ES2260809T3 - Metodo para la determinacion del sexo de una progenie mamifera. - Google Patents

Metodo para la determinacion del sexo de una progenie mamifera.

Info

Publication number
ES2260809T3
ES2260809T3 ES98112150T ES98112150T ES2260809T3 ES 2260809 T3 ES2260809 T3 ES 2260809T3 ES 98112150 T ES98112150 T ES 98112150T ES 98112150 T ES98112150 T ES 98112150T ES 2260809 T3 ES2260809 T3 ES 2260809T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
sperm
antibody
sex
antibodies
beads
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES98112150T
Other languages
English (en)
Inventor
Thomas L. Benjamin
Barbara Kohn
Christopher J. Basker
Susan George
David Livingston
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
VLP WATERTOWN LP
Original Assignee
VLP WATERTOWN LP
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by VLP WATERTOWN LP filed Critical VLP WATERTOWN LP
Application granted granted Critical
Publication of ES2260809T3 publication Critical patent/ES2260809T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0608—Germ cells
    • C12N5/0612—Germ cells sorting of gametes, e.g. according to sex or motility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
    • Y10S530/852—Sperm

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Analysing Materials By The Use Of Radiation (AREA)

Abstract

PROCEDIMIENTO PARA AUMENTAR EL PORCENTAJE DE LA DESCENDENCIA DE UNO U OTRO SEXO DE MAMIFEROS, QUE COMPRENDE PONER UNA MUESTRA DE SEMEN EN CONTACTO CON UN ANTICUERPO ESPECIFICO DE LOS ESPERMATOZOOS QUE DETERMINAN UN SEXO, Y SEPARAR TALES ESPERMATOZOOS DE LOS QUE DETERMINAN EL OTRO SEXO, ENCONTRANDOSE DICHO ANTICUERPO FIJADO A UN SOPORTE DE ESFERAS MAGNETICAS NO POROSAS CON UN DIAMETRO DE 0,1 A 2 MICRAS.

Description

Método para la determinación del sexo de una progenie mamífera.
La presente invención se refiere a un método para separar espermatozoides determinantes de X e Y poniendo en contacto una muestra de esperma con un anticuerpo específico para un sexo, uniéndose el anticuerpo a una perla magnética de un diámetro que permita la separación de espermatozoides que tienen motilidad suficiente como para permitir una inseminación con éxito y fecundidad.
Los ganaderos y otras personas dedicadas a la cría de animales llevan reconociendo desde hace mucho tiempo lo deseable de mejorar la probabilidad de progenie de un sexo seleccionado. En el pasado se han propuesto métodos para aumentar el porcentaje de células espermáticas X o células espermáticas Y para lograr así unas posibilidades mayores de conseguir una progenie macho o hembra, respectivamente. Se han estudiado ejemplos de investigaciones anteriores, por ejemplo, en Garner, D.L. et al., "An Overwiew of Separation of X- and Y-Spermatozoa", Proceedings of the Tenth Technical Conference on Artificial Insemination and Reproduction ("Actas del décimo congreso técnico sobre inseminación artificial y reproducción") (National Association of Animal Breeders - "Asociación Nacional de Criadores de Animales"), págs. 87-92 (1984) y Pincel, D. et al., "Flow Cytometric Determination of the Proportions of X- and Y-Chromosome Bearing Sperm In Samples of Purportedly Separated Bull Sperm", J. Animal Scien., 60, págs. 1303-1307 (1985).
Métodos previos han incluido, por ejemplo, métodos basados en la sedimentación por densidad (véase, por ejemplo, Brandriff, B.F. et al., "Sex Chromosome Ratios Determined by Karyotipic Análisis in Albumin-Isolated Human Sperm", Fértil. Steril., 46, págs. 678-685 (1986)).
La patente de los EE.UU. 3.687.806 concedida a Van Den Bovenkamp describe un método inmunológico para controlar el sexo de una progenie mamífera mediante el uso de anticuerpos que reaccionan bien con los cromosomas X o Y y que utiliza una etapa de aglutinación para separar los anticuerpos unidos de los anticuerpos no afectados.
La patente de los EE.UU. 4.191.749 concedida a Bryant describe un método para aumentar el porcentaje de progenie mamífera de cualquier sexo mediante el uso un anticuerpo específico de macho asociado a un material inmunoabsorbente en fase sólida para unirse selectivamente a espermatozoides determinantes de macho, mientras que los espermatozoides determinantes de hembra permanecen sin unir en un sobrenadante.
La patente de los EE.UU. 5.021.244 concedida a Spaulding describe un método para clasificar células vivas basándose en el contenido de ADN, particularmente poblaciones espermáticas para producir subpoblaciones enriquecidas en esperma X o Y por medio de proteínas de membrana asociadas al sexo y anticuerpos específicos para tales proteínas.
El documento WO 9707399 describe un método para separar espermatozoides determinantes de X e Y utilizando anticuerpos y filtración a través de un filtro de lana de vidrio. Se describe un ejemplo teórico adicional que utiliza perlas magnéticas con un diámetro de 4,5 micras.
Sin embargo, estos métodos a menudo dan como resultado una separación insuficiente de esperma X e Y y a menudo dañan el esperma, reduciendo así su motilidad y su tasa de éxito de fecundidad.
Es, por tanto, un objeto de la presente invención proporcionar un método de separación de espermatozoides determinantes de X e Y que comprende poner en contacto una muestra de semen con un anticuerpo específico para espermatozoides determinantes de un sexo y separar dichos espermatozoides de espermatozoides determinantes del otro sexo, estando dicho anticuerpo unido a un soporte de perla magnética no poroso que tiene de 0,1 a 2 micras.
Es un objeto adicional de la presente invención proporcionar un método para aumentar la probabilidad de que una progenie mamífera no humana sea de un sexo deseado específico.
Es un objeto adicional de la invención proporcionar un método para la separación de espermatozoides determinantes de X e Y sin comprometer la motilidad o la tasa de fecundidad de los espermatozoides separados.
Es todavía un objeto adicional de la invención proporcionar un método para separar esperma determinante de X e Y mediante anticuerpos específicos para el esperma seleccionado, unido a perlas magnéticas, tal como se esbozó anteriormente, para permitir una separación altamente específica, de modo que se proporcione una muestra de esperma enriquecida en un tipo de espermatozoides seleccionado y sustancialmente libre del otro tipo de espermatozoides.
Estos y objetos adiciones de la presente invención se consiguen mediante un método tal como se esbozó anteriormente que pone en contacto una muestra de esperma con anticuerpos específicos frente a un tipo de espermatozoides seleccionado, estando unidos los anticuerpos a perlas, preferiblemente perlas magnéticas que tienen un diámetro de desde 0,1 hasta 2 micras, y posteriormente extraer las perlas, mediante lo cual puede recogerse el sobrenadante restante y contiene espermatozoides sólo del tipo determinante de X o Y.
La presente invención proporciona la separación de esperma portador de X e Y que es competente para fecundar utilizando técnicas convencionales de IA. Tal como se indicó anteriormente, los métodos de separación anteriores a menudo comprometen la motilidad y capacidad de fecundación del esperma, de modo que la fecundación que utiliza tal esperma separado requiere técnicas complicadas tales como FIV (fecundación in vitro). Puede utilizarse el método de la invención para separar esperma de X e Y de una variedad de especies mamíferas, incluyendo ganado diverso, tal como ganado vacuno y ovejas, así como perros, gatos, caballos, cerdos y otras especies. El procedimiento también puede aplicarse al semen humano.
Mediante la presente invención, puede separarse una muestra de esperma que contiene tanto esperma X como Y para producir una subpoblación espermática enriquecida en X o Y que es sustancialmente pura con respecto a los espermatozoides deseados y sustancialmente libre del otro tipo de espermatozoides. Por "sustancialmente libre" se quiere decir que el uso de una muestra enriquecida, por ejemplo, con esperma X, si se utiliza para inseminación artificial, sólo tendría pocas posibilidades de producir una progenie macho, porque la muestra de esperma tiene menos del 20%, preferiblemente menos del 10% de esperma Y. La separación de espermatozoides X o Y se lleva a cabo mediante el uso de anticuerpos que se unen a proteínas específicas de X o Y de las células espermáticas. Estos anticuerpos pueden ser de cualquier tipo de anticuerpo (incluyendo IgG e IgM) y pueden ser o bien anticuerpos policlonales o bien anticuerpos monoclonales. Si van a utilizarse anticuerpos policlonales, entonces tales anticuerpos pueden prepararse según procedimientos conocidos per se. Por ejemplo, pueden utilizarse procedimientos tales como los descritos en Hurn B.A. et al., (1980), Meth. in Enzymology, Ed. Van Vanakis, H. y Langone, J., págs. 104-142.
Si se desea, pueden utilizarse y prepararse anticuerpos monoclonales según los métodos que se conocen per se en la técnica, tales como los creados originariamente por Milstein y Kohler, publicados en Nature (1975), 256, págs. 495-497. Este procedimiento básico implica inyectar a un animal, normalmente un ratón, una sustancia inmunogénica. Tras un tiempo adecuado para la producción de anticuerpos frente al inmunógeno, se sacrifica el ratón. Se extraen las células del bazo y se fusionan con células de mieloma. Las células hibridoma que resultan de esta fusión pueden reproducirse in vitro, y cada una expresa información genética para un anticuerpo específico. Los anticuerpos producidos a partir de una fusión de hibridoma sólo reconocerán, por tanto, a un único determinante antigénico del inmunógeno.
Entonces las células cultivadas a partir de células de hibridoma individuales pueden seleccionarse para la producción de anticuerpos frente al determinante antigénico diana. Los hibridomas positivos para el antígeno diana pueden seleccionarse adicionalmente para identificar los que tienen el nivel deseado de afinidad. Los anticuerpos monoclonales que muestran todas estas características pueden seleccionarse entonces utilizando condiciones de ensayo reales para determinar si las condiciones de ensayo alteran las características de unión o afinidad del anticuerpo, y para descartar aquellos con reactividad cruzada frente a posibles antígenos contaminantes.
Anticuerpos preferidos son aquellos que son específicos para y se unen a esperma Y, tales como los anticuerpos que se unen al antígeno H-Y. Tales anticuerpos pueden prepararse, por ejemplo, mediante el procedimiento descrito en la patente de los EE.UU. 4.680.258 concedida a Hamerling et al.
Tal como se indicó anteriormente, los anticuerpos específicos para los espermatozoides X o Y se inmovilizan sobre perlas. Estas perlas pueden ser perlas de plástico o perlas magnéticas. Perlas de plástico útiles son de Sepharose 6MB, u otras perlas que son lo suficientemente grandes como para depositarse en un procedimiento de purificación discontinuo. Cuando se utilizan perlas de plástico, las perlas que tienen anticuerpo unido a las mismas se mezclan en una muestra de esperma y se deja que se depositen en el fondo del recipiente. Esta etapa puede repetirse, si se desea, para aumentar la completitud de la separación de esperma según un cromosoma sexual.
Si se utilizan perlas magnéticas, las perlas son microesferas de partículas magnéticas que representan una matriz de inmovilización. Se ha descubierto que, según la presente invención, las perlas magnéticas que tienen un diámetro de desde 0,1 hasta 2 micras de diámetro son específicamente útiles para separar la especie deseada de espermatozoides sin comprometer la motilidad y capacidad de fecundación de los espermatozoides. Perlas particularmente útiles se describen, por ejemplo, en la patente de los EE.UU. 5.071.076; la patente de los EE.UU. 5.108.933; patente de los EE.UU. 4.795.698; publicación de patente PCT nº WO91/09678. Según los procedimientos descritos en estas patentes, las perlas pueden prepararse teniendo especialmente un diámetro de 0,1 a 0,5 micras.
Los anticuerpos se unen a las perlas por medio de procedimientos que se conocen per se en la técnica. En general, se une un compuesto de enlace a las perlas magnéticas durante la fabricación de las perlas. Sobre las perlas se une un anticuerpo (tal como un anticuerpo IgG que se dirige contra IgM de ratón) mezclando las perlas a aproximadamente 1 mg de hierro/ml con anticuerpo purificado a 1 mg/ml de proteína. Después de que el anticuerpo se une a las perlas, las perlas se lavan de manera que sólo permanece el anticuerpo unido. Procedimientos adicionales conocidos por los expertos en la técnica se describen, por ejemplo, en la patente de los EE.UU. 4.018.886; patente de los EE.UU. 3.970.518; patente de los EE.UU. 4.855.045; y patente de los EE.UU. 4.230.685. La proteína A es un compuesto de enlace preferido que aumenta enormemente la eficacia de captación por parte de los anticuerpos unidos. (Forsgren et al., (1977) J. Immunol. 99:19). La proteína A se une a la parte Fc de los anticuerpos de subclase IgG, prolongando y presentando así la parte Fab de estos anticuerpos. La orientación correcta resultante de los anticuerpos y la prolongación alejada de las partículas conduce a una interacción muy eficaz entre los anticuerpos unidos y su diana.
El método para unir la proteína A a las partículas magnéticas puede avanzar mediante cualquiera de los diversos procedimientos disponibles a través de la bibliografía científica conocida. En uno de tales procedimientos, se derivatizan químicamente partículas magnéticas de óxido de hierro de aproximadamente un diámetro de un micrómetro mediante una reacción, en primer lugar con 3-aminopropiltrietoxisilano, y luego con glutaraldehído. Las partículas magnéticas derivatizadas se mezclan entonces con proteína A dando como resultado una partícula magnética a la que la proteína A se une covalentemente. Entonces, los anticuerpos se añaden a las partículas magnéticas de proteína A y tras una corta incubación, se forman los complejos de proteína A-anticuerpo. (Weetall,
H.H. (1976) Meth. In Enzymol. 44:134-48).
El siguiente es un ejemplo específico según el método de la invención.
Ejemplo 1
Se lavan aproximadamente 10^{5} a 10^{8} espermatozoides en una cantidad de 1-10 ml de volumen, con medio de cultivo tamponado (Medio de Eagle modificado por Dulbecco) centrifugando a 1.500 rpm durante 10 minutos. Entonces el esperma se resuspende en 4 ml de medio de cultivo tamponado tras decantar cuidadosamente el sobrenadante. La suspensión de esperma se divide entonces en dos viales, y en cada vial se añaden 500 \mul de perlas magnéticas a las que se han unido anticuerpos frente a esperma portador de Y. Se tapan los viales y entonces se hacen girar a 3 rpm, de manera continua, en un rotador a temperatura ambiente durante 30 minutos.
Tras la rotación, se sueltan las tapas y se sitúan en un soporte de captación magnética ("magnetic capture rack"), tal como el descrito en la patente de los EE.UU. 5.571.481. Tras 15 minutos de exposición al campo magnético, se extrae el sobrenadante que es rico en esperma portador de X y sustancialmente libre de esperma portador de Y. Entonces, en el sobrenadante extraído se hace un recuento del esperma, y se ajusta la concentración según sea necesario para la inseminación. Esa muestra se carga entonces en una pajuela o pajuelas para el procedimiento de inseminación.
Si se desea, puede obtenerse una separación más completa repitiendo, de manera seriada, el procedimiento de captación magnética en el sobrenadante.
Habiendo descrito así la invención, quedará claro que la misma puede variarse de muchas maneras. Tales variaciones no deben considerarse como una desviación del espíritu y alcance de la invención, y se pretenden incluir todas esas modificaciones tal como serían obvias para un experto en la técnica, dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (8)

1. Método de separación de espermatozoides determinantes de X e Y que comprende poner en contacto una muestra de semen con un anticuerpo específico para espermatozoides determinantes de un sexo y separar dichos espermatozoides de espermatozoides determinantes del otro sexo, estando unido dicho anticuerpo a un soporte de perla magnética no poroso que tiene un diámetro de 0,1 a 2 micras.
2. Método según la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo se une a dichas perlas a través de un compuesto de enlace intermedio.
3. Método según la reivindicación 2, en donde dicho compuesto de enlace intermedio es proteína A.
4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, en donde dicho anticuerpo es específico para esperma portador de Y.
5. Método según la reivindicación 4, en donde dicho anticuerpo es específico para un antígeno H-Y.
6. Método según la reivindicación 4, en donde dichas perlas tienen un diámetro de 0,1 a 0,5 micras.
7. Método según la reivindicación 6, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
8. Método según la reivindicación 1, en donde dicha muestra de semen se pone en contacto con dichas perlas, la muestra se expone a un campo magnético, y el sobrenadante restante se extrae para proporcionar un sobrenadante rico en esperma portador de X.
ES98112150T 1997-07-01 1998-07-01 Metodo para la determinacion del sexo de una progenie mamifera. Expired - Lifetime ES2260809T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US88620397A 1997-07-01 1997-07-01
US886203 1997-07-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2260809T3 true ES2260809T3 (es) 2006-11-01

Family

ID=25388608

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES98112150T Expired - Lifetime ES2260809T3 (es) 1997-07-01 1998-07-01 Metodo para la determinacion del sexo de una progenie mamifera.

Country Status (6)

Country Link
US (3) US6153373A (es)
EP (1) EP0894498B1 (es)
AT (1) ATE326228T1 (es)
DE (1) DE69834527T2 (es)
DK (1) DK0894498T3 (es)
ES (1) ES2260809T3 (es)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2264427B1 (en) 1997-01-31 2017-05-03 Xy, Llc Optical apparatus with focussing reflector for converging radiation onto a flow of particles, and related method of analysis
DE69834527T2 (de) 1997-07-01 2007-05-10 VLP Watertown Limited Partnership, Watertown Verfahren zur Geschlechtsbestimmung von Säuger-Nachkommenschaft
US6071689A (en) 1997-12-31 2000-06-06 Xy, Inc. System for improving yield of sexed embryos in mammals
US6149867A (en) 1997-12-31 2000-11-21 Xy, Inc. Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm
PT1917974E (pt) 1998-07-30 2011-02-22 Xy Llc Sistema de inseminação artificial não cirúrgica em equinos
GB9817795D0 (en) * 1998-08-14 1998-10-14 Genosis Inc A method and device for separation and detection of spermatozoa in a sample
US7071005B1 (en) 1998-08-24 2006-07-04 Centrus International, Inc. Method and device for concentrating selected groups of microorganisms
US7208265B1 (en) 1999-11-24 2007-04-24 Xy, Inc. Method of cryopreserving selected sperm cells
IL152714A (en) 2000-05-09 2014-03-31 Xy Llc High-purity spermatozoa populations carrying chromosome-x and chromosome-y
US7713687B2 (en) 2000-11-29 2010-05-11 Xy, Inc. System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations
WO2002043486A1 (en) * 2000-11-29 2002-06-06 Xy, Inc. System for in-vitro fertilization with spermatozoa separated into x-chromosome and y-chromosome bearing populations
US8486618B2 (en) 2002-08-01 2013-07-16 Xy, Llc Heterogeneous inseminate system
JP4595067B2 (ja) 2002-08-01 2010-12-08 エックスワイ，エルエルシー 低圧精子細胞分離システム
CA2534394C (en) 2002-08-15 2013-01-08 Xy, Inc. High resolution flow cytometer
US7169548B2 (en) 2002-09-13 2007-01-30 Xy, Inc. Sperm cell processing and preservation systems
US20040142384A1 (en) * 2003-01-16 2004-07-22 Cohen Barb Ariel Magnetic separator
BRPI0408857B1 (pt) 2003-03-28 2018-09-11 Inguran Llc aparelho, métodos e processos para separar partículas e para prover esperma de animal separado por sexo
ES2541121T3 (es) 2003-05-15 2015-07-16 Xy, Llc Clasificación eficiente de células haploides por sistemas de citometría de flujo
US20050114915A1 (en) * 2003-11-26 2005-05-26 Vicam L.P. Method for sex biasing spermatozoa
DK2801363T3 (en) 2004-03-29 2018-05-28 Inguran Llc PROCEDURE FOR STORING SORTED SPERMATOZOES
BRPI0401765C1 (pt) 2004-05-17 2011-03-15 Hy Biotecnologica Ltda método de enriquecimento de espermatozoides de mamìferos portadores de cromossomo x ou de cromossomo y
CA2574499C (en) 2004-07-22 2016-11-29 Monsanto Technology Llc Process for enriching a population of sperm cells
WO2006091717A1 (en) * 2005-02-24 2006-08-31 Biocern, Inc. Sperm cell separation methods and compositions
US7618770B2 (en) 2005-07-29 2009-11-17 Xy, Inc. Methods and apparatus for reducing protein content in sperm cell extenders
CA2632331C (en) 2005-12-22 2015-02-10 Vib Vzw Molecules with a beta-aggregating region and their use in inducing protein aggregation
US8669418B2 (en) 2005-12-22 2014-03-11 Vib Vzw Means and methods for mediating protein interference
EP1870423A1 (fr) * 2006-06-22 2007-12-26 Genes Diffusion Structure antigénique de surface de cellules spermatique associée au chromosome Y
AU2007289164A1 (en) * 2006-08-30 2008-03-06 Biocern, Inc. Sperm cell separation methods and compositions containing aptamers or nucleic acid sequences for use therein
CA2568512A1 (en) * 2006-12-04 2008-06-04 Ab Biotech Inc. Gender selection with the use of antibodies
EP2121901A4 (en) * 2007-01-16 2010-03-24 Univ Texas Tech System METHOD AND APPARATUS FOR SELF-SELECTION ON PH-BASIS
AU2008279893A1 (en) * 2007-07-23 2009-01-29 Androgenix Ltd Materials and methods for sperm sex selection
EP2365968B1 (en) 2007-09-29 2018-08-22 Timothy James Williams Composition and method to modify sperm function and increase male gender ratio in mammals
CA2793945A1 (en) * 2009-04-01 2011-10-21 Biocern, Inc. Sperm cell separation methods and compositions containing sperm cell targeting ligands for use therein
CA2781736A1 (en) * 2009-11-24 2011-06-03 Biassex Pty Ltd. Method for influencing sex selection in artificial insemination and apparatus for same
EP3384939A1 (en) 2011-03-11 2018-10-10 Vib Vzw Molecules and methods for inhibition and detection of proteins
NZ734393A (en) 2012-08-29 2020-02-28 Inguran Llc Magnetic removal or identification of damaged or compromised cells or cellular structures
US10379026B2 (en) 2012-08-29 2019-08-13 Inguran, Llc Cell processing using magnetic particles
WO2014150480A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Barb Ariel Cohen Rapid real time multipoint procedure for optimizing sperm state for use in assisted reproductive technologies
KR101497614B1 (ko) * 2013-12-06 2015-03-03 손중호 마그네틱 비드를 이용한 정자 성 분리방법
EP2955521A1 (en) * 2014-06-11 2015-12-16 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV) Methods for separating cells
EP3988646A1 (en) * 2016-01-04 2022-04-27 University of Tennessee Research Foundation Methods for improvement of semen quality
CA3058848A1 (en) 2017-05-09 2018-11-15 Vib Vzw Means and methods for treating bacterial infections
IL301727A (en) 2023-03-27 2024-10-01 Foreseed Ltd System and method for differentiating types of sperm cells according to optically observed characteristics of the sperm cells

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4474875A (en) * 1969-04-10 1984-10-02 Wallace Shrimpton Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor
US3687806A (en) 1969-11-04 1972-08-29 Bio Controls Inc Method for controlling sex of mammalian offspring
US3692897A (en) 1969-11-04 1972-09-19 Gustaaf J Van Den Bovenkamp Immunological method and composition for controlling the sex of mammalian offspring
US4526716A (en) * 1981-11-20 1985-07-02 The Ohio State University Antigenic modification of polypeptides
US3906929A (en) * 1973-11-23 1975-09-23 Lynn Lawrence Augspurger Processes for reproduction of cellular bodies
US4083957A (en) * 1974-07-26 1978-04-11 Lang John L Process for the alteration of the sex-ratio of mammals
US3970518A (en) 1975-07-01 1976-07-20 General Electric Company Magnetic separation of biological particles
AU2154077A (en) * 1976-01-27 1978-07-27 Univ Edinburgh Control of sex ratio in mammalian offspring
US4448767A (en) * 1977-10-11 1984-05-15 Sumar Corporation Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex
US4191749A (en) * 1977-10-11 1980-03-04 Bryant Bernard J Method and material for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex
US4230685A (en) * 1979-02-28 1980-10-28 Northwestern University Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein
GB2070641A (en) 1980-02-29 1981-09-09 Bryant B J Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex
US4362246A (en) * 1980-07-14 1982-12-07 Adair Edwin Lloyd Method of treating collected mammal semen and separating sperm into X Y components
US4680258A (en) * 1981-03-24 1987-07-14 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Process for sex determination in man by use of monoclonal antibodies to the H-Y antigen
US4659655A (en) * 1981-11-25 1987-04-21 Bio-Response, Inc. Method for isolating product-producing cells
EP0120854A4 (en) * 1982-10-05 1985-06-10 Genetic Engineering Inc PROCESS FOR TREATING SPERM RECOVERED FROM A MAMMAL AND SEPARATING THE SPERM INTO COMPONENTS X AND Y.
US4508625A (en) 1982-10-18 1985-04-02 Graham Marshall D Magnetic separation using chelated magnetic ions
US4912201A (en) 1983-03-15 1990-03-27 University Of Southern California Monoclonal antibodies and antisera to intragonadal regulatory protein
US4554088A (en) 1983-05-12 1985-11-19 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4643967A (en) 1983-07-07 1987-02-17 Bryant Bernard J Antibody method for lowering risk of susceptibility to HLA-associated diseases in future human generations
EP0149673A1 (en) 1983-07-22 1985-07-31 WACHTEL, Stephen S. Monoclonal antibodies to the h-y antigen, methods of production, applications, and products of manufacture
US4769319A (en) 1985-05-31 1988-09-06 Salk Institute Biotechnology Industrial Associates, Inc. Nucleic acid probes for prenatal sexing
US4904391A (en) 1985-10-09 1990-02-27 Freeman Richard B Method and apparatus for removal of cells from bone marrow
US4770992A (en) * 1985-11-27 1988-09-13 Den Engh Gerrit J Van Detection of specific DNA sequences by flow cytometry
US4999283A (en) * 1986-01-10 1991-03-12 University Of Kentucky Research Foundation Method for x and y spermatozoa separation
AU7453287A (en) * 1986-06-26 1988-01-07 Bio Science Laboratory Antibody to middle piece of y chromosome bearing spermatozoon
US5418133A (en) 1986-08-12 1995-05-23 The Australian National University Sex determination in cattle, sheep and goats using y-chromosome polynucleotides
US4722887A (en) * 1986-12-19 1988-02-02 Biosyne Corporation Phase partition separation of sperm based on seminolipid expression
US5238812A (en) 1987-03-13 1993-08-24 Coulter Corporation Method and apparatus for rapid mixing of small volumes for enhancing biological reactions
US5346990A (en) 1987-04-08 1994-09-13 Cytogam, Inc. Sex-associated membrane proteins and methods for increasing the probability that offspring will be of a desired sex
US5021244A (en) * 1988-12-06 1991-06-04 Cytogam, Inc. Sex-associated membrane antibodies and their use for increasing the probability that offspring will be of a desired sex
US5215884A (en) 1988-01-21 1993-06-01 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Sex-specific DNA probes
EP0348174A3 (en) 1988-06-23 1991-05-22 Bio-Rad Laboratories, Inc. Sperm antibody test
US5108933A (en) * 1988-09-16 1992-04-28 Immunicon Corporation Manipulation of colloids for facilitating magnetic separations
DE68900926D1 (de) 1988-09-28 1992-04-09 Sigma Tau Ind Farmaceuti Pharmazeutische zubereitung, die zidovudin und inosiplex oder bestandteile davon enthaelt, fuer die behandlung von aids-verwandten syndromen.
US5536475A (en) 1988-10-11 1996-07-16 Baxter International Inc. Apparatus for magnetic cell separation
US5081030A (en) * 1989-04-25 1992-01-14 The Johns Hopkins University Release of cells from affinity matrices
CA2055494C (en) 1989-05-10 2000-01-18 Lawrence Arthur Johnson Method to preselect the sex of offspring
ATE127695T1 (de) 1989-05-12 1995-09-15 Cytogam Inc Mit dem geschlecht assoziierte membranproteine und methoden zur erhöhung der wahrscheinlichkeit, dass die nachkommenschaft das gewünschte geschlecht besitzt.
DE68924275T2 (de) 1989-05-12 1996-05-02 Cytogam Inc Mit dem geschlecht assoziierte membranproteine und methoden zur erhöhung der wahrscheinlichkeit, dass die nachkommenschaft das gewünschte geschlecht besitzt.
US5389377A (en) * 1989-12-22 1995-02-14 Molecular Bioquest, Inc. Solid care therapeutic compositions and methods for making same
US5648468A (en) 1990-03-09 1997-07-15 Spaulding; Glenn F. Process for identifying sex associated egg proteins and methods for increasing the probability that the avian offspring will be the desired sex
WO1991017188A1 (en) * 1990-05-08 1991-11-14 A.B. Technolody Pty. Limited Separation of mammalian semen into fractions enriched either for spermatozoa containing an x chromosome or for spermatozoa contai ning a y chromosome
CA2085102A1 (en) 1990-06-28 1991-12-29 Peter N. Goodfellow Sex determining gene
US5200084A (en) * 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US5466574A (en) * 1991-03-25 1995-11-14 Immunivest Corporation Apparatus and methods for magnetic separation featuring external magnetic means
US5186827A (en) * 1991-03-25 1993-02-16 Immunicon Corporation Apparatus for magnetic separation featuring external magnetic means
US5225282A (en) * 1991-12-13 1993-07-06 Molecular Bioquest, Inc. Biodegradable magnetic microcluster comprising non-magnetic metal or metal oxide particles coated with a functionalized polymer
JP2593021B2 (ja) 1991-12-13 1997-03-19 伊藤ハム株式会社 ウシ胚の性の識別方法
US5200284A (en) 1992-05-28 1993-04-06 Eastman Kodak Company Melamine-cured polyester-amide coated articles useful as toner fusing members
US5759772A (en) 1992-07-23 1998-06-02 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for determining the sex of an embryo
US5679514A (en) 1992-12-31 1997-10-21 Texas Tech University Method for determining the sex of birds
US5679513A (en) 1992-12-31 1997-10-21 Texas Tech University Method for diagnosing ratites
US5514537A (en) 1994-11-28 1996-05-07 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Process and apparatus for sorting spermatozoa
AU4857796A (en) 1995-01-20 1996-08-07 Florida State University Sex-specific dna probe for parrots, methods and kits
BR9610235A (pt) 1995-08-11 1999-07-27 Univ Guelph Processos para identificar moléculas especificas e não especificas do sexo para tirar uma molécula específica do sexo para diferenciar entre machos e fêmeas para separar esperma determinado sexo mascukino ou feminino de sêmen nativo e para preparar uma preparação enriquecida par moléculas n o especificas do sexo feminino e do masculino anticorpo contra um epítopo de uma molécula específica do sexo molécula especifica do sexo isolada e purificada kit contraceptivo e uso de uma molécula n o especifica do sexo.
AUPO060996A0 (en) 1996-06-21 1996-07-18 University Of Melbourne, The Sexing gene
EP0972183A4 (en) 1997-04-04 2006-12-06 Biosite Inc METHODS USING MAGNETIC PARTICLES FOR CONCENTRATING LIGANDS
DE69834527T2 (de) 1997-07-01 2007-05-10 VLP Watertown Limited Partnership, Watertown Verfahren zur Geschlechtsbestimmung von Säuger-Nachkommenschaft
US6071689A (en) 1997-12-31 2000-06-06 Xy, Inc. System for improving yield of sexed embryos in mammals
US6221857B1 (en) 1998-06-10 2001-04-24 North Carolina State University Altering sex ratio of offspring in mammals
US6485972B1 (en) 1998-10-15 2002-11-26 President And Fellows Of Harvard College WNT signalling in reproductive organs
US6493566B1 (en) 1999-01-22 2002-12-10 Instrumentation Metrics, Inc. Classification system for sex determination and tissue characterization
BR0016212A (pt) 1999-12-07 2002-08-27 Univ Guelph Proteìna especìfica do cromossoma sexual e sequência de ácido nucleico isolada e purificada, método para identificar moléculas especìficas de cromossomas sexuais associadas com membranas celulares de esperma animal, anticorpo contra um epìtopo de uma molécula especìfica de cromossomas sexuais, métodos de triagem para uma molécula especifica de cromossomas sexuais, e para separar esperma determinante de macho e fêmea de sêmen nativo kit para executar um método, contraceptivo, proteìna especìfica do cromossoma sexual isolada e purificada, e , molécula
US20010032340A1 (en) 1999-12-27 2001-10-18 Chengyu Liu Controlling offspring's sex ratio by targeting transgenes onto the sex chromosomes

Also Published As

Publication number Publication date
DK0894498T3 (da) 2006-08-28
EP0894498A2 (en) 1999-02-03
ATE326228T1 (de) 2006-06-15
US20030068654A1 (en) 2003-04-10
US6489092B1 (en) 2002-12-03
EP0894498B1 (en) 2006-05-17
DE69834527T2 (de) 2007-05-10
DE69834527D1 (de) 2006-06-22
EP0894498A3 (en) 2002-05-02
US6153373A (en) 2000-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2260809T3 (es) Metodo para la determinacion del sexo de una progenie mamifera.
US4999283A (en) Method for x and y spermatozoa separation
US4448767A (en) Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex
US4680174A (en) Induction of immune response by immunization with encapsulated antigen-producing cells
Bücheler et al. Alloantibodies against A and B blood types in cats
JPH0361480A (ja) アフィニティーマトリックスからの細胞の解離
WO2004065015A2 (en) Magnetic separator
FR2746398A1 (fr) Anticorps specifique de staphylococcus aureaus, et utilisations
EP1695059A2 (en) Method for sex biasing spermatozoa
US20020081635A1 (en) Novel antibody compositions for preparing enriched T cell preparations
CN1296567A (zh) 用于检测动物怀孕的方法和装置
US4618585A (en) Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies directed against cervical cancer cells
Blanchard et al. Flow cytometry analysis of dual red blood cell populations after bone marrow transplantation
JPS6069553A (ja) ヒト単球のｈｌａｄタイプの決定方法
Simon et al. Lymphocyte typing in pigs: evidence for antigen L 1
GB2070641A (en) Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex
Kristensen et al. The swine histo compatibility system SLA: serological studies in the common Swiss and Danish swine breeds
Abehsira et al. Functional and binding activity of monoclonal anti‐Thy‐1 antibodies: evidence for different expression of the two alleles
SU1514770A1 (ru) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ГИБРИДНЫХ клеток животных миз мизсиьиз-продуЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ФАКТОРА V ЭРИТРОЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
CA2085586A1 (en) Ascites production of monoclonal antibodies using an immunosuppressive anti-cd4-related antibody
Scharff et al. Present status and future prospects for the hybridoma technology
SU1744107A1 (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS - продуцент моноклональных антител против эритроцитарного антигена V F-системы крупного рогатого скота и родственных ему видов
Price Hybridoma technology
AU2007262861A1 (en) Antigenic surface structure of sperm cells associated with the Y chromosome
Beck Human antinuclear antibodies-An immunological, clinical and histochemical study