ES2305083T3 - Procedimientos sinteticos para aplidina y nuevos derivados antitumorales, procedimientos de preparacion y uso de los mismos. - Google Patents

Procedimientos sinteticos para aplidina y nuevos derivados antitumorales, procedimientos de preparacion y uso de los mismos. Download PDF

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Paloma Mendez
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Marta Gutierrez Rodriguez
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Abstract

Un compuesto de la fórmula: (Ver fórmula) en la que: X es independientemente -C(R)2-, -O-, -S- o -NR-, en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; Y es CO o -COCHCH3CO-R4 es H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo amido RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es como se ha definido, un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno, X1 es O o S; y cuando Y es CO, entonces a) X2 es CR, O (y R2 está ausente), S (y R2 está ausente), o N, en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; y R1 y R2 son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo amido RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo guanidino o un grupo halógeno [y R1 o R2, cuando X2 es N, y R4 pueden ser adicionalmente -SO2R, en el que R es como se ha definido]; o b) siendo Aa8 de fórmula: (Ver fórmula) en la que R3 es...

Description

Procedimientos sintéticos para aplidina y nuevos derivados antitumorales, procedimientos de preparación y uso de los mismos.
La presente invención se refiere a nuevos derivados antitumorales derivados de aplidina.
Antecedentes de la invención
La aplidina tiene una estructura cíclica con una cadena lateral como la siguiente:
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1 
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Las didemninas forman una clase de depsipéptidos cíclicos que se han aislado de diversas especies del género Trididemnum (Rinehart, Jr. y col. J. Am. Chem. Soc., 103, 1857-59 (1981), Rinehart, Jr. y col. Science, 212, 933-935 (1981)) con potentes actividades antitumoral y antivírica. Entre ellas, la aplidina es una de las didemninas naturales más activa antitumoral. La descripción del aislamiento y la actividad antitumoral de la aplidina se proporciona en la patente US 5.834.586.
Se han descrito una serie de análogos sintéticos o naturales de la aplidina (Rinehart, Jr. y col. J. Med. Chem., 1996, 39, 2819-2834) que incluyen diferentes modificaciones en la cadena lateral, pero conservando la misma estructura macrocíclica.
Recientemente se ha descrito una estructura relacionada con didemninas denominada tamandarina (Fenical, W. y col., J. Org. Chem., 2000, 65, 782-792), que se aislaron de un ascidio no identificado de la familia Didemnidae. Se encontró que estas moléculas difieren sólo por la presencia de ácido hidroxiisovalérico (Hiv^{3}), en lugar de ácido hidroxiisovalerilpropiónico (Hip^{3}). Se han descrito como péptidos antivíricos, antitumorales e inmunosupresores altamente activos.
2
El documento WO 98/17302 A se refiere a la síntesis total del análogo Hip amino de didemnina A.
El documento WO 98/17275 A se refiere a rutas semisintéticas de análogos de didemnina.
El documento WO 93/00362 A se refiere a nuevos péptidos (didemninas); a su preparación y a su uso.
El documento EP 0.393.883 A se refiere a depsipéptidos cíclicos citotóxicos novedosos a partir del tunicado Trididemnum solidum.
El documento US 6.034.058 se refiere a análogos semisintéticos de alarildidemnina.
R. Sakai y col.; Journal of Medicinal Chemistry; vol 39; nº 14; 1996; páginas 2819-2834 se refiere a las relaciones de estructura-actividad de las didemninas.
Vervoort y col.; J. Org. Chem. 2000, 65, 782-792 se refiere a las tamandarinas A y B.
El documento ES 2.102.322 A se refiere a un procedimiento de preparación de didemnina A.
El documento WO 0.176.616 A se refiere a análogos de tamandarina y didemnina y a procedimientos para prepararlos y usarlos.
El documento US 6.509.315 se refiere a análogos de didemnina y a fragmentos y procedimientos para prepararlos y usarlos.
La presente invención se refiere a los compuestos descritos en la presente memoria, denominados derivados de aplidina, para uso en medicina, en particular en el tratamiento de tumores. La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que los comprenden, por ejemplo, tumores sólidos. Se prefiere particularmente el tratamiento de tumores sólidos tales como de vejiga, mama, colon, gástrico, hígado, CPCNP, de ovario, páncreas, faringe, próstata, renal, CPCP, retinoblastoma, melanoma, fibrosarcoma, condrosarcoma u osteosarcoma, o el tratamiento de leucemia/linfomas tales como LLA (leucemia promielocítica), LLA (linfoblástica aguda), LMC (mielogenosa crónica), LLA (de células B), leucemia (de tricoleucocitos), leucemia (de células plasmáticas), linfoma (de células T), linfoma (de células T cutáneas), linfoma (indiferenciado), linfoma (de células B de Burkitt), linfoma (histiocítico), linfoma (de células B), linfoma (ascitis de Burkitt).
Los ejemplos de composiciones farmacéuticas de la invención incluyen cualquier sólido (por ejemplo, comprimidos, píldoras, cápsulas, gránulos) o líquido (disoluciones, suspensiones o emulsiones) de composición adecuada o para administración oral, tópica o parenteral, y pueden contener el compuesto puro o en combinación con cualquier portador u otros compuestos farmacológicamente activos. Estas composiciones pueden tener que ser estériles cuando se administran por vía parenteral.
Adecuadamente, el compuesto puede conjugarse con una proteína portadora u otro agente adecuado para el suministro al cuerpo animal o humano. La conjugación puede suceder directamente entre un portador y el compuesto o indirectamente mediante un conector adecuado.
La administración del compuesto o las composiciones de la presente invención puede ser mediante cualquier procedimiento adecuado, tal como infusión intravenosa, preparaciones orales, administración intraperitoneal e intravenosa. Se prefiere usar tiempos de infusión de hasta 24 horas, más preferiblemente de 2-12 horas, siendo lo más preferido de 2-6 horas. Son especialmente deseables tiempos de infusión cortos que permitan llevar a cabo el tratamiento sin una estancia de una noche en el hospital. Sin embargo, la infusión puede ser de 12 a 24 horas o incluso más larga si es necesario. La infusión puede llevarse a cabo a intervalos adecuados de digamos 2 a 4 semanas. Las composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de la invención pueden suministrarse mediante encapsulación en liposoma o nanosfera, en formulaciones de liberación sostenida o mediante otros medios de suministro estándar.
La dosificación correcta del compuesto variará según la formulación particular, el modo de aplicación y el sitio, hospedador y cáncer o tumor particular que se esté tratando. Se tendrán en cuenta otros factores como edad, peso corporal, sexo, dieta, momento de administración, velocidad de excreción, condición del hospedador, combinaciones de medicamentos, reacciones de sensibilidad y gravedad de la enfermedad. La administración puede llevarse a cabo continua o periódicamente dentro de la dosis máxima tolerada.
Los compuestos de esta invención pueden usarse con otros medicamentos para proporcionar una terapia de combinación. Los otros medicamentos pueden formar parte de la misma composición o proporcionarse como una composición separada para administración al mismo tiempo o en momentos diferentes. La identidad del otro medicamento no está particularmente limitada y los candidatos adecuados incluyen:
a) medicamentos con efectos antimicóticos, especialmente aquellos que se dirigen a elementos citoesqueléticos, incluyendo moduladores de microtúbulo tales como medicamentos de taxano (tales como taxol, paclitaxel, Taxotere, docetaxel), podofilotoxinas o alcaloides vinca (vincristina, vinblastina);
b) medicamentos antimetabolitos tales como 5-fluorouracilo, citarabina, gemcitabina, análogos de purina tales como pentostatina, metotrexato);
c) agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas (tales como ciclofosfamida o ifosfamida);
d) medicamentos que se dirigen al ADN tales como los medicamentos de antraciclina adriamicina, doxorubicina, farmorubicina o epirubicina;
e) medicamentos que se dirigen a topoisomerasas tales como etopósido;
f) hormonas y agonistas o antagonistas de hormonas tales como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifeno y compuestos relacionados) y andrógenos, flutamida, leuprorelina, goserelina, ciproterón u octreotida;
g) medicamentos que se dirigen a la transducción de señal en células tumorales, incluyendo derivados de anticuerpo tales como herceptina;
h) medicamentos alquilantes tales como medicamentos de platino (cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, paraplatino) o nitrosoureas;
i) medicamentos que afectan potencialmente a la metástasis de tumores tales como inhibidores de metaloproteinasa de matriz;
j) terapia génica y agentes antisentido;
k) anticuerpos terapéuticos; y
l) otros compuestos bioactivos de origen marino, especialmente las ecteinascidinas tales como ET-743.
La presente invención se refiere a compuestos de fórmula:
3
en la que:
\global\parskip0.900000\baselineskip
X es independientemente -C(R)_{2}-, -O-, -S- o -NR-, en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
X_{2} es independientemente CR, O (y R_{2} está ausente), S (y R_{2} está ausente), o N, en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
Y es -(COR')_{n}CO-, en el que n es 0 ó 1 y R' es un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo guanidino, o un grupo halógeno;
X_{1} es O o S;
R_{1}, R_{2} y R_{4} son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo amido RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es como se ha definido, un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno, y R_{1} o R_{2}, cuando X_{2} es N, y R_{4} pueden ser adicionalmente -SO_{2}R, en el que R es como se ha definido;
o R_{1} y R_{2} pueden formar con X_{2} una prolina opcionalmente N-sustituida, siendo el grupo N-sustituido de prolina aa8 de fórmula RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo o un grupo aralquilo, y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi o un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno [y R_{1} o R_{2}, cuando X_{2} es N, y R_{4}, pueden ser adicionalmente -SO_{2}R, en el que R es como se ha definido]; o
b) siendo Aa8 de fórmula:
1000
en la que R_{3} es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo PSO_{2}- o un grupo acilo RCO-, en el que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
c) R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, en los que los sustituyentes opcionales se seleccionan de grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo, grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
d) aa8 se reemplaza por un grupo orgánico seleccionado de un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo RSO_{2}- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
cuando Y es -COCHCH_{3}CO-, entonces
a) X_{2} es N, y R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo amido RCONH-, un grupo -SO_{2}R o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno, o
b) siendo Aa8 de fórmula:
1001
en la que R_{3} es RSO_{2}-, en el que R es alquilo o R_{3} es un grupo alquenilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
\global\parskip1.000000\baselineskip
c) R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, en los que los sustituyentes opcionales se seleccionan de grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo, grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido o un grupo halógeno; o
d) aa8 se remplaza por un grupo orgánico seleccionado de un grupo arilo, un grupo aralquilo o un grupo RSO_{2}-, en el que R es un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, con la condición de que el compuesto no sea uno de
4
5
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en que X es -NR-, en el que R es como se ha definido. Más preferiblemente, X es -NH- o -NMe-, y lo más preferiblemente X es -NH-.
Los compuestos preferidos adicionales incluyen aquellos en los que X es -O-.
El grupo Y puede ser -COCHCH_{3}CO-.
Como alternativa, Y puede ser -CO-.
Es una clase preferida de compuestos en la que X es -NH- u -O- e Y es -COCHCH_{3}CO- o -CO-.
Preferiblemente, R_{4} es metilo.
Preferiblemente X_{1} es =O.
Preferiblemente, X_{2}R_{1} es un grupo aralquiloxi opcionalmente sustituido tal como un grupo benciloxi.
Otros compuestos preferidos incluyen aquellos en los que X_{2}R_{1} es un grupo amino opcionalmente sustituido, más preferiblemente aquellos en los que X_{2}R_{1} es un grupo -NH_{4}R_{1}, en el que R_{1} es un grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo o grupo aralquilo opcionalmente sustituido, especialmente un grupo alquilo o un grupo arilo tal como un grupo fenilo o un grupo butilo.
Los compuestos preferidos adicionales comprenden aquellos en los que X_{2}R_{1} es un grupo alquilo opcionalmente sustituido, especialmente en los que X_{2}R_{1} es un grupo propilo, grupo isopropilo, grupo pentilo o grupo biotina.
Es un grupo de compuestos preferidos aquellos en que -C(=O)X_{2}R_{1}R_{2} forma un grupo acilo de aminoácido opcionalmente sustituido. Adecuadamente, el grupo acilo de aminoácido opcionalmente sustituido es prolina opcionalmente sustituida, y más especialmente la prolina opcionalmente sustituida es norvalina-prolina opcionalmente sustituida, alanina-prolina opcionalmente sustituida, Boc-prolina o alquilprolina opcionalmente sustituida. Preferiblemente, la prolina opcionalmente sustituida es norvalina-prolina, Z-norvalina-prolina, alanina-prolina, Z-alanina-prolina, Boc-alanina-prolina, isobutirilprolina o D-lactilprolina opcionalmente protegida.
Un grupo adicional de compuestos preferidos incluye aquellos en que X_{1} es S y X_{2}R_{1} es un grupo -NHR_{1}, en el que R_{1} es un grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo o grupo aralquilo opcionalmente sustituido. R_{1} es preferiblemente un grupo alquilo o un grupo arilo, más preferiblemente un grupo fenilo o un grupo butilo.
R_{1} y R_{2} pueden formar con X_{2} un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido con uno o más grupos R_{3}. Por ejemplo, el grupo heterocíclico puede ser cumarina.
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en que aa8 está reemplazado por un grupo orgánico RSO_{2}-, en el que R es como se ha definido, tal como metilo.
Los ejemplos de compuestos según esta invención incluyen:
8-[fenilurea]didemnina A,
8-[butilurea]didemnina A,
3-[Val]-8-[isobutiril]didemnina A,
3-[Hiv]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Val]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Hiv]-8-[isobutiril]didemnina A,
3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[Nva-Pro]-aplidina,
8-[feniltiourea]didemnina A,
8-[cumarina]didemnina A,
8-[butiltiourea]didemnina A,
8-[metilsulfonil]didemnina A,
3-[Val]-Z-didemnina A,
3-[Hiv]-8-[Val]-didemnina A,
3-[Hiv]-8-[butiril]-didemnina A,
3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidina,
3-[Hiv]-Z-didemnina A,
3-[Hiv]-9-[Z-Nva-Pro]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidina,
3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-didemnina A,
9-[metilsulfonil]aplidina,
3-[Hiv]-9-[isobutiril]aplidina.
\vskip1.000000\baselineskip
En un aspecto relacionado de la invención, los compuestos ejemplares incluyen:
9-[norvalina]aplidina,
3-[Val]-didemnina A,
3-[Hiv]-didemnina A,
9-[Z-Nva]-aplidina,
8-[Gly]-9-[cumarina]didemnina A,
8-[biotina]didemnina A,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[Boc]-aplidina,
7,8-[espiro]-9-[pyr]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidina,
7,8-[espiro]-9-[Boc]-aplidina,
3-[Val]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[D-lac(OTBDMS)]-aplidina,
7,8-[espiro]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[pyr]-aplidina,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[acriloil]aplidina, o
3-[Aip]-aplidina.
\vskip1.000000\baselineskip
En un aspecto relacionado, la presente invención está dirigida a compuestos que tienen las siguientes fórmulas:
\vskip1.000000\baselineskip
500 
\vskip1.000000\baselineskip
y estructuras relacionadas.
La presente memoria descriptiva describe una ruta sintética para la formación de aa3 = [Hiv]^{3} o [Val]^{3} o [Aip]^{3}
como parte de una serie de agentes antitumorales extremadamente potentes y raros que se prevé programar para ensayos clínicos cuando se pongan a disposición cantidades adecuadas, y sus isómeros más sencillos en los que los residuos aminoacídicos están permutados. Este proceso está enantiomérica y estereoméricamente controlado y es rápido, aprovechando los procedimientos estándar de metodología sintética en fase de disolución.
La realización preferida de la presente invención se representa en la fórmula I, en la que aa3 son independientemente \alpha-aminoácidos de configuración L o D. X es independientemente C(R)_{2}, O, S o NR; en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno. En los que R tiene lo más preferiblemente de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a aproximadamente 8 átomos de carbono, aún más preferiblemente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono y lo más preferiblemente 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono. Metilo, etilo y propilo incluyendo isopropilo son grupos alquilo particularmente preferidos en los compuestos de la presente invención. En los que aa3 es lo más preferiblemente \alpha-(\alpha'-hidroxiisovaleril)propionilo (Hip), (X= O, Y= -COCHCH_{3}CO-) -serie A, o \alpha-(\alpha'-aminoisovaleril)propionilo (Aip) (X= NH, Y= -COCHCH_{3}CO-) -serie N, o valina (X = NH, Y= -CO-) -serie V, o \alpha-hidroxiisovalerilo (X = -O-, Y = -CO-) -serie H, o N-metilvalina (X= NMe, Y = -CO-) -serie M. En los que aa8 son independientemente \alpha-aminoácidos de configuración L o D, si se aplica; en los que X_{2} se define dependiendo de la identidad de Y.
Por ejemplo, cuando Y es CO, entonces
a) X_{2} es CR, O (y R_{2} está ausente), S (y R_{2} está ausente), o N, en el que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; y
R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo amido RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno, [y R_{1} o R_{2}, cuando X_{2} es N, y R_{4}, pueden ser adicionalmente -SO_{2}R, en el que R es como se ha definido]; o
b) siendo Aa8 de fórmula:
1002 
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en la que R_{3} es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo RSO_{2}- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
c) R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, en los que los sustituyentes opcionales se seleccionan de grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo, grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; o
d) aa8 se reemplaza por un grupo orgánico seleccionado de un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo RSO_{2}- o un grupo acilo RCO- en los que R es un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
cuando Y es -COCHCH_{3}CO-, entonces
a) X_{2} es N, y R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo amido RCONH-, un grupo -SO_{2}R o un grupo acilo RCO- en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; o
b) siendo Aa8 de fórmula:
1003
en la que R_{3} es RSO_{2}- en el que R es alquilo, o R_{3} es un grupo alquenilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
c) R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, en los que los sustituyentes opcionales se seleccionan de grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo, grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; o
d) aa8 se reemplaza por un grupo orgánico seleccionado de un grupo arilo, un grupo aralquilo o un grupo RSO_{2}- en el que R es un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno.
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Los grupos alquilo tienen preferiblemente de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a aproximadamente 8 átomos de carbono, aún más preferiblemente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono, y lo más preferiblemente 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono. Metilo, etilo y propilo incluyendo isopropilo son grupos alquilo particularmente preferidos de la presente invención. Como se usa en la presente memoria, el término alquilo, a menos que se modifique de otro modo, designa tanto grupos cíclicos como no cíclicos, aunque los grupos cíclicos comprenderán al menos tres miembros de anillo de carbono. Los aminoácidos preferidos son D o L glicina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptófano, metionina, cisteína, aspartato, asparagina, ácido glutámico, glutamina, lisina, arginina, prolina, serina, treonina, histidina e hidroxiprolina protegidos o no protegidos. Los péptidos preferidos pueden formarse con los aminoácidos anteriormente mencionados.
Como se usa en la presente memoria, el término "grupo orgánico" significa un grupo hidrocarburo que se clasifica como un grupo alifático, grupo cíclico o combinación de grupos alifáticos y cíclicos (por ejemplo, grupos aralquilo). En el contexto de la presente invención, el término "grupo alifático" significa un hidrocarburo saturado o insaturado lineal o ramificado. Este término se usa para comprender grupos alquilo, alquenilo y alquinilo, por ejemplo. El término "grupo alquilo" significa un grupo hidrocarburo saturado lineal o ramificado que incluye, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, terc-butilo, heptilo, dodecilo, octadecilo, amilo, 2-etilhexilo, 2-metilbutilo, 5-metilhexilo y similares. El término "grupo alquenilo" significa un grupo hidrocarburo insaturado lineal o ramificado con uno o más dobles enlaces carbono-carbono, tal como un grupo vinilo. El término "grupo alquinilo" significa un grupo hidrocarburo insaturado lineal o ramificado con uno o más triples enlaces carbono-carbono. El término "grupo cíclico" significa un grupo hidrocarburo de anillo cerrado que se clasifica como un grupo alicíclico, grupo aromático o grupo heterocíclico. El término "grupo alicíclico" significa un grupo hidrocarburo cíclico que tiene propiedades que se parecen a las de grupos alifáticos. El término "grupo aromático" o "grupo arilo" significa un grupo hidrocarburo mono- o policíclico aromático. El término "grupo heterocíclico" significa un hidrocarburo de anillo cerrado en el que uno o más átomos en el anillo son un elemento distinto del carbono (por ejemplo, nitrógeno, oxígeno, azufre, etc.).
Los grupos alcoxi preferidos en los compuestos de la presente invención incluyen grupos que tienen uno o más enlaces de oxígeno y de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a aproximadamente 8 átomos de carbono, y aún más preferiblemente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono, y lo más preferiblemente 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono.
Los grupos heteroaromáticos adecuados de los compuestos de la presente invención contienen uno, dos o tres heteroátomos seleccionados de átomos de N, O o S e incluyen, por ejemplo, cumarinilo incluyendo 8-cumarinilo, quinolinilo incluyendo 8-quinolinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, indolilo, benzofuranilo y benzotiazol. Los grupos heteroalicíclicos adecuados de los compuestos de la presente invención contienen uno, dos o tres heteroátomos seleccionados de átomos de N, O o S e incluyen, por ejemplo, grupos tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, morfolino y pirrolidinilo.
Los grupos arilo carbocíclico adecuados de los compuestos de la presente invención incluyen compuestos de uno y múltiples anillos, incluyendo compuestos de múltiples anillos que contienen grupos arilo separados y/o fusionados. Los grupos arilo carbocíclico típicos contienen 1 a 3 anillos separados o fusionados y de 6 a aproximadamente 18 átomos de anillo de carbono. Los grupos arilo carbocíclico específicamente preferidos incluyen fenilo, incluyendo fenilo sustituido tal como fenilo 2-sustituido, fenilo 3-sustituido, fenilo 2,3-sustituido, fenilo 2,5-sustituido, fenilo 2,3,5-sustituido y fenilo 2,4,5-sustituido, incluyendo cuando uno o más de los sustituyentes de fenilo es un grupo atractor de electrones tal como halógeno, ciano, nitro, alcanoílo, sulfinilo, sulfonilo y similares; naftilo, incluyendo 1-naftilo y 2-naftilo; bifenilo; fenantrilo y antracilo.
Los grupos amino opcionalmente protegidos pueden protegerse usando grupos conocidos con este fin. Los grupos protectores adecuados para aminas incluyen carbamatos, amidas y otros grupos protectores tales como alquilo, arilalquilo, sulfo- o haloarilalquilo, haloalquilo, alquilsililalquilo, arilalquilo, cicloalquilalquilo, alquilarilalquilo, heterociclilalquilo, nitroarilalquilo, acilaminoalquilo, nitroarilditioarilalquilo, dicicloalquilcarboxamido-alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilalquenilo, nitroarilalquenilo, heterociclilalquenilo, heterociclilo, hidroxiheterociclilo, alquilditio, alcoxi- o halo- o alquilsulfinilarilalquilo, heterociclilacilo y otros carbamatos y alcanoílo, haloalcanoílo, arilalcanoílo, alquenoílo, heterociclilacilo, aroílo, arilaroílo, haloaroílo, nitroaroílo y otras amidas, así como alquilo, alquenilo, alquilsililalcoxialquilo, alcoxialquilo, cianoalquilo, heterociclilo, alcoxiarilalquilo, cicloalquilo, nitroarilo, arilalquilo, alcoxi- o hidroxiarilalquilo y muchos otros grupos. Dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos con los grupos sustituyentes anteriormente mencionados.
Las referencias en la presente memoria a grupos sustituidos en los compuestos de la presente invención designan el resto específico que puede estar sustituido en una o más posiciones disponibles por uno o más grupos adecuados, por ejemplo, halógeno tal como fluoro, cloro, bromo y yodo; ciano; hidroxilo; nitro; azido; alcanoílo tal como un grupo alcanoílo C_{1-6} tal como acilo y similares; carboxamido; grupos alquilo, incluyendo aquellos grupos que tienen 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono y más preferiblemente 1-3 átomos de carbono; grupos alquenilo y alquinilo, incluyendo grupos que tienen uno o más enlaces insaturados y de 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos alcoxi, incluyendo aquellos que tienen uno o más enlaces de oxígeno y de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono; ariloxi tal como fenoxi; grupos alquiltio, incluyendo aquellos restos que tienen uno o más enlaces tioéter y de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos alquilsulfinilo, incluyendo aquellos restos que tienen uno o más enlaces sulfinilo y de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos alquilsulfinilo, incluyendo aquellos restos que tienen uno o más enlaces sulfonilo y de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos aminoalquilo tales como grupos que tienen uno o más átomos de N y de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono o de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono; arilo carbocíclico que tiene 6 o más carbonos, particularmente fenilo (por ejemplo, siendo R un resto bifenilo sustituido o no sustituido); y aralquilo tal como bencilo.
Como es bien entendido en este campo técnico, un alto grado de sustitución no es sólo tolerado sino que a menudo es aconsejable. Se prevé sustitución en los compuestos de la presente invención. Como medio de simplificar la discusión y enumeración de cierta terminología usada a lo largo de esta solicitud, los términos "grupo" y "resto" se usan para diferenciar entre especies químicas que permiten la sustitución o que pueden estar sustituidas y aquellas que no permiten o no pueden estar sustituidas. Por tanto, cuando se usa el término "grupo" para describir un sustituyente químico, el material químico descrito incluye el grupo no sustituido y ese grupo con átomos de O, N o S, por ejemplo, en la cadena así como en el grupo carbonilo u otra sustitución convencional. Cuando se usa el término "resto" para describir un compuesto o sustituyente químico, sólo se pretende incluir un material químico no sustituido. Por ejemplo, la frase "grupo alquilo" pretende incluir no sólo sustituyentes alquilo hidrocarburos saturados de cadena abierta puros, tales como metilo, etilo, propilo, isobutilo y similares, sino también sustituyentes alquilo que portan sustituyentes adicionales conocidos en la técnica tales como hidroxi, alcoxi, amino, carboxilo, carboxamido, átomos de halógeno, ciano, nitro, alquilsulfonilo, etc. Por tanto, "grupo alquilo" incluye grupos éter, haloalquilos, alcoholes, tioles, carboxilo, aminas, hidroxialquilos, sulfoalquilos, etc. Por otro lado, la frase "resto alquilo" está limitada a la inclusión de sólo sustituyentes alquilo saturados de cadena abierta puros, tales como metilo, etilo, propilo, isobutilo y similares.
En la presente memoria descriptiva, se proporcionan procedimientos sintéticos.
Se describe un procedimiento de preparación de un fragmento de didemnina que tiene la estructura
6
comprendiendo el procedimiento acoplar Boc-D-alo-Ileu-OH con el enolato de litio de acetato de bencilo.
El grupo carbonilo de un fragmento de didemnina de fórmula:
7
puede reducirse proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
8
El grupo hidroxi de un compuesto de fórmula:
9
puede protegerse proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
10
La desprotección adicional del grupo éster bencílico proporciona un fragmento de didemnina que tiene la estructura
11
Un procedimiento adicional descrito para preparar un fragmento de didemnina comprende acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
12
y un segundo reactivo que tiene la estructura
13
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
14
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que R es un grupo protector de amina; y en la que
R es un grupo protector de hidroxi. Adecuadamente, X es -O- y R es terc-butildimetilsililo; o X es -NH- y R es Boc.
Otro procedimiento descrito para preparar un fragmento de didemnina comprende acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
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15 
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y un segundo reactivo que tiene la estructura
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16 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
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17 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O-, -NMe y -NH-; en la que R es un grupo protector de amina; y en la que R es H. Adecuadamente, X es -O- y R es H; o X es -NH- y R es Boc; o X es -NMe- y R es Boc.
Un procedimiento descrito comprende hidrolizar el fragmento de didemnina de fórmula:
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18
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
19
en la que X se selecciona del grupo constituido por -OH y -NH_{2}.
Otro procedimiento implica hidrolizar el fragmento de didemnina
20
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
21
en la que X se selecciona del grupo constituido por -NH_{2} y -NHMe.
Se describe un procedimiento adicional de preparación de un fragmento de didemnina, comprendiendo el procedimiento acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
22
y un segundo reactivo que tiene la estructura
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23 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
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24 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O-, -NMe y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Un procedimiento implica hidrolizar el fragmento de didemnina
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25 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
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26 
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en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})nCO-; en el que n es O ó 1.
Se describe otro procedimiento, comprendiendo el procedimiento acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
27
y un segundo reactivo que tiene la estructura
28
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
29
Un procedimiento descrito adicionalmente implica la desprotección del grupo éster bencílico del fragmento de didemnina de fórmula
30
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
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31 
\vskip1.000000\baselineskip
Un procedimiento descrito de preparación de un fragmento de didemnina comprende acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
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32 
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y un segundo reactivo que tiene la estructura
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33 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
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34 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Un procedimiento implica la desprotección del fragmento de didemnina
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35 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
36
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Un procedimiento adicional descrito para preparar un fragmento de didemnina comprende ciclar el fragmento de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
37 
\vskip1.000000\baselineskip
proporcionando un análogo de didemnina que tiene la estructura
38
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Un procedimiento descrito adicionalmente implica hidrolizar el análogo de didemnina
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39 
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proporcionando un análogo de didemnina que tiene la estructura
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40 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Se describe un procedimiento de preparación de un análogo de didemnina, comprendiendo el procedimiento acoplar un primer reactivo que tiene la estructura
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41 
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y un segundo reactivo que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
42 
\newpage
proporcionando un análogo de didemnina que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
43
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Otro procedimiento descrito comprende la desprotección del fragmento de didemnina de fórmula:
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44 
\vskip1.000000\baselineskip
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
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45
en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Un procedimiento descrito de preparación de un fragmento de didemnina comprende el acoplamiento del fragmento que tiene la estructura
\vskip1.000000\baselineskip
46
y un segundo reactivo que tiene la estructura
47 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
48 
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Un procedimiento descrito adicionalmente comprende la desprotección del fragmento de didemnina de fórmula:
49 
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proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
50 
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Un procedimiento descrito para preparar un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina de fórmula:
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51 
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con el fragmento
52 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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53 
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en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-; en la que Y es -(COCHCH_{3})_{n}CO-; en el que n es 0 ó 1.
Un procedimiento descrito adicionalmente de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
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54 
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y el fragmento que tiene la estructura
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55 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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56 
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en la que X se selecciona del grupo constituido por -O- y -NH-, y R es isopropilo; en la que X es -O- y R es n-propilo y R es n-pentilo.
Un procedimiento descrito adicionalmente para preparar un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
57
y el fragmento que tiene la estructura
58
proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura:
59
en la que:
60
61
62
63
64
65
Un procedimiento descrito implica la desprotección del análogo de didemnina
66
proporcionando un fragmento de didemnina que tiene la estructura
67
en la que
68
69
70
71
72
Un procedimiento descrito de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
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73 
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y el fragmento que tiene la estructura
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74 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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75 
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Un procedimiento adicional comprende la desprotección del análogo de didemnina
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76 
\newpage
proporcionando un análogo de didemnina que tiene la estructura
77
Un procedimiento descrito de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina
78
y cloruro de isobutirilo, proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
79
Se describe un procedimiento de preparación de un análogo de didemnina que comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
80
teniendo el fragmento la estructura
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81 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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82 
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en la que R es Boc, isobutirilo, piruvilo o acriloílo.
Un procedimiento descrito de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
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83 
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y el fragmento que tiene la estructura
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84 
\newpage
proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
85
en la que R es SO_{2}Me o Z-Nva.
Se describe un procedimiento que comprende la desprotección del análogo de didemnina
86
proporcionando un análogo de didemnina que tiene la estructura
87
en la que R_{2} es Nva.
Se describe un procedimiento de preparación de un análogo de didemnina que comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
88
y el fragmento que tiene la estructura
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89 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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90 
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en la que R es Boc, isobutirilo o piruvilo.
Un procedimiento descrito de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
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91 
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y el fragmento que tiene la estructura
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92 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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93 
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Se describe un procedimiento de preparación de un análogo de didemnina que comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
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94 
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y el fragmento que tiene la estructura
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95 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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96
Un procedimiento descrito de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
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97 
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y el fragmento que tiene la estructura
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98 
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proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
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99 
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Se describe un procedimiento de preparación de un análogo de didemnina que comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
100
y cloruro de metilsulfonilo, proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
101
Un procedimiento descrito de preparación de un análogo de didemnina comprende el acoplamiento del análogo de didemnina que tiene la estructura
102
y el fragmento que tiene la estructura
X=C=N-R
proporcionando el análogo de didemnina que tiene la estructura
103
en la que X es O y S; en la que R es butilo y fenilo.
Se apreciará que estos procedimientos son todos ilustrativos de la presente tecnología y que pueden modificarse según se desee. En particular, pueden adoptarse diferentes grupos protectores para la protección de grupos amino o grupos hidroxi. Pueden emplearse diferentes reactivos para introducir los grupos pretendidos. Los sustituyentes pueden variarse según se desee.
En la medida en que pueda ser necesario asegurar que esta descripción incluye toda la descripción de nuestras solicitudes de prioridad, y para asegurar el derecho a la extensión completa de las fechas de prioridad, se incorpora a la presente como referencia el contenido de los documentos GB 0016148.9 y GB 0103750.6.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas
Los compuestos de la presente invención pueden prepararse sintéticamente. Los procedimientos aquí descritos para la síntesis de aplidina y derivados pueden usarse también para la síntesis de un amplio intervalo de didemninas.
Se muestran en la Figura 1 las estructuras de algunos de los compuestos:
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Los derivados de aplidina Aa3 son depsipéptidos cíclicos sintéticos similares en estructura a la aplidina (compuesto II) (aa3= Hip, también conocida como deshidrodidemnina B) que es una didemnina natural aislada del ascidio Aplidium albicans (Figura 1). Las moléculas preparadas difieren por la presencia de ácido hidroxiisovalérico (Hiv) (compuesto I), o valina (compuesto V) o metilvalina (compuesto VI) o \alpha-(\alpha'-aminoisovaleril)propionilo (Aip) (compuesto VII) en lugar de la unidad hidroxiisovalerilpropiónico (Hip) (II) que está presente en todos los otros congéneres de didemnina de origen natural. La similitud entre estas dos estructuras se ha encontrado también recientemente entre didemnina B (compuesto III), el miembro mejor conocido de esta clase de depsipéptidos, y un nuevo depsipéptido cíclico aislado de un ascidio brasileño no identificado de la familia Didemnidae: tamandarina A (compuesto IV). Los compuestos I, V, VI y VII son derivados de didemnina no naturales.
La homología estructural entre III y IV se refleja también en su respectiva actividad biológica. Comparando ambos compuestos, IV retiene niveles similares de actividad antitumoral in vitro en ensayos clonogénicos, así como propiedades de inhibición de la biosíntesis de proteína, y se ha mostrado que es algo más activo in vitro que III contra carcinoma pancreático. Sin embargo, el compuesto IV no muestra ningún tipo de especificidad tumoral en el panel de células NCI 60. La didemnina B probó ser tóxica a dosis cercanas a las requeridas para aplicaciones terapéuticas y es probable que IV sea una toxina de amplio espectro en lugar de un agente selectivo.
La [Hiv]^{3}-aplidina (I) exhibe por otro lado los mismos beneficios encontrados en la aplidina (II) con respecto a la didemnina B (III), en que es más específica contra tumores sólidos como de colon, condrosarcoma y osteosarcoma en el ensayo de MTS. La [Val]^{3}-aplidina (V) y la [MeVal]^{3}-aplidina (VI) son por otro lado compuestos nuevos que exhiben un alto nivel de actividad antitumoral in vitro. Finalmente, los compuestos V, VI y VII es probable que den como resultado, con respecto a la aplidina original, un aumento del enlace de hidrógeno en el sitio activo, y por tanto proporcionen compuestos más activos. Además, la presencia del enlace amida que reemplaza al enlace éster puede mejorar la estabilidad del núcleo de ciclodepsipéptido.
Se reseña aquí la primera síntesis total de las diferentes series de derivados de aplidina. A modo de ejemplo, se muestra el análisis retrosintético en la Figura 2.
Las etapas clave incluyen una macrociclación eficaz de los precusores lineales 6, y una síntesis estereoselectiva práctica de la unidad Ist-aa3-Leu-Pro (A1), y el fragmento derecho D1. El acoplamiento final del macrociclo 4 con diferentes cadenas laterales proporciona aa3-aa8-aplidina y derivados. La robustez de esta metodología sintética se ha probado exitosamente en el desarrollo de una síntesis práctica de aplidina II (aa3= Hip).
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La formación del núcleo macrocíclico es la etapa clave esencial en todas las series. La ciclación exitosa de todos los cuatro enlaces amida posibles se ha conseguido en síntesis anteriores de didemninas. Sin embargo, en el presente trabajo, se seleccionó el enlace que liga N(Me)-O(Me)-Tyr y Pro como el punto de macrociclación basándose en el trabajo anterior desarrollado durante la síntesis total de aplidina II (G. Jou, I. González, F. Albericio, P. Lloyd-Williams, E. Giralt., J. Org. Chem. 1997, 62, 354-366 y la patente ES-2102322).
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Esquema 1
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El núcleo macrocíclico de la molécula diana se desconecta en la unidad izquierda tetrapéptido Ist-aa3-Leu-Pro A1 y el dipéptido Boc-Thr-(Z-NMe-OMe-Tyr)-OH D1.
La síntesis del fragmento derecho del dipéptido D1 ya se ha descrito. Sin embargo, la síntesis expuesta en el Esquema 1 permite la preparación de este intermedio a escala de kilogramo. La función ácido de Boc-Thr(OH)-OH se protegió con bromuro de fenacrilo para dar directamente el alcohol D3, que se esterificó con Z-N(Me)-O(Me)-Tyr-OH usando DCC en presencia de DMAP, proporcionando D2. La retirada del grupo fenacilo con Zn en ácido acético proporcionó limpiamente el fragmento D1.
La formación del precursor A1 se expone en el Esquema 2 para las diferentes series. Para las series SHPL, SVPL y SMPL, la primera etapa de acoplamiento entre Leu-Pro-OBzl (A5) y el ácido comercialmente disponible (B1) proporcionó directamente alcohol A3 listo para la siguiente reacción con isostatina (C1). Para la síntesis de las series SAPL y SNPL, la ruta difiere de la anteriormente descrita en que B1 es un \beta-cetoéster sintetizado a partir de ácido \alpha-(\alpha'-hidroxiisovaleril)propiónico y \alpha-(\alpha'-aminoisovaleril)-propiónico, respectivamente. La síntesis del fragmento B2 (series SAPL y SNPL) se expone en el esquema 3. La hidrogenólisis de B2 a B1 se consigue justo antes de la reacción de acoplamiento (en un recipiente) con A5.
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema 2
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Esquema 3
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La preparación del fragmento A1 entero se basa en la disponibilidad de la porción de isostatina que se ha preparado a partir del amino no proteinogénico protegido Boc-D-aloisoleucina (C5) en grandes cantidades. La ruta sintética para la preparación de C1 se expone en el Esquema 4.
La activación de la funcionalidad carboxílica de Boc-D-alo-Ile con carbonildiimidazol seguida de condensación con el enolato de litio del acetato de bencilo proporcionó el \beta-cetoéster (C4). La reducción estereoselectiva con KBH_{4} en metanol proporcionó C3. La protección del grupo hidroxilo secundario como éter TBDMS (C2) y la hidrogenólisis del éster bencílico resultante proporcionó isostatina (C1).
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Esquema 4
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Las etapas posteriores que proporcionan los compuestos I, II, V y VII se exponen en el esquema 5.
El acoplamiento de los fragmentos A1 y D1 con HBTU/HOBt proporcionó el precursor de tipo lineal 7. La hidrogenólisis de los grupos protectores Cbz y bencilo procede limpia y suavemente con Pd(OH)_{2}, proporcionando 6. La etapa de macrociclación usando HATU/HOAt proporcionó el intermedio 5 con buen rendimiento (75%). Se usó cloruro de hidrógeno en dioxano para escindir el grupo protector Boc, proporcionando la amina 4. Se acopló este compuesto con Z-NMe-D-Leu-OH, proporcionando 3, que se sometió a hidrogenólisis con Pd-C. Se acopló el compuesto 2 resultante con la cadena lateral Pyr-Pro-OH usando DIPCDI, proporcionando los correspondientes compuestos.
De forma interesante, los precursores de tipo 2, que son análogos en todos los aspectos mencionados anteriormente de didemnina A, han servido como bloques de construcción de partida para la síntesis de algunos congéneres interesantes, puesto que la terminación N, un grupo amino secundario libre, ofrece un sitio para unir diversos grupos acilo al depsipéptido cíclico.
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Esquema 5
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En un estudio anterior (Rinehart y col. J. Med. Chem., 1996, 39, 2819-2834) se encontraron también activos derivados de didemnina A (dA) 3 como los compuestos originales 2. Para la serie aa3, se encontró también actividad en los compuestos 3.
Las Tablas 1 y 2 muestran los valores de CI_{50} encontrados en compuestos 1.
TABLA 1 Citotoxicidad de congéneres de [aa3]-aplidina, CI_{50} (molar) 
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Metodología: según Berjeron y col., Biochem. and Bioph. Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854.
P388 = linfoma de murina. A549 = carcinoma pulmonar humano. HT-29 = carcinoma de colon humano. MEL-28 = melanoma humano.
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TABLA 2 Valores de CI_{50} (molar) para la familia de aplidina
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Los compuestos preparados en la presente memoria se muestran en los esquemas 5 y 6. Estos compuestos incluyen N^{\alpha}-propionil-[aa]^{3}-dA, N^{\alpha}-butiril-[aa]^{3}-dA, N^{\alpha}-isobutiril-[aa]^{3}-dA y N^{\alpha}-pentanoil-[aa]^{3}-dA.
Se prepararon análogos que tienen dos subunidades acilo después de la terminación N del núcleo aa3-dA para examinar los factores estructurales contribuyentes a la especificidad de ciertos tumores. Se prepararon los compuestos diacilo isobutiril-Pro-OH, O-isobutiryi-Lac-Pro-OH, N-bencil-Ala-Pro-OH y se condensaron con compuestos de tipo 2 mediante el procedimiento de DIPCDI, obteniéndose respectivamente, después de desprotección y purificación,
[aa]-^{3}[isobutiril]^{9}-aplidina, [O-isobutiril-Lac]^{9}-aplidina y [Ala]^{9}-aplidina.
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(Esquema pasa a página siguiente)
Derivados de aplidina preferidos: compuestos de las series H, V 
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Los espirocompuestos fueron también acoplados para formar compuestos activos
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Esquema 6
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Se expone la síntesis de los fragmentos espirocíclicos en el esquema 7. La síntesis empezó a partir del compuesto anteriormente reseñado 8. Ref: a) Seebach, D. y col. J. Am. Chem. Soc. 1983, 105, 5390-5398. b) Genin, M. J. y col. J. Org. Chem. 1993, 58, 2334-2337.
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Esquema 7
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Derivados preferidos de aplidina: compuestos de la serie A
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Se ligaron también los compuestos espiro como en la serie anterior, proporcionando compuestos activos:
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Esquema 8
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TABLA 3 Citotoxicidad de derivados de aplidina, CI_{50} (molar)
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Espiro = [(5R)-1-(sustituyente en 9)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano]^{7-9}
(1) Este compuesto se ha descrito en la bibliografía: J. Org. Chem. 2000, 65, 782-792. Se publicó su síntesis antes de su descubrimiento (¡): Org. Lett., 2000, vol 0, No. 0, A-D
Metodología: según Berjeron y col., Biochem and Bioph. Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854
388 = linfoma de murina. A549 = carcinoma pulmonar humano. HT-29 = carcinoma de colon humano. MEL-28 = melanoma humano. DU 145 = carcinoma de próstata humano.
Lista de abreviaturas Miscelánea
AA
aminoácido
Ist
isostatina
Hip
ácido hidroxiisovalerilpropiónico
Hiv
ácido hidroxiisovalérico
Aip
ácido aminoisovalerilpropiónico
Lac
ácido láctico
LCL
cromatografía líquida
HPLC
cromatografía líquida de alta resolución
TLC
cromatografía en capa fina
P.f.
punto de fusión
T_{R}
tiempo de retención
cuant.
rendimiento cuantitativo
ESI-EM
espectros de masas de ionización por electropulverización
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Grupos protectores
Bn
bencilo
Boc
terc-butiloxicarbonilo
TBDMS
terc-butildimetilsililo
Z
benciloxicarbonilo
Pac
fenilacético
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Disolventes
THF
tetrahidrofurano
Hex
hexano
ACN
acetonitrilo
DCM
diclorometano
AcOEt
acetato de etilo
DMF
dimetilformamida
MTBE
metil-terc-butiléter
Et_{2}O
dietiléter
terc-BuOH
terc-butanol
TFA
ácido trifluoroacético
MeOH
metanol
EtOH
etanol
IPA
isopropanol
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Reactivos
CDI
1,1'-carbonildiimidazol
HOBt
1-hidroxibenzotriazol
HBTU
N-óxido de hexafluorofosfato de N-[(1H-benzotriazol-1-il)(dimetilamino)metilen]-N-metanaminio
BOP-Cl
cloruro bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico
HATU
N-óxido de hexafluorofosfato de N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3,-triazolo[4,5-b]piridin-1-ilmetilen]-N- metilmetanaminio
HOAt
1-hidroxi-7-azabenzotriazol
DCC
diciclohexilcarbodiimida
DIPCDI
N,N'-diisopropilcarbodiimida
TBAF
fluoruro de tetrabutilamonio
AcOH
ácido acético
p-TsOH
ácido p-toluenosulfónico
DMAP
4-dimetilaminopiridina
NMM
N-metilmorfolina
DIPEA
diisopropiletilamina
TEA
trietilamina
TFA
ácido trifluoroacético
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Procedimiento general
Se realizaron todas las manipulaciones en una atmósfera inerte de argón. Todos los disolventes eran de pureza de reactivo (usados en procesamientos) o de pureza HPLC (usados como disolvente de reacción y/o como de purificación). Se usaron directamente disolventes anhidros como suministra el fabricante. Se destiló recientemente el tetrahidrofurano antes de usar para retirar el estabilizante. Todos los demás reactivos eran compuestos comerciales de la mayor pureza disponible. Se realizó la cromatografía analítica de capa fina (TLC) en láminas de aluminio sobre gel de sílice Merck (60, F254) prerrecubiertas con un indicador fluorescente. Se efectuó la visualización usando luz ultravioleta (254 nm), ácido fosfomolíbdico (5% p/v) en 95% de metanol o vainillina. Se registraron los espectros de resonancia magnénica de protón y carbono (RMN-^{1}H, ^{13}C) en un espectrómetro de transformada de Fourier Varian-300 (300 MHz) y se expresaron los desplazamientos químicos en partes por millón (ppm) respecto al CHCl_{3} como referencia interna (7,26 ppm para ^{1}H y 77,0 para ^{13}C). Las multiplicidades se designan como singlete (s), doblete (d), doblete de dobletes (dd), doblete de tripletes (dt), triplete (t), cuartete (c), multiplete (m), y singlete ancho (sa), y las constantes de acoplamiento (J) se expresaron en Hz. Se midieron las rotaciones ópticas (en grados) con un polarímetro Jasco P1020. Se obtuvieron los espectros de masas de ionización por electropulverización (ESI-EM) en un Hewlett Packard Series 1100 MSD Elemental. Se llevó a cabo la cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice 60 E. Merck (240-400 de malla) o RP C 18 (40-63 \mum) usando los sistemas disolventes enumerados en los experimentos individuales.
Los siguientes procedimientos describen la síntesis de intermedios obtenidos hacia aplidina (SNPL), [Aiv]^{3}-aplidina (SNPL), [Hiv]^{3}-aplidina (SHPL), [Val]^{3}-aplidina (SVPL) y [MeVal]^{3}-aplidina (SMPL), y se da la descripción de una serie de ejemplos, muchos de los cuales están comprendidos en la presente invención.
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Ejemplo 1 Síntesis de (4R,5S)-4-(terc-butoxicarbonilamino)-5-metil-3-oxoheptanoato de bencilo (C4) 
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Se añadió CDI (16,04 g, 98,96 mmol) a una disolución de Boc-D-alo-lle-OH (15,26 g, 65,9 mmol) en THF seco (200 ml) a 0ºC en atmósfera de argón. Después de 15 min, se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante un periodo de 16 h. Se enfrió la disolución resultante a -78ºC y se añadió mediante una cánula a una disolución bien agitada de enolato de bencil-litio enfriada a -78ºC (625 ml, 0,37 M), [preparada añadiendo gota a gota una disolución de acetato de bencilo (33,34 ml) en THF (165 ml) a una disolución de diisopropilamiduro de litio (0,36 M) en THF/hex 3:1 (642 ml) a -78ºC]. La temperatura debe mantenerse <-75ºC. Se agitó la mezcla de reacción a -78ºC durante 60 min. Después, se dejó llegar a -10ºC (30 min), se reenfrió a -78ºC y se inactivó con cloruro de amonio ac. saturado (200 ml), después se extrajo con DCM (3x500 ml) a temperatura ambiente. Se lavaron los extractos combinados sucesivamente con NaHCO_{3} ac. sat. (500 ml) y salmuera (200 ml). El secado (Na_{2}SO_{4}) seguido de la retirada de disolvente proporcionó un aceite, que se recubrió sobre sílice C18 y se cargó en la parte superior de una columna LC-RPC18 [Lichroprep RPC-18 (40-60 \mum). La elución usando un gradiente de ACN-H_{2}O (60 a 100% de ACN)] proporcionó el producto C4 en forma de un aceite incoloro (16,7 g, 70%). [\alpha]^{20}_{D} -20,0 (c 1, CHCl_{3}), TLC: F_{R}= 0,32 (Merck, RPC18, ACN-H_{2}O 7:3).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,77 (d, 3H), 0,94 (t, 3H), 1,25 (s, 9H), 1,60 (m, 1H), 1,90 (m, 2H), 3,58 (s, 2H), 4,47 (dd, 1H), 5,00 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,35 (s a, 5H).
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Ejemplo 2 Síntesis de éster bencílico de (3S,4R,5S)-N-(terc-butoxicarbonil)isostatina (C3) 
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Se disolvió C4 (16,7 g, 45,9 mmol) en metanol (690 ml) a 0ºC. Se añadió borohidruro de potasio (7,43 g, 137,8 mmol) a la disolución agitada, se inactivó después de 30 min la reacción con HCl ac. (0,1 N) a pH 4 y se extrajo con DCM (300 ml). Se lavó el extracto sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (100 ml, sat) y salmuera (100 ml). El secado (Na_{2}SO_{4}) seguido de la retirada del disolvente proporcionó el alcohol C3 (15,7 g, 93%) en forma de un aceite incoloro. F_{R}= 0,45 (hex-AcOEt 2: 1); [\alpha]_{D}= -9,5 (c 0,76, CHCl_{3}); F_{R}= 0,45 (AcOEt-Hex 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,81 (d, 3H), 0,90 (t, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,36 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,90 (m, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,70 (dd, 1H), 3,20 (d, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,40 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,40 (s a, 5H).
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Ejemplo 3 Síntesis de Boc-(3S,4R,5S)-Ist(TBDMS)-OBn (C2) 
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Se añadieron imidazol (8,77 g, 128,8 mmol), DMAP (1,57 g, 12,81 mmol) y TBDMS-Cl (19,42 g, 128,8 mmol) a una disolución de C3 (15,7 g, 42,9 mmol) en DMF seca (65 ml) a 0ºC. Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante una noche, después se repartió entre Et_{2}O (200 ml) y sucesivamente con HCl ac. (100 ml, 0,1 N), NaHCO_{3} ac. (100 ml, sat) y salmuera (50 ml). Después del secado (Na_{2}SO_{4}) y la retirada de disolvente, se purificó el residuo mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, hex) proporcionando C2 (19,96 g, 97%).
[\alpha]_{D}= 10,6 (c 1,01, CHCl_{3}); F_{R}= 0,73 (AcOEt-Hex 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,15 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,18 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,77 (m, 1H), 2,45 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,40 (d, 1H), 5,05 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,40 (s a, 5H).
Ejemplo 4 Síntesis de Boc-(3S,4R,5S)-Ist(TBDMS)-OH (C1)
134
Se añadió Pd/C al 10% (2,096 g, al 20% en peso) a una disolución de C2 (10,48 g, 21,8 mmol) en THF (110 ml) desgasificada y purgada con argón. Se agitó la mezcla en atmósfera de H_{2} (101,3 kPa) durante 16 h, después se filtró a través de un filtro de teflón de 0,45 \mum y se concentró a presión reducida, dando 7,8 g de un aceite incoloro. Se obtuvieron cristales incoloros (6 g, 70%) después de cristalización con ACN a -20ºC. [\alpha]^{20}_{D} 1,8 (c 0,594, DCM) [[\alpha]_{D}
bib. 1,74 (c 2,64, CHCl_{3}). Synthesis, 1991, 294];
F_{R} = 0,45 (HPTLC Merck, RP-C18, ACN-H_{2}O 8:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,18 (s, 6H), 0,82 (s, 9H), 0,85 (d, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,10-1,20 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,50 (m, 2H), 3,58 (m, 1H), 4,11 (m, 1H).
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Ejemplo 5 Síntesis de ácido (2S)-2-terc-butil(dimetil)sililoxi-3-metilbutírico (SAPLB4)
135
Se añadieron imidazol (27,24 g, 400,11 mmol) y DMAP (6,94 g, 54,56 mmol) a una disolución agitada de ácido (S)-2-hidroxi-3-metilbutírico (21,12 g, 181,9 mmol) en DMF (91 ml) a 0ºC en atmósfera de argón. Después de 5 min, se añadió terc-butildimetilclorosilano (60,31 g, 400,11 mmol). Se dejó calentar la mezcla a 23ºC y se agitó durante una noche. Se repartió la mezcla de reacción bruta entre Et_{2}O (250 ml) y HCl ac. (250 ml, 0,1 N). Se lavó la fase orgánica sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (250 ml, sat), y salmuera (250 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando el producto bis-sililado en forma de un aceite amarillo pálido. Se añadió gota a gota una disolución de este producto en THF (100 ml) (10 min) a una disolución enfriada (0ºC) de KOH (30,47 g, 543 mmol) en THF/H_{2}O (543 ml: 181 ml). Después de 40 min, se repartió la mezcla de reacción entre H_{2}O (300 ml) y Et_{2}O (500 ml). Se repartió la fase acuosa entre HCl ac. frío (0ºC) (200 ml, 3 N) y AcOEt (5 x 250 ml). Se secaron los extractos orgánicos combinados (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida, proporcionando SAPLB4 en forma de un aceite amarillo pálido (38,38 g, 91%).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,02 (m, 6H), 0,90 (m, 15H), 2,08 (m, 1H), 4,06 (d, 1H).
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Ejemplo 6 Síntesis de (4S)-4-terc-butil(dimetil)sililoxi-5-metil-3-oxohexanoato de bencilo (SAPLB3)
136
Se añadió CDI (16,04 g, 98,96 mmol) a una disolución de ácido (S)-2-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilbutírico (15,31 g, 65,9 mmol) en THF seco (200 ml) a 0ºC en atmósfera de argón. Después de 15 min, se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante un periodo de 16 h. Se enfrió a -78ºC la disolución resultante y se añadió mediante una cánula a una disolución bien agitada enfriada a -78ºC de enolato de bencil-litio (625 ml, 0,37 M), [preparada añadiendo gota a gota una disolución de acetato de bencilo (33,34 ml) en THF (165 ml) a una disolución de diisopropilamiduro de litio (0,36 M) en THF/hex 3:1 (642 ml) a -78ºC]. La temperatura debe mantenerse <-75ºC. Se agitó la mezcla de reacción a -78ºC durante 60 min. Después, se dejó llegar a -10ºC (30 min), se reenfrió a -78ºC y se inactivó con cloruro de amonio ac. (200 ml, sat), después se extrajo con DCM (3x500 ml) a temperatura ambiente. Se lavaron los extractos combinados sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (500 ml, sat) y salmuera (200 ml). El secado (Na_{2}SO_{4}) seguido de la retirada de disolvente dio un aceite, que se recubrió sobre sílice C18 y se cargó en la parte superior de una columna LC-RPC18 [Lichroprep RPC-18 (40-60 \mum). La elución usando un gradiente de ACN:H_{2}O (60 a 100% de ACN)] proporcionó SAPLB3 en forma de un aceite incoloro (16,1 g, 70%). [\alpha]_{D} -25 (c 0,5, MeOH); F_{R}= 0,32 (Merck, RP-C18, ACN-H_{2}O 7:3).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,02 (m, 6H), 0,92 (m, 15H), 1,92 (m, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,38 (d, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,20 (d, 1H), 7,35 (s a, 5H).
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Ejemplo 7 Síntesis de (4S)-4-terc-butoxicarbonilamino-5-metil-3-oxohexanoato de bencilo (SNPLB3)
137
Siguiendo el procedimiento obtenido para la síntesis de SAPLB3 a partir de Boc-Val-OH (10 g, 46,0 mmol), se obtuvo el compuesto del título después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 10:1 a 5:1) en forma de un aceite (6,9 g, 43%).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,77 (d, J=7, 3H), 0,98 (d, J=7, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H), 3,58 (s, 2H), 4,31 (m, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,34 (s a, 5H).
ESI-EM calc. para C_{19}H_{27}NO_{5}: 349,19. Encontrado (m/z): 372,1 (M+Na)^{+}.
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Ejemplo 8 Síntesis de (2RS,4S)-4-terc-butil(dimetil)sililoxi-2,5-dimetil-3-oxohexanoato de bencilo (SAPLB2)
138
Se añadió gota a gota el éster SAPLB3 (15,12 g, 41,49 mmol) en THF seco (43 ml) a una disolución de diisopropilamiduro del litio a -78ºC [preparado añadiendo butil-litio (disolución 1,6 M en hex; 31,12 ml, 49,79 mmol) a diisopropilamina (7,26 ml, 51,86 mmol) en THF seco (83 ml) en atmósfera de Ar a -78ºC durante 30 min]. Se agitó la mezcla durante 0,5 h y después se añadió yodometano (52,11 ml, 829,8 mmol). Se dejó calentar la mezcla a 23ºC y después se continuó la agitación durante 24 h. Se añadió yodometano adicional (2,67 ml, 42 mmol) y se agitó la mezcla durante 24 h adicionales o hasta la desaparición del material de partida. Se repartió después la mezcla entre NH_{4}Cl ac. (50 ml, sat) y AcOEt (2x200 ml). Se lavó la fase orgánica sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (100 ml, sat), salmuera (100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró, dando un aceite amarillo (12 g). Se obtuvo producto puro (SAPLB2) después de purificación mediante CL-sílice en gradiente de hex-Et_{2}O 100:0 a 100:2 en forma de una mezcla diastereoisomérica de epímeros en C2 (10 g, 63%).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,01 (s, 3H), 0,02 (s, 3H), 0,91 (m, 15H), 1,30 (d, 3H), 2,01 (m, H), 4,01 (m, 1H), 5,10 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,34 (s a, 5H).
Ejemplo 9 Síntesis de (2RS,4S)-4-terc-butoxicarbonilamino-2,5-dimetil-3-oxohexanoato de bencilo (SNPLB2) 
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139 
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Siguiendo el procedimiento obtenido para la síntesis de SAPLB2, partiendo de SNPLB3 (10 g, 46,0 mmol), se obtuvo el compuesto del título después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 10:1 a 5:1) en forma de una mezcla diestereosomérica (1:1) de epímeros en C2 (4,4 g, 62%). F_{R} = 0,4 y 0.37 (sílice, Hex/AcOEt 3:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,72 (m, 3H), 0,86 (m, 3H), 1,37 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 2,22 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,16 (m, 2H), 7,34 (m, 5H).
ESI-EM calc. para C_{20}H_{29}NO_{5}: 363,20. Encontrado (m/z): 364,1 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 10 Síntesis de Leu-Pro-OBn en forma de sal clorhidrato (A5) 
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140 
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Se añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en dioxano (209 ml, 5,3 N) a un matraz que contenía Boc-Leu-Pro-OBn (113,8 g, 272 mmol) y se continuó la agitación durante 5 h o hasta la conversión total por TLC (desaparición del material de partida: F_{R} = 0,47 (hex-AcOEt 2:1, sílice). Se concentró la disolución a presión reducida y se captó el aceite resultante con CHCl_{3} (3x50 ml), CHCl_{3}-MTBE (30 ml-50 ml), MTBE (50 ml) y hex (50 ml). Se secó el residuo a vacío (16 h) retirando el HCl residual, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido blanco. Se usó A5 (96,4 g, 100%) directamente sin purificación adicional en la siguiente etapa. [\alpha]^{22}_{D} -85,21 (c= 1, CHCl_{3}).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,92 (d, J=7,1, 3H), 0,96 (d, J=7,1, 3H), 1,55 (m, 1H), 1,82-2,14 (m, 5H), 2,26 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,32 (s a, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,01 (d, J=11,5, 1H), 5,16 (d, J=11,5, 1H), 7,34 (m, 5H), 8,40 (s a, 3H).
ESI-EM calc. para C_{18}H_{26}N_{2}O_{3}: 318,19. Encontrado (m/z): 319,2 (M+H)^{+}.
Ejemplo 11 Síntesis de TBDMS-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA4)
141
Se añadió Pd/C al 10% (6,0 g, 30% en peso) en atmósfera de Ar a un matraz que contenía una disolución desgasificada de SAPLB2 (20 g, 52,88 mmol) en THF anh. (158 ml) provisto de tubos de entrada-salida de gas. Después, se pasa a través una corriente de hidrógeno durante 8 h o hasta la conversión completa por TLC (desaparición del material de partida). Se burbujeó la mezcla resultante con Ar para desplazar el hidrógeno, y se filtró en un embudo de vidrio sinterizado a través de una almohadilla corta de Celite hasta un matraz enfriado (-5ºC) que contenía HOBt (7,17 g, 52,88 mmol) y HBTU (21,0 g, 55,53 mmol). Se añadió THF adicional (158 ml) para lavar la Celite. Se añadieron a la mezcla (a -5ºC) NMM (5,8 ml, 52,88 mmol) y después de 5 min una disolución enfriada (-5ºC) que contenía: A5 (31,96 g, 89,81 mmol), NMM (16 ml, 145 mmol) y DMF (120 ml) recién preparado. Se dejó calentar a ta la mezcla de reacción y se agitó durante 14 h. Se filtró la reacción bruta y se retiró el disolvente a presión reducida. Se añadió AcOEt (300 ml) a la disolución residual de DMF y se lavó sucesivamente con HCl ac. (200 ml, 0,1 N), NaHCO_{3} ac. (200 ml, sat) y se aclaró con salmuera (300 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. Se recubrió el material resultante con sílice (AcOEt como disolvente) y se sometió a cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente de AcOEt:hex 1:5 a 1:1, proporcionando SAPLA4 (26,8 g, 78%) en forma de un aceite incoloro espeso. Este producto es una mezcla 1:1 de diastereómeros. F_{R}= 0,5 (sílice, Hex/AcOEt 1:1, azul oscuro/vainillina).
IR (película, DCM) 3295, 3060 y 3040, 2957, 2934, 2880, 2858, 1736, 1634, 1528, 1454, 1387, 1252, 1171, 107,0 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,85-0,97 (m, 12H), 0,92 (s, 9H), 0,93 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,0, 3H), 1,37 (d, J = 7,0, 3H), 2,40-2,65 (m, 3H), 1,92-2,28 (m, 4H), 3,64-3,76 m, 1H), 4,69-4,82 (m, 1H), 5,05 (d, J = 11,8, 1H), 5,20 (d, J = 11,8, 2H), 6,73 (d, J = 8,9, 1H), 6,98 (d, J = 9,0, 1H), 7,34 (s a, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta -5,24, -4,81, 15,70, 17,43, 17,57, 18,84, 21,48, 21,61, 18,05, 23,28, 24,43, 24,55, 24,76, 25,68, 28,87, 31,36, 31,77, 41,27, 41,67, 48,68, 48,55, 48,89, 58,71, 66,84, 83,84, 83,29, 128,09, 128,47, 135,40, 169,24, 170,67, 170,89, 171,16, 171,20, 209,11, 211,62.
m/z (FAB) 611,5 [(M+Na)^{+}, 15], 589,5 [(M+H)^{+}, 100]; m/z (FABHRMS) 589,369045, C_{32}H_{52}NaO_{6}Si requiere (M+H)^{+}, 589,367291.
Ejemplo 12 Síntesis de Boc-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA4)
142
Se añadió Pd/C al 10% (0,74 g, 16% en peso) a una disolución desgasificada de SNPLB2 (2,3 g, 6,32 mmol) en THF seco (30 ml) y después se hidrogenó a presión atmosférica durante 5 h y 30 min o hasta la conversión completa por TLC (desaparición del material de partida). Se filtró la mezcla resultante a través de una almohadilla corta de Celite y se añadió THF adicional (20 ml) para lavar la Celite. Se añadieron a la disolución filtrada (a -5ºC) BOP-Cl (1,77 g, 6,96 mmol) y NMM (765 ml, 6,91 mmol), y después de 30 min una disolución enfriada (-5ºC) que contenía: A5 (3,15 g, 8,85 mmol), NMM (1,88 ml, 8,84 mmol) y DMF (14 ml) preparada 10 min antes. Se dejó calentar la mezcla de reacción a ta y se agitó durante 17 h. Se filtró la reacción bruta y se lavó el sólido con AcOEt (100 ml). Se lavaron sucesivamente las disoluciones orgánicas combinadas con KHSO_{4} ac. (50 ml, 10%), NaHCO_{3} ac. (50 ml, sat.) y salmuera (50 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío, y se sometió a cromatografía el material resultante en gel de sílice eluyendo con un gradiente de AcOEt:hex 1:4 a 1:1, proporcionando SNPLA4 (750 mg, 20%) en forma de un sólido blanco. Este producto es una mezcla de diastereómeros. F_{R}= 0,26 y 0,17 (sílice, Hex/AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,74-1,04 (m, 12H), 1,31-1,70 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), 2,01 (m, 3H), 2,22 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 5,14 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,7, 1H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,34 (s a, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 16,74, 16,91, 20,22, 21,94, 23,53, 24,80, 25,06, 28,48, 29,14, 41,29, 41,41, 46,98, 49,45, 49,64, 51,26, 59,06, 63,70, 64,27, 67,08, 79,86, 80,10, 128,32, 128,48, 128,74, 135,74, 156,28, 169,15, 169,32, 171,18, 171,91.
ESI-EM calc. para C_{31}H_{47}N_{3}O_{7}: 573,34. Encontrado (m/z): 574,4 [(M+H)]^{+}.
Ejemplo 13 Síntesis de Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA4)
143
Se añadió NMM (506 mg, 5,01 mmol) con agitación a un matraz que contenía A5 (2,06g, 4,78 mmol) en DCM (5 ml) a 0ºC. Después de 15 min, se añadieron ácido (2S)-2-hidroxi-3-metilbutanoico (ácido hidroxiisovalérico) (487 mg, 4,78 mmol) y DCC (986 mg, 4,78 mmol) en porciones. Se dejó calentar la mezcla de reacción a 23ºC y se agitó durante 14 h. Se diluyó la suspensión con CHCl_{3} (25 ml) y se repartió entre HCl ac. (10 ml, 1 N), NaHCO_{3} ac. (10 ml, sat) y salmuera (10 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 1:1 a 1:3), proporcionando SHPLA4 (1,13 g, 80%) en forma de un sólido blanco. F_{R} = 0,46 (hex-AcOEt 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,81, (d, J = 7,0, 3H), 0,92 (m, 6H), 0,97 (d, J = 7,0, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,19 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,88 (d, J = 4,8, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,06 (d, J = 12,3, 1H), 5,14 (d, J = 12,3, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,41 (d, J = 8,4, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 15,32, 19,08, 21,38, 23,11, 24,41, 24,69, 28,77, 31,31, 40,54, 46,81, 48,20, 58,82, 66,69, 75,76, 127,93, 128,14, 128,37, 135,28, 171,39, 171,95, 173,94.
Ejemplo 14 Síntesis de Boc-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA4)
144
Se añadió NMM (0,35 ml, 3,15 mmol) a un matraz que contenía Boc-valina-OH (652 mg, 3 mmol) en DCM (6 ml) a 0ºC. Después de agitar durante 15 min, se añadieron A5 (1,065 g, 3 mmol), HOBt (405 mg, 3,0 mmol) y DCC (650 mg, 3,15 mmol) en porciones. Se dejó calentar la mezcla de reacción a 23ºC y se agitó durante 14 h. Se diluyó la suspensión con DCM (25 ml) y se lavó sucesivamente con KHSO_{4} ac. (2x10 ml, 10%), NaHCO_{3} ac. (2x10 ml, sat) y salmuera (10 ml), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante CL ultrarrápida (sílice, gradiente de hex-AcOEt 2:1 a 1:1), dando SVPLA4 (1,48 g, 93%) en forma de un sólido blanco. F_{R} = 0,57 (hex-AcOEt 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,83-0,95 (m, 12H), 1,2-1,4 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,40-1,51 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H), 1,82-2,20 (m, 5H), 3,50-3,60 (m, 1H), 3,74-3,78 (m, 1H), 3,91-3,96 (m, 1H), 4,52-4,57 (s, 1H), 4,75-4,77 (m, 1H), 5,04 (s a, 1H), 5,05 (d, J=12,3, 1H), 5,17 (d, J=12,3, 1H), 6,60 (d, J = 8,4, 1H), 7,26-7,35 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,61, 19,19, 21,66, 23,23, 24,43, 24,78, 24,87, 25,55, 28,20, 28,87, 30,91, 33,86, 41,68, 46,73, 48,86, 58,77, 59,74, 66,82, 79,66, 128,08, 128,21, 128,46, 135,47, 155,66, 170,83, 171,33, 171,60.
ESI-EM calc. para C_{28}H_{43}N_{3}O_{6}: 517,32. Encontrado (m/z): 518,2 [(M+H)]^{+}.
Ejemplo 15 Síntesis de Boc-Me-Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA4)
145
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SVPLA4, partiendo de A5 (1,07 mg, 3,00 mmol) y Boc-(Me)Val-OH (694 mg, 3,00 mmol), se obtuvo el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,39 g, 87%) después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 2:1 a 1:1). F_{R} = 0,51 (Hex-AcOEt 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,83-0,91 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,93-2,03 (m, 4H), 2,18-2,22 (m, 2H), 2,76 (s, 3H), 3,40-3,50 (m, 2H), 3,55-3,62 (m, 1H), 3,75-3,85 (m, 1H), 4,00-4,10 (m, 1H), 4,50-4,60 (m, 1H), 4,70-4,82 (m, 1H), 5,07 (d, J=11,2, 1H), 5,24 (d, J=11,2, 1H), 6,20 (m, 0,5H), 6,50 (m, 0,5 H), 7,26-7,35 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 18,43, 19,77, 21,53, 23,23, 24,47, 24,77, 25,89, 25,30, 28,85, 41,25, 46,67, 48,51, 58,75, 64,05, 66,79, 128,06, 128,18, 128,44, 135,49, 170,12, 170,80, 171,66.
ESI-EM calc. para C_{29}H_{45}N_{3}O_{6}: 531,33. Encontrado (m/z): 532,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 16 Síntesis de Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA3)
146
Se añadió una disolución incolora transparente de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en THF (80,9 ml, 80,9 mmol) a un matraz que contenía SAPLA4 (15,86 g 26,97 mmol) y se agitó la mezcla vigorosamente a ta durante 15 min (o conversión total por TLC). Se inactivó la reacción mediante la adición de H_{2}O (4 ml) y gel de sílice (50 g). Se concentró el material bruto y se purificó mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex:AcOEt 2:1 a 1:1), proporcionando SAPLA3 (12,2 g, 95%) en forma de un sólido blanco (mezcla de diastereómeros). F_{R}= 0,36 y 0,29 (sílice, hex:CHCl_{3}:IPA; 1:5:1).
IR (película, DCM) \nu 3450-3293, 3060 y 3040, 2961, 2946, 2883, 2852, 1746, 1632, 1533, 1454, 1357, 1387, 1265, 1173, 1095, 1045, 1018 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,71 (d, J = 6,8, 3H), 0,81 (d, J = 6,6, 3H), 0,88 (d, J=6,5, 3H), 0,91 (d, J = 6,5, 3H), 0,94 (d, J = 6,5, 3H), 0,99 (d, J = 7,1, 3H), 1,07 (d, J = 6,5, 3H), 1,36 (d, 6,5, 3H), 1,43-1,52 (m, 2H), 1,60-1,66 (m, 1H), 1,93-2,10 (m, 3H), 2,12-2,23 (m, 2H), 3,53-3,58 (m, 1H), 3,65 (c, J = 7,1, 1H), 3,67-3,73 (m, 1H), 3,89 (c, J = 7,1, 1H), 3,96 (d, J = 4,2, 1H), 4,22 (d, J = 4,1, 1H), 4,54-4,56 (m, 1H), 4,58-4,62 (m, 1H), 4,69-4,73 (m, 1H), 5,1 (d, J = 12,1, 1H), 5,18 (d, J = 12,1, 1H), 6,57 (d, J = 8,5, 1H), 6,63 (d, J = 8,5, 1H), 7,28-7,38 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 14,06, 14,26, 15,85, 16,48, 20,07, 20,53, 22,02, 22,25, 25,37, 25,46, 29,45, 29,53, 31,59, 32,09, 41,13, 42,29, 49,93, 50,91, 51,02, 59,52, 67,60, 81,02, 128,78, 129,2, 169,48, 171,58, 172,17, 209,76.
m/z (FAB) 497,4 [(M+Na)^{+}, 12], 475,5 [(M+H)^{+}, 100]. m/z (FABHRMS) 497,263162, C_{26}H_{38}N_{2}O_{6} requiere (M+Na)^{+} 497,262757. Anal. calc. para C_{26}H_{38}N_{2}O_{6}: C, 65,82; H, 8,02; N, 5,91. Encontrado: C, 65,97; H, 8,18; N, 5,76.
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Ejemplo 17 Síntesis de Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA3)
147
Se añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en dioxano (39 ml, 5,3 N) a una disolución de SNPLA4 (750 mg, 1,30 mmol) en dioxano (15 ml, anh.) y se agitó la mezcla durante 5 horas o hasta la conversión total por TLC (desaparición del material de partida). Se concentró la disolución a presión reducida y se captó el aceite resultante con CHCl_{3} (15 ml), MTBE (15 ml) y hex (15 ml). Se secó el residuo a vacío, retirando el HCl residual, formando un sólido espumoso. Se usó directamente SNPLA3 (660 mg, cuant.) en la siguiente etapa sin purificación adicional.
ESI-EM calc. para C_{26}H_{39}N_{3}O_{5}: 473,29. Encontrado 474,2 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 18 Síntesis de Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA3)
148
Se añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en dioxano (1,5 ml, 5,3 N) a un matraz que contenía SVPLA4 (215 mg, 0,41 mmol) y se agitó la mezcla durante 5 horas o hasta la conversión total por TLC. Se concentró la disolución a presión reducida y se captó el aceite resultante con CHCl_{3} (5 ml), MTBE (5 ml) y hex (5 ml). Se secó el residuo a vacío retirando el HCl residual, proporcionando un sólido espumoso de SVPLA3 (185 mg, cuant.) que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-0,90 (m, 6H), 1,04 (d, J = 6,3, 3H), 1,12 (d, J = 6,3, 3H), 1,45-1,55 (m, 1H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,82-2,11 (m, 2H), 2,11-2,25 (m, 1H), 2,25-2,40 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,80-3,95 (m, 2H), 4,52-4,57 (s, 1H), 4,70-4,85 (m, 1H), 5,05 (d, J = 12, 1H), 5,20 (d, J = 12,3, 1H), 7,27-7,37 (m, 5H), 7,91 (m, 1H), 8,62 (s a, 2H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 18,57, 18,79, 21,83, 23,11, 24,50, 24,67, 24,90, 25,34, 28,92, 30,23, 33,25, 40,40, 47,04, 49,46, 49,94, 59,26, 60,02, 66,88, 128,16, 128,27, 128,51, 135,48, 167,54, 170,80, 171,94.
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Ejemplo 19 Síntesis de (Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA3) 
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149 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SVPLA3, partiendo de SMPLA4 (940 mg, 1,94 mmol), se obtuvo el compuesto del título (828 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco. Se usó directamente este producto en la siguiente etapa sin purificación adicional.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,93 (d, J=6,3, 6H), 1,07 (d, J= 6,3, 3H), 1,21 (d, J= 6,3, 3H), 1,47 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 2,00 (m, 3H), 2,23 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,83 (s a, 3H), 3,56-3,65 (m, 2H), 3,77 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 5,07 (d, J= 12,3, 1H), 5,19 (d, J= 12,3, 1H), 7,27-7,38 (m, 5H), 7,90 (m, 1H), 9,11 (m, 0,5H), 9,61 (m, 0,5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 13,98, 18,37, 19,57, 21,33, 22,52, 23,16, 24,74, 28,77, 29,78, 31,54, 32,54, 39,87, 46,75, 50,09, 58,91, 66,85, 122,12, 128,06, 128,24, 128,47, 135,43, 166,22, 170,73, 171,54.
ESI-EM calc. para C_{24}H_{38}ClN_{3}O_{4}: 431,2. Encontrado (m/z): 432,2 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 20 Síntesis de Boc-Ist(TBDMS)-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA2) 
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150 
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Se añadieron en porciones DMAP (0,932 g, 7,6 mmol), C1 (11,89 g, 30,53 mmol) y DCC (6,613 g, 32,05 mmol) a una disolución de SAPLA3 (12,2 g, 25,44 mmol) en DCM anh. (75 ml) a -5ºC en atmósfera de Ar, manteniendo la temperatura <-5ºC (baño de hielo-sal). Se agitó la mezcla de reacción durante 14 h a -5ºC y después se filtró y se concentró. Se captó el material bruto con ACN, se enfrió (-10ºC), se filtró y se concentró de nuevo. Se disolvió el material resultante en AcOEt (400 ml) y se lavó secuencialmente con KHSO_{4} ac. (2x200 ml, 10%), salmuera (200 ml), NaHCO_{3} ac. (200 ml, sat.) y se aclaró con salmuera (200 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando un aceite incoloro que se sometió a cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente de Hex-AcOEt 3:1 a 2:1, proporcionando SAPLA2 (19,35 g, 90%) en forma de una espuma blanca (mezcla de diastereómeros).
IR (película, DCM) \nu 3365-3200, 3069, 3038, 2959, 2930, 2882, 2857, 1746, 1688, 1640, 1533, 1456, 1389, 1258, 1171, 1086 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,01 (s, 3H), 0,03 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,07 (s, 3H), 0,77-1,03 (m, 18H), 0,84 (s, 9H), 0,85 (s, 9H), 1,33 (d, J = 7,4, 3H), 1,32-1,36 (m, 2H), 1,49 (d, J = 7,5, 3H), 1,38-1,62 (m, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,51-1,77 (m, 1H), 1,88-2,37 (m, 3H), 2,17-2,33 (m, 2H), 2,47-2,74 (m, 2H), 3,34-3,72 (m, 1H), 3,72-3,82 (m, 1H), 3,99-4,40 (m, 1H), 4,03-4,16 (m, 1H), 4,49 (d, J = 10,3, 1H), 4,54-4,59 (m, 1H), 4,63-4,70 (m, 2H), 4,75 (d, J = 4,5, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,95-5,19 (m, 2H), 5,22 (d, J = 5,2, 1H), 5,32 (d, J = 10,5, 1H), 6,38 (d, J = 10,9, 1H), 6,71 (d, J = 7,4, 1H), 6,76 (d, J = 8,4, 1H), 8,60 (d, J = 9,5, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta -5,05, -4,49, 11,83, 12,03, 13,01, 13,51, 13,83, 14,08, 16,92, 17,10, 17,85, 19,14, 19,65, 21,57, 22,09, 22,96, 23,28, 24,36, 24,60, 24,85, 25,73, 26,97, 27,33, 28,35, 28,46, 28,93, 29,09, 29,65, 34,12, 34,16, 40,45, 40,85, 41,18, 42,20, 46,74, 46,16, 47,99, 48,34, 48,90, 49,42, 57,62, 58,81, 58,96, 60,46, 66,62, 66,88, 68,18, 69,69, 78,98, 79,24, 79,84, 82,95, 128,08-128,49, 135,48, 135,61, 155,85, 158,27, 157,44, 168,40, 169,07, 170,65, 170,86, 171,42, 171,79, 203,09, 205,97.
m/z (FAB) 846,6 [(M+H)^{+}, 15], 746,6 (100); m/z (FABHRMS) 868,516 630, C_{45}H_{75}N_{3}O_{10}Si requiere (M+Na)^{+} 868,511930.
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Ejemplo 21 Síntesis de Boc-Ist(TBDMS)-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA2) 
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151 
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Se añadió NMM (0,19 ml) a un matraz que contenía SNPLA3 (clorhidrato) (660 mg, 1,12 mmol) en DCM (15 ml, anh) a 0ºC.Después de 15 min, se añadieron C1 (632 mg, 1,62 mmol), HOBt (266 mg, 1,73 mmol) y DCC (331 mg, 1,60 mmol) en porciones. Se dejó calentar el matraz a temperatura ambiente y se continuó la agitación durante una noche. Se repartió la mezcla de reacción bruta entre DCM (50 ml) y KHSO_{4} ac. (2x20 ml, 10%). Se lavó la fase orgánica sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (2x20 ml, sat) y salmuera (20 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el sólido blanco resultante mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 4:1 a 1:1), proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido blanco (700 mg, 73%, mezcla de diastereómeros.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,05 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,09 (s, 3H), 0,68-1,05 (18H, m), 0,87 (9H, s), 1,05-1,85 (12H, m), 1,42 (9H, s), 1,85-2,10 (3H, m), 2,11-2,31 (2H, m), 2,32-2,46 (2H, m), 2,47-2,60 (m, 2H), 3,34-3,90 (2H, m), 3,93-4,30 (2H, m), 4,50-4,89 (6H, m), 4,90-5,12 (2H, m), 5,07 (d, J=12,2, 2H), 5,18 (d, J=12,2, 2H), 5,60 (1H, d, J =9,7), 5,67 (1H, d, J = 10,2), 5,89 (1H, d, J = 11,2), 6,56 (1H, d, J = 7,3), 6,70 (1H, d, J = 8,3), 6,76 (1H, d, J = 6,8), 6,94 (d, J=6,8, 1H), 7,01-7,19 (m, 1H), 7,32 (s a, 5H), 8,17 (1H, d, J = 7,8), 8,28 (d, J=7,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{45}H_{79}N_{4}O_{9}Si: 844,54. Encontrado (m/z): 845,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 22 Síntesis de Boc-Ist(TBDMS)-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA2)
152
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPLA2, partiendo de SHPLA4 (850 mg, 2,0 mmol) y C1 (935 mg, 2,4 mmol), se obtuvo el compuesto del título (1,53 g, 97%) después de purificación mediante CL ultrarrápida (sílice, gradiente de hex-AcOEt 3:1 a 2:1). F_{R}=0,63 (hex-AcOEt 2:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) mezcla de rotámeros de BocNH: \delta 0,04 (s, 3H), 0,06 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,78-1,04 (m, 18H), 1,10-2,80 (m, 11H), 1,44 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 3,57 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,23 (d, J=4,8, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,90 (d, J=10, 1H), 5,05 (m, 1H), 5,20 (d, J=10, 1H), 5,23 (d, J=10, 1H), 6,64 (d, J=6,4, 1H), 6,88 (d, J=8,6, 1H), 7,32 (m, 5H), 8,54 (d, J=8,3, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta -5,14, -4,58, 11,84, 12,97, 17,78, 17,92, 18,98, 21,05, 23,11, 23,49, 25,61, 26,92, 28,36, 28,70, 30,12, 33,68, 38,72, 42,86, 46,51, 48,18, 58,67, 60,24, 66,52, 71,14, 79,40, 82,66, 127,96, 128,01, 128,33, 135,36, 157,30, 169,92, 171,10, 171,69, 171,97.
ESI-EM: calc. para C_{42}H_{71}N_{3}O_{9}: 789,50. Encontrado 790,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 23 Síntesis de Boc-Ist(TBDMS)-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA2)
153
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SNPLA2, partiendo de SVPLA3 (clorhidrato) (1,2 g, 2,64 mmol), C1 (1,23 g, 3,17 mmol), DCC (654 mg, 3,17 mmol), HOBt (464 mg, 3,43 mmol), NMM (0,35 ml) y DCM (6 ml), se obtuvo el compuesto en forma de un sólido blanco (1,87 g, 89%) después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 3:1 a 2:1).
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,07 (s a, 6H), 0,81-0,96 (m, 27H), 1,11-1,38 (m, 3H), 1,39-1,47 (s a, 7H), 1,51 (s a, 3H), 1,58-1,70 (m, 3H), 1,70-1,84 (m, 1H), 1,86-2,60 (m, 4H), 2,28-2,58 (m, 2H), 3,58-3,62 (m, 1H), 3,62-3,73 (m, 1H), 3,73-3,90 (m, 1H), 4,05-4,12 (m, 1H), 4,13-4,19 (m, 1H), 4,19-4,23 (m, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 4,77-5,06 (m, 2H), 5,18 (d, J = 12,3, 1H), 5,55 (s a, 1H), 6,44-6,61 (m, 2H), 7,30-7,35 (m, 5H), 7,94-7,98 (m, 1H).
ESI-EM calc. para C_{42}H_{72}N_{4}O_{8}Si: 788,51. Encontrado (m/z): 789,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 24 Síntesis de Boc-Ist(TBDMS)-(Me)Val-Leu-Pro-OBn (SMPLA2)
154
Se añadió NMM (41 ml, 0,38 mmol) a un matraz que contenía SMPLA3 (clorhidrato) (176 mg, 0,38 mmol) en DCM (2 ml, anh) a 0ºC. Después de 15 min, se añadieron C1 (176 mg, 0,46 mmol) y DCC (93 mg, 0,46 mmol) en porciones. Se dejó calentar el matraz a temperatura ambiente y se continuó la agitación durante una noche. Se repartió la mezcla de reacción entre DCM (10 ml) y KHSO_{4} ac. (2x5 ml, 10%). Se lavó la fase orgánica sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (2x5 ml, sat), salmuera (5 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el sólido blanco resultante mediante CL ultrarrápida (sílice, gradiente de Hex-AcOEt 3:1 a 2:1) dando SMPLA2 (127 mg, 42%) en forma de un sólido blanco. F_{R}=0,51 (Hex-AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta -0,08 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,75-0,86 (m, 27H), 1,00-1,43 (m, 11H), 1,52-1,65 (m, 1H), 1,68-1,80 (m, 1H), 1,83-2,01 (m, 3H), 2,08-2,24 (m, 2H), 2,40 (m, 2H), 2,87 (s, 3H), 3,50-3,57 (m, 3H), 3,71-3,76 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,47-4,63 (m, 4H), 5,01 (d, J= 12,9, 1H), 5,11 (d, J= 12,9, 1H), 6,41 (d, J= 7,8, 0,5 H), 6,62 (d, J= 7,8, 1H), 7,01 (d, J= 7,8, 0,5H), 7,23-7,28 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,56, 13,57, 13,98, 17,83, 18,87, 19,46, 21,77, 22,94, 23,11, 24,50, 24,71, 24,80, 25,64, 25,76, 25,97, 27,29, 28,18, 28,75, 30,40, 34,18, 39,28, 40,85, 46,58, 48,61, 57,03, 58,65, 62,26, 66,63, 69,21, 78,72, 127,92, 128,05, 128,11, 128,33, 135,42, 155,91, 169,76, 170,48, 171,56, 172,01.
ESI-EM calc. para C_{43}H_{74}N_{4}O_{8}Si: 802,53. Encontrado (m/z): 825,5 (M+Na)^{+}.
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Ejemplo 25 Síntesis de Ist-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPLA1)
155
Se añadió una disolución de ácido clorhídrico en dioxano anhidro (4,2 N, 220 ml, 924 mmol) a una disolución que contenía SAPLA2 (19,32 g, 22,8 mmol) en dioxano anh. (78 ml). Se agitó la disolución resultante a 21ºC durante 4,30 h o hasta la desaparición completa del material de partida (TLC). Después, se concentró la disolución a presión reducida. Se disolvió el residuo en DCM (25 ml) y se concentró retirando el HCl residual. Se secó el residuo resultante a vacío hasta la eliminación completa del HCl libre (3 h), dando 17,3 g de SAPLA1 (15,1 g, cuant.) en forma de una espuma blanca (mezcla de diastereómeros).
Ejemplo 26 Síntesis de Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPLA1) 
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156 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPLA1, partiendo de SNPLA2 (700 mg, 0,82 mmol), se obtuvo el compuesto del título en forma de un sólido blanco (545 mg, cuant.) después de precipitación con Et_{2}O (mezcla de diastereómeros).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-1,04 (m, 18H), 1,02-1,22 (m, 3H), 1,23-1,58 (m, 5H), 1,60-1,80 (m, 2H), 1,82-2,01 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,40-2,85 (m, 2H), 3,24 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,70-4,05 (m, 2H), 4,46 (m, 2H), 4,47-4,75 (m, 2H), 5,10 (s a, 2H), 7,34 (s a, 5H), 7,98 (s a, 1H), 8,10 (s a, 1H).
ESI-EM calc. para C_{34}H_{54}N_{4}O_{7}: 630,40. Encontrado (m/z): 631,4 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 27 Síntesis de Ist-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPLA1) 
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157 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPLA1, partiendo de SHPLA2 (1,53 g, 1,94 mmol), se obtuvo el compuesto del título (1,12 g, cuant.) en forma de un sólido blanco después de precipitación con Et_{2}O.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-1,04 (m, 18H), 1,10-1,22 (m, 3H), 1,42 (m, 2H), 1,70 (m, 2H), 1,97 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,34 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,04 (d, J=11, 1H), 5,18 (d, J=11, 1H), 7,34 (s a, 5H), 8,21 (s a, 3H).
ESI-EM calc. para C_{31}H_{49}N_{3}O_{7}: 575,36. Encontrado (m/z): 576,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 28 Síntesis de Ist-Val-Leu-Pro-OBn (SVPLA1) 
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158 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPLA1, partiendo de SVPLA2 (1,87 g, 2,36 mmol), se obtuvo el compuesto del título (1,40 g, cuant.) en forma de un sólido blanco después de precipitación con Et_{2}O.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,01 (m, 15H), 1,01-1,10 (m, 3H), 1,20-1,79 (m, 5H), 1,81-2,05 (m, 4H), 2,05-2,15 (m, 2H), 2,50-2,68 (m, 2H), 2,82-3,1 (m, 1H), 3,20-3,35 (m, 1H), 3,50-3,70 (m, 1H), 3,80-3,90 (m, 1H), 4,18-4,30 (m, 1H), 4,35-4,45 (m, 1H), 4,45-4,55 (m, 1H), 4,60-4,70 (m, 1H), 5,02 (d, J = 12,3, 1H), 5,15 (d, J = 12,3, 1H), 7,28-7,38 (m, 5H), 7,5 (s a, 1H), 7,9 (s a, 3H), 8,15 (s a, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 10,81, 14,67, 18,29, 19,32, 21,48, 23,14, 24,48, 24,76, 25,81, 30,29, 33,41, 40,31, 46,96, 49,35, 59,14, 59,94, 60,67, 66,94, 128,11, 128,32, 128,54, 135,32, 171,58, 171,74, 171,80, 172,57.
ESI-EM calc. para C_{31}H_{50}N_{4}O_{6}: 574,35. Encontrado (m/z): 575,3 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 29 Éster fenacílico de N-terc-butiloxicarboniltreonina (D3) 
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159 
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Se añadieron TEA (14 ml, 0,1 mol) y bromoacetofenona (19,0 g, 0,1 mol) a una suspensión agitada de Boc-Thr-OH (21,91 g, 0,1 mol) en AcOEt (200 ml) a 0ºC. Se dejó calentar la mezcla de reacción a 20ºC, se agitó durante 2 días y después se diluyó con AcOEt (500 ml). Después de lavar sucesivamente con HCl ac. (200 ml, 0,1 N), H_{2}O (100 ml), NaHCO_{3} ac. (200 ml, 1 N) y salmuera (200 ml), secar (Na_{2}SO_{4}), filtrar y concentrar a vacío, se trituró el residuo con Et_{2}O y se filtró. Se secó el sólido resultante en la oscuridad, proporcionando D3 (28,6 g, 85%). F_{R}= 0,55 (hex-AcOEt 1:1, sílice); P.f. = 114,2ºC; [\alpha]^{22}_{D} -29,4 (c 2, AcOEt).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta= 1,31 (d, J= 6,6, 3H), 1,46 (s, 9H), 3,77 (d a, OH), 4,44 (dd, J= 9,6, 1H), 4,6 (c, 1H), 5,34 (d, J= 16,5, 1H), 5,37 (d a, OH) 5,68 (d, J= 16,8, 1H), 7,51 (t, 2H), 7,65 (t, 1H), 7,92 (dd, 2H).
Ejemplo 30 N-Benciloxicarbonil-N,O-dimetil-L-tirosina (E1) 
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160 
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Se añadió KOH finamente dividido (112,72 g, 2 mol) en porciones a una disolución agitada de Z-Tyr-OH (63,24 g, 200 mmol) en THF (900 ml) a 0ºC, seguido de la adición de hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (6,36 g, 10% en peso). Después, se añadió gota a gota sulfato de dimetilo (127,2 ml, 1,33 mol) durante 30 min, manteniendo la mezcla de reacción por debajo de 4ºC. Se agitó la reacción durante 30 min adicionales y se añadió H_{2}O (950 ml). Después de agitar durante 5 h a 0ºC, se diluyó la reacción con éter (1.500 ml), se separó la fase acuosa y se extrajo la fase orgánica con NaHCO_{3} ac. (2x500 ml, sat). Se acidificaron las fases acuosas combinadas a pH 1 con KHSO_{4} 1 M y se extrajeron con AcOEt (5x500 ml). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron. Se precipitó el residuo con etiléter y se filtró, dando E1 en forma de un sólido blanco (53,85 g, 78%). [\alpha]^{22}_{D} -57,16 (c 2,23 CHCl_{3}) ([\alpha]_{D} bib. -48 (c= 2,23 CHCl_{3}). JACS, 112, 21, 1990).
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Ejemplo 31 Éster fenacílico de O-(benzoloxicarbonil-N,O-dimetil-L-tirosil)-N-terc-butiloxicarbonil-L-treonina (D2) 
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161 
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Se añadieron DMAP (3,66 g, 30 mmol) y E1 (34,33 g, 100 mmol) a una disolución de D3 (33,72 g, 100 mmol) en DCM a 0ºC. Después de agitar durante 10 min a 0ºC, se añadió DCC (22,7 g, 110 mmol). Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Después, se filtró la mezcla y se concentró el filtrado hasta sequedad. Se captó el residuo con ACN (100 ml), se filtró de nuevo y se concentró el filtrado. Se disolvió el residuo en AcOEt (200 ml) y se repartió sucesivamente entre KHSO_{4} ac. (100 ml, 10%), NaHCO_{3} ac. (100 ml, sat.) y salmuera (100 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de AcOEt-Hex 1:4 a 1:2) proporcionando D2 (65,5 g, 98%) [\alpha]^{22}_{D} -39,56 (c 1,06 CHCl_{3}); F_{R}= 0,55 (AcOEt:Hex 1:1).
Ejemplo 32 O-(Benciloxicarbonil-N,O-dimetil-L-tirosil)-N-terc-butiloxicarbonil-L-treonina (D1)
162
Se añadió Zn en polvo (18,65 g, 288,3 mmol) a una disolución homogénea de D2 (24,49 g, 38,4 mmol) en AcOH ac. (211 ml, 90%) a 0ºC. Se agitó la mezcla resultante a 0ºC durante 3 h hasta la desaparición del material de partida (seguida por TLC). Se filtró la mezcla de reacción sobre Celite y se lavó con AcOEt (200 ml). Se concentró el filtrado a presión reducida y se captó el residuo con Et_{2}O (200 ml) y se filtró. Se repartió sucesivamente el filtrado entre KHSO_{4} ac. (100 ml, 10%) y salmuera (100 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró, dando un aceite que se purificó mediante CL ultrarrápida [Lichroprep RPC18, ACN:H2O 1:1 (800 ml, después 7:3 (600 ml)] proporcionando D1 (15,53 g, 74%) en forma de un sólido blanco. [\alpha]^{24}_{D} -27,6 (c 2,187, DCM); bib. [\alpha]_{D} -20,5 (c 2, DCM). JOC, 62, 2, 1997. F_{R}= 0,58 [ACN/H_{2}O (7:3)].
IR (película, DCM) \nu 3400, 3050, 2900, 1715, 1613, 1514, 1456, 1402, 1368, 1248, 1165, 1061, 1036 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,29 (d, J = 6,5, 3H), 1,45 (s, 9H), 2,74 (s, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,76-3,31 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 4,42-4,52 (m, 1H), 4,66-4,83 (m, 1H), 5,01-5,16 (m, 2H), 5,30-5,53 (m, 2H), 6,72-6,81 (m, 2H), 6,95-7,09 (m, 2H), 7,35 (s a, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 16,44, 16,82, 28,23, 31,71, 31,97, 33,82, 33,68, 55,14, 56,87, 56,75, 60,39, 60,58, 67,51, 67,76, 71,83, 72,47, 80,40, 113,91, 127,59, 128,69, 129,77, 136,42, 156,00, 156,19, 156,71, 158,31, 159,47, 169,78.
m/z (FAB) 567,1 [(M+Na)^{+}, 46], 545,1 [(M+H)^{+}, 7], 445,1 (100); m/z (FABHRMS) 567,233280, C_{28}H_{35}N_{2}O_{9} requiere (M+Na)^{+} 567,231851.
Ejemplo 33 Síntesis de Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hip-Leu-Pro-OBn (SAPL7)
163
Se canuló una disolución de DCM anh. (296 ml) y DMF anh. (148 ml) en atmósfera de Ar a -5ºC a un matraz que contenía HBTU (9,079 g, 23,9 mmol), HOBt (3,490 g, 22,8 mmol), SAPLA1 (15,258 g, 228 mmol) y D1 (12,417 g, 22,8 mmol). Después de 5 min de agitación, se añadió gota a gota DIPEA (15,9 ml, 91,2 mmol) mediante jeringuilla manteniendo la temperatura < -5ºC. Se agitó la mezcla de reacción resultante durante 21 h a -5ºC. Se añadieron MTBE (300 ml) y KHSO_{4} (200 ml, 10%), se filtró la mezcla resultante y se concentró hasta 300 ml. Se añadió MTBE adicional (200 ml), se separaron las fases y se trató la fase orgánica secuencialmente con KHSO_{4} ac. (200 ml, 10%), salmuera (200 ml), NaHSO_{4} ac. (200 ml, sat.) y se aclaró con salmuera (200 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida, proporcionando un aceite amarillo (30 g). Se disolvió el aceite en MTBE y se trató con hex con agitación. Precipitó un sólido y se añadió más hex. Se filtró el sólido proporcionando SAPL7 (18,33 g, 69% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. Este producto es una mezcla de dos diastereómeros. F_{R}= 0,80 y 0,59 (hex:AcOEt 1:2).
IR (película, DCM) \nu 3350, 2961, 2927, 2893, 1744, 1688, 1638, 1514, 1454, 1368, 1304, 1248, 1171, 1067, 1036 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,74-0,92 (m, 18H), 1,05-1,15 (m, 2H), 1,18-1,20 (m, 2H), 1,23 (d, J = 6,8, 3H), 1,25 (d, J = 6,8, 3H), 1,29 (d, J = 6,9, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 1,50-1,66 (m, 3H), 1,89-2,02 (m, 4H), 2,17-2,25 (m, 2H), 2,37-2,42 (m, 1H), 2,81 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 2,95 (s, 3H), 2,84-2,93 (m, 2H), 3,17-3,25 (m, 1H), 3,53-3,59 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,88-3,98 (m, 4H), 4,49 (d, J = 3,1, 1H), 4,51 (d, J = 3,1, 1H), 4,53-4,57 (m, 1H), 4,68-4,72 (m, 1H), 4,96-4,99 (m, 1H), 5,02-5,33 (m, 4H), 5,02 (d, J = 3,2, 1H), 5,23 (d, J = 3,1, 1H), 5,26-5,33 (m, 1H), 5,47 (1d, J = 9,5, 1H), 6,74 (d, J = 7,8, 2H), 6,77 (d, J = 7,7, 2H), 7,08 (d, J = 7,7, 2H), 7,17 (d, J = 7,5, 1H), 7,21 (d, J = 9,5, 1H), 7,23-7,36 (m, 10H), 7,75 (d, J = 7,9, 1H), 7,79 (d, J = 8,2, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,95, 13,27, 15,16, 16,47, 17,33, 18,79, 21,28, 23,65, 24,65, 24,72, 27,09, 28,08, 28,93, 31,20, 31,32, 33,62, 33,98, 38,38, 41,01, 47,12, 49,38, 54,96, 55,17, 57,89, 58,83, 60,01, 60,16, 67,18, 71,05, 71,32, 80,34, 81,24, 113,89, 127,51, 128,59, 129,69, 129,77, 135,52, 136,77, 156,93, 158,27, 169,87, 170,62, 171,15, 171,85, 172,39, 204,88.
m/z(FAB) 1181,2 [(M+Na)^{+}, 20], 1159,2 [(M+H)^{+}, 80], 1059,2 (100). Anal. calc. para C_{62}H_{87}N_{5}O_{16}: C, 64,30; H, 7,52; N, 6,05. Encontrado: C, 64,14; H, 7,66; N, 5,95
Ejemplo 34 Síntesis de Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Aip-Leu-Pro-OBn (SNPL7)
164
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL7, partiendo de SNPLA1 (150 mg, 0,22 mmol) y D1 (122 mg, 0,22 mmol), se obtuvo el compuesto del título en forma de un sólido blanco (130 mg, 51%) después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 2:1 a 1:3) (mezcla de diastereómeros).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,74-1,03 (m, 18H), 1,16-1,37 (m, 10H), 1,45 (s, 9H), 1,68 (m, 3H), 1,99 (m, 4H), 2,22 (m, 2H), 2,48 (m, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,84-3,10 (m, 2H), 3,19 (m, 1H), 3,51-3,69 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,72-4,02 (m, 3H), 4,18 (m, 1H), 4,50-4,73 (m, 4H), 5,00-5,27 (m, 5H), 5,49 (m, 2H), 6,54 (d, J=9,2, 1H), 6,78 (d, J = 6,8, 2H), 7,02 (d, J = 6,8, 2H), 7,18 (m, 1H), 7,23-7,36 (m, 10H), 7,52 (d, J = 6,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{62}H_{88}N_{6}O_{15}: 1156,63. Encontrado 1158,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 35 Síntesis de Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hiv-Leu-Pro-OBn (SHPL7) 
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165 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL7, partiendo de SHPLA1 (1,12 g, 1,94 mmol) y SAPLD1 (544,6 mg, 1,94 mmol), se obtuvo el compuesto del título (1,045 g, 61%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 1:1 a 1:2). F_{R} = 0,46 (hex-AcOEt 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,74-1,02 (m, 18H), 1,20 (m, 5H), 1,40 (m, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,62 (m, 2H), 1,82-2,20 (m, 3H), 2,20 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,90 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,79 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 4,06 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,82 (m, 2H), 4,94 (m, 1H), 4,98 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,28 (m, 3H), 5,56 (d, J=6,2, 1H), 6,84 (d, J=8,3, 2H), 6,98 (d, J=6,5, 1H), 7,07 (d, J=8,3, 2H), 7,34 (m, 10H), 7,52 (d, J=6,2, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,27, 13,77, 13,95, 16,75, 17,46, 18,31, 20,78, 20,96, 23,09, 24,35, 24,53, 26,74, 27,93, 28,63, 30,17, 33,76, 39,06, 40,01, 46,69, 48,17, 54,89, 57,04, 57,68, 58,65, 60,20, 60,60, 66,74, 67,08, 68,31, 70,30, 78,49, 79,90, 113,62, 127,36, 127,70, 128,14, 128,18, 128,31, 129,64, 135,19, 136,31, 155,86, 156,61, 158,09, 169,77, 170,70, 171,06, 171,17, 171,78.
ESI-EM calc. para C_{59}H_{83}N_{5}O_{15}: 1101,59. Encontrado 1102,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 36 Síntesis de Boc-Thr(Z-N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Val-Leu-Pro-Bn (SVPL7) 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL7, partiendo de SVPLA1 (1,44 g, 2,37 mmol) y D1 (1,29 g, 2,37 mmol), se obtuvo el compuesto del título (1,96 g, 75%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt 2:1 a 1:3). F_{R} = 0,56 (AcOEt).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,83-0,95 (m, 15H), 1,0-1,22 (m, 4H), 1,23-1,44 (m, 9H), 1,60-1,65 (m, 1H), 1,87-2,01 (m, 4H), 2,09-2,20 (m, 3H), 2,77 (s a, 8H), 2,84-3,01 (m, 1H), 3,17-3,24 (m, 1H), 3,51-3,60 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,80-3,90 (m, 2H), 4,03-4,15 (m, 1H), 4,25-4,40 (m, 2H), 4,40-4,52 (m, 1H), 4,70-4,80 (m, 2H), 5,00-5,26 (m, 4H), 5,34-5,36 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 6,75 (d, 2H, J = 7,8), 6,96-7,09 (m, 1H),7,04 (d, 2H, J = 8,1), 7,04-7,12 (m, 1H), 7,16-7,20 (m, 1H), 7,18-7,30 (m, 10H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,43, 13,63, 17,17, 18,35, 19,21, 21,40, 23,23, 24,49, 24,67, 26,87, 28,10, 28,79, 30,48, 32,11, 33,84, 38,47, 40,37, 41,22, 46,80, 48,61, 55,04, 56,88, 57,95, 58,75, 59,25, 60,82, 66,87, 67,33, 69,40, 70,50, 76,44, 80,45, 113,58, 127,51, 127,74, 127,88, 128,10, 128,25, 128,33, 128,46, 128,72, 129,64, 129,77, 135,35, 136,37, 156,77, 158,29, 169,83, 170,57, 171,3, 171,4, 172,81.
ESI-EM calc. para C_{59}H_{84}N_{6}O_{14}: 1100.60. Encontrado (m/z): 1101,7 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 37 Síntesis de Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hip-Leu-Pro-OH (SAPL6)
167
Se añadió Pd(OH)_{2}-C (20% de Pd, 7,33 g, 40% p/p) a una disolución de SAPL7 (18,33 g, 15,8 mmol) en THF (exenta de estabilizante, 500 ml) desgasificada y purgada con argón. Se agitó la mezcla en atmósfera de H_{2} (101,3 kPa) durante 20 h, después se filtró a través de un filtro de teflón de 0,45 \mum a presión reducida, dando un sólido blanco. Se añadió tolueno (30 ml) y se concentró de nuevo a presión reducida y alto vacío, dando SAPL6 (14,78 g, cuant.) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,79-1,08 (m, 18H), 1,09-1,18 (m, 3H), 1,26 (s a, 3H), 1,29 (d, J = 7,1, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,50-1,66 (m, 3H), 1,84-1,94 (m, 1H), 1,90-2,28 (m, 4H), 2,35-2,50 (m, 4H), 2,30-2,35 (m, 1H), 2,44-3,18 (m, 4H), 2,60 (m, 3H), 3,53-3,61 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,88-4,07 (m, 4H), 4,12-4,72 (m, 4H), 5,18-5,24 (m, 1H), 5,24 (s a, 1H), 6,84 (d, J = 7,9, 2H), 7,08 (d, J = 8,0, 2H), 7,13 (d, J = 8,2, 1H), 7,18 (d, J = 8,2, 1H), 7,62-7,68 (s a, 1H).
m/z (FAB) 972,7 [(M+K)+, 33], 934,9 (M)+, 100].
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Ejemplo 38 Síntesis de Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Aip-Leu-Pro-OH (SNPL6) 
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168 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió Pd(OH)_{2}-C (20% de Pd, 45 mg, 35% p/p) a una disolución de SNPL7 (130 mg, 0,11 mmol) en una mezcla de IPA:H_{2}O (2:1; 4 ml:2 ml) desgasificada y purgada con argón. Se agitó la mezcla en atmósfera de H_{2} (101,3 kPa) durante 20 h, después se filtró a través de un filtro de teflón de 0,45 \mum y se concentró a presión reducida, dando un sólido blanco. Se añadió IPA (10 ml) y se concentró de nuevo a presión reducida y alto vacío, dando SNPL6 (100 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
ESI-EM calc. para C_{47}H_{76}N_{6}O_{13}: 932,55. Encontrado 934,0 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 39 Síntesis de Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Hiv-Leu-Pro-OH (SHPL6) 
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169 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL6, partiendo de SHPL7 (1,045 g, 0,95 mmol), se obtuvo el compuesto del título (825 g, 99%) en forma de un sólido blanco.
ESI-EM calc. para C_{44}H_{71}N_{5}O_{13}: 877,50. Encontrado 878,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 40 Síntesis de Boc-Thr(N(Me)-O(Me)-Tyr)-Ist-Val-Leu-Pro-OH (SVPL6)
170
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL6, partiendo de SVPL7 (250 mg, 0,23 mmol), se obtuvo el compuesto del título (195 mg, 97%) en forma de un sólido blanco.
ESI-EM calc. para C_{44}H_{72}N_{6}O_{12}: 876,56. Encontrado (m/z): 877,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 41 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Hip-Leu-Pro (SNPL5)
171
Se añadieron HATU (14,436 g, 37,9 mmol) y HOAt (5,254 g, 38,6 mmol) en atmósfera de Ar con agitación a un reactor enfriado (-5ºC) de 5 l equipado con agitador mecánico que contenía ACN (3,2 l). Se añadió SAPL6 (14,77 g, 15,8 mmol) disuelto en ACN (500 ml). Se añadió gota a gota NMM (3,65 ml, 33,18 mmol) mediante jeringuilla manteniendo la temperatura por debajo de 5ºC. Se dejó alcanzar la temperatura ambiente la mezcla de reacción y se agitó durante 20 h. Se evaporó el disolvente a presión reducida. Se captó el producto bruto con AcOEt (500 ml) y se filtró la disolución para retirar el precipitado. Se lavó la disolución sucesivamente con KHSO_{4} ac. (2x500 ml), salmuera (500 ml), NaHCO_{3} ac. (500 ml, sat.) y se aclaró con salmuera (500 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida, proporcionando un sólido amarillo (17,52 g) que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex:AcOEt 3:1 a 1:1) dando SAPL5 (9,83 g, 68%) en forma de un sólido blanco. F_{R}= 0,60 (Hex:AcOEt 1:3). [\alpha]_{D} -209,4 (c 0,3, CHCl_{3}).
IR (película, DCM) \nu 3343, 2961, 2927, 2893, 1734, 1640, 1514, 1454, 1368, 1302, 1248, 1167, 1018 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,78 (d, J = 7,1, 3H), 0,85 (d, J = 7,0, 3H), 0,87 (d, J = 7,0, 3H), 0,89-0,93 (m, 9H), 1,10-1,20 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,4, 3H), 1,30 (d, J = 6,9, 3H), 1,36 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,48-1,72 (m, 2H), 1,72-1,78 (m, 1H), 1,83-1,88 (m, 1H), 2,01-2,17 (m, 3H), 2,27-2,29 (m, 1H), 2,47-2,53 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,93 (s a, 1H), 3,14-3,19 (m, 2H), 3,34-3,37 (dd, J_{1} = 14,8, J_{2} = 4,1, 1H), 3,54-3,56 (dd, J_{1} = 10,5, J_{2} = 4,1, 1H), 3,58-3,63 (m, 1H), 3,68-3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,94-3,98 (m, 1H), 3,98 (c, J = 7,5, 1H), 4,07-4,11 (3d, J = 3,8, 1H), 4,57-4,61 (m, 2H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,97-4,98 (c, J = 3,5, 1H), 5,02 (d, J = 10,5, 1H), 5,18 (d, J = 4,2, 1H), 6,81 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,19 (d, J = 10,2, 1H), 7,64 (d, J = 10,1, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,56, 14,68, 14,97, 15,27, 16,61, 18,45, 20,64, 23,50, 24,71, 24,78, 26,92, 27,73, 27,94, 31,55, 33,94, 33,94, 38,27, 38,52, 40,64, 46,86, 49,54, 49,65, 55,16, 55,19, 55,84, 57,12, 65,96, 67,30, 71,00, 80,27, 81,41, 114,02, 130,22, 158,53, 168,30, 169,31, 170,12, 170,29, 171,20, 172,38, 204,51.
m/z (FAB) 938,9 [(M+Na)^{+}, 55], 916,9 [(M+H)^{+}, 100]; m/z (FABHRMS) 916,532120, C_{47}H_{73}N_{5}O_{13}, requiere (M+H)^{+}= 916,528300.
Ejemplo 42 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Aip-Leu-Pro (SNPL5) 
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172 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL5, partiendo de SNPL6 (100 mg, 0,11 mmol), se obtuvo el compuesto del título (40 mg, 57%) en forma de un sólido blanco después de CL ultrarrápida (gel de sílice, AcOEt:hex 4:1 a AcOEt puro). F_{R}=0,4 (AcOEt).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,76 (d, J = 6,8, 3H), 0,83-0,96 (m, 15H), 1,10-1,20 (m, 1H), 1,25 (d, J = 6,4, 3H), 1,27 (d, J = 6,3, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 1,41 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,50-1,70 (m, 2H), 1,99-2,31 (m, 5H), 2,61 (s, 3H), 2,91-3,04 (m, 1H), 3,11-3,37 (m, 2H), 3,48-3,64 (m, 3H), 3,69-3,81 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,46-4,67 (m, 3H), 4,81 (t, J=10,7, 1H), 5,01 (m, 1H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,33 (d, J = 8,7, 1H), 7,65 (d, J = 9,2, 1H), 7,86 (d, J = 10,7, 1H).
ESI-EM calc. para C_{47}H_{74}N_{6}O_{12} 914,54. Encontrado m/z 915,5 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 43 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Hiv-Leu-Pro (SHPL5)
173 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL5, partiendo de SHPL6 (2,45 g, 2,78 mmol), se obtuvo el compuesto del título (2,1 g, 88%) en forma de un sólido blanco después de cristalización en DCM/n-heptano (1:3). F_{R} = 0,33 (hex-AcOEt 1:3).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,04 (m, 18H), 1,19 (m, 5H), 1,41 (s, 9H), 1,42 (m, 2H), 1,63 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 2,00-2,22 (m, 3H), 2,44 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 3,36 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,96 (m, 1H), 4,12 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,94 (m, 1H), 5,03 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,54 (d, J = 7,3, 1H), 7,69 (d, J = 6,4, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,38, 14,57, 15,15, 18,11, 18,45, 20,67, 23,40, 24,70, 26,91, 27,89, 30,20, 33,57, 33,90, 38,51, 39,07, 46,62, 48,13, 55,16, 56,05, 56,23, 56,94, 65,67, 68,60, 71,13, 79,41, 80,01, 113,97, 129,69, 130,25, 155,75, 158,49, 168,51, 169,57, 170,24, 170,94, 171,06, 173,59.
ESI-EM: calc. para C_{44}H_{69}N_{5}O_{12} 859,49. Encontrado m/z 860,4 (M+H)^{+}.
Ejemplo 44 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Boc-Thr)-Ist-Val-Leu-Pro (SVPL5) 
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174 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL5, partiendo de SVPL6 (90 mg, 0,1 mmol), se obtuvieron 30 mg (35%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (sílice, gradiente de hex-AcOEt de 1:4 a 1:10). F_{R} = 0,35 (AcOEt).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,85-1,00 (m, 18H), 1,14-1,38 (m, 8H), 1,44 (s, 9H), 1,57 (m, 2H), 1,76-1,95 (m, 2H), 2,01-2,21 (m, 2H), 2,33 (dd, J_{1}= 7,3, J_{2}= 14,7, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 3,17 (dd, J_{1} =10,7, J_{2}= 14,7, 1H), 3,35 (dd, J_{1} =4,4, J_{2}= 14,2, 1H), 3,56 (dd, J_{1}= 3,9, J_{2}= 10,3, 1H), 3,59-3,77 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 4,06 (dt, J_{1}= 3,9, J_{2}= 9,3, 1H), 4,33 (dd, J_{1}= 2,9, J_{2}= 9,3, 1H), 4,38 (dd, J_{1}= 6,8, J_{2}= 10,3, 1H), 4,58 (dd, J_{1}= 5,4, J_{2}= 7,3, 1H), 4,79 (t, J= 10,3, 1H), 4,98 (d, J= 9,3, 1H), 5,03 (dd, J_{1}= 2,4, J_{2}= 6,3, 1H), 6,81 (s a, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,08 (d, J= 8,3, 2H), 7,24 (d, J= 9,8, 1H), 7,54 (d, J= 9,8, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,48, 14,50, 15,20, 18,86, 19,44, 21,03, 23,64, 24,83, 24,96, 26,97, 28,01, 28,135, 30,21, 33,53, 33,96, 38,56, 38,61, 41,05, 41,66, 46,84, 48,53, 55,24, 55,51, 56,31, 57,14, 59,75, 65,85, 70,60, 80,52, 114,11, 129,75, 130,33, 156,77, 158,67, 168,53, 170,21, 170,29, 170,73, 171,02, 174,34.
ESI-EM calc. para C_{44}H_{70}N_{6}O_{11}: 858,51. Encontrado (m/z): 859,5 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 45 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Hip-Leu-Pro (SAPL4) 
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175 
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Se añadió una disolución de ácido clorhídrico en dioxano anh. (5,3 N, 122 ml, 647 mmol) a un matraz que contenía SAPL5 (8,79 g, 9,6 mmol) en dioxano anh. (93 ml). Se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 8 h o hasta la desaparición completa del material de partida. Cuando se completó la reacción, se concentró la disolución a presión reducida. Se diluyó el residuo con CHCl_{3} (100 ml) y se concentró de nuevo. Se coevaporó la espuma blanca bruta con CHCl_{3}/hex dando SAPL4 (8,17 g, 100% de rendimiento) en forma de un sólido blanco.
m/z (FAB) 838,3 [(M+Na)^{+}, 28], 816,3 [(M+H)^{+}, 100].
Ejemplo 46 Síntesis de ciclo-N(Mel-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Aip-Leu-Pro (SNPL4)
176
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL4, partiendo de SNPL5 (40 mg, 43 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (36 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco después de precipitación con Et_{2}O.
ESI-EM: calc. para C_{42}H_{65}N_{5}O_{11} 815,47. Encontrado m/z 815,5 (M)+.
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Ejemplo 47 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Hiv-Leu-Pro (SHPL4)
177
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL4, partiendo de SHPL5 (500 mg, 0,58 mmol), se obtuvo el compuesto del título (440 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco después de precipitación con Et_{2}O.
ESI-EM: calc. para C_{39}H_{61}N_{5}O_{10} 759,44. Encontrado m/z 760,4 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 48 Síntesis de ciclo-N(Me)-O(Me)-Tyr-O-(Thr)-Ist-Val-Leu-Pro (SVPL4) 
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178
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL4, partiendo de SVPL5 (25 mg, 29 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (22 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco después de coevaporación con MTBE.
ESI-EM calc. para C_{39}H_{62}N_{6}O_{9}: 758,5. Encontrado (m/z): 759,5 [(M+H)]^{+}.
Ejemplo 49 Z-N-Metil-D-leucina (H1)
Ref: Coggins, J. R.; Benoiton, N. L. Can. J. Chem 1971, 49, 1968.
179
Se añadió gota a gota con jeringuilla yodometano (8,55 ml, 136,1 mmol) en THF anhidro (120 ml) a 0ºC en atmósfera de Ar a una disolución agitada de Z-D-Leu-OH (10,32 g, 38,9 mmol) en THF anh. (120 ml) a 0ºC. Después, se añadió hidruro de sodio (4,80 g, 120,6 mmol, dispersión al 60% en aceite mineral) en porciones manteniendo la temperatura a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 24 h. Se eliminó el disolvente a presión reducida, se disolvió el residuo en AcOEt (120 ml) y se extrajo con NaHCO_{3} ac. (300 ml, sat). Se lavó la fase acuosa con AcOEt (2x100 ml). Se enfrió la fase acuosa, se añadió ácido cítrico sólido hasta pH 1-2 y se extrajo la disolución con AcOEt (4x250 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. Se cristalizó el producto en AcOEt-heptano (1:3), obteniéndose H1 (7,84 g, 72%) en forma de un sólido blanco cristalino. P.f.: 71-72ºC. [\alpha]^{25}_{D} +23 (c 1, EtOH).
Ejemplo 50 Síntesis de Z-didemnina A (SAPL3)
180
Se añadieron DCM anh. (100 ml) y DMF anh. (50 ml) en atmósfera de Ar a un matraz que contenía HATU (8,76 g, 23,0 mmol), HOAt (3,17 g, 23,1 mmol) SAPL4 (7,09 g, 15,8 mmol) y H1 (3,486 g, 12,5 mmol), y se agitó la disolución a -5ºC (baño de hielo). Se añadió gota a gota con jeringuilla NMM (2,3 ml, 21,0 mmol) manteniendo la temperatura a -5ºC. Se agitó la mezcla de reacción resultante a -5ºC durante 2 h, después se dejó alcanzar la temperatura ambiente durante 14 h adicionales. Se evaporó el disolvente a presión reducida. Se captó el sólido con AcOEt (100 ml) y se filtró la disolución para retirar cierto precipitado. Se lavó la disolución sucesivamente con KHSO_{4} ac. (2x100 ml, 10%), salmuera (100 ml), NaHCO_{3} ac. (100 ml, sat.) y se aclaró con salmuera (100 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida, proporcionando un sólido amarillo que se purificó mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex:AcOEt 2:1 a 1:1) dando SAPL3 (7,98 g, 89% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. F_{R}=0,18 (hex/AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,79-1,00 (m, 24H), 1,10-2,25 (m, 10H), 1,18 (d, J = 6,3, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,49 (dd, J_{1}=10,7, J_{2}=17,0, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,02-3,24 (m, 2H), 3,31-3,40 (dd, J_{1}=3,9, J_{2}=14,1, 1H), 3,53-3,64 (m, 2H), 3,65-3,75 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,92-4,20 (m, 3H), 4,58 (t, J=4,8, 1H), 4,75-4,85 (m, 3H), 5,00 (m, 1H), 5,12-5,26 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 6,86 (s a, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,21-7,44 (m, 6H), 7,92 (d, J = 8,3, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,57, 14,05, 15,18, 16,73, 18,52, 20,83, 22,62, 22,96, 23,66, 24,55, 24,81, 25,03, 25,28, 26,90, 27,86, 28,95, 31,28, 31,81, 33,91, 34,02, 38,51, 38,61, 47,03, 49,61, 55,21, 55,38, 55,50, 57,28, 66,10, 67,65, 67,93, 70,47, 81,44, 114,09, 127,83, 128,46, 129,74, 130,29, 158,60, 168,36, 169,59, 170,28, 171,20, 172,22, 204,80.
ESI-EM calc. para C_{57}H_{84}N_{6}O_{14} 1076,60. Encontrado m/z 1077,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 51 Síntesis de [Aip]3-Z-didemnina A (SNPL3)
181
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SNPL4 (35 mg, 41 \mumol) y H1 (17 mg, 61 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (36 mg, 81%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt de 1:4 a AcOEt puro). F_{R}= 0,30 (AcOEt).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,74 (d, J = 6,3, 3H), 0,80-1,00 (m, 21H), 1,10-2,25 (m, 10H), 1,21 (d, J = 5,8, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J = 6,3, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,12-3,25 (dd, J_{1}=11,2, J_{2}=14,1, 1H), 3,27-3,36 (dd, J_{1}=4,3, J_{2}=14,1, 1H), 3,52-3,63 (m, 3H), 3,69-3,81 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 4,09 (m, 3H), 4,47-4,63 (m, 3H), 4,76-4,92 (m, 2H), 5,00 (m, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 6,85 (d, J = 8,3, 2H), 6,97 (d, J=6,97, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H),7,35 (s a, 5H), 7,48 (d, J = 8,3, 1H), 7,67 (d, J = 8,3, 1H), 7,87 (d, J = 10,2, 1H).
ESI-EM calc. para C_{57}H_{85}N_{7}O_{13}: 1075,62. Encontrado m/z: 1076,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 52 Síntesis de [Hiv]^{3}-Z-didemnina A (SNPL3)
182
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SHPL4 (116 mg, 0,15 mmol) y H1 (63 mg, 0,23 mmol), se obtuvo el compuesto del título (86 mg, 52%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt de 1:1 a 1:2). F_{R} = 0,27 (hex-AcOEt 1:2).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,80-1,08 (m, 24H), 1,18 (m, 3H), 1,21 (m, 4H), 1,58 (m, 2H), 1,74 (m, 1H), 1,80-2,42 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 2,88 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,32 (m, 1H) 3,60 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,84 (m, 1H), 4,92 (d, J =3,8, 1H), 5,00 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 6,65 (d, J=6,3, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J =8,3, 2H), 7,34 (m, 5H), 7,50 (d, J=6,7, 1H), 7,75 (d, J = 7,2, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,58, 14,21, 15,39, 17,64, 18,63, 20,74, 21,88, 22,84, 23,48, 24,22, 24,75, 27,05, 27,84, 29,34, 29,99, 33,42, 33,86, 35,81, 38,52, 39,37, 46,63, 48,14, 55,13, 55,47, 55,53, 55,87, 56,92, 65,68, 67,72, 68,60, 70,61, 79,09, 113,95, 127,71, 127,86, 128,35, 129,63, 130,22, 158,48, 168,46, 169,36, 169,84, 170,29, 170,93, 171,00, 173,73.
ESI-EM: calc. para C_{54}H_{80}N_{6}O_{13} 1020,58. Encontrado m/z 1021,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 53 Síntesis de [Val]^{3}-Z-didemnina A (SVPL3)
183
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SVPL4 (20 mg, 25 \mumol) y SAPLH1 (11 mg, 37,5 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (19 mg, 72%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex-AcOEt de 1:1 a 1:5). F_{R} = 0,44 (AcOEt).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,85-1,06 (m, 21H), 1,10-1,4 (m, 5H), 1,16 (d, J = 6,6, 3H), 1,50-1,63 (m, 6H), 1,72-1,87 (m, 2H), 1,88-2,40 (m, 6H), 2,58 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,17 (dd, J_{1}= 10,5, J_{2}=14,2, 1H), 3,36 (dd, J_{1} = 3,9, J_{2}=14,2, 1H), 3,43 (s a, 1H), 3,51-3,72 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,98-4,16 (m, 1H), 4,40-4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, J_{1} = 5,7, J_{2}=7,8, 1H), 4,67-4,85 (m, 2H), 4,80-5,09 (m, 1H), 5,16 (d, J=12,4, 1H), 5,24 (d, J=12,4, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 6,90-6,94 (s a, 1H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,28-7,50 (m, 6H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,99, 14,37, 15,70, 18,55, 19,82, 21,40, 21,99, 22,81, 23,17, 23,98, 24,62, 25,00, 25,24, 27,28, 28,26, 29,93, 30,23, 33,58, 34,10, 36,16, 38,78, 41,98, 47,10, 48,79, 54,73, 55,45, 56,62, 57,40, 59,51, 66,02, 68,18, 70,37, 71,03, 114,30, 128,00, 128,27, 128,72, 129,86, 130,56, 136,49, 158,28, 158,85, 168,75, 169,27, 170,40, 170,75, 171,04, 173,91, 175,03.
ESI-EM calc. para C_{54}H_{81}N_{7}O_{12}: 1019,59. Encontrado (m/z): 1020,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 54 Síntesis de didemnina A (SAPL2)
184
Se añadió Pd(OH)_{2}-C (al 20%, 3,29 g, 50% p/p) a una disolución de SAPL3 (6,59 g, 6,1 mmol) en THF (exenta de estabilizador, 262 ml) desgasificada y purgada con argón. Se agitó la mezcla en atmósfera de H_{2} (101,3 kPa) durante 20 h, después se filtró a través de un filtro de teflón de 0,45 \mum y se concentró a presión reducida, dando un sólido blanco. Se añadió CHCl_{3} (2x25 ml) y se concentró la mezcla de nuevo a presión reducida, dando SAPL2 (5,51 g, 96%) en forma de un sólido blanco. F_{R}= 0,22 (CHCl_{3}:BuOH 90:10).
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-0,92 (m, 24H), 1,11-1,19 (m, 1H), 1,22 (d, J = 6,9, 3H), 1,32 (d, J = 6,8, 3H), 1,30-1,35 (m, 1H), 1,35-1,63 (m, 6H), 1,71-1,81 (m, 2H), 1,93-2,07 (m, 1H), 2,07-2,18 (m, 2H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,49-2,52 (dd, J_{1} = 11, J_{2} = 10,5, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,72 (s a, 3H), 2,79 (s a, 3H), 2,86-2,94 (s a, 1H), 2,72-2,79 (d a, J =10,5, 1H), 3,15-3,18 (dd, J_{1} = 14,5, J_{2} = 10,5, 1H), 3,33-3,36 (dd, J_{1} = 14,5, J_{2} = 4,5, 1H), 3,54-3,57 (dd, J_{1} = 10,5, J_{2}= 4,5, 1H), 3,56-3,61 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,96-4,00 (m, 1H), 4,03-4,08 (m, 1H), 4,11-4,80 (s a, 1H), 4,56-4,62 (m, 1H), 4,68-4,81 (m, 3H), 4,99-5,01 (c, J = 3,5, 1H), 5,16 (s a, 1H), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 6,95 (s a, 1H), 7,07 (d, J = 8,5, 2H), 7,21-7,25 (s a, 1H), 7,95 (s a, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,55, 14,95, 15,26, 16,82, 18,56, 20,89, 22,00, 23,08, 23,76, 24,58, 24,85, 25,10, 27,12, 29,35, 29,35, 29,65, 29,69, 31,36, 33,96, 34,14, 38,51, 38,64, 40,14, 55,38, 55,56, 57,31, 66,17, 67,85, 70,58, 80,96, 80,98, 81,57, 114,12, 130,33, 158,63, 168,41, 169,33, 169,70, 170,38, 171,24, 172,28, 172,28, 172,93, 204,83.
m/z (FAB) 944,2 [(M + H)+, 100].
Ejemplo 55 Síntesis de [Aip]3-didemnina A (SNPL2)
185
Se añadió Pd(OH)_{2}-C (al 20%, 20 mg, 60% p/p) a una disolución de SNPL3 (33 mg, 35 \mumol) en una mezcla de IPA/H_{2}O (2 ml:1 ml) desgasificada y purgada con argón. Se agitó la mezcla en atmósfera de H_{2} (101,3 kPa) durante 20 h, después se filtró a través de un filtro de teflón de 0,45 \mum y se concentró a presión reducida dando un sólido blanco. Se añadió IPA (2x5 ml), y se concentró la disolución de nuevo a presión reducida, dando SNPL2 (32 mg, 97%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,78 (d, J=6,8, 3H), 0,82-0,92 (m, 21H), 1,11-2,58 (m, 21H), 2,41 (s, 3H), 2,62 (s, 3H), 2,75-3,00 (m, 4H), 3,15-3,18 (dd, J_{1} = 10,7, J_{2} = 14,7, 1H), 3,33-3,36 (dd, J_{1} = 14,5, J_{2}= 4,2, 1H), 3,51-3,78 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,92 (m, 1H), 4,01-4,20 (m, 2H), 4,50 (t, J=4,8, 1H), 4,59 (t, J=6,3, 1H), 4,75-4,91 (m, 2H), 5,05 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,70 (d, J=5,8, 1H), 7,78 (d, J=9,7, 1H), 7,89 (d, J=6,3, 1H), 8,14 (d, J=7,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{49}H_{79}N_{7}O_{11} 941,58. Encontrado m/z 942,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 56 Síntesis de [HiV]^{3}-didemnina A (SHPL2)
186
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL2, partiendo de SHPL3 (86 mg, 0,08 mmol), se obtuvo el compuesto del título (73 mg, 97%) en forma de un sólido blanco. F_{R} = 0,36 (CHCl_{3}/MeOH 95:5).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,02 (m, 24H), 1,12-2,42 (m, 16H), 2,54 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,52-3,90 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 4,04 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,91 (d, J=5,3, 1H), 5,22 (m, 1H), 6,84 (d, J=8,3, 2H), 7,07 (d, J=8,3, 2H), 7,54 (d, J=9,2, 1H), 7,60 (d, J=9,4, 1H), 8,68 (d, J=6,2, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,78, 14,07, 16,13, 17,90, 18,56, 20,98, 21,74, 22,94, 23,60, 24,44, 24,78, 25,06, 27,17, 27,92, 30,09, 33,34, 33,89, 38,71, 40,30, 46,86, 48,22, 54,99, 55,23, 56,97, 57,21, 65,81, 68,53, 70,37, 79,47, 114,03, 129,76, 130,29, 158,57, 168,18, 169,40, 169,86, 170,20, 170,92, 174,16.
ESI-EM calc. para C_{46}H_{74}N_{6}O_{11} 886,54. Encontrado m/z 887,2 (M+H)^{+}.
Ejemplo 57 Síntesis de [Val]^{3}-didemnina A (SVPL2)
187
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL2, partiendo de SVPL3 (19 mg, 18 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (16 mg, 97%) en forma de un sólido blanco. F_{R} = 0,36 (CHCl_{3}/MeOH 95:5).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta -0,82-1,02 (m, 21H), 1,85-1,32 (m, 9H), 1,42-1,83 (m, 7H), 1,87-2,23 (m, 8H), 2,34 (s a, 3H), 2,60 (s a, 1H), 2,85 (dd, J_{1} = 5,7, J_{2}=7,8, 1H), 3,16 (dd, J_{1} =10,8, J_{2}=14,2, 1H), 3,37 (dd, J_{1} = 4,2, J_{2} = 14,2, 1H), 3,48 (s a, 1H), 3,57-3,68 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,95-4,15 (m, 2H), 4,45-4,52 (m, 2H), 4,61 (dd, J_{1} = 4,8, J_{2}=7,8, 1H), 4,77 (t, J = 9,9, 1H), 5,02-5,15 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 1H), 7,09 (d, J = 8,4, 1H), 7,59-7,62 (m, 2H), 7,78-7,81 (m, 2H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,98, 14,46, 16,14, 18,50, 19,83, 21,50, 22,55, 22,81, 22,95, 23,46, 23,98, 27,33, 28,27, 28,33, 29,94, 33,71, 34,16, 38,94, 41,93, 42,11, 45,72, 47,18, 48,94, 53,64, 55,03, 55,50, 56,72, 57,55, 59,22, 59,56, 66,16, 70,71, 114,36, 118,53, 120,85, 130,02, 130,58, 168,71, 169,74, 170,23, 171,18, 175,10.
ESI-EM calc. para C_{46}H_{75}N_{7}O_{10}: 885,56. Encontrado (m/z): 856,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 58 Síntesis de Pyr-Pro-OBn (F2)
188
Se añadió gota a gota con jeringuilla NMM (4,55 ml, 43,8 mmol) a una disolución de H-Pro-OBn-HCl (10,0 g, 41,3 mmol) en DMF anh. (50 ml) a 0ºC en atmósfera de Ar, manteniendo la temperatura a 0ºC. Se añadió después HOBt (18,98 g, 124 mmol) en porciones. Después de 15 min, se añadió gota a gota con jeringuilla ácido pirúvico (8,61 g, 97,79 mmol) disuelto en DCM anh. (10 ml), manteniendo la temperatura por debajo de 3ºC. Finalmente, se añadió gota a gota DCC (22,17 g, 107,46 mmol) disuelto en DCM (80 ml) con un embudo de presión compensada. Se dejó alcanzar la muestra la temperatura ambiente (2 h) y se agitó durante otras 12 h. Se filtró la mezcla de reacción para retirar el precipitado y se concentró la disolución a presión reducida. Se disolvió el residuo en AcOEt (500 ml) y se lavó sucesivamente con KHSO_{4} ac. (100 ml, al 10%), NaHCO_{3} ac. (400 ml, sat.), salmuera (400 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se filtró. Se eliminó el disolvente a presión reducida y se captó el residuo con ACN (100 ml), se enfrió a -30ºC durante 2 h y se filtró para retirar el exceso de N,N-diciclohexilurea. Se purificó el aceite marrón resultante (15,82 g) mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex a hex:AcOEt 2:1), proporcionando F2 (9,06 g, 66% de rendimiento) en forma de un sólido blanco. F_{R}= 0,25 (hex:AcOEt 2:1).
IR (película, DCM) v 3035, 2956, 2884, 1744, 1717, 1645, 1499, 1443, 1383, 1352, 1273, 1175, 1092 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,75-2,40 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 3,45-3,82 (m, 2H), 4,52-4,61 (m, 1H), 4,88-4,97 (m, 1H), 5,14-5,15 (m, 2H), 5,17-5,20 (m, 2H), 7,34 (s a, 5H).
RMN-^{13}C (50 MHz, CDCl_{3}) \delta 22,11, 25,22, 26,5, 27,10, 28,53, 31,48, 47,53, 44,81, 59,76, 67,02, 67,31, 128,11, 128,64, 135,24, 170,1, 170,2, 198,0.
m/z (CI) 293 [(M+NH_{4})^{+}, 100]. Anal. calc. para C_{15}H_{17}NO_{4}: C, 65,44; H, 6,22; N, 5,08. Encontrado: C, 65,04; H, 6,01; N, 5,11.
Ejemplo 59 Síntesis de Pyr-Pro-OH (F1)
189
Se dispuso en un reactor Parr a alta presión una disolución de F2 (8,63 g, 31,34 mmol) y paladio sobre carbón activo (al 10%, 86 mg, 10% p/p) en MeOH desgasificado (125 ml) y se purgó con gas nitrógeno (2x206,8 kPa). Se selló la mezcla de reacción en atmósfera de hidrógeno (206,8 kPa) y se agitó a 23ºC durante 4,5 h. Se filtró la mezcla a través de un filtro de teflón de 0,45 \mum y se concentró a presión reducida. Se recubrió el residuo (6,29 g) sobre SiO_{2}, se cargó en la parte superior de una columna (CL 5,5 x10,0 cm) y se eluyó con hex:AcOEt 1:2, proporcionando F1 (4,64 g, 80%) en forma de un sólido blanco. F_{R} = 0,22 (hex:AcOEt 1:1). [a]_{D}^{20} -92,4 (c 0,12, CHCl_{3}). P.f. 67-69ºC.
IR (película, DCM) v 3450-3000, 2961-2870, 1719, 1643, 1615, 1452, 1354, 1205, 1175, 1094, 1018 cm^{-1}.
RMN-^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,85-2,45 (m, 4H), 2,43 y 2,47 (s, 3H), 3,42-3,85 (m, 2H), 4,52-4,61 (m, 1H), 4,88-4,97 (m, 1H), 7,21-7,40 (s a, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 22,03, 25,23, 26,48, 27,00, 28,23, 31,44, 47,57, 48,37, 59,61, 59,39, 162,47, 162,52, 175,04, 176,29, 197,18.
m/z (CI) 220 [(M+N_{2}H_{7})^{+}, 15], 203 [(M+NH_{4})^{+}, 100], 186 [(M+H)^{+}, 16]. Anal. calc. para C_{8}H_{m}NO_{4}: C, 51,88; H, 5,99; N, 7,56. Encontrado: C, 52,13; H, 5,85; N, 7,65.
Ejemplo 60 Síntesis de aplidina (SAPL1)
190
Se añadió una disolución de DIPCDI (1,806 mg, 14,3 mmol) en DCM (10 ml) a una disolución fría (3ºC) de F1 (4,908 g, 26,5 mmol) en DCM anh. (40 ml) en atmósfera de nitrógeno, y se agitó la disolución a 3ºC durante 60 min. Después, se transfirió una disolución de SAPL2 (5,0 g, 5,3 mmol) en DCM (50 ml) vía cánula a la disolución anterior bajo presión de nitrógeno. Después de 90 h (4 días) a esta temperatura, se añadió HCl ac. (50 ml, 0,1 N) y se agitó la mezcla de reacción durante 15 min. Después, se decantó la fase orgánica y se repartió entre KHSO_{4} ac. (50 ml, 5%), NaHCO_{3} ac. (50 ml, 5%) y salmuera (25 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el sólido amarillo pálido resultante mediante CL ultrarrápida (Lichroprep RP-18, 40-63 mm, gradiente de MeOH:H_{2}O:TFA de 70:30:0.1 a 90:10:0.1), proporcionando SAPL1 (5,4 g, 93%) (mezcla de rotámeros). F_{R}=0,40 y 0,28 (DCM:AcOEt, 2:3), 0,52 y 0,45 (CHCl_{3}-MeOH, 9,5:0,5); [\alpha]_{D} -95,9 (c 1,8, CHCl_{3}).
RMN-^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,84-0,93 (m, 24H), 1,16-1,70 (m, 9H), 1,72-1,81 (m, 1H), 1,81-1,90 (m, 1H), 1,90-2,24 (m, 6H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,49 (s, 3H) 2,51 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,52-2,64 (m, 1H), 2,85 (s a, 1H), 2,94 (s a, 1H), 3,09 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 3,15-3,18 (m, 1H), 3,21-3,26 (dd, J_{1} = 15,8, J_{2}=6,1, 1H), 3,32-3,36 (dd, J_{1} = 14,5, J_{2} = 4,1, 1H), 3,54-3,60 (m, 1H), 3,66-3,72 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,80-3,87 (m, 1H), 3,96-3,99 (m, 1H), 4,03-4,11 (m, 2H), 4,15-4,23 (2c, J = 7,5, 1H), 4,55-4,57 (2d, J_{1} = 5,5, J_{2} =2,2, 1H), 4,59-4,62 (t, 1H), 4,56-4,64 (dd, J_{1} = 6,5, J_{2} = 2,5, 1H), 4,68-4,71 (t, 1H), 4,76-4,81 (t, 1H), 5,10-5,18 (m, 1H), 5,17 (d, J = 3,5, 1H), 5,18 (d, J = 3,5, 1H), 5,27-5,31 (m, 2H), 6,82 (d, J = 8,5, 2H), 6,83 (d, J = 8,5, 2H), 7,05 (d, J = 8,5, 2H), 7,06 (d, J = 8,5, 2H), 7,02 (d, J = 7,1, 1H), 7,16 (d, J = 9,5, 1H), 7,17 (d, J = 9,5, 1H), 7,59 (d, J = 5,5, 1H), 7,77 (d, J = 9,5, 1H), 7,83 (d, J = 9,4, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,63, 11,68, 14,11, 14,70, 15,26, 15,30, 16,00, 16,20, 16,88, 16,93, 18,62, 18,85, 20,89, 20,94, 21,62, 21,36, 23,44, 23,57, 23,84, 23,93, 24,66, 24,77, 24,85, 25,02, 26,22, 26,34, 27,09, 27,6, 27,06, 27,30, 27,95, 27,99, 29,33, 29,69, 31,31-31,37, 33,97, 34,06, 36,02, 36,45, 38,68, 38,76, 41,01, 41,15, 47,00, 48,42, 48,48, 48,86, 49,20, 49,51, 54,65, 54,75, 55,26, 55,58, 55,61, 57,14, 57,27, 57,47, 57,79, 66,24, 67,80, 67,99, 70,34, 70,67, 81,0, 81,52, 114,10, 130,31, 156,0, 158,65, 161,1, 161,60, 168,20, 169,53, 169,59, 170,45, 171,25, 171,80, 171,95, 172,26, 172,33, 197,5, 204,80, 204,85.
m/z (FAB) 1132,6 [(M+Na)^{+}, 42], 1110,8 [(M+H)^{+}, 100].
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Ejemplo 61 Síntesis de [Aip]^{3}-aplidina (SNPL1) 
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191 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SNPL1, partiendo de SNPL2 (10 mg, 10,6 \mumol) y F1 (10 mg, 54 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (8 mg, 68%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 10,5 y 12,0 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,80-1,03 (m, 24H), 1,11-1,70 (m, 9H), 1,72-1,81 (m, 1H), 1,81-1,90 (m, 1H), 1,90-2,24 (m, 6H), 2,30-2,39 (m, 1H), 2,53 (s, 3H) 2,55 (s, 3H), 2,65 (s, 3H), 2,52-2,66 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 3,15-3,18 (m, 1H), 3,22-3,31 (dd, J_{1} = 4,3, J_{2} =15,1, 1H), 3,54-3,60 (m, 2H), 3,67-3,92 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,98 (m, 1H), 4,13-4,29 (m, 3H), 4,45-4,75 (m, 4H), 4,81 (t, J=9,7, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 5,26-5,44 (m, 3H), 6,84 (d, J = 8,3, 2H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,30 (d, J = 8,3, 1H), 7,36 (d, J = 8,3, 1H), 7,68 (d, J = 9,7, 1H), 7,87 (d, J = 4,3, 1H), 8,09 (d, J = 9,7, 1H), 8,28 (d, J = 10,2, 1H).
ESI-RM calc. para C_{57}H_{88}N_{8}O_{14}: 1108,64. Encontrado (m/z): 1110,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 62 Síntesis de [Hiv]^{3}-aplidina (SHPL1)
192
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAUL1, partiendo de SHPL2 (72 mg, 0,081 mmol) y F1 (75 mg, 0,405 mmol), se obtuvo el compuesto del título (68 mg, 79%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (Lichroprep RPC18, gradiente ACN/H_{2}O/TFA de 70:30:0,5 a 90:10:0,5). F_{R}=0,49 (ACN/H_{2}O/TFA 90:10:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,80-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 18H), 1,50-2,30 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,53 (s, 3H) 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,96-3,40 (m, 3H), 3,05 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,63 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H) 4,30 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J = 4,8, 1H), 5,09 (m 1H), 5,20 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 6,83 (d, J = 8,3, 2H), 6,89 (d, J = 6,3, 1H), 7,07 (d, J = 8,3, 2H), 7,29 (d, J = 9,7, 1H), 7,34 (m, 2H), 7,43 (d, J = 5,3, 1H), 7,74 (d, J = 9,7, 1H), 7,80 (d, J = 10,2, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,06, 14,22, 14,30, 16,49, 16,76, 17,84, 19,17, 21,08, 21,41, 21,54, 22,54, 23,79, 23,94, 24,05, 24,16, 24,82, 24,96, 25,05, 25,98, 26,45, 27,37, 27,57, 28,21, 28,59, 30,31, 30,83, 31,56, 31,62, 33,74, 34,24, 36,02, 36,25, 38,91, 38,96, 39,46, 39,86, 46,92, 48,44, 48,71, 49,06, 54,95, 55,49, 57,16, 57,68, 58,23, 59,13, 66,16, 66,28, 69,10, 70,83, 71,14, 79,12, 114,31, 129,96, 130,12, 130,59, 158,86, 168,69, 168,81, 169,75, 169,82, 170,18, 170,45, 170,52, 170,69, 170,84, 171,21, 171,28, 172,47, 173,17, 174,66, 174,82, 197,63, 201,38.
ESI-RM calc. para C_{54}H_{83}N_{7}O_{14}: 1053,60. Encontrado (m/z): 1054,9 (M+H)^{+}.
Ejemplo 63 Síntesis de [Val]^{3}-aplidina (SVPL1)
193
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL1, partiendo de SVPL2 (10 mg, 11 mmol) y F1 (10,5 mg, 57 mmol), se obtuvo el compuesto del título (8 mg, 69%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 10,9 y 12,3 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,02 (m, 24H), 1,13-1,38 (m, 9H), 1,55 (m, 2H), 1,67-1,81 (m, 4H), 1,95-2,02 (m, 3H), 2,10-2,17 (m, 2H), 2,26-2,39 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,74-2,92. (m, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 3,20 (m, 1H), 3,36 (dd, J_{1}= 4,4, J_{2}= 14,2, 1H), 3,49-3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,97-4,13 (m, 2H), 4,38 (dd, J_{1}= 4,6, J_{2}= 14,2, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,68-4,81 (m, 2H), 5,11 (m, 1H), 5,26-5,30 (m, 1H), 5,33-5,40 (m, 1H), 6,84 (d, J= 7,8, 2H), 7,08 (d, J = 8,3, 2H), 7,36-7,52 (m, 2H), 7,48 (d, J=9,6, 1H), 7,61 (d, J=6,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{54}H_{84}N_{8}O_{13} 1052,62. Encontrado (m/z): 1053,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 64 Síntesis de [Hiv]^{3}-[isobutiril]^{8}-didemnina A (81SHPL1)
194
Se añadieron DIPEA (3 \mul, 16,8 \mumol) y cloruro de isobutirilo (1,4 \mul, 13,4 \mumol) a una disolución de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol) en DCM (200 ml) a 0ºC en atmósfera de Ar. Después de 3 h a 22ºC, se añadió DCM (3 ml) y se lavó la mezcla sucesivamente con HCl ac. (2 ml, 0,1N), NaHCO_{3} ac. (2 ml, sat.) y salmuera (2 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. La purificación del residuo mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 19 min) proporcionó el compuesto del título (10 mg, 94%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (24H, m), 1,13-1,65 (18H, m), 1,72-2,58 (6H, m), 2,56 (s, 3H), 2,89 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, J_{1}= 4,6, J_{2}= 15,6, 1H), 3,54-3,73 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,99 (d, J= 5,3, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,73 (d, J= 9,3, 1H), 6,84 (d, J= 9,6, 2H), 7,08 (d, J= 9,6, 2H), 7,55 (d, J= 8,6, 1H), 7,82 (d, J= 11, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,78, 14,63, 15,69, 17,92, 19,03, 19,31, 19,66, 21,03, 22,29, 23,19, 23,85, 24,71, 25,14, 27,27, 28,22, 30,39, 30,51, 31,15, 33,80, 34,25, 35,61, 38,85, 39,63, 46,98, 48,51, 53,29, 53,65, 55,49, 56,01, 56,35, 57,26, 66,07, 69,07, 70,94, 79,33, 114,31, 130,08, 130,60, 158,84, 168,79, 169,75, 170,34, 170,68, 171,36, 171,73, 174,02, 179,84.
ESI-EM calc. para C_{50}H_{80}N_{6}O_{12}, 956,58. Encontrado (m/z): 957,5 (M+H)^{+}.
Ejemplo 65 Síntesis de [Val]^{3}-(isobutiril)^{8}-didemnina A (8ISVPL1)
195
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 8ISHPL1, partiendo de SVPL2 (20 mg, 22,6 \mumol), se obtuvo el compuesto del título después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15, flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 19 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,81-1,02 (m, 24H), 1,14-1,38 (m, 5H), 1,15 (d, J = 6,6, 3H), 1,19 (d, J = 6,6, 3H), 1,38-1,80 (m, 7H), 1,80-2,40 (m, 6H), 2,57 (s, 3H), 2,58-2,64 (m, 1H), 2,85-2,92 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,16 (dd, J_{1} = 10,5, J_{2} =14,4, 1H), 3,36 (dd, J_{1} = 4,5, J_{2} =14,4, 1H), 3,39 (s a, 1H), 3,56 (dd, 1H, J = 4,5, 10,8), 3,59-3,72 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,01 (td, J_{1} = 3,3, J_{2}=10,2, 1H), 4,39-4,47 (m, 2H), 4,58 (dd, J_{1} = 5,7, J_{2} = 7,5, 1H), 4,79 (t, J = 9,9, 1H), 5,03-5,14 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,04 (d, J = 7,8, 1H), 7,08 (d, J = 8,4, 1H), 7,36 (d, J = 9,0, 1H), 7,45 (d, J = 10,2, 1H), 7,51 (d, J = 10,2, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 180,24, 175,10, 173,18, 171,14, 170,72, 170,42, 169,38, 168,73, 158,87, 130,60, 130,02, 114,33, 71,31, 70,50, 66,11, 59,47, 57,42, 56,56, 55,51, 54,93, 53,84, 48,83, 47,13, 41,94, 38,94, 35,67, 34,17, 33,63; 31,32, 31,10, 29,96, 28,32, 27,25, 25,30, 25,05, 24,82, 24,01, 23,22, 21,42, 19,88, 19,72, 11,25, 18,51, 15,60, 14,32, 11,96.
ESI-EM calc. para C_{50}H_{81}N_{7}O_{11}: 955,60. Encontrado 956,8 (M+H)^{+}.
Ejemplo 66 Síntesis de [HiV]^{3}-[butiril]^{8}-didemnina A (8BSHPL1)
196
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 8ISHPL1, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 84%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15, flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 18,6 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,92 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,35 (dd, J_{1}= 5,0, J_{2}= 15,6, 1H), 3,54-3,77 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,89 (m, 1H), 4,98 (d, J_{1}= 6,0, 1H), 5,04 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 6,78 (d, J_{1}= 9,6, 1H), 6,84 (d, J_{1}= 9,6, 2H), 7,08 (d, J_{1}= 9,6, 2H), 7,54 (d, J_{1}= 9,6, 1H), 7,82 (d, J_{1}= 10,6, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,82, 14,15, 14,55, 15,72, 17,96, 18,67, 19,01, 21,05, 22,37, 23,13, 23,84, 24,71, 25,14, 27,30, 28,21, 29,92, 30,38, 30,63, 33,78, 34,25, 35,69, 35,97, 38,85, 39,61, 46,98, 48,52, 53,27, 55,49, 55,99, 56,25, 57,27, 66,07, 69,07, 70,96, 79,40, 114,31, 130,08, 130,59, 158,85, 168,78, 169,73, 170,42, 170,64, 171,36, 171,65, 174,07, 175,79.
ESI-EM calc. para C_{50}H_{80}N_{6}O_{12}: 956,60. Encontrado (m/z): 957,8 (M+H)^{+},
Ejemplo 67 Síntesis de [Hiv]^{3}-[hexanoil]^{8}-didemnina A (8HSHPL1)
197
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 8ISHPL1, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 82%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15, flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 27,8 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 24H); 1,11-1,72 (m, 22H), 1,80-2,51 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,35 (dd, J_{1}= 4,4, J_{2}= 14,1, 1H), 3,54-3,76 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,41 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,98 (d, J_{1}= 5,3, 1H), 5,03 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 6,76 (d, J_{1}= 8,7, 1H), 6,84 (d, J_{1}= 8,7, 2H), 7,08 (d, J_{1}= 8,7, 2H), 7,51 (d, J_{1}= 8,8, 1H), 7,81 (d, J_{1}= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,59, 13,94, 14,34, 15,49, 17,73, 18,77, 20,81, 22,14, 22,46, 22,90, 23,60, 24,47, 24,69, 24,90, 27,08, 27,97, 30,14, 30,40, 31,54, 33,53, 33,76, 34,02, 35,47, 38,62, 39,40, 46,76, 48,28, 53,04, 55,26, 55,78, 55,90, 57,04, 65,84, 68,82, 70,72, 79,17, 114,07, 129,84, 130,36, 158,61, 168,54, 169,51, 170,15, 170,41, 171,12, 171,42, 173,86, 175,75.
ESI-EM calc. para C_{52}H_{84}N_{6}O_{12}: 984,61. Encontrado (m/z): 985,8 (M+H)^{+}.
Ejemplo 68 Síntesis de isobutiril-Pro-OBn
198
Se añadió NMM (680 \mul, 6,21 mmol) en atmósfera de argón a una disolución de H-Pro-OBn.HCl (500 mg, 2,07 mmol) en DCM (10 ml) a 0ºC. Después de 10 min, se añadió cloruro de isobutirilo (240 \mul, 2,27 mmol) y se dejó calentar la mezcla de reacción a 20ºC y se agitó durante 5 h. Se filtró la mezcla y se lavó el filtrado sucesivamente con HCl ac. (15 ml, 1 N), NaHCO_{3} ac. (10 ml, sat.) y salmuera (10 ml), después se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando 560 mg (98%) del compuesto del título. F_{R} =0,42 (hex:AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,20-1,40 (2d, 6H), 1,90-2,35 (m, 4H), 2,35 (c, 1H), 3,40-3,80 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 5,20 (m, 2H), 7,40 (m, 5H).
Ejemplo 69 Síntesis de isobutiril-Pro-OH
199
Se añadió Pd/C (10%) (43 mg, 10% p/p) a una disolución de isobutiril-Pro-OBn (430 mg, 1,56 mmol) en MeOH desgasificado y después se purgó sucesivamente con Ar y se burbujeó con hidrógeno. Se agitó la mezcla en atmósfera de H_{2} durante 14 h y después se desgasificó y filtró. Se concentró la disolución y se cristalizó el residuo con MTBE/hex, dando 140 mg (48%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) 81,20 (m, 6H), 1,90-2,10 (m, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,70 (c, 1H), 3,40-3,70 (m, 2H), 4,60 (dd, 1H).
ESI-EM calc. para C_{9}H_{15}NO_{3}: 185,11. Encontrado (m/z): 186,1 (M+H)^{+}.
Ejemplo 70 Síntesis de [Hiv]^{3}-[isobutiril]^{9}-aplidina (9ISHPL1)
200
Se añadió DIPCDI (5 \mul, 32 \mumol) a una disolución de isobutiril-Pro-OH (10 mg, 54 \mumol) en DCM (150 ml) a 0ºC. Se continuó la agitación durante 60 min y después se transfirió la mezcla a un matraz que contenía SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol) en DCM (150 \mul). Después de 4 d a 2-4ºC, se diluyó la mezcla con DCM (2 ml) y se lavó sucesivamente con HCl ac. (1 ml, 0,1 N), NaHCO_{3} ac. (1 ml, sat.) y salmuera (1 ml), se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 13 y 14 min), proporcionando 9ISHPL1 (9 mg, 72%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 18H), 1,52-2,70 (m, 10H), 2,56 (s, 3H), 3,00-3,44 (m, 4H), 3,08 (s, 3H), 3,55-3,72 (m, 5H) 3,78 (s, 3H), 4,00 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), 4,86 (m, 1H), 5,02 (d, J= 5,3, 1H), 5,30 (m, 2H), 6,84 (d, J= 9,0, 2H), 7,07 (d, J= 9,0, 2H), 7,29 (d, J= 11,0, 1H), 7,80 (d, J= 9,0, 1H); 7,88 (d, J= 11, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,04, 14,44, 16,91, 17,94, 18,96, 19,03, 19,15, 21,07, 21,59, 23,87, 24,10, 24,89, 25,08, 26,04, 27,54, 28,21, 28,87, 30,33, 31,61, 32,64, 33,77, 34,24, 36,19, 39,07, 39,33, 39,81, 46,87, 47,52, 48,45, 54,74, 55,49, 56,20, 57,08, 58,50, 66,41, 69,13, 71,48, 79,16, 114,27, 130,30, 130,59, 158,80, 168,55, 169,88, 170,86, 171,06, 171,22, 173,63, 174,92, 176,19.
ESI-EM calc. para C_{55}H_{87}N_{7}O_{13}: 1053,64. Encontrado (m/z): 1054,46 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 71 Síntesis de [Val]^{3}-[isobutiril]^{9}-aplidina (9ISVPL1)
201
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ISHPL2, partiendo de SVPL2 (10 mg, 11,2 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 77%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 15,3 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,82-1,01 (m, 24H), 1,14-1,37 (m, 12H), 1,148-2,35 (m, 8H), 2,55 (s, 3H), 2,57-2,68 (m, 1H), 2,77-2,83 (m, 1H), 3,12 (s, 3H), 3,19-3,23 (m, 1H), 3,35-3,41 (m, 2H), 3,52-3,56 (m, 1H), 3,58-3,70 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,03-4,13 (m, 1H), 4,33-4,35 (m, 1H), 4,44-4,48 (m, 1H), 4,55-4,66 (m, 2H), 4,70-4,83 (m, 1H), 5,35-5,39 (m, 2H), 6,82 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,25 (s a, 2H), 7,37 (d, 10,5, 1H), 7,46 (d, J = 8,7, 1H), 7,60 (d, J = 9,3, 1H), 8,07 (s a, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,10, 14,44, 16,84, 18,63, 18,95, 19,92, 21,31, 21,61, 23,91, 24,05, 24,86, 25,00, 25,30, 26,06, 27,41, 28,33, 28,93, 30,00, 31,76, 32,65, 33,59, 31,16, 36,21, 39,17, 41,71, 42,19, 47,08, 47,57, 48,88, 54,37, 54,65, 55,50, 56,15, 57,33, 58,70, 59,33, 66,45, 70,92, 71,54, 114,29, 130,28, 130,59, 158,82, 168,41, 170,08, 170,52, 170,69, 171,03, 172,65, 173,80, 175,68, 176,42.
ESI-EM calc. para C_{55}H_{88}N_{8}O_{12}: 1052,65. Encontrado (m/z): 1053,8 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 72 Síntesis de Z-NVa-Pro-OMe
202
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de F2, a partir de Z-NVa-OH (261 mg, 1,04 mmol) y H-Pro-OMe\cdotHCl (156,6 mg, 0,94 mmol), se obtuvo el compuesto del título (315 mg, 87%) en forma de un aceite incoloro después de purificación mediante CL-sílice (hex-AcOEt, gradiente 3:1 a 1:1). F_{R}= 0,42 (hex-AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,97 (t, J = 6,9, 2H), 1,44 (sext., J = 7,5, 2H), 1,53-1,65 (m, 1H), 1,68-1,77 (m, 1H), 1,82-2,09 (m, 3H), 2,17-2,24 (m, 1H), 3,43-3,80 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 4,45-4,55 (m, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,51 (d, J = 8,4, 1H), 7,32-7,35 (m, 5H).
Ejemplo 73 Síntesis de NVa-Pro-OH
203
Se añadió LiOH ac. (130 \mul, 15% p/p) a una disolución de Z-NVa-Pro-OMe (36 mg, 99 \mumol) en una mezcla de THF y MeOH (130 \mul:130 \mul) a 0ºC. Después de 6 h de agitación, se repartió la mezcla de reacción entre H_{2}O (3 ml) y dietiléter (3x2 ml). Se extrajo después la fase orgánica con NaHCO_{3} (3x 2 ml). Se neutralizaron las fases acuosas combinadas (pH= 5) con HCl ac. (0,1 N) y se repartieron con Et_{2}O (3x3 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró, dando el compuesto del título (36 mg, cuant.) en forma de un aceite incoloro.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,96 (t, J = 6,9, 2H), 1,41 (sext., J = 7,4, 2H), 1,53-1,65-1,77 (m, 2H), 1,82-2,10 (m, 3H), 2,17-2,24 (m, 1H), 3,52-3,81 (m, 2H), 4,45-4,58 (m, 2H), 5,07 (s a, 2H), 5,81 (d, J = 8,4, 1H), 7,30-7,35 (m, 5H), 7,41 (s a, 1H).
ESI-EM calc. para C_{18}H_{24}N_{2}O_{5}: 348,17. Encontrado (m/z): 349,2 (M+H)^{+}.
Ejemplo 74 Síntesis de [ZNVa-Pro]^{9}-aplidina (9NVSAPL2)
204
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL1, partiendo de SAPL2 (18 mg, 19 \mumol) y ZNVa-Pro-OH (34 mg, 97 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (16 mg, 66%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 29 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,84-0,96 (m, 27H), 1,12-1,85 (m, 19H), 2,00-2,25 (m, 7H), 2,30-2,40 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,62 (dd, J_{1} = 10,5, J_{2}=17,7, 1H), 2,93 (d, 4,2, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,14-3,20 (m, 1H), 3,28-3,34 (m, 2H), 3,50-3,67 (m, 4H), 3,77-3,80 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,82-3,91 (m, 1H), 4,00-4,17 (m, 2H), 4,27 (dd, J_{1} = 6,3, J_{2}=13,2, 1H), 4,43-4,51 (m, 2H), 4,58-4,63 (m, 1H), 4,69-4,75 (m, 1H), 4,77-4,82 (m, 1H), 5,07 (d, 1H, J = 12,9, 2H), 5,13 (d, J = 12,9, 1H), 5,32-5,41 (m, 2H), 6,07 (d, J = 8,7, 1H), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,4, 2H), 7,17 (d, J = 9,9, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,83 (d, J = 9,0, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,68, 13,74, 14,56, 15,24, 16,39, 16,85, 18,61, 20,94, 21,26, 23,34, 23,70, 24,76, 24,90, 25,02, 26,00, 27,17, 27,81, 28,54, 31,29, 31,40, 33,30, 33,85, 33,86, 36,19, 38,62, 38,84, 41,31, 46,91, 47,21, 49,38, 49,49, 52,50, 54,96, 55,24, 55,25, 56,50, 57,17, 57,96, 62,53, 66,40, 67,93, 70,64, 81,371 14,04, 127,89, 127,77, 128,32, 129,97, 130,29, 136,84, 156,72, 158,55, 168,48, 169,36, 169,58, 170,52, 171,27, 171,71, 172,54, 173,22, 205,08.
ESI-EM calc. para C_{67}H_{100}N_{8}O_{16}: 127,73. Encontrado (m/z): 1273,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 75 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Z-NVa-Pro]^{9}-aplidina (9NVSHPL2) 
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205 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL1, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol) y Z-NVa-Pro-OH (20 mg, 56 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (8 mg, 60%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 26,7 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,80 (m, 22H), 1,82-2,35 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,96-3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,48-3,72 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,88 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,68 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J_{1}= 5,3, 1H), 5,08 (m, 2H), 5,28 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,10 (d, J= 8,3, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,72 (d, J= 4,3, 1H), 7,78 (d, J= 8,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,06, 13,88, 14,22, 16,85, 17,76, 18,89, 19,18, 21,12, 21,47, 23,72, 23,98, 25,08, 26,25, 27,57, 28,15, 28,79, 30,32, 31,61, 33,45, 33,72, 34,07, 35,95, 38,92, 39,59, 39,90, 46,87, 47,44, 48,46, 52,76, 55,21, 55,49, 56,77, 57,17, 58,37, 66,41, 66,65, 69,22, 71,14, 79,07, 114,24, 127,87, 128,00, 128,56, 130,25, 130,55, 157,00, 168,82, 169,86, 170,36, 170,58, 170,77, 171,30, 171,86, 173,28, 174,94.
ESI-EM calc. para C_{64}H_{96}N_{8}O_{15} 1216,7. Encontrado m/z: 1217,5 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 76 Síntesis de [NVa-Pro]^{9}-aplidina (9NVSAPL1) 
\vskip1.000000\baselineskip
206 
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Se saturó con hidrógeno gaseoso una mezcla desgasificada de 9NVSAPL2 (10 mg, 7,8 \mumol) y Pd/C (al 10%, 5 mg) en IPA:H_{2}O (0,2 ml:0,1 ml) (y mantenida a 101,3 kPa) agitando durante 14 h. Después, se filtró la mezcla (teflón, 0,45 \mum) y se concentró a vacío, proporcionando el compuesto del título (8,8 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,85-0,95 (m, 27H), 1,18-1,51 (m, 18H), 1,50-2,45 (m, 7H), 2,59-2,83 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,57-2,80 (m, 3H), 2,81-2,95 (m, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,15-3,40 (m, 3H), 3,52-3,79 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 4,45-4,52 (m, 1 H), 4,61-4,65 (m, 1H), 4,70-4,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,3, 1H), 5,36-5,39 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,1, 2H), 7,86 (d, J = 8,7, 2H), 7,19 (d, J = 10,2, 1H), 7,82 (d, J = 9,0, 1H), 7,80-7,85 (m, 1H).
ESI-EM calc. para C_{59}H_{40}N_{8}O_{14}: 1138,69. Encontrado (m/z): 1139,7 [(M+H)]^{+}.
Ejemplo 77 Síntesis de [HiV]^{3}-[NVa-Pro]^{9}-aplidina (9NVSHPL1)
207 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9NVSAPL1, partiendo de 9NVSHPL2 (10 mg, 8,2 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (8 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 30H), 1,12-1,85 (m, 22H), 1,92-2,35 (m, 6H), 2,42 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10-3,45 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,50-3,70 (m, 5H), 3,78 (s, 3H), 3,82 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,02 (d, J= 5,3, 1H), 5,32 (m, 2H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,38 (d, J= 8,7, 1H), 7,60 (d, J= 4,3, 1H), 7,80 (d, J= 9,3, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,03, 14,13, 14,30, 16,80, 17,81, 18,72, 19,15, 21,09, 21,55, 23,73, 23,96, 25,07, 26,16, 27,55, 28,17, 28,72, 29,91, 30,33, 31,52, 33,80, 34,17, 36,00, 38,94, 39,51, 39,84, 46,88, 47,51, 48,45, 55,01, 55,49, 56,91, 57,15, 58,10, 66,37, 69,17, 71,10, 79,12, 114,29, 130,21, 130,57, 158,82, 163,66, 168,91, 169,86, 170,38, 170,75, 170,82, 171,30, 173,22, 174,79.
ESI-EM calc. para C_{56}H_{90}N_{8}O_{13} 1082,66. Encontrado m/z: 1083,7 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 78 Síntesis de [Hiv]^{3}-[L-Lac(OTBDMS)]^{9}-aplidina [9LSHPL2(L)]
208 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL1, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol) y (L)-Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 68%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, gradiente de ACN/H_{2}O 85:15-100:0 en 10 min. (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 30,1 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,08 (s, 3H), 0,10 (s, 3H), 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 18H), 1,75-2,51 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 5H), 3,11 (s, 3H), 3,53-3,82 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,02 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,01 (d, J= 4,8, 1H), 5,27 (m, 2H), 6,84 (d, J= 8,7, 2H), 7,07 (d, J= 8,7, 2H), 7,29 (d, J= 9,7, 1H), 7,63 (d, J= 5,8, 1H), 7,88 (d, J= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta -4,26, -4,12, 12.04, 14,40, 16,91, 17,97, 19,14, 20,60, 21,11, 21,66, 23,82, 24,11, 24,96, 25,08, 26,11, 26,37, 27,53, 28,18, 28,37, 30,33, 31,69, 33,75, 34,19, 36,23, 39,00, 39,36, 39,81, 46,87, 47,64, 48,45, 54,91, 55,37, 55,48, 56,81, 57,08, 58,37, 66,38, 69,14, 69,89, 71,42, 79,19, 82,66, 114,23, 130,36, 130,59, 158,77, 168,43, 469,86, 170,72, 171,01, 171,21, 172,03, 173,62, 174,91.
ESI-EM calc. para C_{60}H_{99}N_{7}O_{14}Si: 1169,7. Encontrado m/z: 1170,9 (M+H)^{+}.
Ejemplo 79 Síntesis de [Hiv]^{3}-[D-Lac(OTBDMS)]^{9}-aplidina [9LSHPL2(D)]
209
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL1, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol) y (D)-Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 68%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, gradiente de ACN/H_{2}O 85:15-100:0 en 10 min (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 30,4 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,03 (m, 3H), 0,06 (m, 3H) 0,87 (s, 9H), 0,82-1,10 (m, 24H), 1,11-1,72 (m, 18H), 1,75-2,30 (m, 6H), 2,41 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 5H), 3,06 (s, 3H), 3,56 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,61 (m, 2H), 4,86 (m, 1H), 5,00 (d, J= 4,8, 1H), 5,25 (m, 2H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,29 (d, J= 9,7, 1H), 7,74 (d, J= 5,3, 1H), 7,87 (d, J= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta -4,87, -4,84, 12,04, 14,38, 16,89, 17,94, 19,14, 20,24, 21,08, 21,60, 23,85, 24,12, 24,90, 25,06, 25,13, 26,01, 26,53, 27,53, 27,83, 28,20, 30,33, 31,51, 33,76, 34,20, 36,16, 38,99, 39,35, 39,82, 46,87, 47,02, 48,46, 54,79, 55,42, 55,48, 57,08, 57,18, 58,28, 66,39, 69,11, 71,43, 72,61, 79,18, 114,25, 130,29, 130,59, 158,79, 168,45, 169,86, 170,77, 170,81, 170,97, 171,20, 172,53, 173,67, 174,84.
ESI-EM calc. para C_{60}H_{99}N_{7}O_{14}Si: 1169,7. Encontrado m/z: 1170,8 (M+H)^{+}.
Ejemplo 80 Síntesis de [Val]^{3}-[L-Lac(OTBDMS)]^{9}-aplidina [9LSVPL2(L)]
210
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL1, partiendo de SVPL2 (10 mg, 11,2 \mumol) y (L)-Lac(OTBDMS)-Pro-OH (17 mg, 56 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 68%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 17,8 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,14 (s, 6H), 0,71-1,06 (m, 27H), 1,10-1,42 (m, 10H), 1,43-1,84 (m, 8H), 1,85-2,40 (m, 11H), 2,57 (s, 3H), 2,80 (d, J = 14,7, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,15-3,23 (m, 1H), 3,33-3,42 (m, 2H), 3,54 (dd, J_{1} = 4,2, J_{2}=10,8, 1H), 3,58-3,69 (m, 3 H), 3,79 (s, 3H), 3,88-3,90 (m, 1H), 4,05-4,12 (t a, 1H), 4,32 (s a, 1H), 4,43-4,68 (m, 4H), 4,77 (t, J = 10,5, 1H), 5,31-5,35 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,4, 2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,39 (d, J = 9,9, 1H), 7,45 (d, J = 9,0, 1H), 7,60 (d, J = 10,5, 1H), 7,83 (d, J = 4,5, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta -4,67, -4,49, 11,84, 14,13, 16,67, 18,19, 18,41, 19,68, 20,48, 21,15, 21,40, 23,61, 23,92, 24,72, 24,80, 25,06, 25,88, 26,24, 27,17, 28,04, 28,13, 29,78, 31,57, 33,33, 33,81, 35,99, 38,84, 41,56, 41,95, 46,83, 47,52, 48,68, 54,09, 54,64, 55,26, 56,63, 57,13, 58,36, 59,12, 66,20, 70,10, 70,57, 71,27, 77,20, 114,01, 130,13, 130,36, 158,55, 168,09, 169,76, 170,07, 170,48, 170,77, 172,21, 172,33, 173,58, 175,45.
ESI-EM calc. para C_{59}H_{40}N_{8}O_{14}: 1168,72. Encontrado (m/z): 1169,8 (M+H)^{+}.
Ejemplo 81 Síntesis de [Hiv]^{3}-[L-Lac]^{9}-aplidina [9LSHPL1(L)]: tamandarina A 
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211 
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Se añadió TBAF (50 \mul, 1 M en THF) a una disolución de 9LSHPL2(L) (16 mg, 14 \mumol) en THF (500 \mul, anh.) a 0ºC en atmósfera de Ar. Después de 1 h a 22ºC, se concentró la mezcla a vacío y se purificó el producto bruto mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de DCM:MeOH 1% a 5%), proporcionando el compuesto del título (813 mg, 88%) en forma de un sólido blanco.
Se publicaron los datos experimentales: Fenical, W. y col., J. Org. Chem. 2000, 65, 782-792.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,82-0,96 (m, 18H), 1,02 (d, J=3,4, 3H), 1,04 (d, J=3,4, 3H), 1,14-2,28 (m, 14H), 1,24 (s, 3H), 1,34 (d, J=6,8, 3H), 1,43 (d, J=6,8, 3H), 2,44 (dd, J_{1}=7,8, J_{2}=17,1, 1H), 2,58 (s, 3H), 3,00 (s a, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,14-3,31 (m, 2H), 3,37-3,43 (m, 2H), 3,56-3,72 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (t, J=7,8, 1H), 4,02 (dt, J_{1}=3,4, J_{2}=9,8, 1H), 4,25 (d, J= 3,9, 1H), 4,30 (t, J= 6,8, 1H), 4,37 (dd, J_{1}=7,3, J_{2}=8,3, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,71 (t, J= 7,4, 1H), 4,87 (t, J=11,2, 1H), 5,03 (d, J=4,9, 1H), 5,29 (dd, J_{1}=3,4, J_{2}=11,7, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,83 (d, J=8,3, 2H), 7,07 (d, J=8,3, 2H), 7,34 (d, J= 9,8, 1H), 7,48 (d, J= 5,4, 1H), 7,76 (d, J=9,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{54}H_{85}N_{7}O_{14}: 1055,6. Encontrado: 1056,7 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 82 Síntesis de [Hiv]^{3}-[D-Lac]^{9}-aplidina [9LSHPL1(D)] 
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212 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9LSHPL1(L), partiendo de 9LSHPL2(D) (20 mg, 17 \mumol) y TBAF (50 \mul, 1 M en THF), se proporcionó el compuesto del título (14 mg, 78%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de DCM:MeOH 1% a 5%).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,78-1,08 (m, 18H), 1,02 (d, J=3,9, 3H), 1,04 (d, J=3,4, 3H), 1,10-2,36 (m, 14H), 1,20 (d, J=6,3, 3H), 1,34 (d, J=6,3, 3H), 1,37 (d, J=6,3, 3H), 2,38-2,50 (dd, J_{1}=7,8, J_{2}=17,5, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,10 (s, 3H), 3,13-3,20 (m, 1H), 3,22-3,28 (m, 1H), 3,37-3,42 (dd, J_{1}=3,9, J_{2}=4,3, 1H), 4,61-4,68 (m, 3H), 3,69-3,76 (m, 3H), 3,77 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (t, J=7,8, 1H), 3,97-4,07 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,41 (c, J=6,3, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,86 (t, J=10,7, 1H), 5,01 (d, J=4,8, 1H), 5,21-5,37 (m, 2H), 6,83 (d, J=8,3, 2H), 7,06 (d, J=8,3, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,77 (d, J=9,2, 1H).
ESI-EM calc. para C_{54}H_{85}N_{7}O_{14}: 1055,62. Encontrado: 1056,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 83 Síntesis de [Val]^{3}-[L-Lac]^{9}-aplidina [9LSVPL1(L)]
213
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9LSHPL1, partiendo de 9LSVPL2 (5 mg, 4,3 \mumol), se proporcionó el compuesto del título (4 mg, 88%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de DCM:MeOH 1% a 5%).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,82-1,02 (m, 18H), 1,16-1,42 (m, 4H), 1,32 (d, J = 3,0, 3H), 1,40 (d, J = 6,6, 3H), 1,56-1,83 (m, 8H), 1,95-2,34 (m, 11H), 2,58 (s, 3H), 2,84 (d, J = 14,7, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,15-3,23 (m, 1H), 3,36-3,42 (m, 1H), 3,55 (dd, J_{1} = 9,0, J_{2} = 10,5, 2H), 3,64-3,66 (m, 3H), 3,95 (dd, J_{1} = 3,3, J_{2} = 9,9, 1H), 4,08 (td, J_{1} = 7,5, J_{2}=17,1, 1H), 4,32 (s a, 1H), 4,41 (dd, J_{1} = 6,6, J_{2}=9,9, 1H), 4,48 (dd, J_{1} = 5,1, J_{2} = 10,5, 1H), 4,61 (dd, J_{1} = 6,0, J_{2} = 6,6, 1H), 4,69-4,80 (m, 2H), 5,29-5,35 (m, 1H), 5,57 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,1, 2H), 7,08 (d, J = 8,7, 2H), 7,37 (d, J = 3,9, 1H), 7,40 (d, J = 5,4, 1H), 7,60 (d, J = 10,8, 1H), 7,72 (d, J = 3,9, 1H).
ESI-EM calc. para C_{54}H_{86}N_{8}O_{13}: 1054,63. Encontrado: 1055,8 (M+H)^{+}.
Síntesis de la unidad espiro[4,4]nonano Ejemplo 84 Síntesis de N-[(2R)-2-alil-N-(terc-butoxicarbonil)-prolil]-D-leucina (9)
214
Se añadieron HOAt (980 mg, 7,2 mmol), D-Leu-OBn\cdotpTsOH (2,65 g, 12 mmol), NMM (1,21 g, 12 mmol) y DCC (1,48 g, 7,2 mmol) a una disolución enfriada (0ºC) de 8 (1,53 g, 6 mmol) en DCM anh. (33 ml) en atmósfera de argón. Se agitó la mezcla durante 2 h a 0ºC y después durante 12 h a TA; se añadieron D-Leu-OBn\cdotpTsOH (0,66 g, 3 mmol) y NMM (0,30 g, 3 mmol) adicionales y se agitó la mezcla durante 3 h más. Se filtró la mezcla y se concentró el disolvente a vacío. Se disolvió el residuo en AcOEt (30 ml) y se lavó sucesivamente con NaHCO_{3} (2x25 ml, sat.), ácido cítrico (2x25 ml, 10%) y salmuera (25 ml). Se secó la disolución orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo mediante CL-sílice (hex-AcOEt, 6:1), proporcionando 9 (2,63 g, 96%) en forma de un aceite incoloro. [\alpha]^{20}_{D} 12,4º (c 1, MeOH). HPLC [columna mBondapack C18 (Waters), 10 m, 3,9x300 mm, flujo: 1 ml/min, a 214 nm, eluyente ACN/0,05% de TFA (40:60)] T_{R}= 9,08 min].
RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 0,86 (m, 6H), 1,37 (s, 9H), 1,55-1,72 (m, 5H), 2,00 (m, 2H), 2,64 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 5,05-5,11 (m, 4H), 5,63-5,72 (m, 1H), 7,28-7,35 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, acetona-d_{6}) \delta 21,6, 22,8, 24,6, 28,3, 34,7, 38,2, 41,3, 49,38, 51,0, 66,9, 69,7, 80,1, 119,1, 128,3, 132,7, 153,9, 172,8.
Ref. de la síntesis de 8: a) Seebach, D. y col. J. Am. Chem. Soc. 1983, 105, 5390-5398. b) Genin, M. J. y col., J. Org. Chem. 1993, 58, 2334-2337.
Ejemplo 85 Síntesis de (5R,8RS)-1-(terc-butoxicarbonil)-7-[(1R)-1-benciloxicarbonil-3-metilbutil]-8-hidroxi-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (10)
215
Se añadió una disolución de OsO_{4} (al 2,5% p/p, 2,9 ml) en terc-butanol a una disolución de 9 (1,56 g, 3,42 mmol) en MeOH/H_{2}O (2:1, 108 ml) en atmósfera de argón. Se continuó la agitación durante 10 min y se añadió NaIO_{4} (2,195 g, 10,3 mmol). Después de 24 h de agitación, se diluyó la mezcla de reacción con H_{2}O (100 ml) y se extrajo con AcOEt (3x 50 ml). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera (50 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida. Se purificó el residuo mediante CL-sílice (hex-AcOEt, gradiente 80:20 a 0:100%), proporcionando los diastereómeros 10a y 10b (combinados: 1,17 g, 76%) en forma de un sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
10a: HPLC [Columna NovapackC18 (Waters), 3,9 x 150 mm, \varphi=1 ml / min, \lambda= 214 nm, eluyente: CH_{3}CN/ 0,05% de TFA (40/60)] T_{R}=14,45 min. P.f.: 140-141ºC. [\alpha]^{20}_{D} -4º (c 1, MeOH).
RMN-^{1}H (300 MHz, acetona-d_{6}) \delta 0,90 (m, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,64-2,30 (m, 9H), 2,68 (dd, 1H, J_{1}= 6, J_{2}=13, 1H), 3,37 (m, 2H), 4,51 (dd, 1H), 5,13 (d, J=15, 2H), 5,79 (t, J= 5, 2H), 7,40 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, acetona-d_{6}) \delta 21,8, 23,8, 24,1, 24,9, 28,5, 39,6, 40,8, 41,5, 48,5, 66,8, 79,4, 79,8, 81,2, 129,1, 129,3, 128,6, 171,7, 172,0.
ESI-EM: Calc. para C_{25}H_{36}N_{2}O_{6}: 460,26. Encontrado m/z: 483,4 (M+Na)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
10b: HPLC [Columna Novapack C18 (Waters), 3,9x150 mm, \varphi=1 ml / min, \lambda= 214 nm, eluyente: CH_{3}CN / 0,05% de TFA (40/60)] T_{R}= 18,75 min. P.f.: 134-135ºC. [\alpha]^{20}_{D} +26 (c 1,2, MeOH).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,90 (6H, m), 1,40 (9H, s), 1,50-2,60 (9H, m), 3,40 (2H, m), 4,20-5,40 (5H, m), 7,40 (5H, m).
RMN-^{13}C (75 MHz, acetona-_{d6}) \delta 21,3, 23,2, 24,1, 24,9, 28,3, 38,9, 40,2, 42,5, 47,9, 53,2, 66,8, 77,5, 79,4, 80,6, 129,1, 171,2, 174,1.
ESI-EM calc. para C_{25}H_{36}N_{2}O_{6}: 460,26. Encontrado m/z: 483,5 (M+Na)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 86 Síntesis de (5R)-7-[(1R)-1-benciloxicarbonil-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano en forma de sal trifluoroacetato (11)
216
Se añadió NaBH_{4} (106 mg, 2,8 mmol) a una disolución de 10 (430 mg, 0,93 mmol) en TFA (10 ml). Se agitó la mezcla durante 2 h y después se concentró la reacción a presión reducida. Se repartió el residuo entre H_{2}O (5 ml) y DCM (20 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío, proporcionando 11 en forma de un aceite naranja (318 mg, cuant.). [\alpha]^{20}_{D}+15 (c 1, MeOH).
RMN-^{1}H (300 MHz, acetona-d_{6}) 0,91 (m, 6H), 1,50 (m, 1H), 1,66-1,94 (m, 2H), 2,11-2,72 (m, 6H), 3,48-3,72 (m, 4H), 4,74 (dd, J_{1}= 6, J_{2}=15, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,37 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, acetona-d_{6}) \delta 21,2, 23,2, 23,9, 25,5, 30,2, 34,6, 38,0, 42,2, 46,6, 53,9, 67,6, 69,6, 129,3, 161,1, 161,6, 170,9, 172,6.
ESI-EM calc. para C_{20}H_{28}N_{2}O_{3}: 344,21. Encontrado m/z: 345,3 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 87 Síntesis de (5R)-1-(terc-butoxicarbonil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (12) 
\vskip1.000000\baselineskip
217 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron hidróxido de tetrametilamonio pentahidratado (158 mg, 0,87 mmol) y Boc_{2}O (144 mg, 0,66 mmol) con agitación a una disolución de 11 (150 mg, 0,44 mmol) en ACN (5 ml). Después de 6 h, se añadieron TMAH\cdot5 H_{2}O (158 mg) y Boc_{2}O (192 mg) adicionales. Se agitó la reacción durante 2 d y después se repartió entre H_{2}O (10 ml) y DCM (25 ml). Se liofilizó la fase acuosa y se purificó mediante CL-sílice (DCM-MeOH, gradiente de 92:8 a 60:40), proporcionando 12 (100 mg, 64%) en forma de un sólido blanco.
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Ejemplo 88 Síntesis de (5R)-1-(isobutiril)-7-[(1R)-1-benciloxi-carbonil-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (13) 
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218 
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Se añadieron TEA (199 mg, 1,96 mmol), DMAP (6 mg, 0,049 mmol) y gota a gota cloruro de isobutirilo (104 mg, 0,98 mmol) a una disolución de 11 (169 mg, 0,49 mmol) en DCM anh. (10 ml) a 0ºC en atmósfera de argón. Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 24 h. Se repartió el producto bruto entre H_{2}O (10 ml) y DCM (10 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera (10 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío. Se obtuvo el compuesto 13 puro (150 mg, 74%) en forma de un sólido blanco después de CL-sílice (hex-AcOEt, gradiente 60:40 a 0:100).
HPLC [Columna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, \varphi=1 ml /min, \lambda= 214 nm, eluyente: CH_{3}CN / 0,05% de TFA (50/50)] T_{R}= 4,50 min. P.f.: 87ºC. [\alpha]^{20}_{D} +9,6 (c 1,4, MeOH).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,90 (2d, J= 7, 6H), 1,09-1,12 (2d, 6H), 1,37 (septuplete, J = 6, 1H), 1,61-2,10 (m, 7H), 2,64 (m, 2H), 3,14 (dd, J_{1}=9, J_{2}=17, 1H), 3,64 (m, 3H), 4,85 (dd, J_{1} = 5, J_{2} = 10, 1H), 5,14 (d, J = 6, 2H), 7,32 (m, 5H).
RMN-^{13}C (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 18,6, 18,7, 21,2, 23,1, 24,0, 24,8, 29,5, 32,5, 35,7, 37,6, 40,5, 47,8, 52,7, 66,7, 76,3, 170,8, 174,3, 174,9.
ESI-EM calc. para C_{24}H_{34}N_{2}O_{4}: 414,25. Encontrado m/z: 415,4 (M+H)^{+}.
Ejemplo 89 Síntesis de (5R)-1-(piruvil)-7-[(1R)-1-benciloxi-carbonil-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (14)
219
Se preparó cloruro de piruvilo según el procedimiento descrito en la bibliografía, Pansare, S.V.; Gnana R.R. "Asymmetric Allylation and reduction on an Ephedrine-Derived Template: Stereoselective Synthesis of \alpha-Hydroxy Acids and Derivatives" J. Org. Chem. 1998, 63, 4120-4124. Se añadió \alpha,\alpha-diclorometilmetiléter (188 mg, 1,57 mmol) al ácido pirúvico (115 mg, 1,31 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 20 min, se calentó la disolución resultante a 50-55ºC y se agitó después durante 30 min adicionales. Se dejó enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se añadió DCM (3 ml).
Se añadieron TEA (200 mg, 1,98 mmol) y DMAP (4 mg, 0,033 mmol) a una disolución de 11 (150 mg, 0,33 mmol) en DCM anh. (4 ml) a 0ºC en atmósfera de argón a la disolución reciente de cloruro de piruvilo a 0ºC. Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 6 h. Se lavó sucesivamente el producto bruto con ácido cítrico (5 ml, 10%), NaHCO_{3} ac. sat. (5 ml) y salmuera (5 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. Se obtuvo el compuesto puro 14 (77 mg, 56%) en forma de un aceite después de CL-sílice (hex-AcOEt, 1:3).
HPLC [Columna NovapackC18 (Waters), 3,9 x 150 mm, \varphi=1 ml /min, \lambda= 214 nm, eluyente: ACN/ 0,05% de TFA (50/50)] T_{R}= 5,87 y 6,72 min.
RMN-^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,92 y 0,95 (2d, J = 6, 6H); 1,42 (m, 1H); 1,61-2,39 (m, 7H), 2,44 (s, 3H), 2,77 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 3,56-3,78 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,67 y 4,85 (dd, J_{1}= 6, J_{2} = 10, 1H), 5,21 (s, 2H), 7,34 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 21,2, 23,0, 24,4, 24,8, 26,4, 29,3, 35,6, 37,3, 40,7, 48,9, 53,0, 66,8, 68,6, 135,0, 166,0, 170,8, 173,0, 198,0.
ESI-EM calc. para C_{23}H_{30}N_{2}O_{5}: 414,22. Encontrado m/z: 415,4 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 90 Síntesis de (5R)-1-(2-metilacriloil)-7-[(1R)-1-benciloxi-carbonil-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (15)
220
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 13, partiendo de 11 (200 mg, 0,43 mmol) y cloruro de metilacriloílo (89 mg, 0,86 mmol), se obtuvo el compuesto del título (70 mg, 50%) en forma de un aceite incoloro después de purificación mediante CL (gel de sílice, hex-AcOEt, 2:1). HPLC [Columna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, \varphi=1 ml /min, \lambda= 214 nm, eluyente: ACN / 0,05% de TFA (25/75)] T_{R}= 6,38 min.
RMN-^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,91 (t, J = 6, 6H), 1,44 (m, 1H), 1,64-1,93 (m, 5H), 1,93 (s, 3H), 1,96-2,12 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,56-3,68 (m, 3H), 4,80 y 4,77 (2d, J = 10,1H), 5,16 (s, 2H), 5,19 (d, J = 9, 2H), 7,32 (m, 5H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 19,8, 21,4, 23,0, 24,2, 24,9, 29,9, 37,1, 37,7, 41,1, 50,2, 53,2, 66,6, 67,4, 116,9, 128,1, 128,3, 128,4, 135,0, 141,7, 170,7, 174,1.
ESI-EM calc. para C_{24}H_{32}N_{2}O_{4}: 412,24. Encontrado: 413,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 91 Síntesis de (5R)-1-(isobutiril)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (16)
221
Se hidrogenó a 110,3 kPa durante 24 h una disolución desgasificada de 13 (134 mg, 0,32 mmol) en metanol que contenía Pd/C al 10% (27 mg). Se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celite y se concentró la disolución filtrada a presión reducida, proporcionando 16 (100 mg, 95%) en forma de un aceite incoloro. P.f.: 68-69ºC. [\alpha]^{20}_{D} -2º (c 1,1, MeOH).
RMN-^{1}H [300 MHz, acetona-d_{6}] \delta 0,87-0,91 (2d, J = 7, 6H), 1,09-1,12 (2d, 6H), 1,46 (m, 1H), 1,70 (m, 2H), 1,90-2,10 (m, 5H), 2,49 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,49 (dt, J_{1} = 8, J_{2} = 10, 1H), 3,61-3,75 (m, 2H), 4,71 (dd, J_{1} = 5, J_{2} = 11, 1H),
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 16,4, 16,6 21,1, 23,0, 24,3, 25,0, 30,8, 32,6, 36,6, 36,9, 40,6, 48,0, 53,4, 67,5,171,8, 174,2, 176,2.
ESI-EM calc. para C_{17}H_{28}N_{2}O_{4}: 324,20. Encontrado: 323,3 (M-1)^{+}.
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Ejemplo 92 Síntesis de (5R)-1-(piruvil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (17)
222
Se hidrogenó a presión atmosférica durante 45 min una disolución desgasificada de 14 (79 mg, 0,26 mmol) en metanol (20 ml) que contenía Pd-C (10%, 22 mg). Se concentró la disolución filtrada a presión reducida, proporcionando 17 (79 mg, 95%) en forma de un sólido blanco. HPLC [Columna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm,
\varphi=1 ml/min, \lambda= 214 nm, eluyente: ACN / 0,05% de TFA (20/80)] T_{R}= 13,14 min.
RMN-^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,93 (m, 6H), 1,43 (m, 1H), 1,71-2,22 (m, 7H), 2,34 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,80 (dd, J_{1} = 6, J_{2} = 10, 1H), 7,07 (s a, 1H).
RMN-^{13}C (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 21,3, 23,2, 24,7, 25,1, 27,1, 29,9, 36,0, 37,0, 41,0, 49,3, 53,6, 69,1, 162,1, 172,7, 173,7, 197,5.
ESI-EM calc. para C_{23}H_{30}N_{2}O_{5}: 324,17. Encontrado m/z: 325,1 (M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 93 Síntesis de (5R)-1-(2-metilacriloil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano (18)
223
Se añadieron NaOH ac. (1,6 ml, 1 N) y H_{2}O (1,6 ml) a una disolución de 15 (65 mg, 0,16 mmol) en metanol (2,5 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h. Se concentró la mezcla resultante a presión reducida y se repartió el residuo entre H_{2}O (20 ml) y DCM (20 ml). Se acidificó la fase acuosa a pH=2 con HCl ac. (10 ml, 0,1 N) y se extrajo con DCM (3x20 ml). Se lavaron las fases orgánicas combinadas con salmuera (25 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida, proporcionando 18 (44 mg, 85%) en forma de un sólido blanco. HPLC [Columna Novapack C18 (Waters), 3,9 x 150 mm, \varphi= 1 ml /min, \lambda= 214 nm, eluyente: ACN / 0,05% de TFA (25/75)] T_{R}= 6,38 min.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86 (d, J =5, 3H), 0,89 (d, J = 5, 3H), 1,42 (m, 1H), 1,55-2,25 (m, 8H), 2,56 (m, 1H), 3,19-3,44 (m, 2H), 3,57-3,67 (m, 2H), 4,78 (d, J =11, 1H), 4,82 (d, J = 11, 1H), 5,18 (d, J = 6, 2H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 19,5, 21,2, 23,1, 24,2, 25,1, 30,9, 36,5, 37,6, 40,9, 50,5, 53,7, 67,5, 117,5, 140,6, 170,8, 174,2.
ESI-EM calc. para C_{17}H_{26}N_{2}O_{4}: 322,19. Encontrado: 323,2 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 94 Síntesis de [(5R)-1-(terc-butoxicarbonil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano]^{7-9}-aplidina (9SBSAPL1) 
\vskip1.000000\baselineskip
224 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SNPL3, partiendo de SAPL4 (10 mg, 13 \mumol), 12 (5 mg, 14 \mumol), HATU (12,4 mg), HOAt (4,5 mg), NMM (3,3 \mul), DCM (140 \mul) y DMF (70 \mul), se obtuvo el compuesto del título (11 mg, 73%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 30 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,85-0,97 (m, 24H), 1,19-1,34 (m, 18H), 1,48 (s, 9H), 1,50-2,20 (m, 6H), 2,32-2,36 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,58-2,72 (m, 2H), 2,97-3,08 (m, 1H), 3,10-3,22 (m, 3H), 3,34 (dd, 1H, J = 3,9, 13,8), 3,46-3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3 H), 4,03-4,12 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H, J = 6,6, 13,2), 4,57-4,63 (m, 2H), 4,79-4,88 (m, 2H), 5,15 (d, 1H, J = 3,3), 5,21-5,23 (m, 1H), 6,84 (d, 2 H, J = 8,4), 7,07 (d, 2H, J = 8,7), 7,28 (d, 1H, J = 10,8), 7,79 (d, 1H, J = 6,6), 7,82 (d, 1H, J = 9,9).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) 811,66, 15,21, 15,43, 16,79, 17,23, 18,69, 18,77, 21,24, 23,67, 23,95, 24,10, -24,90, 25,10, 25,38, 27,04, 28,23, 28,75, 29,93, 31,61, 34,50, 33,88, 34,16, 36,20, 36,57, 38,76, 39,09, 39,78, 41,29, 47,27, 47,76, 49,60, 49,96, 52,66, 55,50, 56,26, 57,38, 58,18, 66,74, 66,86, 68,34, 70,53, 80,75, 81,93, 114,33, 130,23, 130,54, 168,08, 169,83, 170,18, 170,80, 171,43, 172,55, 175,04, 205,04.
ESI-EM calc. para C_{60}H_{93}N_{7}O_{15} 1151,7. Encontrado m/z: 1152,4 (M+H)^{+}.
Ejemplo 95 Síntesis de [Hiv]^{3}-[(5R)-1-(terc-butoxicarbonil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]-nona- no]^{7-9}-aplidina (9SBSHPL1)
225
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SHPL4 (10 mg, 1,3 \mumol), 12 (5 mg, 14 \mumol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 \mul), DCM (150 \mul) y DMF (50 \mul), se obtuvo el compuesto del título (10 mg, 70%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 28,1 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,80-1,07 (m, 24H), 1,08-1,67 (m, 12H), 1,48 (s, 9H), 1,68-2,30 (m, 10H), 2,41 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,68 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,07-3,40 (m, 4H), 3,42-3,72 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,77 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J= 4,8, 1H), 5,25 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,31 (d, J= 9,7, 1H), 7,50 (d, J= 5,8, 1H), 7,85 (d, J= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,07, 14,25, 17,12, 17,92, 19,15, 21,11, 21,18, 23,80, 24,00, 24,06, 24,86, 25,08, 25,15, 27,58, 28,21, 28,82, 30,33, 31,18, 33,78, 34,28, 35,77, 36,65, 39,07, 39,45, 39,86, 46,91, 48,14, 48,47, 52,62, 55,49, 57,13, 58,42, 66,36, 66,80, 69,14, 70,84, 79,19, 80,55, 114,27, 130,29, 130,59, 154,12, 158,81, 168,25, 169,84, 170,72, 170,80, 170,90, 171,25, 174,89.
ESI-EM calc. para C_{57}H_{89}N_{7}O_{14} 1095,6. Encontrado m/z: 1096,9 (M+H)^{+}.
Ejemplo 96 Síntesis de [(5R)-1-(isobutiril)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano]^{7-9}-aplidina (9SISAPL1)
226
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SAPL4 (11 mg, 12,9 \mumol), 16 (5 mg, 15,4 \mumol), HATU (14 mg, HOAt (5 mg), NMM (3,6 \mul), DCM (155 \mul) y DMF (78 \mul), se obtuvo el compuesto del título (10 mg, 69%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 19 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,86-1,00 (m, 24H), 1,12 (d, J = 6,9, 3H), 1,18 (d, J = 6,6, 3H), 1,34 (t, J = 6,6, 2H), 0,90-1,30 (m, 7H), 1,56-2,25 (m, 16H), 2,30-2,80 (m, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,95-3,06 (m, 1H), 3,15-3,25 (m, 3 H), 3,65 (dd, 1H) 3,52-3,79 (m, 6H), 3,79 (s, 3H), 3,98-4,15 (m, 1H), 4,28 (dd, J_{1} = 6,6, J_{2} = 10,3, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,79-4,85 (m, 2H), 5,17 (d, J = 3,6, 1H), 5,40-5,44 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,06 (d, J = 8,7, 2H), 7,24 (d, J = 11,1, 1H), 7,90 (d, J =9,3, 1H), 8,56 (d, J = 5,1, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta: 11,50, 14,92, 15,22, 16,68, 16,95, 18,50, 18,59, 18,81, 20,94, 23,42, 23,80, 24,49, 24,68, 24,90, 25,11, 26,91, 27,98, 30,93, 31,30, 35,58, 33,88, 34,16, 35,85, 36,24, 38,64, 38,84, 39,71, 41,29, 47,01, 47,76, 49,42, 49,62, 52,66, 55,26, 55,73, 57,12, 58,21, 66,57, 67,40, 68,10, 70,79, 81,57, 114,07, 130,05, 130,31, 158,57, 168,12, 169,66, 170,08, 170,56, 171,13, 171,96, 172,37, 174,04, 175,41, 205,04.
ESI-EM calc. para C_{59}H_{91}N_{7}O_{14}: 1121,66. Encontrado: 1122,8 (M+H)^{+}.
Ejemplo 97 Síntesis de [Hiv]^{3}-[(5R)-1-(terc-butoxicarbonil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]-nonano]7-9-aplidina (9SISHPL1)
227
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SHPL4 (10 mg, 13 \mumol), 16 (4,5 mg, 14 \mumol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 \mul), DCM (150 \mul) y DMF (50 \mul), se obtuvo el compuesto del título (10 mg, 72%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 16,9 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,80-1,07 (m, 24H), 1,08-1,47 (m, 12H), 1,48-2,30 (m, 16H), 2,36 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,65 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,18 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 3,65 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,72 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J= 4,8, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,7, 2H), 7,07 (d, J= 8,7, 2H), 7,27 (d, J= 4,8, 1H), 7,88 (d, J= 9,7, 1H), 8,32 (d, J= 4,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{56}H_{87}N_{7}O_{13} 1065,6. Encontrado m/z: 1066,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 98 Síntesis de [(5R)-1-(piruvil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano]^{7-9}-aplidina (9SPSAPL1)
228
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAP3; partiendo de SAPL4 (10 mg, 11,7 \mumol), 17 (5 mg, 15,4 \mumol), HATU (12 mg), HOAt (5 mg), NMM (5 \mul), DCM (140 \mul) y DMF (70 \mul), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 63%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 14,4 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 0,90-1,00 (m, 24H), 1,05-1,40 (m, 12H), 1,40-2,25 (m, 16H), 2,27-2,41 (m, 1H), 2,42-2,70 (m, 3H), 2,54 (s, 3H), 2,92-2,98 (m, 1H), 3,12-3,38 (m, 4H), 3,54-3,78 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 4,01-4,12 (m, 2H), 4,20-4,26 (m, 2H), 4,57-4,62 (m, 2H), 4,77-4,82 (m, 2H), 535,18 (d, J = 3,0, 2H), 5,37-5,42 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,7, 2H), 7,07 (d, J = 8,7, 2H), 7,20 (d, J = 9,6, 1H), 7,85 (d, J = 9,6, 1H), 98,04 (d, J= 5,4, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,86, 14,97, 15,47, 16,78, 17,12, 18,84, 21,20, 21,27, 23,62, 24,14, 15,03, 25,15, 25,30, 27,35, 27,51, 28,19, 30,46, 31,52, 34,27, 35,95, 39,01, 40,07, 41,59, 47,25, 49,72, 53,08, 55,51, 55,81, 57,38, 58,21, 66,66, 68,19, 69,23, 70,74, 81,69, 85,15, 114,33, 130,13, 130,56, 158,85, 161,12, 168,49, 169,81, 169,91, 170,81, 171,38, 171,69, 172,60, 173,34, 197,64, 205,19.
ESI-EM calc. para C_{58}H_{87}N_{7}O_{15}: 1121,63. Encontrado 1122,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 99 Síntesis de [Hiv]^{3}-[(5R)-1-(piruvil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano]^{7-9}-aplidina (9SPSHPL1)
229
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SHPL4 (10 mg, 13 \mumol), 17 (4,5 mg, 14 \mumol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 \mul), DCM (150 \mul) y DMF (50 \mul), se obtuvo el compuesto del título (10 mg, 72%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 13,6 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,80-1,10 (24H, m), 1,11-1,80 (12H, m), 1,81-2,30 (10H, m), 2,45 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 3,07-3,43 (m, 6H), 3,52-3,77 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,29 (m, 1H) 4,63 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,03 (d, J= 4,3, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,29 (d, J= 8,7, 1H), 7,81 (d, J_{1}= 9,2, 1H), 7,87 (d, J= 4,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{55}H_{83}N_{7}O_{14}: 1065,6. Encontrado 1066,4 (M+H)^{+}.
Ejemplo 100 Síntesis de [Hiv]^{3}-[(5R)-1-(acriloil)-7-[(1R)-1-carboxi-3-metilbutil]-6-oxo-1,7-diazaespiro[4.4]nonano]^{7-9}-aplidina (9SASHPL1)
230
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de SAPL3, partiendo de SHPL4 (10 mg, 13 \mumol), 18 (5,8 mg, 14 \mumol), HATU (14 mg), HOAt (5 mg), NMM (6 \mul), DCM (150 \mul) y DMF (50 \mul), se obtuvo el compuesto del título (10 mg, 72%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, TR = 16,4 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,85-0,96 (m, 18H), 1,02-1,05 (m, 6H), 1,14-1,45 (m, 12H), 1,49-1,64 (m, 4H), 1,68-1,77 (m, 1H), 1,89-2,05 (m, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,10-2,28 (m, 4H), 2,43 (dd, J_{1}=7,8, J_{2}=17,1, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,60-2,68 (m, 1H), 2,97 (s a, 1H), 3,13-3,40 (m, 4H), 3,54-3,77 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,89-4,07 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 5,03 (d, J=4,4, 1H), 5,30 (d, J=20, 1H), 5,30-5,39 (m, 1H), 6,84 (d, J=8,3, 2H), 7,08 (d, J=8,3, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,88 (d, J=9,8, 1H), 8,23 (d, J=7,4, 1H).
ESI-EM calc. para C_{56}H_{85}N_{7}O_{13}: 1063,6. Encontrado 1064,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 101 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Z-Ala]^{9}-aplidina (9ZASHPL2)
231 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió DIPCDI (10 \mul, 64 \mumol) a un matraz que contenía Z-Ala-Pro-OH (36 mg, 112 \mumol) en DCM (0,4 ml) a 0ºC en atmósfera de argón, y se agitó la mezcla durante 60 min. Se añadió después una disolución de SHPL2 (20 mg, 22,5 \mumol) en DCM (0,2 ml) y se inactivó después de 3 d la reacción mediante la adición de HCl ac. (3 ml, 0,1 N). Se agitó la mezcla durante 5 min y se diluyó después con DCM (4 ml) y se lavó sucesivamente con KHSO_{4} ac. (4 ml, 10%), NaHCO_{3} ac. (4 ml, sat.) y salmuera (4 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. La purificación del residuo mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 18,2 min) proporcionó 9ZASHPL2 (30 mg, 67%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 18H), 1,52-2,70 (m, 6H), 2,45 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,96-3,38 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,52-3,72 (m, 5H), 3,85 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J_{1}= 5,3, 1H), 5,06 (m, 2H), 5,25 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,10 (d, J= 8,3, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,70 (d, J= 4,3, 1H), 7,77 (d, J= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,80, 13,97, 16,63, 17,02, 17,48, 18,93, 20,86, 21,15, 23,45, 23,76, 24,78, 25,96, 27,31, 27,92, 28,50, 30,06, 31,36, 33,44, 33,82, 35,66, 38,70, 39,38, 39,63, 46,54, 46,62, 46,98, 47,10, 48,19, 48,59, 54,89, 54,97, 55,22, 56,44, 56,90, 58,14, 66,16, 66,36, 68,95, 70,94, 78,78, 114,00, 127,75, 128,30, 129,90, 130,26, 156,31, 158,53, 168,67, 169,57, 170,06, 170,25, 170,65, 171,97, 173,08, 174,67.
ESI-EM calc. para C_{62}H_{92}N_{8}O_{15} 1188,67. Encontrado m/z 1189,7 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 102 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Boc-Ala]^{9}-aplidina (9BASHPL2) 
\vskip1.000000\baselineskip
232 
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Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ZASHPL2, a partir de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol), Boc-Ala-Pro-OH (17 mg, 57 \mumol), DIPCDI (5 \mul) y DCM (300 \mul), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 70%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, gradiente de ACN/H_{2}O 85:15-100:0 en 10 min (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 14,5 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) 80,82-1,10 (m, 24H), 1,12-1,50 (m, 15H), 1,40 (s, 9H), 1,52-2,70 (m, 9H), 2,45 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 3,00-3,43 (m, 4H), 3,10 (s, 3H), 3,62 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,90 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J_{1}= 4,3, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,76 (d, J=7,8, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,32 (d, J= 9,7, 1H), 7,73 (d, J= 4,8, 1H), 7,80 (d, J= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,06, 14,34, 16,88, 17,20, 17,77, 19,17, 21,10, 21,41, 23,72, 24,03, 25,06, 26,17, 27,60, 28,19, 28,60, 30,31, 31,63, 33,74, 35,96, 38,96, 38,93, 39,59, 39,86, 46,86, 47,27, 48,29, 48,45, 55,18, 55,42, 55,49, 56,59, 57,16, 58,44, 66,43, 69,14, 71,30, 79,05, 79,40, 114,29, 130,21, 130,54, 156,06, 158,83, 168,80, 169,87, 170,51, 170,64, 170,94, 171,31, 172,59, 173,45, 174,92.
ESI-EM calc. para C_{59}H_{94}N_{8}O_{15} 1154,68. Encontrado m/z 1155,6 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 103 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Ala]^{9}-aplidina (9ASHPL1)
233
Se añadió una disolución de ácido clorhídrico en dioxano anh. (1,5 ml, 5,3 N, 7,9 mmol) a un matraz que contenía 9BASHPL2 (8 mg, 6,92 \mumol). Se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 5 h o hasta la desaparición completa del material de partida (TLC). Después, se concentró la disolución a presión reducida, se disolvió el residuo en DCM y se concentró de nuevo. Se precipitó una espuma blanca con DCM/hex (2 ml/4 ml), proporcionando 9ASHPL1 (7,2 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
ESI-EM calc. para C_{54}H_{86}N_{8}O_{13} 1054,6. Encontrado m/z: 1055,6 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 104 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Boc-Pro]^{8}-didemnina A (BPSHPL2)
234
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ZASHPL2, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol), Boc-Pro-OH (13 mg, 57 \mumol), DIPCDI (5 \mul) y DCM (300 \mul), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 74%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, gradiente de ACN/H_{2}O 85:15-100:0 en 10 min (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 18,7 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 24H), 1,12-2,30 (m, 22H), 1,47 (s, 9H), 2,41 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,10-3,74 (m, 7H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 5,02 (d, J= 4,8, 1H), 5,16 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,17 (d, J= 6,3, 1H), 7,35 (d, J= 9,7, 1H), 7,85 (d, J= 9,7, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 12,04, 14,41, 16,76, 17,97, 19,12, 21,03, 21,66, 23,92, 24,00, 24,77, 25,09, 25,20, 27,53, 28,21, 28,72, 29,67, 30,35, 31,23, 33,80, 34,30, 36,24, 39,05, 39,37, 39,80, 46,90, 47,33, 48,42, 54,48, 55,49, 55,58, 55,84, 57,12, 58,08, 66,31, 69,11, 71,05, 79,23, 80,28, 114,29, 130,23, 130,59, 154,91, 158,82, 168,37, 169,88, 170,66, 170,86, 171,28, 171,40, 174,10, 174,79.
ESI-EM calc. para C_{56}H_{91}N_{7}O_{14}: 1085,6. Encontrado m/z: 1086,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 105 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Pro]^{8}-didemnina A (8PSHPL1)
235
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ASHPL1, partiendo de 8PSHPL2 (7 mg, 6,4 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (6 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
ESI-EM calc. para C_{51}H_{8}N_{7}O_{12}: 983,59. Encontrado m/z: 984,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 106 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Boc-Val]^{8}-didemnina A (8VSHPL2)
236
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ZASHPL2, partiendo de SHPL2 (10 mg, 11,2 \mumol), Boc-Val-OH (12 mg, 56 \mumol), DIPCDI (5 \mul) y DCM (300 \mul), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 82%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C18, gradiente de ACN/H_{2}O 85:15-100:0 en 10 min (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R} = 22,1 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 30H), 1,12-1,82 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,84-2,40 (m, 6H), 2,56 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,97 (m, 3H), 3,13 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,85 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 4,99 (d, J_{1} = 5,3, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 5,60 (d, J= 8,3, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,03 (d, J= 8,7, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,46 (d, J= 10,2, 1H), 7,84 (d, J= 9,2, 1H).
ESI-EM calc. para C_{56}H_{91}N_{7}O_{14}: 1085,6. Encontrado m/z: 1086,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 107 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Val]^{8}-didemnina A (8VSHPL1)
237
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ASHPL1, partiendo de 8VSHPL2 (8 mg, 7,4 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (7 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
ESI-EM calc. para C_{51}H_{83}N_{7}O_{12}: 985,61. Encontrado: (m/z): 986,6 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 108 Síntesis de [Hiv]^{3}-[Val]^{8}-[isobutiril]^{9}-didemnina A (8V9ISHPL1)
238
Se añadieron NMM (3,3 \mul, 30 \mumol) y cloruro de isobutirilo (2 \mul, 19 \mumol) a una disolución de SVSHPL1 (6 mg, 5,8 \mumol) en DCM (200 \mul) a 0ºC en atmósfera de Ar. Después de 5 h de agitación a TA, se diluyó la mezcla de reacción con DCM (5 ml) y se lavó sucesivasmente con KHSO_{4} ac. (5 ml, al 10%), HCO_{3}Na ac. (5 ml, sat.) y salmuera (5 ml). Se secó la disolución orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando SV9ISHPL1 (6 mg, 97%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,82-1,10 (m, 36H), 1,12-1,85 (m, 10H), 1,90-2,45 (m, 6H), 2,56 (s, 3H) 2,90 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,13 (m, 2H), 3,36 (dd, J_{1}=4,3, J_{2}=14,1, 1H), 3,64 (m, 6H), 3,78 (s, 3H), 3,87 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,34 (m, 2H), 4,61 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,98 (d, J= 4,8, 1H), 5,17 (m, 2H), 6,24 (d, J= 6,3, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,32 (d, J= 6,3, 1H), 7,35 (d, J= 4,3, 1H), 7,81 (d, J= 9,7, 1H).
ESI-EM calc. para C_{55}H_{89}N_{7}O_{13}, 1055,6. Encontrado m/z: 1056,7 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 109 Síntesis de [cumarin]^{8}-didemnina A (8CSAPL1)
239
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ZASHPL2, partiendo de SAPL2 (20 mg, 21 \mumol) y ácido cumarin-3-carboxílico (20 mg, 107 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (18 mg, 76%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (HyperPrep PEP 100 C 18, ACN/H_{2}O isocrático 85:15 (flujo: 7 ml/min, 250x21 mm, a 270 nm, T_{R}= 16,5 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,78-1,00 (m, 24H), 1,20-2,50 (m, 22H), 2,56 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,08-3,25 (m, 2H), 3,90 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,92-4,25 (m, 3H), 4,60 (m, 1H), 4,80 (m, 2H), 5,15 (m, 1H), 5,18 (d, J= 3,4, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,08 (d, J= 8,3, 2H), 7,20 (d, J= 6,3, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (d, J= 9,7, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,96 (m, 1H), 8,23 (m, 1H).
ESI-EM calc. para C_{59}H_{82}N_{6}O_{15}: 1114,58. Encontrado: 1116,3 (M+H)^{+}.
Ejemplo 110 Síntesis de éster metílico del ácido cumarin-3-carbonilaminoacético (8G9C2)
240
Se añadieron en atmósfera de Ar clorhidrato de N'-(3-dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida (EDC) (479 mg, 2,50 mmol) y DMAP (489 mg, 4,00 mmol) a temperatura ambiente a un matraz de fondo redondo que contenía metilglicina (89 mg, 1,00 mmol), 3-carboxicumarina, DCM anh. (25 ml). Se agitó la mezcla resultante durante 1 h 30 min (se observó conversión total mediante TLC). Después, se añadió DCM (20 ml) y se lavó la disolución sucesivamente con NaHCO_{3} ac. (10 ml, sat.) y salmuera (10 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. Se purificó el sólido naranja resultante mediante CL ultrarrápida (gel de sílice, gradiente de hex:AcOEt 1:1 a 2:1), dando el compuesto del título (445 mg, cuant.) en forma de un aceite incoloro. F_{R}= 0,08 (Hex/AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,79 (s, 3H), 4,25 (d, J= 5,4, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,74 (d, J= 7,3, 1H), 7,68 (m, 2H), 8,91 (s, 1H), 9,25 (s, 1H).
ESI-EM calc. para C_{13}H_{11}NO_{5}: 261,06. Encontrado: 283,1 (M+Na)^{+}.
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Ejemplo 111 Síntesis de ácido cumarin-3-carbonilaminoacético (8G9C1)
241
Se añadió gota a gota una disolución de LiOH en H_{2}O (0,2 M) a una disolución de éster metílico del ácido cumarin-3-carbonilaminoacético (312 mg, 1,19 mmol) en THF (12 ml) en atmósfera de Ar a 0ºC (baño de hielo). Se agitó vigorosamente la mezcla de reacción a temperatura ambiente hasta observar una conversión total por TLC (2 horas). Se concentró parcialmente la disolución y se añadió Et_{2}O (10 ml). Se lavó la fase orgánica con NaHCO_{3} (10 ml, sat.), se acidificaron las fases acuosa con KHSO_{4} al 10% (pH= 3-4) y se extrajeron con éter (3x20 ml). Se concentró la fase orgánica a presión reducida, proporcionando 8G9C1 (280 mg, 95%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,18 (d, J= 5,3, 2H), 7,41 (m, 1H), 7,45 (d, J= 7,8, 1H), 7,74 (d, J= 7,3, 1H), 7,78 (t, J= 8,3, 1H), 7,85 (d, J= 7,8, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,41 (m, 1H).
ESI-EM calc. para C_{12}H_{9}NO_{5}: 247,05. Encontrado: 248,0 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 112 Síntesis de [Gly]^{8}-[cumarina]^{9}-didemnina A (8G9CSAPL1)
242
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ZASHPL2, partiendo de SAPL2 (20 mg, 21 \mumol) y ácido cumarin-3-carbonilaminoacético (26 mg, 105 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (18 mg, 72%) en forma de un sólido blanco después de HPLC (Symetry Prep^{TM} C18, ACN/H_{2}O isocrático 60:40 (flujo: 3 ml/min, 150x7,8 mm, a 270 nm, T_{R} = 17,5 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,85-0,94 (m, 24H), 1,23-2,17 (m, 21H), 2,30-2,44 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,10-3,24 (m, 2H), 3,40 (dd, J_{1} = 5,4, J_{2} = 14,2, 1H), 3,59-3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,99-4,21 (m, 4H), 4,37-4,44 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,81 (t, J=9,8, 1H), 5,18 (d, J= 3,4, 1H), 5,25 (dd, J_{1} = 2,9, J_{2} = 5,9, 1H), 5,20-5,45 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,08 (d, J= 8,3, 2H), 7,19-7,28 (m, 1H), 7,34-7,42 (m, 2H), 7,63-7,72 (m, 2H), 7,88 (d, J= 8,3, 2H), 9,00 (s, 1H), 9,57 (m, 1H).
ESI-EM calculado para C_{61}H_{85}N_{7}O_{16}: 1171,61. Encontrado: 1172,5 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 113 Síntesis de N-metilsulfonil-Pro-OBz (P2) 
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243 
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Se añadieron gota a gota mediante jeringuilla DIPEA (0,7 \mul) y cloruro de metanosulfonilo (116 \mul) a una disolución de Pro-OBn (HCl) (300 mg, 1,24 mmol) en DCM (25 ml, anh.) a 0ºC en atmósfera de Ar. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió DCM (10 ml) y se lavó la disolución sucesivamente con KHSO_{4} ac. (15 ml, 10%), NaHCO_{3} ac. (15 ml, sat.) y salmuera (15 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando P2 puro (350 mg, 1,24 mmol, cuant.) en forma de un sólido blanco. F_{R}= 0,55 (Hex/AcOEt 1:1).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,91-2,08 (m, 3H), 2,19-2,31 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 3,38-3,54 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 4,51 (dd, J_{1}= 3,4, J_{2}= 8,3, 1H), 5,11 (d, J= 12,2, 1H), 5,18 (d, J= 12,2, 1H), 7,31 (m, 5H).
ESI-EM calc. para C_{13}H_{17}NO_{4}S: 283,09. Encontrado: 284,1 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 114 Síntesis de N-metilsulfonil-Pro-OH (P1) 
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244 
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Se saturó con H_{2} una mezcla desgasificada de N-metilsulfonil-Pro-OBz (P2) (250 mg, 0,88 mmol) y Pd(OH)_{2}/C (20% de Pd, 100 mg, 40% p/p) en IPA:H_{2}O (26 ml:13 ml), y se mantuvo a 101,3 kPa de gas hidrógeno con agitación durante 3 h. Después, se filtró la mezcla a través de un filtro de teflón (0,45 \mum) y se concentró a vacío, proporcionando el compuesto del título (128 mg, 75% de rendimiento) en forma de un sólido blanco sin purificación adicional.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,94-2,03 (m, 2H), 2,07-2,14 (m, 1H), 2,22-2,35 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 4,44 (dd, J_{1}= 3,9, J_{2}= 8,8, 2H), 9,10 (m, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 24,96, 31,08, 38,46, 48,06, 60,66, 174,75.
ESI-EM calc. para C_{6}H_{11}NO_{4}S: 193,22. Encontrado: 194,0 (M+H)^{+}.
Ejemplo 115 Síntesis de [metilsulfonil]^{9}-aplidina (9MSAPL1) 
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245 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis de 9ZASHPL2, partiendo de SAPL2 (10 mg, 10,7 \mumol) y N-metilsulfonil-Pro-OH (10 mg, 53 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 74%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (Symmetry Prep C18, ACN/H_{2}O isocrático 60:40 (flujo: 3 ml/min, 150x7,8 mm, a 270 nm, T_{R} = 9 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,78-1,00 (m, 24H), 1,20-2,50 (m, 26H), 2,56 (s, 3H), 2,93 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,08-3,25 (m, 2H), 3,28-3,50 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,05 (m, 2H), 4,17 (m, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,81 (m, 2H), 5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J= 3,4, 1H), 5,33 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 6,86 (m, 1H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,09 (m, 1H), 7,82 (d, J= 9,2, 1H).
ESI-EM calc. para C55H_{87}N_{7}O_{15}S: 1117,60. Encontrado: 1118,7 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 116 Síntesis de [metilsulfonil]^{8}-didemnina A (8MSAPL1) 
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246 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron DIPEA (3 \mul) y cloruro de metanosulfonilo (0,85 \mul) a una disolución de SAPL2 (10 mg, 10,7 \mumol) en DCM (200 \mul, anh.) a 0ºC en atmósfera de Ar. Se agitó la mezcla de reacción a 5ºC durante una noche. Se añadió DCM (10 ml) y se lavó la disolución sucesivamente con KHSO_{4} ac. (5 ml, al 10%), NaHCO_{3} ac. (5 ml, sat.) y salmuera (5 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando 8MSAPL1 puro (11 mg, cuant.) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,83-0,97 (m, 24H), 1,10-1,45 (m, 10H), 1,50-1,65 (m, 5H), 1,76-1,82 (m, 2H), 2,00-2,20 (m, 3H), 2,27-2,36 (m, 1H), 2,45-2,55 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,08 (d, J=16,6, 1H), 3,17 (dd, J_{1}=10,7, J_{2}= 14,1, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,99-4,11 (m, 3H), 4,49 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,78 (m, 2H), 5,06 (m, 1H), 5,19 (d, J= 3,9, 1H), 6,68 (d, J= 8,8, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,33 (d, J= 9,8, 1H), 7,61 (d, J= 8,8, 1H).
ESI-EM calc. para C_{50}H_{80}N_{6}O_{14}S: 1020,55. Encontrado: 1022,1 (M+H)^{+}.
Ejemplo 117 Síntesis de [biotina]^{8}-didemnina A (8BISAPL1)
247
Se añadió gota a gota mediante jeringuilla NMM a una disolución de HATU (24 mg, 61 \mumol), HOAt (8 mg, 63 \mumol), SAPL2 (20 mg, 21,4 \mumol) y d-biotina (7,8 mg, 32 \mumol), en DCM anh. (400 \mul) a 0ºC en atmósfera de Ar. Se agitó la mezcla resultante durante 2 h a 0ºC y después a temperatura ambiente durante 14 h adicionales. Se añadió DCM (10 ml) y se lavó la disolución sucesivamente con KHSO_{4} ac. (5 ml, al 10%), NaHCO_{3} ac. (5 ml, sat.) y salmuera (5 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida. Se obtuvo el compuesto del título (18 mg, 72%) en forma de un sólido blanco después de purificación mediante HPLC (Symetry Prep C18, gradiente de ACN/H_{2}O 60:40-100:0 en 10 min (flujo: 3 ml/min, 150x7,8 mm, a 270 nm, T_{R} = 6 min).
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,78-1,00 (m, 24H), 1,20-1,98 (m, 23H), 2,00-2,62 (m, 7H), 2,53 (s, 3H), 2,80-3,00 (m, 2H), 2,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,01 (m, 2H), 4,10 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,82 (m, 2H), 5,00 (m, 1H), 5,14 (m, 2H), 5,67 (s, 1H), 6,23 (s, 1H), 6,84 (d, J= 8,3, 2H), 7,07 (d, J= 8,3, 2H), 7,28 (d, J= 8,5, 1H), 7,35 (d, J= 7,8, 1H), 8,01 (d, J= 8,7, 1H).
ESI-EM calc. para C_{59}H_{92}N_{8}O_{14}S: 1168,65. Encontrado: 1169,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 118 Síntesis de [fenilurea]^{8}-didemnina A (8PUSAPL1)
248
Se añadió fenilisocianato (1,3 \mul, 12 \mumol) a una disolución de SAPL2 (10 mg, 10,7 \mumol) en DCM (200 \mul, anh.) a 0ºC en atmósfera de Ar y se agitó la mezcla de reacción a TA durante 4 horas. Se añadió DCM (10 ml) y se lavó la disolución sucesivamente con KHSO_{4} ac. (5 ml, al 10%), NaHCO_{3} ac. (5 ml, sat.) y salmuera (5 ml). Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO4), se filtró y se concentró a presión reducida, proporcionando 8PUSAPL1 puro (11 mg, 94%) en forma de un sólido blanco.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,85-0,94 (m, 24H), 1,11-1,43 (m, 4H), 1,22 (d, J=6,8, 3H), 1,35 (d, J=6,8, 3H), 1,49-1,83 (m, 5H), 1,73 (s, 3H), 2,02 (m, 1H), 2,14 (m, 2H), 2,34 (dt, J_{1}=3,4, J_{2}=6,8, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,04 (d, J=16,6, 1H), 3,17 (dd, J_{1}=11,2, J_{2}= 14,6, 1H), 3,36 (dd, J_{1}=3,9, J_{2}=14,2, 1H), 3,57 (dd, J_{1}=4,4, J_{2}= 10,7, 1H), 3,59-3,63 (m, 1H), 3,67-3,75 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,96-4,10 (m, 2H), 4,19 (c, J=6,8, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,74 (dd, J_{1}=3,9, J_{2}= 8,8, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,05 (m, 2H), 5,17 (d, J= 3,4, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,84 (d, J=8,3, 2H), 7,03-7,09 (m, 3H), 7,22-7,32 (m, 4H), 7,39 (d, J= 8,3, 2H), 7,93 (d, J=8,8, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,70, 15,51, 17,16, 18,74, 21,11, 22,41, 23,29, 23,98, 24,94, 25,10, 25,32, 26,97, 28,18, 30,36, 31,57, 34,44, 36,51, 38,86, 41,64, 45,23, 47,30, 49,80, 50,08, 54,60, 55,50, 56,06, 57,51, 62,77, 66,45, 68,17, 70,72, 81,93, 114,36, 120,76, 123,86, 129,12, 130,04, 130,57, 138,78, 141,00, 157,78, 158,87, 169,92, 170,68, 171,49, 172,43, 173,44, 181,47, 192,38, 204,93, 206,66.
ESI-EM calc. para C_{56}H_{83}N_{7}O_{13}: 1161,60. Encontrado: 1062,6 (M+H)^{+}.
Ejemplo 119 Síntesis de [feniltiourea]^{8}-didemnina A (8PTSAPL1)
249
Siguiendo el procedimiento para la síntesis de 8PUSAPL1, partiendo de SAPL2 (10 mg, 10,7 \mumol) y feniltioisocianato (1,3 \mul, 12 \mumol), se obtuvo después de 15 h de agitación el compuesto del título (11 mg, 93%) en forma de un sólido blanco sin purificación adicional.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,84-0,99 (m, 24H), 1,14-1,46 (m, 9H), 1,46-1,78 (m, 9H), 1,98-2,19 (m, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,91 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 3,08-3,21 (m, 1H), 3,36 (dd, J_{1} = 4,4, J_{2} = 14,1, 1H), 3,55-3,64 (m, 2H), 3,66-3,74 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,96-4,12 (m, 2H), 4,21 (c, J=6,8, 1H), 4,59 (t, J=5,3, 1H), 4,75 (dd, J_{1} = 3,4, J_{2} = 8,3, 1H), 4,83 (t, J=10,3, 1H), 5,05-5,12 (m, 2H), 5,16 (d, J= 3,4, 1H), 6,30 (t, J=7,3, 1H), 6,84 (d, J=8,3, 2H), 7,07 (d, J=8,3, 2H), 7,21-7,37 (m, 6H), 7,93 (d, J= 8,8, 1H), 8,08 (d, J=8,8, 1H).
RMN-^{13}C (75 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,68, 15,28, 15,85, 17,15, 18,73, 21,12, 22,73, 23,66, 24,01, 25,13, 25,33, 26,62, 28,16, 29,92, 31,53, 32,42, 32,90, 34,41, 36,77, 38,86, 41,69, 47,28, 50,12, 55,50, 56,48, 57,51, 59,87, 66,47, 70,75, 81,91, 114,37, 125,25, 125,95, 126,57, 127,54, 129,12, 129,77, 130,06, 130,57, 135,43, 158,88, 168,54, 169,90, 170,70, 171,49, 172,38, 190,41.
ESI-EM calc. para C_{56}H_{83}N_{7}O_{12}S: 1077,58. Encontrado: 1078,5 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 120 Síntesis de [butilurea]^{8}-didemnina A (8BUSAPL1)
250
Siguiendo el procedimiento para la síntesis de 8PUSAPL1, partiendo de SAPL2 (10 mg, 10,7 \mumol) y butiltioisocianato (1,4 \mul, 12 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (9 mg, 78%) después de 4 h de agitación en forma de un sólido blanco sin purificación adicional.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,85-0,94 (m, 24H), 1,10-1,80 (m, 24H), 2,03 (m, 1H), 2,13 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,72 (s, 3H), 3,02 (d, J=16,1, 1H), 3,17 (dd, J_{1}=11,2, J_{2}= 14,2, 1H), 3,23-3,40 (m, 3H), 3,62-3,78 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,03 (m, 2H), 4,19 (c, J=6,8, 1H), 4,58 (m, 2H), 4,71 (dd, J_{1}=3,4, J_{2}= 8,3, 1H), 4,82 (m, 1H), 5,00 (m, 2H), 5,16 (d, J= 3,4, 1H), 5,22-5,28 (m, 2H), 6,85 (d, J=8,8, 2H), 7,08 (d, J= 8,3, 2H), 7,21-7,29 (m, 1H), 7,96 (d, J= 9,2, 1H).
ESI-EM calc. para C_{54}H_{87}N_{7}O_{13}: 1041,64. Encontrado: 1042,7 (M+H)^{+}.
Ejemplo 121 Síntesis de [butiltiourea]^{8}-didemnina A (8BTSAPL1)
251
Siguiendo el procedimiento para la síntesis de 8PUSAPL1, partiendo de SAPL2 (10 mg, 10,7 \mumol) y butiltioisocianato (1,5 \mul, 12 \mumol), se obtuvo el compuesto del título (10 mg, 86%) después de 15 h de reacción en forma de un sólido blanco sin purificación adicional.
RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,86-0,97 (m, 24H), 1,14-1,78 (m, 27H), 1,99-2,14 (m, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,01 (d, J= 16,6, 1H), 3,16 (dd, J_{1}=11,2, J_{2}= 14,6, 1H), 3,36 (dd, J_{1}=4,4, J_{2}= 14,2, 1H), 3,49-3,74 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,02 (d, J= 6,8, 2H), 4,21 (c, J=6,8, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,70 (dd, J_{1}=2,9, J_{2}= 8,3, 1H), 4,82 (t, J=10,3, 1H), 5,07-5,12 (m, 2H), 5,09 (d, J= 3,9, 1H), 5,60 (m, 1H), 6,36 (dd, J_{1}=5,4, J_{2}= 8,3, 1H), 6,84 (d, J=8,8, 2H), 7,08 (d, J=8,8, 2H), 7,84 (d, J= 8,3, 1H), 7,91 (d, J= 9,3, 1H).
ESI-EM calc. para C_{54}H_{87}N_{7}O_{12}S: 1057,61. Encontrado: 1080,7 (M+Na)^{+}.

Claims (32)

1. Un compuesto de la fórmula:
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252 
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en la que:
X es independientemente -C(R)_{2}-, -O-, -S- o -NR-, en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
Y es CO o -COCHCH_{3}CO-
R_{4} es H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo amido RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es como se ha definido, un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno,
X_{1} es O o S; y
cuando Y es CO, entonces
a) X_{2} es CR, O (y R_{2} está ausente), S (y R_{2} está ausente), o N, en los que R es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y sus derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; y
R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo amido RCONH- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo guanidino o un grupo halógeno [y R_{1} o R_{2}, cuando X_{2} es N, y R_{4} pueden ser adicionalmente -SO_{2}R, en el que R es como se ha definido]; o
b) siendo Aa8 de fórmula:
253 
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en la que R_{3} es independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo RSO_{2}- o un grupo acilo RCO-, en el que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
c) R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, en los que los sustituyentes opcionales se seleccionan de grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo, grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; o
d) aa8 se reemplaza por un grupo orgánico seleccionado de un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo RSO_{2}- o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
cuando Y es -COCHCH_{3}CO-, entonces
a) X_{2} es N, y R_{1} y R_{2} son cada uno independientemente H o un grupo orgánico seleccionado de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo amido RCONH-, un grupo -SO_{2}R o un grupo acilo RCO-, en los que R es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo heterocíclico, un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno, o
b) siendo Aa8 de fórmula:
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254 
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en la que R_{3} es RSO_{2}-, en el que R es alquilo o R_{3} es un grupo alquenilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
c) R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, en los que los sustituyentes opcionales se seleccionan de grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo, grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo carbonilo, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino opcionalmente protegido, un grupo guanidino o un grupo halógeno; o
d) aa8 se remplaza por un grupo orgánico seleccionado de un grupo arilo, un grupo aralquilo o un grupo RSO_{2}-, en el que R es un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo aralquilo y derivados sustituidos con uno o más de un grupo alcoxi, un grupo hidroxi, un grupo mercapto, un grupo amino, un grupo guanidino o un grupo halógeno;
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, con la condición de que el compuesto no sea uno de
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255
o
256 
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2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es -NR-, en el que R es como se ha definido.
3. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que X es -NH- o -NMe-.
4. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que X es -NH-.
5. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es -O-.
6. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Y es -CO-.
7. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es -NH- o -O- e Y es -COCHCH_{3}CO- o -CO-.
8. Un compuesto según cualquier reivindicación precedente, en el que R_{4} es metilo.
9. Un compuesto según cualquier reivindicación precedente, en el que X_{1} es O.
10. Un compuesto según cualquier reivindicación precedente, en el que X_{2}R_{1} es un grupo aralquiloxi opcionalmente sustituido.
11. Un compuesto según la reivindicación 10, en el que X_{2}R_{1} es un grupo benciloxi.
12. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que X_{2}R_{1} es un grupo amino opcionalmente sustituido.
13. Un compuesto según la reivindicación 12, en el que X_{2}R_{1} es un grupo -NHR_{1}, en el que R_{1} es un grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo o grupo aralquilo opcionalmente sustituidos.
14. Un compuesto según la reivindicación 13, en el que R_{1} es un grupo alquilo o un grupo arilo.
15. Un compuesto según la reivindicación 14, en el que R_{1} es un grupo fenilo o un grupo butilo.
16. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que X_{2}R_{1} es un grupo alquilo opcionalmente sustituido.
17. Un compuesto según la reivindicación 16, en el que X_{2}R_{1} es un grupo propilo, grupo isopropilo, grupo pentilo o grupo biotina.
18. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que -C(=O)X_{2}R_{1}R_{2} forma un grupo acilo de aminoácido opcionalmente sustituido.
19. Un compuesto según la reivindicación 18, en el que el grupo acilo de aminoácido opcionalmente sustituido es prolina opcionalmente sustituida.
20. Un compuesto según la reivindicación 19, en el que la prolina opcionalmente sustituida es norvalina-prolina opcionalmente sustituida, alanina-prolina opcionalmente sustituida, Boc-prolina o alquilprolina opcionalmente sustituida.
21. Un compuesto según la reivindicación 19, en el que la prolina opcionalmente sustituida es norvalina-prolina, Z-norvalina-prolina, alanina-prolina, Z-alanina-prolina, Boc-alanina-prolina, isobutirilprolina o D-lactilprolina opcionalmente protegida.
22. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que X_{1} es S y X_{2}R_{1} es un grupo -NHR_{1}, en el que R_{1} es un grupo alquilo, grupo alquenilo, grupo arilo o grupo aralquilo opcionalmente sustituidos.
23. Un compuesto según la reivindicación 22, en el que R_{1} es un grupo alquilo o un grupo arilo.
24. Un compuesto según la reivindicación 23, en el que R_{1} es un grupo fenilo o un grupo butilo.
25. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R_{1} y R_{2} forman con X_{2} un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido.
26. Un compuesto según la reivindicación 25, en el que el grupo heterocíclico es cumarina.
27. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que aa8 está reemplazado por un grupo orgánico RSO_{2}, en el que R es como se ha definido.
28. Un compuesto según la reivindicación 27, en el que R es metilo.
\vskip1.000000\baselineskip
29. Un compuesto según la reivindicación 1, que se selecciona de:
8-[fenilurea]-didemnina A,
8-[butilurea]-didemnina A,
3-[Val]-8-[isobutiril]-didemnina A,
3-[Hiv]-9-[isobutiril]-aplidina,
3-[Val]-9-[isobutiril]-aplidina,
3-[Hiv]-8-[isobutiril]-didemnina A,
3-[Hiv]-9-[Ala]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[Nva-Pro]-aplidina,
8-[feniltiourea]-didemnina A,
8-[cumarina]-didemnina A,
8-[butiltiourea]-didemnina A,
8-[metilsulfonil]-didemnina A,
3-[Val]-Z-didemnina A,
3-[Hiv]-8-[Val]-didemnina A,
3-[Hiv]-8-[butiril]-didemnina A,
3-[Hiv]-9-[Z-ala]-aplidina,
3-[Hiv]-Z-didemnina A,
3-[Hiv]-9-[Z-Nva-Pro]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[Boc-Ala]-aplidina,
3-[Hiv]-8-[Boc-Val]-didemnina A,
9-[metilsulfonil]aplidina,
3-[Hiv]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Hiv]-8-[Val]-9-[isobutiril]didemnina A; o
3-[Hiv]-8-[hexanoil]-didemnina A.
\vskip1.000000\baselineskip
30. Un compuesto que se selecciona de:
9-[norvalina]aplidina,
3-[Val]-didemnina A,
3-[Hiv]-didemnina A,
9-[Z-Nva]-aplidina,
8-[Gly]-9-[cumarina]didemnina A,
8-[biotina]-didemnina A,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[Boc]-aplidina,
7,8-[espiro]-9-[pyr]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidina,
7,8-[espiro]-9-[Boc]-aplidina,
3-[val]-9-[lac(OTBDMS)]-aplidina,
3-[Hiv]-9-[D-lac(OTBDMS)]-aplidina,
7,8-[espiro]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[pyr]-aplidina,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[isobutiril]aplidina,
3-[Hiv]-7,8-[espiro]-9-[acriloil]aplidina, o
3-[Aip]-aplidina.
\vskip1.000000\baselineskip
31. Un compuesto según la reivindicación 29, que es 8-[fenilurea]didemnina A.
32. Un compuesto según cualquier reivindicación precedente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.
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