ES2533228T3

ES2533228T3 - Identificación, optimización y uso de epítopos compartidos de HLA-B*0702 para inmunoterapia

Info

Publication number: ES2533228T3
Application number: ES09786052.2T
Authority: ES
Inventors: Kostantinos Kosmatopoulos (Kostas); Jeanne Menez-Jamet
Original assignee: Vaxon Biotech SA
Current assignee: Vaxon Biotech SA
Priority date: 2009-06-09
Filing date: 2009-06-09
Publication date: 2015-04-08
Anticipated expiration: 2029-06-09
Also published as: CA2764760C; WO2010143010A1; CA2764760A1; HK1169424A1; BRPI0924556A2; PL2440575T3; US10024868B2; US20120142894A1; CN102459322A; CN102459322B; PT2440575E; EP2440575A1; EP2440575B1; JP2012529283A

Abstract

Método para identificar un péptido restringido por HLA-B*0702 que puede desencadenar una respuesta citotóxica contra al menos dos antígenos de la familia multigénica MAGE-A, que comprende al menos las siguientes etapas: (i) identificar, en los genes de dicha familia multigénica, péptidos de 9 o 10 aminoácidos que tienen una P en la posición 2 y 5 un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, K, H y M en la posición 3; (ii) alinear las secuencias obtenidas en (i); (iii) identificar, entre los péptidos obtenidos en la etapa (i), un grupo de al menos dos péptidos, en los que al menos un péptido es un "péptido esencialmente compartido", es decir, es de tal manera que su región antigénica difiere de las de otros péptidos del grupo en, como máximo, un residuo, en donde dicha región antigénica se extiende desde la posición 4 a la posición 8 en un péptido que tiene 9 aminoácidos, y desde la posición 4 a la posición 9 en un péptido que tiene 10 aminoácidos; (iv) medir la inmunogenicidad del péptido esencialmente compartido; y (v) modificar la secuencia del péptido esencialmente compartido para aumentar su inmunogenicidad; en donde el péptido obtenido en la etapa (v) provoca una respuesta citotóxica contra al menos dos antígenos de dicha familia multigénica.

Description

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Tabla 1: péptidos nativos restringidos por HLA-B7 y péptidos optimizados correspondientes altamente homólogos entre antígenos MAGE-A (las secuencias antigénicas se destacan)

Péptidos Nativos: Secuencia antigénica Correspondiente a IMAGE-A Péptido optimizado

Nombre: Secuencia Seq ID nº Secuencia Seq ID nº

MAGE-A 188 (9 mers): MPKTGFLII 2 MAGE Al, A6 APKTGFLII 32

MPKTGFLIL: 33

MPKTGLLII FPKTGLLII VPKTGLLII: 3 4 5 MAGE A2, MAGE A4, MAGE A12 APKTGLLII 34

MPKTGLLIL FPKTGLLIL VPKTGLLIL: 35 36 37

MPKAGLLII: 6 MAGE A3 MPKAGLLIL APKAGLLII 38

MPKAGLLIL: 39

MPKTGILIL: 7 MAGE A10 APKTGILIL 40

MAGE-A 188 (10 mers): MPKTGFLIIVMPKTGFLIII 8 9 MAGE A1, MAGE A6 APKTGFLIIVAPKTGFLIII 41 42

MPKTGFLIIL: 43

MPKTGLLIIV FPKTGLLIIVVPKTGLLIIV: 10 11 12 MAGE A2, MAGE A4, MAGE A12 APKTGLLIIV 44

MPKTGLLIIL FPKTGLLIIL VPKTGLLIIL: 45 46 47

MPKAGLLIIV: 13 MAGE A3 APKAGLLIIV 48

MPKAGLLIIL: 49

MPKTGILILI: 14 MAGE A10 APKTGILILI 50

MPKTGILILL: 51

MAGE-A 267 (9 mers): GPRALAETS 15 MA GE A1, A4 GPRALAETL 52

GPRALIETS: 16 MAGE A2, A6 GPRALIETL 53

GPRALVETS: 17 MAGE A3, A12 GPRALVETL 54

MAGE-A 267 (10 mers): GPRALAETSY 18 MAGE A1, A4 GPRALAETSL 55

GPRALIETSY: 19 MAGE A2, A6 GPRALIETSL 56

GPRALVETSY: 20 MAGE A3, A12 GPRALVETSL 57

MAGE-A 233 (9 mers): EPRKLLTQD HPRKLLTQDDPKKLLTQH DPKKLLTQY 21 22 23 24 MAGE A1, A4, A10 MAGE A12 MAGE A3 MAGE A6 EPRKLLTQL HPRKLLTQL DPKKLLTQL DPKKLLTQL 58 59 60 61

HPKKLLMQD: 25 MAGE A2 HPKKLLMQL 62

MAGE-A 233 (10 mers): EPRKLLTQDL EPRKLLTQDW HPRKLLTQDL 26 27 28 MAGE A1 MAGE A4, A10 MAGE A12 EPRKLLTQDL APRKLLTQDL 63 64

HPKKLLMQDL: 29 MAGE A2 APKKLLMQDL 65

DPKKLLTQHF: 30 MAGE A3 DPKKLLTQHL 66

DPKKLLTQYF: 31 MAGE A6 DPKKLLTQYL 67

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La vacunación antitumoral poliespecífica ofrece un control más amplio de las células tumorales que la vacunación monoespecífica, reduciendo de ese modo el riesgo de aparición de variantes de escape inmunes. En la mayoría de los casos, la inmunoterapia es entonces más eficaz cuando se dirige a diversos epítopos que cuando se dirige a un único epítopo, siempre que se sepa que el tumor expresa todos los antígenos fijados como diana. Los inventores han descrito previamente un polipéptido compuesto de péptidos crípticos optimizados restringidos por HLA-A*0201 derivados de tres diferentes antígenos tumorales universales (TERT988Y, HER-2/neu402Y y MAGE-A248V9), llamado Vx006 (WO 2007/073768). El Vx-006 es capaz de inducir una respuesta de células CD8 poliespecífica tanto in vivo en ratones HHD transgénicos HLA-A*0201 como in vitro en humanos, mientras que la mezcla de los péptidos TERT988Y, HER-2/neu402Y y MAGE-A248V9 no pudo inducir una respuesta tri-específica. Por lo tanto, un polipéptido quimérico que comprende diversos epítopos puede ser más eficaz que una simple mezcla de los mismos epítopos para desencadenar una respuesta contra más de un epítopo. Dependiendo del contexto, un polipéptido que comprende una repetición de un único epítopo puede también desencadenar una respuesta más fuerte contra dicho epítopo que un péptido que consiste en dicho epítopo. De hecho, una organización de polipéptidos (ya sea con diferentes epítopos o con una repetición de un único epítopo) puede producir nuevos epítopos de unión, especialmente epítopos restringidos por CD4, capaces de optimizar la respuesta inmune específica al péptido o péptidos establecidos como diana. Más aún, cuando los péptidos libres son inyectados por vía subcutánea, los péptidos se unen directamente a moléculas de MHC de cada célula presente en el sitio de inyección. Debido a que los polipéptidos necesitan ser procesados, la vacunación con polipéptidos es más eficaz para dirigir péptidos antigénicos a células presentadoras de antígeno (APC, por sus siglas en inglés), como las células dendríticas.

Un aspecto adicional de la invención es por tanto un polipéptido quimérico, que comprende uno, dos, tres o más epítopos restringidos por HLA-B*0702 tal como se ha descrito anteriormente. En particular, un polipéptido quimérico de acuerdo con la invención puede comprender uno, dos, tres o más epítopos restringidos por HLA-B*0702 nativos descritos anteriormente, o uno, dos, tres o más epítopos restringidos por HLA-B*0702 optimizados inmunogénicos seleccionados entre SEQ ID Nos: 32-67. Por supuesto, los epítopos restringidos por HLA-B*0702 optimizados pueden también combinarse, en un polipéptido quimérico, en epítopos restringidos por HLA-B*0702 nativos que han sido identificados como epítopos inmunogénicos. En un polipéptido quimérico de acuerdo con la invención, los epítopos pueden ser diferentes entre sí, y/o el mismo epítopo puede repetirse varias veces.

Debe de señalarse que cuando diversos epítopos específicos para la misma molécula de HLA se utilizan juntos, ya sea en una mezcla o en un polipéptido quimérico, los epítopos se encuentran en competición para la unión a la correspondiente molécula de HLA. Por el contrario, utilizando una mezcla de diferentes epítopos restringidos por HLA (HLA-A*0201, HLA-A*2402, HLA-B*0702 u otros), o un polipéptido quimérico que comprende los mismos diferentes epítopos restringidos por HLA, no habrá competición para la unión a HLA, y se obtendrá con seguridad una respuesta poliespecífica, siempre que todas las moléculas de HLA se expresen en el individuo vacunado.

En un polipéptido quimérico de acuerdo con la invención, los epítopos crípticos o inmunogénicos (nativos u optimizados) restringidos por HLA-B*0702, descritos anteriormente, pueden por tanto asociarse de manera ventajosa con los péptidos descritos previamente HLA-A*0201 (WO 02/02716) y/o HLA-B*0702 (WO 2008/010010 y WO 2008/010098), y/o a péptidos HLA-A*2402 tal como se revela en la Tabla 2 más adelante, y/o a epítopos inmunogénicos derivados de antígenos asociados a tumores descritos previamente, que comprenden CEA, PRAME, Tirosinasa, TRAG-3, NY-Eso-1, P53, Muc-1, PSA/PSMA, survivina, Melan-A/MART-1, TRP-1, TRP-2, WT1, EphA1, EphA2, EphA3, EphA4, G250/MN/CAIX, STEAP, alfafetoproteína, RAGE-1, PAGE-1. Por supuesto, una mezcla de péptidos polialélicos, que comprende al menos un péptido de acuerdo con la presente invención y un epítopo diferente restringido por HLA (HLA-A*0201, HLA-A*2402, HLA-B*0702 u otros), es también parte de la presente invención.

Ejemplos de epítopos que puedan combinarse de manera ventajosa en epítopos MAGE-A restringidos por HLAB*0702 (ya sea en una mezcla o en un polipéptido quimérico), además de ejemplos de epítopos inmunogénicos optimizados que pueden ser combinados de manera ventajosa en epítopos MAGE-A restringidos por HLA-B*0702 inmunogénicos (nativos u optimizados), se describen en la Tabla 2 a continuación. Por supuesto, estas listas no son limitativas.

Tabla 2: epítopos de HLA-A2, -B7 y -A24 que pueden combinarse con epítopos de MAGE-A restringidos por HLA-B*0702 en polipéptidos quiméricos según la invención

HLA-A *0201

Péptido nativo: Péptido optimizado

Antígeno: Secuencia Nº Nombre Secuencia Nº

Mart-127: AAGIGILTV 68 Mart-127Y1 YAGIGILTV 112

Mart-126: EAAGIGILTV 69 Mart-126LT7 ELAGIGILTV 113

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Tabla 2 (continuación)

HLA-A *0201

Péptido nativo: Péptido optimizado

Antígeno: Secuencia Nº Nombre Secuencia Nº

Gp100177: AMLGTHTMEV 70 Gp100177Y1 YMLGTHTMEV 114

Gp100178: MLGTHTMEV 71 Gp100178Y1 YLGTHTMEV 115

Gp100154: KTWGQYWQV 72 Gp100154Y1 YTWGQYWQV 116

Gp100154M155: KMWGQYWQV 117

Gp100570: SLADTNSLAV 73 Gp100570Y1 YLADTNSLAV 118

Gp100209: TDQVPFSV 74 Gp100209Y1 YDQVPFSV 119

Gp100209M210: YMQVPFSV 120

Gp100476: VLYRYGSFSV 75 GP100476Y1 YLYRYGSFSV 121

Gp100457: LLDGTATLRL 76 Gp100457Y1 YLDGTATLRL 122

HER-2/neu799: QLMPYGCLL 77 HER-2/neu799Y1 YLMPYGCLL 123

HER-2/neu369: KIFGSLAFL 78 HER-2/neu369Y1 YIFGSLAFL 124

HER-2/neu789: CLTSTVQLV 79 HER-2/neu789Y1 YLTSTVQLV 125

HER-2/neu48: HLYQGCQW 80 HER-2/neu48Y1 YLYQGCOW 126

HER-2/neu773: VMAGVGSPYV 81 HER-2/neu773Y1 YMAGVGSPYV 127

HER-2/neu5: ALCRWGLL 82 HER-2/neu5Y1 YLCRWGLL 128

HER-2/neu851: VLVKSPNHV 83 HER-2/neu851Y1 VLVKSPNHV 129

HER-2/neu661: ILLVVVLGV 84 HER-2/neu661Y1 YLLVVVLGV 130

HER-2/neu650: PLTSIISAV 85 HER-2/neu650Y1 YLTSIISAV 131

HER-2/neu466: ALIHHNTHL 86 HER-2/neu466Y1 YLIHHNTHL 132

HER-2/neu402: TLEEITGYL 87 HER-2/neu402Y1 YLEEITGYL 133

HER-2/neu391: PLQPEQLQV 88 HER-2/neu391Y1 YLQPEQLQV 134

HER-2/neu971: ELVSEFSRM 89 HER-2/neu971Y1 YLVSEFSRM 135

EphA261: DMPIYMYSV 90 EphA261Y1 YMPIYMYSV 136

HER2911: TVWELMTFGA 91 92 HER911Y1V10 YVWELMTFGV 137

HER4911: TIWELMTFGG

HER1911: TVWELMTFGS 93

HER2722: KVKVLGSGA 94 HER722Y1V9 YVKVLGSGV 138

HER3722: KLKVLGSGV 95

HER4722: RVKVLGSGA 96

HER1722: KIKVLGSGA 97

HLA-A *0201

Péptido nativo: Péptido optimizado

Antígeno: Secuencia Nº Nombre Secuencia Nº

HER2845: DLAARNVLV 98 HER845Y1 YLAARNVLV 139

HER3845: NLAARNVLL 99

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Tabla 2 (continuación)

HLA-A *0201

Péptido nativo: Péptido optimizado

Antígeno: Secuencia Nº Nombre Secuencia Nº

HER2904: DVWSYGVTV 100 HER904Y1 YVWSYGVTV 140

HER4904: DVWSYGVTI 101

HER2933: DLLEKGERL 102 HER933Y1 YLLEKGERL 141

HER1933: SILELKGERL 103

HER2945: PICTIDVYMI 104 HER945Y1 YICTIDVYMV 142

HER3945: QICTIDVYMV 105

BER4945: PICTIDVYMV 106

HER1945: PICTIDVYKI 107

MAGE-A248G9: YLEYRQVPG 108 MAGE-A248V9 YLEYRQVPV 143

MAGE-A248D9: YLEYRQVPD 109

TERT988: DLQVNSLQTV 110 TERT988Y1 YLQVNSLQTV 144

TERT572: RLFFYRKSV 111 TERT572Y1 YLFFYRKSV 145

HLA-B*0702

Péptido nativo: Péptido optimizado

Nombre: Secuencia Nº Nombre Secuencia Nº

TERT444: DPRRLVQLL 146 TERT444A1 APRRLVQLL 151

CEA188/554: SPRLQLSNG 147 CEA188/554L9 SPRLQLSNL 152

HER-2/neu1069: APRSPLAPS 148 HER-2/neu1069L9 APRSPLAPL 153

HER-2/neu760: SPKANKEIL 149 HER-2/neu760A1 APKANKEIL 154

HER-2/neu246: GPKHSDCLA 150 HER-2/neu246A1 APKHSDCLA 155

HLA-A*2402

Péptido nativo: Péptido optimizado

Nombre: Secuencia Nº Nombre Secuencia Nº

TERT 403: PYGVLLKTH 156 TERT 403 KIL9 KYGVLLKTL 165

TERT 770: PYMRQFVAH 157 TERT 770 RIL9 RYMRQFVAL 166

HER 780: PYVSRLLGI 158 HER 780 R1 RYVSRLLGI 167

EphA2 47: PYGKGWDLM 159 EphA2 47 RIL9 RYGKGWDLL 168

EphA2 502: TYLVQVQAL 160 EphA2 502 R1 RYLVQVQAL 169

EphA2 817: PYWELSNHE 161 EphA2 817 R1L9 RYWELSNHL 170

Her2/neu 922: PYDGIPARE 162

MAGE 261: RYEFLWGPR 163

Her2/neu 300: PYNYLSTDV 164

El experto en el arte puede elegir cualquier técnica conocida para producir tales polipéptidos. Por ejemplo, el polipéptido puede ser obtenido mediante síntesis química, o utilizando la tecnología de la ingeniería genética (Velders et al., 2001).

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Otro objeto de la presente invención es una molécula de ácido nucleico aislada diseñada para causar la expresión de un epítopo MAGE-A restringido por HLA-B*0702 críptico, o de un epítopo MAGE-A restringido por HLA-B*0702 inmunogénico (ya sea nativo u optimizado), o de un polipéptido quimérico tal como se ha descrito anteriormente. Por “diseñada para causar la expresión de” un péptido se entiende en la presente patente que dicho péptido es expresado como tal, aislado de todo el antígeno del que su secuencia ha sido seleccionada (y, en casos adecuados, optimizados tal como se ha descrito anteriormente), cuando el ácido nucleico se introduce en una célula apropiada. La región que codifica el epítopo o el polipéptido quimérico se situará habitualmente en el polinucleótido bajo control de un promotor adecuado. Los promotores bacterianos serán preferidos para la expresión en bacterias, que pueden producir el polipéptido ya sea in vitro, o, en circunstancias particulares, in vivo. Un ejemplo de bacteria que puede ser utilizada para producir un péptido o polipéptido de acuerdo con la invención, directamente in vivo, es Listeria monocytogenes, que es una bacteria facultativa que se introduce en las células presentadoras de antígeno mediante fagocitosis activa (Paterson y Maciag, 2005). De manera alternativa, un ácido nucleico de acuerdo con la invención puede ser administrado directamente, utilizando un vector apropiado. En este caso, un promotor específico del tejido, constitutivo fuerte, o endógeno puede ser utilizado para controlar la expresión del péptido. Sistemas de vectores adecuados incluyen plásmidos de ADN desnudo, composiciones liposomales para mejorar la administración, y vectores virales que causan la expresión transitoria. Ejemplos de vectores virales son los adenovirus o vectores del virus vaccinia y vectores de la familia del herpes, especialmente en una forma no replicativa.

La presente invención también concierne a una composición farmacéutica que comprende al menos, como principio activo, un epítopo críptico MAGE-A restringido por HLA-B*0702 según se ha descrito anteriormente, o un epítopo MAGE-A restringido por HLA-B*0702 inmunogénico (optimizado o nativo) según se ha mencionado anteriormente, o un polipéptido quimérico de acuerdo con la invención, o un ácido nucleico que codifica cualquiera de estos, y/o un vector que porta dicho ácido nucleico. La formulación de composiciones farmacéuticas concordará con estándares y técnicas contemporáneas. Las medicinas destinadas a su administración en humanos serán preparadas en condiciones adecuadamente estériles, en las que el ingrediente o ingredientes activos se combinan con una solución isotónica u otro soporte farmacéutico apropiado para el uso terapéutico recomendado. Formulaciones y técnicas adecuadas se describen en general en la última edición de Remington’s Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co, Easton PA).

En particular, un epítopo MAGE-A restringido por HLA-B*0702 o un polipéptido quimérico o un ácido nucleico de acuerdo con la invención puede ser utilizado para la preparación de una composición para la inmunoterapia anticancerígena preventiva o curativa. El péptido GPRALVETL (SEQ ID No: 54), y los polipéptidos quiméricos que lo comprenden, son especialmente apropiados para este propósito.

En un modo de realización en particular, una composición farmacéutica de acuerdo con la invención es una vacuna. En este último caso, los componentes descritos anteriormente pueden combinarse con un adyuvante para potenciar la respuesta inmune. Adyuvantes clásicos incluyen emulsiones de aceite, como adyuvante incompleto de Freund o Montanide, y superficies adherentes tales como alumbre. Adyuvantes que reclutan y activan las células dendríticas particularmente a través TLR (tale como proteínas derivadas de la membrana bacteriana o de ADN bacteriano), o ayudan a suscitar linfocitos T citotóxicos son especialmente útiles. Otros factores que de otro modo estimulan la respuesta inmune o promueven la apoptosis o la eliminación de células cancerígenas pueden también incluirse en la composición, tales como citocinas IL-2 o IL-12 o GM-CSF.

Múltiples dosis y/o diferentes combinaciones de las composiciones inmunogénicas de la presente invención pueden ser envasadas para su distribución por separado o juntas. Cada composición o conjunto de composiciones, tales como los kits de las piezas descritas más adelante, pueden estar acompañadas de instrucciones escritas en referencia al uso de la composición o combinación para suscitar una respuesta inmune y/o para el tratamiento contra el cáncer.

En una solicitud de patente previa (WO 2006/120038), el solicitante ha descrito un protocolo de vacunación que permite la iniciación y mantenimiento de la respuesta de un linfocito T dirigida a epítopos sub-dominantes/crípticos. Los resultados descritos en WO 2006/120038 demuestran que la inyección de un péptido nativo correspondiente a un epítopo críptico/subdominante, a continuación de la vacunación con su péptido optimizado afín, puede mantener la respuesta inmune iniciada por dicho péptido optimizado.

De acuerdo con la invención, un epítopo críptico MAGE-A restringido por HLA-B*0702 puede por tanto ser utilizado para la preparación de una composición médica para mantener la respuesta inmune del CTL iniciada por su péptido optimizado afín. Un péptido inmunogénico que tiene una secuencia de epítopo MAGE-A restringido por HLA-B*0702 derivada de un epítopo críptico MAGE-A restringido por HLA-B*0702 puede además utilizarse, para la preparación de una composición médica, para iniciar una respuesta inmune del CTL contra dicho epítopo críptico MAGE-A restringido por HLA-B*0702, pero también contra todos los epítopos del grupo seleccionado en la etapa (iii) del método anteriormente descrito. Por supuesto, la mezcla de los péptidos del grupo seleccionado en la etapa (iii) puede ser utilizada para mantener la respuesta inmune de CTL iniciada por el péptido esencialmente compartido.

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(ii) una mezcla de péptidos polialélicos o un polipéptido quimérico polialélico, que comprende al menos un epítopo inmunogénico MAGE-A restringido por HLA-B*0702 afín al epítopo nativo MAGE-A restringido por HLA-B*0702 citado en (i), y al menos otro epítopo inmunogénico afín al otro epítopo nativo citado en (i).

De manera alternativa, los kits de acuerdo con la invención pueden comprender, en lugar de al menos parte de los péptidos o polipéptidos quiméricos, ácido o ácidos nucleicos que codifican dichos péptidos o polipéptidos quiméricos. En este caso, el ácido o ácidos nucleicos es o son tal como se describe anteriormente.

En la siguiente descripción de algunos kits específicos de acuerdo con la invención, se hará mención únicamente de los péptidos (nativos u optimizados) incluidos en la misma; se debe entender que pueden ser incluidos en los kits un polipéptido o polipéptidos quiméricos (que comprenden epítopos crípticos nativos o epítopos optimizados) en lugar de péptidos de un único epítopo, y que un ácido o ácidos nucleicos pueden también ser incluidos además de o en lugar de parte de dichos péptidos o polipéptidos quiméricos.

En un modo de realización en particular de la invención, el kit es un kit de vacunación, en donde dicho primer (nativo) y segundo (optimizado afín) péptidos están en dosis de vacunación separadas. En un modo de realización preferido, el kit de vacunación comprende 2 o 3 dosis de péptido optimizado, y 3, 4, 5 o 6 dosis de péptido nativo. Un kit de vacunación en particular de acuerdo con la invención se adapta para la primera secuencia de vacunación de 6 inyecciones, y comprende 2 o 3 dosis de péptido optimizado, y 4 o 3 dosis de péptido nativo. En caso de enfermedades de larga duración, resulta preferible mantener el nivel de inmunidad obtenido tras esta primera vacunación, mediante ciclos regulares. Esto puede realizarse, por ejemplo, mediante inyecciones realizadas cada 1 a 6 meses. Por lo tanto, kits complementarios, que comprenden al menos 2 dosis, y hasta 40 o 50 dosis de péptido nativo, son también parte de la presente invención. De manera alternativa, el kit de vacunación puede comprender 2 a 3 dosis de péptido optimizado, y 3 a 40 o hasta 50 dosis de péptido nativo. Por supuesto, dichos péptidos nativos y optimizados presentes en el kit son tal como se ha descrito anteriormente.

Cada dosis comprende entre 0,1 y 10 mg de péptido, preferiblemente de 1 a 5 mg, o entre 1 y 20 mg de polipéptido. En un modo de realización preferido, cada dosis está formulada para inyección subcutánea. Por ejemplo, cada dosis puede ser formulada en 0,3 a 1,5 ml de una emulsión de solución acuosa emulsionada con Montanide ISA51, utilizado como un adyuvante. El experto en el arte puede elegir cualquier otro adyuvante o adyuvantes en lugar de (o además de) Montanide ISA51. En un modo de realización en particular, las dosis son en forma de una solución acuosa. De manera alternativa, las dosis pueden ser en forma de péptido liofilizado, para la preparación extemporánea de la solución líquida a ser inyectada. Otros posibles componentes de dichos kits son uno o diversos adyuvantes, a ser añadidos a las composiciones de péptidos antes de su administración, y una nota que describe cómo utilizar dichos kits.

La invención se ilustra además por las siguientes figuras y ejemplos.

Legendas de las figuras

Figura 1: Secuencias de la familia multigénica MAGE-A. Para identificar uno o más epítopos compartidos por los diversos antígenos MAGE-A y presentados por la molécula HLA-B*0702, las secuencias de los antígenos MAGE-A se alinearon, y las regiones de al menos 5 aminoácidos se seleccionaron en base a su homología entre estos antígenos (enmarcados con una línea continua negra). Los aminoácidos que son completamente idénticos de MAGE-A1, -A2, -A3, -A4, -A6, -A12 y/o -A10 están resaltados en gris.

Figura 2: Inmunogenicidad de péptidos crípticos optimizados restringidos por HLA-B*0702. Se vacunaron ratones transgénicos HLA-B*0702 con los péptidos optimizados siguiendo el protocolo descrito y los CTL generados se sometieron a prueba contra dianas T2-B7 cargadas con los péptidos optimizados y con los nativos correspondientes según se indica. A; Vacunación con el péptido MAGE-A A1L9 de SEQ ID No: 171, B; Vacunación con el péptido monomodificado MAGE A L9 de SEQ ID No: 54.

Ejemplos

Los ejemplos han sido realizados utilizando los siguientes materiales y métodos:

Ratones transgénicos. Los ratones genéticamente deficientes o knockout HLA-B7 H-2 clase I fueron descritos previamente (Rohrlich et al., 2003).

Células. Las células T2-B7 humanas transfectadas HLA-B*0702 fueron descritas previamente (Rohrlich et al., 2003).

Péptidos y plásmidos. Los péptidos fueron sintetizados por Epytop (Nîmes, France). EL plásmido HLA-B*0702 fue proporcionado por el Dr. Lemonnier (Institut Pasteur, Paris, France) (Rohrlich et al., 2003).

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18-03-2015

Tabla 4 (continuación)

Péptido Secuencia AR Inmunogenicidad Reconocimiento cruzado SEQ ID No de péptidos nativos

MAGE-A A1L9 APRALVETL + 6/11 MAGE-A A (1/8) 171 MAGE-A I (0/3) MAGE-A V (0/3)

MAGE-A L9 GPRALVETL ND 18/18 MAGE-A A (3/8) 54 MAGE-A I (3/5) MAGE-A V (4/5)

AR= Afinidad relativa = (concentración de cada péptido que induce el 20% de la expresión de HLA-B*0702 / Concentración del péptido de referencia que induce el 20% de la expresión de HLA-B*0702), (-) media de AR>10, (+/-) 1<AR<10, (+) 5<AR<10, (++) AR <1 (X/Y) significa que los ratones X desarrollaron una respuesta específica para un total de ratones vacunados Y

Referencias

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Claims

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