ES2272462T3 - Analogos de tamadarina y didemnina y procedimiento de fabricacion y uso. - Google Patents
Analogos de tamadarina y didemnina y procedimiento de fabricacion y uso. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2272462T3 ES2272462T3 ES01924886T ES01924886T ES2272462T3 ES 2272462 T3 ES2272462 T3 ES 2272462T3 ES 01924886 T ES01924886 T ES 01924886T ES 01924886 T ES01924886 T ES 01924886T ES 2272462 T3 ES2272462 T3 ES 2272462T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- leucine
- methyl
- proline
- lactate
- side chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 0 CC(C)CC(C(*[C@](C1(CC1)OC([C@](*)N(*)C([C@](CCC1)N1C([C@](CC(C)C)NC([C@@](*C(C[C@](*)C1(CC1)N1)=O)C(C)C)=O)=O)=O)=O)C1=O)=O)N Chemical compound CC(C)CC(C(*[C@](C1(CC1)OC([C@](*)N(*)C([C@](CCC1)N1C([C@](CC(C)C)NC([C@@](*C(C[C@](*)C1(CC1)N1)=O)C(C)C)=O)=O)=O)=O)C1=O)=O)N 0.000 description 10
- FBFNXGHTGRJJHX-ZCFIWIBFSA-N CC(C)C[C@H](C(N)=O)NC Chemical compound CC(C)C[C@H](C(N)=O)NC FBFNXGHTGRJJHX-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 2
- KIXFWSGSERCOQE-YUOXTWMHSA-N CC(C)(CC(O)=O)CNC(OC([C@@H](C1O)O)OC1C(O)=O)=O Chemical compound CC(C)(CC(O)=O)CNC(OC([C@@H](C1O)O)OC1C(O)=O)=O KIXFWSGSERCOQE-YUOXTWMHSA-N 0.000 description 1
- VKOKYGFYORVXBG-KSEWMFHCSA-N CC(C)C[C@@H](C(N(CCC1)[C@@H]1C(N(C)[C@@H](Cc(cc1)ccc1OC)C(OC1(CC1)CC(NC(C(C)C)[C@H](CC(O[C@H]1C(C)C)=O)O)=O)=O)=O)=O)NC1=O Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(N(CCC1)[C@@H]1C(N(C)[C@@H](Cc(cc1)ccc1OC)C(OC1(CC1)CC(NC(C(C)C)[C@H](CC(O[C@H]1C(C)C)=O)O)=O)=O)=O)=O)NC1=O VKOKYGFYORVXBG-KSEWMFHCSA-N 0.000 description 1
- JVDICLDMJJQUFG-QWHCGFSZSA-N CC(C)C[C@H](C(N)=O)N(C)C([C@H](CCC1)N1C(C1(C)CC1)=O)=O Chemical compound CC(C)C[C@H](C(N)=O)N(C)C([C@H](CCC1)N1C(C1(C)CC1)=O)=O JVDICLDMJJQUFG-QWHCGFSZSA-N 0.000 description 1
- AEWLLPLXUQRMHV-YCICKEPRSA-N CC(C)C[C@H](C(NC(C1)C1(C1(CC1)OC(C(Cc(cc1)c(C2)cc1OC)N2C([C@H](CCC1)N1[NH+]([C@H](CC(C)C)NC([C@H](C(C)C)OC(C[C@@H](C1(C(C)C1C)N1)O)=O)=O)[O-])=O)=O)C1=O)=O)N(C)C([C@H](CCC1)N1C(C1(C)CC1)=O)=O Chemical compound CC(C)C[C@H](C(NC(C1)C1(C1(CC1)OC(C(Cc(cc1)c(C2)cc1OC)N2C([C@H](CCC1)N1[NH+]([C@H](CC(C)C)NC([C@H](C(C)C)OC(C[C@@H](C1(C(C)C1C)N1)O)=O)=O)[O-])=O)=O)C1=O)=O)N(C)C([C@H](CCC1)N1C(C1(C)CC1)=O)=O AEWLLPLXUQRMHV-YCICKEPRSA-N 0.000 description 1
- XJODGRWDFZVTKW-ZCFIWIBFSA-N CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC Chemical compound CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC XJODGRWDFZVTKW-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- NRNBBCVFUWGGGP-UBIFMFMISA-N CCC([C@@H]1C)C1([C@H](CC(O[C@@H](C(C)C)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N(CCC1)[C@@H]1C(N(C)[C@H]1Cc(cc2)ccc2OC)=O)=O)=O)=O)O)NCC2(CC2)C2(CC2)OC1=O Chemical compound CCC([C@@H]1C)C1([C@H](CC(O[C@@H](C(C)C)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N(CCC1)[C@@H]1C(N(C)[C@H]1Cc(cc2)ccc2OC)=O)=O)=O)=O)O)NCC2(CC2)C2(CC2)OC1=O NRNBBCVFUWGGGP-UBIFMFMISA-N 0.000 description 1
- OHBQPCCCRFSCAX-UHFFFAOYSA-N COc(cc1)ccc1OC Chemical compound COc(cc1)ccc1OC OHBQPCCCRFSCAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Electrochromic Elements, Electrophoresis, Or Variable Reflection Or Absorption Elements (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Una composición que comprende un análogo de tamandarina que tiene la estructura en la que: i) R1 se selecciona del grupo constituido por -H, -(terc-butiloxicarbonilo), - leucina, -(N-metil)leucina, -(N-metil)leucina-(un primer fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina, -(N-metil)leucina-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un primer fluoróforo), -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina. -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un primer fluoróforo). -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-deshidro-prolina, -(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato, -(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato, -(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un primer fluoróforo), -(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato, -(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato, -(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato y -(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina- piroglutamato. ii) o (a) R3 se selecciona del grupo constituido por -CH3 y -H; y R2 se selecciona del grupo constituido por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina, una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina, una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de leucina, una cadena lateral de histidina, una cadena lateral de triptófano, una cadena lateral de arginina, una cadena lateral de lisina, un segundo fluoróforo y un sustituyente que tiene la estructura o (b) R2 y R3 juntos son un sustituyente, que tiene la estructura iii) cada uno de R5, R6, R7, R8 y R9, cuando están presentes se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH3, - CO(C6H5), -Br, -I, -F, -Cl, -CH3 y -C2H5; iv) R4 es una cadena lateral de isoleucina; v) X se selecciona del grupo constituido por -O- y -(NH)-; vi) Y se selecciona del grupo constituido por -H y un grupo protector de hidroxilo; vii) R10 se selecciona del grupo constituido por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral de lisina; y viii) la molécula no es tamandarina A.
Description
Análogos de tamadarina y didemnina y
procedimientos de fabricación y uso.
Didemnina B es un depsipéptido macrocíclico
aislado a partir de una especie de tunicado marino. Didemnina B
muestra actividades antivirales, inmunosupresoras y antitumorales
potentes in vitro e in vivo y fue el primer producto
natural marino que se sometió a pruebas clínicas contra los cánceres
humanos (Li y cols., 1992, Studies in Natural Products Chemistry,
10:241-302; Sakai y cols., 1996, J. Med. Chem.
39:2819-2834; Wipf, 1995, Chem. Rev.
95:2115-2134). Didemnina B es una didemnina, una
familia de compuestos que de forma potente inhiben la síntesis de
proteínas y el desarrollo del ciclo celular e induce una apoptosis
más rápida que ningún otro producto natural que haya sido aislado
hasta la fecha (Grubb y cols. 1995, Biochem. Biophys. Res. Commun.
215:1130-1136; Johnson y cols., 1996, FEBS Lett.
383:1-5; Johnson y cols., 1999. Inmunol. Cell Biol.
77:242-248; Johnson y cols., 1999, J. Cell. Biochem.
72:269-278). Otros miembros de esta familia de
compuestos, que incluyen didemnina M y deshidrodidemnina B,
presentan efectos citotóxicos y citoestáticos también.
Tamandarina A (también denominada
{(2S)Hiv^{2}}didemnina B) es un congénere de la didemnina
natural que se ha aislado recientemente a partir de un tunicado
marino. Tamandarina A presenta actividad biológica que es análoga a
las actividades que muestra didemnina B. Por ejemplo, tamandarina A
es un inhibidor potente de la síntesis de proteínas, del crecimiento
celular y de la oncogénesis. Tamandarina A presenta una mayor
actividad in vitro contra el carcinoma pancreático que
didemnina B (Liang y cols., 1999, Org. Lett.
1:1319-1322). Una limitación significativa del uso
de tamandarina A, bien para investigaciones o para aplicaciones
prácticas, es el limitado suministro de tamandarina A disponible a
partir de fuentes naturales y la dificultad y el coste de aislar
este producto. Existe una necesidad de un procedimiento de
sintetizar tamandarina A y otros análogos de didemnina (que incluyen
análogos de deshidrodidemnina).
A pesar de la potencia de didemnina B en los
estudios aislados, su eficacia clínica se ve obstaculizada por los
efectos secundarios asociados a las dosis terapéuticas del
compuesto. Al igual que con muchos agentes antiproliferativos,
didemnina B muestra un intervalo terapéutico relativamente estrecho.
Aunque didemnina M y deshidrodidemnina B muestran un potencial
terapéutico mejorado, comparado con didemnina B, todavía existe una
necesidad de agentes antiproliferativos que presenten una toxicidad
menor a dosis terapéuticas (es decir, análogos de didemnina que
tengan un índice terapéutico superior).
La presente invención satisface las necesidades
descritas anteriormente.
La invención se refiere a análogos de
tamandarina y didemnina que tienen un resto desoxoprolina o un resto
deshidroprolina en su estructura. En una realización, la invención
se refiere a una composición que comprende un análogo de tamandarina
que tiene la estructura de la fórmula I
En la fórmula I, R^{1} se selecciona del grupo
constituido por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato.
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
y
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato.
R^{2} y R^{3} en la fórmula I, pueden ser
restos separados o, juntos, pueden ser un resto único. Cuando
R^{2} y R^{3} son restos separados, R^{3} es o un grupo metilo
o un radical hidruro y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina, una
cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de leucina, una
cadena lateral de histidina, una cadena lateral de triptófano, una
cadena lateral de arginina, una cadena lateral de lisina, un segundo
fluoróforo y un sustituyente que tiene la estructura de la fórmula
III
Cuando R^{2} y R^{3}, juntos, son un
sustituyente, este sustituyente tiene la estructura de la fórmula
IV.
En las formulas III y IV, cada uno de R^{5},
R^{6}, R^{7}, R^{8} y R^{9} se selecciona independientemente
del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
R^{4} en la fórmula l es una cadena lateral de
isoleucina. También, en la fórmula I, X es o bien -O- o bien -(NH)-,
Y es o un radical hidruro o un grupo protector de hidroxilo y
R^{10} es o una cadena lateral de leucina o una cadena lateral de
lisina. El análogo de didemnina es un análogo distinto de
tamandarina A (es decir, {(2S)Hiv^{2}}didemnina B). En una
realización, cada resto prolina o lactato que está presente en
R^{1} muestra estereoquímica (S). En otra, cada resto capaz de
presentar estereoquímica en R^{1} está presente en sus forma
natural (es decir, la forma (S) para los restos aminoacídicos y
lactato. Se cree que ciclopentanoato se presenta de forma natural
con una estereoquímica (S).
En otra realización, la invención se refiere a
una composición que comprende un análogo de didemnina que tiene la
estructura de la fórmula XXI.
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
En la fórmula XXI, cada uno de R^{1}, R^{2},
R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, R^{8}, R^{9} y
R^{10} tiene el mismo significado que en la fórmula I.
En clases preferidas de análogos tamandarina y
didemnina con desoxo-prolina que tienen la fórmula
de I y XXI, respectivamente, R^{2} tiene la estructura de la
fórmula III, R^{3} es metilo, R^{4} es una cadena lateral de
isoleucina, cada uno de R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} es un
radical hidruro, R^{7} es metoxi, R^{10} es una cadena lateral
de leucina, X es -O-, e Y es un radical hidruro. Ejemplos de
análogos de tamandarina y didemnina que se incluyen en la invención
son los compuestos 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 115, 116,
117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129,
130, 133, 134, 136, 137, 139, 141, 142, 143, 201, 202, 203 y 204,
que se muestran en las Figuras.
En una realización, el análogo de tamandarina o
didemnina tiene un sustituyente fotorreactivo, tal como un resto
R^{2} que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El sustituyente fotorreactivo puede estar unido
directamente al análogo, o puede unirse mediante un enlazador que
tiene una cadena que comprende de 1 a aproximadamente 13 o más
átomos de carbono y, opcionalmente que tiene restos amina o amida
secundaria en la cadena.
En otra realización, el análogo de tamandarina o
didemnina tiene un fluoróforo unido, tal como un análogo en el que
un fluoróforo está unido al resto amino omega de una cadena lateral
de lisina en R^{2} o en R^{10}. Un ejemplo de la estructura de
uno de tales análogos de didemnina fluorescentes se muestra en la
Figura 29. De forma alternativa, el análogo de didemnina puede estar
unido (por ejemplo, de forma covalente) a un soporte. En la mayoría
de las realizaciones, Y en las formulas I y XXI es preferiblemente
un radical hidruro.
La invención incluye una realización de un
análogo de tamandarina o didemnina que puede activarse (o cuya
actividad puede potenciarse) mediante escisión enzimática de un
resto unido al análogo. Por ejemplo, la invención incluye
composiciones que comprenden un análogo que tiene una estructura que
se selecciona del grupo constituido por las fórmulas (a)-(d),
siguientes
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y
\vskip1.000000\baselineskip
En las fórmulas (a)-(d), R^{2}, R^{3},
R^{4}, R^{10}, X, e Y tienen las mismas identidades que se
describen anteriormente para la fórmula I. R^{13} es un resto
enzimáticamente escindible que puede escindirse mediante una enzima,
tal como una que se selecciona del grupo constituido por una
carboxipeptidasa, una \beta-lactamasa, una
\beta-galactosidasa, una penicilina
V-amidasa, una citosina desaminasa, una
nitrorreductasa, una fosfatasa alcalina, una
\beta-glucuronidasa y un anticuerpo catalítico. A
modo de ejemplo, R^{13} puede tener la estructura de cualquiera de
las fórmulas V y VI
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos de tales análogos incluyen el compuesto
131 y el compuesto 132.
La invención también se refiere a composiciones
que comprenden un fragmento de didemnina que tiene la estructura de
la fórmula VII
En la fórmula VII, Y es o un radical hidruro o
un grupo protector de hidroxilo, X es o bien -O- o bien -(NH)-,
R^{4} es o una cadena lateral de isoleucina o una cadena lateral
de valina y APG es un grupo protector de amina. R^{11} puede ser
cualquiera de -OH, NH_{2},-O(alilo),
-O(pentafluorofenilo) y un sustituyente que tiene la
estructura de la fórmula VIII
En la fórmula VIII, R^{1}, R^{2}, R^{3} y
R^{10} tienen las mismas identidades que se describen
anteriormente para la fórmula I y R^{12} puede ser o un radical
hidruro o un resto -2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo.
Los análogos de tamandarina y didemnina que se
describen en la presente memoria pueden formularse, junto con uno o
más vehículos farmacéuticamente aceptables, formando preparaciones
farmacéuticas. Estas preparaciones pueden administrarse a una célula
de mamífero (por ejemplo un ser humano) (es decir, o in vitro
o in vivo) para inhibir la síntesis de proteínas, inhibir el
crecimiento, inhibir la proliferación, inhibir la oncogénesis, o
potenciar la apoptosis en la célula o en uno o más tejidos del
mamífero.
La invención incluye además un procedimiento de
preparar un fragmento de didemnina. Este procedimiento comprende
acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
y un segundo reactivo que tiene la
estructura
proporcionando un fragmento de
didemnina que tiene la
estructura
En esta estructura, X es o bien -O- o bien
-(NH)-, APG es un grupo protector de amina; Y es un grupo protector
de hidroxilo (por ejemplo, un grupo triisopropilsililo) y R^{4}
puede ser o una cadena lateral de isoleucina o una cadena lateral de
valina. El primer fragmento de didemnina puede hidrolizarse
proporcionando un segundo fragmento de didemnina que tiene la
estructura
Puede añadirse un activador (ACT) al resto
carbonilo del segundo fragmento de didemnina proporcionando un
tercer fragmento de didemnina que tiene la estructura
El tercer fragmento de didemnina puede acoplarse
a un tercer reactivo que tiene la estructura
proporcionando un fragmento de
didemnina que tiene la
estructura
En esta estructura, R^{2} y R^{3} tienen las
identidades que se describen anteriormente para la fórmula I, APG es
un grupo protector de amina, SEM es un grupo
2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo y R^{10} es o una cadena
lateral de leucina o una cadena lateral de lisina.
La invención también se refiere a un
procedimiento de preparar un análogo de didemnina a partir del
cuarto fragmento de didemnina. Este procedimiento comprende eliminar
los restos SEM y CBZ del cuarto fragmento de didemnina y ciclar el
fragmento proporcionando un primer análogo de didemnina que tiene la
siguiente estructura.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El grupo APG (que, por ejemplo, puede ser un
resto carbobenciloxi o un resto
terc-butiloxicarbonilo) puede eliminarse del primer
análogo de didemnina proporcionando un segundo análogo de didemnina
que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este segundo análogo de didemnina puede
acoplarse a un cuarto reactivo que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Proporcionando un tercer análogo de didemnina
que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En estas estructuras, R^{14} puede ser uno
de
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-4-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
y
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
o puede ser uno de estos restos acoplado a un resto escindible
enzimáticamente que puede escindirse mediante una enzima tal como
una de una carboxipeptidasa, una \beta-lactamasa,
una \beta-galactosidasa, una penicilina
V-amidasa, una citosina desaminasa, una
nitrorreductasa, una fosfatasa alcalina, una
\beta-glucuronidasa y un anticuerpo catalítico. Si
Y es un grupo protector de hidroxilo, entonces puede eliminarse del
tercer análogo de didemnina (o antes o después de la adición de
R^{14}) proporcionando un cuarto análogo de didemnina que tiene la
estructura
La invención además se refiere a un
procedimiento de preparar análogos de tamandarina y didemnina que
contienen desoxo-prolina. Estos procedimientos
emplean procedimientos conocidos para preparar análogos de
tamandarina y didemnina y se modifican para incorporar un resto
desoxoprolina en lugar del resto prolina del análogo.
La invención de forma todavía adicional se
refiere a un procedimiento de preparar análogos de tamandarina o
didemnina que contienen deshidro-prolina. Estos
procedimientos emplean procedimientos conocidos para preparar
análogos de tamandarina o didemnina y se modifican para incorporar
un resto deshidro-prolina en lugar de un resto
prolina del análogo.
La Figura 1, que comprende las Figuras 1A y 1B,
representa la estructura de tamandarina A (es decir,
{(2S)Hiv^{2}}didemnina B). La Figura 1A es la estructura de
(-) tamandarina A (compuesto 101). La Figura 1B es la estructura de
un diastereoisómero (compuesto 102) de (-) tamandarina A. El centro
quiral en el que difieren estas dos moléculas se indica con una
flecha.
La Figura 2, que comprende las Figuras 2A y 2B,
representa la estructura de tamandarina M (es decir,
{(2S)Hiv^{2}}didemnina M). La Figura 2A es la estructura de
(-) didemnina M (compuesto 103). La Figura 2B es la estructura de un
diastereoisómero (compuesto 104) de (-) tamandarina M. El centro
quiral en el que difieren estas dos moléculas se indica con una
flecha.
La Figura 3, que comprende las Figuras 3A y 3B,
representa la estructura de didemnina B (es decir,
{(2S)Hiv^{2}}didemnina B). La Figura 3A es la estructura de
(-) tamandarina B (compuesto 105). La Figura 3B es la estructura de
un diastereoisómero (compuesto 106) de (-) tamandarina B. El centro
quiral en el que difieren estas dos moléculas se indica con una
flecha.
La Figura 4, que comprende las Figuras 4A, 4B,
4C y 4D, representa la estructura de diversos análogos de didemnina
de tipo tamandarina fluorescentes. La Figura 4A es la estructura del
compuesto 107. La Figura 4B es la estructura del compuesto 108. El
centro quiral en el que difieren los compuestos 107 y 108 se indica
con una flecha. La Figura 4C es la estructura del compuesto 109. La
Figura 4D es la estructura del compuesto 110. El centro quiral en el
que difieren los compuestos 109 y 110 se indica con una flecha.
La Figura 5, que comprende las Figuras 5A y 5B,
representa una clase de análogos de didemnina de tipo tamandarina
inmovilizables. La Figura 5A es la estructura de un análogo de
didemnina de la fórmula I de la presente memoria, en el que R^{10}
es una cadena lateral de lisina. La Figura 5B es la estructura del
análogo de didemnina de la Figura 5A unido a un soporte sólido
(SS).
La Figura 6, que comprende las Figuras 6A y 6B,
representa otra clase de análogos de didemnina de tipo tamandarina
inmovilizables. La Figura 6A es la estructura del análogo de
didemnina de la fórmula I de la presente memoria, en la que R^{1}
es -leucina. La Figura 6B es la estructura del análogo de didemnina
de la Figura 6A unido a un soporte sólido (SS).
La Figura 7 es la estructura del compuesto
115.
La Figura 8 es la estructura del compuesto
116.
La Figura 9 es la estructura del compuesto
117.
La Figura 10 es la estructura del compuesto
118.
La Figura 11 es la estructura del compuesto
119.
La Figura 12 es la estructura del compuesto
120.
La Figura 13 es la estructura del compuesto
121.
La Figura 14 es la estructura del compuesto
122.
La Figura 15 es la estructura del compuesto
123.
La Figura 16 es la estructura de compuesto
124.
La Figura 17 es la estructura del compuesto
125.
La Figura 18 es la estructura del compuesto
126.
La Figura 19 es la estructura de compuesto
127.
La Figura 20 es la estructura del compuesto
128.
La Figura 21 es la estructura del compuesto
129.
La Figura 22 es la estructura del compuesto
130.
La Figura 23 representa la escisión enzimática
del resto cefalosporina del análogo de didemnina 131 mediante
\beta-lactamasa proporcionando compuesto 101.
La Figura 24 representa la escisión enzimática
del resto glucósido del análogo de didemnina 132 mediante
\beta-glucuranidasa proporcionando el compuesto
101.
La Figura 25, que comprende las Figuras 25A y
25B, es un par de estructuras que ilustra la diferencia estructural
entre tamandarina A (101; Figura 25A) y didemnina B (201; Figura
25B). El núcleo macrolítico de 101 difiere del 201 en que 101
contiene un resto \alpha-idroxiisovalerilo (Hiv) y
201 contiene un resto
\alpha-(\alpha-hidroxiisovaleril)propionilo
(Hip) en la posición análoga, tal como indican los paréntesis y
líneas de puntos en cada una de las Figuras.
La Figura 26, que comprende las Figuras
26A-26E, representa un procedimiento de síntesis
para generar análogos de didemnina que se describen en la presente
memoria.
La Figura 27 es la estructura de (-) Tamandarina
A (es decir, {(2S)Hiv^{2}}didemnina B), que ilustra la
convención numérica que se usa en la presente memoria y en Sakai y
cols. (1996, J. Med. Chem. 39: 2819-2834) para los
análogos de didemnina.
La Figura 28, que comprende las Figuras 28A y
28B, representa la estructura de un análogo de didemnina de tipo
deshidrotamandarina (es decir,
{(2S)Hiv^{2}}deshidrodidemnina B). La Figura 28A es la
estructura de (-) deshidrotamandarina (compuesto 133). La Figura 28B
es la estructura de un diastereoisómero de (-) deshidrotamandarina
(compuesto 134). El centro quiral en el que difieren estas dos
moléculas se indica con una flecha. La posición en la que estos
análogos de didemnina de tipo deshidrotamandarina difieren de los
análogos de didemnina de tipo tamandarina se indica con un
asterisco.
La Figura 29 es la estructura de un análogo de
didemnina de tipo deshidrotamandarina fluorescente. "FL" es un
fluoróforo.
La Figura 30 es la estructura del compuesto
136.
La Figura 31 es la estructura del compuesto
137.
La Figura 32 representa un análogo de didemnina
de tipo deshidrotamandarina unido a un soporte sólido (SS).
La Figura 33 es la estructura del compuesto
139.
La Figura 34 es la estructura del compuesto
140.
La Figura 35, que comprende las Figuras 35A y
35B, representa la estructura de deshidrotamandarina B, también
denominada {(2S)Hiv^{2}, Norstal^{1}}didemnina B. La
Figura 35A es la estructura de (-) deshidrotamandarina B (compuesto
141). La Figura 35B es la estructura de un diastereoisómero de (-)
deshidrotamandarina B (compuesto 142). El centro quiral en el que
difieren estas dos moléculas se indica con una flecha.
La Figura 36 es la estructura del compuesto
143.
La Figura 37, que comprende las Figuras 37A y
37B, representa un procedimiento de síntesis para generar (-)
deshidrotamandarina (es decir,
{(2S)Hiv^{2}}deshidrodidemnina B, compuesto 133).
La Figura 38, que comprende las Figuras 38A, 38B
y 38C, representa un procedimiento de síntesis para generar análogos
de didemnina fluorescentes que se describen en la presente
memoria.
La Figura 39 es la estructura de un análogo
preferido de tamandarina con desoxo-prolina
denominado compuesto 201a.
La Figura 40 es la estructura de un análogo
preferido de didemnina con desoxo-prolina denominado
compuesto 202.
Cada una de la Figura 41, la Figura 42 y la
Figura 43 representa un procedimiento de preparar restos de cadenas
laterales que contienen desoxo-prolina para análogos
de tamandarina o didemnina.
La Figura 44 representa un procedimiento de
preparar restos de cadenas laterales que contienen
deshidro-prolina para análogos de tamandarina o
didemnina.
La Figura 45 es la estructura de un análogo
preferido de tamandarina con deshidro-prolina
denominado compuesto 203.
La Figura 46 es la estructura de un análogo
preferido de didemnina con deshidro-prolina
denominado compuesto 204.
Cada una de la Figura 47, la Figura 48, la
Figura 49 y la Figura 50 representa un procedimiento de preparar
análogos de didemnina que tienen restos de cadenas laterales
fotorreactivos.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se refiere a análogos de
tamandarina y didemnina, que incluyen análogos que tienen un resto
desoxoprolina o un resto deshidro-prolina en su
estructura. La invención incluye composiciones que comprenden tales
análogos y procedimientos para preparar y usar estos análogos. Estos
análogos son de utilidad, entre otras cosas, para inhibir la
síntesis de proteínas, el crecimiento celular, la proliferación
celular y la oncogénesis. Los análogos de la invención también
pueden presentar actividades antivirales, antitumorales, inductoras
de la apoptosis e inmunosupresoras en animales, que incluyen los
seres humanos.
\newpage
La invención incluye composiciones que
comprenden un análogo de tamandarina que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1}, R^{2},
R^{3}, R^{4}, R^{10}, X e Y tienen las identidades que se
describen en la presente memoria. En las figuras se muestran
ejemplos de análogos de acuerdo con esta
fórmula.
La invención también incluye composiciones que
comprenden un análogo de didemnina que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1}, R^{2},
R^{3}, R^{4}, R^{10}, X e Y tienen las identidades que se
describen en la presente
memoria.
Tal como se usa en la presente memoria, cada uno
de los siguientes términos tiene el significado que se le asocia en
esta sección.
Los artículos "un" y "una" se usan en
la presente memoria para referirse a uno o más de uno (es decir, a
al menos uno) del objeto gramatical del artículo. Por ejemplo, "un
elemento" quiere decir un elemento o más de un elemento.
Tal como se usa en la presente memoria, los
restos aminoacídicos se representan por su nombre completo, por el
código de tres letras que les corresponde o por el código de una
letra que les corresponde, tal como se indica a continuación:
| Nombre completo | Código de tres letras | Código de una letra |
| Ácido aspártico | Asp | D |
| Ácido glutámico | Glu | E |
| Lisina | Lys | K |
| Arginina | Arg | R |
(Continuación)
| Nombre completo | Código de tres letras | Código de una letra |
| Histidina | His | H |
| Tirosina | Tyr | Y |
| Cisteína | Cys | C |
| Asparragina | Asn | N |
| Glutamina | Gln | Q |
| Serina | Ser | S |
| Treonina | Thr | T |
| Glicina | Gly | G |
| Alanina | Ala | A |
| Valina | Val | V |
| Leucina | Leu | L |
| Isoleucina | Ile | I |
| Metionina | Met | M |
| Prolina | Pro | P |
| Fenilalanina | Phe | F |
| Triptófano | Trp | W |
Tal como se usa en la presente memoria, la
expresión "cadena lateral aminoacídica" se refiere a un resto
que comprende todos los átomos de un aminoácido excluyendo el átomo
de carbono \alpha, un átomo de hidrógeno unido al carbono
\alpha, los átomos del resto carboxilo \alpha y del resto amina
\alpha. A modo de ejemplo, una "cadena lateral de alanina" se
refiere a un grupo metilo y una "cadena lateral de valina" se
refiere a un grupo 2-propilo.
"Inhibición" de un proceso en una célula
(por ejemplo, inhibición de la síntesis de proteínas, inhibición del
crecimiento celular, inhibición del desarrollo del ciclo celular,
inhibición de la proliferación celular, o inhibición de la
oncogénesis) quiere decir reducción (por ejemplo, en al menos 10%,
25%, 50%, 75%, 90%, 95%, o incluso 100%) de la velocidad a la que el
proceso transcurre, reducción (por ejemplo, en al menos 10%, 25%,
50%, 75%, 90%, 95% o incluso 100%) de la velocidad a la que se
inicia el proceso o ambos.
"Potenciación" de un proceso en una célula
(por ejemplo, potenciación de la apoptosis) quiere decir aumentar
(por ejemplo, en al menos 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95% o incluso
100%) la velocidad a la que se desarrolla el proceso, aumentando
(por ejemplo, en al menos 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95% o incluso
100%) la velocidad a la que se inicia el proceso o ambas.
Tal como se usa en la presente memoria, la
expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" quiere decir
una composición química con la que puede combinarse un análogo o
fragmento de didemnina, tal como se describe en la presente memoria
y que, después de la combinación, puede administrarse a un sujeto
(por ejemplo, un ser humano u otro animal).
Tal como se usa en la presente memoria, la
expresión éster o sal "fisiológicamente aceptable" quiere decir
una estérica o salina de un análogo o fragmento de didemnina, tal
como se describe en la presente memoria, que es compatible con otros
ingredientes de una composición farmacéutica y que no es perjudicial
para un sujeto al que se va a administrar la composición.
Tal como se usa en la presente memoria,
"administración parenteral" de una composición farmacéutica
incluye cualquier vía de administración caracterizada porque se
rompen físicamente los tejidos de un sujeto y se administra la
composición farmacéutica a través de la rotura del tejido. La
administración parenteral así incluye, pero sin limitación, la
administración de una composición farmacéutica mediante la inyección
de la composición, mediante la aplicación de la composición a través
de una incisión quirúrgica, mediante la aplicación de la composición
a través de una herida no quirúrgica que penetra los tejidos y
similares. En particular, administración parenteral puede incluir,
pero sin limitación, inyección subcutánea, intraperitoneal,
intramuscular, intraesternal y técnicas de infusión por
diálisis
renal.
renal.
Tal como se usa en la presente memoria, la
expresión "actividad antiviral" quiere decir prevenir la
replicación de un virus en la célula, prevenir la infección de la
célula por un virus o revertir un efecto fisiológico de la infección
de la célula por un virus. Un agente o composición antivirales,
cuando se administran a una célula, muestran actividades
antivirales. Los agentes antivirales son notorios y son descritos en
la bibliografía. A modo de ejemplo, AZT (zidovudina, Retrovir® Glaxo
Wellcome Inc., Research Triangle Park, NC) es un agente antiviral
que se cree que previene la replicación de HIV en células
humanas.
\newpage
Tal como se usa en la presente memoria, un resto
"desoxo-prolina" es un resto químico que tiene
la siguiente estructura.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Tal como se usa en la presente memoria, un resto
"deshidro-prolina" es un resto químico que
tiene la siguiente estructura.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se refiere a análogos de
tamandarina y didemnina, que incluyen los que tienen un resto
desoxo-prolina o deshidro-prolina en
su estructura (y, por supuesto, los que no tienen un resto
desoxo-prolina o deshidro-prolina en
su estructura). Estos análogos muestran propiedades farmacológicas
potentes cuando se administran a seres humanos y otros mamíferos. A
modo de ejemplo, estos compuestos pueden inhibir la síntesis de
proteínas y el crecimiento y la proliferación celulares. Estos
compuestos también pueden potenciar la apoptosis en las células.
Estas propiedades hacen que los compuestos sean de utilidad para
tratar una variedad de trastornos que se caracterizan por uno o más
de síntesis de proteínas aberrante, crecimiento celular aberrante,
proliferación celular aberrante y apoptosis aberrante. Ejemplos de
tales trastornos incluyen oncogénesis, crecimiento tumoral,
metástasis tumoral, infección de una célula por un virus y
replicación de un virus en una célula.
Entre las composiciones de la invención están
aquellas que comprenden un análogo de tamandarina que tiene la
estructura de la fórmula I o un análogo de didemnina que tiene la
estructura de la fórmula XXI.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El sustituyente R^{1} de las fórmulas I y XXI
puede tener un resto desoxo-prolina en su estructura
y, por ejemplo puede ser un átomo de hidrógeno o un grupo protector
de amina adecuado para la protección de aminoácidos. Tales grupos
protectores son conocidos en la técnica y se hace referencia a ellos
en esta descripción. Ejemplos de grupos protectores adecuados pueden
encontrarse en referencias tales como Green y Wutz (1999,
Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, Nueva York) y
Bodansky (1993, Principles of Peptide Synthesis, Springer,
Berlín). De forma alternativa, el sustituyente R^{1} puede ser un
resto aminoacídico (por ejemplo, un resto leucina) o un polipéptido
que comprende uno o más restos aminoacídicos. Ejemplos de tales
restos y polipéptidos incluyen
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-4-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)leucina-piroglutamato.
Ejemplos adicionales de sustituyentes R^{1}
alternativos incluyen péptidos que comprenden un fluoróforo (por
ejemplo, rodamina o cumarina), un resto aminoacídico, un
polipéptido, un grupo escindible enzimáticamente u otro resto
químico unido (por ejemplo, unido de forma covalente) a un soporte
(por ejemplo, una placa de cristal o sílice, una perla de agarosa u
otro polímero, etc.). El fluoróforo o grupo escindible
enzimáticamente puede estar enlazado directamente al análogo, o
puede estar unido a él con un enlazador que tiene de 1 a
aproximadamente 13 o más átomos de carbono (que opcionalmente
incluyen uno o más restos amina o amida secundaria) en él. Cuando
R^{1} comprende un resto
N-metil-leucina, el átomo de carbono
\alpha de ese resto puede tener una estereoquímica (R) o (S).
Otros restos aminoacídicos en R^{1} pueden tener estereoquímica
(R) o (S), pero preferiblemente tienen estereoquímica (S) en su
átomo de carbono \alpha.
Cuando R^{1} comprende un resto lactato, el
resto lactato preferiblemente es un resto (S)lactato. En una
realización preferida, cada resto aminoacídico de R^{1} distinto
del resto leucina (o
N-metil-leucina) (si está presente)
unido directamente al átomo de nitrógeno del anillo de la fórmula I
o XXI tiene estereoquímica (S).
R^{3} puede ser cualquiera de -CH3 y -H. De
forma alternativa, R^{3} junto con R^{2}, puede ser un
sustituyente único.
El sustituyente R^{2} puede ser una cadena
lateral aminoacídica tal como una cadena lateral de isoleucina (es
decir, un resto 2-butilo, que preferiblemente tiene
estereoquímica (R)), una cadena lateral de valina (es decir, un
resto 2-propilo), una cadena lateral de alanina (es
decir, un resto metilo), una cadena lateral de norleucina (es decir,
un resto 1-butilo), una cadena lateral de norvalina
(es decir, un resto 1-propilo), una cadena lateral
de leucina (es decir, un resto isobutilo, que preferiblemente tiene
estereoquímica (S)), una cadena lateral de fenilalanina (es decir,
un resto fenilmetilo), una cadena lateral de histidina (es decir,
un resto 4-metilimidazol), una cadena lateral de
triptófano (es decir, un resto 3-metilindol), una
cadena lateral de tirosina (es decir, un resto
4-hidroxifenilmetilo), una cadena lateral de
arginina (es decir, un resto 4-guanidinilbutilo) y
una cadena lateral de lisina (es decir, un resto
4-aminobutilo).
4-aminobutilo).
Un sustituyente R^{2} puede comprender un
fluoróforo (por ejemplo, un fluoróforo unido a una de las cadenas
laterales aminoacídicas que se describen anteriormente). Además, el
sustituyente R^{2} puede tener la estructura de la fórmula
III
III
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización alternativa, R^{1} y
R^{3} juntos son un sustituyente que tiene la fórmula IV
\vskip1.000000\baselineskip
En las fórmulas III y IV, cada uno de R^{5},
R^{6}, R^{7}, R^{8} y R^{9}, de forma independiente, puede
ser un sustituyente que se selecciona del grupo constituido por H,
-OH, -OCH_{3}, -CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl,
-CH_{3} y -CH_{2}-CH_{3}.
R^{4} puede ser una cadena lateral de
isoleucina o una cadena lateral de valina.
X puede ser -O- o -(NH)-.
Y puede ser -H o un grupo protector de
hidroxilo. Ejemplos de grupos protectores de hidroxilo que pueden
estar presentes en Y incluyen un resto sililo sustituido con
alquilo, un resto sililo sustituido con arilo o un silano sustituido
tanto con restos alquilo como arilo. Un ejemplo de un grupo
protector de hidroxilo de utilidad es un resto triisopropilsililo.
Otros grupos protectores de hidroxilo que pueden usarse en Y en la
fórmula I se describen en referencias tales como Green y Wutz (1999,
Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, Nueva
York).
R^{10} puede ser una cadena lateral
aminoacídica tal como una cadena lateral de leucina o una cadena
lateral de lisina. De forma alternativa, R^{10} puede ser un
aminoácido u otro resto químico que está unido (por ejemplo,
enlazado covalentemente) a un soporte (por ejemplo, un soporte
sólido). Un ejemplo de un soporte con un análogo que tiene la
estructura de la fórmula I unido a él se representa en la Figura
5B.
Otro grupo de composiciones incluidas en la
invención es el que comprende un análogo de tamandarina que tiene
una estructura que se selecciona del grupo constituido por las
fórmulas (a)-(d), que se describen anteriormente.
Cada uno de R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{10},
X e Y tienen el mismo significado en las fórmulas (a)-(d) que el que
tienen en las fórmulas I y XXI.
En las fórmulas (a)-(d), R^{13} puede ser
hidrógeno o un resto químico que puede ser enzimáticamente
escindible (es decir un resto que puede escindirse mediante enzimas)
o fotorreactivo. Tal como se usa en la presente memoria, un resto
que puede escindirse enzimáticamente puede incluir cualquier resto
químico que puede escindirse (es decir separarse químicamente) en
presencia de una enzima específica. Ejemplos de enzimas capaces de
separar químicamente un resto que puede escindirse mediante enzimas
incluyen carboxipeptidasas, \beta-lactamasa,
\beta-galactosidasa, penicilina
V-amidasa, citosina deaminasa, nitrorreductasa,
fosfatasa alcalina, \beta-glucuronidasa y
anticuerpos catalíticos. Ejemplos restos de que pueden escindirse
enzimáticamente que pueden incorporarse a un compuesto que se
describe en la presente memoria incluyen cefalosporinas,
\beta-glucósidos, fosfato, pirofosfato,
\beta-galactósidas, nitrobenzamidina, citosina,
carbamatos, péptidos y aminoácidos. De forma alternativa, R^{13}
puede ser un resto que puede escindirse enzimáticamente tal como un
di-péptido enlazado a
glutamina-piroglutamato, o un resto que tiene la
estructura de la fórmula V o de la fórmula VI
\vskip1.000000\baselineskip
A modo de ilustración, en el compuesto 131, que
se representa en la Figura 23, R^{13} es un resto que puede
escindirse enzimáticamente que tiene la estructura de la fórmula V
(es decir, un resto cefalosporina). El resto cefalosporina del
compuesto 131 puede escindirse por contacto con la enzima,
\beta-lactamasa, generando el compuesto 101. Un
sustituyente R^{13} que tiene la estructura de la fórmula VI, por
ejemplo puede estar en forma de una sal sódica o potásica.
Tras la escisión de un resto que puede
escindirse enzimáticamente mediante una enzima, el análogo de
didemnina resultante puede mostrar una o más de las actividades
fisiológicas que se describen en la presente memoria. Un análogo de
tamandarina o didemnina que tiene la estructura de una de las
fórmulas (a)-(d), en el que R^{13} es un resto que puede
escindirse enzimáticamente, opcionalmente, puede mostrar estas
actividades antes de la escisión del resto que puede escindirse
enzimáticamente. Sin embargo, en una realización preferida, el
análogo muestra actividad terapéutica sólo tras la escisión del
mismo del resto que puede escindirse mediante enzimas.
Tal como se describe anteriormente, un análogo
de tamandarina o didemnina que tiene la estructura de una de las
fórmulas I, XXII y (a)-(d) puede unirse a un soporte. La identidad
del soporte no es crítica. El soporte puede ser sustancialmente de
cualquier material con el que pueda unirse tal análogo (por ejemplo,
por unión covalente mediante uno de los restos R^{10}, R^{2},
R^{3}, o R^{1}). Ejemplos de materiales de soporte incluyen
silicatos enlazados, agarosa reticulada, poliacrilamida, dextrano y
alildextrano. Tales materiales de soporte pueden modificarse
químicamente usando restos químicos reactivos para facilitar la
unión covalente del análogo al soporte. Las modificaciones químicas
de este tipo son notorias en la técnica y, por ejemplo, pueden
incluir la modificación de un soporte con grupos bromuro de
cianógeno, grupos epóxido, grupos mesilo y grupos carboxihexilo. En
la técnica hay disponibles protocolos para la preparación de un
soporte y la unión subsiguiente de un compuesto al soporte y pueden
ser modificados por una persona de experiencia en la técnica para
usarlos con un análogo de didemnina que se describe en la presente
memoria.
Ejemplos de análogos de didemnina que tienen la
estructura de la fórmula I o de la fórmula XXI, incluyen, el
compuesto 21 y los compuestos 101-143, algunos de
los cuales se representan en una o más de las Figuras
1-39.
En el compuesto 21, R^{1} es
-(terc-butiloxicarbonilo), R^{2} es una cadena
lateral de O-metiltirosina (es decir, R^{5},
R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7} es
-OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral de
isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-, e Y
es -(triisopropilsililo).
Los análogos de tamandarina preferidos se basan
en la estructura de tamandarina A. En la tamandarina A
({(2S)Hiv^{2}}didemnina B; compuesto 101), R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} es una cadena lateral de
O-metil-tirosina (es decir, R^{5},
R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7} es -OCH_{3}),
R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral de isoleucina,
R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-, e Y es -H.
En tamandarina M
({(2S)Hiv^{2}}didemnina M; compuesto 103), R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
R^{2} es una cadena lateral
O-metil-tirosina (es decir, R^{5},
R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7} es
-OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral de
isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O- e Y
es -H.
Los análogos de didemnina preferidos se basan en
la estructura de didemnina B. En tamandarina B
({(2S)Hiv^{2}, Norsta^{1}}didemnina B; compuesto 105),
R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y
R^{7} es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena
lateral de valina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es
-O-, e Y es -H.
En el compuesto 107, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-glicina-(7-dimetilcoumarin-4-acetato),
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 109, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato-rodamina,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 111, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 113, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina),
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 115, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} es una cadena lateral de lisina, R^{3} es -CH_{3},
R^{4} es una cadena lateral de isoleucina, R^{10} es una cadena
lateral de leucina, X es -O-, e Y es -H.
En el compuesto 123, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} y R^{3} juntos son un sustituyente tetrahidroisoquinolina
que tiene la estructura de la fórmula IV, R^{5}, R^{6} y
R^{8} son cada uno -H y R^{7} es -OCH_{3}, R^{3} es
-CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral de valina, R^{10} es una
cadena lateral de leucina, X es -O-, e Y es -H.
En el compuesto 124, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} es una cadena lateral de
O-metil-tirosina (es decir, R^{5},
R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{1} es
-OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral de
isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -(NH)-,
e Y es -H.
En el compuesto 128, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 129, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-(N-metil-S-alanina)leucina-piroglutamato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 131, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-prolina-lactato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, R^{13}
es un resto cefalosporina que puede escindirse mediante la enzima
\beta-lactamasa, X es -O-, e Y es -H.
En el compuesto 132, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-(S)-prolina-(S)-lactato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, R^{13}
es un resto \beta-glucósido que puede escindirse
mediante la enzima \beta-glucuronidasa, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 134, R^{1} es
-(N-metil-S-leucina)-(S)prolina-piruvato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
En el compuesto 137, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-(S)prolina-piruvato,
R^{2} y R^{3} juntos son un sustituyente tetrahidroisoquinolina
que tiene la estructura de la fórmula IV, R^{5}, R^{6} y
R^{8} son cada uno -H, R^{4} es una cadena lateral de valina,
R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-, e Y es -H.
En el compuesto 138, R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-(S)prolina-prolina-piruvato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de lisina unida de
forma covalente a un soporte, X es -O-, e Y es -H.
En el compuesto 142, R^{1} es
-(N-metil-S-leucina)-(S)prolina-piruvato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de valina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-, e Y
es -H.
En el compuesto 143, R^{1} es
(N-metil-R-leucina)-(S)prolina-piruvato,
R^{2} es una cadena lateral O-metiltirosina (es
decir, R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} son cada uno -H y R^{7}
es -OCH_{3}), R^{3} es -CH_{3}, R^{4} es una cadena lateral
de isoleucina, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O-,
e Y es -H.
La similitud estructural de didemnina B y
tamandarina A (es decir, {(2S)Hiv^{2}}didemnina B;
compuesto 101) se ilustra en la Figura 25. La diferencia
estructural primaria, indicada mediante paréntesis y líneas
punteadas, es la porción macrocíclica de estos compuestos.
Tamandarina A, que se muestra en la Figura 25A, contiene un resto
\alpha-hidroxiisovalerilo (Hiv) y la didemnina B,
que se muestra en la Figura 25B, contiene un resto
\alpha-(\alpha-hidroxiisovaleril)-propionilo
(Hip). La estructura macrocíclica más simple de tamandarina A y de
cualquier compuesto que tiene la estructura de la fórmula I o de la
fórmula XXI, puede sintetizarse más fácilmente que la estructura
macrocíclica de didemnina B. Los compuestos que tienen la estructura
o bien de la fórmula I o de la fórmula XXI pueden prepararse más
fácilmente (y generalmente de forma menos cara) que los compuestos
que son idénticos a excepción de la presencia de un resto Hip en
lugar del resto Hiv.
Otro grupo de compuestos que puede presentar las
actividades fisiológicas que se describen en la presente memoria y
que se incluyen en la invención son compuestos que corresponden a
fragmentos de análogos de didemnina que tienen la estructura de la
fórmula I o de la fórmula XXI. Los fragmentos que muestran esta
actividad incluyen los que tienen la estructura de la fórmula
VII
\vskip1.000000\baselineskip
En la fórmula VII, X y y R^{4} tienen las
identidades que se describen para las fórmulas I y XXI y APG es un
grupo protector de amina. Ejemplos de grupos protectores de amina
que pueden estar presentes en los fragmentos activos incluyen restos
carbobenciloxi (CBZ) y terc-butiloxicarbonilo (BOC).
Otros grupos protectores de amina de utilidad se describen en
referencias tales como Green y Wutz (1999, Protecting Groups in
Organic Synthesis, Wiley, Nueva York) y Bodansky (1993,
Principles of Peptide Synthesis, Springer, Berlín).
R^{11} en la fórmula VII puede ser cualquiera
de -OH, NH_{2}-, -(O-alilo) y
-(O-pentafluorofenilo). De forma alternativa,
R^{11} can be un sustituyente que tiene la estructura que se
muestra en la fórmula VIII
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la fórmula VIII, R^{2}, R^{3} y R^{10}
tienen las identidades que se describen para las fórmulas I y XXI y
APG es un grupo protector de amina tal como se describe para la
fórmula VII (aunque no tiene que ser el mismo APG que en la fórmula
VII). R^{12} puede ser o -H o un grupo protector de hidroxilo, tal
como se describe en la presente memoria. Compuestos que tienen la
estructura de la fórmula VII que pueden prepararse y usarse tal como
se describe en la presente memoria, incluyen los compuestos
denominados 6, 17, 19 y 20 en la Figura 26.
Los análogos de didemnina y tamandarina que se
describen en la presente memoria pueden usarse para afectar a una
variedad de procesos fisiológicos. Cada uno de estos tipos de
compuestos puede usarse para inhibir la síntesis de proteínas.
Además, los compuestos pueden usarse para inhibir la progresión de
una célula por el ciclo celular. Aunque sin comprometerse con
ninguna teoría particular de funcionamiento, se cree que la
actividad de inhibición del ciclo celular de los compuestos puede
atribuirse a la inhibición de la síntesis de proteínas, a la
inhibición de otras actividades celulares asociadas a la replicación
de ADN o a la división celular, o a alguna combinación de estas
actividades. Estos análogos de didemnina y tamandarina también
inducen la apoptosis de las células. Las actividades fisiológicas
que pueden atribuirse a estos análogos de didemnina y tamandarina
hacen que estos compuestos sean de utilidad para aliviar una
variedad de trastornos en los que uno o más de crecimiento,
proliferación y supervivencia celulares son aberrantes. Ejemplos de
tales trastornos incluyen cánceres en diversas etapas (por ejemplo,
oncogénesis, crecimiento tumoral y metástasis) e infecciones víricas
en diversas etapas (por ejemplo, infección de células por partículas
víricas, producción de partículas víricas en una célula y
supervivencia de células infectadas por virus).
Aunque todavía sin comprometerse con ninguna
teoría particular de funcionamiento, se cree que las actividades
fisiológicas que se pueden atribuir a los análogos de tamandarina y
didemnina que se describen en la presente memoria son resultado de
una o más interacciones entre tales análogos y al menos un
componente celular. Esta(s)
interacción(es) provocan, de forma directa o indirecta, la respuesta celular observada. Por consiguiente, la invención comprende el uso de estos compuestos para identificar uno o más componentes celulares que contribuyen a un fenotipo de trastorno en un individuo. La identificación de tal componente celular puede indicar una vía de tratamiento eficaz para aliviar el trastorno. Ejemplos de compuestos de utilidad para este fin incluyen los análogos que comprenden un sustituyente fluorescente (por ejemplo, en R^{1} o R^{2}), una resto químico fotorreactivo, tal como un resto que tiene la estructura
interacción(es) provocan, de forma directa o indirecta, la respuesta celular observada. Por consiguiente, la invención comprende el uso de estos compuestos para identificar uno o más componentes celulares que contribuyen a un fenotipo de trastorno en un individuo. La identificación de tal componente celular puede indicar una vía de tratamiento eficaz para aliviar el trastorno. Ejemplos de compuestos de utilidad para este fin incluyen los análogos que comprenden un sustituyente fluorescente (por ejemplo, en R^{1} o R^{2}), una resto químico fotorreactivo, tal como un resto que tiene la estructura
o un resto unido a un
soporte.
Los análogos de tamandarina y didemnina
fluorescentes y otros marcados de forma que puedan detectarse que se
describen en la presente memoria (así como sus fragmentos
fisiológicamente activos) pueden usarse para identificar células en
las que esos análogos y fragmentos pueden ejercer sus efectos
fisiológicos. Por ejemplo, pueden identificarse o aislarse las
células que absorben o se unen a un análogo fluorescente. La
identificación o el aislamiento de tales células pueden usarse para
diagnosticar un trastorno asociado a la presencia de tales células.
La identificación o aislamiento de estas células también puede
indicar cuales de los análogos de didemnina y tamandarina son
eficaces para tratar un trastorno que implique a las células.
Los análogos de tamandarina y didemnina que se
describen en la presente memoria pueden usarse para fines
antiproliferativos, antitumorales, antivirales, e inmunosupresores.
Por ejemplo, estos compuestos pueden usarse en una preparación o
medicamento farmacéuticos a administrar a un paciente que padece un
trastorno en el que uno o más de síntesis de proteínas, crecimiento,
proliferación y supervivencia celulares son aberrantes. Tales
medicamentos pueden usarse para tratar trastornos tales como
cánceres (por ejemplo, cáncer de mama), infecciones víricas,
fúngicas, parasíticas y bacterianas, trastornos autoinmunitarios,
alergias, otros trastornos inmunitarios y ateroesclerosis.
Ejemplos de actividades antitumorales que pueden
exhibir los compuestos que se describen en la presente memoria
incluyen inhibición de la oncogénesis, inhibición de la metástasis,
inhibición del crecimiento celular tumoral, inhibición de la
proliferación celular tumoral y potenciación de la apoptosis de las
células tumorales. Deshidrodidemnina muestra actividad contra líneas
celulares que se derivan de diversos tipos tumorales sólidos
humanos, que incluyen cáncer de pulmón amicrocítico y líneas
celulares tumorales de colon y muestra actividad antitumoral
selectiva contra el cáncer amicrocítico, melanomas, cáncer de ovario
y cáncer colorrectal (Depenbrock y cols., 1998. Brit. J. of Cancer
78(6):739-744). Los análogos de tamandarina y
didemnina que se describen en la presente memoria muestran
actividades antitumorales en células de una o más de estas líneas,
así como en células del tipo tumoral correspondiente in vivo.
La determinación de la eficacia de cualquier análogo particular
contra cualquier tipo tumoral particular puede realizarse usando
procedimientos estándar que impliquen, por ejemplo, uno o más de las
60 líneas celulares tumorales estándar que se mantienen en el
programa de selección de fármacos del U.S. National Cancer
Institute.
Ejemplos de actividades antivirales que pueden
mostrar los análogos de tamandarina y didemnina que se describen en
la presente memoria incluyen la inhibición de la unión de un virus
con una diana celular, inhibición de la infección de una célula por
un virus, inhibición de la síntesis celular de componentes víricos,
inhibición del ensamblaje intracelular de partículas víricas,
inhibición de la liberación de partículas víricas a partir de una
célula infectada, inhibición del crecimiento de una célula infectada
por un virus, inhibición de la proliferación de una célula infectada
por un virus, e inducción de la muerte (es decir, apoptosis) de una
célula infectada por un virus. La actividad antiviral de los
compuestos que se describen en la presente memoria puede usarse, por
ejemplo, para tratar o prevenir infecciones víricas de mamíferos y
síntomas asociados. A modo de ilustración, el análogo de tamandarina
o didemnina puede usarse para tratar o prevenir infecciones por
virus tales como virus de la fiebre del valle del Rift, virus del
dengue o cualquiera de los virus de la encefalitis.
Ejemplos de actividades inmunosupresoras que
pueden mostrar los análogos de didemnina y tamandarina que se
describen en la presente memoria incluyen la inhibición de la
respuesta inmunitaria celular contra un inmunógeno (por ejemplo, un
agente infeccioso o una célula o tejido trasplantados) y la
inhibición de una respuesta inmunitaria humoral a un inmunógeno.
Ejemplos de trastornos en los que puede ser deseable la
inmunosupresion incluyen trastornos autoinmunitarios, trastornos de
rechazo de trasplantes (por ejemplo, rechazo de un tejido sólido o
de médula ósea), desarrollo de una respuesta inmunitaria contra un
dispositivo implantado (por ejemplo un stent o una válvula
cardiaca), hipersensibilidad inmunitaria y anafilaxia.
Los análogos de tamandarina y didemnina que se
describen en la presente memoria pueden administrarse in
vitro a una célula o tejido (por ejemplo, una célula o tejido
cultivado, o una célula o tejido extraídos de un animal antes de la
introducción en el mismo animal o en uno diferente). De forma
alternativa, los análogos pueden administrarse a la célula o tejido
in vivo administrando el análogo o una composición
farmacéutica que comprende el análogo a un animal (por ejemplo, un
mamífero tal como un ser humano) que comprende la célula o
tejido.
En una realización de los procedimientos de
tratamiento que se describen en la presente memoria, un análogo de
tamandarina o didemnina que se describe en la presente memoria y que
tiene un grupo que puede escindirse mediante enzimas unido al mismo
(por ejemplo, un compuesto que tiene la estructura de la fórmula
XXI) se administra a un animal. Tras la escisión del grupo que puede
escindirse mediante enzimas, el compuesto se transforma de una forma
inactiva (o menos activa) en una forma activa (o más activa), tal
como se muestra en las Figuras 23 y 24. Así, un análogo de
tamandarina o didemnina puede activarse selectivamente en un lugar
del cuerpo en el que se produce la actividad enzimática.
La enzima que se usa para escindir el análogo de
tamandarina o didemnina que tiene unido un resto que puede
escindirse enzimáticamente puede ser una enzima que se produce de
forma natural en una localización del cuerpo de un animal. De forma
alternativa, la enzima puede proporcionarse al animal, por ejemplo
en forma de una composición que comprende la enzima o un ácido
nucleico que codifica la enzima. Como ejemplo adicional, la enzima
puede acoplarse (por ejemplo, de forma covalente, usando un agente
de entrecruzamiento o mediante la expresión de una proteína de
fusión de enzima y anticuerpo) con un anticuerpo que se une
específicamente a un tejido (por ejemplo, células cancerosas tales
como células leucémicas o células de tumor sólido) de una
localización del cuerpo del animal y el complejo de anticuerpo y
enzima puede administrarse a un animal. La administración de un
análogo de tamandarina o didemnina que tiene un grupo unido que
puede escindirse enzimáticamente al mismo animal provoca la
activación preferente del compuesto en el tejido o localización del
cuerpo. El efecto fisiológico del compuesto por lo tanto puede
localizarse en el tejido o localización del cuerpo y así puede
reducirse o minimizarse cualquier efecto secundario que pueda
atribuirse al compuesto activado.
Para identificar células que comprenden, sobre
sus superficies o en cualquier otro lugar proteínas receptoras,
glucoproteínas y similares que tienen capacidad de interactuar o
unirse al análogo puede usarse un análogo de tamandarina o didemnina
unido a un soporte.
Como ejemplo, puede usarse un análogo de
tamandarina o didemnina que tiene la estructura de la fórmula I o
XXI y unirlo a un soporte en virtud de su interacción con un
receptor celular particular, para identificar o aislar físicamente
las células de un tipo particular (por ejemplo, células tumorales)
que se caracterizan por la presencia de un receptor particular.
La presente invención incluye procedimientos
para preparar los análogos y fragmentos de didemnina que se
describen en la presente memoria. Se han descrito procedimientos
para preparar análogos de tamandarina y didemnina (por ejemplo,
Harris y cols., 1987, Tetrahedron lett.
28:2831-2840; Harris y cols., 1988, Tetrahedron
44:3489-3500; Ewing y cols., 1986, Tetrahedron
42:5863-5868; Ewing. W.R.. 1988, Ph.D. Dissertation,
University of Pennsylvania, Philadelphia PA: Ewing y cols. 1989,
Tetrahedron Lett. 30:3757-3760; Li y cols., 1990, J.
Am. Chem. Soc. 112:7659-7672; Mayer y cols. 1994, J.
Org. Chem. 59:5192-5205; Mayer y cols. 1994.
Tetrahedron:Asymmetry 5:519-522; Xiao y cols.,
1997, Tetrahedron: Asymmetry 9:47-53; Pfizenmayer y
cols., 1998, 8:3653-3656; solicitud de patente de
Estados Unidos con número de serie 09/545.848, presentada el 7 de
abril de 2000). El contenido de cada una de estas referencias y
solicitudes de patente se incorpora a la presente memoria por
referencia. El procedimiento preciso que se usa para preparar un
macrociclo o análogo de tamandarina o didemnina no es crítico.
Preferiblemente, el procedimiento que se usa
produce la síntesis estereoselectiva de un compuesto que se describe
en la presente memoria. Por ejemplo, la síntesis de (-) tamandarina
A ({(2S)Hiv^{2}}didemnina B; compuesto 101) se ejemplifica
en la presente memoria en el Ejemplo 1.
Refiriéndose a procedimientos para preparar los
análogos y fragmentos que se describen en la presente memoria, los
sustituyentes R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7},
R^{8}, R^{9}, R^{10}, X, e Y, tienen los mismos significados
que se usan anteriormente.
Tal como se usa en la presente descripción, una
reacción de protección puede incluir cualquier reacción mediante la
cual uno o más restos químicos se unen de forma covalente (pero
reversible) a uno de un átomo de nitrógeno, un átomo de oxígeno y un
átomo de azufre de una molécula. Tal unión evita que el átomo o
átomos participen en reacciones químicas no deseadas, es decir, que
se unan de forma covalente a otros restos químicos y que donen o
acepten o protones o electrones de otros restos químicos. Un resto
químico unido de este modo se denomina "un grupo protector". A
modo de ejemplo, el átomo de nitrógeno de un compuesto que tiene la
estructura de la fórmula IX, tal como D-alo-isoleucina, puede
protegerse usando un reactivo tal como
carbobenciloxi-succinimida
(CBZ-succinimida). El uso de este reactivo en un
protocolo estándar proporciona una D-alo-isoleucina, es
decir,
N^{\alpha}-CBZ-D-alo-isoleucina,
que tiene la estructura del compuesto 8 de la Figura 26A. En el
compuesto 8, el resto CBZ actúa como grupo protector de amina y el
átomo de nitrógeno al que está unido no puede sufrir reacciones
químicas adicionales fácilmente. Además, a modo de ejemplo, cuando X
es -(NH)-, puede usarse un grupo amina protegido (por ejemplo,
-N(CBZ)-) en las reacciones que se describen en la presente
memoria. Como ejemplo alternativo, el resto hidroxilo del compuesto
11 de la Figura 26A, puede protegerse usando un reactivo tal como
triisopropilsililtriflato (TIPSOTf) proporcionando el compuesto 12
de la Figura 26A. En este compuesto, Y es un resto
triisopropilsililo (TIPS) y actúa como grupo protector de hidroxilo,
evitando reacciones químicas con el átomo de oxígeno al que está
unido este resto.
Protocolos para realizar las reacciones de
protección e información completa sobre restos químicos que pueden
usarse como grupos protectores se encuentran en referencias tales
como Green y Wutz (1999, Protecting Groups in Organic
Synthesis, Wiley, Nueva York) y Bodansky (1993, Principles of
Peptide Synthesis, Springer, Berlín).
\newpage
Los análogos y fragmentos de didemnina pueden
prepararse convirtiendo un compuesto que tiene la estructura de la
fórmula IX
\vskip1.000000\baselineskip
en un compuesto que tiene la
estructura de la fórmula
X
\vskip1.000000\baselineskip
Tal serie de reacciones pueden incluir, pero sin
limitación, una reacción de protección, una reacción de activación,
una reacción de esterificación y una reacción de hidrólisis de
éster. El grupo amina de la fórmula IX preferiblemente es protegido
antes de realizar las reacciones de esterificación e hidrólisis. Un
ejemplo específico de la preparación de un compuesto que tiene la
estructura de la fórmula X se proporciona en el Ejemplo 1. En las
fórmulas X-XVIII, "APG" se refiere a un grupo
protector de amina tal como un resto carbobenciloxi (CBZ) o un resto
terc-butiloxicarbonilo (BOC). También pueden usarse
grupos protectores de amina alternativos tal como se describen en
la presente memoria y en la técnica.
Un ejemplo de una reacción de activación
incluida en el procedimiento de preparar un compuesto que tiene la
estructura de la fórmula X se representa en la Figura 26A, reacción
B. La activación de un compuesto tal como el compuesto 8 puede
implicar un reactivo tal como pentafluorofenol (PFPOH)
proporcionando el compuesto 9. El compuesto 9 es un ejemplo de un
intermedio activado que más fácilmente sufre las reacciones
subsiguientes, tales como esterificación, en el carbono del
carbonilo de su resto éster de PFP. Para preparar un compuesto que
tiene la estructura de la fórmula X pueden emplearse también las
reacciones de esterificación que no requieren un intermedio
activado.
Para preparar un compuesto que tiene la
estructura de la fórmula X puede usarse cualquier procedimiento de
hidrólisis de ésteres conocido en la técnica que no comprenda
condiciones duras que favorezcan la racemización. A modo de ejemplo,
un compuesto que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
puede hidrolizarse usando una base
fuerte en una mezcla de disolventes, tal como se ejemplifica en la
Figura 26A, reacción F. Los reactivos y condiciones adecuadas para
las hidrólisis de ésteres en condiciones más suaves (es decir, que
incluyan condiciones que no favorezcan la racemización) pueden ser
fácilmente seleccionadas por una persona de experiencia en la
técnica.
Un compuesto que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
puede esterificarse, por ejemplo con bromuro de
alilo (por ejemplo, tal como se describe en Ejemplo 1),
proporcionando un compuesto que tiene la estructura de la fórmula
XI
Un compuesto que tiene la estructura de la
fórmula IX y un compuesto que tiene la estructura de la fórmula XI
pueden acoplarse (por ejemplo esterificarse) proporcionando un
compuesto que tiene la estructura de la fórmula XII
(por ejemplo, la reacción I de la
Figura 26B). Opcionalmente, tal reacción puede realizarse usando un
catalizador, un reactivo de acoplamiento o un reactivo de
esterificación. Los reactivos y condiciones de utilidad para este
tipo de reacción son conocidos en la técnica y se ejemplifican en el
Ejemplo 1. Los fragmentos de didemnina que tienen la estructura de
la fórmula XII exhiben uno o más de las actividades farmacológicas
que se describen en la presente
memoria.
Un compuesto que tiene la estructura de la
fórmula XII puede hidrolizarse proporcionando un compuesto que tiene
la estructura de la fórmula XIII
Tal como se describe en otros puntos de la
presente memoria, las condiciones y reactivos de reacción adecuados
para la hidrólisis de ésteres son conocidos en la técnica y pueden
ser aplicados fácilmente por una persona de experiencia en la
técnica. Un ejemplo de este tipo de hidrólisis se representa en la
Figura 26B, reacción J. Los fragmentos de didemnina que tienen la
estructura de la fórmula XIII muestran una o más de las actividades
farmacológicas que se describen en la presente memoria.
El grupo carboxilo de un compuesto que tiene la
estructura de la fórmula XIII puede activarse proporcionando un
compuesto que tiene la estructura de la fórmula XIV
En la fórmula XIV, "ACT" se refiere a un
grupo activador, tal como un resto pentafluorofenilo (PFP). Otro
ejemplo de un grupo activador es un resto
N-hidroxisuccinimida. La activación química puede
realizarse usando reactivos tales como un reactivo activador, un
catalizador, un grupo activador donante o similares. A modo de
ejemplo, el compuesto 6, que se representa en la Figura 26C, se
activa mediante la unión covalente de un grupo PFP proporcionando el
compuesto 19. Los protocolos para activar un compuesto de la forma
que se describe en la presente memoria son conocidos en la técnica.
Los fragmentos de didemnina que tienen la estructura de la fórmula
XIV muestran una o más de las actividades farmacológicas que se
describen en la presente memoria.
El compuesto activado que tiene la estructura de
la fórmula XIV puede acoplarse con un tercer reactivo que tiene la
estructura de la fórmula XV
proporcionando un compuesto que
tiene la estructura de la fórmula
XVI
En las fórmulas XV y XVI, SEM se refiere a
2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo. Un ejemplo de esta reacción
se representa en la reacción M de la Figura 26C. En la que el
compuesto 19 se acopla con el compuesto 18 proporcionando el
compuesto 20. Los reactivos y condiciones necesarios para la
preparación de un péptido protegido tal como el compuesto 18 se
describen, por ejemplo, en Li y cols. (1990, J. Am. Chem. Soc.
112:7659-7672). Los análogos de didemnina que tienen
la estructura de la fórmula XVI muestran una o más de las
actividades farmacológicas que se describen en la presente
memoria.
Un análogo de didemnina que tiene una o más de
las actividades farmacológicas que se describen en la presente
memoria pueden preparase eliminando uno de los grupos protectores de
amino y el grupo protector de carbonilo e hidroxilo de un compuesto
que tiene la estructura de la fórmula XVI y ciclando del compuesto
proporcionando un PSI que tiene la estructura de la fórmula XVII
Un ejemplo de reacciones de este tipo se muestra
en la etapa N de la Figura 26D. La desprotección química de un
compuesto tal como uno que tiene la estructura de la fórmula XVI
puede lograrse haciendo reaccionar el compuesto con uno o más
reactivos para eliminar un grupo protector del compuesto. Las
reacciones de desprotección se describen en la presente memoria, por
ejemplo para el compuesto 20, tal como se muestra en la Figura 26D.
En la técnica se conocen otros protocolos para desproteger un
compuesto y pueden ser fácilmente aplicados por una persona de
experiencia en la técnica para la desprotección de un compuesto que
tiene la estructura de la fórmula XVI. La ciclación de un compuesto
desprotegido que por lo demás tiene la estructura de la fórmula XVI
puede lograrse usando cualquier procedimiento conocido en la técnica
para el macrociclado de péptidos. Por ejemplo, las condiciones de
macrociclado pueden ser similares o idénticas a las que se usan en
la ciclación que proporciona el compuesto 21, que se representa en
la Figura 26D y que se describe en el Ejemplo 1. Los análogos de
didemnina que tienen la estructura de la fórmula XVII muestran una o
más de las actividades terapéuticas que se describen en la presente
memoria.
Uno o más de los grupos protectores de un
compuesto que tiene la estructura de la fórmula XVII pueden
eliminarse proporcionando un compuesto que tiene la estructura de la
fórmula XVIII
Este tipo de desprotección se ejemplifica en la
reacción O de la Figura 26E. Los análogos de didemnina que tienen la
estructura de la fórmula XVIII muestran una o más de las actividades
terapéuticas que se describen en la presente memoria.
Todavía otro compuesto activo puede prepararse
acoplando un compuesto que tiene la estructura de la fórmula XVIII y
un reactivo que tiene la estructura de la fórmula XIX
proporcionando un PSI que tiene la
estructura de la fórmula
XX
Esta reacción se ejemplifica en la reacción N de
la Figura 26E. R^{14} puede ser, por ejemplo, cualquiera de los
restos que se describen anteriormente como R^{1}. El grupo
sustituyente R^{14} puede englobar un resto que puede escindirse
mediante enzimas, preferiblemente en, o cerca, del extremo distal
del mismo (relativo al macrociclo). Tal resto puede ser escindible
mediante enzimas, por ejemplo, un carboxipeptidasa, una
\beta-lactamasa, una
\beta-galactosidasa, una penicilina
V-amidasa, una citosina desaminasa, una
nitrorreductasa, una fosfatasa alcalina, una
\beta-glucuronidasa y un anticuerpo catalítico. Un
ejemplo de un resto R^{14} que comprende un resto que puede
escindirse mediante enzimas es
-(N-metil)leucina-(S)prolina-(S)-lactato-(S)glutamina-(S)piroglutamato.
Otros ejemplos de restos que pueden escindirse mediante enzimas son
que se describen en la presente memoria. A modo de ilustración los
compuestos 131 y 132, que se representan en las Figuras 23 y 24,
respectivamente, pueden prepararse usando los procedimientos que se
describen en la presente memoria. Los análogos y fragmentos de
didemnina que tienen un resto que puede escindirse mediante enzimas
unido a los mismos y que en el resto tienen la estructura de una de
las fórmulas XII-XVIII al escindir el grupo
enzimáticamente escindible del mismo, muestran una o más de las
actividades terapéuticas que se describen en la presente
memoria.
La variación de los sustituyentes de los
análogos y fragmentos de didemnina puede requerir ligeras
modificaciones de los procedimientos generales que se describen en
la presente memoria. Se entiende que la invención incluye tales
modificaciones, ya que podrían ser fácilmente diseñadas por una
persona de experiencia ordinaria en la técnica de la química
sintética.
Los análogos de tamandarina y didemnina también
pueden prepararse mediante un procedimiento que incluye la
incorporación de un resto desoxo-prolina o un resto
deshidro-prolina a la cadena lateral de un análogo
de tamandarina o didemnina. El resto desoxo-prolina
o el resto deshidro-prolina puede usarse en lugar
de un resto prolina en cualquier análogo de tamandarina o didemnina
conocido. Los análogos de didemnina y tamandarina que se contemplan
particularmente son aquellos en los que el resto desoxoprolina o el
resto deshidro-prolina está ligado al macrociclo
mediante un resto leucina que tiene un resto amina metilada (es
decir, un análogo de tamandarina o didemnina que contiene
-(N-metil)leucina-(desoxo o
deshidro)-prolina). Por supuesto, el resto (desoxo
o deshidro)-prolina puede estar sustituido
adicionalmente, por ejemplo por lactato, por piruvato, por
lactato-fluoróforo, por
lactato-glutamina-piroglutamato, por
lactato-glutamina-ciclopentanoato,
por -alanina-leucina-piroglutamato,
o por
-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato.
Uno o más de los restos (desoxo o deshidro)-prolina,
lactato, glutamina, piroglutamato, ciclopentanoato y alanina es
preferiblemente el enantiómero (S).
La incorporación de un resto desoxoprolina puede
lograrse mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica.
Ejemplos de procedimientos para incorporar un residuo
desoxo-prolina se incluyen en esta descripción en el
Ejemplo 5 y en las Figuras 41-43.
En una realización, el procedimiento de
incorporar un resto desoxoprolina comprende proteger los restos
hidroxilo y amina de leucina, metilar el resto amina de leucina y
desproteger el resto amina de leucina. Se protege el grupo amina de
prolina y la función éster de la prolina se reduce a un aldehído
(por ejemplo, usando una base fuerte tal como LiBH_{4} junto con
oxidación con un agente oxidante tal como
piridina-SO_{3}-. Puede usarse la aminación
reductora (por ejemplo, en presencia de un disolvente no acuoso, una
base fuerte y un catalizador de ácido carboxílico; por ejemplo, en
presencia de Na (AcO)_{3}BH, AcOH y CH_{2}Cl_{2}) para
acoplar la leucina con el hidroxilo protegido con la prolina con
amina protegida (por ejemplo, para formar el compuesto 43 de la
Figura 43, en una realización). La aminación reductora, por ejemplo,
puede realizarse tal como describen Abdel-Magid y
colaboradores (por ejemplo, Abdel-Magid y cols.
1990, Tetrahedron Lett.. 31:5595-5598:
Abdel-Magid y cols., 1990, Syn. Lett.
537-539).
El dipéptido
leucina-desoxo-prolina resultante
puede sustituirse adicionalmente con otros restos (por ejemplo, con
-lactato, -piruvato, -lactato-fluoróforo,
-lactato-glutamina-piroglutamato,
-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-alanina-leucina-piroglutamato, o
-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato),
eliminando (preferiblemente) o no primero los grupos protectores.
El dipéptido leucina-desoxo-prolina
(de forma opcional sustituido adicionalmente) puede unirse a un
macrociclo de tamandarina o didemnina en la posición que se
identifica como R^{1} en las fórmulas I y XXI.
La incorporación de un resto
deshidro-prolina puede lograrse mediante cualquier
procedimiento conocido en la técnica. Ejemplos de procedimientos
para incorporar un resto deshidro-prolina se
incluyen en esta descripción en el Ejemplo 6 y en la Figura 44.
En una realización, el procedimiento de
incorporar un resto deshidro-prolina comprende
proteger los grupos carboxilo y amino de
4-hidroxiprolinato, mesilar el resto hidroxilo,
desplazar el resto mesilato con un resto ariloselenilo, eliminar
oxidativamente el resto ariloselenilo y desproteger el resto
carboxilo. El resto hidroprolina resultante puede acoplarse a uno o
más restos aminoacídicos o ácidos orgánicos adicionales (por
ejemplo, los que se identifican en la presente memoria, eliminando
el grupo protector amino si fuera necesario o se deseara) y
acoplarse a un macrociclo de tamandarina o didemnina preparado u
obtenido por medios convencionales.
La invención comprende composiciones
farmacéuticas que comprenden al menos uno de los análogos de
tamandarina y didemnina y los fragmentos fisiológicamente activos
que se describen en la presente memoria. Tales composiciones pueden
comprender el análogo/fragmento y un vehículo farmacéuticamente
aceptable. A modo de ejemplo, una composición farmacéutica puede
comprender un vehículo farmacéuticamente aceptable y un análogo de
tamandarina o didemnina que tiene la estructura de cualquiera de las
fórmulas I, XXI y (a)-(d) como agente activo. Como ejemplo
adicional, una composición farmacéutica puede comprender un vehículo
farmacéuticamente aceptable y uno o más de los compuestos que se
representan en las Figuras en esta descripción.
Tales composiciones farmacéuticas pueden usarse,
por ejemplo, en los procedimientos que se describen en la presente
memoria para inhibir uno o más de síntesis de proteínas, progreso
del ciclo celular, oncogénesis, crecimiento y proliferación en una
célula. Además, tales composiciones pueden usarse en los
procedimientos que se describen en la presente memoria para
potenciar la apoptosis en una célula.
Las composiciones farmacéuticas que son de
utilidad en los procedimientos de la invención pueden administrarse
sistémicamente en formulaciones orales sólidas, oftálmicas,
supositorios, aerosoles, tópicas u otras formulaciones similares.
Además del agente, tales composiciones farmacéuticas pueden contener
vehículos farmacéuticamente aceptables y otros ingredientes que se
sabe que mejoran y facilitan la administración de fármacos. También
pueden usarse otras formulaciones posibles, tales como
nanopartículas, liposomas, eritrocitos liberados y sistemas con base
inmunológica para administrar el agente activo de acuerdo con los
procedimientos de la invención.
La invención engloba composiciones farmacéuticas
que están formadas por el agente activo, en una forma adecuada para
la administración a un sujeto o la composición farmacéutica puede
comprender el agente activo y uno o más vehículos farmacéuticamente
aceptables, uno o más ingredientes adicionales, o alguna combinación
de éstos. El agente activo puede estar presente en la composición
farmacéutica en forma de un éster o salfisiológicamente aceptable,
tal como combinado con un catión o anión fisiológicamente aceptable,
tal como es notorio en la técnica.
Las formulaciones de las composiciones
farmacéuticas que se describen en la presente memoria pueden
prepararse mediante cualquier procedimiento conocido o desarrollado
a partir de ahora en la técnica de la farmacología. En general,
tales procedimientos preparatorios incluyen la etapa de asociar el
agente activo a un vehículo u otro u otros ingrediente(s)
accesorio(s) y después, si fuera necesario o deseable,
modelar o envasar el producto en una unidad modosis o
multidosis.
Aunque las descripciones de las composiciones
farmacéuticas que se proporcionan en la presente memoria se refieren
principalmente a composiciones farmacéuticas que son adecuadas para
la administración ética a seres humanos, una persona de experiencia
en la técnica entenderá que tales composiciones son adecuadas de
forma general para la administración a animales de todo tipo. La
modificación de composiciones farmacéuticas adecuadas para la
administración a seres humanos para hacer que las composiciones sean
adecuadas para la administración a diversos animales es bien
entendida y el farmacólogo veterinario de experiencia ordinaria
puede diseñar y realizar tal modificación con una experimentación
ordinaria, si fuera necesaria. Los sujetos para los que se contempla
la administración de las composiciones farmacéuticas de la invención
incluyen, pero sin limitación, seres humanos y otros primates y
mamíferos que incluyen mamíferos de relevancia comercial tales como
ganado vacuno, porcino, caballar, ovino, gatos y perros.
Las composiciones farmacéuticas que son de
utilidad en los procedimientos de la invención pueden prepararse,
envasarse o venderse en formulaciones adecuadas para la
administración oral, rectal, vaginal, parenteral, tópica, pulmonar,
intranasal, bucal, oftálmica u otra. Otras formulaciones
contempladas incluyen nanopartículas, preparaciones con liposomas,
eritrocitos liberados que contienen el agente activo y formulaciones
con base inmunológica.
Una composición farmacéutica de la invención
puede prepararse, envasarse o venderse a granel, en forma de
monodosis o de una pluralidad de monodosis. Tal como se usa en la
presente memoria, una "monodosis" es una cantidad independiente
de la composición farmacéutica que comprende una cantidad
predeterminada del agente activo. La cantidad del agente activo es
generalmente igual a la dosis del agente activo que se administraría
a un sujeto o una fracción conveniente de tal dosificación tal como,
por ejemplo la mitad o un tercio de tal dosificación.
Además del agente activo, una composición
farmacéutica de la invención puede comprender además uno o más
agentes farmacéuticamente activos tales como otros agentes para el
tratamiento de tumores, otros agentes antiinfecciosos y
similares.
Las formulaciones de liberación controlada o
mantenida de una composición farmacéutica de la invención pueden
prepararse usando tecnología convencional.
Una formulación de una composición farmacéutica
de la invención adecuada para la administración oral puede
prepararse, envasarse o venderse en forma de una monodosis sólida
que incluye, pero sin limitación, un comprimido, una cápsula dura o
blanda, una oblea, un trocisco o una pastilla, que contienen cada
uno una cantidad predeterminada del agente activo. Otras
formulaciones adecuadas para la administración oral incluyen, pero
sin limitación, una formulación en polvo o granulada, una suspensión
acuosa u oleosa, una solución acuosa u oleosa, o una emulsión.
Tal como se usa en la presente memoria, un
líquido "oleoso" es uno que comprende una molécula líquida que
contiene carbono y que muestra un carácter menos polar que el
agua.
Un comprimido que comprende el agente activo
puede prepararse, por ejemplo, comprimiendo o moldeando el agente
activo, opcionalmente con uno o más ingredientes adicionales. Los
comprimidos por compresión pueden prepararse comprimiendo, en un
dispositivo adecuado, el agente activo en forma fluida libre tal
como un polvo o preparación granular, opcionalmente mezclado con uno
o más de un aglutinante, un lubricante, un excipiente, un agente
tensioactivo y un agente dispersante. Los comprimidos moldeados
pueden prepararse moldeando, en un dispositivo adecuado, una mezcla
del agente activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable y líquido
suficiente al menos para humedecer la mezcla. Excipientes
farmacéuticamente aceptables que se usan en la fabricación de
comprimidos incluyen, pero sin limitación, diluyentes inertes,
agentes de granulación y disgregación, agentes aglutinantes y
agentes lubricantes. Agentes dispersantes incluyen, pero sin
limitación, almidón de patata y almidónglicolato sódico. Agentes
tensioactivos conocidos incluyen, pero sin limitación, laurilsulfato
sódico. Diluyentes conocidos incluyen, pero sin limitación,
carbonato cálcico, carbonato sódico, lactosa, celulosa
microcristalina, fosfato cálcico, hidrogenofosfato cálcico y
fosfato sódico. Agentes de granulación y disgregación conocidos
incluyen, pero sin limitación, almidón de maíz y alginato. Agentes
aglutinantes conocidos incluyen, pero sin limitación, gelatina, goma
arábiga, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona e
hidroxipropilmetilcelulosa. Agentes lubricantes conocidos incluyen,
pero sin limitación, estearato de magnesio, estearato, sílice y
talco.
Los comprimidos pueden no estar recubiertos o
ser recubiertos usando procedimientos conocidos para lograr la
disgregación retardada en el tubo gastrointestinal de un sujeto,
proporcionando así liberación y absorción mantenidas del agente
activo. A modo de ejemplo, pueden usarse un material tal como
monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo para recubrir
comprimidos. A modo de ejemplo adicional, los comprimidos pueden
recubrirse usando procedimientos que se describen en las patentes de
Estados Unidos números 4.256.108; 4.160.452; y 4.265.874 formando
comprimidos de liberación controlada por ósmosis. Los comprimidos
además pueden comprender un agente edulcorante, un agente
aromatizante, un agente colorante, un conservante, o alguna
combinación de estos para proporcionar una preparación
farmacéuticamente elegante y agradable al paladar.
Cápsulas duras que comprenden el agente activo
pueden prepararse usando una composición fisiológicamente
degradable, tal como gelatina. Tales cápsulas duras comprenden el
agente activo y pueden comprender además ingredientes adicionales
que incluyen, por ejemplo, un diluyente sólido inerte tal como
carbonato cálcico, fosfato cálcico o caolín.
Cápsulas de gelatina blanda que comprenden el
agente activo pueden prepararse usando una composición
fisiológicamente degradable, tal como gelatina. Tales cápsulas
blandas comprenden el agente activo, que puede mezclarse con agua o
un medio oleoso tal como aceite de cacahuete, parafina líquida o
aceite de oliva.
Las formulaciones líquidas de una composición
farmacéutica de la invención que son adecuadas para la
administración oral pueden prepararse, envasarse y venderse o en
forma líquida o en forma de un producto seco para ser reconstituido
con agua u otro vehículo adecuado antes de usar.
Las suspensiones líquidas pueden prepararse
usando procedimientos convencionales para lograr una suspensión del
agente activo en un vehículo acuoso u oleoso. Vehículos acuosos
incluyen, por ejemplo, agua y solución salina. Vehículos oleosos
incluyen, por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleosos, alcohol
etílico, aceites vegetales tales como de cacahuete, oliva, sésamo o
coco, aceites vegetales fraccionados y aceites minerales tales como
parafina líquida. Las suspensiones líquidas pueden comprender además
uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero sin
limitación, agentes de suspensión, agentes dispersantes o
humectantes, agentes emulsionantes, demulcentes, conservantes,
tampones, sales, aromas, agentes colorantes y agentes edulcorantes.
Las suspensiones oleosas además pueden comprender un agente
espesante. Agentes de suspensión conocidos incluyen, pero sin
limitación, jarabe de sorbitol, grasas comestibles hidrogenadas,
alginato sódico, polivinilpirrolidona, goma tragacanto, goma
arábiga y derivados de celulosa tales como carboximetilcelulosa
sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa. Agentes
dispersantes o humectantes conocidos incluyen, pero sin limitación,
fosfoglicéridos naturales tales como lecitina, productos de
condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso, con un
alcohol alifático de cadena larga, con un éster parcial derivado de
un ácido graso y un hexitol o con un éster parcial derivado de un
ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, estearato de
polioxietileno, heptadecaetilenoxicetanol, sorbitolmonooleato de
polioxietileno y sorbitanmonooleato de polioxietileno
respectivamente). Agentes emulsionantes adecuados incluyen, pero sin
limitación, lecitina y goma arábiga. Conservantes conocidos
incluyen, pero sin limitación, parahidroxibenzoatos metílico,
etílico y n-propílico, ascorbato y sorbato. Agentes
edulcorantes conocidos incluyen, por ejemplo, glicerol,
propilenglicol, sorbitol, sacarosa y sacarina. Agentes espesantes
conocidos para suspensiones oleosas incluyen, por ejemplo, cera de
abeja, parafina dura y alcohol cetílico.
Pueden prepararse soluciones líquidas del agente
activo en disolventes acuosos u oleosos sustancialmente del mismo
modo que las suspensiones líquidas, con la diferencia principal de
que el agente activo se disuelve en lugar de suspenderse en el
disolvente. Las soluciones líquidas de la composición farmacéutica
de la invención pueden comprender cada uno de los componentes que se
describen con respecto a suspensiones líquidas, entendiéndose que
los agentes de suspensión no ayudarán necesariamente a la disolución
del agente activo en el disolvente. Disolventes acuosos incluyen,
por ejemplo, agua y solución salina isotónica. Disolventes oleosos
incluyen, por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleosos, alcohol
etílico, aceites vegetales tales como aceite de cacahuete, oliva,
sésamo o coco, aceites vegetales fraccionados y aceites minerales
tales como parafina líquida.
Las formulaciones granuladas y en polvo de una
preparación farmacéutica de la invención pueden prepararse usando
procedimientos conocidos. Tales formulaciones pueden administrarse
directamente a un sujeto, usarse por ejemplo para formar
comprimidos, para cargar cápsulas o para preparar una suspensión o
solución acuosa u oleosa mediante la adición de un vehículo acuoso u
oleoso a las mismas. Cada una de estas formulaciones puede
comprender además uno o más de un agente dispersante o humectante,
un agente de suspensión y un conservante. También pueden incluirse
en estas formulaciones excipientes adicionales, tales como cargas y
agentes edulcorantes, aromatizantes o colorantes agentes.
Una composición farmacéutica de la invención
también puede prepararse, envasarse o venderse en forma de emulsión
de aceite en agua o de una emulsión de agua en aceite. La fase
oleosa puede ser un aceite vegetal tal como aceite de oliva o
cacahuete, un aceite mineral tal como parafina líquida o una
combinación de éstos. Tales composiciones además pueden comprender
uno o más agentes emulsionantes tales como gomas naturales tales
como goma arábiga o goma tragacanto, fosfoglicéridos naturales,
tales como fosfoglicéridos de soja o lecitina, ésteres o ésteres
parciales derivados de combinaciones de ácidos grasos y anhídridos
de hexitol tales como monooleato de sorbitano y productos de
condensación de tales ésteres parciales con óxido de etileno tales
como sorbitanomonooleato de polioxietileno. Estas emulsiones también
pueden contener ingredientes adicionales que incluyen, por ejemplo,
agentes edulcorantes o aromatizantes.
Una composición farmacéutica de la invención
puede prepararse, envasarse o venderse en una formulación adecuada
para la administración rectal. Tal composición puede estar en forma,
por ejemplo, de un supositorio, de una preparación de enema de
retención y de una solución para la irrigación rectal o
colónica.
Las formulaciones de supositorios pueden
prepararse combinando el agente activo con un excipiente
farmacéuticamente aceptable no irritante que sea sólido a la
temperatura ambiente ordinaria (es decir, aproximadamente 20ºC) y
que sea líquida a la temperatura rectal del sujeto (es
decir,aproximadamente 37ºC en un ser humano sano). Excipientes
farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, pero sin
limitación, manteca de cacao, polietilenglicoles y diversos
glicéridos. Las formulaciones de supositorios además pueden
comprender diversos ingredientes adicionales que incluyen, pero sin
limitación, antioxidantes y conservantes.
Las preparaciones o soluciones de enema de
retención para la irrigación rectal o colónica pueden prepararse
combinando el agente activo con un vehículo líquido
farmacéuticamente aceptable. Tal como es notorio en la técnica, las
preparaciones de enemas pueden administrarse usando y pueden
envasarse en un dispositivo de administración adaptado a la anatomía
rectal del sujeto. Las preparaciones de enemas pueden comprender
además diversos ingredientes adicionales que incluyen, pero sin
limitación, antioxidantes y conservantes.
Una composición farmacéutica de la invención
puede prepararse, envasarse o venderse en una formulación adecuada
para la administración vaginal. Tal composición puede estar en
forma, por ejemplo, de un supositorio, un material que puede
insertarse vaginalmente impregnado y recubierto tal como un tampón,
una preparación en ducha o una solución para irrigación vaginal.
Los procedimientos para impregnar o recubrir un
material con una composición química son conocidos en la técnica e
incluyen, pero sin limitación, procedimientos para depositar o unir
una composición química sobre una superficie, procedimientos para
incorporar una composición química a la estructura de un material
durante la síntesis del material (es decir, tal como con un material
fisiológicamente degradable) y procedimientos para absorber una
solución o suspensión acuosa u oleosa sobre un material absorbente,
con o sin el secado subsiguiente.
Las preparaciones o soluciones en ducha para la
irrigación vaginal pueden prepararse combinando el agente activo con
un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable. Tal como es notorio
en la técnica, las preparaciones en ducha pueden administrarse
usando y pueden envasarse en un dispositivo de administración,
adaptado a la anatomía vaginal de la sujeto. Las preparaciones en
ducha pueden comprender además diversos ingredientes adicionales que
incluyen, pero sin limitación, antioxidantes, antibióticos, agentes
antifúngicos y conservantes.
Las formulaciones de una composición
farmacéutica adecuada para la administración parenteral pueden
comprender el agente activo combinado con un vehículo
farmacéuticamente aceptable, tal como agua estéril o solución salina
isotónica estéril. Tales formulaciones pueden prepararse, envasarse
o venderse en una forma adecuada para la administración embolada o
para la administración continua. Las formulaciones inyectables
pueden prepararse, envasarse, o venderse en forma monodosis, tal
como en ampollas o en envases multidosis que contienen un
conservante. Las formulaciones para la administración parenteral
incluyen, pero sin limitación, suspensiones, soluciones, emulsiones
en vehículos oleosos o acuosos, pastas y formulaciones implantables
de liberación mantenida o biodegradables. Tales formulaciones además
pueden comprender uno o más ingredientes adicionales que incluyen,
pero sin limitación, agentes de suspensión, estabilización o
dispersión. En una realización de una formulación para la
administración parenteral, el agente activo se proporciona en forma
seca (es decir en polvo o granulada) para la reconstitución con un
vehículo adecuado (por ejemplo, agua apirógena estéril) antes de la
administración parenteral de la composición reconstituida.
Las composiciones farmacéuticas pueden
prepararse, envasarse o venderse en forma de una suspensión o
solución acuosa u oleosa inyectable estéril. Esta suspensión o
solución puede formularse de acuerdo con la técnica conocida y puede
comprender además del agente activo, ingredientes adicionales tales
como los agentes dispersantes, agentes humectantes o agentes de
suspensión que se describen en la presente memoria. Tales
formulaciones inyectables estériles pueden prepararse usando un
diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, tal como
agua o 1,3-butanodiol, por ejemplo. Otros diluyentes
y disolventes aceptables incluyen, pero sin limitación, solución de
Ringer; solución isotónica de cloruro sódico y aceites fijos tales
como mono o diglicéridos sintéticos. Otras formulaciones que pueden
administrarse por vía parenteral que son de utilidad incluyen las
que comprenden el agente activo en forma microcristalina, en una
preparación de liposomas o como componente de un sistema de
polímeros biodegradables. Las composiciones para la liberación o
implante mantenido pueden comprender materiales poliméricos o
hidrófobos farmacéuticamente aceptables tales como una emulsión, una
resina de intercambio iónico, un polímero escasamente soluble o una
sal escasamente soluble sal.
Las formulaciones adecuadas para la
administración tópica incluyen, pero sin limitación, preparaciones
líquidas o semilíquidas tales como linimentos, lociones, emulsiones
de aceite en agua o agua en aceite tales como cremas, ungüentos o
pastas y soluciones o suspensiones. Las formulaciones que pueden
administrarse por vía tópica pueden comprender, por ejemplo, de
aproximadamente 1% a aproximadamente 10% (p/p) de agente activo,
aunque la concentración del agente activo puede ser de hasta el
límite de solubilidad del agente activo en el disolvente. Las
formulaciones para la administración tópica pueden comprender además
uno o más de los ingredientes adicionales que se describen en la
presente memoria.
Una composición farmacéutica de la invención
puede prepararse, envasarse o venderse en una formulación adecuada
para la administración pulmonar por vía bucal. Tal formulación puede
comprender partículas secas que comprenden el agente activo y que
tienen un diámetro en el intervalo de aproximadamente 0,5 a
aproximadamente 7 nanómetros y preferiblemente de aproximadamente 1
a aproximadamente 6 nanómetros. Tales composiciones convenientemente
están en forma de polvo seco para su administración usando un
dispositivo que comprende un reservorio de polvo seco al que puede
dirigirse un chorro de propelente para dispersar el polvo o usando
un envase con disolvente autopropelente dispensador de polvo tal
como un dispositivo que comprende el agente activo disuelto o
suspendido en un propelente de punto de ebullición bajo, en un
envase sellado. Preferiblemente, tal polvo está constituido por
partículas en las que al menos el 98% de las partículas en peso
tienen un diámetro superior a 0,5 nanómetros y al menos el 95% de
las partículas en número tienen un diámetro inferior a 7 nanómetros.
Más preferiblemente, al menos el 95% de las partículas en peso
tienen un diámetro superior a 1 nanómetro y al menos el 90% de las
partículas en número tiene un diámetro inferior a 6 nanómetros. Las
composiciones de polvo seco preferiblemente incluyen un diluyente en
polvo fino sólido tal como azúcar y de forma conveniente se
proporcionan en forma monodosis.
Los propelentes de punto de ebullición bajo
generalmente incluyen propelentes líquidos que tienen un punto de
ebullición inferior a 65ºF (18,33ºC) a presión atmosférica.
Generalmente el propelente puede constituir del 50 al 99,9%
(p/p)de la composición y el agente activo pude constituir del
0,1 al 20% (p/p) de la composición. El propelente además puede
comprender ingredientes adicionales tales como un tensioactivo no
iónico líquido o aniónico sólido o un diluyente sólido (que
preferiblemente tiene un tamaño de partícula del mismo orden que las
partículas que comprenden el agente activo).
Las composiciones farmacéuticas de la invención
formuladas para la administración pulmonar también pueden
proporcionar el agente activo en forma de gotitas de solución o
suspensión. Tales formulaciones pueden prepararse, envasarse o
venderse en forma de soluciones o suspensiones acuosas o en
alcoholes diluidos, opcionalmente estériles, que comprenden el
agente activo y pueden administrarse de forma conveniente usando
cualquier dispositivo de nebulización o atomización. Tales
formulaciones pueden comprender además uno o más ingredientes
adicionales que incluyen, pero sin limitación, un agente
aromatizante tal como sacarina sódica, un aceite volátil, un agente
tamponador, un agente tensioactivo o un conservante tal como
hidroxibenzoato metílico. Las gotículas que proporciona esta vía de
administración preferiblemente tienen un diámetro medio en el
intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 200
nanómetros.
Las formulaciones que se describen en la
presente memoria como de utilidad para la administración pulmonar
también son de utilidad para la administración intranasal de una
composición farmacéutica de la invención.
Otra formulación adecuada para la administración
intranasal es un polvo basto que comprende el agente activo y que
tiene un tamaño medio de partícula de aproximadamente 0,2 a 500
micrómetros. Tal formulación se administra de la forma en la que se
aspira el rape, es decir por inhalación rápida a través del pasaje
nasal a partir de un envase del polvo que se mantiene cerca de las
fosas.
Las formulaciones adecuadas para la
administración nasal, por ejemplo, pueden comprender desde
aproximadamente un mínimo del 0,1% (p/p) y hasta un máximo de 100%
(p/p) del agente activo y puede comprender además uno o más de los
ingredientes adicionales que se describen en la presente
memoria.
Una composición farmacéutica de la invención
puede prepararse, envasarse o venderse en una formulación adecuada
para la administración bucal. Tales formulaciones, por ejemplo,
pueden estar en forma de comprimidos o pastillas preparados usando
procedimientos convencionales y por ejemplo, puede incluir de 0,1 a
20% (p/p) de agente activo, el equilibrio que comprende una
composición que puede disolverse o degradarse oralmente y,
opcionalmente, uno o más de los ingredientes adicionales que se
describen en la presente memoria. De forma alternativa, las
formulaciones adecuadas para la administración bucal pueden
comprender un polvo de una solución o suspensión en aerosol o
atomizada que comprende el agente activo. Tales formulaciones en
polvo aerosolizadas o en aerosol, cuando se dispersan,
preferiblemente tienen un tamaño medio de partícula o gotícula en el
intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 200 nanómetros y
pueden comprender además uno o más de los ingredientes adicionales
que se describen en la presente memoria.
Una composición farmacéutica de la invención
puede prepararse, envasarse o venderse en una formulación adecuada
para la administración oftálmica. Tales formulaciones, por ejemplo,
pueden estar en forma de colirios que incluyen, por ejemplo, una
solución o suspensión al 0,1-1,0% (p/p) del agente
activo en un vehículo líquido acuoso u oleoso. Tales colirios pueden
comprender además agentes tamponadores, sales, u otro u otros de los
ingredientes adicionales que se describen en la presente memoria.
Otras formulaciones que pueden administrarse por vía oftálmica que
son de utilidad incluyen las que comprenden el agente activo en
forma microcristalina o en una preparación en liposomas.
Tal como se usa en la presente memoria,
"ingredientes adicionales" incluyen, pero sin limitación, uno o
más de los siguientes; excipientes; agentes tensioactivos; agentes
dispersantes; diluyentes inertes; agentes de granulación y
disgregantes; agentes aglutinantes; agentes lubricantes; agentes
edulcorantes; agentes aromatizantes; agentes colorantes;
conservantes; composiciones fisiológicamente degradables tales como
gelatina; vehículos y disolventes acuosos; vehículos y disolventes
oleosos; agentes de suspensión; agentes de dispersión o humectantes;
agentes emulsionantes, demulcentes; tampones; sales; agentes
espesantes; cargas; agentes emulsionantes; antioxidantes;
antibióticos; agentes antifúngicos; agentes estabilizantes; y
materiales poliméricos o hidrófobos farmacéuticamente aceptables.
Otros "ingredientes adicionales" que pueden incluirse en las
composiciones farmacéuticas de la invención son conocidos en la
técnica y se describen, por ejemplo en Genaro, ed., 1985,
Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.,
Easton, PA, que se incorpora a la presente memoria por
referencia.
Las cantidades del agente activo, del vehículo
farmacéuticamente aceptable y de cualesquiera ingredientes
adicionales de una composición farmacéutica de la invención variarán
dependiendo de la identidad, tamaño y tipo y gravedad de la afección
del sujeto tratado y dependiendo además de la vía por la va a
administrarse la composición. A modo de ejemplo, la composición
puede comprender entre 0,1% y 100% (p/p) del agente activo.
Típicamente, las dosificaciones del agente
activo que pueden administrarse a un animal, preferiblemente un ser
humano, variaran en una cantidad desde 1 microgramo a
aproximadamente 100 gramos por kilogramo de peso corporal del
animal. Aunque la dosis precisa administrada variará dependiendo de
cualquier número de factores, que incluyen pero sin limitación, el
tipo de animal y tipo de estado de enfermedad que se esté tratando,
la edad del animal y la vía de administración. Preferiblemente, la
dosificación del agente activo variará desde aproximadamente 1
miligramo a aproximadamente 10 g por kilogramo de peso corporal del
animal. Más preferiblemente, la dosificación variará desde
aproximadamente 10 miligramos a aproximadamente 1 gramo por
kilogramo de peso corporal del animal. De forma alternativa, la
dosificación puede determinarse en unidades de metros cuadrados de
superficie corporal de un animal (es decir, miligramos o kilogramos
por metro cuadrado, mg/m^{2} o kg/m^{2}). Preferiblemente, esta
dosis variará desde aproximadamente 0,1 miligramo a aproximadamente
5 gramos por metro cuadrado de superficie corporal del animal. Más
preferiblemente, la dosificación variará desde aproximadamente 1
miligramo a aproximadamente 1 gramos por metro cuadrado de
superficie corporal del animal.
El agente activo puede administrarse a un animal
con una frecuencia de hasta varias veces al día, o puede
administrarse con una frecuencia menor, tal como una vez al día, una
vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez al mes o con una
frecuencia incluso menor, tal como una vez cada varios meses o
incluso una vez al año o menos. La frecuencia de la dosis puede
determinarla una persona de experiencia en la técnica y depende de
diversos factores que incluyen, pero sin limitación, el tipo y
gravedad de la enfermedad que se está tratando, el tipo y edad del
animal, etc.
La invención se describe ahora haciendo
referencia a los siguientes Ejemplos. Estos Ejemplos se proporcionan
con fines únicamente ilustrativos y la invención no está limitada
por estos Ejemplos, sino que engloba todas las variaciones que son
evidentes como resultado de las enseñanzas que se proporcionan en la
presente memoria.
A continuación se presentan los reactivos y
procedimientos que se usaron en los Ejemplos.
A no ser que se indique lo contrario, todas las
reacciones se realizaron en presencia de atmósfera inerte (por
ejemplo, argón o nitrógeno). Todos los disolventes eran de pureza
analítica (por ejemplo, disolventes para destilación, disolventes
de cromatografía y disolventes de procesamiento de la reacción) o de
calidad para HPLC (es decir, disolventes de reacción). El éter
dietílico anhidro y el tetrahidrofurano (THF) se destilaron a
partir de sodio y benzofenona. El intervalo de punto de ebullición
del hexano que se usó era de 38-55ºC. El cloruro de
metileno (CH_{2}Cl_{2}), el benceno, el tolueno y la
N,N-dimetilformamida (DMF) se destilaron a partir
de hidruro cálcico (CaH_{2}). Los ácidos y bases orgánicos eran de
pureza analítica. La trietilamina (Et_{3}N), la
diisopropiletilamina (DIPEA), la morfolina y la
N-metilmorfolina se destilaron a partir de hidruro
cálcico (CaH_{2}). Todos los otros reactivos, que incluyen
dimetilaminofenol y 1,3-acetonadicarboxilato
dietílico, eran de la pureza más alta disponible en el mercado. La
cromatografía analítica en capa fina (TLC) se realizó usando placas
de gel de sílice de EM Separations Tech/Merck
(60-F254) de (0,25 milímetros) recubiertas
previamente con un indicador fluorescente. La visualización se
realizó usando luz ultravioleta (254 nanómetros), ácido
fosfomolíbdico (al 7% p/v) en etanol al 95%. Los puntos de fusión
(pf) se determinaron usando un aparato de punto de fusión capilar
Thomas-Hoover y se expresan sin corrección. Los
espectros de protones y de resonancia magnética de carbono (RMN de
^{1}H y ^{13}C, respectivamente) se registraron en un
espectrómetro por transformada de Fourier Bruker
AM-500 (500 MHz) y los desplazamientos químicos se
expresaron en partes por millón (ppm) relativas a CHCl_{3} como
patrón interno (7,24 ppm para ^{1}H y 77,0 para ^{13}C). Las
multiplicidades se denominan singlete (s), doblete (d), doblete de
dobletes (dd), doblete de tripletes (dt), triplete (t), cuartete
(q) multiplete (m) y singlete ancho (brs). Los espectros infrarrojos
(IR) se obtuvieron usando un espectrofotómetro
Perkin-Elmer Modelo 1600 FT-IR. Las
absorciones se expresan en números de onda (cm^{-1}). Las
rotaciones ópticas (en grados) se midideron usando un polarímetro
Perkin-Elmer Modelo 341. Los espectros de masas de
alta resolución (EMAR) se obtuvieron usando o un VG
70-70HS o un Micromass AutoSpect. Los análisis
elementales se realizaron usando un analizador
Perkin-Elmer 2400 Series II CHNS/O. La cromatografía
ultrarrápida en columna se realizó usando gel de sílice Merck 60
(malla de 240-400) usando los sistemas de
disolventes que se indican para los experimentos individuales.
En este ejemplo se describe un procedimiento
para sintetizar (-) tamandarina A. El procedimiento se ilustra en la
Figura 26. El procedimiento se inicia mediante la síntesis del
compuesto 13, que se representa en la Figura 26A.
Una solución que comprende 5,13 mililitros (36,9
milimoles) de Et_{3}N se añadió gota a gota a una solución que
comprendía 1,56 gramos (11,9 milimoles) de compuesto 7,
D-alo-isoleucina y 50 mililitros de CH_{2}Cl_{2} recién
destilado a 0ºC. A la mezcla resultante se añadieron 3,114 gramos
(12,5 milimoles) de carbobenciloxisuccinimida
(Cbz-succinimida). Esta reacción se agitó a 0ºC
durante 1 hora y se mantuvo agitando a temperatura ambiente toda la
noche. La mezcla de reacción se concentró, se diluyó con 20
mililitros de una solución saturada de NaHCl y se lavó dos veces con
alícuotas de 10 mililitros de éter. Las fases de éter combinadas se
extrajeron con 10 mililitros de una solución saturada de
bicarbonato sódico (NaHCO_{3}). Las fases acuosas combinadas se
enfriaron a 0ºC, se acidificaron a pH 2 mediante la adición gota a
gota de KHSO_{4} 1 normal y se extrajeron tres veces con 20
mililitros de acetato de etilo (EtOAc). Las fases de EtOAc se
combinaron, se lavaron con 20 mililitros de una solución saturada de
NaCl y se secaron en presencia de sulfato sódico anhidro
(Na_{2}SO_{4}). La solución resultante se filtró y se concentró
a presión reducida proporcionando 3,13 gramos del compuesto 8
(rendimiento del 99%). El Compuesto 8 se obtuvo en forma de un
aceite incoloro y se usó directamente en la etapa siguiente sin
purificación. Los datos analíticos para el Compuesto 8 fueron los
siguientes: R_{f} 0,08 (acetato de etilo:hexano 20:80); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-0,90 (m,
3H), 0,93-0,97 (m, 3H), 1,20-1,27
(m, 1H) y 1,42-1,47 (m, 1H),
1,98-2,09 (m, 1H), 4,47-4,50 (dd,
J_{1} = 9,1 Hz, J_{2} = 3,4 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H),
5,17-5,19 (d, J = 9,1 Hz, 1H),
7,29-7,35 (m, 5H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 11,69, 14,35, 26,20, 37,42, 56,9,6, 67,20,
128,14, 128,24, 128,55, 135,06, 156,42, 177,41; IR (CHCl_{3})
2470-3540, 3440, 2980, 2950, 2890, 1720, 1510, 1455,
1405, 1385, 1325-1355, 1230-1280,
1165, 1095, 1040, 1005, 910 cm^{-1}.
Una solución que comprendía 3,534 gramos (13,3
milimoles) del Compuesto 8 (es decir,
Cbz-D-alo-isoleucina) y 50 mililitros de
CH_{2}Cl_{2} anhidro se enfrió en un baño de hielo a 0ºC. Cada
uno de los siguientes se añadió en forma sólida a la solución fría:
2,574 gramos (14,0 milimoles) de pentafluorofenol (PFPOH), 3,064
gramos (16,0 milimoles) de clorhidrato de
1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
(EDAC\cdotHCl) y 0,325 gramos (2,7 milimoles) de
4-dimetilaminopiridina (DMAP). La mezcla resultante
se mantuvo a 0ºC durante media hora agitando y a temperatura
ambiente durante 4 horas más. La mezcla se diluyó con 50 mililitros
de CH_{2}Cl_{2}. La fase de CH_{2}Cl_{2} se lavó una vez
usando 25 mililitros de una solución al 10% de ácido clorhídrico
(HCl), una vez usando 25 mililitros de una solución al 5% de
NaHCO_{3} y una vez usando 25 mililitros de una solución saturada
de NaCl. La fase lavada de CH_{2}Cl_{2} se secó en presencia de
Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró a presión reducida. El
éster de PFP resultante, el compuesto 9 (5,70 gramos), se obtuvo en
forma de un aceite incoloro y se usó en la etapa siguiente sin
purificación. Para el compuesto 9 se obtuvieron los siguientes
datos analíticos: R_{f} 0,52 (EtOAc:hexano 20:80); RMN de ^{1}H
(500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,90-1,12 (m, 6H),
1,29-1,39 (m, 1H) y 1,45-1,52 (m,
1H), 2,05-2,15 (m, 1H), 4,79-4,84
(m, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,12-5,14 (d, J = 9,1 Hz,
1H), 7,29-7,37 (m, 5H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 11,68, 14,25, 26,24, 37,64, 57,09, 67,45,
128,20, 128,35, 128,59 y 135,95, 136,9, 139,0, 140,0 y 142,0,156,13,
168,87.
Una solución que comprendía 5,70 gramos del
compuesto 9 y 25 mililitros de THF anhidro se enfrió a -78ºC. Se
preparó una solución en enolato que comprendía el enolato de litio
de acetato de metilo enfriando una solución que comprendía 49,2
milimoles de dialdehído de litio y 25 mililitros de THF anhidro en
un baño de hielo carbónico a -78ºC, añadiendo a la solución 3,92
mililitros (49,2 milimoles) de acetato de metilo mediante una
jeringuilla y manteniendo la solución resultante en agitación a
-78ºC durante 1 hora. La solución de enolato resultante se añadió
gota a gota a la solución que comprendía el compuesto 9 y la mezcla
resultante se mantuvo agitando durante 0,75 horas a -78ºC. La
reacción se inactivó a -78ºC añadiendo 50 mililitros de una solución
saturada de cloruro de amonio acuoso (NH_{4}Cl). La reacción
inactivada se llevó a temperatura ambiente y el THF se eliminó a
presión reducida. La solución acuosa resultante se extrajo 3 veces
con alícuotas de 25 mililitros de CH_{2}Cl_{2}. Las fases de
CH_{2}Cl_{2} combinadas se lavaron una vez usando 25 mililitros
de una solución al 10% de ácido clorhídrico (HCl), una vez usando
25 mililitros de una solución al 5% de NaHCO_{3} y una vez usando
25 mililitros de una solución saturada de NaCl. La fase de
CH_{2}Cl_{2} lavada se secó en presencia de Na_{2}SO_{4}, se
filtró y se concentró a presión reducida. Esta reacción proporcionó
un aceite amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida en
columna. El aceite amarillo se aplicó a una columna de gel de sílice
y se eluyó con una solución que comprendía EtOAc y hexano en una
proporción de 10 a 95, respectivamente. El producto obtenido de la
cromatografía era de 3,42 gramos de un aceite incoloro que
correspondía al \beta-cetoéster, compuesto 10. El
rendimiento del compuesto 10 fue del 80%, según se calculó para
ambas reacciones B y C. Para el compuesto 10 se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f} 0,42 (EtOAc:hexano 35:65); RMN
de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,75-0,79
(m, 3H), 0,90-0,98 (m,3H), 1,26-1,30
(m, 1H) y 1,42-1,46 (m, 1H),
1,97-1,99 (m, 1H), 3,53 (s, 2H), 3,72 (s, 3H),
4,56-4,58 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H),
5,26-5,28 (d, J = 6,4 Hz, 1H),
7,30-7,36 (m, 5H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 11,83, 13,79, 26,83, 36,12, 46,56, 52,46,
63,00, 67,19, 128,10, 128,24, 128,56, 136,16, 156,42, 166,96,
201,68: IR (CHCl_{3}) 3349,1, 2964,4, 1748,3, 1712,9, 1520,6,
1454,8, 1328,2, 1232,1 cm^{-1}: EMAR m/z calculada para
C_{17}H_{23}NO_{5}Na (M^{+}Na^{+}): 344,1498, hallada
344,1490: [\alpha]_{D}^{20} -27,85 (c 0,53 CHCl_{3});
Anal. calculada para C_{17}H_{23}NO_{5}: C, 63,52; H, 7,22;
N, 4,36. Hallada: C, 63,32; H, 7,15; N, 4,24.
Una solución que comprendía 2,797 gramos (8,7
milimoles) del compuesto 10 y 30 mililitros de metanol (MeOH) de
calidad para HPLC se enfrió a -78ºC y se añadieron 1,644 gramos
(30,5 milimoles) de borohidruro potásico (KBH_{4}) en porciones.
La mezcla resultante inicialmente se mantuvo agitando a -78ºC
durante 10 minutos. El recipiente de reacción después se calentó a
-20ºC y se mantuvo agitando durante 30 minutos, después de lo cual,
el recipiente de reacción se calentó a 0ºC y se mantuvo agitando
durante 10 minutos. La mezcla resultante se inactivó a 0ºC añadiendo
gota a gota una solución que comprendía ácido acético glacial hasta
que el pH de la fase acuosa era no menos de pH 6 al analizar con
papel de tornasol. La solución bifásica resultante neutralizada se
concentró a presión reducida y se añadieron 50 mililitros de una
solución que comprendía EtOAc y H_{2}O en una proporción de 1 a 1.
La fase orgánica se separó de la fase acuosa y se lavó con 10
mililitros de una solución saturada de NaCl. La fase orgánica lavada
se secó en presencia de Na_{2}SO_{4} se filtró y se concentró a
presión reducida. El producto en bruto así obtenido era de 2,786
gramos de un aceite incoloro constituido por una proporción 11:1 del
compuesto 11 y su estereosiómero, respectivamente. La cristalización
del aceite incoloro en una solución que comprendía éter y hexano
proporcionó el compuesto 11 puro en forma de un sólido cristalino
blanco con un rendimiento del 99%. Para el compuesto 11 se
obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,29
(EtOAc:hexano 35:65); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
0,83-0,85 (m, 3H), 0,89-0,92 (m,
3H), 1,19-1,23 (m, 1H) y 1,32-1,34
(m, 1H), 1,91,1,93 (m, 1H), 2,45-2,51 (dd, J_{1} =
16,7 Hz, J_{2} = 9,1 Hz, 1H) y 2,58-2,62 (dd,
J_{1} = 16,7 Hz, J_{2} = 2,7 Hz, 1H), 3,12-3,14
(d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,90-3,91 (m,
1H), 4,62-4,65 (d, J = 10,0 Hz, 1H),
5,07-5,08 (d, J = 5,1 Hz, 2H),
7,29-7,35 (m, 5H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 12,10, 13,64, 27,52, 34,28, 38,74, 52,25,
57,57, 67,39, 69,43, 128,50, 128,61, 128,97 y 136,82, 157,08,
174,09; IR (CHCl_{3}) 3421, 3316, 2951, 1709, 1537, 1443, 1229
cm^{-1}; EMAR m/z calculada para C_{17}H_{25}NO_{5}Na
(M^{+}Na^{+}): 346,1630, hallada 346,1645;
[\alpha]_{D}^{20} -10,9 (c 0,595, CHCl_{3}); Anal.
calculada para C_{17}H_{25}NO_{5}: C, 63,12; H, 7,80, N,4,33.
Hallada: C, 63,23; H, 7,85; N, 4,06.
Una solución que comprendía 0,8636 gramos (2,67
milimoles) de compuesto 11 en forma de un aceite incoloro y 10
mililitros de CH_{2}Cl_{2} se introdujo en atmósfera de argón y
se enfrió a 0ºC. Se añadió una solución que comprendía 0,778
mililitros (6,68 milimoles) de 2,6-lutidina, seguida
de la adición de una solución que comprendía 1,08 mililitros (4,01
milimoles) de triflato de triisopropilsililo
(i-Pr_{3}SiOTf). La mezcla de reacción inicialmente se
mantuvo agitando a 0ºC durante 30 minutos, después de lo cual, la
mezcla de reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 2
horas. La mezcla resultante se diluyó con 20 mililitros de
CH_{2}Cl_{2}. La fase de CH_{2}Cl_{2} se lavó una vez usando
15 mililitros de una solución al 10% de ácido clorhídrico (HCl), una
vez usando 15 mililitros de una solución al 5% de NaHCO_{3} y una
vez usando 15 mililitros de una solución saturada de NaCl. La fase
de CH_{2}Cl_{2} lavadaresultantese secó en presencia de
Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se concentró a presión. El
residuo concentrado se purificó por cromatografía ultrarrápida en
columna, eluyendo con soluciones formadas por éter y hexano en una
proporción desde 2 a 98, respectivamente, hasta 15 a 85,
respectivamente. La cromatografía proporcionó 1,204 gramos
(rendimiento del 94%) del compuesto 12 como isómero principal en
forma de un aceite incoloro. Para el compuesto 12 se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f} 0,65 (EtOAc:hexano 35:65); RMN
de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,84-0,91
(m, 6H), 0,99-1,05 (m, 21 H),
1,12-1,34 (m, 2H),
1,81-1,84(m, 1H), 2,54-2,62
(m, 2H), 3,54 (s, 3H), 3,73-3,75 (m, 1H),
4,34-4,36 (m,1H), 4,69-4,71 (d, J =
10,5 Hz, 1H), 5,01-5,04 (d, J = 12,3 Hz, 1H) y
5,09-5,11 (d, J = 12,3 Hz, 1H),
7,28-7,34 (m, 5H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 12,50, 12,74, 13,97, 18,08, 27,44, 34,40,
40,45, 51,54, 58,62, 66,67, 70,49, 128,03, 128,08, 128,46 y 136,67,
156,51, 172,00; IR (CHCl_{3}) 3450, 3359, 2944, 2863, 1728, 1510,
1459, 1434, 1384, 1308, 1232, 1171, 1090 cm^{-1} ; EMAR m/z
calculada para C_{26}H_{45}NSiO_{5}Na (M^{+}Na^{+}):
480,3145, hallada 480,3128; [\alpha]_{D}^{20} +15,88 (c
0,57, CHCl_{3}); Anal. calculada para C_{17}H_{25}NO_{5}: C,
65,09; H, 9,46, N, 2,92. Hallada: C, 64,80; H, 9,41, N, 2,69.
Una solución que comprendía NaOH 1 normal (20
mililitros, 11 milimoles) se añadió a una solución que comprendía
0,84 gramos (1,753 milimoles) de compuesto 12, 10 mililitros de THF
y 10 mililitros de MeOH, enfriado a 0ºC. Esta mezcla de reacción se
mantuvo agitando a 0ºC durante 2 horas. La mezcla de reacción
después se mantuvo agitando a temperatura ambiente toda la noche. La
mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se diluyó con
10 mililitros de H_{2}O. La mezcla resultante se enfrió a 0ºC en
un baño de hielo, se acidificó a pH 2 añadiendo una solución que
comprendía KHSO_{4} 1 normal y se extrajo 3 veces con alícuotas de
10 mililitros deEtOAc. Las fases de EtOAc se combinaron, se lavaron
con 10 mililitros de una solución saturada de NaCl, se secaron en
presencia de Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se
concentraron. Esta reacción proporcionó 0,7709 gramos (rendimiento
del 95%) del compuesto 13 en forma de una espuma blanca. El
compuesto 13 se usó en la reacción subsiguiente sin purificación.
Los datos analíticos para el compuesto 13 fueron los siguientes:
R_{f}, 0,08 (acetato de etilo:hexano 35:65); RMN de ^{1}H (500
MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-1,00 (m, 6H),
1,06-1,08 (m, 21H), 1,19-1,24 (m,
1H) y 1,64-1,72 (m, 1H), 1,85-1,92
(m, 1H), 2,50-2,80 (m, 2H),
3,60-3,80 (m, 1H), 4,28-4,33 (m,
1H), 4,86-4,88 (d, J = 10,4 Hz, 1H),
5,06-5,22 (m, 2H), 7,29-7,45 (m,
5H).
La síntesis de una forma protegida de
(2S)-\alpha-hidroxiisovalerilisostatina
(6) se representa en la Figura 26B. En la reacción G de la Figura
26B, Li-valina (14), se disolvió en una solución que
comprendía nitrito sódico (NaNO_{2}) y ácido sulfúrico 1 normal
(H_{2}SO_{4}). La reacción se llevó a cabo usando un
procedimiento estándar tal como se describe por ejemplo en Green y
Wutz (1999, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley,
Nueva York) o Bodansky (1993, Principles of Peptide
Synthesis, Springer, Berlín).
Esta reacción proporcionó
\alpha-hidroxivalina (15).
En la reacción H, se añadieron 2,46 gramos
(17,78 milimoles) de carbonato potásico anhidro (K_{2}CO_{3}) y
1,25 gramos (3,4 milimoles) de yoduro de tetrabutilamonio
(Bu_{4}NI) a una solución que comprendía 2 gramos (16,93
milimoles) de \alpha-hidroxivalina (15) y 20
mililitros de DMF redestilada seguido de la adición gota a gota de
5,86 mililitros (67,72 milimoles) de bromuro de alilo. La solución
resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla
de reacción se concentró a presión reducida, se diluyó con 20
mililitros de H_{2}O y se extrajo tres veces con alícuotas de 20
mililitros de éter. Las fases orgánicas combinadas se lavaron una
vez usando 15 mililitros de una solución al 10% de ácido clorhídrico
(HCl), una vez usando 15 mililitros de una solución al 5% de
NaHCO_{3} y una vez usando 15 mililitros de una solución saturada
de NaCl. Las fases orgánicas lavadas resultantes se secaron en
presencia de Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron a
presión reducida. Esta reacción proporcionó 2,53 gramos (rendimiento
del 96%) de compuesto 16 en forma de un aceite naranja. El Compuesto
16 se usó en la reacción subsiguiente sin purificación. Para el
compuesto 16 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f}
0,50 (EtOAc:hexano 25:75); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta 0,71-0,86 (d, J = 6,8 Hz, 3H),
0,92-1,00 (d, J = 7,0 Hz, 3H),
2,04-2,10 (m, 1H), 2,65-2,66 (d, J
= 6,1 Hz, 1H), 4,03-4,05 (dd, J_{1} = 5,9 Hz,
J_{2} = 3,5 Hz, 1H), 4,62-4,70 (m, 2H),
5,24-5,27 (dd, J_{1} = 10,4 Hz, J_{2} = 1,1 Hz,
1H) y 5,31-5,35 (dd, J_{1} = 17,2 Hz, J_{2} =
3,5 Hz, 1H), 5,86-5,94 (m, 1H); RMN de ^{13}C (250
MHz, CDCl_{3}) \delta15,93, 18,76, 32,17, 66,04, 75,03, 119,12,
131,48, 174,62; IR (CHCl_{3}) 3521-3458, 2964,
2880, 1735, 1646, 1462, 1367, 1257, 1204, 1136, 1073, 1026, 983, 931
cm^{-1}.
Una solución que comprendía 0,6827 gramos (1,47
milimoles) de compuesto 13 y 2,5 mililitros de tolueno recién
destilado se introdujo en atmósfera inerte y se enfrió a 0ºC. Se
añadió una solución que comprendía 0,232 gramos (1,47 milimoles) de
compuesto 16 y 2,5 mililitros de tolueno gota a gota a la solución
fría de compuesto 13, seguida de la adición de 0,333 gramos (1,61
milimoles) de diciclohexilcarbodiimida (DCC) y 0,036 gramos (0,29
milimoles) de DMAP. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 2
horas y se mantuvo a temperatura ambiente toda la noche. La reacción
se inactivó añadiendo 2 mililitros de una solución que comprendía
MeOH y ácido acético (AcOH) en una proporción de 1:2 y EtOAc y se
agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente. La mezcla
resultante se concentró a presión reducida. El residuo que quedó
tras este procedimiento se disolvió en 10 mililitros de éter, lo que
provocó la formación de un sólido, que se eliminó por filtración. El
filtrado se lavó una vez usando 10 mililitros de una solución al 10%
de ácido cítrico, una vez usando 10 mililitros de una solución al 5%
de NaHCO_{3} y una vez usando 10 mililitros de solución de
salmuera (es decir, un solución saturada de NaCl). La fase orgánica
se secó en presencia de Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se
concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía
ultrarrápida en columna, eluyendo con una mezcla de disolventes que
comprendía éter y hexano en una proporción desde 2 a 98,
respectivamente, hasta 12 a 88 respectivamente. La concentración del
eluyente a presión reducida proporcionó 0,5774 gramos (rendimiento
del 65%) de compuesto 11 en forma de un aceite incoloro. Para el
compuesto 17 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f}
0,55 (acetato de etilo:hexano 20:80); RMN de ^{1}H (500 MHz,
CDCl_{3}) \delta 0,85-1,08 (m, 33H),
1,16-1,19 (m, 1H), 1,34-1,36 (m,
1H), 1,80-1,82 (m, 1H), 2,18-2,21
(m, 1H), 2,68-2,73 (m, 2H),
3,78-3,82 (m, 1H), 4,37-4,42 (m,
1H), 4,55-4,64 (m, 2H), 4,77-4,78
(d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,86-4,88 (d, J = 10,7 Hz,
1H), 5,07 (s, 2H), 5,21-5,23 (dd, J_{1} = 9,4 Hz,
J_{2} = 0,9 Hz, 1H), 5,28-5,32 (dd, J_{1} =
17,0 Hz, J_{2} = 1,2 Hz, 1H), 5,83-5,87 (m, 1H),
7,27-7,34 (m, 5H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 12,69, 12,93, 14,14, 17,25, 18,12, 18,78,
26,33, 29,98, 34,48, 40,28, 58,15, 66,69, 68,67, 70,66, 76,74,
118,82, 128,01, 128,40, 128,47, 136,75, 131,63, 156,48, 169,13,
170,78; IR (CHCl_{3}) 3380, 2964, 2861, 1743, 1508, 1463, 1374,
1201, 1129, 994, 882 cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{33}H_{55}NSiO_{7}Na (M^{+}Na^{+}): 628,364552. hallada
628,365878; Anal. calculada para C_{33}H_{55}NSiO_{7}: C,
65,41; H, 9,16. Hallada: C, 65,09; H, 9,05.
En la reacción J, se añadió
tetrakis(trifenilfosfina)paladio
(Pd(PPh_{3})_{4}, 0,044 gramos, 0,038 milimoles) a
una solución que comprendía 0,2315 gramos (0,38 milimoles) del éster
arílico de isostatina-Hiv, compuesto 17, y 3
mililitros de THF recién destilado. Se añadió morfolina recién
destilada (0,33 mililitros, 3,8 milimoles) gota a gota a la mezcla
resultante. La adición de reactivos se realizó en una campana oscura
y la mezcla de reacción se mantuvo agitando a temperatura ambiente y
en una campana oscura durante al menos 8 horas. La mezcla de
reacción se concentró a presión reducida y se diluyó con 5
mililitros de CH_{2}Cl_{2}. La solución obtenida por este
procedimiento se lavó una vez con 5 mililitros de una solución que
comprendía HCl 1 normal y una vez usando 5 mililitros de H_{2}O.
La fase orgánica lavada se secó en presencia de Na_{2}SO_{4}
anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se
disolvió en 5 mililitros de éter, se filtró y se concentró de nuevo
a presión reducida. El residuo que quedó después de este
procedimiento era una espuma blanca que correspondía al compuesto 6
(0,218 gramos, rendimiento cuantitativo). El compuesto 6 se usó en
la reacción subsiguiente sin purificación.
La síntesis de un compuesto hexapéptido linear
(20) se representa en la Figura 26C. El compuesto 5 se preparó tal
como describen (Li y cols., 1990, J. Am. Chem. Soc.
112:7659-7672).
Una solución que comprendía 0,6653 gramos (0,74
milimoles) de compuesto 5 y 10 mililitros de MeOH se añadió a una
suspensión que comprendía 0,1996 gramos de paladio al 10% sobre
carbono (Pd/C), 10 mililitros de MeOH y 10 mililitros de EtOAc. La
mezcla de reacción se agitó usando un aparato Parr durante 5 horas a
temperatura ambiente. La suspensión resultante se filtró con Celite®
y el Celite® se lavó con un exceso de una mezcla de disolventes que
comprendía MeOH y EtOAc en una proporción de 1 a 1. El filtrado se
secó en presencia de Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se
concentró a presión reducida proporcionando el compuesto 18 (0,552
gramos, rendimiento del 98%). El compuesto 18 (es decir,
Leucilprolil-N,O-dimetiltirosina-N-Boc-O-SEM-treonina)
se obtuvo en forma de un sólido blanco usando este procedimiento y
se usó en la reacción subsiguiente sin purificación. Para el
compuesto 18 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f}
0,03 (acetona:hexano 40:60); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta -0,001 (s, 9H), 0,64-0,86 (m, 2H),
0,88-0,96 (m, 6H), 1,19-1,21 (d, J =
6,3 Hz), 1,33-1,34 (d, J = 6,3 Hz, 3H, RI), 1,44 (s,
9H), 1,63-1,92 (m, 3H), 1,92-2,01,
2,08-2,24 (m, 4H), 2,73 (s, 3H),
2,86-2,96 (m), 3,10-3,19 (m, 2H),
3,45-3,72 (m, 4H), 3,75 (s, 3H),
4,34-4,69 (m, 3H), 4,78-4,81 (dd, J,
= 8,0 Hz, J_{2} = 3,3 Hz, 1H), 5,01-5,10 (m, 1H),
5,17-5,52 (m), 7,58-7,60 (d, J =
9,7 Hz, 3H), 6,77-6,83 (m, 2H),
7,00-7,10 (m, 2H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta -1,46, 16,87, 17,96, 22,00, 23,19, 23,76,
25,14, 28,16, 29,31, 33,65, 39,31, 47,34, 50,54, 55,37, 55,46,
58,66, 62,25, 68,16, 72,36, 81,15, 89,83, 114,39, 128,75, 128,75,
130,47, 157,04, 158,84, 168,15, 168,95, 169,57, 173,13; IR
(CHCl_{3}) 3285, 2951, 1740, 1709, 1641, 1511, 1448, 1365, 1250,
1161 cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{37}H_{63}N_{4}SiO_{10} (M^{+}H^{+}): 751,4314,
hallada 751,4343; [\alpha]_{D}^{20} -44,68 (c 1,03,
CHCl_{3}); Anal. calculada para
C_{37}H_{62}N_{4}SiO_{10}: C, 59,17; H, 8,33; N, 7,46.
Hallada: C, 59,11; H, 8,35; N, 7,26.
En la reacción L, todo el producto del compuesto
6 de la reacción J se disolvió en 1 mililitro de CH_{2}Cl_{2}
recién destilado y se enfrió a 0ºC. A esta solución se añadieron
0,074 gramos (0,40 milimoles) de PFPOH, 0,088 gramos, (0,46
milimoles) de EDAC-HCl y 0,0093 gramos (0,076
milimoles) de DMAP. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 30
minutos. La mezcla de reacción se mantuvo a temperatura ambiente
durante otras 4 horas más y se diluyó con 10 mililitros de
CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se lavó una vez usando 5
mililitros de una solución al 10% de HCl, una vez usando 5
mililitros de una solución al 5% de NaHCO_{3} y una vez usando 5
mililitros de una solución saturada de NaCl. La fase de
CH_{2}Cl_{2} se secó en presencia de Na_{2}SO_{4} anhidro
se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante
se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna, eluyendo con
una mezcla de disolventes que comprendía éter y hexano en una
proporción desde 3 a 97, respectivamente, hasta 7 a 93
respectivamente. La concentración del eluyente a presión reducida
proporcionó 0,2315 gramos de un aceite incoloro que correspondía al
éster de PFP, compuesto 19 (rendimiento del 83% para la reacción J
de la Figura 26B y la reacción L de la Figura 26C). Para el
compuesto 19 se obtuvieron los siguientes datos analíticos:
R_{f}0,57(EtOAc:hexano 20:80); RMN de ^{1}H (500 MHz,
CDCl_{3}) \delta 0,86-1,09 (m, 33H),
1,18-1,20 (m, 1H), 1,27,1,29 (m, 1H), 1,84,1,86 (m,
1H), 2,31-2,36 (m, 1H), 2,69-2,72
(m, 1H), 2,80-2,85 (m, 1H),
3,79-3,82 (m, 1H), 4,38-4,42 (m,
1H), 4,78-4,80 (d, J = 10,7 Hz, 1H),
4,97-4,98 (d, J = 4,4 Hz, 1H),
5,00-5,06 (m, 2H), 7,25-7,29 (m,
5H); RMN de ^{13}C (250 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,72, 12,95,
14,01, 17,20, 18,09, 18,45, 27,52, 30,19, 34,40, 40,12, 58,17,
65,82, 66,74, 70,47, 127,92, 128,18, 128,33, 136,57, 138,83, 140,06,
140,65, 141,97, 156,56, 165,68, 170,76; IR (CHCl_{3}) 3480, 2962,
2868, 1793, 1730, 1516, 1464, 1381, 1214, 1094, 995, 880 cm^{-1};
EMAR m/z calculada para C_{36}H_{50}NF_{5}SiO_{7}Na
(M^{+}Na^{+}): 754,3174, hallada 754,3191.
Una solución que comprendía 0,2855 gramos (0,39
milimoles) de compuesto 19 y 1,5 mililitros de CH_{2}Cl_{2} se
enfrió a 0ºC en un baño de hielo. A esta solución se añadieron 0,17
mililitros (0,98 milimoles) de DIEA gota a gota y la mezcla
resultante se mantuvo agitando a 0ºC durante 20 minutos. Una
solución que comprendía 0,522 gramos de compuesto 18, 0,0095 gramos
(0,078 milimoles) de DMAP y 1,5 mililitros de CH_{2}Cl_{2} se
añadió a la solución que comprendía el compuesto 19 usando una
jeringuilla. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1 hora y se
mantuvo a temperatura ambiente durante 1 hora más. La reacción se
inactivó a 0ºC añadiendo 3 mililitros de una solución saturada de
NH_{4}Cl y diluyendo la reacción con 10 mililitros de
CH_{2}Cl_{2}. La mezcla resultante se separó a temperatura
ambiente. La fase acuosa se extrajo 3 veces usando alícuotas de 10
mililitros de CH_{2}Cl_{2} y las fases orgánicas combinadas se
lavaron una vez usando 10 mililitros de una solución al 10% de HCl,
una vez usando 10 mililitros de una solución al 5% de NaHCO_{3} y
una vez usando 10 mililitros de una solución saturada de NaCl. La
fase orgánica lavada se secó en presencia de Na_{2}SO_{4}
anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Esta reacción
proporcionó 0,4861 gramos (rendimiento del 96%) del hexapéptido
precursor completamente protegido, el compuesto 20. El compuesto 20
se obtuvo en forma de un espuma blanca usando este procedimiento y
se usó en la reacción subsiguiente sin purificación adiciona. Los
datos analíticos para el hexapéptido 20 fueron los siguientes:
R_{f} 0,47 (acetona: CH_{2}Cl_{2} 05:95); RMN de ^{1}H (500
MHz, CDCl_{3}) \delta -0,0008 (s, 9H), 0,7-0,83
(m, 2H), 0,85-0,92 (m, 9H),
0,92-1,08 (m, 21H), 1,45 (s, 9H),
1,13-2,19 (m, 11H), 2,43-2,46 (m,
1H) y 2,54-2,58 (m, 1H), 2,64 y 2,88 (s, 3H, RI),
3,09-3,17 (m, 2H), 3,44-3,73 (m,
4H), 3,75 (s, 3H), 3,79-3,89 (m, 1H),
4,38-4,45 (m, 1H), 4,21-4,35 (m,
3H), 4,70-4,81 (m, 1H), 4,96-5,06
(m, 3H), 5,18-5,43 (m, 3H) y
8,32-8,34 (d, J = 9,0 Hz, 3H),
5,46-5,48 (d, J = 6,1 Hz, 1H),
6,14-6,83 (m, 2H), 6,95-7,11 (m,
2H), 7,25-7,38 (m, 5H), 7,75-7,71
(d, J = 8,5 Hz) y 8,85-8,87 (d, J = 10,1 Hz, 2H);
RMN de ^{13}C (250 MHz, CDCl_{3}) \delta -1,45, 11,73, 12,73,
14,47, 16,54, 17,73, 17,99, 18,14, 18,92, 21,40, 23,54, 24,42,
25,13, 28,21, 28,21, 29,20, 29,67, 30,13, 33,59, 34,86, 39,58,
39,73, 46,87, 49,04, 55,13, 55,39, 56,90, 58,94, 62,24, 66,42,
68,12, 70,96, 72,25, 78,71, 80,39, 89,85, 113,92, 114,37, 127,70,
127,76, 127,86, 128,35, 128,45, 128,81, 128,91, 137,01, 130,44,
130,86, 156,39, 158,40, 158,82, 169,20, 169,75, 169,97, 170,58,
171,77, 173,85; IR (CHCl_{3}) 3275, 2952, 2868, 1735, 1704, 1636,
1511, 1454, 1380, 1365, 1250, 1167, 1110, 1047 cm^{-1}; EMAR
m/z calculada para C_{67}H_{111}N_{5}Si_{2}O_{16}Na
(M^{+}Na^{+}): 1320,7462, hallada 1320,7520;
[\alpha]_{D}^{20} -44,56 (c 1,13, CHCl_{3}); Anal.
calculada para C_{67}H_{111}N_{5}Si_{2}O_{16}: C, 61,95;
H, 8,62; N, 5,40. Hallada: C, 61,75: H, 8,59; N, 5,15.
La ciclación del hexapéptido 20 para
proporcionar el compuesto 21 se representa en la Figura 26D.
Una solución que comprendía 0,3505 gramos (0,27
milimoles) de compuesto 20 y 5 mililitros de CH_{2}Cl_{2} se
enfrió a 0ºC y se añadieron 0,21 gramos (0,81 milimoles) de eterato
de bromuro de magnesio (MgBr_{2}-Et_{2}O). La
mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 2 horas y se mantuvo a
temperatura ambiente durante otras 4 horas más. La mezcla de
reacción se diluyó añadiendo 10 mililitros de CH_{2}Cl_{2} y se
lavó una vez usando 10 mililitros de una solución al 10% de HCl y
una vez usando 10 mililitros de una solución saturada de NaCl. La
fase de CH_{2}Cl_{2} se secó en presencia de Na_{2}SO_{4}
anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. La espuma
blanca obtenida como producto de esta reacción de desprotección se
usó en la reacción de hidrogenólisis subsiguiente sin purificación.
Toda la espuma blanca producto (0,3195 gramos) se disolvió en 10
mililitros de MeOH y se sometió a hidrogenólisis tal como se
describe para la preparación del compuesto 18. Esta reacción de
hidrogenólisis proporcionó 0,296 gramos de una espuma blanca que se
usaron en la reacción de acoplamiento subsiguiente sin
purificación. El producto de la hidrogenólisis se disolvió en 27
mililitros de DMF recién destilada y se enfrió a 0ºC. A la solución
fría se añadieron 0,123 gramos (0,32 milimoles) de hexafluorofosfato
de
2-(1H-9-azobenzotriazol,1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
(HATU), seguido de la adición gota a gota de 0,141 mililitros (0,81
milimoles) de DlEA. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1
hora y se mantuvo agitando a temperatura ambiente durante al menos 8
horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se
diluyó con 10 mililitros de EtOAc y se lavó una vez usando 10
mililitros de una solución al 10% de HCl, una vez usando 10
mililitros de una solución al 5% de NaHCO_{3} y una vez usando 10
mililitros de una solución saturada de NaCl. La fase de
CH_{2}Cl_{2} se secó en presencia de Na_{2}SO_{4} anhidro,
se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo bruto
obtenido a partir de este procedimiento se purificó por
cromatografía ultrarrápida en columna usando una mezcla de
disolventes que comprendía acetona y hexano en una proporción desde
5 a 95, respectivamente, hasta 15 a 85, respectivamente. El eluyente
resultante se concentró a presión reducida proporcionando 0,173
gramos del macrociclo protegido, compuesto 21 en forma de una
espuma blanca. El rendimiento del compuesto 21 representa un
rendimiento del 63% para las tres reacciones empezando por el
compuesto 20 (es decir, las reacciones de desprotección,
hidrogenólisis y acoplamiento). Para el compuesto 21 se obtuvieron
los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,55 (acetona:hexano
30:70); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
0,78-1,07 (m, 39H), 1,21-1,48 (m,
17H), 1,56-1,92 (m, 4H), 1,95-2,11
(m, 2H), 2,4-2,44 (m, 1H),
3-11-3,17 (m, 1H), 2,53 (s, 3H),
2,89-3,02 (m, 1H), 3,30-3,34 (m,
1H), 3,49-3,52 (m, 1H), 3,60-3,62
(m, 1H), 3,66-3,70 (m, 1H), 3,77 (s, 3H),
4,14-4,19 (m, 1H), 4,37-4,43 (m,
1H), 4,46-4,48 (d, J = 7,6 Hz, 1H),
4,55-4,86 (m, 1H), 4,88-4,91 (m),
7,60-7,68 (m, 4H), 6,82-8,83 (d, J =
8,5 Hz, 2H), 7,06-7,07 (d, J = 8,5 Hz, 2H),
7,41-7,48 (m, 2H); RMN de ^{13}C (250 MHz,
CDCl_{3}) \delta 12,24, 12,66, 14,21, 15,11, 15,61, 17,98,
18,60, 18,74, 19,31, 21,10, 23,92, 25,24, 27,21, 28,42, 30,48,
34,87, 37,92, 39,00, 41,65, 47,10, 48,52, 55,67, 56,16, 57,25,
63,26, 66,33, 68,65, 71,78, 80,46, 81,66, 114,50, 130,31, 130,82,
156,40, 159,01, 169,13, 170,90, 171,34, 172,78, 176,75; IR
(CHCl_{3}) 3330, 2952, 2876, 1735, 1629, 1508, 1447, 1243, 1168,
1024, 843 cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{53}H_{89}N_{5}SiO_{12}Na (N4^{+}Na^{+}): 1038,6175,
hallada 1038,6166.
Las reacciones finales de la síntesis global de
(-) Tamandarina A, 101, se representan en la Figura 26E. El
compuesto 4 se preparó de la forma que se reseña anteriormente en Li
y cols. (1990, J. Am. Chem. Soc. 112:7659-7672).
Una solución que comprendía 167 miligramos
(0,165 milimoles) de macrociclo protegido (compuesto 21) y 20
mililitros de EtOAc se enfriaron a -30ºC. Se introdujo HCl gaseoso
en la solución y la temperatura de la mezcla de reacción se mantuvo
entre -10ºC y -20ºC durante la introducción de HCl. La mezcla de
reacción se agitó y se mantuvo a una temperatura de entre -10ºC y
-20ºC durante otros 30 minutos. La mezcla de reacción se calentó a
0ºC y se mantuvo a 0ºC durante 1 hora. El recipiente de reacción se
purgó con gas N_{2} durante al menos 30 minutos mientras que la
temperatura del recipiente se mantenía a 0ºC. La solución purgada se
calentó a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El
residuo que quedaba después de la concentración de la reacción se
trituró y se lavó por decantación usando tres alícuotas de 5
mililitros de una mezcla de disolventes que comprendía
terc-butilmetiléter y hexano en una proporción de 1
a 4 respectivamente. El sólido que se produjo mediante este
procedimiento se recolectó por filtración y se secó a presión
reducida proporcionando 127,5 miligramos (rendimiento cuantitativo)
de la sal clorhidrato del compuesto 22. El compuesto 22 se obtuvo en
forma de un sólido blanco y se usó en la reacción de acoplamiento
final sin purificación.
Una solución que comprendía 63,3 miligramos
(0,082 milimoles) de compuesto 22, 37,7 miligramos (0,12 milimoles)
de compuesto 4 y 0,50 mililitros de CH_{2}Cl_{2} se enfrió a 0ºC
en un baño de hielo. A esta solución fría se añadieron 53,1
miligramos (0,12 milimoles) de hexanuorofosfato de
benzotriazol-1-il-oxi-tris(dimetilamino)fosfonio
(BOP) y 0,035 mililitros (0,32 milimoles) de NMM. La mezcla de
reacción se agitó durante 30 minutos a 0ºC y se dejó calentar a
temperatura ambiente. La mezcla de reacción se mantuvo agitando a
temperatura ambiente durante al menos 8 horas más. La solución
resultante se diluyó con 2 mililitros de una solución saturada de
NaCl y se extrajo con 10 mililitros de EtOAc. La fase orgánica
extraída se lavó una vez usando 10 mililitros de una solución al 10%
de HCl, una vez usando 10 mililitros de una solución al 5% de
NaHCO_{3} y una vez usando 10 mililitros de una solución saturada
de NaCl. La fase orgánica lavada se secó en presencia de
Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se concentró a presión
reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía
ultrarrápida en columna usando una mezcla de disolventes que
comprendía MeOH y CH_{2}Cl_{2} en una proporción de 2 a 98,
respectivamente, a 5 a 95, respectivamente. Este procedimiento
proporcionó 0,0411 gramos de tamandarina A (compuesto 101) en forma
de un sólido amarillo verdoso. El rendimiento del compuesto 101 fue
del 56%, calculado para ambas reacciones O y P y 12% calculado para
las reacciones A-F, I, J y L-P (es
decir, empezando a partir de D-alo-isoleucina). Para
tamandarina A (101) se obtuvieron los siguientes datos analíticos:
R_{f} 0,57 (MeOH:CH_{2}Cl_{2} 10:90); RMN de ^{1}H (500
MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-1,08 (m, 24H),
1,19-2,30 (dd, J_{1} = 17,1 Hz, J_{2} = 7,9 Hz,
1H), 3,29-3,33 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 2,62 (s, 3H),
3,14 (s, 3H), 3,16-3,21 (dd, J_{1} = 14,4 Hz,
J_{2} = 11,1 Hz, 1H), 3,41-3,45 (m, 1H),
3,59-3,80 (m, 5H), 3,82 (s, 3H),
3,90-3,95 (m, 1H), 4,03-4,08 (m,
1H), 4,29-4,30 (m, 1H), 4,37-4,42
(m, 1H), 4,67-4,69 (m, 1H),
4,74-4,77 (m, 1H), 4,89-4,93 (m,
1H), 5,06 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 5,31-5,35 (q, J_{1}
= 11,6 Hz, J_{2} = 3,3 Hz, 1H), 5,44-5,46 (m, 1H),
6,86-6,88 (d, J = 8,3 Hz, 2H),
7,09-7,11 (d, J = 8,3 Hz, 2H),
7,37-7,39 (d, J = 9,1 Hz,1H),
7,48-7,50 (d, J = 5,1 Hz, 1H),
7,78-7,80 (d, J = 9,7 Hz, 1H); RMN de ^{13}C (260
MHz, CDCl_{3}) \delta 11,78, 14,07, 16,52, 17,55, 18,93, 20,28,
20,90, 21,32, 23,47, 23,79, 24,83, 24,90, 25,98, 27,33, 27,96,
28,40, 30,11, 31,26, 33,55, 33,93, 35,73, 38,70, 39,41, 39,65,
46,66, 47,02, 48,28, 54,91, 55,27, 56,71, 56,97, 51,90, 66,07,
66,22, 68,98, 70,70, 78,87, 114,08, 130,07, 130,33, 156,62, 168,52,
169,57, 170,11, 170,35, 170,59, 171,09, 172,67, 173,84, 174,53; IR
(CHCl_{3}) 3330, 2952, 2816, 1735, 1629, 1508, 1447, 1243, 1168,
1024, 843 cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{54}H_{85}N_{7}O_{14}Na (M^{+}Na^{+}): 1078,6052,
hallada 1078,6044; [\alpha]_{D}^{20} -43,93 (c 1,05,
CHCl_{3}).
Los inventores creen que la serie de reacciones
que se describe anteriormente representa la primera síntesis
estereoselectiva de (-) Tamandarina A.
Los experimentos que se describen en este
ejemplo demuestran que tamandarina A es un inhibidor de la síntesis
de proteínas y agente antitumoral eficaz. En la Tabla 1 se muestran
los resultados de la inhibición de la biosíntesis de proteínas
(columna 1), citotoxicidad (columna 2) y actividad antitumoral
(columna 3) de tamandarina A, comparados con el compuesto
antitumoral relacionado didemnina B. Los resultados de la Tabla 1 se
expresan en unidades de concentración del compuesto
seleccionado.
Tal como se usa en la presente memoria,
"IC_{50}" se refiere a la dosis de un compuesto que es capaz
de producir una inhibición del 50% del crecimiento celular. La
IC_{50} se evalúa comparando el crecimiento de las células a las
que se ha administrado un compuesto con el crecimiento de las mismas
células a las que no se ha administrado el compuesto.
Tal como se usa en la presente memoria,
"CL_{50}" se refiere a la dosis de un compuesto que es capaz
de producir una letalidad del 50% en las células. La CL_{50} se
evalúa comparando la muerte de las células en una población de
células a las que se ha administrado un compuesto con la muerte de
las células en una población de las mismas células a las que no se
ha administrado el compuesto.
"NCI-60" se refiere a una
línea tumoral 60 del Nacional Cancer Institute (NCI, Frederick, MD).
"NCI-60 Media" es la IC_{50} o LC_{50}
medias para el grupo tratado con el compuesto seleccionado.
Los hallazgos in vitro indican que
tamandarina A muestra una potencia comparable a la de didemnina A,
un agente anticanceroso conocido. Tamandarina A es
significativamente menos citotóxico en estos ensayos que didemnina
B. La comparación indica la utilidad de tamandarina A y otros
análogos de didemnina como agentes farmacológicos que tienen
actividades anticancerosas y otras actividades características de la
didemnina B.
En este ejemplo se describe un procedimiento
para sintetizar (-) deshidrotamandarina. El procedimiento implica al
compuesto macrocíclico 22, que puede generarse tal como se describe
en el Ejemplo 1. El procedimiento que se describe en este Ejemplo se
ilustra en la Figura 37 y comienza con la síntesis del compuesto 27,
que se representa en la Figura 37A.
A una solución que comprendía 0,1084 gramos
(0,33 milimoles) de compuesto 25 y 1 mililitro de CH_{2}Cl_{2}
recién destilado se añadieron 0,182 g (0,43 milimoles) de
peryodinano de Dess-martin. La mezcla resultante se
agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción
se diluyó con 10 mililitros de éter y se vertió en 6 mililitros de
una solución saturada de NaHCO_{3} que comprendía Na_{2}SO_{4}
al 5%. Se añadió otra alícuota de 10 mililitros de éter a la mezcla
bifásica y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó una vez
usando 10 mililitros de una solución saturada de NaHCO_{3} y una
vez usando 10 mililitros de agua. La fase orgánica lavada se secó
en presencia de Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se concentró a
presión reducida. El residuo obtenido por este procedimiento se
purificó por cromatografía ultrarrápida en columna, eluyendo con una
mezcla de disolventes que comprendía MeOH y CH_{2}Cl_{2} en una
proporción de 5 a 95, respectivamente, proporcionando 0,083 gramos
de compuesto 26 purificado (rendimiento del 77%) en forma de una
espuma blanca. Para el compuesto 26 se obtuvieron los siguientes
datos analíticos: R_{f} 0,61 (MeOH:CH_{2}Cl_{2} 10:90); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-1,05 (m,
6H), 1,41-1,54 (m, 1H), 1,70-1,74
(m, 2H), 1,87-1,89 (m,3H) y
2,05-2,19 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,91 (s, 2H),
3,59-3,63 (m, 2H), 3,70 (s, 3H),
4,95-4,98 (t, J = 7,97Hz, 1H),
5,11-5,13 (m, 1H); EMAR m/z calculada para
C_{16}H_{26}N_{2}O_{5} (M^{+}H^{+}): 327,1920, hallada
327,1912; [\alpha]_{D}^{20} +1,14 (c 0,49,
CHCl_{3}).
Una solución que comprendía 0,0678 gramos (0,21
milimoles) de compuesto 26, 4 mililitros de THF destilado y 4
mililitros de MeOH se enfrió a 0ºC. A esta solución, se añadieron 8
mililitros de una solución que comprendía LiOH 0,2 molar. La mezcla
de reacción inicialmente se mantuvo agitando a 0ºC durante 1 hora,
después la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se
mantuvo agitando durante al menos 8 horas más. La mezcla resultante
se concentró a presión reducida, se enfrió a 0ºC y se acidificó a pH
3 añadiendo KHSO_{4} 1 normal. La mezcla acidificada se extrajo
tres veces con alícuotas de 5 mililitros de EtOAc. Las fases de
EtOAc combinadas se secaron en presencia de Na_{2}SO_{4}
anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida
proporcionando 0,042 gramos (rendimiento del 64%) de compuesto 27 en
forma de un sólido blanco. Para el compuesto 27 se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta 0,86-1,03 (m, 6H),
1,35-1,50 (m, 1H), 1,70-1,77 (m,
2H), 1,85-1,93 (m, 2H) y 2,07-2,18
(m, 2H), 2,33 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,58-3,86 (m,
2H), 4,78-4,81 (m, 1H), 5,08-5,12
(m, 1H); RMN de ^{13}C (250 MHz, CDCl_{3}) \delta 21,26 y
22,55, 23,21, 24,64, 26,36 y 28,17, 31,16, 37,09, 45,70, 56,79,
58,66, 163,32, 173,12, 174,59, 199,07.
Una solución que comprendía 19,7 miligramos
(0,063 milimoles) de compuesto 27, 33,4 miligramos (0,042 milimoles)
de compuesto 22 y 0,50 mililitros de CH_{2}Cl_{2} se enfrió a
0ºC en un baño de hielo. A esta solución fría se añadieron 28
miligramos (0,063 milimoles) de BOP y 0,0185 mililitros (0,17
milimoles) de NMM. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos
a 0ºC y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla de
reacción se mantuvo agitando a temperatura ambiente durante al menos
8 horas más. La solución resultante se diluyó con 2 mililitros de
una solución saturada de NaCl y se extrajo con 10 mililitros de
EtOAc. La fase orgánica extraída se lavó una vez usando 5
mililitros de una solución al 10% de HCl, una vez usando 5
mililitros de una solución al 5% de NaHCO_{3} y una vez usando 5
mililitros de una solución saturada de NaCl. La fase orgánica lavada
se secó en presencia de Na_{2}SO_{4} se filtró y se concentró a
presión reducida. El residuo en bruto se purificó por cromatografía
ultrarrápida en columna, eluyendo con una combinación de mezclas de
disolventes que comprendía MeOH y CH_{2}Cl_{2} en proporciones
desde 2 a 98, respectivamente, hasta 10 a 90 respectivamente,
proporcionando 18,1 miligramos de deshidrotamandarina (compuesto
133) en forma de un sólido amarillo blanquecino. El rendimiento del
compuesto 133 fue del 41%, calculado para ambas reacciones O (es
decir, la desprotección del compuesto 21 proporcionando el compuesto
22 del Ejemplo 1) y S. Para deshidrotamandarina A se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f} 0,48 (MeOH:CH_{2}Cl_{2}
10:90); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
0,80-1,00 (m, 24H), 1,16-1,45 (m,
11H), 1,51-2,25 (m, 10H), 2,38-2,48
y 3,19-3,30 (m, 2H), 2,52-2,53 (d, J
= 6,2Hz, 3H), 2,57 (s, 3H), 3,04 y 3,08 (s, 3H, rotámeros),
3,12-3,16 (m, 1H) y 3,31-3,35 (m,
1H), 3,53-3,72 (m, 5H), 3,77 (s, 3H),
3,81-4,03 (m, 1H), 4,05-4,10 (m,
1H), 4,25-4,26 (m, 1H), 4,61-4,65
(m, 1H), 4,68-4,71 (m, 1H),
4,85-4,88 (m, 1H), 5,00-5,01 (d, J =
4,6 Hz, 1H), 5,15-5,20 (m, 1H),
5,28-5,31 (m, 1H), 6,81-6,83 (d, J =
7,5 Hz, 2H), 7,05-7,07 (d, J = 8,2 Hz, 2H),
7,28-7,30 (d, J = 9,8 Hz, 1H) y
7,33-7,35 (d, J = 10,2 Hz, 1H),
7,39-7,40 (d, J = 5,5 Hz, 1H),
7,72-7,74 (d, J = 9,7 Hz, 1H) y
7,78-7,80 (d, J = 9,7 Hz, 1H); RMN de ^{13}C (500
MHz, CDCl_{3}) \delta 11,80, 14,11, 16,52, 17,63, 18,91, 20,87,
21,33, 22,32, 23,53, 24,89 (superposición), 24,83, 27,08, 27,35,
27,99, 29,62, 30,13, 31,00, 33,56, 34,04, 35,10, 35,84, 38,90,
39,65, 46,72, 48,29, 48,81, 54,78, 55,27 (superposición), 56,91,
57,46, 58,91, 66,10, 68,92, 70,90, 78,94, 114,12, 130,00, 130,36,
158,68, 161,50, 168,43, 169,59, 170,61, 171,00, 172,26, 173,00,
174,52, 197,36: IR (KBr) 3339, 2960, 2927, 2872, 1736 1715, 1655,
1633, 1508, 1460, 1438, 1248, 1177, 1085,1031, 830 cm^{-1}; EMAR
m/z calculada para C_{54}H_{53}N_{7}O_{14}Na
(M^{+}Na^{+}): 1076,5896, hallada 1076,5946;
[\alpha]_{D}^{20} - 35,29 (c 0,35, CHCl_{3}).
[\alpha]_{D}^{20} - 35,29 (c 0,35, CHCl_{3}).
En este ejemplo se describe un procedimiento
para sintetizar un compuesto de didemnina fluorescente, compuesto
108. Como en el Ejemplo 3, el procedimiento que se ilustra en este
Ejemplo implica al compuesto macrocíclico 22, que puede generarse
tal como se describe en el Ejemplo 1. El procedimiento que se
describe en este Ejemplo se ilustra en la Figura 38 y comienza con
la síntesis del compuesto 206a, que se representa en la Figura
38A.
Una solución que comprendía 10,00 gramos (49,5
milimoles) de 1,3-acetonadicarboxilato dietílico,
7,12 gramos (51,9 milimoles) de m-dimetilaminofenol,
8,56 gramos (62,8 milimoles) de cloruro de cinc y 25 mililitros de
etanol absoluto se mantuvieron a reflujo durante 13 horas. La mezcla
de reacción se diluyó con 50 mililitros de EtOAc y se lavó usando25
mililitros de H_{2}O. La fase acuosa obtenida a partir de este
procedimiento se extrajo tres veces con alícuotas de 50 mililitros
de EtOAc. Las fases de EtOAc combinadas se secaron en presencia de
sulfato de magnesio anhidro (MgSO_{4}), se filtraron y se
concentraron a presión reducida. El sólido en bruto resultante se
recristalizó en etanol absoluto proporcionando 2,64 gramos
(rendimiento del 20%) de compuesto 205a en forma de cristales
naranjas. Para el compuesto 205B se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: pf 131-132ºC; R_{f} 0,20
(acetona/hexano 30:70); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta 1,22 (3H, t, J = 7,1 Hz), 3,01 (6H, 5), 3,64 (2H, s), 4,15
(2H, q, J =7,2 Hz), 6,02 (1H, s), 6,48 (1H, d, J = 2,6 Hz), 6,58 (1
H, dd, J_{1} = 2,6 Hz, J_{2} = 8,9 Hz), 1,37 (1H, d, J = 8,9);
RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta 14,02, 38,16, 40,01,
61,49, 98,28, 108,45, 108,93, 110,63,125,22, 148,39, 152,91, 155,89,
161,65, 169,01; IR (KBf) 2901 (w), 1720 (s), 1600 (s), 1534 (m),
1484 (m), 1427 (m), 1405 (s), 1371 (m), 1330 (m), 1232 (m)
cm^{-1}; EMAR calculada para C_{15}H_{15}NO_{4} (M^{+}H):
276,1236, hallada 276,1244, Anal. calculada para
C_{15}H_{17}NO_{4}: C, 65,43; H, 6,23; N, 5,09. Hallada: C,
65,26; H, 6,36; N, 5,03.
Una solución que comprendía 0,46 gramos (11,0
milimoles) de hidróxido de litio (LiOH-H_{2}O) y
25 mililitros de H_{2}O se añadió a una solución que comprendía
1,50 gramos (5,5 milimoles) de compuesto 205b y 10 mililitros de
THF. La mezcla de reacción se mantuvo agitando a temperatura
ambiente durante 2,5 horas. La solución resultante se lavó con 10
mililitros de éter y se acidificó a pH 2. Al acidificar se formó un
precipitado y se recolectó por filtración. El precipitado estaba que
comprendía 0,364 gramos de compuesto 205b en forma de cristales
amarillos. Para el compuesto 205b se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: pf 166-167ºC, RMN de ^{1}H (500 MHz,
CDCl_{3}/DMSO) \delta 3,01 (6H, s), 3,62 (2H, 5), 6,00 (1H, 5),
6,44 (1H, d, J = 2,3 Hz), 6,58 (1H, del, J_{1} = 2,4 Hz, J_{2} =
8,9 Hz), 1,40 (1H, d, J = 9,0 Hz); RMN de ^{13}C (125 MHz,
CDCl_{3}/DMSO) \delta 38,42, 40,25, 98,34, 108,89, 109,35,
110,67, 125,84, 149,59, 153,22, 156,15, 162,00, 111,33; IR (KBr)
2923(m), 1690(s), 1619(s), 1534(m),
1404(m), 1248(m), 1145 (m), 1055(m) cm^{-1};
EMAR calculada para C_{13}H_{14}NO_{4} (M^{+}H): 248,0922,
hallada 248,0929.
Una solución que comprendía 0,364 gramos (1,47
milimoles) de compuesto 205b y 5 mililitros de CH_{2}Cl_{2}
recién destilado se introdujo en atmósfera de argón y se enfrió a
ºC. A esta solución se añadieron 0,282 gramos (1,47 milimoles) de
EDAC\cdotHCl y 0,035 gramos (0,29 milimoles) de DMAP. La mezcla
resultante se agitó durante 10 minutos y se añadieron 0,246 gramos
(1,47 milimoles) de éster terc-butílico de glicina.
La mezcla de reacción se mantuvo agitando a 0ºC durante 2 horas, se
calentó a temperatura ambiente y se mantuvo a temperatura ambiente
durante al menos 8 horas más. La mezcla de reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} y se lavó una vez usando 10 mililitros de una
solución al 10% de HCl y una vez usando 10 mililitros de una
solución saturada de NaCl. Las fases combinadas, lavadas con
CH_{2}Cl_{2} se secaron en presencia de MgSO_{4} anhidro, se
filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo
resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna,
eluyendo con una mezcla de disolventes que comprendía cantidades
iguales de EtOAc y CH_{2}Cl_{2} proporcionando 0,250 gramos
(rendimiento del 42%) de compuesto 206a en forma de un sólido
amarillo. Para el compuesto se obtuvieron los siguientes datos
analíticos 206a: RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,42
(s, 9H), 3,03 (s, 6H), 3,64 (s, 2H), 3,88 (d, J = 5,12 Hz, 2H), 6,05
(s, 1H), 6,48 (brs, 1H), 6,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,60 (dd, J_{1}
= 2,6 Hz, J_{2} = 8,9 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,9 Hz, 1H); RMN de
^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta 168,5, 167,8, 161,6, 156,0,
153,1, 149,2, 125,6, 110,5, 109,2, 108,3, 98,3, 82,5, 42,4, 40,3,
40,1, 27,9; IR (CHCl_{3}) 3450, 1679, 1618, 1530, 1405, 1310,
1230, 1151 cm^{-1}; EMAR (Cl) m/z calculada para
C_{19}H_{24}N_{2}O_{5} (M^{+}): 360,1685, Hallada
360,1686. Anal. calculada para C_{19}H_{24}N_{2}O_{5}: C,
63,30; H, 6,72; N, 7,78. Hallada: C, 62,99; H, 6,60;
N, 7,52.
N, 7,52.
Una solución que comprendía 0,250 gramos (0,69
milimoles) de éster terc-butílico de
Gly-DACA, compuesto 206a y CH_{2}Cl_{2} se
enfrió a 0ºC y se mantuvo durante 10 minutos. A la solución fría se
añadió una solución que comprendía ácido trifluoroacético al 10%
(TFA) gota a gota. Esta adición se completó en 10 minutos. La mezcla
resultante se mantuvo agitando a temperatura ambiente durante al
menos 8 horas. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad usando
una rotavator y el residuo resultante, compuesto por 0,033 gramos
(0,108 milimoles) de compuesto 206b, se usó en la reacción
subsiguiente sin purificación adicional.
Una solución que comprendía 0,033 gramos (0,108
milimoles) de compuesto 206b y CH_{2}Cl_{2} se enfrió a 0ºC. A
la solución fría se añadieron 0,027 gramos (0,108 milimoles) de BOP
y 0,012 gramos (0,108 milimoles) de NMM. La mezcla resultante se
mantuvo en agitación durante 30 minutos. Se añadió un exceso de
éster metílico de
N-metil-D-leucina a
la mezcla en agitación, después mantener la reacción agitando a 0ºC
durante al menos 8 horas. La mezcla de reacción se diluyó con
CH_{2}Cl_{2} y se lavó una vez usando 10 mililitros de una
solución al 10% de HCl y una vez usando 10 mililitros de una
solución saturada de NaCl. Las fases de CH_{2}Cl_{2} combinadas
y lavadas se secaron en presencia de MgSO_{4} anhidro, se
filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo
resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna,
eluyendo con una mezcla de disolventes que comprendía cantidades
iguales de EtOAc y CH_{2}Cl_{2}. La evaporación del eluyente
proporcionó 0,030 gramos (rendimiento del 63%) de compuesto 201a en
forma de un sólido amarillo. Para el compuesto 207a se obtuvieron
los siguientes datos analíticos: [\alpha]_{D}^{20}
+19,08 (c 0,865, CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta 0,87 (d, J = 6,52 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 6,79 Hz, 3H), 1,40
(m, 1H), 1,69 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 3,01 (s, 6H), 3,63 (s, 2H),
3,67 (s, 3H), 4,06 (m, 2H), 5,22 (dd, J_{1} = 10,6 Hz, J_{2} =
5,2 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 6,47 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,57 (dd,
J_{1} = 2,5 Hz, J_{2} = 8,9 Hz, 1H), 6,76 (brs, 1H), 7,42 (d, J
= 8,9 Hz, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta 171,7,
168,6, 167,8, 161,6, 155,9, 152,9, 149,1, 125,4, 110,5, 109,1,
108,4, 98,3, 54,7, 52,3, 41,8, 40,1, 39,9, 37,1, 30,0, 24,8, 23,1,
21,3 cm^{-1}, EMAR m/z calculada para
C_{23}H_{31}N_{3}O_{6} (M^{+}Na^{+}): 468,2111, Hallada
468,2133.
Una solución que comprendía 0,135 gramos (0,304
milimoles) de compuesto 207b y THF se enfrió a 0ºC y se añadió una
solución que comprendía 0,025 gramos (0,606 milimoles) de
LiOH\cdotH_{2}O en 2 mililitros de agua. Esta adición se
completó en un periodo de 5 minutos. La mezcla resultante se mantuvo
agitando a 0ºC durante 30 minutos y después se calentó a temperatura
ambiente. La mezcla de reacción se mantuvo a temperatura ambiente
durante 1,5 horas y después se lavó dos veces usando alícuotas de 4
mililitros de éter. La fase acuosa lavada se evaporó a sequedad a
presión reducida. El residuo resultante, que comprendía el compuesto
207b, se disolvió en una solución que comprendía 2 mililitros de
agua y 4 mililitros de EtOAc, se enfrió a 0ºC y se acidificó a pH 2
añadiendo una solución que comprendía KHSO 1 normal. La fase acuosa
separada formada por este procedimiento se lavó dos veces con
alícuotas de 4 mililitros de EtOAc. Las fases orgánicas combinadas
se secaron en presencia de MgSO_{4} anhidro, se filtraron y se
concentraron a sequedad a presión reducida. El residuo resultante de
este procedimiento comprendía 0,010 gramos (0,023 milimoles) de
compuesto 207b y se usó en la reacción subsiguiente sin
purificación.
Una solución que comprendía 0,010 gramos (0,023
milimoles) de compuesto 207b y CH_{2}Cl_{2} se enfrió a 0ºC. A
esta solución fría se añadieron 0,010 gramos (0,023 milimoles) de
BOP y 0,010 mililitros (0,092 milimoles) de NMM. La mezcla
resultante se mantuvo agitando a 0ºC durante 10 minutos y se añadió
la sal clorhidrato del compuesto 22 (0,018 gramos, 0,023
milimoles). La reacción se mantuvo a 0ºC durante 1 hora y a
temperatura ambiente durante al menos otras 8 horas. La solución
resultante se diluyó con 1 mililitro de salmuera y se extrajo dos
veces usando alícuotas de 2 mililitros de EtOAc. La fase orgánica
formada por extracción se lavó una vez usando 1 mililitro de una
solución al 10% de HCl y dos veces usando alícuotas de 1 mililitro
de agua. La fase orgánica lavada se secó en presencia de MgSO_{4}
anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo
resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con
una mezcla de disolventes que comprendía acetona y hexano en una
proporción de 30 a 70 respectivamente. La evaporación del eluido
proporcionó 0,008 gramos (rendimiento del 30%) de compuesto 107
fluorescente. Para el compuesto 107 se obtuvieron los siguientes
datos analíticos: [\alpha]_{D}^{20} -160,1 (c 0,3,
CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
0,73-0,93 (m, 24H), 1,07-1,74 (m,
15H), 2,04 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 2,31 (m, 2H), 2,53
(s, 4H), 2,84 (s, 2H), 3,03 (5, 6H), 3,17 (brd, J = 10,4 Hz, 2H),
3,35 (m, 1H), 3,51 (m, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,99 (brd,
2H), 4,08-4,12 (m, 3H), 4,55-4,56
(m, 1H), 4,78-4,80 (m, 1H),
4,82-5,01 (m, 2H), 5,13-5,14 (brd,
1H), 6,08 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 6,61 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,83 (d,
J = 8,54 Hz, 2H), 7,07 (d, J = 8,35 Hz, 2H),
7,24-7,41 (m, 3H), 7,51 (d, J = 8,90 Hz, 1H), 7,81
(d, J = 8,65 Hz, 1H); IR (KBr) 3462, 2953, 2358, 1732, 1658, 1632,
1555, 1538, 1456 cm^{-1}: EMAR m/z calculada para
C_{64}H_{92}NaO_{16} (M^{+}Na^{+}): 1251, 6529. Hallada
1251, 6528,
Se usó un enlace sencillo de aminometileno para
sustituir el enlace amida entre D-leucina y
L-prolina de la cadena lateral de didemnina B. En
síntesis, el enlace aminometileno se preparó mediante aminación
reductora, tal como describen (Abdel-Magid y cols.,
1990, Tetrahedron lett. 31:5595-5598;
Abdel-Magid y cols., 1990, Synlett.
537-539).
En un primer procedimiento de síntesis, se
realizó una metilación exhaustiva de
Cbz-D-leucina usando dimetilsulfato,
tal como se ilustra en la Figura 41. El grupo Cbz se eliminó usando
hidrogenólisis proporcionando la amina libre de
D-leucina dimetildada (Compuesto 40). La amina se
usó en la aminación reductora sin purificación.
L-prolina disponible comercialmente se esterificó
primero usando SOCl_{2} en MeOH y su grupo amino se protegió
subsiguientemente usando BOC_{2}O. Después de purificar, la
función éster se redujo a un aldehído en dos etapas. NaBH_{4} se
combinó con LiCl generando LiBH_{4} in situ y este
compuesto se usó para reducir el éster al alcohol correspondiente.
La oxidación con reactivo SO_{3}\cdotpiridina proporcionó el
aldehído, denominado compuesto 42, con buen rendimiento. Podía
realizarse la reducción del éster al aldehído en una etapa usando
DIBAL, pero dependía de lo fresco que estuviera el reactivo reductor
y no era muy reproducible. La aminación reductora entre el aldehído
denominado compuesto 40 y la amina libre (compuesto 42) proporcionó
el compuesto 43. El grupo Boc del compuesto 43 se eliminó usando
TFA/CH_{2}Cl_{2}. La amina libre resultante se acopló a ácido
pirúvico usando BOP proporcionando la cadena lateral
\psi(CH_{2}NH) protegida denominada compuesto 44.
La etapa siguiente era la hidrólisis del éster
metílico del compuesto 44. Pero esta etapa demostró no ser trivial.
Quizá debido a un impedimento estérico, el éster metílico era
difícil de escindir usando 2 equivalentes de LiOH\cdotH_{2}O en
THF/H_{2}O.
Cuando la cantidad de LiOH\cdotH_{2}O se
aumentó a 10 equivalentes, el éster metílico pareció hidrolizarse,
dado que el espectro de masas de la mezcla de reacción mostró el
pico ácido. Pero el ácido era tan hidrófilo y estaba tan enterrado
en el exceso de sales inorgánicas, que no fue posible extraerlo con
ningún disolvente orgánico. Los presentes inventores también
trataron de precipitar el ácido usando éter pero sólo precipitaron
las sales inorgánicas. Debido a este problema de purificación, los
presentes inventores decidieron no usar el éster metílico para
proteger el ácido. Los presentes inventores necesitaban un grupo
protector que pudiera sobrevivir a todas las etapas de síntesis
pero no necesitara condiciones acuosas para su eliminación. Se
encontró que el grupo bencilo servía bien para este fin.
El procedimiento de síntesis se modificó tal
como se indica en la Figura 42. Para ser compatible con el éster
bencílico, el grupo amino de leucina se protegió mediante Boc en
lugar de Cbz. La metilación selectiva del grupo amino proporcionó el
ácido denominado compuesto 46. El ácido libre se benciló
proporcionando el éster bencílico deseado, el compuesto 47. El grupo
protector Boc se eliminó usando TFA. La amina resultante (compuesto
48) se condensó con prolina protegida mediante aminación reductora.
La eliminación del grupo protector Boc y el enfriamiento
subsiguiente con ácido pirúvico proporcionó el compuesto 50. Se usó
hidrogenólisis para eliminar el grupo bencilo y proporcionó la
cadena lateral \psi(CH_{2}NH) deseada en forma del ácido
libre (compuesto 51). El acoplamiento de la cadena lateral del
ácido libre con un macrociclo de didemnina proporcionó el análogo de
didemnina con desoxoprolina deseado denominado compuesto 12.
Se sintetizó un segundo análogo de didemnina con
desoxoprolina (denominado compuesto 72a) usando una estrategia de
síntesis similar, tal como se ilustra en la Figura 43 y se describe
en detalle a continuación
Una solución de
N-Boc-D-leucina (1,0
gramo, 4,1 milimoles) en 20 mililitros de DMF se enfrió a 0ºC. Se
añadió LiCO_{3} finalmente molido (1,5 gramos, 20,5 milimoles),
seguido de la adición de bromuro de bencilo (2,43 mililitros, 20,5
milimoles). La mezcla de reacción se agitó durante 6 horas y se
controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la mezcla de
reacción se diluyó con H_{2}O y se extrajo con EtOAc tres veces.
Los extractos en EtOAc se combinaron y se lavaron con salmuera. La
DMF se eliminó a vacío. La mezcla en bruto se purificó por
cromatografía en columna eluyendo con acetona al 20% en hexano
proporcionando el compuesto 46 con un rendimiento del 78%. Para el
compuesto 46 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f}
0,60 (acetona al 40% en hexano); [\alpha]_{D}^{25} +16
(c = 1,0, CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3})
\delta H_{a}) 0,92 (m, 6H), H_{b}) 1,48 (s, 9H), H_{c})
1,50-1,59 (m, 1H), H_{d})
1,60-1,69 (dd, 2H), H_{e}) 4,36 (m, 1H), H_{f})
4,90 (d, 1H), H_{g}) 5,11-5,20 (m, 2H), H_{h})
7,33(m, 5H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta
C_{a}) 21,8, C_{a'}) 22,7, C_{c}) 24,7, C_{b}) 28,2,
C_{d}) 41,6, C_{e}) 52,1, C_{g}) 66,7, C_{i}) 79,6,
C_{h}) 128,0, 128,2, 128,4, C_{i}) 135,5, C_{j}) 155,3,
C_{k}) 173,2; IR (puro) 3367 (br), 2958 (s), 1732 (s), 1715 (s),
1500 (s), 1455 (m), 1366 (w), 1120 (m) cm^{-1}; EMAR m/z
calculada para C_{11}H_{23}N_{4}O_{2} (M^{+}H) 322,2011,
encontrada 322,2018.
Una solución de compuesto 46 (1,2 gramos, 3,74
milimoles) en 200 mililitros de THF se enfrió a 0ºC. Se añadió
NaHMDS (1 molar en THF; 5,6 mililitros, 5,6 ml/mol), seguido de la
adición de yoduro metílico (1,0 mililitro, 18,7 milimoles). La
mezcla de reacción se agitó toda la noche y se controló por TLC.
Cuando se completó la reacción, la mezcla de reacción se diluyó con
éter. La fase orgánica se lavó con HCl al 5%, NaHCO_{3} al 5% y
salmuera. La solución resultante se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se
concentró. La mezcla en bruto se purificó por cromatografía en
columna, eluyendo con acetona al 20% en hexano proporcionando el
compuesto 47 con un rendimiento del 71%. Para el compuesto 47 se
obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,56 (acetona
al 30% en hexano); [\alpha]_{D}^{25} +20,4 (c = 1,2,
CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{d})
H_{a}) 0,85-0,90 (m, 6H), H_{c}) y H_{d})
1,35-1,65 (m, 3H), H_{b}) 1,45 (s, 9H), H_{e})
2,75 (d, 3H), H_{f}) 4,53-4,58 y
4,81-4,88 (rm, 1H), H_{g}) 5,10(s, 2H),
H_{h}) 7,15-7,28 (m, 5H); RMN de ^{13}C (125
MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 22,0 y 23,5, C_{b}) 25,8,
C_{c}) 29,0, C_{d}) 31,0, C_{e}) 38,0, C_{f}) 57,0,
C_{g}) 66,1, C_{i}) 80,2, C_{h}) 128,0, 128,2, 128,4, C_{l})
136,5, C_{j})156,3, C_{k}) 173,2; IR (puro) 2958,3 (m),
1742,7 (s), 1696,8 (s), 1455,6 (s), 1390,7 (s), 1366,6 (s), 1323,5
(s), 1151,3 (s) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{11}H_{23}N_{4}O_{2} (M^{+}H) 336,2174, hallada
336,2178.
Compuesto 47 (0,1 gramos) se disolvió en
HCl\cdotdioxano (5 mililitros) y se agitó a temperatura ambiente.
Cuando se completó la reacción, el disolvente se eliminó a vacío.
Se añadió tolueno dos veces y se concentró. El residuo se secó a
presión reducida toda la noche proporcionando la sal HCl deseada
(compuesto 48) en un 98%. Para el compuesto 48 se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f}: inicial (MeOH al 10% /
CH_{2}Cl_{2}): [\alpha]_{D}^{25} 1,1 +48,5 (c =
0,2, CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
H_{a}) 0,91 (d, 6H), H_{b}) 1,75 (m, 1H), H_{c})
1,90-1,95 (dd, 2H), H_{d}) 2,71 (s, 3H), H_{e})
3,83 (t, 1H), H_{f}) 5,20-5,30 (rm, 2H), H_{g})
7,35-1,40 (m, SH), H_{h}) 9,85 y 10,15(br,
2H): RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 21,8 y
23,4, C_{c}) 25,8, C_{b}) 31,9, C_{d}) 38,2, C_{e}) 60,1,
C_{f}) 68,8, C_{g}) 128,4, 128,6, 128,8, C_{j}) 134,6,
C_{i}) 168,2; IR (puro) 2958,3 (m), 1742 (s), 1696 (s), 1455 (s),
1390 (s), 1366 (s), 1323 (s), 1151 (s) cm^{-1}; EMAR m/z
calculada para C_{11}H_{23}N_{4}O_{2} (M^{+}H) 336,2174,
hallada 336,2178.
N-Boc-L-prolina
disponible comercialmente (5,0 gramos, 23,2 milimoles) se disolvió
en acetona (200 mililitros). Se añadió K_{2}CO_{3} (3,8 gramos,
27,84 milimoles) a 0ºC, seguido de la adición de Mel (2,9
mililitros, 46,4 milimoles). La mezcla de reacción se agitó toda la
noche. La reacción se inactivó con solución de NaHCO_{3} al 5% y
se extrajo con éter. Las fases de éter combinadas se lavaron con HCl
al 5% y salmuera y se concentraron proporcionando el producto en
bruto (compuesto 41) con un rendimiento del 91%. Este compuesto se
purificó por cromatografía en columna eluyendo con acetona al 20%
en hexano. Para el compuesto 41 se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} 0,4 (acetona al 30% en hexano);
[\alpha]_{D}^{25} -61,2 (c = 0,8, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a}) 1,45 (s, 9H),
H_{b}) 1,98 (dd, 2H), H_{c}) 1,88 y 2,22 (m, rm, 2H), H_{d})
3,42-3,58 (m, 2H), H_{e}) 3,74 (s, 3H), H_{f})
4,24 y 4,35 (rm, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3})
\delta C_{b}) 24,2 y 24,4, C_{a}) 28,3, C_{c}) 31,6 y 31,8,
C_{d}) 47,3, C_{f}) 52,1, C_{e}) 59,7, C_{g}) 80,1, C_{h})
153,8, C_{i}) 174,0; IR (puro) 2915 (m), 1749 (s), 1700 (s), 1396
(s), 1365 (s), 1200 (s), 1161 (s), 1151 (s); EMAR m/z
calculada para C_{11}H_{23}N_{4}O_{2} (M^{+}H) 230,1391,
hallada 230,1389.
El compuesto 41 se disolvió en 200 mililitros de
THF/EtOH (1:1). Se añadió LiCl (1,8 gramos, 32,7 milimoles) y
NaBH_{4} (1,2 gramos, 32,7 milimoles) en porciones a 0ºC. La
mezcla de reacción se agitó toda la noche y se controló por TLC; se
añadieron más LiCI y NaBH_{4} durante la operación. Cuando se
completó la reacción, el sólido blanco se recolectó y se lavó con
éter. El disolvente se eliminó usando una rotavator. El residuo se
neutralizó a pH 4 y después se extrajo dos veces con EtOAc. Los
extractos en EtOAc se combinaron, se lavaron con salmuera, se
secaron y se concentraron. El producto en bruto se purificó por
cromatografía en columna eluyendo con acetona al 10% en hexano
proporcionando el alcohol deseado (compuesto 41a) con un rendimiento
del 83%. Para el compuesto 41a se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} 0,30 (acetona al 30% en hexano);
[\alpha]_{D}^{25} -60,0 (c = 0,8, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a}) 1,48 (s, 9H),
H_{b}) 1,60 y 2,05 (rm, 2H) H_{c}) 1,83-1,98
(dd, 2H), H_{d}) 3,35 y 3,45 (rm, 2H), H_{e})
3-61-3,70 (m, 2H), H_{f}) 4,03 (m,
1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{c}) 23,8,
C_{a}) 28,4, C_{b}) 28,9, C_{f}) 47,3, C_{e}) 59,9, C_{d})
67,3, C_{g}) 80,0, C_{h})156,8; IR (puro) 3424 (br),
2973 (s), 2877 (s), 1695 (s), 1670 (s), 1477 (s), 1406 (s), 1366,2
(s); EMAR m/z calculada para C_{11}H_{23}N_{4}O_{2}
(M^{+}H) 202,1443, hallada 202,1449.
Una solución de compuesto 41a (2,0 gramos, 9,9
milimoles) y Et_{3}N en 200 mililitros de CH_{2}Cl_{2} se
enfrió a -78ºC. Se añadió complejo de
SO_{3}-piridina (4,7 gramos, 29,7 milimoles) en
DMSO (30 mililitros) a la solución anterior. La mezcla de reacción
se calentó a temperatura ambiente, se agitó toda la noche y se
controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la mezcla de
reacción se diluyó con éter. La fase orgánica se lavó con HCl al
5%, NaHCO_{3} al 5% y salmuera. La solución resultante se secó
sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró. La mezcla en bruto se
purificó con una columna corta proporcionando el aldehído deseado
(compuesto 42) con un rendimiento del 81%. Para el compuesto 42 se
obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,55 (acetona
al 30% en hexano); [\alpha]_{D}^{25} +20,4- (c = 1,2,
CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
1,45 (s, 9H), H_{b}) 1,75-1,90 (m, 2H), H_{c})
1,90-2,15 (m, 2H), H_{d})
3,20-3,50 (t, 2H), H_{e})
3,90-4,20 (d, 1H), H_{f}) 9,72 (d, 1H); RMN de
^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{b}) 24,0, C_{c})
27,3, C_{a}) 28,9, C_{d}) 47,5, C_{e}) 65,5, C_{g}) 80,1,
C_{h}) 154,2, C_{i}) 200,1.
El compuesto 42 (0,1 gramos, 0,5 milimoles) se
disolvió en CH_{2}Cl_{2} (8 mililitros) y se añadió la amina
libre del compuesto 48 (0,15 gramos, 0,55 milimoles) agitando
eficazmente. A 0ºC, se añadió AcOH (0,02 mililitros, 0,3 milimoles)
en forma de catalizador y se agitó durante 10 minutos antes de
añadir NaBH(OAc)_{3} (0,13 gramos, 0,6 milimoles) a
la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente y se controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la
mezcla se diluyó con CH_{2}Cl_{2}. El exceso de reactivo se
inactivó mediante la adición gota a gota de solución saturada de
NH_{4}Cl. La fase orgánica se lavó con HCl al 5%, NaHCO_{3} al
5% y salmuera, se secó y se concentró. El producto en bruto se
purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con EtOAc al 20%
en éter de petróleo proporcionando la amina deseada (compuesto
43).
Para el compuesto 43 se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f} 0,50 (acetona al 30% en
hexano); [\alpha]_{D}^{25} -44,0 (c = 1,1,
CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
0,92 (m, 6H), H_{b}) 1,45 (s, 9H), H_{c}), H_{d}) y H_{e})
1,50-1,90 (m, 5H), H_{f}) y H_{g})
2,3-2,45 (m, 5H), H_{h1})
2,22-2,90 (m, 1H), H_{h2}) y H_{i})
3,25-3,4 (m, 3H), H_{j}) y H_{k})
3,70-3,95 (m, 2H), H_{l}) 5,35 (m, 5H), H_{m})
7,30 (m, 5H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta
C_{a}) 22,2, C_{d}) 23,4, C_{c}) 25,6, C_{b}) 28,4, C_{e})
28,8, C_{g}) 36,6, C_{f}) 38,4, C_{h}) 46,2, C_{I}) 56,1,
C_{j})58,5, C_{i}) 56,2, C_{k}) 66,0, C_{n}) 79,6,
C_{m}) 128,2, C_{q}) 136,2, C_{o}) 154,1, C_{p}) 174,2; IR
(puro) 2955 (s), 2868 (s), 1730 (s), 1693 (s), 1455 (s), 1392
(s),1364 (s), 1170 (s) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{24}H_{38}N_{2}O_{4} (M^{+}H) 419,2910, hallada
419,2897.
El compuesto 43 (0,1 gramos) se disolvió en
HCl-dioxano (5 mililitros) y la solución se agitó a
temperatura ambiente. Cuando se completó la reacción, todo el
disolvente se eliminó a vacío. Se añadió tolueno dos veces y se
concentró. El residuo se secó a presión reducida toda la noche
proporcionando la sal HCl deseada (compuesto 44) con un rendimiento
del 98%. Para el compuesto 44 se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} inicial (AE al 60% en EP);
[\alpha]_{D}^{25} +15,3 (c = 0,6, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
0,91-1,10 (d, 6H), H_{b}), H_{c}) y H_{d})
1,6-2,30 (m, 5H), H_{e}) 2,83 (dd, 2H), H_{i})
3,12 (s, 3H), H_{g}) y H_{h}) 3,31-3,65 (m, 4H),
H_{i}) y H_{j}) 4,11-4,30 (m, 2H), H_{k})
5,28 (s, 2H), H_{k}) 7,40 (m, 5H); RMN de ^{13}C (125 MHz,
CDCl_{3}) \delta C_{c}) 20,8, C_{b}) 23,5, C_{a}) 25,9,
C_{d}) 26,1, C_{e}) 36,2, C_{f}) 462, C_{g}) 55,8, C_{h})
61,6, C_{i}) 64,2, C_{j}) 61,0, C_{k}) 68,2, C_{l}) 125,0,
128,0, 128,8, 128,9 y 134,1, C_{n}) 137,9, C_{m}) 167,0; IR
(puro) 2954 (s), 2360 (s), 2336 (s), 1740 (s), 1455 (s), 1389 (s),
1197 (s), 1141 (s); cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{19}H_{30}N_{2}O_{2} (M^{+}H) 319,2386, hallada
319,2392.
El compuesto 44 (20 miligramos, 0,063 milimoles)
se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (0,5 mililitros) y se añadió ácido
láctico (5,55 miligramos, 0,063 milimoles) a 0ºC, seguido de la
adición de BOP (28 miligramos, 0,063 milimoles y NMM (0,035
mililitros, 0,31 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC y
se controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la mezcla de
reacción se diluyó con éter. La fase orgánica se lavó con HCl al
5%, NaHCO_{3} al 5% y salmuera. La solución resultante se secó
sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró. La mezcla en bruto se
purificó por cromatografía en columna, eluyendo con acetona al 30%
en hexano proporcionando el compuesto 50a con un rendimiento del
61%. Para el compuesto 50a se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} 0,50 (acetona al 50% /hexano);
[\alpha]_{D}^{25} +21,0 (c = 0,2, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
0,82-0,92 (d, 6H), H_{b}) 1,20 (d, 3H), H_{c})
1,45-1,66 (m, 2H), H_{d})
1,66-1,72 (m, 1H), H_{e}) y H_{f})
1,76-1,90 (m, 4H), H_{g}) y H_{h})
225-2,45 (m, 5H), H_{i}), H_{j}) y H_{k})
3,19-3,85 (m, 4H), H_{l})
4,10-4,21 (rm, 1H), H_{m})
5,05-5,18 (s, 2H), H_{n})
1,12-7,38 (m, 5H); RMN de ^{13}C (125 MHz,
CDCl_{3}) \delta C_{a}) 22,0, C_{c}) 22,8, C_{d}) 24,2,
C_{e}) 24,8, C_{b}) 25,4, C_{f}) 28,1, C_{g}) 37,8,
C_{h}) 38,6, C_{i}) 45,8, C_{j}) 46,2, C_{k}) 56,0,
C_{l}) 56,8, C_{m}) 66,0, C_{n}) 128,8, C_{o}) 136,1,
C_{p}) 173,8, C_{q}) 114,1; IR (puro), 3415 (br), 2955 (s),
2869 (m), 1729 (s), 1638 (s), 1455 (m), 1379 (m), 1366 (m), 1147
(m), 1126 (m): EMAR m/z calculada para -N_{2}O_{4}
(M^{+}Na) 413,2416, hallada 413,2423.
El compuesto 50a (20 miligramos, 0,063
milimoles) se disolvió en 0,5 mililitros de MeOH/EtOAc (1:1). La
mezcla se añadió a una solución de MeOH y EtOH (1:1) que contenía
catalizador Pd/C (10 miligramos). La mezcla de reacción se agitó en
un hidrogenador Parr en atmósfera de H_{2} (40 libras por pulgada
cuadrada (2,815 kilogramos por centímetro cuadrado)) y se controló
por TLC. Cuando se completó la reacción, el catalizador se eliminó
por filtración. La solución restante se concentró a vacío. El
producto en bruto (compuesto 51a) se usó directamente en la etapa
siguiente. Para el compuesto 51a se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} 0,20 (MeOH al 10% en CH_{2}Cl_{2});
[\alpha]_{D}^{25} +65,0 (c = 0,2, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
0,82-0,92 (d, 6H), H_{b}) 1,34 (d, 3H), H_{c})
1,45-1,55 (m, 1H), H_{d})
1,78-1,91 (m, 2H), H_{e}) 1,91-2,0
(m, 2H), H_{f}) 2,0-2,18 (m, 2H), H_{g}) 2,81
(s, 3H), H_{h}) 3,03-3,18 (d, 2H), H_{i})
3,45-3,54 (m, 1H), H_{j})
3,56-3,68 (t, 2H), H_{k})
4,25-4,35 (m, 1H), H_{i})
4,40-4,49 (m, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz,
CDCl_{3}) \delta C_{a}) 21,0, C_{b}) 22,8, C_{c}) 23,4,
C_{d}) 24,8, C_{e}) 25,8, C_{f}) 29,4, C_{g}) 36,5, C_{h})
38,6, C_{i}) 47,2, C_{j}) 55,2, C_{k}) 66,4, C_{l}) 68,2,
C_{m}) 172,4, C_{n}) 176,2; IR (puro), 3336 (br), 2957 (s),
2870 (m), 1718 (m), 1621 (s), 1466 (s), 1368 (s), 1250 (m), 1197
(w), 1128 (w); EMAR m/z calculada para
C_{15}H_{27}N_{2}O_{4} (M^{+}Na) 323,1947, hallada
323,1939.
El ácido en bruto (12,5 miligramos, 0,038
milimoles) se combinó con la sal HCl del macrociclo (15,0
miligramos, 0,019 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (0,25 mililitros) a
0°C. Se añadieron HATU (8,2 miligramos, 0,020 milimoles) y DIEA
(0,026 mililitros, 4 equivalentes). La reacción se agitó a 0ºC toda
la noche y se controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la
mezcla se diluyó con Et_{2}O y la fase orgánica se lavó con HCl al
5%, NaHCO_{3} al 5% y salmuera. La solución resultante se secó
sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró. El residuo en bruto se
purificó por cromatografía en columna eluyendo con MeOH al 5% en
CH_{2}Cl_{2} proporcionando el producto deseado (compuesto 72a)
con rendimiento del 72%. Para el compuesto 72a se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f} 0,40 (MeOH al 10% en
CH_{2}Cl_{2}): [\alpha]_{D}^{25} +81,2 (c = 0,15,
CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
0,85-0,97 (m, 24H), H_{b})
1,17-1,27 (m, 2H), H_{c})
1,28-1,39 (s, 3H), H_{d}) 1,40 (d, 3H), H_{e})
1,43 (d, 3H), H_{f}) 1,46-1,50 (m, 1H) y 1,61 (t,
1H), H_{g}) 1,68-1,73 (m, 1H), H_{h})
1,74-1,79 (m, 1H), H_{i})
1,82-1,88 (m, 2H), 2,02-2,08 (m,
1H) y 2,11-2,17 (m, 2H), H_{j}) 2,34,2,31 (m, 1H),
H_{k}) 2,57 (s, 3H), H_{l}) 2,38 (d, 2H), H_{m}) 3,18 y 3,39
(dd, 1H), H_{n}) 2,83 (s, 3H), H_{o}) 3,37-3,57
(m, 2H), H_{p}) 3,60 (d, 1H), H_{q}) 3,70-3,73
(m, 1H), H_{r}) 3,80 (s, 3H), H_{s}) 4,05-4,14
(m, 3H) y 4,36-4,48 (m, 2H), H_{t}) 4,27 (q, 1H),
H_{u}) 4,56 (dd, 1H), H_{v}) 4,65 (dd, 1H), H_{w}) 4,81 (1,
1H), H_{x}) 5,19 (d, 1H), H_{y}) 5,35 (dd, 1H), H_{z}) 5,42
(dd, 1H), H_{aa}) 5,61 (dd,1H), H_{bb})
5,71-5,75 (m, 1H), H_{cc}) 6,11 (dd, 1H),
H_{dd}) 6,85 (d, 2H), H_{ee}) 7,08 (d, 2H), H_{ff}) 7,20 (d,
1H), H_{gg}) 7,54 (d, 1H), H_{hh}) 7,78 (d, 1H); RMN de ^{13}C
(125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}), C_{c}) 11,7, 14,7, 15,2,
16,3, 16,9, 18,6, 20,1 y 20,9, C_{d}) 23,3, C_{e}) 23,7,
C_{b}) 24,8 y 27,2, C_{i}) 24,9, 25,0 y 33,9, C_{f}) 27,9,
C_{g})31,2, C_{h}) 31,3, C_{j}) 33,9, C_{l}) 36,2,
C_{m}) 38,7, C_{k}) 38,8, C_{n}) 41,3, C_{o}) 46,9, C_{q})
49,46, C_{s}) 49,52,53,0 y 67,9, C_{r}) 55,3, G_{v}) 55,4,
C_{w)} 55,5, C_{u}) 57,2, C_{y}) 57,6, C_{t}) 63,9,
C_{aa}) 65,9, C_{s}) 66,4, C_{p}) 66,5, C_{x}) 10,4,
C_{z}) 81,5, C_{dd}) 114,1, C_{cc}) 124,0, C_{bb}) 129,1,
C_{ii}) 130,0, C_{ee}) 130,3, C_{ij}) 158,6, C_{kk}) 168,6,
169,3, 170,5, 170,6, 171,3, 171,5, 172,4, 173,9, C_{ll}) 204,9; IR
(puro) 3331 (br), 2956 (s), 2871 (m), 1732 (s), 1638,3 (br,
superposición), 1543 (m), 1513 (s), 1448 (m), 1379 (m), 1247 (w),
1167 (w) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{57}H_{91}N_{7}O_{14} (M^{+}H) 1098,6702, hallada
1098,6726.
La síntesis de la unidad
3,4-deshidroprolina empezó con
trans-4-hidroxi-L-prolina
(compuesto 62), que se produjo tal como describen (Rueger y cols.,
1982, Can. J. Chem. 60:2918; véase la Figura 44). El ácido se
protegió primero en forma de su éster etílico. El grupo amino se
protegió además usando Boc_{2}O proporcionando el compuesto 53. El
grupo hidroxilo se mesiló usando MsCl y piridina. El mesilato (es
decir, el residuo de sulfonato metílico del compuesto 53) fue
desplazado por bencenoselenuro sódico con inversión de la
estereoquímica proporcionando el compuesto 54. La eliminación
oxidativa del grupo fenilselenio proporcionó el alqueno
correspondiente (compuesto 55) con un rendimiento del 73%.
Si el compuesto 54 se exponía directamente a
condiciones de eliminación básica, podían generarse dos
regioisómeros. Pero la eliminación oxidativa del compuesto 54 con
fenilselenio como intermedio proporcionó sólo el regioisómero
deseado. Esta regioselectividad puede deberse al hecho de que el
estado de transición que produce el isómero no deseado tiene un
momento bipolar mayor con energía más elevada.
La hidrólisis del éster etílico (compuesto 55)
proporcionó el ácido de deshidroprolina libre (compuesto 58), que se
acopló a éster de D-leucina proporcionando el
compuesto 57. La hidrólisis del éster metílico proporcionó el ácido
libre, que se acopló a la sal del macrociclo de didemnina usando
HATU proporcionando el compuesto 58. El grupo protector Boc se
eliminó usando gas HCl y la sal HCl se neutralizó usando solución
saturada de NaHCO_{3} proporcionando el análogo final, el
compuesto 59.
Las etapas de esta síntesis se describen a
continuación en mayor detalle.
N-Boc-trans-4-hidroxiprolinato
etílico (compuesto 53). Sal clorhidrato de
trans-4-hidroxi prolinato etílico
(1,0 gramos. 0,005 moles) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} saturado
(10 mililitros). Se añadió Et_{3}N (2,09 mililitros, 0,015 moles)
a 0ºC, seguido de la adición de Boc_{2}O (2,23 g, 0,01 moles). La
mezcla de reacción se agitó toda la noche. Cuando se completó la
reacción, se midió el pH y entonces era de 8. La mezcla de reacción
se lavó con éter y la fase de éter se desechó. La fase acuosa se
acidificó con KHSO_{4} 1 normal a pH 4, seguido de la extracción
tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se
combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron.
La mezcla en bruto se purificó por cromatografía en columna,
eluyendo con acetona al 20% en hexano proporcionando el producto
deseado (compuesto 53) con un rendimiento del 71%.
Para el compuesto 53 se obtuvieron los
siguientes datos analíticos: R_{f} 0,50 (acetona al 40% en
hexano); [\alpha]_{D}^{25} +71,3 (c = 0,2, CHCl_{3});
RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
1,07-1,13 (1, 6H), H_{b})
1,32-1,36 (m, 9H), H_{c})
1,84-2,15 (m, dr, 2H), H_{d})
3,23-3,49 (m, dr, 2H), H_{e})
3,78-3,95 (br, 1H), H_{f})
3,96-4,09 (m, 2H), H_{g})
4,17-4,26 (m, 1H), H_{h})
4,27-4,32 (t, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz,
CDCl_{3}) \delta C_{a}) 14,0, C_{b}) 28,1, C_{c}) 38,2,
C_{d}) 54,2, C_{f}) 57,7, C_{g}) 61,0, C_{h}) 69,0, C_{i})
80,0, C_{j}) 153,9, C_{k}) 172,6: IR (puro) 3448 (br), 2978
(s), 2935 (m), 1746 (m), 1702 (s), 1676 (s), 1477 (m), 1402 (s),
1367 (m), 1339 (m) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{11}H_{23}N_{4}O^{2} (M^{+}H) 260,1497, hallada
260,1503.
\vskip1.000000\baselineskip
N-Boc-cis-4-fenilselenil-L-prolinato
etílico (compuesto 54). Borohidruro sódico (0,15 gramos, 0,004
moles) se añadió en porciones pequeñas, a temperatura ambiente, a
una solución de diselenuro difenílico (0,556 gramos, 0,0018 moles)
en EtOH. La mezcla se agitó durante aproximadamente 5 minutos, hasta
que desapareció el color amarillo brillante. Se añadió el mesilato
preparado anteriormente (1,0 gramo, 0,003 moles), la solución se
sometió a reflujo durante 2 horas y el disolvente se eliminó a
vacío. El residuo se diluyó con Et_{2}O (5 mililitros) y la fase
orgánica se lavó con H_{2}O (10 mililitros) y salmuera. La fase
orgánica resultante se secó y se concentró. El aceite en bruto se
purificó por cromatografía en columna, eluyendo con acetona al 10%
/hexano proporcionando el producto (compuesto 54) con un rendimiento
del 85%. Para el compuesto 54 se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} 0,53 (acetona al 30% en hexano);
[\alpha]_{D}^{25} -16,4 (c = 0,3, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
1,21-1,24 (t, 3H), H_{b}) 1,45 (s, 9H), H_{c})
2,05 y 2,66 (dr, 2H), H_{d}) 3,40 (m, 1H), H_{e}) 3,58 (m, 1H),
H_{f1}) 3,95 (m, 1H), H_{f2}) y H_{g})
4,10-428 (m, 2H), H_{h}) 7,25-7,55
(m, 5H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a})
14,0, C_{b}) 28,2, C_{c}) 36,1, C_{d}) 39,8, C_{e}) 53,6,
C_{f}) 58,8, C_{g}) 60,8, C_{i}) 80,2, C_{h}) 127,0, 128,2,
134,3, C_{j}) 152,8, C_{k}) 171,8; IR (puro) 2977,0, 1747,1,
1701,9, 1477,4, 1394,4, 1190,1, 1114,1 (m) cm^{-1}; EMAR
m/z calculada para C_{18}H_{25}NO_{4}Se (M^{+}H)
399,0948, hallada 399,0957.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
N-Boc-3,4-deshidro-L-protinato
etílico (compuesto 55). Una mezcla de compuesto 54 (0,9 gramos, 2,26
milimoles) y CH_{2}Cl_{2} inicialmente se enfrió a 0ºC en un
baño de hielo. Se añadió piridina (0,27 mililitros, 3,4 milimoles)
gota a gota a esta solución. Después se añadió gradualmente una
solución acuosa de H_{2}O_{2} al 30% (0,58 mililitros) durante
un periodo de 5 minutos. La reacción se agitó a temperatura ambiente
durante 1 hora y después se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se
lavó con HCl al 5%, solución saturada de Na_{2}CO_{3} y
salmuera. La solución resultante se secó y se concentró. El residuo
se purificó por cromatografía en columna proporcionando el producto
deseado (compuesto 55) con un rendimiento del 73%. Para el compuesto
55 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: Rf 0,63 (acetona
al 30% en hexano); [\alpha]_{D}^{25} -32,3 (c = 0,3,
CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
1,15-1,30 (t, 3H), H_{b}) 1,45 (s, 9H), H_{c}) y
H_{d}) 4,15-4,30 (m, 4H), H_{e}) 4,98 (d, 1H),
H_{f}) 5,75 (dt, 1H), H_{g}) 5,95 (dd, 1H); RMN de ^{13}C
(125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 14,1, C_{b}) 29,2,
C_{c}) 53,8, C_{d}) 61,8, C_{e}) 67,0, C_{h}) 80,1,
C_{f}) 125,0, C_{g}) 129,2, C_{i}) 154,0, C_{j}) 170,2; IR
(puro) 3458 (br), 2979 (s), 1786 (s), 1750 (s), 1710 (s), 1448 (m),
1395 (m), 1369 (s), 1318 (s), 1258 (m), 1159 (s), 1896 (m)
cm^{-1}; EMAR m/z calculada para C_{12}H_{19}NO_{4}
(M^{+}H) 242,1392, hallada 242,1386.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
N-Boc-3,4-deshidro-L-prolina
(compuesto 56). El éster etílico 55 (0,18 gramos, 0,8 milimoles) se
disolvió en THF/H_{2}O (1:1, 10 mililitros). Se añadió
LiOH-H_{2}O (0,33 gramos, 8 milimoles) a la
solución a 0ºC. La mezcla se agitó durante aproximadamente 6 horas y
se controló por TLC. Cuando la reacción se completó, el THF se
eliminó a vacío. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} y se
lavó con éter dos veces. Todas las fases acuosas se combinaron y se
acidificaron a pH 4 con KHSO_{4} 1 normal. Se usó acetato de etilo
para extraer la solución acuosa acidificada tres veces. Los
extractos se secaron y se concentraron proporcionando el ácido
deseado (compuesto 56) con un rendimiento del 92%. Para el compuesto
56 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,20
(acetona al 30% en hexano); [\alpha]_{D}^{25} +8,4 (c =
0,2, CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
H_{a}) 1,49 (s, rm, 9H), H_{b}) 4,25 (d, 2H), H_{c}) 5,05 (d,
1H), H_{d}) 5,80 (dt, 1H), H_{e}) 6,01 (dd, 1H), H_{f}) 8,40
(br, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a})
28,9, C_{b}) 53,9, C_{c}) 66,2, C_{g}) 81,8, C_{d}) 124,2,
C_{e}) 129,9, C_{h}) 154,5, C_{i}) 165,3; IR (puro)
3000-3400 (br), 2957 (s), 1736 (s), 1704 (s), 1666
(s), 1400,2 (s), 1367 (m), 1177 (s), 1136 (s) cm^{-1}; EMAR
m/z calculada para C_{10}H_{15}NO_{4} (M^{+}H)
213,1079, hallada 242,1086.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
N-Boc-3,4-deshidro-L-prolil-metil-N-metil-Leucinato
(compuesto 57). El compuesto 56 (0,1 gramos, 0,469 milimoles) se
disolvió en CH_{2}Cl_{2} (5 mililitros). A 0ºC, se añadió HATU
(0,26 gramos, 0,58 milimoles), seguido de la adición de DIEA (0,26
mililitros, 1,88 milimoles). Finalmente se añadió sal clorhidrato de
D-leucina (0,09 gramos, 0,469 milimoles) a la
mezcla. La mezcla de reacción se agitó durante 6 horas y se controló
por TLC. Cuando se completó la reacción, la mezcla se diluyó con
Et_{2}O y la fase orgánica se lavó con HCl al 5%, NaHCO_{3} al
5% y salmuera. La solución resultante se secó y se concentró. El
residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna
proporcionando el producto deseado (compuesto 57) con un rendimiento
del 76%. Para el compuesto 57 se obtuvieron los siguientes datos
analíticos: R_{f} 0,32 (acetona al 30% en hexano):
[\alpha]_{D}^{25}-22,7 (c =
0,4,CHCl_{3}): RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
H_{a}) 0,90-1,05 (d, rm, 6H), H_{b}) 1,48 (s,
rm, 9H), H_{c}) y H_{d}) 1,65-1,80 (m, 3H),
H_{e}) 3,05 (s, 3H), H_{f}) 3,75 (s, 3H), H_{g})
4,26-4,35 (m, 2H), H_{h}) 5,28 (t, 1H), H_{i})
5,40(d, 1H), H_{j}) 5,70 (dt, 1H), H_{k}) 6,01 (dd, 1H);
RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 22,0, 23,8,
C_{c}) 25,2, C_{b}) 29,0, C_{d}) 37,8, C_{e}) 52,2, C_{h})
53,8, C_{i}) 65,8, C_{l}) 80,0, C_{j}) 124,0, C_{k}) 129,2,
C_{m}) 159,5, C_{n}) 171,0, C_{o}) 172,2; IR (puro) 2956 (s),
1743 (s), 1705 (s), 1661 (s),1400 (s), 1366 (m), 1316 (w), 1258
(w), 1177 (m), 1128 (m) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para
C_{18}H_{30}N_{2}O_{5} (M^{+}H) 355,2233, hallada
355,2225.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
N-Boc-3,4-Deshidro-L-Prolil-N-Metil-leucina
(compuesto 57a). El compuesto 57 (0,13 gramos, 0,37 milimoles) se
disolvió en THF/H_{2}O (1:1,5 mililitros). Se añadió
LiOH\cdotH_{2}O (0,15 gramos, 3,7 milimoles) a la solución a
0ºC. La mezcla se agitó durante aproximadamente 6 horas y se
controló por TLC. Cuando se completó la reacción, el THF se eliminó
a vacío. Se añadió solución saturada de NaHCO_{3} y se lavó con
éter dos veces. Todas las fases acuosas se combinaron y se
acidificaron a pH 4 con KHSO_{4} 1 normal, se usó acetato de
etilo para extraer la solución acuosa acidificada tres veces. Los
extractos se secaron y se concentraron proporcionando el ácido
deseado (compuesto 57a) con un rendimiento del 92%. Para el
compuesto 57a se obtuvieron los siguientes datos analíticos:
R_{f} 0,20 (acetona al 40% en hexano);
[\alpha]_{D}^{25} +52,3 (c = 0,2, CHCl_{3}); RMN de
^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a})
0,85-1,05 (d, rm, 6H), H_{b}) 1,48 (s, rm, 9H),
H_{e}) y H_{d}) 1,65-1,92 (m, 3H), H_{e}) 3,12
(s, rm, 3H), H_{f}) br, 1H, H_{g}) 4,10-4,28
(m, 2H), H_{h}) 5,15 (t, 1H), H_{i}) 5,35 (d, 1t,f), H_{j})
5,70 (dt, 1H), H_{k}) 6,01 (dd,1H); RMN de ^{13}C (125 MHz,
CDCl_{3}) \delta C_{a}) 23,3, 24,5, C_{c}) 25,0, C_{b})
28,3, C_{d}) 31,5, C_{g}) 38,5, C_{e}) 53,6, C_{i}) 55,8,
C_{h}) 65,2, C_{l}) 80,0, C_{j}) 124,1, C_{k}) 129,5,
C_{m}) 153,8, C_{n}) 171,3, C_{o}) 175,3: IR (puro) 3300 (br),
2957 (s), 1731 (m), 1783 (s), 1667 (s), 1612 (m), 1481 (m), 1400
(s), 1367 (m), 1177 (s), 1136,7 (s) cm^{-1}; EMAR m/z calculada
para C_{17}H_{25}N_{2}O_{5} (M^{+}H) 341,2076, hallada
341,2063.
Ciclo[N-(N-Boc-3,4-deshidro-L-prolil-N-metil-D-leucil)-O[[N-[(2S,3S,4S)-4[(3S,4R,5S)-4-amino-3-hidroxi-5-
metil-heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetilhexanoil)-L-leucil]-L-prolil-N,O-dimetil-L-tirosil]-L-treonilo) (compuesto 58). El ácido en bruto 57a (5,0 miligramos, 0,012 milimoles) se combinó con la sal HCl del macrociclo (14,9 miligramos, 0,012 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (0,1 mililitro) a 0ºC. Se añadieron HATU (48 miligramos, 0,012 milimoles) y DIEA (0,048 mililitros, 0,048 milimoles). La reacción se agitó a 0ºC toda la noche y se controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la mezcla se diluyó con Et_{2}O y la fase orgánica se lavó con HCl al 5%, NaHCO_{3} al 5% y salmuera. La solución resultante se secó y se concentró. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 5% en CH_{2}Cl_{2} proporcionando el producto deseado (compuesto 58) con un rendimiento del 72%. Para el compuesto 58 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,40 (MeOH al 10% en CH_{2}Cl_{2}); [\alpha]_{D}^{25} -83,2 (c = 0,3, CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a}) 0,85-0,97 (m, 24H), H_{b}) 1,17-1,27 (m, 3H), H_{c}) 1,45 (s, 9H), H_{d}) 1,40 (d, 3H), H_{e}) 1,43 (d, 3H), H_{f}) 1,46-1,50 (m, 1H) y 1,61 (t, 1H), H_{g}) 1,68-1,73 (m, 1H), H_{h}) 1,74-1,79(m, 1H), H_{i}) 1,82-1,88 (m, 2H), 2,02-2,08 (m, 1H) y 2,11-2,17 (m, 2H), H_{j}) 2,34-2,37 (m, 1H), H_{k}) 2,57 (s, 3H), H_{l}) 2,63 (dd, 1H) y 2,95 (d,1H), H_{m}) 3,18 y 3,39 (dd, 1H), H_{n}) 3,23 (s, 3H), H_{o}) 3,57-3,61 (m, 2H), H_{p}) 3,33 (d, 1H), H_{q}) 3,69-3,71 (m, 1H), H_{r}) 3,80 (s, 3H), H_{s}) 4,05-4,14 (m, 2H) y 4,36-4,48 (m, 2H), H_{t}) 4,27 (q, 1H), H_{u}) 4,56 (dd, 1H), H_{v}) 4,65 (dd, 1H), H_{w}) 4,81 (t, 1H), H_{x}) 5,19 (d, 1H), H_{y}) 5,35 (dd, 1H), H_{z}) 5,42 (dd, 1H), H_{aa}) 5,61 (dd, 1H), H_{bb}) 5,73-5,75 (m, 1H), H_{cc}) 6,11 (dd, 1H), H_{dd}) 6,85 (d, 2H), H_{ee}) 7,08 (d, 2H), H_{ff}) 7,20 (d,1H), H_{gg}) 7,54 (d, 1H), H_{hh}) 7,78 (d, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 11,7, 14,7, 15,2, 16,3, 16,9, 18,6, 20,1 y 20,9, C_{d}) 23,3, C_{e}) 23,7, C_{a}) 24,8 y 27,2, C_{i}) 24,9, 25,0 y 33,9, C_{f}) 27,9, Cc) 28,6, C_{g}) 31,2, C_{h}) 31,3, C_{j}) 33,9, C_{l}) 36,2, C_{m}) 38,7, C_{k}) 38,8, C_{n}) 41,3, C_{o}) 46,9, C_{q}) 49,46, C_{s}) 49,52, 53,0 y 67,9, C_{r}) 55,3, C_{v}) 55,4, C_{w}) 55,5, C_{u}) 57,2, C_{y}) 57,6, C_{t}) 63,9, C_{aa}) 65,9, C_{p}) 66,5, C_{x}) 70,4, C_{z}) 81,5, C_{z}) 81,7, C_{dd}) 114,1, C_{ee}) 124,0, C_{bb}) 129,1, C_{ii}) 130,0, C_{ee}) 130,3, C_{jjj}) 158,6, C_{kk}) 168,6, 169,3, 170,5, 170,6, 171,3, 171,5, 172,4, 173,9, 204,9; IR (puro) 3337 (s), 2959 (s), 2870 (m), 1733 (s), 1645 (s), 1640 (s), 1543 (m), 1514 (m), 1454 (m), 1407 (m), 1368 (m), 1302 (w), 1248 (m), 1171 (m) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para C_{59}H_{91}N_{7}O_{15} (M^{+}Na) 1160,6471, hallada 1160,6415.
metil-heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetilhexanoil)-L-leucil]-L-prolil-N,O-dimetil-L-tirosil]-L-treonilo) (compuesto 58). El ácido en bruto 57a (5,0 miligramos, 0,012 milimoles) se combinó con la sal HCl del macrociclo (14,9 miligramos, 0,012 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (0,1 mililitro) a 0ºC. Se añadieron HATU (48 miligramos, 0,012 milimoles) y DIEA (0,048 mililitros, 0,048 milimoles). La reacción se agitó a 0ºC toda la noche y se controló por TLC. Cuando se completó la reacción, la mezcla se diluyó con Et_{2}O y la fase orgánica se lavó con HCl al 5%, NaHCO_{3} al 5% y salmuera. La solución resultante se secó y se concentró. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna, eluyendo con MeOH al 5% en CH_{2}Cl_{2} proporcionando el producto deseado (compuesto 58) con un rendimiento del 72%. Para el compuesto 58 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,40 (MeOH al 10% en CH_{2}Cl_{2}); [\alpha]_{D}^{25} -83,2 (c = 0,3, CHCl_{3}); RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a}) 0,85-0,97 (m, 24H), H_{b}) 1,17-1,27 (m, 3H), H_{c}) 1,45 (s, 9H), H_{d}) 1,40 (d, 3H), H_{e}) 1,43 (d, 3H), H_{f}) 1,46-1,50 (m, 1H) y 1,61 (t, 1H), H_{g}) 1,68-1,73 (m, 1H), H_{h}) 1,74-1,79(m, 1H), H_{i}) 1,82-1,88 (m, 2H), 2,02-2,08 (m, 1H) y 2,11-2,17 (m, 2H), H_{j}) 2,34-2,37 (m, 1H), H_{k}) 2,57 (s, 3H), H_{l}) 2,63 (dd, 1H) y 2,95 (d,1H), H_{m}) 3,18 y 3,39 (dd, 1H), H_{n}) 3,23 (s, 3H), H_{o}) 3,57-3,61 (m, 2H), H_{p}) 3,33 (d, 1H), H_{q}) 3,69-3,71 (m, 1H), H_{r}) 3,80 (s, 3H), H_{s}) 4,05-4,14 (m, 2H) y 4,36-4,48 (m, 2H), H_{t}) 4,27 (q, 1H), H_{u}) 4,56 (dd, 1H), H_{v}) 4,65 (dd, 1H), H_{w}) 4,81 (t, 1H), H_{x}) 5,19 (d, 1H), H_{y}) 5,35 (dd, 1H), H_{z}) 5,42 (dd, 1H), H_{aa}) 5,61 (dd, 1H), H_{bb}) 5,73-5,75 (m, 1H), H_{cc}) 6,11 (dd, 1H), H_{dd}) 6,85 (d, 2H), H_{ee}) 7,08 (d, 2H), H_{ff}) 7,20 (d,1H), H_{gg}) 7,54 (d, 1H), H_{hh}) 7,78 (d, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 11,7, 14,7, 15,2, 16,3, 16,9, 18,6, 20,1 y 20,9, C_{d}) 23,3, C_{e}) 23,7, C_{a}) 24,8 y 27,2, C_{i}) 24,9, 25,0 y 33,9, C_{f}) 27,9, Cc) 28,6, C_{g}) 31,2, C_{h}) 31,3, C_{j}) 33,9, C_{l}) 36,2, C_{m}) 38,7, C_{k}) 38,8, C_{n}) 41,3, C_{o}) 46,9, C_{q}) 49,46, C_{s}) 49,52, 53,0 y 67,9, C_{r}) 55,3, C_{v}) 55,4, C_{w}) 55,5, C_{u}) 57,2, C_{y}) 57,6, C_{t}) 63,9, C_{aa}) 65,9, C_{p}) 66,5, C_{x}) 70,4, C_{z}) 81,5, C_{z}) 81,7, C_{dd}) 114,1, C_{ee}) 124,0, C_{bb}) 129,1, C_{ii}) 130,0, C_{ee}) 130,3, C_{jjj}) 158,6, C_{kk}) 168,6, 169,3, 170,5, 170,6, 171,3, 171,5, 172,4, 173,9, 204,9; IR (puro) 3337 (s), 2959 (s), 2870 (m), 1733 (s), 1645 (s), 1640 (s), 1543 (m), 1514 (m), 1454 (m), 1407 (m), 1368 (m), 1302 (w), 1248 (m), 1171 (m) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para C_{59}H_{91}N_{7}O_{15} (M^{+}Na) 1160,6471, hallada 1160,6415.
\vskip1.000000\baselineskip
Ciclo[N-(N-3,4-dehidro)L-prolil-N-metil-D-leucil)-O[[N-[(2S,3S,4S)-4[(3S,4R,5S)-4-amino-3-hidroxi-5-metil-
heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetilhexanoil)-L-leucil]-L-profil-N,O-dimetil-L-tirosil)-L-treonilo] (compuesto 59). El
compuesto 58 (4 miligramos) se disolvió en HCl/dioxano (0,5 mililitros) y se agitó a temperatura ambiente. Cuando se completó la reacción, el disolvente se eliminó a vacío. Se añadió tolueno dos veces y la solución se concentró. El residuo se secó a vacío toda la noche proporcionando la sal HCl deseada en un 98%. La sal HCl se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} saturado y la fase orgánica se lavó de nuevo con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró proporcionando el producto deseado (compuesto 59) con un rendimiento del 75%. Para el compuesto 59 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,20 (MeOH al 10% /CH_{2}Cl_{2}); [\alpha]_{D}^{25} -242,3 (c = 0,2, CHCl_{3}): RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a}) 0,79-0,97 (m, 24H), H_{b}) 1,12-1,23 (m, 3H), H_{d}) 1,32-1,40 (d, 3H), H_{e}) 1,43 (d, 3H), H_{f})) 1,46-1,50 (m, 1H) y 1,61 (t, 1H), H_{g}) 1,68-1,73 (m, 1H), H_{h}) 1,74-1,79 (m, 1H), H_{i}) y H_{j}) 1,82-1,88 (m, 2H), 2,02-2,08 (m, 1H) y 2,11-2,17 (m, 3H), H_{k}) 2,25 (s, 3H), H_{l}) 2,51 (d, 2H), H_{m}) 3,18 y 3,39 (dd, 1H), H_{n}) 2,95 (s, 3H), H_{o}) 3,57-3,61 (m,2H), H_{p}) 3,33 (d, 1H), H_{q}) 3,69-3,71 (m, 1H), H_{r}) 3,73 (s, 3H), H_{s}) 3,90-4,18 (m, 2H), H_{t}) 4,49 (q, 1H), H_{u}) 4,56 (dd, 1H), H_{v}) 4,65 (dd, 1H), H_{w}) 4,81 (t, 1H), H_{x}) 5,19 (m, 3H), H_{bb}) y H_{aa}) 5,73-5,75 (m, 3H), H_{cc}) y H_{z}) 6,01 (dd, 3H), H_{dd}) 6,85 (d, 2H), H_{ee}) 7,08 (d, 2H), H_{ff}) 7,20 (d, 1H), H_{gg}) 7,54 (d, 1H), H_{hh}) 7,78 (d, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 11,7, 14,7, 15,2, 16,3, 16,9, 18,6, 20,1 y 20,9, C_{d}) 23,3, C_{e}) 23,7, C_{a}) 24,8 y 27,2, C_{i}) 24,9, 25,0 y 33,9, C_{f}) 27,9, C_{c}) 28,6, C_{g}) 31,2, G_{h}) 31,3, C_{j}) 33,9, C_{l}) 36,2, C_{m}) 38,7, C_{k}) 38,8, C_{n}) 41,3, C_{o}) 46,9, C_{q}) 49,46, C_{s}) 49,52, 53,0, y 67,9, C_{r}) 55,3, C_{v}) 55,4, C_{w}) 55,5, C_{u}) 57,2, C_{y}) 57,6, C_{t}) 63,9, C_{aa}) 65,9, C_{p}) 66,5, C_{x}) 70,4, C_{z}) 81,5, C_{dd}) 114,1, C_{cc}) 124,0, C_{bb}) 129,1, C_{ii}) 130,0, C_{ee}) 130,3, C_{jj}) 158,6, C_{kk}) 168,6, 169,3, 170,5, 171,3, 171,5, 172,4, 173,9, C_{ll}) 204,9; IR (puro) 3337 (s), 2958 (s), 2861 (m), 1734 (s), 1642 (s), 1638 (s), 1547 (m), 1514 (m), 1451 (m), 1385 (w), 1243 (w),1166 (w) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para C_{54}H_{83}N_{7}O_{13} (M^{+}H) 1038,6127, hallada 1038,6103.
heptanoil]oxi-3-oxo-2,5-dimetilhexanoil)-L-leucil]-L-profil-N,O-dimetil-L-tirosil)-L-treonilo] (compuesto 59). El
compuesto 58 (4 miligramos) se disolvió en HCl/dioxano (0,5 mililitros) y se agitó a temperatura ambiente. Cuando se completó la reacción, el disolvente se eliminó a vacío. Se añadió tolueno dos veces y la solución se concentró. El residuo se secó a vacío toda la noche proporcionando la sal HCl deseada en un 98%. La sal HCl se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} saturado y la fase orgánica se lavó de nuevo con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró proporcionando el producto deseado (compuesto 59) con un rendimiento del 75%. Para el compuesto 59 se obtuvieron los siguientes datos analíticos: R_{f} 0,20 (MeOH al 10% /CH_{2}Cl_{2}); [\alpha]_{D}^{25} -242,3 (c = 0,2, CHCl_{3}): RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta H_{a}) 0,79-0,97 (m, 24H), H_{b}) 1,12-1,23 (m, 3H), H_{d}) 1,32-1,40 (d, 3H), H_{e}) 1,43 (d, 3H), H_{f})) 1,46-1,50 (m, 1H) y 1,61 (t, 1H), H_{g}) 1,68-1,73 (m, 1H), H_{h}) 1,74-1,79 (m, 1H), H_{i}) y H_{j}) 1,82-1,88 (m, 2H), 2,02-2,08 (m, 1H) y 2,11-2,17 (m, 3H), H_{k}) 2,25 (s, 3H), H_{l}) 2,51 (d, 2H), H_{m}) 3,18 y 3,39 (dd, 1H), H_{n}) 2,95 (s, 3H), H_{o}) 3,57-3,61 (m,2H), H_{p}) 3,33 (d, 1H), H_{q}) 3,69-3,71 (m, 1H), H_{r}) 3,73 (s, 3H), H_{s}) 3,90-4,18 (m, 2H), H_{t}) 4,49 (q, 1H), H_{u}) 4,56 (dd, 1H), H_{v}) 4,65 (dd, 1H), H_{w}) 4,81 (t, 1H), H_{x}) 5,19 (m, 3H), H_{bb}) y H_{aa}) 5,73-5,75 (m, 3H), H_{cc}) y H_{z}) 6,01 (dd, 3H), H_{dd}) 6,85 (d, 2H), H_{ee}) 7,08 (d, 2H), H_{ff}) 7,20 (d, 1H), H_{gg}) 7,54 (d, 1H), H_{hh}) 7,78 (d, 1H); RMN de ^{13}C (125 MHz, CDCl_{3}) \delta C_{a}) 11,7, 14,7, 15,2, 16,3, 16,9, 18,6, 20,1 y 20,9, C_{d}) 23,3, C_{e}) 23,7, C_{a}) 24,8 y 27,2, C_{i}) 24,9, 25,0 y 33,9, C_{f}) 27,9, C_{c}) 28,6, C_{g}) 31,2, G_{h}) 31,3, C_{j}) 33,9, C_{l}) 36,2, C_{m}) 38,7, C_{k}) 38,8, C_{n}) 41,3, C_{o}) 46,9, C_{q}) 49,46, C_{s}) 49,52, 53,0, y 67,9, C_{r}) 55,3, C_{v}) 55,4, C_{w}) 55,5, C_{u}) 57,2, C_{y}) 57,6, C_{t}) 63,9, C_{aa}) 65,9, C_{p}) 66,5, C_{x}) 70,4, C_{z}) 81,5, C_{dd}) 114,1, C_{cc}) 124,0, C_{bb}) 129,1, C_{ii}) 130,0, C_{ee}) 130,3, C_{jj}) 158,6, C_{kk}) 168,6, 169,3, 170,5, 171,3, 171,5, 172,4, 173,9, C_{ll}) 204,9; IR (puro) 3337 (s), 2958 (s), 2861 (m), 1734 (s), 1642 (s), 1638 (s), 1547 (m), 1514 (m), 1451 (m), 1385 (w), 1243 (w),1166 (w) cm^{-1}; EMAR m/z calculada para C_{54}H_{83}N_{7}O_{13} (M^{+}H) 1038,6127, hallada 1038,6103.
Se han identificado dos proteínas que se unen a
las didemninas, en concreto el factor de elongación eucariótico
1\alpha (EF-1a; Crews y cols., 1994 J. Biol. Chem.
269:15411-15414) y palmitoil proteína tioesterasa 1
(PPT1; Crews y cols., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
93:4316-4319). Sin embargo, la interacción
estructural exacta entre didemnina B y estas dos proteínas no se
comprende del todo. Los experimentos que se describen en este
Ejemplo se realizaron para generar derivados de didemnina
fotorreactivos que puedan usarse para investigar la unión de las
didemninas correspondientes a estas y otras dianas celulares y que
puedan sintetizarse derivados de tamandarina fotorreactivos.
En este ejemplo se describe la síntesis de los
análogos de didemnina denominados compuestos 403, 404, 405 y 406.
Estos compuestos tienen la estructura de la fórmula XXI, en la que
R^{2} es un sustituyente que tiene la estructura de la fórmula
III. R^{3} es metilo. R^{4} es una cadena lateral de isoleucina,
cada uno de R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} Es un radical
hidruro. R^{7} es un radical metoxi. R^{10} es una cadena
lateral de leucina. X es -O-, Y es un radical hidruro y R^{1}
tiene la identidad que se muestra en las Figuras 47A, 47B, 47C y 47D
respectivamente.
Cada uno de compuestos 403, 404, 405 y 406 es un
derivado de didemnina A y cada una de estas moléculas comprende un
residuo ácido 4-benzoilbenzoico. Este tipo de
derivado de benzofenona se seleccionó como grupo fotorreactivo
debido a sus múltiples ventajas en el marcado de fotoafinidad, tal
como describen (Dorman y cols., 1994. Biochemistry
33:5661-5673; Fleming, 1995. Tetrahedron
51:12479-12520). Las benzofenonas se manipulan
fácilmente con luz ambiental, pero son fotoactivadas por la luz que
tiene una longitud de onda de aproximadamente 350 nanómetros. La
luz que tiene esta longitud de onda, generalmente no daña las
proteínas y se usó para evitar los cambios inducidos por la luz en
las proteínas diana que se usaron en estos experimentos. El
dirradical de benzofenona activado tiende a evitar las moléculas de
disolvente y los nucleófilos y se entrecruza de forma preferente
con centros de carbono no reactivos. Debido a que la fotoexcitación
de las benzofenonas es reversible, una molécula dada del análogo
que no esté próxima al sitio de unión de los ligandos puede sufrir
varios ciclos de excitación y relajación sin sufrir reacciones
secundarias no específicas, como resultado, las benzofenonas
tienden a entrecruzarse con una mayor especificidad de sitio que los
fotóforos tales como arilazidas, que sufren reacciones de fotólisis
irreversibles.
Se sintetizaron las porciones de las cadenas
laterales de los compuestos 403, 404, 405 y 406 y después se
acoplaron a un intermedio macrólido avanzado como etapa final. La
Figura 48 muestra la síntesis del residuo D-leucina
que es común a los cuatro análogos. D-leucina se
convirtió en su carbamato de bencilo (compuesto 407) usando
cloroformiato de bencilo en NaHCO_{3} y agua. El compuesto 407 se
dialquiló usando sulfato dimetílico en presencia de KOH en polvo.
THF, y Bu_{4}N^{+}HSO_{4}^{-}. La hidrogenólisis catalítica
del carbamato sobre un catalizador de Pd/C en presencia de
hidrógeno y acetato de etilo:metanol (1:1), seguido de atrapamiento
con HCl en presencia de metanol proporcionó la sal clorhidrato de la
amina, el compuesto 409. Tal como se muestra en la Figura 49, el
compuesto 409 se acopló con ácido 4-benzoilbenzoico
manteniendo el ácido con BOP-Cl, un reactivo que es
generalmente de utilidad en el acoplamiento de
N-metilaminas en presencia de NMM y DMF a 0ºC
durante 30 minutos y después poniendo en contacto el producto de
reacción con el compuesto 409. La eliminación del grupo metilo
mediante saponificación del éster proporcionó el compuesto 412.
El derivado de benzofenona denominado compuesto
410 (véase la Figura 50) se alongó mediante acoplamiento mediado
por BOP con un enlazador de éster metílico de glicina en presencia
de BOP, NMM, DMF y la sal clorhidrato del éster metílico de
glicina. La saponificación del éster, compuesto 413, en presencia de
LiOH, agua, THF y metanol, seguido de acoplamiento con la sal de
amina 409 en presencia de BOP-Cl, NMM y DMF y la
subsiguiente saponificación en presencia de LiOH, agua, THF y
metanol proporcionó el compuesto 415. El compuesto 417 se preparó de
forma análoga, usando un éster metílico del ácido aminohexanoico.
El compuesto 419 se preparó mediante acoplamiento dos veces del
compuesto 410 con éster metílico del ácido aminohexanoico antes del
acoplamiento con el compuesto 409 y la subsiguiente
saponificación.
Los compuestos 412, 415, 417 y 419 se acoplaron
con la sal macrocíclica descrita anteriormente (preparada tal como
describen, Mayer y cols., 1994, J. Org. Chem.
59:5192-5205; Mayer y cols. 1995. Acta Crystallogr.
C51:1609-1614) usando el reactivo de acoplamiento
BOP para obtener los compuestos 403, 404, 405 y 406,
respectivamente, con un rendimiento del 68-81%.
Para evaluar su idoneidad para el marcado por
fotoafinidad de la proteína de unión de EF-1a, se
evaluaron los compuestos 403, 404, 405 y 406 para determinar la
potencia de inhibición de la biosíntesis de proteínas. Los
resultados de esta evaluación se recogen en la Tabla 2. El ensayo de
traducción en un sistema sin células fue tal como describen
(SirDeshpande y cols., 1995, Biochemistry
34:9177-9184; Ahuja y cols., J. Med. Chem. 2000
43:4212-4218). En este ensayo, didemnina B mostró
una concentración inhibidora semimáxima (CI_{50}) de 3
micromolar. Los resultados de la Tabla 2 demuestran que la potencia
de inhibición de la biosíntesis de proteínas sigue intacta incluso
cuando se incorpora un gran residuo de benzofenona a la estructura
de didemnina B. La longitud del enlazador parece ejercer un efecto
marginal, siendo las dos cadenas laterales más cortas (es decir,
los compuestos 403 y 404) casi equipolentes a didemnina B. El
aumento de la longitud de la cadena se correlaciona con reducciones
modestas de la potencia inhibidora. Estos resultados son
consistentes con los obtenidos por otros (Sakai y cols., 1996, J.
Med. Chem. 39:2819-2834; Ahuja y cols. J. Med. Chem.
2000 43:4212-4218) y demuestran que la inhibición de
la biosíntesis de proteínas es muy tolerante a la modificación de
las cadenas laterales.
\vskip1.000000\baselineskip
| Compuesto | Rendimiento del acoplamiento | CI_{50} |
| Didemnina B | 3,0 | |
| 403 | 68% | 4,0 |
| 404 | 78% | 4,5 |
| 405 | 74% | 24 |
| 406 | 81% | 19 |
La Tabla 3 recoge los resultados preliminares
obtenidos usando la prueba de selección en células tumorales
NCI-60 (que se describe en Boyd y cols., 1995, Drug
Dev. Res. 34: 91-109). Los datos de la Tabla 3
indican que los análogos de benzofenona con fotoafinidad pueden
usarse para estudiar la actividad antitumoral de las didemninas. El
examen del parámetro de la inhibición del crecimiento al 50%
(IC_{50}) muestra que los cuatro análogos mantienen una potencia
comparable a didemnina B. Al contrario que con los resultados
obtenidos con respecto a la biosíntesis deproteínas in vitro,
no parece haber ninguna relación clara entre la longitud del
enlazador y la actividad. Sin embargo, la inhibición del crecimiento
total (ICT) para los cuatro análogos requiere unas concentraciones
significativamente mayores de las que requiere didemnina B. De forma
interesante, los cuatro análogos exhiben de tres a diez veces menos
toxicidad medida según el parámetro de concentración letal
CL_{50}
\vskip1.000000\baselineskip
| Compuesto | IC_{50} | ICT | CL_{50} |
| (nanomolar) | (micromolar) | (micromolar) | |
| Didemnina B | 13 | 0,066 | 3,8 |
| 403 | 3,0 | 0,35 | 15 |
| 404 | 13 | 2,0 | 23 |
| 405 | 4,3 | 20,5 | 19 |
| 406 | 17 | 5,0 | 48 |
Los resultados de los experimentos que se
presentan en este Ejemplo demuestran que los análogos de didemninas
que contienen benzofenona pueden prepararse totalmente por síntesis.
La evaluación biológica de los análogos indica que la incorporación
de benzofenona las cadenas laterales es una estrategia factible para
el marcado por fotoafinidad de dianas moleculares de las
didemninas.
La descripción de cada patente, solicitud y
publicación de patente que se citan en la presente memoria se
incorpora por la presente a la presente memoria por referencia en su
totalidad.
Aunque esta invención ha sido descrita con
referencia a realizaciones específicas, otras personas de
experiencia en la técnica pueden elaborar realizaciones y
variaciones de esta invención sin alejarse del espíritu y alcance
verdaderos de la invención. Las reivindicaciones anexas incluyen
todas tales realizaciones y variaciones equivalentes.
Claims (78)
1. Una composición que comprende un análogo de
tamandarina que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
i) R^{1} se selecciona del grupo constituido
por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato.
ii) o
(a) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina, una
cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de leucina, una
cadena lateral de histidina, una cadena lateral de triptófano, una
cadena lateral de arginina, una cadena lateral de lisina, un segundo
fluoróforo y un sustituyente que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
o
(b) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
iii) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
iv) R^{4} es una cadena lateral de
isoleucina;
v) X se selecciona del grupo constituido por -O-
y -(NH)-;
vi) Y se selecciona del grupo constituido por -H
y un grupo protector de hidroxilo;
vii) R^{10} se selecciona del grupo
constituido por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral
de lisina; y
viii) la molécula no es tamandarina A.
2. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} se selecciona del grupo constituido por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato.
3. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} se selecciona del grupo constituido por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato.
4. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{2} es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R^{3} es metilo, cada uno de
R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} es un radical hidruro, R^{7}
es metoxi, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O- e Y
es un radical
hidruro.
\newpage
5. La composición de la reivindicación 1, en la
que el análogo de tamandarina es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
6. La composición de la reivindicación 1, en la
que el análogo de tamandarina es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
7. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} es
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-lactato.
8. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} es
-(N-metil-R-leucina).
9. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} es
-(N-metil-R-leucina)-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-gluta-
mina-(S)-piroglutamato, Y es -H y X es -O-.
mina-(S)-piroglutamato, Y es -H y X es -O-.
10. La composición de la reivindicación 9, en la
que el análogo de tamandarina es
\vskip1.000000\baselineskip
o
\vskip1.000000\baselineskip
11. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} es
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo).
12. La composición de la reivindicación 11, en
la que el análogo de tamandarina se selecciona del grupo constituido
por
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
13. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{1} es
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato.
14. La composición de la reivindicación 13, en
la que el análogo de tamandarina es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o
\global\parskip0.900000\baselineskip
15. La composición de la reivindicación 1, en la
que Y es -H, y en la que R^{2} tiene la estructura
16. La composición de la reivindicación 1, en la
que R^{2} es una cadena lateral de lisina e Y es -H.
17. La composición de la reivindicación 1, en la
que el análogo de tamandarina tiene la siguiente estructura
en la que FL es un
fluoróforo.
18. La composición de la reivindicación 1, en la
que X es -(NH)-.
19. La composición de la reivindicación 1, en la
que el análogo de tamandarina se selecciona del grupo constituido
por
\global\parskip0.990000\baselineskip
y
20. La composición de la reivindicación 1, en la
que el análogo de tamandarina se selecciona del grupo constituido
por
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y
21. La composición de la reivindicación 1, que
además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
22. Un soporte que tiene el análogo de
tamandarina de la reivindicación 1 unido covalentemente al
mismo.
23. Una composición que comprende un compuesto
que tiene la estructura que se selecciona del grupo constituido
por
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
i) o
(a) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina,
una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de prolina, una
cadena lateral de leucina, una cadena lateral de histidina, una
cadena lateral de triptófano, una cadena lateral de arginina, una
cadena lateral de lisina, un segundo fluoróforo y un sustituyente
que tiene la estructura
o
(b) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
ii) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
iii) R^{4} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina y una cadena lateral de
valina;
iv) X se selecciona del grupo constituido por
-O- y -(NH)-;
v) Y se selecciona del grupo constituido por -H
y un grupo protector de hidroxilo;
vi) R^{10} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral de lisina;
y
vii) R^{13} es un resto escindible
enzimáticamente que puede escindirse mediante una enzima, que se
selecciona del grupo constituido por una carboxipeptidasa, una
\beta-lactamasa, una
\beta-galactosidasa, una penicilina
V-amidasa, una citosina desaminasa, una
nitrorreductasa, una fosfatasa alcalina, una
\beta-glucuronidasa y un anticuerpo
catalítico.
24. La composición de la reivindicación 25, en
la que R^{13} tiene la estructura
25. La composición de la reivindicación 25, en
la que R^{13} tiene la estructura
26. Una composición que comprende un análogo de
didemnina que tiene la estructura
en la
que:
i) R^{1} se selecciona del grupo constituido
por
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato.
ii) o
(a) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina,
una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de leucina, una
cadena lateral de histidina, una cadena lateral de triptófano, una
cadena lateral de arginina, una cadena lateral de lisina, un
segundo fluoróforo y un sustituyente que tiene la estructura
(b) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
iii) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
iv) R^{4} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina y una cadena lateral de
valina;
v) X se selecciona del grupo constituido por -O-
y -(NH)-;
vi) Y se selecciona del grupo constituido por -H
y un grupo protector de hidroxilo; y
vii) R^{10} se selecciona del grupo
constituido por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral
de lisina.
27. La composición de la reivindicación 26, en
la que R^{1} se selecciona del grupo constituido por
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato.
28. La composición de la reivindicación 26, en
la que R^{1} se selecciona del grupo constituido por
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato
y
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato.
29. La composición de la reivindicación 26, en
la que R^{2} es
\vskip1.000000\baselineskip
R^{3} es metilo, R^{4} es una
cadena lateral de isoleucina, cada uno de R^{5}, R^{6}, R^{8}
y R^{9} es un radical hidruro, R^{7} es metoxi, R^{10} es una
cadena lateral de leucina, X es -O- e Y es un radical
hidruro.
30. La composición de la reivindicación 26, en
la que el análogo de didemnina es
\vskip1.000000\baselineskip
31. La composición de la reivindicación 26, en
la que el análogo de didemnina es
32. La composición de la reivindicación 26, en
la que R es
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-lactato.
33. La composición de la reivindicación 26, en
la que Y es -H, y en la que R^{2} tiene la estructura
34. La composición de la reivindicación 26, en
la que R^{2} es una cadena lateral de lisina e Y es -H.
35. La composición de la reivindicación 26, en
la que X es -(NH)-.
36. La composición de la reivindicación 26, que
además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
37. Un soporte unido de forma covalente al
análogo de didemnina de la reivindicación 26.
38. Un procedimiento para preparar un análogo de
tamandarina de la reivindicación 1 o un análogo de didemnina de la
reivindicación 26, cuya mejora comprende incorporar un resto
desoxo-prolina en lugar de un resto prolina del
análogo, en el que R^{1} comprende un residuo de
desoxo-prolina.
39. El procedimiento de la reivindicación 38, en
el que el análogo comprende un resto
(N-metil)leucina-prolina y
en el que el resto
(N-metil)leucina-prolina está
sustituido por un resto
(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
40. El procedimiento de la reivindicación 39, en
el que el resto
(N-metil)leucina-desoxo-prolina
se prepara reduciendo la función éster de prolina a una función
aldehído; y acoplando la prolina al resto
(N-metil)leucina mediante aminación reductora
para proporcionar el resto
(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
41. El procedimiento de la reivindicación 40, en
el que el resto amina de la prolina se protege con un grupo
protector de amina antes de la aminación reductora.
42. El procedimiento de la reivindicación 40, en
el que la función éster de la prolina se reduce a una función
aldehído poniendo en contacto la prolina con una base fuerte y
después poniendo en contacto la prolina con un agente de
oxidación.
43. El procedimiento de la reivindicación 40, en
el que la aminación reductora se realiza en un disolvente no acuoso
en presencia de una base fuerte y un catalizador de ácido
carboxílico.
44. Un procedimiento para preparar un análogo de
tamandarina de la reivindicación 1 o un análogo de didemnina de la
reivindicación 26, cuya mejora comprende incorporar un resto
deshidro-prolina en lugar de un resto prolina del
análogo, en el que R^{1} comprende un residuo de
deshidro-prolina.
45. El procedimiento de la reivindicación 44, en
el que el análogo comprende un resto
(N-metil)leucina-prolina y
en el que el resto
(N-metil)leucina-prolina está
sustituido por un resto
N-(metil)leucina-deshidro-prolina.
46. El procedimiento de la reivindicación 44, en
el que el resto deshidro-prolina se prepara
protegiendo los restos carboxilo y amino de
4-hidroxiprolinato, alquilosulfonilando el resto
4-hidroxilo, desplazando el resto sulfonato de
alquilo con un resto ariloselenilo, eliminando oxidativamente el
resto ariloselenilo para proporcionar un resto
deshidro-prolina que tiene restos carboxilo y amina
protegidos, y acoplando el resto deshidro-prolina
con un resto amina del análogo.
47. El procedimiento de la reivindicación 46, en
el que el resto sulfonato de alquilo es un resto sulfonato
metílico.
48. El procedimiento de la reivindicación 46, en
el que el resto ariloselenilo es un resto feniloselenilo.
49. El procedimiento de la reivindicación 44, en
el que el 4-hidroxiprolinato es
trans-4-hidroxiprolinato.
50. Una composición que comprende un fragmento
de didemnina que tiene la estructura
en la
que
i) Y se selecciona del grupo constituido por -H
y un grupo protector de hidroxilo;
ii) X se selecciona del grupo constituido por
-O- y -(NH)-;
iii) R^{4} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina y una cadena lateral de
valina;
iv) APG es un grupo protector de amina; y
v) R^{11} se selecciona del grupo constituido
por -OH, -NH_{2}, -O(alilo), -O(pentafluorofenilo) y
un sustituyente que tiene la estructura
en el
que
a) R^{1} se selecciona del grupo constituido
por -H y un grupo protector de amina
b) o
(i) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina,
una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de prolina, una
cadena lateral de leucina, una cadena lateral de histidina, una
cadena lateral de triptófano, una cadena lateral de arginina, una
cadena lateral de lisina, un segundo fluoróforo y un sustituyente
que tiene la estructura
o
(ii) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
c) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
–C_{7}H_{5};
d) R^{10} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de leucina, una cadena lateral de lisina y
una cadena lateral de lisina protegida; y
e) R^{12} se selecciona del grupo constituido
por -H y 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo.
51. Un procedimiento para fabricar un fragmento
de didemnina, que comprende acoplar un primer reactivo que tiene la
estructura
y un segundo reactivo que tiene la
estructura
para proporcionar un primer
fragmento de didemnina que tiene la
estructura
en los que X se selecciona del
grupo constituido por -O- y -(NH)-; en los que APG es un grupo
protector de amina; en los que Y es un grupo protector de
hidroxilo; y en los que R^{4} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina y una cadena lateral de
valina.
52. El procedimiento de la reivindicación 51, en
el que Y es -triisopropilsililo.
53. El procedimiento de la reivindicación 52,
que además comprende hidrolizar el primer fragmento de didemnina
para proporcionar un segundo fragmento de didemnina que tiene la
estructura
\newpage
54. El procedimiento de la reivindicación 53,
que además comprende añadir un activador al resto carbonilo del
segundo fragmento de didemnina para proporcionar un tercer fragmento
de didemnina que tiene la estructura
en el que -ACT es un
activador.
55. El procedimiento de la reivindicación 54,
que además comprende acoplar el tercer fragmento de didemnina y un
tercer reactivo que tiene la estructura
para proporcionar un cuarto
fragmento de didemnina que tiene la
estructura
en el
que:
i) o
(a) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina,
una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de prolina, una
cadena lateral de leucina, una cadena lateral de histidina, una
cadena lateral de triptófano, una cadena lateral de arginina, una
cadena lateral de lisina, un segundo fluoróforo y un sustituyente
que tiene la estructura
o
(b) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
ii) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
iii) APG es un grupo protector de amina;
iv) SEM es
2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo y
v) R^{10} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral de
lisina.
56. Un procedimiento de fabricar un análogo de
didemnina, en el que el procedimiento comprende eliminar el resto
SEM y el resto APG, que protege el grupo amino unido al átomo de
carbono al que está unido R^{4}, del cuarto fragmento de didemnina
de la reivindicación 55 y ciclar el cuarto fragmento de didemnina
para proporcionar un primer análogo de didemnina que tiene la
estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
57. El procedimiento de la reivindicación 56,
que además comprende eliminar el grupo APG del primer análogo de
didemnina para proporcionar un segundo análogo de didemnina que
tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
58. El procedimiento de la reivindicación 56, en
el que el grupo APG se selecciona del grupo constituido por un
resto carbobenciloxi y un resto
terc-butiloxicarbonilo.
59. El procedimiento de la reivindicación 57,
que además comprende acoplar el segundo análogo de didemnina y un
cuarto reactivo que tiene la estructura
para proporcionar un tercer análogo
de didemnina que tiene la
estructura
en el que R^{14} se selecciona
del grupo constituido
por
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato;
y
uno cualquiera de los restos anteriores unido a
un resto escindible enzimáticamente que puede escindirse mediante
una enzima que se selecciona del grupo constituido por una
carboxipeptidasa, una \beta-lactamasa, una
\beta-galactosidasa, una penicilina
V-amidasa, una citosina desaminasa, una
nitrorreductasa, una fosfatasa alcalina, una
\beta-glucuronidasa y un anticuerpo
catalítico.
60. El procedimiento de la reivindicación 59, en
el que Y es un grupo protector de hidroxilo, comprendiendo el
procedimiento además eliminar el grupo protector de hidroxilo del
segundo análogo de didemnina para proporcionar un cuarto análogo de
didemnina que tiene la estructura
61. Uso de una cualquiera de las composiciones
de la reivindicación 1, 23, 26 ó 50 para preparar un medicamento
para inhibir la síntesis de proteínas en una célula.
62. Uso de una cualquiera de las composiciones
de la reivindicación 1, 23, 26 ó 50 para preparar un medicamento
para inhibir el crecimiento de una célula.
63. Uso de una cualquiera de las composiciones
de la reivindicación 1, 23, 26 ó 50 para preparar un medicamento
para inhibir la proliferación de una célula.
64. Uso de una cualquiera de las composiciones
de la reivindicación 1, 23, 26 ó 50 para preparar un medicamento
para inhibir la ocnogénesis en una célula.
65. Uso de una cualquiera de las composiciones
de la reivindicación 1, 23, 26 ó 50 para preparar un medicamento
para potenciar la apóptosis de una célula.
66. Una composición que comprende un análogo de
tamandarina que tiene la estructura
en el
que
i) R^{1} se selecciona del grupo constituido
por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato;
ii) o
(a) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina,
una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de leucina, una
cadena lateral de histidina, una cadena lateral de triptófano, una
cadena lateral de arginina, una cadena lateral de lisina, un
segundo fluoróforo y un sustituyente que tiene la estructura
o
(b) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
iii) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
iv) R^{4} es una cadena lateral de valina;
v) X se selecciona del grupo constituido por -O-
y -(NH)-;
vi) Y se selecciona del grupo constituido por -H
y un grupo protector de hidroxilo;
vii) R^{10} se selecciona del grupo
constituido por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral
de lisina; y
viii) la molécula no es tamandarina B.
67. La composición de la reivindicación 66, en
la que R^{4} es una cadena lateral de valina, Y es -H y X es
-O-.
68. Un análogo de tamandarina que se selecciona
del grupo constituido por
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y
\newpage
69. La composición de la reivindicación 67, en
la que el análogo de tamandarina es
70. Una composición que comprende un análogo de
didemnina que tiene la estructura
en el
que
i) R^{1} se selecciona del grupo constituido
por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-prolina-alanina-leucina-piroglutamato
y
-(N-metil)-leucina-deshidro-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato;
ii) o
(a) R^{3} se selecciona del grupo constituido
por -CH_{3} y -H; y R^{2} se selecciona del grupo constituido
por una cadena lateral de isoleucina, una cadena lateral de valina,
una cadena lateral de alanina, una cadena lateral de norleucina,
una cadena lateral de norvalina, una cadena lateral de leucina, una
cadena lateral de histidina, una cadena lateral de triptófano, una
cadena lateral de arginina, una cadena lateral de lisina, un
segundo fluoróforo y un sustituyente que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
o
(b) R^{2} y R^{3} juntos son un
sustituyente, que tiene la estructura
iii) cada uno de R^{5}, R^{6},
R^{7}, R^{8} y R^{9}, cuando están presentes se seleccionan
independientemente del grupo constituido por -H, -OH, -OCH_{3},
-CO(C_{6}H_{5}), -Br, -I, -F, -Cl, -CH_{3} y
-C_{2}H_{5};
iv) R^{4} es una cadena lateral de valina;
v) X se selecciona del grupo constituido por -O-
y -(NH)-;
vi) Y se selecciona del grupo constituido por un
radical hidruro y un grupo protector de hidroxilo;
vii) R^{10} se selecciona del grupo
constituido por una cadena lateral de leucina y una cadena lateral
de lisina.
71. La composición de la reivindicación 70, en
la que R^{1} se selecciona del grupo constituido por
-H,
-(terc-butiloxicarbonilo),
-leucina,
-(N-metil)leucina,
-(N-metil)leucina-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina.
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo).
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(S)-lactato-glutamina-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-alanina-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-deshidro-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-leucina-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
y
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-piruvato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(un
primer fluoróforo),
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-piroglutamato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-lactato-(S)-glutamina-(S)-ciclopentanoato,
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(S)-alanina-(S)-leucina-(S)-piroglutamato
y
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-(N-metil-S-alanina)-(S)-leucina-(S)-piroglutamato.
72. La composición de la reivindicación 70, en
la que R^{2} es
R^{3} es metilo, cada uno de
R^{5}, R^{6}, R^{8} y R^{9} es un radical hidruro, R^{7}
es metoxi, R^{10} es una cadena lateral de leucina, X es -O- e Y
es un radical
hidruro.
73. La composición de la reivindicación 70, en
la que R es
-(N-metil)leucina-desoxo-(S)-prolina-lactato.
74. La composición de la reivindicación 70, en
la que Y es -H, y en la que R^{2} tiene la estructura
75. La composición de la reivindicación 70, en
la que R^{2} es una cadena lateral de lisina e Y es -H.
76. La composición de la reivindicación 70, en
la que X es -(NH)-.
77. La composición de la reivindicación 70, que
además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
78. Un soporte unido de forma covalente al
análogo de didemnina de la reivindicación 70.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US545848 | 2000-04-07 | ||
| US09/545,848 US6509315B1 (en) | 2000-04-07 | 2000-04-07 | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them |
| US09/767,080 US7064105B2 (en) | 2000-04-07 | 2001-01-22 | Deoxo-proline-containing tamandarin and didemnin analogs, dehydro-proline-containing tamandarin and didemnin analogs, and methods of making and using them |
| US767080 | 2001-01-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2272462T3 true ES2272462T3 (es) | 2007-05-01 |
Family
ID=27068046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01924886T Expired - Lifetime ES2272462T3 (es) | 2000-04-07 | 2001-04-09 | Analogos de tamadarina y didemnina y procedimiento de fabricacion y uso. |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7651997B2 (es) |
| EP (1) | EP1276491B9 (es) |
| JP (1) | JP2003535048A (es) |
| AT (1) | ATE339963T1 (es) |
| AU (1) | AU2001251498A1 (es) |
| BR (1) | BR0109958A (es) |
| CA (1) | CA2405779A1 (es) |
| CY (1) | CY1105866T1 (es) |
| DE (1) | DE60123232T2 (es) |
| DK (1) | DK1276491T3 (es) |
| ES (1) | ES2272462T3 (es) |
| IL (1) | IL152111A0 (es) |
| MX (1) | MXPA02009943A (es) |
| NZ (1) | NZ521844A (es) |
| PL (1) | PL358579A1 (es) |
| RU (1) | RU2323000C2 (es) |
| WO (1) | WO2001076616A1 (es) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030148933A1 (en) | 1990-10-01 | 2003-08-07 | Pharma Mar S.A. | Derivatives of dehydrodidemnin B |
| GB9803448D0 (en) | 1998-02-18 | 1998-04-15 | Pharma Mar Sa | Pharmaceutical formulation |
| IL149488A0 (en) * | 1999-11-15 | 2002-11-10 | Pharma Mar Sa | Pharmaceutical compositions containing aplidine |
| US6509315B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-01-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them |
| UA76718C2 (uk) | 2000-06-30 | 2006-09-15 | Фарма Мар, С.А. | Протипухлинні похідні аплідину |
| BR0114604A (pt) | 2000-10-12 | 2003-10-14 | Pharma Mar Sa | Tratamento de cnceres |
| JP4584245B2 (ja) | 2003-03-12 | 2010-11-17 | ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド | 多発性骨髄腫治療用のアプリジン |
| KR20060002778A (ko) | 2003-03-12 | 2006-01-09 | 파르마 마르, 에스.에이. | 개선된 항종양 치료 |
| AU2004224418A1 (en) * | 2003-03-21 | 2004-10-07 | Madeleine M. Joullie | Tamandarin analogs and fragments thereof and methods of making and using |
| HUE028055T2 (en) | 2006-02-28 | 2016-11-28 | Pharma Mar Sa | Improved treatment of myeloma multiplex |
| AU2008313627A1 (en) * | 2007-10-19 | 2009-04-23 | Pharma Mar, S.A. | Improved antitumoral treatments |
| CN101965191A (zh) * | 2008-03-07 | 2011-02-02 | 法马马有限公司 | 改善的抗癌治疗 |
| US8217076B2 (en) * | 2008-07-17 | 2012-07-10 | Colorado State University Research Foundation | Method for preparing largazole analogs and uses thereof |
| WO2011020913A2 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Pharma Mar, S.A. | Cyclodepsipeptide antiviral compounds |
| WO2013041969A2 (en) | 2011-09-21 | 2013-03-28 | King Abdullah University Of Science And Technology | Didemnin biosynthetic gene cluster in tistrella mobilis |
| AU2016229324B2 (en) | 2015-03-06 | 2020-01-16 | Colorado State University Research Foundation | Method for preparing largazole analogs and uses thereof |
| JP6785801B2 (ja) | 2015-03-06 | 2020-11-18 | コロラド ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション | 新しいキャップ基ラルガゾールの類似体の合成及び使用 |
| JP2019064920A (ja) * | 2016-02-16 | 2019-04-25 | 国立大学法人東北大学 | 環状デプシペプチド化合物 |
| LT3615544T (lt) | 2017-04-27 | 2023-05-10 | Pharma Mar S.A. | Priešnavikiniai junginiai |
| CN115666616A (zh) | 2020-03-02 | 2023-01-31 | 法马马有限公司 | 用于病毒感染的化合物 |
| EP4114436A1 (en) | 2020-03-02 | 2023-01-11 | Pharma Mar S.A. | Compounds for use in the treatment of coronavirus infection |
| US20230158104A1 (en) | 2020-03-02 | 2023-05-25 | Pharma Mar, S.A. | Compounds for use in autoimmune conditions |
| CA3205814A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | Colorado State University Research Foundation | Synthesis of structural analogs of largazole and associated compounds |
| CN115976141B (zh) * | 2021-10-14 | 2025-10-31 | 浙江珲达生物科技有限公司 | 一种发酵制备Didemnin B的培养基及其制备方法 |
| WO2024165764A1 (en) | 2023-02-10 | 2024-08-15 | Pharma Mar, S.A. | Plitidepsin for use in the treatment of non-integrated dna viral infections |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4160452A (en) * | 1977-04-07 | 1979-07-10 | Alza Corporation | Osmotic system having laminated wall comprising semipermeable lamina and microporous lamina |
| US4256108A (en) * | 1977-04-07 | 1981-03-17 | Alza Corporation | Microporous-semipermeable laminated osmotic system |
| US4265874A (en) * | 1980-04-25 | 1981-05-05 | Alza Corporation | Method of delivering drug with aid of effervescent activity generated in environment of use |
| US4493796A (en) * | 1980-09-12 | 1985-01-15 | Board Of Trustees, Univ. Of Ill. | Didemnins A, B, C, and derivatives thereof, as antiviral agents |
| US4782135A (en) * | 1980-09-12 | 1988-11-01 | Board Of Trustees, University Of Illinois | Composition of matter and process |
| US4950649A (en) * | 1980-09-12 | 1990-08-21 | University Of Illinois | Didemnins and nordidemnins |
| US5137870A (en) * | 1980-09-12 | 1992-08-11 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Didemnins and nordidemnins |
| DE4120327A1 (de) * | 1991-06-20 | 1992-12-24 | Basf Ag | Neue peptide, ihre herstellung und verwendung |
| ES2102322B1 (es) | 1995-07-13 | 1998-03-01 | Pharma Mar Sa | Procedimiento de preparacion de didemnina a. |
| EP0836851A1 (en) * | 1996-10-21 | 1998-04-22 | Virbac S.A. | Amidine compounds for use in treating ecto or endo parasitic diseases and systemic parasite control compositions |
| JP2001503746A (ja) | 1996-10-24 | 2001-03-21 | ザ・ボード・オブ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・イリノイ | ジデムニン類似体の半合成法 |
| JP2001504814A (ja) * | 1996-10-24 | 2001-04-10 | ザ・ボード・オブ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・イリノイ | ジデムニンＡのアミノＨｉｐ類似体の全合成 |
| US6509315B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-01-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them |
| UA76718C2 (uk) | 2000-06-30 | 2006-09-15 | Фарма Мар, С.А. | Протипухлинні похідні аплідину |
| AU2004224418A1 (en) * | 2003-03-21 | 2004-10-07 | Madeleine M. Joullie | Tamandarin analogs and fragments thereof and methods of making and using |
-
2001
- 2001-04-09 ES ES01924886T patent/ES2272462T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-09 CA CA002405779A patent/CA2405779A1/en not_active Abandoned
- 2001-04-09 DE DE60123232T patent/DE60123232T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-09 EP EP01924886A patent/EP1276491B9/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-09 DK DK01924886T patent/DK1276491T3/da active
- 2001-04-09 PL PL01358579A patent/PL358579A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-04-09 IL IL15211101A patent/IL152111A0/xx unknown
- 2001-04-09 NZ NZ521844A patent/NZ521844A/en unknown
- 2001-04-09 WO PCT/US2001/011607 patent/WO2001076616A1/en not_active Ceased
- 2001-04-09 RU RU2002129885/15A patent/RU2323000C2/ru active
- 2001-04-09 AU AU2001251498A patent/AU2001251498A1/en not_active Abandoned
- 2001-04-09 BR BR0109958-2A patent/BR0109958A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-09 AT AT01924886T patent/ATE339963T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-04-09 JP JP2001574132A patent/JP2003535048A/ja active Pending
- 2001-04-09 MX MXPA02009943A patent/MXPA02009943A/es active IP Right Grant
-
2006
- 2006-06-20 US US11/455,937 patent/US7651997B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-20 CY CY20061101824T patent/CY1105866T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1276491B9 (en) | 2007-02-28 |
| ATE339963T1 (de) | 2006-10-15 |
| DK1276491T3 (da) | 2007-02-05 |
| RU2002129885A (ru) | 2004-03-27 |
| BR0109958A (pt) | 2003-05-27 |
| CA2405779A1 (en) | 2001-10-18 |
| MXPA02009943A (es) | 2003-04-25 |
| AU2001251498A1 (en) | 2001-10-23 |
| EP1276491A4 (en) | 2004-08-25 |
| EP1276491A1 (en) | 2003-01-22 |
| PL358579A1 (en) | 2004-08-09 |
| JP2003535048A (ja) | 2003-11-25 |
| NZ521844A (en) | 2004-07-30 |
| US7651997B2 (en) | 2010-01-26 |
| CY1105866T1 (el) | 2011-02-02 |
| WO2001076616A1 (en) | 2001-10-18 |
| DE60123232T2 (de) | 2007-11-08 |
| US20070129289A1 (en) | 2007-06-07 |
| IL152111A0 (en) | 2003-07-31 |
| RU2323000C2 (ru) | 2008-04-27 |
| EP1276491B1 (en) | 2006-09-20 |
| DE60123232D1 (de) | 2006-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2323000C2 (ru) | Аналоги тамандарина и дидемнина и способы их получения и применения | |
| JP5559439B2 (ja) | タンパク質薬剤接合体のための分枝リンカー | |
| TWI243828B (en) | Inhibitors of caspases | |
| ES2200902T3 (es) | Profarmacos de carbamato inhibidores de la impdh. | |
| KR100866056B1 (ko) | 아플리딘 및 신규의 항종양성 유도체의 합성 방법, 및 그제조 및 이용 방법 | |
| US6509315B1 (en) | Didemnin analogs and fragments and methods of making and using them | |
| ES2657014T9 (es) | Péptidos citotóxicos y conjugados de fármaco anticuerpo de los mismos | |
| US8030279B2 (en) | Tamandarin analogs and fragments thereof and methods of making and using | |
| CA3130994A1 (en) | Derivatives of dolastatin 10 and auristatins | |
| JP2015524394A (ja) | ペプチドエポキシケトンプロテアーゼ阻害剤のプロドラッグ | |
| CN119325392A (zh) | 苯基马来酰亚胺连接剂 | |
| ES2314890T3 (es) | Tioeteres tripeptidicos y tetrapeptidicos. | |
| ES2704056T3 (es) | Compuestos de epoxicetona para la inhibición de enzimas | |
| EP4648799A1 (en) | Ligand-drug conjugates | |
| ES2735375T3 (es) | Derivados funcionalizados de morfolinil antraciclina | |
| AU2006252266A1 (en) | Tamandarin and didemnin analogs and methods of making and using them | |
| CN121002040A (zh) | 细胞毒性化合物 |