ES2262655T3

ES2262655T3 - Nuevos compuestos cristalinos que comprenden fitosteroles y fitostanoles o sus derivados.

Info

Publication number: ES2262655T3
Application number: ES01942633T
Authority: ES
Inventors: David John Stewart
Original assignee: Forbes Medi-Tech Inc
Current assignee: Forbes Medi-Tech Inc
Priority date: 2000-01-21
Filing date: 2001-01-22
Publication date: 2006-12-01
Anticipated expiration: 2021-01-22
Also published as: AU2822101A; AU2009202917A1; MXPA02007096A; DK1250350T3; EP1250350B1; BR0107707A; CY1105504T1; DE60118883D1; WO2001053320A2; WO2001053320A3; CN1443193A; DE60118883T2; WO2001053320A9; PT1250350E; AU2009202917B2; AU2006201562A1; EP1693376A2; EP1250350A2; ATE323714T1; CA2398970A1

Abstract

Estructura cristalina compuesta que comprende un fitosterol o un derivado del mismo y un fitostanol o un derivado del mismo, preparada mediante: a)la disolución de un fitosterol o derivado esterificado del mismo purificado a partir de su fuente, y un fitostanol o derivado esterificado del mismo purificado a partir de su fuente, en un solvente a temperatura ambiente o a temperatura superior a la ambiente pero inferior al punto de ebullición del solvente; b)el enfriamiento del solvente para permitir la formación de cristales; y c)la filtración y lavado de los cristales formados de esta manera; en la que dicha estructura presenta un único endotermo compuesto, como se pone de manifiesto por calorimetría de escaneo diferencial.

Description

Nuevos compuestos cristalinos que comprenden fitosteroles y fitostanoles o sus derivados.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de los fitosteroles y los fitostanoles, y a su utilización en el tratamiento y en la prevención de las enfermedades cardiovasculares, y de sus condiciones subyacentes, tales como la ateroesclerosis, la hipercolesterolemia, la hiperlipidemia y otros trastornos.

Antecedentes de la invención

Aunque los últimos avances en ciencia y tecnología están ayudando a mejorar la calidad de y a añadir años a la vida humana, la prevención de la ateroesclerosis, la causa subyacente de enfermedad cardiovascular ("CVD") no se ha investigado suficientemente. La ateroesclerosis es un proceso degenerativo que resulta de la interacción de factores heredados (genéticos) y ambientales, tales como la dieta y el estilo de vida. La investigación hasta el momento sugiere que el colesterol podría desempeñar un papel en la ateroesclerosis mediante la formación de placas ateroescleróticas en los vasos sanguíneos, llegando a cortar el suministro sanguíneo hasta el músculo cardíaco o alternativamente hasta el cerebro o hasta las extremidades, dependiendo de la localización de la placa en el árbol arterial (1, 2). Las revisiones señalan que una reducción del 1% en el colesterol sérico total de una persona conlleva una reducción del 2% en el riesgo de un suceso arterial coronario (3). Estadísticamente, una reducción del 10% en el nivel sérico medio de colesterol (por ejemplo de 6,0 mmoles/l a 5,3 mmoles/l) podría resultar en la prevención de 100.000 muertes en los Estados Unidos cada año (4).

Los esteroles son compuestos de origen natural que llevan a cabo muchas funciones celulares críticas. Los fitosteroles, tales como el campesterol, el estigmasterol y el beta-sitosterol en las plantas, el ergosterol en los hongos, y el colesterol en los animales, son, cada uno de ellos, componentes primarios de las membranas celulares y subcelulares en sus tipos celulares respectivos. La fuente dietética de fitosteroles en el ser humano son las materias vegetales, es decir hortalizas y aceites vegetales. El contenido diario estimado de fitosterol en la dieta convencional de tipo occidental es de aproximadamente 60 a 80 miligramos, en contraste con una dieta vegetariana, que proporcionaría aproximadamente 500 miligramos al día.

Los fitosteroles han recibido mucha atención debido a su capacidad para reducir los niveles séricos de colesterol cuando se proporcionan como alimento a varias especies de mamífero, incluyendo el ser humano. Aunque en gran parte se desconoce el mecanismo preciso de acción, la relación entre el colesterol y los fitosteroles se debe aparentemente en parte a las similitudes entre las estructuras químicas de ambos (encontrándose las diferencias en las cadenas laterales de las moléculas). Se supone que los fitosteroles desplazan el colesterol de la etapa micelar y de esta manera reducen su absorción o posiblemente compiten con sitios receptores y/o portadores en el proceso de absorción del colesterol.

Hace unos cuarenta años, Eli Lilly comercializó una preparación de esterol procedente de aceite de sebo, y posteriormente procedente de aceite de soja, denominada Cytellin^{TM}, que se descubrió que reducía el colesterol sérico en aproximadamente el 9% según un informe (5). Diversos investigadores han estudiado posteriormente los efectos de las preparaciones de sitosterol sobre las concentraciones plasmáticas de lípidos y de lipoproteínas (6) y los efectos del sitosterol y del campesterol procedente de la soja y del aceite de soja sobre los niveles séricos de colesterol (7). Una composición de fitosteroles que se ha descubierto que resulta altamente efectiva en la reducción del colesterol sérico se da a conocer en la patente US nº de serie 5.770.749 de Kutney et al., y comprende una cantidad no superior a 70% en peso de beta-sitosterol, por lo menos 10% en peso de campesterol y estigmastanol (beta-sitostanol). Se indica en esta patente que existe alguna forma de sinergia entre los fitosteroles constituyentes, proporcionando resultados de reducción del colesterol todavía mejores de los que se habían conseguido anteriormente.

A pesar de las ventajas evidentes y ahora bien establecidas de los fitosteroles, no sólo en el tratamiento de las CVD y sus condiciones subyacentes, tales como la hipercolesterolemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis, la hipertensión y la trombosis, sino también en el tratamiento de otras enfermedades, tales como la diabetes de tipo II, la demencia, el cáncer y el envejecimiento, la administración de fitosteroles y la incorporación del mismo a alimentos, fármacos y otros vehículos de administración, ha resultado complicada por el hecho de que son altamente hidrofóbicos (es decir, presentan una solubilidad pobre en agua) y son generalmente poco solubles en aceites. La provisión de un derivado de fitosterol soluble en agua y en aceite que pueda administrarse oralmente y que pueda incorporarse sin modificación adicional a vehículos de administración resultaría altamente deseable.

Un objetivo de la presente invención consiste en evitar o atenuar las desventajas anteriores.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una estructura cristalina compuesta que comprende un fitosterol y un fitostanol, o un derivado de ambos.

La presente invención comprende además una composición para el tratamiento o la prevención de CVD y sus condiciones subyacentes, incluyendo la ateroesclerosis, la hipercolesterolemia, la hiperlipidemia, la hipertensión, la trombosis, y enfermedades relacionadas, tales como la diabetes de tipo II, así como otras enfermedades que incluyen daño oxidativo como parte del proceso subyacente de la enfermedad, tal como la demencia, el envejecimiento y el cáncer, que comprende una o más estructuras cristalinas compuestas, comprendiendo fitosteroles o fitostanoles, o derivados de los mismos y un portador o adyuvante para los mismos farmacéuticamente aceptable o de calidad alimentaria.

La presente invención proporciona, además, alimentos, bebidas y nutracéuticos suplementados con una o más estructuras cristalinas compuestas descritas en la presente memoria.

La presente invención proporciona además un método para la preparación de un producto para la utilización en el tratamiento o la prevención de CVD y sus condiciones subyacentes, incluyendo la aterosclerosis, la hipercolesterolemia, la hiperlipidemia, la hipertensión, la trombosis y enfermedades relacionadas, tales como la diabetes de tipo II, así como otras enfermedades que incluyen daño oxidativo como parte del proceso subyacente de la enfermedad, tal como la demencia, el envejecimiento y el cáncer mediante la administración a un animal de una o más estructuras cristalinas compuestas tal como se describe en la presente memoria.

La presente invención proporciona además un procedimiento para la preparación de una estructura cristalina compuesta que comprende un fitosterol y un fitostanol, o un derivado esterificado de ambos, que comprende:

a): disolver el fitosterol purificado a partir de su fuente y el fitostanol purificado a partir de su fuente, en un solvente a temperatura ambiente o a una temperatura superior a la ambiental pero inferior al punto de ebullición del solvente;

b): enfriar el solvente para permitir la formación de cristales; y

c): filtrar y lavar los cristales formados de esta manera.

Lo que se consigue dentro del alcance de la presente invención es la creación de una estructura cristalina compuesta en la que un fitosterol y un fitostanol, bajo condiciones apropiadas, se recristalizan conjuntamente formando una estructura unitaria que es un endotermo compuesto único, como se pone de manifiesto mediante calorimetría de escaneo diferencial ("DSC"). Además, estas nuevas estructuras cristalinas presentan sus propios perfiles de difracción de rayos X de los polvos ("XRD"), sus propias características químicas y sus propios puntos de fusión en comparación con cada uno de los fitosteroles individuales o de fitostanol solo o conjuntamente en una composición. En otras palabras, se crea una estructura química y físicamente diferente de cualquiera de los materiales de partida fitosterol o fitostanol solos o mezclados en composición.

Estos compuestos cristalinos presentan numerosas ventajas sobre los fitosteroles o fitostanoles individuales o mezclas de los mismos conocidos previamente y descritos en la técnica. En particular, se ha descubierto que la solubilidad en aceites, en medios basados en aceites, y en grasas, mejora con un m´todo que resulta simple, económico y que no requiere modificaciones extensivas previas de los esteroles o de los estanoles, tal como mediante esterificación. Los fitosteroles y estanoles aislados y de origen natural se encuentran en forma de polvos gruesos cristalinos que no pueden formar una mezcla homogénea en agua, en aceites o en grasas, sin algún tipo de modificación. Aunque la esterificación de los fitosteroles y de los estanoles provoca que sean considerablemente más solubles en grasas y en aceites y es una técnica ampliamente utilizada por motivos prácticos, estos derivados esterificados no inhiben la absorción del colesterol de manera tan efectiva como en forma de esteroles libres (8). En varias patentes anteriores, los estanoles, en particular, se esterifican con el fin de incrementar su solubilidad, que es pobre (ver la patente US nº de serie 5.502.045, de Raision Tehtaat Oy AB). Las desventajas de los ésteres de ácidos grasos fitosterol/estanol incluyen los siguientes: la absorción reducida de micronutrientes lipofílicos (tal como el beta-caroteno) (9), y el tiempo y costes de procesamiento incrementados para su preparación. El calentamiento del beta-sitosterol en aceite se describe en la patente PCT FI99/00121; sin embargo, el producto resultante es uno en el que los esteroles se disuelven sólo parcialmente.

Dentro del alcance de la presente invención, los fitosteroles y fitostanoles de origen natural en forma cristalina, se recristalizan conjuntamente formando estructuras cristalinas compuestas unitarias que no sólo muestran una solubilidad incrementada en aceites y grasas en comparación con los fitosteroles o fitostanoles individuales o con las mezclas de los mismos conocidas previamente y descritas en la técnica, sino que también muestran una mayor eficacia en la reducción del colesterol sérico.

De acuerdo con lo expuesto anteriormente, las composiciones basadas en aceite y en grasa que comprenden las estructuras cristalinas de la presente invención pueden prepararse y utilizarse como tales o pueden incorporarse fácilmente a alimentos, bebidas, suplementos dietéticos, fármacos y nutracéuticos. Esta solubilidad incrementada se traduce generalmente en concentraciones más bajas de fitosteroles y/o de fitostanoles que necesitan proporcionarse en el aceite o en la grasa con el fin de conseguir el efecto terapéutico o dietético deseado.

Éstas y otras ventajas de la presente invención se describen con mayor detalle a continuación.

Breve descripción de los dibujos

La presente invención se ilustra mediante los dibujos no limitativos siguientes, en los que:

la figura 1 es una fotografía de microscopía del material cristalino de FCP-3P1;

la figura 2 es otra fotografía de microscopía del material cristalino de FCP-3P1;

la figura 3 es una fotografía de microscopía de la estructura cristalina de FCP-3P2;

La figura 4 es otra fotografía de microscopía de la estructura cristalina de FCP-3P2;

la figura 5 es una fotografía de microscopía de una mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 recristalizados a partir de acetato de etilo;

la figura 6 es otra fotografía de microscopía de una mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 recristalizados a partir de acetato de etilo;

la figura 7 es otra fotografía de microscopía de una mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 recristalizados a partir de acetato de etilo;

la figura 8 es otra fotografía de microscopía de una mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 recristalizados a partir de acetato de etilo;

la figura 9 son los datos de calibración de la DSC con indio;

la figura 10 representa la superposición de datos de DSC para FCP-3P1, FCP-3P2, la mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 en una composición, y el material recristalizado (FM-PH-38);

la figura 11 son los datos de DSC de FCP-3P2;

la figura 12 son los datos de DSC de FCP-3P1;

la figura 13 son los datos de DSC para una mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 en una composición;

la figura 14 son datos de DSC para la mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 recristalizados a partir de acetato de etilo;

la figura 15 son los datos de difracción de rayos X para FCP-3P2;

la figura 16 son los datos de difracción de rayos X para FCP-3P1; y

la figura 17 son los datos de difracción de rayos X para la mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 recristalizados a partir de acetato de etilo.

Formas de realización preferidas de la invención

De acuerdo con una forma de realización de la presente invención, se proporciona una estructura cristalina compuesta que comprende un fitosterol y un fitostanol, o un derivado de ambos que resulta adecuado para la utilización per se en el tratamiento o en la prevención de CVD y sus condiciones subyacentes, tales como ateroesclerosis, hipercolesterolemia, hiperlipidemia, hipertensión, trombosis y enfermedades relacionadas, tales como la diabetes de tipo II, así como en el tratamiento y en la prevención de otras enfermedades que incluyen daño oxidativo como parte del proceso subyacente de la enfermedad, tales como la demencia, el envejecimiento y el cáncer.

Desde el principio, debe entenderse que a lo largo de toda la presente memoria, las expresiones "estructura cristalina compuesta", "estructura compuesta cristalina", "nuevas estructuras cristalinas", "cristales compuestos", "nuevas estructuras", "compuesto" y "estructuras cristalinas" se utilizan intercambiablemente y pretenden, a menos que se indique lo contrario, presentar el mismo significado.

Fitosteroles/fitostanoles

El término "fitosterol", dentro del alcance de la presente invención, incluye todos los fitosteroles sin limitación, por ejemplo: sitosterol, campesterol, estigmasterol, brasicasterol, desmosterol, calinoesterol, poriferasterol, clionasterol y todas las formas naturales o sintéticas y derivados de las mismas, incluyendo los isómeros. El término "fitostanol" incluye todos los fitosteroles saturados o hidrogenados y todas las formas naturales o sintéticas y los derivados esterificados de las mismas, incluyendo los isómeros. También debe entenderse que, en caso de duda a lo largo de la memoria, el término "fitosterol" comprende tanto fitosterol como fitostanol, es decir, los términos pueden utilizarse intercambiablemente a menos que se indique lo contrario.

Los fitosteroles y fitostanoles para la utilización en la formación de estructuras compuestas cristalinas de acuerdo con la presente invención pueden obtenerse a partir de una diversidad de fuentes naturales. Por ejemplo, pueden obtenerse a partir del procedimiento de aceites vegetales (incluyendo plantas acuáticas), tales como el aceite de maíz y otros aceites vegetales, aceite de germen de trigo, extracto de soja, extracto de arroz, salvado de arroz, aceite de colza, aceite de sésamo y aceites de pescado. Sin limitación de la generalidad de lo expuesto anteriormente, debe entenderse que existen otras fuentes de fitosteroles y fitostanoles, tales como los animales marinos, a partir de los que la composición de la presente invención puede prepararse. La patente US nº de serie 4.420.427 da a conocer la preparación de esteroles a partir de pasta de aceite vegetal utilizando solventes, tales como el metanol. Alternativamente, pueden obtenerse fitosteroles y fitostanoles a partir de alquitrán de aceite de sebo o jabón de aceite de sebo, productos secundarios de prácticas silvícolas, tal como se describe en la patente US nº de serie 5.770.749. Los fitosteroles y fitostanoles se encuentran ampliamente disponibles a través de compañías de suministro comercial.

Sin limitación de la generalidad de lo expuesto anteriormente, debe entenderse que existen numerosos métodos conocidos de extracción y de purificación de fitosteroles y fitostanoles a partir de la "fuente" de elección, y la presente invención no se encuentra limitada a ningún método para conseguir estos fitosteroles y fitostanoles purificados. Sin embargo, generalmente los fitosteroles y fitostanoles, purificados a partir de la fuente, se encuentran en una forma cristalina, estando representando cada esterol y cada estanol por una estructura cristalina individual, y presentando su propio endotermo de DSC y perfil de XRD.

En una forma más preferida, la estructura compuesta cristalina de la presente invención se forma con beta-sitosterol o campesterol derivados naturalmente o sintéticos, y sitostanol o campestanol, o mezclas de los mismos.

Procedimiento de recristalización

En una forma preferida, el procedimiento de recristalización es el siguiente:

a): se seleccionan uno o más fitosteroles y fitostanoles para la combinación en la estructura cristalina única;

b): estos fitosteroles y fitostanol, cada uno purificado a partir de su fuente, se disuelven en un solvente a temperatura ambiente o a una temperatura superior a la ambiente pero inferior al punto de ebullición del solvente;

c): el solvente se enfría para permitir la formación de cristales; y

d): los cristales formados de esta manera se filtran y se secan.

Muchos solventes resultan adecuados para la utilización en el método de la presente invención. Más preferentemente, el solvente se selecciona de entre cualquiera de los siguientes, solo o en combinación:

1): cualquier solvente hidrocarburo, tal como pentano, hexano y miembros superiores de la familia, entre C7 y C10 inclusive, o derivados de los mismos;

2): cualquier alcohol de la familia C1 a C10 inclusive, incluyendo sin limitación, etanol, alcohol isopropílico y metanol, o derivados de los mismos;

3): solventes aromáticos, tales como tolueno y xileno y derivados de los mismos;

4): cetonas con 1 a 10 átomos de carbono, incluyendo, aunque sin limitación, acetona, propanona, metil-isobutil cetona y butanona, o derivados de los mismos; y

5): ésteres, tales como acetato de etilo y los derivados de ácidos carboxílicos de la familia C2 a C10 inclusive.

En una forma preferida, los fitosteroles y fitostanoles se disuelven en un solvente a temperatura ambiente, de entre 18ºC y 30ºC, aunque no se pretende que el procedimiento se encuentre limitado a ninguna temperatura particular. Por ejemplo, cuando se utiliza alcohol isopropílico como el solvente de recristalización, la temperatura para la disolución de los fitosteroles y los fitostanoles más preferentemente se encuentra en el intervalo comprendido entre 50ºC y 80ºC. Lo que resulta crítico es que sustancialmente todos los fitosteroles y fitostanoles se disuelvan en el solvente seleccionado (que el solvente se encuentre "saturado") y que la temperatura seleccionada sea inferior al punto de ebullición del solvente utilizado. Esta disolución tiene lugar en cualquier momento entre los 30 minutos y las 6 horas, dependiendo del solvente utilizado y de los fitosteroles/estanoles constituyentes. De manera similar, la temperatura de enfriamiento de la etapa b), para promover la formación de los cristales, puede variar considerablemente pero generalmente es de entre 1ºC y 20ºC. Preferentemente, el enfriamiento se produce rápidamente, en menos de una hora, y más preferentemente en aproximadamente 30 minutos, hasta una temperatura a la que se inicia la formación de cristales. La mezcla de suspensión resultante se mezcla mejor lentamente durante este procedimiento. Tras la precipitación de los esteroles/estanoles en la solución, los cristales formados de esta manera se filtran y se lavan repetidamente (por ejemplo con agua desionizada) y se comprimen a continuación ligeramente y se elimina el líquido por
succión.

Tras completar la recristalización, para confirmar la formación de nuevas estructuras cristalinas, en análisis de endodermos utilizando tecnología de DSC y perfiles de XRD, u otras técnicas, en las que puede comprobarse la estructura molecular o la matriz cristalina. Lo que se ha descubierto es que las nuevas estructuras cristalinas formadas de esta manera presentan propiedades (mostradas como datos de XRD y de DSC) que son diferentes de cada uno de los materiales de partida por sí solos (los fitosteroles o fitostanoles particulares) o en composición, y que, de hecho, presentan propiedades intermedias entre las de los materiales de partida.

En una forma de realización, el cristal compuesto de la presente invención puede utilizarse directamente y sin ninguna adaptación ni tratamiento adicional en los protocolos terapéuticos y dietéticos descritos posteriormente. En otra forma de realización, el cristal compuesto puede formarse como polvos sólidos mediante precipitación, filtración y secado, secado por pulverización, liofilización o mediante otras técnicas convencionales de procesamiento. Esta forma de polvos puede utilizarse a continuación en los protocolos terapéuticos y dietéticos indicados a continuación.

El método de la presente invención, en el que los fitosteroles y fitostanoles se recristalizan conjuntamente formando nuevas estructuras cristalinas puede utilizarse:

1): para formar nuevas composiciones "de diseño" de fitosteroles y fitostanoles que presenten cualquier intervalo de concentración deseado de los constituyentes; o

2): para mezclar o "incrementar puntualmente" fitosteroles y fitostanoles en las composiciones de esterol extraídas de las fuentes naturales con el fin de garantizar la uniformidad entre lotes de la especificación.

Pueden prepararse composiciones "de diseño", bajo condiciones controladas, que presenten cualquier concentración de fitosteroles y fitostanoles deseada. Por ejemplo, puede prepararse una composición que presente 99% en peso ("p/p") de fitosteroles y 1% p/p de fitostanoles o cualquier valor intermedio entre ellos, o que presenta 99% p/p de fitostanoles y 1% p/p de fitosteroles, o cualquier valor intermedio entre ellos, utilizando el protocolo de recristalización. De acuerdo con ello, se proporciona una gran flexibilidad de procesamiento, debido a que las cantidades relativas de cada esterol y de cada estanol en la composición final pueden ajustarse mediante recristalizaciones sucesivas. Por ejemplo, si se desea una concentración relativa más elevada de sitostanol en una composición dada, el sitostanol puede recristalizarse con el esterol/estanoles ya presentes en la composición, proporcionando una o más nuevas estructuras cristalinas del compuesto dentro de la composición. Preferentemente, la composición de diseño de la presente invención, preparada mediante recristalización, comprende entre 20% y 80% p/p de fitosteroles y entre 80% y 20% p/p de fitostanoles, más preferentemente entre 30% y 70% p/p de fitosteroles y entre 70% y 30% p/p de fitostanoles, más preferentemente entre 40% y 60% p/p de fitosteroles y entre 60% y 40% p/p de fitostanoles, y todavía más preferentemente 50% p/p de fitosteroles y de fitostanoles.

La mezcla o la adición puntual de fitosteroles y fitostanoles en composiciones extraídas de fuentes naturales presenta además varias aplicaciones comerciales críticas. Con independencia de la fuente natural de la que se han extraído y purificado los fitosteroles y fitostanoles, siempre existirá alguna variación entre lotes de las cantidades relativas de cada fitosterol y cada fitostanol. Esto puede ser un problema de producción, cuando resulta necesario producir consistentemente una composición que presente un conjunto particular de especificaciones. El método de recristalización de la presente invención se refiere a este problema y lo resuelve. Por ejemplo, si un lote extraído y purificado no cumple la especificación necesaria en el aspecto de que la concentración de sitostanol es excesivamente reducida, ésta puede ajustarse fácilmente mediante recristalización en la composición de una cantidad fija de sitostanol para "incrementar puntualmente" su nivel.

Tanto la formación de composiciones de diseño como la adición puntual de composiciones naturales existentes puede conseguirse con fitosteroles y fitostanoles derivados originalmente de cualquier fuente (sin limitación, jabón de aceite de sebo, alquitrán de aceite de sebo, destilado vegetal, extracto de soja y similares). Además, se contempla completamente que las fuentes de fitosterol y de fitostanol puedan "mezclarse". En otras palabras, una composición derivada naturalmente de jabón de aceite de soja puede "incrementarse puntualmente" y recristalizarse con un esterol o un estanol derivado de extracto de soja. La "adición puntual" de composiciones se describe con mayor detalle en los Ejemplos.

Ventajas de las nuevas estructuras cristalinas compuestas

Las nuevas estructuras de la presente invención proporcionan muchas ventajas dietéticas y terapéuticas cuando se comparan con la utilización de fitosteroles/fitostanoles solos o combinados en una composición. Lo que se consigue principalmente mediante la formación de los cristales compuestos es el incremento de la solubilidad de los constituyentes fitosterol/estanol en aceites y grasas, sin la necesidad de modificaciones químicas u otras modificaciones estructurales de los esteroles y estanoles. Esto no sólo facilita la incorporación de esteroles y estanoles a vehículos de "administración" (con los ahorros de costes y tiempos correspondientes), sino que esta nueva estructura unitaria resulta más fácilmente absorbida en las micelas de ácidos biliares, desplazando eficientemente de esta manera el colesterol y bloqueando su absorción. Tanto los fitosteroles como los fitostanoles en primer lugar deben disolverse en micelas de aceite en el intestino antes de que se produzca la interacción con el colesterol.

Por motivos que todavía no resultan claros, las estructuras cristalinas de la presente invención, en las que se forman fitosteroles y fitostanoles en estructuras unitarias, maximizan muchas de las ventajas individuales de los fitosteroles y los fitostanoles, minimizando simultáneamente las desventajas respectivas. Por ejemplo, muchos estudios sugieren que los estanoles en general, y el sitostanol en particular, son los inhibidores más efectivos de la absorción del colesterol, sin embargo, presentan una solubilidad pobre en lípidos (10). Los fitosteroles son generalmente más solubles, pero resultan menos efectivos en la reducción del colesterol (11, 12 y 13). Las estructuras cristalinas de la presente invención son más solubles en aceites y en grasas que los fitosteroles, es decir, muestran una solubilidad en aceite intermedia entre la de los fitosteroles y los fitostanoles, e inesperadamente, muestran una eficacia en la reducción del colesterol más comparable a la de los estanoles que a la de los esteroles. Esta combinación permite una acción más efectiva en la reducción del colesterol que los fitosteroles o el fitostanol por sí solos o conjuntamente en una composición.

Métodos de utilización

Las estructuras de la presente invención pueden utilizarse directamente y sin modificación adicional en cocción, el horneo y similares, como agentes para reducir el colesterol sérico en animales, particularmente en el ser humano. Pueden añadirse a cualquier aceite comestible y utilizarse para la cocción, el horneo y para la utilización general. Alternativamente, las estructuras pueden tratarse para incrementar la administración en diversos otros medios de administración. Por ejemplo, las estructuras cristalinas pueden modificarse físicamente tal como se describe en la solicitud internacional nº PCT/CA99/00402, específicamente en las páginas 11 a 23 (publicada el 25 de noviembre de 1999, e incorporada a la presente memoria como referencia), para incrementar todavía más la solubilidad y la dispersabilidad del fitosterol y/o fitostanol en el medio de administración seleccionado.

Además, la presente invención contempla por completo la formación de alimentos en gel oleaginoso, tales como manteca de cacahuete, mayonesa, helado y margarinas, que incorporan estas estructuras. Además, los cristales compuestos pueden incluirse fácilmente en una diversidad de alimentos bajos en grasas, tales como yogures en los que los cristales finos se dispersan uniformemente en el producto. Existen numerosos modos o "vehículos" de administración de la presente composición, de acuerdo con ello la presente invención no pretende limitarse a los ejemplos de administración siguientes.

1) Formas de dosificación farmacéutica

Se contempla dentro del alcance de la presente invención la incorporación de las estructuras de la presente invención a diversas preparaciones y formas de dosificación farmacéuticas convencionales, tales como comprimidos (solas o recubiertas) para la utilización oralmente, bucalmente o lingualmente, cápsulas (duras y blandas, gelatina, con o sin recubrimientos adicionales), polvos, gránulos (incluyendo los gránulos efervescentes), pellets, micropartículas, soluciones (tales como micelas, jarabes, elixires y gotas), grageas, pastillas, ampollas, emulsiones, microemulsiones, pomadas, cremas, supositorios, geles y parches transdérmicos, formas de dosificación de liberación modificada, conjuntamente con excipientes y/o diluyentes y estabilizantes convencionales.

Las estructuras de la presente invención, adaptadas en la forma de dosificación apropiada, tal como se ha descrito anteriormente, pueden administrarse a animales, incluyendo seres humanos, oralmente, mediante inyección (intravenosamente, subcutáneamente, intraperitonealmente, intradérmicamente o intramuscularmente), tópicamente o de otras maneras. Aunque no está claro el mecanismo preciso de acción, las estructuras de la presente invención, administradas intravenosamente, reducen el colesterol sérico. Se cree que algunas mezclas de fitosteroles, podrían conjuntamente presentar, además de un papel como inhibidor de la absorción del colesterol en el intestino, un efecto sistémico sobre la homeostasis del colesterol a través de la síntesis de ácidos biliares, la excreción por enterocitos y biliar del colesterol, la excreción de ácidos biliares, y cambios en la cinética enzimática y transporte del colesterol entre diversos compartimientos en el cuerpo (PCT/CA97/00474 publicada el 15 de enero de 1998).

Las estructuras tal como se describen en la presente memoria pueden utilizarse con funciones dietéticas y terapéuticas con el fin de tratar y/o de prevenir CVD, sus condiciones subyacentes, tales como la hipercolesterolemia, la hiperlipidemia, la arterioesclerosis, la hipertensión, la trombosis, enfermedades relacionadas, tales como la diabetes de tipo II, así como otras enfermedades que incluyen daño oxidativo por parte del proceso subyacente de la enfermedad, tales como la demencia, el envejecimiento y el cáncer. En las poblaciones que se consideran de "alto riesgo" de CVD o de cualquier trastorno relacionado con la oxidación, se contempla que las composiciones y alimentos en los que se encuentran contenidos puedan utilizarse en programas de tratamiento primario, secundario y terciario.

Con el fin de apreciar los diversos vehículos posibles de administración de las composiciones, se proporciona una lista a continuación. Las dosis de los derivados varían dependiendo, entre otros factores, del modo de administración (es decir, de cómo y a qué alimento o bebida o fármaco se incorporan finalmente los derivados), del tamaño y la condición del paciente, del resultado que debe conseguirse, así como de otros factores conocidos por el experto en la materia de los aditivos alimentarios y de los agentes medicinales. Sin embargo, resulta preferible generalmente que los derivados de la presente invención se administren en el ser humano en una forma que comprenda hasta 6 gramos (basados en una persona de 70 kg) de fitosteroles y/o de fitostanoles al día, más preferentemente entre 1 y 5 gramos al día, y todavía más preferentemente 1,5 gramos al día. También se reconocerá que la administración de dosis diarias mucho más elevadas no resulta perjudicial para el animal huésped, debido a que el exceso simplemente pasará por los canales excretorios normales.

2) Alimentos/bebidas/nutracéuticos

En otra forma de la presente invención, las estructuras de la presente invención pueden incorporarse a alimentos, bebidas y nutracéuticos, incluyendo, aunque sin limitación, los siguientes:

1): productos lácteos, tales como quesos, mantequilla, leche y otras bebidas lácteas, cremas vegetales y mezclas lácteas, helado y yogur;

2): productos de base grasa, tales como margarinas, cremas vegetales, mayonesa, manteca vegetal, aceites de cocción y de freír, y aliños;

3): productos basados en cereales, que comprenden cereales (por ejemplo pan y pastas), estén estos productos cocinados, horneados o procesados de otro modo;

4): dulces, tales como chocolate, caramelos, goma de mascar, postres, coberturas no lácteas (por ejemplo Cool Whip^{TM}), sorbetes, glaseados y otros rellenos;

5): bebidas, alcohólicas o no alcohólicas, e incluyendo colas y otras bebidas refrescantes, zumos, suplementos dietéticos y bebidas de sustitución de comidas, tales como las comercializadas bajo las marcas comerciales Boost^{TM} y Ensure^{TM}; y

6): productos misceláneos, incluyendo huevos y productos con huevo, alimentos procesados, tales como sopas, pasta precocinadas.

La proporción óptima de fitosteroles a fitostanoles en el compuesto depende, en algún grado, de la matriz en la que se suspende o a la que se incorpora el compuesto. Generalmente, los alimentos con un elevado contenido de grasas incluirán una proporción más elevada de fitostanoles que los alimentos más bajos en grasas. Ello puede determinarse empíricamente con cada tipo de alimento/bebida en el que se desee añadir el compuesto.

Las estructuras de la presente invención pueden incorporarse directamente y sin modificación adicional al alimento, nutracéutico o bebida mediante técnicas, tales como mezcla, infusión, inyección, mezcla, dispersión, emulsión, inmersión, pulverización y amasado. Alternativamente, estas estructuras pueden aplicarse directamente sobre un alimento o en una bebida por el consumidor previamente a la ingestión. Estos son modos simples y económicos de administración.

Aunque los ejemplos siguientes pretenden ilustran diversos aspectos de la presente invención y asistir en la preparación de las estructuras, no pretenden limitar el alcance de la invención según se reivindica en la presente memoria.

Ejemplo 1 Recristalización a partir de acetato de etilo

Se disolvió en acetato de etilo a temperatura ambiente (21ºC) una mezcla igual (1:1 en peso) de una composición derivada de aceite de sebo no hidrogenado que comprendía principalmente campesterol y beta-sitosterol (en adelante denominada FCP-3P1) y una composición de fitosterol derivada de aceite de sebo hidrogenado que comprendía principalmente sitostanol y campestanol (en adelante denominada FCP-3P2). El fitosterol se recristalizó a partir de solución saturada de acetato de etilo a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrar sobre un filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenarlo en un tubo de polipropileno de 50 ml de tapa roscable. Este material recristalizado a partir de acetato de etilo procedente de una mezcla de FCP-3P1 y de FCP-3P2 se denomina en algunas de las figuras, FM-PH-38. Se llevó a cabo un análisis de este nuevo producto recristalizado utilizando fotografía microscópica, calorimetría de escaneo diferencial ("DSC") y difracción de rayos X ("XRD") y se llevaron a cabo comparaciones apropiadas entre los datos para FM-PH-38 y:

1): cada uno de los materiales de partida por sí solos: FC-3P1 y FCP-3P2; y

2): una mezcla a partes iguales de FCP-3P1 y FCP-3P2 en una composición, es decir no recristalizados conjuntamente.

Fotografía de microscopía

Las estructuras cristalinas de estado sólido de FCP-3P1, FCP-3P2 y FM-PH-38 se investigaron utilizando fotografía de microscopía a magnificaciones de 15X y 40X (aunque sólo se muestra la magnificación de 40X en las figuras). Se examinó el material individual bajo un microscopio óptico y se obtuvieron registros fotográficos contra un fondo oscuro utilizando película en blanco y negro. Los registros para FCP-3P1 se ilustran en las figuras 1 y 2. Los registros para FCP-3P2 se ilustran en las figuras 3 y 4. Los registros para el producto recristalizado FMP-PH-38 se ilustran en las figuras 5 a 8, inclusive.

Calorimetría de escaneo diferencial

Se llevaron a cabo determinaciones de DSC utilizando un DSC Dupont modelo 910S (New Castle, DL) calibrado con indio. Las muestras que pesaban entre 3 y 4 mg se introdujeron en bandejas abiertas de aluminio (n=3 para cada uno de los materiales de ensayo). La celda de DSC se purgó con nitrógeno a un flujo de 40 ml/min. Todas las mediciones se llevaron a cabo a una tasa de escaneo de 10ºC/min. Los escaneos se obtuvieron mediante calentamiento desde temperatura ambiente hasta 350ºC. Los datos de DSC para FCP-3P1, FCP-3P2 y FM-PH-38 se presentan en las figuras 9 a 14.

Difracción de rayos X

Se realizaron mediciones de XRD de FCP-3P1, de FCP-3P2 y de FM-PH-38 utilizando un difractor de rayos X de ángulo ancho y se presentan en las figuras 15 a 17. Generalmente, XRD es el método clásico para investigar cómo los cristales se forman y se ensamblan entre sí.

Composición química

Las características de la composición química se investigaron utilizando cromatografía de gases/espectrometría de masa ("GC/MS"). Este método implica la utilización de una columna capilar fusionada de sílice con fase ligada de difenil dimetilsiloxano al 5% para la separación de los cuatro fitosteroles. La cuantificación de los cuatro componentes fitosterol principales se basa en un enfoque de proporción de estándar interno con la adición de colestano a cada muestra como estándar interno. Se representa la proporción de las áreas de los picos de cada fitosterol respecto al del colestano frente a las concentraciones de estándar de calibración añadidas. Las curvas de estándar de calibración se establecieron a partir de análisis de regresión lineal ponderada (1/Y) de proporción de las áreas de pico frente a un mínimo de 6 concentraciones estándar de fitosterol a lo largo de un intervalo entre 0,01 y 3,0 mg/ml. Se utilizó un cromatógrafo de gases Hewlett Packard Modelo 5890 serie II con el moldeo 5971 de GC/MS (MSD) y un automuestreador modelo 3635 con los parámetros siguientes:

Columna de GC	30 m x 0,25 mm x 0,25 \mum SAC-5
Temperatura de horno de GC	270 grados C
Gas portador de columna de GC	helio
Temp. de línea de transferencia GC/MSD	300 grados C
Temp. de inyector	300 grados C
Volumen de inyección	1 \mul
Modo de inyección	sin división (tiempo de purgado: 0,5 minutos)

Resultados y comentario Fotomicrografías

Las diferencias de apariencia de la silueta cristalina entre FCP-3P1, FCP-3P2 y FM-PH-38 en las figura 1 a 8 muestran que estos tres materiales son químicamente únicos. Los cristales FM-PH-38 en las figuras 5 a 8 muestran claramente barras más delgadas. Aunque la transparencia aparentemente es similar a la de FCP-3P2, la forma no es similar en absoluto a los cristales en forma de bloque mostrados en las figuras 3 y 4.

DSC

Se presentan la totalidad de los datos en las figuras 9 a 13, aunque se resumen en la Tabla 1:

TABLA 1

Nº de lote	Endotermos de DSC
Estándar de calibración de indio	157,81 (correcto según calibración)
FCP-3P2	117,97 (pico ancho) 142,22 (pico agudo)
FCP-3P1	136,21, 138,33 (doblete ancho)
FM-PH-38	135,7, 139,39 (triplete ancho)
Composición de 3P1 y 3P2	118,31 (pico ancho), 138,72 (hombro de doblete ancho)

Los puntos de fusión para esteroles y estanoles individuales, en grados C son los siguientes:

Beta-sitosterol	140
Sitostanol	138-139
Campesterol	157-158
Campestanol	146,5-147,8

Los endotermos de DSC perfilados en las figuras 9 a 13 indican que los cuatro componentes principales interaccionan durante la fusión y no se correlacionan de manera directa ni simple con los puntos de fusión de los componentes individuales. Una mezcla física (composición) de FCP-3P1 y FCP-3P2 muestra dos endotermos a 118,31ºC y a 138,72ºC en comparación con el material recristalizado (FM-PH-38), que demuestra un solo endotermo compuesto con picos en 135,37ºC y 139,39ºC que comprenden tres picos estrechamente solapados (triplete). Esto muestra claramente que los dos materiales de partida se han combinado para producir una estructura cristalina compuesta que presenta sus propias propiedades particulares de fusión en comparación con los materiales de partida individuales solos, o en una composición.

XRD

Se muestran los datos en las figuras 15 a 17. Los espectros para FM-PH-38 muestra que no existen picos bien definidos, lo que indica que no existe un orden cristalino bien definido como en la mayoría de las estructuras cristalinas, incluyendo FCP-3P1 y FCP-3P2. En global, el hábito de cristalización de FM-PH-38 es diferente del de otros materiales.

Composición química

Los resultados de GC/MS indican que la proporción de los cuatro fitosteroles principales en los tres materiales son las siguientes:

TABLA 2 Resumen de los cuatro fitosteroles principales

Fitosteroles	FCP-3P1	FCP-3P2	Producto recristalizado
Campesterol	0,17	0,01	0,09
Campestanol	0,05	0,13	0,17
Beta-sitosterol	0,40	0,03	0,20
Sitostanol	0,26	0,52	0,66
% p/p	88,9	107,6	103,7

TABLA 3 Cuantificación de GC/MS de los fitosteroles principales en FCP-3P2

Muestra de ensayo:	Muestra nº 1 a	Muestra nº 2 a
FM-PH-35	0,70 mg/ml	0,60 mg/ml
	Muestra nº 1,	Muestra nº 1,	Muestra nº 2,	Muestra nº 2,	Media
	análisis nº 1	análisis nº 2	análisis nº 1	análisis nº 2
campesterol	0,02	0,01	0,01	0,01	0,01
campestanol	0,16	0,14	0,11	0,11	0,13
\beta-sitosterol	0,03	0,03	0,03	0,03	0,03
sitostanol	0,58	0,56	0,49	0,46	0,52
total de esteroles	0,79	0,75	0,65	0,62	0,70
principales
% p/p de esteroles	112,4	106,4	107,8	103,7	107,6
principales
(en peso húmedo)

TABLA 4 Cuantificación mediante GC/MS de los fitosteroles principales en FCP-3P1

Muestra de ensayo: FM-PH-36	Concentración de la muestra a 0,99 mg/ml
	análisis nº 1	análisis nº 2	análisis nº 3	Media
campesterol	0,18	0,17	0,17	0,17
campestanol	0,05	0,05	0,05	0,05
\beta-sitosterol	0,40	0,39	0,40	0,40
sitostanol	0,27	0,26	0,27	0,26
componentes esterol principales	90,0	87,5	89,2	88,9
(% p/p en peso húmedo)

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 5 Cuantificación mediante GC/MS de los fitosteroles principales en FM-PH-38

FM-PH-35 y 36 recristalizados	Concentración de la muestra a 1,08 mg/ml
	análisis nº 1	análisis nº 2	análisis nº 3	Media
campesterol	0,09	0,09	0,07	0,09
campestanol	0,19	0,19	0,14	0,17
\beta-sitosterol	0,21	0,22	0,18	0,20
sitostanol	0,62	0,69	0,67	0,66
componentes de esterol principales	102,9	110,6	97,7	103,7
(% p/p en peso húmedo)

Ejemplo 2 Recristalización a partir de alcohol isopropílico

Se disolvió una mezcla igual (1:1 en peso) de FCP-3P1 y FCP-3P2 en alcohol isopropílico a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El fitosterol se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrar sobre un papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno de tapa roscable.

Ejemplo 3 Recristalización a partir de metilisobutil cetona ("MIBK")

Se disolvió una mezcla igual (1:1 en peso) de FCP-3P1 y FCP-3P2 en MIBK a temperatura ambiente para conseguir la saturación de la solución. El fitosterol se recristalizó a partir de solución saturada de MIBK a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrar sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno de tapa roscable.

Ejemplo 4 Recristalización a partir de tolueno

Se disolvió una mezcla igual (1:1 en peso) de FCP-3P1 y FCP-3P2 en tolueno a temperatura ambiente para conseguir la saturación de la solución. El fitosterol se recristalizó a partir de solución saturada de tolueno a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrar sobre un papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable.

Ejemplo 5 Recristalización a partir de hexano/acetona

Se disolvió una mezcla igual (1:1 en peso) de FCP-3P1 y FCP-3P2 en una mezcla hexano/acetona (50% de cada, p/p) a temperatura ambiente para conseguir la saturación de la solución. El fitosterol se recristalizó a partir de la solución saturada de hexano/acetona a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrar sobre un papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a 35ºC bajo un atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable.

Ejemplo 6 Purificación e hidrogenación de fitosteroles de aceite de sebo crudo, y posterior mezcla o "adición puntual" utilizando el procedimiento de recristalización

Meta: la composición terapéutica a preparar debía encontrarse dentro de las especificaciones predeterminadas siguientes:

	Beta-sitosterol	38 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%
	Campesterol	9 a 28%
	Campestanol	2 a 14%

a): Purificación: se dispersaron esteroles de aceite de sebo crudo (55 kg) en 220 litros de alcohol isopropílico ("IPA"). Se añadió carbono activado (5,5 kg) para purificar los esteroles. La purificación se llevó a cabo mediante la agitación de la mezcla durante 2 horas a 65ºC. El carbono se separó por filtración utilizando un filtro Mott, también a 65ºC.

b): Hidrogenación: una parte (30% p/p) de la mezcla de fitosterol purificado (59,41% de beta-sitosterol; 4,73% de sitostanol; 24,19% de campesterol y 7,39% de campestanol, todos los % en p/p) se hidrogenó en IPA utilizando un catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: la parte hidrogenada (74,47% de sitostanol y 20,35% de campestanol) y la parte no hidrogenada (70% p/p con la especificación indicada anteriormente) se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrar sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a continuación a 35ºC bajo atmósfera abierta durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% p/p):

	Beta-sitosterol	41,59%
	sitostanol	25,65%
	Campesterol	16,93%
	Campestanol	11,28%

La concentración de sitostanol era significativamente más elevada en el producto recristalizado que en el material originalmente purificado (25,65% en comparación con el 4,73%), lo que se traduce en un producto de eficacia terapéutica más elevada.

Ejemplo 7 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas y mezcla o "adición puntual" posteriores, utilizando el procedimiento de recristalización

Meta: la composición terapéutica que ha de prepararse debía encontrarse dentro de las especificaciones predeterminadas siguientes:

	Beta-sitosterol	18 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%
	Campesterol	9 a 28%

	Campestanol	2 a 14%
	Estigmasterol	n/a
	Brasicasterol	n/a

a): Purificación: se adquirieron esteroles de soja comercialmente de ADM.

b): Hidrogenación: una parte (44% p/p) de la mezcla de fitosteroles purificados (45,70% beta-sitosterol; 2,1% sitostanol; 27,90% campesterol; y 14,80% estigmasterol y 5,3% brasicasterol, todos los % en p/p) se hidrogenó en IPA utilizando catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: la parte hidrogenada (con una especificación de 62,60% de sitostanol y 33,20% de campestanol) y la parte no hidrogenada (en una cantidad de 56% p/p y que presentaba la especificación indicada anteriormente) se disolvieron en solución IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarlo sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a continuación a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno de tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	25,60%
	Sitostanol	28,70%
	Campesterol	15,60%
	Campestanol	14,60%
	Estigmasterol	8,30%
	Brasicasterol	3,00%

Tal como en el Ejemplo 6 anterior, la concentración de sitostanol era significativamente más elevada en el producto recristalizado que en el material originalmente purificado (25,60% en comparación con 2,10%), lo que se traduce en un producto de eficacia terapéutica más elevada.

Ejemplo 8 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas, y posterior mezcla o "adición puntual" con fitosteroles derivados de aceite de sebo, utilizando el procedimiento de recristalización

	Beta-sitosterol	18 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%
	Campesterol	9 a 28%
	Campestanol	10 a 30%
	Estigmasterol	n/a
	Brasicasterol	n/a

a): Purificación: los esteroles vegetales se adquirieron comercialmente de Henkel.

b): Hidrogenación: la mezcla de fitosteroles vegetales se hidrogenó en IPA utilizando un catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 40% de sitostanol; 0% de campesterol; 40% de campestanol y 0% de brasicasterol; todos los % en p/p) y los esteroles derivados de aceite de sebo no hidrogenado (con una especificación de 59,4% de beta-sitosterol; 4,7% de sitostanol; 24,2% de campesterol; 7,4% de campestanol y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 55:45% p/p se disolvieron en una solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre un papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a continuación a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% p/p) que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	26,7%
	Sitostanol	24,1%
	Campesterol	10,9%
	Campestanol	25,3%
	Brasicasterol	0%

Ejemplo 9 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de aceite de sebo, y posterior mezcla o "adición puntual" con fitosteroles derivados de hortalizas, utilizando el procedimiento de recristalización

	Beta-sitosterol	18 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%
	Campesterol	9 a 28%
	Campestanol	2 a 30%
	Estigmasterol	n/a
	Brasicasterol	n/a

a): Purificación: se dispersaron los esteroles de aceite de sebo crudo (55 kg) en 220 litros de alcohol isopropílico ("IPA"). Se añadió carbono activado (5,5 kg) para purificar los esteroles. La purificación se llevó a cabo mediante la agitación de la mezcla durante 2 horas a 65ºC. El carbono se separó por filtración utilizando un filtro Mott, también a 65ºC.

b): Hidrogenación: los fitosteroles del aceite de sebo se hidrogenaron en IPA utilizando un catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 74,5% de sitostanol; 0% de campesterol; 20,4% de campestanol y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) y los esteroles no hidrogenados derivados de hortalizas, adquiridos comercialmente de Henkel (con una especificación de 40% de beta-sitosterol; 0% de sitostanol; 33% de campesterol; 0% de campestanol y 7% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 33:67% p/p se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre un papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a continuación a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	26,8%
	Sitostanol	24,6%
	Campesterol	22,1%
	Campestanol	6,7%
	Brasicasterol	4,7%

Ejemplo 10 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas, y posterior mezcla y "adición puntual" con fitosteroles derivados de hortalizas, utilizando el procedimiento de recristalización

	Beta-sitosterol	18 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%

	Campesterol	9 a 28%
	Campestanol	10 a 30%
	Estigmasterol	n/a
	Brasicasterol	n/a

a): Purificación: los esteroles vegetales se adquirieron comercialmente de Henkel y de ADM.

b): Hidrogenación: la mezcla de fitosteroles vegetales de ADM se hidrogenó en IPA utilizando catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 55,6% de sitostanol; 0% de campesterol; 23,9% de campestanol; 6,9% de brasicastanol y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) y los esteroles no hidrogenados derivados de hortalizas de Henkel (con una especificación de 40% de beta-sitosterol; 0% de sitostanol; 33% de campesterol; 0% de campestanol y 7% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 44:56% p/p se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre un papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado seguidamente se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno de tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% en p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	22,4%
	Sitostanol	24,5%
	Campesterol	18,5%
	Campestanol	10,5%
	Brasicasterol	3,9%
	Brasicastanol	3,0%

Ejemplo 11 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas, y posterior mezcla o "adición puntual" con fitosteroles derivados de hortalizas, utilizando el procedimiento de recristalización

Meta: la composición terapéutica que ha de prepararse debía encontrarse dentro de la especificaciones predeterminadas siguientes:

	Beta-sitosterol	10 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%
	Campesterol	5 a 28%
	Campestanol	10 a 30%
	Estigmasterol	n/a
	Brasicasterol	n/a

a): Purificación: se adquirieron esteroles vegetales de Henkel.

b): Hidrogenación: la mezcla de fitosteroles vegetales se hidrogenó en IPA utilizando un catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 40% de sitostanol; 0% de campesterol; 39% de campestanol, y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) y los esteroles no hidrogenados derivados de hortalizas (con una especificación de 40% de beta-sitosterol; 0% de sitostanol; 33% de campesterol; 0% de campestanol y 6% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 73:27% p/p se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de la solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a continuación a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

\newpage

	Beta-sitosterol	10,8%
	Sitostanol	29,2%
	Campesterol	8,9%
	Campestanol	28,5%
	Brasicasterol	1,6%

Ejemplo 12 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas, y posterior mezcla y "adición puntual" con fitosteroles derivados de hortalizas, utilizando el procedimiento de recristalización

a): Purificación: los esteroles vegetales se adquirieron comercialmente de Cargill.

b): Hidrogenación: la mezcla de fitosteroles vegetales se hidrogenó en IPA utilizando catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 67% de sitostanol; 0% de campesterol; 25,6% de campestanol y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) y los esteroles no hidrogenados derivados de hortalizas (con una especificación de 43% de beta-sitosterol; 1,0% de sitostanol, 24% de campesterol; 0,8% de campestanol; 23% de estigmasterol y 0,8% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 49:51% p/p se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado se secó a continuación a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	21,9%
	Sitostanol	33,3%
	Estigmasterol	11,7%
	Campesterol	12,2%
	Campestanol	1,3%
	Brasicasterol	0,4%

Ejemplo 13 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas, y posterior mezcla o "adición puntual" con fitosteroles derivados de hortalizas, utilizando el procedimiento de recristalización

a): Purificación: los esteroles vegetales se adquirieron comercialmente de Cargill y de Henkel.

b): Hidrogenación: la mezcla de fitosteroles vegetales de Henkel se hidrogenó en IPA utilizando catalizador de paladio sobre alúmina. El procedimiento de hidrogenación se llevó a cabo a 70ºC y 60 psi de presión de hidrógeno durante 3 horas. Se utilizó un filtro Mott para recuperar el catalizador de paladio tras la hidrogenación.

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 40% de sitostanol; 0% de campesterol; 36 a 44% de campestanol, y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) y los esteroles no hidrogenados derivados de hortalizas de Cargill (con una especificación de 43% de beta-sitosterol; 1,0% de sitostanol; 24% de campesterol; 0,8% de campestanol, 23% de estigmasterol y 0,8% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 72:28% p/p se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado seguidamente se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especificaciones siguientes (% en p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	12%
	Sitostanol	29,1%
	Estigmasterol	6,4%
	Campesterol	6,7%
	Campestanol	26,1 a 31,9%
	Brasicasterol	0,2%

Ejemplo 14 Purificación e hidrogenación de fitosteroles crudos derivados de hortalizas, y posterior mezcla y "adición puntual" con fitosteroles derivados de hortalizas, utilizando el procedimiento de recristalización

	Beta-sitosterol	5 a 60%
	Sitostanol	14 a 34%
	Campesterol	5 a 28%
	Campestanol	10 a 40%
	Estigmasterol	n/a
	Brasicasterol	1 a 5%

c): Mezcla/adición puntual: los esteroles hidrogenados (con una especificación de 0% de beta-sitosterol; 40% de sitostanol; 0% de campesterol; 36 a 44% de campestanol, y 0% de brasicasterol, todos los % en p/p) y los esteroles no hidrogenados derivados de hortalizas (con una especificación de 40% de beta-sitosterol; 0% de sitostanol; 30 a 36% de campesterol; 0% de campestanol y 6 a 8% de brasicasterol, todos los % en p/p) a una proporción de 83:17% p/p se disolvieron en solución de IPA a 75ºC para conseguir la saturación de la solución. El producto se recristalizó a partir de solución saturada de alcohol isopropílico a aproximadamente 6ºC durante la noche antes de filtrarse sobre papel de filtro Whatman nº 1 utilizando un embudo Buchner de vidrio para filtros con succión de vacío. El material recristalizado seguidamente se secó a 35ºC bajo atmósfera abierta en un horno caliente durante 48 horas antes de almacenar en un tubo de 50 ml de polipropileno con tapa roscable. El producto recristalizado formado de esta manera presentaba las especifi-caciones siguientes (% en p/p), que se encontraban satisfactoriamente dentro de los intervalos deseados:

	Beta-sitosterol	6,8%
	Sitostanol	33,2%
	Estigmasterol	0%
	Campesterol	5,1 a 6,1%
	Campestanol	29,9 a 36,5%
	Brasicasterol	1 a 4%

Bibliografía

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13. Heinemann et al. Agents Actions(Suppl) 1988:26; 117-122

Claims

1. Estructura cristalina compuesta que comprende un fitosterol o un derivado del mismo y un fitostanol o un derivado del mismo, preparada mediante:

a): la disolución de un fitosterol o derivado esterificado del mismo purificado a partir de su fuente, y un fitostanol o derivado esterificado del mismo purificado a partir de su fuente, en un solvente a temperatura ambiente o a temperatura superior a la ambiente pero inferior al punto de ebullición del solvente;

b): el enfriamiento del solvente para permitir la formación de cristales; y

c): la filtración y lavado de los cristales formados de esta manera; en la que dicha estructura presenta un único endotermo compuesto, como se pone de manifiesto por calorimetría de escaneo diferencial.

2. Estructura según la reivindicación 1, en la que el fitosterol se selecciona de entre el grupo constituido por sitosterol, campesterol, estigmasterol, brasicasterol, desmosterol, calinosterol, poriferasterol, clionasterol y todas las formas naturales o sintéticas de los mismos, incluyendo los isómeros.

3. Estructura según la reivindicación 1, en la que el fitostanol se selecciona de entre el grupo constituido por todos los fitosteroles saturados o hidrogenados y todas las formas naturales o sintéticas de los mismos, incluyendo los isómeros.

4. Estructura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su utilización en un método de tratamiento de un animal.

5. Utilización de una estructura según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la preparación de un producto para su utilización en un método para el tratamiento o la prevención de enfermedades cardiovasculares y sus condiciones subyacentes, incluyendo la ateroesclerosis y la hipercolesterolemia en un animal.

6. Utilización según la reivindicación 5, en la que el animal es un ser humano.

7. Utilización según la reivindicación 5 ó 6, en la que en el método la estructura reduce el colesterol sérico.

8. Producto que comprende una estructura cristalina compuesta según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, y un portador farmacéuticamente aceptable o de grado alimentario para el mismo, para la administración a un animal.

9. Producto según la reivindicación 8, que es un comestible o una bebida.

10. Procedimiento para la preparación de una estructura cristalina compuesta que comprende un fitosterol y un fitostanol, en el que dicha estructura presenta un único endotermo compuesto, tal como se pone de manifiesto mediante calorimetría de escaneo diferencial, que comprende:

a): disolver el fitosterol o el derivado esterificado del mismo purificado a partir de su fuente, y el fitostanol o el derivado esterificado del mismo purificado a partir de su fuente en un solvente a temperatura ambiente o temperatura superior a la ambiente pero inferior al punto de ebullición del solvente;

b): enfriar el solvente para permitir la formación de cristales; y

c): filtrar y lavar los cristales formados de esta manera.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el solvente es cualquier hidrocarburo que presenta de 5 a 10 átomos de carbono.

12. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el solvente es cualquier alcohol que presenta de 1 a 10 átomos de carbono.

13. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el solvente es aromático.

14. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el solvente es cualquier cetona que presenta de 1 a 10 átomos de carbono.

15. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el solvente es cualquier éster derivado de ácidos carboxílicos que presenta de 2 a 10 átomos de carbono, preferentemente acetato de etilo.

16. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el fitosterol o el derivado esterificado del mismo y el fitostanol o el derivado esterificado del mismo se disuelven en el solvente a una temperatura comprendida entre 18ºC y 80ºC.

17. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el solvente se enfría en la etapa b) hasta una temperatura comprendida entre 1ºC y 20ºC.

18. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el fitosterol se selecciona de entre el grupo constituido por sitosterol, campesterol, estigmasterol, brasicasterol, desmosterol, calinesterol, poriferasterol, clionasterol y todas las formas naturales o sintetizadas y los derivados esterificados de los mismos, incluyendo los isómeros.

19. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el fitostanol se selecciona de entre el grupo constituido por todos los fitosteroles saturados o hidrogenados y todas las formas naturales o sintetizadas y los derivados esterificados de los mismos, incluyendo los isómeros.