ES2269711T3 - Inactivacion de genes de la via mep. - Google Patents
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Abstract
Utilización in vitro de intermediarios que pueden obtenerse mediante un procedimiento, caracterizada porque en células y organismos seleccionados el gen lytB de la vía MEP se suprime o se inactiva o se modifica de tal modo que la actividad enzimática del producto génico se reduce a efectos de activar las células gamma/delta T.
Description
Inactivación de genes de la vía MEP.
La presente invención se refiere a células y
organismos en los que puede aumentarse la concentración de
intermediarios de la vía metabólica del isoprenoides independiente
del mevalonato (vía MEP) mediante la supresión o inactivación de
genes. Además, la invención describe procedimientos para la
preparación de intermediarios y productos derivados de la vía MEP a
partir de organismos en los que los genes según la invención se han
suprimido o inactivado, así como procedimientos de tecnología
genética y convencionales para la preparación de estos organismos.
La invención también describe la utilización de inhibidores
enzimáticos para el enriquecimiento de intermediarios de la vía
MEP. Además, la invención describe la utilización terapéutica de
células y organismos en los que los genes o enzimas según la
invención se han suprimido o inactivado, y la preparación de
medicamentos a partir de estas células y organismos.
La biosíntesis de isoprenoides a través de la
vía acetato/mevalonato clásica (Beytia ED, Porter JW. Annu Rev
Biochem. 1976; 45:113-42) y una vía biosintética
alternativa independiente del mevalonato, la vía
2-metil-D-eritritol
(vía MEP, sinónimo de vía DOXP) es conocida (Rohmer M. Nat Prod
Rep. 1999 Oct; 16 (5): 565-74). Las dos vías
conducen al pirofosfato de isopentenilo (IPP), el precursor común de
todos los isoprenoides superiores. Mientras que la vía
acetato/mevalonato se conoce desde hace tiempo y se ha analizado
completamente, actualmente todavía no se conocen todas las etapas
de reacción biosintéticas de la vía MEP.
En el pasado se han derivado diferentes
procedimientos biotecnológicos basados en la aplicación de
conocimientos sobre la vía MEP:
1. Los inhibidores de diferentes enzimas de la
vía MEP resultan adecuados como antiinfectivos y herbicidas, dado
que la vía MEP no tiene lugar en las personas.
2. Determinados intermediarios de la vía MEP
provocan una estimulación masiva de células gamma/delta T humanas.
Estos intermediarios resultan adecuados como medicamentos
inmunomoduladores.
3. Mediante la sobreexpresión de determinados
genes de la vía MEP (por ejemplo, DOXP sintasa, LytB) puede
alcanzarse un enriquecimiento de isoprenos superiores como productos
derivado de la vía MEP.
Sin embargo, hasta el momento se desconocía que
mediante la supresión de un gen de la vía MEP, o mediante la
inactivación de la enzima correspondiente, puede alcanzarse el
enriquecimiento de un intermediario de la vía MEP.
Se conoce que las células gamma/delta T humanas
se activan mediante uno o más intermediarios de la vía MEP. Esto
significa que, mediante la incubación de linfocitos sanguíneos
periféricos con extractos de organismos que presentan la vía MEP,
se producen una proliferación y una secreción de citoquinas
selectiva de la población de células gamma/delta T (Jomaa H,
Feurle J, Luhs K, Kunzmann V, Tony HP, Herderich M, Wilhelm M. FEMS
Immunol Med Microbiol. 1999 Sep; 25 (4):
371-8). Todavía se desconoce la naturaleza
química exacta de esta sustancia o sustancias activadoras. Los
datos publicados indican que el pirofosfato de
3-formil-1-butilo,
como intermediario hipotético de la vía MEP, participa en la
activación de las células gamma/delta T (Belmant C, Espinosa E,
Poupot R, Peyrat MA, Guiraud M, Poquet Y, Bonneville M, Fournie JJ.
J Biol Chem. 1999 Nov 5; 274 (45):
32079-84).
Consecuentemente, pudo demostrarse que las
bacterias en las que se habían suprimido diferentes genes de la vía
MEP (por ejemplo, la DOXP reductoisomerasa, gcpE) no fueron capaces
de activar células gamma/delta T (Altincicek B, Moll J, Campos
N, Foerster' G, Beck E, Hoeffler JF, Grosdemange- Billiard C,
Rodriguez-Concepcion M, Rohmer M, Boronat A, Eberl
M, Jomaa H. J Immunol. 2001 Mar 15; 166 (6):
3655-8). Para la preparación de este tipo de
mutantes supresores resulta necesario introducir en las bacterias,
mediante técnicas genéticas, genes de la vía del mevalonato. De
este modo, las bacterias pueden sobrevivir en presencia de
mevalonato en el medio incluso si la vía MEP ya no es funcional
(figura 1).
Sorprendentemente, se ha puesto de manifiesto
que las bacterias cuyo gen lytB ha sido suprimido (ejemplo 1)
activan las células gamma/delta T de forma significativamente más
intensa que las bacterias tipo salvaje (ejemplo 2, figura 2). Pudo
demostrarse una participación esencial del gen lytB en la vía MEP
(ejemplo 3). De este modo, un bloqueo de la vía MEP a la altura de
la enzima lytB provoca un enriquecimiento de un intermediario
responsable de la activación de las células gamma/delta T.
Por ello, se da a conocer un procedimiento en el
que se alcanza un enriquecimiento de intermediarios de la vía MEP
mediante la supresión, mutación o inactivación funcional de los
genes correspondientes. El enriquecimiento de intermediarios de la
vía MEP también puede alcanzarse mediante inhibición de la función
enzimática de los polipéptidos correspondientes.
Para llevar a cabo el procedimiento según la
invención resulta particularmente adecuadas secuencias de ADN que
codifican un polipéptido con la secuencia de aminoácidos
representada por la SEC. ID. nº 2, o un análogo o un derivado del
polipéptido según la SEC. ID. nº 2, suprimiéndose, insertándose o
sustituyéndose por otros aminoácidos uno o más aminoácidos sin
reducir esencialmente la acción enzimática del polipéptido.
La invención se define además mediante las
reivindicaciones 1 a 7. Las subreivindicaciones definen
perfeccionamientos de la invención.
A continuación se describe la invención a título
de ejemplo a partir de las figuras adjuntas, en las que:
la figura 1 muestra el principio de
enriquecimiento de intermediarios de la vía MEP mediante supresión
de genes de la vía MEP. Se representan las etapas principales de la
vía MEP presente de forma natural en E. coli con las enzimas
Dxs, Dxr, YgbP, YchB, YgbB, Gcpe, LytB. Para poder suprimirse genes
de la vía MEP, se introdujeron genes de la vía de mevalonato
(codificadores de Mvk, Pmk, Mpd) mediante procedimientos de
tecnología genética. La supresión de lytB produce un
enriquecimiento de intermediarios que activan las células
gamma/delta T;
la figura 2 muestra la activación de células
gamma/delta T en la sangre de donantes sanos medida como expresión
de CD25 mediante extractos de diferentes cepas bacterianas (tipo
salvaje, wtDeltagcpE, wtDeltalytB) en diversos grados
de dilución. Sirvió como control IPP en una concentración final de
10 \muM (IPP activa las células gamma/delta T de forma
significativamente más débil que los intermediarios según la
invención, pero resulta adecuado como control para el sistema de
ensayo). El mutante wtDeltagcpE se preparó de forma análoga
al mutante wtDeltalytB.
Los genes y sus productos génicos (polipéptidos)
se indican en el protocolo de secuencias con sus estructuras
primarias, y la correspondencia es la siguiente:
| SEC. ID. nº 1: | gen lytB |
| SEC. ID. nº 2: | proteína lytB |
Las secuencias proceden de Escherichia
coli.
Además de las secuencias de ADN mencionadas en
el protocolo de secuencias, también son adecuadas aquellas que, a
consecuencia de la degeneración del código genético, presentan otra
secuencia de ADN, codificando sin embargo el mismo polipéptido o un
análogo o derivado del mismo. En este sentido también deben
considerarse secuencias procedentes de otros organismos distintos a
E. coli, particularmente otras bacterias, algas, plantas y
protozoos, y que puedan reconocerse en base a la comparación de
secuencias o a análisis de función como homólogas a las secuencias
mencionadas en el protocolo de secuencias.
La invención describe células y organismos, así
como la preparación de células y organismos, en los que los genes
según la invención se han inactivado funcionalmente mediante
procedimientos básicamente conocidos. Los genes también pueden no
haber sido completamente inactivados, sino que se haya reducido o
modificado su función. Esto puede alcanzarse mediante:
- -
- supresión total o parcial de los genes
- -
- sustitución de los genes por una secuencia de ADN artificial o un gen para un marcador de selección
- -
- inserción de un gen para un marcador de selección
- -
- supresión, inserción y sustitución de uno o más pares de bases
- -
- mutaciones en las zonas 5' y 3' de las secuencias codificadores (influencia de secuencias de promotor, aumentador, terminador, puntos de enlace de ribosomas)
- -
- introducción de constructos de ADN que codifican ARN antisentido
- -
- aplicación de agentes mutagénicos, radiación ionizante, radiación UV
- -
- filtración tras mutantes espontáneos
La inactivación o modificación de las secuencias
según la invención puede ser llevada a cabo por bacterias, algas,
plantas y protozoos. Para la obtención de mutantes estables puede
resultar necesario introducir parcial o totalmente los genes de la
vía acetato/mevalonato y, en caso necesario, añadir mevalonato u
otros intermediarios de la vía MEP o derivados o análogos de estos
intermediarios (por ejemplo,
3-metil-3-buten-1-ol,
3-metil-2-buten-1-ol)
al
medio.
medio.
También pueden utilizarse aquellas células y
organismos que no presentan de forma natural la vía MEP, siempre
que se hayan introducido mediante procedimientos de técnica genética
o bioteconológicos genes de la vía MEP. También es posible alcanzar
el enriquecimiento de intermediarios de la vía MEP o sus derivados
introduciendo sólo de forma incompleta los genes de la vía MEP.
Para ello, resultan adecuados, entre otros, células de mamíferos e
insectos, hongos inferiores y superiores, mixomicetos y diversos
protozoos.
Además de mediante procedimientos genéticos,
puede alcanzarse una inactivación o disminución de la actividad
enzimática de los polipéptidos según la invención mediante
inhibidores enzimáticos que se añaden al medio de cultivo de los
organismos o extractos celulares de los organismos. Los inhibidores
enzimáticos pueden consistir en compuestos sintéticos o naturales
que inhiben reversible o irreversiblemente la función del
polipéptido mediante interacciones competitivas o alostéricas.
Las células y organismos descritos en el
presente documento, y entre ellos también plantas enteras y partes
de plantas, pueden multiplicarse y cultivarse mediante
procedimientos conocidos. También es posible un
co-cultivo con otras células u organismos, entre
ellos también aquellos que no presentan la vía MEP. Los
intermediarios enriquecidos de la vía MEP o sus derivados pueden
obtenerse mediante desintegración de las células o a partir de los
sobrenadantes del cultivo. Para la purificación de los
intermediarios resultan adecuados diversos procedimientos
conocidos, entre otros cromatografía, electroforesis y precipitación
(por ejemplo como sales de bario).
Los intermediarios enriquecidos de la vía MEP
son adecuados para distintas aplicaciones. Se ha puesto de relieve
que los intermediarios contienen el producto de la enzima GcpE y el
sustrato de la enzima LytB. Por ello, los intermediarios pueden
utilizarse como sustrato en ensayos de actividad enzimática para
LytB y GcpE. En el ensayo de actividad para GcpE se considera la
reacción de retorno. Los ensayos de actividad enzimática de este
tipo son adecuados para la detección de inhibidores de GcpE y
LytB.
Los intermediarios enriquecidos de la vía MEP
también pueden utilizarse para la preparación de medicamentos. La
actividad de las sustancias se basa en la activación de células
gamma/delta T. En función del ámbito de aplicación, pueden
reforzarse las defensas inmunológicas (por ejemplo, contra tumores)
o inducirse una tolerancia inmunológica contra autoantígenos y
alergenos.
Son ámbitos de aplicación el tratamiento de
enfermedades inmunes o autoinmunes y alergias. Son ejemplos de
ello: alergias, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, tiroiditis
de Hashimoto, miastenia grave, lupus eritematoso, diabetes
mellitus, cirrosis biliar primaria, hepatitis crónica activa,
adrenalinitis/enfermedad de Addison, polimiositis, dermatomiositis,
anemia hemolítica autoinmune, inflamaciones del miocardio y el
endocardio, esclerodermia, uveitis (facouveitis, oftalmia
simpática), pénfigo vulgar, penfigoide, anemia perniciosa,
gastritis atrófica autoinmune, enfermedades inflamatorias del
intestino tal como enfermedades de Crohn y colitis ulcerosa,
enfermedades inflamatorias de los pulmones tal como enfermedades
asmáticas y bronquíticas.
Resulta preferente la aplicación en Morbus
Crohn, colitis ulcerosa, esclerosis múltiple, asma, bronquitis
crónica y alergias.
Otras aplicaciones son las enfermedades óseas,
particularmente la osteoporosis.
Para la aplicación médica, los intermediarios de
la vía MEP obtenidos a partir de los organismos descritos en el
presente documento pueden aislarse o utilizarse como extractos
crudos. También pueden utilizarse los organismos enteros, vivos o
muertos. Los intermediarios y organismos descritos en el presente
documento pueden utilizarse solos o en combinación con otros
medicamentos. En este caso se incluye la aplicación como adyuvante
para el reforzamiento o modulación de una respuesta inmune. Las
formas de aplicación preferentes son la aplicación oral, inhalativa
y rectal, así como la aplicación sobre la piel o membranas
mucosas.
Como composiciones farmacéuticas resultan
adecuadas: comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras, granulados,
supositorios, soluciones, suspensiones y emulsiones, pastas,
pomadas, geles, cremas, lociones, polvos o sprays.
Los comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y
granulados pueden contener las sustancias activas con las sustancias
portadoras usuales, como (a) agentes de relleno y extensor, por
ejemplo almidones, lactosa, azúcar de caña, glucosa, manita y ácido
silícico, (b) agentes aglutinantes, por ejemplo caboximetilcelulosa,
alginato, gelatina, polivinilpirrolidona, (c) agentes humectantes,
por ejemplo glicerina, (d) agentes disgregantes, por ejemplo
agar-agar, carbonato cálcico y carbonato sódico, (e)
inhibidores de disolución, por ejemplo parafina, y (f) acelerantes
de la resorción, por ejemplo compuestos de amonio cuaternario, (g)
agentes reticulantes, por ejemplo alcohol cetílico, monoestearato
de glicerina, (h) agentes de adsorción, por ejemplo caolina y
bentonita y (i) agentes lubricantes, por ejemplo talco, estearato
de calcio y magnesio y polietilenglicoles sólidos, o mezclas de las
sustancias mencionadas de (a) a (i). Además, los compuestos
descritos en el presente documento pueden disponerse en otros
materiales portadores, como por ejemplo plásticos, (cadenas
plásticas para terapia local), colágeno o cemento óseo.
Los comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y
granulados pueden estar provistos de los recubrimientos y envolturas
usuales, eventualmente con contenido en agentes opacantes, y estar
compuestos de tal modo que las sustancias activas sólo se liberan
en una parte determinada del tracto intestinal, eventualmente de
forma retardada, pudiéndose utilizar como masa de encapsulación,
por ejemplo, sustancias poliméricas y ceras.
Las sustancias activas pueden presentarse
también en forma microencapsulada, eventualmente con una o varias
de las sustancias portadoras mencionadas anteriormente.
\newpage
Los supositorios pueden contener, además de las
sustancias activas, las sustancias portadoras usuales solubles o
insolubles en agua, por ejemplo polietilenglicoles, grasas, por
ejemplo grasa de cacao y ésteres superiores (por ejemplo alcohol
C14 con ácido graso C16), o mezclas de estas sustancias.
Las pomadas, pastas, cremas y geles pueden
contener, además de la sustancia activa o sustancias activas, las
sustancias portadoras usuales, por ejemplo grasas animales y
vegetales, ceras, parafinas, almidones, tragacanto, derivados de
celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonita, ácido silícico,
talco y óxido de zinc, o mezclas de estas
sustancias.
sustancias.
Los polvos y sprays pueden contener, además de
la sustancia activa o sustancias activas, las sustancias portadoras
usuales, por ejemplo lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de
aluminio, silicato de calcio y polvos de poliamida, o mezclas de
estas sustancias. Los sprays pueden contener además los propelentes
usuales, por ejemplo hidrocarburos clorofluorados.
Las soluciones y emulsiones pueden contener,
además de las sustancias activas, las sustancias portadoras usuales,
tal como disolventes, solubilizadores y emulsionantes, por ejemplo
agua, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato etílico,
acetato etílico, alcohol bencílico, benzoato bencílico,
propilenglicol, 1,3-butilenglicol,
dimetilformamida, aceites, particularmente aceite de algodón, aceite
de cacahuete, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de
ricino y aceite de sésamo, glicerina, glicerinformal, alcohol
tetrahidrofufurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso
de sorbitan, o mezclas de estas sustancias.
Resulta particularmente ventajosa la selección
de una forma de administración de medicamento que contiene
adicionalmente una sustancia que puede ser reconocida por el sistema
inmune como antígeno extraño o autoantíge-
no.
no.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Para la preparación de un mutante supresor de
lytB de E. coli se utilizó el vector pKO3 (Link, A. J.;
Phillips, D.; Church, G. M.; J. Bacteriol. 179,
6228-6237). Para la preparación del constructo de
supresión se amplificaron dos secuencias en sentido superior e
inferior del gen lytB en dos prolongaciones de PCR asimétricas. Los
primers se introdujeron en relaciones molares de 1:10 (50 nM y 500
nM). Los dos productos PCR se fusionaron en un producto en una
segunda amplificación por PCR. El producto se clonó mediante el
pCR-TA-TOPO Cloning Kit
(Invitrogen) y se transpuso a través de las interfases de
restricción Bam HI y Sal I en el vector pKO3. Se utilizaron los
primers siguientes:
Las interfases de restricción están subrayadas.
Las secuencias solapadas que definen una inserción 21bp "in
frame" se marcan en negrita.
Para poder preparar mutantes en los que están
suprimidos los genes individuales de la vía MEP, en primer lugar se
preparó una cepa de E. coli modificada genéticamente que es
capaz de utilizar mevalonato del medio de cultivo para la síntesis
de IPP. Además, se construyó un operón sintético que contenía los
genes para las enzimas de la vía de mevalonato de Saccharomyces
cerevisiae (levadura de pan) siguientes: mevalonato quinasa
(ERG12), fosfomevalonato quinasa (ERG8) y difosfomevalonato
descarboxilasa (ERG19). Los tres genes se amplificaron en tres
prolongaciones de PCR asimétricas con ADN genómico de levadura como
matriz, introduciéndose los primers en relaciones molares de 1:10
(50 nM y 500 nM). Con los primers se introdujeron puntos de enlace
de ribosomas. Los tres productos PCR se mezclaron, de modo que
pudieran hibridarse con las zonas solapadas, y se amplificaron como
fragmento mediante la utilización del primer externo. El producto se
clonó en el vector pBAD mediante la utilización del
pBAD-TA-TOPO Cloning Kit
(Invitrogen) y se verificó mediante análisis de restricciones y de
secuencia. Se utilizó el conjunto de primers siguiente:
Las secuencias solapadas están marcadas en
negrita y las secuencias que definen los puntos de enlace de
ribosomas están marcadas en cursiva.
A efectos de comprobar la funcionalidad del
operón, se analizó en presencia de mevalonato la sensibilidad
contra fosmidomicina de bacterias transformadas con el operón
sintético. Según lo esperado, las bacterias que contenían el operón
crecieron con fosmidomicina con una tasa de crecimiento reducida
mientras se mantuvo el medio mevalonato. Sin mevalonato, las
bacterias con fosmidomicina murieron.
El plásmido
pKO3-DeltalytB se transformó en la cepa de
E. coli K-12 DSM nº 498 (ATCC 23716), que
anteriormente había sido transformada con pSC-MVA.
El medio se suplemento con 100 \muM de mevalonato. Tras 1 h de
incubación a 30ºC, se seleccionaron bacterias con plásmido
integrado mediante un desplazamiento de la temperatura a 43ºC.
Mediante el ensayo siguiente de resistencia a la sucrosa y
sensibilidad al cloranfenicol se seleccionaron bacterias que habían
perdido las secuencias de vector y finalmente se analizó por PCR
para el genotipo deseado.
El enriquecimiento de intermediarios de la vía
MEP se detectó mediante la capacidad de dichos intermediarios de
activar las células gamma/delta T. Se cultivaron diferentes cepas
bacterianas (tipo salvaje, wtDeltagcpE, wtDeltalytB) en cultivos
líquidos hasta una densidad óptica de aproximadamente 0,8. La
obtención de extractos de moléculas pequeñas (low molecular weight,
LMW) con un límite de exclusión de 3 kDa se llevó a cabo tal como
se describe (Jomaa, H., J. Feurle, K. Luhs, V. Kunzmann, H. P.
Tony, M. Herderich, and M. Wilhelm. 1999. FEMS Immunol. Med.
Microbiol. 25: 371). Los linfocitos se obtuvieron mediante
centrifugación por gradientes de densidad de Ficoll a partir de
sangre periférica de tres donantes sanos. Para cada ensayo se
cultivaron 2 x 10^{5} de las células obtenidas de este modo en un
volumen de 0,2 ml de medio RPMI 1640 (Life Technologies)
enriquecido con 25 mM de HEPES, 2 mM de L-glutamina,
0,025 mg/ml de gentamicina, 100 U/ml de
interleucina-2 humana (IL-2) (todos
de Life Technologies), y 10% de suero AB humano (Cruz
Roja de Baviera). Las preparaciones LMW se añadieron en diversas
diluciones, y como control positivo se utilizó IPP (Sigma) en una
concentración final de 10 \muM. La incubación tuvo lugar a 37ºC y
un 5% de CO_{2} en estufa de cultivo. Tras 72 horas se
recolectaron las células y se analizaron en un citómetro de flujo.
Se midió la expresión del marcador de activación CD25 sobre la
superficie de Células T V gamma 9^{+} con ayuda del anticuerpo
monoclónico CD25-PE (B1.49.9), V gamma
9-FITC (Immu360) y CD3-PC5 (UCHT1)
de la firma Beckman-Coulter. Los extractos de la
cepa tipo salvaje de las bacterias activaron las células gamma/delta
T en una dilución de 1:500 (correspondiente a aproximadamente 2 x
10^{7} bacterias/ml). Los extractos del mutante supresor
DeltagcpE produjeron una activación significativamente
menor. En cambio, la activación por parte de extractos del mutante
supresor DeltalytB fue significativamente mayor que por parte
de extractos de la cepa tipo salvaje. Finalmente, se midió una
activación de células gamma/delta T significativa para una dilución
de 1:12500 (correspondiente a aproximadamente 8 x 10^{5}
bacterias/ml). (figura 2)
Todos los mutantes supresores lytB obtenidos
crecieron estrictamente de forma dependiente del mevalonato. Para
comprobar más exactamente esta observación, el mutante supresor
wtDeltalytB se complementó mediante un gen lytB tipo salvaje
sobre un plásmido. El gen lytB se amplificó con los primers
(5'-GGATCCATGCAGATCCTGTTGGCCAAC-3')
y Eclytbrev
(5'-AAGCTTTTAATCGACTTCACGAATATCG-3')
de ADN genómico de E. coli y se clonó en el vector
pCR2.1-TOPO. La inserción se transpuso a través de
las interfases de restricción BamHI y HindIII y se transpusieron en
el vector de expresión pQE30. Las bacterias de la cepa
wtDeltalytB, que habían sido transformadas con este
constructo, pudieron crecer de nuevo sin mevalonato. Este resultado
confirma que el lytB participa de forma esencial en la vía
metabólica MEP. Los intermediarios enriquecidos, de hecho, provenían
de la vía MEP.
<110> Jomaa Pharmaka GmbH
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<120> Inactivación de genes de la vía
MEP
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<130> 16819
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<140>
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<141>
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<151>
2001-04-23
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<160> 2
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<170> PatentIn Ver. 2.1
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<210> 1
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<211> 951
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<212> DNA
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<213> Escherichia coli
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<400> 1
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<210> 2
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<211> 316
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<212> PRT
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<213> Escherichia coli
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<400> 2
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Claims (7)
1. Utilización in vitro de
intermediarios que pueden obtenerse mediante un procedimiento,
caracterizada porque en células y organismos seleccionados
el gen lytB de la vía MEP se suprime o se inactiva o se modifica de
tal modo que la actividad enzimática del producto génico se reduce a
efectos de activar las células gamma/delta T.
2. Utilización in vitro de
intermediarios que pueden obtenerse mediante un procedimiento,
caracterizada porque en células y organismos seleccionados
el gen lytB de la vía MEP se suprime o se inactiva o se modifica de
tal modo que la actividad enzimática del producto génico se reduce
para la preparación de medicamentos.
3. Utilización según la reivindicación
2, para la preparación de medicamentos destinados a la activación
de células gamma/delta T.
4. Utilización según las
reivindicaciones 2 ó 3, para la preparación de medicamentos
destinado al tratamiento de enfermedades en personas y
animales.
5. Utilización según una de las
reivindicaciones 2 a 4, para la preparación de medicamentos
destinados al tratamiento de una enfermedad seleccionada de entre
el grupo constituido por asma, enfermedades inmunes o autoinmunes,
alergias, Morbus Crohn, colitis ulcerosa, esclerosis múltiple,
artritis reumatoide, tiroiditis de Hashimoto, miastenia grave,
lupus eritematoso, diabetes mellitus, cirrosis biliar primaria,
hepatitis crónica activa, adrenalinitis/enfermedad de Addison,
polimiositis, dermatomiositis, anemia hemolítica autoinmune,
inflamaciones del miocardio y del endocardio, esclerodermia, uveitis
(facouveitis, oftalmia simpática), pénfigo vulgar, penfigoide,
anemia perniciosa y bronquitis crónica, así como enfermedades óseas,
particularmente osteoporosis.
6. Utilización según la reivindicación
5, caracterizada porque se selecciona una forma de
administración de medicamento que contiene adicionalmente una
sustancia que puede ser reconocida por el sistema inmune como
antígeno extraño o como autoantígeno.
7. Medicamento que contiene un
intermediario que puede obtenerse mediante un procedimiento,
caracterizado porque en células y organismos seleccionados
el gen lytB de la vía MEP se suprime o se inactiva o se modifica de
tal modo que la actividad enzimática del producto génico se
reduce.
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