ES2258149T3 - Derivados de acido 2-((n-(2-amino-3-(heteroaril o aril)propionil)aminoacil)amino)alquilboronico. - Google Patents

Derivados de acido 2-((n-(2-amino-3-(heteroaril o aril)propionil)aminoacil)amino)alquilboronico.

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ES2258149T3
ES2258149T3 ES02743128T ES02743128T ES2258149T3 ES 2258149 T3 ES2258149 T3 ES 2258149T3 ES 02743128 T ES02743128 T ES 02743128T ES 02743128 T ES02743128 T ES 02743128T ES 2258149 T3 ES2258149 T3 ES 2258149T3
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Abstract

Un compuesto de la fórmula I (Ver fórmula) en la que R1 es arilo no substituido o substituido; arilalquilcarbonilo, en el que el resto arilo no está substituido o está substituido; heterociclilo no substituido o substituido; o heterociclilalquilcarbonilo, en el que el resto heterociclilo no está substituido o está substituido; R2 es arilo no substituido o substituido o heteroarilo no substituido o substituido; R3 es hidrógeno, arilo no substituido o substituido o alquilo que no está substituido o está substituido por - cicloalquilo no substituido o substituido, - arilo no substituido o substituido o - heteroarilo no substituido o substituido que comprende al menos un átomo de nitrógeno; R4 es un resto de la fórmula IA, (Ver fórmula) en la que A1 y A2 son hidroxi o hidroxi substituido, o junto con el átomo de boro de unión y los dos átomos de oxígeno de unión forman un anillo de la fórmula IA*, (Ver fórmula) en la que W es alquileno, alquileno substituido, cicloalquileno no substituido o substituido, bicicloalquileno no substituido o substituido o tricicloalquileno no substituido o substituido; y R5 es alquilo no substituido o substituido, arilo no substituido o substituido, heterociclilo no substituido o substituido o cicloalquilo no substituido o substituido; o una sal del mismo.

Description

Derivados de ácido 2-((N-(2-amino-3-(heteroaril o aril)propionil)aminoacil)amino)alquilborónico.
La invención se refiere a derivados de ácido 2-{[N-(2-amino-3-(heteroaril o aril)propionil)aminoacil]amino}alquilborónico, a procedimientos para la preparación de los mismos, a preparaciones farmacéuticas que comprenden esos compuestos y al uso de los mismos en la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento terapéutico de animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos.
La invención se refiere a compuestos de fórmula I
1
en la que
R_{1}
es arilo no substituido o substituido; arilalquilcarbonilo, en el que el resto arilo no está substituido o está substituido; heterociclilo no substituido o substituido; o heterociclilalquilcarbonilo, en el que el resto heterociclilo no está substituido o está substituido;
R_{2}
es arilo no substituido o substituido o heteroarilo no substituido o substituido;
R_{3}
es hidrógeno, arilo no substituido o substituido o alquilo que no está substituido o está substituido por
\quad
- cicloalquilo no substituido o substituido,
\quad
- arilo no substituido o substituido o
\quad
- heteroarilo no substituido o substituido que comprende al menos un átomo de nitrógeno;
R_{4}
es un resto de la fórmula IA,
\vskip1.000000\baselineskip
2
\quad
en la que A_{1} y A_{2} son hidroxi o hidroxi substituido, o junto con el átomo de boro de unión y los dos átomos de oxígeno de unión forman un anillo de la fórmula IA*,
3
\quad
en la que W es alquileno, alquileno substituido, cicloalquileno no substituido o substituido, bicicloalquileno no substituido o substituido o tricicloalquileno no substituido o substituido; y
R_{5}
es alquilo no substituido o substituido, arilo no substituido o substituido, heterociclilo no substituido o substituido o cicloalquilo no substituido o substituido;
o sales de los mismos.
Para situar la presente invención en su contexto, deben mencionarse las siguientes referencias; US 5.106.948 describe análogos peptídicos de ácido borónico que se dice que son útiles para tratar diversas formas de cáncer; US 5.780.454 describe compuestos de éster y ácido borónico como inhibidores de la función del proteasoma. Adams y otros, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (1998), 8(4), 333-338 describe ácidos dipeptidilborónicos como inhibidores del proteasoma. Christie y otros, Journal of Neurochemistry (1999), 73(1), 195-204 describe compuestos útiles para inhibir el proteasoma.
Dentro del contexto de la presente invención, los términos generales usados anteriormente aquí y posteriormente aquí tienen preferiblemente los siguientes significados:
El arilo tiene preferiblemente un sistema anular de no más de 20 átomos de carbono, especialmente no más de 12 átomos de carbono, es preferiblemente mono-, di- o tri-cíclico y no está substituido o está substituido, preferiblemente en cada caso por fenilo o (especialmente 1- o 2-naftilo) no substituido o substituido, seleccionándose independientemente uno o más substituyentes preferiblemente del grupo que consiste en un radical alifático; hidroxi libre, eterificado o esterificado; carboxi libre o esterificado; formilo; alcanoílo; amino no substituido, mono- o di-substituido; mercapto; sulfo; alquiltio; carbamoílo, N-alquilcarbamoílo; N,N-dialquilcarbamoílo; fenilo; naftilo; heterociclilo, especialmente piridilo; ciano y nitro, seleccionándose más preferiblemente de alquilo, por ejemplo metilo, etilo o propilo; alcoxi, por ejemplo metoxi o etoxi; amino disubstituido, por ejemplo dimetilamino; halógeno, por ejemplo cloro o bromo; halogenoalquilo, por ejemplo trifluorometilo; y fenilo, (especialmente 1- o 2-)-naftilo y heterociclilo, especialmente según se define posteriormente, especialmente piridilo, por ejemplo 3-, 4- o especialmente 2-piridilo, cada uno de los cuales no está substituido o está substituido con uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes, especialmente seleccionados independientemente de los otros substituyentes arilo ya mencionados. El arilo R_{1} es más preferiblemente bifenililo, especialmente 2-, 4- o preferiblemente 3-bifenililo, piridilfenilo, especialmente 4-, 3- o lo más especialmente 2-piridil-(2-, 4- o preferiblemente 3-)fenilo, o alquil(inferior)-fenilo, especialmente propilfenilo, tal como 2-, 4- o especialmente 3-isopropilfenilo. El arilalquilcarbonilo R_{1} (con arilo no substituido o preferiblemente substituido) es preferiblemente aril-alquil(inferior)-carbonilo, con el arilo según se define anteriormente, más preferiblemente fenil-alcoxi(inferior)-fenil-alquil(inferior)-carbonilo, especialmente 2-, 4- o preferiblemente 3-benciloxifenil-acetilo o -propionilo, piridil-alquiloxi(inferior)-fenil-alquil(inferior)-carbonilo, especialmente 2-, 4- o preferiblemente 3-(piridin-2-, -4- o preferiblemente -3-)-acetilo o -propionilo, o fenil-alquil(inferior)-carbonilo, especialmente fenil-2- o preferiblemente 3-fenilpropionilo o fenilacetilo, en donde el fenilo no está substituido o está substituido por hasta tres substituyentes seleccionados independientemente de alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, o halógeno-alquilo(inferior), tal como trifluorometilo. El arilo no substituido o substituido R_{2} o (independientemente) R_{3} es preferiblemente fenilo mono-, di- o tri-substituido, especialmente substituido por hasta cuatro substituyentes seleccionados independientemente de los substituyentes mencionados para arilo, especialmente de hidroxi, alcoxi inferior (el más preferido), preferiblemente metoxi, halógeno, preferiblemente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), preferiblemente trifluorometilo, especialmente fenilo substituido por hasta tres substituyentes alcoxi inferior, preferiblemente metoxi, o en el caso de R_{3}, fenilo no substituido, o además naftilo no substituido o substituido, especialmente 1- o 2-naftilo que no está substituido o está substituido por hasta cuatro substituyentes seleccionados independientemente de los substituyentes mencionados para arilo, especialmente de hidroxi, alcoxi inferior (el más preferido), preferiblemente metoxi, halógeno, preferiblemente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), preferiblemente trifluorometilo.
El heterociclilo no substituido es preferiblemente un radical heterociclilo que está insaturado, saturado o parcialmente saturado en el anillo de unión y es preferiblemente monocíclico o en un sentido más amplio un anillo bicíclico o tricíclico; tiene de 3 a 24, más preferiblemente de 4 a 16 átomos de anillo; en donde al menos en el anillo que se une al radical de la molécula de fórmula I uno o más, preferiblemente de 1 a 4, especialmente 1 ó 2 átomos de carbono y un radical arilo correspondiente están substituidos por un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre, teniendo el anillo de unión preferiblemente de 4 a 12, especialmente de 5 a 7 átomos de anillo, no estando el heteroarilo substituido o estando substituido por uno o más, especialmente de 1 a 3, substituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en los substituyentes definidos anteriormente como substituyentes de arilo substituido; y siendo especialmente un radical heteroarilo seleccionado del grupo que consiste en imidazolilo, tienilo, furilo, tetrahidrofurilo, piranilo, tiantrenilo, isobenzofuranilo, benzofuranilo, cromenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, imidazolilo, imidazolidinilo, benzimidazolilo, pirazolilo, pirazolidinilo, piraniol, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piperidilo, piperazinilo, piridazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, triazolilo, tetrazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, tetrahidroquinolilo, tetrahidroisoquinolilo, decahidroquinolilo, octahidroisoquinolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, carbazolilo, \beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, furazanilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, isocromanilo y cromanilo, no estando substituidos cada uno de estos radicales o estando substituidos por de uno a dos radicales seleccionados del grupo que consiste en alquilo inferior, especialmente metilo o terc-butilo, alcoxi inferior, especialmente metoxi, y halo, especialmente bromo o cloro; piridilo, especialmente 2- o 3-piridilo, o el indolilo se prefiere especialmente, en un aspecto más amplio alquil(inferior)-piridilo, pirimidinilo o alquil(inferior)-pirimidinilo, halo-alquil(inferior)-piridilo, alcoxi(inferior)-piridilo, di-alquil(inferior)-piridilo o halopiridilo. El heterociclilo no está substituido o está substituido por uno o más, preferiblemente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de los mencionados anteriormente para arilo (donde el heterociclilo como substituyente de heterociclilo no tiene un substituyente heterociclilo adicional distinto de piridilo o indolilo) y de arilo según se define anteriormente, especialmente fenilo, especialmente los mencionados como preferidos. Se prefiere el heterociclilo no substituido.
En el heterociclilalquilcarbonilo R_{1}, el resto heterociclilo es preferiblemente heterociclilo substituido o especialmente no substituido según se menciona anteriormente; se prefiere heterociclil-alquil(inferior) substituido o preferiblemente no substituido, especialmente con heterociclilo substituido o preferiblemente no substituido terminal, con el heterociclilo según se describe anteriormente; se prefiere piridil-alquil(inferior)-carbonilo, tal como -acetilo o -propionilo.
Como R_{1}, se prefiere sobre los otros significados arilo no substituido o substituido o aril-alquil(inferior)carbonilo substituido.
El heteroarilo R_{2} es preferiblemente heteroarilo no substituido o substituido según se menciona anteriormente, especialmente indolilo que no está substituido o está substituido con uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de los mencionados anteriormente para arilo substituido, especialmente de hidroxi, alcoxi inferior (el más preferido), preferiblemente metoxi, halógeno, preferiblemente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), preferiblemente trifluorometilo.
R_{2} es preferiblemente arilo substituido.
Un radical alifático tiene preferiblemente hasta 12 átomos de carbono, preferiblemente hasta 7 átomos de carbono, lo más preferiblemente hasta 4 átomos de carbono, y es un radical hidrocarbonado alifático, es decir tal como un radical alquinilo, alquenilo o preferiblemente alquilo, más preferiblemente alquilo inferior, no substituido o substituido, especialmente metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo o terc-butilo.
El alquilo, que puede ser ramificado o lineal, tiene preferiblemente hasta 12 átomos de carbono, y es más preferiblemente alquilo inferior. El alquilo R_{3} es preferiblemente alquilo inferior, especialmente isobutilo.
El sufijo "inferior" indica un radical que tiene hasta e incluyendo 7, preferiblemente hasta e incluyendo 4, átomos de carbono.
Alquilo inferior es preferiblemente n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo o n-heptilo, preferiblemente isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, isopropilo, etilo o metilo, lo más preferiblemente isopropilo, etilo o metilo.
El hidroxi eterificado es, por ejemplo, alcoxi, especialmente alcoxi inferior, tal como etoxi o metoxi, ariloxi, especialmente feniloxi, aril-alcoxi(inferior), especialmente fenil-alcoxi(inferior), heterocicliloxi, especialmente piridiloxi o heterociclil-alcoxi(inferior), especialmente piridil-alcoxi(inferior) (el arilo y el heteroarilo tienen preferiblemente los significados dados anteriormente).
El hidroxi esterificado es preferiblemente hidroxi esterificado mediante un ácido carboxílico orgánico, tal como un ácido alcanoico, por ejemplo alcanoiloxi inferior.
El carboxi esterificado es, por ejemplo, alcoxicarbonilo, especialmente alcoxi(inferior)-carbonilo, tal como, por ejemplo, metoxicarbonilo.
El amino mono- o di-substituido es, preferiblemente, N-alquilamino o N,N-dialquilamino, especialmente N-alquil(inferior)-amino o N,N-di-alquil(inferior)-amino, tal como N-metilamino o N,N-dimetilamino.
El halógeno es flúor, cloro, bromo o yodo, preferiblemente flúor, cloro o bromo.
El cicloalquilo no substituido o substituido tiene preferiblemente hasta 12, más preferiblemente de 3 a 8 átomos carbonílicos de anillo y está substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de los mencionados para arilo substituido, o preferiblemente no está substituido. Se prefiere ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.
En el alquilo R_{3} substituido con cicloalquilo no substituido o substituido, el alquilo es preferiblemente como se define anteriormente, más preferiblemente alquilo inferior, especialmente isopropilo, y está substituido (preferiblemente terminalmente) por cicloalquilo según se define anteriormente.
En el alquilo R_{3} substituido con arilo no substituido o substituido, el alquilo es preferiblemente como se define en el último párrafo, y el arilo se define como anteriormente y está substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de los mencionados para arilo substituido, o no está substituido, especialmente el arilo es fenilo substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independien-
temente de halógeno, especialmente fluoro, hidroxi o alcoxi inferior, especialmente metoxi, o es fenilo no substituido.
En el alquilo R_{3} substituido con heterociclilo no substituido o substituido, el alquilo es preferiblemente como se define para el alquilo R_{3} substituido con cicloalquilo, y el heterociclilo se define como anteriormente y está substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de los mencionados para heterociclilo substituido, o no está substituido.
Si A_{1} y A_{2} son cada uno hidroxi substituido, entonces el hidroxi substituido es preferiblemente alquiloxi, especialmente alquiloxi inferior, ariloxi, especialmente con el arilo no substituido o substituido según se define anteriormente, o cicloalquiloxi con el cicloalquilo no substituido o substituido según se define anteriormente.
Si A_{1} y A_{2} junto con el átomo de boro y los átomos de oxígeno de unión forman un anillo de la fórmula IA* mostrada anteriormente, entonces W preferiblemente tiene los dos átomos de oxígeno unidos al átomo de boro en dos átomos de carbono diferentes que son átomos de carbono especialmente próximos o vecinos, especialmente en posición adyacente ("1,2") o "1,3" (uno con relación al otro).
El alquileno es preferiblemente un resto de alquileno C_{2}-C_{12}, preferiblemente C_{2}-C_{7}, no ramificado, por ejemplo etileno o propileno, en un aspecto más amplio butileno, pentileno o hexileno, unido a través de dos átomos de carbono diferentes como ya se ha descrito, preferiblemente adyacentes o en posición "1,3". Uno o más, especialmente uno, de los átomos de carbono no unidos a los átomos de oxígeno que se unen al átomo de boro pueden reemplazarse por un heteroátomo seleccionado de O, S o preferiblemente N (que tiene el número requerido de átomos de H, respectivamente), por ejemplo en 1,5-(3-azapentileno).
El alquileno substituido es preferiblemente un resto de alquileno inferior no ramificado según se define anteriormente, que está substituido o no está substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes preferiblemente seleccionados independientemente de alquilo inferior, tal como metilo o etilo, por ejemplo en 1-metiletileno, 1,2-dimetiletileno, hidroxi, por ejemplo en 2-hidroxipropileno, o hidroxi-alquilo(inferior), tal como hidroximetilo, por ejemplo en 1-hidroximetiletileno.
El cicloalquileno no substituido o substituido es preferiblemente cicloalquileno C_{3}-C_{12}, más preferiblemente C_{3}-C_{8}, unido a través de dos átomos de carbono diferentes según se describe para W, preferiblemente adyacentes o en posición "1,3", tal como ciclohexileno o ciclopentileno, en el que uno o más, especialmente uno, de los átomos de carbono no unidos a los átomos de oxígeno que se unen al átomo de boro pueden reemplazarse por un heteroátomo seleccionado de O, S o N (que tiene el número requerido de átomos de H, respectivamente), por ejemplo en tetrahidrofurileno o tetrahidropiranileno, y puede no estar substituido o estar substituido por uno o más, especialmente hasta tres substituyentes seleccionados independientemente de alquilo inferior, tal como metilo o etilo, hidroxi, hidroxi-alquilo(inferior), tal como metoxi, o mono- u oligo-sacaridilo unido a través de un átomo de oxígeno (comprendiendo preferiblemente el "oligosacaridilo" hasta cinco restos de sacaridilo).
El bicicloalquileno no substituido o substituido es preferiblemente bicicloalquileno C_{5}-C_{12} unido a través de dos átomos de carbono diferentes según se describe para W, preferiblemente adyacentes o en posición "1,3", en el que uno o más, especialmente uno, de los átomos de carbono no unidos a los átomos de oxígeno que se unen al átomo de boro pueden reemplazarse por un heteroátomo seleccionado de O, S o N (que tiene el número requerido de átomos de H, respectivamente) y puede no estar substituido o estar substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de alquilo inferior, tal como metilo o etilo, hidroxi e hidroxi-alquilo(inferior), tal como metoxi. Se prefiere el pinanileno (2,3-(2,6,6-trimetilbiciclo[3.1.1]heptano).
El bicicloalquileno no substituido o substituido es preferiblemente tricicloalquileno C_{8}-C_{12} unido a través de dos átomos de carbono diferentes según se describe para W, preferiblemente adyacentes o en posición "1,3", en el que uno o más, especialmente uno, de los átomos de carbono no unidos a los átomos de oxígeno que se unen al átomo de boro pueden reemplazarse por un heteroátomo seleccionado de O, S o N (que tienen el número requerido de átomos de H, respectivamente), y puede no estar substituido o estar substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente de alquilo inferior, tal como metilo o etilo, hidroxi e hidroxi-alquilo(inferior), tal como metoxi.
Lo más preferiblemente, R_{4} es -B(OH)_{2} o 2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo, especialmente (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo.
En el alquilo no substituido o substituido R_{5}, el alquilo, que puede ser ramificado o lineal, tiene preferiblemente hasta 11 átomos de carbono y es más preferiblemente alquilo inferior. El alquilo R_{5} es preferiblemente alquilo inferior, especialmente isopropilo. Los substituyentes, de los cuales pueden estar presentes uno o más, especialmente hasta dos, se seleccionan independientemente de arilo no substituido o substituido (especialmente fenilo o hidroxifenilo), heterociclilo no substituido o substituido (especialmente imidazolilo o indolilo), cicloalquilo no substituido o substituido, cada uno según se define anteriormente; hidroxi (preferido), carboxi (preferido), carbamoílo, mercapto, alquil(inferior)-tio, por ejemplo metiltio, fenilo, hidroxifenilo, indolilo, imidazolilo, amino, tri-alquil(inferior)-amino, por ejemplo trimetilamino, alcanoil(inferior)-amino, por ejemplo acetilamino, guanidino, N-alquil(inferior)-guanidino, por ejemplo N-metilguanidino, o cualquier otro substituyente que complete un aminoácido que comprende R_{5}. Preferiblemente, R_{5} puede ser metilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, mercaptometilo, 2-metiltioetilo, fenilmetilo, hidroxifenilmetilo, indol-3-ilmetilo, hidroximetilo, 1-hidroxietilo, 2-hidroxietilo, carbamoilmetilo, 2-carbamoiletilo, 4-aminobutilo, 3-guanidinopropilo, 5-imidazolilmetilo, carboximetilo o 2-carboxietilo.
Los átomos de carbono asimétricos de un compuesto de fórmula I que están presentes pueden existir en la configuración (R), (S) o (R,S), preferiblemente en la configuración (R) o (S), lo más preferiblemente en la configuración indicada en la fórmula I posteriormente. Los substituyentes en un doble enlace o un anillo pueden estar presente en forma cis (= Z) o trans (= E). Los compuestos pueden así estar presentes como mezclas de isómeros o preferiblemente como isómeros puros.
Los grupos formadores de sales en un compuesto de fórmula I son grupos o radicales que tienen propiedades básicas o ácidas. Los compuestos que tienen al menos un grupo básico o al menos un radical básico, por ejemplo amino, un grupo amino secundario que no forma un enlace peptídico o un radical piridilo pueden formar sales de adición de ácidos, por ejemplo con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico o un ácido fosfórico, o con ácidos carboxílicos o sulfónicos orgánicos adecuados, por ejemplo ácidos mono- o di-carboxílicos alifáticos, tales como ácido trifluoroacético, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido hidroximaleico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico o ácido oxálico, o aminoácidos tales como arginina o lisina, ácidos carboxílicos aromáticos, tales como ácido benzoico, ácido 2-fenoxibenzoico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácidos carboxílicos aromáticos-alifáticos, tales como ácido mandélico o ácido cinámico, ácidos carboxílicos heteroaromáticos, tales como ácido nicotínico o ácido isonicotínico, ácidos sulfónicos alifáticos, tales como ácido metano-, etano- o 2-hidroxietano-sulfónico o ácidos sulfónicos aromáticos, por ejemplo ácido benceno-, p-tolueno- o naftaleno-3-sulfónico. Cuando están presentes varios grupos básicos, pueden formarse sales de adición de mono- o poli-ácidos.
Los compuestos de fórmula I que tienen grupos ácidos, por ejemplo un grupo ácido borónico libre (-B(OH)_{2}, esto es, en la fórmula IA*A_{1} y A_{2} son cada uno hidroxi) o un grupo carboxi, pueden formar sales de metal o amonio, tales como sales de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, por ejemplo sales sódicas, potásicas, magnésicas o cálcicas, o sales amónicas con amoníaco o aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietilamina o tri-(2-hidroxietil)-amina, o bases heterocíclicas, por ejemplo N-etilpiperidina o N,N-dimetilpiperazina. Son posibles mezclas de sales.
Los compuestos de fórmula I que tienen grupos tanto ácidos como básicos pueden formar sales internas.
Para los propósitos de aislamiento o purificación, así como en el caso de compuestos que se usan además como productos intermedios, también es posible usar sales farmacéuticamente inaceptables, por ejemplo los picratos. Sin embargo, solo las sales atóxicas farmacéuticamente aceptables pueden usarse con propósitos terapéuticos y por lo tanto esas sales se prefieren.
Debido a la estrecha relación entre los nuevos compuestos en forma libre y en forma de sus sales, incluyendo las sales que pueden usarse como productos intermedios, por ejemplo en la purificación de los nuevos compuestos o para la identificación de los mismos, debe entenderse que cualquier referencia anteriormente y posteriormente aquí a los compuestos libres incluye las sales correspondientes, cuando es apropiado y conveniente.
Cuando se mencionan compuestos o sales, esto pretende incluir también el singular (un compuesto o una sal).
Los compuestos de fórmula I tienen propiedades farmacológicas valiosas y pueden usarse, por ejemplo, como fármacos para tratar enfermedades proliferativas.
Los compuestos de fórmula I inhiben la actividad del proteasoma. Se sabe que las proteínas elegidas para la degradación por el complejo proteasómico multicatalítico tienen entre otras cosas funciones en el control del ciclo celular (por ejemplo, cidinas, p21, p27) y la apoptosis (por ejemplo, p53) (Rolfe, M., Chiu, I. M. y Pagano, M., The ubiquitin-mediated proteolytic pathway as therapeutic area. J. Mol. Med. 75, 1997, 5-17). Los inhibidores del proteasoma son por lo tanto adecuados para el tratamiento de enfermedades proliferativas que responden a la inhibición de la actividad del proteasoma. Enfermedades proliferativas como la psoriasis y los tumores, en particular tumores sólidos como tumor de colon, tumor de mama, tumor de pulmón y tumor de próstata, pertenecen a las enfermedades que han de mencionarse aquí. Otras enfermedades proliferativas que han de tratarse son la psoriasis y la restenosis. Además, pueden tratarse enfermedades adicionales en un aspecto más amplio de la invención, por ejemplo la degradación de proteínas musculares u otras enfermedades conectadas con la degradación de proteínas intracelulares o el equilibrio de nitrógeno negativo, por ejemplo en pacientes que sufren sepsis, quemaduras, trauma, cáncer, infecciones crónicas o sistémicas, enfermedad degenerativa neuromotriz, por ejemplo distrofia muscular, acidosis, lesiones espinales o nerviosas, durante el tratamiento con corticosteroides, o similares; enfermedades relacionadas con la presentación de antígenos en células; enfermedades relacionadas con la adhesión celular; o similares, especialmente en tanto que sea eficaz la inhibición del proteasoma.
Inhibición de Proteasoma 20S
Los compuestos de fórmula I inhiben el proteasoma 20S, especialmente con alta selectividad la actividad similar a quimotripsina.
El complejo proteasómico multicatalítico es responsable de la proteolisis dependiente de ATP de la mayoría de las proteínas celulares. Aunque el proteasoma 20S contiene el núcleo proteolítico, no puede degradar proteínas in vivo a no ser que se compleje con protecciones de 19S, en cualquier extremo de su estructura, que contiene de por sí múltiples actividades de ATPasa. La mayor estructura se conoce como el proteasoma 26S y rápidamente degradará proteínas que se han elegido para la degradación mediante la adición de múltiples moléculas del polipéptido ubiquitina de 8,5 kDa. Según se menciona anteriormente, las proteínas elegidas para la degradación proteasómica tienen funciones en el ciclo celular. Los compuestos de fórmula I son por lo tanto altamente adecuados para el tratamiento de enfermedades que responden a la inhibición de la actividad del proteasoma 20S, que es el caso para las enfermedades proliferativas (o también las otras enfermedades) mencionadas anterior-
mente.
La inhibición de la actividad similar a quimotripsina del proteasoma 20S puede demostrarse mediante el siguiente experimento. Se basa en la hidrólisis del péptido fluorogénico Suc-LLVY-AMC (Succinil-leucina-leucina-valina-tirosina-7-amino-4-metil-cumarina), que es segmentado exclusivamente en el enlace Y-AMC por el proteasoma 20S. La hidrólisis de este péptido se efectúa mediante un incremento en la intensidad de fluorescencia (\lambda_{ex} (longitud de onda de excitación): 355 nm; \lambda_{em} (longitud de onda de emisión): 460 nm) debido a la liberación de la fluorescencia de 2-aminobenzoílo internamente extinguida que acompaña a la difusión separada del producto de hidrólisis
Suo-LLVY.
Se preincuban 2 \mul de una solución 1 mM de un compuesto de prueba en DMSO (dimetilsulfóxido, concentración final 20 \muM en el pocillo) durante 60 minutos a temperatura ambiente en placas de microvaloración negras de 96 pocillos junto con una mezcla de 1 \mul de proteasoma 20S de placenta humana purificado. (Diabetes Forschungsinstitut, Düsseldorf, Alemania; aproximadamente 100 ng de proteasoma, dependiendo de la preparación de proteasoma) y 47 \mul de tampón-Ca (CaCl_{2} 5 mM, Tris/HCl (hidrocloruro de tris-(hidroximetil)aminometano) 20 mM, pH 8,0). Se mezclan y se añaden 3 \mul de una solución 2,67 mM de Suo-LLVY-AMC (Bachem, Suiza) en DMSO (concentración final en el pocillo 80 mM) y 47 ml de tampón-Ca. La mezcla resultante se incuba durante 3-24 h a 37ºC. Si se desea, la proteolisis del sustrato puede detenerse mediante la adición de 50 \mul de solución de parada (ácido monocloroacético 100 mM, NaOH 130 mM, ácido acético 100 mM, pH = 4,3). La fluorescencia se controla con un lector de placas de microvaloración FLUOROSKAN ASCENT™.
Para cada serie de medidas se llevaron a cabo dos experimentos de control.
1.)
valor 0%: se usan 2 \mul de DMSO en el ensayo descrito anteriormente en lugar de 2 \mul de una solución 1 mM de un compuesto de prueba en DMSO y 48 \mul de tampón-Ca en lugar de una mezcla de 47 \mul de tampón-Ca y 1 \mul de proteasoma purificado.
2.)
valor 100%; en el ensayo descrito anteriormente se usan 2 \mul de DMSO en lugar de 2 \mul de una solución 1 mM del compuesto de prueba en DMSO.
Cálculo
% \ de \ actividad \ restante \ = \ \frac{(valor \ con \ compuesto - valor \ 0%)}{(valor \ 100% - valor \ 0%)} \cdot 100%
El valor IC_{50} se define como la concentración de un compuesto a la que la actividad restante es 50% en comparación con el control de 0%. Los compuestos de fórmula I exhiben un valor de IC_{50} para la inhibición de la actividad similar a quimotripsina del proteasoma 20S en el intervalo de entre 0,3 nM y 1 \muM, especialmente entre 0,5 nM y
200 nM.
Por otra parte, los compuestos de acuerdo con la invención son altamente específicos para la actividad similar a quimotripsina.
La inhibición de la actividad similar a tripsina (TrpL) y la actividad hidrolizante de peptidoglutamilo (PGPH) del proteasoma 20S puede demostrarse controlando la hidrólisis de los péptidos fluorogénicos Boc-LRR-AMC (Boc-leucina-arginina-arginina-7-amino-4-metil-cumarina) con respecto a la actividad de TrpL y la hidrólisis de Z-LLE-AMC (Z-leucina-leucina-glutamato-7-amino-4-metil-cumarina) con respecto a la actividad de PGPH. Los péptidos se segmentan exclusivamente en el enlace aminoácido-AMC mediante la actividad proteolítica correspondiente del proteasoma 20S. La hidrólisis de los péptidos está acompañada por un incremento en la intensidad de fluorescencia (\lambda_{ex} =
355 nm, \lambda_{em} = 460 nm) provocado por la liberación de la fluorescencia de 2-aminobenzoílo extinguida internamente, según ya se ha descrito.
Se preincuban 2 \mul de una solución 1 mM de un compuesto de prueba en DMSO (dimetilsulfóxido, concentración final en el pocillo 20 \muM) durante 60 minutos a temperatura ambiente en placas de microvaloración negras de 96 pocillos junto con una mezcla de 1 \mul de proteasoma 20S humano (aproximadamente 10 ng de proteasoma purificados de eritrocitos humanos según se describe por Dahlmann y otros, Biochem. J. 309, 195-202 (1995) y McGuire y otros, Biochim. Biophys. Acta 995(2), 181-186 (1989)) y 47 \mul de tampón-Ca (CaCl_{2} 5 mM, Tris/HCl (hidrocloruro de tris-(hidroximetil)aminometano) 20 mM, pH 8,0). Se mezclan y se añaden 3 \mul de una solución 2,67 mM de Suc-LLVY-AMC (Bachem, Suiza) en DMSO (concentración final en el pocillo 80 \muM) y 47 \mul de tampón-Ca para ensayar la actividad de ChyL. Se mezclan y se añaden 3 \mul de una solución 1,67 mM de Boc-LRR-AMC (Affinity, Mamhead, UK) en DMSO (concentración final en el pocillo 50 \muM) o 3 \mul de una solución 3,67 mM de Z-ILE-AMC (Calbiochem/Juro Supply AG, Lucerne, Suiza) en DMSO (concentración final en el pocillo 80 \muM) y 47 \mul de tampón-Ca para ensayar la actividad de TryL o PGPH, respectivamente. La mezcla resultante se incuba durante de 3-24 h a 37ºC. Si se desea, la proteolisis del sustrato puede detenerse mediante la adición de 50 \mul de solución de parada (ácido monocloroacético 100 mM, NaOH 130 mM, ácido acético 100 mM, pH = 4,3). La fluorescencia se controla con un lector de placas de microvaloración FLUOROSKAN ASCENT™.
Para cada serie de medidas se han llevado a cabo dos experimentos de control
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1.)
valor 0%: se usan 2 \mul de DMSO en el ensayo descrito anteriormente en lugar de 2 \mul de una solución 1 mM de un compuesto de prueba en DMSO y 48 \mul de tampón-Ca en lugar de una mezcla de 47 \mul de tampón-Ca y 1 \mul de proteasoma purificado.
2.)
valor 100%; en el ensayo descrito anteriormente se usan 2 \mul de DMSO en lugar de 2 \mul de una solución 1 mM del compuesto de prueba en DMSO.
Cálculo
% \ de \ actividad \ restante = \frac{(valor \ con \ compuesto - valor \ 0%)}{(valor \ 100% - valor \ 0%)} \cdot 100%
El valor IC_{50} se define como la concentración de un compuesto a la que la actividad restante es 50%.
En estos sistemas de prueba, la selectividad de los compuestos de la fórmula I para la actividad similar a quimotripsina es más de 20 veces, preferiblemente de 50 a 3000 veces superior que para la actividad similar a tripsina o hidrolizante de peptidoglutamilo, siendo esta selectividad una ventaja adicional en los compuestos de fórmula I.
La actividad antiproliferativa de los compuestos de fórmula I puede demostrarse in vitro contra, por ejemplo, la línea celular de carcinoma de mama humano MDA-MB435 (HTB-129) obtenida de the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, EE.UU. de A.). Habitualmente, se usa el ensayo de proliferación CellTiter96™ (Promega, Madison MI) siguiendo el procedimiento recomendado por el suministrador. Este ensayo se realiza en placas de 96 pocillos preparadas para cultivo tisular. Las células se siembran en una densidad de 2,5 x 10^{4} por pocillo en 50 \mul de MEM [medio esencial mínimo] completo (Gibco-Life Technologies) complementado con 10% de suero de ternero fetal, 100 U/ml de PenStrep, piruvato sódico 1 mM, L-glutamina 4 mM, HEPES 20 mM y aminoácidos no esenciales. Las células se incuban durante 24 horas a 37ºC en atmósfera humidificada equilibrada con CO_{2} al 5%. Los compuestos de prueba se añaden al sobrenadante celular como diluciones en serie en 50 \mul de MEM completo por pocillo. Las células se incuban durante al menos 48 horas a 37ºC en atmósfera humidificada equilibrada con CO_{2} al 5%. El colorante de tetrazolio MTT (bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio) se añade al sobrenadante celular en un volumen de 15 \mul por pocillo y los cultivos celulares se incuban durante 4 horas. Posteriormente, la reacción se detiene mediante la adición de 100 \mul de solución de parada por pocillo y las placas se incuban durante 1 hora adicional. La conversión del colorante de tetrazolio mediante células metabólicamente activas da formazano soluble. La absorbancia del sobrenadante celular de color azul es proporcional a la cantidad de células viables. La absorbancia se controla a la longitud de onda de 550 y 630 mm usando un lector de placas de microvaloración (Dynatech MR5000).
Se preparan diluciones en serie de compuesto diluyendo en primer lugar la solución de reserva de compuesto 10 mM (en DMSO) hasta una solución de prueba 60 \muM en MEM completo seguido por 9 diluciones 1:3 sucesivas en MEM completo. Los pocillos que contienen MEM completo sirven como control negativo, fondo (0%). Los pocillos que contienen células y MEM/DMSO al 0,6% sirven como control positivo (100%). El % de actividad restante se determina calculando como se describe anteriormente con respecto a la inhibición de la actividad similar a quimotripsina del proteasoma 20S. El valor de IC_{50} se define como la concentración de un compuesto a la que la actividad restante es 50%.
Los compuestos de fórmula I exhiben un valor de IC_{50} para la actividad antiproliferativa en el intervalo de entre 0,5 nM y 1 \muM, especialmente entre 1 nM y 200 nM.
La acción antitumoral de los compuestos de fórmula I también puede demostrarse in vivo.
Evaluación in vivo de la acción antitumoral en ratones desnudos usando xenoinjertos de tumor humano
Ratones BALB/c nu/nu hembra o macho (Novartis animal farm, Sisseln, Suiza o Bomholtgaard, Copenhague, Dinamarca) con tumores humanos trasplantados subcutáneamente se usan para la evaluación de la acción antitumoral de los compuestos de fórmula I contra líneas celulares que se originan a partir de los cuatro tipos de tumores, tumor de mama: MCF-7; tumor de pulmón: NCI H596; tumor de colon: HCT 116 y tumor de próstata PC 3.
Materiales
Carcinoma de colon humano HCT 116 (ATCC CCL 247), carcinoma pulmonar de células escamosas humano NCI H596 (ATCC HTB 178), carcinoma de mama dependiente de estrógenos MCF-7 (ATCC HTB 22) y la línea celular de cáncer de próstata humano PC3 se obtienen de the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, EE.UU. de A.). Las células se cultivan a 37ºC en una atmósfera de 5% p/p de CO_{2} y 80% de humedad relativa en los siguientes medios: NCI H 596: RPMI 1640, FBS (suero bovino fetal) al 20% v/v, glutamina al 1% p/v; HCT-116: 5A de McCoy, FBS al 10% v/v, glutamina al 1% p/v; PC 3: RPMI 1640; FBS al 20% v/v, glutamina al 1% p/v; MCF-7, RMPI 1640, FBS al 20% v/v, glutamina al 1% p/v. Todas estas líneas celulares son adherentes y pueden liberarse enjuagando con sal equilibrada de Hank y tratamiento con tripsina al 0,25% p/v. Todas estas células se preparan como reservas principales de células (en medios de cultivo complementados para contener FBS al 20% v/v y DSMO al 7% v/v) y se almacenan a -125ºC (vapores de nitrógeno líquido). Las reservas de células de trabajo se preparan a partir de las reservas principales descongelando y expandiendo las células a lo largo de tres pasajes, que se distribuyen a continuación a viales y se congelan. La viabilidad (prueba de exclusión con azul de tripano usando azul de tripano al 0,5% p/v) antes de la congelación es > 90% para todas las líneas celulares).
Establecimiento de tumores sólidos en ratones desnudos
Los ratones se mantienen bajo condiciones controladas (Condiciones Higiénicas Óptimas, [OHC]) con acceso libre a alimento y agua estériles. Los tumores se establecen después de la inyección subcutánea de células (un mínimo de 2 x 10^{6} células en 100 de PBS (solución salina tamponada con fosfato o medio) en ratones portadores (4-8 ratones por línea celular). Las inyecciones se realizan s.c. en el flanco izquierdo del ratón a medio camino entre la cola y la cabeza. Los tumores resultantes se hacen pasar en serie durante un mínimo de tres trasplantes consecutivos antes del inicio del tratamiento. Los tumores se trasplantan cuando el tumor alcanza un volumen de 800 a 1000 mm^{3}.
Trasplante de tumores sólidos en ratones desnudos
Ratones donantes son anestesiados (Forene®, Abbott, Suiza) y sacrificados mediante dislocación cervical. La piel se desinfecta y el tumor se retira mediante disección. Los bordes externos de la masa del tumor se retiran usando un escalpelo y la masa resultante se corta en trozos de aproximadamente 3-4 mm de altura. Se cortan secciones de 3-4 mm^{2} y se ponen en NaCl estéril al 0,9% p/v. Las secciones de tumor que son necróticas no se usan.
Se implantan fragmentos tumorales s.c. en el flanco izquierdo de los ratones receptores. Los ratones receptores son anestesiados (Forene®, Abbott, Suiza) y la piel de todo el lomo y los costados del ratón se desinfecta. La piel de 0,5 a 1 cm por encima de la cola se eleva y se realiza una sola incisión de 1 a 1,5 cm. Las secciones de tumor se introducen en una aguja de trocar de calibre 13. La aguja de trocar se introduce en la abertura de la piel y se hace avanzar bajo la piel hasta un punto a medio camino entre la cabeza y la cola. El fragmento de tumor se deposita haciendo avanzar el trocar. La herida se sutura usando una o dos grapas metálicas.
En el caso de tumores de mama dependientes de estrógenos, nódulos de estrógeno (17b-estradiol, 5 mg/nódulo, que da una liberación sostenida a lo largo de 60 días, se obtiene de Innovative Research of America, Sarasota, EE.UU. de A.), se colocan subcutáneamente en el otro flanco.
Se deja que los tumores se incrementen hasta que el tamaño es de 100 a 150 mm^{3} antes de que se comience el tratamiento. Los tumores se miden a continuación y se ponen en grupos (normalmente n = 6 a 8) que se equilibran de acuerdo con el tamaño medio y el intervalo de volúmenes de tumor. Los grupos se asignan aleatoriamente a grupos de tratamiento.
Preparación y aplicación de compuestos de prueba
Soluciones de reserva de 40 mg/ml de compuesto se disuelven en DMSO al 100% y se agitan a temperatura ambiente hasta que se obtienen soluciones transparentes. Antes de cada administración, se añade Tween® 80 (Fluka, Buchs, Suiza; monoestearato de polioxietilensorbitán; Tween® es una marca comercial de ICI Americas Inc. EE.UU. de A.) al 10% a la solución de reserva y a continuación se diluye 1:20 (v/v) con NaCl al 0,9% p/v o agua estériles. Las soluciones y diluciones se preparan diariamente antes de la aplicación. Las aplicaciones se dan 7 días a la semana (p.o., i.p., s.c. o i.v.). Los volúmenes de aplicación son: p.o. 25 ml/kg; i.p. 25 ml/kg; s.c. 10 ml/kg; i.v. 10 ml/kg.
Medida de los volúmenes de los tumores: El crecimiento tumoral se verifica una vez, dos veces o tres veces a la semana (dependiendo de la velocidad de crecimiento de la línea tumoral) y 24 horas después del último tratamiento midiendo diámetros perpendiculares. Se usan calibres capaces de determinar distancias de mm. Los volúmenes de los tumores se calculan de acuerdo con la fórmula L x D^{2} x \pi/6 (L: longitud; D: diámetro). La actividad antitumoral se expresa como % de T/C (incremento medio de volúmenes de tumores de animales tratados dividido por el incremento medio de volúmenes de tumores de animales de control multiplicado por 100). La regresión del tumor (%) representa el menor volumen medio del tumor en comparación con el volumen medio del tumor al inicio del tratamiento. Delta (\Delta) volúmenes de tumores comparaba el cambio en el volumen del tumor a lo largo de la duración del experimento (volumen el último día del tratamiento menos volumen el primer día de tratamiento). Cualesquiera animales en los que el tumor alcance un tamaño que supere aproximadamente de 1500 a 2000 mm^{3} se sacrifican.
Medidas adicionales
También se recogen pesos corporales y datos de supervivencia. Delta (\Delta) pesos corporales se calcula como una indicación de la capacidad de tolerancia al tratamiento (peso el último día de tratamiento - peso el primer día de tratamiento). La pérdida de peso corporal estadísticamente significativa o las mortalidades se consideran indicadores de una escasa capacidad de tolerancia al tratamiento. Adicionalmente, los ratones se controlan una vez o dos veces al día con respecto a la salud general.
Análisis estadístico
El enfoque básico para los análisis estadísticos es usar pruebas para comparaciones múltiples para juzgar la significación estadística de las diferencias entre grupos de tratamiento y las diferencias dentro de un grupo para determinar si el tratamiento inducía regresiones de una enfermedad estable o un tumor. Como los volúmenes de tumores subcutáneos no siempre están distribuidos normalmente, se determinan las diferencias en los volúmenes de tumores subcutáneos entre grupos de tratamiento usando la prueba ANOVA unidireccional de Kruskat-Wallis no paramétrica sobre datos ordenados por rangos y la significación estadística de las diferencias entre grupos de tratamiento en comparación con grupos de control se determinan usando la prueba de Dunnett. Las comparaciones por pares entre todos los grupos se realizan usando el método de Sutdent-Newman-Keuls (SNK). Si solo se comparan dos grupos, se usa la prueba de suma de rangos. Los pesos corporales de los animales están distribuidos normalmente y los cambios en los pesos corporales dentro de un grupo se analizan mediante pruebas t apareadas y entre diferencias de grupos se analizan mediante un ANOVA unidireccional y comparaciones por pares realizadas usando la prueba de Tukey. Para todas las pruebas el nivel de significación se fija en p < 0,05.
Usando los mismos métodos, en lugar de las líneas de células tumorales mencionadas también puede usarse la línea de células de tumor de mama independiente de estrógenos MDS-MB435 (HTB-129) obtenible de the American Type Culture Collection. El cultivo de esta línea celular es MEM, FBS al 10% v/v, glutamina al 1% p/v; adherencia y liberación según se describe anteriormente para las otras líneas celulares.
Otra prueba in vivo para determinar la acción antitumoral de los compuestos de fórmula I es el siguiente ensayo en fibras huecas:
Ensayo en Fibras Huecas: evaluación de la acción antitumoral en ratones desnudos
En este ensayo, cuatro tumores humanos diferentes encapsulados en fibras huecas se implantan subcutáneamente y/o intraperitonealmente en ratones desnudos (ratones desnudos hembra exógamos atímicos (Ncr nu/nu)). Los animales se tratan a continuación con un compuesto de prueba formulado en un vehículo apropiado, mientras que los animales de control se tratan con el vehículo solo. Al final del experimento, las fibras se recuperan y el número de células viables se mide usando un ensayo metabólico (MTT, bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio). La actividad del compuesto de prueba se mide comparando el crecimiento de células en los animales experimentales (T) con
el crecimiento de células en los animales de control tratados con el vehículo solo (C) y se expresa como % de T/C.
Materiales
Carcinomas de colon humanos SW 620 y LS 174T y carcinoma de mama MDA-MB-435S se obtienen de the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, EE.UU. de A.). El carcinoma de colon MIP 101, que expresa altos niveles de pgp-1, se estableció originalmente a partir de un paciente del Dana Farber Cancer Institute, Boston, EE.UU. de A. Todas las líneas celulares se hacen crecer de acuerdo con técnicas de cultivo tisular estándar en RPMI 1640 que contiene los siguientes aditivos: 5% de FBS (suero bovino fetal), 5 mg/ml de insulina, 5 mg/ml de transferrina, 5 ng/ml de ácido selenioso, \beta-estradiol 1 nM, testosterona 1 nM.
Diseño del ensayo
Las líneas celulares de tumores sólidos humanos se encapsulan en fibras huecas de PVDF (poli(fluoruro de vinilideno)) que son permeables a moléculas < 500.000 daltons y que tienen un diámetro interno de 1 mm (Biopore, Spectrum Medical, CA, EE.UU. de A.). Después de la incubación y antes de la implantación en los animales, se deja que las células se unan a la superficie interna de la fibra mediante incubación en el medio de cultivo tisular durante 24 horas. Cuatro fibras huecas se implantan a continuación en un animal intraperitonealmente o subcutáneamente. En el montaje experimental se usan de cuatro a seis animales por grupo y el experimento consiste en un mínimo de tres grupos:
1. Grupo "tiempo 0"
2. Grupo de control (placebo)
3. Grupo "tratado" (compuesto probado).
El tratamiento comienza 24 horas después de la implantación de las fibras. Los animales se tratan una vez al día, los días 1, 3 y 5. En el mismo momento en el que comienza el tratamiento, los animales del grupo "Tiempo 0" se sacrifican, las fibras se recuperan y se determina el número de células viables al comienzo del experimento (T_{0}). El día 7 después de la implantación todos los animales son sacrificados, las fibras se recuperan y se determina el número de células viables para el Control (C_{v}) y para los grupos "Tratados" (T_{v}). Se calcula a continuación % de T/C de acuerdo con la fórmula:
% T/C = (T_{v} - T_{0})/(C_{v} - T_{0}) \ x \ 100%
Encapsulación de células tumorales en fibras huecas
Las fibras se cortan a la longitud deseada y se sumergen durante al menos 72 h en etanol al 70%. Posteriormente, las fibras y los instrumentos de la encapsulación se esterilizan. La línea celular de tumor sólido humano desarrollada en cultivo tisular se tripsiniza, se suspende en una pequeña cantidad de medio de cultivo tisular y se transfiere a las fibras usando una jeringa. Las fibras se termosellan y se incuban a 37ºC durante 24 h en una atmósfera que comprende CO_{2} al 5%. Las fibras se implantan a continuación subcutánemanete y/o intraperitonealmente en los ratones desnudos.
Determinación de células viables en fibras huecas
Se añade 1 g de MTT a 200 ml de PBS (solución salina tamponada con fosfato), se agita durante 20 minutos y se filtra (filtro de 0,22 micras). Se mezclan 10 ml de esta solución con 40 ml de RMPI 1640 con aditivos para dar la solución de trabajo de MTT. Las fibras recuperadas se incuban en 5 ml de RPMI 1640 durante 30 minutos a 37ºC en CO_{2} al 5% para la estabilización. Se añaden 0,5 ml de solución de trabajo de MTT a cada pocillo de la placa de muestras. Las placas se incuban a 37ºC en CO_{2} al 5% durante 4 h. El MTT se aspira de cada pocillo de la placa de muestras. Se añaden 2 ml de solución acuosa de sulfato de protamina al 2,5% a cada pocillo de la placa de muestras. Las placas se incuban a 4ºC durante 24 h. El sulfato de protamina se aspira de cada pocillo de la placa de muestras. Se añaden 2 ml de sulfato de protamina a cada pocillo y las placas se incuban a 4ºC durante 2-4 h más. Cada fibra se transfiere a un pocillo en una placa de 24 pocillos. Las fibras se acortan dejándolas que descansen sobre el fondo de los pocillos y se secan durante la noche. Se añaden 250 \mul de DMSO a cada pocillo. Las placas se ponen en una batidora orbital durante 4 h con un cubierta para proteger el MTT de la luz. Se transfieren 150 \mul de cada muestra al pocillo apropiado en una placa de 96 pocillos. Las placas se leen a 540 nm usando DMSO como el pocillo del blanco.
La biodisponibilidad después de la administración oral de compuestos de fórmula I puede mostrarse, por ejemplo, en la siguiente prueba. Para la administración por vía oral, se prepara una solución de la substancia de prueba (25 mg/ml) en un disolvente adecuado tal como Cremophor RH40®/Maisine®/propilenglicol/etanol (38/32/15/15). Ratones Balb/c hembra se mantienen en ayunas durante 24 horas antes del inicio y a lo largo del experimento se da agua a voluntad. En diversos momentos después de la administración del fármaco, se obtienen muestras de sangre sacrificando los animales bajo anestesia cortando la vena yugular, seguido por dislocación cervical. Las muestras se recogen en tubos heparinizados (típicamente 0,4-0,6 ml). Para el análisis de muestras se usan extracción en fase sólida y HPLC. La concentración de fármaco en las muestras se calcula mediante análisis de regresión lineal de mínimos cuadrados de la relación de las áreas de los picos (inhibidor/patrón interno) de patrones de sangre con aditivos frente a la concentración. A partir de los datos de concentración frente al tiempo, se calcula el valor del "Área Bajo la Curva" (AUC) mediante la regla trapezoidal.
Modalidades preferidas de la invención
En las siguientes modalidades preferidas de la invención, las definiciones o expresiones generales pueden, individualmente, independientemente para varias o todas completamente, reemplazarse por definiciones más específicas que las dadas anteriormente, si no se menciona otra cosa, definiendo así modalidades aún más preferidas de la invención.
Se da preferencia a compuestos de fórmula I en los que
R_{1} es aril-alquil(inferior)-carbonilo substituido o arilo no substituido o substituido,
R_{2} es arilo substituido o heterociclilo no substituido o substituido,
R_{3} es alquilo inferior, arilo no substituido o substituido o alquilo inferior que está substituido o arilo no substituido o substituido,
R_{4} es un resto de la fórmula IA dada anteriormente en la que A_{1} y A_{2} son hidroxi, alquiloxi inferior, ariloxi con arilo no substituido o substituido o cicloalquiloxi con cicloalquilo no substituido o substituido, o en la que A_{1} y A_{2}, junto con el átomo de boro de unión y los dos átomos de oxígeno de unión, forman un anillo de la fórmula IA* dada anteriormente en el que W es alquileno inferior no substituido o substituido unido a través de dos átomos de carbono diferentes que son espacialmente próximos o adyacentes, especialmente en posición adyacente o, relativamente entre sí, "1,3",
y
R_{5} es alquilo inferior,
o sales de los mismos.
Se da más preferencia a compuestos de la fórmula I en los que
R_{1} es feniloxifenil-alquil(inferior)-carbonilo; fenil-alcoxi(inferior)-fenil-alquil(inferior)-carbonilo; piridiloxifenil-alquil(inferior)-carbonilo; fenil-alquil(inferior)-carbonilo substituido por alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, o halógeno-alquilo(inferior), especialmente trifluorometilo; o preferiblemente fenilo o naftilo no substituido o substituido, en donde en ambos casos los substituyentes, si están presentes, son independientemente uno o más, especialmente de uno a tres, substituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior, alcanoiloxi inferior, carboxi, alcoxi(inferior)-carbonilo, formilo, alcanoílo inferior, amino, N-alquil(inferior)-amino, N,N-di-alquil(inferior)-amino, mercapto, sulfo, alquil(inferior)-tio, carbamoílo, N-alquil(inferior)-carbamoílo, N,N-di-alquil(inferior)-carbamoílo, fenilo, naftilo, piridilo, ciano y nitro, más preferiblemente alcoxi inferior, especialmente metoxi o etoxi;
R_{2} es fenilo substituido por uno o más, especialmente de uno a tres, restos seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), especialmente trifluorometilo.
R_{3} es alquilo inferior, especialmente isobutilo, fenilo o fenilo substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), especialmente trifluorometilo;
R_{4} es -B(OH)_{2} (especialmente preferido) o 2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo, especialmente (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo; y
R_{5} es alquilo inferior, especialmente isopropilo;
o sales de los mismos.
Se da preferencia especialmente a compuestos de fórmula I, en los que
R_{1} es feniloxifenilacetilo, benciloxifenilacetilo, piridiloxifenilacetilo, bifenililo, piridilfenilo, alquil(inferior)-fenilo o fenilpropioniloxi substituido en el que los substituyentes del fenilo son hasta tres substituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metoxi, fluoro, cloro y trifluorometilo;
R_{2} es fenilo substituido con hasta tres substituyentes metoxi, especialmente 2,3,4-trimetoxifenilo o 3,4,5-trimetoxifenilo;
R_{3} es isobutilo o fenilo que no está substituido o está substituido con hasta tres restos seleccionados independientemente de hidroxi, fluoro y metoxi;
R_{4} es (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo o especialmente-B(OH)_{2}; y
R_{5} es isopropilo;
o sales de los mismos.
Se da además preferencia especialmente a compuestos de fórmula I, en los que
R_{1} es bifenililo, alquilo(inferior)-fenilo, fenil-alquil(inferior)-carbonilo, fenoxifenil-alquil(inferior)-carbonilo, fenil-alcoxi(inferior)-fenil-alquil(inferior)-carbonilo o piridilfenilo; R_{2} es fenilo substituido por de uno a tres radicales alcoxi inferior o fenil-alcoxi(inferior)-fenilo;
R_{3} es alquilo inferior o fenil-alquilo(inferior);
R_{4} es 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-ilo, (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.
1.0^{2,6}]dec-4-ilo o -B(OH)_{2}; y
R_{5} es alquilo inferior;
o sales de los mismos.
Se da una preferencia muy especial a compuestos de fórmula I o sales de los mismos en los que la estereoquímica es como se representa en la fórmula I*
4
en la que la configuración mostrada representa la configuración absoluta y en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados que se definen para un compuesto de fórmula I, especialmente los significados descritos anteriormente aquí como preferidos.
También se prefieren compuestos de fórmula I o sales de los mismos, en los que la estereoquímica es como se representa en la fórmula I**
5
en la que la configuración mostrada representa la configuración absoluta y en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados que se definen para un compuesto de fórmula I, especialmente los significados descritos anteriormente aquí como preferidos.
También son preferidos adicionalmente compuestos de fórmula I o sales de los mismos, incluyendo mezclas de diastereoisómeros, en los que la estereoquímica es como se representa en la fórmula I***
6
en la que la configuración mostrada representa la configuración absoluta y en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados que se definen para un compuesto de fórmula I, especialmente los significados descritos anteriormente aquí como preferidos.
Los más especialmente preferidos son los compuestos de fórmula I descritos en los Ejemplos, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Los compuestos de fórmula I o las sales de los mismos se preparan de acuerdo con procedimientos conocidos de por sí, aunque no estén previamente descritos para la fabricación de los compuestos de la fórmula I. Los procedimientos comprenden preferiblemente
a)
hacer reaccionar un análogo dipeptídico de la fórmula II,
\vskip1.000000\baselineskip
7
en la que R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados dados bajo la fórmula I, con un aminoácido de la fórmula III,
8
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{1} y R_{2} tienen los significados dados bajo la fórmula I, protegiéndose los grupos funcionales presentes en un compuesto de fórmula II y/o III, con la excepción de los grupos que participan en la reacción, si es necesario, mediante grupos protectores fácilmente retirables, y cualesquiera grupos protectores presentes se retiran,
o
b)
para la producción de un compuesto de la fórmula I en la que R_{1} es arilalquilcarbonilo o heterociclilalquilcarbonilo y los otros restos R_{2} a R_{5} tienen los significados dados bajo la fórmula I, hacer reaccionar un aminocompuesto de la fórmula IV,
9
en la que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados dados bajo la fórmula I, con un ácido carbónico de la fórmula V
10
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{1} es arilalquilcarbonilo o heterociclilalquilcarbonilo, estando protegidos los grupos funcionales presentes en un compuesto de fórmula IV y/o V, con la excepción de los grupos que participan en la reacción, si es necesario, por grupos protectores fácilmente retirables, y cualesquiera grupos protectores presentes se retiran, y, si se desea, convertir un compuesto de fórmula I obtenido mediante el procedimiento a) o b) en otro compuesto de fórmula I, convertir un compuesto libre obtenido de fórmula I en una sal, convertir una sal obtenida de un compuesto de fórmula I en una sal diferente o en su forma libre, y/o separar una mezcla de compuestos isómeros de fórmula I en los isómeros individuales.
Los posibles diferentes estereoisómeros de compuestos de fórmula I pueden prepararse usando aductos con la configuración apropiada. Por ejemplo, los compuestos de fórmula I* o sales de los mismos pueden prepararse
a)
haciendo reaccionar un análogo dipeptídico de la fórmula II*,
11
en la que R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados dados bajo la fórmula I, con un aminoácido de la fórmula III*,
12
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{1} y R_{2} tienen los significados dados bajo la fórmula I,
estando protegidos los grupos funcionales presentes en un compuesto de fórmula II* y/o III*, con la excepción de los grupos que participan en la reacción, si es necesario, por grupos protectores fácilmente retirables, y cualesquiera grupos protectores presentes se retiran,
o
b)
para la producción de un compuesto de la fórmula I* en la que R_{1} es arilquilcarbonilo o heterociclilalquilcarbonilo y los otros restos R_{2} a R_{5} tienen los significados dados bajo la fórmula I, hacer reaccionar un aminocompuesto de la fórmula IV*
13
en la que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados dados bajo la fórmula I, con un ácido carbónico de la fórmula V,
14
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{1} es arilalquilcarbonilo o heterociclilalquilcarbonilo, estando protegidos los grupos funcionales presentes en un compuesto de fórmula IV* y/o V, con la excepción de los grupos que participan en la reacción, si es necesario, por grupos protectores fácilmente retirables, y cualesquiera grupos protectores se retiran,
y, si se desea, convertir un compuesto de fórmula I* obtenido mediante el procedimiento a) o b) en otro compuesto de fórmula I*, convertir un compuesto libre obtenido de fórmula I* en una sal o convertir una sal obtenida de un compuesto de fórmula I* en una sal diferente o en su forma libre.
Notas Generales
Los productos finales de fórmula I pueden contener substituyentes que también pueden usarse como grupos protectores en materiales de partida para la preparación de otros productos finales de fórmula I, por ejemplo en el caso de R_{4} distinto de -B(OH)_{2}. Así, dentro del alcance de este texto, solo un grupo fácilmente retirable que no sea un constituyente del producto final deseado particular de fórmula I se denomina un "grupo protector", a no ser que el contexto indique otra cosa.
La protección de grupos funcionales mediante tales grupos protectores, los propios grupos protectores y sus reacciones de segmentación se describen, por ejemplo, en trabajos de referencia estándar, tales como J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres y Nueva York 1973, en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Tercera edición, Wiley, Nueva York 1999, en "The Peptides"; Volumen 3 (editores: E. Gross y J. Meienhofer), Academic Press, Londres y Nueva York 1981, en "Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4ª edición, Volumen 15/l, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, en H. D. Jakubke y H. Jescheit, "Aminosäuren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach y Basel 1982 y en Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974.
Una característica de los grupos protectores es que pueden retirarse fácilmente (es decir, sin la presencia de reaccione secundarias no deseadas), por ejemplo, mediante solvolisis, reducción, fotolisis o alternativamente bajo condiciones fisiológicas (por ejemplo, mediante segmentación enzimática).
La retirada de un grupo protector para el grupo -B(OH)_{2} (para obtener un compuesto de la fórmula I en el que R_{4} es -B(OH)_{2}) tiene lugar preferiblemente con un ácido, por ejemplo cloruro de hidrógeno, en un disolvente apropiado, por ejemplo un alcanol inferior, tal como metanol, o un alcano inferior, tal como hexano, o una mezcla de los mismos, a temperaturas de 0 a 50ºC, por ejemplo a temperatura ambiente.
Procedimiento a)
La reacción se lleva a cabo disolviendo los compuestos de fórmulas II y III en un disolvente adecuado, por ejemplo N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metil-2-pirrolidona, cloruro de metileno o una mezcla de dos o más de tales disolventes, y mediante la adición de una base adecuada, por ejemplo trietilamina, diisopropiletilamina (DIEA) o N-metilmorfolina, y un agente de acoplamiento adecuado que forma un derivado reactivo preferido del ácido carbónico de fórmula III in situ, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida/1-hidroxibenzotriazol (DCC/HOBT); tetrafluoroborato de O-(1,2-dihidro-2-oxo-1-piridil)-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (TPTU); tetrafluoroborato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (TBTU) o hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC). Para la revisión de otros posibles agentes de acoplamiento, véase, por ejemplo, Klauser; Bodansky, Synthesis 1972, 453-463. La mezcla de reacción se agita preferiblemente a una temperatura de entre aproximadamente -20 y 50ºC, especialmente entre 0ºC y temperatura ambiente, para dar un compuesto de fórmula I. La reacción se lleva a cabo preferiblemente bajo un gas inerte, por ejemplo nitrógeno o argón.
Procedimiento b)
La reacción se lleva a cabo preferiblemente bajo condiciones análogas a las descritas para el procedimiento a).
Las sales de un compuesto de fórmula I con un grupo formador de sal pueden prepararse de una manera conocida de por sí. Sales de adición de ácidos de compuestos de fórmula I pueden así obtenerse mediante el tratamiento con un ácido o con un reactivo de intercambio aniónico adecuado.
Las sales pueden convertirse habitualmente en compuestos libres, por ejemplo tratando con agentes básicos adecuados, por ejemplo con carbonatos, hidrogenocarbonatos o hidróxidos de metales alcalinos, típicamente carbonato potásico o hidróxido sódico.
Las mezclas estereoisómeras, por ejemplo mezclas de diastereoisómeros, pueden separarse en sus isómeros correspondientes de una manera conocida de por sí por medio de métodos de separación adecuados. Las mezclas diastereoisómeras, por ejemplo, pueden separarse en sus diastereoisómeros individuales por medio de cristalización fraccionada, cromatografía, distribución en disolventes y procedimientos similares. Esta separación puede tener lugar a nivel de uno de los compuestos de partida o en un compuesto de fórmula I de por sí. Los enantiómeros pueden separarse a través de la formación de sales diastereoisómeras, por ejemplo mediante formación de sal con un ácido quiral enantiómeramente puro, o por medio de cromatografía, por ejemplo mediante HPLC, usando sustratos cromatográficos con ligandos quirales.
Los compuestos de la fórmula I en la que R_{4} es distinto de -B(OH)_{2} pueden convertirse en compuestos de la fórmula I en los que R_{4} es -B(OH)_{2} de acuerdo con procedimientos estándar, por ejemplo usando ácido isobutilborónico (i-BuB(OH)_{2}) en presencia de un ácido, especialmente un ácido halohídrico, en una mezcla de agua/metanol/hexano, a temperaturas que varían preferiblemente de 0 a 50ºC, por ejemplo a temperatura ambiente.
En ambos procedimientos a) y b), para la conversión o para la síntesis de los productos intermedios sobre el material de partida, especialmente como se describe posteriormente, los disolventes de los que pueden seleccionarse aquellos que son adecuados para la reacción en cuestión incluyen, por ejemplo, agua, ésteres, típicamente alcanoato inferior de alquilo inferior, por ejemplo acetato de dietilo, éteres, típicamente éteres alifáticos, por ejemplo éter dietílico, o éteres cíclicos, por ejemplo tetrahidrofurano, hidrocarburos aromáticos líquidos, típicamente benceno o tolueno, alcoholes, típicamente metanol, etanol o 1- o 2-propanol, nitrilos, típicamente acetonitrilo, hidrocarburos halogenados, típicamente diclorometano, amidas de ácidos, típicamente dimetilformamida, bases, típicamente bases nitrogenadas heterocíclicas, por ejemplo piridina, ácidos carboxílicos, típicamente ácidos alcano(inferior)-carboxílicos, por ejemplo ácido acético, anhídridos de ácido carboxílico, típicamente anhídridos de alcano(inferior)-ácido, por ejemplo anhídrido acético, hidrocarburos cíclicos, lineales o ramificados, típicamente ciclohexanos, hexano o isopentano, o mezclas de estos disolventes, por ejemplo soluciones acuosas, a no ser que se indique otra cosa en la descripción del procedimiento. Tales mezclas de disolventes también pueden usarse en el procesamiento, por ejemplo a través de cromatografía o distribución.
Nuevos materiales de partida y/o productos intermedios, así como los procedimientos para la preparación de los mismos, son asimismo la materia de esta invención. En la modalidad preferida, se usan tales materiales de partida y condiciones de reacción seleccionadas tal como para permitir la fabricación de los compuestos preferidos.
Los materiales de partida de fórmulas II-V o sus precursores son conocidos, pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos o pueden obtenerse comercialmente, en particular, pueden prepararse usando procedimientos idénticos o análogos a los descritos en los Ejemplos.
Un compuesto de fórmula II, en la que los substituyentes son como se definen anteriormente bajo la fórmula I, puede obtenerse, por ejemplo, mediante las siguientes reacciones:
En primer lugar, un análogo de ácido borónico de un aminoácido de la fórmula VI
15
que comprende, por ejemplo, la configuración que se indica en la fórmula VI*
16
en la que R_{3} tiene los significados dados anteriormente para los compuestos de fórmula I y R_{4} tiene los significados distintos de -B(OH)_{2} mencionados anteriormente para los compuestos de fórmula I, especialmente es (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo, o una sal de adición de ácido del mismo, especialmente la sal del mismo con ácido trifluorácetico, se condensa con un aminoácido de la fórmula VII
17
que comprende, por ejemplo, la configuración que se indica en la fórmula VII*
18
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{5} tiene los significados dados anteriormente para compuestos de la fórmula I y Pr_{1} es un grupo amino protegido, preferiblemente terc-butoxicarbonilamino, bajo condiciones de reacción análogas a las descritas para la reacción a) anteriormente (también una reacción de condensación, también preferiblemente con formación in situ de derivados de ácido carbónico activos), dando así un compuesto de fórmula II en forma protegida en N que a continuación se desprotege en N, por ejemplo usando condiciones descritas en los libros de texto estándar mencionados anteriormente, en el caso de terc-butoxicarbonilamino, por ejemplo, con ácido clorhídrico en un disolvente apropiado, por ejemplo dioxano y/o cloruro de metileno, dando un compuesto de la fórmula II que puede usarse directamente en el procedimiento a).
Los ácidos borónicos de la fórmula VI son conocidos, están disponibles comercialmente y/o pueden sintetizarse de acuerdo con procedimientos conocidos. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula VI en la que R_{3} es alquilo inferior, especialmente isobutilo, y R_{4} es como se describe para los compuestos de la fórmula VI, preferiblemente 1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo, pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula VIII,
\vskip1.000000\baselineskip
19
en la que R_{4} tiene los significados que se acaban de describir, en un disolvente apropiado, por ejemplo cloruro de metileno, con n-alquil(inferior)-litio, especialmente n-butil-litio, y subsiguientemente con cloruro de zinc, dando un compuesto de la fórmula IX,
20
en la que R_{4} tiene los significados dados anteriormente bajo la fórmula VI. Este compuesto se hace reaccionar a continuación con LiN(SiCH_{3})_{2}, y el compuesto resultante se hace reaccionar a continuación en presencia de ácido trifluoroacético para dar la sal de la fórmula X,
21
en la que R_{4} tiene los significados dados bajo la fórmula VI, que es un compuesto de la fórmula VI y puede usarse a continuación directamente para la reacción con el compuesto de fórmula VII según se menciona anteriormente.
Un compuesto de la fórmula III es conocido, está disponible comercialmente y/o puede obtenerse de acuerdo con procedimientos estándar.
Por ejemplo, un compuesto de la fórmula III en la que R_{1} es arilo, especialmente bifenililo, puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula XI,
22
que comprende, por ejemplo, la configuración que se indica en la fórmula XI*
23
en la que R_{2} tiene el significado dado para un compuesto de la fórmula I, que es conocido, está disponible comercialmente o puede obtenerse de acuerdo con procedimientos estándar, con un compuesto de la fórmula XII,
(XII) R_{1}-X
en la que R_{1} es arilo y X es halógeno, especialmente bromo, en un disolvente apropiado, por ejemplo en dimetilformamida, en presencia de una base, especialmente un carbonato de metal alcalino, por ejemplo carbonato potásico, a temperaturas entre 50 y 100ºC, por ejemplo a 90ºC, preferiblemente bajo un gas inerte, por ejemplo nitrógeno o argón. Esto da directamente el compuesto correspondiente de la fórmula III.
Los derivados de aminoácido de la fórmula VII son conocidos, están disponibles comercialmente o pueden obtenerse de acuerdo con procedimientos estándar. Se usan preferiblemente en la forma protegida en amino, por ejemplo con terc-butoxicarbonilamino, en lugar del grupo amino libre.
Los compuestos de la fórmula IV pueden obtenerse, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula II que comprende, por ejemplo, la configuración que se indica en la fórmula II*, según se define en el procedimiento a), con un aminoácido protegido en N de la fórmula XIII,
24
que comprende, por ejemplo, la configuración que se indica en la fórmula XIII*
25
o un derivado reactivo del mismo, en el que R_{2} es como se define bajo la fórmula I y Pr_{2} es amino protegido, especialmente terc-butoxicarbonilamino, bajo condiciones de reacción de condensación preferidas como las descritas bajo el procedimiento a) anteriormente. A partir del compuesto resultante, se obtiene un compuesto de fórmula IV en el que el grupo amino N-terminal está presente en forma protegida, a continuación el grupo protector N-terminal se retira, por ejemplo en el caso del terc-butoxicarbonilamino con cloruro de hidrógeno en dioxano.
Preparaciones Farmacéuticas y Usos
La invención se refiere en particular al uso de un compuesto de fórmula I para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa. La invención se refiere además al uso de un compuesto de fórmula I en la inhibición del complejo proteasómico multicatalítico en animales de sangre caliente, en particular seres humanos.
Dosis eficaces, por ejemplo dosis diarias de aproximadamente 0,05 g a aproximadamente 10 g, preferiblemente de aproximadamente 0,1 g a aproximadamente 5 g, por ejemplo de aproximadamente 0,15 g a 1,5 g, de un compuesto de fórmula I se administran a una animal de sangre caliente de aproximadamente 70 kg de peso corporal de acuerdo con la especie, la edad, el estado individual, el modo de administración y el síndrome individual.
La invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo (ingrediente activo), especialmente una cantidad eficaz, lo más específicamente una cantidad eficaz en la prevención o la terapia de una de las enfermedades mencionadas anteriormente, del ingrediente activo junto con portadores farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la administración tópica, enteral, por ejemplo oral o rectal, o parenteral, que pueden ser inorgánicos u orgánicos, sólidos o líquidos o cualquier combinación de los mismos. Para la administración oral, se usan especialmente tabletas o cápsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con diluyentes, por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicerol, y/o lubricantes, por ejemplo ácido silícico, talco, ácido esteárico o sales del mismo, tales como estearato magnésico o cálcico, y/o polietilenglicol. Las tabletas también pueden comprender aglutinantes, por ejemplo silicato de magnesio y aluminio, almidones, tales como almidón de maíz, trigo o arroz, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica y/o polivinilpirrolidona y, si se desea, desintegrantes, por ejemplo almidones, agar, ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato sódico, y/o mezclas efervescentes, o adsorbentes, colorantes, saboreantes y edulcorantes. Los compuestos farmacológicamente activos de la presente invención también pueden usarse en forma de composiciones administrables parenteralmente o en forma de soluciones para infusión. Tales soluciones son preferiblemente soluciones o suspensiones acuosas isotónicas, que, por ejemplo, en el caso de las composiciones liofilizadas que comprenden el ingrediente activo solo o junto con un portador, por ejemplo manitol, pueden prepararse antes de usar. Las composiciones farmacéuticamente pueden esterilizarse y/o pueden comprender excipientes, por ejemplo conservantes, estabilizantes, agentes humectantes y/o emulsionantes, solubilizantes, sales para regular la presión osmótica y/o tampones. Las presentes composiciones farmacéuticamente que, si se desea, pueden comprender substancias farmacológicas activas adicionales, tales como antibióticos, se preparan de una manera conocida de por sí, por ejemplo por medio de procedimientos de mezcladura, granulación, combinación, disolución o liofilización convencionales. Las concentraciones de ingrediente o ingredientes activos, por supuesto, variarán dependiendo, por ejemplo, del compuesto de fórmula I empleado, el tratamiento deseado y la naturaleza de la forma. Las presentes composiciones farmacéuticas comprenden aproximadamente de 1% a 100%, especialmente de aproximadamente 1% a aproximadamente 20%, de ingrediente o ingredientes activos.
Las composiciones para administración oral, por ejemplo, pueden obtenerse formulando un compuesto de fórmula I con un medio portador que comprende una fase hidrófila, una fase lipófila y un tensioactivo. Preferiblemente, la composición está en la forma de un "preconcetrado para microemulsión" o "preconcentrado para emulsión", en particular del tipo que proporciona micromemulsiones o emulsiones de aceite en agua. Sin embargo, la composición puede estar en la forma de una microemulsión o una emulsión que contiene adicionalmente una fase acuosa, preferiblemente agua. Un "preconcentrado para microemulsión" es una formulación que forma espontáneamente una microemulsión en un medio acuoso, por ejemplo en agua o en los jugos gástricos después de la aplicación oral. Una microemulsión es una suspensión coloidal no opaca o substancialmente no opaca que se forma espontáneamente o de forma substancialmente espontánea cuando sus componentes se ponen en contacto. Una microemulsión es termodinámicamente estable. Un "preconcentrado para emulsión" es una formulación que forma espontáneamente una emulsión en un medio acuoso, por ejemplo en agua o en los jugos gástricos, después de la aplicación oral. La emulsión formada es opaca y termodinámicamente estable. La fase lipófila puede comprender de aproximadamente 10 a 85% en peso del medio portador; el tensioactivo puede comprender de aproximadamente 5 a 80% en peso del medio portador y la fase hidrófila puede comprender de aproximadamente 10 a 50% en peso del medio portador.
La fase hidrófila puede seleccionarse de, por ejemplo, Transcutol® (C_{2}H_{5}-[O-(CH_{2})_{2}]_{2}-OH), Glycofurol® (también conocido como éter polietilenglicólico de alcohol tetrahidrofurfurílico) y 1,2-propilenglicol, o mezclas de los mismos, y es preferiblemente 1,2-propilenglicol. Puede incluir co-componentes hidrófilos adicionales, por ejemplo alcanoles C_{1}-C_{5}.
Componentes de la fase lipófila preferidos son triglicéridos de ácidos grasos de cadena media, mono-, di- y tri-glicéridos mixtos y aceites vegetales etoxilados transesterificados.
Ejemplos de tensioactivos adecuados son:
i)
productos de reacción de un aceite de ricino natural o hidrogenado y óxido de etileno. Los aceites disponibles bajo el nombre comercial Cremophor® (BASF, AG, Alemania) son especialmente adecuados. Particularmente adecuados son Cremophor RH 40® (resultante de una relación de 1:40 a 1:45 de aceite de ricino hidrogenado a óxido de etileno durante la síntesis) y Cremophor RH 60® (resultante de una relación 1:60 de aceite de ricino hidrogenado a óxido de etileno durante la síntesis). También son adecuados aceites de ricino polietilenglicólicos tales como el que está disponible bajo el nombre comercial Cremophor EL® (resultante de una relación de 1:35 a 1:40 de aceite de ricino a óxido de etileno durante la síntesis). Productos similares o idénticos que también pueden usarse están disponibles bajo los nombres comerciales Nikkol®, Mapeg®, Incrocas® (Croda Inc., EE.UU. de A.) y Tagat® (Th. Goldschmidt, Alemania);
ii)
ésteres de ácido graso de polioxietilensorbitán, por ejemplo ésteres del tipo conocido y disponible comercialmente bajo el nombre comercial Tween® (ICI Americas, Inc. EE.UU. de A.);
iii)
ésteres de ácido graso polioxietilénico, por ejemplo ésteres de ácido polioxietilenesteárico del tipo conocido y disponible comercialmente bajo el nombre comercial Myrj® (ICI Americas, Inc. EE.UU. de A.);
iv)
copolímeros y copolímeros de bloques de polioxietileno-polioxipropileno, por ejemplo del tipo conocido y disponible comercialmente bajo los nombres comerciales Pluronic® (BASF AG, Alemania), Emkalyx® y Poloxamer®, se prefieren especialmente Pluronic F68® y Poloxamer 188®;
v)
dioctilsulfosuccinato o di-[2-etilhexil]-succinato;
vi)
fosfolípidos, en particular lecitina.
vii)
mono- y di-ésteres de ácido graso propilenglicólicos.
El tensioactivo seleccionado preferiblemente tiene un HLB (equilibrio hidrófilo/lipófilo) de al menos 10. Las características físicas completas de los productos mencionados aquí por su nombre comercial pueden obtenerse, por ejemplo, de H. P. Fiedler, "Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und Angrenzende Gebiete", Editio Cantor, D-7960 Aulendorf, Alemania, tercera edición corregida y aumentada (1989).
Por ejemplo, una preparación farmacéutica adecuada se formula a partir de una mezcla de Cremophor®/etanol 2:1 que, con propósitos de inyección i.v., se diluye 1:4 (v/v) con una solución de dextrosa al 5% en agua.
Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir aditivos o ingredientes adicionales, por ejemplo antioxidantes. Exhiben propiedades especialmente ventajosas cuando se administran oralmente, por ejemplo en términos de consistencia y alto nivel de biodisponibilidad obtenido en experimentos de biodisponibilidad estándar. Los parámetros farmacocinéticos, por ejemplo absorción y niveles en sangre, también se hacen sorprendentemente más predecibles y los problemas en la administración con la absorción errática pueden eliminarse o reducirse. Adicionalmente, la composición farmacéutica es eficaz con materiales superficieactivos, por ejemplo sales biliares, presentes en el tracto gastrointestinal.
Las composiciones farmacéuticas para uso oral se combinan preferiblemente en forma de dosificación unitaria, por ejemplo rellenándolas en envueltas para cápsulas oralmente administrables. Las envueltas para cápsulas pueden ser envueltas para cápsulas de gelatina blanda o dura. Sin embargo, si se desea, las composiciones farmacéuticas pueden estar en una forma de solución para bebida y pueden incluir agua y cualquier otro sistema acuoso, para proporcionar sistemas de emulsión o microemulsión adecuados para bebida.
La presente invención se refiere en particular al uso de compuestos de fórmula I en la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa, por ejemplo de un tumor sólido.
Ejemplos
Los siguientes Ejemplos ilustran la invención pero no limitan el alcance de la misma de ningún modo.
Abreviaturas
abs.
absoluto
i-BuB(OH)_{2}
ácido isobutilborónico
DIEA
N-etildiisopropilamina
DMF
N,N-dimetilformamida
equiv
equivalente(s)
ES-MS
Espectroscopía de Masas con Electropulverización
EtOAc
acetato de etilo
h
hora(s)
HPLC
Cromatografía Líquida de Alta Resolución
MeOH
metanol
min
minuto(s)
p.f.
punto de fusión
MPLC
Cromatografía Líquida de Media Presión
R_{f}
relación de valores del frente obtenidos mediante TLC sobre gel de sílice 60F 254 (Merck, Darmstadt)
ta
temperatura ambiente
TBTU
tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronio
TFA
ácido trifluoroacético
TLC
Cromatografía en Capa Fina
t_{R}
tiempo de retención
Las relaciones de eluyentes y otras mezclas de disolventes se dan en volumen por volumen (v/v) si no se menciona otra cosa.
Visualización de TLC
Las manchas de TLC de los compuestos finales o productos intermedios que no son detectables mediante irradiación UV se visualizan usando una solución de tinción de permanganato potásico seguido por calentamiento de la placa. Composición de la solución de tinción de permanganato potásico:
2,5 g de KMnO_{4} (permanganato potásico) (Fluka, Buchs, Suiza)
en 800 ml de H_{2}O y 200 m l de H_{2}SO_{4} 1N.
Condiciones de HPLC Analítica
Sistema 1
Gradiente lineal CH_{3}CN al 2-100% (TFA al 0,1%) y H_{2}O (TFA al 0,1%) en 10 min + 2 min de CH_{3}CN al 100% (TFA al 0,1%); detección a 215 nm, caudal 0,7 ml/min a 25ºC. Columna: Nucleosil 120-3 C18 (125 x 30 mm).
Sistema 2
Gradiente lineal CH_{3}CN al 20-100% (TFA al 0,1%) y H_{2}O (TFA al 0,1%) en 7 min + 2 min de CH_{3}CN al 100% (TFA al 0,1%); detección a 215 nm, caudal 1 ml/min a 30ºC. Columna: Nucleosil 100-3 C18 HD (125 x 4 mm).
Sistema 3
Gradiente lineal CH_{3}CN al 20-100% (TFA al 0,1%) y H_{2}O (TFA al 0,1%) en 7 min + 2 min de CH_{3}CN al 100% (TFA al 0,1%); detección a 215 nm, caudal 1 ml/min a 30ºC. Columna: Nucleosil 100-3 C18 HD (125 x 4 mm).
Esquema Sintético 1
Ejemplos 1 y 2
26
Ejemplo 1 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
Etapa A
Una solución 4N de HCl en dioxano (5,7 ml, 22,77 mmol, 30 equiv) se añade a una solución fría (0ºC) de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]-propil}-carbámico ((A) en el Esquema Sintético 1) (0,352 g, 0,759 mmol) en CH_{2}Cl_{2} abs. (5,5 ml) bajo una atmósfera de argón. La mezcla resultante se deja calentar hasta ta y se agita durante 10 min. Se añade HCl 4N adicional (1,9 ml, 7,59 mmol, 10 equiv). La mezcla de reacción se agita durante 10 min y se concentra para dar el hidrocloruro en bruto como una espuma amarilla.
Etapa B
Se añade gota a gota (1,9 ml/min) TIEA abs. (0,72 ml, 4,14 mmol, 5 equiv) a una solución fría (0ºC) del hidrocloruro en bruto (0,331 g, 0,828 mmol), ácido (S)-2-(difenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico ((B) en el Esquema Sintético 1) (0,518 g, 0,994 mmol, 1,2 equiv) y TBTU (0,292 g, 0,910 mmol, 1,1 equiv) en DMF abs. (3,0 ml) bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se deja calentar hasta ta, se agita durante 40 min y se vierte sobre H_{2}O (45 ml) de 0ºC. El precipitado resultante se recoge mediante filtración a vacío, se disuelve en EtOAc y se lava con H_{2}O. La fase orgánica se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se concentra. El residuo se purifica mediante cromatografía en columna de gel de sílice (25 g) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 90/10) para proporcionar el compuesto del título como una espuma amarilla.
Compuesto del título: ES-MS: 754,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a R=11,85 min (Sistema 1); R_{f} = 0,72 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 90/10).
Los materiales de partida se preparan como sigue:
(a) Ácido (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (para la Etapa B)
El compuesto del título se prepara calentando una suspensión de 2-bromobifenilo (1,47 ml, 8,54 mmol, Aldrich 25,538-6), ácido (S)-2-amino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (3,4,5-OCH_{3}-phe-OH) (3,27 g, 12,81 mmol), K_{2}CO_{3} (1,18 g, 8,54 mnol) y CuI (163 mg, 0,854 mmol) en DMF abs. (10,6 mL) durante 24 h a 90ºC, bajo una atmósfera de argón. La mezcla resultante se deja enfriar hasta ta, a continuación se concentra a vacío y se purifica mediante MPLC (CH_{3}CN/H_{2}O/TFA) para proporcionar el compuesto del título.
Compuesto del título: ES-MS: 408,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 8,86 min (Sistema 1).
(b) Ácido (S)-2-Amino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (L-3,4,5-Trimetoxifenilalanina)
El compuesto del título se prepara a partir de 3,4,5-trimetoxibenzaldehído y N-acetilglicina disponibles comercialmente de acuerdo con un procedimiento de la literatura (E. M. Oltz, R. C. Bruening, M. J. Smith, K. Kustin y K. Nakanishi en J. Am. Chem. 1998, 110 (18), 6162-6172). La resolución del éster metílico de N-acetil-3,4,5-trimetoxifenilalanina racémico se realiza mediante la hidrólisis catalizada por enzima del L-éster usando Alcalase® (Novo Nordisk) según se describe en la literatura (J. J. Nestor, Jr., T. L. Ho, R. A. Simpson, B. L. Homer, G. H. Jones, G. I. McRae y B. H. Vickery en J. Med. Chem. 1982, 25 (7), 795-801; o O. D. Tyagi y P. M. Boll en Indian J. Chem. 1992, pp. 851-854).
Compuesto del título: [\alpha]_{D}^{20} = -18,9º (c = 1,025, H_{2}O); ES-MS: 256,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 2,08 min (Sistema 2).
(c) Éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]propil}carbámico
El compuesto del título se prepara según se describe en la Etapa B del Ejemplo 1, pero usando trifluoroacetato de (S)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilamonio ((C) en el Esquema Sintético 1) (para la preparación, véanse Kettner, C. A. y Shenvi, A. B. J. Biol. Chem. 1984, 259, p. 15106-15114 y Matteson, D. S. y Sadhu, K. M. J. Am. Chem. Soc. 1981, 103, p. 5241-5242) (2,395 g, 6,32 mmol), Boc-L-valina (1,373 g, 6,32 mmol), TBTU (2,23 g, 6,95 mmol, 1,1 equiv), DIEA (3,3 mL, 18,95 mmol, 3,0 equiv) y DMF (24 mL).
Compuesto del título: ES-MS: 465,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 9,95 min (Sistema 1).
Ejemplo 2 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
Se añade i-BuB(OH)_{2} a una mezcla de (S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida, metanol (4,3 ml), hexano (4,3 ml) y HCl 1N (1,45 ml). La mezcla de reacción se agita durante 2 h a ta y a continuación se disuelve con metanol (8 ml) y hexano (8 ml). Las dos capas se separan. La capa de metanol se lava dos veces con hexano, se diluye con CH_{2}Cl_{2}, se lava con H_{2}O, se seca (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se concentra. El residuo se disuelve en CH_{2}Cl_{2} y se purifica mediante cromatografía en columna de gel de sílice (20 g) (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 80/20) para proporcionar el compuesto del título como una espuma de color amarillo claro. Compuesto del título: ES-MS: 618,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,03 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Esquema Sintético 2
Ejemplos 3 y 4
27
Ejemplo 3 (S)-3-Metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida
El compuesto del título se prepara a partir de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico ((A) en el Esquema Sintético 2) mediante la reiteración del procedimiento en dos etapas (desprotección/acoplamiento) descrito en el Ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico ((D) en el Esquema Sintético 2) y ácido (3-fenoxifenil)acético ((F) en el Esquema Sintético 2) (Trans World Chemicals, Inc,; Rockville, Md,, EE.UU. de A.) como los socios en cada reacción de acoplamiento (etapa B, ejemplo 1), respectivamente. El compuesto del título se obtiene como un sólido blanco.
Compuesto del título: ES-MS: 812,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,13 min (Sistema 1); R_{f} = 0,41 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 3.1
(L-2,3,4-Trimetoxifenilalanina) de ácido (S)-2-amino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-amino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1).
Compuesto del título: ES-MS: 256,1 [M+H]^{+}; HPLC: t_{R} = 2,54 min (Sistema 2); [\alpha]_{D}^{20} = -18,5º (c = 0,99, H_{2}O).
Etapa 3.2
Ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se sintetiza partiendo de ácido (S)-2-amino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico de acuerdo con un procedimiento conocido en la técnica (M. Bodanszky en Principles of Peptide Synthesis, Akad.-Verlag. 1984).
Compuesto del título: ES-MS: 356,1 [M+H]^{+}; HPLC: t_{R} = 5,35 min (Sistema 1); [\alpha]_{D}^{20} =-2,5º (c = 0,985, MeOH).
Ejemplo 4 Ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)-acetilamino]-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 676,0 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,025 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 5 (S)-3-Metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida
El compuesto del título se prepara a partir de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico mediante la reiteración del procedimiento en dos etapas (desprotección/acoplamiento) descrito en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-(terc-butiloxicarbonilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico y ácido 3-fenilpropiónico (Fluka, Buchs, Suiza) como los socios en cada reacción de acoplamiento (etapa B, ejemplo 1), respectivamente.
Compuesto del título: ES-MS: 734,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,25 min (Sistema 1); R_{f} = 0,41 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 6 Ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 598,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,025 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 7 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 694,4 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 12,01 min (Sistema 1); R_{f} = 0,56 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 7.1
Ácido (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando O-metil-L-tirosina (Badlem). La purificación mediante MPLC (CH_{3}
CN/H_{2}O/TFA) proporcionaba el compuesto del título; ES-MS: 348,3 [M+H]^{+}_{;} HPLC: pico simple a t_{R} = 9,52 min (Sistema 1).
Ejemplo 8 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 558,0 [M-H]^{-}; HPLC: t_{R} = 6,47 min (Sistema 3); R_{f} = 0,086 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 9 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 724,4 [M+H]^{+}_{;} HPLC: pico simple a t_{R} = 11,75 min (Sistema 1); R_{f} = 0,41 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 9.1
Ácido (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando 3-(3,4-dimetoxifenil)-L-alanina (Aldrich). La purificación mediante MPLC (CH_{3}CN/H_{2}O/TFA) proporcionaba el compuesto del título; ES-MS: 378,2 [M+H]^{+}_{;} HPLC: pico simple a t_{R} = 9,10 min (Sistema 1).
Ejemplo 10 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 588,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,090 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 11 (S)-2-[(S)-2-(3-Isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando (S)-2-(3-isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 720,4 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,85 min (Sistema 1); R_{f} = 0,43 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 11.1
Ácido (S)-2-(3-isopropilfenilamino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando 1-bromo-3-isopropilbenceno (Lancaster). La purificación mediante MPLC (CH_{3}CN/H_{2}O/TFA) proporcionaba el compuesto del título; ES-MS: 374,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 8,95 min (Sistema 1).
Ejemplo 12 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 584,3 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,13 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 13 (S)-3-Metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-(3-piridin-2-il-fenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-(3-piridin-2-ilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 755,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 9,97 min (Sistema 1); R_{f} = 0,23 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 13.1
2-(3-Bromofenil)piridina
El compuesto del título se prepara de acuerdo con procedimientos de la literatura: Zhang, Biliang, Breslow, Ronald Ester Hydrolysis by a Catalytic Cyclodextrin Dimer Enzyme Mimic with a Metallobipyridyl Linking Group. J. Am. Chem. Soc. (1997), 119(7), 1676-1681; M. Van der Sluis, V. Beverwijk, A. Termaten, F. Bickelhaupt, H. Kooijman, A. L. Spek Synthesis of Novel Phosphaalkene-Based Bidentate Ligands Mes*P:CH(3-R-Ar) (R=Pyridyl, Carbaldimino) and Formation of Three-Membered Palladacycles Mes*(Me)P-CH(3-R-Ar)-PdCl by Carbopalladation of the P:C Double Bond. Organometallics (1999), 18(8), 1402-1407.
Compuesto del título: ES-MS: 235,0 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 6,64 min (Sistema 1); R_{f} = 0,17 (Hexano/Et_{2}O, 80/20).
Etapa 13.2
Ácido (S)-2-(3-piridin-2-il-fenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando 2-(3-bromofenil)piridina. La purificación mediante MPLC (CH_{3}CN/H_{2}O/TFA) proporcionaba el compuesto del título; ES-MS: 409,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 6,64 min (Sistema
1).
Ejemplo 14 Ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-(3-piridin-2-il-fenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 619,2 [M-H]^{-}; Rf = 0,044 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 15 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 754,4 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 12,08 min (Sistema 1); R_{f} = 0,66 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 15.1
Ácido (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando ácido (S)-2-amino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico. La purificación mediante MPLC (CH_{3}CN/H_{2}O/TFA) proporcionaba el compuesto del título; ES-MS: 408,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 9,42 min (Sistema 1).
Ejemplo 16 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 618,3 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,23 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 17 (S)-2-[(S)-3-(4-Benciloxifenil)-2-(bifenil-3-ilamino)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-3-(4-benciloxifenil)-2-(bifenil-3-ilamino)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 770,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 12,45 min (Sistema 1); R_{f} = 0,74 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 17.1
Ácido (S)-3-(4-benciloxifenil)-2-(bifenil-3-ilamino)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando ácido (S)-2-amino-3-(4-benciloxifenil)propiónico (O-bencil-L-tirosina). La purificación mediante MPLC (CH_{3}CN/H_{2}O/TFA) proporcionaba el compuesto del título; ES-MS: 424,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 10,40 min (Sistema 1).
Ejemplo 18 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-3-(4-Benciloxifenil)-2-(bifenil-3-ilamino)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metil-butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 633,9 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,65 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 90/10).
Ejemplo 19 (R)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(R)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico.
Compuesto del título: ES-MS: 754,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,73 min (Sistema 1); R_{f} = 0,52 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
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Etapa 19.1
Éster terc-butílico de ácido {(R)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico
El compuesto del título se prepara como se describe para el éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]propil}carbámico (ejemplo 1 (c)), pero usando Boc-D-valina (Fluka).
Compuesto del título: ES-MS: 465,4 [M+H]^{+}.
Ejemplo 20 Ácido (R)-1-{(R)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 618,2 [M-H]^{-}; Rf = 0,088 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 21 (S)-2-[(R)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando (R)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 754,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,71 min (Sistema 1); R_{f} = 0,67 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 21.1
Ácido (R)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se prepara como se describe para el ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 1), pero usando ácido (R)-2-amino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico (3,4,5-OCH_{3}-phe-
OH)
Compuesto del título: ES-MS: 408,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 9,10 min (Sistema 1).
Para la síntesis de ácido (R)-2-amino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico, véase el ejemplo 1. Después de la resolución enzimática, el éster metílico de D-aminoácido restante se hidroliza y se desacetila usando protocolos conocidos en la técnica; [\alpha]_{D}^{20} =+19,7º (c = 1,04, H_{2}O); pico simple a t_{R} = 2,11 min (Sistema 2).
Ejemplo 22 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(R)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 618,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,20 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 90/10).
Ejemplo 23 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[3-metil-1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[3-metil-1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-butilcarbamoil]propil}carbámico.
El compuesto del título se obtiene como un producto en bruto; ES-MS: 702,3 [M+H]^{+}; HPLC: t_{R} = 10,31 min (Sistema 1).
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Etapa 23.1
Éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[3-metil-1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)butilcarbamoil]propil}carbámico
El compuesto del título se prepara de forma análoga a la síntesis del éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico (ejemplo 1 (c)).
Compuesto del título: ES-MS: 413,3 [M+H]^{+}.
Ejemplo 24 Ácido 1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilbónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 618,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,076 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5); HPLC: dos picos a t_{R} = 6,23 min y 6,36 min (relación 1:1) (Sistema 3).
Ejemplo 25 (S)-2-{(S)-3-(3,4-Dimetoxifenil)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-propionilamino}-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara a partir de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico mediante la reiteración del procedimiento en dos etapas (desprotección/acoplamiento) descrito en el ejemplo 1, pero usando Boc-L-3,4-dimetoxifenilalanina (Synthetech) y ácido (3-fenoxifenil)acético (Trans World Chemicals, Inc,; Rockville, MD, EE.UU. da A.) como los socios en cada reacción de acoplamiento (etapa B, ejemplo 1), respectivamente. El compuesto del título se obtiene como una espuma; ES-MS: 782,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,76 min (Sistema 1); R_{f} = 0,61 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 90/10).
Ejemplo 26 Ácido (R)-1-((S)-2-{(S)-3-(3,4-dimetoxifenil)-2-[2-(3-fenoxifenil)-acetilamino]propionilamino}-3-metilbutirilamino)-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 646,2 [M-H]^{-}; HPLC: pico simple a t_{R} = 5,90 min (Sistema 3); R_{f} = 0,12 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 90/10).
Ejemplo 27 (S)-3-Metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida
El compuesto del título se prepara a partir de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,
6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico mediante la reiteración del procedimiento en dos etapas (desprotección/acoplamiento) descrito en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico y ácido (3-fenoxifenil)acético (Trans World Chemicals, Inc,; Rockville, MD, EE.UU. de A.) como los socios en cada reacción de acoplamiento (etapa B, ejemplo 1), respectivamente. El compuesto del título se obtiene como una espuma amarilla; ES-MS: 812,4 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,36 min (Sistema 1); R_{f} = 0,53 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 27.1
Ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico
El compuesto del título se sintetiza como se describe para el ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 3) pero partiendo de ácido (S)-2-amino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 356 [M+H]^{+}; HPLC: t_{R} = 4,83 min (Sistema 2); p.f. = 76-80ºC; [\alpha]_{D}^{20} = +13,4º
(c = 1,01, metanol).
Ejemplo 28 Ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)-acetilamino]-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 676,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,14 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 29 (S)-2-{(S)-3-(4-Benciloxifenil)-2-[2-(3-benciloxifenil)acetilamino]-propionilamino}-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
El compuesto del título se prepara a partir de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico mediante la reiteración del procedimiento en dos etapas (desprotección/acoplamiento) descrito en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-3-(4-benciloxifenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propiónico y ácido (3-fenoxifenil)acético (Trans World Chemicals, Inc.; Rockville, MD, EE.UU. de A.) como los socios en cada reacción de acoplamiento (etapa B, ejemplo 1), respectivamente. El compuesto del título se obtiene como una espuma beige; ES-MS: 842,0 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 12,19 min (Sistema 1); R_{f} = 0,37 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 29.1
Ácido (S)-3-(4-benciloxifenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propiónico
El compuesto del título se sintetiza como se describe para el ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico (ejemplo 3) pero partiendo de O-bencil-L-tirosina (Fluka). Compuesto del título: ES-MS: 370,1 [M-H]^{-}; HPLC: t_{R} = 9,23 min (Sistema 1).
Ejemplo 30 Ácido (R)-1-((S)-2-{(S)-3-(4-benciloxifenil)-2-[2-(3-benciloxifenil)-acetilamino]propionilamino}-3-metilbutirilamino)-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 705,8 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,12 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 31 [(R)-3-Metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butil]amida de ácido (S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-4-metilpentanoico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-3-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]butil}carbámico.
Compuesto del título: ES-MS: 768,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,79 min (Sistema 1); R_{f} = 0,72 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 31.1
Éster terc-butílico de ácido {(S)-3-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]butil}carbámico
El compuesto del título se prepara como se describe para el éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcamoil]propil}carbámico (ejemplo 1 (c)), pero usando Boc-L-leucina. Compuesto del título: ES-MS: 479,2 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 10,05 min (Sistema 1).
Ejemplo 32 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-4-metil-pentanoilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 632,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,15 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 33 [(R)-3-Metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]amida de ácido (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxi-fenil)propionilamino]-4-metilpentanoico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-3-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]butil}carbámico y ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 738,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,76 min (Sistema 1); R_{f} = 0,59 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 34 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-4-metilpentanoilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 602,2 [M-H]^{-}; Rf = 0,14 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 35 [(R)-3-Metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo-[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butil]amida de ácido (S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-4-metilpentanoico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-3-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]butil}carbámico y ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 708,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 12,03 min (Sistema 1); R_{f} = 0,70 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 36 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)-propionilamino]-4-metilpentanoilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 572,1 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,25 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 90/10).
Ejemplo 37 (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoiletil}-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionamida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico.
Compuesto del título: ES-MS: 726,3 [M+H]^{+;} HPLC: pico simple a t_{R} = 11,24 min (Sistema 1); R_{f} = 0,41 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 37.1
Éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-Metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1, 1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico
El compuesto del título se prepara como se describe para el éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico (etapa 1.1, ejemplo 1), pero usando Boc-L-alanina (Fluka). Compuesto del título: ES-MS: 437,4 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 10,91 min (Sistema 1).
Ejemplo 38 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]propionilamino}-3-metilbutilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 590,0 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,12 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 39 (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionamida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico y ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 726,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,71 min (Sistema 1); R_{f} = 0,45 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 40 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)-propionilamino]propionilamino}-3-metil-butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 590,0 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,033 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 41 (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]etil}propionamida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico y ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 666,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,63 min (Sistema 1); R_{f} = 0,46 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 42 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino-3-(4-metoxifenil)-propionilamino]propionilamino}-3-metil-butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 530,3 [M-H]^{-}; Rf = 0,051 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 43 (S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxi-fenil)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]etil}propionamida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico y ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 696,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,39 min (Sistema 1); R_{f} = 0,53 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 44 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)-propionilamino]propionilamino}-3-metil-butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 560,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,023 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 45 (S)-2-(3-Isopropilfenilamino)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionamida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico y ácido (S)-2-(3-isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 692,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,49 min (Sistema 1); R_{f} = 0,24 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 46 Ácido (R)-1-(S)-2-{(S)-2-(3-isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]propionilamino}-3-metil-butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 560,2 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,22 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 47 (S)-N-{(S)-1-[(R)-3-Metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionamida
El compuesto del título se prepara a partir de éster terc-butílico de ácido {(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}carbámico mediante la reiteración del procedimiento en dos etapas (desprotección/acoplamiento) descrito en el ejemplo 1, pero usando ácido (S)-2-amino-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propiónico y ácido 3-fenilpropiónico (Fluka) como los socios en cada reacción de acoplamiento (etapa B, ejemplo 1), respectivamente. Compuesto del título: ES-MS: 706,3 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 10,81 min (Sistema 1); R_{f} = 0,32 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 48 Ácido (R)-3-metil-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]propionilamino} butilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 570,3 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,22 (CH_{2}
Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Ejemplo 49 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)etil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)etilcarbamoil]propil}carbámico.
Compuesto del título: ES-MS: 788,0 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,66 min (Sistema 1); R_{f} = 0,79 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5).
Etapa 49.1
Éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)etilcarbamoil]propil}carbámico
El compuesto del título se prepara análogamente a la síntesis de éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]propil}carbámico (ejemplo 1 (c)). Compuesto del título: ES-MS: 499,1 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 10,78 min (Sistema
1).
\newpage
Ejemplo 50 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-2-feniletilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 652,2 [M-H]^{-}; Rf = 0,22 (CH_{2}Cl_{2}/
MeOH, 95/5).
Ejemplo 51 (S)-2-[(S)-2-(Bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il-etil]butiramida
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 1, pero usando éster terc-butílico de ácido {(S)-2-metil-1-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)etilcarbamoil]propil}carbámico y ácido (S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propiónico.
Compuesto del título: ES-MS: 727,9 [M+H]^{+}; HPLC: pico simple a t_{R} = 11,87 min (Sistema 1); R_{f} = 0,73 (CH_{2}Cl_{2}/
MeOH, 95/5).
Ejemplo 52 Ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-2-feniletilborónico
El compuesto del título se prepara como se describe en el ejemplo 2; ES-MS: 591,8 [M-H]^{-}; R_{f} = 0,13 (CH_{2}Cl_{2}/
MeOH, 95/5).
Ejemplo 53 Inhibición de la actividad similar a quimiotripsina del proteasoma 20S
Valores de IC_{50} ejemplares determinados de acuerdo con la prueba descrita anteriormente para compuestos de fórmula I se dan posteriormente (Tabla 1).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo IC_{50} [\muM] (resultados de uno Ejemplo IC_{50} [\muM] (resultados de uno
o dos experimentos) o dos experimentos)
1 0,0046/0,0024 28 0,0008
2 0,0028/0,0021 29 0,004
3 0,0017/0,0014 30 0,0059
4 0,0019/0,0015 31 0,0022
5 0,0013/0,0006 32 0,0037
6 0,0018/0,0019 33 0,0026
7 0,0029/0,0032 34 0,0013
8 0,0028/0,0045 35 0,0023
9 0,0017/0,0022 36 0,0023
10 0,0029/0,004 37 0,0013
11 0,0039 38 0,0017
12 0,0038 39 0,0019
13 0,0013 40 0,0022
14 0,0017 41 0,0012
(Continuación)
Ejemplo IC_{50} [\muM] (resultados de uno Ejemplo IC_{50} [\muM] (resultados de uno
o dos experimentos) o dos experimentos)
15 0,0071 42 0,0019
16 0,0059 43 0,0018
17 0,0093 44 0,001
18 0,0015 45 0,0013
21 0,0015 46 0,0019
22 0,0017 47 0,0008
23 0,0021 48 0,0007
24 0,0021 50 0,0023
25 0,0008 51 0,0043
26 0,001 52 0,005
27 0,0003
Ejemplo 54 Composición para Aplicación Oral
Pueden prepararse 20,0 g de una solución para aplicación oral de uno cualquiera de los compuestos del título dados en los ejemplos 1 a 5 como sigue (% significa peso de ingrediente/peso total de la solución):
Cremophor RH 40® 9,6 g (48%)
mono-di-tri-glicéridos de aceite de maíz 5,8 g (29%)
propilenglicol 3,8 g (19%)
compuesto de fórmula I 0,8 g (4%)
La solución se prepara inmediatamente antes de usar.

Claims (16)

1. Un compuesto de la fórmula I
28
en la que
R_{1}
es arilo no substituido o substituido; arilalquilcarbonilo, en el que el resto arilo no está substituido o está substituido; heterociclilo no substituido o substituido; o heterociclilalquilcarbonilo, en el que el resto heterociclilo no está substituido o está substituido;
R_{2}
es arilo no substituido o substituido o heteroarilo no substituido o substituido;
R_{3}
es hidrógeno, arilo no substituido o substituido o alquilo que no está substituido o está substituido por
\quad
- cicloalquilo no substituido o substituido,
\quad
- arilo no substituido o substituido o
\quad
- heteroarilo no substituido o substituido que comprende al menos un átomo de nitrógeno;
R_{4}
es un resto de la fórmula IA,
29
\quad
en la que A_{1} y A_{2} son hidroxi o hidroxi substituido, o junto con el átomo de boro de unión y los dos átomos de oxígeno de unión forman un anillo de la fórmula IA*,
30
\quad
en la que W es alquileno, alquileno substituido, cicloalquileno no substituido o substituido, bicicloalquileno no substituido o substituido o tricicloalquileno no substituido o substituido; y
R_{5}
es alquilo no substituido o substituido, arilo no substituido o substituido, heterociclilo no substituido o substituido o cicloalquilo no substituido o substituido;
o una sal del mismo.
2. Un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la estereoquímica es como se representa en la fórmula I*
31
en la que la configuración mostrada representa la configuración absoluta y en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son como se definen para la fórmula I en la reivindicación 1,
o una sal del mismo.
3. Un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que
R_{1} es aril-alquil(inferior)-carbonilo substituido o arilo no substituido o substituido,
R_{2} es arilo substituido o heterociclilo no substituido o substituido,
R_{3} es alquilo inferior, arilo no substituido o substituido o alquilo inferior que está substituido o arilo no substituido o substituido,
R_{4} es un resto de la fórmula IA dada anteriormente en la que A_{1} y A_{2} son hidroxi, alquiloxi inferior, ariloxi con arilo no substituido o substituido o cicloalquiloxi con cicloalquilo no substituido o substituido, o en la que A_{1} y A_{2}, junto con el átomo de boro de unión y los dos átomos de oxígeno de unión, forman un anillo de la fórmula IA* dada anteriormente en el que W es alquileno inferior no substituido o substituido unido a través de dos átomos de carbono diferentes que son espacialmente próximos o adyacentes, especialmente en posición adyacente o, relativamente entre sí, "1,3", y
R_{5} es alquilo inferior;
o una sal del mismo.
4. Un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que
R_{1} es feniloxifenil-alquil(inferior)-carbonilo; fenil-alcoxi(inferior)-fenil-alquil(inferior)-carbonilo; piridiloxifenil-alquil(inferior)-carbonilo; fenil-alquil(inferior)-carbonilo substituido por alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, o halógeno-alquilo(inferior), especialmente trifluorometilo; o preferiblemente fenilo o naftilo no substituido o substituido, en donde en ambos casos los substituyentes, si están presentes, son independientemente uno o más, especialmente de uno a tres, substituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior, alcanoiloxi inferior, carboxi, alcoxi(inferior)-carbonilo, formilo, alcanoílo inferior, amino, N-alquil(inferior)-amino, N,N-di-alquil(inferior)-amino, mercapto, sulfo, alquil(inferior)-tio, carbamoílo, N-alquil(inferior)-carbamoílo, N,N-di-alquil(inferior)-carbamoílo, fenilo, naftilo, piridilo, ciano y nitro, más preferiblemente alcoxi inferior, especialmente metoxi o etoxi;
R_{2} es fenilo substituido por uno o más, especialmente de uno a tres, restos seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), especialmente trifluorometilo.
R_{3} es alquilo inferior, especialmente isobutilo, fenilo o fenilo substituido por uno o más, especialmente hasta tres, substituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidroxi, alcoxi inferior, especialmente metoxi, halógeno, especialmente fluoro o cloro, y halógeno-alquilo(inferior), especialmente trifluorometilo;
R_{4} es -B(OH)_{2} (especialmente preferido) o 2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo, especialmente (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo; y
R_{5} es alquilo inferior, especialmente isopropilo;
o una sal del mismo.
5. Un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que
R_{1} es feniloxifenilacetilo, benciloxifenilacetilo, piridiloxifenilacetilo, bifenililo, piridilfenilo, alquil(inferior)-fenilo o fenilpropioniloxi substituido en el que los substituyentes del fenilo son hasta tres substituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en metoxi, fluoro, cloro y trifluorometilo;
R_{2} es fenilo substituido con hasta tres substituyentes metoxi, especialmente 2,3,4-trimetoxifenilo o 3,4,5-trimetoxifenilo;
R_{3} es isobutilo o fenilo que no está substituido o está substituido con hasta tres restos seleccionados independientemente de hidroxi, fluoro y metoxi;
R_{4} es (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-ilo o especialmente-B(OH)_{2}; y
R_{5} es isopropilo;
o una sal del mismo.
6. Un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que
R_{1} es bifenililo, alquilo(inferior)-fenilo, fenil-alquil(inferior)-carbonilo, fenoxifenil-alquil(inferior)-carbonilo, fenil-alcoxi(inferior)-fenil-alquil(inferior)-carbonilo o piridilfenilo;
R_{2} es fenilo substituido por de 1 a 3 radicales alcoxi inferior o fenil-alcoxi(inferior)-fenilo;
R_{3} es alquilo inferior o fenil-alquilo(inferior);
R_{4} es 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-ilo, (1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.
1.0^{2,6}]dec-4-ilo o -B(OH)_{2}; y
R_{5} es alquilo inferior;
o una sal del mismo.
7. Un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, seleccionado del grupo que consiste en
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico y
ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)-propionilamino]-butirilamino}-butilborónico,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, seleccionado del grupo que consiste en
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
(S)-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida, y
(S)-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, seleccionado del grupo que consiste en
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico
ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-(3-piridin-2-ilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino)-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-3-(4-benciloxifenil)-2-(bifenil-3-ilamino)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metil-butilborónico,
ácido (R)-1-{(R)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico,
\newpage
ácido (R)-1-{(S)-2-[(R)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido 1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-((S)-2-{(S)-3-(3,4-dimetoxifenil)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]propionilamino]-3-metilbutirilamino)-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-3-metil-1-{(S)-3-metil-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butirilamino}butilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-3-(4-benciloxifenil)-2-[2-(3-benciloxifenil)acetilamino]propionilamino}-3-metilbutirilamino)-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-4-metilpentanoilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-4-metilpentanoilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-4-metilpentanoilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]propionilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]propionilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]propionilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propionilamino]-propionilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]propionilamino}-3-metilbutilborónico,
ácido (R)-3-metil-1-{(S)-2-[(S)-2-(3-bifenilpropionilamino)3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino}butilborónico,
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-2-feniletilborónico, y
ácido (R)-1-{(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-3-metilbutirilamino}-2-feniletilborónico,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, seleccionado del grupo que consiste en:
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
(S)-2-[(S)-2-(isopropilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
(S)-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-(3-piridin-2-ilfenilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida,
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
\newpage
(S)-2-[(S)-3-(4-benciloxifenil)-2-(bifenil-3-ilamino)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
(R)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
(S)-2-[(R)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-3-metil-N-[3-metil-1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)butil]butiramida,
(S)-2-{(S)-3-(3,4-dimetoxifenil)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]propionilamino}-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
(S)-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]-2-[(S)-2-[2-(3-fenoxifenil)acetilamino]-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]butiramida,
(S)-2-{(S)-3-(4-benciloxifenil)-2-[2-(3-benciloxifenil)acetilamino]-propionilamino}-3-metil-N-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butil]butiramida,
[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)butil]amida de ácido (S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-propionilamino]-4-metilpentanoico,
[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butil]amida de ácido (S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)-propionilamino]-4-metilpentanoico,
[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butil]amida de ácido (S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)-propionilamino]-4-metilpentanoico,
(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]etil}-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionamida,
(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)-butilcarbamoil]etil}-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionamida,
(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}propionamida,
(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4-dimetoxifenil)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}propionamida,
(S)-2-(3-isopropilfenilamino)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionamida,
(S)-N-{(S)-1-[(R)-3-metil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6,1,1,0^{2,6}]dec-4-il)butilcarbamoil]etil}-2-(3-fenilpropionilamino)-3-(2,3,4-trimetoxifenil)propionamida,
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)etil]butiramida, y
(S)-2-[(S)-2-(bifenil-3-ilamino)-3-(4-metoxifenil)propionilamino]-3-metil-N-[(R)-2-fenil-1-((1S,2S,6R,8S)-2,9,9-trimetil-3,5-dioxa-4-boratriciclo[6.1.1.0^{2,6}]dec-4-il)etil]butiramida,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. Una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
12. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto para usar en un método para el tratamiento terapéutico del cuerpo de un ser humano o un animal.
13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
\newpage
14. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa en animales de sangre caliente, incluyendo seres humanos, que comprende, en una dosis eficaz contra dicha enfermedad, un compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
15. El uso de un compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.
16. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 o de una sal de tal compuesto, que comprende
a)
hacer reaccionar un análogo dipeptídico de la fórmula II,
\vskip1.000000\baselineskip
32
en la que R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados que se definen en la reivindicación 1, con un aminoácido de la fórmula III,
\vskip1.000000\baselineskip
33
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{1} y R_{2} tienen los significados que se definen en la reivindicación 1,
protegiéndose los grupos funcionales presentes en un compuesto de fórmula II y/o III, con la excepción de los grupos que participan en la reacción, si es necesario, mediante grupos protectores fácilmente retirables, y cualesquiera grupos protectores presentes se retiran,
o
b)
para la producción de un compuesto de la fórmula I en la que R_{1} es arilalquilcarbonilo o heterociclilalquilcarbonilo y los otros restos R_{2} a R_{5} tienen los significados que se definen en la reivindicación 1, hacer reaccionar un aminocompuesto de la fórmula IV,
\vskip1.000000\baselineskip
34
en la que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen los significados que se definen en la reivindicación 1, con un ácido carbónico de la fórmula V
\vskip1.000000\baselineskip
35
o un derivado reactivo del mismo, en donde R_{1} es arilalquilcarbonilo o heterociclilalquilcarbonilo, estando protegidos los grupos funcionales presentes en un compuesto de fórmula IV y/o V, con la excepción de los grupos que participan en la reacción, si es necesario, por grupos protectores fácilmente retirables, y cualesquiera grupos protectores presentes se retiran,
y, si se desea, convertir un compuesto de fórmula I obtenido mediante el procedimiento a) o b) en otro compuesto de fórmula I, convertir un compuesto libre obtenido de fórmula I en una sal, convertir una sal obtenida de un compuesto de fórmula I en una sal diferente o en su forma libre, y/o separar una mezcla de compuestos isómeros de fórmula I en los isómeros individuales.
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