ES2379587T3

ES2379587T3 - Amidofenoxiindazoles como inhibidores de C-Met

Info

Publication number: ES2379587T3
Application number: ES09790440T
Authority: ES
Inventors: Tiechao Li; Mark Andrew Pobanz; Chuan Shih; Zhipei Wu; Wei Jennifer Yang; Boyu Zhong
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2008-07-24
Filing date: 2009-07-15
Publication date: 2012-04-27
Anticipated expiration: 2029-07-15
Also published as: IL210490A0; AR074632A1; IL210490A; MX2011000925A; CR20110046A; HK1155172A1; US20100022529A1; HRP20120202T1; CA2731773C; MA32594B1; PE20110150A1; TWI365185B; ECSP11010778A; SV2011003816A; EA201170252A1; DOP2011000009A; JP2011529054A; MY163852A; KR20110022691A; CA2731773A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula: en la que: R1 es H o metilo; R2 es amino, dimetilamino, fluoro, ciclopropilo, piridilo opcionalmente substituido con un substituyente amino o substituyentes 1, 2-metilo, pirazolilo opcionalmente substituido con dos substituyentes metilo, 2-metoxipirimidin-5-ilo, 4-metilsulfonilfenilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilamino, (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino carbonilo, o un substituyente morfolinil-4-ilo; en la que Ra, Rb y Rc están independientemente seleccionados entre H o metilo; R3 es H o F; R4 es H, metilo, piperidin-1-ilmetilo, morfolin-4-ilmetilo, o pirazol-1-ilmetilo; R5 es H o F; y X es CH=N, CH=CH, CH=C (CH3), C (CH3) =CH, C (CH3) =N, N (CH3) o C (morfolin-4-ilmetil) =CH; o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo.

Description

Amidofenoxiindazoles útiles como inhibidores de c-Met

c-Met es un miembro de la familia del receptor del factor de crecimiento tirosina quinasa. La expresión de c-Met se produce en células endoteliales, epiteliales, y mesenquimatosas. La unión a c-Met del ligando endógeno, el factor de 5 crecimiento de hepatocitos (HGF), promueve la migración, proliferación, e invasión de las células.

c-Met está implicada en la progresión de ciertos tumores. La sobreexpresión de c-Met ha sido mostrada en numerosos tipos de tumores incluyendo colon, mama, renal, pulmón, hemangiomas, leucemia mieloide de célula escamosa, melanomas, glioblastomas, y astrocitomas. La activación de los receptores de c-Met de células de tumores potencia la proliferación, invasión/metástasis, y resistencia de las células de tumores a la apoptosis y a terapias citotóxicas.

10 Se ha informado de diversos inhibidores de c-Met amidofenoxiheteroarilos. Véanse, por ejemplo las Patentes de EE.UU. 2005/0288290, 2006/0211695, 2006/0004006, y la Patente WO 2007/103308.

Sin embargo, existe aún una necesidad de compuestos adicionales que inhiban la c-Met. La presente invención proporciona nuevos compuestos de amidofenoxiindazol que se estima tienen uso clínico para el tratamiento del cáncer mediante la inhibición de la c-Met. Los compuestos preferidos de la presente invención se estiman igualmen

15 te que proporcionan una mejora de potencia sobre otros ciertos compuestos inhibidores de la c-Met que se encuentran en la técnica.

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula I:

Un compuesto de la fórmula:

20 Fórmula I en el que: R1 es H o metilo; R2 es amino, dimetilamino, fluoro, ciclopropilo, piridilo opcionalmente substituido con un substituyente amino

o substituyentes 1,2-metilo, pirazolilo opcionalmente substituido con dos substituyentes metilo, 2-metoxi

25 pirimidin-5-ilo, 4-metilsulfonilfenilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilamino, (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino carbonilo, o un substituyente morfolinil-4-ilo;

en la que Ra, Rb y Rc están independientemente seleccionados entre H o metilo; R3 es H o F; R4 es H, metilo, piperidin-1-ilmetilo, morfolin-4-ilmetilo, o pirazol-1-ilmetilo; R5 es H o F; y X es CH=N, CH=CH, CH=C(CH3), C(CH3)=CH, C(CH3)=N, N(CH3) o C(morfolin-4-ilmetil)=CH;

o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo.

La presente invención proporciona igualmente una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable farmacéuticamente.

La presente invención proporciona igualmente un compuesto de Fórmula I o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, para uso como un medicamento. Adicionalmente, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. En particular, estos cánceres están seleccionados entre el grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorectal, cáncer renal, cáncer pancreático, cáncer de cabeza, cáncer de cuello, carcinoma de célula renal papilar hereditario, carcinoma hepatocelular infantil, y cáncer gástrico. Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer seleccionado entre el grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorectal, cáncer renal, cáncer pancreático, cáncer de cabeza, cáncer de cuello, carcinoma de célula renal papilar hereditario, carcinoma hepatocelular infantil, y cáncer gástrico, que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo como un ingrediente activo.

Se da por entendido por el lector experto que la mayoría o la totalidad de los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales. Los compuestos de la presente invención son aminas y, de acuerdo con ello, reaccionan con cualquiera de entre un cierto número de ácidos inorgánicos y orgánicos para formar sales de adición de ácido aceptables. Dichas sales de adición de ácido aceptables farmacéuticamente y la metodología usual para la preparación de los mismos son bien conocidas en la técnica. Véanse, por ejemplo, P. Stahl, y otros, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, (2002)); L.D. Bighley, S.M. Berge, D.C. Monkhouse, en Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, Eds. J. Swarbrick y J.C. Boylan, vol. 13, Marcel Decker, Inc., New York, Basel, Hong Kong, págs. 453-499, (1995); S.M. Berge, y otros, “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 66, Nº. 1, (Enero 1977). Las sales aceptables farmacéuticamente preferidas de los compuestos de la presente invención son las sales metanosulfonato.

Los preferidos son los compuestos de Fórmula I en los que:

(a): R1 es H;

(b): R1 es metilo;

(c): R2 es amino, dimetilamino, ciclopropilo, 6-metilpiridin-3-ilo, pirazol-4-ilo, o un morfolin-4-ilo de la fórmula:

(d): R2 es amino, dimetilamino, pirazol-4-ilo, o morfolin-4-ilo;

(e): R2 es pirazol-4-ilo;

(f): R1 es metilo y R2 es pirazol-4-ilo;

(g): R3 es F;

(h): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, y R3 es F;

(i): R4 es metilo, o morfolin-4-ilmetilo;

(j): R4 es H;

(k): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, y R4 es H;

(l): R5 es H;

(m): R5 es F;

(n): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, y R5 es H;

(o): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, y R5 es F;

(p): X es CH=CH o CH=C(CH3);

(q): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, R5 es H, y X es CH=CH o CH=C(CH3);

(r): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, R5 es F, y X es CH=CH o CH=C(CH3);

(s): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, R5 es H o F, y X es CH=C(CH3);

(t): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, R5 es H, y X es CH=C(CH3); y

(u): R1 es metilo, R2 es pirazol-4-ilo, R3 es F, R4 es H, R5 es F y X es CH=C(CH3).

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con los esquemas de síntesis siguientes, mediante procedimientos bien conocidos y apreciados en la técnica. Las condiciones de reacción adecuadas para las etapas de estos esquemas son bien conocidas en la técnica y las substituciones apropiadas de disolventes y coreactivos entran dentro del conocimiento de la técnica. Igualmente, los expertos en la técnica comprenderán que pueden aislarse y/o purificarse productos intermedios de síntesis mediante diversas técnicas bien conocidas según necesidad o deseo, y que, frecuentemente, será posible usar diversos productos intermedios directamente en las etapas de síntesis posteriores con una pequeña o nula purificación. Además, el técnico experto comprenderá que, en algunas circunstancias, el orden en el cual se introducen los restos no es crítico. El orden particular de las etapas requeridas para producir los compuestos de la presente invención depende del compuesto particular a sintetizar, del compuesto de partida, y de la responsabilidad relativa de los restos substituidos, tal como es bien sabido por el químico experto. Todos los substituyentes, salvo que se indique lo contrario, son tal como previamente se han definido, y todos los reactivos son bien conocidos y apreciados en la técnica.

Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse tal como se ilustra en el Esquema I siguiente, en el que X, R3, R4, y R5 son como previamente se han definido, y R1’ y R2’ son iguales a o precursores de R1 y R2.

Esquema I

Los compuestos de la presente invención pueden llevarse a cabo mediante condiciones de acoplamiento de péptidos convencionales bien conocidas para el técnico experto. Una indazol anilina adecuadamente substituida de fórmula (a) se hace reaccionar con un compuesto de ácido de fórmula (b), en la presencia de un reactivo de acoplamiento de péptido, tal como clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCl), hidrato de 1hidroxibenzotriazol (HOBt), una base apropiada tal como N-metilmorfolina, N,N-diisopropiletilamina (DIPEA), o trietilamina (TEA), en un disolvente adecuado tal como diclorometano (DCM), N,N-dimetilformamida (DMF) o tetrahidrofurano (THF), para proporcionar la amida deseada de la presente invención. Si R1’ es un grupo de protección de nitrógeno adecuado tal como tetrahidropirano (THP), o si R2’ es un grupo funcional protegido por un grupo de protección de nitrógeno, es necesaria una etapa de desprotección para obtener el compuesto deseado de la presente invención.

Esquema II

peratura elevada, en la presencia de una base adecuada tal como bicarbonato sódico en un disolvente apropiado, tal como DMF, para proporcionar el compuesto de fórmula (e). El compuesto de fórmula (e) puede ser metilado con un reactivo de metilación apropiado, tal como yoduro de metilo, en un disolvente adecuado, tal como THF, con una base adecuada, tal como terc-butóxido potásico, para proporcionar el compuesto de fórmula (d), en el que R1’ es un metilo. El compuesto de fórmula (e) puede igualmente protegerse con un reactivo de protección adecuado, tal como 2,3-dihidropirano (DHP), en un disolvente apropiado, tal como THF, en la presencia de un ácido, tal como CH3SO3H, para proporcionar el compuesto de fórmula (d), en donde R1’ es un grupo de protección, tal como 2-tetrahidropiranilo. [Los procedimientos para la introducción o eliminación de grupos de protección son bien conocidos en la técnica; véase, por ejemplo, Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd. Ed., John Wiley and Sons, New York, (1999)].

El compuesto de fórmula (d) puede reaccionar bajo diversas condiciones de acoplamiento facilitadas por metales de transición, para proporcionar el compuesto deseado de fórmula (c) con un R2’ apropiadamente substituido, tal como anteriormente se definido. Más específicamente, si es un acoplamiento carbono-carbono, el compuesto de fórmula

(c) puede llevarse a cabo bajo condiciones de acoplamiento tal como un acoplamiento de Suziki con un ácido borónico adecuado, un catalizador apropiado, tal como cloruro de 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno paladio(II) (PdCl2(dppf)), y una base apropiada, tal como CsF, en un disolvente adecuado, tal como 1,4-dioxano, a temperatura elevada. Si es un acoplamiento carbono-nitrógeno, el compuesto de fórmula (c) puede llevarse a cabo bajo condiciones de acoplamiento, tal como acoplamiento de Buchwald-Hartwig, con un reactivo que contenga nitrógeno adecuado, tal como morfolina, un ligando adecuado, tal como 2-di-terc-butil-fosfino-2’-metilbifenilo, una base tal como KOH, y un catalizador tal como tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(0) (Pd2(dba)3), en un disolvente adecuado, tal como terc-butanol, a temperatura elevada. La reacción de acoplamiento puede llevarse a cabo bajo condiciones de calentamiento convencionales o bajo condiciones de reacción mediante microondas bien conocidas para el técnico experto.

El compuesto de fórmula (c) puede reducirse a un compuesto amino bajo diversas condiciones de reducción bien conocidas para el técnico experto. Más específicamente, el compuesto de fórmula (c) puede reaccionar con cloruro estannoso en un disolvente adecuado, tal como acetato de etilo (EtOAc)/etanol (EtOH) a una temperatura elevada, para proporcionar el compuesto deseado de fórmula (a). Si R1’ es un grupo de protección de nitrógeno, tal como 2tetrahidropiranilo, el grupo de protección se escindirá. R1’ será un protón después de la reducción.

El compuesto de fórmula (c) puede igualmente reducirse mediante reacción con N.N-dimetilhidracina y FeCl3 en un disolvente apropiado, tal como metanol (MeOH), o H2/paladio sobre carbón (Pd/C) en disolvente apropiado, tal como EtOH. Ambas condiciones de reacción reducirán únicamente el grupo nitro a un grupo amino, y dejarán el grupo de protección de nitrógeno, R1’, sin tocar.

Es bien sabido para el técnico experto, que las reacciones sobre el nitrógeno de algunos heterociclos que contienen nitrógeno, tal como compuestos de indazol, podrían generar tautómeros. La relación de tautómeros depende esencialmente del modo de llevar a cabo las reacciones y de diferentes condiciones. Los productos intermedios divulgados en la presente invención con grupos de protección de nitrógeno, tal como THP, pueden existir como regioisómeros. En los compuestos de la presente invención, cuando R1 es un protón, este puede existir como un par de tautómeros que se intercambian completamente, tal como se ilustra en el Esquema III.

Esquema III

Las preparaciones y ejemplos siguientes están enumerados usando la ChemDraw® Ultra versión 10.0.

Preparación 1

N-(4-metoxi-2-metilfenil) acetamida

A una solución de 4-metoxi-2-metilanilina (120 g, 0,88 mol) en DCM (400 ml) se agregó anhídrido de ácido acético (120 ml, 1,2 mol), gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de agregar éter de petróleo (PE) (1,6 litros), la suspensión se agitó durante una hora más. El precipitado se recogió mediante filtración y se lavó con PE, proporcionando el producto en forma de un sólido de color rosa (130 g, 82% de rendimiento). MS (m/z): 180,0 (M+H).

Preparación 2

N-(5-bromo-4-metoxi-2-metilfenil)acetamida

A una solución de N-(4-metoxi-2-metilfenil)acetamida (130 g, 0,73 mol) en ácido acético (800 ml) se agregó bromo (42 ml, 0,8 mol), gota a gota a 0ºC. Después de la adición, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se agregó NaHSO3 acuoso saturado hasta que se obtuvo una solución transparente y, a continuación, se agregó una gran cantidad de agua (2 litros), formando un precipitado. El sólido precipitado se recogió y se lavó con agua, proporcionando el producto bruto (cromatografía de capa fina (TLC), disolvente: DCM:EtOAc (10:1). El sólido se disolvió en la cantidad mínima de DCM a reflujo y, a continuación, se agregó PE (aproximadamente se usó 10-20% en volumen de DCM). La solución resultante se enfrió a temperatura ambiente. Después de 2 horas, el sólido precipitado se recogió y lavó con PE, proporcionando un producto de color blanco (108 g, 57% de rendimiento). MS (m/z): 260,0 (M+H).

Preparación 3

5-bromo-4-metoxi-2-metilanilina

A una solución de N-(5-bromo-4-metoxi-2-metilfenil)acetamida (108 g, 0,42 mol) en MeOH (400 ml) se agregó HCl concentrado (160 ml, 2 mol). Después de calentamiento a reflujo durante una noche, la mezcla se neutralizó con NaHCO3 acuoso, y se extrajo con EtOAc (1200 ml). La fase orgánica se secó y se concentró, proporcionando el producto (76 g, 84% de rendimiento). MS (m/z): 216,0 (M+H).

Preparación 4

Tetrafluoroborato de 1-(5-bromo-4-metoxi-2-metilfenil)diazonio

A una solución de 5-bromo-4-metoxi-2-metilanilina (76 g, 0,35 mol) en HBF4 (48% en peso, 140 ml) y H2O (280 ml) se agregó una solución de NaNO2 (27,6 g, 0,4 mol) en H2O (60 ml) a 0ºC. Una vez completada la adición, la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 30 minutos. El precipitado se filtró, se lavó con una pequeña cantidad de agua de hielo varias veces y se secó, proporcionando el producto (110 g, 99% de rendimiento). MS (m/z): 229,0 (M+H).

Preparación 5

6-bromo-5-metoxi-1H-indazol

Se agregó tetrafluoroborato de 1-(5-bromo-4-metoxi-2-metilfenil)diazonio (110 g, 0,35 mol) en una sola porción a una mezcla agitada de KOAc (140,5 g, 1,43 mol) y 18-corona-6-éter (9,3 g, 0,035 mol) en CHCl3 (800 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con DCM. El filtrado combinado se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 50:1), proporcionando el producto (10 g). La torta se agregó a THF (1600 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró, proporcionando 10 g del producto bruto (86% de rendimiento total). MS (m/z): 229,0 (M+H).

Preparación 6

6-bromo-5-hidroxi-1H-indazol

A una solución de 6-bromo-5-metoxi-1H-indazol (60 g, 0,265 mol) en DCM (1300 ml), se agregó una solución de BBr3 (105 g, 0,42 mol) en DCM (200 ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. A continuación, la solución de reacción se interrumpió con MeOH a 0ºC. El disolvente se eliminó en vacío y el residuo se neutralizó con NaHCO3 sólido. La mezcla se repartió en agua (150 ml) y EtOAc (1500 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (1500 ml) dos veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron, proporcionado el producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice (PE:THF = 2:1), proporcionando el producto deseado (42,5 g, 75% de rendimiento). MS (m/z): 215,0 (M+H).

Preparación 7

6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1H-indazol

Una mezcla de 6-bromo-5-hidroxi-1H-indazol (7,0 g, 33,0 mmol), 3,4-difluoronitrobenceno (4,98 mg, 31,0 mmol), NaHCO3 (2,5 g, 31,0 mmol) en DMF (10 ml), se agitó a 80ºC durante 4 horas. A continuación, se agregó LiCl (solución acuosa al 10%) y la solución se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:DCM (1:1), proporcionando el producto deseado (5,5 g, 46,6% de rendimiento). MS (m/z): 354,0 (M+H).

El compuesto siguiente se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 7:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

8: 6-bromo-5-(4-nitrofenoxi)-1H-indazol 336

Preparación 9

6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol

A una solución de 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1H-indazol (5,0 g, 14,2 mmol) en THF (50 ml), se agregó DHP (2,4 g, 28,5 mmol) y CH3SO3H (1,0 g, 10,4 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora.. A continuación, se agregaron soluciones de EtOAc y NaHCO3 acuosa. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (5:1), proporcionando el producto deseado (5,5 g, 89% de rendimiento). MS (m/z): 436,0 (M+H).

El compuesto siguiente se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 9:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

10: 6-bromo-5-(4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol 418,0

Preparación 11

6-bromo-1-metil-5-(4-nitrofenoxi)-1H-indazol

A una mezcla de 6-bromo-5-(4-nitrofenoxi)-1H-indazol (2,68 g, 8,02 mmol) y KOH (600 mg, 10,69 mmol) en acetona (100 ml) enfriada con un baño de hielo-agua, se agregó gota a gota yoduro de metilo (0,55 ml, 8,83 mmol). Después de agitar la mezcla de reacción a 0ºC durante 2 horas, esta se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se eliminó, y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto (1,50 g, 53,7% de rendimiento). MS (m/z): 348,0 (M+H).

El compuesto siguiente se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 11:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

12: 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol 365,9

Como alternativa, 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol

(Preparación 12) puede prepararse igualmente en el procedimiento de 3 etapas siguiente:

Se agitaron 2,4-dibromo-5-hidroxi-benzaldehido (50 g, 178,6 mmol), 1,2-difluoro-4-nitrobenceno (28,4 g, 178,6 mmol) y carbonato potásico (49,0 357,2 mmol) en DMF (500 ml) a 60ºC durante 2 horas. La reacción se interrumpió con agua (1000 ml) y se extrajo con metil terc-butil éter (MTBE) (2 x 500 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa de cloruro sódico saturada (2 x 500 ml), se secó con sulfato sódico anhidro, y se concentró, obteniéndose un sólido de color amarillo. El sólido bruto se recristalizó en EtOAc/PE (1:5), proporcionando 2,4-dibromo-5-(2-fluoro-4nitrofenoxi)benzaldehído en forma de un sólido de color amarillo (52,8 g, 70,6% de rendimiento).

Se mantuvo a reflujo 2,4-dibromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)benzaldehído (13,0 g, 31,0 mmol) con metilhidracina (4,3 g, 93 mmol) en THF (130 ml) durante 2 horas. La reacción se interrumpió con agua (150 ml) y se extrajo con MTBE (2 x 150 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa de cloruro sódico saturada (2 x 150 ml), se secó con sulfato sódico anhidro, y se concentró, obteniéndose un sólido. El sólido bruto se recristalizó en EtOAc/hexano, obteniéndose 1-(2,4-dibromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)bencilidene)-2-metilhidracina en forma de un sólido de color amarillo (10,6 g, 76,7% de rendimiento). MS (m/z): 447,9 (M+H).

Se combinaron 1-(2,4-dibromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)bencilidene)-2-metilhidracina (1,0 g, 2,2 mmol), cloruro cuproso (22 mg, 0,2 mmol), carbonato potásico (0,638 g, 7,2 mmol) y DMF (10 ml) con una varilla de agitación en un tubo a presión bajo nitrógeno. La tapa se selló y el tubo se introdujo en un baño de acetite con agitación. El baño se calentó a 100ºC durante 30 minutos y se mantuvo a 100ºC durante 6 horas y, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió dentro de un embudo de separación que contenía MTBE (10 ml) y agua (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con una porción adicional de MTBE (10 ml). Las capas orgánicas se combinaron, y se lavaron con agua seguida por solución acuosa de cloruro sódico saturada. La capa orgánica se secó sobre sulfato magnésico y se concentró, proporcionando 0,70 g de producto bruto. El sólido bruto se disolvió en DCM y heptano y, continuación, se concentró, para eliminar el DCM, dando como resultafo la formación de una suspensión. El producto se recogió mediante filtración y se secó bajo vacío, proporcionando 6bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol en forma de un sólido (0,65 g, 79% de rendimiento). MS (m/z): 367,8 (M+H).

Preparación 13

6-bromo-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5-ol

A una solución de 6-bromo-5-hidroxi-1H-indazol (725,0 g, 3,4 mol) en THF (10,2 litros), se agregó DHP (336,5 ml, 3,57 mol) y CH3SO3H (65,4 g, 9,68 mol) a temperatura ambiente. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas. La mezcla de reacción se interrumpió con agua destilada (6 litros) y se extrajo con EtOAc (6 litros). Se agregó solución de NaHCO3 acuosa saturada (1100 ml) para ajustar el pH a 8. Después de la separación de fase, la fase orgánica se lavó con agua (4 litros) y, a continuación, con cloruro sódico acuoso saturado (3 litros), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró, proporcionando el producto en forma de un sólido (1,64 kg, 99,3% de rendimiento). MS (m/z): 299,0 (M+H).

Preparación 14

6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol

A una solución de 6-bromo-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5-ol (1,475 kg, 4,96 mol) en DMF (5,3 litros), se agregó 3,4-difluoronitrobenceno (1,18 kg, 7,45 mol) y NaHCO3 (625,5 g, 7,45 mol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 70ºC durante 10 horas y, a continuación, se enfrió a menos de 20ºC. A la solución se agregó lentamente agua desionizada (DI) (7,9 ml) y la suspensión resultante se agitó a 15ºC durante una hora.El sólido se recogió mediante filtración al vacío, y la torta del sólido se lavó con agua (8 litros). A continuación, esta se secó al aire bajo vacío y se trituró con metil MTBE (18,6 litros) bajo condiciones de reflujo durante dos horas. A continuación, la suspensión se enfrió a temperatura ambiente y el sólido se recogió mediante filtración al vacío. La torta del sólido se lavó con MTBE (4 litros x 2) y se secó en una estufa de vacio a 35ºC, proporcionando el producto deseado (1,405 kg, 64,9% de rendimiento). MS (m/z): 436,0 (M+H).

Preparación 15

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(piridin-4-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol

Una mezcla de 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol (5,0 g, 11,5 mmol), ácido 4piridinoborónico (3,0 g, 24,3 mmol), PdCl2(dppf) (1,8 g, 2,25 mmol) y CsF (5,0 g, 33,0 mmol) en 1,4-dioxano (100 ml), se agitó a 110ºC durante una noche. A continuación, se agregaron NH4Cl acuoso y EtOAc. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice eluyendo con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto deseado (2,8 g, 56% de rendimiento). MS m/z): 435,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 15:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

16: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(4-metilsulfonil)fenil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1Hindazol 512,1

17: 4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)-1Hpirazol-1-carboxilato de terc-butilo 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(1H-pirazol-4-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1Hindazol 524,1 424,1

18: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(piridin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol 435,1

19: 6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidropiran-2-il)-1Hindazol 452,1

20: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(2-metoxipirimidin-5-il)-1-(tetrahidropiran-2-il)-1Hindazol 466,1

21: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(2-metilpiridin-4-il)-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-indazol 449,1

22*: 6-ciclopropil-5--(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol 398

23: 4-(1-metil-5-(4-nitrofenoxi)-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo 1-metil-5-(4-nitrofenoxi)-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol 436,0 336,0

24: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-6-(2-metilpiridin-4-il)-1H-indazol 379,1

25: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-6-(piridin-3-il)-1H-indazol 3651

26: 4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo 454,0

27: 4-(5-(2-fluoro-1-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol 454,1 354,1

*: La reacción se llevó a cabo bajo condiciones de microondas a 95ºC durante aproximadamente 90 minutos

Preparación 28

10 6-(2,6-dimetilpiridin-4-il)-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidropiran-2-il)-2H-indazol

A una solución de 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidropiran-2-il)-2H-indazol (1,31 g, 3,0 mmol) en 1,4dioxano (20 ml), se agregó bis(pinacolato)diboro (0,91 g, 3,6 mmol), Pd2(dba)3 (0,14 g, 0,2 mmol), triciclohexilfosfina (0,1 g g, 0,4 mmol), acetato potásico (KOAc) (0,59 g, 6,0 mmol) bajo N2. Después calentar la mezcla de reacción a reflujo durante 3 horas bajo atmósfera de N2, esta se enfrió a temperatura ambiente. Se agregaron bromhidrato de 415 bromo-2,6-dimetilpiridina (0,8 g, 3,0 mmol), PdCl2(dppf) (0,16 g, 0,2 mmol), CsF (1,38 g, 9,0 mmol) bajo N2. La mezcla resultante se calentó a reflujo durante una noche bajo N2. El sólido se separó por filtración y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyéndo con PE:EtOAc (desde

5:1 hasta 1:1), proporcionando el producto (0,67 g, 48,3% de rendimiento). MS (m/z): 463,1 (M+H).

Preparación 29

20 4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)morfolina

A una solución de 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidropiran-2-il)-2H-indazol (8,0 g, 18 mmol) en tercbutanol (150 ml) y H2O (3,2 ml), se agregó Pd2(dba)3 (320 mg, 0,35 mmol), 2-di-terc-butilfosfino-2’-metilbifenilo (480 mg, 1,54 mmol), KOH (3,2 g g, 57 mmol) y morfolina (3,2 g, 36,7 mmol) bajo N2. Después agitar la mezcla a 70ºC durante 2 horas bajo atmósfera de N2, esta se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se repartió entre EtOAc (100 ml) y NH4Cl acuoso saturado (30 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyéndo con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto (4,5 g, 56,5% de rendimiento). MS (m/z): 443,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 29:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

30: 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-N,N-dimetil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol6-amina 401,2

31: N,N-dimetil-5-(4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-amina 383,1

Preparación 32

4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-6-il)-2-metilmorfolina (racémica)

A un vial de microondas de 25 ml se agregaron 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2Hindazol (0,8 g, 1,8 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (98 mg, 165 µmol) y Pd2(dba)3 (50 mg, 55 µmol). La mezcla se suspendió en tolueno (12 ml, 113 mmol) y, a continuación, se agregaron clorhidrato de 2metilmorfolina (278 mg, 2,02 mmol) y terc-butóxido sódico (454 mg, 4,58 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 150ºC durante 25 minutos en un reactor de microondas. A continuación, la mezcla se concentró y el residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyéndo con hexanos (A) y EtOAc (B), gradiente desde 90% (A):10% (B) hasta 60% (A):40% (B) durante 60 minutos y, a continuación, a 50% (A):50% (B) durante 20 minutos, proporcionando un sólido de color naranja como el producto deseado (419 mg, 39% de rendimiento). MS (m/z): 457 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 32:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

33: (2R)-4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-6-il)-2metilmorfolina 456,8

34: (2S,6R)-4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-6il)-2,6-dimetilmorfolina 470,8

Preparación 35

4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-6-il)-2,2-dimetilmorfolina

Se agregó 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol (1,5 g, 3,4 mmol) a un tubo Genevac Carousel® de 50 ml y se suspendió en el hidrato de amileno (10 ml, 91,4 mmol) y se borboteó N en la suspensión. A la mezcla, se agregaron 2-(di-terc-butilfosfino)-2’-metilbifenilo (97,7 mg, 3,09 µmol), Pd2(dba)3 (94,5 mg, 103 µmol) y agua DI (0,3 ml), y el borboteo de N2 se continuó durante 10 minutos. A esta mezcla se agregaron clorhidrato 2,2-dimetilmorfolina (1,04 g, 6,9 mmol) y una solución de KOH (617 mg, 11,0 mmol), disuelta en 0,3 ml de agua destilada. La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante 2 horas y, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla se vertió en EtOAc (300 ml), se lavó con agua destilada (1 x 100 ml) y, a continuación, con cloruro sódico acuoso saturado (100 ml). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc (100 ml). La solución orgánica combinada se secó con Na2SO4, se filtró, y se concentró hasta sequedad, proporcionando un sólido de color dorado. Este sólido se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyéndo con hexanos (A) y EtOAc (B), gradiente desde 95% (A):5% (B) hasta 75% (A):25% (B) durante 70 minutos, proporcionando un sólido de color amarillo claro como el producto deseado (410 mg, 25% de rendimiento). MS (m/z): 470,8 (M+H).

Preparación 36

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(piridin-4-il)-1H-indazol

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(piridin-4-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (2,8 g, 6,45 mmol) en EtOH (30 ml), se agregó HCl (concentrado, 5 ml). La mezcla se agitó a 80ºC durante 2 horas. A continuación, se

agregaron NaHCO3 acuoso y EtOAc. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyéndo con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto deseado (1,95 g, 86,0% de rendimiento). MS (m/z): 351,0 (M+H).

Preparación 37

3-fluoro-4-(6-(piridin-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina

Una mezcla de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(piridin-4-il)-1H-indazol (1,95 g, 4,5 mmol) y SnCl2·2H2O (10,2 g, 45,3 mmol) en EtOAc/EtOH (200 ml/10 ml)), se agitó a 80ºC durante 2 horas. A continuación, se agregaron NaHCO3 acuoso y EtOAc. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyéndo con PE:EtOAc (2:1), proporcionando el producto deseado (1,10 g, 61,0% de rendimiento). MS (m/z): 321,0 (M+H).

Preparación 38

3-fluoro-4-(6-(4-(metilsulfonil)fenil-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(4-(metilsulfonil)fenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (320 mg, 0,63 mmol) en EtOH (50 ml), se agregó Pd/C (10%, 100 mg). La mezcla resultante se desgasificó mediante vacío y se volvió a rellenar con H2 tres veces. Esta se agitó bajo una atmósfera de H2 a temperatura ambiente durante una noche. El sólido se eliminó mediante filtración y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyéndo con DCM:MeOH (20:1), proporcionando el producto deseado (250 mg, 83,0% de rendimiento). MS (m/z): 482,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 38:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

39: 3-fluoro-4-(1-metil-6-(2-metilpiridin-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina 349,1

40: 4-(5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo 424

Preparación 41

4-(6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluoroanilina

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(1H-pirazol-4-il)-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-indazol (900 mg, 2,13 mmol) y éster terc-butílico del ácido 4-[5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-indazol-6-il]pirazol-1-carboxílico (3,1 g, 5,92 mmol) en EtOAc/EtOH (75 ml/75 ml), se agregó dihidrato de cloruro estannoso (10 g, 52,74 mmol). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante una noche. Después de enfriarla y basificarla con NaHCO3 acuoso saturado a pH 8-9, la mezcla se extrajo con EtOAc (100 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyéndo primeramente con PE:EtOAc (1:1) y, a continuación, con EtOAc, proporcionando el producto (1,75 g, 71,0% de rendimiento). MS (m/z): 310,0 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 41:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

42: 3-fluoro-4-(6-(piridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina 321,1

43: 4-(6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluoroanilina 338,1

44: 3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5-iloxi)anilina 329,1

45: 4-[6-(2,6-dimetilpiridin-4-il)-1H-indazol-5-iloxi]-3-fluoroanilina 349,1

46: 3-fluoro-4-[6-(2-metoxipirimidin-5-il)-1H-indazol-5-iloxi]anilina 352,1

47: 5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-N,N-dimetil-1H-indazol-6-amina 287,1

48: 3-fluoro-4-(6-(2-metilpiridin-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina 335,1

49: 5-(4-aminofenoxi)-N,N-dimetil-1H-indazol-6-amina 269,1

(Continuación)

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

50: 4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina 306,0

51: 3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina 324,1

52: 3-fluoro-4-(1-metil-6-(piridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina 335,1

Preparación 53

4-(6-ciclopropil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-6-iloxi)-3-fluoroanilina

A un vial de vidrio de 25 ml se agregó 6-ciclopropil-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol (395 mg, 994 µmol) y MeOH (20 ml, 494 mmol). A la suspensión se agregó N,N-dimetilhidracina (756 µl, 9,94 mmol) y FeCl3 (163 mg, 994 µmol). El vial se cerró y se calentó a 60ºC y se agitó durante 2 horas y, a continuación, se agitó a 50ºC durante una noche. La mezcla se filtró sobre un embudo Büchner y el sólido se lavó con MeOH (100 ml). El filtrado se recogió y se concentró, proporcionando un sólido de color parda/naranja. El residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice, eluyéndo con DCM (A) y MeOH al 10% en una solución de DCM (B), gradiente desde 100% (A) hasta 85% (A):15% (B) durante 50 minutos, proporcionando un sólido de color amarillo como el compuesto del epígrafe (358 mg, 98% de rendimiento). MS (m/z): 368 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 53:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

54: 3-fluoro-4-(6-(2-metilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5iloxi)anilina 427

55: 4-(6-(2,2-dimetilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5-iloxi)-3fluoroanilina 441

56: 3-fluoro-4-(6-(R))-2-metilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5iloxi)anilina 427

57: 4-(6-(2S,6R))-2,6-dimetilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5iloxi)-3-fluoroanilina 441

58: 3-fluoro-4-(6-morfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5-iloxi)anilina 413

Preparación 59

N-(difenilmetileno)-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-amina

A un vial de microondas de 10 ml se agregaron 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol (500 mg, 1,37 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (73 mg, 123 µmol) y Pd2(dba)3 (38 mg, 41 µmol). La mezcla se suspendió en tolueno (5 ml, 47 mmol) y se agregó benzofenona imina (272 mg, 1,5 mmol) y terc-butóxido sódico (203 mg, 2,05 mmol). La mezcla se calentó a 150ºC durante 20 minutos en un reactor de microondas. Después de enfriamiento, la solución de reacción se concentró, proporcionando un aceite de color pardo, el cual se disolvió en DCM (150 ml) y se lavó con cloruro sódico acuoso saturado (2 x 50 ml). Las capas acuosas se combinaron y se extrajeron con DCM (1 x 50 ml), se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron, proporcionando un residuo de color pardo. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyéndo con hexanos (A) y EtOAc (B), gradiente desde 85% (A):15% (B) hasta 50% (A):50% (B) durante 50 minutos, proporcionando un material sólido de color amarillo como el compuesto del epígrafe (574 mg, 90,1% de rendimiento). MS (m/z): 467,2 (M+H).

Preparación 60

5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-N-(benzhidril-1-metil-1H-indazol-6-amina

A un matraz de fondo redondo de 100 ml se agregó N-(difenilmetileno)-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol6-amina (424 mg, 909 µmol) en EtOH (35 ml, 601 mmol). A la mezcla se agregó formiato amónico (1000 mg, 15,9 mmol), seguido de la adición de Pd/C al 10% (300 mg, 141 µmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se calentó a 45ºC durante 15 minutos. El disolvente se eliminó y el residuo se disolvió en DCM (150 ml) y agua destilada (100 ml). La capa orgánica se lavó con agua destilada (1 x 100 ml), y las capas

acuosas combinadas se extrajeron con DCM (1 x 50 ml). La solución orgánica combinada se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró. El producto bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyéndo con hexanos (A) y EtOAc (B), gradiente desde 90% (A):10% (B) hasta 40% (A):60% (B) durante 90 minutos, proporcionando un material sólido de color blanquecino como el compuesto del epígrafe (204 mg, 51% de rendimiento). MS (m/z): 438,8 (M+H).

Preparación 61

Acetato de 1-acetil-6-bromo-1H-indazol-5-ilo

Una mezcla de 6-bromo-5-hidroxi-1H-indazol (25 g, 117 mmol) en anhídrido de ácido acético (75 ml), se calentó a 110ºC con agitación durante 2 horas. Una vez enfriada, se agregó éter dietílico (100 ml). El precipitado se recogió mediante filtración, se lavó con éter dietílico (30 ml), y se secó bajo vacío, proporcionando el producto (34 mg, 98% de rendimiento). MS (m/z): 297,0 (M+H).

Preparación 62

5-hidroxi-1H-indazol-6-carboxilato de etilo

Un autoclave cargado con acetato de 1-acetil-6-bromo-1H-indazol-5-ilo (25 g, 84 mmol), TEA (25 g, 252 mmol), dicloro bis(benzonitrilo)paladio (Pd(PhCN)2Cl2) (1,6 mg, 4,2 mmol), 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno (dppf) (4,7 g, 8,4 mmol) y EtOH (500 ml), se agitó a 130ºC bajo una atmósfera de CO durante 8 horas. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, proporcionando el producto (15,5 g, 90% de rendimiento). MS (m/z): 207,0 (M+H).

Preparación 63

5-hidroxi-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxilato de etilo

A una solución de 5-hidroxi-1H-indazol-6-carboxilato de etilo (15,5 g, 75 mmol) en DCM (100 ml) y THF (100 ml) conteniendo ácido metanosulfónico (721 mg, 7,5 mmol), se agregó una solución de 3,4-dihidro-2H-pirano (6,6 g, 79 mmol) en DCM (20 ml), gota a gota, a temperatura ambiente. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de eliminar el disolvente, se agregaron EtOAc (500 ml), cloruro sódico acuoso saturado (500 ml) y NaHCO3 (5 g). La capa orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, proporcionando el producto (16,8 g, 77% de rendimiento). MS (m/z): 291,1 (M+H).

Preparación 64

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxilato de etilo

Una mezcla de 5-hidroxi-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxilato de etilo (10,8 g, 37 mmol), 1,2-difluoro4-nitrobenceno (7,1 mg, 44 mmol), NaHCO3 (7,4 g, 88 mmol) y DMF (100 ml), se agitó a 80ºC durante 2 horas. Después de enfriarla a temperatura ambiente, se agregaron agua (400 ml) y PE (50 ml) y la mezcla se agitó durante 20 minutos. El precipitado se recogió y se secó bajo vacío a 50ºC, proporcionando el producto (15 g, 95% de rendimiento). MS (m/z): 430,1 (M+H).

Preparación 65

Acido 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxilato de etilo (22 g, 51,2 mmol) en THF (60 ml) y MeOH (60 ml) y H2O (10 ml), se agregó LiOH (3 g, 125 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas y los disolventes orgánicos se eliminaron. El residuo acuoso se acidificó con HCl 6 N frío hasta pH 2, y se extrajo con EtOAc (150 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc:ácido acético (100:100:1), proporcionando el producto (19,5 g, 95% de rendimiento). MS (m/z): 402,1 (M+H).

Preparación 66

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-ilcarbamato de terc-butilo

Una mezcla de ácido 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico (590 mg, 1,47 mmol), difenilfosforil azida (485 mg, 1,76 mmol), TEA (179 mg, 1,76 mmol), tamices moleculares 4 A (3 g) en tercbutanol (40 ml), se agitó a 80ºC durante una noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE/EtOAc (10:1), proporcionando el producto deseado (400 mg, 65% de rendimiento). MS (m/z): 473,1 (M+H).

Preparación 67

5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-ilcarbamato de terc-butilo

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-ilcarbamato de terc-butilo (400 mg, 0,85 mmol) en EtOAc (50 ml), se agregó Pd/C (10%, 50 mg). La mezcla resultante se desgasificó por vacío y se volvió a rellenar con H2 tres veces. La mezcla se agitó bajo una atmósfera de H2 a temperatura ambiente durante una noche. El sólido se eliminó por filtración y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con DCM/MeOH (10:1), proporcionando el producto deseado (300 mg, 80% de rendimiento). MS (m/z): 443,2 (M+H).

Preparación 68

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-6-carboxamida

La solución de ácido 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxílico (0,5 g, 1,25 mmol), tetrahidropiran-4-ilamina (0,13 g, 1,25 mmol), EDCl (0,24 g, 1,25 mmol), HOBT (0,17 g, 1,25 mmol), N-metilmorfolina (0,5 ml) en DMF (5 ml), se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A continuación, la mezcla de reacción se repartió con NH4Cl acuoso saturado (20 ml) y EtOAc (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (1:1), proporcionando el producto (0,49 g, 81,2% de rendimiento). MS (m/z): 485,1 (M+H).

Preparación 69

5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-6-carboxamida

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-6carboxamida (0,49 g, 1,0 mmol) en MeOH (50 ml), se agregó Pd/C (100 g, 10% en peso) bajo N2. La mezcla resultante se desgasificó por vacío y se volvió a rellenar con nitrógeno. A continuación, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de H2 durante una noche. El sólido se eliminó por filtración y el filtrado se concentró, proporcionando un producto bruto (0,42 g, 91,4% de rendimiento). MS (m/z): 455,1 (M+H).

Preparación 70

5-(benciloxi)-6-bromo-1H-indazol

A una solución de 6-bromo-5-hidroxi-1H-indazol (5 g, 23,5 mmol), se agregó alcohol bencílico (3,05 g, 28,2 mmol), PPh3 (7,39 g, 28,2 mmol) y dietilazodicarboxilato (4,46 ml, 28,2 mmol). Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante una noche, se agregaron EtOAc (50 ml) y NH4Cl acuoso saturado (30 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (4:1), proporcionando el producto (5,0 g, 70,2% de rendimiento). MS (m/z): 303,0 (M+H).

Preparación 71

5-(benciloxi)-6-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol

A una solución de 5-(benciloxi)-6-bromo-1H-indazol (5 g, 16,5 mmol) en THF (30 ml) y DCM (30 ml), se agregó 3,4dihidro-2H-pirano (3 ml, 32,8 mmol) y ácido metanosulfónico (1 ml, 15,3 mmol). Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas, se agregaron EtOAc (50 ml) y NaHCO3 acuoso saturado. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (4:1), proporcionando el producto deseado (2,70 g, 42,2% de rendimiento). MS (m/z): 387,0 (M+H).

Preparación 72

5-(benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-amina

A una solución de 5-(benciloxi)-6-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (2 g, 5,16 mmol) en tolueno (30 ml), se agregó tetrahidropiran-4-ilamina (800 mg, 7,91 mmol), acetato de paladio (60 mg, 267 µmol),.2-diciclohexilfosfino2’-(N,N-dimetilamino)bifenilo (200 mg, 508 µmol) y terc-butóxido sódico (700 mg, 7,28 mmol) bajo N2. Después de agitar la reacción a 100ºC bajo N2 durante 1 hora, se agregó EtOAc (30 ml) y la mezcla de reacción se filtró. El filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo primeramente con EtOAc:PE (1/1) y, a continuación, con EtOAc, proporcionando el producto deseado (1,87 g, 88,8% de rendimiento). MS (m/z): 408,2 (M+H).

Preparación 73

N-(5-(benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamida

A una solución de 5-(benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-amina (1,87 g, 4,59 mmol) en THF (30 ml), se agregó cloruro de acetilo (0,39 ml, 5,48 mmol) y K2 CO3 (760 mg, 5,50 mmol). Después de calentar la mezcla de reacción a reflujo durante 30 minutos, se agregaron H2O (20 ml) y EtOAc (30 ml). La fase orgánica se separó, se lavó con NH4Cl acuoso saturado, se secó y se concentró, proporcionando el producto (1,7 g, 82,4% de rendimiento). MS (m/z): 450,2 (M+H).

Preparación 74

N-(5-(hidroxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamida

A una solución de N-(5-(benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamida (1,7 g, 3,78 mmol) en EtOH (100 ml) y EtOAc (100 ml), se agregó Pd/C (100 ml). Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente bajo H2 durante una noche, esta se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo primeramente con EtOAc:PE (1:1) y, a continuación, con EtOAc, proporcionando el producto (1,2 g, 88,2% de rendimiento). MS (m/z): 360,2 (M+H).

Preparación 75

N-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamida

A una solución de N-(5-(hidroxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamida (1,2 g, 3,34 mmol) en DMF (30 ml), se agregó 1,2-difluoro-4-nitrobenceno (0,64 g, 4,02 mmol) y CsCO3 (1,63 g, 5,00 mmol). Después de agitar la mezcla de reacción a 100ºC durante 2 horas, se agregaron EtOAc (60 ml) y NH4Cl acuoso saturado. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo primeramente con PE:EtOAc (1:1) y, a continuación, con EtO-Ac, proporcionando el producto (1,44 g, 86,5% de rendimiento). MS (m/z): 499,2 (M+H).

Preparación 76

5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-6-amina

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 41. MS (m/z): 343,1 (M+H).

Preparación 77

5-(benciloxi)-6-(6-metilpiridin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol

A una solución de 5-(benciloxi)-6-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol (4 g, 10,3 mmol) en 1,4-dioxano (25 ml), se agregó bis(pinacolato)diboro (3 g, 11,8 mmol), dppf (0,3 g, 541 µmol), PdCl2(dppf) (0,42 g, 514 µmol) y KOAc (2 g, 20,4 mmol) bajo N2. Después de agitar la mezcla de reacción a reflujo durante 5 horas, se agregaron 5-bromo2-metilpiridina (2,1 g, 12,2 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (Pd(PPh3)4) (0,6 g, 519 µmol) y Cs2CO3 (4 g, 12,3 mmol) y la mezcla se agitó a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió y se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (2:1), proporcionando el producto (1,9 g, 46,0% de rendimiento). MS (m/z): 400,1 (M+H).

Preparación 78

6-(6-metilpiridin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-5-ol

A una solución de 5-(benciloxi)-6-(6-metilpiridin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol (1,44 g, 3,60 mmol) en EtOH (50 ml) y EtOAc (50 ml), se agregó Pd/C (500 g, 10% en peso) bajo N2. La mezcla resultante se desgasificó por vacío y se volvió a rellenar con nitrógeno. A continuación, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de H2 durante una noche. La mezcla de reacción se filtró. El filtrado se concentró, proporcionando el producto (982 mg, 88,0% de rendimiento). MS (m/z): 310,1 (M+H).

Preparación 79

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-6-(6-metilpiridin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 75. MS (m/z): 449,2 (M+H).

Preparación 80

3-fluoro-4-(6-(6-metilpiridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 41. MS (m/z): 335,1 (M+H).

Preparación 81

1-(4-bromo-2-fluorofenoxi)-2-fluoro-5-metil-4-nitrobenceno

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el mismo procedimiento de Preparación 75. RMN 1H d6-dimetilsulfóxido) (DMSO)) 5 8,20 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,10 (d, 1H).

Preparación 82

4-(4-bromo-2-fluorofenoxi)-5-fluoro-2-metilanilina

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 53. MS (m/z): 315,8 (M+H).

Preparación 83

5-(4-bromo-2-fluorofenoxi)-6-fluoro-1H-indazol

A una suspensión de 4-(4-bromo-2-fluorofenoxi)-5-fluoro-2-metilanilina (5,2 g, 16,6 mmol) en agua (100 ml), se agregó ácido fluorobórico (6,06 g, 33,1 mmol) a temperatura ambiente. La solución se enfrió a 0ºC y se agregó Na-NO2 (1,71 g, 24,8 mmol) en agua (2 ml). La reacción se agitó a 0ºC durante 40 minutos. Se agregó CHCl3 (200 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, y se filtró. Al filtrado se agregó KOAc (7,31 g, 74,5 mmol) y 18corona-6-éter (0,218 g, 0,82 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se lavó con DCM y se filtró, dando lugar al producto deseado en forma de un sólido de color amarillo claro. El filtrado se purificó mediante cromatografía, eluyendo con DCM y, a continuación, EtOAc:hexano (1:1), proporcionando producto deseado adicional. Ambas porciones del sólido se combinaron, dando lugar al producto deseado (3,2 g, 59% de rendimiento). MS (m/z): 324,8 (M+H).

Preparación 84

5-(4-bromo-2-fluorofenoxi)-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-triazol

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 9. MS (m/z): 410,8 (M+H).

Preparación 85

N-(difenilmetileno)-3-fluoro-4-(6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina

La mezcla de 5-(4-bromo-2-fluorofenoxi)-6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol (0,97 g, 2,37 mmol), benzofenona imina (0,64 g, 3,56 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (0,10 g, 0,075 mol), Cs2CO3 (1,16 g, 3,56 mmol), Pd2(dba)3 (0,11 g, 0,12 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml), se purgó con nitrógeno, se calentó a 100ºC y se agitó durante una noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se extrajo con EtOAc, se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró (1,45 g). MS (m/z): 510 (M+H).

Preparación 86

3-fluoro-4-(6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina

A una solución de N-(difenilmetileno)-3-fluoro-4-(6-fluoro-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina (1,45 g, 2,85 mmol) en THF (30 ml) y agua (5 ml), se agregó HCl 1 N acuoso (5,69 ml, 5,69 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó EtOAc y la mezcla se lavó con solución de NaHCO3 acuoso saturado, cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía, eluyendo con DCM y, a continuación, EtOAc:hexano (1:1), proporcionando el producto deseado en forma de un gel de color pálido (0,53 g, 54% de rendimiento). MS (m/z): 346 (M+H).

Preparación 87

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el mismo procedimiento de Preparación 75. MS (m/z): 430,1 (M+H).

Preparación 88

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1H-indazol-6-carboxilato de etilo

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-carboxilato de etilo (15 g, 35 mmol) en DCM (300 ml), se agregó ácido trifluoroacético (TFA) (30 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante

una noche. El DCM se evaporó. El residuo se repartió entre EtOAc (800 m) y NaHCO3 acuoso al 5% (400 ml). La capa orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre MgSO4, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:acetona (5:1), proporcionando el producto (10,4 g, 86% de rendimiento). MS (m/z): 346,1 (M+H).

Preparación 89

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-carboxilato de etilo

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 11. MS (m/z): 360,1 (M+H).

Preparación 90

Acido 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-carboxílico

A una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-carboxilato de etilo (1,19 g, 3,5 mmol) en THF/H2O (15 ml/5 ml), se agregó LiOH (0,2 g, 8,3 mmol). Después de agitar la reacción a temperatura ambiente durante 2 horas, se eliminaron los disolventes. El residuo se acidificó con HCl 2 N hasta pH 5, y se extrajo con EtOAc (50 ml). La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó y se concentró, proporcionando el producto (1,1 g, 100% de rendimiento). MS (m/z): 332,0 (M+H).

Preparación 91

5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-carbamato de terc-butilo

La suspensión de ácido 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-carboxílico (1,1 g, 3,3 mmol), difenil fosforil azida (0,91 g, 3,3 mmol), TEA (0,33 g, 3,3 mmol) y tamiz molecular 4 A (2,5 g) en terc-butanol (50 ml), se calentó a reflujo durante una noche. A continuación, el sólido se separó por filtración y el filtrado se concentró. El residuo se repartió entre cloruro sódico acuoso saturado (40 ml) y EtOAc (100 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice, eluyendo con PE:acetona (4:1), proporcionando el producto (0,64 g, 47,9% de rendimiento). MS (m/z): 403,1 (M+H).

Preparación 92

5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-carbamato de terc-butilo

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 38. MS (m/z): 373,1 (M+H).

Preparación 93

5-(5-benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-amina

A una solución de (5-benciloxi)-6-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol (1,5 g, 3,87 mmol) en 1,4-dioxano (50 ml), se agregó 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (1 g, 4,54 mmol), Pd(PPh3)4 (200 mg, 173 µmol) y Cs2CO3 (5 g, 10,6 mmol). Después agitar la mezcla de reacción a reflujo durante una noche, esta se repartió entre EtOAc (100 ml) y NH4Cl acuoso saturado (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (15:1), proporcionando el producto (0,80 g, 51% de rendimiento). MS (m/z): 401,1 (M+H).

Preparación 94

5-(5-benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-ilcarbamato de terc-butilo

A una solución de 5-(5-benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-amina (310 mg, 774 µmol) en THF (20 ml), se agregó dicarbonato de di-terc-butilo (250 mg, 1,13 mmol) y TEA (1 ml, 7,17 mmol). Después agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 3 horas, esta se repartió entre EtOAc (50 ml) y NH4Cl acuoso saturado (20 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto (260 mg, 67,1% de rendimiento). MS (m/z): 501,2 (M+H).

Preparación 95

5-(5-hidroxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-ilcarbamato de terc-butilo

A una solución de 5-(5-benciloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-ilcarbamato de terc-butilo (260 mg, 519 µmol) en EtOH (25 ml) y EtOAc (25 ml), se agregó Pd/C (100 mg, 10% en peso) bajo N2. La mezcla resultante se desgasificó mediante vacío y se volvió a llenar con nitrógeno. A continuación, la mezcla de reacción se agitó

a temperatura ambiente bajo atmósfera de H2 durante 6 horas. La mezcla de reacción se filtró. El filtrado se concentró, proporcionando el producto (200 mg, 93,8% de rendimiento). MS (m/z): 411,1 (M+H).

Preparación 96

5-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-ilcarbamato de terc-butilo

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el mismo procedimiento de Preparación 75. MS (m/z): 550,2 (M+H).

Preparación 97

5-(5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-6-il)piridin-2-ilcarbamato de terc-butilo

El compuesto del epígrafe se preparó esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 38. MS (m/z): 520,2 (M+H).

Preparación 98

4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo

A (5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol (1,56 g, 4,42 mmol) en DCM (15,6 ml), se agregó dicarbonato de di-terc-butilo (1,09 ml, 4,83 mmol). La mezcla se agitó durante 30 minuto. La HPLC muestra que la reacción es completa. El disolvente se eliminó bajo presión reducida. A continuación, se agregó MTBE (5 ml). La solución se enfrió con un baño de hielo y se agitó durante 15 minutos y, a continuación, se filtró, proporcionando el compuesto del epígrafe en forma de un sólido (0,764 g, 48,9% de rendimiento).

Preparación 99

6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1H-indazol

A un matraz de 3000 ml se agregó 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol (250 g, 573,1 mmol), seguido de MeOH (1000 ml) y MeSO3H (112,71 ml, 1,72 mol) y se calentó a 50ºC durante 14 horas. A partir de la solución cristalizó un sólido. A continuación, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró bajo vacío a 45ºC hasta sequedad para solidificarla. El sólido se diluyó con DCM (2000 ml) y se trató con agua (1000 ml)y NaOH 5 N (aproximadamente 350 ml) hasta el pH de 8-9. La capa orgánica se separó y el disolvente se eliminó, seguido de la formación de azeótropo con tolueno, proporcionando 195,6 g del material sólido de color amarillo. MS (m/z): 354,0 (M+H).

Preparación 100

6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol

A un matraz de 4000 ml se agregó 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1H-indazol (230 g, 653,2 mmol), DMF (3000 ml) y K2CO3 (134,41 g, 979,78 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 4,5ºC con un baño de hielo. A la mezcla se agregó yoduro de metilo (92,71 g, 653,19 mmol) y la reacción se dejó agitando durante 20 minutos a la misma temperatura. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 13 horas. La mezcla de reacción se monitorizó mediante espectrometría de masa-cromatografía líquida. Se agregaron yoduro de metilo adicional (50 g) y NaHCO3 (33 g) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que se completó la reacción. La mezcla de reacción se dividió en dos porciones, marcadas (A) y (B), y cada una de ellas se interrumpió con agua (1 litro), seguido de extracción con EtOAc (1 litro), lo cual dio lugar a la formación de algunos sólidos. Los sólidos combinados procedentes de (A) y (B) se recogieron mediante filtración por vacío, proporcionando 70 g de peso bruto conteniendo aproximadamente 90% de 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol (que es el isómero deseado) y 8% de isómeros 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-metil-2H-indazol. A continuación, este sólido se trituró con 1000 ml de DCM y 750 ml de MeOH durante una noche (aproximadamente 14 horas). El sólido se recogió mediante filtración y se lavó con DCM reciente (100 ml), proporcionando 55,5 g del material deseado marcado con (C). El licor madre se concentró y marcó con (D). La capa orgánica procedente de (A) y (B) se separaron y concentraron. Los residuos procedentes de (A) y (B) se combinaron, proporcionando 185 g de compuesto bruto en forma de un sólido de color naranja marcado con (E).

El compuesto bruto (E) se disolvió en MeOH y DCM y, a continuación, la solución se dividió en 3 porciones. Con cada porción de solución se mezclaron 600 g de gel de sílice y, a continuación, la mezcla de gel de sílice se cargó en siete cartuchos llenos de 270 g de tamaño. Se usaron siete columnas ISCO® de 1,5 kg con sistema disolvente, partiendo de EtOAc al 25% en hexanos y, a continuación, cambiando a EtOAc al 50% en hexanos, proporcionando 62 g del compuesto deseado en forma de un polvo de color amarillo marcado como (F). Después de 7 ensayos, se formaron algunas fracciones mezcladas de isómeros de 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol y 6bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-2-metil-2H-indazol. Las fracciones se agruparon y se combinaron con licor madre (D) procedente del procedimiento descrito anteriormente, proporcionando 17 g de la mezcla. La mezcla se disolvió en MeOH y DCM, se mezcló con 170 g de sílice en solución, y se ensayó sobre una columna de 1,5 kg, proporcionando

10 g de un polvo de color amarillo como el producto deseado marcado como (G). El rendimiento total (55,5 g (C), 62 g (F), y 10 g (G)) es de 127,5 g.

Preparación 101

A un matraz de fondo redondo de 12 litros equipado con agitación por la parte superior, un termopar, manta calefactora, condensador, y purgador de nitrógeno sumergido, se agregó 1,4-dioxano (7,44 litros) y agua (1,67 litros). La solución se purgó con N2 (tubo interior). A continuación, se agregó 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1Hindazol (595 g, 1,63 mol) y la solución se purgó con N2 nuevamente. Se agregaron 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (717,02 g, 2,44 mol), fosfato potásico tribásico N-hidrato (689,8 g, 3,25 mol) y 1,1’-bis-(di-terc-butilfosfino)ferroceno (7,71 g, 16,25 mmol). Finalmente, se agregó Pd2(dba)3 (7,44 g, 8,13 mmol). La solución se purgó durante 15 minutos y, a continuación, se calentó a 60ºC durante 12 horas. La reacción no se completó y se agregó más Pd2(dba)3 (7,44 g, 8,13 mmol). La solución se calentó nuevamente a 60ºC durante un tiempo adicional de 3 horas y la reacción se completó. A continuación, se eliminó el 1,3-dioxano (temperatura del baño Buchi® 60ºC) y el residuo se volvió a disolver en 10 volúmenes (6 litros) de DCM. Se agregó agua (3 litros) y, a continuación, se separaron las capas. La solución orgánica se secó sobre Na2SO3, se filtró y se concentró hasta un aceite de color oscuro (835 g). El material no se purificó y se trató nuevamente en la siguiente etapa. El material es aproximadamente el 60% del producto deseado y aproximadamente el 40% de 5-(2-fluoro-4nitrofenoxi)-1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol. El producto bruto obtenido se volvió a proteger en la etapa siguiente. Se supone que el 50% del producto bruto es el 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol.

A un matraz de fondo redondo de 22 litros equipado con agitación por la parte superior, termopar, embudo de adición de 1 litro, purgador de nitrógeno y baño de enfriamiento, se agregó una solución de 5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol (835 g, 1,18 mol) bruto en DCM (6 litros) de dicarbonato de di-terc-butilo (283,69 g, 1,30 mol) disuelto en DCM (350 ml), se agregó a un embudo de adición. La solución se agregó gota a gota durante 48 minutos. Una vez completada la reacción, se eliminó el DCM mediante evaporación rotatoria, proporcionando un aceite de color oscuro. Al aceite de color oscuro se agregó MTBE (2,5 litros) y la solución aceitosa se enfrió hasta aproximadamente 0-5ºC. La solución se sembró con material obtenido en la Preparación 98. Después del sembrado, se observó cristalización y la suspensión resultante se agitó durante 30-40 minutos. La suspensión de color amarillo pálido se filtró sobre un lecho de polipropileno y la torta se lavó con MTBE frio (0-5ºC) (1,5 litros). Los sólidos se secaron en una estufa de vacío a 40ºC durante una noche, proporcionando el producto deseado (443 g, 60% de rendimiento bruto). MS (m/z): 354,0 (M+H). El material mostró que era aproximadamente 93-95% puro mediante HPLC y, en consecuencia, se trató posteriormente.

Preparación 102

4-(5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo

A un tanque de 11,355 litros, se agregó 4-(5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (433,0 g, 952,8 mmol), seguido de THF (6,5 litros) y Pd/C (21,65 g, Pd/C al 10% y 21,65 g de Pd/C al 5%). La mezcla se calentó a 35ºC bajo gas hidrógeno durante 2 horas. A continuación, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se dejó en agitación bajo gas hidrógeno durante una noche y, a continuación, se calentó a 40ºC bajo gas hidrógeno durante siete horas. Se agregó una cantidad adicional de 2 g de Pd/C (1 g, Pd/C al 10% y 1 g de Pd/C al 5%) y se agitó bajo gas hidrógeno durante otra hora y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se agitó nuevamente bajo gas hidrógeno durante una noche, completándose la reacción. La mezcla se filtró sobre una combinación de GFF® y papel Watman®. El filtrado se concentró hasta un sólido de color ligeramente amarillo (446 g, 110% de recuperación).

Preparación 103

2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de metilo

A un matraz se agregó ácido 2-hidroxinicotínico (10 g, 72 mmol), H2SO4 concentrado (2 ml) y MeOH (400 ml), seguido de tolueno (80 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante una noche con una trampa Dean-Stark. Después de enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en DCM (200 ml), se neutralizó con NaHCO3 acuoso saturado hasta pH 7 y se extrajo con DCM (200 ml) tres veces. Las fases orgánicas combinadas se secaron y concentraron, proporcionando el producto deseado (8,2 g, 74% de rendimiento). MS (m/z): 153,9 (M+H).

Preparación 104

1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de metilo

A una mezcla de 2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de metilo (6,0 g, 39 mmol), ácido 4-fluorofenilborónico (16,3 g, 116 mmol), acetato cúprico (14 g, 78 mmol) y piridina (12 g, 0,156 mmol) en DCM (300 ml), se agregaron tamices moleculares 4 A (5 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente abierta al aire. Después de filtrar los

sólidos y de lavarlos con agua, el filtrado se extrajo con DCM (100 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con PE:DCM (2:1 a 0:1), proporcionando el producto (9,6 g, 100% de rendimiento). MS (m/z): 248,0 (M+H).

Preparación 105

2-(4-fluorofenil)hidracinacarboxilato de etilo

A una solución de clorhidrato de 4-fluorofenilhidracina (2 g, 12,05 mmol) en THF (60 ml), se agregó DIPEA (6 ml, 34,40 mmol), cloroformiato de etilo (1,2 ml, 12,55 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0,16 g, 1,31 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con DCM y, a continuación, con DCM:MeOH (80:1), proporcionando el compuesto del epígrafe (1,92 g, 80,5% de rendimiento). MS (m/z): 199 (M+H).

Preparación 106

1-(4-fluorofenil)-2-metilhidracina

A una mezcla de LiAlH4 (1,1 g) en THF (15 ml), se agregó una solución de 2-(4-fluorofenil)hidracinacarboxilato de etilo (1,9 g, 9,59 mmol) en THF (10 ml), gota a gota, bajo nitrógeno en un baño de hielo y sal. Después de la adición, se retiró el baño de hielo y la mezcla se calentó a 60ºC durante una noche. La reacción se enfrió y se interrumpió con agua. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida, eluyendo con PE:EtOAc (80:1 a 60:1), proporcionando el compuesto del epígrafe (1 g, 74% de rendimiento). MS (m/z): 141 (M+H).

Preparación 107

2-(4-fluorofenil)-1,5-dimetil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo

Una mezcla de 1-(4-fluorofenil)-2-metilhidracina (0,6 g, 4,28 mmol), 2-acetilmalonato de dietilo (0,96 g, 4,75 mmol) y ácido acético (0,51 g, 8,49 mmol) en agua (15 ml), se calentó a 115ºC durante 3 horas. La reacción se enfrió y se extrajo con EtOAc dos veces. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (desde 1 hasta 60:1), proporcionando el compuesto del epígrafe (0,59 g, 49,5% de rendimiento). MS (m/z): 279 (M+H).

Preparación 108

(E)-2-(2-(4-fluorofenil)hidrazono)acetaldehido

Una solución de clorhidrato de 4-fluorofenilhidracina (1 g, 6 mmol) en THF (20 ml), se trató con DIPEA (3 ml, 18 mmol). A continuación, se agregó oxaldehido (40% en agua, 0,89 g, 6,0 mmol) en THF (10 ml), gota a gota, en un baño de hielo. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, se interrumpió con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4 y se concentró, proporcionando el compuesto del epígrafe bruto (0,97 g, 97% de rendimiento). MS (m/z): 167 (M+H).

Preparación 109

2-(4-fluorofenil)-3-oxo-2,3-dihidropiridacina-4-carboxilato de etilo

Se disolvió (E)-2-(2-(4-fluorofenil)hidrazono)acetaldehido (0,97 g, 5,8 mmol) bruto en EtOH (50 ml) y se agregaron malonato de dietilo (0,93 g, 5,8 mmol) y piperidina (0,2 ml, 2,0 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante una noche. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió y se concentró. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc dos veces. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (desde 3:1 hasta 1:1), proporcionando el compuesto del epígrafe (0,26 g, 17% de rendimiento). MS (m/z): 263 (M+H).

Preparación 110

3-(4-fluorofenilamino)-3-oxopropanoato de metilo

A una solución de 4-fluoroanilina (4,4 ml, 45 mmol) en acetona, se agregó TEA (8,5 ml, 67 mmol) y cloruro de metil malonilo (7,2 ml, 67 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas y, a continuación, se concentró. Después de agregar agua (20 ml), el residuo se acidificó con HCl concentrado hasta pH 3. El precipitado se recogió mediante filtración y se lavó con PE, proporcionando el producto (14,1 g, 100% de rendimiento). MS (m/z): 212,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 110:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

111: 3-oxo-3-(fenilamino)propanoato de etilo 208

112: 3-(4-fluorofenilamino)-3-oxopropanoato de etilo 226,1

Preparación 113

1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo

A una solución de 3-(4-fluorofenilamino)-3-oxopropanoato de metilo (10,1 g, 48 mmol) en EtOH (100 ml), se agregó trans-4-metoxi-3-buten-2-ona (5,7 g, 57 mmol) y CH3ONa (3,1 g, 57 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante una noche y, a continuación, se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (desde 5:1 hasta 2:1), proporcionando el producto (2,1 g, 16% de rendimiento). MS (m/z): 276,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 113:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

114: (4-fluorofenil)-5-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo 276,1

115: 5-metil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo 258,1

Preparación 116

(Z)-4-aminopent-3-en-2-ona

A una solución de 2,4-pentanodiona (20,0 g, 0,2 mol) en agua (20 ml), se agregó amoníaco acuoso al 25% (13,2 ml, 0,2 mol), gota a gota, a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. A continuación, se elimino el disolvente, proporcionando el producto (20,0 g, 100% de rendimiento) en forma de un sólido. RMN 1H (acetona-d6, 300 MHz): 1,88 (s, 3H), 1,88 (s, 3H), 2,8 (s ancho, 1H), 6,54 (s ancho, 1H), 9,7 (s ancho, 1H).

Preparación 117

4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo

Una solución de (Z)-4-aminopent-3-en-2-ona (20,0 g, 0,2 mol) en THF seco (20 ml), se agregó a una solución de cianoacetato de etilo (22,6 g, 0,2 mol) y TEA (20,2 g, 0,2 mol) en THF (200 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 56 horas y, a continuación, se concentró. El residuo se mantuvo a temperatura ambiente durante 5 horas y el precipitado se filtró y lavó con EtOAc, proporcionando el compuesto del epígrafe (7,3 g, 19% de rendimiento). MS (m/z): 196,0 (M+H).

Preparación 118

1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo

Una suspensión de 4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo (5,0 g, 0,025 mol), ácido 4-fluorofenilborónico (10,7 g, 0,077 mol), acetato cúprico (1,33 g, 0,007 mol), piridina (6,86 ml) y tamices moleculares 4 A (5,0 g) en 1,4-dioxano (80 ml), se calentó a 80ºC durante 68 horas. Los sólidos se separaron por filtración y el filtrado se concentró. El residuo se repartió entre EtOAc (50 ml) y HCl 2 N (70 ml). El sólido precipitado se recogió mediante filtración y se lavó con EtOAc, proporcionando el producto (1,2 g). El filtrado de EtOAc se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc:MeOH (40:20:1), proporcionando otra porción de producto (0,2 g), (1,32 g total, 17,8% de rendimiento). MS (m/z): 290,1 (M+H).

Preparación 119

4,6-dimetil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo

Una suspensión de 4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo (7,5 g, 0,038 mol), ácido fenilborónico (14,1 g, 0,115 mol), acetato cúprico (1,38 g, 0,008 mol), piridina (7,5 ml) en 1,4-dioxano (80 ml), se calentó a 80ºC durante 96 horas. El sólido se separó por filtración y el filtrado se concentró. El residuo se repartió entre EtOAc (50 ml) y HCl 2 N (70 ml) y el precipitado se recogió mediante filtración y se lavó con EtOAc, proporcionando el producto

del epígrafe (2,95 g). La solución de EtOAc se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con PE:acetona (2:1), proporcionando otra porción de (0,3 g), (3,25 g, 31,2% de rendimiento). MS (m/z): 272,0 (M+H).

Preparación 120

5-(bromometil)-2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo

A una solución de 2-(4-fluorofenil)-1,5-dimetil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo (1,2 g, 4,3 mmol) y azobisisobutironitrilo (AIBN) (0,09 g, 0,06 mmol) en DCM, se agregó N-bromosuccinimida (NBS) (0,9 g, 4,3 mmol) en tres porciones a temperatura ambiente. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (4:1), proporcionando el producto en forma de un sólido de color blanco (1,3 g, 84% de rendimiento). MS (m/z): 357,0 (M+H).

Preparación 121

5-((1H- pirazol-1-il)metil)-2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo

A una solución de 5-(bromometil)-2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo (1,3 g, 3,6 mmol) y 1H-pirazol (0,25 g, 3,6 mmol) en THF (50 ml) y H2O (1 ml) enfriada en un baño de hielo-agua, se agregó KOH sólido (0,2 g, 3,6 mmol) en tres porciones. Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante una noche, se eliminó el disolvente. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (4:1), proporcionando el producto (0,87 g, 70% de rendimiento). MS (m/z): 345,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 121:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

122: 2-(4-fluorofenil)-1-metil-5-(morfolinometil)-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4carboxilato de etilo 364,1

123: 2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-5-(piperidin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1H-pirazol-4carboxilato de etilo 362,1

Preparación 124

1-(4-fluorofenil)-5-(morfolinometil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo

Una mezcla de 1-(4-fluorofenil)-5-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo (0,275 g, 1 mmol), NBS (0,2 g, 1,1 mmol), AIBN (40 mg, 0,2 mmol) en CCl4 (20 ml), se calentó a reflujo durante 3 horas. Después de volver a enfriar la reacción, se agregaron morfolina (0,088 ml, 1 mmol) y K2CO3 (0,14 g, 1 mmol), La reacción se agitó a temperatura ambiente durante otras 2 horas. El disolvente se eliminó, y el residuo se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml) dos veces. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado, se secaron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (desde 100:1 hasta 50:1, conteniendo NH3 2 N al 0,5% en MeOH), proporcionando el compuesto del epígrafe (0,17 g, 47,2% de rendimiento). MS (m/z): 361,1 (M+H).

Preparación 125

2-(4-fluorofenilcarbamoil)-3-metilbut-2-enoato de etilo

A una solución de 4-fluoroanilina (2 g, 18 mmol) en isopropilidenomalonato de dietilo (10 g, 50 mmol), se agregó 1Himidazol (0,25 g, 3,67 ml). La mezcla de reacción a agitó a 200ºC bajo N2 durante 3 horas. Después de enfriada la reacción, se agregó gel de sílice. La mezcla se cargó sobre una columna de gel de sílice, y se eluyó primeramente con PE y, a continuación, con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto (1,85 g, 39% de rendimiento). MS (m/z): 266,1 (M+H).

Preparación 126

1-(4-fluorofenil)-4-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de etilo

Una mezcla de 2-(4-fluorofenilcarbamoil)-3-metilbut-2-enoato de etilo (1,85 g, 6,97 mmol) y N,N-dimetilformamida dimetil acetal (5 ml, 37,45 mmol), se agitó a 90ºC durante 90 minutos. Después de enfriar la reacción, se agregaron EtOAc (30 ml) y solución de NH4Cl saturado (20 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo

se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (10:1). Las fracciones que contenían producto se concentraron, y el residuo se mezcló con éter, proporcionando 1,2 g de sólido de color amarillo, el cual se filtró y se descartó. El filtrado se concentró y se purificó nuevamente mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (20:1), proporcionando el producto (500 mg, 26% de rendi

5 miento). MS (m/z): 276,1 (M+H).

Preparación 127

2-(4-fluorofenil)-6-metil-3-oxo-2,3-dihidropiridacino-4-carboxilato de etilo

A una suspensión de 1-trifenilfosforanilideno-2-propanona (3,18 g, 9,99 mmol) en THF (50 ml), se agregó cetomalonato de dietilo (1,74 g, 9,99 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, pro10 porcionando una solución transparente. A continuación, esta solución se agregó a una solución de clorhidrato de 4fluorofenilhidracina (1,62 g, 9,96 mmol) en EtOH:H2O (30 ml:30 ml). Después de mantener la mezcla resultante a reflujo durante 1 hora, se agregó TEA (3 ml) y la mezcla se agitó a reflujo durante 1 hora más. A continuación, esta se concentró y el residuo se repartió entre NH4Cl acuoso saturado (30 ml) y EtOAc (30 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, elu

15 yendo con PE:EtOAc (3:1), proporcionando el producto (1,20 g, 43% de rendimiento). MS (m/z): 277,1 (M+H).

Preparación 128

Acido 1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico

A una solución de 1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxilato de metilo (10,0 g, 0,04 mol) en MeOH (150 ml) y agua (50 ml), se agregó LiOH (1,9 g, 0,08 mol). La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura am

20 biente durante 0,5 horas. Después de eliminar la mayor parte de MeOH, la mezcla se acidificó con HCl acuoso concentrado hasta que precipitó un sólido de color blanco. El sólido se recogió mediante filtración y se lavó con agua (5 ml), proporcionando el producto deseado (8,7 g, 93% de rendimiento). MS (m/z): 234,0 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento de Preparación 128:

Prep. No.: Nombre químico Datos físicos MS (m/z) (M+H)

129: Acido 2-(4-fluorofenil)-1,5-dimetil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxílico 251

130: Acido 2-(4-fluorofenil)-3-oxo-2,3-dihidropiridacino-4-carboxílico 235

131: Acido 1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico 248,1

132: Acido 1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico

133: Acido 4,6-dimetil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico 244,0

134*: Acido 5-((1H-pirazol-1-il)metil)-2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-2,3-dihidro-1Hpirazol-4-carboxílico

135**: Acido 2-(4-fluorofenil)-1-metil-5-(morfolinometil)-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol4-carboxílico 336,1

136: Acido 2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-5-(piperidin-1-ilmetil)-2,3-dihidro-1Hpirazol-4-carboxílico 334,1

137: Acido 1-(4-fluorofenil)-5-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico 248,0

138: Acido 5-metil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico 230,1

139: Acido 1-(4-fluorofenil)-5-(morfolinometil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico 333,1

140**: Acido 1-(4-fluorofenil)-4-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico 248,1

141: Acido 2-(4-fluorofenil)-6-metil-3-oxo-1,2-dihidropiridino-4-carboxílico 249,0

*: se usó KOH como la base. **: se usó NaOH como la base.

Preparación 142

Acido 6-metil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico

A una solución de etóxido sódico en EtOH (preparada a partir de sodio (0,5 g, 21,75 mmol) disuelto en EtOH (40 ml)), se agregó 3-oxo-3-(fenilamino)propanoato de etilo (4 g, 19,30 mmol) y trans-4-metoxi-3-buten-2-ona (2 g, 19,98 mmol). Después de agitar la reacción a reflujo durante una noche, la mezcla se concentró. El residuo se repartió entre H2O (50 ml) y EtOAc (50 ml). La capa acuosa se acidificó con HCl concentrado hasta un pH de 3-4 y, a continuación, se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se secaron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (25:1), proporcionando el producto (1,20 g, 27% de rendimiento). MS (m/z): 230,0 (M+H).

Preparación 143

Acido 1,5-dimetil-3-oxo-2-fenil-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxílico

A una mezcla de 1,5-dimetil-3-oxo-2-fenil-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carbaldehido (2 g, 9,25 mmol) en agua (100 ml) a 75ºC, se agregó una solución de KMnO4 (1,5 g, 9,49 mmol) en agua (200 ml) lentamente. Una vez completada la adición, la mezcla de reacción se agitó a 75ºC durante 1 hora más. Se agregó KOH para alcalinizar la solución y la mezcla se filtró mientras estaba caliente. Al filtrado se agregó EtOH (10 ml) y EtOAc (50 ml). La fase orgánica se separó y se descartó. La fase acuosa se acidificó con HCl concentrado hasta pH 5 y se extrajo con EtOAc (60 ml) y DCM (60 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron y se concentraron, proporcionando el producto del epígrafe (1,9 g, 88,46% de rendimiento). MS (m/z): 233,1 (M+H).

Preparación 144

3-(4-fluorofenilamino)-3-oxopropanoato de etilo

A un matraz de fondo redondo de 10 litros de 4 bocas, se agregó DCM (5000 ml), 4-fluoroanilina (111 g, 1,0 mol) y TEA (166 ml, 1,2 mol). Se agregó cloruro de etil malonilo (196 g, 1,3 mol) en DCM (500 ml), gota a gota, bajo N2 a 0-5ºC (bajo baño de hielo) durante 4 horas. Después de la adición, la mezcla se agitó durante 30 minutos a esta temperatura. Se agregó agua (2 litros) dentro de la mezcla con agitación a esta temperatura. La fase orgánica se lavó con NaHCO3 saturado, con cloruro sódico acuoso saturado y se secó sobre Na2SO4 anhidro. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 1 litro). La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado y se secó sobre Na2SO4 anhidro. Después de filtración, la solución orgánica combinada se concentró hasta sequedad bajo presión reducida. El residuo se lavó con PE (1 litro), proporcionando 3-(4-fluorofenilamino)-3-oxopropanoato de etilo (230 g, rendimiento bruto 102%). MS (m/z): 226,1 (M+H).

Preparación 145

Acido 1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico

A un matraz de fondo redondo de 3 litros de 4 bocas, se agregó EtOH (1500 ml), 3-(4-fluorofenilamino)-3oxopropanoato de etilo (139 g, 617 mmol), etóxido sódico (65,6 g, 925 mmol) y 4-metoxi-3-buten-2-ona (103 g, 925 mmol). La mezcla se mantuvo a reflujo durante 3 horas. Después de enfriar la solución a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida para eliminar el EtOH. El residuo se diluyó con DCM (700 ml) y HCl 1 M (1500 ml).La fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado (1000 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se trituró con EtOAc (150 ml) a temperatura ambiente (10-15ºC) durante 1 hora. Después de trituración y lavado con EtOAc (50 ml), se obtuvo ácido 1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico, en forma de un sólido de color amarillo (85,3 g, 56% de rendimiento). MS (m/z): 226,1 (M+H).

Ejemplo 1

N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida

A un matraz de fondo redondo de 100 ml se agregó 4-(5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol1-carboxilato de terc-butilo (1,43 g, 3,38 mmol), ácido 1-(4-flurofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (1,25 g, 5,07 mmol), EDCl (1,48 g, 7,6 mmol) y HOBt (776 mg, 5,07 mmol), seguido de DMF (15 ml, 193,99 mmol) y, a continuación, DIPEA (1,47 ml, 8,44 mmol). La mezcla se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó en EtOAc (300 ml) y se lavó con cloruro sódico acuoso saturado (5 x 100 ml). La solución acuosa combinada se extrajo con EtOAc (1 x 100 ml) y, a continuación, las soluciones orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El sólido se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM (A) y MeOH al 10% en una solución de DCM (B), gradiente desde 100% (A) hasta 80% (A):20% (B), durante 70 minutos, proporcionando 4-(5-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenil)-6-metil-2oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamido)fenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo en forma de un sólido de color oro (2,20 g, 87% de rendimiento). MS (m/z): 653 (M+H), 675 (M+Na).

A un matraz de fondo redondo se agregó 4-(5-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamido)fenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (1,92 g, 2,94 mmol) y DCM (50 ml), seguido de trietilsilano (1,88 ml, 11,77 mmol) y TFA (17,8 ml,235,35 mmol). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 1,5 horas. El disolvente se eliminó y se diluyó en DCM (150 ml) y se lavó con solución de NaHCO3 acuoso saturado (2 x 100 ml). La solución orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró bajo presión reducida, proporcionado un material sólido. El sólido se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM (A) y MeOH al 10% en una solución de DCM (B), gradiente desde 100% (A) hasta 75% (A):25% (B), durante 70 minutos, manteniéndose a esta relación de 75:25 durante 15 minutos, proporcionando el compuesto del epígrafe en forma de un sólido de color blanquecino. Este sólido se disolvió en EtOH caliente (50 ml), seguido de una adición de una porción de agua destilada (250 ml), lo cual dio lugar a que precipitara un sólido de color blanco. El sólido se filtró sobre un embudo Buchner y se lavó con agua destilada (3 x 15 ml), se secó al aire, y se secó al vacío a 60ºC durante 15 horas, proporcionando el compuesto del epígrafe en forma de un sólido de color blanquecino (1,27 g, 78% de rendimiento). MS (m/z): 552,8 (M+H).

Ejemplo 2

Un matraz de fondo redondo de 12 litros se equipó con agitación por la parte superior, un termopar, y una purga de N2. Se disolvió 4-(5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (404 g, 954,08 mmol) en DMF (2 litros) y se cargó en el matraz. Para lavar el matraz se usó DMF (1 litro). Se agregaron ácido 1-(4-flurofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (259,46 g, 1,05 mol) y EDCl (228,63 g, 1,19 mol) y este se lavó con DMF (500 ml). A continuación, se agregó HOBt (189,94 g, 1,27 mol) y este se lavó nuevamente con DMF (500 ml). Finalmente, se agregó lentamente DIPEA (184,97 g, 1,43 mol). A continuación, la solución de color oscuro se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana. A un matraz de fondo redondo de 20 litros se agregó agua desionizada (3 litros) y DCM (5 litros). La mezcla de reacción se vertió en él y se lavó con DCM (1 litro). La capa orgánica se separó, se lavó con agua desionizada (3 x 3 litros), se secó sobre Na2SO4, se filtró, los sólidos se lavaron con DCM y el filtrado se concentró. Se agregó otra porción de EtOAc (2 litros) y se concentró para eliminar todo el DCM. Se agregaron EtOAc (650 ml) y MTBE (3 litros) al residuo y la solución se agitó en un baño de hielo durante 1 hora. La suspensión de color tostado se filtró usando un lecho de polipropileno. La torta se lavó con MTBE (2 x 500 ml). El sólido de color tostado claro se secó durante una noche en una estufa de vacío a 40ºC, proporcionando el producto bruto (553 g). El producto bruto se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 50% (50%): DCM al 35% (35%): n-heptano (15%)), proporcionando el producto deseado puro 4-(5-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamido)fenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (424 g, 68% de rendimiento). MS (m/z): 651,0 (M+H).

Se disolvió 4-(5-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamido)fenoxi)-1-metil-1H-indazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (423,9 g, 649,50 mmol) en DCM (4,24 litros). Se agreó HCl en MeOH (5,74 N, 799,99 ml, 4,59 mol) y la solución se calentó a 30ºC durante 1 hora. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 45ºC y se agregó DCM (1,5 litros). Después de dos horas, la solución se calentó a 50ºC y se agregó

DCM (2 litros). Después de 3 horas, se agregó DCM (2 litros) seguido de HCl en MeOH (4,5 N, 721,67 ml, 3,25 mol). Después de otros 45 minutos, se agregaron DCM (1 litro), HCl en MeOH (4,5 N, 288,67 ml, 1,30 mol) y MeOH (1,5 litros). A continuación, la solución de reacción se calentó a 60ºC. Después de 4 horas, se agregó MeOH (2 litros) y 10 minutos después se agregó DCM (1 litro) seguido de HCl en MeOH (4,5 N, 200 ml). Después de 5 horas, la reacción se completó. La mezcla de reacción se concentró hasta aproximadamente 1/3 del volumen. Se agregó MeOH (2 litros) y la solución se concentró hasta una suspensión espesa. De nuevo, se agregó MeOH (2 litros) y la mezcla se concentró hasta una suspensión espesa. La suspensión se enfrió hasta aproximadamente 10-15ºC y, a continuación, se filtró. Los sólidos se lavaron con MeOH. Los sólidos se introdujeron en una estufa de vacío a 55ºC durante 2 días, proporcionando el producto deseado clorhidrato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (377 g, 92,8%). MS (m/z): 551,0 (M+H).

A un matraz de fondo redondo de 22 litros equipado con agitación mecánica bajo nitrógeno, se agregó clorhidrato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida (367 g, 0,62 mol) seguido de DCM (7,34 litros) y agua (7,34 litros). Se agregó Na2CO3 (181,6 g, 1,71 mol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El pH se comprobó que era de aproximadamente 9,4. La mezcla se filtró sobre polipropleno. Los sólidos se recogieron y se introdujeron en un matraz de fondo redondo de 5 litros. Se agregó una solución de agua al 20%/MeOH (2,6 litros) y la suspensión se agitó durante 30 minutos. La suspensión se filtró y los sólidos se lavaron con agua al 20%/MeOH (600 ml). Los sólidos se introdujeron en una estufa de vacío a 35ºC durante una noche. El primer peso indicó 394 g (rendimiento teórico 324,8 g, aproximadamente 121% de recuperación de masa). El TGA (análisis termogravimétrico)/DCS (calorimetría por escaneado diferencial) muestra aproximadamente 17% en peso de agua libre y 10-11% en peso de pérdida de volátiles en la fusión. Los sólidos se secaron a 55ºC en una estufa de vacío con barrido de N2 durante 3,5 horas (354,7 g, aproximadamente 100% de recuperación de masa; la RMN muestra aproximadamente 9,3% en peso de DCM). De acuerdo con la TGA/DSC, no existe presente agua libre. El material se envió para su molienda.

Se ensambló un molino de chorro (AljetTM 0101) en una bolsa de tipo guante a lo largo del interior de una campana y se conectó N2 a un cabezal de 45,4 kg. La boquilla impulsora interior se ajustó para la extracción máxima y dentro del molino se introdujo el flujo de nitrógeno máximo. Las lecturas de presión marcaron 621 kPa sobre la boquilla impulsora y 586,5 kPa sobre ambas boquillas de molienda. El material de partida (353,4 g) se suministró lentamente al interior del molino, parándose para vaciar la bolsa receptora cuando fue necesario. El tiempo de molido total fue de 22 minutos y 25 segundos. La velocidad de suministro calculada fue de 15,8 g/min (353,4 gramos dividido por 22,42 minutos). El material molido (335,7 g, 95%) se obtuvo con una pérdida de 17,7 g. El resultado del análisis del tamaño de partícula del material molido fue d90 de 4,6 micrómetros.

El TGA/DSC indicó aproximadamente 11,4% en peso de volátiles en el fundido y la RMN (DMSO) mostró aproximadamente 9,3% en peso de DCM. RMN 1H (DMSO) 5 12,94 (s ancho, 1H),11,88 (s, 1H), 8,44 (d, J = 7,47 Hz, 1H), 8,12 (s ancho, 1H), 8,00 (s ancho, 1H), 7,96 (s ancho, 1H), 7,94 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,47-7,37 (m, 5H), 6,82 (t, J = 9,26 Hz, 8,82 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 7,49 Hz, 1H), 4,04 (s, 3H), 2,03 (s, 3H). LC/MS: (M+H) 553,1.

Preparación de forma de cristal anhidro

A 10 ml de EtOH se agregaron 120 mg del compuesto anterior dentro de un vial de 20 ml. La muestra se calentó a 70ºC con agitación. Inicialmente, los sólidos comenzaron a disolverse y, a continuación, se formó una suspensión seguido de un precipitado de color blanco. La muestra se enfrió a temperatura ambiente mientras se agitaba. Se extrajo una pequeña muestra de la suspensión mediante una pipeta y se dejó secar al aire. Este material es altamente cristalino y demostró ser un solvato en etanol mediante TGA. A la suspensión restante, se agregaron 10 ml de heptano y, a continuación, se calentó hasta ebullición. La temperatura medida se controló a 70,8ºC hasta que el volumen se había reducida a 10 ml. Cuando la temperatura comenzó a subir, se retiró el calor y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El sólido se aisló mediante filtración por vacío y se secó en una estufa de vacío a 45ºC durante 3 horas, dando como resultado un 77% de recuperación. La forma cristalina mostró una pérdida de peso de 0,17% desde 25-238ºC mediante TGA. El inicio de fusión de la forma fue de 247,8ºC.

Ejemplo 3

Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida

A una solución de 3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)anilina (300 mg, 927,8 µmol) y ácido 1-(4fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (300 mg, 1,15 mmol) en DMF (5 ml), se agregó HOBt (130 mg, 0,962 mmol), EDCl (180 mg, 0,939 mmol) y N-metilmorfolina (0,5 ml). Después de agitar la mezcla de reacción a 60ºC durante una noche, esta se repartió entre EtOAc (50 ml) y NH4Cl acuoso saturado (30 ml). La fase

5 orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se trituró con EtOAc (5 ml9 y los sólidos se recogieron mediante filtración, proporcionando N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil)-4,6dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida como el producto deseado (230 mg, 43,7% de rendimiento). MS (m/z): 567,2 (M+H).

A una solución de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo

10 1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (230 mg, 0,406 mmol) en acetona (10 ml), se agregó MeSO3H (39 mg, 0,406 mmol). Después de agitar la reacción a temperatura ambiente durante 0,5 horas, esta se concentró. El residuo se trituró con éter y se secó, proporcionando metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (250 mg, 92,9% de rendimiento). MS (m/z): 567,2 (M+H).

15 Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento del Ejemplo 3, con la excepción de que en ciertos casos se generó la base libre y no la sal:

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

4: Metanosulfonato de 1-(4-fluorofenil)-6-metil-N-(4-(1metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 535,2

5: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-6-metil-2-oxo-1-fenil1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 535,1

6: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-4,6-dimetil-2-oxo-1fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 549,1

7: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-2-(4-fluorofenil)-1,5dimetil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 556,2

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

8: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-2-(4-fluorofenil)-3oxo-2,3-dihidropiridacino-4-carboxamida 540,2

9: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(2metilpiridin-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 578,1

10: Metanosulfonato de 6-metil-N-(4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-2-oxo-1-fenil-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 517,2

11: 5-((1H-pirazol-1-il)metil)-N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1Hindazol-5-iloxi)fenil-2-(4-fluorofenil)-1-metil-3-oxo-2,3dihidro-1H-pirazolo-4-carboxamida 627,2

12: N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 558,1

13: Metanosulfonato de N-(4-(6-(dimetilamino)-1Hindazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1-fenil-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 498,2

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

14: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)5-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 553,1

15: N-(3-fluoro-4-(6-(piridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 550,2

16: Metanosulfonato de 5-((1H-pirazol-1-il)metil)-N-(4-(6(dimetilamino)-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1metil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 585,1

17: Metanosulfonato de 1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-N-(4(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-2oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 549,2

18: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1Hindazol-5-iloxi)fenil-1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 544,2

19: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-(tetrahidro-2Hpiran-4-ilamino)-1H-indazol-5-iloxi)fenil-1-(4fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 586,1

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

20: N-(4-(6-(dimetilamino)-1H-indazol-5-iloxi)-3fluorofenil)-2-(4-fluorofenil)-3-oxo-2,3dihidropiridacino-4-carboxamida 503,1

21: N-(4-(6-(dimetilamino)-1H-indazol-5-iloxi)-3fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 530,2

22: Metanosulfonato de N-(4-(6-(dimetilamino)-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-6-metil-2-oxo-1-fenil-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 480,2

23: N-(3-fluoro-4-(6-((6-metilpiridin-3-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 564,1

24: Metanosulfonato de 4,6-dimetil-N-(4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-2-oxo-1-fenil1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 531,2

25: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(piridin3-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-2-(4-fluorofenil)-1,5dimetil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 567,1

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

26: N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-1(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 544,1

27: Metanosulfonato de 5-metil-N-(4-(1-metil-6-(1Hpirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-2-oxo-1-fenil-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 517,1

28: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-2-(4-fluorofenil)-1-metil-5(morfolinometil)-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4carboxamida 646,2

29: N-(3-fluoro-4-(6-(piridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)1-(4-fluorofenil)-2-oxo-2,3-dihidropiridino-3carboxamida 535,5

30: N-(3-fluoro-4-(6-(piridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)2-(4-fluorofenil)-1-metil-5-(morfolinometil)-3-oxo-2,3dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 638,2

31: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-(piridin-4-il)-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-2-(4-fluorofenil)-3-oxo-2,3dihidropiridacino-4-carboxamida 537,1

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

32: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-(piridin-4-il)-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-2-(4-fluorofenil)-1,5-dimetil-3-oxo2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 553,2

33: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-(piridin-3-il)-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-2-(4-fluorofenil)-1,5-dimetil-3-oxo2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 553,1

34: Metanosulfonato de N-(4-(6-(1H-pirazol-4-il)-1Hindazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-2-(4-fluorofenil)-6-metil3-oxo-2,3-dihidropiridacino-4-carboxamida 540,1

35: N-(4-(6-(dimetilamino)-1H-indazol-5-iloxi)-3fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 516,2

36: N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-1(4-fluorofenil)-5-(morfolinometil)-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 643,2

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

37: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-4-metil-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 558,1

38: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-(6-metilpiridinil3-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-4,6dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 578,1

39: N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-2(4-fluorofenil)-6-metil-3-oxo-2,3-dihidropiridacino-4carboxamida 559,2

40: N-(4-(6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-5-iloxi)-1H-indazol-5iloxi)-3-fluorofenil)-2-(4-fluorofenil)-3-oxo-2,3dihidropiridacino-4-carboxamida 554,2

41: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-piridinil-4-il)-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-1,5-dimetil-3-oxo-2-fenil-2,3dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 535,2

42: N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-2(4-flurofenil)-3-oxo-2,3-dihidropiridacino-4carboxamida 545,1

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

43: Metanosulfonato de N-(4-(6-(1,3-dimetil-1H-pirazol5-il)-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)4,6-dimetil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-4-carboxamida 581,1

44: Metanosulfonato de N-(4-(6-(2,6-dimetil-4-il)-1Hindazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-2-(4-fluorofenil)-1,5dimetil-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 581,2

45: N-(3-fluoro-4-(6-(2-metilpiridin-4-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-2-(4-flurofenil)-1-metil-3-oxo-5-(piperidin-1ilmetil)-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamida 650,1

46: N-(3-fluoro-4-(6-(2-metoxipirimidin-5-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-flurofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 567,2

47: N-(3-fluoro-4-(6-(2-metilpiridin-4-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-2-(4-flurofenil)-3-oxo-2,3-dihidropiridacino4-carboxamida 551,2

Ejemplo 48

Metanosulfonato de N-(4-(6-amino-1-metil-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida

A un vial con tapón de rosca de 10 ml se agregó 5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-N-benzhidril-1-metil-1H-indazol-6-amina (91 mg, 208 µmol), ácido 1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (66,7 mg, 269,78 µmol), EDCl (90,9 mg, 466,9 µmol) y HOBt (47,7 mg, 311,3 µmol), seguido de DMF (2 ml, 25,9 mmol). A la mezcla se 5 agregó DIPEA (90,5 µl, 518,8 µmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Se agregaron EDCl (50 mg), HOBt (25 mg), DIPEA (0,02 ml) y ácido 1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (40 mg) adicionales y la mezcla se agitó durante un período adicional de 24 horas. La reacción se diluyo en EtOAc (100 ml) y se lavó con cloruro sódico acuoso saturado (3 x 25 ml). La solución acuosa combinada se extrajo con EtOAc (1 x 25 ml). La solución orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró hasta sequedad.

10 El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM (A) y una solución de MeOH al 10% en DCM (B), gradiente desde 100% (A) hasta 90% (A):10% (B) durante 60 minutos, proporcionando un material ceroso transparente como el producto deseado (114 mg, 82% de rendimiento).MS (m/z) 667,8 (M+H).

A un matraz de fondo redondo de 25 ml, se agregó N-(4-(6-(benzhidrilamino)-1-metil-1H-indazol-5-iloxi)-3fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (100 mg, 149,7 µmol) y DCM (15 ml, 15,6 15 mmol), seguido de la adición de trietilsilano (0,3 ml, 1,8 mmol) y TFA (2 ml, 26,9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se eliminó y, a continuación, el residuo se diluyó en DCM (50 ml) y se lavó con una solución de NaHCO3 saturada (1 x 25 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM (1 x 25 ml) y la solución orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM (A) y una solución de MeOH al 10% en DCM (B), gradiente desde

20 100% (A) hasta 80% (A):20% (B) durante 50 minutos, manteniéndose a una relación de 80:20 durante 5 minutos y, a continuación, el gradiente a 70% (A):30% (B) durante 5 minutos, proporcionando un material sólido de color blanco como el producto deseado (67 mg, 90% de rendimiento). MS (m/z) 501,8 (M+H).

A un matraz de fondo redondo se agregó N-(4-(6-amino-1-metil-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-6metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (47,5 mg, 94,7 µmol) en DCM (2 ml, 31,2 mmol) y MeOH (2 ml, 49,4

25 mmol). Se agregó MeSO3H (6,2 µl, 94,7 µmol) en MeOH. La solución se concentró, proporcionando un sólido de color amarillo claro (54 mg, 96% de rendimiento). MS (m/z) 501,8 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento del Ejemplo 48:

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

49: Metanosulfonato de N-(4-(6-amino-1-metil1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 487,8

Ejemplo 50

30 Metanosulfonato de N-(6-amino-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-6-metil1-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida

A una solución de 5-(4-amino-2-fluorofenoxi)-1H-indazol-6-ilcarbamato de terc-butilo (170 mg, 474 µmol) y ácido 6metil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (120 mg, 0,52 mmol) en DMF (5 ml), se agregó HOBt (60 mg, 0,44 mmol), EDCl (90 mg, 0,47 mmol) y N-metilmorfolina (0,5 ml). Después de agitar la mezcla de reacción a 60ºC

5 durante una noche, esta repartió entre EtOAc (50 ml) y NH4Cl acuoso saturado (30 ml). La fase orgánica se separó, se secó y se concentró, y el residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con PE:EtOAc (1:1), proporcionando el producto (65 mg, 24,1% de rendimiento).MS (m/z) 570,2 (M+H).

A una solución de 5-(2-fluoro-4-(6-metil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxamido)fenoxi-1H-indazol-6-ilcarbamato de terc-butilo (65 mg, 0,114 mmol) en DCM (10 ml), se agregó TFA (1,1 ml, 13,5 mmol). Después de agitar la

10 reacción a temperatura ambiente durante una noche, esta concentró. El residuo se repartió con NaHCO3 acuoso saturado (30 ml) y DCM (50 ml), y la fase orgánica se separó, se secó y se concentró. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM:MeOH (20:1), proporcionando el producto (35 mg, 65,3% de rendimiento). MS (m/z) 470,1 (M+H).

A una solución de N-(4-(6-amino-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-6-metil1-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxa

15 mida (35 mg, 74,6 µmol) en acetona (10 ml), se agregó MeSO3H (7,16 mg, 74,6 µmol). Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 0,5 horas, esta concentró. El residuo se lavó con éter y se secó, proporcionando metanosulfonato de N-(4-(6-amino-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-6-metil1-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (39 mg, 9,2% de rendimiento). MS (m/z) 470,1 (M+H).

Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento del Ejemplo 50:

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

51: N-(4-(6-amino-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 474,1

52: Metanosulfonato de N-(4-(6-amino-1H-indazol-5iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 502,2

53: N-(4-(6-amino-1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 488,1

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

54: N-(4-(6-(6-aminopiridin-3-il)-1H-indazol-5-iloxi)-3fluorofenil)-2-(4-fluorofenil)-3-oxo-2,3dihidropiridacino-4-carboxamida 552,1

Ejemplo 55

N-(3-fluoro-4-(6-(2-metilmorfolino)-1H-indazol-5-iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida

A un vial con tapón de rosca de 10 ml se agregó 3-fluoro-4-(6-(2-metilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2Hindazol-5-iloxi)anilina (44 mg, 103,17 µmol), ácido 1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxílico (42 mg, 0,18 mmol), EDCl (45,177 mg, 232,13 µmol), HOBt (23,699 mg, 154,75 µmol), seguido de DMF (5 ml, 64,66 mmol) y DIPEA (44,980 µl, 257,92 µmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La 10 reacción se diluyó en EtOAc (50 ml) y se lavó con cloruro sódico acuoso saturado (5 x 25 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y se concentraron hasta sequedad. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con hexanos (A) y EtOAc (B), gradiente desde 80% (A):20% (B) a 30% (A):70% (B) durante 40 minutos, manteniéndose a la relación de 30:70 durante 15 minutos, proporcionando un sólido de color amarillo como el producto deseado N-(3-fluoro-4-(6-(2-metilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5-iloxi)fenil)-1

15 (4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (70 mg, 99% de rendimiento).MS (m/z) 641,8 (M+H).

A un matraz de fondo redondo se agregó N-(3-fluoro-4-(6-(2-metilmorfolino)-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-2H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida (66 mg, 102,86 µmol) y MeOH (5 ml, 123,54 mmol). A la mezcla resultante se agregó MeSO3H (20,229 µl, 308,57 µmol) y la mezcla de reacción se calentó a 40ºC durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentró y se disolvió en DCM (100 ml). La solución se lavó con

20 una mezcla de cloruro sódico acuoso saturado (20 ml) y solución de bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 2o ml). La solución orgánica se extrajo con DCM (1 x 25 ml) y se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM (A) y una solución de MeOH al 10% en DCM (B), gradiente desde 100% (A) hasta 70% (A):30% (B) durante 60 minutos, proporcionando un sólido de color amarillo claro como el producto deseado (40 mg, 62% de rendimiento). MS (m/z) 557,8 (M+H).

25 Los compuestos siguientes se prepararon esencialmente mediante el procedimiento del Ejemplo 55:

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

56: (R)-N-(3-fluoro-4-(6-(2metilmorfolino)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 558,2

57: (R)-N-(3-fluoro-4-(6-(2metilmorfolino)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 572,2

58: N-(4-(6-ciclopropil-1H-indazol-5-iloxi)3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 499

59: N-(4-(6-ciclopropil-1H-indazol-5-iloxi)3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 512,8

60: N-(4-(6-((2S,6R)-2,6-dimetilmorfolino1H-indazol-5-iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridino3-carboxamida 572,2

(Continuación)

Ej. No.: Nombre químico Estructura Datos físicos MS (m/z) (M+H)

61: N-(4-(6-(2,2-dimetilmorfolino-1H-indazol-5iloxi)-3-fluorofenil)-1-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,2dihidropiridino-3-carboxamida 572,2

62: N-(3-fluoro-4-(6-morfolino-1H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-4,6-dimetil-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 571,8

63: N-(3-fluoro-4-(6-(4-(metilsulfonil)fenil)-1Hindazol-5-iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-2-oxo1,2-dihidropiridino-3-carboxamida 613,1

64*: Metanosulfonato de N-(3-fluoro-4-(6-fluoro1H-indazol-5-iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-6metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3carboxamida 491,2

65: 5-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenil)-(6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamid)fenoxi)-N(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-indazol-6carboxamida 600,2

*: La sal metanosulfonato se preparó esencialmente mediante el mismo procedimiento de la etapa de formación de sal en el Ejemplo 3.

Los ensayos siguientes demuestran que ciertos compuestos de la presente invención inhiben potencialmente la fosforilación de c-Met en células, inhiben potencialmente la c-Met in vivo, y demuestran actividad anti-tumor dependiente de la dosis en ciertos modelos de xeno-injertos.

Expresión y purificación de proteína c-Met

El dominio quinasa (KD) de c-Met humana (desde Gly 966 hasta Scr 1390, NCBI NM 000245) se clonó dentro de un vector pFastBac®HT (Invitrogen, Carslbad, CA). El constructo de KD His-c-Met se transposicionó dentro de ADN de Baculovirus usando un sistema Bac-to-Bac® (Invitrogen). Se infectaron células SF9 con el baculovirus recombinante. Las células infectadas se recolectaron mediante centrifugación y el gránulo de células se recogió y almacenó a 80ºC. Las células se lisaron en tampón A (tris(hidroximetil)aminometano (Tris) 40 mM, pH 7,5, NaCl 500 mM, glcerol al 20%, e imidazol 10 mM). Los lisatos de células se homogeneizaron y centrifugaron. Los sobrenadantes se incubaron con resina níquel-nitrilotriacético (Ni-NTA) y se cargaron sobre una columna. Las proteínas se eluyeron con tampón B (tampón A más imidazol 0,3 mM) y las fracciones que contenían c-Met se agruparon conjuntamente, se cargaron sobre una columna Superdex® 200 (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ), se eluyeron con tampón C (Tris 40 mM, pH 7,5, NaCl 250 mM, y glicerol al 10%).

El HGF estimula el ensayo ELISA a base de célula NCI-H460 Met (pY1349)

Se cultivaron células NCI-H460 (adquiridas del ATCC) en medio RPMI 1640 (Invitrogen) suplementadas con Suero Bovino Fetal (FBS) al 10% y se usaron para recubrir placas (antes de que alcanzaran el 70% de confluencia) en placas de fondo plano de 96 pocillos a una densidad de 20.000 células por pocillo en un volumen de 80 µl. A continuación, las células se incubaron durante una noche en una incubadora de cultivo de células (CO2 al 5%, 95% de humedad relativa (HR) y 37ºC) y se dejaron unir a la placa. A la mañana siguiente, las células se lavaron con 2 volúmenes de un Medio de Suero Reducido (RSM) (medio RPMI 1640 suplementado con FBS al 0,5%).Después de la eliminación del último lavado, se agregaron 80 µl de RSM a cada pocillo de las placas de células. Las placas de células se incubaron durante 2,5 horas en una incubadora de cultivo de células y, a continuación, se dosaron con compuestos. En primer lugar, los inhibidores de los compuestos se solubilizaron a 10 mM en DMSO al 100% y, a continuación, se diluyeron a 100 µM con RSM de DMSO al 2%. A continuación, se prepararon diluciones en serie

(1:3) dentro de un intervalo de 100 µM a 0,005 µM. Las células se dosaron con la adición 20 µl de producto madre para producir una concentración en DMSO final de 0,4% y una dosis de concentración de compuesto final dentro del intervalo de entre 20 y 0,001 µM. Después de la dosificación con compuestos, las placas de células se agitaron suavemente para mezclaros y, a continuación, se dejaron incubar durante 30 minutos en una incubadora de cultivo de células. Una vez completada la dosis, las células se estimularon con la adición de 20 µl por pocillo de Factor de Crecimiento de Hepatocitos (HGF) a una concentración final de 100 ng/ml en RSM (se estimularon todos los pocillos excepto los pocillos MIN; los pocillos MIN se dosaron con 20 µl de RSM). Después de 10 minutos de incubación en una incubadora de cultivo de células, se eliminó el líquido de los pocillos de la placa de células, y las células se lisaron mediante la adición de 50 µl de Meso Scale Discovery® (MSD, Gaitherburg, Maryland) enfriado en hielo, Tampón de Lisis 1X (NaCl 150 mM, Tris 20 mM, pH 7,5, EDTA 1 mM, ácido etileno glicol tetraacético 1 mM, TRITON® X-100 al 1%) suplementado con inhibidores Phosphatase I y II y Protease (Sigma, St. Louis, MO). Después de lisis a temperatura ambiente durante 30 minutos, los lisatos se transfirieron a y se capturaron sobre una placa PhosphoMet de 4 manchas y 96 pocillos MSD® Multi-Spot, es decir bloqueada con BSA (a 30 mg/ml de Bloque A en Tampón de Lavado Tris 1X) y, a continuación, se lavó una vez con Tampón de lavado Tris. Después de 2 horas de captura (a temperatura ambiente), los lisatos se eliminaron de la placa MSD® y la placa se lavó con Tampón de Lavado Tris 1X. Después del manchado, se agregaron 25 µl de anticuerpo Met Sulfo-Tag Anti-Total 5 nM (anticuerpo de detección, MSD® preparado en Tampón de Lavado Tris 1X suplementado con 10 mg/ml de BSA y Blocker D-R al 0,1% (MSD®)) a los pocillos de la placa MSD®. Después de 1 hora de captura (a temperatura ambiente), los pocillos de la placa MSD® se lavaron con Tampón de Lavado Tris 1X y, a continuación, se agregaron 150 µl de Tampón de lectura T 1X (con tensioactivo, MSD®). Inmediatamente después de la adición del Tampón de Lectura, las placas se analizaron con un lector de placas SECTOR 6000 MSD® Imager. Los valores IC50 relativos se determinaron usando unidades de actividad MSD, mediante el cálculo del por ciento de inhibición con respecto a los controles “MIN” y “MAX” sobre la placa y, a continuación, representando los valores de inhibición y los datos de respuesta a la dosis de 10 puntos a una ecuación logística de cuatro parámetros. Este ensayo tiene una Relación Significante Mínima (MSR) de 2,06. Para todos los compuestos ejemplificados, los valores de IC50 son menores de 0,2 µM. Por ejemplo, el valor IC50 promedio (n=6) (50% de concentración inhibidora) del Ejemplo 1 en este ensayo es de 0,0352 µM, lo cual indica que inhibe potentemente la fosforilación de c-Met en células.

Ensayo de inhibición diana in vivo de c-Met

Se cultivaron células S114 (con licencia de PHS, que sobre-expresan tanto HGF humano como c-Met humano) en un medio de desarrollo (Medio Eagle Modificado de Dulbecco) suplementado con suero bovino fetal al 10% y se expandieron. Las células se recolectaron y se lavaron dos veces con solución salina tamponada con fosfato y se mezclaron 2x106 células un volumen igual de matriz BD MatrigelTM (BD Bioscience, Franklin, NJ), y se inyectaron subcutáneamente en el costado de ratones desnudos (desnudos atímicos, procedentes de Harlan, Indianapolis, IN). El día 8 después del implante, se administraron compuestos (formulados en goma arábiga al 10% o carboximetilcelulosa al 1%/lauril sulfato sódico al 0,5%/antiespuma al 0,05% como suspensión) a animales mediante sobrealimen

tación por sonda oral a una concentración de 50 mg/kg. Los animales se sacrificaron a las 2 horas post-dosis, y los tumores se recolectaron y almacenaron congelados hasta que se necesitaron.

Los tumores congelados se pulverizaron usando aglomerante pastel. Los tejidos pulverizados se transfirieron a un tubo que contenía esférulas Lysin Matrix D (MP Biomedicals, Solon, OH) y 600 µl de tampón de lisis (tampón RIPA, conteniendo Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, NP-40 al 1%, desoxicolato sódico al 0,5%, SDS al 0,1%, procedente de Boston Bioproducts). Se usó un desmenuzador de células FastPrep® (MP Biomedicals) para desmenuzar el tejido y lisar las células. Los lisatos se pasaron a través de una aguja de galga 20 y se transfirieron a un tubo limpio. La concentración de proteína se determinó mediante el procedimiento Bradford.

Los lisatos de tumores se cargaron sobre placas MSD® phosphor-Met ELISA y se determinó la proporción de fósforo-c-Met usando el mismo protocolo que para el ensayo ELISA a base de célula H460. Para todos los compuestos presentados a modo de ejemplo, los valores de inhibición in vivo de S114 son iguales o superiores al 50% a la dosis de 50 mg/kg. Por ejemplo, el Ejemplo 1 es un inhibidor potente de la fosforilación de c-Met, con un valor ED50 (dosis que produce una inhibición del 50% en tumores) de 2,9 mg/kg, lo que indica que es un inhibidor de c-Met potente in vivo.

Modelos de tumor de xeno-injertos

Se expandieron células de glioblastoma humanas U87MG, células de cáncer gástrico humanas MKN45, células de cáncer de pulmón de célula no pequeña humanas H441, y células de carcinoma renal humanas Caki-1 en cultivo, se recolectaron, y se inyectaron subcutáneamente sobre el costado trasero de ratones desnudos atímicos. El compuesto de ensayo se preparó en un vehículo apropiado y se administró mediante sobrealimentación por sonda oral cuando los tumores se establecieron (7-21 días después del implante). La respuesta del tumor se determinó mediante la medición del volumen del tumor llevada a cabo dos veces a la semana durante el curso del tratamiento. La inhibición del volumen del tumor ((% de inhibición decrecimiento) se calculó mediante comparación con grupos tratados con un grupo de control de vehículo. El peso del cuerpo se tomó como una medición general de la toxicidad. El Compuesto de Ejemplo 1 demostró excelente actividad anti-tumor dependiente de la dosis en estos modelos. Por ejemplo, cuando se dosaron a 1,3 mg/kg (oral (PO), dos veces al día (BID) x 35), el Ejemplo 1 es capaz de causar una inhibición del crecimiento del 59% de tumores U87MG. A la dosis de 4 mg/kg (PO, BIDx35), se logró una inhibición del crecimiento del 82%. A la dosis de 12 mg/kg (PO, BID x35), se alcanzó una inhibición del crecimiento del 92%.

Modelos de xeno-injertos y de tumores relevantes de c-Met

La sobreexpresión de c-Met es una característica común para la mayoría de los tumores humanos, incluyendo pulmón, mama, colorectal, gástrico, renal, pancreático, cabeza y cuello (1,2). Las mutaciones que activan la c-Met en el dominio quinasa están implicadas como la causa para diversos tumores, tal como carcinoma de célula renal papilar hereditaria, carcinoma hepatocelular infantil, y cáncer gástrico (3-7). Los inhibidores de d-Met de Pfizer demostraron eficacia antitumor en muchos tumores de xeno-injertos humanos, incluyendo U97MG, GTL16, H441, Caki-1, y PC3 (8).

1.: Christinsen, JG., Burrows, J., y Salgia, R., Cancer Letters, vol. 225, págs. 1-26, (2005).

2.: Birchmeier, C., Birchmeier, W., Gherardi, E., y Vande Woude, GF., Nat. Rev. Mol. Cell Biol., vol. 4, págs. 915-925, (2003).

3.: Di Renzo, MF., Olivero, M., Martone, T. y otros, Oncogene, vol. 19, págs. 1547-1555, (2000).

4.: Lee, JH., Ha, SU., Cho, H., y otros, Oncogene, vol. 19, págs. 4947-4963, (2000).

5.: Ma, PC., Kijima, T., Mulik, G. y otros, Cancer Res., vol. 63, págs. 6272-6281, (2003).

6.: Park, WS., Dong, SM., Kim, SY., y otros, Cancer Res. Vol. 59, págs. 307-310, (1999).

7.: Schmidt, L., Duh, FM., Chen, F., y otros, Nat. Genet., vol. 16, págs. 68-73, (1997).

8.: Zou, HY., Li, Qiuhua., Lee, JH., y otros, Cancer Res., vol. 67, págs. 4408-4417, (2007).

Los compuestos de la presente invención se formulan preferentemente como composiciones farmacéuticas administradas mediante una diversidad de vías. Lo más preferiblemente, dichos compuestos son para administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas y procedimientos para la preparación de los mismos son bien conocidos en la técnica. Véase, p.ej., Remington: the Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, y otros, eds., 19th, ed. Mack Publishing Co., (1995)).

Los compuestos de Fórmula I son generalmente eficaces dentro de un amplio intervalo de dosificación. Por ejemplo, las dosificaciones por día normalmente entran dentro del intervalo de aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 200 mg de dosis diaria total, preferiblemente 1 mg a 150 mg de dosis diaria total, más preferiblemente 1 mg a 50 mg de dosis diaria total. En algunas circunstancias, pueden ser más adecuadas proporciones de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo anteriormente indicado, en tanto que, en otros casos, pueden usarse dosis aún

mayores. El intervalo de dosificación anterior no está destinado a limitar el ámbito de la invención de ninguna manera. Se da por entendido que la cantidad del compuesto realmente administrado será determinada por un médico, a la vista de las circunstancias relevantes, incluyendo el estado a tratar, la vía elegida de administración, el compuesto o compuestos reales administrados, la edad, peso, y respuesta del paciente individual, y la severidad de los síntomas del paciente.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula:

en la que:

R1 es H o metilo;

R2 es amino, dimetilamino, fluoro, ciclopropilo, piridilo opcionalmente substituido con un substituyente amino

o substituyentes 1,2-metilo, pirazolilo opcionalmente substituido con dos substituyentes metilo, 2-metoxipirimidin-5-ilo, 4-metilsulfonilfenilo, tetrahidro-2H-piran-4-ilamino, (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino carbonilo, o un substituyente morfolinil-4-ilo;

en la que Ra, Rb y Rc están independientemente seleccionados entre H o metilo; R3 es H o F; R4 es H, metilo, piperidin-1-ilmetilo, morfolin-4-ilmetilo, o pirazol-1-ilmetilo; R5 es H o F; y X es CH=N, CH=CH, CH=C(CH3), C(CH3)=CH, C(CH3)=N, N(CH3) o C(morfolin-4-ilmetil)=CH;

o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo.
2.

El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en el que R2 es amino, dimetilamino, ciclopropilo, piridilo opcionalmente substituido con un substituyente amino o substituyentes 1,2-metilo, pirazol-4-ilo, o un morfolinil-4-ilo.
3.

El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en el que R2 es amino, dimetilamino, pirazol-4-ilo, o un morfolinil-4-ilo.
4.

El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en el que R2 es pirazol-4-ilo.
5.

El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en el que R4 es H, metilo, o morfolin-4-ilmetilo.
6.

El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en el que R4 es H.
7.

El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-6, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, en el que X es CH=CH o CH=C(CH3).
8.

El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-1-(4-fluorofenil)-6-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo.
9.

El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es N-(3-fluoro-4-(1-metil-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5iloxi)fenil)-6-metil-2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridino-3-carboxamida o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo.
10.

El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-9, en el que la sal aceptable farmacéuticamente es una sal metanosulfonato.
11.

El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-10, en el que el tamaño de partícula es menor de 10 micrómetros.

5 12. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las reivindicaciones 1-11 o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable farmacéuticamente.
13. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-11 o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, para su uso como un medicamento.
14. Un compuesto o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindi10 caciones 1-11, para su uso en el tratamiento de cáncer.
15. Un compuesto o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el cáncer está seleccionado entre el grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorectal, cáncer renal, cáncer pancreático, cáncer de cabeza, cáncer de cuello, carcinoma de célula renal papilar hereditario, carcinoma hepatocelular infantil, y cáncer gástrico.