isooctano. Se añadieron a la solución de surfactante MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 0,9 mM. Se añadió a esta mezcla tampón acetato (pH 5,0) para ajustar el Wo a 3,0. Se añadió lipasa de Candida rugosa en una concentración de 1 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 37 grados C durante 24 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 2

Se preparó una solución 100 mM de AOT en 10 ml de isooctano. Se añadieron a la solución de surfactante MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 9,0 mM. Se añadió a esta mezcla tampón acetato (pH 4,5) para ajustar el Wo a 2,8. Se añadió lipasa de Mucor meihei en una concentración de 10 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 37 grados C durante 48 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 3

Se preparó una solución 100 mM de AOT en 50 ml de isooctano. Se añadieron a la solución de surfactante MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 9,0 mM. Se añadió a esta mezcla tampón acetato (pH 4,5) para ajustar el Wo a 10. Se añadió lipasa de Candida albicans en una concentración de 7 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 37 grados C durante 48 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 4

Se preparó una solución 100 mM de CTAB en 50 ml de isooctano con etanol como cosolvente. Se añadieron a la solución de surfactante MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 9,0 mM. Se añadió a esta mezcla tampón fosfato (pH 7,0) para ajustar el Wo a 20. Se añadió esterasa de hígado de cerdo en una concentración de 5 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 37 grados C durante 96 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 5

Se preparó una solución 100 mM de TOMAC en 50 ml de octanol con propanol como cosolvente. Se añadieron a la solución de surfactante MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 9,0 mM. Se añadió a esta mezcla tampón acetato (pH 4,5) para ajustar el Wo a 2,8. Se añadió proteasa de Serratia marcescens en una concentración de 7 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 45 grados C durante 120 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 6

Se preparó un sistema de microemulsión usando hexano, agua y 2-propanol en una razón de fracciones molares de 0,23:0,32:0,45. Se añadieron a la solución MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 9,0 mM. Se añadió proteasa de Bacillus subtilis en una concentración de 7 mg/ml. Se añadió cutinasa en una concentración de 7 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 37 grados C durante 48 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 7

Se añadió una solución 150 mM de AOT en 100 ml de isooctano. Se añadieron a la solución de surfactante MPA en una concentración de 0,6 mM y 2-morfolinoetanol 9,0 mM. Se añadió a esta solución tampón acetato (pH 4,5) para ajustar el Wo a 1,5. Se añadió lipasa de Mucor meihei en una concentración de 5 mg/ml. Se incubó la mezcla de reacción a una temperatura de 20 grados C durante 48 h. Se analizó el producto esterificado por HPLC.

Ejemplo 8

Se tomaron 10 mg de MPA en 10 ml de 2-morfolinoetanol y se calentó la mezcla a 100 grados C. Se mantuvo la temperatura entre 140 y 150 grados C durante aproximadamente 6 h. Después de completarse la reacción, se añadieron 100 ml de acetato de etilo, se lavaron las capas orgánicas con 3 x 100 ml de agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se eliminó el acetato de etilo a presión reducida para obtener el producto.

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Ejemplo 9

Se tomaron 10 mg de MPA en 10 ml de 2-morfolinoetanol y se calentó la mezcla a 140 grados C a reflujo. Se mantuvo la temperatura entre 140 y 150 grados C durante aproximadamente 6 h. Después de completarse la reacción, se añadieron 100 ml de acetato de etilo, se lavaron las capas orgánicas con 3 x 100 ml de agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se eliminó el acetato de etilo a presión reducida para obtener el producto, micofenolato mofetilo.

Ejemplo 10

Se tomaron 12,5 mg de MPA en 20 ml de 2-morfolinoetanol y se calentó la mezcla a 80 grados C. Se mantuvo la temperatura entre 80 y 85 grados C durante aproximadamente 96 h. Después de completarse la reacción, se añadieron 100 ml de acetato de etilo, se lavaron las capas orgánicas con 3 x 100 ml de agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se eliminó el acetato de etilo a presión reducida para obtener el producto.

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Claims

1. Un método para la producción de micofenolato mofetilo, que consiste en la reacción del ácido micofenólico con un exceso molar de 2-morfolinoetanol en un solvente orgánico junto con una enzima y en presencia de agua a una temperatura de entre 20 y 55 grados C y un pH de 3 a 8, durante un período de hasta 120 h.

2. El método de la reivindicación 1, donde el solvente orgánico es un alcano C6-C12, tal como isooctano, n-hexano, ciclohexano, heptano u octano, o un alcohol C2-C12, tal como etanol, propanol, isopropanol, hexanol u octanol.

3. El método de la reivindicación 2, donde el solvente orgánico es una mezcla de solventes orgánicos.

4. El método de la reivindicación 1, donde el catalizador enzimático es una hidrolasa, tal como lipasa, esterasa o proteasa.

5. El método de la reivindicación 1, donde el catalizador enzimático es una lipasa o esterasa.

6. El método de las reivindicaciones 4 y 5, donde el catalizador enzimático es una enzima inmovilizada.

7. El método de las reivindicaciones 4 y 5, donde el catalizador enzimático es una forma no inmovilizada.

8. El método de las reivindicaciones 4 y 5, donde se añade la enzima eventualmente junto con un surfactante.

9. El método de la reivindicación 8, donde el surfactante es 2-(etilhexil)sulfosuccinato de sodio.

10. El método de la reivindicación 8, donde el surfactante es bromuro de cetiltrimetilamonio.

11. El método de la reivindicación 1, donde el contenido acuoso (Wo) es de entre 1 y 30, preferiblemente de entre 2 y 10.

12. Un método para la producción de micofenolato mofetilo, que consiste en calentar ácido micofenólico con un exceso de 2-morfolinoetanol en ausencia de cualquier otro solvente orgánico o catalizador.

13. El método de la reivindicación 12, donde el calentamiento es llevado a cabo a una temperatura de entre 80 y 150 grados.

14. El método de la reivindicación 12, donde la mezcla es sometida a reflujo en dichas condiciones durante un período de tiempo de 12 a 120 h.

15. El método de las reivindicaciones 12-14, donde la reacción es llevada a cabo durante un período de tiempo de 12 a 120 h.