ES2254392T3

ES2254392T3 - Composiciones cosmeticas y farmaceuticas y metodos que utilizan materiales emisores de luz verde.

Info

Publication number: ES2254392T3
Application number: ES01923244T
Authority: ES
Inventors: Glen Rein; Liliana George; Gheorge Cioca; Sorin Comorosan
Original assignee: EL Management LLC
Current assignee: EL Management LLC
Priority date: 2000-06-27
Filing date: 2001-04-10
Publication date: 2006-06-16
Anticipated expiration: 2021-04-10
Also published as: AU4995601A; EP1296639A1; JP2004501178A; EP1296639B1; AU783025B2; DE60115646T2; ATE311856T1; WO2002000190A1; DE60115646D1; CA2381261C; CA2381261A1

Abstract

El uso de una composición que comprende al menos un compuesto que proporciona una fuente de luz verde para la producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de daños por radicales libres de oxígeno en la piel.

Description

Composiciones cosméticas y farmacéuticas y métodos que utilizan materiales emisores de luz verde.

Campo de la invención

La invención se refiere a composiciones cosméticas y farmacéuticas y a métodos de utilización de las mismas. Más específicamente, la invención se refiere a composiciones que tienen una actividad antioxidante, o de eliminación de radicales libres.

Antecedentes de la invención

En los seres vivos se están llevando a cabo miles de procesos bioquímicos en cualquier instante dado. Muchos de estos procesos aeróbicos endógenos dan lugar de forma natural, como sub-productos, a moléculas muy altamente reactivas. Un gran número de estas moléculas reactivas son conocidas en general como radicales libres, los cuales se definen como un átomo o grupo de átomos que tienen un electrón sin aparear. Sin embargo, otras especies reactivas de radicales no-libres, son también generadas por estos procesos. Los procesos que producen las entidades reactivas pueden ser enzimáticos, tal como los involucrados en la fagocitosis, la respiración, el sistema citocromo P-450 y la síntesis de prostaglandina; o pueden ser no enzimáticos, tal como la reacción de oxígeno con compuestos orgánicos, o las reacciones iniciadas por radiación ionizante. Estas moléculas reactivas, si se descontrolan, pueden reaccionar rápidamente, y aleatoriamente, con moléculas próximas, dando lugar a productos tóxicos que pueden interferir con los procesos fisiológicos normales del cuerpo. Sin embargo, el cuerpo tiene un número de defensas que puede, bajo circunstancias normales, mantener contenido en gran medida el daño potencial resultante de estas reacciones endógenas.

Existe también un número de fuentes endógenas de estas reacciones indeseadas. Muchos agentes medioambientales, tales como diversos elementos dietéticos, pesticidas, la luz solar, el humo del tabaco, los contaminantes del aire, los anestésicos, y los hidrocarburos aromáticos, a los que el hombre moderno se encuentra expuesto de forma rutinaria, pueden generar también especies altamente reactivas. De ese modo, no es sorprendente que los efectos acumulativos de estas reacciones puedan, y eventualmente siempre lo hagan, trastornar los mecanismos reparadores normales del cuerpo. Existe una evidencia considerable de que la falta de control de las reacciones de radicales libres está algo, si no muy, involucrada en un número de estados de enfermedad, por ejemplo, en enfisema, inflamación, cáncer, arteriosclerosis y cataratas. Se ha considerado también ampliamente que las reacciones de radicales libres tienen un importante efecto contributivo en el proceso de envejecimiento natural.

Entre las especies más reactivas de todos los reactivos que se producen de forma natural, y biológicamente entre las más importantes, se encuentran las que contienen oxígeno. Éstas incluyen, por ejemplo, radicales libres de oxígeno parcialmente reducido, tales como los radicales de anión superóxido, iones de peróxido de hidrógeno e hidroxilo, así como también oxígeno singlete. Estas especies de oxígeno reactivas han estado implicadas en un número de reacciones que pueden causar serios daños a componentes celulares: por ejemplo, los radicales oxidantes pueden atacar las bases y las moléculas de azúcar del ADN, alterar la estructura molecular, y con ello interferir con las funciones biológicas. También pueden interactuar con ácidos grasos insaturados de las membranas celulares, causando peroxidación lípida, que da como resultado no sólo una alteración de la interacción proteína:lípido de las membranas, sino también la producción de productos de ruptura que pueden ejercer un sin número de efectos indeseados, tal como una inhibición de la síntesis de ADN, adenil ciclasa y glucosa-6-fosfato, incrementar la permeabilidad capilar, y una inhibición de la agregación de plaquetas.

Puesto que el oxígeno molecular está virtualmente en cualquier parte y acepta libremente electrones, estos radicales centrados en oxígeno son probablemente los mediadores más comunes de las reacciones de radicales libres celulares. Éstas pueden, por supuesto, ser producidas de forma rutinaria como resultado de un metabolismo aeróbico. Sin embargo, se genera una cantidad muy significativa como resultado de las reacciones fotoquímicas. Muchos compuestos orgánicos o inorgánicos absorberán algo de radiación de UV, y la energía absorbida fomentará reacciones químicas. Existe una diversidad de mecanismos reconocidos por los que la luz puede provocar la generación de radicales centrados en oxígeno; con independencia del mecanismo, sin embargo, está claro que la interacción de la luz solar con los substratos orgánicos o inorgánicos sobre la piel al descubierto, puede dar como resultado que se produzcan una o más especies de oxígeno reactivo sobre la piel.

En los últimos años se ha reconocido que la presencia de radicales libres sobre la piel es probablemente la responsable de un número de efectos indeseados de la exposición prolongada al sol. Por ejemplo, el fenómeno de envejecimiento observado en general a través del cuerpo, es observado con frecuencia de forma prematura sobre la piel como resultado de un foto-envejecimiento, que acelera el proceso de deterioro de la elastina y del colágeno, entre otros efectos. Existe un riesgo incrementado de cáncer de piel en todos sus tipos. En respuesta a esta necesidad, la industria del cuidado de la piel ha seguido buscando antioxidantes nuevos y más efectivos, es decir, compuestos que interfieran de alguna manera con los procesos oxidativos en los que intervienen radicales libres. Los antioxidantes pueden actuar, ya sea evitando una reacción completamente, o ya sea rompiendo la cadena o las etapas de la reacción que ya se hayan iniciado. Muchos compuestos, por ejemplo fenoles o sulfuros, son reconocidos como capaces de interferir con los procesos oxidativos; sin embargo, tales compuestos pueden no ser apropiados para su uso sobre la piel, o pueden ser difíciles de formular de una manera cosméticamente o farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona ahora una nueva composición antioxidante basada en un concepto y una observación novedosos con relación al uso de luz visible para inhibir o eliminar los radicales libres de la piel.

Sumario de la invención

La invención se refiere al uso de una composición que comprende al menos un compuesto que proporciona una fuente de luz verde para la producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de los daños por radicales libres en la piel.

En particular, la composición comprende un material fosforescente verde, un material fluorescente verde, o una combinación de los mismos.

Otro objeto de la invención consiste en el uso de una composición que comprende al menos un compuesto que proporciona una fuente de luz verde para la producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de los efectos de la exposición a UV sobre la piel.

La luz verde puede, aparentemente, mitigar o impedir la generación de radicales libres, protegiendo con ello la piel a la que se aplica frente al daño por radicales libres, y protegiendo también la composición respecto a los efectos potencialmente decadentes de los radicales libres presentes en la composición. Particularmente preferida para su uso en la composición, es una combinación de un material fosforescente verde con un material fluorescente verde, cuya composición puede ser activada mediante su simple exposición a la luz del día.

Breve descripción de las figuras

Las Figuras 1-4 ilustran el efecto de las diversas fuentes de luz verde sobre el nivel de radicales libres de oxígeno bajo diversas condiciones: Figura 1: pigmento fosforescente verde; Figura 2: lámpara verde con iluminación ambiental; Figura 3: lámpara verde con baja iluminación ambiental; Figura 4: lámpara verde en una caja oscura.

Descripción detallada de la invención

La capacidad de la luz verde para alterar el comportamiento químico de determinados materiales, ha sido ya descrita con anterioridad. Conocido como "efecto Comorosan", se ha demostrado que la irradiación con luz verde de un substrato de enzima seco (\gamma = 546 nm, o en esa región), con tiempos de exposición específicos, con anterioridad a su disolución, da como resultado un incremento de las velocidades de reacción de la enzima (Comorosan et al., Physiol. Chem. and Physics 3: 343, 1971; Comorosan, Int. J. Quantum Chem.: Quantum Biology Symp. I: 221, 1974; Comorosan et al., Physiol. Chem. and Physics 12: 497, 1980). Un efecto similar, pero a la inversa, fue observado cuando un revelador de película fue irradiado de ese modo, conduciendo a una reducción de opacidad de la película para el material irradiado (Peschel et al., Physiol. Chem. Physics and Med. NMR 19: 271-274, 1987). Mientras tanto, interesantes observaciones, sin embargo, no han conducido a una aplicación comercial amplia del fenómeno.

Ahora se ha descubierto inesperadamente que la exposición a la luz verde tiene un efecto antioxidante en las composiciones químicas. Más específicamente, en los experimentos diseñados expresamente para generar radicales peróxido, se ha encontrado que el tratamiento de la composición generadora de radicales libres con luz verde da como resultado una reducción del nivel de radicales libres encontrados en la composición tratada con relación al control. Los efectos observados son particularmente interesantes por dos razones. En primer lugar, a diferencia con el efecto Comorosan que ocurre en estado sólido, es la primera vez que este efecto ha sido transmitido a un sistema acuoso. En segundo lugar, la fuente de luz verde no afecta a la eficacia del tratamiento: la luz verde puede proceder de una fuente externa, es decir, una lámpara que se utiliza para irradiar las composiciones, o una fuente interna, es decir, una sustancia emisora de luz verde incorporada en la composición. En ambos casos, los radicales libres son reducidos sustancialmente. Un aspecto sorprendente adicional de la invención consiste en que el tratamiento observado no está limitado a tiempos de exposición específicos, a diferencia con observaciones anteriores de este fenómeno, en las que la actividad de la luz verde solamente había sido vista durante tiempos de exposición críticos. Por el contrario, el presente efecto de luz verde puede ser obtenido a partir de una exposición prolongada de la luz verde al substrato tratado, sin disminución alguna de la actividad, y no depende críticamente de tiempos de exposición específicos.

En una realización preferida, el tratamiento de la composición se realiza mediante la inclusión de una fuente de luz verde directamente en la composición. Esto se realiza más fácilmente con la incorporación de un pigmento fosforescente verde en la composición. Mediante "pigmento fosforescente", en el presente contexto, se pretende indicar no sólo pigmentos fosforescentes en sentido tradicional, tales como los que se relacionan en lo que sigue, sino también cualesquiera materiales cosméticamente aceptables que emitan luz fosforescente en la gama de longitud de onda de alrededor de 500-550 nm. La presencia del pigmento fosforescente proporciona una fuente continua de luz verde en la composición; la fosforescencia se activa por exposición a la componente UV de la luz ordinaria, cuyo efecto se prolonga durante varias horas. Existen varios componentes diferentes que se sabe que poseen la propiedad de la fosforescencia verde, incluyendo, aunque sin limitación, el sulfuro de zinc (dopado con cobre y/o manganeso), el aluminato de estroncio o la calcita fosforescente, óxidos cerámicos dopados con elementos de tierras raras tales como el europio, el terbio o el disprosio, boro-silicatos de zinc (vidrio) dopados con cobre o elementos de tierras raras, metales tales como el molibdeno chapeado con cobre o elementos de tierras raras, y sales de calcio. Particularmente preferidos para su utilización en la invención, son el sulfuro de zinc y el aluminato de estroncio.

Durante el uso práctico, se pueden utilizar los pigmentos según son, o pueden estar recubiertos o microencapsulados con el fin de aumentar su fotoestabilidad, o para facilitar su dispersión en la formulación. Los recubrimientos utilizados para los pigmentos pueden ser cualesquiera de los que se utilizan típicamente para recubrir pigmentos cosméticos tradicionales. Ejemplos de recubrimientos de pigmento útiles son los recubrimientos hidrofóbicos tales la meticona, dimeticona, silanos, polietileno, jabones metálicos, lecitina, ceras, nailon o fluoroquímicos. Ejemplos de recubrimientos hidrofílicos incluyen copoliol de dimeticona. La naturaleza del recubrimiento dependerá del tipo de vehículo elegido. La cantidad de pigmento empleada depende de la intensidad fosforescente del pigmento elegido, pero normalmente será desde alrededor de 0,01 hasta alrededor de 50%, con preferencia desde alrededor de 1 hasta alrededor de 10%, en peso, de la composición total, siendo normalmante las cantidades que están en el extremo más alto de la gama particularmente útiles en caso de que el pigmento esté recubierto.

En una realización preferida particular, el pigmento fosforescente se combina con una fuente de luz verde fosforescente. Una fuente preferida de fluorescencia verde la constituyen los polvos de minerales fluorescentes. Especialmente preferidos son los minerales que producen una fluorescencia verde a verde azulada; los minerales de este tipo incluyen, pero sin limitación, la andalusita y la quiastolita (silicato de aluminio); la ambligonita (fosforato básico de aluminio y litio); la fenaquita (silicato de berilio); la variscita (fosfato de aluminio hidratado); serpentina (silicato de magnesio básico); amazonita (silicato de aluminio y potasio); amatista (dióxido de silicio); crisoberilo (óxido de aluminio y berilio); turquesa (fosfato de aluminio básico que contiene cobre); turmalina incolora, amarilla o rosa (borosilicato); ámbar (succionato/ varias resinas); opalo (dióxido de silicio hidratado); cerusita (carbonato de plomo); fucsita (silicato de aluminio y potasio); diópsido (silicato de magnesio y calcio); ulexita (borato de calcio y sodio hidratado); aragonita (carbonato de calcio); y villemita (silicato de zinc). Particularmente preferidos, entre todos éstos, son los silicatos, en particular los que presentan una fluorescencia intensa, tal como la fucsita, el diópsido, la ulexita, la aragonita y la villemita.

Los polvos fluorescentes pueden ser preparados mediante técnicas de molienda estándar, tal como molienda de chorro, molienda de rodillo o pulverización. El tamaño medio de partícula de los polvos será normalmente, por razones estéticas, no mayor de alrededor de 45 \mu; con preferencia, el tamaño de partícula está entre 0,5 - 20 \mu, y más preferiblemente entre alrededor de 0,5 y 5 \mu, estando los minerales más duros molidos preferentemente en el extremo más bajo de la gama recomendada. Las cantidades de polvos pueden ser variadas dependiendo de la intensidad de la fluorescencia y del color del mineral, y pueden estar presentes en una cantidad de entre alrededor de 0,01% hasta alrededor de 50%, más preferiblemente, sin embargo, la cantidad utilizada estará entre alrededor de 0,1% hasta alrededor de 10%.

Aunque se prefieren particularmente los polvos de mineral fluorescente, también pueden utilizarse otros materiales fluorescentes. Los ejemplos incluyen aunque sin limitación, las biomoléculas fluorescentes, tales como la proteína fluorescente verde, el plancton fluorescente o los tintes fluorescentes orgánicos o inorgánicos, los cuales pueden estar opcionalmente enlazados a un polímero. Estos materiales pueden ser empleados en cantidades comparables a los polvos minerales fluorescentes, teniendo en cuenta su intensidad fluorescente relativa.

La fuente de luz verde puede ser incorporada de cualquier forma conveniente utilizada típicamente para formulaciones cosméticas. Ejemplos de formas útiles incluyen formulaciones de vertido en caliente, emulsiones de aceite-en-agua, emulsiones de agua-en-aceite, geles, barras, pulverizadores, formulaciones anhidras, y polvos prensados o sueltos. El producto puede ser también un producto de maquillaje o un producto para el cuidado de la piel. La incorporación de un componente productor de luz verde, puede lograr un número de efectos diferentes en una formulación tópica. Según se ha indicado en primer lugar, puede ser utilizado, por supuesto, como antioxidante, con lo que consigue dos efectos posibles. En primer lugar, su presencia retardará o impedirá la degradación de la fórmula en la que se incorpora, es decir, actúa como conservante. También actúa para proteger la piel a la que se aplica la formulación, reduciendo o eliminando el número de radicales libres del oxígeno que se producirían de forma ordinaria sobre la piel con la exposición normal o prolongada a estímulos medioambientales de generación de radicales libres. De forma similar, también tiene un efecto protector sobre las células de la piel contra los efectos dañinos de la radiación UV.

La composición puede ser aplicada según un número de formas, dependiendo del uso que se pretenda del producto final. Por ejemplo, las composiciones pueden ser utilizadas como tratamiento antioxidante rutinario para la piel, con lo que la aplicación impide o mitiga los daños por radicales libres que podrían producirse debido a la exposición diaria a los estímulos generadores de radicales libres. Un método preferido de obtener beneficios de la composición para este propósito es, por tanto, una aplicación crónica. Por ejemplo, la aplicación tópica de la composición, en una cantidad de alrededor de 0,1 mg/cm^{2} a 2 mg/cm^{2} de piel, podrá ser realizada entre alrededor de una vez por semana hasta alrededor de 4 ó 5 veces diarias, con preferencia desde alrededor de 3 veces a la semana hasta alrededor de 3 veces diarias, más preferiblemente alrededor de una vez o dos veces por día. Mediante aplicación "crónica" se intenta indicar aquí que el período de aplicación tónica puede ser durante toda la vida del usuario, con preferencia durante un período de al menos un mes, más preferiblemente entre alrededor de tres meses y alrededor de veinte años, más preferiblemente desde alrededor de seis meses hasta alrededor de diez años, más preferiblemente aún desde alrededor de un año hasta alrededor de cinco años, con lo que a corto plazo, se obtiene como resultado una reducción inmediata de la presencia de radicales libres sobre la piel, y finalmente, a largo plazo, se obtiene como resultado el tratamiento o la prevención tanto de los signos internos como externos del foto- o crono-envejecimiento.

Las composiciones, según se ha indicado, pueden ser utilizadas también para tratar o evitar los efectos dañinos de la radiación UV. En esta realización, la composición puede ser aplicada según se ha descrito anteriormente, como una protección regular contra la exposición casual a UV. Adicionalmente, sin embargo, durante este uso, se prefiere que la composición sea aplicada con anterioridad a la exposición a la luz solar, por ejemplo, cuando el usuario prevé un largo período de actividad externa, con un tiempo considerable al sol, y/o durante el tiempo de tal exposición.

La invención va a ser mejor ilustrada mediante los ejemplos no limitativos que siguen.

Ejemplos Ejemplo 1

Este ejemplo ilustra el efecto de la luz verde en la reducción de la cantidad de radicales libres de oxígeno en un ambiente generador de radicales libres.

Para probar las propiedades antioxidantes de la luz verde, se han evaluado dos fuentes de luz verde. La luz verde se genera utilizando un pigmento fosforescente de aluminato de estroncio, así como también una lámpara de vapor de mercurio filtrada con un filtro de 547 nanometros. Para los estudios que incluyen el pigmento, una cubeta de reacción se rodea por todos los lados mediante cuatro cubreobjetos y se aseguran en el interior de un tarro que se tapa con una delgada lámina de hoja de aluminio. Cada cubreobjeto se ha recubierto con el pigmento, mientras que se utilizan cubreobjetos no recubiertos como control. Los cubreobjetos recubiertos de pigmento son activados durante 10 minutos utilizando una lámpara de UVA inmediatamente antes del montaje en el tarro.

Los experimentos que incluyen luz verde generada con una lámpara, utilizan dos estructuras experimentales. La primera estructura "oscura" se realiza en el interior de una caja de cartón en la que se irradia la cubeta desde la parte de arriba. La segunda estructura "ambiental" se realiza, ya sea a plena luz ambiental o ya sea a baja luz ambiental (cubeta cubierta libremente con la hoja), mientras que se irradia desde abajo. La lámpara está encendida durante los tratamientos de control, pero la luz está bloqueada y no alcanza la cubeta. En ambos casos, las diferencias de temperatura entre las condiciones de control de tratamiento son menos de, o iguales a, 0,4ºC.

Para demostrar la actividad antioxidante, se generan superóxidos químicamente a partir de peróxido de hidrógeno, y se mide el efecto de la luz verde sobre la concentración de superóxidos. La cantidad de superóxidos generados a partir de peróxido de hidrógeno puede ser medida mediante su enlace a Lucigenin, en un ensayo que se realiza como sigue. Se incuba NaOH (0,25 ml, 4N) con H_{2}O_{2} (1 ml, 0,6%) en presencia de Tween (1 ml, 2%) en 4% etanol. La reacción se lleva a cabo en una cubeta de cuarzo cerrada con un tapón de rosca que contiene una membrana. Después de 6 minutos de agitación suave (utilizando un agitador Titertek de Flow Labs a una relación #6), se inyecta Lucigenin (0,5 ml, 10 mM) a través de la membrana utilizando una jeringa de calibre 25. Los espectros de fluorescencia se obtienen excitando la solución a 465 nm y monitorizando la emisión (utilizando el programa cinético) cada minuto durante seis minutos a 508 nm. Se calcula la pendiente y se utiliza como valor de dato numérico final. Se calcula la pendiente y se utiliza como valor de dato numérico final para análisis estadístico. Se utilizan concentraciones sub-óptimas (0,6%) de H_{2}O_{2} para incrementar la sensibilidad del ensayo.

En la comprobación de la actividad de la luz verde, se generan radicales libres de superóxido según se ha descrito anteriormente durante seis minutos. Durante los seis minutos, la cubeta de reacción se expone o no (control) a la luz verde. Tras el período de prueba, se cuantifican los radicales libres con la adición de Lucigenin y midiendo la cinética (durante seis minutos) de la emisión de luz fluorescente a 508 nm. Para los experimentos con lámpara, un desarrollo experimental dado consiste en un control y un tratamiento. El orden del par se cambia aleatoriamente. Para los experimentos con pigmento, se desarrolla toda una serie de controles, y después una serie de tratamientos. La información cuantitativa se obtiene a partir de la cinética de fluorescencia de Lucigenin una vez que se han generado los radicales libres (Figuras 1-4).

Para experimentos con lámpara, se realiza un conjunto separado de experimentos, en los que se calculan los valores delta. Los valores delta se obtienen como valor absoluto de la substracción numérica de la fluorescencia del control y del tratamiento para cada par en una ejecución dada. Para el entorno ambiental, se utilizan los valores fluorescentes en los seis minutos, y para la fluorescencia en ambiente oscuro, en los tres minutos. Los deltas de control se obtienen a partir de un conjunto separado de experimentos en los que cada par de desarrollos consiste en dos controles no expuestos. En todos los experimentos, los deltas de tratamiento son siempre negativos, indicando que la exposición a la luz verde es siempre efectiva como antioxidante, aunque la magnitud de la respuesta varíe de un desarrollo a otro. Los resultados son todos estadísticamente significativos, con p<0 para el pigmento, y p=0,013 para la luz ambiental más la luz verde, p=0,014 para una baja luz ambiental más luz verde, y p=0,009 para oscuridad más luz verde. De este modo, el efecto antioxidante se aprecia bajo todas las condiciones de luz; sin embargo, la luz verde en presencia de una luz ambiental baja parece más efectiva y más reproducible, siendo el efecto algo menos reproducible, pero sin embargo significativo estadísticamente, a plena luz ambiental y en oscuridad.

Se realizó un experimento posterior en el que se eliminó el retardo entre la adición de Lucigenin y la recogida de datos, y la pendiente fue calculada inmediatamente después de la adición de Lucigenin. Se generan radicales libres de superóxido a partir de la oxidación química de peróxido de hidrógeno en presencia de NaOH y Tween/ etanol en el interior de una cubeta durante 12 minutos. El Lucigenin fue añadido a continuación, y se monitorizó la fluorescencia a 508 nm durante los siguientes 3 minutos. Se utilizó una lámpara de vapor de mercurio como fuente de luz verde, la cual se iluminó en la cubeta durante cantidades de tiempo variables durante los 12 minutos de generación de radicales libres. Los desarrollos de control no recibieron la luz verde, y estuvieron expuestos a las mismas condiciones de luz y calor que los desarrollos experimentales. Se calcularon las pendientes y se promediaron sobre los experimentos individuales. Como control positivo, la prueba fue también llevada a cabo con BHT, un antioxidante conocido. Los resultados con los mostrados en la Tabla 1.

TABLA 1

	Pendiente	Desviación	n	p
	media	estándar
Control	+101,4	18	7
3 min. luz verde	-22,5	13	4	<0,001
6 min. luz verde	-17,0	17	6	<0,001
9 min. luz verde	-27,0	16	6	<0,001
12 min. luz verde	-7,5	17	4	<0,001
0,1% BHT	-27,3	1,8	2
0,05% BHT	-15,0	2,8	2
0,025% BHT	-1,9	0,7	2

Los resultados confirman la actividad antioxidante mostrada en el primer experimento, y demuestran que esta actividad es comparable con la mostrada por el BHT.

Ejemplo 2

El experimento muestra el efecto de la luz verde producida por un pigmento fosforescente en la protección de células de la piel frente a daños por UV.

Cultivos de melanocito de ratón (BC1), fueron tratados con luz verde emitida a partir de un pigmento de aluminato de estroncio. Tras la activación previa de una superficie recubierta de pigmento con luz UVA, se colocaron cápsulas de Petri que contenían las células sobre la parte superior del pigmento. Cinco horas después, las células fueron expuestas a luz UVB, e inmediatamente después expuestas a un pigmento recién activado. Las células se expusieron después a cuatro tratamientos adicionales con luz durante las siguientes 24 horas. En ese punto, las células fueron tratadas con procedimientos rojo neutro y estándar, seguidos de viabilidad celular cuantitativa. Cada condición experimental se realizó por cuadruplicado, siendo el valor de viabilidad celular final calculado como el promedio (absorción a 540 nm) de estas cuatro muestras. Los datos se han expresado también como una reducción porcentual de la viabilidad celular en relación con los controles que se mantuvieron sin tratar con luz verde o con luz UV. El experimento se repitió para confirmación de los resultados. Los resultados se muestran en la Tabla 2.

TABLA 2

	Viabilidad	SD	% cambio	Significado
	celular media			estadístico
				w/r/t control
Control	0,891	0,05
UVB 10 mJ	0,626	0,06	-29,7	p<0,0001
UVB + luz verde	0,806	0,09	-10,5	NS

Control	0,445	0,02
UVB 20 mJ	0,119	0,005	-73,2	p<0,0001
UVB + luz verde	0,228	0,01	-48,8	p<0,0001

Los resultados indican que la luz verde tiene un efecto protector frente a los daños por UV. Sin embargo, la magnitud del efecto protector depende de la dosis, siendo la luz verde menos protectora frente a dosis más altas de UVB.

Ejemplo 3

Este ejemplo ilustra el efecto de la luz verde producida por un segundo pigmento fosforescente en el incremento de la viabilidad celular.

Cultivos de melanocito de ratón (BC1) fueron tratados con luz verde emitida a partir de un pigmento de sulfuro de zinc. Tras la activación previa de una superficie recubierta de pigmento con luz UV-A durante 10 minutos, como se ha descrito en lo que antecede, se colocaron cápsulas de Petri que contenían las células, sobre la parte superior del pigmento activado. Para la mayor parte de los experimentos, los melanocitos fueron pre-tratados durante 1-2 días mediante re-activación del pigmento cada 3-4 horas. Las células fueron expuestas a 10 mJ/cm^{2} o 20 mJ/cm^{2} de luz UVB, y después expuestas a cuatro tratamientos adicionales de luz verde durante las siguientes 24 horas. En ese punto, las células fueron tratadas con rojo estándar y se evaluó la viabilidad celular utilizando el ensayo de captación de tinte rojo neutro. Cada condición experimental se realizó por cuadruplicado, siendo calculado el valor de viabilidad celular final como la absorción media a 540 nm para estas cuatro muestras. Los datos se han expresado como reducción porcentual de la viabilidad celular en relación con controles no tratados. La significación estadística fue determinada para células tratadas con UV solamente frente a UV más luz verde. Los resultados se muestran en la
Tabla 3.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 3

	Viabilidad	SD	% cambio	Significado
	celular			Estadístico
				w/r/t control
10 mJ/cm^{2}
Control	0,891	0,05
UVB	0,626	0,06	-29,7
UVB + luz verde	0,806	0,09	-10,5	p=0,023

Control	0,647	0,02
UVB	0,482	0,009	-25
UVB + luz verde	0,682	0,02	-9,3	p<0,001

Control	0,752	0,04
UVB	0,608	0,02	-19
UVB + luz verde	0,682	0,02	-9,3	p<0,004

Control	0,668	0,02
UVB	0,565	0,01	-15
UVB + luz verde	0,630	0,03	-5,7	p<0,001

TABLA 3 (continuación)

	Viabilidad	SD	% cambio	Significado
	celular			Estadístico
				w/r/t control
20 mJ/cm^{2}
Control	0,445	0,02
UVB	0,119	0,005	-73
UVB + luz verde	0,228	0,01	-49	p<0,001

Control	0,755	0,01
UVB	0,373	0,01	-50
UVB + luz verde	0,483	0,04	-36	p<0,004

Los resultados indican que en todos los caos, el daño inducido por UV, medido como viabilidad celular reducida, se redujo significativamente mediante la presencia de luz verde. La luz verde es más efectiva para la provisión de esta protección frente a dosis bajas de UVB, pero se han observado también efectos significativos a dosis más altas.

Claims

1. El uso de una composición que comprende al menos un compuesto que proporciona una fuente de luz verde para la producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de daños por radicales libres de oxígeno en la piel.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que la composición comprende un material fosforescente verde, un material fluorescente verde, o una combinación de los mismos.

3. El uso de la reivindicación 2, en el que el material fosforescente se elige en el grupo consistente en sulfuro de zinc dopado con cobre o manganeso o una combinación de ambos, aluminato de estroncio, calcita fosforescente, óxidos cerámicos dopados con un elemento de tierra rara, boro-silicatos de zinc dopados con cobre o un elemento de tierra rara, metales chapeados con cobre o con un elemento de tierra rara, y sales de cesio.

4. El uso de la reivindicación 2 ó 3, en el que el material fluorescente es un polvo mineral.

5. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la composición comprende sulfuro de zinc o aluminato de estroncio, y un polvo de mineral fluorescente.

6. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la composición comprende un material fosforescente verde.

7. El uso de una composición que comprende al menos un compuesto que proporciona una fuente de luz verde para la producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de los efectos de la exposición a UV sobre la piel.

8. El uso de la reivindicación 7, en el que la composición se aplica con anterioridad a la exposición a UV.

9. El uso de la reivindicación 7 u 8, en el que la composición comprende un material fosforescente elegido en el grupo consistente en sulfuro de zinc, dopado con cobre o manganeso o una combinación de ambos, aluminato de estroncio, calcita fosforescente, óxidos cerámicos dopados con un elemento de tierra rara, boro-silicatos de zinc dopados con cobre o un elemento de tierra rara, metales chapeados con cobre o un elemento de tierra rara, y sales de cesio.

10. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en el que la composición comprende un material fluorescente elegido en el grupo consistente en polvos de minerales fluorescentes, biomoléculas fluorescentes, y tintes fluorescentes orgánicos e inorgánicos.

11. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en el que la composición comprende desde alrededor de 0,01 hasta alrededor de 50% de un material fosforescente.

12. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, en el que la composición comprende desde alrededor de 1 hasta alrededor de 10% de un material fosforescente.

13. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, en el que el material fosforescente es sulfuro de zinc o aluminato de estroncio.

14. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, en el que la composición comprende al menos un polvo de mineral fluorescente.

15. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, en el que la composición comprende tanto material fosforescente como material fluorescente.