ES2617560T3 - Combinación del inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptídica carfilzomib con melfalán para su uso en el tratamiento del mieloma múltiple - Google Patents

Abstract

Inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptídica que tiene la estructura de:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más agentes terapéuticos, para su uso en el tratamiento de mieloma múltiple, en el que uno de uno o más agentes terapéuticos es melfalán.

Description

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DESCRIPCION

Combinacion del inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptidica carfilzomib con melfalan para su uso en el tratamiento del mieloma multiple

Antecedentes de la invencion

En eucariotas, la degradacion de protemas esta mediada predominantemente a traves de la ruta de ubiquitina en la que las protemas seleccionadas como diana para destruccion se ligan al polipeptido de 76 aminoacidos ubiquitina. Una vez seleccionadas como diana, las protemas ubiquitinadas sirven entonces como sustratos para el proteasoma 26S, una proteasa multicatalftica, que escinde protemas en peptidos cortos a traves de la accion de sus tres actividades proteolicas principales. Aunque tiene una funcion general en el recambio proteico intracelular, la degradacion mediada por el proteasoma tambien desempena un papel clave en muchos procesos tales como la presentacion del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I, la apoptosis, la division celular y la activacion de NF-kB.

El proteasoma 20S es un complejo de proteasas multicatalfticas de forma cilmdrica de 700 kDa compuesto por 28 subunidades organizadas en cuatro anillos que desempena un papel importante en la regulacion del crecimiento celular, la presentacion del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I, la apoptosis, la preparacion del antigeno, la activacion de NF-kB y la transduccion de senales proinflamatorias. En la levadura y otros eucariotas, 7 subunidades a diferentes forman los anillos exteriores y 7 subunidades U diferentes comprenden los anillos interiores. Las subunidades a sirven como sitios de union para los complejos reguladores 19S (PA700) y 11S (PA28), asf como una barrera ffsica para la camara proteolttica interna formada por los dos anillos de la subunidad U. Por tanto, in vivo, se cree que el proteasoma existe como una partmula 26S (“el proteasoma 26S”). Experimentos in vivo han demostrado que la inhibicion de la forma 20S del proteasoma puede correlacionarse facilmente con la inhibicion del proteasoma 26S. La escision de prosecuencias amino terminales de las subunidades U durante la formacion de partmulas expone residuos de treonina amino terminal, que sirven como nucleofilos cataltticos. Las subunidades responsables de la actividad catalttica en el proteasoma poseen, por tanto, un residuo nucleofflico amino terminal, y estas subunidades pertenecen a la familia de las nucleofilo hidrolasas N-terminales (Ntn) (en las que el residuo nuclefflico N-terminal es, por ejemplo, Cys, Ser, Thr y otros restos nucleofflicos). Esta familia incluye, por ejemplo, penicilina G acilasa (PGA), penicilina V acilasa (PVA), glutamina PRPP amidotransferasa (GAT) y glicosilasparagmasa bacteriana. Ademas de las subunidades U expresadas de manera ubicua, los vertebrados superiores tambien poseen tres subunidades U inducibles por interferon y (LMP7, LMP2 y MECL1), que reemplazan a sus homologos normales, X, Y y Z, respectivamente, alterando asf las actividades catalfticas del proteasoma. A traves del uso de diferentes sustratos peptfdicos, se han definido tres actividades proteolicas principales para el proteasoma 20S de eucariotas: actividad de tipo quimotripsina (CT-L), que escinde despues de grandes residuos hidrofobos; actividad de tipo tripsina (T-L), que escinde despues de residuos basicos; y la actividad hidrolizante del peptido peptidilglutamilo (PgpH), que escinde despues de residuos acidos. Tambien se han atribuido al proteasoma otras dos actividades adicionales menos caracterizadas: actividad BrAAP, que escinde despues de aminoacidos de cadena ramificada; y actividad SNAAP, que escinde despues de aminoacidos neutros pequenos. Las principales actividades proteoltticas del proteasoma parecen recibir la contribucion de diferentes sitios cataltticos, puesto que inhibidores, mutaciones puntuales en las subunidades U y el intercambio de subunidades U que inducen el interferon-y alteran estas actividades en diversos grados.

El inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptfdica de formula I mostrado a continuacion se conoce per se. Por ejemplo, el documento de EE. uU. 2006/128611 describe el uso de dichos inhibidores de epoxicetona para su uso en el tratamiento del cancer. Deborah Kuhn et al., Blood, vol. 110, n.° 9, 3281-3290, noviembre de 2007, describe la actividad antineoplasica de este compuesto en modelos preclmicos de mieloma multiple (MM).

Douglas Ivancsits et al., Blood, vol. 106, n.° 11, Part 1, noviembre de 2005, pag. 452A divulga que este compuesto puede mantener actividad sobre celulas que son resistentes al melfalan.

Resumen de la invencion

Un aspecto de la invencion se refiere a un tratamiento combinado, concretamente un inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptfdica que tiene la estructura de:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y uno o mas agentes terapeuticos, para su uso en el tratamiento del mieloma multiple, en el que uno de uno o mas agentes terapeuticos es melfalan. La combinacion muestra una eficacia que es mayor que la eficacia de cualquier agente que se administra solo (por ejemplo, efecto antitumoral sinergico o aditivo). Dicho tratamiento combinado puede conseguirse mediante la dosificacion simultanea, secuencial o separada de los componentes individuales del tratamiento.

En ciertos modos de realizacion, el agente o los agentes terapeuticos se seleccionan de un inhibidor de HDAC, un antibiotico, un taxano, un agente alquilante antiproliferativo/antimitotico, un complejo de coordinacion de platino, un esteroide, un inmunomodulador, un inhibidor de topoisomerasa, un inhibidor de m-TOR e inhibidores de protema cinasas.

Un modo adicional de realizacion es el inhibidor de epoxicetona para su uso de acuerdo con el modo de realizacion anterior, en el que el mieloma multiple es resistente a farmacos.

Breve descripcion de las la figuras

La figura 1 muestra un grafico del volumen tumoral a lo largo del tiempo para ratones tratados con veldculo, compuesto 1, SAHA, o compuesto 1 en combinacion con SAHA una vez que los tumores de celulas RL habfan alcanzado aproximadamente 50 mm3 de tamano.

La figura 2A muestra el programa de dosificacion para el tratamiento combinado con Doxil y el compuesto 1.

La figura 2B muestra el estudio de toxicidad para el tratamiento combinado con Doxil y el compuesto 1, en la que Doxil se administra a 10 o 20 mg/kg y el compuesto 1 se administra a 5 mg/kg.

La figura 3 muestra el tamano del tumor colorrectal HT29 a lo largo del tiempo para el tratamiento con vehfculo, Doxil (3 mg/kg), compuesto 1 (5 mg/kg), y una combinacion de compuesto 1 y Doxil.

La figura 4 muestra el tamano del tumor de pulmon no microdtico A549a lo largo del tiempo para el tratamiento con vehfculo, Doxil (3 mg/kg), compuesto 1 (5 mg/kg), y una combinacion de compuesto 1 y Doxil.

La figura 5A muestra la pauta posologica para el tratamiento combinado con docetaxel y compuesto 1.

La figura 5B muestra el estudio de toxicidad para el tratamiento combinado con docetaxel y compuesto 1, donde docetaxel se administra a 10 mg/kg y el compuesto 1 se administra a 5 mg/kg.

La figura 6 muestra el tamano del tumor de pulmon no microdtico A549 a lo largo del tiempo para el tratamiento con vehfculo, compuesto 1 (5 mg/kg), docetaxel (5 mg/kg), y una combinacion de compuesto 1 y docetaxel.

La figura 7 muestra el tamano del tumor de pulmon de celulas no pequenas A549 a lo largo del tiempo para el tratamiento con vehfculo, compuesto 1 (3 mg/kg), docetaxel (3 mg/kg), y una combinacion de compuesto 1 y docetaxel.

La figura 8A muestra el programa de dosificacion para el tratamiento combinado con SAHA y compuesto 1.

La figura 8B muestra el estudio de toxicidad para el tratamiento combinado con vorinostat y compuesto 1, en el que SAHA se administra a 50 mg/kg y el compuesto 1 se administra a 3 o 5 mg/kg.

La figura 9 muestra el tamano del tumor de linfoma RL a lo largo del tiempo para el tratamiento con vehfculo, compuesto 1 (3 mg/kg), SAHA (50 mg/kg), y una combinacion de compuesto 1 y SAHA.

La figura 10 muestra el tamano del tumor de ovario ES2 a lo largo del tiempo para el tratamiento con vehfculo, compuesto 1 (5 mg/kg), SAHA (50 mg/kg), y una combinacion de compuesto 1 y SAHA.

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La figura 11 muestra el efecto de una combinacion de compuesto 1 y melfalan sobre celulas MM1.S.

La figura 12A muestra resultados preliminares de un estudio de escalada de dosis de fase Ib de carfilzomib mas lenalidomida y dexametasona en dosis bajas en pacientes con mieloma multiple con recidiva. Dentro de las tres primeras cohortes, 17 pacientes fueron evaluables para respuesta y toxicidad. La dosis maxima tolerada (DMT) todavfa no se habfa alcanzado y no se notificaron acontecimientos adversos graves de grado 3 o 4 relacionados con el farmaco.

La figura 12B muestra resultados preliminares de un estudio de escalada de dosis de fase Ib de carfilzomib mas lenalidomida y dexametasona en dosis bajas en pacientes con mieloma multiple con recidiva. Las respuestas fueron duraderas.

Descripcion detallada de la invencion

Un primer modo de realizacion de la presente invencion es un inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptfdica que tiene la estructura de:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y uno o mas agentes terapeuticos, para su uso en el tratamiento del mieloma multiple, en el que uno de uno o mas agentes terapeuticos es melfalan. Un modo adicional de realizacion es el inhibidor de epoxicetona para su uso de acuerdo con el modo de realizacion 1, en el que el mieloma multiple es resistente a farmacos.

Como se usa en el presente documento, el termino “tratamiento” incluye la reversion, reduccion o detencion de smtomas, signos clmicos y patologfa subyacente de una afeccion para mejorar o estabilizar el estado de un sujeto.

Tratamiento combinado

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un inhibidor de HDAC (por ejemplo, tricostatina A, depsipeptido, apicidina, A-161906, scriptaid, PXD-101, CHAP, acido butmco, depudecina, oxamflatina, butirato de fenilo, acido valproico, SAHA (Vorinostat), MS275 (N-(2-aminofenil)-4-[N-(piridina-3-ilmetoxi- carbonil)aminometil]benzamida), LAQ824/LBH589, CI994 y MGCD0103). En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente es SAHA (acido suberoilanilida-hidroxamico).

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un antibiotico (por ejemplo, dactinomicina (actinomicina D), daunorubicina, doxorubicina e idarubicina). En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente terapeutico comprende doxorubicina. En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es Doxil.

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un taxano (por ejemplo, paclitaxel y docetaxel).

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un agente alquilante antiproliferativo/antimitotico tal como una mostaza nitrogenada (por ejemplo, mecloretamina, ifosfamida, ciclofosfamida y analogos, melfalan y clorambucilo). En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es ciclofosfamida o melfalan.

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un complejo de coordinacion de platino (por ejemplo, cisplatino y carboplatino). En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es carboplatino.

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un esteroide (por ejemplo, hidrocortisona, dexametasona, metilprednisolona y prednisolona). En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es dexametasona.

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un inmunomodulador (por ejemplo, talidomida, CC- 4047 (Actimid) y lenalidomida (Revlimid). En algunos de dichos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es lenalidomida.

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En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un inhibidor de topoisomerasa (por ejemplo, irinotecan, topotecan, camptotecina, lamellarina D y etoposido).

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un inhibidor de m-TOR (por ejemplo, CC1-779, AP23573 y RAD-001).

En ciertos modos de realizacion, el otro agente terapeutico es un inhibidor de protema cinasa (por ejemplo, sorafenib, imatinib, dasatinib, sunitinib, pazopanib y nilotinib). En algunos de dichos modos de realizacion, el inhibidor de protema cinasa es sorafenib.

La administracion de la epoxicetona peptfdica puede preceder o seguir al otro agente terapeutico en intervalos que vanan entre minutos y dfas. En algunos de dichos modos de realizacion, puede administrarse la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico en el plazo de aproximadamente 1 minuto, aproximadamente 5 minutos, aproximadamente 10 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 60 minutos, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 6 horas, 8 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 18 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 36 horas, o incluso aproximadamente 48 horas o mas entre uno y otro. Preferentemente, la administracion de la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico sera en el plazo de aproximadamente 1 minuto, aproximadamente 5 minutos, aproximadamente 30 minutos o incluso aproximadamente 60 minutos entre uno y otro.

En ciertos modos de realizacion, la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico pueden administrarse segun diferentes pautas posologicas (por ejemplo, la epoxicetona peptfdica por ejemplo puede administrarse una vez al dfa, mientras que el otro agente terapeutico puede administrarse solo una vez cada tres semanas), de tal manera que en algunos casos la administracion de la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico estara en el plazo de aproximadamente 60 minutos entre uno y otro, mientras que en otros casos, la administracion de la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico estara en el plazo de dfas o incluso semanas entre uno y otro.

Como se usa en el presente documento, el termino “regimen” es una pauta predeterminada de uno o mas agentes terapeuticos para el tratamiento de un cancer. En consecuencia, cuando un agente terapeutico se administra “solo,” el regimen no incluye el uso de otro agente terapeutico para el tratamiento del cancer.

En ciertos modos de realizacion, las combinaciones como se describen en el presente documento pueden ser de naturaleza sinergica, lo que significa que el efecto terapeutico de la combinacion de la epoxicetona peptfdica y el otro o los otros agentes terapeuticos es mayor que la suma de los efectos individuales.

En ciertos modos de realizacion, las combinaciones como se describen en el presente documento pueden ser de naturaleza aditiva, lo que significa que el efecto terapeutico de la combinacion de la epoxicetona peptfdica y el otro o los otros agentes terapeuticos es mayor que el efecto de cada agente individualmente (es decir, el efecto terapeutico es la suma de los efectos individuales).

Los compuestos descritos en el presente documento pueden administrarse en diversas formas, dependiendo de la edad, el estado, y peso corporal del paciente, como es bien conocido en la tecnica. Por ejemplo, cuando los compuestos deben administrarse por via oral, pueden formularse como comprimidos, capsulas, granulos, polvos o jarabes; o para la administracion parenteral, pueden formularse como inyecciones (intravenosas, intramusculares o subcutaneas), o preparaciones para infusion por gotero. Estas formulaciones pueden prepararse por medios convencionales y, si se desea, el principio activo puede mezclarse con cualquier aditivo o excipiente convencional, tal como un aglutinante, un agente disgregante, un lubricante, un correctivo, un agente solubilizante, un adyuvante de suspension, un agente emulsionante, un agente de recubrimiento, una ciclodextrina y/o un tampon. La dosificacion variara dependiendo de los smtomas, edad y peso corporal del paciente, la naturaleza y gravedad del trastorno que va a tratarse o prevenirse, la via de administracion y la forma del farmaco. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un vehmulo para producir una forma de dosificacion individual sera en general la cantidad del compuesto que produce un efecto terapeutico.

En un modo de realizacion, la presente invencion es una composicion farmaceutica que incluye un inhibidor del proteasoma practicamente insoluble, una ciclodextrina y opcionalmente un tampon. Dichas composiciones farmaceuticas tfpicamente incluyen una cantidad farmaceuticamente eficaz del inhibidor del proteasoma, por ejemplo, que mejora los efectos del cancer, cuando se administra a un paciente.

En ciertos modos de realizacion, la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico pueden estar en la misma forma (por ejemplo, ambos pueden administrarse como comprimidos o ambos pueden administrarse por via intravenosa) mientras que en ciertos modos alternativos de realizacion, la epoxicetona peptfdica y el otro agente terapeutico pueden estar en diferente formas (por ejemplo uno puede administrarse como un comprimido mientras que el otro se administra por via intravenosa).

El momento exacto de la administracion y/o la cantidad exacta de la composicion que produciran los resultados mas

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eficaces en cuanto a la eficacia de tratamiento en un paciente dado dependeran de la actividad, la farmacocinetica, y la biodisponibilidad de un compuesto particular, el estado fisiologico del paciente (incluyendo edad, sexo, tipo y estadio de la enfermedad, estado ffsico general, capacidad de respuesta a una dosis dada, y tipo de medicacion), la via de administracion, etc. Sin embargo, las directrices anteriores pueden usarse como base para ajustar el tratamiento, por ejemplo, determinando el momento y/o la cantidad de administracion optimos, que solo requerira experimentacion de rutina que consista en el seguimiento del sujeto y el ajuste de la dosificacion y/o el momento adecuado.

La expresion “farmaceuticamente aceptable” se emplea en el presente documento para referirse a aquellos ligandos, materiales, composiciones y/o formas de dosificacion que son, dentro del alcance de criterio medico responsable, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritacion, respuesta alergica, u otro problema o complicacion, acorde con una proporcion beneficio/riesgo razonable.

La expresion “vetnculo farmaceuticamente aceptable” como se usa en el presente documento significa un material, composicion o vetnculo farmaceuticamente aceptable, tal como una carga lfquida o solida, un diluyente, un excipiente, un disolvente o un material de encapsulacion. Cada vetnculo debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros componentes de la formulacion y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehiculos farmaceuticamente aceptable incluyen: (1) azucares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidon de mafz, almidon de patata y 13-ciclodextrina sustituida o no sustituida; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; (4) goma tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de cartamo, aceite de sesamo. aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) esteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes tamponantes, tales como hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio; (15) acido algmico; (16) agua libre de pirogenos; (17) solucion salina isotonica: (18) solucion de Ringer; (19) alcohol etflico; (20) disoluciones de tampon fosfato; y (21) otras sustancias compatibles no toxicas empleadas en formulaciones farmaceuticas, en ciertos modos de realizacion, las composiciones farmaceuticas de la presente invencion no son pirogenas, es decir, no inducen elevaciones de temperatura significativas cuando se administran a un paciente.

El termino “sal farmaceuticamente aceptable” se refiere a las sales de adicion de acidos inorganicos y organicos, relativamente no toxicas de los inhibidores. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y la purificacion finales de los inhibidores, o haciendo reaccionar por separado uno o mas inhibidores purificados en su forma de base libre con un acido organico o inorganico adecuado, y aislando la sal asf formada. Las sales representativas incluyen las sales de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato, laurilsulfonato, y sales de aminoacidos, y similares. (Vease, por ejemplo, Berge et al. (1977) “Pharmaceutical Sales”,./. Phann. Sei. 66: 1-19.)

En otros casos, los inhibidores utiles en los procedimientos de la presente invencion pueden contener uno o mas grupos funcionales acidos y, por tanto, son capaces de formar sales farmaceuticamente aceptables con bases farmaceuticamente aceptables. El termino “sales farmaceuticamente aceptables” en estos casos se refiere a las sales de adicion de bases inorganicas y organicas, relativamente no toxicas, de uno o mas inhibidores. Asimismo, estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y la purificacion finales de los inhibidores, o haciendo reaccionar por separado los inhibidores purificados en su forma de acido libre con una base adecuada, tal como hidroxido, carbonato o bicarbonato de un cation de metal farmaceuticamente aceptable, con amoniaco, o con una amina primaria, secundaria o terciaria farmaceuticamente aceptable. Las sales alcalinas o alcalinoterreas representativas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio, y similares. Las aminas organicas representativas utiles para la formacion de sales de adicion de base incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina y similares (vease, por ejemplo. Berge et al., supra).

En las composiciones tambien pueden estar presentes agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como laurisulfato de sodio y estearato de magnesio, asf como agentes colorantes, agentes de liberacion, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, aromatizantes, y perfumantes, conservantes y antioxidantes.

Los ejemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tales como acido ascorbico, clorhidrato de cistema, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol y similares; y (3) agentes quelantes de metales, tales como acido dtrico, acido etilendiaminotetraacetico (EDTA), sorbitol, acido tartarico, acido fosforico y similares.

Las formulaciones adecuadas para administracion oral pueden estar en forma de capsulas, sellos, pfldoras, comprimidos, pastillas para chupar (que usan una base aromatizada, habitualmente sacarosa y goma arabiga o goma tragacanto), polvos, granulos, o como disolucion o suspension en un lfquido acuoso o no acuoso, o como una emulsion lfquida de aceite en agua o agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (que usan una

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matriz inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arabiga) y/o como colutorios y similares, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada de uno o mas inhibidores como principio activo. Una composicion tambien puede administrarse como bolo, electuario o pasta.

En formas de dosificacion solidas para administracion oral (capsulas, comprimidos, pfldoras, grageas, polvos, granulos y similares), el principio activo se mezcla con uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato de dicalcio, y/o cualquiera de los siguientes: (1) cargas o diluyentes, tales como almidones, ciclodextrinas, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o acido silfcico; (2) aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o goma arabiga; (3) humectantes, tales como glicerol; (4) agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidon de patata o tapioca, acido algmico, determinados silicatos y carbonato de sodio; (5) agentes retardantes de disolucion, tales como parafina; (6) aceleradores de la absorcion, tales como compuestos de amonio cuaternario; (7) agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol acetflico y monoesterato de glicerol; (8) absorbentes, tales como caolm y arcilla de bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, laurisulfato de sodio y mezclas de los mismos; y (10) agentes colorantes. En el caso de capsulas, comprimidos y pfldoras, las composiciones farmaceuticas tambien pueden comprender agentes tamponantes. Tambien pueden emplearse composiciones solidas de tipo similar como cargas en capsulas de gelatina blanda y dura que usan excipientes tales como lactosa o azucares de leche, asf como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

Puede fabricarse un comprimido mediante compresion o moldeo, opcionalmente con uno o mas ingredientes auxiliares. Pueden prepararse comprimidos fabricados por compresion usando aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, disgregante (por ejemplo, glicolato sodico de almidon o carboximetilcelulosa de sodio reticulada), agente tensioactivo o dispersante. Pueden prepararse comprimidos moldeados mediante moldeo en una maquina adecuada de una mezcla de uno o mas inhibidores en polvo humedecida con un diluyente lfquido inerte.

Los comprimidos, y otras formas de dosificacion solidas, tales como grageas, capsulas, pfldoras y granulos, pueden opcionalmente ranurarse o prepararse con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entericos y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de formulacion farmaceutica. Tambien pueden formularse para proporcionar liberacion lenta o controlada del principio activo en los mismos usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberacion deseado, otras matrices polimericas, liposomas y/o microesferas. Pueden esterilizarse mediante, por ejemplo, filtracion a traves de un filtro de retencion de bacterias, o mediante la incorporacion de agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse en agua esteril, o algun otro medio inyectable esteril inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones tambien pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de una composicion que liberan solo el principio o principos activos, o preferentemente, en una determinada porcion del tubo digestivo, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de intercalado que pueden usarse incluyen ceras y sustancias polimericas. El principio activo tambien puede estar en forma microencapsulada, si resulta apropiado, con uno o mas de los excipientes descritos anteriormente.

Las formas de dosificacion lfquidas para administracion oral incluyen emulsiones, microemulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmaceuticamente aceptables. Ademas del principio activo, las formas de dosificacion lfquidas pueden contener diluyentes inertes comunmente usados en la tecnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes tales como alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodon, de cacahuete, de mafz, de germen, de oliva, de ricino y de sesamo), glicerol, alcohol tetrahidrofunlico, polietilenglicoles y esteres de acidos grasos de sorbitano, y mezclas de los mismos.

Ademas de diluyentes inertes, las composiciones orales tambien pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspension, agentes edulcorantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes y conservantes.

Las suspensiones, ademas de uno o mas inhibidores activos, pueden contener agentes de suspension como, por ejemplo, alcoholes isoesteanlicos etoxilados, esteres de sorbitol y sorbitano de polioxietileno, celulosa microcristalina, metahidroxido de aluminio, bentonita, agar-agar y goma tragacanto, y mezclas de los mismos.

Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion adecuadas para administracion parenteral comprenden uno o mas inhibidores en combinacion con una o mas disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas esteriles, o polvos esteriles farmaceuticamente aceptables que pueden reconstituirse para dar disoluciones o dispersiones inyectables esteriles justo antes de su uso, que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos, solutos que vuelven la formulacion sea isotonica con la sangre del receptor previsto o agentes de suspension o espesantes.

Los ejemplos de vehfculos acuosos y no acuosos adecuados que pueden emplearse en las composiciones

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farmaceuticas de la invencion incluyen agua, etanol, polioles (tal como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y esteres organicos inyectables, tales como oleato de etilo. Puede mantenerse una fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partmula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos.

Estas composiciones tambien pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. Puede garantizarse la prevencion de la accion de microorganismos mediante la inclusion de diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, acido fenolsorbico y similares. Tambien puede ser deseable incluir agentes de ajuste de la tonicidad, tales como azucares, cloruro de sodio,y similares, en las composiciones. Ademas, puede provocarse una absorcion prolongada de la forma farmaceutica inyectable mediante la inclusion de agentes que retardan la absorcion tal como monoesterato de aluminio y gelatina.

En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto de un farmaco, es deseable ralentizar la absorcion del farmaco de inyeccion subcutanea o intramuscular. Por ejemplo, la absorcion retardada de una forma de farmaco administrada por via parenteral se consigue disolviendo o suspendiendo el farmaco en un vehmulo de aceite.

Las formas de deposito inyectables se preparan formando matrices de microcapsulas de uno mas inhibidores en polfmeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolida. Dependiendo de la proporcion del farmaco con respecto al polfmero, y la naturaleza del polfmero particular empleado, puede controlarse la tasa de liberacion del farmaco. Los ejemplos de otros polfmeros biodegradables incluyen poli(ortoesteres) y poli(antndridos). Tambien se preparan formulaciones de deposito inyectables atrapando el farmaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal.

Las expresiones “administracion parenteral” y “administrado por via parenteral” como se usan en el presente documento significan modos de administracion distintos de la administracion enteral y topica, habitualmente mediante inyeccion, e incluyen, sin limitacion, injeccion intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradermica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutanea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intrarraqmdea e intrasternal, e infusion.

Las expresiones “administracion sistemica”, “administrado sistematicamente”, “administracion periferica” y “administrado perifericamente” como se usan en el presente documento, significan la administracion de un ligando, farmaco u otro material distinto de directamente en el sistema nervioso central, de manera que entra en el sistema del paciente y por tanto, se somete a metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo, administracion subcutanea.

La administracion de las composiciones terapeuticas de la presente invencion a un paciente seguira protocolos generales para la administracion de agentes quimioterapicos, teniendo en cuenta la toxicidad, si la hay. Se espera que los ciclos de tratamiento se repitan segun sea necesario. Tambien se contempla que pueden aplicarse diversos tratamientos convencionales o tratamientos antineoplasicos complementarios, asf como una intervencion quirurgica, en combinacion con el agente de arsenico descrito.

Independientemente de la via de administracion seleccionada, el inhibidor, que puede usarse en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmaceuticas de la presente invencion, se formulan en formas de dosificacion farmaceuticamente aceptables mediante procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la tecnica.

Pueden variarse los niveles de dosificacion reales de los principios activos en las composiciones farmaceuticas de esta invencion para obtener una cantidad del principio activo que sea eficaz para conseguir la respuesta terapeutica deseada para un paciente, composicion y modo de administracion particulares, sin ser toxico para el paciente.

Los siguientes ejemplos se presentan con el fin de ilustrar mejor los modos preferentes de realizacion de la invencion.

Usos de los compuestos

La degradacion ordenada de protemas es crucial para el mantenimiento de funciones celulares normales y el proteasoma es parte integrante del proceso de degradacion de protemas. El proteasoma controla los niveles de protemas que son importantes para la progresion del ciclo celular y la apoptosis en celulas normales y cancerosas; por ejemplo, ciclinas, caspasas, BCL2 y nF-KB (Kumatori et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87:7071-7075; Almond et al, Leukemia (2002) 16: 433-443). Por tanto, no es sorprendente que la inhibicion de la actividad del proteasoma pueda traducirse en tratamientos para tratar diversos procesos patologicos, tales como enfermedades malignas, no malignas y autoinmunitarias, dependiendo de las celulas implicadas.

Los agentes quimioterapicos son farmacos que se usan en el tratamiento de enfermedades en las que esta

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justificada la destruccion de celulas anormales, tales como enfermedades autoinmunitarias, como esclerosis multiple y artritis reumatoide, y cancer. Aunque puede diferir el mecanismo de cada categona de agente quimioterapico, funcionan generalmente alterando la capacidad de una celula para proliferar.

De acuerdo con la invencion, el inhibidor de epoxicetona peptidica o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en combinacion con uno o mas agentes terapeuticos en los que uno de uno o mas agentes terapeuticos es melfalan, puede usarse en el tratamiento del mieloma multiple.

Esta invencion tambien proporciona un procedimiento para el tratamiento de tumores resistentes a farmacos. En ciertos modos de realizacion, el tumor resistente a farmacos es mieloma multiple.

Con el termino “resistente a farmacos” se entiende un estado que demuestra resistencia intrmseca o resistencia adquirida. Con “resistencia intrmseca” se entiende el perfil de expresion caractenstico en celulas cancerosas de genes clave en rutas relevantes, incluyendo pero no limitandose a apoptosis, progresion celular y reparacion de ADN, lo que contribuye a la capacidad de crecimiento mas rapido de celulas cancerosas en comparacion con sus homologos normales. Con “resistencia adquirida” se entiende un fenomeno multifactorial que se produce en la formacion y progresion de tumores que puede influir en la sensibilidad de las celulas cancerosas a un farmaco. La resistencia adquirida puede deberse a varios mecanismos tales como, pero sin limitarse a, alteraciones de las dianas de farmacos, disminucion de la acumulacion de farmacos, alteracion de la distribucion intracelular de farmacos, reduccion de la interaccion farmaco-diana, aumento de la respuesta de destoxificacion, desregulacion del ciclo celular, aumento de la reparacion del ADN danado, y reduccion de la respuesta apoptotica. Varios de dichos mecanismos pueden producirse simultaneamente y/o pueden interactuar entre sf. Su activacion y/o inactivacion puede deberse a acontecimientos geneticos o epigeneticos, o a la presencia de protemas oncovirales. Puede producirse resistencia adquirida a farmacos individuales pero tambien puede producirse mas ampliamente a muchos farmacos diferentes con diferentes estructuras qmmicas y diferentes mecanismos de accion. Esta forma de resistencia se denomina resistencia a multiples farmacos.

Ejemplificacion

Ejemplo 1 (no de acuerdo con la invencion)

Se expusieron ratones inmunocomprometidos (BNX, Charles River Laboratories) a administracion subcutanea de celulas de linfoma humano RL (1 * 1o7/raton) en el costado derecho en un volumen total de 0,1 ml de solucion salina tamponada con fosfato (PBS). Cuando los tumores teman un tamano de aproximadamente 50 mm3 (como se indica con la flecha en la figura 1), se aleatorizaron los ratones a grupos de tratamiento (9 ratones/grupo). Se administro el compuesto 1 por via intravenosa (i.v.) en una disolucion de sulfobutil eter-beta-ciclodextrina al 10 % (p/v) en 10 mM de tampon citrato acuoso, pH 3,5. Se facilito la administracion los dfas 1 y 2 de cada semana. Se formulo SAHA en DMSO al 100% y se administro por via intraperitoneal (i.p.) en los dfas 1-5 de cada semana. *** = p <0,001 (Compuesto 1 + SAHA frente a vehmulo) mediante ANOVA de dos factores y comparaciones multiples a posteriori de Bonferroni.

Ejemplo 2 (no de acuerdo con la invencion)

Lmeas celulares y reactivos: Se adquirieron lmeas celulares tumorales de linfoma humano (RL), de pulmon no microcftico (A549) y de colon (HT-29) de ATCC (Manassas, VA). Se adquirio el inhibidor de HDAC, vorinostat, de Cayman Chemical (Ann Arbor, MI). Se adquirio docetaxel de Sigma Chemicals (Ann Arbor, MI). Se adquirio la receta de Doxil de una farmacia local.

Estudios de toxicidad: Se trataron ratones BNX hembra de 4-6 semanas de edad con agentes quimioterapicos de multiples clases en monoterapia o en combinacion con carfilzomib. Se realizaron estudios de toxicidad de dos semanas con dosis y pautas posologicas como se menciona en la leyenda de la figura. Se midio la toxicidad como perdida de peso corporal tres veces a la semana.

Estudios de xenoinjertos: Se establecieron los tumores mediante inyeccion subcutanea (s.c.) de lmeas celulares (numero de pases <9 y viabilidad >95 % en el momento de la implantacion) en el costado derecho de ratones BNX (n = 8/9 por grupo). Se inyectaron suspensiones celulares de RL (0,1ml) que conteman 1 *107 celulas y 5 * 106 celulas (0,1 ml), en el caso de celulas HT-29, ES2 y A549. Se aleatorizaron ratones a arupos de tratamiento y se inicio la dosificacion cuando el tamano de los tumores era de aproximadamente 100 mm3. En todos los grupos de tratamiento, se midieron los tumores tres veces a la semana registrando los diametros perpendiculares mas largos y se calcularon los volumenes tumorales usando la ecuacion V (mm3) = (longitud * anchura2)/2.

Analisis estadfstico: Para las comparaciones de los grupos de tratamiento, se realizo un ANOVA de dos factores seguido por un analisis multiple a posteriori de Bonferroni usando el software GraphPad Prism (version 4.01). La significacion estadfstica se logro cuando p <0,05.

El compuesto 1 se tolero bien en combinacion con Doxil con un programa de dosis relevante clmicamente a MTD de

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10 mg/kg de Doxil ^ c7d (i.v.) y DMT de 5 mg/kg de carfilzomib ^ c.d*2 (i.v.). Como se muestra en la figura 2A, la pauta posologica fue Doxil dfa 1 (i.v.), despues de una hora del compuesto 1 los dfas 1, 2 (i.v.). Como se muestra en la figura 2B, se realizo un estudio de toxicidad de dos semanas en ratones BNX y se evaluo la perdida de peso corporal (n = 5), donde la dosis maxima tolerada (DMT) de Doxil como agente unico en ratones BNX fue de 20 mg/kg mientras que la DMT de Doxil en combinacion con el compuesto 1 (5 mg/kg) en la pauta posologica sometida a prueba fue de 10 mg/kg.

% de perdida de peso corporal

Doxil (i.v.) (2 semanas)

Combinacion

Dosis Pauta Perdida de peso (%)

Ninguna

10 mg/kg c7d 10

Compuesto 1 (5 mg/kg)

10 mg/kg c7d 16

Ninguna

20 mg/kg c7d 15

Como se muestra en la figura 3, el compuesto 1 a la DMT (5 mg/kg) y por debajo de la DMT de Doxil (3 mg/kg) (n = 10/grupo) en el modelo de xenoinjerto colorrectal de HT29 establecido muestra una actividad antitumoral aumentada, (tratamiento combinado ***p <0,001 frente al control o carfilzomib solo; **p <0,01 frente a Doxil solo) (la flecha indica el inicio del penodo de dosificacion). Se observaron observaciones similares en el modelo de xenoinjerto de cancer de pulmon no microcftico A549 establecido. Como se muestra en la figura 4 (tratamiento combinado ***p <0,001 frente al control o Doxil solo; sin significacion frente a carfilzomib solo) (la flecha indica el inicio del penodo de dosificacion).

El compuesto 1 en combinacion con docetaxel se tolero bien con una pauta posologica relevante clmicamente a la DMT de 10 mg/kg de docetaxel ^ c7d (i.v.) y la DMT de 5 mg/kg de compuesto 1 ^ cd * 2 (i.v.). Como se muestra en la figura 5A la pauta posologica fue docetaxel dfa 1 (i.v.), despues de una hora del compuesto 1 los dfas 1, 2 (i.v.). Se realizo un estudio de toxicidad de dos semanas en ratones BNX y se evaluo la perdida de peso corporal (n = 5), donde la DMT de docetaxel en combinacion con carfilzomib en esta pauta posologica fue de 10 mg/kg.

% de perdida de peso corporal

Docetaxel (i.v.) (2 semanas)

Combinacion

Dosis Pauta posologica Perdida de peso (%)

Ninguna

10 mg/kg c7d

Ninguna

Compuesto 1

10 mg/kg c7d 16

Como se muestra en la figura 6, una combinacion de compuesto 1 a la DMT (5 mg/kg) y por debajo de la DMT de docetaxel (5 mg/kg) (n = 10/grupo) en el modelo de xenoinjerto de cancer de pulmon no microcftico A549 establecido, (tratamiento combinado ***p <0,001 frente al control; **p <0,05 frente al carfilzomib solo, NS frente a docetaxel) (la flecha indica el inicio del penodo de dosificacion). Se muestra en la figura 7 una combinacion de compuesto 1 por debajo de la DMT (3 mg/kg) y por debajo de la DMT de docetaxel (5 mg/kg) (n = 10/grupo) en el modelo de xenoinjerto de cancer de pulmon no microcftico A549 establecido, (tratamiento combinado ***p <0,001 frente al control; **p <0,01 frente a carfilzomib y docetaxel) (la flecha indica el inicio del penodo de dosificacion).

Una combinacion del compuesto 1 y vorinostat se tolero bien con una pauta posologica relevante clmicamente a 50 mg/kg ^ c5d, vorinostat (i.p.) y la DMT de 5 mg/kg de compuesto 1 ^ cd * 22(i.v.). Como se muestra en la figura 8A, no se determino la DMT de vorinostat. Se administro vorinostat los dfa 1-5 (i.p.), despues de una hora de compuesto 1 los dfas 1, 2 (i.v.). La toxicidad del tratamiento con vorinostat y el compuesto 1 en ratones BNX, como se mide por la perdida de peso corporal (BWL), fue similar entre los grupos de tratamiento, lo que sugiere que se tolero bien la combinacion en animales de experimentacion (figura 8B).

Se muestra en la figura 9 el efecto de la combinacion de compuesto 1 (3 mg/kg) y vorinostat (50 mg/kg) (n = 8/grupo) en tumores RL establecidos (la flecha indica el inicio del penodo de dosificacion). Se muestra en la figura 10 el efecto de la combinacion de compuesto 1 (3 mg/kg) y vorinostat (50 mg/kg) (n = 8/grupo) en tumores ES2 establecidos. **, p <0,01; y ***, p <0,001 frente a monoterapia y vefftculo (la flecha indica el inicio del penodo de dosificacion).

El tratamiento con compuesto 1 se tolero bien en combinacion con un inhibidor de histona desacetilasa (vorinostat), un agente de alteracion de microtubulos (docetaxel) y una antraciclina (Doxil) en las pautas posologicas relevantes clmicamente para cada agente individual. La combinacion de compuesto 1 y vorinostat dio como resultado una reduccion significativa del crecimiento tumoral del linfoma (RL) en comparacion con controles con vefftculo o tratamiento con un agente unico (p <0,001 frente al control; p <0,01 frente a compuesto 1 o vorinostat solo). La combinacion de compuesto 1 y docexatel dio como resultado una reduccion significativa del crecimiento tumoral de A549 en comparacion con controles con vefftculo o tratamiento con cualquier agente unico (p <0,001 frente al control; p <0,01 frente a carfilzomib o docetaxel solo). Se advirtieron observaciones similares en el modelo de xenoinjerto de HT-29 donde una combinacion de compuesto 1 y Doxil redujo significativamente la carga tumoral (p <0,001 frente al control o carfilzomib solo; p <0,01 frente a Doxil solo). El compuesto 1 y Doxil a dosis por debajo

de la DMT muestra un efecto antitumoral sinergico en el modelo de tumor solido. De forma similar, el compuesto 1 en combinacion con docetaxel a dosis por debajo de la DMT indujo un efecto antitumoral sinergico en el modelo de cancer de pulmon humano. El compuesto 1 en combinacion con vorinostat indujo un efecto antitumoral sinergico en el modelo linfoma. El compuesto 1 en combinacion con vorinostat indico una propiedad antitumoral eficaz en el 5 modelo de cancer de ovario.

Ejemplo 3

Se sometio a prueba el compuesto 1 a 6,58 nM en combinacion con melfalan a cuatro dosis diferentes: 11,1, 7,4, 4,9 10 y 3,3 |iM. Se sembraron en placa celulas MM1.S (mieloma multiple, sensible a dexametasona) a 200 000 celulas/ml

en 45 |il y luego se trataron previamente con melfalan durante 24 horas. A continuacion se anadio el compuesto 1 y se incubaron las celulas durante 24 horas adicionales a 6,58 nM. A continuacion, se anadio una proporcion 1:1 de disolucion CellTiter-Glo a las muestras de celulas y se leyo la viabilidad. Se calcularon los valores del mdice de combinacion usando el programa Calcusyn donde valores <0,9 = sinergia, 0,9-1,0 = aditivo y >1,1 = antagonista. 15 Como se muestra en la figura 11, los resultados indican que el compuesto 1 y melfalan muestran efectos sinergicos y aditivos a estas concentraciones.

Claims (1)

1. 1.

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   10 2.

   REIVINDICACIONES

   Inhibidor del proteasoma de epoxicetona peptfdica que tiene la estructura de:

   imagen1

   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y uno o mas agentes terapeuticos, para su uso en el tratamiento de mieloma multiple, en el que uno de uno o mas agentes terapeuticos es melfalan.

   El inhibidor de epoxicetona peptidica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el mieloma multiple es resistente a farmacos.