ES2333219T3 - Nuevos derivados de benzoimidazol utiles como agentes antiproliferativos. - Google Patents

Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo constituido por: (±)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; 1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; 1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriores.

Description

Nuevos derivados de benzoimidazol útiles como agentes antiproliferativos.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a nuevos derivados de bencimidazol que son útiles en el tratamiento del crecimiento celular anormal, tal como cáncer, en mamíferos. La presente invención también se refiere a un procedimiento de uso de dichos compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del crecimiento celular anormal en mamíferos, especialmente seres humanos, y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos.

Se sabe que una célula se puede convertir en cancerosa en virtud de la transformación de una porción de su ADN en un oncogen (es decir, un gen que, al activarse, produce la formación de células tumorales malignas). Muchos oncogenes codifican proteínas que son tirosina quinasas aberrantes capaces de causar la transformación celular. Como alternativa, la sobreexpresión de una tirosina quinasa normal protooncogénica puede también tener como resultado trastornos proliferativos que, en ocasiones, tienen como resultado un fenotipo maligno.

Las tirosina quinasas receptoras son enzimas que atraviesan la membrana celular y poseen un dominio de unión extracelular para factores de crecimiento tales como el factor de crecimiento epidérmico, un dominio transmembrana y una porción intracelular que funciona como una quinasa para fosforilar residuos de tirosina específicos en proteínas y, por tanto, para influir sobre la proliferación celular. Otras tirosina quinasas receptoras incluyen c-erb-2, c-met, tie-2, PDGFr, FGFr y VEFGR. Se sabe que tales quinasas con frecuencia se expresan de forma aberrante en los cánceres humanos habituales, tales como el cáncer de mama, el cáncer gastrointestinal tal como cáncer de colon, rectal o de estómago, leucemia y cáncer de ovarios, bronquial o pancreático. También se ha mostrado que el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), que posee actividad de tirosina quinasa, está mutado y/o sobreexpresado en muchos cánceres humanos, tales como tumores cerebrales, pulmonares, de células escamosas, de vejiga, gástricos, de mama, de cabeza y cuello, esofágicos, ginecológicos y tiroideos.

De acuerdo con lo expuesto, se ha reconocido que los inhibidores de las tirosina quinasas receptoras son útiles como inhibidores selectivos del crecimiento de células de cáncer de mama. Por ejemplo, la erbstatina, un inhibidor de la tirosina quinasa, atenúa de forma selectiva el crecimiento en ratones desnudos atímicos de un carcinoma de mama humano trasplantado que expresa la tirosina quinasa receptora (EGFR) del factor de crecimiento epidérmico, pero no tiene efecto sobre el crecimiento de otro carcinoma que no expresa el receptor del EGF. Por tanto, los compuestos de la presente invención, que son inhibidores selectivos de ciertas tirosina quinasas receptoras, en particular PDGFr, son útiles en el tratamiento del crecimiento celular anormal, en particular en el cáncer, en mamíferos.

También se ha mostrado que otros varios compuestos, tales como derivados de estireno, poseen propiedades inhibidoras de la tirosina quinasa. Más recientemente, cinco publicaciones de patente europea, a saber EP 0 566 226 A1 (publicada el 20 de octubre de 1993), el documento EO 0 602 851 A1 (publicado el 22 de junio de 1994), el documento EP 0 635 507 A1 (publicado el 25 de enero de 1995), el documento EP 0 635 498 A1 (publicado el 25 de enero de 1995) y el documento EP 0 520 722 A1 (publicado el 30 de diciembre de 1992) hacen referencia a que ciertos derivados bicíclicos, en particular derivados de quinazolina, poseen propiedades anti-cancerosas que son el resultado de sus propiedades inhibidoras de la tirosina quinasa. Asimismo, la solicitud de patente internacional WO 92/20642 (publicada el 26 de noviembre de 1992) hace referencia a ciertos compuestos arilo y heteroarilo bis-mono y bicíclico como inhibidores de la tirosina quinasa que son útiles en la inhibición de la proliferación celular anormal. Las solicitudes de patente internacional WO 96/16960 (publicada el 6 de junio de 1996), WO 96/09294 (publicada el 6 de marzo de 1996), WO 97/30034 (publicada el 21 de agosto de 1997), WO 98/02434 (publicada el 22 de enero de 1998), WO 98/02437 (publicada el 22 de enero de 1998) y WO 98/02438 (publicada el 22 de enero de 1998), también hacen referencia a derivados heteroaromáticos bicíclicos sustituidos como inhibidores de la tirosina quinasa que son útiles para el mismo fin. Asimismo, véase el documento WO 99/16755, J. Med. Chem. 1998, 41, 5457-5465 y J. Med. Chem. 1999, 42, 2373-2382. El documento WO 01/40217 se refiere a derivados de benzoimidazol útiles como agentes antiproliferativos.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto seleccionado del grupo constituido por:

(\pm)-1-{1-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriores.

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En una forma de realización preferida se selecciona un compuesto del grupo constituido por:

(+)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

(-)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriores.

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En otra forma de realización preferida, el compuesto se selecciona del grupo constituido por 1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto anterior.

En otra forma de realización preferida, el compuesto se selecciona del grupo constituido por 1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto anterior.

En otra forma de realización preferida, el compuesto de la presente invención es la sal bencenosulfonato de cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente.

La invención también se refiere al uso de los compuestos mencionados en lo que antecede en un procedimiento para el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad de un compuesto de fórmula 1 que es eficaz en el tratamiento del crecimiento celular anormal.

En una forma de realización preferida de la presente invención, el crecimiento celular anormal es cáncer.

En una forma de realización de la presente invención, el cáncer se selecciona de cáncer de pulmón, cáncer de huesos, cáncer pancreático, cáncer gástrico, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovarios, cáncer ginecológico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de cerviz, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratifoidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de células escamosas, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, linfomas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o el uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasias del sistema nervioso central (SNC), linfoma primario del SNC, tumores del eje espinal, adenoma cerebral, de la hipófisis, o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores.

En una forma de realización preferida de la presente invención, el cáncer se selecciona del grupo constituido por cáncer de células escamosas, de vejiga, gástrico, pancreático, de mama, de cabeza, de cuello, esofágico, de próstata, colorrectal, de pulmón, renal, de riñón, de ovarios, ginecológico y de tiroides.

En una forma de realización preferida de la presente invención, el cáncer se selecciona del grupo constituido por cáncer de próstata, de mama, de pulmón, de colon y de ovario.

En otra forma de realización preferida de la presente invención, el cáncer se selecciona del grupo constituido por cáncer de próstata, de mama y de pulmón.

En una forma de realización más el cáncer de mama es cáncer de mama metastásico.

En una forma de realización más el cáncer de pulmón es cáncer de mama de células no pequeñas.

En otra forma de realización preferida de la presente invención, el crecimiento celular anormal es no canceroso.

En una forma de realización preferida de la presente invención, el crecimiento celular anormal no canceroso es hiperplasia benigna de la piel o la próstata.

En una forma de realización, la presente invención se refiere al uso de los compuestos anteriores en un procedimiento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula 1, o una sal, profármaco o hidrato farmacéuticamente aceptable en combinación con un agente antitumoral seleccionado del grupo constituido por inhibidores de la mitosis, agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos intercalantes, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de la topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, anti-hormonas, inhibidores de la angiogénesis y anti-andrógenos.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero, que comprende una cantidad de un compuesto como se ha definido en lo que antecede, que es eficaz en el tratamiento del crecimiento celular anormal, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una forma de realización de la presente invención, la composición farmacéutica de fórmula 1 es el uso para tratar el crecimiento celular anormal, tal como cáncer.

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La invención además se refiere a un procedimiento para preparar un compuesto como se ha definido en lo que antecede, o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende tratar la correspondiente amina protegida con N-BoC con un ácido.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo en un mamífero, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una forma de realización, dicha composición farmacéutica es para el tratamiento del cáncer, tal como cáncer de cerebro, de pulmón, de células escamosas, de vejiga, gástrico, pancreático, de mama, de cabeza, de cuello, renal, de riñón, de ovarios, de próstata, colorrectal, esofágico, testicular, ginecológico o de tiroides. En otra forma de realización, dicha composición farmacéutica es para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativa no cancerosa tal como hiperplasia benigna de la piel (p. ej., soriasis), reestenosis o de próstata (p. ej., hipertrofia prostática benigna (HPB)).

La invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de pancreatitis o de enfermedad renal (incluida glomerulonefritis proliferativa y enfermedad renal inducida por diabetes) en un mamífero, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica para la prevención de la implantación de blastocitos en un mamífero, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica para tratar una enfermedad relacionada con la vasculogénesis, reestenosis, aterosclerosis o angiogénesis en un mamífero, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una forma de realización, dicha composición farmacéutica es para tratar una enfermedad seleccionada del grupo constituido por angiogénesis tumoral, enfermedad inflamatoria crónica, tal como artritis reumatoide, aterosclerosis, enfermedades de la piel tal como soriasis, eccema y esclerodermia, diabetes, retinopatía diabética, retinopatía del prematuro, degeneración macular relacionada con la edad, hemangioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi y cáncer de ovarios, mama, pulmón, pancreático, de próstata, de colon y epidermoide.

La invención también se refiere a un procedimiento para tratar un trastorno hiperproliferativo en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo. En una forma de realización, dicho procedimiento se refiere al tratamiento del cáncer, tal como cáncer cerebral, de células escamosas; de vejiga, gástrico, pancreático, de mama, de cabeza, de cuello, esofágico, de próstata, colorrectal, de pulmón, renal, de riñón, de ovarios, testicular, ginecológico o de tiroides. En otra forma de realización, dicho procedimiento se refiere al tratamiento de un trastorno hiperproliferativo no canceroso tal como hiperplasia benigna de la piel (p. ej., soriasis), reestenosis o de próstata (p. ej., hipertrofia prostática benigna (HPB)).

La invención también se refiere a un procedimiento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente antitumoral seleccionado del grupo constituido por inhibidores de la mitosis, agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos intercalantes, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de la topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, anti-hormonas, inhibidores de la angiogénesis y anti-andrógenos.

La invención también se refiere a un procedimiento para tratar la pancreatitis o la enfermedad renal en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La invención también se refiere a un procedimiento para prevenir la implantación de blastocitos en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La invención también se refiere a un procedimiento para tratar enfermedades relacionadas con la vasculogénesis o la angiogénesis en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo. En una forma de realización, dicho procedimiento es para tratar una enfermedad seleccionada del grupo constituido por angiogénesis tumoral, enfermedad inflamatoria crónica, tal como artritis reumatoide, aterosclerosis, enfermedades de la piel tal como soriasis, eccema y esclerodermia, diabetes, retinopatía diabética, retinopatía del prematuro, degeneración macular relacionada con la edad, hemangioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi y cáncer de ovarios, mama, pulmón, pancreático, de próstata, de colon y epidermoide.

Los pacientes que pueden tratarse con un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, y las sales e hidratos farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos, de acuerdo con los procedimientos de la presente invención incluyen, por ejemplo, pacientes a los que se les ha diagnosticado soriasis, reestenosis, aterosclerosis, HPB, cáncer de pulmón, cáncer de huesos, LMMC, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovarios, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, testicular, tumores ginecológicos (p. ej., sarcomas uterinos, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de la cérvix, carcinoma de la vagina o carcinoma de la vulva), enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino (p. ej., cáncer de la glándula tiroides, de la glándula paratiroidea, de las glándulas suprarrenales), sarcoma de tejidos blandos, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, tumores sólidos de la infancia, linfomas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o el uréter (p. ej., carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal), o neoplasias del sistema nervioso central (p. ej., linfoma primario del SNC, tumores del eje espinal, gliomas de células madre en el cerebro o adenomas pituitarios).

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento celular anormal en un mamífero, que comprende una cantidad de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con una cantidad de un quimioterapéutico, en la que las cantidades del compuesto, sal, solvato o profármaco y del agente quimioterapéutico son eficaces juntas en la inhibición del crecimiento celular anormal. Actualmente se conocen muchos quimioterapéuticos en la técnica. en una forma de realización, el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo constituido por inhibidores de la mitosis, agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos intercalantes, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de la topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, anti-hormonas, por ejemplo anti-andrógenos.

La presente invención además se refiere a un procedimiento para inhibir el crecimiento celular anormal en un mamífero o tratar un trastorno hiperproliferativo, en el que el procedimiento comprende administrar al mamífero una cantidad de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con radioterapia, en el que la cantidad del compuesto, sal, solvato o profármaco está en combinación con la radioterapia eficaz en la inhibición del crecimiento celular anormal o en el tratamiento del trastorno hiperproliferativo en el mamífero. En la técnica se conocen técnicas para administrar radioterapia, y estas técnicas se pueden usar en la terapia de combinación descrita en la presente memoria descriptiva. La administración del compuesto de la invención en esta terapia de combinación se puede determinar como se ha descrito en la presente memoria descriptiva.

Se cree que los compuestos de la invención pueden convertir las células normales en más sensibles al tratamiento con radiación con el fin de matar y/o inhibir el crecimiento de dichas células. De acuerdo con esto, la presente invención además se refiere a un procedimiento para sensibilizar células anormales en un mamífero al tratamiento con radiación, que comprende administrar al mamífero una cantidad de un compuesto como se ha definido en lo que antecede o una sal o solvato farmacéuticamente del mismo, en la que la cantidad es eficaz en la sensibilización de celular anormales al tratamiento con radiación. La cantidad de compuesto, sal o solvato en este procedimiento se puede determinar de acuerdo con los medios para determinar cantidades eficaces de dichos compuestos descritos en la presente memoria descriptiva.

La presente invención también se refiere a un procedimiento y a una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento celular anormal en un mamífero, que comprende una cantidad de un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un derivado del mismo marcado con isótopos, y una cantidad de una o más sustancias seleccionada de agentes anti-angiogénesis, inhibidores de la transducción de seña y agentes antiproliferativos.

Se pueden usar agentes anti-angiogénesis, tales como inhibidores de la MMP-2 (metaloproteinasa 2 de la matriz), e inhibidores de la COX-II (ciclooxigenasa II) junto con un compuesto de la invención y composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria descriptiva. Ejemplos de inhibidores de la COX-II útiles incluyen CELEBREX^{TM} (alecoxib), valdecoxib y rofecoxib. Ejemplos de inhibidores útiles de la metaloproteinasa de la matriz se describen en el documento WO 96/33172 (publicado el 24 de octubre de 1996), el documento WO 96/27583 (publicado el 7 de marzo de 1996), la solicitud de patente europea Nº 97304971.1 (presentada el 8 de julio de 1997), la solicitud de patente europea Nº 99308617-2 (presentada el 29 de octubre de 1999), el documento 98/07697 (publicado el 26 de febrero de 1998), el documento WO 98/03516 (publicado el 29 de enero de 1998), el documento WO 98/34918 (publicado el 13 de agosto de 1998), el documento WO 98/34915 (publicado el 13 de agosto de 1998), el documento WO 98/33768 (publicado el 6 de agosto de 1998), el documento WO 98/30566 (publicado el 16 de julio de 1998), la solicitud de patente europea Nº 606.046 (publicada el 13 de julio de 1994), la solicitud de patente europea 931.788 (publicada el (presentada el 28 de julio de 1999), el documento WO 90/05719 (publicado el 31 de mayo de 1990), el documento WO 99/52910 (publicado el 21 de octubre de 1999), el documento WO 99/52889 (publicado el 21 de octubre de 1999), el documento WO 99/29667 (publicado el 17 de junio de 1999), la solicitud de patente internacional PCT Nº PCT/IB98/01113 (presentada el 21 de julio de 1998), la solicitud de patente europea Nº 99302232.1 (presentada el 25 de marzo de 1999), la solicitud de patente del Reino Unido 9912961.1 (presentada el 3 de junio de 1999), la solicitud provisional de EE.UU. Nº 60/148.464 (presentada el 12 de agosto de 1999), la patente de EE.UU. 5.863.949 (expedida el 26 de enero de 1999), la patente de EE.UU. 5.861.510 (expedida el 19 de enero de 1999) y la publicación de patente europea 780.386 (publicada el 25 de junio de 1997). Los inhibidores de MMP-2 y MMP-9 preferidos son aquéllos que tienen poca o ninguna actividad inhibidora de la MMP-1. Más preferidos son aquéllos que inhiben de forma selectiva la MMP-2 y/o la MMP-9 respecto a las otras metaloproteinasas de la matriz (es decir, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 y MMP-13).

Algunos ejemplos específicos de inhibidores útiles de MMP en la presente invención son AG-3340, RO-32-355, RS 13-0830 y los compuestos enumerados en la lista siguiente:

Ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclopentil)-amino]-propiónico;

Hidroxiamida de ácido 3-exo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octano-3-carboxílico;

Hidroxiamida de ácido (2R, 3R)-1-[4-(2-cloro-4-fluoro-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-hidroxi-3-metilpiperidina-2-carboxílico;

Hidroxiamida de ácido 4-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-piran-4-carboxílico;

Ácido 4-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclobutil)-amino]-propiónico;

Hidroxiamida de ácido 4-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-piran-4-carboxílico;

Hidroxiamida de ácido (R) 3-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-piran-3-carboxílico;

Hidroxiamida de ácido (2R, 3R)-1-[4-(4-fluoro-2-metil-benciloxi)-bencenosulfonil]-3-hidroxi-3-metilpiperidina-2-carboxílico;

Ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-1-metil-etil)-amino]-propiónico;

Ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonil]-(4-hidroxicarbamoil-tetrahidro-piran-4-il)-amino]-propiónico;

Hidroxiamida de 3-exo-3-[4-(4-cloro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octano-3-carboxílico;

Hidroxiamida de 3-endo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octano-3-carboxílico; y

Hidroxiamida de ácido (R) 3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-bencenosulfonilamino]-tetrahidro-furan-3-carboxílico;

y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos.

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Otros agentes anti-angiogénesis, incluidos otros inhibidores de la COX-II y otros inhibidores de la MMP, también se pueden usar en la presente invención.

Un compuesto de la invención también se puede usar con inhibidores de la transducción de señal, tal como agentes que pueden inhibir respuestas del EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico), tales como anticuerpos frente al EGFR, anticuerpos frente al EGF y moléculas que son inhibidores del EGFR; inhibidores del VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular), tales como receptores del VEGF y moléculas que pueden inhibir el VEGF; e inhibidores del receptor de erbB2, tales como moléculas orgánicas o anticuerpos que se unen al receptor del erbB2, por ejemplo HERCEPTIN^{TM} (Genentech, Inc. de South San Francisco, California, EE.UU.).

Inhibidores del EGFR se describen en, por ejemplo, el documento WO 95/19970 (publicado el 27 de julio de 1995), el documento 98/14451 (publicado el 9 de abril de 1998), el documento 98/02434 (publicado el 22 de enero de 1998) y la patente de EE.UU. 5.747.498 (expedida el 5 de mayo de 1998), y dichas sustancias se pueden usar en la presente invención tal como se describen en la presente memoria descriptiva. Entre los agentes inhibidores del EGFR se incluyen los anticuerpos monoclonales C225, 22MAc anti-EGFR (ImClone Systems Incorporated of New York, New York, EE.UU.) y ABX-EGF (anticuerpo de Abgenix) los compuestos ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc. de Annandale, New Jersey, EE.UU.) y OLX-103 (Merck & Co. de Whitehouse Station, New Jersey, EE.UU.), VRCTC-310 (Ventech Research) y toxina de fusión con EGF (Seragen Inc. de Hopkinton, Massachussets). Estos y otros agentes inhibidores del EGFR se pueden usar en la presente invención.

Asimismo, se pueden combinar con el compuesto de la presente invención inhibidores del VEGF, por ejemplo SU-5416 y SU-6668 (Sugen Inc. de South San Francisco, California, EE.UU.). Inhibidores del VEGF se describen en, por ejemplo, el documento 99/24440 (publicado el 20 de mayo de 1999), la solicitud de PCT internacional PCT/IB99/00797 (presentada el 3 de mayo de 1999), el documento WO 95/21613 (publicado el 17 de agosto de 1995), el documento WO 99/61422 (publicado el 2 de diciembre de 1999), la patente de EE.UU. 5.834.504 (expedida el 10 de noviembre de 1998), el documento WO 98/50356 (publicado el 12 de noviembre de 1998), la patente de EE.UU. 5.883.113 (expedida el 16 de marzo de 1999), la patente de EE.UU. 5.886.020 (expedida el 23 de marzo de 1999), la patente de EE.UU. 5.792.783 (expedida el 11 de agosto de 1998), el documento WO 99/10349 (publicado el 4 de marzo de 1999), el documento WO 97/32856 (publicado el 12 de septiembre de 1997), el documento 97/22596 (publicado el 26 de junio de 1997), el documento WO 98/54093 (publicado el 3 de diciembre de 1998), el documento WO 98/02438 (publicado el 22 de enero de 1998), el documento WO 99/16755 (publicado el 8 de abril de 1999) y el documento WO 98/02437 (publicado el 22 de enero de 1998). Otros ejemplos de algunos inhibidores específicos del VEGF útiles en la presente invención son IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Washington, EE.UU.); IMC-1C11 Imclone antibody, anticuerpo monoclonal anti-VEGF de Genentech Inc. de South San Francisco, California; y angioenzima, una ribozima sintética de Ribozyme (Boulder, Colorad) y Chiron (Emeryville, California). Estos y otros inhibidores de VEGF se pueden usar en la presente invención tal como se describe en la presente memoria descriptiva.

Además, inhibidores del receptor ErbB2, tal como GW-282974 (Glaxo Wellcome plc) y los anticuerpos monoclonales AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. de The Woodlands, Texas, EE.UU.) y 2B-1 (Chiron) pueden combinarse con el compuesto de la invención, por ejemplo los indicados en el documento WO 98/02434 (publicado el 22 de enero de 1998), el documento WO 99/35146 (publicado el 15 de julio de 1999), El documento WO 99/35132 (publicado el 15 de julio de 1999), el documento WO 98/02437 (publicado el 22 de enero de 1998), el documento WO 97/13760 (publicado el 17 de abril de 1997), el documento WO 95/19970 (publicado el 27 de julio de 1995), la patente de EE.UU. 5.587.458 (expedida el 24 de diciembre de 1996) y la patente de EE.UU. 5.877.305 (expedida el 2 de marzo de 1999). Inhibidores del receptor ErbB2 útiles en la presente invención también se describen en la solicitud provisional de EE.UU. Nº 60/117.341, presentada el 27 de enero de 1999, y en la solicitud provisional de EE.UU. Nº 60/117.346 presentada el 27 de enero de 1999. Los compuestos y sustancias inhibidoras del receptor erbB2 descritos en las solicitud PCT, patentes de EE.UU. y solicitudes provisionales de EE.UU. mencionados en lo que antecede, así como otros compuestos y sustancias que inhiben el receptor erbB2, se pueden usar con el compuesto de la presente invención de acuerdo con la presente invención.

El compuesto de la invención también se puede usar con otros agentes útiles en el tratamiento del crecimiento celular anormal o del cáncer, incluidos, entre otros, agentes capaces de potenciar las respuestas inmunitarias anti-tumorales, tales como anticuerpos CTLA4 (antígeno linfocitario citotóxico 4) y otros agentes capaces de bloquear el CTLA4; y agentes antiproliferativos tales como inhibidores de la farnesilproteína transferasa, e inhibidores \alphav\beta3, tales como el anticuerpo avp3 Vitaxin, e inhibidores \alphav\beta5 y similares. Entre los anticuerpos de CTLA4 específicos que se pueden usar en la presente invención se incluyen los descritos en la solicitud provisional de EE.UU. 60/113.647 (presentada el 23 de diciembre de 1998), no obstante en la presente invención se pueden usar otros anticuerpos de CTLA4.

Los compuestos de la invención y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables además pueden usarse de forma independiente en un tratamiento neoadyuvante/adyuvante paliativo en el alivio de los síntomas asociados con las enfermedades enumeradas en la presente memoria descriptiva, así como los síntomas asociados con el crecimiento celular anormal. Tal tratamiento puede ser una monoterapia o puede ser una combinación de quimioterapia y/o inmunoterapia.

En esta solicitud, los términos "crecimiento celular anormal" y "trastorno hiperproliferativo" se usan de forma intercambiable.

"Crecimiento celular anormal", como se usa en la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario, se refiere al crecimiento celular que es independiente de los mecanismos reguladores normales (p. ej., pérdida de inhibición por contacto). Esto incluye el crecimiento anormal de: (1) las células tumorales (tumores) que proliferando mediante la expresión de una tirosina quinasa mutada o la sobreexpresión de una tirosina quinasa receptora; (2) células benignas y malignas de otras enfermedades proliferativas en las que se produce activación de tirosina quinasa aberrante; (4) cualquier tumor que prolifera a través de tirosina quinasas receptoras; (5) cualquier tumor que prolifera mediante la activación de serina/treonina quinasa aberrantes; y (6) células benignas y malignas de otras enfermedades proliferativas en las que se produce activación de serina/treonina quinasa aberrante.

El término "tratar", como se usa en la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario, significa invertir, aliviar, inhibir el progreso, o prevenir el trastorno o afección al que se aplica dicho término, o uno o más síntomas de dicho trastorno o afección. El término "tratamiento", como se usa en la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario, incluye sales de grupos ácidos o básicos que pueden estar presentes en los compuestos de la invención. Los compuestos de la invención que son de naturaleza básica puede formar una amplia variedad de sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Los ácidos que se pueden usar para preparar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos básicos de la invención son aquéllos que forman sales de adición de ácido no tóxicas, es decir sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como las sales de acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato cálcico, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, etilsuccinato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato y valerato. Dado que un único compuesto de la presente invención puede incluir más de un resto ácido o básico, los compuestos de la presente invención pueden incluir mono, di o tris-sales en un único compuesto.

Los compuestos de la presente invención que son de naturaleza ácida pueden formar sales de bases con varios cationes farmacológicamente aceptables. Entre los ejemplos de dichas sales se incluyen las sales de metal alcalino o de metal alcalino térreo y, particularmente, las sales de calcio, magnesio, sodio y potasio de los compuestos de la presente invención.

Los compuestos de acuerdo con la invención tienen uno o más centros asimétricos y, en consecuencia, pueden existir tanto como enantiómeros como en forma de diaestereoisómeros. Debe entenderse que dichos isómeros y mezclas de los mismos quedan abarcados dentro del alcance de la presente invención.

Ciertos compuestos de la invención pueden tener centros asimétricos y, por tanto, existir en diferentes formas enantioméricas. Todos los isómeros y estereoisómeros ópticos de los compuestos de la invención, y sus mezclas, se consideran dentro del alcance de la invención. Con respecto a los compuestos de la invención, la invención incluye el uso de un racemato, una o más formas enantioméricas, una o más formas diaestereoméricas, y sus mezclas. Los compuestos de la invención también pueden existir como tautómeros. La presente invención se refiere al uso de todos estos tautómeros y sus mezclas.

La invención objeto también incluye compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los compuestos de la invención, pero por el hecho de que uno o más átomos están sustituidos por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente de la masa atómica o número de masa que normalmente se encuentra en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tal como 2H, ^{3}H, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{18}O, ^{17}O, ^{31}P, ^{32}P, ^{35}S, ^{18}F y ^{38}Cl, respectivamente. Compuestos de la presente invención, y sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos, que contienen los isótopos y/u otros isótopos de otros átomos, están dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo aquéllos en los que se han incorporado isótopos radiactivos tales como ^{3}H, y ^{14}C, son útiles en los ensayos de distribución tisular de fármacos y/o sustratos. Particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detectabilidad son los isótopos tritiados, es decir ^{3}H, y carbono 14, es decir ^{14}C. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir ^{2}H, puede conferir ciertas ventajas terapéuticas que resultan de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo la mayor semivida in vivo o menores necesidades de dosis y, por tanto, pueden preferirse en algunas circunstancias. Generalmente, los compuestos de la presente invención marcados isotópicamente pueden prepararse realizando los procedimientos divulgados en los Esquemas y/o en los Ejemplos y Preparaciones que se indican más adelante, mediante la sustitución de un reactivo isotópicamente marcado y de fácil disponibilidad por un reactivo no marcado isotópicamente.

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Esquema 1

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1

Descripción detallada de la invención

Procedimientos de síntesis generales a los que se puede hacer referencia para preparar los compuestos de la presente invención se proporcionan en la patente de EE.UU. 5.990.146 (expedida el 23 de noviembre de 1999) (Wamer-Lambert Co.) y la solicitud de PCT publicada números WO 99/16755 (publicada el 8 de abril de 1999) (Merck & Co.) y WO 01/40217 (publicada el 7 de julio de 2001) (Pfizer, Inc.).

Como alternativa, los compuestos de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con el esquema 1 a partir de 2-cloro-8-benciloxiquinolina (I) y un 2-amino-nitrobenceno adecuado (J) mediante el procedimiento esbozado en el Esquema 1. R^{1}, R^{2} y R^{3} son hidrógeno, y R4 es tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo o 3-metiloxietanilmetilo. La aminación catalizada por paladio de I y J proporciona quinolina K. La reducción del grupo nitro y la eliminación del grupo bencilo mediante hidrogenación catalítica proporciona el benciimidazol L, que después se puede transformar en el correspondiente triflato M. Una segunda aminación catalizada con paladio con amina N proporciona piperidinilquinolina O y la posterior eliminación del grupo t-butiloxi-carbonilo proporciona el producto deseado.

Los compuestos de la presente invención pueden tener átomos de carbono asimétricos. Las mezclas diaestereoméricas pueden separarse en sus diaestereómeros individuales sobre la base de sus diferencias físicoquímicas mediante procedimientos conocidos para los expertos en la técnica, mediante, por ejemplo, cromatografía o cristalización fraccional. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo las mezclas enantioméricas en una mezcla diaestereomérica mediante la reacción con un compuesto óptimamente activo (p. ej., alcohol), separando los diaestereómeros y convirtiendo (p. ej., mediante hidrólisis) los diaestereómeros individuales en los correspondientes enantiómeros puros. Todos estos isómeros, incluidas las mezclas diaestereoméricas y los enantiómeros puros, se consideran parte de la invención.

Los compuestos de la invención son de naturaleza básica y pueden formar una amplia variedad de diferentes sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Aunque dichas sales deben ser farmacéuticamente aceptables para administrar a animales, a menudo es deseable en la práctica aislar inicialmente el compuesto de la invención a partir de la mezcla de reacción como una sal farmacéuticamente inaceptable y, después, simplemente convertir esta última en el compuesto de base libre mediante tratamiento con un reactivo alcalino y, posteriormente, convertir la última base libre en una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido de los compuestos básicos de la presente invención se preparan fácilmente mediante tratamiento del compuesto básico con una cantidad sustancialmente equivalente del ácido orgánico o mineral escogido en un medio disolvente acuoso o en un disolvente orgánico adecuado, tal como metanol o etanol. Tas la cuidadosa evaporación del disolvente, la sal sólida deseada se obtiene fácilmente. La sal ácida deseada también se puede precipitar a partir de una solución de la base libre en un disolvente orgánico mediante la adición a la solución de un ácido mineral u orgánico adecuado.

La actividad de los compuestos de la invención puede determinarse mediante el siguiente procedimiento.

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Método general ELISA PGT Quinasa

Se usan los siguientes reactivos y soluciones madre:

Adenosina trifosfato (ATP)

Sigma, cat. nº A-2383

Seroalbúmina bovina (BSA)

Sigma, cat nº A-3294

PBS de Dulbecco (dPBS)

Gibco-BRL, cat nº 14190-136

Placas MaxiSorp

Nunc, cat nº 439454

MgCl_{2}

Sigma, cat. nº M-1028

Poli-Glu-Tyr (PGT)

Sigma, cat. nº P-0275

TMB Micowell Substrate

Klrkegaard y Perry, cat. nº 50-76-05

Tween 20

Sigma cat. Nº p-1379

Anticuerpo HRP-PY59

OSI Pharmaceuticals, Inc.

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Tampón de fosforilación (TF): HEPES 50 mM, pH 7,3, NaCl 125 mM, MgCl_{2} 24 mM;

Tampón de lavado (TL): dPBS + 0,1% Tween 20 (polioxietilensorbitano); y

Tampón de bloqueo: 3% BSA, 0,05% Tween 20 en dPBS

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Procedimiento de ensayo

(a)

Para el revestimiento de placas, llenar una placa Nunc MaxiSorp con 100 \mul por pocillo de Poly-Glu-Tyr (PGT) diluido en PBS (varias concentraciones). Después, la placa se incuba durante la noche a 37ºC. A continuación, se elimina el sobrenadante PGT y las placas se lavan 3X con tampón de lavado.

(b)

Después, la enzima PDGF se diluye en TF hasta una concentración adecuada y se añaden 25 \mul de esta solución madre por pocillo.

(c)

Después, el ATP se diluye (de 20 mM madre) hasta una concentración adecuada (0,5 nM-2 \muM) con TF. La reacción de fosforilación comienza mediante la adición de 25 \mul de la solución de ATP a cada pocillo de la placa de ensayo. La incubación continúa durante aproximadamente 10 minutos, con agitación a temperatura ambiente.

(d)

La reacción se cesa mediante aspiración de la mezcla de reacción. Después, la placa se lava 4X con TL.

(e)

El anticuerpo HRP-PY54 se diluye hasta una concentración adecuada en tampón de bloqueo. Después, se añaden 50 \mul de esta solución por pocillo, seguido por incubación 25-35 minutos a temperatura ambiente. La solución que contiene anticuerpos se elimina mediante aspiración y la placa se lava de nuevo 4C con TL.

(f)

La extensión de la reacción se determina mediante medición de la absorbancia de la luz a 450 nm. En primer lugar, el color se desarrolla mediante la adición de solución TMB, 50 \mul por pocillo y la reacción se deja progresar hasta que los pocillos con señales positivas alcanzan aproximadamente 0,6-1,2 DO450 unidades. Después, se detiene el desarrollo del color mediante la adición de 50 \mul por pocillo de H_{2}SO_{4} 0,09M. Los controles básicos son pocillos son PGT, pero con todos los demás componentes incluidos. Como se ha mencionado en lo que antecede, la señal preferida está, generalmente, en el intervalo de 0,6-1,2 unidades DO, en esencialmente ausencia de fondo.

La actividad in vitro de los compuestos de la presente invención en la inhibición del receptor PDGF puede determinarse mediante el siguiente procedimiento.

La inhibición de la actividad tirosina quinasa puede medirse usando una enzima recombinante en un ensayo que mide la capacidad de los compuestos para inhibir la fosforilación del sustrato exógeno, polyGluTyr (PGT, Sigma^{TM}, 4:1). El dominio citoplasmático del receptor PDGF\beta humano (aminoácidos 559-1106) (Ishikawa, F. y col. Nature 338: 557-562, 1989) se expresa en las células de insecto Sf9 como una proteína de fusión-glutatión-S-transferasa (GST) usando el sistema de expresión de baculovirus. La proteína se purifica después a partir de lisados de estas células usando columnas de afinidad en glutatión agarosa.

El ensayo enzimático se realiza en placas de 96 pocillos que están revestidos con el sustrato PGT (0,625 \mug de PGT por pocillo). Los compuestos de prueba se diluyen en dimetilsulfóxido (DMSO) y después se añaden a las placas con PGT de modo que la concentración final de DMSO en el ensayo es de 1,6% (v/v). La enzima recombinante se diluye en tampón de fosforilación (Hepes 50 mM, pH 7,3, NaCl 125 mM, MgCl_{2} 24 mM). La reacción se inicia mediante la adición de ATP hasta una concentración final de 10 \muM. Tas una incubación de 10 minutos a temperatura ambiente con agitación, la reacción se aspira y las placas se lavan con tampón de lavado (que contiene PBS, 0,1% de Tween-20). La cantidad de PGT fosforilado se cuantifica mediante incubación con un anticuerpo PY-54 conjugado con peroxidasa de rábano (HRP) (Transduction Labs), y se desarrolla con peroxidasa TMB (YMB es 3,3',5,5'-tetrametilbencidina) y detección en un lector de microplacas BloRad^{TM} a 450 nM. La inhibición de la actividad enzimática quinasa por el compuesto de prueba se detecta en forma de una reducción de la absorbancia, y la concentración del compuesto que se requiere para inhibir la señal en un 50% (en las circunstancias del ensayo) se indica como el valor de CI_{50} para el compuesto de prueba.

Para medir la capacidad de los compuestos para inhibir la actividad tirosina quinasa de PDGFR\beta para la proteína de longitud completa que existe en un contexto celular; se pueden usar células endoteliales aórticas porcinas (PAE) transfeccionadas con el PDGFR\beta humano (Westermark, Bengt. y col., PNAS 87, pág. 128-132, 1990). Las células se siembran en placas y se dejan fijarse en placas de 96 pocillos en el mismo medio (F12 de Ham) con 10% de FBS (suero bovino fetal) durante 6-8 horas. Las células se lavan, se vuelven a alimentar con medio sin suero y se dejan incubar durante la noche. Inmediatamente antes de introducir la dosis del compuesto, se vuelve a alimentar a las células con el medio sin suero. Los compuestos de prueba, disueltos en DMSO, se diluyen en el medio (concentración final de DMSO 0,5% (v/v)). Al final de una incubación de 10 minutos se añade PDFG-BB (100 ng/ml final) al medio para una incubación de 8 minutos. Las células se lavan con solución salina tamponada con Hepes (HBSS) y se lisan en 50 \mul de tampón HNTG (Hepes 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, 0,2% Triton^{TM} X-100, 10% de glicerol, más PMSF 0,2 mM (fluoruro de fenilmetilsulfonilo), 1 \mug/ml de pepstatina, 1 \mug/ml de leupeptina, 1 \mug/ml de aprotonina, pirofosfato de sodio 2 mM, ortovanadato de sodio 2 mM) y después se diluyen con 50 \mul de tampón de dilución HG (Hepes 20 mM, pH 7,5, 10% de glicerol, PMSF 0,2 mM (fluoruro de fenilmetilsulfonilo), 1 \mug/ml de pepstatina, 1 \mug/ml de leupeptina, 1 \mug/ml de aprotonina, pirofosfato de sodio 2 mM, ortovanadato de sodio 2 mM). La extensión de la fosforilación del PDGFR\beta se mide usando un ensayo ELISA. Las placas de 96 pocillos revestidas con proteína A se bloquean con Superblock (Pierce) y se revisten con 0,5 \mug por pocillo de anticuerpo anti-PDGFR\beta P20 (Santa Cruz, número de catálogo SC-339).

Todo el anticuerpo que no se haya unido se lava de las placas antes de la adición del lisado celular. Tras una incubación de los lisados (50 \mul) de 2 horas a temperatura ambiente con el anticuerpo del PDGFR\beta, la fosfotirosina asociada con PDGFR\beta se cuantifica mediante desarrollo con el anticuerpo PY-54 conjugado con HRP, y TMB, como se ha descrito en lo que antecede. La capacidad de los compuestos para inhibir la reacción de autofosforilación estimulada con PDGF-BB en un 50% en las condiciones usadas, respecto a los controles estimulados con PDGF-BB, se indica como el valor CI_{50} para el compuesto de prueba. Los compuestos de la presente invención, incluidos los ejemplos enumerados más adelante, generalmente tienen valores de CI_{50} usando el procedimiento anterior que entran dentro del intervalo siguiente: 1-1000 nM.

La actividad in vitro de los compuestos de la presente invención en la inhibición del receptor de KDR/VEGF puede determinarse mediante el procedimiento siguiente.

La capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir la actividad tirosina quinasa puede medirse usando una enzima recombinante en un ensayo que mide la capacidad de los compuestos para inhibir la fosforilación del sustrato exógeno, polyGluTyr (PGT, Sigma^{TM}, 4:1). El dominio quinasa del receptor de KDR/VEGF humano (aminoácidos 805-1350) se expresa en células de insecto Sf9 en forma de proteína de fusión glutatión-S-transferasa (GST) usando el sistema de expresión de baculovirus. La proteína se purifica a partir de los lisados de estas células usando columnas de afinidad de glutatión agarosa. El ensayo enzimático se realiza en placas de 96 pocillos que están revestidas con el sustrato PGT (0,625 \mug de PGT por pocillo). Los compuestos de prueba se diluyen en dimetilsulfóxido (DMSO) y después se añaden a las placas con PGT de modo que la concentración final de DMSO en el ensayo es de 1,6% (v/v). La enzima recombinante se diluye en tampón de fosforilación (Hepes 50 mM, pH 7,5, NaCl 125 mM, MgCl_{2} 24 mM). La reacción se inicia mediante la adición de ATP hasta una concentración final de 10 \muM. Tras una incubación de 30 minutos a temperatura ambiente con agitación, la reacción se aspira y las placas se lavan con tampón de lavado (que contiene PBS, 0,1% de Tween-20). La cantidad de PGT fosforilado se cuantifica mediante incubación con un anticuerpo PY-54 conjugado con HRP (HRP es peroxidasa de rábano (Transduction Labs), desarrollado con peroxidasa TMB (TMB es 3,3',5,5'-tetrametilbencidina) y la reacción se cuantifica en un lector de microplacas BioRad^{TM} a 450 nM. La inhibición de la actividad enzimática quinasa por el compuesto de prueba se detecta en forma de una reducción de la absorbancia, y la concentración del compuesto que se requiere para inhibir la señal en un 50% se indica como el valor de CI_{50} para el compuesto de prueba.

Para medir la capacidad de los compuestos para inhibir la actividad tirosina quinasa del KDR para la proteína de longitud completa que existe en un contexto celular; se pueden usar células endoteliales aórticas porcinas (PAE) transfeccionadas con el KDR humano (Waltenberger y col. J. Biol. Chem. 269: 26988, 1994). Las células se siembran en placas y se dejan fijar en placas de 96 pocillos en el mismo medio (F12 de Ham) con 10% de FBS (suero bovino fetal). Las células se lavan, se vuelven a alimentar con medio sin suero que contiene 0,1% (v/v) de seroalbúmina bovina (BSA) y se dejaron incubar durante 24 horas. Inmediatamente antes de introducir la dosis del compuesto, se vuelve a alimentar a las células con el medio sin suero (sin BSA). Los compuestos de prueba, disueltos en DMSO, se diluyen en el medio (concentración final de DMSO 0,5% (v/v)). Al final de una incubación de 2 horas se añade VEGF165 (50 ng/ml final) al medio para una incubación de 8 minutos. Las células se lavan y se lisan en tampón HNTG (Hepes 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, 0,2% Triton^{TM} X-100, 10% de glicerol, PMSF 0,2 mM (fluoruro de fenilmetilsulfonilo), 1 \mug/ml de pepstatina, 1 \mug/ml de leupeptina, 1 \mug/ml de aprotonina, pirofosfato de sodio 2 mM, ortovanadato de sodio 2 mM). La extensión de la fosforilación del KDR se mide usando un ensayo ELISA. Las placas de 96 pocillos revestidas con 1 \mug de anticuerpo anti-ratón de cabra. El anticuerpo no unido se lava de la placa y los sitios restantes se bloquean con tampón Superblock (Pierce) antes de la adición del anticuerpo C-20 anti-flk 1 (0,5 \mug por placa, Santa Cruz). Todo anticuerpo no unido se lava de las placas antes de la adición del lisado celular. Tras una incubación de 2 hora, los lisados con el anticuerpo flk-1, el KDR asociado con fosfotirosina se cuantifica mediante desarrollo con el anticuerpo PY-54 conjugado con HRP y TMB, como se ha descrito antes. La capacidad de los compuestos para inhibir la reacción de autofosforilación estimulada con VEGF en un 50% respecto a los controles estimulados con VEGF se indica como el valor CI_{50} para el compuesto de prueba.

Se realizaron incubaciones de citosol de hígado humano usando citosol conservado criogénicamente comercialmente disponible (Tissue Transformation Technologies, 20 mg/ml de proteína Lote nº HHC-0255). El citosol de hígado humano se descongeló lentamente y se diluyó en tampón de fosfato potásico 100 mM (pH 7,4) hasta una concentración final de proteína de 3,1 mg/ml y se calentó hasta 37ºC. Las incubaciones se iniciaron con la adición de reserva de compuesto disuelto en metanol. La concentración total de metanol se mantuvo en un 1%, o inferior a 1%. Después del inicio de la reacción, la incubación se mezcló suavemente y se recogió una alícuota muestra a 0 min y se inactivó en un volumen igual de acetonitrilo que contenía un patrón interno. Se recogieron puntos de tiempo posteriores a 5, 10, 15 y 30 minutos y se inactivaron del mismo modo. Las muestras se centrifugaron y los sobrenadantes se analizaron mediante HPLC/EM/EM usando la proporción entre la respuesta de área máxima del analito y la del patrón interno. Una regresión lineal se ajustó a los datos y se calcularon las semividas a partir de la pendiente de la línea. El porcentaje de los cálculos restantes se efectuó usando la semivida de los datos ajustados. Las incubaciones control se incluyeron para monitorizar la variabilidad entre días y la pérdida no mediada por el citosol. Los compuestos de la presente invención eran estables en citosol de hígado humano descrito en lo que
antecede.

La administración de los compuestos de la presente invención (en lo sucesivo "el(los) compuestos activos") se puede efectuar mediante cualquier procedimiento que permita la liberación de los compuestos en el sitio de acción. Estos procedimientos incluyen vías orales, vías intraduodenales, inyección parenteral (incluidos intravenosa, subcutánea, intra muscular, intravascular o infusión), administración intraocular, intraperitoneal, intravesical, intravaginal, tópica y rectal.

La cantidad del compuesto activo administrado dependerá del sujeto que se esté tratando, la gravedad del trastorno o afección, la velocidad de administración, la disposición del compuesto y el criterio del médico que lo prescribe. No obstante, una dosis eficaz está en el intervalo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal al día, preferentemente aproximadamente 1 a aproximadamente 35 mg/kg/día, en dosis única o divididas. Para un humano de 70 kg, esto representaría de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 7 g/día, preferentemente de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 2,5 g/día. En algunos casos, niveles de dosis menores que el límite inferior del intervalo mencionado en lo que antecede pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis todavía mayores sin producir ningún efecto secundario perjudicial, siempre que tales dosis más grandes se dividan primero en varias dosis pequeñas para la administración a lo largo del día.

El compuesto activo se puede aplicar como un solo tratamiento o puede implicar una o más sustancias antitumorales, por ejemplo las seleccionadas de, por ejemplo, inhibidores de la mitosis, por ejemplo vinblastina; agentes alquilantes, por ejemplo cisplatino, carboplatino y ciclofosfamida; anti-metabolitos, por ejemplo 5-fluorouracilo, citosina arabinósido e hidroxiurea, o, por ejemplo, uno de los anti-metabolitos preferidos divulgados en la solicitud de patente europea Nº 239362, tales como ácido N-(5-[N-(3,4-dihidro-2-metil-4-oxoquinazolin-6-ilmetil)-N-metilamino]-2-tenoil)-L-glutámico; inhibidores del factor de crecimiento; inhibidores del ciclo celular; antibióticos intercalantes, por ejemplo adriamicina y bleomicina; enzimas, por ejemplo interferón; y anti-hormonas, pro ejemplo anti-estrógenos tales como Nolvadex^{TM} (tamoxifeno) o, por ejemplo, anti-andrógenos tales como Casodex^{TM} (4'-ciano-3-(4-fluorofenilsulfonil)-2-hidroxi-2-metil-3'-(trifluorometil)propionanilida). Dicho tratamiento conjunto puede alcanzarse mediante la adminis-
tración de las dosis de forma simultánea, secuencial o por separado de los componentes individuales del tratamiento.

La composición farmacéutica puede estar, por ejemplo, en forma adecuada para administración oral en forma de un comprimido, píldora, polvo, formulaciones de liberación sostenida, solución, suspensión, para inyección parenteral en forma de una solución, suspensión o emulsión estéril, para administración tópica como ungüento o crema, o para administración rectal en forma de un supositorio. La composición farmacéutica puede estar en formas de dosificación unitaria adecuadas para la administración única de dosis precisas. La composición farmacéutica incluirá un vehículo o excipiente farmacéutico convencional y un compuesto de acuerdo con la invención como ingrediente activo. Además, puede incluir otros agentes medicinales o farmacéuticos, vehículos, adyuvantes, etc.

Entre las formas de administración parenteral de ejemplo se incluyen soluciones o suspensiones de compuestos activos en soluciones acuosas estériles, por ejemplo soluciones acuosas de propilenglicol o dextrosa. Tales formas de dosificación pueden tamponarse adecuadamente, si se desea.

Entre los vehículos farmacéuticos adecuados se incluyen diluyentes o cargas inertes, agua y varios disolventes orgánicos. Las composiciones farmacéuticas pueden, si se desea, contener ingredientes adicionales tales como aromatizantes, ligantes, excipientes y similares. Por tanto, para la administración oral, los comprimidos que contienen varios excipientes, tal como ácido cítrico, pueden emplearse junto con varios disgregantes tales como almidón, ácido algínico y ciertos silicatos complejos, y con agentes de unión tales como sacarosa, gelatina y goma arábiga. Además, los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, laurilsulfato sódico y talco, a menudo son útiles con fines de formación de comprimidos. Las composiciones sólidas de un tipo similar también pueden emplearse en cápsulas de gelatina rellenas blandas y duras. Por tanto, entre los materiales preferidos se incluyen lactosa o azúcar de la leche y polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando las suspensiones o elixires acuosos se desean para administración oral, el compuesto activo de ellos puede estar combinado con varios agentes edulcorantes o aromatizantes, materias colorantes o pigmentos y, si se desea, agentes emulsionantes o agentes de suspensión, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina, o combinaciones de los mismos.

Los expertos en esta técnica conocen, o será evidente para ellos, procedimientos de preparación de varias composiciones farmacéuticas con una cantidad específica de compuesto activo. Para ejemplos, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa, 15ª Edición (1975).

Los ejemplos y preparaciones que se proporcionan a continuación ilustran más a fondo y demuestran los compuestos de la presente invención y procedimientos de preparar dichos compuestos. Debe entenderse que el alcance de la presente invención no está limitado de ningún modo por el alcance de los ejemplos y preparaciones siguientes. En los ejemplos siguientes, las moléculas con un único centro quiral, a menos que se indique lo contrario, existen en forma de una mezcla racémica. Las moléculas con dos o más centros quirales, a menos que se indique lo contrario, existen en forma de una mezcla racémica de diaestereómeros. Los enantiómeros sencillos/diaestereómeros pueden obtenerse mediante procedimientos conocidos para los expertos en la técnica.

Preparación de productos intermedios generales 8-benciloxi-2-cloro-quinolina

El compuesto 2,8-quinolindiol (133,3 g, 0,827 mol) se disolvió en 800 ml de DMF anhidro en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió carbonato potásico (183 g, 1,32 mol), seguido por bromuro de bencilo (110 ml, 0,909 mol) y la solución se calentó después hasta 65ºC y reaccionó a esta temperatura durante la noche. A continuación, la mezcla de reacción se vertió en 9 l de agua y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5,5 horas, tiempo tras el cual se filtró. El sólido se lavó con agua, se recogió y se suspendió en tolueno, y, por último, la solución se concentró a vacío para dar 142 g de 8-benciloxiquinolin-2-ol. Este material (142 g, 0,565 mol) se disolvió en 500 ml de DCE en una atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (99 ml, 1,13 mol), seguido por 1 ml de DFM. Una vez que la adición se hubo completado, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, tiempo tras el cual la reacción se calentó hasta 84ºC. La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 10 horas y después se concentró al vacío. El residuo resultante se repartió entre DCM y NaHCO_{3} saturado acuoso. La capa de DCM se lavó de nuevo con NaHCO_{3} saturado acuoso, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío, para dar un sólido marrón. El sólido se recristalizó en tolueno, para dar dos cosechas (68,3 g y 38,3 g) de 8-benciloxi-2-cloro-quinolina.

El éster terc-butílico de ácido piperidin-4-il-carbámico se puede preparar mediante los procedimientos que se encuentran en Carling y col. J. Med. Chem. 42 (14), (1999) pág. 2706 o Mase y col. J. Org. Chem. 66 (20), (2001) pág. 6775.

Los compuestos de la invención pueden prepararse a partir del producto intermedio H (Ejemplo 1) mediante el procedimiento esbozado en el Esquema 1 y que se demuestra mediante la preparación de 1-[2-(5-ciclopropilmetoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina en el Ejemplo 2.

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Ejemplo 1 Preparación de éster terc-butílico de ácido {1-[2-(5-hidroxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-il}-car- bámico (compuesto H)

El producto intermedio H 5-hidroxi-bencimidazol puede prepararse mediante el procedimiento esbozado en el Esquema 2.

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Esquema 2

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2

Preparación del Compuesto B

Éster 8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-quinolin-2-ílico de ácido trifluoro-metanosulfónico

El compuesto 2,8-quinolindiol (A) (20,0 g, 124 mmol) se suspendió en 500 ml de diclorometano (DCM) en atmósfera de nitrógeno seco (N_{2}). A esta solución se añadió imidazol (20,3 g, 298 mmol), seguido por cloruro de terc-butildimetilsililo (20,6 g, 137 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (1,50 g, 12,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, tiempo tras el cual se repartió entre DCM y 1% de bisulfato sódico acuoso (NaHSO_{4}). La capa de DCM se guardó y lavó dos veces más con 1% de NaHSO_{4} acuoso, después bicarbonato sódico saturado acuoso (NaHCO_{3}) y, por último, salmuera. La capa de DCM se secó sobre sulfato sódico (Na_{2}HSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío para dar el producto bruto (40 g) en forma de un sólido blando. El sólido se disolvió en 500 ml de tetrahidrofurano (THF) anhidro en una atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió N-fenil-bis(trifluorometanosulfonimida) (48,7 g, 136 mmol) y la solución se enfrió hasta 0ºC. A esta solución se añadió lentamente (3,2 g, 136 mmol) hidruro sódico (60% en aceite). Una vez que la adición se hubo completado, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente. Tras una hora se añadieron 1,00 g adicionales de hidruro sódico (60% en aceite) y se agitó durante 30 minutos adicionales. La mezcla se concentró al vacío y se suspendió en DCM. Gota a gota se añadió agua (1,0 ml) lentamente para inactivar cualquier hidruro sódico sin reaccionar y, después, se extrajo la mezcla de reacción dos veces en hidróxido sódico acuoso (NaOH) 0,1N y después se lavó con salmuera. La capa de DCM se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar 57 g del triflato B crudo en forma de un aceite amarillo.

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Preparación del Compuesto C

([8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-quinolin-2-il]-(4-metoxi-2-nitro-fenil)-amina

Los compuestos éster 8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-quinolin-2-ílico de ácido trifluoro-metanosulfónico B (9,81 g, 24,1 mmol) y 4-metoxi-2-nitroanilina (4,86 g, 28,9 mmol) se disolvieron en 100 ml de dioxano en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución (se añadió carbonato de cesio (Cs_{2}CO_{3}) 11,0 g, 33,7 mmol), 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo racémico (BINAP) (900 mg, 1,45 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (883 mg, 0,964 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100ºC y se hizo reaccionar a esta temperatura durante 4 horas. Después, la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se concentró al vacío, se trató con DCM, se filtró y se concentró al vacío, para dar un sólido rojo. El sólido se sometió a cromatografía en gel de sílice ultrarrápido eluyendo con hexanos/DCM (3:1) para dar 7,25 g de C en forma de un sólido rojo.

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Preparación del Compuesto D

N^{1}-[8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-quinolin-2-il]-4-metoxi-benceno-1,2-diamina

El compuesto ([8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-quinolin-2-il]-(4-metoxi-2-nitro-fenil)-amina C (21,9 g, 51,3
mmol) se disolvió en 200 ml de etanol (EtOH) y 70 ml de THF en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió 10% de paladio sobre carbono (2,18 g), seguido por la adición gota a gota de 10 ml de hidracina anhidra. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, tiempo tras el cual se filtró mediante Celite^{TM} y el Celite^{TM} se lavó con DCM. Los filtrados combinados se concentraron al vacío y el residuo resultante se repartió entre DCM y NaHCO_{3} saturado acuoso. Después, la capa de DCM se lavó de nuevo con NaHCO_{3} saturado y, después, con salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío, para dar 18,3 g de un sólido marrón como el compuesto del título D.

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Preparación del Compuesto E

2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-ol

El compuesto N^{1}-[8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-quinolin-2-il]-(4-metoxi-benceno-1,2-diamina D (18,3 g, 46,1 mmol) se disolvió en 40 ml de 2-metoxietanol en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió acetato de formamidina (5,28 g, 50,7 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta 125ºC y se hizo reaccionar a esta temperatura durante 1,5 horas. El disolvente se eliminó al vacío y el sólido resultante se trituró con éter etílico (Et_{2}O), se secó al vacío para dar 13,3 g de E en forma de un sólido rosa.

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Preparación del Compuesto F

Éster 2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8 de ácido trifluoro-metanosulfónico

El compuesto 2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-ol E (13,9 g, 47,8 mmol) se disolvió en 100 ml de THF anhidro en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió N-fenil-bis(trifluorometanosulfonimida) (20,3 g, 47,8 mmol) y, después, la solución se enfrió posteriormente hasta 0ºC. a esta solución se añadió lentamente (1,31 g, 54,9 mmol) hidruro sódico (60% en aceite). Una vez que se hubo completado la adición, la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente. Tras 30 minutos, se añadieron 500 mg más de hidruro sódico (60% en aceite), seguidos por 3,50 g de N-fenil-bis-(trifluorometanosulfonimida) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A continuación, el disolvente se eliminó al vacío y el residuo resultante se suspendió en DCM. A esta solución se añadió lentamente 1,0 ml de agua para descomponer todo el hidruro sódico sin reaccionar. Posteriormente, la mezcla se repartió entre DCM y NaOH acuoso 0,1N. Después, la capa de DCM se lavó de nuevo con NaOH acuoso 0,1N, seguido por salmuera, y después se secó sobre sulfato magnésico (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío para dar 20,7 g del compuesto F bruto en forma de un sólido rosa usado inmediatamente en la siguiente reacción.

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Preparación del Compuesto G

Éster terc-butílico de ácido {1-[2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-il}-carbámico

Los compuestos éster 2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-ílico de ácido trifluoro-metanosulfónico F (15,0 g, 35,4 mmol) y éster terc-butílico de ácido piperidin-4-il-carbámico (14,2 g, 70,9 mmol) se disolvieron en 200 ml de dioxano en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió CsCO_{3} (16,2 g, 49,6 mmol), BINAP racémico (1,28 g, 2,12 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (1,29 g, 1,41 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100ºC y se hizo reaccionar a esta temperatura durante la noche. Después, la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se filtró y se concentró al vacío para dar una espuma naranja. La espuma se sometió a cromatografía en gel de sílice ultrarrápida eluyendo con un gradiente de acetato de etilo (EtOAc)/DCM (1:5) a EtOAC/DCM (7:3) para dar 12,3 g del compuesto G en forma de un sólido ligeramente amarillo.

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Preparación del Compuesto H

Éster terc-butílico de ácido {1-[2-(5-hidroxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-il}-carbámico

El compuesto éster terc-butílico de ácido {1-[2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-il}-car-
bámico G (8,40 g, 17,7 mmol) se disolvió en 50 ml de ácido trifluoroacético (TFA) en atmósfera de N_{2} seco. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos, tiempo tras el cual se concentró al vacío, para dar un aceite amarillo. El aceite se repartió entre DCM y NaOH acuoso 0,1N. La capa de DCM se lavó de nuevo con NaOH acuoso 0,1N. La capa de DCM se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró, para dar 5,85 g de 1-[2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina en forma de un sólido amarillo. C.I. m/z 374 [M+1]; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,66 (s, 1H), 8,37 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 8,30 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,68 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,35 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,06 (dd, J= 2,5, 8,9 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,88 (m, 2H), 2,90 (m, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 1,50 (as, 2H).

El compuesto 1-[2-(5-metoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina (500 mg, 1,10 mol) se disolvió en 10 ml de DCM en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió tribromuro de boro (300 ml, 3,30 mmol) y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después, se añadieron 200 ml adicionales de tribromuro de boro y la mezcla se agitó durante dos horas. La mezcla de reacción se vertió después sobre hielo picado y el pH de la solución resultante se ajustó a 9 con la adición cuidadosa de carbonato sódico (Na_{2}CO_{3}). La pasta se filtró y el sólido se lavó con agua, seguido de Et_{2}O y después se secó al vacío para dar 1-[8-(4-amino-piperidin-1-il)-quinolin-2-il]-1H-benzoimidazol-5-ol en forma de un sólido amarillo. C.I. m/z 360 [M+1]; RMN ^{1}H (DMSO) \delta 9,07 (s, 1H), 8,76 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 8,48 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 8,10 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,56 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,26 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 7,01 (d, J= 2,2, Hz, 1H), 6,95 (dd, J= 2,2, 8,9 Hz, 1H), 3,72 (m, 2H), 2,76 (m, 3H), 1,88 (m, 2H), 1,65 (m, 2H).

El compuesto 1-[8-(4-amino-piperidin-1-il)-quinolin-2-il]-1H-benzoimidazol-5-ol (460 mg, 1,30 mmol) se disolvió en 5 ml de DMF anhidro en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió di-terc-butildicarbonato (279 mg, 1,30 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se repartió entre DCM y NaHCO_{3} saturado acuoso concentrado. La capa de DCM se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar un sólido amarillo. El sólido se sometió a cromatografía en gel de sílice ultrarrápida eluyendo con EtOAc para dar 273 mg del compuesto H en forma de un sólido amarillo.

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Ejemplo 2

(De referencia)

Preparación de 1-[2-(5-ciclopropilmetoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina

El compuesto éster terc-butílico de ácido {1-[2-(5-hidroxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-il}-car-
bámico H (200 mg, 0,435 mmol) se disolvió en 1,5 ml de DMF anhidro en atmósfera de N_{2} seco. A esta solución se añadió CsCO_{3} (170 mg, 0,520 mmol), seguido por bromuro de ciclopropilmetano (46 ml, 0,48 mmol). Posteriormente, la mezcla de reacción se calentó hasta 65ºC y se agitó a esta temperatura durante 4 horas. Después, la mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se repartió entre EtOAc y agua. La capa de EtOAC se lavó 4 veces más con agua y después con salmuera. Después, el EtOAc se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío y, el aceite verde resultante se sometió a cromatografía en gel de sílice ultrarrápida eluyendo con MeOH/diclorometano (DCM) (2:98), para dar un aceite verse. El aceite se disolvió en 1,5 ml de TFA en atmósfera de N_{2} seco. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos, tiempo tras el cual se concentró al vacío y el residuo resultante se repartió entre DCM y NaOH acuoso 0,1N. La capa de DCM se lavó después con salmuera básica (pH= 10), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró al vacío, para dar 118 mg de 1-[2-(5-ciclorpopilmetoxibenzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina en forma de un sólido amarillo. C.I. m/z 414 [M+1]; RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,63 (s, 1H), 8,37 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 8,27 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,65 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,44 (m, 2H), 7,30 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,24 (m, 1H), 7,09 (dd, J= 2,5, 8,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 4H), 2,87 (m, 3H), 2,03 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,56 (as, 2H), 1,32 (m, 1H), 0,66 (m, 2H), 0,39 (m, 2H).

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Ejemplo 3

(De referencia)

Preparación de sal de besilato de 1-[2-(5-ciclopropilmetoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina

La sal de besilato de 1-[2-(5-ciclopropilmetoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina se prepara mediante la reacción de un equivalente de ácido bencenosulfónico con un equivalente de 1-[2-(5-ciclopropilmetoxi-benzoimidazol-1-il)-quinolin-8-il]-piperidin-4-ilamina. El producto se recupera usando cualquiera de las bien conocidas técnicas empleadas en la preparación de sales de compuestos orgánicos.

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Ejemplo 4 Preparación de 1 (+)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina

El compuesto (\pm)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina se preparó de acuerdo con el modo descrito en el Ejemplo de referencia 2 y se determinó que tenía una LRMS (MH+) de 430,4. El racemato de 1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina se puede separar en sus enantiómeros usando técnicas bien conocidas para los expertos en la técnica.

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Ejemplo 5 Preparación de 1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina

El compuesto 1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina se preparó de acuerdo con el modo descrito en el ejemplo de referencia 2 y se determinó que tenía una LRMS (MH+) de 444,4.

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Ejemplo 6 Preparación de 1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina

El compuesto 1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina se preparó de acuerdo con el modo descrito en el ejemplo de referencia 2 y se determinó que tenía una LRMS (MH+) de 444,4.

Claims (10)

1. Un compuesto seleccionado del grupo constituido por:

(\pm)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriores.

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2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado del grupo constituido por:

(+)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

(-)-1-{2-[5-(tetrahidro-furan-3-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriores.

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3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado del grupo constituido por:

1-{2-[5-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina;

y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto anterior.

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4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado del grupo constituido por:

1-{2-[5-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-benzoimidazol-1-il]-quinolin-8-il}-piperidin-4-ilamina; y las sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto anterior.

5. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicha sal es la sal bencenosulfonato.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar como medicamento.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero.

8. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero.

9. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo en un mamífero en combinación con agente antitumoral seleccionado del grupo constituido por inhibidores de la mitosis, agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos intercalantes, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de la topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, anti-hormonas, inhibidores de la angiogénesis y anti-andrógenos.

10. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.