ES2348461T3 - Gránulos que contienen proteínas y formulaciones de gránulos. - Google Patents

Gránulos que contienen proteínas y formulaciones de gránulos. Download PDF

Info

Publication number
ES2348461T3
ES2348461T3 ES05026512T ES05026512T ES2348461T3 ES 2348461 T3 ES2348461 T3 ES 2348461T3 ES 05026512 T ES05026512 T ES 05026512T ES 05026512 T ES05026512 T ES 05026512T ES 2348461 T3 ES2348461 T3 ES 2348461T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
granules
enzyme
matrix
layer
granule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES05026512T
Other languages
English (en)
Inventor
Mahmood Ghani
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Danisco US Inc
Original Assignee
Danisco US Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Danisco US Inc filed Critical Danisco US Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2348461T3 publication Critical patent/ES2348461T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/02—Inorganic compounds ; Elemental compounds
    • C11D3/12—Water-insoluble compounds
    • C11D3/1213—Oxides or hydroxides, e.g. Al2O3, TiO2, CaO or Ca(OH)2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D17/00—Detergent materials or soaps characterised by their shape or physical properties
    • C11D17/0039—Coated compositions or coated components in the compositions, (micro)capsules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/02—Inorganic compounds ; Elemental compounds
    • C11D3/12—Water-insoluble compounds
    • C11D3/124—Silicon containing, e.g. silica, silex, quartz or glass beads
    • C11D3/1246—Silicates, e.g. diatomaceous earth
    • C11D3/1253—Layer silicates, e.g. talcum, kaolin, clay, bentonite, smectite, montmorillonite, hectorite or attapulgite
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/20—Organic compounds containing oxygen
    • C11D3/22—Carbohydrates or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/20—Organic compounds containing oxygen
    • C11D3/22—Carbohydrates or derivatives thereof
    • C11D3/222—Natural or synthetic polysaccharides, e.g. cellulose, starch, gum, alginic acid or cyclodextrin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38672—Granulated or coated enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/40—Dyes ; Pigments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/98—Preparation of granular or free-flowing enzyme compositions

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

Un método para preparar un gránulo, que comprende: (i) disponer una partícula soporte de proteína; donde dicha partícula soporte de proteína se forma mediante una capa de un material que contiene la enzima sobre un material central, (ii) formar una capa matriz de barrera alrededor de la partícula (iii) aplicando una mezcla que incluye (a) un agente secante finamente dividido, (b) un agente aglutinante y (c) un agente estructurante polimérico, y aplicar una capa de revestimiento que comprende un polímero formador de película alrededor de dicha capa matriz de barrera, estando la capa de revestimiento exterior sustancialmente exenta de pigmentos.

Description

Campo técnico Esta invención se refiere a procedimientos para producir gránulos soporte de
5 proteínas, por ejemplo, gránulos de enzimas.
Técnica anterior El uso de proteínas tales como proteínas con importancia desde el punto de
10 vista farmacéutico, por ejemplo, hormonas y proteínas con importancia desde el punto de vista industrial, por ejemplo, enzimas, ha experimentado un rápido crecimiento en los últimos años. Hoy en día, por ejemplo, las enzimas encuentran un uso frecuente, entre otras, en industrias del almidón, láctea y de detergentes. En la industria de detergentes, en particular, las enzimas se configuran con
15 frecuencia en una forma granular, con el deseo de conseguir una o más características de almacenamiento y/o comportamiento deseables, dependiendo de la aplicación concreta particular. En este sentido, la industria ha ofertado numerosos desarrollos en la granulación y revestimiento de enzimas, algunos de los cuales se ejemplifican en las siguientes patentes y publicaciones:
20 La patente de Estados Unidos 4.106.991 describe una formulación mejorada de gránulos de enzimas mediante la inclusión en la composición que se somete a granulación, de fibras de celulosa finamente divididas en una cantidad de 2 a 40% en peso/peso tomando como base el peso seco de toda la composición. Además, esta patente describe que se pueden usar sustancias céreas para revestir las partículas del
25 granulado. La patente de Estados Unidos 4.689.297 describe partículas que contienen enzimas que comprenden un núcleo dispersable en agua en forma de partículas que tiene una dimensión más grande de 150 a 2.000 micrómetros, una capa uniforme de enzima alrededor de la partícula de núcleo que constituye de 10% a 35% en peso del
30 peso de la partícula de núcleo, y una capa de un agente de revestimiento soluble o dispersable en agua, formador de película y macromolecular que rodea de forma uniforme a la capa de enzima, constituyendo la combinación de enzima y agente de revestimiento de 25 a 55% del peso de la partícula de núcleo. El material de núcleo descrito en esta patente incluye arcilla, un cristal de azúcar inmerso en capas de
35 almidón de maíz que está revestido con una capa de dextrina, almidón de patata aglomerado, sal en partículas, citrato trisódico aglomerado, copos de NaCl cristalizado en cubeta, gránulos o perlas de bentonita, gránulos que contienen bentonita, caolín y tierra de diatomeas o cristales de citrato sódico. El material formador de película puede ser un éster de ácido graso, un alcohol etoxilado, un poli(alcohol vinílico) o un
5 alquilfenol etoxilado.
La patente de Estados Unidos 4.740.469 describe una composición granular de enzima que consiste esencialmente en 1 a 35% en peso de una enzima y de 0,5 a 30% en peso de un material fibroso sintético que tiene una longitud media de 100 a 500 micrómetros y una finura en el intervalo de 0,05 a 0,7 denier (0,7 g en 9.000
10 metros de hilo), siendo el resto un extendedor o carga. La composición granular puede comprender además un material céreo molido, tal como polietilenglicol, y opcionalmente un colorante tal como dióxido de titanio.
La patente de Estados Unidos 5.324.649 describe gránulos que contienen enzima que tienen un núcleo, una capa de enzima y una capa de revestimiento 15 externa. La capa de enzima y, opcionalmente el núcleo y la capa de revestimiento
externa contienen un polímero de vinilo.
El documento WO 91/09941 describe una preparación que contiene enzima en la que al menos el 50% de la actividad enzimática está presente en la preparación en forma de cristales de enzima. La preparación puede ser una suspensión o un
20 granulado. El documento WO 97/12958 describe una composición de enzima microgranular. Los gránulos están elaborados por aglomeración en lecho fluido que da lugar a gránulos con numerosas partículas soporte o iniciadoras revestidas con enzima y unidas entre si por medio de un aglomerante.
25 El documento WO 99/32613 describe una composición granular que incluye un núcleo que comprende una proteína o enzima mezclada con un azúcar o azúcar-alcohol y un agente estructurante, tal como un polisacárido o un polipéptido. La composición granular puede incluir además una capa de barrera formada sobre el núcleo, así como un material de revestimiento externo. La capa de barrera puede estar
30 compuesta de, por ejemplo, sales inorgánicas o sales o ácidos orgánicos. Materiales de revestimiento ejemplo incluyen, por ejemplo, materiales formadores de película solubles o dispersables en agua, tales como poli(alcohol vinílico) (PVA), polivinil pirrolidona (PVP) o derivados de la celulosa tales como metilcelulosa. De forma típica, el revestimiento externo incluye además un pigmento tal como TiO2, para impartir un
35 color deseado a la composición.
El documento EP 0 258 068 describe un método para preparar un gránulo, que comprende (i) proporcionar una partícula que soporta una enzima criosecada, y (ii) revestir la partícula en tres etapas, de la siguiente manera: 5% de polietilenglicol (MW 600), 11,25% de TiO2/silicato de Mg (4:1), 4% de polietilenglicol (MW 600).
5 A pesar de tales desarrollos, existe una continua necesidad de gránulos de enzimas que tengan unas características beneficiosas o mejoradas adicionales. Una de tales características necesarias en la industria de la granulación de enzimas son formulaciones de gránulos que tengan una buena estabilidad, en particular a alta temperatura y humedad. Se desean de modo especial gránulos de enzimas con una
10 buena estabilidad durante el almacenamiento en, por ejemplo, fórmulas detergentes que contienen blanqueantes, tales como las que contienen blanqueantes de peroxígeno, por ejemplo, perborato sódico o percarbonato sódico. Un objeto de la presente es proporcionar un método para preparar gránulos de enzimas que tengan una buena estabilidad al almacenamiento.
15
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un método para preparar un gránulo, que comprende (i) disponer una partícula soporte de proteína; donde dicha partícula soporte de proteína se forma mediante una capa de un material que contiene la 20 enzima sobre un material central, (ii) formar una capa matriz de barrera alrededor de la partícula aplicando una mezcla que incluye (a) un agente secante finamente dividido,
(b) un agente aglutinante y (c) un agente estructurante polimérico, y (iii) aplicar una capa de revestimiento que comprende un polímero formador de película alrededor de dicha capa matriz de barrera, estando la capa de revestimiento exterior
25 sustancialmente exenta de pigmentos. Componentes de matriz ejemplo incluyen: (i) un pigmento o arcilla como agente secante, (ii) un azúcar o azúcar-alcohol como agente aglutinante, y (iii) un polisacárido
o polipéptido como agente estructurante. Por ejemplo, el agente secante puede ser TiO2, el agente aglutinante puede ser sacarosa y el agente estructurante puede se 30 almidón. Por ejemplo, de acuerdo con una realización, el revestimiento está formado por un material polimérico sustancialmente exento de pigmento (por ejemplo, HPMC).
De acuerdo con una realización, la partícula soporte de proteína se forma aplicando una enzima mezclada junto con al menos un aglomerante seleccionado del
grupo consistente en hidratos de carbono, derivados de hidratos de carbono, sales y cualquiera de sus mezclas, sobre un material inerte en forma de partículas. Los gránulos descritos en la presente memoria se adaptan particularmente bien para usar en formulaciones detergentes, tales como detergentes para la ropa y/o 5 lavavajillas.
El resto de características, aspectos y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada, en combinación con las reivindicaciones adjuntas.
10 Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona una composición adecuada para usar en relación con gránulos soporte de proteínas, por ejemplo, gránulos de enzimas y similares. Por lo general, la composición comprende una mezcla que incluye un agente secante, un agente aglutinante y un agente estructurante polimérico; definiendo juntos
15 una matriz. La matriz se puede aplicar como revestimiento o capa alrededor de una partícula soporte de proteínas. Con preferencia, la matriz se diseña para que actúe a modo de barrera, o divisor físico, que ralentice o evite la difusión de sustancias, tales como humedad y blanqueantes, que puedan afectar de modo adverso a la proteína o enzima en la región que contiene proteína del gránulo. Por consiguiente, por lo general
20 en la presente memoria se hace referencia a la matriz como “matriz de barrera”. La invención proporciona además un revestimiento o capa polimérica para usar en un gránulo que contiene proteína. El revestimiento está sustancialmente exento de pigmentos y similares. A los revestimientos formulados conforme a la invención se hace referencia por lo general como “revestimientos claros”. Se apreciará, en este
25 sentido, que el término “claro”, en el contexto de la expresión “revestimiento claro” incluye los revestimientos transparentes, así como los revestimientos semitransparentes y opacos. La característica clave en la presente es que el revestimiento está sustancialmente exento de pigmentos. Como se describe con más detalle más adelante, la matriz y revestimiento de
30 la presente invención se usan en combinación en una formulación de gránulo de enzimas, presentando los gránulos resultantes una buena estabilidad cuando se los ensaya de forma deliberada con ciertos factores y/o sucesos desestabilizadores. Más adelante se describen detalles de la matriz y revestimiento.
Como se ha citado anteriormente, la matriz de barrera de la presente invención comprende una mezcla de componentes, incluyendo un agente secante finamente dividido, un agente aglutinante y un agente estructurante polimérico.
Agentes secantes contemplados para usar en la matriz de barrera de la
5 invención incluyen materiales dispersables en agua, sustancialmente insolubles en agua. El agente secante está en forma finamente dividida, por ejemplo, un material en forma de partículas que tiene un diámetro medio no superior a aproximadamente 30 micrómetros y, con preferencia no superior a aproximadamente 10 micrómetros, preferiblemente comprende un material inorgánico. En una de dichas realizaciones, el
10 material secante tiene un diámetro medio de aproximadamente 1 a 5 micrómetros. Agentes secantes ejemplo incluyen pigmentos y arcillas. Por ejemplo, el agente secante puede comprender uno o más de los siguientes materiales: TiO2, talco, carbonato de calcio, bentonita, tierra de diatomeas y cualquier mezcla de los mismos. En una realización preferida de modo particular, el agente secante es TiO2.
15 En la matriz de barrera de la invención se puede(n) utilizar cualesquiera agente(s) secante(s) adecuado(s). Por ejemplo, se pueden utilizar polisacáridos de cadena corta, es decir, no más de aproximadamente veinte subunidades de longitud. En una realización, el agente aglutinante comprende hidrolisatos de almidón, tales como maltodextrina y jarabe de glucosa sólidos. En otra realización, el agente
20 aglutinante es un azúcar o azúcar-alcohol. Ejemplos de agentes aglutinantes incluyen glucosa, fructosa, rafinosa, maltosa, lactosa, trehalosa, sacarosa, manitol, sorbitol, inositol y cualquier mezcla de los mismos. En una realización particularmente preferida, el agente aglutinante es sacarosa. El agente estructurante de la matriz es un material polimérico. Por ejemplo, el
25 agente estructurante puede comprender un polisacárido, polipéptido o una mezcla de los mismos. En una realización, el agente estructurante comprende un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en almidón, carragenano, celulosa, goma arábiga, goma de acacia, goma xantán, goma de algarrobilla y goma guar y cualquier mezcla de los mismos. En una realización preferida de modo particular, el agente
30 estructurante es un polisacárido sustancialmente insoluble en agua tal como almidón (por ejemplo, maíz no hidratado o en bruto no modificado). En otra realización, el agente estructurante es un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en quitosano, gelatina, colágeno, caseína, ácido poliaspártico, ácido poliglutámico, y cualesquiera mezclas de los mismos. Se debe apreciar que el agente estructurante
puede comprender un solo tipo de polipéptido o polisacárido, o se puede usar en los gránulos de la presente invención una combinación de dos o más de tales materiales. Haciendo referencia de nuevo al agente estructurante, se apreciará que los polisacáridos y polipéptidos tienen de forma típica las propiedades deseables de alto
5 peso molecular y alta solubilidad en agua. Sin pretender estar limitado por la teoría, se cree que el alto peso molecular del agente estructurante contribuye a dos importantes propiedades de las que un azúcar o azúcar-alcohol solo carecería: (1) proporcionar cohesión y resistencia a la partícula, reduciendo enormemente la tendencia de la partícula a formar polvo; y (2) servir como barrera de difusión al agua
10 y pequeñas moléculas gracias a la formación de una red polimérica o “jaula” a través de toda la estructura de la matriz. Esto mejora enormemente la estabilidad del gránulo. Los agentes estructurantes elegidos particulares -polisacáridos y polipéptidos- también tienen de forma típica una característica antipegajosidad que sirve de ayuda
15 para reducir las características aglomerantes del azúcar o azúcar-alcohol y permite que las capas de la matriz se acumulen (por ejemplo en un revestimiento en lecho fluido) a altas velocidades sin aglomeración.
Azúcares y azúcar-alcohol y los agentes estructurantes poliméricos también tienen una elevada solubilidad o dispersabilidad en agua. Se puede preparar de forma 20 sencilla una fórmula de matriz que incluya un azúcar o azúcar-alcohol, un agente estructurante polimérico y un agente secante finamente dividido como solución o suspensión con una elevada concentración de sólidos totales. Se pueden formular concentraciones de sólidos totales en solución o suspensión de 20 a 50% peso/peso o más. Estas mezclas concentradas son muy deseables porque se pueden conformar en
25 forma de gránulos con unas mínimas necesidades de evaporar agua, una ventaja en cualquier proceso de granulación y secado. De modo opcional, la matriz de la presente invención puede incluir además un tensioactivo o agente humectante. El tensioactivo o agente humectante puede ser útil, por ejemplo, para ayudar a mantener el agente secante en la matriz, por ejemplo,
30 TiO2 en suspensión. Materiales ejemplo que se pueden incorporar en la matriz incluyen Neodol, alcoholes de sebo, ácidos grasos, sales de ácidos grasos tales como estearato de magnesio y ésteres de ácidos grasos. En una realización particularmente preferida, se emplea en la matriz Neodol. A continuación se describirán detalles del revestimiento o capa polimérico de la
35 presente invención. El revestimiento comprende un polímero formador de película, tal
como poli(alcohol vinílico), polivinil pirrolidona, derivados de la celulosa tales como metilcelulosa, hidroxipropil metilcelulosa, hidroxicelulosa, etilcelulosa, carboximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, polietilenglicol, poli(óxido de etileno), quitosán, goma arábiga, goma xantán, carragenano o cualquiera de sus mezclas. Como se ha citado 5 anteriormente, el revestimiento polimérico está sustancialmente exento de pigmentos y componentes similares. En una realización particularmente preferida, se forma un revestimiento claro de hidroxipropil metilcelulosa (HPMC), o una combinación de HPMC y otros polímeros. Por ejemplo, está disponible de forma comercial Methocel E15, una hidroxipropil metilcelulosa, de Dow Chemical Co., Midland Mich. De forma 10 opcional, el revestimiento claro puede incluir un agente para elevar la temperatura de gelificación, tal como uno o más azúcares (por ejemplo, sacarosa) y un plastificador. Plastificadores adecuados incluyen, por ejemplo, polioles tales como azúcares, azúcar-alcohol o polietilenglicoles (PEG), urea, glicol, propilenglicol u otros plastificadores conocidos tales como citrato de trietilo, ftalato de dibutilo o dimetilo o
15 agua. En una realización preferida, el plastificador es polietilenglicol (por ejemplo, PEG 400 y/o PEG 600). Como se ha descrito anteriormente, la matriz de barrera y el revestimiento claro de la presente invención se usan en combinación en una formulación de gránulo de enzimas. El revestimiento claro está dispuesto directamente adyacente a la matriz de
20 barrera, siendo el revestimiento el más externo de los dos. Se apreciará sin embargo, que se pueden incluir además una o más capas intermedias (es decir, entre la matriz y el revestimiento).
La matriz y/o el revestimiento de la presente invención puede incorporar una amplia gama de gránulos de enzimas o proteínas. Preferiblemente, la capa matriz está 25 sustancialmente exenta de enzimas. Por ejemplo, la matriz de barrera y/o el revestimiento claro se pueden realizar en perlas, esferas, extrudidos, gránulos estratificados en lecho fluido (por ejemplo, gránulos de Enzoguard®; Genencor International, Inc.), y/o gránulos de matriz obtenidos por alto cizallamiento (por ejemplo, T-granulates; Novo-Nordisk), entre otros. El gránulo incluye una región que 30 contiene una o más proteínas o enzimas alrededor de la cual puede aplicarse la matriz. Preferiblemente, sustancialmente toda la enzima incluida en el gránulo está contenida dentro de la región que contiene la proteína. La región que contiene proteína comprende un núcleo que tiene una o más proteínas o enzimas embebidas
o dispersadas en el mismo, y/o revestidas o estratificadas sobre el mismo. De forma 35 alternativa, o adicional, la región que contiene proteínas o enzimas puede incluir una
partícula inerte sobre la cual se estratifica una matriz de proteínas o enzimas. Gránulos ejemplo que se pueden modificar para que incorporen la matriz de barrera y/o el revestimiento claro de la presente invención se describen en las publicaciones de documento PCT números WO 99/32613, WO 99/32595 y WO 99/32612; así como 5 en las patentes de Estados Unidos números 5.814.501, 5.324.649, 4.689.297 y
4.106.991.
Proteínas que están dentro del alcance de la presente invención incluyen proteínas importantes desde el punto de vista farmacéutico tales como hormonas u otras proteínas terapéuticas y proteínas importantes desde el punto de vista industrial
10 tales como enzimas. En la presente invención se puede usar cualquier enzima o combinación de enzimas. Enzimas preferidas incluyen aquellas que pueden hidrolizar sustratos, por ejemplo, manchas. Tales enzimas, que se conocen como hidrolasas, incluyen, aunque sin quedar limitadas a las mismas, proteasas (bacterianas, fúngicas, ácidas, neutras o
15 alcalinas), amilasas (alfa o beta), lipasas, celulasas y mezclas de las mismas. Enzimas particularmente preferidas son subtilisinas y celulasas. Las más preferidas son subtilisinas tales como las descritas en la patente de Estados Unidos 4.760.025, patente europea 130 756 B1 solicitud PCT WO 91/06637, y celulasas tales como Multifect L250™ y Puradax™, disponibles de forma comercial de Genencor
20 International. Otras enzimas que se pueden usar en la presente invención incluyen oxidasas, transferasas, deshidratasas, reductasas, hemicelulasas e isomerasas. Los gránulos de la presente invención también comprenden uno o más revestimientos o capas adicionales, por ejemplo, una o más capas intermedias y/ una sobrecapa. Estas pueden servir para cualquiera de una serie de funciones en una
25 composición granular, dependiendo del uso final del gránulo. Por ejemplo, los revestimientos pueden hacer una enzima resistente a la oxidación por blanqueantes, consiguiendo velocidades deseables de disolución al introducir el gránulo en un medio acuoso, y/o reducir la posibilidad de crecimiento microbiano en el gránulo. Los gránulos descritos en la presente memoria se pueden preparar por
30 procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica de granulación de enzimas, incluyendo el revestimiento en bandeja, revestimiento en lecho fluido, perlado, granulación en placa, secado por pulverización, extrusión, extrusión centrífuga, esferonización, granulación en tambor, aglomeración con alto cizallamiento o combinaciones de estas técnicas.
Un procedimiento preferido, contemplado por la presente invención, es un procedimiento de pulverización en lecho fluido. En una realización ejemplo, el procedimiento conlleva cargar partículas fluidizables, tales como cristales de azúcar, en un aparato de pulverización en lecho fluido, tal como un revestidor de lecho fluido
5 Vector FL1. Con las partículas fluidizadas, se puede aplicar una primera pulverización, con preferencia que comprende una solución acuosa de proteínas o enzimas. Esta primera pulverización puede ser, por ejemplo, un concentrado fluido que incluya una proteasa, un azúcar disuelto y almidón suspendido. De este modo, se puede formar una primera capa o revestimiento sobre las partículas fluidizadas. A
10 continuación se puede aplicar una segunda pulverización, que comprende una matriz de barrera de la presente invención. La segunda pulverización puede ser, por ejemplo, una mezcla fluida que incluye un azúcar disuelto en agua y almidón suspendido y dióxido de titanio. Esta suspensión también puede contener un agente tensioactivo/humectante, tal como Neodol, para mantener el dióxido de titanio en
15 suspensión. A continuación, se puede aplicar una tercera pulverización, que forma un revestimiento claro alrededor de la matriz de barrera. Esta tercera pulverización puede ser, por ejemplo, una solución que incluya HPMC (o una combinación de HPMC y otros polímeros) y, opcionalmente, un azúcar (por ejemplo, sacarosa) para elevar la temperatura de gelificación y/o un plastificador tal como PEG 400 o PEG
20 600. Un gránulo particularmente preferido, que se puede preparar como se acaba de describir, consiste esencialmente en (i) un núcleo compuesto por un cristal de azúcar que tiene una matriz de enzimas estratificada sobre el mismo; (ii) una matriz de barrera estratificada sobre la matriz de enzimas; y (iii) un revestimiento claro formado
25 sobre la matriz de barrera. Sin pretender limitarse a una teoría particular, se cree que la estabilidad mejorada de dicho gránulo se debe a la presencia, en la capa matriz de barrera, de un pigmento (por ejemplo, dióxido de titanio) y almidón no hidratado, que actúan como agentes secantes y protegen las enzimas de la humedad. Además, se cree que el revestimiento claro proporciona una sobrecapa en película
30 sustancialmente continua. Los productos de enzimas granulados conocidos tienen de forma típica el pigmento en la capa más externa, creando de este modo una sobrecapa con una estructura más débil.
Los gránulos preferidos, construidos conforme a la presente invención se caracterizan por una baja afinidad por la humedad. Así, tales gránulos están 35 sustancialmente exentos de capas o revestimientos que tengan una alta afinidad por la humedad (por ejemplo, capas con sales). Tal y como se usa en la presente memoria “baja afinidad por la humedad” significa que un gránulo expuesto a 50ºC y una humedad relativa del 70% captará menos del 10% y, con preferencia menos del 5% de un aumento en peso por la humedad “en equilibrio”. es decir, cuando la 5 absorción de humedad se ha estabilizado generalmente. Como se puede apreciar de los resultados del Ejemplo 5 (más adelante), las formulaciones de gránulos ejemplo que incorporan la matriz de la presente invención por lo general se estabilizan a aproximadamente 2 a 3% de aumento de peso por la humedad. Se cree que, como resultado de dicha baja afinidad por la humedad, se reduce de forma significativa la
10 intrusión no deseada de humedad y sustancias inactivadoras asociadas en la región que contiene la proteína de dichos gránulos. Cuando la matriz de barrera y/o el revestimiento claro están realizados en un gránulo de enzimas, las enzimas rodeadas de este modo presentan de forma típica una muy buena estabilidad.
15 EJEMPLOS Ejemplo 1: Formulación de gránulo de enzimas A continuación en la Tabla 1 se muestra una formulación ejemplo de un lote de gránulos, producido usando un proceso de pulverización en lecho fluido. La
20 pulverización inicial en este ejemplo se aplicó a 540,0 g de cristales de sacarosa cargados en una cámara de lecho fluido y suspendidos en la misma. La enzima usada fue Purafect OxP (Genencor International, Inc.). En este y en los siguientes ejemplos, “pulverización 1” denota una matriz de enzimas formada sobre una partícula fluidizable, “pulverización 2” denota la matriz de barrera de la presente
25 invención y “pulverización 3” denota el revestimiento claro de la presente invención. Ciertos detalles del proceso en lecho fluido fueron sustancialmente como se describen en el Ejemplo 2 del documento WO 99/32613.
Tabla 1
PULVERIZACIÓN 1:
OxP conc. 14,3% en sólidos 1542,0 g
Sacarosa
393,0 g
Almidón
393,0 g
PULVERIZACIÓN 2:
Almidón de maíz 224,0 g
Sacarosa
224,0 g
TiO2
125,0 g
Neodol
28,0 g
PULVERIZACIÓN 3:
Methocel E15 56,0 g
PEG 400
8,0 g
Ejemplo 2: 5 Formulaciones de gránulo de enzimas
En las Tablas 2, 3 y 4, a continuación, se muestran varias formulaciones ejemplo para gránulos de enzimas, también producidos usando un proceso de pulverización en lecho fluido. Como con el ejemplo anterior, la pulverización inicial para cada una de las siguientes formulaciones se aplicó a 540,0 g de cristales de
10 sacarosa cargados en una cámara de lecho fluido, y suspendidos en la misma. La enzima usada en estas formulaciones fue Properase (Genencor International, Inc.).
Tabla 2 -“Lote 80”
PULVERIZACIÓN 1:
Properase conc. (17,3% en sólidos) 1200,0 ml
Sacarosa
396,0 g
Almidón
396,0 g
PULVERIZACIÓN 2:
Almidón de maíz 224,0 g
Sacarosa
224,0 g
TiO2
125,0 g
Neodol
28,0 g
PULVERIZACIÓN 3:
HPMC(Methocel E15) 48,0 g
PEG 600
8,0 g
15
Tabla 3 - “Lote 81”
PULVERIZACIÓN 1:
Properase conc. (17,3% en sólidos) 1200,0 ml
Sacarosa
396,0 g
Almidón
396,0 g
PULVERIZACIÓN 2:
Almidón de maíz 224,0 g
Sacarosa
224,0 g
TIO2
125,0 g
Neodol
28,0 g
PULVERIZACIÓN 3:
HPMC(Methocel E15) 24,0 g
Almidón modificado (Pure Cote (50/50))
24,0 g
PEG 600
8,0 g
Tabla 4 - “Lote 82”
PULVERIZACIÓN 1:
Properase conc. (17,3% en sólidos) 1200,0 ml
Sacarosa
396,0 g
Almidón
396,0 g
PULVERIZACIÓN 2:
Almidón de maíz 224,0 g
Sacarosa
224,0 g
TiO2
125,0 g
Neodol
28,0 g
PULVERIZACIÓN 3:
HPMC (Methocel E15) 48,0 g
Sacarosa
8,0 g
PEG 600
8,0 g
Ejemplo 3: Ensayos de estabilidad acelerada usando una base de detergente para la colada Los gránulos del Ejemplo 2 (Lotes 80, 81 y 82) se analizaron para determinar
10 su estabilidad en tres ensayos de estabilidad bajo condiciones de sobrecarga de tres días. Los métodos para estos procedimientos fueron sustancialmente como se describen en el Ejemplo 3 del documento WO 99/32613. Sin embargo, en este ejemplo, se usó una base de detergente para la colada registrada. Como se describe en el documento WO 99/32613, el ensayo de estabilidad
15 acelerada se diseña para ayudar a desarrollar y seleccionar formulaciones granulares, puesto que proporciona un medio acelerado para determinar la estabilidad relativa de los gránulos. Las condiciones del ensayo de estabilidad acelerada (AST) (del inglés Accelerated Stability Test) son bastante más intensas que las que se encontrarían los gránulos de enzimas o detergentes en un transporte o almacenamiento real. El AST es un “ensayo de sobrecarga” diseñado para discriminar diferencias entre formulaciones que de otro modo no serían evidentes durante semanas o meses.
Los resultados del AST mostrados en la Tabla 5, a continuación, muestran el
porcentaje de actividad que queda para cada uno de los Lotes 80, 81 y 82, durante un
período de tres días.
Tabla 5 -Porcentaje de actividad del original
Día0
Día 1 Día 3
Lote 80
100,0 88,8 49,7
Lote 81
100,0 91,4 41,0
Lote 82
100,0 85,4 39,7
74-A
100,0 89,7 32,0
87-B
100,0 75,5 27,0
10 Los resultados de estabilidad para dos lotes más, denominados 74-A y 87-B, se muestran también en la Tabla 5. Estos lotes adicionales tienen las formulaciones generales mostradas en la Tabla 6, siguiente. Se apreciará que estas formulaciones adicionales se prepararon en un aparato de pulverización en lecho fluido, como antes,
15 aplicando las pulverizaciones a cristales de sacarosa fluidizados en una cámara del aparato. Tabla 6: 74-A 87-B
PULVERIZACIÓN 1:
Properase conc. (17,3% en sólidos) Properase conc. (17,3% en sólidos)
Sacarosa
Sacarosa
Almidón
Almidón
PULVERIZACIÓN 2:
Almidón de maíz Ninguno
Sacarosa
Ti2
Neodol
PULVERIZACIÓN 3:
Ninguno HPMC (Methocel E15)
Sacarosa (opcional)
PEG 600
Como se puede apreciar de la Tabla 6, los Lotes 74-A y 87-B están compuestos de gránulos, la mayoría como los descritos en los Ejemplos 1 y 2, anteriores, salvo porque los gránulos del Lote 74-A carecen de un revestimiento claro y los gránulos del Lote 87-B carecen de una capa matriz de barrera.
5 Aunque los gránulos que tienen un núcleo de enzimas rodeado únicamente por la matriz de barrera (por ejemplo, Lote 74-A) o por el revestimiento claro (por ejemplo, Lote 87-B) de la presente invención muestran una buena estabilidad en los ensayos de estabilidad acelerada (véase la Tabla 5 anterior), los gránulos que incluyen ambas capas alrededor de un núcleo de enzimas (por ejemplo, Lotes 80, 81 y 82)
10 presentan una estabilidad incluso mejor.
Ejemplo 4: Ensayos de estabilidad acelerada usando una base de detergente para lavavajillas automáticos
15 Se analizaron también los gránulos del Ejemplo 2 (Lotes 80, 81 y 82) en ensayos de estabilidad bajo condiciones de sobrecarga de tres días para determinar la estabilidad en una base de detergente para lavavajillas automáticos. Como con el ejemplo anterior, los métodos para estos procedimientos fueron sustancialmente como se describen en el Ejemplo 3 del documento WO 99/32613. No obstante, aquí, los
20 estudios se llevaron a cabo a 40ºC y una humedad relativa del 70%. La Tabla 7, siguiente, muestra el porcentaje de actividad que queda para cada uno de los Lotes 80, 81 y 82, durante un período de tres días. También se muestran los resultados para un gránulo disponible de forma comercial en las mismas condiciones.
25
Tabla 7 -Porcentaje de actividad del original
Día 0
Día 1 Día 2 Día 3
Lote 80
100,0 87 51 32
Lote 81
100,0 71 44 27
Lote 82
100,0 86 51 37
Gránulo comercial de proteasa
100,0 55 25 19
Ejemplo 5:
Ensayos de estabilidad acelerada usando una base de detergente para lavavajillas automáticos Como se ha citado anteriormente, los gránulos preferidos de la presente invención tienen una baja afinidad por la humedad. Así, tales gránulos (por ejemplo,
5 los gránulos de los Lotes 80, 81, 82, 74-A, 87-B) están sustancialmente exentos de capas o revestimientos que tengan una alta afinidad por la humedad (por ejemplo, capas de sales). Tal y como se usa en la presente memoria, “baja afinidad por la humedad” significa que un gránulo expuesto a 50ºC y humedad relativa del 70% captará menos de 10% y, preferiblemente, menos de 5% de aumento de peso por la
10 humedad “en el equilibrio”, es decir, cuando la absorción de humedad se ha estabilizado generalmente. Como se aprecia de los datos de la Tabla 8, siguiente, la formulación de gránulos ejemplo del Lote 81 se estabiliza por lo general a un aumento de peso por la humedad menor que aproximadamente 2 a 3%. Por otro lado, el gránulo de proteasa comercial mostró un aumento de peso por la humedad en
15 equilibrio de al menos 17%.
Tabla 8 -Aumento de peso porcentual
Día 0
Día 5 Día 12
Gránulo del Lote 81
100 101,631 101,4609
Granulo comercial de proteasa
100 107,0899 117,2339
20

Claims (2)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un método para preparar un gránulo, que comprende:
    (i) disponer una partícula soporte de proteína; donde dicha
    partícula soporte de proteína se forma mediante una capa de un 5 material que contiene la enzima sobre un material central,
    (ii) formar una capa matriz de barrera alrededor de la partícula aplicando una mezcla que incluye (a) un agente secante finamente dividido, (b) un agente aglutinante y (c) un agente estructurante polimérico, y
    10 (iii) aplicar una capa de revestimiento que comprende un polímero formador de película alrededor de dicha capa matriz de barrera, estando la capa de revestimiento exterior sustancialmente exenta de pigmentos.
    15 2. El método de la reivindicación 1, en el que dicha partícula soporte de proteína se forma aplicando una enzima mezclada junto con al menos un aglutinante seleccionado del grupo que consiste en carbohidratos, derivados de carbohidratos, sales y cualesquiera mezclas de los mismos, sobre un material inerte en forma de partículas.
    20
  2. 3. El método de la reivindicación 1, en el que dicho agente secante comprende un pigmento o arcilla, dicho agente aglutinante comprende un azúcar o azúcar-alcohol, y dicho agente estructurante comprende un polisacárido o polipéptido.
    25 4. El método de la reivindicación 3, en el que dicho agente secante comprende TiO2, dicho agente aglutinante comprende sacarosa, y dicho agente estructurante comprende almidón.
    30
ES05026512T 1999-10-15 2000-10-10 Gránulos que contienen proteínas y formulaciones de gránulos. Expired - Lifetime ES2348461T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US419391 1989-10-10
US41939199A 1999-10-15 1999-10-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2348461T3 true ES2348461T3 (es) 2010-12-07

Family

ID=23662063

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05026512T Expired - Lifetime ES2348461T3 (es) 1999-10-15 2000-10-10 Gránulos que contienen proteínas y formulaciones de gránulos.
ES00968909T Expired - Lifetime ES2249300T3 (es) 1999-10-15 2000-10-10 Granulos que contienen proteinas y formulaciones de granulos.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00968909T Expired - Lifetime ES2249300T3 (es) 1999-10-15 2000-10-10 Granulos que contienen proteinas y formulaciones de granulos.

Country Status (10)

Country Link
EP (2) EP1220887B1 (es)
JP (1) JP2003514922A (es)
AT (2) ATE312162T1 (es)
AU (1) AU7875800A (es)
CA (1) CA2387511A1 (es)
DE (2) DE60044652D1 (es)
DK (2) DK1220887T3 (es)
ES (2) ES2348461T3 (es)
PT (1) PT1632561E (es)
WO (1) WO2001029170A1 (es)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003514922A (ja) 1999-10-15 2003-04-22 ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド 蛋白質含有顆粒および顆粒配合物
EP1328612B1 (en) 2000-10-27 2007-04-25 Genencor International, Inc. Particle with substituted polyvinyl alcohol coating
AU2006100716B4 (en) * 2006-08-22 2006-10-05 Eibl, Robert Mr Saccharose as washingpowder
ES2531135T3 (es) 2006-09-21 2015-03-11 Basf Enzymes Llc Fitasas, ácidos nucleicos que las codifican y métodos para su producción y uso
EP2120894A1 (en) * 2006-10-25 2009-11-25 Universidade de Coimbra Oral submicron particle delivery system for proteins and process for its production
WO2011090980A1 (en) 2010-01-20 2011-07-28 Danisco Us Inc. Mold treatment
MX350545B (es) * 2010-07-20 2017-09-08 The Procter & Gamble Company * Partículas de suministro con pluralidad de núcleos.
GB201308828D0 (en) 2013-03-12 2013-07-03 Verenium Corp Phytase
GB201308843D0 (en) * 2013-03-14 2013-07-03 Verenium Corp Phytase formulation
EP3027762A4 (en) 2013-07-25 2017-06-28 BASF Enzymes LLC Phytase
HK1220221A1 (zh) 2013-11-11 2017-04-28 艺康美国股份有限公司 多用途的酶洗涤剂和稳定使用溶液的方法
DE102014226251A1 (de) * 2014-12-17 2016-06-23 Henkel Ag & Co. Kgaa Verwendung anorganischer Oxide, Hydroxide oder Oxidhydroxide in enzymhaltigen Wasch- oder Reinigungsmitteln zur Erhöhung der Stabilität von Enzymen

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1590432A (en) 1976-07-07 1981-06-03 Novo Industri As Process for the production of an enzyme granulate and the enzyme granuate thus produced
US4760025A (en) 1984-05-29 1988-07-26 Genencor, Inc. Modified enzymes and methods for making same
NZ208612A (en) 1983-06-24 1991-09-25 Genentech Inc Method of producing "procaryotic carbonyl hydrolases" containing predetermined, site specific mutations
US5185258A (en) 1984-05-29 1993-02-09 Genencor International, Inc. Subtilisin mutants
JPS6192570A (ja) 1984-10-12 1986-05-10 Showa Denko Kk 酵素造粒法
US4689297A (en) 1985-03-05 1987-08-25 Miles Laboratories, Inc. Dust free particulate enzyme formulation
US5167854A (en) * 1985-08-21 1992-12-01 The Clorox Company Encapsulated enzyme in dry bleach composition
EP0270608B1 (en) * 1986-05-21 1990-08-22 Novo Nordisk A/S Coated detergent enzymes
DE3750450T2 (de) 1986-08-29 1995-01-05 Novo Industri As Enzymhaltiger Reinigungsmittelzusatz.
DK435687D0 (da) * 1987-08-21 1987-08-21 Novo Industri As Enzymholdigt granulat og fremgangsmaade til fremstilling deraf
DK435587D0 (da) * 1987-08-21 1987-08-21 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et enzymholdigt granulat
EP0404806B1 (en) * 1988-03-14 1992-03-11 Novo Nordisk A/S Stabilized particulate composition
WO1991009941A1 (en) 1989-12-21 1991-07-11 Novo Nordisk A/S Enzyme containing preparation and detergent containing such preparation
US5814501A (en) 1990-06-04 1998-09-29 Genencor International, Inc. Process for making dust-free enzyme-containing particles from an enzyme-containing fermentation broth
US5324649A (en) 1991-10-07 1994-06-28 Genencor International, Inc. Enzyme-containing granules coated with hydrolyzed polyvinyl alcohol or copolymer thereof
ATE161045T1 (de) * 1992-08-14 1997-12-15 Genencor Int Gmbh Neue enzymgranulate
ATE268381T1 (de) 1995-10-06 2004-06-15 Genencor Int Mikrogranulaten zur nahrungs- oder futteranwendung
WO1997039116A1 (en) * 1996-04-12 1997-10-23 Novo Nordisk A/S Enzyme-containing granules and process for the production thereof
CN1242060C (zh) * 1997-12-20 2006-02-15 金克克国际有限公司 基体颗粒
EP1021525A1 (en) 1997-12-20 2000-07-26 Genencor International, Inc. Fluidized bed matrix granule
NZ505298A (en) 1997-12-20 2002-10-25 Genencor Int Enzyme (protease) granule formulations with salt hydrate and polymer coating having high solubility and increased stability
JP2003514922A (ja) 1999-10-15 2003-04-22 ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド 蛋白質含有顆粒および顆粒配合物

Also Published As

Publication number Publication date
DE60024656D1 (de) 2006-01-12
EP1632561B1 (en) 2010-07-07
PT1632561E (pt) 2010-07-29
ES2249300T3 (es) 2006-04-01
DK1220887T3 (da) 2006-04-10
EP1632561A1 (en) 2006-03-08
CA2387511A1 (en) 2001-04-26
WO2001029170A1 (en) 2001-04-26
ATE473265T1 (de) 2010-07-15
EP1220887B1 (en) 2005-12-07
JP2003514922A (ja) 2003-04-22
DK1632561T3 (da) 2010-10-11
ATE312162T1 (de) 2005-12-15
AU7875800A (en) 2001-04-30
DE60044652D1 (de) 2010-08-19
DE60024656T2 (de) 2006-06-22
EP1220887A1 (en) 2002-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2355123T3 (es) Gránulo de baja densidad en lecho fluidizado.
ES2276482T3 (es) Granulo con material de barrera hidratado.
ES2348461T3 (es) Gránulos que contienen proteínas y formulaciones de gránulos.
US6423517B2 (en) Granule containing protein and salt layered on an inert particle
ES2257999T3 (es) Composiciones de baja densidad y materiales particulados que incluyen las mismas.
EP1037968B1 (en) Matrix granule
EP0270608B1 (en) Coated detergent enzymes
ES2237209T3 (es) Granulo de matriz.
US20010056177A1 (en) Matrix granule
JP7680825B2 (ja) 低凝集の酵素含有粒子
MXPA01004174A (es) Granulos con matriz de proteinas