ES2307040T3 - Derivados de pirimidilpirrol activos como inhibidores de cinasa. - Google Patents

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Roberto D'alessio
Marcellino Tibolla
Mario Varasi
Alessia Montagnoli
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Paolo Orsini
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I) para tratar trastornos de la proliferación celular causados y/o asociados con una alteración de la actividad de la proteína cinasa seleccionados del grupo compuesto por cáncer, enfermedad de Alzheimer, infecciones víricas, enfermedades autoinmunitarias, trastornos neurodegenerativos, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgica, en los que el compuesto debe administrarse en una cantidad eficaz a un mamífero que lo necesite. (Ver fórmula) en la que R es un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de amino, arilamino, alquilamino C 1-C 6 opcionalmente sustituido, arilaquilamino opcionalmente sustituido, heteroarilalquilamino, dialquilamino C 1-C 6 y acilamino; R1 y R2 son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o de halógeno, un grupo alquilo C1-C6 de cadena lineal o ramificada, un grupo amino o arilamino o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, R1 y R2 pueden formar un grupo divalente -NH-CH=N, -N=CH-NH o -NH-CH=CH; R3, R''3, R4 y R''4 son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de alquilo C1-C6 de cadena lineal o ramificada, cicloalquilo C3-C6, heterociclilo, arilo, cicloalquil-alquilo, heterociclil-alquilo o aril-alquilo; o R3 y R''3 o R4 y R''4, tomados juntos, forman un grupo alquilo C 3-C 6 cíclico; R5 es un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo alquilo C1-C6 de cadena lineal o ramificada y sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

Derivados de pirimidilpirrol activos como inhibidores de cinasa.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a derivados de pirimidilpirrol, a un procedimiento para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los comprendan y a su uso como agentes terapéuticos, particularmente en el tratamiento del cáncer y de los trastornos de la proliferación celular.
Discusión de los antecedentes
El mal funcionamiento de las proteínas cinasas (PK) es la característica de numerosas enfermedades. Un gran número de oncogenes y protoocogenes implicados en los cáncer humanos codifican PK. Las actividades potenciadas de las PK también están implicadas en muchas enfermedades no malignas, como hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis, artritis y estenosis y reestenosis posquirúrgica.
Las PK también están implicadas en afecciones inflamatorias y en la multiplicación de virus y parásitos. Las PK pueden también desempeñar una función principal en la patogenia y desarrollo de los trastornos neurodegenerativos.
Para una referencia general al malfuncionamiento o alteración de la regulación de las PK véase, por ejemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465.
Entre las diversas proteína cinasas conocidas en la técnica como implicadas en el crecimiento de las células cancerosas es Cdc7, una serina-treonina cinasa conservada en la evolución, que desempeña un papel central en la vinculación de la regulación del ciclo celular con la duplicación del genoma, siendo esencial para el desencadenamiento de los orígenes de replicación en el ADN (véase Montagnoli A. y col., EMBO Journal, Vol. 21, Nº 12, pág. 3171-3181, 2002).
El documento 03/027114 describe derivados de 1,5,6,7-tetrahidropirrolo[3,2-c]piridina, de los que se ha descubierto que suprimen el apetito e inducen pérdida de peso.
Resumen de la invención
Es un objeto de la invención proporcionar compuestos útiles, en terapia, como agentes contra un huésped de enfermedades causadas por y/o asociadas con una alteración de la regulación de la actividad de la proteína cinasa y, más particularmente, actividad de Cdk2 y Cdc7.
Es otro objeto proporcionar compuestos, dotados de actividad inhibidora de proteína cinasa y, más particularmente, de actividad inhibidora de Cdk2 y Cdc7.
Ahora, los presentes autores han descubierto que algunos piridilpirroles están dotados de actividad inhibidora de proteínas cinasas, por ejemplo actividad inhibidora de Cdk2 y, especialmente, de Cdc7.
Más específicamente, los compuestos de esta invención son útiles en el tratamiento de varios tipos de cáncer, entre los que se incluyen: carcinoma, tal como de vejiga urinaria, de mama, de colon, de riñón, de hígado, de pulmón, incluido el cáncer de pulmón de células pequeñas, de esófago, de vesícula biliar, de ovarios, de páncreas, de estómago, de cuello uterino, de tiroides, de próstata y de piel, incluido el carcinoma espinocelular; tumores hematopoyéticos de línea linfoide, incluidos leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células peludas y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de línea mieloide, incluidos las leucemias mielógenas crónicas y agudas, el síndrome mielodisplásico y la leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimatoso, incluidos fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluidos astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwanomas; otros tumores, incluidos melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratosarcoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.
Debido al papel fundamental que las PK Cdk2 y CD7 desempeñan en la regulación de la proliferación celular, estos pirimidilpirroles también son útiles en el tratamiento de varios trastornos de proliferación celular, tal como la hiperplasia prostática benigna, la adenomatosis familiar, la poliposis, la neurofibromatosis, la psoriasis, la proliferación de células lisas vasculares asociada con la aterosclerosis, la fibrosis pulmonar, la artritis, la glomerulonefritis y la estenosis y restenosis posquirúrgica.
Los compuestos de la invención también pueden ser activos como inhibidores de otras proteínas cinasas tales como, por ejemplo, la proteína cinasa C en diferentes isoformas, Met, PAK-4, PAK-5, STLK-2, DDR-2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, PLK, Chk1, Chk2, HER2, raf2, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, VEFG-R, PI3K, cinasa weel, Src, Abl, Akt, ILK, MK-2, IKK-2, Cdk en diferentes isoformas, Nek, y, por tanto, ser eficaces en el tratamiento de enfermedades asociadas con otras proteínas cinasas.
En consecuencia, en una primera forma de realización, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) para la fabricación de un medicamento para tratar los trastornos de proliferación celular causados por y/o asociados con una alteración de la actividad de la proteína cinasa seleccionados del grupo compuesto por cáncer, enfermedad de Alzheimer, infecciones víricas, enfermedades autoinmunitarias, trastornos neurodegenerativos, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgica, en los que el compuesto debe administrarse en una cantidad eficaz a un mamífero que lo necesite,
1
en la que
R es un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de amino, arilamino, alquilamino C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido, arilalquilamino opcionalmente sustituido, heteroarilalquilamino, dialquilamino C_{1}-C_{6} y acilamino.
R_{1} y R_{2} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o de halógeno, un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, un grupo amino o arilamino o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, R_{1} y R_{2} pueden formar un grupo divalente -NH-CH=N, -N=CH-NH o -NH-CH=CH;
R_{3}, R'_{3}, R_{4} y R'_{4} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, heterociclilo, arilo, cicloalquil-alquilo, heterociclil-alquilo o aril-alquilo; o R_{3} y R'_{3} o R_{4} y R'_{4}, tomados juntos, forman un grupo alquilo C_{3}-C_{6} cíclico;
R_{5} es un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada y sus sales farmacéuticamente aceptables.
El uso anterior permite el tratamiento de trastornos de proliferación celular causados y/o asociados con una alteración de la actividad cinasa de Cdc7.
En una forma de realización preferida del uso descrito antes, el trastorno de proliferación celular es cáncer.
Entre los tipos específicos de cáncer que se pueden tratar se incluyen carcinoma, carcinoma espinocelular, tumores hematopoyéticos de línea mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatoso, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.
La presente invención también proporciona un derivado de pirimidilpirrol que está representado por la fórmula (I)
2
en la que
R es un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de amino, arilamino, alquilamino C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido, arilalquilamino opcionalmente sustituido, heteroarilalquilamino, dialquilamino C_{1}-C_{6} y acilamino.
R_{1} y R_{2} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o de halógeno, un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, un grupo amino o arilamino o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, R_{1} y R_{2} pueden formar un grupo divalente -NH-CH=N, -N=CH-NH o -NH-CH=CH;
R_{3}, R'_{3}, R_{4} y R'_{4} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, heterociclilo, arilo, cicloalquil-alquilo, heterociclil-alquilo o aril-alquilo; o R_{3} y R'_{3} o R_{4} y R'_{4}, tomados juntos, forman un grupo alquilo C_{3}-C_{8} cíclico;
R_{5} es un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que se excluya el compuesto 2-[2-(dimetilamino)-5-fluoropirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-C]-piridin-4-ona.
La presente invención también incluye procedimientos de síntesis de derivados de pirimidilpirrol de fórmula (I) y las composiciones farmacéuticas que los comprenden.
Fácilmente se obtendrán una apreciación más completa de la invención tal y como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas 1-18 y muchas de las ventajas adicionales de la misma debido a que esta se entiende mejor por referencia a la siguiente descripción detallada.
Descripción detallada de la invención
En la técnica se conocen diversos compuestos heterocíclicos como inhibidores de proteínas cinasas. Ente ellos se encuentran, por ejemplo, los pirrolopirazoles descritos en el documento WO 02/12242; tetrahidroindazoles descritos en el documento WO 00/69846; pirrolopiridinas descritas en el documento WO 01/98299; aminoftalazinonas descritas en el documento WO 03/014090 y aminoindazoles descritos en el documento WO 03/028720.
Además, en la solicitud de patente internacional PCT WO 04/058762 (publicada el 15 de julio de 2004), que reclama prioridad sobre el documento de EE.UU. nº de serie 60/434.962, presentada el 12 de diciembre de 2002 se describen derivados de piridilpirrol dotados de actividad inhibidora de la proteína cinasa 2 activada por proteína cinasa activada por mitógenos.
Entre los compuestos descritos en dicha memoria se encuentran en particular, piridilpirroles que están sustituidos por grupos arilo o aril-alquenilo en el resto piridina; piridilpirroles sustituidos con grupos amino o átomos de halógeno en este mismo anillo de piridina también se describen en dicha memoria como intermedios sintéticos.
Es interesante el hecho de que los compuestos de la invención entran dentro de la amplia fórmula general que se describe en la solicitud de patente US 60/434962 mencionada anteriormente, pero no son ejemplos específicos en dicha memoria.
Los compuestos de fórmula (I) de la invención pueden tener átomos de carbono asimétricos y, por tanto, pueden existir en forma de isómeros ópticos individuales, en forma de mezclas racémicas o, como en cualquier otra mezcla que incluya la mayoría de uno de los dos isómeros ópticos, todos los cuales se pretende comprender dentro del alcance de la presente invención.
Asimismo, el uso como agente antitumoral de todos los posibles isómeros y sus mezclas de los compuestos de fórmula (I) también está dentro del alcance de la presente invención.
En los casos en los que los compuestos puedan existir en formas tautoméricas, por ejemplo tautómeros de ceto-enol, cada forma tautomérica se contempla como incluida dentro de esta invención, aunque exista en equilibrio o predominantemente en una forma.
En la presente descripción, a menos que se especifique otra cosa, con el término alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, los autores quieren decir cualquiera de los grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo.
Con el término amino, los autores quieren decir un grupo -NH_{2}, mientras que el término arilamino comprende cualquier grupo de -NH-arilo, en el que arilo es como se define a continuación.
Con el término arilo, los autores quieren decir cualquier hidrato de carbono carbocíclico o heterocíclico con de 1 a 2 restos anillos, bien condensados o unidos entre sí mediante enlaces simples, en el que al menos uno de los anillos es aromático. Si está presente, cualquier hidrato de carbono heterocíclico aromático también denominado grupo heteroarilo, comprende un anillo de 5 a 6 miembros con de 1 a 3 heteroátomos seleccionado entre N, O o S.
Ejemplos de grupos arilo de acuerdo con la invención son, por ejemplo, fenilo, bifenilo, \alpha- o \beta-naftilo, dihidronaftilo, tienilo, benzotienilo, furilo, benzofuranilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolilo, isoindolilo, purinilo, quinolilo, isoquinolilo, dihidroquinolilo, quinoxalinilo, benzodioxolilo, indanilo, indanilo, triazolilo.
Con el término cicloalquilo C_{3}-C_{6}, los autores quieren decir cualquier grupo tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
Con el término heterociclilo, los autores quieren decir cualquier anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros que comprende de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S. Claramente, si dicho grupo heterociclo o heterociclilo es un heterociclo aromático, también denominado heteroarilo, está incluido en la definición anterior de grupos arilo.
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Como tal, además de los heterociclos aromáticos anteriores, el término heterociclilo también abarca heterociclos insaturados o saturados tales como, por ejemplo, pirrolina, pirrolidona, imidazolina, imidazolidina, pirazolina, pirazolidina, piperidina, piperazina, morfolina.
Con el término acilamino, los autores quieren decir cualquier grupo alquilcarbonilamino C_{1}-C_{6}, cicloalquilcarbonilamino C_{3}-C_{7}, cicloalquilalquilcarbonilamino, cualquier grupo arilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino, arilaquilcarbonilamino y heteroarilalquilcarbonilamino. De lo anterior queda claro para el experto que cualquier grupo cuyo nombre se identifique como un nombre compuesto tal como, por ejemplo, cicloalquil-alquilo, heterociclil-alquilo, arilalquilo y similares, se pretende que todos ellos se interpreten como los restos de los que derivan. A este respecto, como ejemplo, cualquier grupo que se identifique como un arilaquilo debe interpretarse como un grupo alquilo que además está sustituido con arilo, en el que tanto el arilo como el alquilo son como se ha definido en lo que
antecede.
Claramente, cuando R_{3} y R'_{3} o R_{4} y R'_{4}, tomados juntos, forman un grupo alquilo cíclico de C_{3}-C_{6}, el compuesto se denomina derivado espiro.
Cuando el grupo alquilamino o arilalquilamino está opcionalmente sustituido, los sustituyentes se escogen de alquilo, cicloalquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, alcoxi, halógeno, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo y alquilcarbonilamino como se define en la presente memoria descriptiva.
Claramente, cuando R_{1} y R_{2} están unidos como cuando forman cualquier grupo divalente -NH-CH=NH, -N=CH-NH- o -NH-CH=CH-, se obtienen sistemas de purina y condensados de pirimidina-pirrol como los que tienen la fórmula siguiente, que sigue siendo un objeto de la invención.
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Sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) incluyen las sales de adición de ácido con ácidos inorgánicos u orgánicos tales como, por ejemplo, ácido nítrico, clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, perclórico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, glicólico, láctico, oxálico, malónico, málico, maleico, tartárico, cítrico, benzoico, cinnámico, mandélico, metanosulfónico, isetiónico y salicílico.
Una clase preferida de compuestos de la invención está representada por los derivados de fórmula (I), en la que R es hidrógeno, amino o fenilamino; R_{1} y R_{2} son, ambos, átomos de hidrógeno o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, forman un grupo divalente -NH-CH=N; y R_{3}, R'_{3}, R_{4}, R'_{4} y R_{5} son como se ha definido en lo que antecede.
Otra clase de compuestos preferidos de la invención está representada por los derivados de fórmula (I), en la que al menos uno de R_{3} y R'_{3} es un átomo de hidrógeno.
Otra clase de compuestos preferidos de la invención está representada por los derivados de fórmula (I), en la que al menos uno de R_{4}, R'_{4} es un átomo de hidrógeno.
Compuestos preferidos de la invención todavía más preferidos son los derivados de fórmula (I), en la que R_{1}, R_{2} son ambos átomos de hidrógeno.
Para una referencia a cualquier compuesto específico de fórmula (i) de la invención, opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, véase la sección experimental y las reivindicaciones.
Como se ha indicado anteriormente, otro objeto de la presente invención está representado por el procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I).
Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con el siguiente esquema sintético, haciendo reaccionar el derivado de pirimidina de fórmula (III) con un derivado adecuado de piperidina-diona de fórmula (IV), en la que Q es H o un grupo protector de nitrógeno adecuado, preferentemente terc-butoxicarbonilo.
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La reacción se produce en presencia de acetato amónico y de un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, un alcohol menor. Preferentemente, la reacción se lleva a cabo en presencia de etanol funcionando a temperatura ambiente y durante un tiempo adecuado variable de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 24 horas. Si es necesario, el compuesto (V) se convierte en el compuesto (I) mediante la eliminación del grupo protector Q.
Por tanto, los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse mediante un procedimiento que comprende:
a) la halogenación de un compuesto de fórmula (II) de modo que se obtenga un compuesto de fórmula (III)
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en la que R, R_{1} y R_{2} tienen los significados indicados en lo que antecede, R_{5} es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada y Hal representa un átomo de halógeno adecuado, preferentemente bromo o cloro;
b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (III) con un compuesto de fórmula (IV)
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en la que R_{3}, R'_{3}, R_{4}, R'_{4} y Q tienen los significados indicados en lo que antecede, de modo que se obtenga un compuesto de fórmula (I) y, opcionalmente, convertirlo en otro compuesto de fórmula (I) y/o en su sal farmacéuticamente aceptable.
El procedimiento anterior es un procedimiento de analogía que se puede llevar a cabo de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica.
De acuerdo con la etapa (a) del procedimiento, el compuesto de fórmula (II) está halogenado, en particular bromado o clorado, funcionando bajo procedimientos convencionales, por ejemplo en presencia de bromo y en un disolvente adecuado tal como mezclas de ácido acético y bromhídrico, durante un tiempo variable desde 1 hora a 24 horas. Como alternativa, un derivado activado adecuado del compuesto de fórmula (11), por ejemplo un enoléter o sililéter, puede hacerse reaccionar con una fuente de halógeno tal como N-bromo-succinimida (NBS) en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, mezclas de tetrahidrofurano/agua.
De acuerdo con la etapa (b) del procedimiento, a continuación el compuesto intermedio de fórmula (III) se hace reaccionar con un compuesto de fórmula (IV) en presencia de acetato amónico y de un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, un alcohol menor. Preferentemente, la reacción se lleva a cabo en presencia de etanol funcionando a temperatura ambiente y durante un tiempo adecuado variable desde 2 horas a 24 horas.
El compuesto final de fórmula (I) obtenido de este modo puede después convertirse en otro compuesto de fórmula (I) de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica. Como ejemplo, los compuestos de fórmula (I), en la que R_{5} representa un átomo de hidrógeno pueden convertirse fácilmente en los compuestos correspondientes de fórmula (I), en la que R_{5} es un átomo de halógeno, mediante procedimientos convencionales indicados en la literatura para la halogenación de derivados de pirrol.
En otro ejemplo, los compuestos de fórmula (I), en la que R es un alquilamino C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido o heteroarilalquilamino o arilalquilamino opcionalmente sustituido o dialquilamino C_{1}-C_{6} se pueden obtener de otro compuesto de fórmula (I), en la que R es amino mediante afinación reductora.
Otro ejemplo está representado por la preparación de compuestos de fórmula (I), en la que R es un grupo acilamino haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (V), que es una forma protegida de un compuesto de fórmula (I), con un haluro de acilo adecuado, como se muestra en el esquema siguiente:
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Asimismo, la conversión de un compuesto de fórmula (I) en una sal farmacéuticamente aceptable se lleva a cabo fácilmente de acuerdo con procedimientos conocidos, por ejemplo mediante el contacto de cualquier base libre de fórmula (I) con cualquier ácido adecuado farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de fórmula (II) y (IV), asó como cualquier otro reactivo del procedimiento, se conocen o se pueden preparar con facilidad de acuerdo con procedimientos conocidos.
Como ejemplo, los compuestos de fórmula (II), en la que R es amino(-NH_{2}) o arilamino(-NH-Ar) se pueden obtener de acuerdo con la ruta siguiente:
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La 1-(dimetilamino)-4,4-dimetoxi-1-penten-3-ona es un compuesto conocido que se puede preparar de acuerdo con procedimientos conocidos, por ejemplo tal y como se indica en J. Het. Chem., 22(6), 1723-6, 1985. Se hace reaccionar fácilmente con guanidina o un derivado de guanidina de la misma, por ejemplo el que está disponible en forma de una sal de adición de ácido, por ejemplo en forma de una sal clorhidrato de guanidinio. La reacción se lleva a cabo en condiciones básicas, por ejemplo en presencia de etilato sódico y de un disolvente adecuado tal como un alcohol menor, preferentemente etanol. La reacción se produce a temperatura de reflujo, durante un tiempo adecuado de hasta 24 horas.
A su vez, la guanidina y sus derivados se conocen y, si no están disponibles comercialmente per se, se pueden preparar fácilmente de acuerdo con procedimientos conocidos.
La reacción anterior permite obtener el compuesto de pirimidina intermedio que después se convierte en el compuesto de fórmula (11) mediante tratamiento ácido a temperatura ambiente, por ejemplo en presencia de ácido acético.
Asimismo, los compuestos de fórmula (11), en la que R_{1} y R_{2} están unidos a través del grupo divalente -N=CH-NH- de modo que forman un sistema de purina, puede obtenerse a partir de la 6-cloro-9H-purina comercialmente disponible. A este respecto, el derivado halogenado de fórmula (III) puede obtenerse directamente según el esquema sintético siguiente, sin la necesidad de aislar en compuesto de purina intermedio de fórmula (II):
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Por tanto, la 6-cloro-gH-purina está protegida en el átomo de nitrógeno del imidazol de acuerdo con procedimientos convencionales, por ejemplo con 3,4-dihidro-2H-pirano en presencia de ácido p-toluensulfónico, de modo que se obtiene el correspondiente derivado de 6-cloro-purina, en el que el grupo protector es, por ejemplo, tetrahidro-2H-piran-2-ilo.
A continuación, este derivado se hace reaccionar con 1-(etoxivinil)tributiltino y en presencia de tetrakis trifenilfosfina paladio de modo que se obtiene el correspondiente derivado de 6-(1-etoxivinil)purina. A continuación, este último compuesto intermedio se convierte en el derivado halogenado de fórmula (III) con los agentes halogenantes adecuados y en presencia de disolventes adecuados, como se ha indicado anteriormente.
Trabajando en un procedimiento análogo utilizando cualquier material de partida adecuado, se pueden obtener de este modo compuestos adicionales de fórmula (11), por ejemplo aquéllos en los que R_{1} y R_{2} forman un grupo divalente -NH-CH=CH.
Los compuestos de fórmula (I) en la que uno o ambos R1 y R2 son distintos a los átomos de hidrógeno se preparan de acuerdo con el procedimiento objeto de la invención comenzando a partir los correspondientes derivados de pirimidina de fórmula (II).
Asimismo, el derivado de piperidina-diona (IV) es un compuesto conocido o, como alternativa, se puede preparar mediante procedimientos conocidos, por ejemplo de acuerdo con la ruta sintética siguiente, en la que Alc significa un grupo alquilo menor adecuado, por ejemplo etilo, y A es cloro o OALc:
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A este respecto, un derivado adecuado de \beta-anilino-carboxiéster (VI), en el que R_{3}, R'_{3}, R_{4} y R'_{4}, tiene los significados indicados anteriormente, se hace reaccionar con dialquilmalonato o, como alternativa, con éster alquílico de ácido 3-cloro-3-oxopropanoato, por ejemplo dimetilmalonato o 3-cloro-3-oxopropanoato de etilo, respectivamente. Cuando A es cloro, la reacción se lleva a cabo en condiciones básicas, por ejemplo en presencia de trietilamina y en un disolvente adecuado tal como diclorometano, a una temperatura comprendida entre la temperatura ambiente y de reflujo. Cuando A es OAlc, la reacción se lleva a cabo con o son condiciones básicas y, más convenientemente, en ausencia de disolventes a temperatura de reflujo del dialquilmalonato.
Cuando no están disponible comercialmente, los derivados de \beta-amino-carboxiéster mencionados antes (VI) se pueden obtener de acuerdo con procedimientos bien conocidos descritos en la literatura.
El derivado intermedio obtenido de este modo (VII) se convierte en el compuesto de fórmula (IV) en una reacción de dos etapas, primero haciéndolo reaccionar en condiciones básicas, por ejemplo en presencia de metilato de sodio y de un disolvente adecuado, preferentemente tolueno, a temperatura de reflujo y durante un tiempo variable entre 2 horas y 24 horas. Posteriormente, el producto de la etapa anterior se hace reaccionar como tal, sin aislar, con una mezcla de acetona/agua/ácido acético en condiciones de reflujo y durante un tiempo variable entre 12 horas y 24 horas. Opcionalmente, la piperidin-diona (IV) se puede proteger con un grupo protector Q adecuado.
En la alternativa, el derivado de piperidin-diona (IV) se puede preparar, por ejemplo, también de acuerdo con la ruta sintética alternativa siguiente:
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En el procedimiento, el ácido Meldrum (2,2-dimetil-1,3-dioxan-4,6-diona) se hace reaccionar con un derivado aminoacídico adecuado de fórmula (VIII) de modo que se obtenga un compuesto de fórmula (IX) en la que Q es un grupo protector de nitrógeno adecuado y R_{3}, R'_{3}, R_{4} y R'_{4} son como se ha definido en lo que antecede. A continuación, el compuestos de fórmula (IX) se cicla mediante su disolución en un disolvente adecuado, por ejemplo acetato de etilo, y de reflujo durante un periodo de tiempo de 1 a 24 horas;
O, en la alternativa, el derivado de piperidin-diona (IV) se puede modificar de acuerdo con la ruta sintética siguiente, en la que Q es un grupo protector de nitrógeno adecuado tal como, en particular, terc-butoxicarbonilo, u otros grupos, tales como p-metoxibencilo, p-metoxietilbencilo, p-metoxifenilo:
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A este respecto, un derivado de piperidin-diona (IV) adecuado, en el que R_{3}, R_{4} y R'_{4} y Q tienen los significados indicados en lo que antecede, se hace reaccionar con una base, por ejemplo bis(trimetilsilil)amida de litio (LIHMDS). La reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado, tal como tetrahidro, a una temperatura comprendida entre -78ºC y la temperatura ambiente.
A continuación, la mezcla de reacción se trata con un haluro de alquilo adecuado de modo que se obtiene otro compuesto de fórmula (IV). El compuesto obtenido de este modo, en el que Q es, por ejemplo, un grupo terc-butoxicarbonilo, se puede convertir en otro compuesto de fórmula (IV) tratándolo con condiciones ácidas, por ejemplo en presencia de ácido trifluoroacético y de un disolvente adecuado, preferentemente diclorometano, a temperatura ambiente y durante un tiempo comprendido entre 1 hora y 6 horas.
A partir de todo lo anterior, está claro para el experto que cuando se prepara el compuesto de fórmula (I) de acuerdo con el procedimiento mencionado anteriormente, completo con cualquier variante del mismo, los grupos funcionales opcionales dentro de los materiales de partida o los intermedios de los mismos y que podrían dar lugar a reacciones secundarias indeseadas, necesitan protegerse de forma adecuado de acuerdo con técnicas convencionales. Asimismo, la conversión de estos últimos en los compuestos desprotegidos libres puede llevarse a cabo de acuerdo con procedimientos conocidos.
Por analogía, cualquier compuesto de fórmula (I) que es susceptible de salificarse puede convertirse con facilidad en la correspondiente sal de adición de ácido, trabajando en presencia de cualquier ácido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo seleccionado entre los indicados previamente.
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Como se apreciará con facilidad, si los compuestos de fórmula (I) preparados de acuerdo con el procedimiento descrito antes se obtienen en forma de una mezcla de isómeros, su separación en los isómeros sencillos de fórmula (I), de acuerdo con técnicas convencionales, también está dentro del alcance de la presente invención.
Entre las técnicas convencionales para la resolución del racemato se incluyen, por ejemplo, cristalización partida de derivados de sales diastereoisoméricas o HPLC preparativa quiral.
Farmacología
Los compuestos de fórmula (I) son activos como inhibidores de proteínas cinasas y, por tanto, son útiles para restringir la proliferación no regulada de las células tumorales.
En terapia, se pueden usar en el tratamiento de varios tumores, tales como los indicados anteriormente, así como en el tratamiento de otros trastornos de proliferación celular, tales como psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociadas con aterosclerosis y estenosis y restenosis posquirúrgica y en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
La actividad inhibidora de los inhibidores secundarios de Cdc7 y la potencia de compuestos seleccionados se determina a través de un procedimiento de ensayo basado en el uso de tecnología de captura de resina Dowex. El ensayo consiste en la transferencia de un resto de fosfato marcado con radiactividad por la cinasa a un sustrato aceptor. El producto marcado con 33P resultante se separa del marcador que no ha reaccionado, se transfiere a un cóctel de centelleo y la luz emitida se mide en un contador de centelleo.
Ensayo de inhibición de la actividad Cdc7/Dbf4
El ensayo de inhibición de la actividad de Cdc7/Dbf4 se realiza de acuerdo con el protocolo siguiente. El sustrato MCM2 se trans-fosforila mediante el completo Cdc7/Dbf4 en presencia de ATP marcado con \gamma^{33}-ATP. La reacción se detiene mediante la adición de resina Dowex en presencia de ácido fórmico. Las partículas de resina Dowex capturan el \gamma^{33}-ATP sin reaccionar y lo arrastran hacia el fondo de l pocillo, mientras que el sustrato MCM2 fosforilado con ^{33}P permanece en solución. El sobrenadante se recoge, se transfiere a placas Optiplate y la extensión de la fosforilación del sustrato se evalúa mediante conteo \beta.
El ensayo de inhibición de la actividad Cdc7/Dbf4 se realizó en una placa de 96 pocillos de acuerdo con el protocolo siguiente.
A cada pocillo de la placa se añadieron:
- 10 \mul del compuesto problema (10 concentraciones crecientes en el intervalo de nM a \muM para generar una curva de dosis-respuesta). El disolvente para los compuestos problema contenía 3% de DMSO (concentración final 1%).
- 10 \mul del sustrato MCM2 (concentración final 6 \muM), una mezcla de ATO frío (concentración final 2\muM) y ATP radioactivo (proporción molar de 1/5000 con ATP frío).
- 10 \mul de enzima (Cdc7/Dbf4, concentración final 2 mM) que inició la reacción. El tampón de la reacción estaba compuesto por HEPES 50 mM a pH 7,9 que contenía MgCl_{2} 15 mM, DTT 2 mM, NaVO_{3} 3 \muM, glicerofosfato 2 mM y BSA 0,2 mg/ml.
Tras incubación durante 60 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo añadiendo a cada pocillo 150 \mul de resina Dowex en presencia de ácido fórmico 150 mM. Después de otros 60 min de incubación, se extrajeron 50 \mul de suspensión y se transfirieron a placas de 96 pocillos OPTIPLATE que contenían 150 \mul de MicroScint 40 (Packard); tras 5-10 minutos en agitación, las placas se leyeron durante 1 min en un lector de radiactividad Packard TOP.Count.
Determinación de la CI50: los inhibidores se analizaron a diferentes concentraciones variables de 0,0005 a 10 \muM. Los datos experimentales se analizaron mediante el programa informático Assay Explorer utilizando la ecuación logística de cuatro parámetros:
y = fondo + (parte superior-fondo)/(1+10^((logCI50-x)*pendiente))
en la que x es el logaritmo de la concentración del inhibidor, y es la respuesta; y comienza en el fondo y sube hacia la parte superior con una forma sigmoidea.
La actividad inhibidora de los posibles inhibidores de cdk/ciclina y la potencia de compuestos seleccionados puede determinarse mediante un procedimiento de ensayo basado en el uso de la tecnología SPA (Amersham Pharmacia Biotech).
El ensayo consiste en la transferencia de resto de fosfato marcado con radioactividad mediante la cinasa a un sustrato biotinilado. El producto biotinilado marcado con 33P se deja unir a esferas SPA recubiertas con estreptavidina (capacidad de biotina de 130 pmol/mg) y la luz emitida se midió en un contador de centelleo.
Ensayo de inhibición de la actividad cdk2/ciclina A
Reacción de la cinasa: sustrato histona H1 biotinilada durante el proceso 4 \muM (Sigma nº H-5505), ATP 10 \mum (0,1 microClP33\gamma-ATP), complejo ciclina A/CDK2 1,1 nM, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml de BSA) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en U. Tras la incubación durante 60 min a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 \mul de tampón PBS que contiene EDTA 32 mM, ATP frío 500 \muM, 0,1% de Triton X100 y 10 mg/ml de esferas SPA recubiertas con estreptavidina. Tras 20 min de incubación, se extrajeron 100 \mul de suspensión y se transfirieron a una placa de 96 pocillos OPTPLATE con 100 \mul de CsCl 5M. Tras 4 horas, las placas se leyeron durante 2 min en un lector de radiactividad Packard TOP.Count.
Determinación de CI50: los inhibidores se analizaron a diferentes concentraciones variables de 0,0015 a 10 \muM. Los datos experimentales se analizaron mediante el programa informático GraphPad Prizm utilizando la ecuación logística de cuatro parámetros:
y = fondo + (parte superior-fondo)/(1+10^((logCI50-x)*pendiente))
en la que x es el logaritmo de la concentración del inhibidor, y es la respuesta; y comienza en el fondo y sube hacia la parte superior con una forma sigmoidea.
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Cálculo de KI
Método experimental: La reacción se llevó a cabo en tampón (Tris 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, 0,2 mg/ml de BSA, DTT 7,5 mM (que contiene enzima 3,7 nM, histona y ATP (proporción constante de ATP frío/marcado 1/3000). La reacción se detuvo con EDTA y el sustrato capturado en fosfomembrana (placas Multiscreen de 96 pocillos de Millipore). Tras un extenso lavado, las placas multiscreen se leyeron en un contador TOP. Se midieron las concentraciones control (tiempo cero) para el ATP y la histona.
Diseño experimental: Las velocidades de la reacción se miden a cuatro concentraciones de ATP, sustrato (histona) e inhibidor. Se diseñó una matriz de concentración de 80 puntos alrededor de los respectivos valores de Km del ATP y el sustrato y los valores de CI50 del inhibidor (0,3, 1, 3, 9 veces los valores de Km o de CI50). Un experimento preliminar en el tiempo en ausencia de inhibidor y a las diferentes concentraciones de ATP y sustrato permite la selección de un único criterio de tiempo (10 min) en el intervalo lineal de la reacción para el experimento de determinación de KI.
Estimaciones de los parámetros cinéticos: los parámetros cinéticos se estimaron mediante regresión de mínimos cuadrados simultánea no lineal utilizando la [Ec.1] (inhibidor competitivo respecto al ATP, mecanismo aleatorio) usando el conjunto de datos completos (80 puntos):
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en la que A= [ATP], B= [Sustrato], I= [Inhibidor], Vm= velocidad máxima, Ka, Kb, Ki, las constantes de disociación del ATP, sustrato e inhibidor respectivamente. \alpha y \beta el factor de cooperación entre la unión entre el sustrato y el ATP y la unión del sustrato y el inhibidor, respectivamente.
Como ejemplo, algunos compuestos representativos de la invención se analizaron como se ha indicado anteriormente frente a Cdc7/Dbf4 y Cdk2, que muestran una actividad inhibidora, expresada en forma de CI50 (nM) del siguiente modo:
Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona clorhidrato CI50 Cdc7: 11 nM;
Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-fenil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 15 nM;
Clorhidrato de 2-(2-fenilaminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 7 nM;
Clorhidrato de 2-(9H-purin-6-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 200 nM;
Clorhidrato de 2-pirimidin-4-il-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 19 nM;
Clorhidrato de 7-fenil-2-(9H-purin-6-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 90 nM;
Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-6,6-dimetil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 32 nM;
Clorhidrato de 7-fenil-2-pirimidin-4-il-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 32 nM;
Clorhidrato de 2-(2-anilinopirimidin-4-il)-7-fenil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 29 nM;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-6-isopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 9 nM;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 8 nM;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-6-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 26 nM;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-7,7-dimetil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 2 nM;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-6-isobutil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 4 nM;
4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-ilcarbamato de etilo CI50 Cdc7: 80 nM;
(7R o 7S)-2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona clorhidrato CI50 Cdc7: 5 nM;
(7R o 7S)-2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 4 nM;
2-(2-aminopirimid)in-4-il)-3-yodo-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 4 nM
2-(2-aminopirimidin-4-il)-7,7-dietil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 7 nM;
2-{2-[(2-furilmetil)amino]pirimidin-4-il}-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 74 nM;
N-[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]benzamida CI50 Cdc7: 300 nM;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-isopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 8 nM;
2-[2-(bencilamino)pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 270 nM;
2-[2-(propilamino)pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 310 nM; CI50
Cdk2: 35 nM;
2-[2-(isobutilamino)pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdk2: 50 nM;
2-{2-[(ciclohexilmetil)amino]pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 680
nM; CI50 Cdk2: 220 nM;
2-{2-[(2-furilmetil)amino]pirimidin-4-il}-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona CI50 Cdc7: 87 nM;
CI50 Cdk2: 80 nM y
Trifluoroacetato de N-[4-([[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]amino]metil)fenil]acetamida (CI50 Cdc7: 300 nM; CI50 Cdk2: 20 nM.
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Los compuestos de la presente invención se pueden administrar como agentes sencillos o, como alternativa, en combinación con tratamientos anticancerosos conocidos tales como regímenes de radioterapia o quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos, agentes de tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antimetabolitos, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes de tipo interferón, inhibidores de la ciclooxigenasa (p. ej., inhibidores de la COX-2), inhibidotes de matriz metaloproteasas, inhibidores de la telomerasa, inhibidores de tirosina cinasa, agentes anti-receptor del factor de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogénesis (p. ej., inhibidores de la angiogénesis), inhibidores de la farnesil transferasa, inhibidores de la vía de la señal de transducción raf-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdk, agentes dé unión a tubulina, inhibidores de la topoisomerasa I e inhibidores de la topoisomerasa II.
Si se formula en forma de dosis fija, tales productos de combinación emplean los compuestos de esta invención dentro del intervalo de dosis que se describe más adelante y el otro agente farmacéuticamente activo dentro del intervalo de dosificación aprobado.
Los compuestos de fórmula (I) se pueden usar secuencialmente con agentes anticancerosos conocidos cuando una formulación de combinación es inadecuada.
Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención, adecuados para la administración a un mamífero, por ejemplo a seres humanos, se pueden administrar por las vías habituales y el nivel de dosificación depende de la edad, el peso, las condiciones del paciente y la vía de administración.
Por ejemplo, una dosificación adoptada para la administración oral de un compuesto de fórmula (I) puede variar de 10 a 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces al día. Los compuestos de la invención se pueden administrar en diversas formas de dosificación, por ejemplo por vía oral en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos recubiertos por azúcar o por película, soluciones líquidas o suspensiones; por vía rectal en forma de supositorios; por vía parenteral, por ejemplo por vía intramuscular, o mediante inyección o infusión intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal.
La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que puede ser un transportador o un diluyente.
Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención normalmente se preparan siguiendo procedimientos convencionales y se administra en una forma farmacéutica adecuada.
Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo lactosa, dextrosa sacarosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, por ejemplo sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o de calcio y/p polietilenglicoles; agentes de unión, por ejemplo almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinil pirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas efervescentes; tinturas; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias inactivas no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Estas preparaciones farmacéuticas pueden fabricarse de un modo conocido, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezclado, granulado, formación de comprimidos, recubrimiento con azúcar o recubrimiento con película.
Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser, por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones.
Como ejemplo, los jarabes pueden contener, como transportador, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol.
Las suspensiones y las emulsiones pueden contener, como ejemplos de transportadores, goma natural, agar, alginato sódico, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o alcohol polivinílico.
Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un transportador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína.
Las soluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener, como transportador, agua estéril o, preferentemente, pueden estar en forma de soluciones salinas estériles, acuosas, isotónicas o pueden contener propilenglicol como transportador.
Los supositorios pueden contener, junto con el compuesto activo, un transportador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo manteca de cacao. Polietilenglicol, un tensioactivo éster de ácido graso de polioxietilensorbitano o lecitina.
Con el objetivo de ilustrar mejor la presente invención, se proporcionan los ejemplos siguientes.
Procedimientos generales
La cromatografía ultrarrápida se realizó en gel de sílice (Merck, grado 9395, 60A). La HPLC se realizó en columna Waters X Terra RP (4,6 x 50 mm, 3,5 \mum) utilizando un sistema Waters 2790 HPLC equipado con un detector 996 Waters PDA y espectrómetro de masas Micromass mod. ZQ single quadrupole, equipado con una fuente de iones por electronebulización (ESI). La fase móvil A fue tampón acetato de amonio 5 mM (pH 5,5 con ácido acético/acetonitrilo 95:5) y la fase móvil B fue H_{2}O/acetonitrilo (5:95). Gradiente de 10 a 90% B en 8 minutos, retención 90% B 2 minutos. Detección UV a 220 nm y 254 nm. Caudal 1 ml/min. Volumen de inyección 10 \mul. Escáner completo, intervalo de masas de 100 a 800 amu. La tensión capilar fue 2,5 kB; temperatura fuente fue 120ºC; el cono fue 10V. Los tiempos de retención (HPLC t.a) se proporcionan en minutos a 220 nm o a 254 nm. Las masas se proporcionan en forma de proporción m/z.
En caso necesario, los compuestos se han purificado mediante HPLC preparativa en una columna Water Symmetry C18 (19 x 50 mm, 5 \mum) utilizando una HPLC 600 preparativa Waters equipada con un detector 996 Waters PDA y un y espectrómetro de masas Micromass mod. ZQ single quadrupole, ionización por electronebulización, modo positivo. La fase móvil A fue agua 0,01% TFA y la fase móvil B fue acetonitrilo. Gradiente de 10 a 90% B en 8 min, retención 90% B 2 min. Caudal 20 ml/min.
La espectrometría 1H-RMN se realizó en un Mercury VX 400 A 400,45 mHz equipado con una sonda de resonancia doble de 5 mm [1H (15N-31P) ID_PFG Varian].
Los compuestos de fórmula (I) que tienen un átomo de Caboto asimétrico y obtenidos como mezcla racémica, se resolvieron mediante separación HPLC en columnas quirales. En particular, por ejemplo, se pueden utilizar columnas preparativas CHIRALPACK® AD, CHIRALPACK® AS, CHIRALCELL® OJ.
Ejemplo 1 2-bromo-2-pirimidin-4-iletanona bromhidrato
El compuesto del título se preparó tal y como se describe en J. Med. Chem. 1992, 35, 3288. en una solución agitada de pirimidina (2,5 g, 31,2 mmol) y acetaldehído (10,8 ml, 192 mmol) en diclorometano (190 ml) a alrededor de 0ºC, se añadió gota a gota ácido sulfúrico 3,4 M (15,6 ml). La solución se enfrió a -5ºC y, desde dos embudos de goteo distintos, dos soluciones se introdujeron simultáneamente en ella en alrededor de 30 minutos: una solución al 80% de terc-butilhidroperóxido en di-terc-butilperóxido/agua (23,4 ml) y una solución de heptahidrato sulfato ferroso (52,2 g) en 100 ml de agua. Tras la adición, la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 2,5 horas, después se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 150 ml). Las fases orgánicas unidas se lavaron con una solución acuosa al 10% de yoduro sódico, con Na_{2}S_{2}O_{5} (solución acuosa al 10%) y con salmuera y, después, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. Tas la concentración, el sólido amarillo obtenido se suspendió con éter de petróleo y se filtró. Tras secar, el compuesto del título se obtuvo en forma de un sólido marronáceo (0,87 g, R = 23%).
^{1}H RMN (DMSO-d6/300 MHz) \delta ppm 5,0 (s, 2H), 7,98 (d, 1H), 9,12 (d, 1H), 9,42 (s, 1H), (as, 1H).
Ejemplo 2 Bromhidrato de 1-(2-aminopirimidin-4-il)-2-bromoetanona
El compuesto del título (a) se preparó tal y como se ha descrito en J. Het. Chem. 1985, 22, 1723.
Una mezcla de 3,3-dimetoxi-2-butanona (25 g, 189,16 mmol) y N,N-dimetolformamida dimetilacetal (22,5 g, 189,16 mmol) se agitó a 110ºC durante 30 horas y después se destiló (115ºC, 1 mmHg), obteniendo de este modo 1-(dimetilamino)-4,4-dimetoxipent-1-en-3-ona, en forma de un sólido amarillo (27,3 g, 146 mmol, 77%).
En una solución de sodio (3,48 g, 151,67 mmol) en etanol anhidro (400 ml), se añadió clorhidrato de guanidina sólido (14,5 g, 151,67 mmol) a t.a., para dar una suspensión blanca en la que se añadió una solución de 1-(dimetilamino)-4,4-dimetoxipent-1-en-3-ona (28,4 g, 151,67 mmol) en etanol anhidro (50 ml). La mezcla se sometió a reflujo durante 19 horas. Después de enfriar, el precipitado se filtró y lavó con etanol y con abundante agua, obteniendo de este modo un sólido blanco (8,56 g). Las soluciones etanólicas se concentraron hasta sequedad, se suspendieron con acetato de etilo en ebullición (1000 ml), se filtraron mientras estaban calientes y después se enfriaron para dar una segunda cosecha. Cantidad total de 4-(1,1-dimetoxietil)pirimidin-2-amina: 17,66 g, 63,5%. Una solución de dicha amina (17,5 g, 95,5 mmol) en ácido fórmico se agitó a t.a. durante 6 horas y se concentró hasta sequedad y el residuo se agitó en etanol (50 ml), y después se filtró, obteniendo de este modo 1-(2-aminopirimidin-4-il)etanona (9,2 g, 70%). A una solución de 1-(2-aminopirimidin-4-il)etanona (412 mg, 3 mmol) en ácido acético glacial (1 ml) y se añadió HBr ac. al 48%, bromo (0,153 ml) en ácido acético (0,4 ml) y la solución naranja resultante se añadió a t.a. durante 15 horas. Después de diluir con acetato de etilo (15 ml), el precipitado se filtró y se lavó con acetato de etilo, lo que dio el compuesto del título en forma de un sólido blancuzco (580 mg, 65%).
^{1}H RMN (DMSO-d6/300 MHz) \delta ppm 4,9 (s, 2H), 7,0 (d, 2H), 8,5 (d, 2H) s, 6H), 2,49 (as, 2H), 3,13 (as, 2H), 8,13 (as, 1H).
Ejemplo 3 2-bromo-1-()H-purin-6-il)etanona
Una solución de 6-(1-etoxivinil)-9-tetrahidro-2H-piran-2-il-pH-purina (430 mg, 1,57 mmol), preparada como se describe en Tetrahedron 53 (6), 2291-2302 (1997), en tetrahidrofurano (24 ml) y agua (1,5 ml) se trató con N-bromo-succinimida (NBS, 280 mg, 1,57 mmol) y se conservó a temperatura ambiente durante 15 minutos. La solución se evaporó a presión reducida, se suspendió en agua y se filtró para obtener el compuesto del título (312 mg, R = 82%) en forma de un sólido amarillo.
^{1}H RMN (DMSO-d6/300 MHz) \delta ppm 5,12 (s, 2H), 8,85 (s, 1H), 9,14 (s, 1H)
Ejemplo 4 1-(2-fenilaminopirimidin-4-il)-2-cloroetanona
A una solución de sodio (614 mg, 26,7 mmol) en etanol anhidro (70 ml) se añadió fenilguanidina (4,43 g, 13,35 mmol) seguido por una solución de 1-(dimetilamino)-4,4-dimetoxipent-1-en-3-ona (5 g, 26,7 mmol), obtenido como se ha descrito anteriormente, en etanol anhidro (20 ml). La suspensión se sometió a reflujo durante 20 horas, después se extrajeron 2/3 del disolvente y se añadió agua (250 ml). El precipitado se extrajo con acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con una solución de dihidrogenofosfato de sodio, con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró para dar el cetal deseado (4,3 g). El cetal (4,2 g, 16,19 mmol) se disolvió en ácido fórmico al 88% (25 ml) y se agitó a t.a. durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (200 ml), el precipitado se filtró y se lavó con agua abundante. De este modo se aisló 1-(2-fenilaminopirimidin-4-il)-etanona en forma de un sólido amarillo (3,1 g).
Esta cetona (1,3 g, 6,1 mmol) se disolvió en diclorometano (40 ml), después se añadieron TEA (5,1 ml, 36,6 mmol) y terc-butil-dimetil-trifluoro metanosulfonato (4,2 ml, 18,3 mmol). La solución naranja se agitó durante la noche, después se diluyó con más diclorometano (150 ml), se lavó dos veces con una solución de hidrogenocarbonato sodio al 5% (50 ml), con agua, con salmuera, después se secó sobre sulfato sódico y se concentró para dar el derivado bis-sililado (2,67 g). A la mitad del material (1,32 g, 2,94 mmol) disuelto en tetrahidrofurano (THF, 25 ml) y enfriado a 0ºC, gota a gota se añadió una solución de NBS (0,549 g, 3,09 mmol) en THF (10 ml) en 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 hora, después se añadió HCl 2N y la mezcla de reacción se agitó durante 24 horas a t.a. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente: hexano/acetato de etilo 5:1) para dar 0,325 g del compuesto del título.
^{1}H RMN (DMSO-d6/300 MHz) \delta ppm 4,9 (s, 2H), 6,7 (m, 1H), 6,9 (d, 1H) 7,0 (m, 2H), 7,4 (d, 2H), 8,4 (d, 1H), 9,6 (s, 1H).
Ejemplo 5 Preparación de 6,6-dimetil-2,4-dioxopiperidina
Una solución de 3-metilbut-2-enoato de etilo (1 g, 7, 8 mmol) en etanol anhidro (12 ml) se enfrió hasta -20ºC y se saturó con amoniaco gaseoso. El tuno se selló y se guardó a 90ºC durante 24 horas. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se introdujeron burbujas de nitrógeno para eliminar el amoniaco residuo y se trató con una solución 4N de HCl en dioxanos (1,9 ml). Tras 30 minutos de agitación, la mezcla se evaporó a presión reducida para dar clorhidrato de 3-amino-3-metilbutanoato de etilo en forma de un sólido gris (1,19 g, R = 84%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}-/400 MHz) \delta ppm 1,2 (t, 3H), 1,26 (s, 6H), 2,65 (s, 2H), 4,1 (C, 2H), 8,27 (as, 3H).
El compuesto clorhidrato de 3-amino-3-metilbutanoato de etilo (0,87 g, 4,79 mmol) se suspendió en cloruro de metileno (12 ml) y trietilamina (1,4 ml, 2,1 eq.). La mezcla se enfrió hasta 0ºC y se trató gota a gota con 3-cloro-3-oxopropanoato de etilo (0,64 ml, 1,05 eq.). La reacción se conservó a temperatura ambiente durante 2 horas, se diluyó con cloruro de metileno, se lavó con HCl 1N y después con NaHCO_{3} al 5%, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporó hasta sequedad para obtener 3-[(3-etoxi-3-oxopropanoil)amino]-3-metilbutanoato (1,2 g, R = 97%) en forma de aceite rojo.
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/300 MHz) \delta ppm 1,11-1,21 (m, 6H), 1,29 (s, 6H), 2,71 (s, 2H), 3,14 (s, 2H), 3,95-4,15 (m, 4H), 7,75 (as, 1H).
A una solución de epóxido sódico, obtenida a partir de metal de sodio (0,122 g, 5,55 mmol) en etanol anhidro (7 ml), se añadió gota a gota una solución de 3-[(3-etoxi-3-oxopropanoil)amino]-3-metilbutanoato de etilo (1,2 g, 4,62 mmol) en tolueno seco (7 ml) a temperatura ambiente en agitación. La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante 2 horas, después se concentró hasta volumen reducido y el residuo se disolvió en tolueno (15 ml). La fase orgánica se extrajo con agua (40 ml), la fase acuosa se acidificó hasta un pH de 2-3 con HCl 1N y se extrajo con acetato de etilo (4 x 50 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró para dar 6,6-dimetil-2,4-dioxopiperidina-3-carboxilato de etilo en forma de un sólido amarillo (0,7 g, R = 71%), que se utilizó para la etapa siguiente sin más purificación.
El compuesto 6,6-dimetil-2,4-dioxopiperidina-3-carboxilato de etilo (0,69 g, 3,23 mmol) se disolvió en acetonitrilo que contiene 1% de agua (15 ml) y la solución resultante se sometió a reflujo durante 2 horas. Después de evaporar hasta sequedad, el material bruto se suspendió en éter isopropílico, se mantuvo en agitación enérgica y se filtró, para dar el compuesto del título (387 mg, R = 85%) en forma de un sólido marrón claro.
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/300 MHz) \delta ppm 1,18 (s, 6H), 2,49 (as, 2H), 3,13 (as, 2H), 8,13 (as, 1H).
Ejemplo 6 Preparación de 5-fenilpiperidin-2,4-diona
El compuesto ciano(fenil)acetato de etilo (14,9 g, 78,83 mmol) se disolvió en etanol absoluto (400 ml) que contiene ácido clorhídrico al 37% (40 ml). La solución se trató con Pd-C al 10% (2 g) y se mantuvo en hidrógeno (275,79 kPa) en un aparato Parr durante 24 horas. La mezcla resultante se filtró para eliminar el catalizador y se evaporó hasta la sequedad a presión reducida. El residuo se suspendió con acetato de etilo, se mantuvo en agitación enérgica durante 15 minutos y se filtró. Se obtuvo clorhidrato de 3-amino-2-fenilpropanoato de etilo (11 g, R = 60%).
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/300 MHz) \delta ppm 1,11 (t, 3H), 3,05 (dd, 1H, J = 12,9, 6,15), 3,42 (Dd, 1H, J = 12,9, 8,79), 4,07 (m, 3H), 7,35 (m, 5H), 8,15 (ar, 3H).
El clorhidrato de 3-amino-2-fenilpropanoato de etilo (4,38 g, 19,13 mmol) se suspendió en cloruro de metileno (80 ml) y trietilamina (5,86 ml, 2,2 eq.). La mezcla se enfrió hasta 0ºC y se trató gota a gota con 3-cloro-3-oxopropanoato de etilo (2,69 ml, 1,1 eq.). La reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante una hora, se diluyó con cloruro de metileno, se lavó con HCl 1 N y, después, con NaHCO_{3} al 5%, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporó hasta sequedad. El material bruto se cromatografió en gel de sílice, eluyendo con hexano/acetato de etilo 1/1, para dar éster etílico de ácido 3-(2-etoxicarbonil-acetilamino)-2-fenil-propiónico (4,24 g, R = 72%) en forma de un aceite.
^{1}H RMN (CDCl_{3}/300 MHz) \delta ppm 1,21 (t, 3H), 1,27 (t, 3H), 3,26 (s, 2H), 3,73 (m, 2H), 3,89 (dd, 1H, J = 6,16, 8,50), 4,17 (m, 4H), 7,29 (m, 6H).
Se disolvió sodio (380 mg, 16,52 mmol) en etanol anhidro (13 ml) y la solución resultante se trató gota a gota con éster etílico de ácido 3-(2-etoxicarbonil-acetilamino)-2-fenil-propiónico (4,23 g, 13,76 mmol) disuelto en tolueno anhidro (35 ml). La reacción se mantuvo a 80ºC durante 1,5 horas. Después de enfriar, la mezcla se extrajo con agua. Los extractos acuosos se acidificaron con HCl 2N, se extrajeron con acetato de etilo y las capas orgánicas se recogieron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron hasta la sequedad para obtener 2,4-dioxo-5-fenilpiperidina-2-carboxilato de etilo (1,73 g, R = 48%), que se usó para la etapa siguiente sin más purificación. El 2,4-dioxo-5-fenilpiperidina-2-carboxilato de etilo (1,73 g, 6,63 mmol) se disolvió en acetonitrilo con 1% de agua (30 ml) y la solución resultante se sometió a reflujo durante 2 horas. Después de evaporar hasta sequedad, el material bruto se cromatografió en gel de sílice, eluyendo con cloruro de metileno/metanol 92/8, para dar el compuesto del título (780 mg, R = 62%) en forma de un sólido.
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/300 MHz) \delta ppm 3,25 (d, 1H, J = 18,75) 3,42-3,70 (m, 2H), 3,61 (d, 1H, J = 18,75), 3,81 (dd, 1H, J = 5,57, 9,67), 7,26 (m, 5H), 8,20 (as, 1H).
Ejemplo 7 Preparación de clorhidrato de 2-(aminometil)-3-metilbutanoato de etilo
El compuesto 2-ciano-3-metilbut-2-enoato de etilo (5,0 g, 32,6 mmol) se disolvió en 320 ml de EtOH absoluto. Se añadieron 700 mg de PtO_{2} y 12 ml de HCl 4M. La mezcla de reacción se hidrogenó a temperatura ambiente durante 5 horas (206,84 kPa). La filtración en una lámina de celite y la evaporación del disolvente dieron el compuesto del título bruto (rendimiento cuantitativo). ^{1}H RMN (400 MHz-DMSO-D6) \delta ppm 0,90 (d, J = 6,83 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,83 Hz, 3H) 1,24 (t, J = 7,13 Hz, 3H) 1,92-2,06 (m,1H) 2,53-2,60 (m, 1H) 2,84-3,17 (m, 2H) 4,05-4,24 (m, 2H) 7,84 (s, 3H)
ESI (+) MS: m/z 160 (MH+)
Trabajando de forma análoga y comenzando a partir del derivado de ciano adecuado, también se prepararon los compuestos siguientes:
Clorhidrato de 2-(aminometil)-3-metilpentanoato de etilo
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 0,80 (m, 6H), 1,23-1,40 (2m, 5H) 1,76 (m, 1H) 2,69 (m, 1H) 2,89 (m, 1H), 3,09 (m, 1H) 4,14 (m, 2H) 7,82 (S, 3H)
ESI (+) MS: m/z 174 (MH+)
Clorhidrato de 1-(aminometil)ciclopropanocarboxilato de etilo
ESI (+) MS: m/z 144 (MH+)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 8 Preparación de 2-{[(3-etoxi-3-oxopropanoil)amino]metil}-3-metilbutanoato de etilo
El clorhidrato de 2-(aminometil)-3-metilbutanoato de etilo se disolvió en 200 ml de DCM seco y se añadió DIPEA (14 ml, 2,5 eq.). Tras enfriar hasta 0ºC se añadió 3-cloro-3-oxopropanoato de etilo (6,3 ml, 35,4 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, la mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con KHSO_{4} ac. al 5% (x2), solución saturada de NaHCO_{3} ac. (x2) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó hasta sequedad. La cromatografía en columna (hexano/EtOAc = 7/3- 1/1) dio 8,35 g (30,55 mmol, rendimiento del 93,4%) del producto diana.
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 0,89 (d, J = 6,82 Hz, 3H) 0,93 (d, J = 6,83 Hz, 3H) 1,20 (m, 6H) 1,82-1,90 (m, 1H) 2,35 (m, 1H) 3,19-3,33 (2m, 4H) 4,06 (m, 4H) 8,11 (t, J = 5,12 Hz, 1H)
ESI (+) MS: m/z 274 (MH+)
Trabajando de forma análoga y comenzando a partir del derivado clorhidrato adecuado se prepararon los compuestos siguientes:
2-{[(3-etoxi-3-oxopropanoil)amino]metil}-3-metilpentanoato de etilo
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 0,90 (m, 6H), 1,19-1,65 (3m, 9H) 2,47 (m, 1H) 3,20 (m, 4H), 4,08 (m, 4H), 8,09 (m, 1H)
ESI (+) MS: m/z 288 (MH+)
2-{[(3-etoxi-3-oxopropanoil)amino]metil}-ciclopropanocarboxilato de etilo
ESI (+) MS: m/z 258 (MH+)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 9 Preparación de 5-isopropilpiperidin-2,4-diona
El 2-{[(3-etoxi-3-oxopropanoil)amino]metil}-metilbutanoato de etilo bruto (8,35 g, 30,55 mmol) se disolvió en 215 ml de tolueno seco y se calentó hasta 100ºC. Se añadieron 6,9 ml de solución de metóxido sódico al 20% en metanol (36 mmol) y la mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 4 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la fase orgánica se lavó con agua (X2). Las capas acuosas se recogieron se acidificaron (HCl al 10%) y se extrajeron con DCM (x4). Las capas orgánicas se recogieron y se evaporaron hasta sequedad. El producto bruto se trató con 250 ml de AcOH al 10% en agua y se sometió a reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se neutralizo con NaHCO_{3} (-pH 7) y se extrajo con DCM (x5). Las capas orgánicas se recogieron, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se evaporaron hasta sequedad. La cromatografía en columna (DCM/EtOH = 97/3) dio 2,35 g del producto diana (15,14 mmol. Rendimiento de 49,6%).
^{1}H RMN (400 MHz-DMSO-D6) \delta ppm 0,85 (d, J = 6,83 Hz) 0,94 (d, J = 6,95 Hz, 3H) 2,07-2,17 (m, 1H) 2,25-2,33 (m, 1H), 3,09-3,41 (m, 4H) 8,03 (s, 1H)
ESI (+) MS: m/z 156 (MH+)
Trabajando de forma análoga y comenzando a partir del derivado aminoéster adecuado se prepararon los compuestos siguientes:
5-sec-butilpiperidin-2,4-diona
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/(400 MHz) \delta ppm 0,87 (m, 6H) 1,36 (m, 2H) 1,95 (m, 1H) 2,35 (m, 1H) 3,34 (m, 4H), 8,02 (s, 1H)
ESI (+) MS: m/z 170 (MH+)
5-azaespiro[2,5]octan-6,8-diona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 0,95-1,02 (m, 2H) 1,09-1,15 (m, 2H) 3,33 (s, 2H) 3,42 (s, 2H) 8,22 (s, 1H)
ESI (+) MS: m/z 140 (MH+)
5,5-dietilpiperidin-2,4-diona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 0,77 (t, J = 7,56 Hz, 6H) 1,46 (c, J = 7,68 Hz, 4H) 3,23 (d, J = 3,78 Hz, 2H) 3,26 (s, 2H) 7,98 (s, 1H)
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Ejemplo 10 6-bencilpiperidin-2,4-diona
Una mezcla de beta-homofenilalanina (9,1 g, 50,94 mmol), diterc-butildicarbonato (12,2 g, 56,1 mmol), dioxanos (180 ml), agua (18 ml) y trietilamina (8,5 ml) se agitó a TA durante la noche. Tras la concentración y múltiples extracciones con tolueno se obtuvo ácido 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-fenilbutanoico en forma de un aceite y se usó directamente en la siguiente etapa. Se disolvió en diclorometano seco (370 ml) y se añadieron ácido Meldrum (8,1 g, 56,1 mmol) y DMAP (9,7 g, 79 mmol), la mezcla se enfrió hasta -5ºC y se añadió diciclohexilcarbodiimida (12,6 g, 61 mmol). Tas la adición, la mezcla de reacción se mantuvo en el frigorífico durante la noche. El precipitado se filtró y se lavó con diclorometano. El filtrado se diluyó con acetato de etilo, se lavó secuencialmente con KHSO_{4} ac. al 10%, salmuera, y después se concentró para dar 1-bencil-3-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-1,3-dioxan-5-il)-3-oxopropilcarbamato de terc-butilo bruto que se disolvió en acetato de etilo (250 ml) y se sometió a reflujo 2 horas. Tras la concentración y el tratamiento con diisopropiléter, el compuesto cristalizado se filtró y se lavó para dar 2-bencil-4,6-dioxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo en forma de polvo blando con un rendimiento global del 75%.
El grupo de t-butoxicarbonilo se pudo eliminar mediante tratamiento ácido (HCl 4M en dioxano) a TA. ^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 2,32 (dd, J = 15,73, 8,17 Hz, 1H) 2,42 (dd, J = 16,34, 4,76 Hz, 1H) 2,66-2,74 (m, 1H) 2,87-3,02 (m, 2H) 3,25-3,40 (m, 1H) 3,84-3,93 (m, 1H) 7,20-7,36 (m, 5H) 8,14 (s, 1H)
Trabajando de forma análoga también se obtuvieron los compuestos siguientes:
6-isopropilpiperidin-2,4-diona
ESI (+) MS: m/z 156 (MH+).
6-metilpiperidin-2,4-diona
ESI (+) MS: m/z 128 (MH+).
5,5-dimetilpiperidin-2,4-diona
^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 1,0 (s, 6H) 3,15 (s, 2H) 3,25 (s, 2H) 8,0 (s, 1H)
6-(2-feniletil)piperidin-2,4-diona
ESI (+) MS: m/z 218 (MH+).
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Ejemplo 11 Preparación de 5-bencilpiperidin-2,4-diona
A una solución de 2,4-dioxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (324 mg, 1,5 mmol) en THF seco (10 ml), enfriada hasta -20ºC en nitrógeno, gota a gota se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (LIHMDS) (4 ml de solución 1M en THF). Tras 20 min en agitación se añadieron 3,0 eq. de bromuro de bencilo y la solución se agitó a -20ºC durante 2 horas. La mezcla de reacción se vertió en KHSO_{4} ac. al 5% y se extrajo con DCM (x2). A las capas orgánicas recogidas (200 ml) se añadieron 20 ml de TFA y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Tras la evaporación, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano/EtOAc 1:2), dando 150 mg del producto diana (0,74 mmol, 49%).
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 2,81 (m, 1H) 3,12 (m, 2H) 3,34 (m, 4H) 7,23-7,30 (m, 5H), 7,99 (s, 1H)
ESI (+) MS: m/z 204 (MH+).
Trabajando de forma análoga y usando el haluro de alquilo adecuado se prepararon los compuestos siguientes:
5-isobutilpiperidin-2,4-diona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 0,88 (m, 6H), 1,16 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,61 (m, 1H), 3,08 (m, 1H) 3,20-3,40 (m, 4H), 8,03 (s, 1H)
ESI (+) MS: m/z 170 (MH+).
5-etilpiperidin-2,4-diona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6/) \delta ppm 0,89 (t, J = 7,56, 3H), 1,35 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 2,39 (m, 1H), 3,14-3,38 (m, 4H), 8,05 (s, 1H)
ESI (+) MS: m/z 142 (MH+).
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Ejemplo 12 Preparación de 5-etil-2,4-dioxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo
A una solución de 2,4-dioxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,92 g, 9,0 mmol) en THF seco (65 ml) y enfriado hasta -20ºC en nitrógeno se añadió, gota a gota, bis(trimetilsilil)amida de litio (LiHMDS) (27 ml de solución 1M en THF). Tras 20 min en agitación, se añadieron 2,53 ml (4,9 g, 31,3 mmol) de yodoetano y la solución se agitó a -20ºC durante 2 horas. La mezcla de reacción se vertió en KHSO_{4} ac. al 5% y se extrajo con DCM (x2). Las capas orgánicas recogidas se lavaron con agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (n-Hexano/EtOAc 1:1), dando 1,4 g del producto diana (5,8 mmol. 64%).
ESI (+) MS: m/z 242 (MH+).
Trabajando de forma análoga y usando 1-yodo-3-metilbutano se prepararon los compuestos siguientes:
5-isobutil-2,4-dioxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo
ESI (+) MS: m/z 270 (MH+).
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Ejemplo 13 Clorhidrato de 2-pirimidin-4-il-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
Los compuestos bromhidrato de 2-bromo-1-pirimidin-4-iletanona (67 mg, 0,239 mmol), piperidin-2,4-diona (50 mg, 0,358 mmol) y acetato de amonio (74 mg, 0,957 mmol) se disolvieron en etanol anhidro (1 ml) y se agitaron a t.a. durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad a presión reducida y el residuo se suspendió con agua (1 ml) y se filtró; el sólido se lavó con agua fría y se secó.
Al sólido marrón obtenido (30 mg) disuelto en MeOH (15 ml) se añadió HCl 4N en dioxanos y la mezcla se agitó durante 30 minutos y después se concentró a presión reducida hasta la mitad del volumen,
El precipitado obtenido se filtró, se lavó con acetato de etilo y se secó, para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo (31 mg, R = 52%).
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 2,87 (t, 2H, J = 6,83), 3,44 (t, 2H, J = 6,83), 7,19 (as, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 5,85), 8,68 (d, 1H, J = 5,85), 9,10 (s, 1H)
Trabajando de forma análoga también se obtuvieron los compuestos siguientes:
Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 2,91 (t, 2H, J = 6,71), 3,36 (t, 2H, J = 6,71), 7,27 (d, 1H, J = 6,70), 7,29 (as, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,86 (a, 1H), 8,21 (d, 1H, J = 6,70)
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Clorhidrato de 6,6-dimetil-2-(2-aminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 1,3 (sc, J = 2,7, 0,9, 0,5 Hz, 3H) 1,5 (sc, J = 2,7, 0,9, 0,5 Hz, 3H) 2,5 (sc, J = 15,6, 1,5, 0,9, 0,5 Hz, 1H) 2,6 (sc, J = 15,6, 1,5, 0,9, 0,5 Hz, 1H) 7,5 (sc, J = 0,9 Hz, 1H) 7,7 (sc, J = 4,8 Hz, 1H) 8,2 (sc, J = 4,8 Hz, 1H) 9,2 (sc, 1H).
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2-(2-fenilaminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, Disolvente) \delta ppm 2,7 (sc, J = 17,1, 6,2, 5,1, 1,5, 0,9 Hz, 1H) 2,8 (sc, J = 17,1, 6,3, 5,1, 1,5, 0,9 Hz, 1H) 3,5 (sc, J = 12,2, 6,2, 5,1, 2,5 Hz, 1H) 3,5 (sc, J = 12,2, 6,3, 5,1, 2,5 Hz, 1H) 6,9 (sc, J = 7,5 1,2 Hz, 1H) 7,3 (sc, J = 6,1, 7,5, 1,6, 0,4 Hz, 1H) 7,3 (sc, J = 8,1, 7,5, 1,6, 0,4 Hz, 1H) 7,6 (sc, J = 0,9 Hz, 1H) 7,6 (sc, J = 8,1, 2,5, 1,2, 0,4 Hz, 1H) 7,6 (sc, J = 8,1, 2,5, 1,2, 0,4 Hz, 1H) 7,7 (sc, J = 4,8 Hz, 1H) 8,4 (sc, J = 4,8 Hz, 1H)
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Clorhidrato de 2-(2-enilaminopirimidin-4-il)-7-fenil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, Disolvente) \delta ppm 3,7 (sc, J = 13,0, 8,0, 4,0 Hz, 1H) 3,8 (sc, J = 8,0, 6,0, 1,5, 0,9, 0,6 Hz, 1H) 3,9 (sc, J = 13,0, 6,0, 3,0 Hz, 1H) 6,9 (sc, J = 7,5 1,2 Hz, 1H) 7,0 (sc, J = 7,53, 7,1 1,4 1,0 Hz, 1H) 7,0 (sc, J = 7,3, 7,1, 1,4, 1,0 Hz, 1H) 7,2 (sc, J = 7,1, 1,2 Hz, 1H) 7,3 (sc, J = 8,1, 7,5, 1,6, 0,4 Hz, 1H) 7,3 (sc, J = 8,1, 7,5, 1,6, 0,4 Hz, 1H) 7,4 (sc, J = 7,3, 1,2, 1,2, 1,0, 0,6 Hz, 1H) 7,4 (sc, J = 7,3, 1,2, 1,2, 1,0, 0,6 Hz, 1H) 7,6 (sc, J = 0,9 Hz, 1H) 7,6 (sc, J = 8,1, 2,5, 1,2, 0,4 Hz, 1H) 7,6 (sc, J = 8,1, 2,5, 1,2, 0,4 Hz, 1H) 7,7 (sc, J = 4,8 Hz, 1H) 8,4 (sc, J = 4,8 Hz, 1H) 9,2 (sc, 1H)
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Clorhidrato de 2-(9H-purin-6-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 2,91 (t, 2H, J = 6,83), 3,42 (t, 2H, J = 6,83), 7,16 (a, 1H), 7,77 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 12,26 (as, 1H).
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Clorhidrato de 7-fenil-2-pirimidin-4-il-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo-[3,2-c]piridin-4-ona
H RMN (400 MHz, Disolvente) \delta ppm 3,7 (sc, J = 13,0, 8,0, 4,0 Hz, 1H) 3,8 (sc, J = 8,0, 6,0, 1,5, 0,9, 0,6 Hz, 1H) 3,9 (sc, J = 13,0, 6,0, 3,0 Hz, 1H) 7,0 (sc, J = 7,3, 7,1, 1,4, 1,0 Hz, 1H) 7,0 (sc, J = 7,3, 71, 1,4, 1,0 Hz, 1H) 7,2 (sc, J = 7,1, 1,2 Hz, 1H) 7,4 (sc, J = 7,3, 1,2, 1,2, 1,0, 0,6 Hz, 1H) 7,4 (sc, J = 7,3, 1,2, 1,2, 1,0, 0,6 Hz, 1H) 7,5 (sc, J = 0,9 Hz, 1H) 7,8 (sc, J = 4,8, 1,0 Hz, 1H) 8,9 (sc, J = 4,8, 0,5 Hz, 1H) 9,0 (sc, J = 1,0, 0,5 Hz, 1H) 9,2 (sc, 1H).
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-fenil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, Disolvente) \delta ppm 3,7 (sc, J = 13,0, 8,0, 4,0 Hz, 1H) 3,8 (sc, J = 8,0, 6,0, 1,5, 0,9, 0,6 Hz, 1H) 3,9 (sc, J = 13,0, 6,0, 3,0 Hz, 1H) 7,0 (sc, J = 7,3, 7,1, 1,4, 1,0 Hz, 1H) 7,0 (sc, J = 7,3, 71, 1,4, 1,0 Hz, 1H) 7,2 (sc, J = 7,1, 1,2 Hz, 1H) 7,4 (sc, J = 7,3, 1,2, 1,2, 1,0, 0,6 Hz, 1H) 7,4 (sc, J = 7,3, 1,2, 1,2, 1,0, 0,6 Hz, 1H) 7,5 (sc, J = 0,9 Hz, 1H) 7,7 (sc, J = 4,8, Hz, 1H) 8,2 (sc, J = 4,8 Hz, 1H) 9,2 (sc, 1H).
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Clorhidrato de 7-fenil-2-(9H-purin-6-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (DMSO-d_{6}/400 MHz) \delta ppm 3,93 (dd, 2H, J = 5,37, 12,80), 4,89 (m, 1H), 7,18 (d, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,32 (t, 2H), 7,85 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 12,27 (as, 1H).
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-6-isopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 0,92 (dd, J = 4,15, 6,83 Hz, 6H), 1,86 (m, 1H) 2,79 (dd, J = 9,39, 16,95 Hz, 1H) 2,92 (dd, J = 0,48, 19,90 Hz, 1H) 3,52 (m, 1H) 7,26 (as, 1H) 7,31 (d, J = 6,83 Hz, 1H) 7,52 (as, 1H) 8,21 (d, J = 6,71 Hz, 1H) 12,32 (as, 1H)
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 1,29 (d, J = 6,58 Hz, 3H) 3,06-3,24 (m, 2H) 3,41-3,56 (m, 1H) 7,30 (s, 1H) 7,35 (d, J = 6,83 Hz, 1H) 7,51 (s, 1H) 8,03 (s, 2H) 8,23 (d, J = 6,71 Hz, 1H) 12,24 (s, 1H)
El racemato, como derivado Boc, se sometió a separación quiral para obtener los enantiómeros puros. La cromatografía quiral se realizó en CHIRALCELL®OJ (5 x 50 cm).
La fase móvil fue n-Hex/EtOH/MeOH 70:23:7.
Condiciones analíticas, como clorhidrato: columna Chiralcell® OJ, con precolumna, fase móvil -Hex/EtOH 80:20.
(7 o 7S)-2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,8,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
TA 19,3 min; e.e 98,7%
(7 o 7S)-2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
TA 24,1 min; e.e 99,8%
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-6-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 1,24 (d, J = 6,34 Hz, 3H) 2,65 (dd, J = 16,71, 10,12 Hz, 1H) 3,01 (dd, J = 16,58, 5,00 Hz, 1H) 3,73-3,85 (m, 1H) 7,30 (s, 1H) 7,31 (d, J = 7,19 Hz, 1H) 7,52 (d, J = 2,07 Hz, 1H) 8,03 (s, 2H) 8,21 (d, J = 6,71 Hz, 1H) 12,34 (s, 1H)
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-7,7-dimetil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (500 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 1,37 (s, 6H) 3,20 (s, 2H) 7,39-7,43 (m, 1H) 7,46 (d, J = 6,70Hz, 1H) 7,52 (s, 1H) 8,16 (s, 2H) 8.28 (d, J = 6,70 Hz, 1H) 12,20 (s, 1H)
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-6-isobutil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 0,81-0,97 (m, 6H); 1,26-1,42 (m, 1H); 1,42-1,58 (m, 1H); 1,64-1,81 (m, 1H); 2,70 (dd, J = 16,58, 5,24 Hz, 1H); 3,63-3,80 (m, 1H); 7,29 (s, 1H); 7,31 (d, J = 6,71, 1H); 7,51 (s, 1H); 8,08 (ss, 2H); 8,21 (d, J = 6,71 Hz, 1H); 12,35 (s, 1H)
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Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-7,7-dietil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 0,80 (t, J = 7,44 Hz, 6H) 1,73-1,85 (m, 4H) 3,27 (d, J = 2,56 Hz, 2H) 7,31 (s, 1H) 7,37-7,43 (m, 1H) 7,46 (s, 1H) 7,91 (s, 2H) 8,24 (d, J = 6,58 Hz, 1H) 11,98 (s, 1H)
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2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-isopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-D6) \delta ppm 0,91 (t, J = 6,95 Hz, 6H) 1,07 (t, J = 6,95 Hz, 1H) 1,96-2,10 (m, 1H) 2,66-2,74 (m, 1H) 3,40-3,54 (m, 1H) 6,28-6,39 (n, 2H) 6,95 (d, J = 5,37, Hz, 1H) 6,97 (s, 1H) 7,03 (d, J = 2,19 Hz, 1H) 8,16 (d, J = 5,24 Hz, 1H) 11,64 (s, 1H)
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Ejemplo 14 2-(2-aminopirimidin-4-il)-3-yodo-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
A una solución de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (100 mg, 0,44 mmol) en DMF (5 ml) se añadió KOH (61 mg, 1,09 mmol). Se añadió una solución de yodo (115 mg, 0,45 mmol) en DMF (2 ml). Tras 30 minutos, la mezclad de reacción se vertió en agua helada (que contiene 0,5 ml de NH_{3} y 25 mg de K_{2}S_{2}O_{5}). El precipitado sólido se filtró, se lavó con agua fría y se secó. El compuesto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (DCM-MeOH- 30% NH_{4}OH, 95:5:0,5) para dar el producto en forma de un sólido amarillo (22 mg, rendimiento del 14%). ^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 2,87 (t, J = 6,77 Hz, 2H), 3,23-3,44 (n, 2H), 6,41 (s, 2H), 7,13 (t, J = 2,68 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 5,37 HZ, 1H), 8,29 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 12,03 (s, 1H).
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Ejemplo 15 2-[2-(ciclohexilmetil-amino)-pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
Los compuestos 2-(2-amino-pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (140 mg, 0,61 mmol), ácido trifluoroacético (565 \mul, 7,33 mmol) y ciclohexanocarbaldehído (151 \mul, 1,25 mmol) se mezclaron en DMF (10 ml). A la solución anterior se añadió triacetoxiborohidruro sódico (390 mg, 1,84 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en N_{2} durante 20 horas. Se añadieron ciclohexanocarbaldehído (151 \mul, 1,25 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (390 mg, 1,84 mmol) adicionales y la mezcla de reacción se agitó 20 horas más. La reacción se inactivó con NaOH 0,33N (50 ml) y el producto se extrajo con DCM (50 ml). El extracto de DCM se secó (MgSO_{4}) y se evaporó el disolvente. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (DCM-MeOH, 95:5) para dar el producto en forma de un sólido beige (80 mg, rendimiento de 40%).
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 0,87-1,29 (m, 5H), 1,43-1,85 (m, 6H), 2,87 (t, J = 6,77 Hz, 2H), 3,18-3,31 (m, 2H), 3,38-3,49 (m, 2H), 6,67-6,95 (m, 1H), 6,85 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 2,19 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 2,07 Hz, 1 H), 8,15 (d, J = 5,12 Hz, 1H), 11,65 (s, 1H). De forma análoga se pueden preparar los productos siguientes comenzando a partir del aldehído correspondiente:
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2-(2-propilamino-pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 0,93 (t, J = 7,38 Hz, 3H), 1,51-1,64 (m, 2H), 2,87 (t, J = 6,89 Hz, 2H), 3,34-3,48 (m, 4H), 6,81 (s, 1H), 6,86 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 2,32 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 2,07 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 11,66 (s, 1H).
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2-(2-dipropilamino-pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 0,90 (t, J = 7,38 Hz, 6H), 1,53-1,70 (m, 4H), 2,89 (t, J = 6,77 Hz, 2H), 3,38-3,49 (m, 2H), 3,59 (s, 4H), 6,86 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 2,44 Hz, 1H), 7,06-7,07 (m, 1H), 8,22 (d, J = 5,12 Hz, 1H), 11,62 (s, 1H).
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2-2(isobutilamino-pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 0,93 (d, J = 6,71, 6H), 1,81-1,95 (m, 1H), 2,87 (t, J = 6,83 Hz, 2H), 3,24 (s, 2H), 3,41 (td, J = 6,98, 2,38 Hz, 2H), 6,71-6,94 (m, 1H), 6,87 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 2,32 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 2,38 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 5,12 Hz, 1H), 11,88 (s, 1H).
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2-(2-[(furan-2-ilmetil)amino]-pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 2,87 (t, J = 6,83 Hz, 2H), 3,19-3,48 (m, 2H), 4,66 (d, J = 3,66 Hz, 2H), 6,28 (d, J = 2,68 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 3,17, 1,83 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 7,03-7,10 (m, 2H), 7,28 (s, 1H), 7,56 (dd, J = 1,71, o,85 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 5,24 Hz, 1H), 11,75 (s, 1H).
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N-(4-{[4-OXO-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]-pirimidin-2-ilamino)metil}-fenil)acetamida
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 2,03 (s, 3H), 2,91 (t, 2H), 3,38 (m, 2H), 4,73 (as, 2H), 7,1-7,45 (m, 7H), 7,53 (m, 2H), 6,17 (d, 1H), 12,0 (s, 1H).
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2-(2-bencilamino-pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
^{1}H RMN (500 MHz, DMSO-d6) \delta ppm 2,87 (t, J = 6,85 Hz, 2H), 3,42 (td, J = 6,85, 2,44 Hz, 2H), 4,68 (s, 2H), 6,92 (d, J = 5,18 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,28 Hz, 1H), 7,08 (t, J = 2,51 Hz, 1H), 7,21-7,26 (m, 1H), 7,27-7,48 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7,54 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 7,76 Hz, 2H), 8,19 (d, J = 5,18 Hz, 1H), 11,73 (s, 1H).
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Ejemplo 16 N-[4-(4-Oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)-pirimidin-2-il]benzamida
A una solución de éster terc-butílico del ácido 2-(2-benzoilamino-pirimidin-4-il)-4-oxo-1,4,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-5-carboxílico en THF se añadió HCl 4N en dioxanos y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 2 horas. La evaporación del disolvente dio el producto deseado en forma de un sólido.
^{1}H RMN (DMSO-d6) \delta ppm 1,45 (2H), 3,44 (2H), 7,22 (1H), 7,36 (1H), 7,57 (2H), 7,64 (2H), 8,03 (2H), 8,59 (1H), 11,26 (1H), 12,13 (1H).
Éster terc-butílico del ácido 2-(2-benzoilamino-pirimidin-4-il)-4-oxo-1,4,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-5-carboxílico
A una mezcla de éster terc-butílico del ácido 2-(2-amino-pirimidin-4-il)-4-oxo-1,4,6,7-tetrahidro-pirrolo[3,2-c]piridin-5-carboxílico y Et_{3}N (4 eq.) en THF seco se añadió PhCOCl (2 eq.) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en argón durante la noche. De este modo se añadió NaOH (1N); tras 30 minutos, el disolvente se evaporó y el residuo se disolvió en agua y la fase acuosa se extrajo con AcOEt (2X). A continuación, la fase orgánica se lavó con NH_{4}Cl ac. y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. Tras la evaporación del disolvente, el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH_{2}Cl_{2}:MeOH 97:3) para dar el producto puro en forma de un sólido.
^{1}H RMN (DMSO-d6) \delta ppm 1,49 (s, 9H), 2,98 (2H), 3,98 (2H), 7,35 (1H), 7,51-7,66 (m, 4H), 8,00 (2H), 10,82 (1H), 12,11 (1H).
De forma análoga se pueden preparar los productos siguientes comenzando a partir del agente acilante correspondiente.
Clorhidrato de 2-metil-N[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]propanamida
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta ppm 1,15 (6H, d), 2,93 (3H, m), 3,43 (2H), 7,25 (1H), 7,36 (1H, s) 7,58 (1H), 8,51 (1H), 11,03 (1H), 12,16 (1H).
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Clorhidrato de N[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]tiofen-2-carboxiamida
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta ppm 2,91 (2H), 3,44 (2H), 7,22 (1H), 7,27 (1H), 7,36 (1H), 7,63 (1H), 7,97 (1H), 8,22 (1H), 8,59 (1H), 11,33 (1H), 12,10 (1H).
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Clorhidrato de N[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]-2-fenilacetamida
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta ppm 2,90 (2H), 3,42 (2H), 7,21 (1H), 7,31 (5H), 7,34 (1H), 7,54 (1H), 8,51 (1H), 11,03 (1H), 12,06 (1H).
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Clorhidrato de N[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]-acetamida
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta ppm 2,31 (3H, s), 2,92 (2H, t), 3,51 (2H), 7,26 (1H), 7,37 (1H, s) 7,60 (1H), 8,50 (1H), 11,11 (1H), 12,22 (1H).
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4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-ilcarbamato de etilo
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta ppm 1,26 (t, 3H), 2,88 (t, 2H), 3,2-3,5 (m, 2H), 4,17 (c, 2H), 7,12 (t, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,4 (d, 1H), 8,48 (d, 1H), 10,05 (s, 1H), 11,80 (s, 1H).

Claims (18)

1. Un compuesto de fórmula (I) para tratar trastornos de la proliferación celular causados y/o asociados con una alteración de la actividad de la proteína cinasa seleccionados del grupo compuesto por cáncer, enfermedad de Alzheimer, infecciones víricas, enfermedades autoinmunitarias, trastornos neurodegenerativos, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgica, en los que el compuesto debe administrarse en una cantidad eficaz a un mamífero que lo necesite.
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14
en la que
R es un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de amino, arilamino, alquilamino C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido, arilaquilamino opcionalmente sustituido, heteroarilalquilamino, dialquilamino C_{1}-C_{6} y acilamino;
R_{1} y R_{2} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o de halógeno, un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, un grupo amino o arilamino o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, R_{1} y R_{2} pueden formar un grupo divalente -NH-CH=N, -N=CH-NH o -NH-CH=CH;
R_{3}, R'_{3}, R_{4} y R'_{4} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, heterociclilo, arilo, cicloalquil-alquilo, heterociclil-alquilo o aril-alquilo; o R_{3} y R'_{3} o R_{4} y R'_{4}, tomados juntos, forman un grupo alquilo C_{3}-C_{6} cíclico;
R_{5} es un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada y sus sales farmacéuticamente aceptables.
2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el cáncer se selecciona del grupo compuesto por carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de línea mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatoso, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.
3. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el mamífero que lo necesita se somete además a un régimen de radioterapia o quimioterapia en combinación con al menos un agentes citostático o citotóxico.
4. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el mamífero que lo necesita es un ser humano.
5. Un compuesto de fórmula (I)
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15
en la que
R es un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de amino, arilamino, alquilamino C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido, arilalquilamino opcionalmente sustituido, heteroarilalquilamino, dialquilamino C_{1}-C_{6} y acilamino.
R_{1} y R_{2} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o de halógeno, un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, un grupo amino o arilamino o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, R_{1} y R_{2} pueden formar un grupo divalente -NH-CH=N, -N=CH-NH o -NH-CH=CH;
R_{3}, R'_{3}, R_{4} y R'_{4} son, cada uno de forma independiente, un átomo de hidrógeno o un grupo seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, heterociclilo, arilo, cicloalquil-alquilo, heterociclil-alquilo o aril-alquilo; o R_{3} y R'_{3} o R_{4} y R'_{4}, tomados juntos, forman un grupo alquilo C_{3}-C_{8} cíclico; R_{5} es un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que se excluya el compuesto 2-[2-(dimetilamino)-5-fluoropirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-C]-piridin-4-ona.
6. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 5, en el que R es hidrógeno, amino o fenilamino; R_{1} y R_{2} son ambos átomos de hidrógeno o, tomados junto con el enlace pirimidina al que están unidos, forman un grupo divalente -NH-CH=N-; y R_{3}, R'_{3}, R_{4}, R'_{4} y R_{5} son como se ha definido en lo que antecede.
7. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 5, en el que R_{3} y R'_{3} son ambos átomos de hidrógeno o uno de ellos es un grupo fenilo y el restante es un átomo de hidrógeno; y R, R_{1}, R_{2}, R_{4}, R'_{4} y R_{5} son como se ha definido en lo que antecede.
8. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 5, en el que R_{4} y R'_{4} son ambos átomos de hidrógeno o ambos grupos metilo; y R, R_{1}, R_{2}, R_{3} y R'_{3}, R_{4}, R'_{4} y R_{5} son como se ha definido en lo que antecede.
9. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 5, en el que R_{5} es un átomo de hidrógeno y R, R_{1}, R_{2}, R_{3} y R'_{3}, R_{4} y R'_{4} son como se ha definido en lo que antecede.
10. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 5, opcionalmente en forma de su sal farmacéutica aceptable, seleccionado del grupo compuesto por:
Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
Clorhidrato de 2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-fenil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
Clorhidrato de 2-(2-fenilaminopirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
Clorhidrato de 2-(9H-purin-6-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
Clorhidrato de 2-pirimidin-4-il-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
Clorhidrato de 7-fenil-2-(9H-purin-6-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
Clorhidrato de 2-(2-anilinopirimidin-4-il)-7-fenil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-2(aminopirimidin-4-il)-6-isopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-2(aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-2(aminopirimidin-4-il)-6-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-2(aminopirimidin-4-il)-7,7-dimetil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-2(aminopirimidin-4-il)-6-isobutil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2c]piridin-2-il)pirimidin-2-ilcarbamato de etilo;
(7R o 7S)-2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
(7R o 7S)-2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-metil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-3-yodo-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-7,7-dietil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-{2-[(2-furilmetil)amino]pirimidin-4-il}-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
N-[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]benzamida;
2-(2-aminopirimidin-4-il)-7-isopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-[2-(bencilamino)pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-[2-(propilamino)pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-[2-(isobutilamino)pirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-{2-[(ciclohexilmetil)amino]pirimidin-4-il)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona;
2-{2-[(2-furilmetil)amino]pirimidin-4-il}-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona y
Trifluoroacetato de N-[4-({[4-(4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)pirimidin-2-il]amino}metil)fenil]acetamida.
11. Un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, según la reivindicación 5, en el que el procedimiento comprende:
a) la halogenación de un compuesto de fórmula (II) de modo que se obtenga un compuesto de fórmula (III)
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16 
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en la que R, R_{1} y R_{2} tienen los significados indicados en lo que antecede, R_{5} es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal o ramificada y Hal representa un átomo de halógeno adecuado, preferentemente bromo o cloro;
b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (III) con un compuesto de fórmula (IV)
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en la que R_{3}, R'_{3}, R_{4}, R'_{4} tienen los significados indicados en lo que antecede, de modo que se obtenga un compuesto de fórmula (I) y, opcionalmente, convertirlo en otro compuesto de fórmula (I) y/o en su sal farmacéuticamente aceptable.
12. El procedimiento según la reivindicación 11, en el que la etapa (a) se lleva a cabo bromando o clorando el compuesto de fórmula (II).
13. El procedimiento según la reivindicación 12, en el que, dentro del compuesto de fórmula (III), Hal representa un átomo de bromo o cloro.
14. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 5, excepto porque el compuesto 2-[2-(dimetilamino)-5-fluoropirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona no se excluye, y al menos un excipiente, transportador y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
15. Una composición farmacéutica según la reivindicación 14, que además comprende uno o más agentes quimioterapéuticos.
16. Un producto o kit que comprende un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, como se ha definido en la reivindicación 5, excepto porque el compuesto 2-[2-(dimetilamino)-5-fluoropirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona no se excluye, o composiciones farmacéuticas del mismo como se definen en la reivindicación 14, y uno o más agentes quimioterapéuticos, como preparación combinada para el uso simultáneo, por separado o secuencial en terapia anticancerosa.
17. Un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 5, excepto porque el compuesto 2-[2-(dimetilamino)-5-fluoropirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona no se excluye, para usar como medicamento.
18. Uso de un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 5, excepto porque el compuesto 2-[2-(dimetilamino)-5-fluoropirimidin-4-il]-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona no se excluye, en la fabricación de un medicamento con actividad antitumoral.
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