ES2541804T3 - Hematoxilina estabilizada - Google Patents

Abstract

Composición de hematoxilina estabilizada para la tinción de una muestra de tejido o citológica, que comprende: un solvente, hematoxilina, una cantidad de un oxidante químico suficiente para convertir por lo menos una parte de la hematoxilina en hemateína, un mordiente, y tanto ciclodextrina como hidroquinona.

Description

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07-07-2015

adición de un compuesto del huésped podía enlentecer adicionalmente la oxidación natural de la hemateína y la formación resultante de precipitado.

En todos los casos se prepararon las formulaciones de hematoxilina de la manera siguiente:

1) Se mezcló agua desionizada y etilenglicol (al 25% en volumen, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) o propilenglicol (al 25% en volumen, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) para formar un solvente para la composición. 2) A continuación se añadió al solvente pigmento hematoxilina (Dudley Chemical Corp., Lakewood, NJ) a la concentración indicada en las figs. 2 y 3, formando una solución de hematoxilina. 3) Se añadió yodato sódico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) a las concentraciones indicadas en las figs. 2 y 3 y se dejó que oxidase la hematoxilina en hemateína, formando de esta manera una solución de hemateína que presentaba una concentración molar inicial de hemateína aproximadamente igual a la concentración molar de la hematoxilina menos la concentración molar del yodato sódico. 4) Se añadió octadecahidrato de sulfato de aluminio (JT Baker, Phillipsburg, NJ) a la solución de hemateína a la concentración indicada en las figs. 2 y 3 para formar una solución de hemalum. 5) A continuación se añadieron combinaciones de hidroquinona, galato de n-propilo e hidrato de β-ciclodextrina (todos disponibles de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) a las concentraciones indicadas en las figs. 2 y 3, formando las composiciones sometidas a ensayo. 6) Se introdujeron las composiciones en recipientes de bolsa interior separadas que se utilizaron para el almacenamiento a bordo de reactivos en el sistema de tinción automatizado descrito anteriormente.

No se añadió ácido a las composiciones utilizadas en los presentes ejemplos.

Las figs. 2 y 3 resumen 8 composiciones diferentes y los resultados de ensayo de la estabilidad a varias temperaturas se basaron en la observación de los precipitados en los recipientes de bolsa interior. En todos los casos, la adición de uno o más antioxidantes y el compuesto del huésped mejoraron la estabilidad en comparación con una solución de hematoxilina "no estabilizada" equivalente sin un antioxidante y/o compuesto del huésped añadido, en el que la hematoxilina no estabilizada muestra precipitados en todo el recipiente tras una semana a una temperatura de entre 2ºC y 8ºC, tras 4 semanas a temperatura ambiente y a 30ºC y tras 2 semanas a 45ºC.

También se llevó a cabo un ensayo de estabilidad de larga duración que incluyó la utilización de composiciones almacenadas para la tinción manual de portaobjetos multitejido. Se introdujeron en recipientes de múltiples bolsas interiores cada uno de dos lotes de una solución acuosa de hematoxilina que incluía etilenglicol al 25% (v/v), hematoxilina 20 mM, yodato sódico 3,3 mM, octadecahidrato de sulfato de aluminio 20 mM, hidroquinona 85 mM e hidrato de β-ciclodextrina 10 mM con un pH de aproximadamente 2,6. Un recipiente de cada lote se dejó bajo condiciones ambientales; un recipiente de cada lote se sometió a un ciclo de congelación-descongelación, un recipiente de cada lote se sometió a condiciones de estrés durante el transporte de 45ºC a temperatura ambiente y un recipiente de cada lote se sometió a condiciones de estrés durante el transporte de temperatura entre 2ºC y 8ºC y la temperatura ambiente. A intervalos de un mes se inspeccionó cada uno de los recipientes para la presencia de precipitados y se extrajo una alícuota y se comprobó su pH. A continuación se utilizó la alícuota para teñir manualmente un portaobjetos de microscopía que portaba múltiples secciones de tejido (hígado, riñón, colon, piel y una amígdala, nódulo linfático o bazo). Tras un total de 13 meses de ensayos mensuales, las soluciones en la totalidad de los diferentes recipientes consistentemente mostró la ausencia de precipitados, el pH de cada una de las soluciones en los diferentes recipientes permaneció consistentemente estable y las soluciones de hematoxilina en los diferentes recipientes proporcionó consistentemente una tinción nuclear aceptable de las secciones de tejido tras el procedimiento manual de tinción.

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Claims (1)

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