ES2292530T3 - Pirrolidinas sustituidas como antagonistas del receptor ccr-3. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): en la cual R1 es hidrógeno, alquilo C1-6, acilo, heteroalquilo, -CONR3R4 (donde R3 y R4 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-6, -COOR5 (donde R5 es hidrógeno, alquilo C1-6 o heteroalquilo) o -SO2R6 donde R6 es alquilo C1-6; alk1 es una cadena de alquileno de 1 a 6 átomos de carbono; X es -NHCO- o _CONH-; Y es -SCH2-, -OCH2- o -NHCH2-; Ar1 es piridilo o pirimidinilo; Ar2 es fenilo o 3, 4-dimetoxifenilo; alk2 es un grupo de alquileno con 1 a 3 átomos de carbono; Ar3 es arilo; o una sal respectiva farmacéuticamente aceptable; en donde, a menos que se indique de otro modo "arilo" significa un radical hidrocarbúrico aromático monocíclico o bicíclico monovalente con 6 a 10 átomos de anillo, y el anillo de arilo puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno, dos o tres sustituyentes elegidos entre alquilo C1-6, halo alquilo C1-6, alquiltio C1-6, alcoxilo C1-6, halo, ciano, nitro, amino, hidroxilamino, hidroxilo, alquilsulfonilo C1-6, sulfonil-amino, aminosulfonilo, -NR''R" (en donde R'' es hidrógeno o alquilo C1-6 y R" es hidrógeno, alquilo C1-6, acilo, alquilsulfonilo C1-6) y -COOR (en donde R es hidrógeno o alquilo C1-6); "acilo" significa un radical -C(O)R en donde R es alquilo C1-6, halo alquilo C1-6, alquilo C1-6 sustituido con carboxilo, alcoxicarbonilo C1-6, heterociclo, o ariloxicarbonilo, arilo, aril-alquilo C1-6, heteroarilo o heteroaril alquilo C1-6; "heteroalquilo" significa un radical alquilo C1-6 como se ha definido antes, comportando un sustituyente elegido entre -NRaRb, -ORa y -S(O)nRc, en donde n es un número entero de 0 a 2, Ra es hidrógeno, alquilo C1-6, halo-alquilo C1-6, o -COR (en donde R es alquilo C1-6, hidroxilo o alcoxilo C1-6), Rb es hidrógeno o alquilo C1-6 y Rc es hidrógeno, alquilo C1-6, amino, mono-alquilamino C1-6, o di-alquilamino C1-6.

Description

Pirrolidinas sustituidas como antagonistas del receptor CCR-3.

La presente invención se refiere a ciertos derivados de pirrolidina 2,4-sustituidos, que son antagonistas del receptor CCR-3 y por lo tanto, útiles en el tratamiento de mamíferos que presentan estados de enfermedad mediados por los mismos, como el asma. La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que los contienen, a métodos para prepararlos y a su empleo.

La eosinofilia del tejido, es una característica que presenta una serie de condiciones patológicas tales como asma, rinitis, eccema e infecciones parasitarias (ver Bousquet, J. et al. N. Eng. J. Med. 323: 1033-1039 (1990) y Kay, A. B. Corrigan, C. J. Br. Med. Bull. 48:51-64 (1992)). En el asma, la acumulación y activación de eosinófilos, están asociadas al daño del epitelio bronquial e hiperrespuesta a mediadores constrictores. Es sabido, que las quimiocinas tales como RANTES, eotaxina y MCP-3, activan los eosinófilos (ver Baggiolini, M. and Dahinden, C. A. Immunol Today. 15:127-133 (1994)), Rot, A. M. et al. J. Exp. Med. 176, 1489-1495 (1992) y Ponath, P. D. et al. J. Clin. Invest., Vol. 97, #3, 604-612 (1996)). Sin embargo, a diferencia de RANTES y MCP-3, que también inducen la migración de otros tipos de leucocitos, la eotaxina es selectivamente quimiotáctica para los eosinófilos (ver Griffith-Johnson, D.A. et al., Biochem. Biophy. Res. Commun. 197:1167 (1993) y Jose, P. J. et al., Biochem. Biophy. Res. Commun. 207, 788 (1994)). Se observó una acumulación específica de eosinófilos, en el sitio de administración de eotaxina, ya sea por inyección intradérmica o intraperitoneal, o por inhalación de aerosol (ver Griffith-Johnson, D.A. et al., Biochem. Biophy. Res. Commun. 197: 1167 (1993); Jose, P. J. et al., J. Exp. Med. 179, 881-887 (1994); Rothenberg, M. E. et al., J. Exp. Med. 181, 1211 (1995) y Ponath, P. D. et al., J. Clin. Invest., Vol. 97, #3, 604-612 (1996)).

Los glucocorticoides tales como dexametasona, metprednisolona e hidrocortisona, se utilizan para tratar muchas alteraciones relacionadas con eosinófilos, entre las que se incluyen asma bronquial (R. P. Schleimer et al., Am. Rev. Respir. Dis., 141, 559 (1990)). Se cree que los glucocorticoides inhiben la supervivencia de eosinófilos mediados por IL-3, IL-5, en estas enfermedades. Sin embargo, el uso prolongado de glucocorticoides puede producir efectos secundarios tales como glaucoma, osteoporosis y retraso del crecimiento en los pacientes (ver Hanania N. A. et al., J. Allergy and Clin. Immunol., Vol 96, 571-579 (1995) y Saha M. T. et al. Acta Paediatrica, Vol. 86 #2, 138-142 (1997)). Por lo tanto, es conveniente disponer de un medio alternativo para tratar enfermedades relacionadas con los eosinófilos, sin producir estos efectos secundarios indeseados.

Recientemente, se ha identificado el receptor CCR-3 como principal receptor de quimiocina, que los eosinófilos utilizan para su respuesta a la eotaxina, RANTES y MCP-3. Cuando se transfectó a una línea de pre-\beta linfoma murino, el CCR-3 se unió a la eotaxina, RANTES y MCP-3, y confirió respuestas quimiotácticas en estas células, a la eotaxina, RANTES y MCP-3 (ver Ponta, P. D. et al., J. Exp. Med., 183, 2437-2448 (1996)). El receptor CCR-3 se expresa en la superficie de los eosinófilos, células T (subtipo Th-2), basófilos y células cebadas, y es altamente selectivo para la eotaxina. Los estudios han demostrado que el pretratamiento de eosinófilos con anti-CCR-3 mAb, inhibe por completo la quimiotaxis de eosinófilos a la eotaxina, RANTES y MCP-3 (ver Heath H. et al., J. Clin. Invest., Vol. 99, #2, 178-184 (1997)). La solicitud de patente de invención estadounidense en trámite serie nº 09/134.013 del Solicitante, presenta el 14 de agosto de 1998, y el documento WO 00/31032, divulgan antagonistas de CCR-3 que inhiben el reclutamiento eosinofílico a través de la quimiocina, como la eotaxina. Por lo tanto, debe disponerse el bloqueo de la capacidad del receptor CCR-3 de unirse a RANTES, MCP-3 y eotaxina, evitando de este modo el reclutamiento de eosinófilos, para el tratamiento de enfermedades inflamatorias mediadas por eosinófilos.

La WO 0031032 A, WO 0031033 y EP-A-0903349 describe derivados de pirrolidina, derivados de piperidina y derivados de amina cíclicos, respectivamente, que son antagonistas receptores de CCR-3.

La EP-A-0671389 describe derivados de 3-fenil-pirrolidina que inhiben fosfodiesterasa IV.

La presente invención se refiere a nuevos derivados de pirrolidina, capaces de inhibir la unión de eotaxina al receptor CCR-3 y por lo tanto, proporcionan un medio para combatir las enfermedades inducidas por eosinófilos, como ser asma.

En consecuencia, en un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I):

1

en la cual:

R^{1}

es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, acilo, heteroalquilo, -CONR^{3}R^{4} (donde R^{3} y R^{4} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1-6}, -COOR^{5} (donde R^{5} es hidrógeno, alquilo C_{1-6} o heteroalquilo) o -SO_{2}R^{6} donde R^{6} es alquilo C_{1-6};

alk^{1}

es una cadena de alquileno de 1 a 6 átomos de carbono;

X

es -NHCO- o -CONH-;

Y

es -SCH_{2}-, OCH_{2}- o -NHCH_{2}-;

Ar^{1}

es piridilo o pirimidinilo;

Ar^{2}

es fenilo o 3,4-dimetoxifenilo;

alk^{2}

es un grupo alquileno con de 1 a 6 átomos de carbono;

Ar^{3}

es arilo; o

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

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Asimismo, dentro de los compuestos como se ha definido antes [a estos se hará referencia en lo siguiente bajo (i)], se prefieren los siguientes compuestos:

(ii)

El compuesto de (i) en donde X es -CONH-.

(iii)

El compuesto de (ii) en donde Y es -SCH_{2}- o -OCH_{2}-.

(iv)

El compuesto de (iii) en donde Y es -OCH_{2}-, alk^{1} y alf^{2} son independientemente una cadena alquileno de 1 ó 2 átomos de carbono.

(v)

El compuesto de (iv) en donde Ar^{1} es pirimidin-2-ilo.

(vi)

El compuesto de (v) en donde Y es -SCH_{2}- o -OCH_{2}-.

(vii)

El compuesto de (vi) en donde Ar^{2} es fenilo o 3,4-dimetoxifenilo y está en la posición 5 del pirimidin-2-ilo.

(viii)

El compuesto de (vii) en donde Ar^{2} es -CH_{2}-.

(ix)

El compuesto de (viii) en donde Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo.

En un segundo aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En un tercer aspecto, la presente invención brinda un procedimiento para preparar compuestos de Fórmula (I).

En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona el empleo de un compuesto de Fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de medicamentos que comprenden uno o más compuestos de fórmula I para el tratamiento de una enfermedad mediada por un receptor CCR-3. Los estados de enfermedad incluyen enfermedades respiratorias tales como asma.

Salvo indicación contraria, los siguientes términos utilizados en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, tienen los significados que se indican a continuación:

"Alquilo" significa un radical de hidrocarburo monovalente saturado lineal, que tiene entre uno y seis átomos de carbono, o un radical de hidrocarburo monovalente saturado ramificado que tiene entre tres y seis átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, iso-butilo, terc-butilo, n-pentilo, 2-, 3-metil-butilo, neo-pentilo y similares.

"Alquileno" significa, salvo indicación contraria, un radical de hidrocarburo divalente saturado lineal que tiene entre uno y seis átomos de carbono, o un radical de hidrocarburo divalente saturado ramificado, que tiene entre tres y seis átomos de carbono, por ejemplo metileno, (2-propil)metileno, etileno, metiletileno, (2-propil)etileno, propileno, 1- o 2-metilpropileno, 1- o 2-etilpropileno, pentileno.

"Cicloalquilo" significa un radical hidrocarbúrico cíclico monovalente saturado de tres a siete carbonos de anillo, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo, 4-metilciclohexilo.

"Acilo" significa un radical -C(O)R, en el cual R es alquilo, haloalquilo, alquilo sustituido por carboxi, alcoxicarbonilo, heterociclo, o ariloxicarbonilo, arilo, aralquilo, heteroarilo o heteroaralquilo, por ejemplo acetilo, trifluoroacetilo, -C(O)CH_{2}CO_{2}H, -C(O)-CH_{2}-CO_{2}CH_{3}, benzoilo, tenoilo.

"Halo" significa fluoro, cloro, bromo o yodo, preferentemente fluoro o cloro.

"Haloalquilo" significa alquilo sustituido por uno o más átomos halo iguales o diferentes, por ejemplo -CH_{2}Cl, -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CH_{2}CCl_{3}.

"Sulfonilamino" significa un radical -NHSO_{2}H, en el cual R es hidrógeno o alquilo. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, -NH_{2}SO_{2}CH_{3}.

"Aminosulfonilo" significa un radical -SO_{2}NHR, en el cual R es alquilo.

"Alquilsulfonilo" significa un radical -SO_{2}R, en el cual R es alquilo. Los ejemplos representativos incluyen pero no se limitan a metilsulfonilo, etilsulfonilo.

"Arilo" significa un radical de hidrocarburo aromático monocíclico o bicíclico monovalente, que tiene entre 6 y 10 átomos de cadena. La cadena arilo puede estar opcionalmente sustituida en forma independiente, por uno o más sustituyentes, preferentemente uno, dos o tres sustituyentes seleccionados entre alquilo, haloalquilo, alquiltio, alcoxi, halo, ciano, nitro, amino, hidroxilamino, hidroxi, aquil-sufonilo, sulfonilamino, aminosulfonilo, -NR'R'' (en el cual R' es hidrógeno o alquilo, y R'' es hidrógeno, alquilo, acilo, alquilsulfonilo) y -COOR (en el cual R es hidrógeno o alquilo). Más específicamente, el término arilo incluye, pero no se limita a fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo y derivados de los mismos tales como 2,3-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, metoxifenilo, 2,3-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo.

"Heteroarilo" significa un radical aromático monocíclico o bicíclico monovalente que tiene entre 5 y 10 átomos de cadena que contienen uno, dos o tres heteroátomos de cadena, seleccionados entre N, O o S, y el resto de los átomos de la cadena son C. El radical aromático está opcionalmente fusionado a un fenilo y opcionalmente sustituido por uno o dos sustituyentes de alquilo, haloalquilo, alcoxi, halo, ciano, nitro, amino, monoalquilamino, dialquilamino, hidroxi y -COOR (en el cual r es hidrógeno o alquilo). Más específicamente el término heteroarilo incluye, pero no se limita a piridilo, pirrolilo, tiofenol, pirazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirimidinilo, tiadiazolilo, indolilo, carbazolilo, azaindolilo, benzofuranilo, bencimidazolilo, bencitiazolilo, quinoxalinilo, benzotriazolilo, bencisoxazolilo, purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzopiranilo y derivados de los mismos.

"Heterociclo" o "heterociclilo" significa un radical cíclico saturado o insaturado que tiene entre 3 y 8 átomos de cadena, en el cual uno o dos átomos de cadena son heteroátomos seleccionados entre N, O, o S(O)_{n} (en el cual n es un entero que oscila entre 0 y 2), y el resto de los átomos de cadena son C, donde uno o dos átomos de C pueden reemplazarse opcionalmente por un grupo carbonilo. La cadena heterociclo puede estar opcionalmente sustituida en forma independiente por uno, dos o tres sustituyentes seleccionados entre alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, hetero-arilo, heteroaralquilo, halo, ciano, amino, monoalquilamino, dialquilamino, -COOR (en el cual R es hidrógeno o alquilo), o -XR (en el cual X es O y R es hidrógeno o alquilo). Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, tetrahidropiranilo, piperidino, piperazino, pirrolidino.

"Heteroalquilo" significa un radical alquilo tal como se ha definido anteriormente, que lleva un sustituyente que contiene un heteroátomo seleccionado entre N, O, S(O)_{n}, donde n es un entero que oscilo entre 0 y 2. Los sustituyentes representativos incluyen -NR^{a}R^{b}, OR^{a} o -S(O)_{n}R^{c}, donde n es un entero que oscila entre 0 y 2, R^{a} es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, o -COR (donde R es alquilo, hidroxi o alcoxi), R^{b} es hidrógeno o alquilo y R^{c} es hidrógeno, alquilo, amino, monoalquilamino o dialquilamino. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a 2-metoxietilo, hidroximetilo, metoximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, -aminoetilo, 2-dimetilaminoetilo.

"Hidroxialquilo" significa un radical de hidrocarburo monovalente lineal que tiene entre dos y seis átomos de carbono o un radical de hidrocarburo monovalente ramificado, que tiene tres o seis carbonos sustituidos por uno o dos grupos hidroxi, con la condición de que si dos grupos hidroxi están presentes, ambos no están en el mismo átomo de carbono. Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, 2-hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxi-propilo, 1-(hidroximetilo)-2-metilpropilo, 2-hidroxibutilo, 3-hidroxibutilo, 4-hidroxibutilo, 2,3-dihidroxipropilo, 1-(hidroximetil)-2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxibutilo, 3,4-dihidroxibutilo y 2-(hidroximetilo)-3-hidroxipropilo, preferentemente 2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxipropilo, y 1-(hidroximetil)-2-hidroxietilo. El hidroxialquilo es un subconjunto del grupo heteroalquilo.

"Aralquilo" (arilalquilo) significa un radical -R^{a}R^{b} donde R^{a} es un grupo alquileno y R^{b} es un grupo arilo tal como se ha definido anteriormente, por ejemplo bencilo, feniletilo, 3-(3-clorofenilo)-2-metilpentilo.

"Alcoxi" significa un radical -OR, en el cual R es un alquilo, respectivamente tal como se ha definido anteriormente, por ejemplo metoxi, etoxi, propoxi.

"Opcional" u "opcionalmente" significa que el evento o circunstancia posteriormente descrito puede ocurrir pero no necesariamente, y que la descripción incluye casos en los cuales el evento o circunstancia ocurre y casos en los cuales no. Por ejemplo, "grupo heterociclo opcionalmente mono- o disustituido por un grupo alquilo" significa que el alquilo puede estar presente pero no necesariamente, y la descripción incluye situaciones donde el grupo heterociclo está mono- o disustituido por un grupo alquilo y situaciones en las cuales el grupo heterociclo no está sustituido por el grupo alquilo.

"Grupo amino-protector" se refiere a aquellos grupos orgánicos que tienen como fin proteger los átomos de nitrógeno contra reacciones indeseadas durante procedimientos sintéticos, por ejemplo bencilo, benciloxicarbonilo (CBZ), t-butoxicarbonilo (BOC), trifluoroacetilo.

Los compuestos que tienen la misma fórmula molecular pero no difieren en la naturaleza o secuencia de unión de sus tomos o en la disposición de sus átomos en el espacio, se denominan "isómeros". Los isómeros que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio, se denominan "estereoisómeros". Los estereoisómeros que no son idénticos entre sí, se denominan "diastereoisómeros" y aquellos que son idénticos no superponibles entre sí, se denominan "enantiómeros". Cuando un compuesto tiene un centro asimétrico, por ejemplo si un átomo de carbono está unido a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiómeros. Un enantiómero puede caracterizarse por la configuración absoluta de su centro asimétrico, y se describe a través de las reglas de secuenciación R- y S- de Cahn y Prelog, o por la forma en que la molécula rota el plano de luz polarizada, y se designa como dextrorotatorio o levorotatorio (es decir, como isómeros (+) o (-), respectivamente). Un compuesto quiral puede existir ya sea como enantiómero individual o como mezcla del mismo. Una mezcla que contiene iguales proporciones de enantiómeros, se denomina "mezcla racémica".

Los compuestos de la presente invención, pueden poseer uno o más centros asimétricos; por lo tanto, dichos compuestos pueden producirse como estereoisómeros (R)- o (S)- individuales, o como mezclas de los mismos. Por ejemplo, si el sustituyente R^{1} en el compuesto de Fórmula (I) es alquilo, entonces el carbono al cual está adherido es un centro asimétrico y el compuesto de Fórmula (I) puede existir como estereoisómero (R)- o (S)-. Salvo indicación contraria, la descripción o el nombre de un compuesto en particular en la memoria descriptiva o en las reivindicaciones, tiene la intención de incluir tanto enantiómeros individuales como mezclas racémicas y otras de los mismos. Los métodos para determinar la estereoquímica y la separación de estereoisómeros, son conocidos en el arte (ver tratamiento del tema en el Capítulo 4 de "Advanced Organic Chemistry", 4ª Edición, J. March, Jonh Wiley and Sons, Nueva York, 1992).

Un "excipiente farmacéuticamente aceptable" significa un excipiente que es útil para preparar una composición farmacéutica que es generalmente segura, no es tóxica ni biológicamente o de otro modo inaceptable, e incluye un excipiente que es aceptable para el uso veterinario así como también para el uso farmacéutico en humanos. "Un excipiente farmacéuticamente aceptable" tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones, incluye tanto uno como más de uno de dicho excipiente.

"Una sal farmacéuticamente aceptable" de un compuesto, significa una sal que es farmacéuticamente aceptable y que posee la actividad farmacológica deseada del compuesto madre. Dicha sal incluye:

(1)

Sales de adición ácidas, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares; o formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 1,2-etano-disulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 4-clorobencenosulfónico, ácido 2-naftalensulfónico, ácido 4-toluensulfónico, ácido canforsulfónico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]oct-2-eno-1-carboxílico, ácido glucoheptónico, 4,4'-metilenbis-(ácido 3-hidroxi-2-eno-1-carboxílico), ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetil-acético, ácido butilacético terciario, ácido lauril-sulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico, o

(2)

sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto madre, es reemplazado por un ión de metal, por ejemplo un ión de metal alcalino, un ión alcalinotérreo, o un ión de aluminio; o coordina con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina.

La frase "grupo de salida" tiene el significado convencionalmente asociado a la misma en la química orgánica sintética, es decir un átomo grupo capaz de ser desplazado por un nucleófilo, e incluye halógeno, alcanosulfoniloxi, arenosulfoniloxi, éster, o amino tal como cloro, bromo, yodo, mesiloxi, tosiloxi, trifluorosulfoniloxi, metoxi, N,O-dimetilhidroxilamino.

El término "tratar" o "tratamiento" de una enfermedad incluye:

(1)

prevención de una enfermedad, es decir lograr que los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrollen en un mamífero, que puede estar expuesto o predispuesto a la enfermedad, pero que aún no ha experimentado o manifestado los síntomas de la enfermedad,

(2)

inhibición de la enfermedad, es decir deteniendo o reduciendo el desarrollo de la enfermedad o sus síntomas clínicos, o

(3)

alivio de la enfermedad, es decir causar la regresión de la enfermedad o de sus síntomas clínicos.

La frase "cantidad terapéuticamente eficaz" significa la cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un mamífero para tratar la enfermedad, es suficiente para llevar a cabo dicho tratamiento para la enfermedad. La "cantidad terapéuticamente eficaz" dependerá del compuesto, de la enfermedad y su gravedad, y de la edad, peso, etc. del mamífero a tratar.

La nomenclatura utilizada en la presente solicitud, se basa en general en las recomendaciones del IUPAC.

La cadena de pirrolidina está numerada de la siguiente manera:

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2

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y los compuestos de la invención, se denominan de la siguiente manera:

Un compuesto de Fórmula (I), donde Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo, alf^{2} es -CH_{2}-, R^{1} es hidrógeno, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, X es -CONH-, Y es -(CH_{2})_{2}- y Ar^{1} es piridin-2-ilo, Ar^{2} es 4-metoxifenilo y se encuentra en la posición 5 de la cadena de pirimidina, se denomina N-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-3-[5-(4-metoxifenil)pirimidin-2-il]propionamida.

Un compuesto de Fórmula (I), donde Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo, alk^{2} es -CH_{2}-, R^{1} es metilo, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, X es -CONH-, Y es -SCH_{2}- y ar^{1} es pirimidin-2-ilo, Ar^{2} es 4-metoxifenilo y se encuentra en la posición 5 de la cadena de pirimidina, se denomina N-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metil-pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida.

Un compuesto de Fórmula (I), donde Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo, alk^{2} es -(CH_{2})_{2}-, X es -CONH-, Y es -OCH_{2}- y Ar^{1} es pirimidin-2-ilo, Ar^{2} es 4-metoxifenilo y se encuentra en la posición 5 de la cadena de pirimidina, se denomina N-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4 -dimetoxifenil)pirimidin-2-iloxi]acetamida.

Un compuesto de Fórmula (I), donde Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo, alk^{2} es -CH_{2}-, R^{1} es metilo, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, X es -CONH-, Y es -NHCH_{2}- y Ar^{1} es pirimidin-2-ilo, Ar^{2} es 3,4-metoxifenilo y se encuentra en la posición 5 de la cadena de pirimidina, se denomina N-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilamino]acetamida.

Un compuesto de Fórmula (I), donde Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo, alk^{2} es -CH_{2}-, R^{1} es acetilo, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, X es -CONH-, Y es -SCH_{2}- y Ar^{1} es pirimidin-2-ilo, Ar^{2} es 3,4-metoxifenilo y se encuentra en la posición 5 de la cadena de pirimidina, se denomina N-[1-acetil-4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida.

Un compuesto de Fórmula (I), donde Ar^{3} es 3,4-dicloro-fenilo, alk^{2} es -CH_{2}-, R^{1} es hidrógeno, alk^{1} es -(CH_{2})-, X es -CONH-, Y es -CH_{2}NH- y Ar^{1} es pirimidinilo, Ar^{2} es 4-metoxifenilo y se encuentra en la posición 5 de la cadena de pirimidina, se denomina 1-[4-(3,4-diclorobencil)-pirrolidin-2-ilmetil]-3-(4-metoxifenil-pirimidin-2-ilmetil)urea.

3

4

5

6

En los compuestos de fórmula (I), de preferencia, R^{1} es hidrógeno, alquilo, acilo o -SO_{2}R^{a}, en donde R^{a} es alquilo. Más preferentemente, R^{1} es hidrógeno, metilo, etilo, acetilo, trifluoroacetilo, -COCH_{2}CO_{2}H; -COCH_{2}CO_{2}R', en donde R^{1} es alquilo o -SO_{2}CH_{3}-. Aún más preferentemente, R^{1} es hidrógeno, metilo, etilo, acetilo, -COCH_{2}CO_{2}H-, -COCH_{2}CO_{2}R', -CO_{2}-ter-butilo.

De preferencia, alk^{1} es una cadena alquileno de 1 a 3 átomos de carbono; más preferentemente metilo, etilo o n-propilo, aún más preferentemente metilo o etilo.

De preferencia X es -CONH-.

De preferencia Y es -SCH_{2}- u -OCH_{2}-.

De preferencia Ar^{1} es piridin-2-ilo o pirimidin-2-ilo. Aún más preferentemente pirimidin-2-ilo.

De preferencia Ar^{2} es fenilo o 3,4-dimetoxifenilo y está en la posición 5 del anillo pirimidin-2-ilo o piridin-2-ilo.

De preferencia, Alk^{2} es -CH_{2}-.

Preferentemente, Ar^{3} es fenilo opcionalmente sustituido por 1 ó 2 grupos halo. Con mayor preferencia aún, Ar^{3} es 3,4-diclorofenilo.

Preferentemente, X es -CONH- e Y es -SCH_{2}- u -OCH_{2}-.

Preferentemente, X es -CONH-, Y es -SCH_{2}- u -OCH_{2}- y Ar^{1} es piridilo o pirimidinilo. Con mayor preferencia, Ar^{1} es piridin-2-ilo o pirimidin-2-ilo. Con mayor preferencia aún, pirimidin-2-ilo.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de varias maneras conocidas por los expertos en el arte. Los métodos preferidos incluyen, pero no se limitan a los procedimientos sintéticos generales que se describen a continuación.

Las materias primas y reactivos utilizados para preparar estos compuestos se encuentran disponibles comercialmente de proveedores tales como Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, Wisconsin, EUA), Bachem (Torrance, California, EUA), Emka-Chemie, o Sigma (St. Louis, Missouri, EUA), Maybridge (Dist: Ryan Scientific, P.O. Box 6496, Columbia, SC 92960), Binet Research Ltd., (Conwall PL32 9Qz, Reino Unido), Menai Organics Ltd., (Gwynedd, N. Wales, Reino Unido), UVT Park Ltd., (Dist. Interchim, Montlucon Cedes, Francia), o se preparan a través de métodos conocidos por los expertos en el arte, siguiendo los procedimientos que aparecen en referencias tales como Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volúmenes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991); Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volúmenes 1-5 y Complementarios (Elsevier Science, Publishers, 1989), Organic Reactions, Volúmenes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991), March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 1992), y Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989). Estos esquemas son meramente ilustrativos de algunos métodos, por medio de los cuales se pueden sintetizar los compuestos de la presente invención, y se pueden realizar varias modificaciones a los mismos, las cuales se sugerirán a los expertos en el arte quienes se hayan referido a la presente divulgación.

Los materiales de partida y los intermediarios de la reacción, pueden aislarse y purificarse, si se desea, utilizando las técnicas convencionales, que incluyen pero no se limitan a filtración, destilación, cristalización, cromatografía y demás. Dichos materiales pueden caracterizarse utilizando medios convencionales, que incluyen constantes físicas y datos espectrales.

Los compuestos de Fórmula (I) donde X es -CONH-, alk^{1} es -CH_{2}-, los demás grupos son tal como se han definido previamente y la estereoquímica en los átomos de carbono C2 y C4 de la cadena de pirrolidina es (2S,4R) pueden prepararse tal como se ilustra en el Esquema I que aparece a continuación.

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Esquema I

7

El tratamiento de etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato 1 con di-terc-butildicarbonato, produce etil (S)-1-terc-butoxicarbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato 2. la reacción se lleva a cabo en un solvente orgánico inerte como cloruro de metileno, cloroformo, éter y similares, en presencia de una amina orgánica como trietilamina y dimetilaminopiridina a temperatura ambiente. El experto en el arte podrá reconocer, que se pueden utilizar otros grupos protectores de nitrógeno adecuados, tales como benciloxicarbonilo.

El tratamiento de 2 con un haluro de aralquilo/haluro de heteroaralquilo de fórmula Ar^{3}-alk^{2}-LG, donde Ar^{3} y alk^{2} son tal como se han definido previamente, y LG es un grupo de salida adecuado como halo, tosilato, mesilato, triflato y similares, brinda un etil (S)-1-terc-butoxicarbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato 4-sustituido 3. La reacción se lleva a cabo en presencia de una base fuerte tal como LiHDMS, en una solución etérea como tetrahidrofurano, éter dietílico y similares. La reacción se lleva a cabo inicialmente aproximadamente a -78ºC y luego se calienta hasta temperatura ambiente. Los haluro de aralquilo/haluro de heteroaralquilo de fórmula Ar^{3}-alk^{2}LG, se encuentran disponibles comercialmente o se pueden preparar a través de métodos conocidos por los expertos en el arte. Por ejemplo, el cloruro de bencilo, bromuro de 3,4-diclorobencilo, y cloruro de 3-clorobencilo, se encuentran disponibles comercialmente. Otros se pueden preparar a partir de alcoholes disponibles comercialmente tales como alcohol bencílico 2-feniletanol, 3-fenilpropanol, tratándolos con un agente halogenante como ser PBr_{3}POCl_{3} y similares. Alternativamente, los alcoholes pueden convertirse en derivados de mesilo, tosilo, o triflato, a través de métodos conocidos en el arte y se pueden utilizar en la reacción anterior en lugar de los haluros de alquilo.

La reducción del éster y de los grupos amido en el compuesto 3 con un agente de reducción adecuado, como borano en solución etérea tal como tetrahidrofurano, aproximadamente a 40ºC, proporciona el correspondiente (2S,4R)-4-(aralquil o heteroalquil)-2-hidroximetil-2-terc-butoxi-carbonilpirrolidina de fórmula 4. El grupo hidroxi en 4 se convierte en un grupo de salida adecuado, como mesilato, tosilato, a través de métodos conocidos en el arte. La reacción se lleva a cabo tratando 4 con cloruro de metanosulfonilo o cloruro de p-toluensulfonilo respectivamente, en presencia de una base como trietilamina, piridina y similares, y en un solvente inerte tal como cloruro de metileno.

El desplazamiento del grupo mesilato/tosilato en el compuesto 5 con un ión de azida, seguido de la reacción del grupo azido en la (2S,4R)-4-(aralquil o heteroalquil)-2-azidometil-1-terc-butoxicarbonilpirrolidina resultante de fórmula 6, produce una (2S,4R)-4-(aralquil o heteroalquil)-2-aminometil-1-terc-butoxicarbonilpirrolidina de fórmula 7. El desplazamiento del grupo mesilato ocurre al calentar 5 con azida de sodio en un solvente orgánico polar, como dimetilformamida.

La reducción del grupo azido en 6 a grupo amino, se lleva a cabo bajo condiciones de reacción de hidrogenación catalítica, utilizando un catalizador adecuado como óxido de platino. La reacción se lleva a cabo en acetato de etilo a presión atmosférica y a temperatura ambiente.

Luego, se convierte el compuesto 7 en un compuesto de Fórmula (I), donde X es un grupo -CONH-, tratando 7 con un ácido de fórmula 8, donde Ar^{1}, Ar^{2} e Y son tal como se han definido previamente. La reacción se lleva a cabo en presencia de un agente de acoplamiento tal como 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, dietilazacarbodiimida (DEAD) y opcionalmente en presencia de un catalizador tal como hidrato de 1-hidroxibenzotriazol. La reacción se lleva a cabo en solventes tales como cloruro de metileno, tetrahidrofurano y a temperatura ambiente. Alternativamente, la reacción de acoplamiento se puede llevar a cabo convirtiendo 8 en un haluro ácido, como cloruro ácido, seguido de la reacción con 7 en presencia de una base como trietilamina, piridina y similares.

Los ácidos de fórmula 8 se encuentran disponibles comercialmente o se pueden preparar a través de métodos conocidos en el arte. Por ejemplo, el ácido 2-(5-metil-2-feniloxazol-4-il)acético ácido 2-(3-metil-2-N-fenilpirazol-4-il)acético, ácido 2-(2-pirazin-2-iltiazol-4-il)acético, ácido 2-[2-(piridin-2-il)-6-trifluorometilpirimidin-4-il-sulfanil]acético, ácido 2-[6-(4-clorofenil)pirimidin-2-il-sulfanil]acético, ácido 2-(3-fenilpirazol-1-il)acético, y ácido 2-metil-2-(4-tiofenoilfenil)acético, se encuentran disponibles comercialmente.

Otros pueden prepararse a través de métodos conocidos en el arte. Por ejemplo, el ácido 3-[4-(4-metoxifenil)pirimidin-2-il]propanoico puede prepararse agregando una solución de etóxido de sodio (21% p/v en etanol, 10 ml, 30 mmol, 3 equiv.) a una suspensión de perclorato de 2-(4-metoxifenil)trimetinio (3,3 g, 9,8 mmol) [ver, Jutz, C.; Kirchlechner, R.; Seidel, H. Chem. Ber. 102, 2301, (1969)] y mono HCl de ácido 4-amidinobutanoico (1,5 g, 9,8 mmol) [ver, McElvain, S.M.; Schroeder, J.P. J. Am. Chem. Soc., 71, 40, (1949)] en etanol absoluto (40 ml) y calentando la mezcla de reacción a reflujo durante 12 horas. La suspensión se concentra, diluye con agua, y lava con éter. Luego, se acidifica la fase acuosa con ácido cítrico (10 g). Los precipitados se filtran lavan con agua y éter, y secan bajo gran vacío para obtener ácido 3-[4-(4-metoxifenil)-pirimidin-2-il]propanoico.

El ácido 3-[5-(4-nitrofenil)pirimidin-2-il]-propanoico se prepara de la siguiente manera: se agrega oxicloruro de fósforo (83 ml, 0,79 mol) lentamente en dimetilformamida seca y fría (100 ml) bajo N_{2}, a una velocidad tal que la temperatura no supere los 5ºC. Una vez completada la adición, se agrega ácido 4-nitrofenilacético (48 g, 0,26 mol) en una porción y se calienta la mezcla de reacción hasta 85ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfría y luego se vierte en hielo. Se agrega monohidrato de perclorato de sodio sólido (37 g, 0,26 mol) para iniciar la precipitación del producto como sal de perclorato. La filtración del sólido, seguido de lavado con agua fría, metanol y éter, proporciona perclorato de 2-(4-nitrofenil)trimetinio.

Se agrega una solución de etóxido de sodio (21% p/v, en etanol, 60 ml, 180 mmol, 3 equiv.) en una porción, a una suspensión de perclorato de 2-(4-nitrofenil)trimetinio (20,8 g, 60 mmol) y sal de monoclorhidrato de ácido 4-amidinopropiónico (9,1 g, 60 mmol) en etanol (300 ml). La suspensión se calienta a temperatura ambiente durante la noche. La suspensión resultante se filtra, lava con etanol, HCl frío, agua y éter, luego se seca bajo vacío para obtener ácido 3-[5-(4-nitrofenil)pirimidin-2-il]-propanoico que se puede hidrogenar bajo condiciones estándares de hidrogenación catalítica (es decir, utilizando catalizador Pd/C en el solvente metanol a presión atmosférica) para obtener ácido 3-[5-(4-aminofenil)pirimidin-2-il]propiónico. El ácido 2-[5-(4-metoxifenil)pirimidin-2-ilamino]acético (150 mg), se prepara agregando una solución etanólica de etóxido de sodio (2,7 M, 3,8 ml, 10 mmol, 2,9 equiv.) a una suspensión de sal de perclorato de 2-(4-metoxifenil) trimetinio (1,1 g, 3,4 mmol) y ácido guanidinacético (0,48 g, 4,0 mmol, 1,2 equiv.) en etanol deshidratado (20 ml). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego a reflujo durante 3 horas. Después de enfriar, se filtra la sal sódica y se disuelve la torta en 20 ml de agua y luego se acidifica con ácido clorhídrico 1M. La capa acuosa se extrae con acetato etílico y las fases orgánicas combinadas se lavan con salmuera y secan en sulfato de sodio. La eliminación del solvente bajo vacío, produce un sólido que contiene una mezcla \sim1:1 de regioisómeros. Se separan los dos componentes utilizando cromatografía de fase inversa para obtener ácido 2-[5-(4-metoxifenil)pirimidin-2-ilamino]acético y el regioisómero.

El ácido 2-(5-fenilpirimidin-2-iloxi)acético y sus derivados, pueden prepararse por reacción de 5-bromo-2-cloropirimidina (preparada tal como se describe en la publicación de patente de invención PCT No. WO 00/31032, cuya divulgación se incorpora a la presente en su totalidad) con glicolato de metilo para obtener metil 5-bromopirimidin-2-iloxiacetato. El acoplamiento de metil 5-bromopirimidin-2-iloxiacetato con ácido fenilborónico bajo las condiciones de reacción que se describen en el Ejemplo 8, etapa 5 del documento WO 00/31032, seguido de hidrólisis básica del grupo éster, proporciona ácido 2-(5-fenilpirimidin-2-iloxi)acético.

Luego, la desprotección del grupo BOC proporciona un compuesto de Fórmula (I), donde R^{1} es hidrógeno. La desprotección se lleva a cabo bajo condiciones de reacción de hidrólisis ácida. Los ácidos adecuados son ácido trifluoroacético, ácido clorhídrico y similares.

Un compuesto de Fórmula (I), donde R^{1} es hidrógeno puede convertirse luego en otros compuestos de Fórmula (I), donde R^{1} es un compuesto diferente de hidrógeno, a través de los métodos conocidos en el arte.

Un compuesto de Fórmula (I), donde R^{1} es hidrógeno, puede tratarse con un haluro de acilo o haluro de sulfonilo en presencia de una base no nucleófila, como trietilamina, piridina y en solvente orgánico adecuado, como cloruro de metileno, tetrahidrofurano y similares, para obtener un compuesto de Fórmula (I) correspondiente, donde R^{1} es acilo. Los haluros de acilo tales como cloruro de acetilo, cloruro de propionilo, cloruro de trifluoroacetilo y cloruro de monometoxi malonilo, se encuentran disponibles comercialmente. Los haluros de sulfonilo tales como cloruro de metanosulfonilo, se encuentran disponibles comercialmente.

Un compuesto de Fórmula (I) que tiene un sustituyente alcoxi, por ejemplo, en el grupo Ar^{1} o Ar^{3}, puede convertirse en un compuesto de Fórmula (I) correspondiente con un grupo hidroxi, por desalquilación del grupo alcoxi bajo condiciones conocidas en el arte. De igual modo, un compuesto de Fórmula (I) que tiene un sustituyente nitro, por ejemplo en el grupo Ar^{1} o Ar^{3}, puede convertirse en un compuesto de Fórmula (I) correspondiente con un grupo amino bajo condiciones estándares de reacción de hidrogenación catalítica.

Adicionalmente, el empleo de etil (R)-2-pirrolidona-5-carboxilato como materia prima en lugar de etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato 1, proporciona compuestos de fórmula (I) que tienen la estereoquímica (2R,4S) en la cadena de pirrolidina.

Los compuestos de Fórmula (I), en la cual X es -CONH, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, los demás grupos son tal como se han definido previamente y la estereoquímica en los átomos de carbono C2 y C4 de la cadena de pirrolidina es (2S,4R), pueden prepararse tal como se ilustra en el Esquema II que aparece a continuación.

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Esquema II

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8

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Un compuesto de Fórmula (I), donde X es -CONH- y alk^{1} es -(CH_{2})_{2}- y los demás grupos son tal como se han definido previamente, puede prepararse a partir de un compuesto de fórmula 5 convirtiéndolo primero en un derivado ciano de fórmula 10, a través de la reacción del mismo con cianuro de sodio o potasio en sulfóxido de dimetilo, entre 70 y 90ºC. La reducción del grupo ciano con un agente de reducción adecuado, como diborano en tetrahidrofurano, da un derivado de aminoetilo de fórmula 11. El compuesto 11 se convierte luego en un compuesto de Fórmula (I), donde X es -CONH tal como se describe en el Esquema I anterior. Aquí también, la sustitución de etil (R)-2-pirrolidona-5-carboxilato como material de partida en lugar de etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato, da un compuesto de Fórmula (I) que tiene estereoquímica (2R,4S) en la cadena de pirrolidina.

Los compuestos de Fórmula (I), donde X es -CONH-, R^{1} es alquilo, alk^{1} es -(CH_{2})-, los demás grupos son tal como se han definido previamente y la estereoquímica en los átomos de carbono C2 y C4 en la cadena de pirrolidina es (2S,4S) o (2S,4R), pueden prepararse tal como se ilustra y describe en el Esquema III que aparece a
continuación.

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Esquema III

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9

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La eliminación del grupo terc-butoxicarbonilo en el compuesto 3 en presencia de una base fuerte como hidruro de sodio anterior, brinda un compuesto de fórmula 12. La alquilación de 12 con un haluro de alquilo de fórmula R^{1}LG, en la cual LG es cloro, bromo o yodo, da una mezcla de diastereoisómeros de fórmula 13a y 13b. Los diastereo-isómeros pueden separarse, si se desea, mediante cromatografía en columna tal como se describe en el Ejemplo 4 que aparece más adelante. El tratamiento de 13a o 13b con amoníaco en metanol a temperatura ambiente, da el correspondiente derivado de 2-amido-5-oxopirrolidina de fórmula 14a o 14b, respectivamente.

La reducción del grupo 2-amido en 14a o 14b da el correspondiente derivado de 2-aminometilpirrolidina de fórmula 15a o 15b respectivamente, que luego se convierte en un compuesto de Fórmula (I) tal como se describe detalladamente en el Esquema I anterior. La reducción del grupo amido se lleva a cabo por calentamiento de 14a o 14b con diborano en tetrahidrofurano.

A través de la sustitución de etil (R)-2-pirrolidona-5-carboxilato como material de partida en lugar de etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato, se obtienen los enantiómeros de 15a o 15b como productos.

Alternativamente, los compuestos de Fórmula (I), en los cuales la cadena de pirrolidina tiene estereoquímica (2S,4S), es decir los grupos en la posición C-2 y C-4 de la cadena de pirrolidina son sin entre sí, pueden prepararse calentando los compuestos 3 en dimetilformamida en presencia de cianuro de potasio tal como se describe en Ezquerra, J., et al., Tetrahedron, 49, 8665 (1993). Esta reacción produce la racemización en el carbono C-4 en 3, dando de esta manera compuestos de fórmula 3, donde -CO_{2}Et y los grupos -alk^{2}-Ar^{3} son sin o trans entre sí. Estos diastereoisómeros pueden separarse y luego convertirse en un compuesto de Fórmula (I) tal como se ha descrito anteriormente.

Los compuestos de Fórmula (I), donde x es -CONH-, R^{1} es metilo u otro grupo alquilo, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, los demás grupos son tal como se han definido previamente y la estereoquímica en los átomos de carbono C2 y C4 de la cadena de pirrolidina es (2S,4R), pueden prepararse tal como se ilustra y describe en el Esquema IV que aparece a
continuación.

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Esquema IV

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10

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El calentamiento prolongado del compuesto 3 con diborano en exceso en tetrahidrofurano, seguido de calentamiento con ácido clorhídrico en metanol, da un derivado de N-metil-2-hidroximetilpirrolidina de fórmula 16. El compuesto 16 luego se convierte en un compuesto de Fórmula (I), en el cual X es -CONH-, alk^{1} es -(CH_{2})_{2}-, los demás grupos son tal como se han definido previamente y la estereoquímica en la cadena de pirrolidina es (2S,4R) tal como se ha descrito en el Esquema II anterior. En el esquema II el ter-butoxicarbonilo puede ser otro grupo protector de nitrógeno apropiado tal como benciloxi-carbonilo.

Los compuestos de la invención son antagonistas del receptor CCR-3 e inhiben el reclutamiento de eosinófilos a través de quimiocinas de CCR-3 tal como RANTES, eotaxina, MCP-2, MCP-3 y MCP-4. Los compuestos de la invención y las composiciones que los contienen, son útiles en el tratamiento de enfermedades inducidas por eosinófilos, tales como enfermedades inflamatorias o alérgicas, e inclusive enfermedades alérgicas respiratorias tales como asma, rinitis alérgica, enfermedades pulmonares por hiper-sensibilidad, neumonitis por hipersensibilidad, neumonías eosinofílicas (por ejemplo, neumonía eosinofílica crónica); enfermedades intestinales inflamatorias (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); y psoriasis y dermatosis inflamatoria, tales como dermatitis y eccema.

Además, se ha descubierto recientemente que el receptor CCR-3 cumple una función en la patogénesis del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). En consecuencia, los compuestos de la presente invención y composiciones que los contienen, también son útiles en el tratamiento del SIDA.

Se midió la actividad antagonista de CCR-3 de los compuestos de la invención, a través de ensayos in vitro tales como ensayos de unión de ligando y quimiotaxis tal como se describe más detalladamente en los Ejemplos 9, 10 y 11. Se ensayo la actividad in vivo en el Asma Inducido por Ovoalbúmina en Modelos de Ratones Balb/c, tal como se describe más detalladamente en el Ejemplo 12.

En general, los compuestos de la presente invención se administrarán en una cantidad terapéuticamente eficaz, por medio de cualquiera de las formas de administración aceptadas para agentes que cumplen los mismos fines. La cantidad real del compuesto de la presente invención, es decir el ingrediente activo, dependerá de numerosos factores tales como gravedad de la enfermedad a tratar, edad y salud relativa del sujeto, potencia del compuesto utilizado, vía y forma de administración, y otros factores.

Las cantidades terapéuticamente eficaces de los compuestos de Fórmula (I), pueden oscilar entre aproximadamente 0,01 y 20 mg por kilogramo de peso corporal del que los recibe, por día; preferentemente, aproximadamente entre 0,1 y 10 mg/kg/día. Por lo tanto, para la administración a una persona de 70 kg, el rango de dosificación oscilará con mayor preferencia entre aproximadamente 7 mg y 0,7 g por día.

En general, los compuestos de la presente invención se administrarán como composiciones farmacéuticas, a través de cualquiera de las siguientes vías: administración oral, por inhalación (por ejemplo, inhalación oral o intranasal) o parenteral (por ejemplo, intramuscular, intravenosa o subcutánea). Una vía de administración preferida es la oral, utilizando un régimen de dosificación diario conveniente, que se puede regular de acuerdo con el grado de aflicción. Las composiciones pueden presentarse en forma de comprimidos, píldoras, cápsulas, semisólidos, polvos, formulaciones de liberación prolongada, soluciones, suspensiones, liposomas, elixires, o cualquier otra composición apropiada. Otra forma preferida para la administración del compuesto de la invención es la inhalación. Este es un medio eficaz para suministrar un agente terapéutico directamente en el tracto respiratorio, para el tratamiento de enfermedades tales como asma y otras alteraciones tracto respiratorias similares o relacionadas (ver, patente de invención estadounidense 5.607.915).

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La selección de la formulación depende de varios factores tales como forma de administración del fármaco y biodisponibilidad de la sustancia del fármaco. Para suministrarlo por inhalación, el compuesto puede formularse como soluciones o suspensiones líquidas, propulsores de aerosol, o polvo seco, y se cargan en un envase de suministro adecuado para la administración. Existen tres tipos de dispositivos de inhalación farmacéuticos -inhaladores nebulizadores, inhaladores de dosis fija (IDF) e inhaladores de polvo seco (IPS). Los dispositivos nebulizadores producen un flujo de aire a alta velocidad, que causan la pulverización de agentes terapéuticos (que se han formulado en forma líquida) como vaporización que entra en el tracto respiratorio de paciente. Típicamente, los IDF presentan la formulación envasada con un aire comprimido. Al accionarlo, el dispositivo descarga una cantidad medida de agente terapéutico mediante aire comprimido, obteniendo así un método confiable para administrar una cantidad fija de agente. Los IPS administran agentes terapéuticos en forma de polvo de libre circulación, que se puede dispersar en el caudal de aire inspiratorio del paciente, durante la inhalación del dispositivo. Para lograr un polvo de libre circulación, el agente terapéutico está formulado con un excipiente, como lactosa. Se almacena una cantidad agente terapéutico medida, en una forma de cápsula y se suministra al paciente con cada accionamiento.

Recientemente, se han desarrollado formulaciones farmacéuticas especialmente para fármacos que exhiben una escasa biodisponibilidad, en base al principio de que se puede incrementar la biodisponibilidad, aumentando la superficie, es decir disminuyendo el tamaño de partículas. Por ejemplo, la patente de invención estadounidense Nº 4.107.288 describe una formulación farmacéutica que tiene partículas cuyo tamaño oscila entre 10 y 1.000 nm, en la cual el material activo está soportado en una matriz reticulada de macromoléculas. La patente de invención estadounidense Nº 5.145.684 describe la producción de una formulación farmacéutica, en la cual se pulveriza la sustancia del fármaco en nanopartículas (tamaño promedio de partículas 400 nm) en presencia de un modificador de superficie, y luego se dispersa en un medio líquido para obtener una formulación farmacéutica que exhibe una biodisponibilidad notablemente alta.

Las composiciones están compuestas en general, por un compuesto de Fórmula (I) en combinación con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los excipientes aceptables no son tóxicos, facilitan la administración, y no afectan adversamente el beneficio terapéutico del compuesto de Fórmula (I). Dicho excipiente puede ser cualquier sólido, líquido, semisólido, o en el caso de una composición en aerosol, un excipiente gaseoso que en general, se encuentra disponible para los expertos en el arte.

Los excipientes farmacéuticos sólidos incluyen almidón, celulosa, talco, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, yeso, gel de sílice, estearato de magnesio, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, cloruro de sodio, leche descremada desecada y similares. Los excipientes líquidos y semisólidos pueden seleccionarse entre glicerol, propilenglicol, agua, etanol y varios aceites, incluso los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético, por ejemplo aceite de maní, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, etc. los portadores líquidos preferidos, en particular para soluciones inyectables, incluyen agua, solución salina, dextrosa acuosa y glicoles.

Se pueden utilizar gases comprimidos para dispersar un compuesto de la presente invención en forma de aerosol. Los gases inertes adecuados para este fin son nitrógeno, dióxido de carbono, etc.

Para las formulaciones del fármaco en liposomas, para el suministro parenteral u oral, el fármaco y los lípidos se disuelven en un solvente orgánico adecuado, por ejemplo terc-butanol, ciclohexano (etanol al 1%). Se liofiliza la solución y la mezcla lipídica se suspende en un tampón acuoso y se deja formar un liposoma por sonificación (ver, Frank Szoka, Jr. y Demetrios Papahadjopoulos, "Comparative Properties and Methods of Preparation of Lipid Vesicles (Liposomes)", Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9:467-508 (1980), y D.D. Lasic, "Novel Applications of Liposomes", Trends in Biotech., 16: 467-608, (1998)).

Otros excipientes farmacéuticos adecuados y sus formulaciones, se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, editado por E. W. Martín (Mack Publishing Company, 18º ed., 1990).

El nivel del compuesto en una formulación puede oscilar entre el rango total empleado por los expertos en el arte. Típicamente, la formulación contendrá, en base al porcentaje del peso (% del peso), entre aproximadamente 0,01 y 99,99% del peso de un compuesto de Fórmula (I), en base a la formulación total, siendo el resto uno o más excipientes farmacéuticos. Preferentemente, el compuesto está presente en un nivel aproximadamente del 1-80%. Las formulaciones farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de Fórmula (I), se describen en el
Ejemplo 8.

Ejemplos Ejemplo 1 Síntesis de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxi-carbonilpirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida

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Etapa 1

A una solución de etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato (25,5 g, 162 mmol) en cloruro de metileno (250 ml), se agregó, en orden, anhídrido BOC (36,5 g, 167 mmol), trietilamina (24,8 ml, 178,4 mmol) y DMAP (2,0 g, 16,2 mmol), y se agitó la mezcla a 20ºC durante 16 horas. Se eliminó el solvente mediante evaporación bajo presión reducida, y la mezcla resultante se disolvió nuevamente en EtOAc, se lavó con agua y luego secó en Na_{2}SO_{4}. la evaporación hasta secarse y la purificación por medio de cromatografía por filtración en gel de sílice, eluyendo con 50% de EtOAc-hexano, produjeron etil (S)-1-terc-butoxi-carbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato (38,3 g, 149,2 mmol) como aceite que se cristalizó al dejarlo reposar.

Etapa 2

Se enfrió una solución de etil (S)-1-terc-butoxi-carbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato (5,0 g, 194, mmol) en THF seco (100 ml), a -78ºC mientras se agitaba bajo N_{2}, después de lo cual se agregó una solución 1,0 M de hexametildisilazida de litio en THF (21,4 ml, 21,4 mmol) por medio de una jeringa durante 3 minutos. Después de agitar durante 12 minutos, se agregó HMPA (3,7 ml, 21,4 mmol) a la mezcla, con una jeringa, y después de otros 5 minutos, se agregó una solución de bromuro de 3,4-diclorobencilo (5,1 g, 21,4 mmol) en THF (10 ml), a través de un embudo de adición durante 3 minutos. La agitación a -78ºC continuó durante 1 hora, después de lo cual se agregó NH_{4}Cl acuoso saturado (10 ml) y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente. La elaboración corriente entre EtOAc y H_{2}O, produjo un aceite que se solidificó. La purificación se llevó a cabo a través de dos recristalizaciones consecutivas a partir de acetona-hexano, lo cual produjo etil (2S,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato (5,68 g, 13,6 mmol) como producto cristalino blanco.

Etapa 3

A una solución de etil (2S,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato (1,92 g, 4,61 mmol) en THF recién destilado (10 ml), se agregó una solución 1,0 M de BH_{3} en THF (46 ml, 46 mmol) y la mezcla se entibió a 40ºC durante 3,5 horas. Luego, se enfrió la mezcla en hielo, se eliminó el exceso de BH_{3} a través de la adición cuidadosa de metanol y la concentración por evaporación in vacuo produjo un aceite transparente (3,02 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 40% de EtOAc-hexano produjo la (2S-4R)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-2-(hidroximetil)pirrolidina pura (0,99 g, 2,75 mmol).

Etapa 4

A una solución de (2S,4R)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-2-(hidroximetil)pirrolidina (1,38 g, 3,82 mmol) en cloruro de metileno (30 ml), se agregó trietilamina (0,78 ml, 5,72 mmol) seguido de cloruro de metanosulfonilo (0,36 ml, 4,58 mmol) y se agitó la mezcla a 20ºC durante 9 horas. Luego, se eliminó la mayor parte de CH_{2}Cl_{2} mediante evaporación in vacuo, y el residuo se diluyó con acetato de etilo y se lavó con NaHCO_{3} acuoso seguido de agua. El secado con Na_{2}SO_{4} seguido de evaporación in vacuo produjo 1,70 g de (2S,4R)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil 2-(metanosulfoniloximetil)pirrolidina, que se utilizó sin otra purificación.

Etapa 5

Se agregó cianuro de sodio (4,3 g, 87,4 mmol) a una solución de (2S,4R)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxi-carbonil-2-(metanosulfoniloximetil)pirrolidina cruda (7,7 g, 17,5 mmol) en DMSO seco (120 ml) y se calentó la mezcla a 80ºC con agitación durante 3,5 horas. Se enfrió la mezcla de reacción y elaboró entre EtOAc y Na_{2}CO_{3} acuoso. El secado al vacío del producto produjo 6,34 g (17,2 mmol) de (2S,4R)-2-(cianometil)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-pirrolidina como aceite ámbar.

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Etapa 6

A una solución de (2S,4R)-2-(cianometil)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-pirrolidina (6,34 g, 17,2 g) en THF seco (65 ml), se agregó una solución 1,0 M de BH_{3} en THF (110 ml, 110 mmol) y se calentó la mezcla a 45ºC durante 1,5 horas. Luego, se enfrió la mezcla en hielo y se templó a través de la adición de agua en forma de gotas hasta que cesó la espuma. Se acidificó la mezcla fría con 2N HCl y luego se agregaron otros 100 ml de 1N HCl, y luego se almacenó la mezcla a 6ºC durante 16 horas. La solución transparente se tornó básica con Na_{2}CO_{3} acuoso y luego se extrajo la emulsión resultante con CH_{2}Cl_{2}, y el completado de la elaboración final luego produjo 7,3 g del producto crudo. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con 0,5% de NH_{4}OH conc. y entre 10 y 15% de CH_{3}OH en CH_{2}Cl_{2}, produjo (2S,4R)-2-(2-aminoetil)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonilpirrolidina (4,40 g, 11,8 mm) como aceite transparente.

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Etapa 7

Se agitó una mezcla de cloruro de clorometilene-dimetilamonio (sal Vilsmeier; 25,0 g, 195,3 mmol; Aldrich) en DMF (45 ml), enfriando con hielo durante 15 minutos, después de lo cual se agregó ácido 3,4-dimetoxifenilacético (12,8 g, 65,1 mmol) en porciones, durante 10 minutos. Se agitó la reacción a 0ºC durante otros 10 minutos y luego se elevó la temperatura a 65ºC. Después de 20 minutos, se elevó la temperatura a 85ºC durante 1 hora, y luego se dejó enfriar la mezcla. Se vertió la mezcla en agua helada (200 ml) y perclorato de sodio (9,2 g, 65,1 mmol) y la mezcla se agitó a 0ºC hasta que se disolvió la sal y comenzó la cristalización del producto. Luego de reposar a 0ºC durante 16 horas, se recogió el producto mediante filtración y se lavó con pequeñas cantidades de agua helada y etanol frío, y luego con éter etílico. El secado al vacío produjo el producto perclorato de 2-(3,4-dimetoxifenil)-trimetinio (17,4 g, 48,0 mmol) como sólido blancuzco.

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Etapa 8

A una suspensión de perclorato de 2-(3,4-dimetoxifenil)trimetinio (17,4 g, 47,9 mmol) en DMF (60 ml) y tiourea (5,11 g, 67,1 mmol) en EtOH absoluto (160 ml), se agregó una solución de etóxido de sodio en etanol (2,7 M, 43 ml, 115 mmol) y se calentó la mezcla a 75ºC durante 3 horas. La mezcla se enfrió, neutralizó con ácido acético y se vertió en agua helada. La filtración del precipitado fino resultante, lavado con agua y secado al vacío, produjeron 5-(3,4-dimetoxifenil)-2-tiolpirimidina (11,5 g, 46,3 ml) como sólido amarillo.

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Etapa 9

A una solución de 5-(3,4-dimetoxifenil)-2-tiolpirimidina (2,49 g, 10,0 mmol) en DMF (60 ml), se agregó una suspensión al 60% de hidruro de sodio en aceite (0,42 g, 10,5 mmol). Después de agitar a 20ºC durante 1 hora, se agregó bromoacetato de etilo (1,8 g, 11,0 mmol), y se continuó agitando durante 20 horas. La mezcla se vertió en agua y extrajo con EtOAc para obtener el producto crudo. La purificación por cromatografía, eluyendo con 25% de acetona-hexano, produjo etil 5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-il]acetato como aceite amarillo (2,83 g, 8,46 mmol).

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Etapa 10

A una solución de etil 5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-il]acetato (2,83 g, 8,46 mmol) en EtOH (40 ml), se agregó una solución de LiOH.H_{2}O (0,53 g, 12,7 mmol) en agua (8 ml). Después de agitar a 20ºC durante 2 horas, se diluyó la suspensión resultante con agua y luego se acidificó con 2N HCl acuoso. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc para aislar el producto. La cristalización a partir de EtOAc-hexano, produjo ácido 5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-il]acético (2,23 g, 7,28 mmol) como agujas amarillas finas.

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Etapa 11

A una solución de (2S,4R)-2-(2-aminoetil)-4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-pirrolidina (4,4 g, 11,8
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (120 ml), se agregaron, en orden, ácido 5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-iltioacético (4,3 g, 14,1 mmol) (preparado tal como se ha descrito en las Etapas 7 a 10 anteriores), EDCI (3,4 g, 17,7 mmol) y HOBT (0,4 g, 2,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20ºC durante 2 horas, después de lo cual la elaboración final entre CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} acuoso seguido de purificación cromatográfica en gel de sílice, eluyendo con 50% de acetona-hexano, produjo N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonilpirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (5,5 g, 8,3 mmol).

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Ejemplo 2 Síntesis de clorhidrato de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida

12

Etapa 1

Se desprotegió clorhidrato de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonilpirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (5,5 g, 8,3 mmol), agitándolo con ácido triflluoroacético (0,25 ml) en solución de CH_{2}Cl_{2} (3 ml) durante 16 horas. La elaboración final de la mezcla de reacción entre CH_{2}Cl_{2} y Na_{2}CO_{3} acuoso, produjo la amina libre en forma de aceite. Se purificó el producto por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3% de isopropilamina y 15% de metanol en EtOAc, y luego se convirtió el producto en la sal de HCl mediante tratamiento con un equivalente de HCl/Et_{2}O. El producto se secó bajo vacío, y se obtuvo clorhidrato de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (4,33 g, 7,24 mmol) como sólido amarillo, pf 100,5-102,1ºC, espectro de masa 561 (MH^{+}).

Procediendo como se describe en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, pero sustituyendo etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato por etil (R)-2-pirrolidona-5-carboxilato, se obtuvo clorhidrato de N-(2R,4S)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-il-sulfanil]acetamida.

Procediendo como se describe en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, pero sustituyendo ácido 5-(3,4-dimetoxifenil)-pirimidin-2-iltioacético por ácido 5-(3,4-dimetoxifenil)-pirimidin-2-iltiopropiónico, se obtuvo clorhidrato de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-il]propionamida.

Procediendo como se describe en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, pero sustituyendo ácido 5-(3,4-dimetoxifenil)-pirimidin-2-iltioacético por ácido 5-(fenil)pirimidin-2-iltioacético, se obtuvo clorhidrato de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]-acetamida.

Procediendo como se describe en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, pero sustituyendo ácido 5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-iltioacético por ácido 5-(fenil)-pirimidin-2-iltioacético, y sustituyendo etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato por etil (R)-2-pirrolidona-5-carboxilato, se obtuvo clorhidrato de N-(2R,4S)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida.

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Ejemplo 3 Síntesis de N-(2R-4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-ilmetil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida

13

Etapa 1

A una solución de etanol de etil (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato (preparado tal como se describe en el Ejemplo 1, Etapas 1 & 2 anteriores, pero sustituyendo etil (S)-2-pirrolidona-5-carboxilato por etil (R)-2-pirrolidona-5-carboxilato) (1,0 g, 2,4 mmol), se agregó 1N HCl en éter (12 ml, 12 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 6 horas a 55ºC. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente, diluyó con acetato de etilo, y lavó con NaHCO_{3} acuoso. Se secó la capa orgánica en MgSO_{4}, filtró y concentró. La cromatografía instantánea (50% hexano/50% EtOAc) produjo etil (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-2-pirrolidona-5-carboxilato (543 mg, 1,72 mmol).

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Etapa 2

A una solución de THF de etil (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-2-pirrolidona-5-carboxilato (685 mg, 2,17 mmol), se agregó una mezcla de NaH al 60% (130 mg, 3,25 mmol) agitando en THF a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se agregó yoduro de metilo (0,27 ml, 4,34 mmol). Después de 6 horas, se enfrió la mezcla de reacción mediante la adición de una solución de NH_{4}Cl. Luego, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc y se lavó con salmuera. Se secó la capa orgánica en MgSO_{4}, filtró y concentró. La cromatografía instantánea (60% hexano/40% EtOAc) produjo el isómero anti menos polar etil (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona-5-carboxilato (216 g, 0,66 mmol) y el isómero sin más polar etil (2R,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona-5-carboxilato (130 mg, 0,4 mmol).

Etapa 3

Al isómero etil (2R,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona-5-carboxilato (910 mg, 2,76 mmol), se agregaron 30 ml de 2,0M NH_{3} en metanol. Se agitó la mezcla de reacción durante 120 horas a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla de reacción para obtener un sólido blanco. El sólido se suspendió en éter y se filtró para obtener el isómero (2R,4R)-5-aminocarbonil-4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidona (659 mg, 2,19 mmol) [EM:301].

Etapa 4

A (2R,4R)-5-aminocarbonil-4-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona (620 mg, 2,06 mmol) se agregó 1,0 M BH_{3}THF (14,4 ml, 14,4 mmol), y se calentó la mezcla a 70ºC durante 3,5 horas, se agitó a 20ºC durante 15 horas y luego se concentró. Lentamente, se agregó metanol a la mezcla de reacción concentrada, seguido de 7 ml de 6N HCl. Luego, se agitó esta mezcla durante 1 hora a 55ºC, se enfrió a temperatura ambiente, diluyó con agua y basificó con 1N NaOH acuoso, y se extrajo el producto en EtOAc. Se obtuvo un producto adicional concentrando la capa acuosa y lavando los sólidos resultantes con EtOAc. Se secaron las capas orgánicas combinadas en MgSO_{4}, filtraron y concentraron para obtener (2R,4R)-5-aminometil-4-(3,4-diclorobencil)-1-metil-pirrolidina (353 mg, 1,29 mmol).

Etapa 5

A una solución de CH_{2}Cl_{2} de (2R,4R)-5-aminometil-4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (preparada tal como se describe en el Ejemplo 4,4) (40 mg, 0,15 mmol), se agregó ácido 5-fenilpirimidin-2-iltioacético (40 mg, 0,16 mmol), EDCO (36 mg, 0,19 mmol) y HOBT (2 mg, 0,015 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente y luego se diluyó con EtOAc y lavó con NaHCO_{3} acuoso. La capa orgánica se secó en MgSO_{4}, filtró y concentró.

La cromatografía instantánea (95% CH_{2}Cl_{2}/5% MeOH) produjo clorhidrato de N-(2R,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-ilmetil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (47 mg, 0,098 mmol) espectro de masas 502 (MH^{+}).

Procediendo como se describe en el Ejemplo 3, etapa 1 anterior, pero sustituyendo etil (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxicarbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato por etil (2S,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxi-carbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato, seguido de metilación tal como se describe en la Etapa 2 del Ejemplo 3 anterior, se obtuvo etil (2S,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona-5-carboxilato después de la cromatografía. Luego, se convirtió etil (2S,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona-5-carboxilato en N-(2S,4S)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-ilmetil]-2-[5-(fenil)-pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida, siguiendo las Etapas 3 a 5 que se describen en el Ejemplo 3 anterior.

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Ejemplo 4 Síntesis de N-(2R,4S)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metil-pirrolidin-2-ilmetil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida

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Etapa 1

A una solución de etil (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona-5-carboxilato (preparada tal como se describe en el Ejemplo 3 anterior) (216 mg, 0,65 mmol) en 2,0 M NH_{3} en MeOH (10 ml, 20 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 96 horas. Luego, se concentró la mezcla de reacción hasta secarse, para obtener (2R,4S)-5-aminocarbonil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona (196 mg, 0,65 mmol).

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Etapa 2

A (2R,4S)-5-aminocarbonil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metil-2-pirrolidona (196 mg, 0,65 mmol), se agregó una solución de 1,0 M BH3 en THF (5 ml, 5 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 70ºC durante 3,5 horas después de lo cual se concentró al vacío. Lentamente, se agrego metanol seguido de 5 ml de 6N HCl y se calentó la mezcla a 70ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, basificó con 1N NaOH y se extrajo el producto en EtOAc. Se concentró la capa acuosa hasta secarse y se lavaron los sólidos resultantes con EtOAc. Los extractos combinados se secaron en MgSO_{4}, filtraron y concentraron. La cromatografía instantánea (95% CH_{2}Cl_{2}/4% MeOH/1% NH_{4}OH), produjo (2R,4S)-2-aminometil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (117 mg, 0,43 mmol).

Etapa 3

A una solución de (2R,4S)-2-aminometil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (24 mg, 0,088 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml), se agregó ácido 5-fenil-pirimidin-2-iltioacético (24 mg, 0,097 mmol), EDCI (21 mg, 0,11 mmol) y HOBT (1 mg, 0,009 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente y luego se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHCO_{3}. La capa orgánica se secó en MgSO_{4}, filtró y concentró para obtener N-(2R,4S)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-ilmetil]-2-[5-(fenil)-pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (30 mg, 0,06 mmol), espectro de masas 502 (MH^{+}).

Procediendo como se ha descrito en el ejemplo 4, pero sustituyendo (2R,4S)-3-(3,4-diclorobencil)-1-ter-butoxi-carbonil-2-pirrolidon-5-carboxilato por (2S,4R)-3-(3,4-di-clorobencil)-1-ter-butoxicarbonil-2-pirrolidon-5-carboxilato (preparado como se ha descrito en el ejemplo 3 anterior) se obtuvo N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-ilmetil]-2-[5-(fenil)-pirimidin-2-ilsulfanil]-acetamida.

Ejemplo 5 Síntesis de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-metil-pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida

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Etapa 1

A etil (2S,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-1-terc-butoxi-carbonil-2-pirrolidona-5-carboxilato (preparado tal como se ha descrito en el Ejemplo 2 anterior) (1 g, 2,4 mmol), se agregó 1,0M BH_{3}/THF (36 ml, 36 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 70ºC durante 50 horas y luego se concentró. Lentamente, se agregó MeOH a la mezcla de reacción y luego 36 ml, 1,0M HCl en éter, y luego se calentó a 70ºC durante 1 hora. Luego, se concentró la mezcla, diluyó con EtOAc y luego se lavó con NaHCO_{3}. La capa orgánica se secó en MgSO_{4}, filtró y concentró. La cromatografía instantánea (95% CH_{2}Cl_{2}/4% MeOH/1% NH_{4}OH), produjo (2S,4R)-2-hidroximetil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (216 mg, 0,79 mmol).

Etapa 2

A una solución a temperatura ambiente (2S,4R)-2-hidroximetil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (212 mg, 0,77 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml), se agregó trietilamina (0,161 ml, 1,16 mmol) y luego cloruro de metanosulfonilo (0,072 ml, 0,93 mmol). Después de 3,5 horas, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc y se lavó 2X con NaHCO_{3} acuoso. La capa orgánica se secó en MgSO_{4}, filtró y concentró para obtener (2S,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-2-(metanosulfoniloximetil-1-metilpirrolidina (211, mg, 0,6 mmol).

Etapa 3

A una solución de (2S,4R)-3-(3,4-diclorobencil)-2-(metanosulfoniloximetil-1-metilpirrolidina (211 mg, 0,6 mmol) en DMSO, se agregó cianuro de sodio (176 mg, 3,6 mmol) y la mezcla se calentó a 70ºC durante 21 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó 3X NaHCO_{3} acuoso. La capa orgánica se secó en MgSO_{4}, filtró y concentró. La cromatografía instantánea (60% EtOAc/40% hexanos) produjo (2S,4R)-2-cianometil-3-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (104 mg, 0,37 mmol).

Etapa 4

A una solución de (2S,4R)-2-cianometil-3-(3,4-di-clorobencil)-1-metilpirrolidina (793 mg, 2,8 mmol) en THF (50 ml), se agregó 1,0M BH_{3}/THF (19,6 ml, 19,6 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 70ºC durante 4 horas y luego se concentró. Lentamente, se agregó MeOH al concentrado seguido de 10 ml de 6N HCl y luego se calentó la mezcla a 70ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se basificó con 1N NaOH, y extrajo con EtOAc. La capa acuosa que contenía el producto, se concentró hasta secarse. El sólido resultante se trituró con EtOAc y los sólidos se eliminaron por filtración. El extracto de EtOAc se concentró para obtener (2S,4R)-2-(2-aminoetil)-3-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidina (425 mg, 1,5 mmol).

Etapa 5

A una solución de (2S,4R)-2-(2-aminoetil)-3-(3,4-di-clorobencil)-1-metilpirrolidina (50 mg, 0,17 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml), se agregó ácido 5-fenilpirimidin-2-iltioacético (47 mg, 0,19 mmol), EDCI (42 mg, 0,22 mmol), y HOBT (2,3 mg, 0,017 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente, luego se diluyó con EtOAc y se lavó con 2X con NaHCO_{3} acuoso. La capa orgánica se secó con MgSO_{4}, filtró y concentró. La cromatografía instantánea (95% CH_{2}Cl_{2}/4% MeOH/1% NH_{4}OH), produjo N-(2S,4R)-4-(3,4-diclorobencil)-1-metilpirrolidin-2-iletil]-2-[5-(fenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (60 mg, 0,12 mmol), espectro de masas 516 (MH^{+}).

Ejemplo 6 Síntesis de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(metoxi-carbonilmetilcarbonil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-di-metoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida

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A una solución enfriada con hielo de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (preparada tal como se describe en el Ejemplo 1 anterior) (95 mg, 0,16 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml), se agregó trietilamida (1,0 ml), cloruro de monometoximalonilo (24 mg, 0,19 mmol) y un cristal de DMAP. Se dejó calentar la mezcla y se agitó a 20ºC durante 1 hora y luego se almacenó a 0ºC durante 16 horas. La distribución de la mezcla entre EtOAc y agua, el lavado con agua, secado y evaporación de la capa orgánica, produjo un residuo naranja que se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice. La elusión con 60% acetona-hexano produjo 46 mg (0,07 mmol) de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(metoxi-carbonil-metilcarbonil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-di-metoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida, espectro de masas 661 (MH^{+}).

Procediendo como se describe en el Ejemplo 6 anterior, pero sustituyendo cloruro de monometoximalonilo por cloruro de acetilo, se obtuvo N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(acetil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida.

Procediendo como se describe en el Ejemplo 6 anterior, pero sustituyendo cloruro de monometoximalonilo por cloruro de metanosulfonilo, se obtuvo N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(metanosulfonil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida.

Ejemplo 7 Síntesis de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(carboximetilcabonil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)piri-midin-2-ilsulfanil]acetamida

17

A una solución de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(metoxicarbonil-metilcarbonil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (preparada de acuerdo con el Ejemplo 6 anterior) (40 mg, 0,06 mmol) en CH_{3}OH, se agregó 0,3 ml de una solución acuosa 1N recién preparada de LiOH. La solución se agitó bajo N_{2} a 20ºC durante 16 horas, después de lo cual se vertió en agua, y luego se acidificó la mezcla con H_{2}SO_{4} acuoso diluido y se extrajo con EtOAc. El desecado y la evaporación de la capa orgánica, produjeron 33 mg de N-(2S,4R)-[4-(3,4-diclorobencil)-1-(carboximetilcarbonil)pirrolidin-2-iletil]-2-[5-(3,4-dimetoxifenil)pirimidin-2-ilsulfanil]acetamida (0,05 mmol) como espuma amorfa blanca, espectro de masas 657 (MH^{+}).

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Ejemplo 8 Ejemplos de formulaciones

A continuación, siguen formulaciones farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de Fórmula (I).

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Formulación en comprimidos

Los siguientes ingredientes se mezclan íntimamente y se prensan en comprimidos con entalla.

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18

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Formulación en cápsulas

Los siguientes ingredientes se mezclan íntimamente y cargan en una cápsula de gelatina de recubrimiento duro.

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19

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Formulación en suspensión

Los siguientes ingredientes se mezclan para formar una suspensión para la administración oral.

20

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Formulación inyectable

Los siguientes ingredientes se mezclan para formar una formulación inyectable.

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Formulación en liposomas

Los siguientes ingredientes se mezclan para formar una formulación en liposomas.

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Desecar la muestra por congelamiento y liofilizar durante la noche. Reconstituir la muestra con 1 ml, 0,9% de solución salina. El tamaño del liposoma puede reducirse por sonicación.

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Ejemplo 9 Ensayo in vitro de unión al receptor CCR-3

Se determinó la actividad antagonista de CCR-3 de los compuestos de la invención, a través de la capacidad para inhibir la unión de ^{125}I eotaxina a las células transfectantes L1.2 CCR-3 (ver Ponta, P.D. et al., J. Exp. Med., Vol. 183, 2437-2448 (1996)).

El ensayo se llevó a cabo en placas de base redonda de polipropileno de 96 pocillos Costar. Los compuestos de prueba se disolvieron en DMSO y luego se diluyeron con tampón de unión (50 mM HEPES, 1 mM CaCl_{2}, 5 mM MgCl_{2}, 0,5% de albúmina de suero bovino (ASB), 0,02% de azida de sodio, pH (7,24) de manera tal que la concentración final de DMSO era del 2%. Se agregó 25 \mul de la solución de prueba o sólo tampón con DMSO (muestras control) en cada recipiente, seguido de la adición de 25 \mul de 25I-eotaxina (100 pmol) (NEX314, New England Nuclear, Boston, MA) y 1,5 X 10^{5} de las células transfectadas L1.2 CCR-3 en 25 \mul de tampón de unión. El volumen final de la reacción era 75 \mul.

Después de incubar la mezcla de reacción durante 1 hora a temperatura ambiente, se detuvo la reacción filtrando la mezcla de reacción a través de una placa de filtro GF/C Unifilter Packard tratada con polietilenimina (Packard, Chicago, Il.). Se lavaron los filtros cuatro veces con tampón de lavado helado que contenía 10 mm HEPES y 0,5M cloruro de sodio (pH 7,2) y secaron a 65ºC durante aproximadamente 10 minutos. Se agregaron 25 \mul/recipiente de fluido de centelleo Microscint-20^{TM} (Packard) y se determinó la reactividad retenida en los filtros utilizando el Packard TopCount^{TM}.

Los compuestos de la presente invención fueron activos en este ensayo.

El valor CI_{50} (concentración del compuesto de prueba requerida para reducir la ^{125}I-eotaxina que se une a las células transfectadas L 1.2 CCR-3, que es del 50%) para los compuestos en la Tabla I de la invención, oscilaba entre 0,02 y 200 \muM. A continuación se muestran las actividades de ciertos compuestos específicos.

23

Ejemplo 10 Inhibición de la quimiotaxis mediada por eotaxina de las células transfectantes L1.2 CCR-3 - Ensayo in vitro

Se determinó la actividad antagonista de CR-3 de los compuestos de la presente invención, midiendo la inhibición de la quimiotaxis mediada por eotaxina de células transfectantes L1.2 CCR-3, utilizando una leve modificación del método que se describe en Ponta, P.D. et al., J. Clin. Invest., 97:604-612 (1996). El ensayo se llevó a cabo en una placa de quimiotaxis de 24 pocillos (Costar Corp., Cambridge MA). Se cultivaron células transfectantes L1.2 CCR-3 en un medio de cultivo que contenía RPMI 1640, 10% de suero fetal de ternero Hyclone^{TM}, 55 mM 2-mercaptoetanol y Geneticin 418 (0,8 mg/ml). Entre 18 y 24 horas antes del ensayo, se trataron las células transfectadas con ácido n-butírico en una concentración final de 5 mM/1 x 10^{6} células/ml, aislaron y suspendieron nuevamente en 1 x 10^{7} células/ml en un medio de ensayo que contenía partes iguales de RPMI 1640 y médium 199 (M 199) con 0,5% de albúmina de suero bovino.

Se agregó eotaxina humana suspendida en solución salina tamponada con fosfato en 1 mg/ml, a la cámara inferior en una concentración final de 100 nm. Se introdujeron inserciones de cultivo Transwell (Costra Corp., Cambridge MA) con un tamaño del poro de 3 micrones, en cada recipiente y se agregaron células L1.2 (1 x 10^{6}) en la cámara superior en un volumen final de 100 \mul. Se agregaron los compuestos de prueba en DMSO, tanto en la cámara superior como inferior, de manera tal que el volumen de DMSO final era del 0,5%. El ensayo se llevó a cabo en comparación con dos grupos de controles. El control positivo contenía células sin compuesto de prueba en la cámara superior y sólo eotaxina en la cámara inferior. El control negativo contenía células sin compuesto de prueba en la cámara superior y sin eotaxina ni compuesto de prueba en la cámara inferior. La placa se incubó a 37ºC. Después de 4 horas, se eliminaron las inserciones de las cámaras y se contaron las células que habían migrado a la cámara inferior, tomando 500 \mul de la suspensión de células de la cámara inferior con una pipeta y colocándolos en tubos Cluster de 1,2 ml (Costar) y contándolos en un FACS durante 30 segundos.

El valor CI_{50} (concentración del compuesto de prueba requerida para reducir la quimiotaxis mediada por eotaxina de células transfectadas L1.2 CCR-3, que es del 50%) para compuestos representativos de la invención, oscilaba entre 0,006 y 1,1 \muM.

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Ejemplo 11 Inhibición de la quimiotaxis mediada por eotaxina de eosinófilos humanos - Ensayo in vitro

Se evaluó la capacidad de los compuestos de la invención para inhibir la quimiotaxis mediada por eotaxina de eosinófilos humanos, utilizando una leve modificación del procedimiento descrito en Carr, M. W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 91: 3652-3656 (1994). Los experimentos se llevaron a cabo utilizando placas de quimiotaxis de 24 recipientes (Costar Corp., Cambridge MA). Los eosinófilos se aislaron de la sangre, utilizando el procedimiento descrito en la solicitud de patente de invención PCT, publicación Nº WO 96/22371. Las células endoteliales utilizadas eran la línea de células endoteliales ECV 304, obtenida de European Collection of Animal Cell Cultures (Porton Down, Salisbury, Reino Unido). Se cultivaron las células endoteliales en inserciones de cultivo de tejido Transwell Biocoat® de 6,5 mm de diámetro (Costar Corp., Cambridge MA) con un tamaño del poro de 3,0 \muM. El medio de cultivo para las células ECV 304 estaba compuesto por M199, 10% de suero fetal de ternero, L-glutamina y antibióticos. El medio de ensayo estaba compuesto por partes iguales de RPMI 1640 y M199, con 0,5% de ASB. 24 horas antes del ensayo, se colocaron 2 x 10^{5} de células ECV 304 en cada inserción de la placa de quimiotaxis de 24 recipientes y se incubaron a 37ºC. Se agregó 20 nM de eotaxina diluida en el medio de ensayo, en la cámara inferior. El volumen final en la cámara inferior era de 600 \mul. Las inserciones de cultivo de tejido recubierto endotelial, se insertaron en cada recipiente. 10^{6} de células de eosinófilos suspendidas en 100 \mul de tampón de ensayo, se agregaron en la cámara superior. Se agregaron los compuestos de prueba disueltos en DMSO en las cámaras superiores e inferiores, de manera tal que el volumen de DMSO final en cada recipiente era del 0,5%. El ensayo se llevó a cabo en comparación con dos grupos de controles. El control positivo contenía células en la cámara superior y eotaxina en la cámara inferior. El control negativo contenía células en la cámara superior y sólo buffer de ensayo en la cámara inferior. Las placas se incubaron a 37ºC en 5% de CO_{2}/95% de aire durante 1-1,5 horas.

Se contaron las células que habían migrado hacia la cámara inferior, utilizando citometría de flujo. Se colocaron 500 \mul de la suspensión de células de la cámara inferior en un tubo, y se obtuvieron conteos de células relativas, adquiriendo eventos durante un período de tiempo fijo de 30 segundos.

Los compuestos de la presente invención eran activos en este ensayo.

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Ejemplo 12 Inhibición del influjo de eosinófilos en los pulmones de ratones balb/c sensibilizados con ovoalbúmina a través del antagonista CCR-3 - Ensayo in vivo

Se determinó la capacidad de los compuestos de la invención, para inhibir la infiltración de leucocitos en los pulmones, midiendo la inhibición de la acumulación de eosinófilos en el fluido de lavado bronquioalveolar (LBA) de ratones balb/c sensibilizados con ovoalbúmina (OA), después de la administración de antígenos mediante aerosol. En resumen, se sensibilizaron ratones balb/c machos que pesaban entre 20 y 25 g con OA (10 \mug en 0,2 ml de una solución de hidróxido de aluminio) en forma intraperitoneal en los días 1 y 14. Después de una semana, se dividieron los ratones en diez grupos. Se administró el compuesto de prueba o sólo vehículo (grupo control) o anticuerpo antieotaxina (grupo control positivo), ya sea en forma intraperitoneal, subcutánea u oral. Después de 1 hora, se colocaron los ratones en una caja de Plexiglás y expusieron a aerosol de OA generado por un nebulizador PARISTAR^{TM} (PARI, Richmond, VA) durante 20 minutos. Los ratones que no habían sido sensibilizados o no se les había administrado antígenos se incluyeron como control negativo. Después de 24 ó 72 horas, se anestesiaron los ratones (uretano, aprox. 1 g/kg, i.p.), se insertó una cánula traqueal (sonda PE 60), y se lavaron los pulmones cuatro veces con 0,3 ml de PBS. El fluido de LBA se transfirió a tubos de plástico y se mantuvo en hielo. Se determinó el total de leucocitos en una cantidad de 20 \mul de fluido de LBA, por medio de un Coulter Counter^{TM} (Coulter, Miami, F1). Se llevaron a cabo conteos diferenciales de leucocitos en preparaciones Cytospin^{TM} que se habían manchado con una mancha de Wright modificada (Dic-Quick^{TM}) a través de microscopia de luz utilizando un criterio morfológico estándar.

Los compuestos de la presente invención eran activos en el presente ensayo. La DI_{50} para los compuestos de la presente invención, oscila entre 30 y 50 mg/kg.

Claims (18)

1. Un compuesto de fórmula (I):

24

en la cual

R^{1}

es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, acilo, heteroalquilo, -CONR^{3}R^{4} (donde R^{3} y R^{4} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1-6}, -COOR^{5} (donde R^{5} es hidrógeno, alquilo C_{1-6} o heteroalquilo) o -SO_{2}R^{6} donde R^{6} es alquilo C_{1-6};

alk^{1}

es una cadena de alquileno de 1 a 6 átomos de carbono;

X

es -NHCO- o _CONH-;

Y

es -SCH_{2}-, -OCH_{2}- o -NHCH_{2}-;

Ar^{1}

es piridilo o pirimidinilo;

Ar^{2}

es fenilo o 3,4-dimetoxifenilo;

alk^{2}

es un grupo de alquileno con 1 a 3 átomos de carbono;

Ar^{3}

es arilo; o

una sal respectiva farmacéuticamente aceptable;

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en donde, a menos que se indique de otro modo

"arilo" significa un radical hidrocarbúrico aromático monocíclico o bicíclico monovalente con 6 a 10 átomos de anillo, y el anillo de arilo puede estar opcionalmente sustituido independientemente con uno, dos o tres sustituyentes elegidos entre alquilo C_{1-6}, halo alquilo C_{1-6}, alquiltio C_{1-6}, alcoxilo C_{1-6}, halo, ciano, nitro, amino, hidroxilamino, hidroxilo, alquilsulfonilo C_{1-6}, sulfonil-amino, aminosulfonilo, -NR'R'' (en donde R' es hidrógeno o alquilo C_{1-6} y R'' es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, acilo, alquilsulfonilo C_{1-6}) y -COOR (en donde R es hidrógeno o alquilo C_{1-6});

"acilo" significa un radical -C(O)R en donde R es alquilo C_{1-6}, halo alquilo C_{1-6}, alquilo C_{1-6} sustituido con carboxilo, alcoxicarbonilo C_{1-6,} heterociclo, o ariloxicarbonilo, arilo, aril-alquilo C_{1-6}, heteroarilo o heteroaril alquilo C_{1-6};

"heteroalquilo" significa un radical alquilo C_{1-6} como se ha definido antes, comportando un sustituyente elegido entre -NR^{a}R^{b}, -OR^{a} y -S(O)_{n}R^{c}, en donde n es un número entero de 0 a 2, R^{a} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, halo-alquilo C_{1-6}, o -COR (en donde R es alquilo C_{1-6}, hidroxilo o alcoxilo C_{1-6}), R^{b} es hidrógeno o alquilo C_{1-6} y R^{c} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, amino, mono-alquilamino C_{1-6}, o di-alquilamino C_{1-6}.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde X es -CONH-.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, en donde Y es -SCH_{2}- u -OCH_{2}-.

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, en donde Y es -OCH_{2}-, alk^{1} y alk^{2} son independientemente una cadena alquileno con 1 o 2 átomos de carbono.

5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde Ar^{1} es pirimidin-2-ilo.

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, en donde Y es -SCH_{2}- u -OCH_{2}-.

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, en donde Ar^{2} es fenilo o 3,4-dimetoxifenilo y está en la posición 5 del pirimidin-2-ilo.

8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, en donde alk^{2} es -CH_{2}-.

9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, en donde Ar^{3} es 3,4-dimeclorofenilo.

10. Un método para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que comprende:

(i) acoplar un compuesto que tiene la fórmula 7,

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25

en donde Pro es un grupo protector, y alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1;

con un compuesto de fórmula 8:

Ar^{1}-Ar^{2}-Y-CO_{2}H

8

en donde Ar^{1}, Ar^{2} e Y son como se ha descrito en la reivindicación 1;

(ii) separación del grupo protector para proporcionar un compuesto de fórmula (Ib)

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26

en donde R^{1} es hidrógeno, y Ar^{1}, Ar^{2}, alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1; y

(iii) conversión a compuestos de fórmula (I) en donde R^{1} es acilo o sulfonilo con un haluro ácido de fórmula general R^{1}C(O)Hal o un haluro de sulfonilo de fórmula general R^{1}SO_{2}Hal, en donde Hal es un halógeno.

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11. Un método para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que comprende

(i) reducción del grupo ciano de un compuesto que tiene una fórmula 10:

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27

en donde Pro es un grupo protector, y alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1;

(ii) acoplamiento con un compuesto de fórmula 8:

Ar^{1}-Ar^{2}-Y-CO_{2}H

8

en donde Ar^{1}, Ar^{2} e Y son como se ha descrito en la reivindicación 1;

(iii) separación del grupo protector para proporcionar un compuesto de fórmula (Ic)

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28

en donde R^{1} es hidrógeno, y Ar^{1}, Ar^{2}, alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1; y

(iv) conversión a compuestos de fórmula (I) en donde R^{1} es un grupo acilo o sulfonilo con un haluro ácido de fórmula general R^{1}C(O)Hal o un haluro de sulfonilo de fórmula general R^{1}SO_{2}Hal, en donde Hal es un halógeno.

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12. Un método para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que comprende:

(i) acoplar un compuesto que tiene la fórmula 15a o 15b,

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29

en donde R^{1} es alquilo, y alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1;

con un compuesto de fórmula 8:

Ar^{1}-Ar^{2}-Y-CO_{2}H

8

en donde Ar^{1}, Ar^{2} e Y son como se ha descrito en la reivindicación 1;

para proporcionar un compuesto de fórmula (Ia) o (Ib)

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30

en donde R^{1} es alquilo, y Ar^{1}, Ar^{2}, alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1.

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13. Un método para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que comprende:

(i) mesilar un compuesto que tiene la fórmula 16,

31

en donde R^{1} es alquilo, y alk^{2} y Ar^{3} son como se ha definido en la reivindicación 1;

(ii) convertir a un cianuro seguido de reducción, y

(iii) acoplar con un compuesto de fórmula 8:

Ar^{1}-Ar^{2}-Y-CO_{2}H

8

en donde Ar^{1}, Ar^{2} e Y son como se ha descrito en la reivindicación 1,

para proporcionar un compuesto de fórmula (Ic)

32

en donde R^{1} es alquilo, y Ar^{1}, Ar^{2}, alk^{2}, Ar^{3} e Y son como se ha definido en la reivindicación 1.

14. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. Compuestos, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para uso en el tratamiento de enfermedades.

16. Compuestos, de conformidad con la reivindicación 15, en donde la enfermedad es tratable mediante administración de un antagonista receptor de CCR-3.

17. Compuestos, de conformidad con la reivindicación 16, en donde la enfermedad es asma.

18. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para la preparación ce medicamentos que comprende uno o mas compuestos de fórmula I para el tratamiento de enfermedades tratables mediante administración de un antagonista receptor de CCR-3.