ES2503732T3 - Anticuerpos anti-CXCR4 nuevos y su utilización para el tratamiento del cáncer - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la selección de un anticuerpo anti-CXCR4, o uno de sus fragmentos funcionales, siendo dicho fragmento funcional seleccionado de entre los fragmentos Fv, Fab, (Fab')2, Fab', scFv, scFv-Fc y diacuerpos, que puede inhibir la activación de CXCR4, caracterizado por que comprende las etapas siguientes: i) cribar los anticuerpos generados y seleccionar los anticuerpos que pueden unirse específicamente a CXCR4 y modular asimismo la activación de CXCR4; ii) someter a prueba los anticuerpos seleccionados de la etapa i) y seleccionar los anticuerpos que puedeninducir un cambio conformacional de los homodímeros de CXCR4, y a continuación iii) someter a prueba los anticuerpos seleccionados de la etapa ii) y seleccionar los anticuerpos que pueden inducir un cambio conformacional de los heterodímeros de CXCR4/CXCR2.
Description
E09744645
17-09-2014
de las CDR características de la invención que puede ejercer en particular de manera general una actividad, incluso parcial, del anticuerpo del que proviene.
Preferentemente, dichos fragmentos funcionales comprenderán o incluirán a una secuencia parcial de de la cadena 5 ligera o pesada variable del anticuerpo del que se derivan, siendo dicha secuencia parcial suficiente para retener la misma especificidad de unión que el anticuerpo del que proviene y suficiente afinidad, preferentemente por lo menos igual a 1/100, más preferentemente por lo menos 1/10 de la del anticuerpo del que proviene.
Un fragmento funcional de este tipo contendrá por lo menos cinco aminoácidos, preferentemente 6, 7, 8, 10, 15, 25, 10 50 ó 100 aminoácidos consecutivos de la secuencia del anticuerpo del que proviene.
Preferentemente, estos fragmentos funcionales serán de los tipos Fv, scFv, Fab, F(ab’)2, F(ab’), scFv-Fc o diacuerpos, que generalmente presentan la misma especificidad de unión que el anticuerpo del que resultan. Según la presente invención, pueden obtenerse fragmentos del anticuerpo de la invención a partir de los anticuerpos 15 descritos anteriormente mediante procedimientos tales como digestión con enzimas, incluyendo pepsina o papaína, y/o mediante escisión de los puentes disulfuro mediante reducción química. Los fragmentos de anticuerpo también pueden obtenerse mediante técnicas de genética recombinante también conocidas por un experto en la materia o mediante síntesis de péptidos por medio, por ejemplo, de sintetizadores automáticos de péptidos tales como los vendidos por Applied BioSystems, etc. 20 Para mayor claridad, la tabla 2 a continuación resume las diversas secuencias de aminoácidos correspondientes al anticuerpo de la invención.
Tabla 2 (en la que mu. = murino y qui. = quimérico) 25
- Anticuerpo
- Numeración de CDR Cadena pesada Cadena ligera SEC ID nº
- 414H5
- Común CDR-L1 1
- CDR-L2
- 2
- CDR-L3
- 3
- CDR-H1
- 4
- CDR-H2
- 5
- CDR-H3
- 6
- IMGT
- CDR-L1 1
- CDR-L2
- 2
- CDR-L3
- 3
- CDR-H1
- 7
- CDR-H2
- 5
- CDR-H3
- 8
- Kabat
- CDR-L1 9
- CDR-L2
- 10
- CDR-L3
- 3
- CDR-H1
- 11
- CDR-H2
- 12
- CDR-H3
- 6
- Dominio variable mu.
- 13
- Dominio variable mu.
- 14
- Dominio variable qui.
- 64
- Dominio variable qui.
- 65
- 515H7
- Común CDR-L1 40
- CDR-L2
- 2
- CDR-L3
- 41
- CDR-H1
- 42
- CDR-H2
- 5
- CDR-H3
- 43
- IMGT
- CDR-L1 40
- CDR-L2
- 2
- CDR-L3
- 41
- CDR-H1
- 44
- CDR-H2
- 5
- CDR-H3
- 45
- Kabat
- CDR-L1 46
- CDR-L2
- 47
- CDR-L3
- 41
16
E09744645
17-09-2014
- Anticuerpo
- Numeración de CDR Cadena pesada Cadena ligera SEC ID nº
- CDR-L2
- 24
- CDR-L3
- 17
- CDR-H1
- 25
- CDR-H2
- 26
- CDR-H3
- 20
- Dominio variable mu.
- 27
- Dominio variable mu.
- 28
- Dominio variable qui.
- 68
- Dominio variable qui.
- 69
- 515H7
- Común CDR-L1 52
- CDR-L2
- 16
- CDR-L3
- 53
- CDR-H1
- 54
- CDR-H2
- 19
- CDR-H3
- 55
- IMGT
- CDR-L1 52
- CDR-L2
- 16
- CDR-L3
- 53
- CDR-H1
- 56
- CDR-H2
- 19
- CDR-H3
- 57
- Kabat
- CDR-L1 58
- CDR-L2
- 59
- CDR-L3
- 53
- CDR-H1
- 60
- CDR-H2
- 61
- CDR-H3
- 55
- Dominio variable mu.
- 62
- Dominio variable mu.
- 63
- Dominio variable qui.
- 70
- Dominio variable qui.
- 71
Las expresiones “ácido nucleico”, “secuencia nucleica”, “secuencia de ácido nucleico”, “polinucleótido”, “oligonucleótido”, “secuencia de polinucleótido” y “secuencia de nucleótidos”, utilizadas de manera intercambiable en la presente descripción, significan una secuencia de nucleótidos precisa, modificada o no, que define un fragmento o 5 una región de un ácido nucleico, que contiene o no nucleótidos no naturales, y que es o bien un ADN bicatenario, un ADN monocatenario o bien los productos de transcripción de dichos ADN.
También debe incluirse que la presente invención no se refiere a secuencias de nucleótidos en su entorno cromosómico natural, es decir, en un estado natural. Las secuencias de la presente invención se han aislado y/o
10 purificado, es decir, se tomaron como muestras directa o indirectamente, por ejemplo mediante copia, de su entorno, habiéndose modificado por lo menos parcialmente. También deben mencionarse en la presente memoria los ácidos nucleicos aislados obtenidos mediante genética recombinante, por medio, por ejemplo, de células huésped, o los obtenidos mediante síntesis química.
15 “Las secuencias nucleicas que muestran una identidad en porcentaje de por lo menos el 80%, preferentemente el 85%, 90%, 95% y 98%, tras una alineación óptima con una secuencia preferida” significa secuencias nucleicas que muestran, con respecto a la secuencia nucleica de referencia, ciertas modificaciones tales como, en particular, una deleción, un truncamiento, una extensión, una fusión quimérica y/o una sustitución, en particular puntual. Preferentemente, éstas son secuencias que codifican para las mismas secuencias de aminoácidos que la secuencia
20 de referencia, estando ésta relacionada con la degeneración del código genético, o secuencias de complementariedad que es probable que hibriden específicamente con las secuencias de referencia, preferentemente en condiciones altamente rigurosas, en particular las definidas a continuación.
La hibridación en condiciones altamente rigurosas significa que se seleccionan condiciones relacionadas con la
25 temperatura y fuerza iónica de tal manera que permiten que se mantenga la hibridación entre dos fragmentos de ADN de complementariedad. Partiendo de una base meramente ilustrativa, las condiciones altamente rigurosas de la etapa de hibridación con el fin de definir los fragmentos de polinucleótido descrito anteriormente son ventajosamente tal como sigue.
30 La hibridación de ADN-ADN o ADN-ARN se lleva a cabo en dos etapas: (1) prehibridación a 42ºC durante tres horas en tampón fosfato (20 mM, pH 7,5) que contiene 5X SSC (1X SSC corresponde a una disolución de NaCl 0,15 M +
19
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