ES2319429T3 - Inhibidores de cinesina mitotica. - Google Patents
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Abstract
El compuesto de fórmula I ** ver fórmula** o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R 1 y R 2 se seleccionan independientemente de: H y alquilo(C1-C6).
Description
Inhibidores de cinesina mitótica.
Esta invención se refiere a derivados de
2,5-dihidropirrol 2,2-disustituido
que son inhibidores de cinesinas mitóticas, en particular la
cinesina mitótica KSP, y son útiles en el tratamiento de
enfermedades proliferativas celulares, por ejemplo cáncer,
hiperplasias, reestenosis, hipertrofia cardiaca, trastornos
inmunitarios e inflamación.
Entre los agentes terapéuticos usados para
tratar el cáncer están los taxanos y alcaloides de la vinca. Los
taxanos y alcaloides de la vinca actúan sobre los microtúbulos, que
están presentes en una diversidad de estructuras celulares. Los
microtúbulos son el elemento estructural principal del huso
mitótico. El huso mitótico es responsable de la distribución de
múltiples copias del genoma a cada una de las dos células hijas que
resultan de la división celular. Se supone que la interrupción del
huso mitótico por medio de estos fármacos da como resultado la
inhibición de la división de las células del cáncer, y la inducción
de la muerte de las células del cáncer. Sin embargo, los
microtúbulos forman otros tipos de estructuras celulares, incluidas
las vías para el transporte intracelular en procesos nerviosos.
Debido a que estos agentes no seleccionan como diana los husos
mitóticos de forma específica, tienen efectos secundarios que
limitan su utilidad.
Las mejoras en la especificidad de los agentes
usados para tratar el cáncer tienen un interés considerable por los
beneficios terapéuticos que se producirían si pudieran reducirse los
efectos secundarios asociados con la administración de estos
agentes. Tradicionalmente, se asocian mejoras importantes en el
tratamiento del cáncer con la identificación de agentes
terapéuticos que actúan a través de mecanismos novedosos. Los
ejemplos de esto incluyen no sólo los taxanos, sino también la clase
camptotecina de inhibidores de topoisomerasa I. Desde estas dos
perspectivas; las cinesinas mitóticas son dianas atractivas para
nuevos agentes anticancerosos.
Las cinesinas mitóticas son enzimas esenciales
para la organización y función del huso mitótico, pero no son en
general parte de otras estructuras microtubulares, tales como en
procesos nerviosos. Las cinesinas mitóticas desempeñan funciones
esenciales durante todas las fases de la mitosis. Estas enzimas son
"motores moleculares" que transforman la energía liberada por
la hidrólisis de ATP en una fuerza mecánica que acciona el
movimiento direccional de carga celular a lo largo de microtúbulos.
El dominio catalítico suficiente para esta tarea es una estructura
compacta de aproximadamente 340 aminoácidos. Durante la mitosis, las
cinesinas organizan los microtúbulos dentro de la estructura
bipolar que es el huso mitótico. Las cinesinas median el movimiento
de los cromosomas a lo largo de los microtúbulos del huso, así como
cambios estructurales en el huso mitótico asociados con las fases
específicas de la mitosis. La perturbación experimental de la
función mitótica de las cinesinas provoca malformación o disfunción
del huso mitótico, dando como resultado frecuentemente un paro del
ciclo celular y muerte celular.
Entre las cinesinas mitóticas que se han
identificado está la KSP. La KSP pertenece a una subfamilia de
cinesinas conservadas de forma evolutiva de motores microtubulares
dirigidos hacia el extremo más que se organizan para dar
homotetrámeros bipolares constituidos por homodímeros antiparalelos.
Durante la mitosis, se asocia la KSP con microtúbulos del huso
mitótico. La microinyección de anticuerpos dirigidos contra la KSP
dentro de células humanas impide la separación de polos del huso
durante la prometafase, dando lugar a husos monopolares y
provocando el paro mitótico e inducción de la muerte celular
programada. La KSP y cinesinas relacionadas en otros organismos no
humanos, conecta microtúbulos antiparalelos y los desliza uno con
respecto a otro, forzando de esta manera la separación de los dos
polos del huso. La KSP puede también mediar un alargamiento del
huso de anafase B y centrado de los microtúbulos en el polo del
huso.
Se ha descrito la KSP humana (también denominada
HsEg5) [Blangy, y col., Cell, 83:1159-1169 (1995);
Whitehead, y col., Arthritis Rheum., 39:1635-1642
(1996); Galgio y col., J. Cell Biol., 135:339-414
(1996); Blangy, y col., J Biol. Chem.,
272:19418-19424 (1997); Blangy, y col., Cell Motil
Cytoskeleton, 40:174-182 (1998); Whitehead y
Rattner, J. Cell Sci., 111:2551-2561 (1998); Kaiser,
y col., JBC 274:18925-18931 (1999); números de
acceso de GenBank: X85137, NM004523 y U37426], y se ha descrito un
fragmento del gen de la KSP (TRIP5) [Lee, y col., Mol Endocrinol.,
9:243-254 (1995); número de acceso de GenBank
L40372]. Se han informado homólogos de KSP de Xenopus (Eg5), así
como K-LP61 F/KRP 130 de Drosophila.
Recientemente se han descrito ciertas
quinazolinonas como inhibidores de la KSP (publicación PCT WO
01/30768, 3 de mayo de 2001).
Las cinesinas mitóticas son dianas atractivas
para el descubrimiento y desarrollo de quimioterapéuticos mitóticos
novedosos. Por consiguiente, es un objeto de la presente invención
proporcionar compuestos, procedimientos y composiciones útiles en
la inhibición de la KSP, una cinesina mitótica.
La presente invención se refiere a derivados de
dihidropirazol, que son útiles para tratar enfermedades
proliferativas celulares, para tratar trastornos asociados con la
actividad de la cinesina KSP, y para inhibir la cinesina KSP.
Figura 1 Un dibujo ORTEP de Compuesto
2-5.
Figura 2 Un dibujo ORTEP de Compuesto
3-1 Para simplificar el dibujo no se muestran
muchos de los átomos de hidrógeno.
Los compuestos de esta invención son útiles en
la inhibición de cinesinas mitóticas y se ilustran por medio de un
compuesto de Fórmula I:
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal o esteroisómero
farmacéuticamente aceptable del
mismo,
en la que:
R^{1} y R^{2} se seleccionan
independientemente de H y
alquilo(C_{1}-C_{6}).
Otra forma de realización de la presente
invención se ilustra por medio de un compuesto de Fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal o esteroisómero
farmacéuticamente aceptable del
mismo,
en la que:
R^{1} y R^{2} se seleccionan
independientemente de H y
alquilo(C_{1}-C_{6}).
Los ejemplos específicos de los compuestos de la
presente invención incluyen:
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(2R,4R)-2-(fluorometil)-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(2S,4S)-2-(fluorometil)-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metil-1-oxidopiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-isopropilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4S)-3-fluoropiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
o una de sus sales o estereoisómero
farmacéuticamente
aceptable.
Son ejemplos particulares de los compuestos de
la presente invención:
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida.
\vskip1.000000\baselineskip
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida.
\vskip1.000000\baselineskip
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida.
\vskip1.000000\baselineskip
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(2R,4R)-2-(fluorometil)-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida.
\vskip1.000000\baselineskip
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida.
\vskip1.000000\baselineskip
o una de sus sales o estereoisómero
farmacéuticamente
aceptable.
Los compuestos de la presente invención pueden
tener centros asimétricos, ejes quirales, y planos quirales (como
se describe en: E.L. Eliel y S.H. Wilen, Stereochemistry of Carbon
Compounds, John Wiley & Sons, Nueva York, 1994, páginas
1119-1190), y presentarse como racematos, mezclas
racémicas y como diastereómeros individuales, con todos los
posibles isómeros y mezclas de los mismos, incluidos isómeros
ópticos, estando incluidos todos los isómeros de este tipo en la
presente invención. Además, los compuestos descritos en este
documento pueden existir como tautómeros y se propone que ambas
formas tautoméricas estén abarcadas por el alcance de la invención,
aunque sólo se describe una estructura tautomérica.
Cuando se presenta cualquier variable más de una
vez en cualquier constituyente, en cada presentación su definición
es independiente de cada otra presentación. También, se permiten
combinaciones de sustituyentes y variables sólo si tales
combinaciones dan como resultado compuestos estables. Las líneas
dibujadas dentro de los sistemas de anillos desde los sustituyentes
representan que el enlace indicado puede estar unido a cualquiera de
los átomos del anillo sustituibles. Si el sistema de anillos es
policíclico, se pretende que el enlace esté unido a cualquiera de
los átomos de carbono adecuados sólo en el anillo próximo.
Se entiende que los sustituyentes y patrones de
sustitución en los compuestos de la presente invención pueden ser
seleccionados por un experto en la técnica para proporcionar
compuestos que son químicamente estables y que pueden sintetizarse
fácilmente mediante técnicas conocidas en la técnica, así como los
procedimientos que se exponen a continuación, a partir de
materiales de partida disponibles fácilmente. Si un sustituyente
está sustituido por sí mismo con más de un grupo, se entiende que
estos grupos múltiples pueden estar en el mismo carbono o en
diferentes carbonos, siempre que dé como resultado una estructura
estable. La frase "opcionalmente sustituido con uno o más
sustituyentes" debe tomarse como equivalente a la frase
"opcionalmente sustituido con al menos un sustituyente" y en
tales casos la forma de realización de preferencia tendrá desde cero
hasta tres sustituyentes.
Tal como se usa en este documento, se pretende
que "alquilo" incluya grupos de hidrocarburos alifáticos
saturados tanto de cadena lineal como ramificada que tienen el
número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo,
C_{1}-C_{10}, como en "alquilo
C_{1}-C_{10}" se define para incluir los
grupos que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 carbonos con una
organización lineal o ramificada. Por ejemplo, "alquilo
C_{1}-C_{10}" incluye específicamente
metilo, etilo, n-propilo, i-propilo,
n-butilo, t-butilo,
i-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo,
decilo, y así sucesivamente. El término "cicloalquilo"
significa un grupo hidrocarburo alifático saturado monocíclico que
tiene el número especificado de átomos de carbono.
En la presente invención está incluida la forma
libre de los compuestos, así como las sales farmacéuticamente
aceptables y estereoisómeros de los mismos. Algunos de los
compuestos mostrados a modo de ejemplo en este documento son las
sales protonadas de compuestos de amina. El término "forma
libre" se refiere a los compuestos de amina que no están en
forma de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluidas no
sólo incluyen las sales mostradas a modo de ejemplo para los
compuestos específicos descritos en este documento, sino también
todas las sales farmacéuticamente aceptables de la forma libre de
los compuestos. La forma libre de los compuestos de sales
específicas descritos pueden aislarse usando técnicas conocidas en
la técnica. Por ejemplo, la forma libre puede regenerarse tratando
la sal con una adecuada disolución básica acuosa diluida tal como
NaOH, carbonato de potasio, amonio y bicarbonato de sodio acuosos
diluidos. Las formas libres pueden diferir de sus respectivas
formas salinas de alguna manera en ciertas propiedades físicas,
tales como la solubilidad en disolventes polares, pero por lo
demás, las sales de ácidos y bases son farmacéuticamente
equivalentes a sus respectivas formas libres para los fines de la
invención.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los
presentes compuestos pueden sintetizarse a partir de los compuestos
de esta invención que contienen un resto básico o ácido mediante
procedimientos químicos convencionales. Generalmente, se preparan
las sales de los compuestos básicos mediante cromatografía de
intercambio iónico o por medio de la reacción de la base libre con
cantidades estequiométricas o con un exceso del ácido orgánico o
inorgánico que forma la sal deseada en un disolvente adecuado o
diversas combinaciones de disolventes. De forma similar, se forman
las sales de los compuestos ácidos por medio de reacciones con la
base orgánica o inorgánica adecuada.
Por consiguiente, las sales farmacéuticamente
aceptables de los compuestos de esta invención incluyen las sales
no tóxicas convencionales de los compuestos de esta invención tal
como se forman mediante la reacción de un compuesto presente básico
con un ácido orgánico o inorgánico. Por ejemplo, las sales no
tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos
tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico,
fosfórico, nítrico y similares, así como las sales preparadas a
partir de ácidos orgánicos tales como ácido acético, propiónico,
succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico,
cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético,
glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico,
2-acetoxibenzoico, fumárico, toluensulfónico,
metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, isetiónico,
trifluoroacético y similares.
Cuando el compuesto de la presente invención es
ácido, "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales
preparadas a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables
que incluyen bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales
derivadas de bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio,
calcio, cobre, férricas, ferrosas, de litio, magnesio, sales
mangánicas, manganosas, de potasio, sodio, cinc y similares. Son
particularmente de preferencia las sales de amonio, calcio,
magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas
orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas
primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que
incluyen aminas sustituidas que se presentan en la naturaleza,
aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio de iones, tales
como arginina, betaína, cafeína, colina,
N,N^{1}-dibenciletilendiamina, dietilamina,
2-dietilaminoetanol,
2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina,
N-etilmorfolina, N-etilpiperidina,
glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina,
lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas
de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina,
trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares.
La preparación de las sales farmacéuticamente
aceptables descritas anteriormente y otras sales farmacéuticamente
aceptables típicas están descritas más completamente por Berg y
col., "Farmaceutical Salts", J. Farm. Sci., 1977:66:
1-19.
También debe observarse que los compuestos de la
presente invención son potencialmente sales internas o bipolares,
puesto que en condiciones fisiológicas un resto ácido desprotonado
en el compuesto, tal como un grupo carboxilo, puede ser aniónico, y
esta carga electrónica puede entonces equilibrarse internamente
frente a la carga catiónica de un resto básico protonado o
alquilado, tal como un átomo de nitrógeno cuaternario.
Las siguientes abreviaturas, usadas en los
Esquemas y Ejemplos, se definen a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de esta invención pueden
prepararse usando reacciones como se muestran en los siguientes
esquemas, además de otras manipulaciones habituales que se conocen
en la bibliografía o se muestran a modo de ejemplo en los
procedimientos experimentales. Los esquemas ilustrativos siguientes,
por consiguiente, no se limitan a los compuestos enumerados o por
ningún sustituyente particular usado para fines ilustrativos. La
numeración de los sustituyentes, tal como se muestra en los
esquemas no se correlaciona necesariamente con la usada en las
reivindicaciones y frecuentemente, por claridad, se muestra un único
sustituyente unido al compuesto donde se permiten múltiples
sustituyentes en las definiciones anteriores en este documento.
Tal como se muestra en el esquema A, el producto
intermedio clave dihidropirrol 2,2-disustituido
A-8 puede obtenerse a partir de
\alpha-fenilglicinas sustituidas de manera
adecuada fácilmente disponibles. Siguiendo el procedimiento
descrito por Van Betsbrugge y col. (Tetrahedron, 1997, 53,
9233-9240) se prepara
\alpha-alil-\alpha-fenilglicina
A-3. La reducción del éster y la ciclización con
carbonildiimidazol proporciona el producto intermedio
A-4. La oxidación con rutenio de la olefina
alílica, seguida por la formación del éster y alquilación del
nitrógeno proporciona el intermedio A-5. La
ciclización y descarboxilación dan como resultado el intermedio
A-6. A continuación puede usarse el anillo
carbonilo para incorporar un resto fenilo sustituido de manera
adecuada. La posterior saponificación y protección del oxígeno da
lugar a los intermedios protegidos A-8. Los
enantiómeros de A-8 pueden separarse frecuentemente
utilizando técnicas de cromatografía quiral. Posteriormente puede
hacerse reaccionar el nitrógeno del anillo con trifosgeno para
preparar el cloruro de carbonilo activado A-9.
El Esquema B ilustra la preparación de la
aminopiperidina fluorada B-5, partiendo con la
piperidona N protegida. Los pares diastereoméricos cis y trans
pueden separarse frecuentemente por medio de cromatografía en gel de
sílice y los enantiómeros pueden separarse frecuentemente usando
técnicas de cromatografía quiral.
Tal como se muestra en el Esquema C, tal
aminopiperidina fluorada puede a continuación hacerse reaccionar
con el intermedio dihidropirrol A-9 para
proporcionar el presente compuesto C-1.
El Esquema D ilustra la preparación de
compuestos de
2-fluorometil-4-aminopiperidina
y la incorporación de esos grupos en los compuestos de la presente
invención. Debe notarse que el desplazamiento de fluoruro del
hidroxilo de la cadena lateral en el intermedio D-3
con frecuencia da lugar al intermedio D-4 deseado y
al compuesto homólogo de anillo D-5. Estos
compuestos intermedios pueden separarse por medio de cromatografía
en gel de sílice.
El Esquema E ilustra una preparación alternativa
de los compuestos de
2-fluorometil-3-aminopiperidina
en la que no se produce el isómero de anillo de siete miembros.
Tal como se muestra en los Esquemas F y G, el
resto hidroxilo de A-9 puede sufrir alquilación con
una diversidad de reactivos.
Tal como se ilustra en el Esquema H, el
reemplazo del resto hidroxilo del compuesto C-1 con
una amina sustituida de manera adecuada tiene lugar a través del
aldehído correspondiente H-1, seguido por
alquilación reductora, que da lugar al presente compuesto
H-2.
El Esquema I ilustra la síntesis de compuestos
dihidropirrol 2-monosustituidos de la presente
invención. La preparación y desplazamiento del resto
metilimidazolilo en el intermedio I-7 con la
aminopiperidina proporciona el presente compuesto
I-8.
El Esquema J ilustra la homologación de la
cadena lateral 2-alquilo para proporcionar los
presentes compuestos J-3 y J-4.
Los Esquemas K a M ilustran otras modificaciones
de la cadena lateral C-2 alquilo partiendo con el
aldehído intermedio H-1. De esta manera, en el
Esquema K se trata el aldehído H-1 con un reactivo
de Grignard, tal como un reactivo de Grignard de alquilo, para
proporcionar el compuesto hidroxi K-1.
El Esquema L ilustra la homologación de la
cadena lateral de C-2. Se trata el aldehído
H-1 con un fosfonoacetato y a continuación se
reduce el doble enlace conjugado para proporcionar el éster
L-1. La posterior reducción del éster y oxidación
del alcohol proporciona el aldehído L-3, que puede
alquilar de manera reductora una amina sustituida de manera
adecuada para proporcionar el presente compuesto
L-4. También se ilustra otra alquilación de
L-4.
El Esquema M ilustra la fluoración de la cadena
lateral del C-2 y la posterior conversión del resto
hidroxilo en una amina a través del desplazamiento del triflato
correspondiente con azida de sodio.
El Esquema N ilustra la incorporación de un
resto difluorometilo en la cadena lateral de
C-2.
En los siguientes esquemas; las variables son
como se definen en las posiciones correspondientes de las
estructuras de las reivindicaciones.
Esquema
A
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Esquema
B
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\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
C
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\newpage
Esquema
D
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Esquema
E
Esquema
F
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
G
\newpage
Esquema
H
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\newpage
Esquema
I
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\newpage
Esquema
J
Esquema
K
Esquema
L
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\newpage
Esquema
M
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\newpage
Esquema
N
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la invención se usan en una
diversidad de aplicaciones. Como podrán apreciar los expertos en la
técnica, la mitosis puede alterarse de diversas maneras; es decir,
uno puede afectar la mitosis aumentando o disminuyendo la actividad
de un componente en la ruta mitótica. Expuesto de manera diferente,
la mitosis puede afectarse (por ejemplo, interrumpirse) alterando
el equilibrio, por medio de la inhibición o activación de ciertos
componentes. Pueden usarse enfoques similares para alterar la
meiosis.
En una forma de realización de preferencia, se
usan los compuestos de la invención para modular la formación del
huso mitótico, provocando de esta manera el paro prolongado del
ciclo celular en la mitosis. En este documento se entiende por
"modular" a alterar la formación del huso mitótico, incluidos
aumentar y disminuir la formación del huso. En este documento se
entiende por "formación del huso mitótico" a la organización de
microtúbulos dentro de estructuras bipolares por medio de cinesinas
mitóticas. En este documento se entiende por "disfunción del huso
mitótico" al paro mitótico y formación del huso monopolar.
Los compuestos de la invención son útiles para
unirse a y/o modular la actividad de una cinesina mitótica. En una
forma de realización de preferencia, la cinesina mitótica es un
miembro de la subfamilia bimC de las cinesinas mitóticas (como se
describe en la Patente de los EEUU Nº 6.284.480, columna 5). En otra
forma de realización de preferencia, la cinesina mitótica es KSP
humana, aunque la actividad de las cinesinas mitóticas de otros
organismos también puede modularse por medio de los compuestos de la
presente invención. En este contexto, modular significa aumentar o
disminuir la separación de los polos del huso, provocando
malformación, es decir, separación de los polos mitóticos, o
provocando de otra manera una perturbación morfológica del huso
mitótico. También se incluyen dentro de la definición de KSP para
estos fines, variantes y/o fragmentos de KSP. Además, pueden
inhibirse otras cinesinas mitóticas por medio de los compuestos de
la presente invención.
Los compuestos de la invención se usan para la
preparación de medicamentos para tratar enfermedades de
proliferación celular. Los estados de enfermedad que pueden
tratarse mediante los procedimientos y composiciones proporcionados
en este documento incluyen, pero no se limitan a, cáncer (que se
analiza más a continuación), enfermedad autoinmune, artritis,
rechazo de injertos, enfermedad inflamatoria intestinal,
proliferación inducida tras procedimientos médicos, incluidos, pero
no limitados a cirugía, angioplastía, y similares. Es evidente que
en algunos casos las células pueden no estar en un estado de hiper
o hipoproliferación (estado anormal) y requieren todavía
tratamiento. Por ejemplo, durante la cicatrización de heridas, las
células pueden estar proliferando "normalmente", pero puede
desearse el aumento de la proliferación. De forma similar, tal como
se trató anteriormente, en el campo de la agricultura, las células
pueden estar en un estado "normal", pero puede desearse la
modulación de la proliferación para aumentar una cosecha,
aumentando directamente el crecimiento de una cosecha, o inhibiendo
el crecimiento de una planta u organismo que afecta negativamente a
la cosecha. Por consiguiente, en una forma de realización, la
invención en este documento incluye la aplicación a las células o
los individuos aquejados o aquejados de forma inminente con uno
cualquiera de estos trastornos o estados.
Los compuestos y las composiciones
proporcionados en este documento se consideran particularmente
útiles para el tratamiento del cáncer, incluidos los tumores
sólidos tales como carcinomas de piel, mama, cervicales, carcinomas
testiculares, etc. Más particularmente, los cánceres que pueden
tratarse por medio de los compuestos, composiciones y
procedimientos de la invención incluyen, pero no se limitan a:
Cardiacos: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma,
rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y
teratoma; Pulmón: carcinoma broncogénico (células escamosas,
células pequeñas no diferenciadas, células grandes no diferenciadas,
adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma
bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma;
Gastrointestinal: esófago (carcinoma de células escamosas,
adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estómago (carcinoma,
linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma ductal,
insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma),
intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides,
sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma,
fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular,
adenoma velloso, hamartoma, leiomioma); Tracto
genitourinario: riñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm
[nefroblastoma], linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de
células escamosas, carcinoma de células de transición,
adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo
(seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma,
coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales,
fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma);
Hígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular),
colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma
hepatocelular, hemangioma; Hueso: sarcoma osteogénico
(osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno,
condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células
reticulares), mieloma múltiple, tumor maligno de células gigantes,
cordoma, osteocondroma (exostosis osteocartilaginosas), condroma
benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumor
de células gigantes; Sistema nervioso: cráneo (osteoma,
hemangioma, granuloma, xantoma, osteítis deformante), meninges
(meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma,
meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma],
glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma,
retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de la médula
espinal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológicos: útero
(carcinoma endometrial), cuello del útero (carcinoma cervical,
displasia cervical pretumoral), ovarios (carcinoma ovárico)
[cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma
no clasificado], tumores de células tecales y granulosas, tumores de
células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma
maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma
intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina
(carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas,
sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrional), trompas de falopio
(carcinoma); Hematológicos: sangre (leucemia mieloide [aguda
y crónica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica
crónica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple,
síndrome mielodisplásico, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin
[linfoma maligno]; Piel: melanoma maligno, carcinoma de
células basales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Karposi,
nevus displásico de lunares, lipoma, angioma, dermatofibroma,
queloides, psoriasis; y Glándulas suprarrenales:
neuroblastoma. Por consiguiente, el término "célula cancerosa"
tal como se proporciona en este documento, incluye una célula
aquejada por una cualquiera de las afecciones identificadas
anteriormente.
Los compuestos de la presente invención también
pueden ser útiles como agentes antifúngicos, al modular la
actividad de los miembros fúngicos del subgrupo de la cinesina bimC,
tal como se describe en la Patente de los EE.UU. Nº 6.284.480.
Los compuestos de esta invención pueden
administrarse a mamíferos, de preferencia seres humanos, solos o,
de preferencia, en combinación con vehículos, excipientes o
diluyentes farmacéuticamente aceptables, en una composición
farmacéutica, según la práctica farmacéutica convencional. Los
compuestos pueden administrarse por vía oral o parenteral,
incluidas las vías de administración intravenosa, intramuscular,
intraperitoneal, subcutánea, rectal y tópica.
Tal como se usa en este documento, se pretende
que el término "composición" incluya un producto que comprende
los componentes especificados en las cantidades específicas, así
como cualquier producto que resulta, directa o indirectamente, de
la combinación de los componentes específicos en las cantidades
especificadas.
Las composiciones farmacéuticas que contienen el
principio activo pueden estar en una forma adecuada para uso oral,
por ejemplo, como comprimidos, pastillas, píldoras, suspensiones
acuosas u oleosas, polvos o gránulos que pueden dispersarse,
emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las
composiciones propuestas para uso oral pueden prepararse según
cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación
de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden
contener uno o más agentes seleccionados del grupo constituido por
agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y
agentes conservantes, para proporcionar preparaciones
farmacéuticamente elegantes y de sabor agradable. Los comprimidos
contienen el principio activo mezclado con excipientes no tóxicos
farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación
de comprimidos. Estos excipientes pueden ser por ejemplo, diluyentes
inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio,
lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de
granulación y desagregantes, por ejemplo, celulosa microcristalina,
croscarmelosa de sodio, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes
aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina, polivinilpirrolidona o
acacia, y agentes lubricantes, por ejemplo, estereato de magnesio,
ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar no recubiertos
o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para enmascarar el
sabor desagradable del fármaco o retrasar la desagregación y
absorción en el tracto gastrointestinal y proporcionar de esta
manera una acción sostenida durante un periodo más prolongado. Por
ejemplo, puede emplearse un material de enmascaramiento del sabor
soluble en agua, tal como hidroxipropilmetilcelulosa o
hidroxipropilcelulosa, o un material para retrasar el tiempo tal
como etilcelulosa, butirato acetato de celulosa.
Las formulaciones para uso oral también pueden
presentarse como cápsulas de gelatina duras en las que se mezcla el
principio activo con un diluyente sólido inerte, por ejemplo,
carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolina, o tales como
cápsulas de gelatina blandas en las que se mezcla el principio
activo con un vehículo soluble en agua tal como polietilenglicol o
un medio de aceite, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina
líquida, o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen el principio
activo mezclado con excipientes adecuados para la fabricación de
suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión,
por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa,
hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona,
goma tragacanto y goma acacia; los agentes de dispersión o
humectantes pueden ser un fosfátido que se presenta naturalmente,
por ejemplo lecitina o productos de condensación de óxido de
alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato de
polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con
alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo
heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de
etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol
tal como el monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de
condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de
ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de
polietilensorbitano. Las suspensiones acuosas también pueden
contener uno o varios conservantes, por ejemplo, etilo, o
p-hidroxibenzoato de n-propilo, uno
o más agentes colorantes, uno o más agentes aromatizantes, y uno o
más agentes edulcorantes, tales como sacarosa, sacarina o
aspartamo.
Las suspensiones oleosas pueden formularse
suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, por ejemplo,
aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de
coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las
suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por
ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Los
agentes edulcorantes tales como los expuestos anteriormente, y los
agentes aromatizantes pueden añadirse para proporcionar una
preparación oral agradable. Estas composiciones pueden conservarse
por medio de la adición de un antioxidante tal como hidroxianisol
butilado o alfa-tocoferol.
Los polvos y gránulos que pueden dispersarse
adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la
adición de agua proporcionan el principio activo mezclado con un
agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más
conservantes. Los agentes de dispersión o humectantes y los agentes
de suspensión adecuados se ejemplifican por medio de los ya
mencionados anteriormente. También pueden estar presentes otros
excipientes, por ejemplo agentes edulcorantes, aromatizantes o
colorantes. Estas composiciones pueden conservarse mediante la
adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.
Las composiciones farmacéuticas de la invención
también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La
fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de
oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo,
parafina líquida o sus mezclas. Los agentes emulsivos adecuados
pueden ser fosfátidos que se presentan naturalmente, por ejemplo,
lecitina de semilla de soya, y ésteres o ésteres parciales derivados
de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato
de sorbitano, y productos de condensación de dichos ésteres
parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de
polioxietilensorbitano. Las emulsiones también pueden contener
agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, conservantes y
antioxidantes.
Los jarabes y elixires pueden formularse con
agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol,
sorbitol o sacarosa: Tales formulaciones también pueden contener un
demulcente, un conservante, agentes aromatizantes y colorantes y
antioxidantes.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en
forma de disoluciones acuosas inyectables estériles. Entre los
vehículos y disolventes aceptables que pueden usarse están el agua,
la disolución de Ringer y la disolución de cloruro de sodio
isotónica.
La preparación inyectable estéril puede ser
también una microemulsión de aceite en agua inyectable estéril
donde se disuelve el principio activo en la fase oleosa. Por
ejemplo, el principio activo puede disolverse en primer lugar en
una mezcla de aceite de semilla de soya y lecitina. La disolución de
aceite se introduce a continuación dentro de una mezcla de agua y
glicerol y se trata para formar una microemulsión.
Las disoluciones o microemulsiones inyectables
pueden introducirse dentro del torrente sanguíneo de un paciente
mediante inyección local en bolo. Como alternativa, puede ser
ventajoso administrar la disolución o microemulsión de forma de
mantener una concentración circulante constante del presente
compuesto. Para mantener tal concentración constante, puede
utilizarse un dispositivo de administración intravenosa continua. Un
ejemplo de un dispositivo de este tipo es la bomba intravenosa
Deltec CADD-PLUS^{TM} modelo 5400.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en
forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril para
la administración intramuscular y subcutánea. Esta suspensión puede
formularse según la técnica conocida usando los agentes humectantes
o de dispersión y agentes de suspensión adecuados que se han
mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril puede
ser también una disolución o una suspensión inyectable estéril en
un disolvente o diluyente no tóxico parenteralmente aceptable, por
ejemplo, como una disolución en 1,3-butanodiol.
Además, se usan de forma convencional los aceites fijos, estériles,
como un disolvente o medio de suspensión. Para este objeto, puede
usarse cualquier aceite fijo insípido incluidos mono o diglicéridos
sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico se
usan en la preparación de inyectables.
Los compuestos pueden administrarse también en
forma de supositorios para la administración rectal del fármaco.
Estas composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un
excipiente no irritante que es sólido a temperaturas normales pero
líquido a la temperatura rectal y por consiguiente se disolverá en
el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca
de cacao, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados,
mezclas de polietilenglicoles de diversos pesos moleculares y
ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol.
Para uso tópico, se usan cremas, ungüentos,
gelatinas, disoluciones o suspensiones, etc., que contienen el
compuesto. (Para el objeto de esta aplicación, la aplicación tópica
incluirá colutorios bucales y productos para hacer gárgaras).
Los compuestos de la presente invención pueden
administrarse en forma intranasal por medio del uso tópico de
vehículos intranasales y dispositivos de administración adecuados o
por medio de vías transdérmicas, usando aquellas formas de parches
transdérmicos cutáneos bien conocidos por los expertos en la
técnica. Para administrarse en forma de un sistema de
administración transdérmico, la administración de la dosificación
será, por supuesto, continua en vez de intermitente a lo largo del
régimen de dosificación. Los compuestos de la presente invención
pueden administrarse también como un supositorio utilizando bases
tales como manteca de cacao, gelatina glicerinada, aceites
vegetales hidrogenados; mezclas de polietilenglicoles de diversos
pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos de
polietilenglicol.
Cuando se administra un compuesto según esta
invención a un sujeto humano, normalmente el médico que prescribe
determinará la dosificación diaria variando la dosificación
generalmente según la edad, el peso, el sexo y la respuesta del
paciente individual, así como la gravedad de los síntomas del
paciente.
En un ejemplo de aplicación, se administra una
cantidad adecuada de compuesto a un mamífero sometido a tratamiento
para el cáncer. La administración se produce en una cantidad entre
desde aproximadamente 0,1 mg/kg de peso corporal hasta
aproximadamente 60 mg/kg de peso corporal por día, de preferencia
entre desde 0,5 mg/kg de peso corporal hasta aproximadamente 40
mg/kg de peso corporal por día.
Los presentes compuestos son útiles también en
combinación con agentes terapéuticos y agentes anticancerosos
conocidos. Por ejemplo, los presentes compuestos son útiles en
combinación con agentes anticancerosos conocidos. Las combinaciones
de los compuestos descritos en este documento con otros agentes
anticancerosos o quimioterapéuticos están dentro del alcance de la
invención. Ejemplos de tales agentes pueden encontrarse en Cancer
Principles and Practice of Oncology por V.T. Devita y S. Hellman
(editores), 6ª Edición (15 de febrero de 2001), Lippincott Williams
& Wilkins Publishers. Un experto en la técnica podrá distinguir
qué combinaciones de agentes serían útiles basándose en las
características particulares de los fármacos y el cáncer implicado.
Tales agentes anticancerosos incluyen, pero no se limitan a, los
siguientes: moduladores del receptor de estrógenos, moduladores del
receptor de andrógenos, moduladores del receptor de retinoides,
agentes citotóxicos/citostáticos, agentes antiproliferativos,
inhibidores de la proteína preniltransferasa, inhibidores de la
HMG-CoA reductasa y otros inhibidores de la
angiogénesis, inhibidores de la proliferación celular y la
señalización de supervivencia, agentes inductores de la apoptosis y
agentes que interfieren con controles del ciclo celular. Los
presentes compuestos son particularmente útiles cuando se
administran conjuntamente con tratamiento de radiación.
En una forma de realización, los presentes
compuestos también son útiles en combinación con agentes
anticancerosos conocidos que incluyen los siguientes: moduladores
del receptor de estrógenos, moduladores del receptor de andrógenos,
moduladores del receptor de retinoides, agentes citotóxicos, agentes
antiproliferativos, inhibidores de la proteína preniltransferasa,
inhibidores de la HMG-CoA reductasa, inhibidores de
la proteasa del VIH, inhibidores de la transcriptasa inversa y
otros inhibidores de la angiogénesis.
"Moduladores del receptor de estrógenos" se
refiere a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de
estrógenos al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos
de moduladores del receptor de estrógenos incluyen, pero no se
limitan a, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY117081,
toremifeno, fulvestrant, 2,2-dimetilpropanoato de
4-[7-(2,2-dimetil-1-oxopropoxi-4-metil-2-[4-[2-(1-piperidinil)etoxi]fenil]-2H-1-benzopiran-3-il]-fenilo,
4,4'-dihidroxi-benzofenona-2,4-dinitrofenil-hidrazona
y SH646.
"Moduladores del receptor de andrógenos" se
refiere a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de
andrógenos al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos
de moduladores del receptor de andrógenos incluyen, finasterida y
otros inhibidores de la 5\alpha-reductasa,
nilutamida, flutamida, bicalutamida, liarozol, y acetato de
abiraterona.
"Moduladores del receptor de retinoides" se
refiere a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de
retinoides al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos
de tales moduladores del receptor de retinoides incluyen
bexaroteno, tretinoína, ácido
13-cis-retinoico, ácido
9-cis-retinoico,
\alpha-difluorometilomitina,
ILX23-7553,
trans-N-(4'-hidroxifenil)-retinamida,
y N-4-carboxifenil retinamida.
"Agentes citotóxicos/citostáticos" se
refiere a compuestos que causan muerte celular o inhiben la
proliferación celular principalmente al interferir directamente con
el funcionamiento de la célula o inhiben o interfieren con la
meiosis celular, incluyendo agentes alquilantes, factores de
necrosis tumoral, intercaladores, compuestos inducibles por
hipoxia, agentes estabilizadores de microtúbulos/inhibidores de
microtúbulos, inhibidores de cinesinas mitóticas, inhibidores de
cinasas implicadas en la progresión mitótica, antimetabolitos;
modificadores de la respuesta biológica; agentes terapéuticos
antihormonales/hormonales, factores de crecimiento hematopoyético,
agentes terapéuticos seleccionados como diana de anticuerpos
monoclonales, inhibidores de la topoisomerasa, inhibidores de
proteosomas e inhibidores de la ubiquitina ligasa.
Los ejemplos de agentes citotóxicos incluyen,
pero no se limitan a, sertenef, caquectina, ifosfamida, tasonermina,
lonidamina, carboplatino, altretamina, prednimustina,
dibromodulcitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatino,
oxaliplatino, temozolomida, heptaplatino, estramustina, tosilato de
improsulfano, trofosfamida, nimustina, cloruro de dibrospidio,
pumitepa, lobaplatino, satraplatino, porfiromicina, cisplatino,
irofulveno, dexifosfamida,
cis-aminodicloro(2-metil-piridina)platino,
bencilguanina, glufosfamida, GPX100, tetracloruro de (trans, trans,
trans)-bis-mu-(hexano-1,6-diamino)-mu-[diamino-platino(II)]bis[diamino-(cloro)platino(II)],
diaricidinilespermina, trióxido de arsénico,
1-(11-dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina,
zorubicina, idarubicina, daunorubicina, bisantreno, mitoxantrona,
pirarubicina, pinafida, valrubicina, amrubicina, antineoplaston,
3'-desamino-3'-morfolino-13-desoxo-10-hidroxicarminomicina,
anamicina, galarubicina, elinafida, MEN10755, y
4-desmetoxi-3-desamino-3-aciridinil-4-metilsulfonil-daunorubicina
(véase el documento WO 00/50032).
Un ejemplo de un compuesto inducible por hipoxia
es la tirapazamina.
Los ejemplos de inhibidores de proteosomas
incluyen, pero no se limitan a, lactacistina y bortezomib.
Los ejemplos de agentes inhibidores de
microtúbulos/agentes estabilizadores de microtúbulos incluyen
paclitaxel, sulfato de vindesina,
3',4'-dideshidro-4'-desoxi-8'-norvincaleucoblastina,
docetaxol, rizoxina, dolastatina, isotionato de mivobulina,
auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunina,
criptoficina,
2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)
benceno, sulfonamida, anhidrovinblastina,
N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolina-t-butilamida,
TDX 258, las epotilonas (véase por ejemplo las patentes de los EEUU
Nº 6.284.781 y 6.288.237) y BMS188797.
Algunos ejemplos de inhibidores de la
topoisomerasa son topotecan, hicapatamina, irinotecan, rubitecan,
6-etoxipropionil-3',4'-O-exo-benciliden-chartreusina,
9-metoxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo-[3,4,5-kl]acridina-2-(6H)
propanoamina,
1-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-1H,12H-benzo[des]pirano[3',4':b,7]-indolizino[1,2b]-quinolina-10,13(9H,15H)diona,
lurtotecan,
7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S)
camptotecina, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de
etopósido, tenipósido, sobuzoxano,
2'-dimetilamino-2'-desoxi-etopósido,
GL331,
N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidroxi-5,6-dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida,
asulacrina, (5a, 5aB, 8aa,
9b)-9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a,9-hexohidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol-6-ona,
2,3-(metilendi-oxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridinio,
6,9-bis[(2-aminoetil)amino]
benzo[g]isoquinolin-5,10-diona,
5-(3-aminopropilamino)-7,10-dihidroxi-2-(2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazolo[4,5,1-de]acridin-6-ona,
N-[1-[2(dietilamino)
etilamino]-7-metoxi-9-oxo-9H-tioxanten-4-ilmetil]formamida,
N-(2-(dimetilamino)
etil)acridina-4-carboxamida,
6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3-hidroxi-7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-ona,
y dimesna.
Los ejemplos de inhibidores de cinesinas
mitóticas, y en particular la cinesina mitótica humana KSP, se
describen en las publicaciones PCT de los documentos WO 01/30768 y
WO 01/98278, WO 03/050064 (19 de junio de 2003), WO 03/050122 (19
de junio de 2003), WO 03/049527 (19 de junio de 2003), WO 03/049.679
(19 de junio de 2003), WO 03/049678 (19 de junio de 2003) y WO
03/39460 (15 de mayo de 2003), y Solicitudes PCT Nº US03/06403
(presentada el 4 de marzo de 2003), US 03/15861 (presentada el 19
de mayo de 2003), US03/15810 (presentada el 19 de mayo de 2003),
US03/18482 (presentada el 12 de junio de 2003) y US03/18694
(presentada el 12 de junio de 2003) en trámite. En una forma de
realización los inhibidores de las cinesinas mitóticas incluyen,
pero no se limitan a, inhibidores de KSP, inhibidores de MKLP1,
inhibidores de CENP-E, inhibidores de MCAK,
inhibidores de Mphosph1 e inhibidores de
Rab6-KIFL.
Los "inhibidores de cinasas implicados en la
progresión mitótica" incluyen, pero no se limitan a, inhibidores
de la aurora cinasa, inhibidores de cinasas análogas a Polo (PLK)
(en particular inhibidores de PLK-1), inhibidores de
bub-1 e inhibidores de bub-R1.
Los "agentes antiproliferativos" incluyen
oligonucleótidos de ADN y ARN antisentido, tales como G3139, ODN698,
RVASKRAS, GEM231, e INX3001, y antimetabolitos tales como
enocitabina, carmofur, tegafur, pentostatina, doxifluridina,
trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, citarabina
ocfosfato, hidrato de sodio de fosteabina, raltitrexed,
paltitrexid, emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexed,
pemetrexed, nelzarabina,
2'-desoxi-2'-metilidencitidina,
2'-fluorometilen-2'-desoxicitidina,
N-[5-(2,3-dihidro-benzofuril)sulfonil]-N'-(3,4-diclorofenil)urea,
N6-[4-desoxi-4-[N2-[2(E),4(E)-tetradecadienoil]glicilamino]-L-glicero-B-L-manno-heptopiranosil]adenina,
aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido
4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimidino[5,4-b][1,4]tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-L-glutámico,
aminopterina, acetato de 5-fluorouracilo,
alanosina, éster del ácido
11-acetil-8-(carbamoiloximetil)-4-formil-6-metoxi-14-oxa-1,11-diazatetraciclo(7.4.1.0.0)-tetradeca-2,4,6-trien-9-il
acético, swainsonina, Iometrexol, dexrazoxana, metioninasa,
2'-ciano-2'-desoxi-N4-palmitoil-1-B-D-arabino
furanosil citosina y tiosemicarbazona de
3-aminopiridina-2-carboxaldehído.
Los ejemplos de agentes terapéuticos
seleccionados como diana de anticuerpos monoclonales incluyen los
agentes terapéuticos que tienen agentes citotóxicos o radioisótopos
unidos a anticuerpos monoclonales específicos contra células diana
o células cancerígenas específicas. Los ejemplos incluyen
Bexxar.
"Inhibidores de la HMG-CoA
reductasa" se refiere a inhibidores de la
3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA
reductasa. Los compuestos que tienen actividad inhibidora para la
HMG-CoA reductasa pueden identificarse fácilmente
usando ensayos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, véanse
los ensayos descritos o citados en la patente de los EEUU Nº
4.231.938 en la columna 6, y el documento WO 84/02131 en las páginas
30-33. Los términos "inhibidor de la
HMG-CoA reductasa" e "inhibidor de la
HMG-CoA reductasa" tienen el mismo significado
cuando se usan en este documento.
Los ejemplos de inhibidores de la
HMG-CoA reductasa que pueden usarse incluyen, pero
no se limitan a, lovastatina (MEVACOR®; véanse las patentes de los
EEUU Nº 4.231.938, 4.294.926 y 4.319.039), simvastatina (ZOCOR®;
vénase las patentes de los EEUU Nº 4.444.784, 4.820.850 y
4.916.239), pravastatina (PRAVACHOL®; véanse las patentes de los
EEUU Nº 4.346.227, 4.537.859, 4.410.629, 5.030.447 y 5.180.589),
fluvastatina (LESCOL®; véanse las patentes de los EEUU Nº
5.354.772, 4.911.165, 4.929.437, 5.189.164, 5.118.853, 5.290.946 y
5.356.896) y atorvastatina (LIPITOR®; véase las patentes de los
EEUU Nº 5.273.995, 4.681.893, 5.489.691 y 5.342.952). Las fórmulas
estructurales de estos y de otros inhibidores de la
HMG-CoA reductasa que pueden usarse en los presentes
procedimientos se describen en la página 87 de M. Yalpani,
"Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry, pág.
85-89 (5 de febrero de 1996) y las patentes de los
EEUU Nº 4.782.084 y 4.885.314. El término inhibidor de la
HMG-CoA reductasa tal como se usa en este documento
incluye todas las formas farmacéuticamente aceptables de ácidos
abiertos y lactonas (es decir, en las que el anillo de lactona se
abre para formar el ácido libre) así como las formas de sal y éster
de compuestos que tienen actividad inhibidora de la HMGCoA
reductasa, y por consiguiente, el uso de tales sales, ésteres,
ácidos abiertos y formas de lactona están incluidos dentro del
ámbito de esta invención. A continuación se muestra una ilustración
de la parte lactona y su correspondiente forma de ácido abierto
como estructuras I y II.
En los inhibidores de la HMG-CoA
reductasa en los que puede existir una forma de ácido abierto,
pueden formarse formas de ésteres y sales a partir del ácido
abierto, y tales formas están incluidas dentro del significado del
término "inhibidor de la HMG-CoA reductasa" tal
como se usa en este documento. En una forma de realización, el
inhibidor de la HMG-CoA reductasa se selecciona de
lovastatina y simvastatina, y en otra forma de realización,
simvastatina. En este documento, el término "sales
farmacéuticamente aceptables" con respecto al inhibidor de la
HMG-CoA reductasa significará sales no tóxicas de
los compuestos usados en esta invención que se preparan
generalmente haciendo reaccionar el ácido libre con una base
orgánica o inorgánica adecuada, en particular las formadas a partir
de cationes tales como sodio, potasio, aluminio, calcio, litio,
magnesio, cinc y tetrametilamonio, así como las sales formadas a
partir de aminas tales como amonio, etilendiamina,
N-metilglucamina, lisina, arginina, ornitina,
colina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína,
dietanolamina, procaína, N-bencilfenetilamina,
1-p-clorobencil-2-pirrolidina-1'-il-metilbenzo-imidazol,
dietilamina, piperazina, y tris(hidroximetil) aminometano.
Otros ejemplos de formas de sales de inhibidor de la
HMG-CoA reductasa pueden incluir, pero no se limitan
a, acetato, bencensulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato,
bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato,
carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato,
edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato,
glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina,
bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato,
lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato,
mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato,
pamoato, palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato,
poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato,
tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietyoduro, y valerato.
Los derivados de ésteres de los compuestos
inhibidores de la HMG-CoA reductasa descritos pueden
actuar como profármacos que, cuando se absorben en el torrente
sanguíneo de un animal de sangre caliente, pueden escindirse de tal
manera que liberan la forma farmacéutica y permiten que el fármaco
alcance una mejor eficacia terapéutica.
"Inhibidor de la proteína
preniltransferasa" se refiere a un compuesto que inhibe una
cualquiera o cualquier combinación de las enzimas de la proteína
preniltransferasa, incluidas la proteína farnesiltransferasa
(FTPasa), la proteína geranilgeraniltransferasa de tipo I
(GGPTasa-I), y la proteína geranilgeranil
transferasa de tipo II (GGPTasa-II, también
denominada Rab GGPTasa). Los ejemplos de compuestos que inhiben la
proteína preniltransferasa incluyen
(\pm)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)
quinolinona,
(-)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona,
(+)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona,
5(S)-n-butil-1-(2,3-dimetilfenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona,
(S)-1-(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-5-[2-(etanosulfonil)metil)-2-pipera-zinona,
5(S)-n-butil-1-(2-metilfenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona,
1-(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobencil)-2-metil-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona,
1-(2,2-difeniletil)-3-[N-(1-(4-cianobencil)-1H-imidazol-5-iletil)
carbamoil]piperidina,
4-{5-[4-hidroximetil-4-(4-cloropiridin-2-ilmetil)-piperidina-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}
benzonitrilo,
4-{5-[4-hidroximetil-4-(3-clorobencil)-piperidina-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}
benzonitrilo,
4-{3-[4-(2-oxo-2H-piridin-1-il)bencil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
4-{3-[4-(5-cloro-2-oxo-2H-[1,2']bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
4-{3-[4-(2-oxo-2H-[1,2']
bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
4-[3-(2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridin-4-ilmetil)-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo,
18,19-dihidro-19-oxo-5H,17H-6,10:12,16-dimeten-1H-imidazo[4,3-c][1,11,4]dioxaazaciclo-nonadecin-9-carbonitrilo,
(\pm)-19,20-dihidro-19-oxo-5H-18,21-etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo[d]imidazo[4,3-k]1,6,9,12]oxatriaza-ciclooctadecin-9-carbonitrilo,
19,20-dihidro-19-oxo-5H,17H-18,21-etano-6,10:12,16-dimeteno-22H-imidazo[3,4-h][1,8,11,14]oxatriazacicloeicosin-9-carbonitrilo
y
(\pm)-19,20-dihidro-3-metil-19-oxo-5H-18,21-etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo
[d]imidazo[4,3-k]1,6,9,12]
oxa-triazaciclooctadecin-9-carbonitrilo.
Otros ejemplos de inhibidores de la proteína
preniltransferasa pueden encontrarse en las siguientes publicaciones
y patentes: documentos WO 96/30343, WO 97/18813, WO 97/21701, WO
97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO 98/29119, WO 95/32987,
Patente de los EEUU Nº 5.420.245, Patente de los EEUU Nº 5.523.430,
Patente de los EEUU Nº 5.532.359, Patente de los EEUU Nº 5.510.510,
Patente de los EEUU Nº 5.589.485, Patente de los EEUU Nº 5.602.098,
Publicación de Patente Europea Nº 0 618 221, Publicación de Patente
Europea Nº 0 675 112, Publicación de Patente Europea Nº 0 604 181,
Publicación de Patente Europea Nº 0 696 593, documentos WO 94/19357,
WO 95/08542, WO 95/11917, WO 95/12612, WO 95/12572, WO 95/10514,
Patente de los EEUU Nº 5.661.152, WO 95/10515, WO 95/10516, WO
95/24612, WO 95/34535, WO 95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO
96/06193, WO 96/16443, WO 96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO
96/24611, WO 96/24612, WO 96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736,
Patente de los EEUU Nº 5.571.792, WO 96/17861, WO 96/33159, WO
96/34850, WO 96/34851, WO 96/30017, WO 96/30018, WO96/30362,
WO96/30363, WO96/31111, WO 96/31477, WO 96/31478, WO 96/31501, WO
97/00252, WO 97/03047, WO 97/03050, WO97/04785, WO 97/02920, WO
97/17070, WO 97/23478, WO 97/26246, WO 97/30053, WO 97/44350, WO
98/02436, Patente de los EEUU Nº 5.532.359.
Como un ejemplo del papel de un inhibidor de la
proteína preniltransferasa en la angiogénesis, véase European J. of
Cancer, Vol. 35, Nº 9, pág. 1394-1401 (1999).
"Inhibidores de la angiogénesis" se refiere
a compuestos que inhiben la formación de nuevos vasos sanguíneos,
independientemente del mecanismo. Los ejemplos de inhibidores de la
angiogénesis incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la
tirosina cinasa, tales como inhibidores de los receptores de la
tirosina cinasa Flt-1 (VEGFR1) y
Flk-1/KDR (VEGFR2), inhibidores de derivados
epidérmicos, derivados de fibroblastos, o factores de crecimiento
derivados de plaquetas, inhibidores de MMP (metaloproteasa de
matriz), bloqueadores de integrina,
interferón-\alpha,
interleucina-12, polisulfato de pentosano,
inhibidores de la ciclooxigenasa, incluidos los antiinflamatorios
no esteroides (NSAID) tales como aspirina e ibuprofeno así como
inhibidores de la ciclooxigenasa-2 como celecoxib y
rofecoxib (PNAS, volumen 89, pág. 7384 (1992); JNCI, volumen 69,
pág. 475 (1982); Arch. Opthalmol., volumen 108, pág. 573 (1990);
Anat. Rec., volumen 238, pág. 68 (1994); FEBS Letters, volumen 372,
pág. 83 (1995); Clin, Orthop. volumen 313, pág. 76 (1995); J. Mol.
Endocrinol., volumen 16, pág.107 (1996); Jpn. J. Pharmacol.,
volumen 75, pág. 105 (1997); Cancer Res., volumen 57, pág. 1625
(1997); Cell, volumen 93, pág. 705 (1998); Intl. J. Mol. Med.,
volumen 2, pág. 715 (1998); J. Biol. Chem., volumen 274, pág. 9116
(1999)), antiinflamatorios esteroides (tales como corticosteroides,
mineralocorticoides, dexametasona, prednisona, prednisolona,
metilpred, betametasona), carboxiamidotriazol, combrestastasina
A-4, escualamina,
6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol,
talidomida, angiostatina, troponina-1, antagonistas
de angiotensina II (véase Fernández y col., J. Lab. Clin. Med.
105:141-145 (1985)), y anticuerpos frente a VEGF
(véase, Nature Biotechnology, volumen 17, pág.
963-968 (octubre de 1999); Kim y col., Nature, 362,
841-844 (1993); los documentos WO 00/44777; y WO
00/61186).
Otros agentes terapéuticos que modulan o inhiben
la angiogénesis y también pueden usarse en combinación con los
compuestos de la presente invención incluyen agentes que modulan o
inhiben los sistemas de la fibrinolisis y la coagulación (véase
revisión en Clin. Chem. La. Med. 38:679-692 (2000)).
Los ejemplos de tales agentes que modulan o inhiben las rutas de la
fibrinolisis y la coagulación incluyen, pero no se limitan a,
heparina (véase Thromb. Haemost. 80:10-23 (1998)),
heparinas de bajo peso molecular e inhibidores de carboxipeptidasa
U (también conocidos como inhibidores del inhibidor de la
fibrinolisis activado por trombina activa [TAFIa]) (véase
Thrombosis Res. 101:329-354 (2001)). Se han descrito
inhibidores de TAFIa en la publicación PCT del documento WO
03/013.526 y el documento de los EEUU de número de serie 60/349.925
(presentado el 18 de Enero de 2002).
"Agentes que interfieren con controles del
ciclo celular" se refiere a compuestos que inhiben proteínas
cinasas que transducen señales de control del ciclo celular,
sensibilizando así la célula cancerígena frente a agentes que dañan
el ADN. Tales agentes incluyen inhibidores de cinasas ATR, ATM, las
cinasas Chk1 y Chk2 e inhibidores de cinasas cdk y cdc y que se dan
a modo de ejemplo específicamente mediante
7-hidroxiestaurosporina, flavopiridol, CYC202
(Cyclacel) y BMS-387032.
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"Inhibidores de la proliferación celular y
ruta de señalización de supervivencia" se refiere a agentes
farmacéuticos que inhiben receptores de superficie celular y
cascadas de transducción de señales secuencia debajo de esos
receptores de superficie. Tales agentes incluyen inhibidores de
inhibidores de EGFR (por ejemplo gefitinib y erlotinib),
inhibidores de ERB-2 (por ejemplo trastuzumab),
inhibidores de IGFR, inhibidores de receptores de citosinas,
inhibidores de MET, inhibidores PI3K (por ejemplo (por ejemplo
LY294002), serina/treonina cinasas (incluidos, pero no limitados a
inhibidores de Akt tal como se describe en los documentos WO
02/083064, WO 02/083139, WO 02/083140 y WO 02/083138), inhibidores
de cinasa Raf (por ejemplo
BAY-43-9006), inhibidores de MEK
(por ejemplo CI-1040 y PD-098059) e
inhibidores de mTOR (por ejemplo Wyeth CCI-779).
Tales agentes incluyen compuestos inhibidores de molécula pequeña y
antagonistas de anticuerpos.
"Agentes que inducen la apoptosis" incluyen
los activadores de miembros de la familia de receptor de TNF
(incluidos los receptores TRAIL).
Las combinaciones con NSAID están dirigidas al
uso de NSAID que son agentes de inhibición de COX-2
potentes. Para los fines de esta memoria descriptiva un NSAID es
potente si posee una CI_{50} para la inhibición de
COX-2 de 1 \muM o inferior tal como se mide
mediante ensayos celulares o microsomales.
La invención también abarca combinaciones con
NSAID que son inhibidores de COX-2 selectivos. Para
los fines de esta memoria descriptiva los NSAID que son inhibidores
de COX-2 selectivos se definen como los que poseen
una especificidad para inhibir COX-2 sobre
COX-1 de al menos 100 veces tal como se mide
mediante la razón de CI_{50} para COX-2 sobre
CI_{50} para COX-1 evaluada por medio de ensayos
celulares o microsomales. Tales compuestos incluyen, pero no se
limitan a los descritos en la Patente de EEUU Nº 5.474.995, expedida
el 12 de diciembre de 1995, Patente de EEUU Nº 5.861.419, expedida
el 19 de enero de 1999, Patente de EEUU Nº 6.001.843, expedida el
14 de diciembre de 1999, Patente de EEUU Nº 6.020.343, expedida el 1
de febrero de 2000, Patente de EEUU Nº 5.409.944, expedida el 25 de
abril de 1995, Patente de EEUU Nº 5.436.265, expedida el 25 de
julio de 1995, Patente de EEUU Nº 5.536.752, expedida 16 de julio de
1996, Patente de EEUU Nº 5.550.142, expedida el 27 de agosto de
1996, Patente de EEUU Nº 5.604.260, expedida el 18 de febrero de
1997, Patente de EEUU Nº 5.698.584, expedida el 16 de diciembre de
1997, Patente de EEUU Nº 5.710.140, expedida el 20 de enero de
1998, documento WO 94/15932, publicado el 21 de julio de 1994,
Patente de EEUU Nº 5.344.991, expedida el 6 de junio de 1994,
Patente de EEUU Nº 5.134.142, expedida el 28 de julio de 1992,
Patente de EEUU Nº 5.380.738, expedida el 10 de enero de 1995,
Patente de EEUU Nº 5.393.790, expedida el 20 de febrero de 1995,
Patente de EEUU Nº 5.466.823, expedida el 14 de noviembre de 1995,
Patente de EEUU Nº 5.633.272, expedida el 27 de mayo de 1997, y
Patente de EEUU Nº 5.932.598, expedida el 3 de agosto de 1999, todas
las que se incorporan en este documento por referencia.
Los inhibidores de COX-2 que son
particularmente útiles en el presente procedimiento de tratamiento
son:
3-fenil-4-(4-(metilsulfonil)fenil)-2-(5H)-furanona;
y
5-cloro-3-(4-metilsulfonil)fenil-2-(2-metil-5-piridinil)piridina;
o una de sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Los procedimientos sintéticos específicos y
generales para la preparación de los compuestos inhibidores de
COX-2 descritos anteriormente se encuentran en la
Patente de EEUU Nº 5.474.995, expedida el 12 de diciembre de 1995,
la Patente de EEUU Nº 5.861.419, expedida el 19 de enero de 1999, y
la Patente de EEUU Nº 6.001.843, expedida el 14 de diciembre de
1999, todas las que se incorporan en este documento por
referencia.
Los compuestos que se han descrito como
inhibidores específicos de COX-2 y que por
consiguiente son útiles en la presente invención incluyen, pero no
se limitan a, los siguientes:
o una de sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
Los compuestos que se describen como inhibidores
específicos de COX-2 y que por consiguiente son
útiles en la presente invención, y los procedimientos de síntesis
de los mismos, pueden encontrarse en las siguientes patentes,
solicitud de patente en trámite y publicaciones, que se incorporan
en este documento por referencia: documento WO 94/15932, publicado
el 21 de julio de 1994, Patente de EEUU Nº 5.344.991, expedida el 6
de junio de 1994, Patente de EEUU Nº 5.134.142, expedida el 28 de
julio de 1992, Patente de EEUU Nº 5.380.738, expedida el 10 de
enero de 1995, Patente de EEUU Nº 5.393.790, expedida el 20 de
febrero de 1995, Patente de EEUU Nº 5.466.823, expedida el 14 de
noviembre de 1995, Patente de EEUU Nº 5.633.272, expedida el 27 de
mayo de 1997, y Patente de EEUU Nº 5.932.598, expedida el 3 de
agosto de 1999.
Los compuestos que son inhibidores específicos
de COX-2 y que por consiguiente son útiles en la
presente invención, y los procedimientos de síntesis de los mismos,
pueden encontrarse en las siguientes patentes, solicitud de patente
en trámite y publicaciones, que se incorporan en este documento por
referencia: Patente de EEUU Nº 5.474.995, expedida el 12 de
diciembre de 1995, Patente de EEUU Nº 5.861.419, expedida el 19 de
enero de 1999, Patente de EEUU Nº 6.001.843, expedida el 14 de
diciembre de 1999, Patente de EEUU Nº 6.020.343, expedida el 1 de
febrero de 2000, Patente de EEUU Nº 5.409.944, expedida el 25 de
abril de 1995, Patente de EEUU Nº 5.436.265, expedida el 25 de
julio de 1995, Patente de EEUU Nº 5.536.752, expedida el 16 de julio
de 1996, Patente de EEUU Nº 5.550.142, expedida el 27 de agosto de
1996, Patente de EEUU Nº 5.604.260, expedida el 18 de febrero de
1997, Patente de EEUU Nº
5.698.584, expedida el 16 de diciembre de 1997 y Patente de EEUU Nº 5.710.140, expedida el 20 de Enero de 1998.
5.698.584, expedida el 16 de diciembre de 1997 y Patente de EEUU Nº 5.710.140, expedida el 20 de Enero de 1998.
Otros ejemplos de inhibidores de la angiogénesis
incluyen, pero no se limitan a, endostatina, ucraína, ranpirnasa,
IM862,
5-metoxi-4-[2-metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1-oxaspiro[2,5]oct-6-il(cloroacetil)carbamato,
acetildinanalina,
5-amino-1-[[3,5-dicloro-4-(4-clorobenzoil)fenil]metil]-1H-1,2,3-triazol-4-carboxamida,
CM101, escualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, fosfato de
manopentosa sulfatada, bis-(1,3-naftalendisulfonato)
de
7,7-(carbonil-bis[imino-N-metil-4,2-pirrolocarbonilimino[N-metil-4,2-pirrol]-carbonilimino],
y
3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilen]-2-indolinona
(SU5416).
Tal como se usa anteriormente, "bloqueadores
de integrina" se refiere a compuestos que contrarrestan, inhiben
o antagonizan selectivamente la unión de un ligando fisiológico a la
integrina \alpha_{v}\beta_{3}, a compuestos que
contrarrestan, inhiben o antagonizan selectivamente la unión de un
ligando fisiológico a la integrina \alpha_{v}\beta_{5}, a
compuestos que contrarrestan, inhiben o antagonizan selectivamente
la unión de un ligando fisiológico tanto a la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} como a la integrina
\alpha_{v}\beta_{5}, y a compuestos que contrarrestan,
inhiben o antagonizan la actividad de la(s)
integrina(s) particular(es) expresada(s) en
células endoteliales capilares. El término también se refiere a
antagonistas de las integrinas \alpha_{v}\beta_{6},
\alpha_{v}\beta_{5}, \alpha_{v}\beta_{8},
\alpha_{1}\beta_{1}, \alpha_{2}\beta_{1},
\alpha_{5}\beta_{1}, \alpha_{6}\beta_{1} y
\alpha_{6}\beta_{4}. El término también se refiere a
antagonistas de cualquier combinación de las integrinas
\alpha_{v}\beta_{3}, \alpha_{v}\beta_{5},
\alpha_{v}\beta_{6}, \alpha_{v}\beta_{8},
\alpha_{1}\beta_{1}, \alpha_{2}\beta_{1},
\alpha_{5}\beta_{1}, \alpha_{6}\beta_{1} y
\alpha_{6}\beta_{4}.
Algunos ejemplos específicos de inhibidores de
la tirosina cinasa incluyen
N-(trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida,
3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)
metilidenil)indolin-2-ona,
17-(alilamino)-17-desmetoxigeldanamicina,
4-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-metoxi-6-[3-(4-morfolinil)propoxil]quinazolina,
N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)-4-quinazolinamina,
BIBX1382,
2,3,9,10,11,12-hexahidro-10-(hidroximetil)-10-hidroxi-9-metil-9,12-epoxi-1H-diindolo[1,2,3-fg:3',2',1'kl]pirrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocin-1-ona,
SH268, genisteína, STI571, CEP2563, sulfonato de
4-(3-clorofenilamino)-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinmetano,
4-(3-bromo-4-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina,
4-(4'-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina,
SU6668, STI571A,
N-4-clorofenil-4-(4-piridilmetil)-1-ftalazinamina
y EMD121974.
También están incluidas en los presentes
procedimientos las combinaciones con compuestos distintos de los
compuestos anticancerosos. Por ejemplo, combinaciones de los
compuestos reivindicados actualmente con agonistas de
PPAR-\gamma (es decir,
PPAR-gamma), agonistas de
PPAR-\delta (es decir, PPAR-delta)
son útiles en el tratamiento de ciertas neoplasias.
PPAR-\gamma y PPAR-\delta son
los receptores \gamma y \delta activados por proliferadores de
peroxisomas nucleares. Se ha informado de la expresión de
PPAR-\gamma en células endoteliales y su
implicación en la angiogénesis en la bibliografía (véase J.
Cardiovasc. Pharmacol. 1998; 31:909-913; J. Biol.
Chem. 1999; 274:9116-9121; Invest. Ophthalmol Vis.
Sci. 2000; 41:2309-2317). Más recientemente, se ha
mostrado que los agonistas de PPAR-\gamma inhiben
la respuesta angiogénica frente a VEGF in vitro; tanto el
maleato de rosiglitazona como de troglitazona inhiben el desarrollo
de la neovascularización retinal en ratones (Arch. Ophthamol. 2001;
119:709-717). Ejemplos de agonistas
PPAR-\gamma y agonistas de
PPAR-\gamma/\alpha incluyen, pero no se limitan
a, tiazolidindionas (tales como DRF2725, CS-011,
troglitazona, rosiglitazona, y pioglitazona), fenofibrato,
gemfibrozil, clofibrato, GW2570, SB219994,
AR-H039242, JTT-501,
MCC-555, GW2331, GW409544, NN2344, KRP297, NP0110,
DRF4158, NN622, GI262570, PNU182716, DRF552926, ácido
2-[(5,7-dipropil-3-trifluorometil-1,2-benzisoxazol-6-il)oxi]-2-metilpropiónico
(descrito en el documento USSN 09/782.856), y ácido
2(R)-7-(3-(2-cloro-4-(4-fluorofenoxi)fenoxi)propoxi)-2-etilcromano-2-carboxílico
(descrito en los documentos USSN 60/235.708 y 60/244.697).
Otra forma de realización de la presente
invención es el uso de los compuestos descritos en este documento
en combinación con terapia génica para el tratamiento del cáncer.
Para una visión general de las estrategias genéticas para tratar
cáncer véase Hall y col. (Am J Hum Genet 61:785-789,
1997) y Kufe y col. (Cancer Medicine, 5ª Ed, páginas
876-889, BC Decker, Hamilton 2000). La terapia
génica puede usarse para administrar cualquier gen supresor de
tumores. Los ejemplos de tales genes incluyen, pero no se limitan a
p53, que pueden administrarse por medio de transferencia génica
mediada por virus recombinantes (véase la Patente de EEUU Nº
6.069.134, por ejemplo), un antagonista de uPA/uPAR
("Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR
Antagonist Suppresses Angiogenesis-Dependent Tumor
Growth and Dissemination in Mice", Gene Therapy, agosto de
1998;5(8):1105-1113), e interferón gamma (J
Immunol 2000;164:217-222).
Los compuestos de la presente invención pueden
también administrarse en combinación con un inhibidor de resistencia
inherente a múltiples fármacos (MDR), en particular MDR asociado
con altos niveles de expresión de proteínas transportadoras. Tales
inhibidores de MDR incluyen inhibidores de
p-glicoproteína (P-gp), tales como
LY335979, XR9576, OC144-093, R101922, VX853 y
PSC833 (valspodar).
Un compuesto de la presente invención puede
usarse en combinación con agentes antieméticos para tratar náuseas
o emesis, incluyendo emesis anticipatoria, de fase tardía, retardada
y aguda, que puede resultar del uso de un compuesto de la presente
invención, sólo o con tratamiento de radiación. Para evitar o tratar
la emesis, un compuesto de la presente invención puede usarse en
combinación con otros agentes antieméticos, especialmente
antagonistas de receptores de neurocinina-1,
antagonistas de receptores de 5HT3, tales como ondansetrona,
granisetrona, tropisetrona y zatisetrona, agonistas de receptores
GABAB, tales como baclofen, un corticosteroide tal como Decadron
(dexametasona), Kenalog, Aristocort, Nasalide, Preferid, Benecorten
u otros tales como se describen en las Patentes de EEUU Nº
2.789.118, 2.990.401, 3.048.581, 3.126.375, 3.929.768, 3.996.359,
3.928.326 y 3.749.712, un antidopaminérgico, tales como las
fenotiazinas (por ejemplo, proclorperazina, flufenazina,
tioridazina y mesoridazina), metoclopramida o dronabinol. Para el
tratamiento o prevención de la emesis que puede resultar tras la
administración de los presentes compuestos, resulta de preferencia
una terapia conjunta con un agente antiemesis seleccionado de un
antagonista de receptores de neurocinina-1, un
antagonista de receptores 5HT3 y un corticosteroide.
Los antagonistas de receptores de
neurocinina-1 para uso junto con los compuestos de
la presente invención se describen totalmente, por ejemplo, en las
Patentes de EEUU números 5.162.339, 5.232.929, 5.242.930, 5.373.003,
5.387.595, 5.459.270, 5.494.926, 5.496.833, 5.637.699, 5.719.147;
Publicaciones de Patentes Europeas Nº EP
0360 390, 0 394 989, 0 428 434, 0 429 366, 0 430 771, 0 436 334, 0 443 132, 0 482 539, 0 498 069, 0 499 313, 0 512 901, 0 512 902, 0 514 273, 0 514 274, 0 514 275, 0 514 276, 0 515 681, 0 517 589, 0 520 555, 0 522 808,
0 528 495, 0 532 456, 0 533 280, 0 536 817, 0 545 478, 0 558 156, 0 577 394, 0 585 913, 0 590 152, 0 599 538, 0 610 793, 0 634 402, 0 686 629, 0 693 489, 0 694 535, 0 699 655, 0 699 674, 0 707 006, 0 708 101, 0 709 375, 0 709 376, 0 714 891, 0 723 959, 0 733 632 y 0 776 893; Publicaciones de Patentes Internacionales PCT Nº WO 90/05525, 90/05729, 91/09844, 91/18899, 92/01688, 92/06079, 92/12151, 92/15585, 92/17449, 92/20661, 92/20676, 92/21677, 92/22569, 93/00330, 93/00331, 93/01159, 93/01165, 93/01169, 93/01170, 93/06099, 93/09116, 93/10073, 93/14084, 93/14113, 93/18023, 93/19064, 93/21155, 93/21181, 93/23380, 93/24465, 94/00440, 94/01402, 94/02461, 94/02595, 94/03429, 94/03445, 94/04494, 94/04496, 94/05625, 94/07843, 94/08997, 94/10165, 94/10167, 94/10168, 94/10170, 94/11368, 94/13639, 94/13663, 94/14767, 94/15903, 94/19320, 94/19323, 94/20500, 94/26735, 94/26740, 94/29309, 95/02595, 95/04040, 95/04042, 95/06645, 95/07886, 95/07908, 95/08549, 95/11880, 95/14017, 95/15311, 95/16679, 95/17382, 95/18124, 95/18129, 95/19344, 95/20575, 95/21819, 95/22525, 95/23798, 95/26338, 95/28418, 95/30674, 95/30687, 95/33744, 96/05181, 96/05193, 96/05203, 96/06094, 96/07649, 96/10562, 96/16939, 96/18643, 96/20197, 96/21661, 96/29304, 96/29317, 96/29326, 96/29328, 96/31214, 96/32385, 96/37489, 97/01553, 97/01554, 97/03066, 97/08144, 97/14671, 97/17362, 97/18206, 97/19084, 97/19942 y 97/21702; y en las Publicaciones de Patente Británica Nº 2 266 529, 2 268 931, 2 269 170, 2 269 590, 2 271 774, 2 292 144, 2 293 168, 2 293 169, y 2 302 689. La preparación de tales compuestos se describe completamente en las patentes y publicaciones mencionadas anteriormente, que se incorporan en este documento por referencia.
0360 390, 0 394 989, 0 428 434, 0 429 366, 0 430 771, 0 436 334, 0 443 132, 0 482 539, 0 498 069, 0 499 313, 0 512 901, 0 512 902, 0 514 273, 0 514 274, 0 514 275, 0 514 276, 0 515 681, 0 517 589, 0 520 555, 0 522 808,
0 528 495, 0 532 456, 0 533 280, 0 536 817, 0 545 478, 0 558 156, 0 577 394, 0 585 913, 0 590 152, 0 599 538, 0 610 793, 0 634 402, 0 686 629, 0 693 489, 0 694 535, 0 699 655, 0 699 674, 0 707 006, 0 708 101, 0 709 375, 0 709 376, 0 714 891, 0 723 959, 0 733 632 y 0 776 893; Publicaciones de Patentes Internacionales PCT Nº WO 90/05525, 90/05729, 91/09844, 91/18899, 92/01688, 92/06079, 92/12151, 92/15585, 92/17449, 92/20661, 92/20676, 92/21677, 92/22569, 93/00330, 93/00331, 93/01159, 93/01165, 93/01169, 93/01170, 93/06099, 93/09116, 93/10073, 93/14084, 93/14113, 93/18023, 93/19064, 93/21155, 93/21181, 93/23380, 93/24465, 94/00440, 94/01402, 94/02461, 94/02595, 94/03429, 94/03445, 94/04494, 94/04496, 94/05625, 94/07843, 94/08997, 94/10165, 94/10167, 94/10168, 94/10170, 94/11368, 94/13639, 94/13663, 94/14767, 94/15903, 94/19320, 94/19323, 94/20500, 94/26735, 94/26740, 94/29309, 95/02595, 95/04040, 95/04042, 95/06645, 95/07886, 95/07908, 95/08549, 95/11880, 95/14017, 95/15311, 95/16679, 95/17382, 95/18124, 95/18129, 95/19344, 95/20575, 95/21819, 95/22525, 95/23798, 95/26338, 95/28418, 95/30674, 95/30687, 95/33744, 96/05181, 96/05193, 96/05203, 96/06094, 96/07649, 96/10562, 96/16939, 96/18643, 96/20197, 96/21661, 96/29304, 96/29317, 96/29326, 96/29328, 96/31214, 96/32385, 96/37489, 97/01553, 97/01554, 97/03066, 97/08144, 97/14671, 97/17362, 97/18206, 97/19084, 97/19942 y 97/21702; y en las Publicaciones de Patente Británica Nº 2 266 529, 2 268 931, 2 269 170, 2 269 590, 2 271 774, 2 292 144, 2 293 168, 2 293 169, y 2 302 689. La preparación de tales compuestos se describe completamente en las patentes y publicaciones mencionadas anteriormente, que se incorporan en este documento por referencia.
En una forma de realización, el antagonista de
receptores de neurocinina-1 para uso en combinación
con los compuestos de la presente invención se seleccionan de:
2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)etoxi)-3-(S)-(4-fluorofenil)-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazolo)metil)morfolina,
o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, que se describe
en la Patente de EEUU Nº 5.719.147.
También puede administrarse un compuesto de la
presente invención con un agente útil para el tratamiento de
anemia. Un agente de tratamiento de anemia de este tipo es, por
ejemplo, un activador continuo de receptores de eritropoyesis (tal
como epoetina alfa).
También puede administrarse un compuesto de la
presente invención con un agente útil en el tratamiento de
neutropenia. Tal agente de tratamiento de neutropenia de este tipo
es, por ejemplo, un factor de crecimiento hematopoyético que regula
la producción y la función de neutrófilos tales como el factor
estimulante de colonias de granulocitos humanos
(G-CSF). Los ejemplos de un GCSF incluyen
filgrastim.
También puede administrarse un compuesto de la
presente invención con un fármaco potenciador inmunológico, tal
como levamisol, isoprinosina y Zadaxin.
Por consiguiente, el alcance de la presente
invención abarca el uso de los compuestos reivindicados en este
documento en combinación con un segundo compuesto seleccionado de:
1) un modulador de receptores de estrógenos, 2) un modulador de
receptores de andrógenos, 3) un modulador de receptores de
retinoides, 4) un agente citotóxico/citostático, 5) un agente
antiproliferativo, 6) un inhibidor de la proteína preniltransferasa,
7) un inhibidor de la HMG-CoA reductasa, 8) un
inhibidor de la proteasa de VIH, 9) un inhibidor de la transcriptasa
inversa, 10) un inhibidor de la angiogénesis, 11) un agonista de
PPAR-\gamma, 12) un agonista de
PPAR-\delta, 13) un inhibidor de la resistencia
inherente a múltiples fármacos, 14) un agente antiemético, 15) un
agente útil en el tratamiento de anemia, 16) un agente útil en el
tratamiento de neutropenia, 17) un fármaco potenciador inmunológico,
18) un inhibidor de la proliferación y señalización de
supervivencia celulares, 19) un agente que interfiere con un
control del ciclo celular y 20) un agente inductor de la
apoptosis.
El término "administración" y sus variantes
(por ejemplo, "administrar" un compuesto) en referencia a un
compuesto de la invención significa introducir el compuesto o un
profármaco del compuesto dentro del sistema del animal que necesita
tratamiento. Cuando se proporciona un compuesto de la invención o
profármaco del mismo en combinación con uno o más de otros agentes
activos (por ejemplo, un agente citotóxico, etc.), se entiende que
cada "administración" y sus variantes incluyen la introducción
simultánea y secuencial del compuesto o profármaco del mismo y otros
agentes.
Tal como se usa en este documento, el término
"composición" pretende abarcar un producto que comprende los
componentes especificados en las cantidades especificadas, así como
cualquier producto que resulta, directa o indirectamente, de la
combinación de los componentes especificados en las cantidades
especificadas.
El término "cantidad terapéuticamente
eficaz" tal como se usa en este documento significa la cantidad
de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta
biológica o médica en un tejido, sistema, animal o ser humano que
está estudiando el investigador, veterinario, doctor u otro
médico.
El término "tratar cáncer" o "tratamiento
del cáncer" se refiere a la administración a un mamífero aquejado
de una afección cancerosa y se refiere a un efecto que alivia la
afección cancerosa destruyendo las células cancerosas, pero también
a un efecto que da como resultado la inhibición del crecimiento y/o
metástasis del cáncer.
En una forma de realización, el inhibidor de la
angiogénesis a usarse como el segundo compuesto se selecciona de un
inhibidor de la tirosina cinasa, un inhibidor del factor de
crecimiento derivado del epidérmico, un inhibidor del factor de
crecimiento derivado de fibroblastos, un inhibidor del factor de
crecimiento derivado de plaquetas, un inhibidor de MMP
(metaloproteasa de matriz), un bloqueador de integrina,
interferón-\alpha,
interleucina-12, polisulfato de pentosan, un
inhibidor de ciclooxigenasa, carboxiamidotriazol, combrestastatina
A-4, escualamina,
6-O-(cloroacetil-carbonil)-fumagillol,
talidomida, angiostatina, troponina-1, o un
anticuerpo contra VEGF. En una forma de realización, el modulador
de receptores de estrógenos es tamoxifeno o raloxifeno.
También se incluye en el alcance de las
reivindicaciones el uso de los compuestos para la fabricación de un
medicamento para tratar cáncer que comprende la administración de
una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto en combinación
con radioterapia de radiación y/o en combinación con un compuesto
seleccionado de: 1) un modulador de receptores de estrógenos, 2) un
modulador de receptores de andrógenos, 3) un modulador de
receptores de retinoides, 4) un agente citotóxico/citostático, 5) un
agente antiproliferativo, 6) un inhibidor de la proteína
preniltransferasa, 7) un inhibidor de la HMG-CoA
reductasa, 8) un inhibidor de la proteasa de VIH, 9) un inhibidor
de la transcriptasa inversa, 10) un inhibidor de la angiogénesis,
11) agonistas de PPAR-\gamma, 12) agonistas de
PPAR-\delta, 13) un inhibidor de resistencia
inherente a múltiples fármacos, 14) un agente antiemético, 15) un
agente útil en el tratamiento de anemia, 16) un agente útil en el
tratamiento de neutropenia, 17) un fármaco potenciador
inmunológico, 18) un inhibidor de la proliferación y señalización
de supervivencia celulares, 19) un agente que interfiere con un
control de ciclo celular, y 20) un agente inductor de la
apoptosis.
\newpage
Y aún otra forma de realización de la invención
es el uso de los compuestos para la fabricación de un medicamento
para tratar cáncer que comprende administrar una cantidad
terapéuticamente eficaz de un compuesto en combinación con
paclitaxel o trastuzumab.
La invención abarca además el uso de los
compuestos para la fabricación de un medicamento para tratar o
prevenir el cáncer que comprende administrar una cantidad
terapéuticamente eficaz de un compuesto en combinación con un
inhibidor de COX-2.
La presente invención también incluye una
composición farmacéutica útil para tratar o prevenir el cáncer que
comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto y un
compuesto seleccionado de: 1) un modulador de receptores de
estrógenos, 2) un modulador de receptores de andrógenos, 3) un
modulador de receptores de retinoides, 4) un agente
citotóxico/citostático, 5) un agente antiproliferativo, 6) un
inhibidor de la proteína preniltransferasa, 7) un inhibidor de la
HMG-CoA reductasa, 8) un inhibidor de la proteasa de
VIH, 9) un inhibidor de la transcriptasa inversa, 10) un inhibidor
de la angiogénesis, 11) agonistas de PPAR-\gamma,
12) agonistas de PPAR-\delta, 13) un inhibidor de
la proliferación y señalización de supervivencia celulares, 14) un
agente que interfiere con un control de ciclo celular, y 15) un
agente inductor de la apoptosis.
La invención comprende además el uso de los
presentes compuestos en un procedimiento para seleccionar otros
compuestos que se unen a KSP. Para utilizar los compuestos de la
invención en un procedimiento para seleccionar los compuestos que
se unen a la cinesina KSP, se une la KSP a un soporte, y se añade un
compuesto de la invención (que es un agente mitótico) al ensayo.
Como alternativa, se une el compuesto de la invención al soporte y
se añade KSP. Las clases de compuestos entre los que pueden
encontrarse los agentes de unión novedosos incluyen anticuerpos
específicos, agentes de unión no naturales identificados en
selecciones de bibliotecas químicas, análogos peptídicos, etc.
Resultan de particular interés los ensayos de selección para agentes
candidatos que tienen baja toxicidad para las células humanas.
Puede usarse una amplia diversidad de ensayos para este objetivo,
incluyendo ensayos de unión proteína-proteína
marcadas in vitro, ensayos de desplazamiento de movilidad
electroforética, inmunoensayos para la unión de proteínas, ensayos
funcionales (ensayos de fosforilación, etc.) y similares.
La determinación de la unión del agente mitótico
a KSP puede realizarse de varias maneras. En una forma de
realización de preferencia, el agente mitótico (el compuesto de la
invención) se marca, por ejemplo, con un radical fluorescente o
radiactivo y se determina la unión directamente. Por ejemplo, esto
puede llevarse a cabo uniendo toda o una porción de la KSP a un
soporte sólido, añadiendo un agente mitótico marcado (por ejemplo,
un compuesto de la invención en el que al menos se ha reemplazado un
átomo mediante un isótopo que puede detectarse), lavando el exceso
de reactivo, y determinando si la cantidad del marcador es la que
está presente en el soporte sólido. Pueden utilizarse diversas
etapas de bloqueo y lavado tal como se conoce en la técnica.
Por "marcado" se entiende en este documento
que el compuesto está marcado directa o indirectamente con un
marcador que proporciona una señal que puede detectarse, por
ejemplo, un radioisótopo, etiqueta fluorescente, enzima,
anticuerpos, partículas tales como partículas magnéticas, etiqueta
quimioluminiscente, o moléculas de unión específicas, etc. Las
moléculas de unión específicas incluyen pares, tales como biotina y
estreptavidina, digoxina y antidigoxina, etc. Para los miembros de
unión específicos, normalmente se marcaría el miembro complementario
con una molécula que proporciona la detección, según procedimientos
conocidos, tal como se explicó anteriormente. El marcador puede
proporcionar una señal que puede detectarse directa o
indirectamente.
En algunas formas de realización, sólo se marca
uno de los componentes. Por ejemplo, las proteínas cinesinas pueden
marcarse en las posiciones tirosina usando ^{125}I, o con
fluoróforos. Como alternativa, puede marcarse más de un componente
con diferentes marcadores; usando ^{125}I para las proteínas, por
ejemplo, y un fluoróforo para los agentes mitóticos.
Los compuestos de la invención también pueden
usarse como competidores para seleccionar otros candidatos a
fármacos. "Agente bioactivo candidato" o "candidato a
fármaco" o equivalentes gramaticales tal como se usan en este
documento describen cualquier molécula, por ejemplo, proteína,
oligopéptido, molécula orgánica pequeña, polisacárido,
polinucleótido, etc., a probarse para detectar bioactividad. Éstas
pueden alterar directa o indirectamente el fenotipo de
proliferación celular o la expresión de una secuencia de
proliferación celular, incluyendo secuencias tanto de ácido
nucleico como de proteínas. En otros casos, se selecciona la
alteración de unión y/o actividad de la proteína de proliferación
celular. Las selecciones de este tipo pueden realizarse en
presencia o en ausencia de microtúbulos. En el caso en el que se
selecciona la unión o actividad de las proteínas, las formas de
realización de preferencia excluyen las moléculas que ya se sabe se
unen a esa proteína particular, por ejemplo, estructuras de
polímero tales como microtúbulos, y fuentes de energía tales como
ATP. Las formas de realización de preferencia de ensayos en este
documento incluyen agentes candidatos que no se unen a la proteína
de proliferación celular en su estado nativo endógeno denominados en
este documento agentes "exógenos". En otra forma de
realización de preferencia, los agentes exógenos excluyen además los
anticuerpos contra KSP.
Los agentes candidatos pueden abarcar numerosas
clases químicas, aunque normalmente son moléculas orgánicas, de
preferencia compuestos orgánicos pequeños que tienen un peso
molecular superior a 100 e inferior a aproximadamente 2.500
daltons. Los agentes candidatos comprenden grupos funcionales
necesarios para la interacción estructural con proteínas,
particularmente enlaces de hidrógeno y unión lipófila, y normalmente
incluyen al menos un grupo amino, carbonilo, hidroxilo, éter o
carboxilo, de preferencia al menos dos de los grupos químicos
funcionales. Los agentes candidatos comprenden frecuentemente
estructuras cíclicas de carbono o heterocíclicas y/o estructuras
aromáticas o poliaromáticas sustituidas con uno o más de los grupos
funcionales anteriores. Los agentes candidatos también se
encuentran entre las biomoléculas que incluyen péptidos, sacáridos,
ácidos grasos, esteroides, purinas, pirimidinas, derivados,
análogos estructurales o sus combinaciones. Los péptidos son
particularmente de preferencia.
Los agentes candidatos se obtienen de una amplia
diversidad de fuentes que incluyen bibliotecas de compuestos
sintéticos o naturales. Por ejemplo, numerosos medios están
disponibles para la síntesis aleatoria y directa de una amplia
diversidad de compuestos orgánicos y biomoléculas, incluyendo la
expresión de oligonucleótidos aleatorizados. Como alternativa, las
bibliotecas de compuestos naturales en la forma de extractos
bacterianos, fúngicos, vegetales y animales están disponibles o
pueden producirse fácilmente. Además, las bibliotecas y compuestos
producidos de forma natural o sintética pueden modificarse
fácilmente mediante medios bioquímicos, físicos y químicos
convencionales. Los agentes farmacológicos conocidos pueden
someterse a modificaciones químicas aleatorias o directas tales
como acilación, alquilación, esterificación, amidificación para
producir análogos estructurales.
Los ensayos de selección competitiva pueden
llevarse a cabo combinando KSP y un candidato a fármaco en una
primera muestra. Una segunda muestra comprende un agente mitótico,
KSP y un candidato a fármaco. Esto puede realizarse en presencia o
en ausencia de microtúbulos. Se determina la unión del candidato a
fármaco para ambas muestras, y un cambio, o diferencia en la unión
entre las dos muestras indica la presencia de un agente que puede
unirse a KSP, y que modula potencialmente su actividad. Es decir, si
la unión del candidato a fármaco es diferente en la segunda muestra
con respecto a la primera muestra, el candidato a fármaco es capaz
de unirse a KSP.
En una forma de realización de preferencia, se
determina la unión del agente candidato a través del uso de ensayos
de unión competitivos. En esta forma de realización, el competidor
es un resto de unión que se sabe que se une a KSP, tal como un
anticuerpo, péptido, acompañante de unión, ligando, etc. En
determinadas circunstancias, puede haber unión competitiva tal como
entre el agente candidato y el resto de unión, con el resto de unión
desplazando al agente candidato.
En una forma de realización, se marca el agente
candidato. Se añade el agente candidato, o el competidor, o ambos,
en primer lugar a KSP durante un tiempo suficiente para permitir la
unión, si existe. Pueden realizarse incubaciones a cualquier
temperatura que facilita la actividad óptima, normalmente entre
aproximadamente 4 y aproximadamente 40ºC.
Se seleccionan los periodos de incubación para
la actividad óptima, pero también pueden optimizarse para facilitar
la selección rápida de alta velocidad. Típicamente será suficiente
entre 0,1 y 1 hora. Generalmente el reactivo en exceso se lava o se
elimina. Se añade a continuación el segundo componente, y se sigue
la presencia o ausencia del componente marcado, para indicar la
unión.
En una forma de realización de preferencia, se
añade en primer lugar el competidor, seguido por el agente
candidato. El desplazamiento del competidor es una indicación de que
el agente candidato se está uniendo a KSP y por consiguiente es
capaz de unirse a, y potencialmente modular, la actividad de KSP. En
esta forma de realización, puede marcarse cualquier componente. Por
consiguiente, por ejemplo, si se marca el competidor, la presencia
de marcador en la disolución de lavado indica el desplazamiento por
el agente. Como alternativa, si se marca el agente candidato, la
presencia del marcador en el soporte indica desplazamiento.
En una forma de realización alternativa, se
añade en primer lugar el agente candidato, con incubación y lavado,
seguido por el competidor. La ausencia de unión por el competidor
puede indicar que el agente candidato está unido a la KSP con una
mayor afinidad. Por consiguiente, si se marca el agente candidato,
la presencia del marcador en el soporte, junto con una carencia de
unión del competidor, pueden indicar que el agente candidato es
capaz de unirse a la KSP.
Puede resultar de valor identificar el sitio de
unión de la KSP. Esto puede realizarse en una diversidad de formas.
En una forma de realización, una vez que se ha identificado la KSP
como que se une al agente mitótico, se fragmenta o modifica la KSP
y se repiten los ensayos para identificar los componentes necesarios
para la unión.
Se somete a prueba la modulación mediante la
selección de agentes candidatos que pueden modular la actividad de
la KSP que comprende las etapas de combinar un agente candidato con
KSP, tal como anteriormente, y determinar una alteración en la
actividad biológica de la KSP. Por consiguiente, en esta forma de
realización, el agente candidato debe tanto unirse a KSP (aunque
esto puede no ser necesario), como alterar su actividad biológica o
bioquímica tal como se define en este documento. Los procedimientos
incluyen tanto procedimientos de selección in vitro como
in vivo de células para detectar alteraciones en la
distribución del ciclo celular, viabilidad celular, o la presencia,
morfología, actividad, distribución, o la cantidad de husos
mitóticos, tal como se explicó de forma general anteriormente.
Como alternativa, puede usarse selección
diferencial para identificar candidatos a fármaco que se unen a la
KSP nativa, pero no pueden unirse a la KSP modificada.
En los ensayos pueden usarse controles positivos
y negativos. De preferencia, se realizan todas las muestras control
y de prueba al menos por triplicado para obtener resultados
estadísticamente significativos. La incubación de todas las
muestras se realiza durante un tiempo suficiente para que se una el
agente a la proteína. Tras la incubación, todas las muestras se
lavan para eliminar material unido no específicamente y se determina
la cantidad de agente unido, generalmente marcado. Por ejemplo,
cuando se usa un radiomarcador, las muestras pueden contarse en un
contador de centelleo para determinar la cantidad de compuesto
unido.
Pueden incluirse una diversidad de otros
reactivos en los ensayos de selección. Estos incluyen reactivos
tales como sales, proteínas neutras, por ejemplo, albúmina,
detergentes, etc. que pueden usarse para facilitar la unión
proteína-proteína óptima y/o reducir las
interacciones previas o no específicas. También pueden usarse
reactivos que mejoran de otra forma la eficacia del ensayo, tales
como inhibidores de proteasas, inhibidores de nucleasas, agentes
antimicrobianos, etc. La mezcla de componentes puede añadirse en
cualquier orden que proporciona la unión que se necesita.
Estos y otros aspectos de la invención serán
evidentes a partir de las enseñanzas contenidas en este
documento.
Se probaron los compuestos de la presente
invención descritos en los Ejemplos mediante los ensayos descritos
a continuación y se encontró que tenían actividad inhibidora de
cinasa. Se conocen otros ensayos en la bibliografía y podrían
realizarse fácilmente por los expertos en la técnica.
Se clonaron plásmidos para la expresión de la
construcción del dominio motor de KSP humano mediante PCR usando
una construcción de KSP humano de longitud completa pBluescript
(Blangy y col., Cell, vol. 83, págs. 1159-1169,
1995) como molde. Se usaron el cebador N-terminal
5'-GCAACGA TTAATATGGCGTCG
CAGCCAAATTCGTCTGCGAAG (SEC. ID. Nº: 1) y el cebador C-terminal 5'-GCAACGCTCGAGTCAGTGAT GATGGTGGTGATGCTGATTCACTTCAGGCTTATTCAATAT (SEC. ID. Nº: 2) para amplificar el dominio motor y la región ligadora del cuello. Se digirieron los productos de PCR con AseI y XhoI, se ligaron dentro del producto de digestión NdeI/XhoI de pRSETa (Invitrogen) y se transformó en BL21 (DE3) de E. Coli.
CAGCCAAATTCGTCTGCGAAG (SEC. ID. Nº: 1) y el cebador C-terminal 5'-GCAACGCTCGAGTCAGTGAT GATGGTGGTGATGCTGATTCACTTCAGGCTTATTCAATAT (SEC. ID. Nº: 2) para amplificar el dominio motor y la región ligadora del cuello. Se digirieron los productos de PCR con AseI y XhoI, se ligaron dentro del producto de digestión NdeI/XhoI de pRSETa (Invitrogen) y se transformó en BL21 (DE3) de E. Coli.
Se cultivaron las células a 37ºC hasta una
DO_{600} de 0,5. Tras enfriar el cultivo hasta temperatura
ambiente, se indujo la expresión de la KSP con IPTG 100 \muM y se
continuó la incubación durante la noche. Se sedimentaron las
células mediante centrifugación y se lavaron una vez con PBS
congelado. Se congelaron ultrarrápidamente los sedimentos y se
almacenaron a -80ºC.
Se descongelaron los sedimentos celulares sobre
hielo y se resuspendieron en tampón de lisis
(K-HEPES 50 mM, pH 8,0, KCl 250 mM, Tween al 0,1%,
imidazol 10 mM, Mg-ATP 0,5 mM, PMSF 1 mM,
benzimidina 2 mM, 1x mezcla inhibidora de proteasas completa
(Roche)). Se incubaron las suspensiones celulares con lisozima 1
mg/ml y \beta-mercaptoetanol 5 mM sobre hielo
durante 10 minutos, seguido de sonicación (3 x 30 s). Se realizaron
todos los procedimientos siguientes a 4ºC. Se centrifugaron los
lisados a 40.000 x g durante 40 minutos. Se diluyeron los
sobrenadantes y se cargaron en una columna de sepharose SP
(Pharmacia, cartucho de 5 ml) en un tampón A
(K-HEPES 50 mM, pH 6,8, MgCl_{2} 1 mM, EGTA 1 mM,
Mg-ATP 10 \muM, DTT 1 mM) y se eluyó con un
gradiente de KCl de 0 a 750 mM en tampón A. Se combinaron e
incubaron las fracciones que contenían KSP con resina
Ni-NTA (Qiagen) durante 1 hora. Se lavó la resina
tres veces con tampón B (tampón de lisis menos PMSF y mezcla
inhibidora de proteasas), seguido de tres incubaciones de 15
minutos y lavados con tampón B. Finalmente, se incubó la resina y
se lavó durante 15 minutos tres veces con tampón C (el mismo que el
tampón B excepto por el pH 6,0) y se vertió dentro de una columna.
Se eluyó la KSP con un tampón de elución (idéntico al tampón B
excepto por KCl 150 mM e imidazol 250 mM). Se combinaron las
fracciones que contenían KSP, preparadas al 10% en sacarosa, y se
almacenaron a -80ºC.
Se preparan microtúbulos a partir de tubulina
aislada de cerebro bovino. Se polimeriza la tubulina purificada
(>97% libre de MAP) a 1 mg/ml a 37ºC en presencia de paclitaxel
10 \muM, DTT 1 mM, GTP 1 mM en tampón BRB80
(K-PIPES 80 mM, EGTA 1 mM, MgCl_{2} 1 mM a pH
6,8). Se separan los microtúbulos resultantes de la tubulina no
polimerizada mediante ultracentrifugación y se retira el
sobrenadante. Se resuspende el sedimento, que contiene los
microtúbulos, cuidadosamente en paclitaxel 10 \muM, DTT 1 mM,
ampicilina 50 \mug/ml y cloramfenicol 5 \mug/ml en BRB80.
Se incuba el dominio motor de cinesina con
microtúbulos, ATP 1 mM (1:1 MgCl_{2}: Na-ATP), y
se forma el compuesto a 23ºC en tampón que contiene
K-HEPES 80 mM (pH 7,0), EGTA 1 mM, DTT 1 mM,
MgCl_{2} 1 mM, y KCl 50 mM. Se termina la reacción mediante una
dilución de 2-10 veces con una composición de tampón
final de HEPES 80 mM y EDTA 50 mM. Se mide el fosfato libre de la
reacción de hidrólisis de ATP a través de un ensayo de rojo de
quinaldina/molibdato de amonio añadiendo 150 \mul de tampón C
extinguido que contiene una razón 2:1 de A extinguido con respecto
a B extinguido. A extinguido contiene rojo de quinalina 0,1 mg/ml y
poli (alcohol vinílico) al 0,14%; B extinguido contiene molibdato
de amonio tetrahidratado 12,3 mM en ácido sulfúrico 1,15 M. Se
incuba la reacción durante 10 minutos a 23ºC, y se mide la
absorbancia del complejo fosfomolibdato a 540 nm.
Se probaron los compuestos 3-1,
4-2, 5-3, 5-4,
7-1, 7-2, 7-3,
8-6a/8-6b, 9-1,
10-2, 11-1, 12-1,
12-2 y 12-3 en los Ejemplos en el
ensayo anterior y se encontró que tienen CI_{50} \leq 50
\muM.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sembraron células en placas de cultivo
tisular de 96 pocillos a densidades que permiten el crecimiento
logarítmico durante el transcurso de 24, 48 y 72 horas y se dejaron
adherir durante la noche. Al día siguiente, se añaden los
compuestos en una valoración de la mitad del logaritmo de 10 puntos
en todas las placas. Se realiza cada serie de valoración por
triplicado y se mantiene una concentración constante de DMSO del
0,1% a lo largo de todo el ensayo. Se incluyen también controles de
DMSO al 0,1% solo. Cada serie de disolución de compuestos se
prepara en medio sin suero. La concentración final de suero en el
ensayo es del 5% en un volumen de medio de 200 \mul. Se añadieron
veinte microlitros de reactivo colorante azul alamar a cada pocillo
de muestra y control sobre la placa de valoración a las 24, 48 o 72
horas tras la adición del fármaco y se volvió a la incubación a
37ºC. Se analizó la fluorescencia del azul alamar
6-12 horas más tarde sobre un lector de placas
CytoFluor II usando una excitación de longitud de onda de
530-560 nanometros, emisión a 590 nanometros.
Se deriva una CE_{50} citotóxica mediante la
representación gráfica de la concentración de compuestos en el eje
x y la inhibición por ciento promedio de crecimiento celular para
cada punto de valoración en el eje y. El crecimiento de células en
los pocillos control que se han tratado con vehículo solo se define
como el crecimiento al 100% para el ensayo, y se compara el
crecimiento de las células tratadas con compuestos a este valor. Se
usa software propio para calcular valores porcentuales de
citotoxicidad y puntos de inflexión usando ajuste logístico a
curvas mediante 4 parámetros. La citotoxicidad por ciento se define
como:
% de
citotoxicidad: (Fluorescencia_{control}) -
(Fluorescencia_{muestra}) x 100 x
(Fluorescencia_{control})^{-1}
Se informa el punto de inflexión como la
CE_{50} citotóxica.
\vskip1.000000\baselineskip
Se usa el análisis de FACS para evaluar la
capacidad de un compuesto para parar células en mitosis y para
inducir la apoptosis mediante la medición del contenido de ADN en
una población de células tratadas. Se siembran las células a una
densidad de 1,4 x 10^{6} células por 6 cm^{2} de placa de
cultivo tisular y se dejan adherir durante la noche. A continuación
se tratan las células con vehículo (DMSO al 0,1%) o una serie de
valoración de compuesto durante 8-16 horas. Tras el
tratamiento, se cultivan las células mediante tripsinización a los
tiempos indicados y se sedimentan mediante centrifugación. Se
aclaran los sedimentos celulares en PBS y se fijan en etanol al 70%
y se almacenan a 4ºC durante la noche o más.
Para el análisis de FACS, se sedimentan al menos
500.000 células fijadas y se elimina el etanol al 70% mediante
aspiración. A continuación se incuban las células durante 30 minutos
a 4ºC con ARNasa A (50 unidades Kunitz/ml) y yoduro de propidio (50
\mug/ml), y se analizan usando un FACSCaliber de Becton Dickinson.
Se analizaron los datos (de 10.000 células) usando el software de
modelización de análisis de ciclo celular Modfit (Verity Inc.).
Se deriva una CE_{50} para el paro mitótico
mediante la representación gráfica de la concentración del compuesto
en el eje de las x y el porcentaje de células en la fase G2/M del
ciclo celular para cada punto de valoración (tal como se mide
mediante la fluorescencia de yoduro de propidio) en el eje y. Se
realiza el análisis de datos usando el programa SigmaPlot para
calcular un punto de inflexión usando ajuste logístico a curvas
mediante 4 parámetros. Se informa el punto de inflexión como la
CE_{50} para el paro mitótico. Se usa un procedimiento similar
para determinar la CE_{50} del compuesto para la apoptosis. En
este caso, el porcentaje de células apoptóticas en cada punto de
valoración (tal como se determina mediante la fluorescencia de
yoduro de propidio) se representa gráficamente en el eje y, y se
lleva a cabo un análisis similar tal como se describió
anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
Los procedimientos para la tinción de
inmunofluorescencia de ADN, tubulina, y pericentrina son
esencialmente tal como se describen en Kapoor y col. (2000) J. Cell
Biol. 150: 975-988. Para estudios de cultivos
celulares, se siembran las células sobre portaobjetos de vidrio
tratado de cultivos tisulares y se permite que se adhieran durante
la noche. A continuación se incuban las células con el compuesto de
interés durante 4 a 16 horas. Tras completar la incubación, se
aspiran el medio y el fármaco y se retiran la cámara y la junta del
portaobjetos de vidrio. Posteriormente se permeabilizan, fijan,
lavan, y bloquean las células para la unión a anticuerpos no
específicos según el protocolo de referencia. Se desparafinan las
secciones tumorales incrustadas en parafina con xileno y vuelven a
hidratarse a través de una serie de etanol antes del bloqueo. Se
incuban los portaobjetos en anticuerpos primarios (anticuerpo
anti-\alpha-tubulina monoclonal de
ratón, DM1A clon de Sigma diluido 1:500; anticuerpo
antipericentrina policlonal de conejo de Covance, diluido 1:2000)
durante la noche a 4ºC. Tras lavar, se incuban los portaobjetos con
anticuerpos secundarios conjugados (IgG anti-ratón
de burro conjugado con FITC para tubulina; IgG
anti-conejo de burro conjugado con rojo texas para
pericentrina) diluido hasta 15 \mug/ml durante una hora a
temperatura ambiente. Se lavan a continuación los portaobjetos y se
someten a contratinción con Hoechst 33342 para visualizar el ADN.
Se visualizan las muestras sometidas a tinción inmunológica
mediante un objetivo de inmersión en aceite de 100x en un
microscopio de epifluorescencia Nikon usando un software de
formación de imágenes y deconvolución Metamorph.
Los ejemplos proporcionados pretenden ayudar a
entender más la invención. Los materiales particulares utilizados,
especies y condiciones pretenden ser ilustrativos de la invención y
no limitantes del ámbito razonable de la misma.
Esquema
1
Etapa
1
A una suspensión de 15,8 g (416 mmol) de polvo
de LAH en 600 ml de éter dietílico, se le añadieron 18,3 g (90
mmol) de etiléster de
\alpha-alil-\alpha-fenilglicina
(1-3) (preparado según: Van Betsbrugge y col.
Tetrahedron,1997, 53, 9233-9240) en 75 ml de éter
dietílico a una velocidad para mantener un reflujo suave. Tras
agitar durante la noche a temperatura ambiente, se extinguió la
reacción cuidadosamente con 27 ml de agua, seguidos por 27 ml de
NaOH al 15% y finalmente 82 ml de agua. Se añadió una cantidad de
Na_{2}SO_{4}, y la mezcla se agitó durante 1 hora. A
continuación se filtraron los sólidos y se concentró la disolución.
Se disolvió el residuo en 300 ml de CH_{2}Cl_{2}, se secó sobre
Na_{2}SO_{4}, y se concentró para proporcionar el amino alcohol
como un aceite incoloro. Se disolvió el amino alcohol (4,5 g, 25
mmol) en 50 ml de CH_{2}Cl_{2} y se enfrió hasta 0ºC. Tras la
adición de 5,4 ml (53 mmol) de trietilamina y 4,5 g (28 mmol) de
1,1'-carbonildiimidazol, se calentó la mezcla hasta
temperatura ambiente y se dejó en agitación durante 4 horas. A
continuación se vertió la reacción en un embudo de separación, se
lavó dos veces con HCl 1M, agua, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y
se concentró para obtener oxazolidinona 1-4 como un
aceite incoloro. Datos para 1-4: RMN de ^{1}H
(500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,4-7,2 (m, 5H), 6,6
(s, 1H), 5,6-5,5 (m, 1H), 5,2 (m, 2H), 4,5 (d, 1H),
4,35 (d, 1H), 2,8 (m, 1H), 2,6 (m, 1H) ppm.
Etapa
2
Se enfrió una disolución de 68 g (334,6 mmol) de
1-4 en 500 ml de CH_{2}Cl_{2} hasta
-78ºC y se burbujeó ozono a través de la disolución
hasta persistencia de un color azul claro. A continuación se
burbujeó O_{2} a través de la disolución durante 15 minutos,
seguido por 30 minutos con N_{2}. En ese momento, se añadieron
491 ml (6,7 moles) de sulfuro de dimetilo y se agitó la disolución
durante la noche mientras alcanzaba lentamente la temperatura
ambiente. Se eliminaron los volátiles mediante evaporación rotativa
para proporcionar un aceite marrón. Este material se suspendió en 1
litro de tBuOH, y se añadieron 200 ml (1,9 moles) de
2-metil-2-buteno. A
continuación a esta disolución se le añadió gota a gota una mezcla
de 160 g (1,33 moles) de NaH_{2}PO_{4} y 70 g (774 mmol) de
NaClO_{2} en 800 ml de H_{2}O. Tras completar la adición, se
agitó la mezcla durante otras 4 horas. Tras separar las fases, se
concentró la orgánica mediante evaporación rotativa, se disolvió el
residuo en EtOAc y se colocó en un embudo de separación con la fase
acuosa de la reacción. Tras la separación, se extrajo la fase
acuosa 3 x con EtOAc, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró
para proporcionar - 90 g de una goma amarilla.
Se suspendió el residuo en 500 ml de MeOH, y se burbujeó gas HCl a
través de la disolución hasta que estaba casi a reflujo. A
continuación se tapó el matraz y se dejó en agitación durante la
noche mientas se enfriaba hasta temperatura ambiente. Se eliminaron
los volátiles mediante evaporación rotativa, se cargó el residuo en
una columna de gel de sílice en CH_{2}Cl_{2}, y se eluyó con
EtOAc/hexanos para proporcionar el metiléster como una goma de
color naranja claro. Este residuo se disolvió en 500 ml de THF, se
enfrió hasta 0ºC y se añadieron 32,6 ml (220,5 mmol) de bromoacetato
de terc-butilo, seguidos por 10,6 g de NaH (264,6
mmol de una suspensión al 60%). Tras dejar calentar la mezcla hasta
temperatura ambiente y se agitar durante la noche, se extinguió con
una disolución saturada de NH_{4}Cl, y se extrajo dos veces con
EtOAc. A continuación se lavaron las fases orgánicas combinadas con
salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se concentró y se
purificó el residuo por medio de cromatografía en gel de sílice con
EtOAc/hexanos para dar 1-5 como una goma espesa de
color amarillo claro. Datos para 1-5: RMN de ^{1}H
(500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,4-7,3 (m, 5H),
4,65 (d, 1H), 4,55 (d, 1H), 3,9 (d, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,5 (d, 1H),
3,35 (d, 1H), 3,2 (d, 1H), 1,4 (s, 9H) ppm.
EMAR (EV) M + Na calculado para
C_{18}H_{23}NO_{6}: 372,1423. Hallado: 372,1412.
Etapa
3
A una disolución de 18,6 g (53 mmol) de
1-5 en 150 ml de THF a -78ºC se le
añadieron gota a gota 58,6 ml (58,6 mmol) de una disolución de
LiHMDS 1M en THF. Tras agitar durante 1 hora a esa temperatura, se
retiró el baño de enfriamiento y se dejó calentar la reacción hasta
temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se extinguió la
mezcla con una disolución saturada de NH_{4}Cl, se extrajo dos
veces con EtOAc, se lavó dos veces con salmuera, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró. Se disolvió el residuo en 60 ml de
ácido fórmico y se calentó hasta 100ºC durante 24 horas. Se
eliminaron los volátiles bajo vacío y el residuo se trituró con
CH_{2}Cl_{2}/hexanos/Et_{2}O para proporcionar
1-6 como un sólido beige. Datos para
1-6: RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,5-7,3 (m, 5H), 4,7 (d, 1H), 4,3 (d, 1H), 4,2 (d,
1H), 3,5 (d, 1H), 3,1 (d, 1H), 2,95 (d, 1H), 2,9 (d, 1H) ppm.
Etapa
4
A una suspensión de 2,2 g (10 mmol) de
1-7 en 150 ml de THF a -78ºC se le
añadieron gota a gota 12,2 ml (12,2 mmol) de una disolución de
NaHMDS 1M en THF. Tras agitar durante 30 minutos, se dejó calentar
la disolución hasta 0ºC y se mantuvo a esa temperatura durante 1
hora. A continuación se volvió a enfriar la disolución hasta
-78ºC y se añadió una disolución de 4,35 g (12,2 mmol) de
N-fenilbis(trifluorometanosulfonimida) en 10
ml de THF. Se retiró el baño de enfriamiento y se dejó calentar la
mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se
extinguió la mezcla con una disolución saturada de NH_{4}Cl, se
extrajo dos veces con EtOAc, se lavó dos veces con salmuera, se
secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró. Se disolvió el residuo
en 75 ml de DME y 18 ml de agua. A esta mezcla se le añadieron 1,29
g (30 mmol) de LiCl, 3,2 g (30 mmol) de Na_{2}CO_{3}, y 4,8 g
(30 mmol) de ácido 2,5-difluorofenilborónico. A
continuación se desgaseó la disolución con N_{2} durante 1
minuto, seguido por la adición de 630 mg (0,5 mmol) de
tetrakis(trifenilfosfina) paladio (0). Se calentó la
reacción a 90ºC durante 3 horas, se enfrió hasta temperatura
ambiente, se diluyó con NaHCO_{3} saturado, y se extrajo dos
veces con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con
salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se concentró y se purificó
el residuo mediante cromatografía en gel de sílice con
CH_{2}Cl_{2}/hexanos para dar 1-7 como un sólido
blanco. Datos para 1-7: RMN de ^{1}H (500 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,5-7,3 (m, 5H),
7,1-6,9 (m, 3H), 6,8 (s, 1H), 4,9 (d, 1H), 4,75 (d,
1H), 4,5 (d, 1H), 4,25 (d, 1H) ppm. EMAR (EV) M+ H calculado para
C_{18}H_{13}F_{2}NO_{2}: 314,0987. Hallado: 314,0993.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
Se calentó una suspensión de 1,75 g (5,6 mmol)
1-7 en 15 ml de EtOH y 10 ml de NaOH 3 M a 60ºC
durante 3 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió
en un embudo de separación con EtOAc y salmuera. Se separaron las
fases, y la fase acuosa se extrajo dos veces con EtOAc, las fases
orgánicas combinadas se lavaron dos veces con salmuera, se secó
sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró para proporcionar un sólido
blanco. A este matraz se le añadieron 30 ml de CH_{2}Cl_{2}, 1,5
g (22,3 mmol) de imidazol y 1,76 g (11,7 mmol) de TBSCl, y la
suspensión resultante se agitó durante la noche. Se diluyó la
reacción con CH_{2}Cl_{2}, se lavó dos veces con agua, se secó
sobre Na_{2}SO_{4}, se concentró, y el residuo se purificó por
medio de cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos para
proporcionar 1-8 como un sólido blanco. Datos para
1-8: RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,6-7,3 (m, 5H), 7,1-6,9 (m, 3H),
6,75 (s, 1H), 4,25 (d, 1H), 4,1 (d, 1H), 3,95 (d, 1H), 3,75 (d,
1H), 0,9 (s, 9H), 0,1 (s, 3H), 0,05 (s, 3H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
Se realizó la resolución de los enantiómeros por
medio de cromatografía usando una columna Chiralpak AD© de 10 x 50
cm con isopropanol al 1% en hexanos (con dietilamina al 0,1%) a 150
ml/min. El análisis de HPLC analítica del eluente sobre una columna
Chiralpak AD® de 4 x -250 mm con isopropanol al 1% en
hexanos (con dietilamina al 0,1%) indicó que el primer enantiómero
activo en eluir tiene 1 ml/min tiene T_{r} = 5,5 minutos y el
segundo enantiómero tiene T_{r} = 6,9 minutos.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
7
A una disolución de 1,95 g (6,6 mmol) de
trifosgeno en 25 ml de THF a 0ºC se le añadió una disolución de
1,31 g (3,3 mmol) del primer enantiómero eluido de
1-8 y 915 \mul (6,6 mmol) de trietilamina en 10 ml
de THF. Se retiró el baño de hielo y se dejó calentar la reacción
hasta temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas. A
continuación se repartió la reacción entre agua y EtOAc, la
disolución orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró
para proporcionar 1-9 como un aceite marrón. Datos
para 1-9: EMAR (EV) M + H calculado para
C_{24}H_{28}ClF_{2}NO_{2}Si: 464,1619. Hallado:
464,1625.
Esquema
1A
A una mezcla bifásica de 14,8 g (73 mmol) de
1-4 y 110 ml de CH_{2}Cl_{2}, 110 ml de
CH_{3}CN, y 320 ml de agua se le añadieron aproximadamente 200 mg
de cloruro de rutenio(III) hidrato. A continuación se añadió
peryodato de sodio (85,6 g, 400 mmol) en porciones durante 1 hora
con agitación rápida. Tras completar la adición, se dejó agitar la
reacción durante 4 horas más a temperatura ambiente. La mezcla se
diluyó con 500 ml de agua y 1,5 l de EtOAc, y los sólidos se
eliminaron por medio de filtración. El filtrado se colocó en un
embudo de separación, se separaron las fases, la fase acuosa se
extrajo dos veces con EtOAc, las fases orgánicas combinadas se
lavaron dos veces con salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4}.
Tras la concentración, se disolvió el sólido marrón oscuro en 250
ml de MeOH y se hizo pasar HCl (gas) lentamente a través de la
disolución a una velocidad tal que la temperatura de la disolución
no aumentase por encima de 35ºC. Tras 5 minutos, se tapó la
reacción y se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche.
Posteriormente se eliminaron los volátiles en un evaporador
rotativo y se purificó el residuo por medio de cromatografía en gel
de sílice con EtOAc/hexanos para proporcionar 13,6 g (58 mmol) del
metiléster como un aceite viscoso. A continuación se disolvió este
residuo en 200 ml de THF, se enfrió hasta 0ºC y se añadieron 10,3 ml
(70 mmol) de bromoacetato de terc-butilo, seguido
por 2,8 g de NaH (70 mmol de una suspensión al 60%). Tras dejar
calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y agitar durante la
noche, se extinguió con disolución saturada de NH_{4}Cl, y se
extrajo dos veces con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se
lavaron a continuación con salmuera, se secó sobre
Na_{2}SO_{4}, se concentró, y el residuo se purificó por medio
de cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos para
proporcionar 1-5 como un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
1B
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
Se neutralizó a disolución acuosa (300 ml) de
HCl-metil éster de fenil glicina (100 g) hasta pH 8
con NaOH 10N. Se extrajo la disolución acuosa con EtOAc (3 X 200
ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtró y se concentró. El residuo (56,7 g, 344 mmol)
se disolvió en trimetilortoformato (100 ml) y se trató con
benzaldehído (34,9 ml, 36,4 g, 344 mmol). Tras agitar durante 2
horas, se diluyó la reacción con Et_{2}O (200 ml) y se lavó con
agua (3 X 50 ml). La disolución orgánica se secó sobre MgSO_{4},
se filtró y se concentró. Se disolvió una porción del residuo imina
(26,8 g, 100 mmol) en diclorometano (240 ml) y se trató con 160 ml
de NaOH 10N, dicloruro de metallilo (50,0 g, 400 mmol) y
Bu_{4}NHSO_{4} (3,59 g). Tras agitar durante 10 horas a
temperatura ambiente, se diluyó la reacción con diclorometano y se
separó la disolución orgánica, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró
y se concentró. Se disolvió nuevamente el residuo en Et_{2}O/HCl
1N (200 ml/200 ml) y se agitó durante 2 horas. La fase acuosa se
separó y se neutralizó con NaOH 10N (hasta pH 8). Se extrajo la
mezcla acuosa con EtOAc (3 x 200 ml). Las disoluciones orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró.
Se disolvió el residuo en agua y se neutralizó (hasta pH 8). La
extracción de esta mezcla con EtOAc (X 3) seguida por secado sobre
MgSO_{4}, filtración y concentración, proporcionó
1B-2 bruto. La purificación de este residuo por
medio de cromatografía de resolución rápida (SiO_{2}; EtOAc al
30%/hexanos) proporcionó 1B-2 puro.
Datos para 1B-2: RMN de ^{1}H
(CDCl_{3}, 500 MHz) \delta 7,51 (m, 2H), 7,42 (m, 3H), 5,03 (s,
1H), 4,95 (s, 1H), 3,71 (m, 5H), 3,41 (m, 1H), 2,80 (m, 1H)
ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se enfrió una suspensión de LiAlH_{4} (7,14 g,
188 mmol) en THF (500 ml) hasta 0ºC y se trató con una disolución
de éster 1B-2 (10,2 g, 47 mmol) en THF (50 ml)
durante 20 minutos. Tras agitar durante 30 minutos a 0ºC, se
extinguió la reacción cautelosamente por medio de la adición de agua
(7,1 ml), NaOH acuoso al 15% (7,1 ml) y H_{2}O (21,3 ml). Se
añadió Na_{2}SO_{4} sólido y se agitó la mezcla durante 40
minutos. La mezcla se filtró y se concentró. Se disolvió el residuo
(8,2 g, 43,3 mmol) en diclorometano (300 ml) y se trató con
trietilamina (9,0 ml, 6,5 g, 65,0 mmol) y carbonildiimidazol (9,14
g, 56,4 mmol). Tras agitar durante 8 horas a ta, se diluyó la
reacción con diclorometano y se lavó con HCl 1N y salmuera. Se
concentró la disolución orgánica y no se purificó más. Se enfrió
una disolución del residuo 1B-3 (9,2 g, 42,8 mmol)
en diclorometano (200 ml) hasta -78ºC y se hizo pasar
ozono a través de la disolución hasta persistencia de color azul. Se
purgó la disolución y se trató con sulfuro de dimetilo (35 ml).
Tras calentar de manera gradual hasta ta durante la noche, se
concentró la disolución hasta un sólido amarillo. La trituración de
este sólido con Et_{2}O proporcionó 1-6 puro.
Datos para 1-6: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 MHz)
\delta 7,5-7,3 (m, 5H), 4,7 (d, 1H), 4,3 (d, 1H),
4,2 (d, 1H), 3,5 (d, 1H), 3,1 (d, 1H), 2,95 (d, 1H), 2,9 (d, 1H)
ppm.
Esquema
1C
Etapa
1
A una mezcla a 0ºC de
(R)-(-)-2-fenilglicina
(1C-1, 4 kg) en THF y NaOH 5N (10,6 l) se le añadió
cloroformato de etilo durante 1 hora manteniendo la temperatura
interna por debajo de 10ºC. Una vez completada la adición, se dejó
la reacción durante 15 minutos a 0-10 C y se ensayó
si la reacción se había completado. Se extinguió la reacción con
HCl al 37% (hasta pH =1, 2,3 l) manteniendo la temperatura interna
<25ºC. Se añadió tolueno (20 l) y tras agitar/decantar, se cortó
la fase acuosa. Se ensayó el rendimiento de la fase orgánica y se
cambió el disolvente a tolueno. La suspensión de
1C-2 se usó directamente en la siguiente reacción.
Ácido (2R)-[(etoxicarbonil)amino]-(fenil)acético: pf
154-156ºC; RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3})
indicó una mezcla de rotámeros aproximadamente 1:1: \delta =12,12
(sa, 2H), 7,99 (d,
J = 5,3 Hz, 1H), 7,45-7,32 (m, 10 H), 5,78 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,12 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 1,24 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,06 (t, J = 7,0 Hz, 3H); RMN de ^{13}C (100 MHz, CDCl_{3}): \delta=175,1, 173,6, 157,3, 155,8, 137,4, 136,1, 129,0, 128,7, 128,6, 128,2, 127,2, 127,1, 62,1, 61,5, 58,3, 57,7, 14,4, 14,1; EM m/z 224 ([M + H]^{+}, C_{11}H_{14}NO_{4}, calculado 224,09).
J = 5,3 Hz, 1H), 7,45-7,32 (m, 10 H), 5,78 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,12 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 1,24 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,06 (t, J = 7,0 Hz, 3H); RMN de ^{13}C (100 MHz, CDCl_{3}): \delta=175,1, 173,6, 157,3, 155,8, 137,4, 136,1, 129,0, 128,7, 128,6, 128,2, 127,2, 127,1, 62,1, 61,5, 58,3, 57,7, 14,4, 14,1; EM m/z 224 ([M + H]^{+}, C_{11}H_{14}NO_{4}, calculado 224,09).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
A una disolución de 1C-2 y
PhSO_{3}H (42,7gm) en tolueno bajo presión reducida (350 torr) a
85ºC, se le añadió una disolución de benzaldehído dimetil acetal (3
l) en tolueno (5 ml/g) durante 1-2 horas. El
tolueno/MeOH se eliminó por destilación durante el transcurso de la
reacción. Tras completar la reacción, se enfrió la disolución hasta
ta y se diluyó con THF (36 l), hasta homogeneidad. La disolución
orgánica se lavó con NaHSO_{3} al 10% (7,5 l), seguido por
NaHCO_{3} saturado (9 l). A continuación se cambió el disolvente a
tolueno y se diluyó hasta volumen total de 7,5 ml/g (vs.
rendimiento del ensayo) con tolueno una vez completado. Se calentó
la suspensión hasta 75ºC y se dejó hasta homogeneidad. Tras enfriar
lentamente, cristalizó 1C-3. Cuando la suspensión
alcanzó los 40ºC, se añadió heptano (2,5 ml/g). Se enfrió la
suspensión hasta ta y se filtró para recoger el sólido. Se lavó el
sólido con tolueno/heptano 1:1 (5 ml/g) y se secó hasta peso
constante bajo una corriente de nitrógeno.
(2S,4R)-5-oxo-2,4-difenil-1,3-oxazolidin-3-carboxilato
de etilo: pf 197-199 ºC; RMN de ^{1}H
(CDCl_{3}, 400 Hz) \delta =7,46-7,37 (m, 10H),
6,77 (sa, 1H), 5,45 (sa, 1H), 3,96 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 0,84 (t,
J = 7,1 Hz, 3H); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}, 100 Hz) \delta
=130,2, 129,1, 129,0, 218,8, 126,7, 90,3, 61,9, 60,3, 13,8; EM m/z
312 ([M + H]^{+}, C_{18}H_{18}NO_{4}, calculado
312,12).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
A una disolución de 1C-3 y
allil-Br(1,67 l) en THF (40 l) a
-10ºC se le añadió una disolución de
bis(trimetilsilil) amida de sodio 2M en THF (7 l) durante 1
hora, manteniendo la temperatura <5ºC. Tras 5 minutos, se ensayó
si la reacción se había completado. Se extinguió la reacción con HCl
1N (22,5 l) y se diluyó con heptano (20 l). Se cortó la fase acuosa
y la fase orgánica se lavó con salmuera saturada (12 l). Se cambió
el disolvente a MeOH y se eliminó el agua de manera azeotrópica
hasta alcanzar una KF < 900ppm. La disolución de
1C-4 se usó directamente en la siguiente reacción.
(2S,
4S)-4-allil-5-oxo-2,4-difenil-1,3-oxazolidin-3-carboxilato
de etilo: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 Hz) \delta =
7,60-7,52 (m, 2H), 7,39-7,33 (m,
8H), 6,55 (m, 1H), 5,84 (m, 1H), 5,38 (m, 2H), 4,16 (m, 2H),
3,72-3,12 (m, 2H), 1,17 (t, J = 7,0 Hz, 3H); RMN de
^{13}C (CDCl_{3}, 100 Hz): \delta = 172,5, 164,0, 137,5,
131,0, 130,5, 129,7, 128,3, 128,1, 127,4, 126,2, 122,0, 89,5, 62,0,
42,2, 40,4, 14,2; EM m/z 352 ([M + H]+, C_{21}H_{22}NO_{4},
calculado 352,15).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
A una disolución de 1C-4 en MeOH
(20 l) a 23ºC se le añadió NaOMe al 30% en MeOH (535 ml) durante
0,25 horas, manteniendo la temperatura <30ºC. Tras 4 horas, se
ensayó si la reacción se había completado. Se extinguió la reacción
en NaHSO_{3} al 5% (40 l) y se diluyó con IPAc (20 l). Se cortó la
fase acuosa y la fase orgánica se lavó con KH_{2}PO_{4} al 10%
(12 l). Se cambió el disolvente a MeCN y se usó directamente en la
siguiente reacción.
(2S)-2-[(etoxicarbonil)amino]-2-fenilpent-4-enoato
de metilo: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 Hz) \delta
=7,46-7,43 (m, 2H), 7,39-7,27 (m,
3H), 6,23 (sa, 1H), 5,76-5,66 (m, 1H),
5,20-5,14 (m, 2H), 4,10-4,00 (m,
2H), 3,68 (s, 3H), 3,53 (sa, 1H), 3,20 (dd, J = 13,7, 7,6 Hz, 1H)
1,27-1,15 (m, 3H); 1 RMN de ^{13}C (CDCl_{3},
100 Hz): \delta = 172,6, 154,3, 139,8, 132,3, 128,4, 127,8, 125,9,
119,4, 65,0, 60,6, 53,1, 37,8, 14,4; EM m/z 300 ([M + Na]+,
C_{15}H_{19}NNaO_{4}, calculado 300,12).
\newpage
Etapa
5
A una disolución de 1C-5 en MeCN
(42 l) 23ºC se le añadió agua (12 l), seguida por I_{2} (8 kg).
Tras 6 h, se ensayó si la reacción se había completado. Se
extinguió la reacción con Na_{2}SO_{3} al 10% (35 l),
alcalinizado con NaOH al 50% en peso (4 l) y se extrajo con IPAc (35
l). Se cortó la fase acuosa y se eliminó y la fase orgánica se
extrajo con HCl 6N (35 l). Se eliminó la fase orgánica. Se enfrió la
fase acuosa hasta -10ºC, se añadió IPAc (35 l) y se
neutralizó lentamente con 22 l de NaOH 10N. Se cortó la fase acuosa
y se eliminó y se almacenó la disolución de 1C-6.
4-[(etoxicarbonil)oxi]-2-fenil-D-prolinato
de metilo: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 Hz) indicó una mezcla
2:1 de diastereómeros: \delta = 7,55-7,47 (m, 5H),
7,34-7,22 (m, 5H), 5,18-5,11 (m,
2H), 4,22-4,11 (m, 4H), 3,68 (s, 6H),
3,33-3,24 (m, 4H), 3,10 (d, J = 14,1 Hz, 2H), 3,05
(a, 2H), 2.34 (dd J = 14,3, 5,5 Hz, 1H), 2,22 (dd J = 14,3, 4,1 Hz,
1H), 1,31-1,23 (m, 6H); RMN de ^{13}C
(CDCl_{3}, 100 Hz): \delta = 175,2, 175,1, 154,7, 154,4, 142,0,
141,5, 128,3, 128,2, 127,5, 127,4, 126,0, 125,7, 78,5, 77,6, 71,7,
71,0, 63,8, 52,9, 52,8, 52,7, 52,0, 51,8, 43,2, 42,9, 14,1, 14,0; EM
m/z 294 ([M + H]^{+}, C_{15}H_{20}NO_{5}, calculado
294.13).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
6
A una disolución de carbonato
1C-6 (5,0 g, 17,0 mmol) en THF (50 ml) se le añadió
disolución de Red-Al 3,5M en tolueno (17,0 ml, 59,7
mmol, 3,5 eq. mol.) a -50ºC. Se calentó la mezcla de
reacción hasta ta y se dejó durante 2 horas. Se extinguió la
reacción por medio de disolución de sal de Rochelle 2,0M (45 ml, ca.
1,5 eq. mol para Red-Al) a 0ºC y dejó agitando
enérgicamente durante 5 horas a ta. Tras separar la fase acuosa, se
cambió la disolución orgánica mezclada a n-BuOAc por
destilación azeotrópica bajo presión reducida (ca. 20 torr, 60ºC).
Tras añadir 200 ml de n-BuOAc, se detectó menos del
0,1% de THF, tolueno y metoxi etanol en CG y KF mostró 0,11%. EM
m/z 194 ([M + H]^{+}, C_{11}H_{15}NO_{2}, calculado
193,11).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
7
A la disolución de n-BuOAc
descrita en la Etapa 6 se le añadió CDI (3,46 g, 21,3 mmol, 1,25 eq.
mol) en porciones y se dejó durante 1 hora a ta. Se añadieron 30 ml
de disolución de HCl 2N a la mezcla de reacción y se dejó durante 1
hora. Se separó la fase acuosa y se extrajo con 30 ml de
n-BuOAc tras añadir 6,0 g de NaCl. Se añadieron 150
mg de carbón activado (Darco KB) a la fase orgánica combinada y se
dejó la mezcla durante la noche. Se filtró el carbón a través de
una almohadilla de Solka-Floc. Datos: RMN de ^{1}H
(CDCl_{3}, 400 Hz) \delta 7,47-7,28 (m, 7H),
4,65 (d, J=8,3 Hz, 1H), 4,64-4,59 (m, 0,4H),
4,57-4,51 (m, 1H), 4,51 (d, J=8,8 Hz, 0,4H), 4,33
(d, J=8,3 Hz, 1H), 4,28 (dd, J=13,1, 6,7 Hz, 0,4H), 4,15 (d, J=8,8
Hz, 0,4H), 3,92 (d, J=12,7, Hz, 1H), 3,28 (dd, J=12,7, 3,9 Hz, 1H),
3,18 (dd, J=13,1, 2,7 Hz, 0,4H), 2,63 (d, J=13,6 Hz, 0,4H), 2,50
(dd, J=13,7, 5,1 Hz, 1H), 2,40 (da, J=13,7 Hz, 1H), 2,25 (dd,
J=13,6, 6,8 Hz, 0,4H).
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
8
IC-8 (bruto, una porción de la
disolución anterior 1,40 g ensayo, 6,38 mmol) en
n-BuOAc se concentró bajo presión reducida y se
añadieron 14 ml de MeCN a los cristales brutos. La relación de
disolventes era n-BuOAc : MeCN = 8 : 92 en CG. A
esta disolución se le añadió AcOH (1,10 ml, 19,2 mmol, 3,0 eq. mol),
TPAP (33,6 mg, 0,095 mmol), 1,5 mmol%) y disolución de NaOCl 2,0M
(9,5 ml, 19,2 mmol, 3,0 eq. mol) en gotas durante 30 minutos a ta.
(ca. 5% del producto clorado se observó en HPLC.) Tras 30 minutos,
la mezcla de reacción se diluyó con 12 ml de AcOEt y se separó la
fase acuosa. La fase orgánica se lavó con disolución saturada acuosa
de Na_{2}S_{2}O_{3} y salmuera. Se cambió el disolvente
orgánico a MTBE y se filtró el precipitado resultante y se lavó con
MTBE. Se obtuvo la cetona 1C-9; 78% (1,08 g, 4,97
mmol, 99:4 área%, 97,0 p/p%, 0,5 área% del producto clorado).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
1D
En un matraz equipado con agitador superior,
termocupla y entrada de nitrógeno/vacío se cargó la
S-TBS pirrolina sólida 1-8 (180
gramos) y se añadió IPAC (1,26 l). Se continuó agitando hasta que la
disolución se volvió homogénea, durante aproximadamente 30
minutos.
En un matraz separado equipado con agitador
superior, termocupla y entrada de nitrógeno/vacío se añadió IPAC
(1,26 l) y la disolución se enfrió hasta -5ºC. Se añadió
trifosgeno (67 gramos) y a continuación se añadió lentamente
lutidina (173 ml). A continuación se añadió a esta disolución
lentamente la disolución de la S-TBS pirrolina. Se
controló la reacción por medio de HPLC y se consideró completa
cuando la conversión de la amina en el producto eras >99A% a 200
nm por HPLC. Se extinguió la reacción añadiendo 1,8 l de ácido
cítrico acuoso al 10% en peso a la mezcla de reacción. Se separaron
las fases y la fase orgánica se lavó dos veces con agua (240 ml). A
continuación se concentró la fase orgánica hasta 900 ml (el
contenido de agua era de 105 \mug/ml) y se usó directamente en
las reacciones de acoplamiento. Los ensayos de HPLC mostraron 99,96%
de conversión al cloruro de carbamilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
1E
Etapa
1
Se agitó enérgicamente una suspensión de 231 g
(1,06 moles) de 1-6 en 11 l de THF en un reactor
recubierto de 20 litros con agitación superior durante 1 hora, a
continuación se enfrió hasta -70ºC. A esta suspensión se
le añadió gota a gota 1,28 l (1,28 moles) de una disolución de
NaHMDS 1M en THF. Tras agitar durante 3 horas, se añadieron 478,9 g
(1,28 moles) de
N-fenilbis(trifluoro-metanosulfonimida),
seguidos por otras 1,5 horas de agitación, antes de extinguir por
medio de la adición de 2 l de una disolución saturada acuosa de
NH_{4}Cl. Una vez que la disolución alcanzó temperatura ambiente,
se añadieron 2 l de agua y 2 l de EtOAc, se separaron las capas y
la capa acuosa se extrajo con 2 l de EtOAc. Las fases orgánicas
combinadas se lavaron con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4},
y se concentró por evaporación rotativa. Se disolvió el residuo en
6 l de DME y 1,2 l de agua en un reactor recubierto de 20 litros con
agitación superior, y se desgaseó la disolución con un flujo fuerte
de N_{2} durante 1 hora. Posteriormente se añadieron al reactor
201,6 g (1,28 moles) de ácido
2,5-difluorofenilborónico, 134 g (3,19 moles) de
LiCl, 338 g (3,19 moles) de Na_{2}CO_{3}, y 24,6 g (21 mmol) de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0), y se
calentó la reacción a 90ºC durante 2 horas. Tras este período de
tiempo, se eliminaron por destilación aproximadamente 4,5 l de DME,
se enfrió la disolución restante hasta temperatura ambiente y se
vertió en 6 l de agua y 8 l de CH_{2}Cl_{2}. Se separaron las
fases, la fase acuosa se extrajo con 2 l de CH_{2}Cl_{2}, se
combinaron las fases orgánicas, se lavó con 4 l de agua, se secó
sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró por medio de evaporación
rotativa para proporcionar una masa sólida rojo oscuro. Este
residuo se agitó con 500 ml de CHCl_{3} y se filtró para
proporcionar un sólido color canela. Se concentró el filtrado
hasta - 300 ml y se recogió un segundo
rendimiento del sólido, se combinó con el primero y el material
combinado se agitó con 500 ml de EtOAc durante la noche. Se filtró
esta suspensión para proporcionar un sólido blancuzco, se concentró
el filtrado hasta - 250 ml y se recogió un
segundo rendimiento, se combinó con el primero y se recristalizó el
material combinado (- 205 g) desde 1,6 l de EtOAc para
proporcionar 1-7 como un sólido blanco. Datos para
1-7: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 Hz) \delta
7,5-7,3 (m, 5H), 7,1-6,9 (m, 3H),
6,8 (s, 1H), 4,9 (d, 1H), 4,75 (d, 1H), 4,5 (d, 1H), 4,25 (d, 1H)
ppm. EMAR (EV)
M + H calculado para C_{18}H_{13}F_{2}NO_{2}: 314,0987. Hallado: 314,0993.
M + H calculado para C_{18}H_{13}F_{2}NO_{2}: 314,0987. Hallado: 314,0993.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se calentó una suspensión de 109,4 g (349 mmol)
de 1-7 en 2,2 l de EtOH y 105 ml (1,05 moles) de
NaOH 10 M en un recipiente de base redonda de 10 litros a 60ºC
durante 4 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se dejó
durante la noche. A esta mezcla se le añadieron 90,2 ml (1,08 moles)
de HCl concentrado y se eliminaron los disolventes por medio de
evaporación rotativa. Se suspendió el residuo en 2 l de acetonitrilo
y se llevó nuevamente a sequedad por medio de evaporación rotativa.
Se suspendieron los sólidos en 3,8 l de CH_{2}Cl_{2} y 200 ml
de DMF, se añadieron 118,7 g (1,75 moles) de imidazol, seguidos por
110,5 (733 mmol) de TBSCl. Tras agitar durante 15 horas bajo una
suave corriente de N_{2}, se vertió la reacción en 4 l de agua y 2
l de CH_{2}Cl_{2}, se separaron las fases y la fase acuosa se
extrajo con 2 l de CH_{2}Cl_{2}. A continuación se lavaron las
fases orgánicas combinadas con 4 x 4 l de agua, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró por medio de evaporación rotativa.
Se disolvió el residuo en 500 ml de MeOH y 500 ml de MeNH_{2} 2M
en MeOH, se agitó durante 4 horas y posteriormente se concentró por
medio de evaporación rotativa. Se colocó el residuo bajo alto vacío
hasta obtener peso constante y se trituró el material con un mortero
y pilón para proporcionar 1-8 como un sólido beige.
Datos para 1-8: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 Hz)
\delta 7,6-7,3 (m, 5H), 7,1-6,9
(m, 3H), 6,75 (s, 1H), 4,25 (d, 1H), 4,1 (d, 1H), 3,95 (d, 1H), 3,75
(d, 1H), 0,9 (s, 9H), 0,1 (s, 3H), 0,05
(s, 3H) ppm.
(s, 3H) ppm.
\newpage
Esquema
2
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución de 10,0 g (43 mmol) de
4-oxo-1-piperidin-carboxilato
bencilo en 25 ml de DMF se le añadieron 14,3 ml (103 mmol) de
trietilamina y posteriormente 6,53 ml (52 mmol) de TMSCl. Se calentó
la reacción a 80ºC durante la noche, se enfrió hasta temperatura
ambiente y a continuación se vertió en hexanos en un embudo de
separación. Se repartió la mezcla con disolución saturada acuosa de
NaHCO_{3}, se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre
MgSO_{4} y se concentró por medio de evaporación rotativa. Se
disolvió el residuo en 500 ml de CH_{3}CN y se trató con 16,7 g
(47 mmol) de Selectfluor. Tras 90 minutos se concentró la reacción
hasta aproximadamente la mitad del volumen original, se repartió
entre EtOAc y salmuera, se separó, se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y concentró por medio de evaporación rotativa. Se cargó el
residuo en una columna de gel de sílice y se eluyó con
EtOAc/hexanos para proporcionar 2-2 como un aceite
incoloro.
Etapa
2
A una disolución de 9,4 g (37,5 mmol) de
2-2 en 150 ml de 1,2-dicloroetano se
le añadieron 37,5 ml (74,9 mmol) de una disolución de metilamina 2M
en THF y 11,9 g (56,2 mmol) de Na(OAc)_{3}BH. Tras
agitar durante 2 horas, se extinguió la reacción con disolución
saturada acuosa de K_{2}CO_{3}, se repartió con EtOAc, se separó
y se extrajo la fase acuosa 3 x EtOAc. Se lavaron los extractos
orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y se concentró por medio de evaporación rotativa. Se cargó el
residuo en una columna de gel de sílice y se eluyó con 80:10:10
CHCl_{3}/EtOAc/MeOH para proporcionar los isómeros cis y trans de
2-2a como aceites incoloros. Datos para el isómero
trans de 2-2a, primero en eluir (confirmado por
análisis NOE): RMN de ^{1}H (CD_{2}Cl_{2}, 600 MHz) \delta
7,4-7,3 (m, 5H), 5,1 (m, 2H),
4,4-4,1 (m, 2H), 3,9 (m, 1H),
3,15-3,05 (m, 2H), 2,75 (m, 1H), 2,4 (s, 3H), 2,0
(m, 1H), 1,25 (m, 1H) ppm. Datos para el isómero cis de
2-2a, segundo en eluir (confirmado por análisis
NOE): RMN de ^{1}H (CD_{2}Cl_{2}, 600 MHz) \delta
7,4-7,2 (m, 5H), 5,1 (m, 2H),
4,9-4,7 (m 1H), 4,4 (m, 1H), 4,15 (m, 1H),
3,1-2,9 (m, 2H), 2,6 (m, 1H), 2,4 (s, 3H), 1,8 (m,
1H), 1,6 (m, 1H) ppm. EMAR (EV) M + H calculado para
C_{14}H_{19}F_{1}N_{2}O_{2}: 267,1504. Hallado:
267,1500.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
A una disolución de 7,67 g (28,8 mmol) de
cis-2-2a en 150 ml de
CH_{2}Cl_{2} se le añadieron 12,1 ml (86,5 mmol) de
trietilamina y 9,44 g (43,3 mmol) de dicarbonato de
di-terc-butilo. Tras agitar durante
1 hora, se repartió la reacción entre CH_{2}Cl_{2} y H_{2}O,
la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se
filtró y concentró por medio de evaporación rotativa. Se cargó el
residuo en una columna de gel de sílice y se eluyó con
EtOAc/hexanos para proporcionar
cis-2-3 racémico como un sólido
blanco. La resolución de los enantiómeros se realizó por medio de
cromatografía usando una columna Chiralpak AD© 10 x 50 cm con
isopropanol al 20% en hexanos (con dietilamina al 0,1%) a 150
ml/min. El análisis de HPLC analítica del eluente en una columna
Chiralpak AD® de 4 x 250 mm con isopropanol al 20% en hexanos (con
dietilamina al 0,1%) a 1 ml/min indicó que el primer enantiómero en
eluir (enantiómero de 2-3) tiene T_{r} = 5,90
minutos y el segundo enantiómero (2-3) tiene
T_{r} = 6,74 minutos. Datos para 2-3: EMAR (EV) M
+ Na calculado para C_{19}H_{27}F_{1}N_{2}O_{4}:
389,1847. Hallado: 389,1852.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
4
A una disolución de 4,6 g (12,6 mmol) del
segundo enantiómero 2-3 en eluir en 150 ml de EtOH
se le añadieron 29,7 ml (314 mmol) de
1,4-ciclohexadieno y una cantidad catalítica de Pd
sobre carbono al 10%. Tras agitar durante la noche, se filtró la
reacción a través de Celite y se concentró por medio de evaporación
rotativa. Se disolvió el residuo en 75 ml de MeOH, 2 ml de AcOH y
se añadieron 3,1 ml (38 mmol) de formaldehído acuoso al 37% y la
mezcla se agitó durante 1 hora. En ese momento, se añadieron 1,58 g
(25,1 mmol) de NaCNBH_{3} en 10 ml de MeOH y se dejó la reacción
durante 2 horas más antes de verter en disolución saturada acuosa de
NaHCO_{3}. Tras extraer con 3 x CH_{2}Cl_{2}, la fase
orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se
concentró por medio de evaporación rotativa para proporcionar
2-4 como un aceite incoloro. Datos para
2-4: EMAR (EV) M + H calculado para
C_{12}H_{23}FN_{2}O_{2}: 247,1817. Hallado: 247,1810.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
5
A una disolución de 3,0 g (12,2 mmol) de
2-4 en 100 ml de EtOAc se le burbujeó HCl gas hasta
que la disolución estuviera caliente al tacto. A continuación se
tapó el matraz y se agitó durante 4 horas. Se eliminaron los
volátiles por medio de evaporación rotativa y se trituró el residuo
con Et_{2}O y se colocó bajo alto vacío para proporcionar un
sólido blanco. Este material se mezcló con 25 ml de Na_{2}CO_{3}
acuoso al 15% y se extrajo con 5 x 50 ml 2:1 CHCl_{3}/EtOH. Se
concentró la fase orgánica por medio de evaporación rotativa con
calentamiento muy suave, se disolvió el residuo en 200 ml de
CHCl_{3}, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para
proporcionar 2-5 como un aceite incoloro. Datos para
2-5: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 Hz) \delta
4,8 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,5 (s, 3H), 2,45 (m, 1H),
2,3 (s, 3H), 2,2-2,0 (m, 2H),
1,9-1,7 (m, 2H) ppm. EMAR (EV) M + H calculado para
C_{7}H_{15}FN_{2}: 147,1292. Hallado: 147,1300.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
2A
Etapa
1
Se cargó un matraz de base redonda de 22 litros
con agitador mecánico con Cbz-cetona
2-1 (2,5 kg, 10,7 mol), 5,0 l de dimetilacetamida,
trietilamina (3,0 l, 21,5 mol). Se añadió cloruro de trimetilsililo
(2,0 l, 15,7 mol). Se calentó la mezcla hasta 60ºC y se dejó
durante 4 horas. Tras enfriar hasta 10ºC, la mezcla se extinguió en
10 l de bicarbonato de sodio al 5% y 10 l de
n-heptano manteniendo la temperatura interna
inferior a 20ºC. Se lavó la fase orgánica dos veces con 10 l de
bicarbonato de sodio al 2,5%. Se secó la fase orgánica final sobre
sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida y
se cambió el disolvente a 10 l de MeCN.
Se cargó un recipiente recubierto de 50 litros
con 7,5 l de MeCN y Selectfluor (4,1 kg, 11,5 mol). Se enfrió la
suspensión hasta 10ºC y se añadió carbonato de potasio (0,37 kg,
2,68 mol). Se transfirió la disolución de sililéter en MeCN en
porciones manteniendo la temperatura interna en
10-15ºC. La suspensión final se dejó durante 2
horas a 10-15ºC. Se extinguió la reacción en un
extractor de 100 l que contenía 20 l de ácido clorhídrico 2 N y 30
l de acetato de etilo. Se lavó la fase orgánica con 20 l de ácido
clorhídrico 2 N, 10 l de cloruro de sodio al 20% en peso, se secó
sobre sulfato de sodio y se filtró. El filtrado se concentró y se
aclaró con EtOAc seco bajo presión reducida hasta
KF = 16000 \mug/ml y a continuación se cambió el disolvente bajo presión reducida a aproximadamente 10 l de THF.
KF = 16000 \mug/ml y a continuación se cambió el disolvente bajo presión reducida a aproximadamente 10 l de THF.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
Se disolvió Cbz fluorocetona (10,3 mol) en
tetrahidrofurano (30 l) en un matraz de base redonda. Se añadió
metilamina, 2 M en tetrahidrofurano (2,00 equivalentes; 20,6 moles;
10,3 l) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura
ambiente. Se enfrió la mezcla hasta 0ºC y se añadió ácido acético
(20,6 moles; 1,17 l; 1,236 kg) seguido por agitación a 0ºC durante
otros 30 minutos. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (12,36
moles; 2,62 kg) en porciones a la disolución en 15 minutos y se dejó
la mezcla de reacción a 0ºC hasta reacción completa según el
análisis de HPLC.
La mezcla de reacción se transfirió lentamente a
un extractor cilíndrico de 100 litros conteniendo ácido clorhídrico,
12 M en agua (30,9 moles, 2,575 l), agua (30 l) y tolueno (140 mol,
15 l). Tras agitar enérgicamente durante 15 minutos, se separaron
las fases y la fase de tolueno se lavó además con agua (10 l). La
fase acuosa combinada se transfirió nuevamente al extractor. Se
añadió hidróxido de sodio, 10 M en agua (82,4 moles, 8,24 l) y la
mezcla se extrajo una vez con IPAC (30 l).
Se secó la fase orgánica con sulfato de sodio (3
kg) y se concentró. Se disolvió el residuo en 8:2 (vol:vol)
etanol:agua (23 kg de etanol mezclado con 7,2 kg de agua), se añadió
ácido fosfórico al 85% (9,83 mol, 952 g, 667 ml) a la disolución y
se añadió germen de cristalización. Se agitó la mezcla a temperatura
ambiente durante la noche. El precipitado sólido cristalino se
recogió por filtración. El sólido se lavó con 8:2 etanol:agua y se
secó en horno de vacío para dar 2,1 kg de sólido.
El sólido se suspendió en una mezcla de 36 l de
EtOH y 4 l de agua y la mezcla se calentó hasta
70ºC-80ºC hasta que se disolvió todo el sólido. Se
retiró la fuente de calor y se sembró la disolución transparente
con la mezcla de isómero cis 2-2a. Tras agitar a
temperatura ambiente durante la noche, precipitó un sólido
cristalino y se recogió por filtración. El producto sólido se secó
en horno de vacío para dar un sólido blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
En un extractor de 50 litros se cargaron 20 l de
agua y 1,06 kg de Na_{2}CO_{3}, se agitó la mezcla hasta que se
disolvió todo el sólido. Se añadió IPAC (20 l) y carboxilato de CBZ
amina (1,85 kg, 5,3 mol). Se cortaron las fases después de mezclar.
La fase acuosa se extrajo con otros 5 l de IPAC. Se secaron las
fases orgánicas combinadas con sulfato de sodio. Tras retirar el
agente de secado por filtración, se cargó el lote en un matraz de
base redonda de 72 litros y se añadió disolución de Boc_{2}O (1,0
M, 4,8 l). El ensayo de HPLC tras 45 minutos indicó 98% de
conversión. Se añadió más disolución de Boc_{2}O (50 ml). Tras
dejar el lote durante otras 15 horas, se concentró bajo vacío hasta
volumen mínimo, se aclaró con MeOH (10 l - 15
l). Se diluyó el lote con metanol hasta un peso total de ca. 14,3
kg . El ensayo de HPLC indicó ca. 1,9 kg del producto deseado.
La fluoropiperidina se resolvió por separación
cromatográfica en columna de fase estacionaria quiral de 20
micrómetros Chiralpak AD (Diacel Chemical Industries, Ltd.) (30 ID x
25 cm). Se eluyó una cantidad de 54 g de racemato por inyección con
metanol. Se recogió el enantiómero de tiempo de retención más bajo
dando 45 g (85% de recuperación) del enantiómero (3R, 4S) deseado
en un 98% ee. Este proceso de separación se repitió y las
fracciones deseadas de diferentes inyecciones se combinaron y
concentraron.
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Etapa
4
Se mostró que la disolución concentrada (4 l) de
la etapa de separación quiral contenía 489,5 g (1,3 mol) de
Cbz-Boc-diamina 2-3.
A esta disolución, se le añadió formaldehído (al 37% en agua, 430
ml, 5,3 mol) y la mezcla se presurizó bajo hidrógeno sobre Pd/C al
5% (183 g) durante 4 horas. La mezcla de reacción se filtró para
eliminar el catalizador y se repartió entre 8 l de EtOAc y 8 l de
bicarbonato de sodio 0,5 M. Se lavó la fase orgánica con 8 l de
bicarbonato de sodio 0,5 M. Las fases acuosas combinadas se
extrajeron nuevamente con 8 l de EtOAc. Las fases orgánicas
combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se filtró. El
filtrado se usó en la siguiente etapa directamente.
Etapa
6
Se cargó la disolución de acetato de etilo
conteniendo la amina Boc protegida 2-4 (327 g por
ensayo de HPLC) a un matraz de 12 litros mientras se concentraba a
28ºC. Cuando el lote llegó a un volumen total de 1,5 l, se cambió
entonces el disolvente del lote a etanol cargando 8 l de etanol
mientras se destilaba a un volumen constante.
A otro matraz diferente de 12 litros se le
añadieron 1,5 l de etanol (200 proof, meticuloso). A continuación
se añadieron 436 ml de cloruro de acetilo al etanol manteniendo la
temperatura por debajo de 35ºC con ayuda de un baño de agua. Se
agitó la disolución durante 1 hora. A continuación se añadió
lentamente la disolución de etanol conteniendo 302 g de la diamina
Boc protegida 2-4 al HCl, manteniendo la temperatura
<30ºC. En el punto en que 3/4 de la adición estaba completa,
comenzaron a cristalizar sólidos desde la disolución. La reacción
se controló por CG y la suspensión se agitó durante la noche. Los
sólidos se aislaron por filtración y la torta se lavó con 2 l de
etanol al 85%, acetato de etilo al 15%. Posteriormente se secó la
torta filtrada bajo vacío con una corriente de N_{2} durante la
noche para dar 243 g del producto 2-5 deseado como
la sal bis clorhidrato. El análisis de CG indicó que el lote era
99,3% ee.
Se añadieron aproximadamente 200 mg de
2-5 (fluoropiperidina 2 HCl) a un vial y se
suspendió en metanol (<500 \mul). Se calentó la muestra hasta
disolución con pistola de calor. Después de 2 horas se notaron
cristales tridimensionales grandes. Se aislaron los cristales
eliminando el disolvente restante.
Se seleccionó un cristal único para recoger
datos de rayos x de monocristal en un sistema Bruker Smart Apex. El
cristal era una placa incolora con dimensiones de 0,24 mm x 0,22 mm
x 0,14 mm. Los datos de la celda unidad se recogieron mediante un
barrido de 5 segundos y la autoindexación dio una configuración de
celda monoclínica. La estructura se resolvió en el grupo espacial
monoclínico P 21 tras recoger datos de cuadrante usando un barrido
de 5 segundos. Véanse las Tablas 1-5 para la
información tabulada perteneciente a las especificaciones finales
de la estructura resuelta. En la Figura 1 se muestra un dibujo por
ordenador de la estructura de 2-5.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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Esquema
3
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A una disolución de 1,6 g (3,45 mmol) de cloruro
de carbamoílo 1-9 en 25 ml de THF se le añadieron
630 mg (4,31 mmol) de amina 2-5, 1,44 ml (10,3
mmol) de trietilamina y una cantidad catalítica de DMAP. Tras agitar
durante 24 horas a temperatura ambiente, se repartió la reacción
entre EtOAc y NaHCO_{3} acuoso saturado, la fase orgánica se lavó
con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró por
medio de evaporación rotativa. El residuo se purificó por
cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos para proporcionar
- 1,7 g de un caramelo amarillo claro. Éste
se disolvió en 75 ml de CH_{3}CN, se añadieron 3 ml de
trihidrofluoruro de trietilamina y la mezcla se agitó durante 24
horas a temperatura ambiente. Se añadieron otros 3 ml de
trihidrofluoruro de trietilamina y la reacción se calentó a 37ºC
durante otras 24 horas. Posteriormente se vertió la reacción en
NaHCO_{3} saturado acuoso, se extrajo 3 x con EtOAc, se lavó con
salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró por medio
de evaporación rotativa. El residuo se purificó por cromatografía en
gel de sílice con EtOAc - 20:1:1
EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O para proporcionar 3-1 como
un sólido blanco. Datos para 3-1: RMN de ^{1}H
(CDCl_{3}, 500 Hz) \delta 7,4-7,2 (m, 5H),
7,1-6,9 (m, 3H), 6,3 (s, 1H), 5,25 (m, 1H), 4,9 (d,
1H), 4,8 (d, 1H), 4,6 (d, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,1-4,0
(m, 2H), 3,2-3,1 (m, 1H), 3,1 (s, 3H), 3,0 (m, 1H),
2,4-2,3 (m, 1H), 2,3 (s, 3H),
2,3-2,2 (m, 2H), 1,7 (m, 1H) ppm. EMAR (EV) M + H
calculado para C_{25}H_{28}F_{3}N_{3}O_{2}: 460,2207.
Hallado: 460,2213.
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Esquema
3A
En un matraz equipado con agitador superior,
termocupla y entrada de nitrógeno/vacío se cargó el cloruro de
carbamoílo 1.9 en IPAC (0,9 l). A esta disolución se le añadieron
0,9 l de DMF, 111 gramo de fluorodiamina 2-5 y 540
ml de diisopropiletilamina. Se calentó la disolución a 60ºC durante
15 horas y se ensayó la conversión de cloruro de carbamoílo a
producto. La reacción se considera completa cuando la conversión de
cloruro de carbamoílo a producto es >98A% a 200 nm por HPLC. Se
enfrió la reacción hasta 5ºC y se añadieron 450 ml de HCl 6N. Se
dejó la disolución hasta completar la destilación (>99A% a 200
nm), aproximadamente 2 horas.
Se añadió isopropilacetato (3 l) y a
continuación bicarbonato de sodio acuoso al 8% en peso (2 l) a la
mezcla de reacción, que se dejó calentar hasta
15-20ºC. Se separaron las fases y la fase acuosa se
extrajo una vez con 3 l de IPAC. Las fases orgánicas combinadas se
lavaron dos veces con 1 l de agua. La disolución orgánica lavada se
concentró hasta 5 litros y, mientras estaba a
35-40ºC se transfirió a otro matraz a través de un
filtro de polipropileno de 1 \mum. La destilación continuó hasta
que se obtuvo un volumen de 1 litro y a continuación se enfrió la
reacción hasta temperatura ambiente durante dos horas. A
continuación se añadió heptano (1 l) lentamente durante 2 horas. La
suspensión resultante se filtró en un embudo de cristal y el
producto cristalino se lavó 3 veces con 500 ml de 2:1 heptano:
isopropilacetato como lavados de desplazamiento. El sólido
3-1 se secó con un barrido de nitrógeno durante la
noche. Los datos de RMN de ^{1}H y EMAR para este sólido
correspondieron a los datos del producto del
Esquema 3.
Esquema 3.
Se seleccionó un cristal único para recoger
datos de rayos x de monocristal en un sistema Bruker Smart Apex. El
cristal era un poliedro incoloro con dimensiones de 0,14 mm x 0,13
mm x 0,13 mm. Los datos de la celda unidad se recogieron mediante
un barrido de 30 segundos y la autoindexación dio una configuración
de celda ortorrómbica. La estructura se resolvió en el grupo
espacial ortorrómbico P 2_{1} 2_{1} 2_{1} tras recoger datos
de cuadrante usando un barrido de 30 segundos. Véanse las Tablas
6-10 para la información tabulada perteneciente a
las especificaciones finales de la estructura resuelta. En la Figura
2 se muestra un dibujo por ordenador de la estructura de
3-1.
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Esquema
4
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Este compuesto se preparó de una manera idéntica
a la utilizada para obtener 3-1, con la excepción de
la incorporación del primer enantiómero en eluir de
2-3 de la columna quiral descrita en el Esquema 2,
Etapa 3. Datos para 4-2: RMN de ^{1}H
(CDCl_{3}, 500 Hz) \delta 7,4-7,2 (m, 5H),
7,1-6,9 (m, 3H), 6,3 (s, 1H), 5,4 (sa, 1H), 5,2 (d,
1H), 4,9 (m, 1H), 4,6 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,8 (m,
1H), 3,2 (s, 3H), 3,0 (m, 1H), 2,5-2,2 (m, 3H), 2,4
(s, 3H), 1,8-1,6 (m, 2H) ppm. EMAR (EV) M + H
calculado para C_{25}H_{28}F_{3}N_{3}O_{2}: 460,2207.
Hallado: 460,2229.
\newpage
Esquema
5
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Este compuesto se preparó de una manera idéntica
a la utilizada para obtener 3-1, con la excepción de
que se incorporó el isómero trans de 2-2a en la
síntesis. La resolución de los enantiómeros de
"trans-2-3" se realizó por
cromatografía usando una columna Chiralpak AD© de 10 x 50 cm con
EtOH al 15% en hexanos (con dietilamina al 0,1%) a 150 ml/min. El
análisis de HPLC analítica del eluente en una columna Chiralpak AD®
de 4 x 250 mm con EtOH al 15% en hexanos (con dietilamina al 0,1%) a
1 ml/min indicó que el primer enantiómero en eluir tiene T_{r} =
7,30 minutos y el segundo enantiómero tiene T_{r} =11,59 minutos.
El primer enantiómero en eluir (que tiene estereoquímica absoluta
desconocida) se procesó más para proporcionar
trans-amina 5-1, que se incorporó
en la síntesis de 5-3 siguiendo una ruta idéntica a
la explicada en el Esquema 2. Datos para 5-3: RMN
de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 Hz) \delta 7,4-7,2 (m,
5H), 7,1-6,9 (m, 3H), 6,3 (s, 1H),
5,0-4,7 (m, 4H), 4,5 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,8 (m,
1H), 3,3 (m, 1H), 2,9 (s, 3H), 2,85 (m, 1H), 2,35 (s, 3H),
2,2-1,9 (m, 3H), 1,7 (m, 1H) ppm. EMAR (EV) M + H
calculado para C_{25}H_{28}F_{3}N_{3}O_{2}: 460,2207.
Hallado: 460,2231. La estereoquímica absoluta en la piperidina de
los compuestos 5-3 y 5-4 no se ha
determinado y la estereoquímica indicada se ha asignado de manera
tentativa.
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Este compuesto se preparó de una manera idéntica
a la utilizada para obtener 5-3, con la excepción de
la incorporación del segundo isómero de
trans-2-3 en eluir de la columna
quiral. Datos para 5-4: RMN de ^{1}H (CDCl_{3},
500 Hz) \delta 7,4-7,2 (m, 5H),
7,1-6,9 (m, 3H), 6,3 (s, 1H), 5,4 (m, 1H),
4,9-4,6 (m, 3H), 4,4 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,85 (m,
1H), 3,25 (m, 1H), 3,0 (s, 3H), 2,85 (m, 1H), 2,35 (s, 3H),
2,2-1,9 (m, 4H) ppm. EMAR (EV) M + H calculado para
C_{25}H_{28}F_{3}N_{3}O_{2}: 460,2207. Hallado:
460,2229.
Esquema
6
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Etapa
1
A un matraz equipado con barra agitadora secado
a la llama se le añadió
(2S,4S)-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato
de terc-butilo (6-1, preparado a
partir de
(S)-(-)-4-cloro-3-hidroxibutironotrilo
por el método de Maeda, y col. Synlett 2001,
1808-1810, 7,8 g, 20,7 mmol) y acetonitrilo anhidro
(20,0 ml). La disolución resultante se trató con trihidrofluoruro
de trietilamina (10,1 ml, 62,0 mmol) mientras se agitaba bajo
N_{2}. La reacción se agitó durante 12 horas a 40ºC. A
continuación se diluyó la reacción con EtOAc (100 ml) y se vertió en
NaHCO_{3} acuoso al 5%. Tras cesar la evolución de gas, se lavó
la fase orgánica otras tres veces con NaHCO_{3} acuoso al 5%. La
fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y
concentró para proporcionar el producto bruto. La recristalización
se realizó desde EtOAc/hexanos para proporcionar
4-hidroxi-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato
de (2S,4S)-terc-butilo
(6-2) como un sólido cristalino blanco. RMN de
^{1}H (CDCl_{3}, 300 Hz) rotámeros \delta
7,38-7,18 (m, 5H), 4,90 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 3,88
(m, 1H), 3,56 (dd, J = 11,5, 4,0 Hz, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,03 (m,
1H), 1,50 y 1,20 (s a, 9H); EM 208,0 hallado, 208,1
(M-C(CH_{3})_{3}) requerido.
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Etapa
2
A un matraz equipado con barra agitadora secado
a la llama se le añadieron 150 ml diclorometano anhidro que se
había enfriado hasta -78ºC. Se añadió cloruro de oxalilo
(3,8 ml, 44 mmol) y DMSO (4,8 ml, 61 mmol) de manera secuencial y
la reacción se agitó durante 10 minutos. Se añadió
4-hidroxi-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato
de (2S,4S)-terc-butilo
(6-2, 2,28 g, 8,73 mmol) en 10 ml diclorometano
anhidro gota a gota y se agitó durante 1 hora a -78ºC.
Se añadió trietilamina (12 ml, 87 mmol) y se calentó la reacción
hasta 0ºC durante 1 hora. Una vez completada, la reacción se lavó
con salmuera de NaHCO_{3} al 5%, y se secó sobre MgSO_{4}. La
fase orgánica se concentró para proporcionar
4-oxo-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato
de (2S)-terc-butilo bruto
(6-3). La recristalización se realizó con
EtOAc/hexanos. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 300 Hz) \delta 7,35
(m, 3H), 7,17 (m, 2H), 5,38 (m, 1H), 4,08 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 3,90
(d, J = 19,3 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 18,8, 9,8 Hz, 1H), 2,58 (dd, J
= 18,6, 2,4 Hz, 1H), 1,40 (s a, 9H); EM 206,0 hallado, 206,1
(M-C(CH_{3})_{3}) requerido.
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Etapa
3
A un matraz equipado con barra agitadora secado
a la llama se le añadió cetona
4-oxo-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato
de (2S)-terc-butilo
(6-3, 0,16 g, 0,62 mmol) y THF anhidro (2 ml). La
disolución resultante se enfrió hasta -78ºC y se trató
gota a gota con hexametildisililamida de litio (LHMDS, 0,68 ml, 1M
en THF, 0,68 mmol). Se agitó la reacción durante 1 hora a
-78ºC, y se añadió
N-(5-cloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoro-N-[(trifluorometil)sulfonil]metanosulfonamida
(0,27 g, 0,68 mmol) neto en una porción. Se dejó calentar la
reacción hasta 0ºC y se agitó durante 4 horas en total. La reacción
se diluyó con Et_{2}O (10 ml) y se lavó sucesivamente con H_{2}O
(10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó sobre
MgSO_{4}, se filtró y se concentró. El residuo bruto se purificó
por medio de cromatografía en columna de resolución rápida
(gradiente de EtOAc al 0-20%/hexanos, 15 minutos)
para proporcionar
2-fenil-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato
de (2S)-terc-butilo
(6-4). RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 300 Hz) rotámero
principal \delta 7,30 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 5,48 (m, 1H), 4,42
(m, 2H), 1,18 (s, 9H); EM 379,0 hallado 379,1
(M-CH_{3}) requerido.
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Etapa
4
A un matraz equipado con barra agitadora secado
a la llama se le añadió
2-fenil-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato
de (2S)-terc-butilo
(6-4, 0,250 g, 0,636 mmol), ácido
2,5-difluorofenil borónico (0,251 g, 1,59 mmol),
Na_{2}CO_{3} (0,202 g, 1,91 mmol), y LiCl (0,081 g, 1,91 mmol).
Los sólidos se disolvieron en 20 ml de 4:1 DME/H_{2}O y se
desgaseó con nitrógeno. Se añadió Pd(PPh_{3})_{4}
(0,037 g, 0,032 mmol) y se selló la reacción bajo nitrógeno y se
calentó hasta 90ºC durante 2 horas. Una vez completada, la reacción
se repartió entre NaHCO_{3} acuoso al 5% y EtOAc (3 x 50 ml), y
las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}. Tras la
filtración, se concentró la fase orgánica y se purificó por medio
de cromatografía en columna de resolución rápida (SiO_{2},
gradiente de EtOAc al 0-20%/hexanos) para
proporcionar
4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato
de (2S)-terc-butilo
(6-5).
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Etapa
5
A un matraz equipado con barra agitadora secado
a la llama bajo nitrógeno se le cargó 6-5 (0,63 g,
1,75 mmol) y CH_{2}Cl_{2} anhidro (10 ml). La disolución
resultante se trató con ácido trifluoroacético (5 ml) y se agitó
durante 1,5 horas a 25ºC. Una vez completada, la reacción se
concentró, se retomó en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y se lavó con
NaHCO_{3} al 5% (50 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}), se
filtró y concentró bajo presión reducida. La amina libre resultante
se disolvió en THF anhidro (10 ml) y se trató con carbonil
diimidazol (0,31 g, 1,93 mmol). La disolución resultante se sometió
a reflujo durante 4 horas hasta completar. La reacción se
concentró, se retomó en EtOAc (50 ml) y se lavó con H_{2}O y
salmuera. Las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y
concentraron. El acil imidazol bruto se disolvió en CH_{3}CN
anhidro y se trató con MeI (2,2 ml, 36 mmol). La disolución
resultante se agitó a 25ºC durante la noche. Una vez completada, la
reacción se concentró para dar 6-6 como un sólido de
color naranja: EMBR m/z (M+H) 365,9 hallado, 366,1 requerido.
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Esquema
7
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A una disolución de 75 mg (0,15 mmol) de
6-6 en 1 ml de THF se le añadieron 40 mg (0,18 mmol)
de la sal bis-HCl de amina 2-5 y
106 \mul (0,76 mmol) de trietilamina. Tras agitar durante 72 horas
a temperatura ambiente, la reacción se repartió entre
CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} saturado acuoso, la fase orgánica se
lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró por
medio de evaporación rotativa. El residuo se purificó por
cromatografía en gel de sílice con 80:10:10 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH
para proporcionar 7-1 como un sólido blanco. Datos
para 7-1: EMAR (EV) M + H calculado para
C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O: 430,2101. Hallado: 430,2116.
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Este compuesto se preparó de una manera análoga
a 7-1, sustituyendo 4-1 como
material de partida. Datos para 7-2: EMAR (EV) M +
H calculado para C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O: 430,2101. Hallado:
430,2119.
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Este compuesto se preparó de una manera análoga
a 7-1, sustituyendo 5-1 como
material de partida. Datos para 7-3: EMAR (EV) M +
H calculado para C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O: 430,2101. Hallado:
430,2115. La estereoquímica absoluta en la piperidina del compuesto
7-3 no se ha determinado y la estereoquímica
indicada se ha asignado de manera tentativa.
Los siguientes compuestos se preparan por medio
de modificaciones simples de los procedimientos ilustrados en los
Esquemas 1-7 y Esquemas G-N, pero
sustituyendo los reactivos utilizados en los Esquemas por los
reactivos adecuadamente sustituidos.
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(Continuación)
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(Continuación)
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(Continuación)
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(Continuación)
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(Continuación)
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Esquema
8
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A una disolución de 2,0 g (6,8 mmol) de
8-1 (informado en: S. J. Hayes, T. C. Malone, G.
Johnson J. Org. Chem. 1991, 56, 4084-4086) en 100
ml de CH_{2}Cl_{2} se le añadieron 3,33 ml (23,9 mmol) de
trietilamina, seguido por la adición gota a gota de 2,44g (15,4
mmol) de SO_{3}-piridina en 50 ml de DMSO. Tras
agitar durante 5 horas a temperatura ambiente, la mezcla se
repartió entre CH_{2}Cl_{2} y H_{2}O, se separaron las fases,
se lavaron con 2 x HCl 1M, NaHCO_{3} saturado acuoso, salmuera, se
secó sobre MgSO_{4} y se concentró para proporcionar la cetona. A
2,1 g (7,2 mmol) de esta cetona disuelta en 35 ml de MeOH se le
añadió 1 ml de AcOH y 14,4 ml (28,9 mmol) de una disolución de
MeNH_{2} 2M en MeOH. Tras agitar durante 1 hora, se añadieron 910
mg (14,4 mmol) de NaCNBH_{3} en 5 ml de MeOH y la reacción se
agitó durante la noche. Se extinguió la reacción con NH_{4}Cl
acuoso saturado, se extrajo con CH_{2}Cl_{2}, se lavó con
NaHCO_{3}, H_{2}O, salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró para proporcionar 2,0 g (7,2 mmol) de la amina. Este
material se disolvió en 25 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron
1,78 g (8,2 mmol) de dicarbonato de
di-terc-butilo y 1,8 ml (12,9 mmol)
de trietilamina y se agitó la mezcla resultante durante 72 horas. La
reacción se repartió a continuación entre CH_{2}Cl_{2} y
NaHCO_{3} acuoso saturado, se separó, se lavó con H_{2}O,
salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El residuo se
purificó por cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos para
proporcionar 1,85 g (4,6 mmol) de una mezcla de diastereómeros. Ésta
se disolvió en 20 ml de THF y 1 ml de MeOH, se enfrió hasta 0ºC y
se añadieron 496 mg (22,8 mmol) de LiBH_{4}. Tras calentar hasta
temperatura ambiente y agitar durante la noche, se extinguió la
reacción con NH_{4}Cl saturado acuoso, se extrajo con EtOAc, se
lavó con H_{2}O, salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró
para proporcionar 8-2 como una goma incolora. Datos
para 8-2: EMBR (ES) M + H calculado para
C_{20}H_{30}N_{2}O_{5}: 379. Hallado: 379.
A 1,08 g (2,9 mmol) de 8-2 en 30
ml de EtOH se le añadieron 7 ml (74 mmol) de
1,4-ciclohexadieno y una cantidad catalítica de Pd
sobre carbono al 10%. Tras agitar durante la noche, se filtró la
reacción a través de Celite, se concentró por medio de evaporación
rotativa y se disolvió en 25 ml de MeOH. A esto se le añadieron 2 ml
de AcOH, y 700 \mul (8,6 mmol) de formaldehído acuoso al 37%.
Tras agitar durante la noche, se añadieron 540 mg (8,6 mmol) de
NaCNBH_{3} en 5 ml de MeOH y la reacción se agitó durante 1 hora
más. Se eliminaron los disolventes por medio de evaporación
rotativa, el residuo se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3} acuoso,
la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró. El residuo se retomó en
CH_{2}Cl_{2}, se filtró y se concentró para proporcionar
8-3 como un aceite incoloro. Datos para
8-3: EMBR (ES) M + H calculado para
C_{13}H_{26}N_{2}O_{3}: 259. Hallado: 259.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de 350 \mul (2,6 mmol) de
trifluoruro de (dietilamino)azufre (DAST) en 15 ml de
CH_{2}Cl_{2} a -78ºC se le añadieron 520 mg (2,0
mmol) de 8-3 en 5 ml de CH_{2}Cl_{2}. La
reacción se dejó calentar lentamente hasta temperatura ambiente con
agitación durante la noche y a continuación se extinguió con agua
helada. La mezcla se repartió con más CH_{2}Cl_{2} y una pequeña
cantidad de KOH 3M, la fase orgánica se lavó con agua, se secó
sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró. Se cargó el residuo en una
columna de gel de sílice y se eluyó con EtOAc
- 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O. El primer
producto en eluir fue el producto 8-5 de anillo
agrandado como un aceite incoloro, y el segundo en eluir fue
8-4 como un aceite incoloro. Tanto
8-5 como 8-4 se aislaron como
mezclas enantioméricas del diastereómero trans. Las estructuras se
confirmaron por espectroscopía de RMN 1D y 2D extensa. Datos para
8-5: RMN de ^{1}H (CD_{2}Cl_{2}, 600 MHz)
\delta 4,75 (m, 1H), 4,1-3,9 (m, 1H),
2,9-2,7 (m, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,4 (s, 3H), 2,35 (m,
1H), 2,1-1,7 (m, 4H), 1,4 (s, 9H) ppm. Datos para
8-4: RMN de ^{1}H (CD_{2}Cl_{2}, 600 MHz)
\delta 4,8-4,5 (m, 2H), 4,1-4,0
(m, 1H), 3,2 (m, 1H), 2,75 (m, 2H), 2,7 (s, 3H), 2,45 (s, 3H),
1,9-1,5 (m, 4H), 1,45 (s, 9H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
Se saturó una disolución de 80 mg (0,31 mmol) de
8-4 en 30 ml de EtOAc con gas HCl y se dejó agitar
durante 1 hora a temperatura ambiente. A continuación se concentró
la reacción por medio de evaporación rotativa y el sólido blanco
resultante se suspendió en 1 ml de THF. A éste se le añadieron 156
mg (0,34 mmol) de 1-9, 268 ml (1,54 mmol) de
diisopropiletilamina y una cantidad catalítica de DMAP. Tras
calentar a 50ºC durante la noche, se añadieron 500 \mul de ácido
trifluoroacético y se continuó agitando durante 1 hora más a
temperatura ambiente antes de extinguir con NaHCO_{3} acuoso
saturado. La mezcla se repartió con CH_{2}Cl_{2}, la fase
orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró. Se cargó el residuo en una columna de gel de sílice y se
eluyó con CHCl_{3} - 80: 10: 10
CHCl_{3}/EtOAc/MeOH para proporcionar 8-6a y
8-6b como una mezcla inseparable
- una goma incolora. Datos para
8-6a/8-6b: EMAR (EV) M+ H calculado
para C_{26}H_{30}F_{3}N_{3}O_{2}: 474,2363. Hallado:
474,2374.
Los siguientes compuestos se preparan por medio
de modificaciones simples de los procedimientos ilustrados en los
Esquemas 1-8 y Esquemas G-N, pero
sustituyendo los reactivos utilizados en los Esquemas por los
reactivos adecuadamente sustituidos.
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de 20 mg (0.044 mmol) de
3-1 en 1 ml de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC se le
añadieron 11 mg (-0,048 mmol) de mCPBA. Se retiró el baño de hielo
y se agitó la reacción durante 30 minutos. La mezcla se repartió
con EtOAc y NaHCO_{3} saturado acuoso, se separó, se lavó con
H_{2}O, salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} u se concentró
por medio de evaporación rotativa. Se cargó el residuo en una
columna de gel de sílice y se eluyó con EtOAc- 20:1:1
EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O para proporcionar 9-1 como
una espuma blanca. Datos para 9-1: RMN de ^{1}H
(CDCl_{3}, 500 Hz) \delta 7,4-7,2 (m, 5H),
7,1-6,9 (m, 3H), 6,25 (s, 1H),
5,0-4,9 (m, 2H), 4,7 (m, 1H), 4,5 (m, 1H),
4,3-4,2 (m, 1H), 4,0 (m, 2H), 3,7 (m, 1H),
3,4-3,3 (m, 2H), 3.3 (s, 3H), 3,2 (s, 3H),
2,5-1,9 (sa, 2H), 1,8 (m, 1H) ppm. EMAR (EV) M + H
calculado para C_{25}H_{28}F_{3}N_{3}O_{3}: 476,2156.
Hallado: 476,2165.
\newpage
Esquema
10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
1
A una disolución de 885 mg (2,4 mmol) de
2-3 (primer isómero en eluir de la cromatografía) en
12 ml de EtOAc a 0ºC se le añadieron 12 ml (48 mmol) de una
disolución de HCl 4M en dioxano. Se retiró el baño de hielo, se
continuó agitando durante 2 horas y a continuación se eliminaron los
volátiles por medio de evaporación rotativa. El residuo se repartió
entre EtOAc y NaHCO_{3} acuoso saturado con 5 ml de NaOH 1M, se
separó y se extrajo la fase acuosa 2 x EtOAc. Los extractos
orgánicos combinados se lavaron nuevamente con NaHCO_{3},
salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para
proporcionar 590 mg (2,2 mmol) de la amina. A 215 mg (0,81 mmol) de
este material en 5 ml de THF se le añadieron 340 mg (0,73 mmol) de
1-9, 306 \mul (2,2 mmol) de trietilamina y una
cantidad catalítica de DMAP. Tras agitar durante la noche, la
reacción se consideró sólo - 40% completa por
CL/EM, por lo que se añadió otra porción de DMAP y se continuó
agitando durante la noche. A continuación se repartió la reacción
entre EtOAc y NaHCO_{3} acuoso saturado, la fase orgánica se lavó
con NaHCO_{3}, H_{2}O, salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}
y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en gel de
sílice con EtOAc/hexanos para proporcionar 10-1 como
un aceite incoloro. Datos para 10-1: EMBR (EV) M +
H calculado para C_{38}H_{46}F_{3}N_{3}O_{4}Si: 694,4.
Hallado: 694,3.
\newpage
Etapa
2
A una disolución de 405 mg (0,58 mmol) de
10-1 en 4 ml de EtOH se le añadieron 1,38 ml (14,6
mmol) de 1,4-ciclohexadieno, 100 mg de paladio
sobre carbono al 10%, y a continuación se agitó durante la noche. Se
filtró la reacción a través de Celite, se concentró y se disolvió
el residuo en 3 ml de CH_{2}Cl_{2}. A esto se le añadieron 3 ml
de ácido trifluoroacético, se mantuvo la agitación durante 1 hora y
a continuación la mezcla se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3}
acuoso saturado más 25 ml de Na_{2}CO_{3} acuoso al 5%, la fase
orgánica se lavó con NaHCO_{3} nuevamente, H_{2}O, salmuera, se
secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró por medio de evaporación
rotativa. Se cargó el residuo en una columna de gel de sílice y se
eluyó con EtOAc - 20:1:1
EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O para proporcionar 10-2 como
un sólido blanco. Hubo una impureza de - 5%
eliminada posteriormente por cromatografía en fase inversa con 95:5
a 5:95 H_{2}O/CH_{3}CN (ambos con TFA al 0,1%). Las fracciones
se alcalinizaron con NaHCO_{3} para proporcionar
B-2 puro como un sólido blanco. Datos para
10-2: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 Hz) \delta
7,4-7,2 (m, 5H), 7,1-6,9 (m, 3H),
6,3 (s, 1H), 5,2 (sa, 1H), 4,9 (m, 1H), 4,8-4,6 (m,
2H), 4,45 (m, 1H), 4,2-4,1 (m, 1H), 4,0 (m, 1H),
3,3-3,2 (m, 2H), 3,1 (s, 3H),
2,85-2,7 (m, 2H), 2,1 (m, 1H), 1,7 (m, 2H) ppm. EMAR
(EV) M + H calculado para C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O_{2}:
446,2050. Hallado: 446,2059.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de 38 mg (0,085 mmol) de
10-2 en 1 ml de 1,2-dicloroetano se
le añadieron 20 \mul (0,34 mmol) de ácido acético, 25 \mul
(0,34 mmol) de acetona y 27 mg (0,13 mmol) de
Na(OAc)_{3}BH. Tras agitar durante la noche, la
reacción se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3} saturado acuoso, la
fase orgánica se lavó nuevamente con NaHCO_{3}, H_{2}O,
salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró por medio de
evaporación rotativa. El residuo se purificó por cromatografía en
fase inversa con 95:5 a 5:95 H_{2}O/CH_{3}CN (ambos con TFA al
0,1%). Las fracciones se alcalinizaron con NaHCO_{3} para
proporcionar 11-1 como una película incolora. Datos
para 11-1: RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 500 Hz)
\delta 7,4-7,2 (m, 5H), 7,1-6,9
(m, 3H), 6,3 (s, 1H), 5,3 (m, 1H), 4,95-4,8 (m,
2H), 4,6 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,1-4,0 (m, 2H), 3,2
(m, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,0 (m, 1H), 2,8 (m, 1H),
2,45-2,25 (m, 3H), 1,75 (m, 1H),
1,1-1,0 (m, 6H) ppm. EMAR (EV) M + H calculado para
C_{27}H_{32}F_{3}N_{3}O_{2}: 488,2519. Hallado:
488,2517.
\newpage
Esquema
12
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se preparó de una manera idéntica
a la utilizada para 10-2, con la excepción de la
incorporación del enantiómero de 2-3. Datos para
12-1: EMAR (EV) M + H calculado para
C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O_{2}: 446,2050. Hallado:
446,2069.
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se preparó de una manera idéntica
a la utilizada para 10-2, con la excepción de que se
incorporó el isómero trans de 2-2a en la síntesis.
La resolución de los enantiómeros de
"trans-2-3" se realizó por
medio de cromatografía usando una columna Chiralpak AD© de 10 x 50
cm con EtOH al 15% en hexanos (con dietilamina al 0,1%) a 150
ml/min. El análisis de HPLC analítica del eluente en una columna
Chiralpak AD® de 4 x 250 mm con EtOH al 15% en hexanos (con
dietilamina al 0,1%) a 1 ml/min indicó que el primer enantiómero en
eluir tiene T_{r} = 7,30 minutos y el segundo enantiómero tiene
T_{r} = 11,59 minutos. El primer enantiómero en eluir (que tiene
estereoquímica absoluta desconocida) se procesó más para
proporcionar la amina trans, que se incorporó a la síntesis de
12-2 siguiendo una ruta idéntica a la explicada en
el Esquema 10. Datos para 12-2: EMAR (EV) M+H
calculado para C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O_{2}: 446,2050.
Hallado: 446,2069. La estereoquímica absoluta en la piperidina de
los compuestos 12-2 y 12-3 no se ha
determinado y la estereoquímica indicada se ha asignado de manera
tentativa.
\vskip1.000000\baselineskip
Este compuesto se preparó de una manera idéntica
a la utilizada para 10-2, con la excepción de la
incorporación del segundo isómero de
"trans-2-3" en eluir de la
columna quiral. Datos para 12-3: EMAR (EV) M + H
calculado para C_{24}H_{26}F_{3}N_{3}O_{2}: 446,2050.
Hallado: 446,2068.
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Merck & Co., Inc.
\hskip1cm Coleman, Paul J.
\hskip1cm Cox, Christopher D.
\hskip1cm Garbaccio, Robert M.
\hskip1cm Hartman, George D.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> INHIBIDORES DE CINESINA MITÓTICA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 21481Y
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/495.637
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
15-08-2003
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/563.580
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
19-04-2004
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> FastSEQ para Windows Version 4.0
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 42
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia de Nucleótidos
Completamente Sintéticos
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcaacgatta atatggcgtc gcagccaaat tcgtctgcga ag
\hfill42
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
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<211> 60
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Secuencia de Nucleótidos
Completamente Sintéticos
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<400> 2
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcaacgctcg agtcagtgat gatggtggtg atgctgattc acttcaggct tattcaatat
\hfill60
\newpage
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<110> Merck & Co., Inc.
\hskip1cm Coleman, Paul J.
\hskip1cm Cox, Christopher D.
\hskip1cm Garbaccio, Robert M.
\hskip1cm Hartman, George D.
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<120> INHIBIDORES DE CINESINA MITÓTICA
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<130> 21481Y
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<150> 60/495.637
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15-08-2003
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<150> 60/563.580
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<151>
19-04-2004
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<170> FastSEQ PARA Windows Version 4.0
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<210> 1
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> C Secuencia de Nucleótidos
Completamente Sintéticos
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<210> 2
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<211> 60
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<212> ADN
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<223> Secuencia de Nucleótidos
Completamente Sintéticos
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<400> 2
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\hskip-.1em\dddseqskipgcaacgctcg agtcagtgat gatggtggtg atgctgattc acttcaggct tattcaatat
\hfill60
Claims (10)
1. El compuesto de Fórmula I:
o una sal o esteroisómero
farmacéuticamente aceptable del
mismo,
en la que:
R^{1} y R^{2} se seleccionan
independientemente de: H y
alquilo(C_{1}-C_{6}).
\vskip1.000000\baselineskip
2. El compuesto de Fórmula II:
o una sal o esteroisómero
farmacéuticamente aceptable del
mismo,
en la que:
R^{1} y R^{2} se seleccionan
independientemente de: H y
alquilo(C_{1}-C_{6}).
\vskip1.000000\baselineskip
3. Un compuesto seleccionado de:
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(2R,4R)-2-(fluorometil)-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(2S,4S)-2-(fluorometil)-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metil-1-oxidopiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-isopropilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4S)-3-fluoropiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida
o una de sus sales
farmacéuticamente
aceptable.
4. Un compuesto que es:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida,
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3S,4R)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida,
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida,
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(2R,4R)-2-(fluorometil)-1-metilpiperidin-4-il]-2-(hidroximetil)-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida,
(2S)-4-(2,5-Difluorofenil)-N-[(3R,4S)-3-fluoro-1-metilpiperidin-4-il]-N-metil-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxamida,
o una de sus sales
farmacéuticamente
aceptable.
5. El compuesto seleccionado de:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
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\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(Continuación)
\vskip1.000000\baselineskip
o una de sus sales o estereoisómero
farmacéuticamente
aceptable.
6. Una composición farmacéutica que está
comprendida por un compuesto según una cualquiera de las
Reivindicaciones 1 a 5 y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
7. La composición de la Reivindicación 6 que
además comprende un segundo compuesto seleccionado de:
- 1)
- un modulador de receptores de estrógenos,
- 2)
- un modulador de receptores de andrógenos,
- 3)
- un modulador de receptores de retinoides,
- 4)
- un agente citotóxico/citostático,
- 5)
- un agente antiproliferativo,
- 6)
- un inhibidor de la proteína preniltransferasa,
- 7)
- un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,
- 8)
- un inhibidor de la proteasa de VIH,
- 9)
- un inhibidor de la transcriptasa inversa,
- 10)
- un inhibidor de la angiogénesis, y
- 11)
- agonistas de PPAR-\gamma,
- 12)
- agonistas de PPAR-\delta,
- 13)
- un inhibidor de la proliferación y señalización de supervivencia celular,
- 14)
- un agente que interfiere con un control de ciclo celular, y
- 15)
- un agente inductor de la apoptosis.
8. La composición según la Reivindicación 7, en
la que el segundo compuesto es un inhibidor de la angiogénesis
seleccionado del grupo constituido por un inhibidor de la tirosina
cinasa, un inhibidor del factor de crecimiento derivado del
epidérmico, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de
fibroblastos, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de
plaquetas, un inhibidor de MMP, un bloqueador de integrina,
interferón-\alpha,
interleucina-12, polisulfato de pentosano, un
inhibidor de ciclooxigenasa, carboxiamidotriazol, combrestastatina
A-4, escualamina,
6-O-(cloroacetil-carbonil)-fumagillol,
talidomida, angiostatina, troponina-1, o un
anticuerpo contra VEGF.
9. La composición según la Reivindicación 6, que
además comprende un inhibidor de proteosomas, un inhibidor de la
aurora cinasa, un inhibidor de la Raf cinasa, un inhibidor de la
serina/treonina cinasa, o un inhibidor de otra cinesina mitótica
que no es KSP.
10. La composición de la Reivindicación 7, en la
que el segundo compuesto es un modulador de receptores de
estrógenos seleccionado de tamoxifeno y raloxifeno.
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