ES2298386T3 - 1-glicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazinas y -piperidinas como antagonistas del factor xa. - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I) en la que R1 representa alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4; y R2 se selecciona entre y en las que X1 representa un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno; X2 representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un átomo de cloro o un átomo de bromo; X3 representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo o un átomo de halógeno; X5 representa cloro, metoxi o metilo; X6 representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno o un grupo metilo, y X4 representa CH o N; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

Description

1-glicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazinas y -piperidinas como antagonistas del Factor Xa.
La presente invención se refiere a compuestos útiles como productos farmacéuticos, a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, a un procedimiento para preparar los compuestos, a intermedios útiles en la preparación de los compuestos y al uso de los compuestos como productos farmacéuticos. La enfermedad cardiovascular sigue siendo en la actualidad un problema de la salud importante en todo el mundo y es una causa común de enfermedades graves y muerte.
Una línea de investigación que siguen muchos investigadores en la búsqueda de nuevos tratamientos para la enfermedad cardiovascular está basada en la hipótesis de que un inhibidor de la serinaproteasa, el Factor Xa, puede ser útil como agente anticoagulante en el tratamiento de la enfermedad trombótica.
Son conocidos inhibidores del Factor Xa. Por ejemplo, los documentos WO 99/11657, WO 99/11658 y WO 99/76971 describen ciertos compuestos que contienen un grupo aromático, por ejemplo un resto de glicina que presenta un grupo cíclico y un grupo lipófilo. El documento WO 99/11657, que describe compuestos cuyo grupo aromático es un grupo aminoisoquinolina, describe también genéricamente compuestos de aminoisoquinolina que contienen un resto de glicina que presenta un grupo acíclico. Jones y otros, Bioorg. Med. Chem. Lett., vol. 11, 2001, págs. 733-736, se refieren al diseño de benzamida carboxamidas que contienen fenilglicina como inhibidores selectivos del Factor Xa.
Sorprendentemente, se ha encontrado ahora que compuestos que contienen grupos particulares de fenilo o indolilo, un resto de glicina que presenta un grupo alquilo y un grupo 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidin)-1-ilo o 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1-ilo son inhibidores selectivos del Factor Xa y que tienen propiedades particularmente ventajosas. Consecuentemente, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I)
\vskip1.000000\baselineskip
1
en la que
R^{1}
representa alquilo C_{1-4}, alquenilo C_{2-4} o alquinilo C_{2-4}; y
R^{2}
se selecciona entre
2 
\newpage
y
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3 
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en las que
X^{1}
representa un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno;
X^{2}
representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un átomo de cloro o un átomo de bromo;
X^{3}
representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo o un átomo de halógeno;
X^{5}
representa cloro, metoxi o metilo;
X^{6}
representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno o un grupo metilo, y
X^{4}
representa CH o N;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
Se ha encontrado que los compuestos de fórmula (I) son inhibidores potentes y selectivos de la serinaproteasa, Factor Xa, que tienen buena actividad antocoagulante en plasma humano, que tienen buena exposición al plasma después de administración oral a mamíferos y que poseen perfiles de actividad farmacológica y toxicológica particularmente ventajosos.
En un grupo de compuestos de fórmula (I), el grupo R^{2} se selecciona entre
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4 
\vskip1.000000\baselineskip
En otro grupo de compuestos de fórmula (I), el grupo R^{2} se selecciona entre
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5 
\newpage
En otro grupo de compuestos de fórmula (I), el grupo R^{2} se selecciona entre
\vskip1.000000\baselineskip
6 
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7 
\vskip1.000000\baselineskip
R^{1}
preferiblemente es un grupo alquilo C_{1-4}.
Son ejemplos de valores particulares para R^{1}, metilo, etilo, propilo, 2-propilo, butilo, t-butilo, 1-metipropilo y 2-metilpropilo. Son otros ejemplos más, prop-3-enilo y prop-3-inilo. Cuando R^{1} es 1-metilpropilo, la estereoquímica preferida es la correspondiente a (D)-isoleucina.
Preferiblemente, R^{1} es 2-propilo.
X^{1}
preferiblemente representa un átomo de hidrógeno o un átomo de flúor.
X^{2}
preferiblemente representa un átomo de hidrógeno o un átomo de cloro.
X^{3}
preferiblemente representa un átomo de flúor o cloro, tal como un átomo de cloro.
X^{6}
preferiblemente representa un átomo de cloro.
Son ejemplos de valores particulares para R^{2}, 4-metoxifenilo, indol-6-ilo, 3-metilindol-6-ilo, 3-cloroindol-6-ilo y 2-cloroindolo-2-ilo. Se pueden mencionar particularmente compuestos de fórmula (I) en los que R^{2} es 3-fluoro-4-metoxifenilo, 5-fluoroindol-2-ilo y 6-clorobenzo[b]-tiofen-2-ilo. Se puede hacer mención particular de compuestos de fórmula (I) en los que R^{2} es 3-fluorometoxifenilo y compuestos de fórmula (I) en los que R^{2} es 5-fluoro-2-ilo.2-ilo.
R^{2} preferiblemente es 4-metoxifenilo, indol-6-ilo o 5-cloroindol-5-ilo.
Un valor particular para X^{4} es CH.
Cuando X^{4} representa CH, son compuestos de fórmula (I) particularmente preferidos:
1-(4-metoxibenzoil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y
1-(indol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
y sus sales farmacéuticamente aceptables, en particular la sal del ácido metanosulfónico de la primera.
\vskip1.000000\baselineskip
Otro valor particular para X^{4} es N.
Cuando X^{4} representa N, un compuesto de fórmula (I) particularmente preferido es:
1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina,
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
\newpage
Son ejemplos de compuestos de fórmula (I) en la que
R^{2}
representa
8
1-(3-amino-4-clorobenzoil)-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina,
1-(3-amino-4-clorobenzoil)-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina,
1-(3-amino-4-metoxibenzoil)-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina,
1-(3-amino-4-metoxibenzoil)-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina,
1-(3-amino-4-metilbenzoil)-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina,
1-(3-amino-9-metilbenzoil)-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina,
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Se apreciará que los compurestos de fórmula (I) contienen un centro de asimetría que tiene la configuración (D). Esta es la conformación que resultaría de la construcción de un D-\alpha-aminoácido H_{2}N-CH(R^{1})COOH. Por tanto, los compuestos pueden existir y aislar en una mezcla con el correspondiente isómero (L), tal como una mezcla racémica, o separadamente. Preferiblemente, los compuestos se aíslan sustancialmente exentos del isómero (L).
Se apreciará tambien que los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden aislar en forma de solvato y, consecuentemente, que cualquiera de tales solvatos esté incluido en el ámbito de la presente invención.
En los compuestos de acuerdo con la presente invención, a no ser que se indique lo contrario, son ejemplos de "átomo de halógeno" flúor y cloro. El nombre específico de un grupo alquilo, tal como propilo o butilo, significa el isómero no ramificado o isómero n.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden preparar por un procedimiento que comprende:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
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9 
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o una de sus sales, con un compuesto de fórmula (III)
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10 
\vskip1.000000\baselineskip
o un derivado reactivo de él; o
\newpage
(b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV)
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11 
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o una sal de él, con un compuesto de fórmula (V)
(V)HOOC-R^{2}
o un derivado reactivo de él,
a lo que sigue, si se desea una sal farmacéuticamente aceptable, la formación de una sal famacéuticamente aceptable.
La reacción entre un compuesto de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (III) se puede realizar convenientemente empleando reactivos y condiciones de reacción convencionalmente usadas para la formación de un enlace de amida. La reacción es realiza convenientemente en presencia de un reactivo basado en benzotriazol, tal como 1-hidroxibenzotriazol o 1-hidroxi-7-azabenzotriazol, y un agente deshidratante tal como diciclohexilcarbodiimida o 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, en un disolvente orgánico inerte tal como dimetilformamida y/o cloruro de metileno. La reacción se realiza convenientemente a una temperatura de 0 a 50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente. Si se usa una sal de un compuesto de fórmula (II), la reacción se realiza convenientemente en presencia adicional de una base tal como trietilamina. Son conocidos en la técnica otros reactivos y disolventes adecuados, por ejemplo, un haluro de ácido, tal como el cloruro, en presencia de una base tal como trietilamina.
La reacción entre un compuesto de fórmula (IV) y un compuesto de fórmula (V) se puede realizar convenientemente empleando reactivos y condiciones de reacción convencionalmente usados para la formación de un enlace amida. La reacción se lleva a cabo convenientemente en presencia de un reactivo basado en benzotriazol, tal como 1-hidroxibenzotriazol o 1-hidroxi-7-azabenzotriazol, y un agente deshidratante tal como diciclohexilcarbodiimida o 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, en un disolvente orgánico inerte tal como dimetilformamida y/o cloruro de metileno. La reacción se realiza convenientemente a una temperatura de 0 a 50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente. Si se usa una sal de un compuesto de fórmula (IV), la reacción se realiza convenientemente en presencia adicional de una base tal como trietilamina. Son conocidos en la técnica otros reactivos y condiciones de reacción, por ejemplo, un haluro de ácido, tal como cloruro de p-anisol, en presencia de una base tal como trietilamina. Alternativamente, se puede hacer reaccionar el compuesto de fórmula (IV) con un compuesto de fórmula (V) en presencia de cianofosfonato de dietilo. La reacción se lleva a cabo convenientemente en un disolvente orgánico tal como diclorometano en presencia de una base tal como trietilamina. La temperatura conveniente está en el intervalo de -25 a 25ºC.
El compuesto de la fórmula (II) en la que X^{4} es H es conocido, por ejemplo, por el documento WO 00/76971, págs. 163-164, y se denomina 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina o 1-metil-4,4'-bispiperidina. El compuesto de la fórmula (II) en la que X^{4} es N está disponible comercialmente. Se denomina en esta memoria 4-(1-metilpiperidina-4-il)piperazina, pero también se puede denominar 1-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.
Los compuestos de fórmula (III) se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (VI)
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13 
\newpage
en la que
R^{3} representa un grupo protector de carboxilo, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-6}, tal como metilo o etilo, con un compuesto de fórmula (IV) para que resulte un compuesto de fórmula (VII)
14
a lo que sigue la eliminación del grupo protector.
Los compuestos de fórmula (IV) se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (VIII)
15
en la que
R^{4} representa un grupo protector de amino tal como t-butoxicarbonilo (Boc), para obtener un compuesto de fórmula (IX)
16
a lo que sigue la eliminación del grupo protector.
Los compuestos de las fórmulas (VI) y (VIII) son conocidos o se pueden preparar usando procedimientos convencionales para la preparación de aminoácidos protegidos sobre el grupo carboxi o amino.
Los compuestos de fórmula (V) son bien conocidos.
La protección de grupos amino o carboxílicos es descrita por McOmie en Protecting Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, NY, 1973, y por Greene y Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, 2ª edición, John Wiley & Sons, NY, 1991. Entre los ejemplos de grupos protectores de carboxi están incluidos grupos alquilo C_{1-6} tales como metilo, etilo, 1-butilo y t-amilo; grupos arilalquilo C_{1.-4} tales como bencilo, 4-nitrobencilo, 4-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, 2,4,6-trimetoxibencilo, 2,4,6-trimetilbencilo, benzohidrilo y tritilo; grupos sililo tales como trimetilsililo y t-butildimetilsililo; y grupos alilo tales como alilo y 1-(1-trimetilsililmetil)prop-1-en-3-ilo.
Entre los ejemplos de grupos protectores de amino están incluidos grupos acilo tales como grupos de fórmula RCO en la que R representa alcoxi C_{1-6}, fenilalcoxi C_{1-6} o un cicloalcoxi C_{3-10}, pudiendo estar opcionalmente sustituido un grupo fenilo con, por ejemplo, uno o dos entre halógeno, alquilo C_{1-4} y alcoxi C_{1-4}.
Entre los grupos protectores de amino preferidos están incluidos benciloxicarbonilo (Cbz) y t-butoxicarbonilo (Boc).
Se cree que algunos de los intermedios descritos en esta memoria, por ejemplo, los compuestos de las fórmulas (III) y (IV), son nuevos y, por tanto, se aportan como otro aspecto de la invención.
Los compuestos de la invención se pueden administrar por cualquier vía conveniente, por ejemplo, en el tracto gastrointestinal (por ejemplo, rectal u oralmente), nariz, pulmones, musculatura o vasoculatura, o transdérmicamente. Los compuestos se pueden administrar en cualquier forma administrativa conveniente, por ejemplo, comprimidos, polvos, cápsulas, soluciones, dispersiones, suspensiones, jarabes, aerosoles, supositorios, geles, emulsiones, parches, etc. Tales composiciones pueden contener componentes convencionales en los preparados farmacéuticos, por ejemplo, diluyentes, vehículos, modificadores del pH, edulcorantes, agentes para hacer masa, y otros agentes activos. Si se desea la administración parenteral, las composiciones serán estériles y en forma de solución o suspensión adecuada para inyección o infusión. Tales composiciones forman otro aspecto más de la invención.
Vista desde este aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, para uso en terapia.
De acuerdo con otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno trombótico.
De acuerdo con otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de un trastorno trombótico.
El sujeto puede ser un ser humano o un animal, tal como un mamífero no humano, por ejemplo un gato, un perro, un caballo, una vaca o una oveja.
El trastorno trombótico puede ser, por ejemplo, trombosis venosa, embolismo pulmonar, trombosis arterial, isquemia miocárdica, infarto miocárdico o trombosis cerebral. Una indicación particular es, por ejemplo, la profilaxis de la trombosis venosa posoperativa que sigue a cirugía ortopédica de alto riesgo (tal como sustitución de cadera o rodilla), tratamiento primario de la trombosis venosa, prevención secundaria de complicaciones cardiovasculares isquémicas que siguen al infarto de minocardio (en combinación con, por ejemplo, dosis bajas de aspirina), o la prevención de accidente embólico en la fibrilación atrial no valvular. Los compuestos se pueden usar tambien en el tratamiento de cierre vascular agudo asociado con terapia trombolítica y la reestenosis, por ejemplo después de angioplastia coronaria transluminal o injerto de bypass de la arteria coronaria o las periféricas, y en el mantenimiento de la potencia de acceso vascular en pacientes de hemodiálisis a largo plazo.
La dosificación del compuesto de fórmula (I) dependerá de la naturaleza y la gravedad de la afección que se está tratando, la vía de administración y el tamaño y la especie del sujeto. Por lo general, se administrarán cantidades de 0,01 a 100 \muM/kg de peso corporal.
Tal como se usa en esta memoria, el término "tratamiento" incluye el uso profiláctico. El término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto de fórmula (I) que es eficaz para reducir o inhibir la manifestación de los síntomas del trastorno trombótico que se está tratando.
El compuesto de acuerdo con la presente invención se puede administrar solo o en combinación con un anticoagulante que tiene un modo diferente de acción o con un agente trombolítico.
Los Ejemplos siguientes ilustran la invención.
Las abreviaturas usadas siguen la nomenclatura de IUPAC-IUB. Son abreviaturas adicionales: Boc, t-butoxicarbonilo; DCC, diciclohexilcarbodiimida; DIEA, N,N-diisopropiletilamina; DMSO, dimetilsulfóxido (perdeuteriado si es para RMN); DMF, dimetilformamida; EDCl, hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida; ES-MS, espectro de masas por electroproyección; EtOAc, acetato de etilo; Et_{2}O, dietil éter; HOAt, 1-hidroxi-7-azabenzotriazol; HOBt, 1-hidroxibenzotriazol; HPLC, cromatografía de líquidos a alta presión; MeOH, metanol; SCX, intercambio de cationes fuerte; TEA, trietilamina; TFA, ácido trifluoroacético, y THF, tetrahidrofurano. Los reactivos se adquirieron da varias fuentes comerciales.
Procedimientos generales de acoplamiento
Procedimiento 1: una solución o suspensión de una amina o una sal hidrocloruro de amina (1 equivalente molar, aproximadamente 0,2 M) en THF, diclorometano o DMF (o una mezcla de cualquiera de estos disolventes) se trata con un ácido carboxílico (aproximadamente 1 equivalente molar), HOBt o HOAt (aproximadamente 1 equivalente molar), TEA o DIEA (0-3 equivalentes molares) y EDCl o DCC (aproximadamente 1 equivalente molar). Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente, se eliminan los disolventes y el residuo se diluye con acetato de etilo o diclorometano y se lava con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. La solución orgánica se seca luego con MgSO_{4}, se filtra y se concentra en vacío. Si es necesario, el producto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 2% a 12% (amoniaco 2N/metanol) en diclorometano o cloroformo. Se combinan luego las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío.
Procedimiento 2: A una solución en agitación de una amina, o una sal hidrocloruro de amina (1 equivalente molar), trietilamina (1-3 equivalentes molares) y un ácido carboxílico (aproximadamente 1,2 molar) en diclorometano (0,2-0,5 M) a 0ºC se añade lentamente cianofosfonato de dietilo (aproximadamente 1,2 equiv. molar). Después de agitar durante la noche, se eliminan los disolventes en vacío; y el residuo se reparte entre agua y un disolvente orgánico, tal como acetato de etilo o diclorometano, y se lava con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y seguidamente con salmuera. La fase orgánica se seca luego con MgSO_{4} o Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra en vacío. Si es necesario, el producto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 10% (amoniaco 2N/metanol) en diclorometano o cloroformo. Se combinan luego las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío.
Procedimiento 3: La amina o la sal hidrocloruro de amina (1 equivalente molar) y trietilamina (1-3-equivalente molar) se disuelven en diclorometano (0,2-0,5 M) y se añade un cloruro de ácido (aproximadamente 1,3 equivalentes molares). Después de agitar durante aproximadamente 3 h, se eliminan los volátiles en vacío y el residuo se disuelve en metanol (posiblemente con un codisolvente orgánico tal como diclorometano) y se carga en una columna de intercambio de cationes fuerte (SCX). La columna se lava con metanol y luego se eluye el producto deseado de la columna con una solución de amoniaco o trietilamina en metanol (posiblemente con un codisolvente orgánico tal como diclorometano). Se combinan luego las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío. Si es necesario, el producto se puede purificar más por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 10% (amoniaco 2N/metanol) en diclorometano o cloroformo. Se combinan luego las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío.
Procedimientos generales de desprotección
Procedimiento 1: Una solución de carbamato de t-butilo (1 equivalente molar) en CH_{2}Cl_{2} (0,2 M) se trata con anisol (5 equiv) y TFA (20% en volumen). Después de agitar durante 1-3 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentra en vacío. El residuo en bruto (sal de TFA) se purifica por cromatografía catiónica fuerte (SCX). La columna de SCX se lava con solución al 5% de ácido acético en metanol y la sal de TFA se disuelve en metanol (posiblemente con un codisolvente tal como diclorometano) y se carga en la columna de SCX. La columna se lava luego con metanol (posiblemente con un codisolvente tal como diclorometano) y luego se eluye la base libre de la columna con una solución 2 N de amoniaco o trietilamina en metanol (posiblemente con un codisolvente tal como diclorometano). Se combinan luego las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío, obteniéndose el producto en forma de base libre.
Procedimiento 2: Se hace burbujear HCl gas en una solución de carbamato de t-butilo en MeOH anhidro (0,1 M) durante aproximadamente 10 a 30 min; luego se concentra en vacío la mezcla de reacción, obteniéndose una sal hidrocloruro de la amina del título.
Procedimientos generales de formación de la sal hidrocloruro
Procedimiento 1: Se disuelve la base libre en HCL 2N acuoso (1-2 equivalentes de HCl). La solución resultante se liofiliza, obteniéndose la sal hidrocloruro de la amina.
Procedimiento 2: Una solución de la base libre en una pequeña cantidad de CH_{2}Cl_{2} se trata con 1,0-2,2 equivalentes de HCl 1 M en éter. Después de agitar durante 30 min, se filtra la mezcla de reacción y el sólido resultante se enjuaga con éter y se seca, obteniéndose la sal hidrocloruro de la amina.
Procedimientos analíticos generales por HPLC
Procedimiento 1: Vydac C18 (columna de 4,6 x 250 mm), se eluye con un gradiente lineal de 90/10 a 50/50 (0,1% de TFA en agua/0,1% de TFA en acetonitrilo) a lo largo de 40 min, 1 ml/min, \lambda=214 nm.
Procedimiento 2: Xterra RP18 (columna de 4,6 x 50 mm), gradiente de 2-50% de CH_{3}CN en H_{2}O con 1% de TFA, 1 ml/min, a lo largo de 30 min, \lambda= 214 nm.
Procedimiento 3: Xterra RP18 (columna de 4,6 x 150 mm), gradiente de 10-50% de CH_{3}CN en H_{2}O con 1% de TFA, 1 ml/min, a lo largo de 40 min, detección con Waters 996 PDA y/o Sedex ELS.
\newpage
Preparación de intermedios
1-(Boc-D-alaninil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de Boc-D-alanina y dihidrobromuro de 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 354,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{19}H_{35}N_{3}O_{3}\cdot0,3H_{2}O:
Calculado: C 63,58; H 10,00; N 11,71.
Hallado: C 63,46; H 9,82; N 11,61 
\vskip1.000000\baselineskip
1-(Boc-D-etilglicinil)-9-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de Boc-D-etilglicina y dihidrobromuro de 4-(1-metil-piperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 368,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{20}H_{37}N_{3}O_{3}\cdot0,2H_{2}O.
Calculado: C 64,72; H 10,16; N 11,32.
Hallado: C 65,03; H 9,98; N 10,94. 
\vskip1.000000\baselineskip
1-[Boc-D-(propil)glicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de Boc-D-(propil)glicina y dihidrobromuro de 9-(1-metil-piperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 382,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{21}H_{39}N_{3}O_{3}\cdot1,3H_{2}O.
Calculado: C 62,28; H 10,35; N 10,38.
Hallado: C 62,29; H 9,17; N 10,01. 
\vskip1.000000\baselineskip
1-[Boc-D-(butil)glicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de Boc-D-(n-butil)glicina y dihidrobromuro de 4-(1-metil-piperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 396,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{22}H_{41}N_{3}O_{3}
Calculado: C 66,80; H 10,45; N 10,62.
Hallado: C 66,68; H 10,41; N 10,50. 
\newpage
1-(Boc-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
A una solución de Boc-D-Val-OH (33,0 g, 152 mmol) en DMF anhidra (1,5 l) se añade dihidrobromuro de 4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina (52,2 g, 152 mmol) [el dihidrobromuro de 4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina se denomina también dihidrobromuro de 1-metil-4,4'-bispiperidina; y su preparación se describe en el documento WO 00/76971, págs. 163-164] y seguidamente trietilamina (63,5 ml, 456 mmol), HOBt (20,5 g, 152 mmol) y DCC (31,3 g, 152 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se vierte luego en LiCl acuoso (1,5 l) y se somete a extracción con CH_{2}Cl_{2} (3 x 2 l). Se combinan las capas orgánicas y la combinación se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra en vacío. El residuo se disuelve en CHCl_{3} (1 l), se filtra y se concentra en vacío. El material en bruto se purifica usando cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 4% de (NH_{3} 2 M en MeOH)/CHCl_{3}, obteniéndose 43,3 g (75%) del compuesto del título como una espuma de color castaño.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 6,68 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,76 (m, 2H), 2,47 (m, 1H), 2,11 (s, 3H), 1,89 (s anc, 1H), 1,8-1,5 (m anc, 6H), 1,37 (s, 9H), 1,2-0,9 (m anc, 7H), 0,82 (m, 6H).
ES-MS: m/z 382,3 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-(Boc-D-leucinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de Boc-D-leucina y dihidrobromuro de 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
ES-MS, m/z 396,4 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-[Boc-D-(t-butil)glicinil]-9-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de Boc-D-(t-butil)glicina y dihidrobromuro de 4-(1-metil.-piperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 396,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{22}H41N_{3}O_{3}\cdot1,3H_{2}O.
Calc.: C 64,73; H 10,47; N 10,29.
Hallado: C 64,65; H 10,03; N 10,30. 
\vskip1.000000\baselineskip
1-(Boc-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
A una solución en agitación de Boc-D-valina (5,0 g, 23 mmol) en diclorometano (230 ml) se añade HOBt (3,42 g, 25,3 mmol) y seguidamente EDCl (4,85 g, 25,3 mmol) y luego 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (4,2 g, 23 mmol). Después de agitar durante la noche, la solución se lava con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y seguidamente con salmuera, luego se concentra en vacío. El residuo se cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0-10% (amoniaco 2 N/metanol) en cloroformo. Se combinan las fracciones que contienen el producto y la combinación ser concentra en vacío, obteniéndose el compuesto del título (8,98 g, cuantitativo) como un sólido blancuzco.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 383,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{22}H_{41}N_{3}O_{3}\cdot0,5H_{2}O.
Calc.: C 61,35; H 10,04; N 14,31.
Hallado: C 61,50; H 9,68; N 14,29. 
\vskip1.000000\baselineskip
1-[Boc-D-(t-butil)glicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparada a partir de Boc-D-(t-butil)glicina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 397,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{21}H_{40}N_{4}O_{3}\cdot0,5H_{2}O.
Calc.: C 62,19; H 10,1; N 13,81.
Hallado: C 62,08; H 9,89; N 13,86. 
\vskip1.000000\baselineskip
1-(Boc-D-isoleucinil)-4(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparada a partir de Boc-D-isoleucina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 397,4 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{21}H_{40}N_{4}O_{3}\cdot0,2H_{2}O\cdot0,2CH_{2}Cl_{2}.
Calc.: C 62,04; H 9,86; N 13,43.
Hallado: C 60,87; H 9,53; N 13,60. 
\vskip1.000000\baselineskip
1-(Boc-D-leucinil)-4(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparada a partir de Boc-D-leucina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
ES-MS, m/z 397,3 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-D-alaninil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de 1-(Boc-D-alaninil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Desprotección 1.
ES-MS, m/z 254,2 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Hidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparado a partir de 1-(Boc-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Desprotección 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 268,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{15}H_{29}N_{30}\cdot2,7HCl\cdot0,6H_{2}O.
Calc.: C 47,60; H 8,82; N 11,10
Hallado: C 47,59; H 8,82; N 10,97. 
\vskip1.000000\baselineskip
Hidrocloruro de 1-D-(propil)glicinil-4-(1-metilpiperidin-9-il)piperidina
Preparado a partir de 1-[Boc-D-(propil)glicinil]-4(1-metilpiperidin-4-il)piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Desprotección 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 282,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{16}H_{31}N_{3}O\cdot2,6HCl\cdot1,6H_{2}O.
Calc.: C 47,44; H 9,16; N 10,37
Hallado: C 47,35; H 9,18; N 10,29. 
\vskip1.000000\baselineskip
Hidrocloruro de 1-D-(butil)glicinil-4-(1-metilpiperidin-9-il)piperidina
Preparado a partir de 1-[Boc-D-(butil)glicinil]-4(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Desprotección 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 296,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{17}H_{33}N_{3}O\cdot2,6HCl\cdot1,6H_{2}O.
Calc.: C 51,61; H 9,30; N 10,62
Hallado: C 51,59; H 9,27; N 10,51. 
\vskip1.000000\baselineskip
Dihidrocloruro de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Se disuelve 1-(Boc-D-valinil)-9-(1-metilpiperidin-9-il)piperidina (23,3 g, 61,1 mmol) en metanol anhidro (700 ml), se enfría a 0ºC y se trata con HCl (gas) hasta que la HPLC indica que el consumo de material de partida ha sido completo. Se elimina el disolvente en vacío, obteniéndose el compuesto del título (20,8 g, 96%) como una espuma blancuzca.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,8 (s anc, 1H), 8,19 (m, 3H), 4,77 (s anc, 3H), 4,44 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,1-2,6 (m anc, 6H), 2,01 (m, 1H), 1,9-1,5 (m anc, 5H), 1,3 (m, 2H), 0,98 (m, 3H), 0,91 (m, 3H).
ES-MS, m/z 282,3 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-D-leucinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de 1-(Boc-D-leucinil)-4-(1-metilpiperidin-4-ilpiperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 296,2 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-D-(t-butil)glicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina
Preparada a partir de 1-[Boc-D-(t-butil)glicinil]-9-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 296,2 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Trihidrocloruro de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Se disuelve 1-(Boc-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-9-il)piperazina (8,9 g, 23 mmol) en metanol (500 ml) y se hace burbujear HCl gas en la solución en agitación durante 10-15 min. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añade dietil éter (500 ml) y el sólido resultante se separa por filtración y se seca en vacío, obteniéndose 8,59 g (94%) del compuesto del título.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 283,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{15}H_{30}N_{3}O\cdot3,0HCl\cdot0,3H_{2}O.
Calc.: C 45,43; H 8,53; N 14,11
Hallado: C 45,43; H 8,25; N 13,89. 
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip0.950000\baselineskip
1-D-(t-butil)glicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de 1-[Boc-D-(t-butil)glicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 297,2 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-D-isoleucinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de 1-(Boc-D-isoleucinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 297,3 (M+1)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
1-D-leucinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de 1-(Boc-D-leucinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 297,3 (M+1)^{+}.
Ejemplo 1 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de 1-D-alaninil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 397,1 (M+1)^{+}, 395,3 (M-1)^{-}.
HPLC analítica (Procedimiento 1): 98% t_{f} = 15,2 min.
Ejemplo 2 Hidrocloruro de 1-[indol-6-carbonil-D-etilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-(etil)glicinil-4-(metilpiperidin-4-il) piperidina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 411,2 (M+1)^{+}, 409,2 (M-1)^{-}.
Análisis para C_{24}H_{34}N_{4}O_{2}\cdot0,9HCl\cdot2,0H_{2}O.
Calc. C 60,13; H 8,18; N 11,69; Cl 6,66.
Hallado: C 59,97; H 7,97; N 11,83; Cl 6,27.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >95, t_{f} = 17,4 min.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-(propil)glicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 425,2 (M+1)^{+}, 423,2 (M-1)^{-}.
Análisis para C_{25}H_{36}N_{4}O_{2}\cdot0,9HCl\cdot2,0H_{2}O.
Calc. C 60,85; H 8,35; N 11,36; Cl 6,47.
Hallado: C 60,95; H 7,98; N 11,39; Cl 5,93.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >98, t_{f} = 19,1 min.
Ejemplo 4 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-(butil)glicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-(butil)glicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H.
ES-MS, m/z 439,2 (M+1)^{+}, 4372 (M-1)^{-}.
Análisis para C_{26}H_{38}N_{4}O_{2}\cdot1HCl\cdot2,2H_{2}O.
Calc. C 60,67; H 8,50; N 10,89; Cl 6,89.
Hallado: C 60,53; H 8,13; N 10,96; Cl 6,67.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >95, t_{f} = 21,1 min.
Ejemplo 5 1-(4-metoxibezoil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Se pone en suspensión dihidrocloruro de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-il) piperidina (15,6 g, 44,1 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (400 ml) y se añade a la suspensión trietilamina (19,7 ml, 141,0 mmol) y seguidamente cloruro de p-anisol (7,9 ml, 52,9 mmol). Se agita la mezcla de reacción durante aproximadamente 30 min y luego se apaga añadiendo solución saturada de NaHCO_{3} (300 ml); seguidamente se separan las fases. La capa orgánica se lava con solución saturada de NaHCO_{3} (2 x 300 ml), se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y concentra en vacío. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 2,5% de (NH_{3} 2M en MeOH)/CHCl_{3}, obteniéndose 16,3 g (89%) del compuesto del título como una espuma blanca.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6)} \delta 8,25 (m, 1H), 7,88 (m, 2H), 6,97 (m, 2H), 4,71 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 2,96 (m, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,13 (m, 1H), 2,10 (m, 3H), 1,8-1,5 (m anc, 6H), 1,3-0,9 (m anc, 7H), 0,89 (m, 6H).
ES-MS, m/z 416,4 (M+1)^{+}.
[\alpha]_{D}^{20} = -41,12 (c= 0,01 MeOH).
Ejemplo 6 Hidrocloruro de 1-(4-metoxibezoil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
A una solución de 1-(4-metoxibezoil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina (14,75 g, 35,5 mmol) en CH_{2}
Cl_{2} anhidro (400 ml) enfriada a 0ºC se añade HCl en Et_{2}O (1 M, 35,9 ml, 35,9 mmol). Después de aproximadamente 5 min, se elimina el disolvente en vacío, obteniéndose 16,9 g (cuantitativo) del compuesto del título como una espuma amarilla.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 10,0 (s anc, 1H), 8,27 (m, 1H), 7,88 (m, 2H), 6,98 (m, 2H), 4,71 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,37 (m, 2H), 3,00 (m, 1H), 2,83 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,15 (m anc, 1H), 1,9-1,6 (m, 4H), 1,5-1,2 (m anc, 4H), 1,07 (m, 1H), 0,91 (m, 3H), 0,87 (m, 3H).
ES-MS, m/z 416,4 (M+1)^{+}.
[\alpha]_{D}^{20} =-42,72 (c = 0,01 MeOH).
Análisis para C_{24}H_{37}N_{3}O_{3}\cdot1,0HCl\cdot1,2H_{2}O\cdot0,25CH_{2}Cl_{2}.
Calc. C 59,93; H 8,48; N 8,65; Cl 9,12.
Hallado: C 59,67; H 8,38; N 8,52; Cl 9,35.
Ejemplo 7 Sal del ácido metanosulfónico de 1-(4-metoxibezoil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
La sal mesilato se prepara disolviendo la base libre en EtOAc (concentración ejemplo, 416 mg/10 ml). Separadamente se disuelve ácido metanosulfónico en EtOAc (concentración ejemplo, 92 mg/2 ml). La solución de ácido metanosulfónico se añade a la solución de la base y la mezcla inicial se vuelve turbia. Se siembra el vial y las semillas se pegan a los lados a medida que el material empieza a convertirse en un aceite. Se deja el aceite en reposo durante la noche y cristaliza a la mañana. Los cristales se lavan con una pequeña cantidad de EtOAc y se secan al aire. Se obtienen 400 mg (aproximadamente 96%) sobre la base de una sal monomesilato, como se confirma más tarde. El material así obtenido es cristalino como lo revela la birrefringencia por fotomicroscopía. El análisis por DSC (calorimetría diferencial de barrido) y TGA (análisis termogravimétrico) indicaron que la sal monomesilato tenía un punto de fusión con pico endotérmico a 185ºC, con pérdida de 0,9% de volátiles a 25-150ºC y con liberación de 1,9% de volátiles a 150-185ºC.
A mayor escala es conveniente el procedimiento siguiente: a una solución de la base libre (125 g) en acetato de etilo (2,5 l) sometida a una buena agitación se añade a gotas una solución de ácido metanosulfónico en acetato de etilo (0,5 l). Finalizada la adición, la mezcla se agita durante 4 h a temperatura ambiente antes de filtrar el producto cristalino, se lava con acetato de etilo (0,5 l) y se seca en vacío (35ºC, 24 h) para obtener la sal del título como un sólido cristalino blanco (139,5 g, 90,0%).
Punto de fusión 182-183ºC.
[\alpha]_{D}^{20} = -43,0 (c = 0,416 H_{2}O).
Exceso enantiómero mayor que 99% por HPLC quiral.
Ejemplo 8 1-(indol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Se ponen en suspensión 6-carboxiindol (4,0 g, 24,8 mmol) y 1-(D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-9-il)piperidina (10,1 g, 27,8 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (250 ml) y se enfría a -15ºC. A esta suspensión se añade cianofosfonato de dietilo (4,5 ml, 29,8 mmol) y seguidamente TEA (11,1 ml, 79,4 mmol) manteniendo la temperatura por debajo de -10ºC. Se deja que la mezcla de reacción se caliente a temperatura ambiente durante la noche. A la mañana siguiente, la TLC indica que todavía está presente material de partida; se añade más 6-carboxiindol (0,5 g, 3,1 mmol) y cianofosfonato de dietilo (0,5 ml, 3,3 mmol); seguidamente se añade TEA (1,0 ml, 7,2 mmol). Después de agitar durante 2 horas más, la reacción se apaga añadiendo salmuera (100 ml), formándose un aceite marrón insoluble en los lados del matraz. Se separan las capas y la capa acuosa se somete a extracción con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 ml). Se combinan las capas orgánicas, la combinación se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra. El material en bruto se purifica luego por cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 5% de (NH_{3} 2 M en MeOH)/CHCl_{3} obteniéndose 9,7 g (92%) del compuesto del título como una espuma de color amarillo claro.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,35 (s, 1H), 8,22 (m, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 9,76 (m, 1H), 4,96 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 2,73 (m, 2H), 2,16 (m, 1H), 2,09 (m, 3H), 1,8-1,5 (m, 6H), 1,4-1,0 (m, 6H), 0,91 (m, 6H).
ES-MS, m/z 425,1 (M+1)^{+}.
El examen por fotomicroscopía reveló que la base libre se obtuvo como un sólido cristalino birrenfringente que según análisis por DSC (calorimetría diferencial de barrido) y TGA (análisis termogravimétrico) tenía un punto de fusión con su pico endotérmico a 196ºC y sólo aproximadamente 0,4% de volátiles.
Ejemplo 9 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-valinil)-9-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Se pone en suspensión 1-(indol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina (3,4 g, 8,03 mmol) en HCl acuoso 0,2 N (40,2 ml, 8,03 mmol) y se sonica. La solución resultante se liofiliza, obteniéndose 3,64 g (98%) del compuesto del título.
ES-MS, m/z 425,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{36}N_{4}O_{3}\cdot1,1HCl\cdot1,0H_{2}O.
Calc. C 62,20; H 8,16; N 11,61; Cl 8,08.
Hallado: C 61,91; H 7,80; N 11,51; Cl 7,79
Análisis por HPLC (Procedimiento 1): 99%, t_{f} = 20,80 min.
Ejemplo 10 Hidrocloruro de 1-(3-metilindol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido 3-metilindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 2. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 439,0 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{26}H_{38}N_{4}O_{2}\cdot1,2HCl\cdot0,9H_{2}O.
Calc. C 62,63; H 8,29; N 11,24; Cl 8,53.
Hallado: C 62,46; H 8,34; N 11,03; Cl 8,96
HPLC analítica (Procedimiento 1): 100%, t_{f} = 25,3 min.
Ejemplo 11 Hidrocloruro de 1-(3-cloroindol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido 3-cloroindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 459,0 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{35}N_{4}O_{2}\cdot1,1HCl\cdot0,7H_{2}O.
Calc. C 58,68; H 7,39; N 10,95; Cl 14,55.
Hallado: C 58,55; H 7,41; N 10,43; Cl 14,46
HPLC analítica (Procedimiento 1):100%, t_{f} = 27,8 min.
Ejemplo 12 Hidrocloruro de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 2. Purificado y convertido en la sal HCl por HPLC preparativa en fase inversa (columna YMC ODS C18 de 5 \mu, 5-95% de CH_{3}CN en H_{2}O con 0,01% de HCl) para obtener la sal HCl.
ES-MS, m/z 459,1 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}ClH_{35}N_{4}O_{2}\cdot0,8HCl\cdot2,2H_{2}O.
Calc. C 56,89; H 7,68; N 10,62; Cl 12,09.
Hallado: C 56,98; H 6,94; N 10,45; Cl 12,13
HPLC analítica (Procedimiento 1):100%, t_{f} = 25,3 min.
Ejemplo 13 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-leucinil)-4-(1-metilpiperidin-9-il)-piperidina
Preparado a partir de 1-D-leucinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal se prepara usando el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 438,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{26}H_{38}N_{4}O_{2}\cdot1,1HCl\cdot1,4H_{2}O.
Calc. C 61,97; H 8,38; N 11,12; Cl 7,74.
Hallado: C 62,00; H 8,00; N 11,18; Cl 7,58
HPLC analítica (Procedimiento 1):>95%, t_{f} = 24,43 min.
Ejemplo 14 Hidrocloruro de 1-[indol-6-carbonil-D-(t-butil)glicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de 1-[D-(t-butil)glicinil]-9-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 439,1 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{26}H_{38}N_{4}O_{2}\cdot1,1HCl\cdot1,7H_{2}O.
Calc. C 61,31; H 8,41; N 11,00.
Hallado: C 61,43; H 8,28; N 10,65.
HPLC analítica (Procedimiento 1): 100%, t_{f} = 23,86 min.
Ejemplo 15 1-(indol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 426,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{2}\cdot1,4HCl\cdot2,1H_{2}O.
Calc. C 56,03; H 7,95; N 13,61.
Hallado: C 56,05; H 7,57; N 13,24.
HPLC analítica (Procedimiento 1): 100%, t_{f} = 16,55 min.
Ejemplo 16 Hidrocloruro de 1-(3-cloroindol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido 3-cloroindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal HCl se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 460,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{34}N_{5}O_{2}Cl\cdot2HCl\cdot1,1H_{2}O.
Calc. C 56,05; H 7,20; N 13,38; Cl 14,90.
Hallado: C 56,05; H 7,08; N 13,35; Cl 14,82.
HPLC analítica (Procedimiento 3): 97%, t_{f} = 19,3 min.
Ejemplo 17 Hidrocloruro de 1-(3-metilindol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de 1-D-valinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 3-metilindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Acoplamiento 1. El producto se purificó y convirtió en la sal hidrocloruro por HPLC preparativa en fase inversa (C18, 90:10 a 50:50 - HCl 0,1 N:CH_{3}CN).
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 440,3 (M+1)^{+}.
HPLC analítica (Procedimiento 3): 100%, t_{f} = 21,5 min.
Ejemplo 18 Hidrocloruro de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
A una solución de hidrocloruro de D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina (3,5 g, 8,93 mmol) y trietilamina (4,4 ml, 31,3 mmol) en diclorometano (90 ml) se añade HOBt (1,33 g, 9,82 mmol) y seguidamente EDCl (1,9 g, 9,82 mmol). Después de agitar durante la noche, la mezcla se concentra en vacío. El residuo se cromatografía luego sobre gel de sílice con un gradiente de 0-15% (amoniaco 2 N/metanol) en cloroformo. Se combinan las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío, obteniéndose 3,97 g (97%) de la base libre del compuesto del título.
La base libre (2,183 g, 4,75 mmol) se disuelve en HCl 2 N (23,8 ml) y se liofiliza, obteniéndose el compuesto del título.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 460,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{34}N_{5}O_{2}Cl\cdot2HCl\cdot1,6H_{2}O.
Calc. C 54,12; H 7,27; N 13,15; Cl 14,65.
Hallado: C 54,02; H 7,13; N 13,04; Cl 14,65.
HPLC analítica (Procedimiento 3): 97,7%, t_{f} = 22,9 min.
Ejemplo 19 Hidrocloruro de 1-(indol-2-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de hidrocloruro de 1-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido indol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento general de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 426,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{2}\cdot2HCl\cdot1,6H_{2}O.
Calc. C 57,45; H 8,06; N 13,96; Cl 7,77.
Hallado: C 57,37; H 7,39; N 13,68; Cl 8,15.
Ejemplo 20 Hidrocloruro de 1-[indol-6-carbonil-D-(t-butil)glicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de 1-D-(t-butil)glicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento general de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 440,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O\cdot2,1HCl\cdot1,9H_{2}O.
Calc. C 54,55; H 7,86; N 12,72; Cl 13,53.
Hallado: C 54,39; H 7,72; N 12,34; Cl 13,85.
HPLC analítica (Procedimiento 1): 94%, t_{f} = 17,07 min.
Ejemplo 21 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-isoleucinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de 1-D-isoleucinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento general de Formación de Sales 2
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 440,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O \cdot2,3HCl\cdot1,8H_{2}O.
Calc. C 54,19; H 7,77; N 12,64; Cl 14,72
Hallado: C 53,91; H 7,37; N 12,02; Cl 14,90.
HPLC analítica (Procedimiento 1): 95%, t_{f} = 18,08 min.
Ejemplo 22 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-leucinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de 1-D-leucinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 2.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 440,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O\cdot1,1HCl\cdot3,0H_{2}O.
Calc. C 56,25; H 8,33; N 13,12; Cl 7,31.
Hallado: C 56,34; H 7,64; N 12,75; Cl 7,06.
HPLC analítica (Procedimiento 1): 100%, t_{f} = 18,72 min.
Información adicional para los ejemplos siguientes:
Análisis por HPLC (Procedimiento A): Columna C18 (4,6 x 250 mm), Waters Symmetry. El sistema de elución estaba constituido por un gradiente lineal de 95:5 (0,1% de TFA en H_{2}O)/(0,1% de TFA en CH_{3}CN) a 5:95 (0,1% de TFA en H_{2}O)/(0,1% de TFA en CH_{3}CN) a lo largo de 30 min, seguido de 5:95 (0,1% de TFA en H_{2}O)/(0,1% de TFA en CH_{3}CN) isocrático a lo largo de 10 min. El caudal era de 1 ml/min. La detección por UV se realizó a 254 nm a no ser que se indique lo contrario.
Los API-MS (espectros de masas por ionización química a presión atmosférica) se obtuvieron con un dispositivo PESciex API 150EX con un nebulizador calentado y nitrógeno como gas reactivo al modo de ion positivo.
Los CI-MS (espectros de masas por ionización química) se obtuvieron con un espectrómetro de masas de inserción directa Shimadzu 5000, al modo de ionización química utilizando metano como gas reactivo.
Se usan las abreviaturas siguientes: CMA (cloroformo:metanol:hidróxido amónico concentrado 80:18:2); DEPC (cianofosfonato de dietilo).
Procedimiento General de Acoplamiento 4: Se disuelven la amina o la sal hidrocloruro de amina (1 equivalente) y trietilamina (1-3-equiv) en diclorometano (0,1-0,5 M) y se añade un cloruro de ácido (aprox. 1,1 equiv). Después de agitar durante la noche, se apaga la mezcla de reacción con solución saturada de NaHCO_{3}. La capa acuosa se somete dos veces a extracción con diclorometano y la combinación de capas orgánicas se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra en vacío. Si es necesario, se purifica el producto por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0-10% de amoniaco 2 N/metanol en diclorometano. Se combinan las fracciones que contienen el producto y la combinación se concentra en vacío. Alternativamente, el producto en bruto se purifica por HPLC en fase inversa en columna C18 usando un gradiente de 5 a 95% de acetonitrilo en H_{2}O con 0,01% de HCl en 12 min. La liofilización da el producto como su sal hidrocloruro.
Ejemplo 23 Hidrocloruro de 1-(3-cloroindol-6-carbonil-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido 3-cloroindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 445,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{33}N_{4}O_{2}Cl\cdot1,0HCl\cdot1,6H_{2}O.
Calc. C 56,49; H 7,35; N 10,98; Cl 13,90.
Hallado: C 56,58; H 6,95; N 10,93; Cl 13,44.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >97%, t_{f} = 20,7 min.
Ejemplo 24 Hidrocloruro de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 445,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{33}N_{4}O_{2}Cl \cdot1,0HCl\cdot2,1H_{2}O.
Calc. C 55,51; H 7,41; N 10,79; Cl 13,66.
Hallado: C 55,61; H 6,90; N 10,77; Cl 13,57.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >90%, t_{f} = 22,3 min.
Ejemplo 25 Hidrocloruro de 1-(4-metoxibenzoil-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y cloruro de 4-metoxibenzoílo usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 4. La purificación por la opción de cromatografía en fase inversa da la sal hidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 402,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{23}H_{35}N_{3}C_{3}\cdot1,0HCl\cdot1,4H_{2}O.
Calc. C 59,63; H 8,44; N 9,07.
Hallado: C 59,75; H 8,24; N 8,91
Ejemplo 26 Hidrocloruro de 1-[(3-fluoro-4-metoxibenzoil)-D-etilglicinil)]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 3-fluoro-4-metoxibenzoico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1 con purificación en fase inversa como se describe en el Procedimiento General de Acoplamiento 4 para obtener la sal hidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 420,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{23}H_{34}N_{3}O_{3}F\cdot1,7HCl\cdot1,0H_{2}O.
Calc. C 55,30; H 7,61; N 8,41.
Hallado: C 55,22; H 7,22; N 8,42
Ejemplo 27 Hidrocloruro de 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-etilglicinil)]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-etilglicinil4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 6-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1 con purificación en fase inversa como se describe en el Procedimiento General de Acoplamiento 4 para obtener la sal hidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 462,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{32}N_{3}O_{2}SCl\cdot1,0HCl\cdot1,2H_{2}O.
Calc. C 55,42; H 6,86; N 8,08.
Hallado: C 55,50; H 6,65; N 8,04
Ejemplo 28 Hidrocloruro de 1-[3-cloroindol-6-carbonil-D-propilglicinil]-4-(1-metil-piperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 3-cloroindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 459,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{35}N_{4}O_{2}Cl\cdot1,0HCl\cdot2,3H_{2}O.
Calc. C 55,92; H 7,62; N 10,44; Cl 13,21.
Hallado: C 55,84; H 6,95; N 10,35; Cl 13,16.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >90%, t_{f} = 22,3 min.
Ejemplo 29 Hidrocloruro de 1-[5-cloroindol-2-carbonil-D-propilglicinil]-4-(1-metil-piperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 459,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{35}N_{4}O_{2}Cl\cdot0,9HCl\cdot1,9H_{2}O.
Calc. C 57,08; H 7,61; N 10,65; Cl 12,81.
Hallado: C 57,09; H 6,98; N 10,71; Cl 12,74.
HPLC analítica (Procedimiento 2): >91%, t_{f} = 24,0 min.
Ejemplo 30 Hidrocloruro de 1-[4-metoxibenzoil-D-propilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y cloruro de 4-metoxibenzoílo usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 4. La purificación por la opción de cromatografía en fase inversa da la sal hidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 416,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{37}N_{3}O_{3}\cdot1,0HCl\cdot1,4H_{2}O.
Calc. C 60,40; H 8,62; N 8,81.
Hallado: C 60,49; H 8,38; N 8,78.
Ejemplo 31 Hidrocloruro de 1-[(3-fluoro-4-metoxibenzoil)-D-propilglicinil]-4-(1-metil-piperidin-4-il)piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 3-fluoro-4-metoxibenzoico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1 con purificación en fase inversa como se describe en el Procedimiento General de Acoplamiento 4 para obtener la sal hidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 434,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{36}N_{3}O_{3}F\cdot1,1HCl\cdot1,6H_{2}O.
Calc. C 57,36; H 8,08; N 8,36.
Hallado: C 57,36; H 7,80; N 8,33.
Ejemplo 32 Hidrocloruro de 1-[6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-propilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 6-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1 con purificación en fase inversa como se describe en el Procedimiento General de Acoplamiento 4 para obtener la sal hidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 476,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{34}N_{3}O_{2}SCl\cdot1,0HCl\cdot1,3H_{2}O.
Calc. C 56,02; H 7,07; N 7,84.
Hallado: C 55,95; H 6,79; N 7,74.
Ejemplo 33 Hidrocloruro de 1-[3-cloroindol-6-carbonil-D-butilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 3-cloroindol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 473,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{26}H_{37}N_{4}O_{2}Cl\cdot0,9HCl\cdot2,0H_{2}O.
Calc. C 57,63; H 7,79; N 10,34; Cl 12,43.
Hallado: C 57,48; H 7,49; N 10,41; Cl 12,36.
HPLC analítica (Procedimiento 2) > 96%, t_{f} = 23,9 min.
Ejemplo 34 Hidrocloruro de 1-[5-cloroindol-2-carbonil-D-butilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperidina
Preparado a partir de dihidrocloruro de 1-D-butillglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 473,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{26}H_{37}N_{4}O_{2}Cl\cdot0,9HCl\cdot1,9H_{2}O.
Calc. C 57,82; H 7,78; N 10,37; Cl 12,47.
Hallado: C 57,93; H 7,74; N 10,54; Cl 12,20.
HPLC analítica (Procedimiento 2) > 95%, t_{f} = 25,5 min.
Preparación de intermedios
1-N-Boc-D-etlglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de Boc-D-etilglicina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 369,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{19}H_{36}N_{4}O_{3}\cdot0,3H_{2}O.
Calc. C 61,03; H 9,87; N 14,98.
Hallado: C 61,02; H 9,39; N 14,87.
1-N-Boc-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de Boc-D-propilglicina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 383,3 (M+1)^{+}.
1-N-Boc-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparada a partir de Boc-D-butilglicina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 397,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{21}H_{40}N_{4}O_{3}\cdot0,3H_{2}O.
Calc. C 62,75; H 10,18; N 13,94.
Hallado: C 62,89; H 9,71; N 13,88
N-Boc-D-propargilglicina
Procedimiento A-1: Una solución de dicarbonato de di-t-butilo (5,7 g, 26,4 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se añade a una solución sometida a agitación eficiente de D-propargilglicina (2,5 g, 22,1 mmol) y NaOH (1,86 g, 46,5 mmol) en agua (45 ml) a 0ºC. La mezcla se agita a 0ºC durante 30 min y durante 3,5 h a temperatura ambiente. La mezcla se concentra a 35ºC y en vacío a la mitad de volumen. La solución se enfría en baño de hielo/agua y se acidifica a pH 2-3 con solución de hidrogenosulfato potásico (2 N). La mezcla se somete a extracción con acetato de etilo; la capa orgánica se lava con agua, se seca sobre sulfato sódico anhidro y se concentra en vacío, obteniéndose el compuesto del título (4,6 g, 97%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 214 (M+1)^{+}.
1-(N-Boc-D-proparglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Procedimiento B-1: A una mezcla de N-Boc-D-propargilglicina (4,6 g, 21,6 mmol), 4-(1-metilpiperidin.4.il)piperazina (3,91 g, 21,6 mmol), HOBt (2,88 g, 21,6 mmol), EDCl (5,3 g, 28 mmol), CH_{2}Cl_{2} (250 ml) se añade diisopropilamina (7,9 ml, 43,2 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agita durante la noche. La mezcla se diluye con diclorometano y agua. Se separan las capas y la capa orgánica se seca sobre sulfato sódico anhidro, se filtra y se concentra en vacío. El residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice con hexanos/CMA para que resulte el compuesto del título (3,4 g, 41%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 379 (M+1)^{+}.
N-Boc-D-alilglicina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes al descrito en el Procedimiento A-1, se prepara el compuesto del título a partir de D-alilglicina y dicarbonato de di-t-butilo (81%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 216 (M+1)^{+}.
1-(N-Boc-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes al descrito en el Procedimiento B-1, se prepara el compuesto del título a partir de N-Boc-D-alilglicina y 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (31%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 380 (M+1)^{+}.
Trihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-9-il)piperazina
Preparado usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 2 a partir de 1-Boc-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 269,2 (M+1)^{+}
Análisis para C_{14}H_{28}N_{4}O\cdot3HCl
Calculado C 44,51; H 8,27; N 14,83; Cl 28,15.
Hallado C 44,48; H 8,02: N 14,79; Cl 27,77
Trihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparado usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 2 a partir de 1-Boc-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 283,3 (M+1)^{+}
Análisis para C_{15}H_{30}N_{4}O\cdot3HCl\cdot0,2H_{2}O
Calculado C 45,68; H 8,28; N 14,21; Cl 26,97.
Hallado C 45,86; H 8,29: N 14,11; Cl 26,85
Trihidrocloruro de 1-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-9-il)piperazina
Preparado usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento General de Desprotección 2 a partir de 1-Boc-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 297,3 (M+1)^{+}
Análisis para C_{16}H_{32}N_{4}O\cdot2,9HCl\cdot1,2H_{2}O
Calculado C 45,45; H 8,65; N 13,25; Cl 24,32.
Hallado C 45,23; H 8,27: N 13,00; Cl 24,39
1-(D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Procedimiento C-1: Se enfría a 0ºC una mezcla de 1-(1-Boc-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (3,9 g, 9 mml), metanol (50 ml) y anisol (15 ml). Se añade a gotas HCl concentrado (20 ml). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se concentra en vacío. El residuo se disuelve en metanol y se aplica a resina SCX (activada con ácido acético al 5% en metanol y lavada con metanol), se lava con metanol y se eluye con solución saturada de amoniaco en metanol. La fracción del producto se concentra en vacío, obteniéndose el compuesto del título como un aceite (2,1 g, 84%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 279 (M+1).
1-(D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Procedimiento C-2: A una solución en agitación de 1-(Boc-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (2,2 g) en diclorometano (40 ml) a 0ºC se añade ácido trifluoroacético (20 ml). Se deja que la solución se caliente a temperatura ambiente a lo largo de 3 horas. Se eliminan los disolventes en vacío. El residuo se disuelve en metanol y se aplica a una columna SCX (prelavada con ácido acético al 5% en metanol y metanol), se lava con metanol y se eluye con solución saturada de amoniaco en metanol. Se recoge la fracción del producto y se concentra en vacío para obtener el compuesto del título (1,6 g, cuantitativo) como un aceite amarillo.
RMN ^{1}H (DC_{3}OD).
APCI-MS, m/e 281 (C_{15}H_{28}N_{4}O+1).
Ejemplo 35 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 412,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{23}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot1,0HCl\cdot0,9H_{2}O.
Calculado C 59,51; H 7,77; N 15,09
Hallado: C 59,63; H 7,89; N 15,09.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 98%, t_{f} = 11,3 min.
Ejemplo 36 Hidrocloruro de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 446,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{23}H_{32}N_{5}O_{2}Cl\cdot1,0HCl\cdot2,0H_{2}O.
Calculado C 53,28; H 7,19; N 13,51, Cl 13,68.
Hallado: C 53,14; H 6,51; N 13,29, Cl 13,45.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 18,9 min.
Ejemplo 37 Hidrocloruro de 1-(4-metoxibenzoíl-D-etilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y cloruro de 4-metoxibenzoilo usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 4. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 403,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{22}H_{34}N_{4}O_{3}\cdotHCl\cdot0,4H_{2}O.
Calculado C 59,35; H 7,88; N 12,59, Cl 7,96.
Hallado: C 59,38; H 8,21; N 12,54, Cl 8,05.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 7,2 min.
Ejemplo 38 Hidrocloruro de 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-etilglicinil)-4-(1-metil-piperidin-4-il)piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-etilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 6-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 463,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{23}H_{31}N_{4}O_{2}SCl\cdotHCl\cdot1,4H_{2}O.
Calculado C 52,65; H 6,68; N 10,68.
Hallado: C 52,72; H 6,70; N 10,34.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 17,8 min.
Ejemplo 39 Hidrocloruro de 1-[indol-6-carbonil-D-propilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 426,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{35}N_{5}O_{2}\cdotHCl\cdot1,9H_{2}O.
Calculado C 58,20; H 7,90; N 14,14, Cl 7,16.
Hallado: C 58,31; H 7,75; N 14,07, Cl 7,14..
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 14,4 min.
Ejemplo 40 Hidrocloruro de 1-[5-cloroindol-2-carbonil-D-propilglicinil]-4-(1-metil-piperidin-4-il)piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 460,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{34}N_{5}O_{2}Cl\cdot0,9HCl\cdot2,4H_{2}O.
Calculado C 53,77; H 7,46; N 13,06, Cl 12,57.
Hallado: C 53,84; H 6,70; N 12,96, Cl 12,40.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 19,8 min.
Ejemplo 41 Hidrocloruro de 1-[4-metoxibenzoil-D-propilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y cloruro de 4-metoxibenzoilo usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 4. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 417,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{23}H_{36}N_{4}O_{3}\cdotHCl
Calculado C 60,98; H 8,23; N 12,37, Cl 7,83.
Hallado: C 60,99; H 8,33; N 12,35, Cl 7,75.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 11,6 min.
Ejemplo 42 Hidrocloruro de 1-[6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-propilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-propilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 6-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1 con purificación en fase inversa según se describe en el Procedimiento General de Acoplamiento 4 para obtener la sal dihidrocloruro.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 477,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{33}N_{4}O_{2}SCl\cdot3,3HCl\cdot0,1H_{2}O
Calculado C 48,11; H 6,14; N 9,35.
Hallado: C 47,81; H 5,74; N 8,96.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 96%, t_{f} = 19,5 min.
Ejemplo 43 Hidrocloruro de 1-[indol-6-carbonil-D-butilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido indol-6-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 440,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{37}N_{5}O_{2}\cdotHCl\cdot2,3H_{2}O
Calculado C 58,14; H 8,12; N 13,56; Cl 6,86.
Hallado: C 58,15; H 7,46; N 13,41; Cl 6,94.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 16,8 min.
Ejemplo 44 Hidrocloruro de 1-[5-cloroindol-2-carbonil-D-butilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 474,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{36}N_{5}OCl\cdotHCl\cdot1,5H_{2}O
Calculado C 55,86; H 7,50; N 13,03; Cl 13,19.
Hallado: C 55,95; H 7,00; N 12,94; Cl 13,09.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 21,6 min.
Ejemplo 45 Hidrocloruro de 1-[4-metoxibenzoil-D-butilglicinil]-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y cloruro de 4-metoxibenzoílo usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 4. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 431,3 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{24}H_{38}N_{4}O_{3}\cdotHCl\cdot0,8H_{2}O
Calculado C 60,00; H 8,31; N 11,66; Cl 7,38.
Hallado: C 60,00; H 8,35; N 11,54; Cl 7,3,0.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 14,7 min.
Ejemplo 46 Hidrocloruro de 1-[6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-butilglicinil]-4-(1-metil-piperidin-4-il)-piperazina
Preparado a partir de trihidrocloruro de 1-D-butilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 6-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico usando procedimientos sustancialmente equivalentes al Procedimiento General de Acoplamiento 1. La sal hidrocloruro se prepara siguiendo el Procedimiento General de Formación de Sales 1.
RMN ^{1}H
ES-MS, m/z 491,2 (M+1)^{+}.
Análisis para C_{25}H_{35}N_{4}O_{2}SCl\cdotHCl\cdot2H_{2}O
Calculado C 53,28; H 7,15; N 9,94.
Hallado: C 52,92; H 6,84; N 10,23.
HPLC analítica (Procedimiento 2): > 99%, t_{f} = 21,4 min.
Ejemplo 47 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Procedimiento D-1: A una mezcla de 1-(D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (725 mg, 2,6 mmol), ácido 5-cloroindol-2-carboxílico (510 mg, 2,6 mmol), HOBt (363 mg, 2,6 mmol), DMF (8 ml) y trietilamina (0,72 ml, 5,7 mmol) se añade DCC (700 mg, 3,4 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado que se forma se separa por filtración y se lava con DMF. El filtrado se concentra en vacío. El residuo se disuelve en metanol y se aplica a una resina SCX (activada con ácido acético al 5% y lavada con metanol), se lava con metanol y se eluye con solución saturada de amoniaco/metanol. Se concentran en vacío las fracciones del producto y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano y CMA), obteniéndose el compuesto del título (730 mg, 620).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}).
APCI-MS, m/e = 456 (M+1).
Ejemplo 48 Hidrocloruro de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Procedimiento de Formación de Sales 3: A una solución de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina (700 mg, 1,54 mmol, 1N) en acetonitrilo (200 ml) se añade a gotas, a 0ºC, cloruro de hidrógeno (1,54 ml, 1,54 mmol, 1 N en dietil éter). El disolvente se elimina en vacío. El residuo se disuelve en metanol, se concentra en vacío y se seca en horno de vacío a 40ºC para que resulte el compuesto del título (768 mg, cuantitativo).
[\alpha]_{D}^{25} -23,0ºC (c 0,30, metanol)
Punto de fusión = 174-185ºC con descomposición.
RMN ^{1}H (CD_{3}OD).
APCI-MS, m/e = 456 (C_{24}H_{30}ClN_{5}O_{2}+1)
TLC R_{f} = 0,34 (CH_{2}Cl_{2}:CMA 3:2)
Análisis para C_{24}H_{30}ClN_{5}O_{2}\cdot0,9HCl\cdot0,6H_{2}O
Calculado: C 57,38; H 6,47; N 13,92; Cl 13,76.
Hallado: C 57,47; H 6,50; N 13,76; Cl 13,74.
Análisis por HPLC (Procedimiento A): >99%, t_{f} = 12,9 min.
Ejemplo 49 1-(indol-6-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes al descrito en el Procedimiento D-1, se prepara el compuesto del subtítulo a partir de 1-(D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido indol-6-carboxílico (76%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 422 (M+1).
Ejemplo 50 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento de Formación de Sales 3, se prepara el compuesto del título a partir de 1-(1-indol-6-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina (96%).
[\alpha]_{D}^{25} -14,1º (c 0,29, metanol)
Punto de fusión = 170-180ºC con descomposición
RMN ^{1}H (CD_{3}OD)
APCI-MS, m/e = 422 (C_{24}H_{31}N_{5}O_{2}+1)
TLC R_{f} = 0,23 (CH_{2}Cl_{2}:CMA 3:2)
Análisis para C_{24}H_{31}N_{5}O_{2}\cdot1,2HCl\cdot1,2H_{2}O
Calculado: C 59,20; H 7,16; N 14,38; Cl 8,74
Hallado: C 59,41; H 7,01; N 14,14; Cl 8,93.
Análisis por HPLC (Procedimiento A): >99%, t_{f} = 9,9 min.
Ejemplo 51 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes al descrito en el Procedimiento D-1, se prepara el compuesto del título a partir de 1-(D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina y ácido indol-6-clorobenzo-[b]tiofen-2-carboxílico (76%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3})
APCI-MS, m/e = 472 (M+1).
Ejemplo 52 Hidrocloruro de 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metil-piperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento de Formación de Sales 3, se prepara el compuesto del subtítulo a partir de 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-propargilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (96%).
[\alpha]_{D}^{25} -19,1º (c 0,295, metanol)
Punto de fusión = 115-135ºC con descomposición
RMN ^{1}H (CD_{3}OD)
APCI-MS, m/e = 473 (C_{24}H_{29}ClN_{4}O_{2}S+1)
TLC R_{f} = 0,3 (CH_{2}Cl_{2}:CMA 3:2)
Análisis para C_{24}H_{29}ClN_{4}O_{2}S\cdotHCl\cdot0,9H_{2}O.
Calculado: C 54,83; H 6,01; N 10,66; Cl 13,49.
Hallado: C 54,66; H 6,06; N 10,54; Cl 13,75.
Análisis por HPLC (Procedimiento A): >99%, t_{f} = 13,2 min.
Ejemplo 53 1-(indol-6-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento D-1, se prepara el compuesto del título a partir de 1-(D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido indol-6-carboxílico (62%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}).
APCI-MS, m/e 424 (C_{24}H_{33}N_{5}O_{2}+1).
Ejemplo 54 Hidrocloruro de 1-(indol-6-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento de Formación de Sales 3, se prepara el compuesto del título a partir de 1-(indol-6-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (86%).
[\alpha]_{D}^{25} -58,7º (c 0,25, metanol).
Punto de fusión = 110-115ºC, con descomposición.
RMN ^{1}H (CD_{3}OD).
APCI-MS, m/e 424 (C_{24}H_{33}N_{5}O_{2}+1).
TLC R_{f} = 0,58 (CH_{2}Cl_{2}:CMA 3:7).
Análisis para C_{24}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot1,2HCl\cdot1,5H_{2}O.
Calculado: C 58,31; H 7,58; N 14,17; Cl 8,61.
Hallado: C 58,35; H 7,67; N 14,07; Cl 8,33.
Análisis por HPLC (Procedimiento A): >99%, t_{f} = 10,9 min
Ejemplo 55 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento D-1, se prepara el compuesto del subtítulo a partir de 1-(D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 6-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico (46%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}).
APCI-MS, m/e 475 (C_{24}H_{31}ClN_{4}O_{2}S+1).
Ejemplo 56 Hidrocloruro de 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metil-piperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento de Formación de Sales 3, se prepara el compuesto del título a partir de 1-(6-clorobenzo[b]tiofen-2-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (84%).
[\alpha]_{D}^{25} -48,5º (c 0,25, metanol).
Punto de fusión = 130-135ºC, con descomposición.
RMN ^{1}H (CD_{3}OD).
APCI-MS, m/e 475 (C_{24}H_{31}ClN_{4}O_{2}S+1).
TLC R_{f} = 0,67 (CH_{2}Cl_{2}:CMA 3:7).
Análisis para C_{24}H_{31}ClN_{4}O_{2}S\cdot0,9HCl\cdot0,9H_{2}O.
Calculado: C 55,00; H 6,48; N 10,69; Cl 12,85; S 6,12.
Hallado: C 55,00; H 6,46; N 10,46; Cl 12,74; S 5,88.
Análisis por HPLC (Procedimiento A): >99%, t_{f} = 13,6 min.
Ejemplo 57 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento D-1, se prepara el compuesto del título a partir de 1-(D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina y ácido 5-cloroindol-2-carboxílico (73%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}).
APCI-MS, m/e = 458 (C_{24}H_{32}ClN_{5}O_{2}+1).
Ejemplo 58 Hidrocloruro de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina
Usando procedimientos sustancialmente equivalentes a los descritos en el Procedimiento de Formación de Sales 3, se prepara el compuesto del subtítulo a partir de 1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-alilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (82%).
[\alpha]_{D}^{25} -60,1º (c 0,25, metanol).
Punto de fusión = 170-175ºC, con descomposición.
RMN ^{1}H (CD_{3}OD).
APCI-MS, m/e = 458 (C_{24}H_{32}ClN_{5}O_{2}+1)
TLC R_{f} = 0,57 (CH_{2}Cl_{2}:CMA 3:7)
Análisis para C_{24}H_{32}ClN_{5}O_{2}\cdot1,1HCl\cdot0,8H_{2}O.
Calculado: C 56,24; H 6,82; N 13,66; Cl 14,53.
Hallado: C 56,33; H 7,01; N 13,43; Cl 14,49.
Análisis por HPLC (Procedimiento A): >99%, t_{f} = 13,1 min.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayos de inhibición de enzimas
La capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir el factor Xa se puede evaluar en uno o varios de los siguientes ensayos de inhibición de enzimas o en otros ensayos estándar conocidos por los expertos en la técnica.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo de inhibición de enzimas
El factor humano Xa y la trombina humana se compran en Enzyme Research Laboratories (South Bend, Indiana, USA). Otras proteasas proceden de fuentes comerciales. Los sustratos cromogénicos de para-nitroanilida-peptidoproteasa se compran de Midwest Biotech (Fishers, Indiana, USA).
Las afinidades de unión para el factor humano Xa se midieron como constantes de asociación aparentes (Kass) derivadas de la cinética de inhibición de proteasa según se ha descrito previamente, ^{a, b, c, d} Los valores aparentes de Kass se obtienen usando diluciones automatizadas (BioMek-1000) de inhibidores (las determinaciones de Kass se realizan por triplicado a cada una de cuatro-ocho concentraciones de inhibidor) en placas de 96 pocillos y velocidades de hidrólisis de sustratos cromogénicos a 405 nm usando un lector de placas Thermomax de Molecular Devices (San Francisco). Para la inhibición del factor Xa, el protocolo del ensayo es: para iniciar la hidrólisis se añadieron en 2 min 50 \mul de tampón (tris 0,06 M, NCl 0,3 M, pH 7,4), 25 \mul de solución de ensayo de inhibidor (en MeOH), 25 \mul de Xa de factor humano (32 nM en tris 0,03 M, NaCl 0,15 M, 1 mg/ml, de IISA) y finalmente 150 \mul de BzIIeGluGlyArgpNA (0,3 mM en agua). El [factor Xa] final es 3,2 nM. Se determinan [Xa libre] y [Xa unido] a partir de curvas estándar lineales en la misma placa usando software SoftmaxPro para cada concentración de inhibidor y se calculó Kass aparente para cada concentración de inhibidor que producía inhibición de la hidrólisis entre 20% y 80% del control (factor Xa 3,2 nM):Kass aparente = [E:I]/[E_{f}][I_{f}] = [E_{b}]/[E_{f}][Iº-I_{b}]. Los valores de Kass aparente así obtenidos son aproximadamente el valor inverso de la Ki para los respectivos inhibidores [1/Kass apart. = Ki apart]. La variabilidad de los valores medios de Kass aparente determinados a la concentración individual de sustrato es \pm 15%. La Km del sistema de ensayo se midió como 0,347 \pm 0,031 mM [n=4] y Vmax era 13,11 \pm 0,76 \muM/min.
Los valores de Kass se determinan con trombina y otras proteasas usando el mismo protocolo con las siguientes concentraciones de enzima y sustrato:
trombina, 5,9 nM con BzPheValArgpNA 0,2 mM;
factor XIa 1,2 nM con pyroGluProArgpNA 0,4 mM;
factor XIIa, 10 nM con HDProPheArgpNA 0,2 mM;
plasmina, 3,4 nM con HDValLeuLyspNA 0,5 mM;
nt-PA, 1,2 nM con HDIleProArgpNA 0,8 mM;
uroquinasa, 0,4 nM con pyroGlu GlyArgpNA 0,4 mM;
aPC, 3 nM con pyroGluProArgpNA 0,174 mM;
kallikrein de plasma, 1,9 nM con D-ProPheArgpNA y
tripsina bovina, 1,4 nM con BzPheValArgpNA 0,18 mM.
Citas
(a) Sall DJ, JA Bastian, SL Briggs, JA Buben, NY Chirgadze, DK Clawson, ML Denny, DD Giera, DS Gifford-Moore, RW Harper, KL Hauser, VJ Klimkowski, TJ Kohn, H-S Lin, JR McCowan, AD Palkowitz, GF Smith, ME Richeff, K Takeuchi, KJ Thrasher, JM Tinsley, BG Utterback, S-CB Yan, M Zhang. Dibasic Benzo[b]thiophenes Derivatives as a Novel Class of Active Site Directed Thrombin Inhibitors. 1. Determination of the Serine Potease Selectivity, Structure-Activity Relationships and Binding Orientation. J Med Chem 40 3489-3493 (1997).
(b) Smith GF, TJ Craft, DS Gifford-Moore, WJ Coffman, KD Kurz, E Roberts, RT Shuman, GE Sandusky, ND Jones, N Chirgadze, and CV Jackson. A Family of Arginal Thrombin Inhibitors Releated to Efegatran, Sem. Thrombos. Hemost. 22, 173-183 (1996) pp 265-300.
(c) Smith GF, DS Gifford-Moore, TJ Craft, N Chirgadze, KJ Ruterbories, TD Lindstrom, JH Satterwhite. Efegatran: A New Cardiovascular Anticoagulant. In New Anticoagulants for the Cardiovascular Patient. Ed. R Pifarre. Hanley & Belfus, Inc., Philadelphia (1997) pp 265-300.
(d) Sall DJ, DL Bailey, JA Bastian, NY Chirgadze, AC Clemens-Smith, ML Denney, MJ Fisher, DD Geira, DS Gifford-Moore, RW Harper, LM Johnson, VJ Klimkowski, TJ Kohn, HS Lin, JR McCowan, AD Palkowitz, ME Richett, GF Smith, DW Snyder, K Takeuchi, JE Toth, M Zang. Diamino Benzo[b]thiophene Derivatives as a Novel Class of Active Site Directed Thrombin Inhibitors: 5 Potency, Efficacy and Pharmacokinetic Properties of Modified C-3 Side Chain Derivatives. J. Med. Chem., 43, 649-669 (2000).
Se ha encontrado que los compuestos de fórmula (I) ejemplificados exhiben una Kass mayor que 1 x 10^{6} L/mol en el ensayo de inhibición de enzimas. Por ejemplo, se ha encontrado que los compuestos, o sus sales farmacéuticamente aceptables de la lista dada antes como preferidos y ejemplificados en los Ejemplos 6, 9 y 18, presentan unos valores de Kass de aproximadamente 20, 89 y 385 x 10^{6} L/mol, respectivamente.
La capacidad de un compuesto de ensayo para alargar el tiempo de tromboplastina parcial (Tiempo de Protrombina) se puede evaluar en los siguientes protocolos de ensayo.
Protocolo de ensayo del tiempo de tromboplastina parcial (Protrombina)
Se recoge sangre venosa en tubos de mantenimiento en vacío de citrato trisódico al 3,2% (0,109 M) a de 1 volumen de anticoagulante a 9 volúmenes de sangre. Se separan las células de la sangre por centrifugación a 700 g durante 10 minutos para obtener plasma, que se congela a 70ºC hasta que es requerido.
Para realizar el ensayo, se pipetean 100 \mul de plasma a un tubo de ensayo de vidrio, se añade 1 \mul del compuesto de ensayo en DMSO y se deja que se caliente a 37ºC en 2 min. Se añaden 100 \mul de reactivo de Manchester (tromboplastina de tejido) (Helena Biosciences, UK) caliente (37º) y se deja que se equilibre durante 2 min. Para iniciar la coagulación se añaden 100 \mul de solución caliente (37ºC) de cloruro cálcico 25 mM. El tubo de ensayo se inclina tres veces en un ángulo de 90º cada cinco segundos para mezclar los reactivos y se registra el tiempo para la formación de coágulo. Los datos obtenidos en una serie de observaciones y concentraciones del compuesto de ensayo se analizan por un programa de análisis estadístico SAS y se genera para cada compuesto una CT2 (concentración requerida para duplicar el tiempo de coagulación).
Se ha encontrado que el compuesto de la invención alarga significativamente el tiempo de tromboplastina parcial (Tiempo de Protrombina).
Protocolos alternativos de Tiempo de Protrombina y APTT
Determinaciones de la coagulación: Se determinan los Tiempos de Protrombina y los valores de APTT en plasma humano con un instrumento STA (Stago). El BioPT es un ensayo especial de coagulación no plasmática desencadenado con factor de tejido humano (Innovin). La posible unión a albúmina o un lípido se estimó por comparación de los efectos de BioPT en presencia/ausencia de 30 mg/ml de albúmina humana (HSA) y 1 mg/ml de fosfatidilcolina (PC). Los inhibidores se suministran en un vehículo de metanol acuoso al 50%.
Ensayo APTT
75 \mul de plasma Citrol Baxter-Dade, normal con citrato
Plasma humano
25 \mul de solución de ensayo
75 \mul de actina, cefaloplastina Baxter-Dade activada se incuba a 37ºC durante 2 min
75 \mul de CaCl_{2} (0,02 M).
Ensayo PT
75 \mul de plasma
25 \mul de solución de ensayo
75 \mul de solución salina se incuba a 37ºC 1 min
75 \mul de Innovin, factor de tejido humano recombinante Baxter-Dade.

Claims (24)

1. Un compuesto de fórmula (I)
17
en la que
R^{1}
representa alquilo C_{1-4}, alquenilo C_{2-4} o alquinilo C_{2-4}; y
R^{2}
se selecciona entre
\vskip1.000000\baselineskip
18
y
19 
\vskip1.000000\baselineskip
en las que
X^{1}
representa un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno;
X^{2}
representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un átomo de cloro o un átomo de bromo;
X^{3}
representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo o un átomo de halógeno;
X^{5}
representa cloro, metoxi o metilo;
X^{6}
representa un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno o un grupo metilo, y
X^{4}
representa CH o N;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{2} se selecciona entre
20
3. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R^{2} se selecciona entre
21
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{2} se selecciona entre
22
23
5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R^{1} es un grupo alquilo C_{1-4}.
6. Un compuesto según la reivindicación 5, en el que R^{1} es metilo, etilo, propilo, 2-propilo, butilo, t-butilo, 1-metilpropilo o 2-metilpropilo.
7. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que R^{1} es 2-propilo.
8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R^{1} es metilo, etilo, propilo, 2-propilo, butilo, t-butilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, prop-2-enilo o prop-2-inilo.
9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que
X^{1}
representa un átomo de hidrógeno o un átomo de flúor;
X^{2}
representa un átomo de hidrógeno o un átomo de cloro;
X^{3}
representa un átomo de flúor o cloro, y
X^{6}
representa un átomo de cloro.
10. Un compuesto según la reivindicación 9, en el que R^{2} es 4-metoxifenilo, indol-6-ilo, 3-metilindol-6-ilo, 3-cloroindol-6-ilo, 5-cloroindol-2-ilo, 3-fluoro-4-metoxifenilo, 5-fluoroindol-2-ilo o 6-clorobenzo[b]tiofen-2-ilo.
11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que
X^{1}
representa un átomo de hidrógeno o un átomo de flúor;
X^{2}
representa un átomo de hidrógeno o un átomo de cloro, y
X^{3}
representa un átomo de cloro.
12. Un compuesto según la reivindicación 11, en el que R^{2} es 4-metoxifenilo, indol-6-ilo, 3-metilindol-6-ilo, 3-cloroindol-6-ilo o 5-cloroindol-2-ilo.
13. Un compuesto según la reivindicación 11, en el que R^{2} es 4-metoxifenilo, indol-6-ilo o 5-cloroindol-2-ilo.
14. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que X^{4} representa CH.
15. Un compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona entre:
1-(4-metoxibenzoil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina y
1-(indol-6-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperidina,
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
16. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que X^{4} representa N.
17. Un compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona entre:
1-(5-cloroindol-2-carbonil-D-valinil)-4-(1-metilpipreridin-4-il)piperazina.
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
18. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
19. Un procedimiento para preparar un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, que comprende:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
\vskip1.000000\baselineskip
24 
\vskip1.000000\baselineskip
o una de sus sales, con un compuesto de fórmula (III)
\vskip1.000000\baselineskip
25 
\vskip1.000000\baselineskip
o un derivado reactivo de él; o
\newpage
(b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV)
26
o una sal de él, con un compuesto de fórmula (V)
(V)HOOC-R^{2}
o un derivado reactivo de él,
a lo que sigue, si se desea una sal farmacéuticamente aceptable, la formación de una sal farmacéuticamente aceptable.
20. Un compuesto de fórmula (III)
28
o una de sus sales, en la que R^{1} y R^{2} son lo definido en la reivindicación 19.
21. Un compuesto de fórmula (IV)
29
o una de sus sales, en la que R^{1} y X^{4} son lo definido en la reivindicación 19.
22. Un compuesto según se ha reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para uso en terapia.
23. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en el tratamiento de un trastorno trombótico.
24. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno trombótico.
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