ES2624996T3 - Benzoxazoles sustituidos - Google Patents

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ES2624996T3
ES2624996T3 ES14727487.2T ES14727487T ES2624996T3 ES 2624996 T3 ES2624996 T3 ES 2624996T3 ES 14727487 T ES14727487 T ES 14727487T ES 2624996 T3 ES2624996 T3 ES 2624996T3
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alkyl
mmol
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methyl
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Swen Allerheiligen
Anja BUCHMÜLLER
Karen Engel
Christoph Gerdes
Kersten Matthias Gericke
Michael Gerisch
Stefan Heitmeier
Alexander Hillisch
Tom KINZEL
Philip Lienau
Bernd Riedl
Susanne Röhrig
Martina Victoria Schmidt
Julia Strassburger
Adrian Tersteegen
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Bayer Pharma AG
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Bayer Pharma AG
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Abstract

Compuesto de la fórmula**Fórmula** en la cual R1 representa un grupo de las fórmulas**Fórmula** en la que * es el punto de unión al grupo carbonilo, X representa un átomo de oxígeno, un átomo de azufre o CH-R6, en donde R6 representa hidroxi, R2 representa hidrógeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 o fenilo, en donde alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por hidroxi, metoxi, ciano, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, metilsulfonilo, difluorometoxi y trifluorometoxi, o 15 en donde alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con 1 a 3 sustituyentes flúor, R3 representa hidrógeno o alquilo C1-C4, o R2 y R3 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo de ciclopropilo, un anillo de ciclobutilo o un anillo de ciclopentilo, en donde el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi, R4 representa hidrógeno o alquilo C1-C6, en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, R5 representa alquilo C1-C4, o R4 y R5 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo de ciclopropilo, un anillo de ciclobutilo o un anillo de ciclopentilo, en donde el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi, R7 representa hidrógeno o alquilo C1-C6, en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o en donde alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes flúor, R8 representa hidrógeno, R9 representa hidrógeno o alquilo C1-C6, en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o en donde alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes flúor, R10 representa hidrógeno, R11 representa alquilo C1-C4, en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, R12 representa hidrógeno o alquilo C1-C4, o R11 y R12 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman un anillo de ciclopropilo, un anillo de ciclobutilo o un anillo de ciclopentilo, en donde el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi, R13 representa hidroximetilo o hidroxietilo, R14 representa metoxi o etoxi, o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.

Description

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DESCRIPCION
Benzoxazoles sustituidos
La invencion se refiere a benzoxazoles sustituidos y a procedimientos para su preparacion y a su uso para preparar medicamentos para el tratamiento y/o profilaxis de enfermedades, en particular de trastornos cardiovasculares, preferentemente de trastornos tromboticos o tromboembolicos.
La coagulacion sangumea es un mecanismo protector del organismo que ayuda a "sellar" defectos en la pared de los vasos sangumeos de forma rapida y confiable. De este modo, la perdida de sangre se puede evitar o mantener a un mmimo. La hemostasia despues de la lesion de los vasos sangumeos se efectua principalmente mediante el sistema de coagulacion en el cual se dispara la cascada enzimatica de las reacciones complejas de las protemas plasmaticas. En este proceso estan involucrados numerosos factores de coagulacion sangumea, cada uno de los cuales convierte, mediante activacion, respectivamente el proximo precursor inactivo a su forma activa. Al final de la cascada viene la conversion del fibrinogeno soluble en fibrina insoluble, dando por resultado la formacion del coagulo sangumeo. En la coagulacion sangumea, tradicionalmente se distinguen el sistema intrmseco y el sistema extrmseco, que finalizan en una ruta de reaccion conjunta final. Aqm, los factores Xa y IIa (trombina) cumplen funciones claves: El factor Xa envuelve las senales de las dos vfas de coagulacion dado que se forma tanto mediante el factor Vlla/tissue factor (ruta extrmseca) como mediante el complejo tenasa (ruta intrmseca) a traves de la conversion del factor X. La serina proteasa Xa activada escinde la protrombina a trombina la cual, mediante una serie de reacciones, realiza la transduccion de los impulsos desde la cascada hasta el estado de coagulacion de la sangre: La trombina escinde directamente el fibrinogeno a fibrina. Activa el factor XIII, necesario para la estabilizacion del coagulo de fibrina, al factor XIIIa. Ademas, la trombina es un potente disparador de agregacion plaquetaria (mediante la activacion PAR-1), la cual ademas contribuye de forma considerable a la hemostasia. Mediante la activacion de TAFI (inhibidor de fibrinolisis activable por trombina) a TAFIa, la trombina en un complejo con trombomodulina inhibe la disolucion del coagulo. La activacion de los factores V y VIII conduce a la potenciacion de la produccion de trombina y de este modo a su vez a la amplificacion de la reaccion de coagulacion.
Ademas de la trombina libre en la sangre, tambien se conocen las formas ligadas: Durante la formacion de un coagulo de fibrina, la trombina y la protrombinasa (factor Xa en un complejo) se unen al esqueleto de la fibrina. Estas moleculas enzimaticas todavfa estan activas y no pueden ser inhibidas por la antitrombina III endogena. Asf, de esta manera, los coagulos tienen todavfa un potencial procoagulador general.
Ademas, la trombina, en particular mediante la activacion de los receptores PAR-1 sobre las celulas endoteliales, tambien esta involucrada en los procesos inflamatorios, lo que, en interaccion con el sistema de coagulacion, acelera ambos procesos.
La activacion no controlada del sistema de coagulacion o la inhibicion defectuosa de los procesos de activacion pueden conducir a la formacion de trombosis locales o embolias en los vasos (arterias, venas, vasos linfaticos) o cavidades cardfacas. Ademas, la hipercoagulacion sistemica puede conducir a la amplia formacion de trombos y finalmente a la coagulopatfa de consumo en el contexto de una coagulacion intravasal diseminada. Las complicaciones tromboembolicas ademas se encuentran en las anemias hemoltticas microangiopaticas, en los sistemas circulatorios extracorporeos, tales como hemodialisis, y ademas en las protesis valvulares y endoprotesis vasculares.
En el curso de muchos trastornos cardiovasculares y metabolicos, debido a los factores sistemicos tales como por ejemplo hiperlipidemia, diabetes o tabaquismo, debido a cambios en el flujo sangumeo con estasis, tal como por ejemplo en la fibrilacion auricular, o debido a cambios patologicos en las paredes de los vasos, por ejemplo, disfunciones endoteliales o aterosclerosis, hay una creciente tendencia a la activacion de la coagulacion y activacion de trombocitos la cual, mediante la formacion de trombos ricos en fibrina y plaquetas, pueden conducir a trastornos tromboembolicos y complicaciones tromboticas con enfermedades potencialmente mortales. Por consiguiente, los trastornos tromboembolicos pertenecen ahora como antes a las causas mas frecuentes de morbilidad y mortalidad en la mayona de los pafses industrializados [Heart Disease: A Textbook of Cardiovascular Medicine, Eugene Braunwald, 5° edicion, 1997, W.B. Saunders Company, Filadelfia].
Los anticoagulantes conocidos por la tecnica anterior, es decir sustancias para inhibir o evitar la coagulacion sangumea, tienen varias desventajas. En el tratamiento y la profilaxis de trastornos tromboembolicos, en primer lugar se hace uso de heparina la cual se administra de forma parenteral o subcutanea. Debido a las propiedades farmacocineticas mas favorables, se da creciente preferencia en estos dfas a la heparina de bajo peso molecular; sin embargo, las desventajas conocidas descritas en la presente memoria que se encuentran mas adelante en el tratamiento con heparina no se pueden evitar de esta manera tampoco. De este modo, la heparina es ineficaz por via oral y solo tiene una vida media comparativamente corta. Ademas, hay un alto riesgo de hemorragia, en particular pueden ser hemorragias cerebrales, y hemorragias en el tracto gastrointestinal, y puede haber trombopenia, alopecia por medicamentos u osteoporosis [Pschyrembel, Klinisches Worterbuch, 257a edicion, 1994, Walter de Gruyter Verlag, pagina 610, entrada “Heparin”; Rompp Lexikon Chemie, version 1.5, 1998, Georg Thieme Verlag Stuttgart, entrada “Heparin”]. Las heparinas de bajo peso molecular tienen una probabilidad mas baja de conducir al desarrollo de trombocitopenia inducida por heparina, sin embargo, igualmente solo se pueden
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administrar por via subcutanea. Esto ademas se aplica al fondaparinux, un inhibidor del factor Xa selectivo producido de forma sintetica con una vida media larga.
Una segunda clase de anticoagulantes son los antagonistas de la vitamina K. Estos incluyen, por ejemplo, 1,3- indanodionas y sobre todo sin embargo compuestos tales como warfarina, fenprocumona, dicumarol y otros derivados de cumarina que inhiben de forma no selectiva la smtesis de varios productos de ciertos factores de coagulacion dependientes de la vitamina K en el hngado. Debido al mecanismo de accion, el inicio de la accion es muy lento (latencia al inicio de accion de 36 a 48 horas). Los compuestos se pueden administrar por via oral, sin embargo, debido al alto riesgo de hemorragia y al estrecho mdice terapeutico, se requiere un ajuste individual complicado y control del paciente [J. Hirsh, J. Dalen, D.R. Anderson et al., “Oral anticoagulants: Mechanism of action, clinical effectiveness, and optimal therapeutic range” Chest 2001, 119, 8S-21S; J. Ansell, J. Hirsh, J. Dalen et al., “Managing oral anticoagulant therapy” Chest 2001, 119, 22S-38S; P.S. Wells, A.M. Holbrook, N.R. Crowther et al., “Interactions of warfarin with drugs and food” Ann. Intern. Med. 1994, 121, 676-683]. Ademas, se han descrito otros efectos secundarios tales como problemas gastrointestinales, perdida de cabello y necrosis cutaneas.
Enfoques mas recientes para anticoagulantes orales estan en varias fases de evaluacion clmica o en uso clmico; sin embargo, tambien han demostrado desventajas tales como, por ejemplo, biodisponibilidad muy variable, dano hepatico y complicaciones hemorragicas, en particular en pacientes con los rinones danados.
Para los medicamentos antitromboticos, el espectro terapeutico es de importancia: La distancia entre la dosis activa de forma terapeutica para la inhibicion de la coagulacion y la dosis con la que se pueden producir hemorragias debe ser tan grande como sea posible de modo que la actividad terapeutica maxima se obtenga a un perfil de mmimo riesgo.
En particular en enfermedades terapeuticas con trombos ya presentes, puede ser ventajoso inhibir ademas el factor IIa presente en el trombo, y de este modo promover una degradacion mas rapida del trombo. Por ejemplo, mediante el uso de argatroban o hirudina como inhibidores de FIIa, se ha demostrado el efecto ventajoso de la inhibicion de FIIa en un trombo existente solos o en presencia del activador tisular del plasminogeno (tPA) en varios modelos in vitro e in vivo.
Por consiguiente, es un objetivo de la presente invencion proporcionar compuestos novedosos como inhibidores de trombina para el tratamiento de trastornos cardiovasculares, en particular de trastornos tromboticos o tromboembolicos, en humanos y animales, compuestos que tienen un espectro terapeutico amplio y buen comportamiento farmacocinetico.
El documento WO 98/37075 describe entre otros derivados de benzoxazol con un sustituyente amidino-bencilamino como inhibidores de trombina. Los inhibidores de trombina amino sustituidos tienen una vida media corta y baja biodisponibilidad oral. Como tal, los compuestos solo son adecuados para la administracion parenteral y, cuando se administran por via oral, deben ser empleados como profarmacos (A. Casimiro-Garcia, D. A. Dudley, R. J. Heemstra, K. J. Filipski, C. F. Bigge, J. J. Edmunds, Expert Opin. Ther. Patents 2006, 16(2), 119-145).
El documento WO 2007/140982 describe el uso de benzoxazoles como inhibidores de trombina.
El documento EP-A 0 535 521 describe el uso de benzoxazoles como inhibidores de la biosmtesis de leucotrieno para el tratamiento de trastornos inflamatorios.
Son objeto de la invencion compuestos de la formula
HC
O
imagen1
F
Cl
en la cual
R1 representa un grupo de la formula
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en la que X
R2
R3 o R2
R4
R5 o R4
R7
R8
R9
R10
R11
R12
o R11 y R12
R13
R14
R4
X'
R2
imagen2
imagen3
R14
imagen4
* es el punto de union al grupo carbonilo,
representa un atomo de oxfgeno, un atomo de azufre o CH-R6,
en el que
R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 o fenilo,
en el que alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por hidroxi, metoxi, ciano, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, metilsulfonilo, difluorometoxi y trifluorometoxi, o
en el que alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con 1 a 3 sustituyentes fluor, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un
sustituyente hidroxi,
representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa alquilo C1-C4,
y R5 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un
sustituyente hidroxi,
representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
en el que alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes fluor,
representa hidrogeno,
representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
en el que alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes fluor, representa hidrogeno, representa alquilo C1-C4,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un
sustituyente hidroxi,
representa hidroximetilo o hidroxietilo,
representa metoxi o etoxi,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Los compuestos de acuerdo con la invencion son los compuestos de la formula (I) y las sales, solvatos y solvatos de las sales de los mismos, y ademas los compuestos comprendidos en la formula (I) y que se especifican de aqrn en adelante como ejemplos de realizacion, y las sales, solvatos y solvatos de las sales de los mismos en la medida que los compuestos comprendidos en la formula (I) y que se especifican de aqrn en adelante no sean ya sales, solvatos y solvatos de las sales.
Los compuestos de acuerdo con la invencion pueden, dependiendo de su estructura, existir en diferentes formas estequiometricas, es decir, en la forma de isomeros configuracionales o ademas opcionalmente como isomeros conformacionales (enantiomeros y/o diastereomeros, incluyendo aquellos en el caso de atropisomeros). La presente invencion, por lo tanto, abarca los enantiomeros y diastereomeros, y las respectivas mezclas de los mismos. Los constituyentes estereoisomericamente uniformes se pueden aislar de estas mezclas de enantiomeros y/o diastereomeros de manera conocida; preferentemente se usan procedimientos de cromatograffa para esto, en
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particular la cromatograffa HPLC sobre una fase aquiral o quiral.
Si los compuestos de acuerdo con la invencion pueden presentarse en formas tautomericas, la presente invencion abarca todas las formas tautomericas.
La presente invencion ademas abarca todas las variantes isotopicas adecuadas de los compuestos de acuerdo con la invencion. Una variante isotopica de un compuesto de acuerdo con la invencion se entiende en esta memoria descriptiva que significa un compuesto en el cual al menos un atomo dentro del compuesto de acuerdo con la invencion ha sido intercambiado por otro atomo del mismo numero atomico, pero con una masa atomica diferente que la masa atomica que usualmente o predominantemente se produce en la naturaleza. Ejemplos de isotopos que pueden ser incorporados en un compuesto de acuerdo con la invencion son aquellos de hidrogeno, carbono, nitrogeno, oxfgeno, fosforo, azufre, fluor, cloro, bromo y yodo, tales como 2H (deuterio), 3H (tritio), 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 129I y 131I. Las variantes isotopicas particulares de un compuesto de acuerdo con la invencion, especialmente aquellos en los cuales se han incorporado uno o mas isotopos radioactivos, pueden ser beneficiosos, por ejemplo, para el analisis del mecanismo de accion o de la distribucion del principio activo en el cuerpo; debido a la preparacion y deteccion comparativamente facil, especialmente los compuestos marcados con isotopos 3H o 14C son adecuados para este fin. Mas aun, la incorporacion de isotopos, por ejemplo de deuterio, puede conducir a ventajas terapeuticas particulares como consecuencia de mayor estabilidad metabolica del compuesto, tal como por ejemplo una extension de la semivida en el cuerpo o una reduccion en la dosis activa requerida; estas modificaciones de los compuestos de acuerdo con la invencion pueden, por lo tanto, en algunos casos, constituir ademas una forma de realizacion preferente de la presente invencion. Las variantes isotopicas de los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden preparar mediante los procedimientos conocidos por los expertos en la tecnica, asf por ejemplo mediante los procedimientos que se describen a continuacion y las instrucciones reproducidas en los ejemplos de realizacion, usando las correspondientes modificaciones isotopicas de los respectivos reactivos y/o compuestos de partida.
Como sales se prefieren en el contexto de la presente invencion sales fisiologicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invencion. Sin embargo, ademas estan comprendidas las sales que no son en sf mismas adecuadas para las aplicaciones farmaceuticas pero se pueden usar, por ejemplo, para el aislamiento o la purificacion de los compuestos de acuerdo con la invencion.
Las sales fisiologicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invencion incluyen sales de adicion de acido de acidos minerales, acidos carboxflicos y acidos sulfonicos, por ejemplo sales de acido clortndrico, acido bromtndrico, acido sulfurico, acido fosforico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido toluenosulfonico, acido bencenosulfonico, acido naftalenodisulfonico, acido acetico, acido trifluoroacetico, acido propionico, acido lactico, acido tartarico, acido malico, acido cftrico, acido fumarico, acido maleico y acido benzoico.
Las sales fisiologicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invencion tambien incluyen sales de bases convencionales, como a modo de ejemplo y con preferencia las sales de metal alcalino (por ej., sales de sodio y potasio), sales de metal alcalinoterreo (por ej., sales de calcio y magnesio) y sales de amonio derivadas de amomaco o aminas organicas con 1 a 16 atomos de carbono, como a modo de ejemplo y con preferencia etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procama, dibencilamina, A/-metilmorfolina, arginina, lisina, etilendiamina, /V-metilpiperidina y colina.
Como solvatos se designan en el contexto de la invencion aquellas formas de los compuestos de acuerdo con la invencion que, en estado solido o lfquido, forman un complejo por coordinacion con moleculas de disolvente. Los hidratos son una forma especial de los solvatos en la que la coordinacion es con agua.
Ademas, la presente divulgacion abarca todos los profarmacos de los compuestos de acuerdo con la invencion. El termino "profarmacos" incluye los compuestos que en sf mismos pueden ser biologicamente activos o inactivos pero se convierten en compuestos de acuerdo con la invencion mientras residen en el cuerpo (por ejemplo por via metabolica o hidrolftica).
En el sentido de la presente invencion, el termino "tratamiento" o "que trata" incluye la inhibicion, el retardo, la contencion, el alivio, la atenuacion, la restriccion, la reduccion, la supresion, el rechazo o la curacion de una enfermedad, una afeccion, un trastorno, una lesion o un problema de salud, o el desarrollo, el curso o el avance de estos estados y/o los smtomas de estos estados. El termino "terapia" se entiende aqrn como sinonimo del termino "tratamiento".
Los terminos "prevencion", "profilaxis" o "exclusion" se usan como sinonimos en el contexto de la presente invencion y se refieren a la evitacion o reduccion del riesgo de contraer, experimentar, padecer o tener una enfermedad, una afeccion, un trastorno, una lesion o problema de salud, o un desarrollo o avance de estos estados y/o los smtomas de estos estados.
El tratamiento o la prevencion de una enfermedad, una afeccion, un trastorno, una lesion o un problema de salud puede ser parcial o completo.
10
15
20
25
30
35
En el contexto de la presente invencion, los sustituyentes, a menos que se especifique lo contrario, tienen el siguiente significado:
alquilo representa un radical alquilo lineal o ramificado con 1 a 6 atomos de carbono, preferentemente 1 a 4 atomos de carbono, a modo de ejemplo y con preferencia representa metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, 1 -metilpropilo, terc-butilo, n-pentilo, iso-pentilo, 1 -etilpropilo, 1-metilbutilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n- hexilo, 1 -metilpentilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 3,3-dimetilbutilo, 1 -etilbutilo y 2-etilbutilo.
Cicloalquilo representa un grupo cicloalquilo monodclico con 3 a 6 atomos de carbono, a modo de ejemplo y con preferencia se pueden mencionar ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo para cicloalquilo.
En las formulas del grupo que pueden representar R1, el punto extremo de la lmea marcada con * no representa un atomo de carbono o un grupo CH2 sino que es parte del enlace al atomo al cual esta unido R1.
Se da preferencia a los compuestos de la formula (I) en la cual
R1 representa un grupo de la formula
en la que X
R2
R3
o R2 y R3
R4
R5
R7
R8
R9
R10
R11 y R12
R13
R14
R4
X'
R2
imagen5
imagen6
R14
imagen7
* es el punto de union al grupo carbonilo, representa un atomo de oxfgeno o CH-R6, en el que
R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, alquilo C1-C4 o cicloalquilo C3-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o hidroxicarbonilo, y
en el que cicloalquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en el que el anillo de ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
representa alquilo C1-C4,
representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
representa hidrogeno,
representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, representa hidroximetilo o hidroxietilo, representa metoxi o etoxi,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
R4
X
R2
imagen8
imagen9
R14
imagen10
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
X representa un atomo de oxfgeno,
R2 representa metilo o etilo en el que metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi,
5
R3 representa hidrogeno,
o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo en el que el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
R4 representa hidrogeno o metilo,
R5 representa metilo,
10
R7 representa hidrogeno o metilo,
R8 representa hidrogeno,
R9 representa metilo,
R10 representa hidrogeno,
R11 y R12 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo:
15
R13 representa hidroximetilo o hidroxietilo,
R14 representa etoxi,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las
sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
20
R4
X'
R2
imagen11
en la que X
25 R2
30
R3
o R2 y R3
35
R4
R5
o R4 y R5 40
R7
R8
* es el punto de union al grupo carbonilo,
representa un atomo de oxfgeno, un atomo de azufre o CH-R6,
en el que
R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 o fenilo,
en el que alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por hidroxi, metoxi, ciano, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, metilsulfonilo, difluorometoxi y trifluorometoxi, o
en el que alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con 1 a 3 sustituyentes fluor, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un
sustituyente hidroxi,
representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un
sustituyente hidroxi,
representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
en el que alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes de fluor, representa hidrogeno,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual
5
10
15
20
25
30
35
R1
representa un grupo de la formula
R\
X'
R2
imagen12
en la que X
R2
R3
o R2 y R3
R4
R5
R7
* es el punto de union al grupo carbonilo, representa un atomo de oxfgeno o CH-R6, en el que
R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, alquilo C1-C4, o cicloalquilo C3-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o hidroxicarbonilo, y
en el que cicloalquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en el que el anillo de ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa alquilo C1-C4, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
R8 representa hidrogeno,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las
sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
imagen13
en la que X
R2
R3
o R2 y R3
R4
R5
R7
R8
* es el punto de union al grupo carbonilo, representa un atomo de oxfgeno o CH-R6, en el que
R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, metilo, etilo o ciclobutilo,
en el que metilo y etilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi o hidroxicarbonilo, y
en el que ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o metilo,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo,
en el que el anillo de ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
representa hidrogeno, metilo, etilo o propilo, en el que metilo, etilo y propilo pueden estar
sustituidos con un sustituyente hidroxi,
representa metilo,
representa hidrogeno, metilo o etilo, representa hidrogeno,
5
10
15
20
25
30
35
40
R4
X'
R2
imagen14
en la que
* es el punto de union al grupo carbonilo,
X
representa un atomo de oxfgeno,
R2
representa metilo o etilo, en el que metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi,
R3
representa hidrogeno,
o R2 y R3
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo en el que el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
R4
representa hidrogeno o metilo,
r5
representa metilo,
R7
representa hidrogeno o metilo,
R8
representa hidrogeno,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos. Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
r4 r5
X
imagen15
R
R3
en la que X
R2
R3
o R2 y R3
R4
R5
o R4 y R5
* es el punto de union al grupo carbonilo,
representa un atomo de oxfgeno, un atomo de azufre o CH-R6, en el que R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 o fenilo,
en el que alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por hidroxi, metoxi, ciano, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, metilsulfonilo, difluorometoxi y trifluorometoxi, o
en el que alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con 1 a 3 sustituyentes fluor, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un
sustituyente hidroxi,
representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi,
r4 r5
X
imagen16
N,
R2 R3
imagen17
en la que 5 X
R2
10
R3 o R2
15 R4
R5
* es el punto de union al grupo carbonilo, representa un atomo de oxfgeno o CH-R6,
en el que
R6 representa hidroxi,
representa hidrogeno, metilo, etilo o ciclobutilo,
en el que metilo y etilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi o hidroxicarbonilo,
y
en el que ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o metilo,
y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en el que el anillo de ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno, metilo, etilo o propilo,
en el que metilo, etilo y propilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi, representa metilo,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual 20 R1 representa un grupo de la formula
r4 r5
X
imagen18
N
R2 R3
imagen19
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
X representa un atomo de oxfgeno,
R2 representa metilo, etilo o ciclobutilo,
25
en el que metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi, y en el que ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
R3 representa hidrogeno,
R4 representa hidrogeno o metilo,
30
y R5 representa metilo,
o R2 representa metilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa metilo, etilo o propilo, en el que metilo, etilo y propilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi,
35
y R5 representa metilo,
o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo: en el que el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
R4 representa hidrogeno o metilo,
y R5 representa metilo,
5
10
15
20
25
30
r4 r5
X
imagen20
R
zN\
R3
en la que
X
R2
R3
o R2 y R3
R4
R5
* es el punto de union al grupo carbonilo, representa un atomo de oxfgeno, representa metilo o etilo,
en el que metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en el que el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o metilo, representa metilo,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
imagen21
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
R7 representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
en el que alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes fluor,
R8 representa hidrogeno,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos. Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
imagen22
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
R7 representa hidrogeno, metilo o etilo,
R8 representa hidrogeno,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual
5
10
15
20
25
30
R1 representa un grupo de la formula
imagen23
en la que R9
R10
R11
R12
o R11 y R12
* es el punto de union al grupo carbonilo, representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
en el que alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes fluor, representa hidrogeno, representa alquilo C1-C4,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi, representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, anillo de ciclobutilo o anillo de ciclopentilo,
en el que el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
imagen24
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
R9 representa metilo,
R10 representa hidrogeno,
R11 y R12 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos de la formula (I) en la cual R1 representa un grupo de la formula
R14
imagen25
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
R13 representa hidroximetilo o hidroxietilo,
R14 representa metoxi o etoxi,
5
10
15
20
25
30
R14
imagen26
en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
R13 representa hidroximetilo o hidroxietilo,
R14 representa etoxi,
y las sales de los mismos, los solvatos de los mismos y los solvatos de las sales de los mismos.
Se prefieren tambien compuestos que presentan la formula (la)
H3^
O
imagen27
V\ /
Cl
(Ia),
F
en la cual R1 es como se definio anteriormente.
Se prefiere tambien
(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4- il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro] o
(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(3-hidroxiciclobutil)-2-metilmorfolin-4- il]metanona [isomero 4 enantiomericamente puro] o
(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(c/s-2-hidroxi-7-metil-8-oxa-5- azaespiro[3.5]non-5-il)metanona [isomero 2 enantiomericamente puro] o
4-[(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)carbonil]-3-metil-1,4- diazabiciclo[4.2.0]octan-2-ona [isomero enantiomericamente puro] o
acido {(3S)-4-[(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)carbonil]-6-metilmorfolin-3- il}acetico [isomero enantiomericamente puro] o
(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5R)-5-(2-hidroxietil)-2,2-dimetilmorfolin-4- il]metanona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
o una de las sales, los solvatos o los solvatos de las sales de estos compuestos.
Se prefiere especialmente 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5S)-5-(2-hidroxietil)-2- metilmorfolin-4-il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro] con la siguiente formula
imagen28
O
/)
N
H
N
F
imagen29
Cl
5
o una de las sales de la misma, los solvatos de la misma o los solvatos de las sales de la misma.
Se prefiere especialmente tambien (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxM,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)- 5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona con la siguiente formula
imagen30
O
/)
N
imagen31
F Cl
o una de las sales de la misma, los solvatos de la misma o los solvatos de las sales de la misma.
Es objeto de la invencion tambien el compuesto 2-(6-metilmorfolin-3-il)etanol [racemato] con la siguiente formula
imagen32
o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
10 El compuesto 2-(6-metilmorfolin-3-il)etanol [racemato] se puede separar en sus enantiomeros mediante procedimientos conocidos por el experto en la tecnica, por ejemplo por cromatograffa sobre una fase quiral.
Se prefiere tambien el compuesto 2-[(3S,6S)-6-metilmorfolin-3-il]etanol con la siguiente formula
O^CH3
HO
imagen33
o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
15 Es objeto de la invencion ademas un procedimiento para preparar los compuestos de la formula (I), o las sales de los mismos, los solvatos de los mismos o los solvatos de las sales de los mismos, en el que el compuesto de la formula
5
10
15
20
25
30
HC
3UN
O
HO
imagen34
F
Cl
(II)
se hace reaccionar con los compuestos de la formula
R1-H
(III)
en la cual
R1 tiene el significado que se dio anteriormente con reactivos de deshidratacion.
La reaccion se lleva a cabo en general en disolventes inertes, si fuera apropiado en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperature desde 0 °C hasta temperature ambiente a presion atmosferica.
Como reactivos de deshidratacion son adecuados segun esto, por ejemplo, carbodiimidas tales como N,N'-dietil-, N, N'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N,N"-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilamino-isopropil)-N'-
etilcarbodiimida (EDC) (opcionalmente en presencia de pentafluorofenol (PFP)), N-ciclohexilcarbodiimida-N‘- propiloximetil-poliestireno (PS-carbodiimida) o compuestos carbomlicos tales como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio tales como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazolio, o compuestos de acilamino tales como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina, o antndrido propanofosfonico, o cloroformiato de isobutilo, o cloruro de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxi- tri(dimetilamino)fosfonio, o hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU),
tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TPTU), fluoroborato de (benzotriazol-1- iloxi)bisdimetilaminometilio (TBTU) o hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)-fosfonio (BOP), o mezclas de estos, con bases. La condensacion se lleva a cabo preferentemente con HATU.
Son bases, por ejemplo, carbonatos de metal alcalino tales como carbonato o hidrogenocarbonato de sodio o potasio, o bases organicas tales como trialquilaminas, por ejemplo trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4- dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina, prefiriendose diisopropiletilamina.
Son disolventes inertes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tales como diclorometano o triclorometano, hidrocarburos tales como benceno, u otros disolventes tales como nitrometano, dioxano, dimetilformamida, dimetilsulfoxido o acetonitrilo, o mezclas de los disolventes, prefiriendose dimetilformamida.
Los compuestos de la formula (III) son conocidos, se pueden sintetizar a partir de los correspondientes compuestos de partida mediante procedimientos conocidos o se pueden preparar de forma analoga a los procedimientos descritos en la seccion de ejemplos.
El compuesto de la formula (II) se conoce o se puede preparar haciendo reaccionar los compuestos de la formula
HC
3UN
O
imagen35
F
Cl
en la cual
R15 representa metilo o etilo:
10
15
20
25
con una base.
La reaccion se lleva a cabo en general en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura desde 0 °C hasta temperatura ambiente a presion atmosferica.
Son bases, por ejemplo, hidroxidos de metal alcalino tales como hidroxido de sodio, hidroxido de litio o hidroxido de potasio, o carbonatos de metal alcalino tales como carbonato de cesio, carbonato de sodio o carbonato de potasio, prefiriendose hidroxido de sodio.
Son disolventes inertes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, triclorometano, tetracloruro de carbono, tricloroetano, tetracloroetano, 1,2-dicloroetano o tricloroetileno, eteres tales como eter dietflico, metil terc-butil eter, 1,2-dimetoxietano, dioxano, tetrahidrofurano, glicol dimetil eter o dietilenglicol dimetil eter, alcoholes tales como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol o terc-butanol hidrocarburos tales como benceno, xileno, tolueno, hexano, ciclohexano o fracciones de aceite mineral, u otros disolventes tales como dimetilformamida, dimetilacetamida, dimetilsulfoxido, acetonitrilo o piridina, o mezclas de disolventes, prefiriendose dioxano.
Los compuestos de la formula (IV) son conocidos o se pueden preparar haciendo reaccionar los compuestos de la formula
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Cl
(V)
en la cual
R15 representa metilo o etilo, con el compuesto de la formula
h2n
^ /
F Cl
(VI)
en presencia de una base.
La reaccion se lleva a cabo en general en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura desde temperatura ambiente hasta reflujo a presion atmosferica.
Los compuestos de las formulas (V) y (VI) son conocidos, se pueden sintetizar a partir de los correspondientes compuestos de partida mediante procedimientos conocidos o se pueden preparar de forma analoga a los procedimientos descritos en la seccion de ejemplos.
La preparacion de los compuestos de partida y de los compuestos de la formula (I) se puede ilustrar mediante el siguiente esquema de smtesis.
Esquema 1:
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Cl
F
H3C.
O
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Base
R1/
H
HATU
Base
H3C
O
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H
N
F
Cl
Los compuestos de acuerdo con la invencion tienen un espectro util impredecible de actividad farmacologica y un buena comportamiento farmacocinetico. A este respecto se trata de compuestos que modulan la actividad proteolftica de la serina proteasa trombina. Los compuestos de acuerdo con la invencion inhiben la escision enzimatica catalizada con trombina de los sustratos que cumplen una funcion esencial en la activacion de la coagulacion sangumea, la agregacion plaquetaria (mediante la activacion PAR-1 de las plaquetas) y en procesos de inflamacion, fibrosis y angiogenesis inducidos por trombina.
Por lo tanto son adecuados para su uso como medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en humanos y animales.
Otro objeto de la presente invencion es el uso de los compuestos de acuerdo con la invencion para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos, en particular de trastornos cardiovasculares, preferentemente trastornos tromboticos o tromboembolicos y/o complicaciones tromboticas o tromboembolicas.
Como enzima clave al final de la cascada de coagulacion, la trombina traduce, mediante una serie de conversiones, los impulsos de la cascada en el estado de coagulacion de la sangre. Mediante la conversion del fibrinogeno en la fibrina insoluble, se forman coagulos de fibrina, que se estabilizan de igual manera mediante el factor XIIIa activado por trombina. Mediante la activacion de TAFI (inhibidor de fibrinolisis activable por trombina) a TAFIa, la trombina en un complejo con trombomodulina inhibe la disolucion del coagulo. La activacion de los factores V y VIII conduce a la potenciacion de la produccion de trombina y de este modo a su vez a la amplificacion de la reaccion de coagulacion. Ademas, la trombina es un potente disparador de agregacion de trombocitos (mediante la activacion de PAR-1), la cual ademas contribuye de forma considerable a la hemostasia.
Por consiguiente, los compuestos de acuerdo con la invencion son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos o complicaciones que surgen o pueden surgir de la formacion de coagulos.
A los "trastornos tromboticos o tromboembolicos" en el sentido de la presente invencion pertenecen trastornos que se producen tanto en la vasculatura arterial como en la venosa y que se pueden tratar con los compuestos de acuerdo con la invencion, en particular trastornos en las arterias coronarias del corazon, tales como smdrome coronario agudo (ACS), infarto de miocardio con elevacion del segmento ST (STEMI) y sin elevacion del segmento ST (no-STEMI), angina de pecho estable, angina de pecho inestable, reoclusiones y restenosis despues de intervenciones coronarias tales como angioplastfa, implantacion de endoprotesis vascular o derivacion aortocoronaria, pero ademas trastornos tromboticos o tromboembolicos en otros vasos que conducen a trastornos oclusivos arteriales perifericos, embolias pulmonares, tromboembolias venosas, trombosis venosa, en particular en venas profundas de la pierna, y venas renales, ataques isquemicos transitorios y ademas accidente cerebrovascular trombotico y accidente cerebrovascular tromboembolico.
La estimulacion del sistema de coagulacion puede producirse por varias causas o trastornos asociados. En el contexto de las intervenciones quirurgicas, inmovilidad, encamado, infecciones o un cancer o tratamiento de cancer, inter alia, el sistema de coagulacion puede estar extremadamente activado y puede haber complicaciones tromboticas, en particular trombosis venosa. Por lo tanto, los compuestos de acuerdo con la invencion son adecuados para la profilaxis de trombosis en el contexto de intervenciones quirurgicas en pacientes que sufren de cancer. Por lo tanto, los compuestos de acuerdo con la invencion son adecuados para la profilaxis de trombosis en pacientes que tienen un sistema de coagulacion activado, por ejemplo en las situaciones de estimulacion descritas.
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Por consiguiente, los compuestos de acuerdo con la invencion tambien son adecuados para la prevencion y el tratamiento de tromboembolias cardiogenas tales como, por ejemplo, isquemias cerebrales, accidentes cerebrovasculares y tromboembolias sistemicas e isquemias, en pacientes con arritmias cardfacas agudas, intermitentes o persistentes tales como, por ejemplo, fibrilacion auricular, y las que experimentan cardioversion, ademas en pacientes con trastornos en valvulas cardfacas o con protesis valvulares.
Ademas se encuentran complicaciones tromboembolicas en las anemias hemolfticas microangiopaticas, en los sistemas circulatorios extracorporeos, tales como hemodialisis, y ademas en protesis valvulares.
Ademas se tienen en consideracion los compuestos de acuerdo con la invencion en particular para el tratamiento de trastornos donde un coagulo ya esta presente, dado que la trombina incorporada en el coagulo estabiliza el coagulo. Dado que la inhibicion de estas moleculas de trombina acelera la degradacion del coagulo, los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden usar para el tratamiento de los coagulos existentes. Estos coagulos se pueden formar en el sistema vascular completo y pueden originar graves complicaciones en varios organos, en particular mediante isquemia, reacciones inflamatorias o formacion de embolias, tal como por ejemplo infarto de miocardio o accidente cerebrovascular, pero tambien embolia pulmonar o smdrome pos-trombotico en particular despues de una trombosis venosa profunda en la pierna. Por consiguiente, los compuestos de acuerdo con la invencion tambien se tienen en consideracion para el tratamiento de oclusiones venosas y arteriales de los vasos sangumeos oculares originados por coagulos, por ejemplo degeneracion macular relacionada con la edad.
En virtud de los efectos sinergicos observados con los principios terapeuticos ltticos tales como el activador tisular del plasminogeno (tPA), los compuestos son adecuados para el uso adyuvante en el contexto del tratamiento de trombolisis.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la invencion se tienen en consideracion para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos que involucran la formacion de microcoagulos o bien depositos de fibrina en vasos sangumeos cerebrales que pueden conducir a trastornos de demencia tales como la demencia vascular o enfermedad de Alzheimer. Aqm, el coagulo puede contribuir al trastorno tanto mediante oclusiones como mediante la union de otros factores relevantes de la enfermedad.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la invencion se tienen en consideracion en particular para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos donde, ademas del componente pro-coagulante, tambien el componente pro- inflamatorio de la accion de la trombina cumple una funcion esencial. La potenciacion mutua de la coagulacion y la inflamacion se puede prevenir en particular mediante los compuestos de acuerdo con la invencion y por tanto se puede reducir de forma decisiva la probabilidad de complicaciones tromboticas. Aqm, se puede considerar el tratamiento y/o la profilaxis, inter alia, en el contexto de los trastornos vasculares ateroscleroticos, inflamaciones en el contexto de trastornos reumaticos del sistema locomotor, trastornos inflamatorios del pulmon, tales como fibrosis pulmonar, trastornos inflamatorios del rinon, tales como glomerulonefritis, trastornos inflamatorios del intestino, tales como enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa, o trastornos que pueden estar presentes en el contexto de una enfermedad diabetica subyacente, tales como por ejemplo retinoparia diabetica o nefroparia.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden usar para inhibir el desarrollo de tumores y la formacion de metastasis, y ademas para la profilaxis y/o el tratamiento de complicaciones tromboembolicas, tales como, por ejemplo, tromboembolias venosas, en pacientes con tumor, en particular los que se someten a intervenciones quirurgicas importantes o a quimioterapia o radioterapia.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la invencion se tienen en consideracion tambien para la profilaxis y/o el tratamiento de hipertension pulmonar.
En el contexto de la presente invencion, el termino "hipertension pulmonar" incluye hipertension arterial pulmonar, hipertension pulmonar asociada con trastornos del hemicardio izquierdo, hipertension pulmonar asociada con trastornos pulmonares y/o hipoxia e hipertension pulmonar debida a tromboembolias cronicas (CTEPH).
La "hipertension arterial pulmonar" comprende hipertension arterial pulmonar idiopatica (IPAH), inicialmente denominada hipertension pulmonar primaria), hipertension arterial pulmonar familiar (FPAH) e hipertension arterial pulmonar asociada (APAH), la cual esta asociada con colagenosis, derivacion pulmonar-sistemica congenita, hipertension portal, infecciones por VIH, la ingestion de ciertas drogas y medicamentos, con otros trastornos (trastornos de la glandula tiroidea, trastornos por deposito de glucogeno, enfermedad de Gaucher, teleangiectasia hereditaria, hemoglobinoparias, trastornos mieloproliferativos, esplenectoirna), con trastornos que tienen una contribucion capilar/venosa significativa, tales como trastorno pulmonar-venoso oclusivo y hemangiomatosis pulmonar-capilar, y ademas hipertension pulmonar persistente de neonatos.
La hipertension pulmonar asociada con trastornos del hemicardio izquierdo comprende la enfermedad de la auricula o el ventriculo izquierdo y defectos en la valvula mitral o aorta.
La hipertension pulmonar asociada con trastornos pulmonares y/o hipoxia comprende trastornos pulmonares obstructivos cronicos, trastorno pulmonar intersticial, smdrome de apnea del sueno, hipoventilacion alveolar, mal de las alturas cronico y defectos inherentes.
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La hipertension pulmonar debida a tromboembolias cronicas (CTEPH) comprende la oclusion tromboembolica de las arterias pulmonares proximales, la oclusion tromboembolica de las arterias pulmonares distales y las embolias pulmonares no tromboticas (tumor, parasitos, cuerpos extranos).
Otro objeto de la presente invencion es el uso de los compuestos de acuerdo con la invencion para preparar medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de hipertension pulmonar asociada con sarcoidosis, histiocitosis X y linfangiomatosis.
Ademas, las sustancias de acuerdo con la invencion se tienen en consideracion tambien para tratar fibrosis pulmonar y hepatica.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la invencion se tienen en consideracion tambien para el tratamiento y/o la profilaxis de la coagulacion intravascular diseminada en el contexto de una enfermedad infecciosa, y/o del smdrome inflamatorio sistemico (SIRS), disfuncion organica septicemica, insuficiencia organica septicemica e insuficiencia multiorganica, smdrome disneico agudo (SDA), lesion aguda del pulmon (ALI), choque septicemico y/o insuficiencia organica septicemica.
En el curso de una infeccion, puede haber una activacion generalizada del sistema de coagulacion (“coagulacion intravascular diseminada” o “coagulopatfa de consumo”, denominada en la presente memoria debajo como "DIC") con microtrombosis en varios organos y complicaciones hemorragicas secundarias. Ademas, puede haber dano endotelial con aumento de permeabilidad de los vasos y filtracion de fluidos y protemas dentro del lumen extravasal. A medida que avanza la infeccion, puede haber insuficiencia de un organo (por ejemplo insuficiencia renal, insuficiencia hepatica, insuficiencia respiratoria, deficit del sistema nervioso central e insuficiencia cardiovascular) o insuficiencia multiorganica.
En el caso de DIC, hay una activacion masiva del sistema de coagulacion en la superficie de las celulas endoteliales danadas, las superficies de cuerpos extranos o del tejido extravascular lesionado. Como consecuencia, hay coagulacion en pequenos vasos de varios organos con hipoxia y posterior disfuncion organica. Un efecto secundario es el consumo de factores de coagulacion (por ejemplo factor X, protrombina y fibrinogeno) y plaquetas, que reduce la posibilidad de coagulacion de la sangre y puede dar por resultado hemorragia grave.
Los compuestos de acuerdo con la invencion son muy particularmente adecuados para el tratamiento y/o la profilaxis del smdrome coronario agudo (SCA), tromboembolias venosas, trombosis venosas, en particular en venas profundas de la pierna y venas renales, embolias pulmonares, accidente cerebrovascular y/o la profilaxis de trombosis en el contexto de intervenciones quirurgicas, en particular en el contexto de intervenciones quirurgicas en pacientes que padecen cancer.
Otro objeto de la presente invencion es el uso de los compuestos de acuerdo con la invencion para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos, en particular de los trastornos antes mencionados.
Otro objeto de la presente invencion es el uso de los compuestos de acuerdo con la invencion para producir un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos, en particular de los trastornos antes mencionados.
Otro objeto de la presente invencion es un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos, especialmente de los trastornos antes mencionados, mediante el uso de una cantidad eficaz desde el punto de vista terapeutico de un compuesto de acuerdo con la invencion.
Otro objeto de la presente invencion son los compuestos de acuerdo con la invencion para su uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos, especialmente de los trastornos antes mencionados, mediante el uso de una cantidad eficaz desde el punto de vista terapeutico de un compuesto de acuerdo con la invencion.
Otro objeto de la presente invencion son medicamentos que contienen un compuesto de acuerdo con la invencion y uno o mas de otros compuestos activos.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden usar para prevenir la coagulacion ex vivo, por ejemplo para la proteccion de organos a ser trasplantados contra el dano del organo originado por la formacion de coagulos y para proteger al receptor del organo contra la tromboembolia del organo trasplantado, para conservar los hemoderivados y derivados plasmaticos, para limpiar/pretratar cateteres y otros medios auxiliares e instrumentos medicos, para recubrir las superficies sinteticas de los medios auxiliares e instrumentos medicos que se usan in vivo o ex vivo o para muestras biologicas que pueden comprender el factor IIa.
Otro objeto de la presente invencion es un procedimiento para prevenir la coagulacion de la sangre in vitro, en particular en muestras de sangre en bancos o muestras biologicas que pueden contener el factor IIa, procedimiento que se caracteriza porque se agrega una cantidad anticoagulante efectiva del compuesto de acuerdo con la invencion.
Otro objeto de la presente invencion son medicamentos que contienen un compuesto de acuerdo con la invencion y
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uno o mas de otros principios activos, especialmente para el tratamiento y/o la profilaxis de los trastornos antes mencionados. Como principios activos de combinacion adecuados se mencionan a modo de ejemplo y preferentemente:
• hipolipemiantes, en particular inhibidores de HMG-CoA-(3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A) reductasa tales como, por ejemplo, lovastatina (Mevacor), simvastatina (Zocor), pravastatina (Pravachol), fluvastatina (Lescol) y atorvastatina (Lipitor);
• agentes terapeuticos coronarios/vasodilatadores, en particular inhibidores de ECA (enzima convertidora de la angiotensina) tales como, por ejemplo, captopril, lisinopril, enalapril, ramipril, cilazapril, benazepril, fosinopril, quinapril y perindopril, o antagonistas del receptor AII (angiotensina II) tales como, por ejemplo, embusartan, losartan, valsartan, irbesartan, candesartan, eprosartan y temisartan, o antagonistas p-adrenoceptores tales como, por ejemplo, carvedilol, alprenolol, bisoprolol, acebutolol, atenolol, betaxolol, carteolol, metoprolol, nadolol, penbutolol, pindolol, propanolol y timolol, o antagonistas del adrenoceptor alfa-1 tales como, por ejemplo, prazosina, bunazosina, doxazosina y terazosina, o diureticos, tales como, por ejemplo, hidroclorotiazida, furosemida, bumetanida, piretanida, torasemida, amilorida y dihidralazina, o bloqueadores del canal de calcio, tales como, por ejemplo verapamilo y diltiazem, o derivados de dihidropiridinas tales como, por ejemplo, nifedipino (Adalat) y nitrendipino (Bayotensin), o preparaciones nitro tales como, por ejemplo, 5-mononitrato de isosorbida, dinitrato de isosorbida y trinitrato de glicerol, o sustancias que originan un incremento en el guanosina monofosfato cfclico (cGMP) tales como, por ejemplo, estimuladores de guanilato ciclasa soluble, por ejemplo riociguat;
• activadores del plasminogeno (tromboltticos/fibrinoltticos) y compuestos que promueven la trombolisis/fibrinolisis tales como inhibidores del inhibidor del activador del plasminogeno (inhibidores de PAI) o inhibidores del inhibidor de fibrinolisis activado por trombina (inhibidores de TAFI) tales como, por ejemplo, activador tisular del plasminogeno (tPA), por ejemplo Actilyse®), estreptocinasa, reteplasa y urocinasa;
• sustancias anticoagulantes (anticoagulantes), tales como, por ejemplo, heparina (UFH), heparinas de bajo peso molecular (NMH), tales como, por ejemplo, tinzaparina, certoparina, parnaparina, nadroparina, ardeparina, enoxaparina, reviparina, dalteparina, danaparoid, semuloparina (AVE 5026), adomiparina (M118) y EP- 42675/ORG42675;
• inhibidores directos de la trombina (DTI) tales como, por ejemplo, pradaxa (dabigatran), atecegatran (AZD-0837), DP-4088, SSR-182289A, argatroban, bivalirudina y tanogitran (BIBT-986 y el profarmaco BIBT-1011), hirudina;
• inhibidores directos del factor Xa tales como, por ejemplo, rivaroxaban, apixaban, edoxaban (DU-176b), betrixaban (PRT-54021), R-1663, darexaban (YM-150), otamixaban (FXV-673/RPR-130673), letaxaban (TAK- 442), razaxaban (DPC-906), DX-9065a, LY-517717, idraparinux y fondaparinux;
• sustancias inhibidoras de la agregacion plaquetaria (inhibidores de agregacion plaquetaria, inhibidores de agregacion trombodtica) tales como, por ejemplo, acido acetilsalfcilico (por ejemplo aspirina), ticlopidina (Ticlid), clopidogrel (Plavix), prasugrel, ticagrelor, cangrelor, elinogrel, vorapaxar;
• antagonistas del receptor del fibrinogeno (antagonistas de la glucoprotema Mb/IMa) tales como, por ejemplo, abciximab, eptifibatida, tirofiban, lamifiban, lefradafiban y fradafiban;
• protema C activada humana recombinante tal como, por ejemplo, Xigris;
• y ademas antiarntmicos.
Otro objeto de la presente invencion es una combinacion que contiene (A) un compuesto de la formula (I) y (B) 5- cloro-A/-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3-oxazolidin-5-il}metil)-2-tiofeno-carboxamida (rivaroxaban)
[documento WO 01/47919] con la formula estructural
O
/
O
V
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N
O
Cl
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O
Otro objeto de la presente invencion es tambien una combinacion que contiene (A) (2-{[1-(3-clorofenil)-2- fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5S)-5-(2-hidroxi-etil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro] con la siguiente formula
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O
/)
N
H
N
F
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Cl
o una de las sales de la misma, los solvatos de la misma o los solvatos de las sales de la misma. y (B) 5-cloro-A/-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3-oxazolidin-5-il}metil)-2-tiofeno-carboxamida
(rivaroxaban) con la formula estructural
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/
O
V
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N
O
Cl
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O
Otro objeto de la presente invencion es tambien una combinacion que contiene (A) (2-{[(1S)1-(3-clorofenil)-2- fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona con la siguiente formula
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O
/)
N
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F Cl
10 o una de las sales de la misma, los solvatos de la misma o los solvatos de las sales de la misma y (B) 5-cloro-A/- ({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3-oxazolidin-5-il}-metil)-2-tiofeno-carboxamida (rivaroxaban) con la formula estructural
O
/
O
V
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N
O
Cl
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O
Otro objeto de la presente invencion es tambien una combinacion que contiene (A) (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2- 15 fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona con la siguiente
formula
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O
/)
N
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F Cl
y (B) 5-cloro-W-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3-oxazolidin-5-il}-metil)-2-tiofeno-carboxamida
(rivaroxaban) con la formula estructural
O
/
O
V
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N
O
Cl
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O
"Combinaciones" significa a los fines de la invencion no solo una forma farmaceutica que contiene todos los componentes (las denominadas combinaciones fijas), y paquetes de combinaciones que contienen los componentes separados entre sf, sino ademas componentes que se administran de forma simultanea o secuencial, en la medida que se empleen para la profilaxis y/o el tratamiento de la misma enfermedad. De igual modo es posible combinar dos o mas principios activos entre sf, es decir, se trata a este respecto en cada caso de combinaciones de dos componentes o multicomponentes.
En la combinacion, los principios activos (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5- il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona y 5-cloro-W-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3- oxazolidin-5-il}-metil)-2-tiofeno-carboxamida (rivaroxaban) se emplean preferentemente cada uno de ellos en una cantidad subterapeutica.
En la combinacion, los principios activos (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5- il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona y 5-cloro-W-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3- oxazolidin-5-il}-metil)-2-tiofeno-carboxamida (rivaroxaban) se emplean preferentemente cada uno de ellos en una cantidad subterapeutica, donde la cantidad subterapeutica se refiere a los trastornos para los cuales se usa la combinacion.
Preferentemente, se emplean de 20 mg a 120 mg de (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3- benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona en la combinacion cada 24 horas, en particular preferentemente de 20 mg a 80 mg cada 24 horas.
Preferentemente se emplean de 2,5 mg a 10 mg de 5-cloro-W-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3- oxazolidin-5-il}-metil)-2-tiofeno-carboxamida (rivaroxaban) en la combinacion cada 24 horas, en particular preferentemente de 2,5 mg, 5 mg o 10 mg cada 24 horas.
Los compuestos de acuerdo con la invencion pueden actuar de forma sistemica y/o local. A este fin, se pueden administrar de una manera adecuada, por ejemplo por via oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dermica, transdermica, conjuntival, otica, o en forma de un implante o endoprotesis vascular.
Los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden administrar en las formas de administracion adecuadas para estas vfas de administracion.
Son formas de administracion adecuadas para administracion oral aquellas que funcionan de acuerdo con el estado de la tecnica y proporcionan los compuestos de acuerdo con la invencion de forma rapida y/o de una manera modificada, y que contienen los compuestos de acuerdo con la invencion en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta, tal como por ejemplo comprimidos (comprimidos no recubiertos o recubiertos, por ejemplo con recubrimientos entericos o recubrimientos que son insolubles o se disuelven de una manera retardada y controlan la liberacion del compuesto de acuerdo con la invencion), comprimidos que se disgregan rapidamente en la boca, o pelfculas/obleas, pelfculas/liofilizados, capsulas (por ejemplo capsulas de gelatina dura o blanda), comprimidos recubiertos con azucar, granulos, microgranulos, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.
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La administracion parenteral puede evitar una etapa de absorcion (por ej., por v^a intravenosa, intraarterial, intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o incluir una absorcion (por ej., por via intramuscular, subcutanea, intracutanea, percutanea o intraperitoneal). Las formas de administracion adecuadas para administracion parenteral incluyen formulaciones para inyeccion e infusion en la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos esteriles.
Se prefiere la administracion oral.
Son formas de administracion adecuadas para las otras vfas de administracion, por ejemplo, formas farmaceuticas para inhalacion (incluyendo inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas nasales, soluciones o pulverizaciones; comprimidos para administracion lingual, sublingual o bucal, pelfculas/obleas o capsulas, supositorios, preparaciones oftalmologicas u oculares, capsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones lipofilas, pomadas, cremas, sistemas terapeuticos transdermicos (por ej., parches), leche, pastas, espumas, polvos para espolvoreo, implantes o endoprotesis vascular.
Los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden convertir en las formas de administracion mencionadas. Esto se puede hacer de una manera conocida per se, mezclandolos con coadyuvantes inertes, no toxicos, farmaceuticamente adecuados. Estos coadyuvantes incluyen vetffculos (por ejemplo celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por ej., polietilenglicoles lfquidos), emulsionantes y agentes dispersantes o humectantes (por ejemplo dodecilsulfato sodico, oleato de polioxisorbitano), aglutinantes (por ejemplo polivinilpirrolidona), polfmeros sinteticos y naturales (por ejemplo albumina), estabilizantes (por ej., antioxidantes, tales como por ejemplo acido ascorbico), colorantes (por ej., pigmentos inorganicos, tales como por ejemplo oxidos de hierro) y correctores del sabor y/o el olor.
Otro objeto de la presente invencion son medicamentos que contienen al menos un compuesto de acuerdo con la invencion, preferentemente junto con uno o mas coadyuvantes inertes no toxicos, farmaceuticamente adecuados, y el uso de los mismos para los fines antes mencionados.
En el caso de administracion parenteral, en general se ha hallado que es ventajoso administrar cantidades de aproximadamente 5 a 250 mg cada 24 horas para obtener resultados efectivos. En el caso de administracion oral, la cantidad es aproximadamente de 5 a 500 mg cada 24 horas.
Sin embargo, puede ser necesario donde sea apropiado desviarse de las cantidades establecidas, espedficamente en funcion del peso corporal, la via de administracion, la respuesta individual al principio activo, la naturaleza de la preparacion y la hora o el intervalo en la o con el cual tiene lugar la administracion.
Los porcentajes en las pruebas y en los ejemplos que siguen son, a menos que se indique lo contrario, porcentajes en peso; las partes son partes en peso. Las relaciones de disolvente, las relaciones de dilucion y las cifras de concentracion para las soluciones lfquido/lfquido se basan en el volumen. La indicacion "p/v" significa "peso/volumen". Asf, por ejemplo "10% p/v" significa: 100 ml de solucion o suspension contienen 10 g de sustancia.
A) Ejemplos
Abreviaturas:
d. a.
doblete ancho (en RMN)
multiplete ancho (en RMN)
singulete ancho (en RMN)
aproximadamente
dfa(s), doblete (en RMN)
cromatograffa de capa fina
doblete de dobletes (en RMN)
dimetilsulfoxido
doblete de tripletes (en RMN)
de la teoffa (en rendimiento)
ionizacion por electropulverizacion (en EM)
cromatograffa de gases acoplada a espectroscopfa de masa
hora(s)
hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
cromatograffa lfquida de alta resolucion, alta presion
concentrado
cromatograffa lfquida acoplada a espectroscopfa de masa
multiplete (en rMn)
molar
multiplete centrado (en RMN) minuto(s)
espectroscopfa de masas normal
m. a. s. a. aprox. d
CCF
dd
DMSO dt d. t.
IEP
CG-EM
h
HATU
HPLC
conc.
CL-EM
m
M
mc
min
EM
N
5
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15
20
25
30
35
40
RMN
espectroscopfa de resonancia magnetica nuclear
cuant.
cuantitativo
q
cuadruplete (en RMN)
quin
quinteto (en RMN)
RP
fase inversa
TA
temperatura ambiente (20-25 °C)
Tr
tiempo de retencion (en HPLC)
s
singulete (en RMN)
t
triplete (en RMN)
UV
ultravioleta
UPLC
cromatograffa de ultra alto rendimiento, ultra alta presion
Procedimientos de CL-EM
Procedimiento 1A: Instrumento: Waters ACQUITY SQD UPLC System; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 |j 50 x 1 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, gradiente: 0,0 min 90 % de A ^ 1,2 min 5 % de A ^ 2,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; caudal: 0,40 ml/min; deteccion UV: 208 - 400 nm.
Procedimiento 2A: Instrumento: Waters ACQUITY SQD UPLC System; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 j 30 x 2 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, gradiente: 0,0 min 90 % de A ^ 1,2 min 5 % de A ^ 2,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; caudal: 0,60 ml/min; deteccion UV: 208 - 400 nm.
Procedimiento 3A: Instrumento: Micromass Quattro Premier con Waters UPLC Acquity; columna: Thermo Hypersil GOLD 1,9 j 50 x 1 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico de 50 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico de 50 % de concentracion, gradiente: 0,0 min 97 % de A ^ 0,5 min 97 % de A ^ 3,2 min 5 % de A ^ 4,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; caudal: 0,3 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 4A: Instrumento de EM: Waters (Micromass) Quattro Micro; instrumento de HPLC: Serie Agilent 1100; columna: YMC-Triart C18 3 j 50 x 3 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,01 mol de carbonato de amonio, fase movil B: 1 l de acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 100 % de A ^ 2,75 min 5 % de A ^ 4,5 min 5 % de A; horno: 40 °C; caudal: 1,25 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 5A: Instrumento de EM: Waters (Micromass) QM; instrumento de HPLC: Serie Agilent 1100; columna: Agient ZORBAX Extend-C18 3,0 x 50 mm 3,5 micrometres; fase movil A: 1 l de agua + 0,01 mol de carbonato de amonio, fase movil B: 1 l de acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 98 % de A ^ 0,2 min 98 % de A ^ 3,0 min 5 % de A ^
4.5 min 5 % de A; horno: 40 °C; caudal: 1,75 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 6A: Instrumento de EM: Waters (Micromass) QM; instrumento de HPLC: Serie Agilent 1100; columna: Agient ZORBAX Extend-C18 3,0 x 50 mm 3,5 micrometros; fase movil A: 1 l de agua + 0,01 mol de carbonato de amonio, fase movil B: 1 l de acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 98 % de A ^ 0,2 min 98 % de A ^ 3,0 min 5 % de A ^
4.5 min 5 % de A; horno: 40 °C; caudal: 1,75 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 7A: Instrumento: Waters ACQUITY SQD UPLC System; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 j 50 x 1 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, gradiente: 0,0 min 95 % de A ^ 6,0 min 5 % de A ^ 7,5 min 5 % de A; horno: 50 °C; caudal: 0,35 ml/min; deteccion UV: 210 - 400 nm:
Procedimientos de CG-EM
Procedimiento 1B: Instrumento: Thermo DFS, Trace GC Ultra; columna: Restek RTX-35, 15 m x 200 jm x 0,33 jm; caudal constante con helio: 1,20 ml/min; horno: 60 °C; entrada: 220 °C; gradiente: 60 °C, 30 °C/min ^ 300 °C (se mantiene durante 3,33 min).
Procedimiento 2B: Instrumento: Micromass GCT, GC6890; columna: Restek RTX-35, 15 m x 200 jm x 0,33 jm; caudal constante con helio: 0,88 ml/min; horno: 70 °C; entrada: 250 °C; gradiente: 70 °C, 30 °C/min ^ 310 °C (se mantiene durante 3 min).
Procedimientos de EM:
Procedimiento 1C: Instrumento: Thermo Fisher-Scientific DSQ; ionizacion qmmica; gas reactivo NH3; temperatura de origen: 200 °C; energfa de ionizacion 70eV.
Procedimiento 2C: Instrumento: Waters ZQ 2000; ionizacion por electroaspersion; fase movil A: 1 l de agua + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,25 ml de acido formico de 99 % de concentracion; 25 % de A, 75 % de B; caudal: 0,25 ml/min.
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Separacion de enantiomeros/diastereomeros preparativa sobre una fase quiral:
Procedimiento 1D: Fase: Daicel Chiralpak AZ-H, 5 pm 250 mm x 30 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 40 ml/min; temperature: 20 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 2D: Fase: Daicel Chiralpak AZ-H, 5 pm 250 mm x 30 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 40 ml/min, temperatura: 25 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 3D: Fase: Daicel Chiralpak AD-H SFC, 10 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: dioxido de carbono/etanol 70:30; caudal: 100 ml/min, caudal adicional: 30 ml/min, contrapresion: 8 MPa; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 4D: Fase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: iso-hexano/iso-propanol 70:30; caudal: 20 ml/min; temperatura: 25 °C; deteccion UV: 230 nm.
Procedimiento 5D: Fase: Daicel Chiralpak AZ-H, 5 pm 250 mm x 30 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 90:10; caudal: 40 ml/min; temperatura: 25 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 6D: Fase: Daicel Chiralpak AY-H, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 90:10; caudal: 40 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 7D: Fase: Daicel Chiralpak AS-H, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 70:30; caudal: 20 ml/min; temperatura: 25 °C; deteccion UV: 230 nm.
Procedimiento 8D: Fase: Daicel Chiralpak AZ-H, 5 pm 250 mm x 30 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 20 ml/min; temperatura: 25 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 9D: Fase: Daicel Chiralpak OZ-H, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 15 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 10D: Fase: Daicel Chiralpak OD-H, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 60:40; caudal: 20 ml/min; temperatura: 22 °C; deteccion UV: 230 nm.
Separacion de enantiomeros/diastereomeros analitica sobre una fase quiral:
Procedimiento 1E: Fase: Daicel Chiralcel OZ-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 2E: Fase: Daicel Chiralcel AZ-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 3E: Fase: Daicel Chiralpak AD-H SFC, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: dioxido de carbono/etanol 70:30; caudal: 3 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 4E: Fase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/isopropanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 5E: Fase: LUX Amylose-2, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 90:10; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 6E: Fase: Daicel Chiralpak AS-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/iso-propanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 7E: Fase: Daicel Chiralcel OD-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 80:20 + 0,2 % de dietilamina; caudal: 1 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 8E: Fase: Daicel Chiralpak AD-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 9E: Fase: Daicel Chiralcel OZ-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm, fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 40 °C; deteccion UV: 220 nm.
Procedimiento 10E: Fase: Daicel Chiralcel OD-H, 5 pm 250 mm x 4,6 mm; fase movil: iso-hexano/etanol 50:50; caudal: 1 ml/min; temperatura: 30 °C; deteccion UV: 220 nm.
Purificacion preparativa:
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Procedimiento 1F: Fase: Sunfire C-18, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: gradiente de agua/acetonitrilo 80:20 ^ 5:95; caudal: 23,75 ml/min + adicion constante de acido formico de 2 % de concentracion, caudal: 1,25 ml/min; deteccion UV: 210 nm.
Separacion de diastereomeros preparativa sobre una fase aquiral:
Procedimiento 1G: Fase: Sunfire C-18, 5 pm 250 mm x 20 mm, fase movil: agua/metanol 60:40; caudal: 60 ml/min, temperatura: 23 °C; deteccion UV: 210 nm.
Microondas
El reactor de microondas usado era un instrumento de “modo unico” del tipo sintetizador por microondas del iniciador Biotage.
Cuando los compuestos de acuerdo con la invencion se purifican por HPLC preparativa usando los procedimientos descritos anteriormente en los cuales las fases moviles contienen aditivos, tales como, por ejemplo, acido trifluoroacetico, acido formico o amomaco, los compuestos de acuerdo con la invencion se pueden obtener en forma de sal, por ejemplo, como trifluoroacetato, formiato o sal de amonio, siempre que los compuestos de acuerdo con la invencion contengan una funcionalidad lo suficientemente acida o basica. Este tipo de sal se puede convertir en la correspondiente base libre o acido libre mediante varios procedimientos conocidos por el experto en la tecnica.
Si, en los intermedios de smtesis y los ejemplos de realizacion de la invencion descritos mas adelante se da un compuesto en la forma de una sal de la correspondiente base o acido, en general no se conoce la composicion estequiometrica exacta de esta sal como se ha obtenido mediante el respectivo procedimiento de preparacion o purificacion. A menos que se especifique en mas detalle, las adiciones a los nombres y formulas estructurales, tales como "clorhidrato", "trifluoroacetato", "sal de sodio" o "xHCl", "x CF3COOH", "x Na+" no se deben entender de forma estequiometrica en el caso de estas sales, sino que solo tienen caracter descriptivo con respecto a los componentes formadores de sales contenidos en las mismas.
Esto se aplica de igual manera si los intermedios de smtesis y los ejemplos de realizacion o las sales de los mismos se obtuvieron mediante los procedimientos de preparacion y/o purificacion descritos en la forma de solvatos, por ejemplo hidratos, cuya composicion estequiometrica (si es de un tipo definido) no se conoce.
Compuestos de partida
Ejemplo 1A
7-Metoxi-2-tioxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo
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Se disolvieron 20,0 g (101 mmol) de 3-amino-4-hidroxi-5-metoxibenzoato de metilo y 17,9 g (112 mmol) de O- etilditiocarbonato de potasio en piridina (400 ml), y la solucion se agito a reflujo durante 3 horas (de forma analoga a la bibl.: R. Lok et al., J. Org. Chem. 1996, 61, 3289-3297). La mezcla de reaccion se enfrio posteriormente y se vertio en una mezcla de hielo (600 g) y solucion de cloruro de hidrogeno acuoso concentrado (60 ml). El solido formado se separo por filtracion a vado y se lavo con agua (5 x 200 ml). El solido se seco inicialmente a 50 °C/40 hPa y posteriormente a alto vado. Rendimiento: 23,3 g (96 % d. t.).
CL-EM (Procedimiento 1A): Tr = 0,79 min; EM (lEPpos): m/z = 240 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 8 [ppm] = 14,1 (s. a., 1H), 7,45 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,88 (s, 3H). Ejemplo 2A
2-Cloro-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo
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Se suspendieron 150 g (627 mmol) de 7-metoxi-2-tioxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol-5-carboxilato en cloruro de tionilo (450 ml), se mezclaron con cantidades catalfficas de N,N-dimetilformamida (1,0 ml) y se agito posteriormente durante 3 h (de forma analoga a la bibl.: R. Lok et al., J. Org. Chem. 1996, 61, 3289-3297). Se agrego de nuevo N,N- dimetilformamida (1,0 ml), y se agito a 70 °C hasta que el desprendimiento de gas hubo cesado (aprox. 4 h). La solucion de reaccion se concentro a vado y el residuo se coevaporo con diclorometano (2 x 200 ml) para eliminar completamente el cloruro de tionilo. El solido se seco a alto vado y luego se purifico por cromatograffa de columna sobre gel de sflice (diclorometano). De forma alternativa, el producto bruto se puede usar tambien posteriormente de manera directa. Rendimiento: 125,6 g (82 % d. t.).
CL-EM (Procedimiento 1A): Tr= 1,00 min; EM (lEPpos): m/z = 242 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, CDCla): 8 [ppm] = 7,99 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,96 (s, 3H).
Ejemplo 3A
1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetanona
O
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Procedimiento 1:
Inicialmente se cargaron en acetonitrilo (850 ml) 50,7 g (161 mmol) de trihidrato de fluoruro de tetra-n-butilamonio, 22,1 g (214 mmol) de fluoruro de zinc y 6,22 g (107 mmol) de fluoruro de potasio y se agito a 80 °C durante 1 h (de forma analoga a la bibl.: X. Zou et al., J. Fluorine Chem. 2010, 131, 340-344). Posteriormente se agregaron gota a gota 50,0 g (214 mmol) de 2-bromo-1-(3-clorofenil)etanona en acetonitrilo (210 ml) a esta temperatura durante un peffodo de 3 h, y se agito posteriormente a 80 °C durante otras 3 h. La solucion de reaccion se enfrio hasta TA y las sales precipitadas se separaron por filtracion a traves de una placa filtrante de vidrio. El filtrado se concentro a vado, se agrego agua al residuo y la mezcla se extrajo de forma repetida con ferc-butil metil eter. Mas sales precipitadas se eliminaron por filtracion. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vado. Posteriormente, el producto bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (eter de petroleo/acetato de etilo 10-1). Rendimiento: 27,0 g (58 % d. t., pureza 80 %).
CG-EM (Procedimiento 1B): Tr = 3,73 min; EM (lEPpos): m/z = 172 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,91 (m6 1H), 7,85 (da, 1H), 7,77 (dd, 1H), 7,60 (mc, 1H), 5,85 (d, 2H). Procedimiento 2:
Se agregaron 45,8 g (129 mmol) de 1-(clorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo[2,2,2]octano-bis-tetrafluoroborato (Selectfluor) a 10,0 g (64,7 mmol) de 1-(3-clorofenil)etanona en metanol (80,0 ml) y posteriormente, en diez porciones, se agito en el microondas (sintetizador Biotage) a 110 °C durante 2,5 h (de forma analoga a la bibl.: B. H. Hoff et al., Tetrahedron 2009, 65, 9550-9556.). Posteriormente se agregaron 5 ml de agua en cada caso, y se agitaron en el microondas a 110 °C durante 1 h. Las mezclas de reaccion se combinaron posteriormente, el metanol se elimino a vado, el residuo se diluyo con agua y luego se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 12,5 g (86 % d. t., pureza 77 %).
CG-EM (Procedimiento 2B): Tr = 3,56 min; EM (lEPpos): m/z = 172 [M]+.
Ejemplo 4A
1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetanamina [racemato]
NH
lo
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Cl
Procedimiento 1:
Se agregaron gota a gota 82,0 g (86,3 ml, 289 mmol) de tetraisopropoxido de titanio a 24,9 g (144,0 mmol) de 1-(3- clorofenil)-2-fluoroetanona en solucion de amomaco etanolico 2 M (361 ml, 722 mmol), la temperatura se mantuvo a 5 20 °C mediante enfriamiento con hielo, y la mezcla se agito posteriormente a TA durante toda la noche. A 10 °C, se
agregaron posteriormente 8,19 g (216 mmol) de borohidruro de sodio en porciones y se agito a TA durante 6 h. Otros 1,64 g (43,2 mmol) de borohidruro de sodio se agregaron posteriormente y se agito durante toda la noche. Se agrego solucion de cloruro de hidrogeno acuoso semiconcentrado (300 ml) a la solucion de reaccion, y se diluyo posteriormente con agua (1,0 l) (pH = 2). Se extrajo con ferc-butil metil eter (3 x 500 ml), y las fases organicas se 10 secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. Rendimiento: 10,5 g (pureza: 58 %).
La fase acuosa se ajusto a pH = 10 con solucion de hidroxido de sodio acuoso de 45 % de concentracion, se saturo con cloruro de sodio y se extrajo con ferc-butil metil eter (3 x 500 ml). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. Esto dio otros 12,9 g (51 % d. t.) del producto deseado. CL-EM (Procedimiento 5A): Tr= 1,93 min; EM (lEPpos): m/z = 174 [M+H]+;
15 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,50 (s, 1H), 7,40-7,27 (m, 3H), 4,45 (mc, 1H), 4,32 (mc, 1H), 4,12 (dt, 1H), 2,10 (s. a., 2H).
Las fracciones del producto se combinaron y se usaron para la proxima etapa sin purificacion posterior. Procedimiento 2:
En una atmosfera de argon, se disolvieron 8,20 g (38,0 mmol, pureza: 80 %) de 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanona en 20 solucion 2 M de amomaco etanolico (95 ml, 190 mmol), se agregaron 21,6 g (22,8 ml, 76,0 mmol) de tetraisopropoxido de titanio y se agito a TA durante 16 h. Posteriormente se agregaron 1,51 g (57,3 mmol) de borohidruro de sodio y se agito a TA durante 5 h. Se agregaron otros 700 mg (18,5 mmol) de borohidruro de sodio y se agito a TA durante toda la noche. Usando solucion acuosa 6 M de cloruro de hidrogeno, la solucion de reaccion se ajusto a pH = 2 y luego se extrajo tres veces con ferc-butil metil eter. La fase acuosa se ajusto a pH = 10 con 25 hidroxido de sodio, se saturo con cloruro de sodio y se extrajo cuatro veces con ferc-butil metil eter. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El residuo se recogio en diclorometano y se lavo con solucion de bicarbonato de sodio acuoso saturado. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El compuesto objetivo se uso para la proxima etapa sin purificacion posterior. Rendimiento: 7,32 g (90 % d. t., pureza: 81 %).
30 CL-EM (Procedimiento 5A): Tr = 1,92 min; EM (lEPpos): m/z = 174 [M+H]+;
Ejemplo 5A
Clorhidrato 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanamina [racemato]
Procedimiento 1:
35 En una atmosfera de argon, se agregaron 6,52 g (6,87 ml 23,0 mmol) de tetraisopropoxido de titanio a 2,00 g (11,5 mmol) de 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanona en solucion 2 M de amomaco etanolico (28,7 ml, 57,4 mmol), y se agito a TA durante 16 h. Posteriormente se agregaron 654 mg (17,3 mmol) de borohidruro de sodio y se agito a TA durante 5 h. Se agregaron otros 350 mg (9,25 mmol) de borohidruro de sodio y se agito a TA durante toda la noche. La solucion de reaccion se vertio en solucion de amomaco acuoso de 25 % de concentracion (100 ml) y posteriormente 40 se filtro a traves de tierra de diatomeas. Se agrego ferc-butil metil eter (200 ml) al filtrado y se extrajo. Despues de la separacion de fase, la fase acuosa se extrajo con ferc-butil metil eter (100 ml). Las fases organicas combinadas se
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NH2xHCl
Cl
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secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se disolvio en eter dietflico/tetrahidrofurano (5:1; 60 ml), y posteriormente se agrego una solucion 4 N de cloruro de hidrogeno en 1,4- dioxano (10,0 ml). El solido formado se separo por filtracion a vado, se lavo con un poco de eter dietilico y se seco a alto vado. Rendimiento: 1,54 g (63% d. t.).
CL-EM (Procedimiento 5A): Tr= 1,94 min; EM (lEPpos): m/z = 174 [M+H-HCl]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,98 (s. a., 3H), 7,70 (s, 1H), 7,60-7,47 (m, 3H), 4,88-4,67 (m, 3H). Procedimiento 2:
Se agregaron gota a gota 1,10 kg (1,16 l, 3,88 mol) de tetraisopropoxido de titanio a 335 g (194,0 mmol) de 1-(3- clorofenil)-2-fluoroetanona en solucion 2 M de amomaco etanolico (4,85 l, 9,71 mmol), (la temperatura se mantuvo a 20 °C mediante enfriamiento con hielo) y se agito posteriormente a TA durante toda la noche. A 10 °C, se agregaron posteriormente 110 g (2,91 mol) de borohidruro de sodio en cuatro porciones, y se agito a TA durante 36 h. Se agregaron otros 29,4 g (776 mmol) de borohidruro de sodio y se agito a TA durante 1 h. La solucion de reaccion se vertio en solucion 2 M de amomaco acuoso (4,85 l) y las sales precipitadas se separaron por filtracion a traves de una placa filtrante a vado. Se agregaron ferc-butil metil eter (14 l) y agua (50 l) al filtrado, se extrajo y se agrego entonces solucion de cloruro de sodio acuoso al 5 % para facilitar la separacion de las fases. Despues de la separacion de las fases, la fase acuosa se extrajo nuevamente con ferc-butil metil eter (5 l), y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se disolvio en eter dietilico/tetrahidrofurano (10:1; 1,1 l) y posteriormente se agrego una solucion 4 N de cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (385 ml) con agitacion y enfriamiento con hielo. El solido blanco precipitado se separo por filtracion a vado, se lavo con un poco de eter dietflico y se seco a alto vado. Rendimiento: 261 g (77 % d. t.).
CL-EM (Procedimiento 5A): Tr= 1,93 min; EM (lEPpos): m/z = 174 [M+H-HCl]+;
Ejemplo 6A
[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]carbamato de ferc-butilo [racemato]
imagen63
Procedimiento 1:
Se suspendieron 7,47 g (43,3 mmol) de 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanamina [racemato] en diclorometano (150 ml), en primer lugar se mezclaron con 9,14 g (12,6 ml, 90,4 mmol) de trietilamina y luego con 10,3 g (47,3 mmol) de dicarbonato de di-ferc-butilo y se agito a TA durante toda la noche. La solucion de reaccion se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N (100 ml), solucion de bicarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml) y agua (100 ml). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se purifico por RP-HPLC preparativa (agua/acetonitrilo). Rendimiento: 7,23 g (61 % d. t.).
CL-EM (Procedimiento 1A): Tr= 1,10 min; EM (lEPpos): m/z = 218 [M+H^HgT;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 8 [ppm] = 7,72 (d, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,41-7,29 (m, 3H), 4,89 (mc, 1H), 4,59-4,45 (m, 1H), 4,45-4,32 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
Procedimiento 2:
En una atmosfera de argon se suspendieron 41,5 g (198 mmol) de clorhidrato 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanamina [racemato] en diclorometano (200 ml), y posteriormente se agregaron primero 80,0 g (110 ml, 790 mmol) de trietilamina y luego diclorometano (200 ml). Se agregaron 31,0 g (142 mmol) de dicarbonato de di-ferc-butilo (100 ml) y se agito a TA durante toda la noche. Se agregaron otros 9,91 g (45,4 mmol) de dicarbonato de di-ferc-butilo y se agito hasta que la conversion casi se completo (control por CCF). La solucion de reaccion se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 1 N (2 x 100 ml) y solucion de bicarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. Rendimiento: 51,0 g (94 % d. t.).
CL-EM (Procedimiento 7A): Tr = 3,25 min; EM (lEPpos): m/z = 218 [M+H^HgT
Ejemplo 7A
[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]carbamato de ferc-butilo [isomero 1 enantiomericamente puro]
imagen64
La separacion de los enantiomeros sobre una fase quiral de 7,23 g del compuesto del ejemplo 6A de acuerdo con el procedimiento 6D dio 3,05 g del ejemplo 7A (isomero 1 enantiomericamente puro) y 3,05 g del ejemplo 8A (isomero 2 enantiomericamente puro).
5 HPLC (procedimiento 6E): Tr = 5,01 min, 99,0 % de ee;
CL-EM (Procedimiento 7A): Tr = 3,26 min; EM (lEPpos): m/z = 218 [M+H-C^gT;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,72 (d, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,42-7,27 (m, 3H), 4,89 (mc, 1H), 4,59-4,45 (m, 1H), 4,44-4,31 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
Ejemplo 8A
10 [1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]carbamato de ferc-butilo [isomero 2 enantiomericamente puro]
imagen65
La separacion de los enantiomeros sobre una fase quiral de 7,23 g del compuesto del ejemplo 6A de acuerdo con el procedimiento 6D dio 3,05 g del ejemplo 7A (isomero 1 enantiomericamente puro) y 3,05 g del ejemplo 8A (isomero 2 enantiomericamente puro).
15 HPLC (procedimiento 6E): Tr = 7,46 min, 99,0 % de ee;
CL-EM (procedimiento 7A): Tr = 3,26 min; EM (lEPpos): m/z = 218 [M+H-C4H9]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,72 (d, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,42-7,28 (m, 3H), 4,89 (mc, 1H), 4,58-4,45 (m, 1H), 4,44-4,30 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
Ejemplo 9A
20 Clorhidrato 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanamina [isomero enantiomericamente puro]
imagen66
Inicialmente se cargaron en 1,4-dioxano (50 ml) 17,3 g (63,2 mmol) de [1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]carbamato de ferc- butilo [isomero 2 enantiomericamente puro], y se agregaron posteriormente 79 ml (316 mmol) de solucion de cloruro de hidrogeno 4 N en 1,4-dioxano a TA. Se formo un solido despues de un breve penodo de tiempo. Se agrego 1,425 dioxano (250 ml) y posteriormente se agregaron 31,6 ml (126 mmol) de solucion de cloruro de hidrogeno 4 N en 1,4- dioxano y se agito a TA durante toda la noche. La suspension formada se concentro completamente a vacfo, el
residuo se mezclo mediante agitacion con terc-butil metil eter (200 ml), se filtro y el residuo filtrado se lavo con terc- butil metil eter (2 x 50 ml). El solido formado se seco a alto vacio. Rendimiento: 13,2 g (99 % d. t.).
Rotacion optica: = 27,06 0 (c = 0,51, metanol),
CL-EM (procedimiento 5A): Tr= 1,94 min; EM (IEPpos): m/z = 174 [M+H]+;
5 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,91 (s. a., 3H), 7,68 (s, 1H), 7,55-7,47 (m, 3H), 4,89-4,66 (m, 3H).
Ejemplo 10A
2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo [racemato]
imagen67
H
N
F
imagen68
Cl
A TA se agregaron 2,22 g (2,99 ml, 17,2 mmol) de W,W-diisopropiletilamina a 1,82 g (5,73 mmol, pureza: 78 %) de 210 cloro-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo y 2,03 g (5,73 mmol, pureza: 49 %) de 1-(3- clorofenil)etanamina [racemato] en 1,4-dioxano (78 ml) y luego se agito durante 1 h. La solucion de reaccion se agito a reflujo durante 5 h y posteriormente se agito a TA durante toda la noche. Entonces se concentro a vado, el residuo se recogio en eter dietflico y se agrego un poco de diclorometano, se agito y el solido precipitado se filtro a vado y se lavo con eter dietilico. Rendimiento: 1,42 g (37 % d. t., pureza: 56 %). El filtrado se purifico por RP-HPLC 15 preparativa (acetonitrilo/agua), para dar otros 665 mg (22 % d. t., pureza: 71 %) del producto deseado.
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,10 min; EM (IEPpos): m/z = 379 [M+H]+;
Ejemplo 11A
Acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [racemato]
H3C
O
imagen69
H
N
F
imagen70
Cl
20 Se disolvieron 628 mg (1,31 mmol, pureza: 79 %) de 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol- 5-carboxilato de metilo [racemato] en 1,4-dioxano (80 ml) y posteriormente se agrego solucion de hidroxido de sodio acuoso 1 N (20 ml). Se agito a Ta durante 18 h. Entonces, la mayor parte del 1,4-dioxano se elimino a vado, el residuo se recogio en solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 1 N y se extrajo de forma repetida con acetato de etilo. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El residuo se 25 mezclo mediante agitacion con acetonitrilo, el solido precipitado se separo por filtracion a vado y se seco a alto vado. Rendimiento: 134 mg (17 % d. t., pureza 60 %). El filtrado se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua) y se obtuvo una segunda cantidad de producto. Rendimiento: 137 mg (23 % d. t., pureza 80 %). CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (IEPpos): m/z = 365 [M+H]+;
Ejemplo 12A
30 2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo [isomero enantiomericamente puro]
5
10
15
20
25
30
35
H3C
H3C
O
imagen71
H
N
F
imagen72
Cl
Procedimiento 1:
Bajo argon inicialmente se cargaron 15,2 g (62,8 mmol) de 2-cloro-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo en N,N-dimetilformamida (100 ml) y a continuacion a TA se agregaron 13,2 g (62,8 mmol) de clorhidrato de 1-(3- clorofenil)-2-fluoroetanamina [ejemplo 9A, isomero enantiomericamente puro] y 32,5 g (43,8 ml, 251 mol) de N,N- diisopropiletilamina. La solucion de reaccion se agito a 70 °C (temperatura del bano de aceite) durante 2 h y se agregaron otros 264 mg (1,26 mmol) de clorhidrato 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanamina [ejemplo 9A]. Se agito a 70 °C (temperatura del bano de aceite) durante 1 h, luego se enfrio y se vertio en agua helada. Despues de la separacion de las fases se agrego ferc-butil metil eter (500 ml) a la fase acuosa y se agito durante 10 min. La suspension formada se filtro a traves de una placa filtrante de vidrio a vado, el solido se mezclo mediante agitacion de forma repetida con ferc-butil metil eter y se filtro a vado. La fase acuosa se extrajo con ferc-butil metil eter (2 x 300 ml) y las fases organicas combinadas se concentraron a vado. El residuo se mezclo mediante agitacion de nuevo con ferc-butil metil eter, se filtro y se concentro a vado. Ambas fracciones solidas se combinaron posteriormente y se secaron a alto vado. Rendimiento: 18,4 g (77 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 5A): Tr = 2,56 min; EM (lEPpos): m/z = 379 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 8 [ppm] = 9,10 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50-7,35 (m, 4H), 7,31 (d, 1H), 5,26 (mc, 1H), 4,82-4,53 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
Procedimiento 2:
Bajo argon inicialmente se cargaron 125 g (517 mmol) de 2-cloro-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxilato de metilo en N,N-dimetilformamida (850 ml) y se agregaron a TA 114 g (543 mmol) de clorhidrato de 1-(3-clorofenil)-2- fluoroetanamina y 267 g (360 ml, 2,07 mol) de N,N-diisopropiletilamina. La solucion de reaccion se agito a 70 °C (temperatura de bano de aceite) durante 4 h, posteriormente se agregaron 8,69 g (41,4 mmol) de clorhidrato 1-(3- clorofenil)-2-fluoroetanamina y se agito a TA durante toda la noche (aprox. 14 h). Se agregaron otros 1,09 g (5,17 mmol) de clorhidrato 1-(3-clorofenil)-2-fluoroetanamina, se agito a 70 °C (temperatura del bano de aceite) durante 2 h y luego se concentro a vado. El residuo se recogio en ferc-butil metil eter (2,0 l) y la fase organica se lavo con agua (3 x 1,0 l). A vado, la fase organica se concentro hasta aprox. un tercio de su volumen original y a continuacion el solido precipitado se separo por filtracion a vado. El solido precipitado en la fase acuosa se separo por filtracion de igual modo a vado y posteriormente se lavo con ferc-butil metil eter (2x 100 ml). Los solidos combinados se secaron a alto vado. Rendimiento: 181 g (92 % d. t.).
r 120,1
Rotacion optica: d = 77,20 0 (c = 0,465, metanol);
CL-EM (procedimiento 5A): Tr = 2,57 min; EM (lEPpos): m/z = 379 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,11 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51-7,35 (m, 4H), 7,31 (s, 1H), 5,27 (mc, 1H), 4,83-4,50 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
Ejemplo 13A
Acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro]
5
10
15
20
25
30
H3C
O
imagen73
H
N
F
imagen74
Cl
Inicialmente se cargaron 181 g (478 mmol) de 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5- carboxilato de metilo [isomero enantiomericamente puro] en 1,4-dioxano (2,4 l) y a continuacion se agrego una solucion fria (aprox. 8 °C) de 425 g (287 ml, 4,78 mol) de solucion de hidroxido de sodio acuoso de 45 % de concentracion en agua (2,35 l). Se agito a TA durante 4 h y posteriormente se diluyo con agua (2,0 l). La solucion de reaccion se extrajo con terc-butil metil eter (2 x 1,0 l), se agrego hielo a la fase acuosa y la fase acuosa se acidifico con solucion de cloruro de hidrogeno concentrado (aprox. 450 ml). Se agito a 10 °C durante 15 min, el solido precipitado se separo por filtracion a vacfo y el residuo se lavo con agua (2 x 1,0 l), se dejo a TA durante toda la noche, posteriormente se seco a 60 °C durante 4 h y luego a 50 °C a vacfo hasta que la masa quedo constante. Rendimiento: 172 g (98 % d. t., pureza: 89 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,92 min; EM (lEPpos): m/z = 365 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 12,85 (s. a., 1H), 9,06 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51-7,46 (m, 1H), 7,45-7,35 (m, 3H), 7,31 (d, 1H), 5,32-5,20 (m, 1H), 4,81-4,54 (m, 2H), 3,95 (s, 3H).
Ejemplo 14A
3-Metilpiperidin-4-ol [diastereomero trans racemico, 2 isomeros]
OH
CH
3
N
H
Inicialmente se cargaron 2,82 g (13,7 mmol) de 1-bencil-3-metilpiperidin-4-ol [diastereomero trans racemico, 2 isomeros; bibl.: M.-J. Blanco-Pilado et al., documento WO 2004/094380 A1] en etanol (250 ml), se agregaron 1,46 g de paladio sobre carbon (al 10 %) y se agito a TA y una atmosfera de hidrogeno de 350 kPa en un aparato Parr durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro para eliminar el catalizador y el filtrado se concentro a vacfo. Rendimiento: 1,26 g (79 % d. t.).
CG-EM (Procedimiento 2B): Tr = 2,23 min; EM (lEPpos): m/z =115 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 8 [ppm] = 4,48 (s. a., 1H), 2,95-2,75 (m, 3H), 2,37 (td, 1H), 2,05-1,96 (m, 1H), 1,68 (mc, 1H), 1,27-1,13 (m, 2H), 0,83 (d, 3H).
Ejemplo 15A
W-Bencil-2-cloro-W-(1,3-dihidroxipropan-2-il)propanamida [racemato]
HO. Cl^/CH3
HO.
‘N^^O
Inicialmente se cargaron 60,5 g (334 mmol) de 2-(bencilamino)propano-1,3-diol [bibl.: W. Lacote et al., Org. Lett. 2011, 13, 5990-5993] en /so-propanol (0,93 l), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 50,7 g (69,8 ml, 501 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 50,9 g (38,9 ml, 401 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo
[racemate]. La solucion de reaccion se dejo enfriar hasta TA y posteriormente se concentro a vacte. Se agrego solucion cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N al residuo y se extrajo con diclorometano. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacte. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 91,7 g (94 % d. t.).
5 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,71 min; EM (lEPpos): m/z = 272 [M+H]+.
Ejemplo 16A
4-Bencil-5-(hidroximetil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
,CH,
imagen75
N^^O
OH
Ti
Inicialmente se cargaron 81,3 g (272 mmol, pureza: 91 %) de W-bencil-2-cloro-A/-(1,3-dihidroxipropan-2- 10 il)propanamida [racemato] en /so-propanol (600 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 91,6 g (817 mmol) de terc- butilato de potasio. La solucion de reaccion se dejo enfriar hasta temperatura ambiente y se agito a TA durante toda la noche. La mayor parte del /so-propanol se elimino a vacte y el residuo se recogio en diclorometano. La mezcla se lavo con agua, la fase organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro a vacte. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 61,7 g (96 % d. t., relacion diastereomerica 15 aprox. 7:3).
CL-EM (procedimiento 2A): Tr = 0,61 min (diastereomero 1, 2 isomeros), Tr = 0,62 min (diastereomero 2, 2 isomeros);
EM (lEPpos): m/z = 236 [M+H]+.
Ejemplo 17A
20 4-Bencil-5-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
imagen76
O
N
,CH.
3
O
Inicialmente se cargaron 21,5 g (91,4 mmol) de 4-bencil-5-(hidroximetil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en W,A/-dimetilformamida (126 ml), y se agregaron a TA 12,4 g (183 mmol) de imidazol y luego 14,5 g (96,0 mmol) de cloruro de terc-butildimetilsililo. Se agito durante 2 h y a continuacion la mayor parte 25 del disolvente se elimino a vacte. El residuo se recogio en acetato de etilo/agua y la fase organica se lavo con agua, solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,4 N, solucion de bicarbonato de sodio acuoso saturado y agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vacte. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 31,2 g (97 % d. t., relacion diastereomerica aprox. 7:3).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,41 min; EM (lEPpos): m/z = 350 [M+H]+;
30 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,38-7,18 (m, 5H), 5,00 (d, 0,3H), 4,95 (d, 0,7H), 4,32-4,19 (m, 2H), 3,92-3,85 (m, 1H), 3,75-3,62 (m, 3H), 3,32-3,26 (m, 0,3H), 3,19-3,13 (m., 0,7H), 1,35 (d, 0,9H), 1,32 (d, 2,1H), 0,840,80 (m, 9H), 0,04--0,03 (m, 6H).
Ejemplo 18A
4-Bencil-5-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-2,2-dimetilmorfolin-3-ona [racemato]
5
10
15
20
25
imagen77
CH
3
3
imagen78
imagen79
CH3
CH
3
Inicialmente se cargaron 17,0 g (70,7 mmol) de 4-bencil-5-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en tetrahidrofurano (340 ml) y se agregaron 32,4 ml (58,4 mmol) de solucion de diisopropilamida de litio (1,8 M en tetrahidrofurano/n-heptano/etilbenceno) a -78 °C. Se calento lentamente hasta 0 °C y se agregaron posteriormente 8,97 g (3,94 ml, 63,2 mmol) de yodometano. Despues de 1,5 h se enfrio nuevamente hasta -78 °C y se agregaron 5,40 ml (9,73 mmol) de solucion de diisopropilamida de litio (1,8 M en tetrahidrofurano/n-heptano/etilbenceno). Entonces se calento hasta 0 °C y se agregaron 2,07 g (0,91 ml, 14,6 mmol) de yodometano. Despues de 1 h, se agrego agua a la solucion de reaccion con enfriamiento, el tetrahidrofurano se elimino a vacfo, el residuo se recogio en acetato de etilo y luego se lavo con agua y solucion de cloruro de sodio acuoso saturado. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 19,8 g (98 % d. t., pureza: 88 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,45 min; EM (lEPpos): m/z = 364 [M+H]+.
Ejemplo 19A
4-Bencil-5-(hidroximetil)-2,2-dimetilmorfolin-3-ona [racemato]
Inicialmente se cargaron 18,1 g (43,8 mmol, pureza: 88 %) de 4-bencil-5-({[terc-butil(dimetil)silil]oxi}metil)-2,2- dimetilmorfolin-3-ona [racemato] en tetrahidrofurano (329 ml), se agregaron 110 ml (110 mmol) de solucion de fluoruro de tetra-n-butilamonio (1,0 M en tetrahidrofurano) a TA y se agito durante toda la noche. La solucion de reaccion se concentro posteriormente a vacfo, el residuo se recogio en acetato de etilo y se lavo con agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se purifico por cromatograffa de columna sobre gel de sflice (diclorometano, diclorometano/metanol 100:3). Rendimiento: 9,99 g (89 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,73 min; EM (lEPpos): m/z = 250 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,43-7,35 (m, 2H), 7,34-7,21 (m, 3H), 5,09-4,98 (m, 2H), 4,23 (d, 1H), 3,90-3,75 (m, 2H), 3,65-3,55 (m, 2H), 3,15 (t. a., 1H), 1,42 (s, 3H), 1,39 (s, 3H).
Ejemplo 20A
(4-Bencil-6,6-dimetilmorfolin-3-il)metanol [racemato]
imagen80
imagen81
Inicialmente se cargo 1,00 g (4,01 mmol) de 4-bencil-5-(hidroximetil)-2,2-dimetilmorfolin-3-ona [racemate] en tetrahidrofurano (39 ml), se agregaron 8,02 ml (16,0 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 2 h. Se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (10 ml) cuidadosamente y se agito a reflujo durante 30 min. Posteriormente se concentro 5 completamente a vacte, el residuo se recogio en acetonitrilo y se purifico por RP-HPLC (acetonitrilo/agua, isocratico). Rendimiento: 587 mg (58 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 5A): Tr = 2,19 min; EM (lEPpos): m/z = 236 [M+H]+.
Ejemplo 21A
(6,6-Dimetilmorfolin-3-il)metanol [racemato]
10
» ch3
3
CH
3
OH
N
H
Inicialmente se cargaron 587 mg (2,49 mmol) de (4-bencil-6,6-dimetilmorfolin-3-il)metanol [racemato] en etanol (20 ml) y se agregaron 58,7 mg de paladio sobre carbono (al 10 %) y 29,4 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo se lavo con etanol. El filtrado se 15 concentro a vacte y el producto se seco a alto vacte. Rendimiento: 385 mg (cuant.).
CL-EM (procedimiento 6A): Tr = 0,68 min; EM (lEPpos): m/z = 146 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMS0-d6): 8 [ppm] = 4,54 (t, 1H), 3,46 (dd, 1H), 3,30-3,22 (m, 3H), 2,62-2,55 (m, 2H), 2,45 (d, 1H), 2,17 (s. a., 1H), 1,17 (s, 3H), 1,04 (s, 3H).
Ejemplo 22A
20 N-Bencil-2-cloro-W-[(2R)-1-hidroxipropan-2-il]propanamida [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
HO. Cl^/CH3 H3C N ^O
Inicialmente se cargaron 16,4 g (99,3 mmol) de (2R)-2-(bencilamino)propan-1-ol [bibl.: T. J. Tewson et al., Synthesis 2002, 6, 766-770] en /so-propanol (500 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 20,1 g (27,7 ml, 199 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 13,9 g (10,8 ml, 109 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo 25 [racemato], y la solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA, se agito durante toda la noche y a continuacion se concentro a vacte. Se agrego solucion cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N al residuo y se extrajo con acetato de etilo. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacte. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 24,3 g (88 % d. t., pureza: 92 %, relacion diastereomerica aprox. 1:1).
30 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,80 min (diastereomero 1), Tr = 0,84 min (diastereomero 2);
EM (lEPpos): m/z = 256 [M+H]+.
Ejemplo 23A
O ^CH,
vv'\
h3c n ^o
Inicialmente se cargaron 30,0 g (109 mmol, pureza: 93 %) de W-bencil-2-cloro-A/-[(2R)-1-hidroxipropan-2- il]propanamida [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en /so-propanol (588 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 49,0 g (436 mmol) de ferc-butilato de potasio. La solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA y se agito durante 5 toda la noche. La mayor parte del /so-propanol se elimino a vado y el residuo se recogio en agua. Se extrajo con acetato de etilo, las fases organicas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 22,8 g (93 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,85 min; EM (lEPpos): m/z = 220 [M+H]+.
Ejemplo 24A
10 (5R)-4-Bencil-2,5-dimetilmorfolina [isomeros enantiomericamente puros 1+2]
O CH3
vo''\ s'
h3c n
Inicialmente se cargaron 27,0 g (123 mmol) de (5R)-4-bencil-2,5-dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (400 ml), se agregaron 184 ml (369 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetil en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 2 h. La mezcla se enfrio 15 posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (200 ml) cuidadosamente y se agito a reflujo durante 2 h. Posteriormente la mezcla se concentro completamente a vado, el residuo se recogio en acetonitrilo y se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua, isocratico) y se separo en los diastereomeros. Esto dio 2,60 g (10 % d. t.) del diastereomero 1 enantiomericamente puro que eluye primero, y 9,00 g (35 % d. t.) del diastereomero 2 enantiomericamente puro que eluye mas tarde.
20 Isomero 1 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 6A): Tr = 2,30 min; EM (lEPpos): m/z = 206 [M+H]+;
Isomero 2 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 6A): Tr = 2,46 min; EM (IEPpos): m/z = 206 [M+H]+.
Ejemplo 25A
25 Clorhidrato de (5R)-2,5-dimetilmorfolina [isomero 1 enantiomericamente puro]
O CH3
3 H xHCl
Inicialmente se cargaron 2,60 g (12,7 mmol) de (5R)-4-bencil-2,5-dimetilmorfolina (ejemplo 24A, isomero 1 enantiomericamente puro) en etanol (127 ml) y se agrego solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 2 N (10,0 ml). Bajo argon se agregaron 363 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 181 mg de hidroxido de paladio sobre carbon
5
10
15
20
25
30
(al 20 %) y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con etanol. Se concentro a vado y el producto deseado se seco a alto vado. Rendimiento: 2,35 g (cuant.).
EM (procedimiento 1C): m/z = 116 [M+H-HCl]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 9,80-9,34 (m. a., 2H), 3,94-3,71 (m, 2H), 3,48-3,38 (m, 1H), 3,23-3,11 (d, 2H), 2,66 (q. a., 1H), 1,15 (d, 3H), 1,11 (d, 3H).
Ejemplo 26A
Clorhidrato de (5R)-2,5-dimetilmorfolina [isomero 2 enantiomericamente puro]
O
h3c^n^
3 H xHCl
Inicialmente se cargaron 9,00 g (43,8 mmol) de (5R)-4-bencil-2,5-dimetilmorfolina (ejemplo 24A, isomero 2 enantiomericamente puro) en etanol (441 ml) y se agrego solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 2 N (40,0 ml). Bajo argon se agregaron 1,26 g de paladio sobre carbon (al 10 %) y 628 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con etanol. Se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 7,83 g (cuant.).
EM (procedimiento 1C): m/z = 116 [M+H-HCl]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,97 (s. a., 1H), 9,43 (s. a., 1H), 3,90-3,71 (m, 2H), 3,62 (d, 1H), 3,40 (d, 1H), 3,06-2,91 (m, 1H), 2,89-2,71 (m, 1H), 1,32 (d, 3H), 1,14 (d, 3H).
Ejemplo 27A
(5R)-2-Alil-4-bencil-2,5-dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
CH
'/
2
,O„/
-CH,
h3c"'Vn^o
Inicialmente se cargaron 22,8 g (104 mmol) de (5R)-4-bencil-2,5-dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (1,34 l), bajo argon y a -78 °C se agregaron 146 ml (146 mmol) de solucion de hexametildisilazida de litio en terahidrofurano y se agito durante 15 min. A -78 °C se agregaron posteriormente 21,0 g (11,4 ml, 125 mmol) de yoduro de alilo, la mezcla de reaccion se dejo calentar hasta TA y se agito durante 3 horas. La reaccion se termino por la adicion de solucion de cloruro de hidrogeno acuoso saturado y a continuacion se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se lavo con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 27,5 g (77 % d. t., pureza: 75 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,99 min; EM (lEPpos): m/z = 260 [M+H]+.
Ejemplo 28A
H3C
imagen82
Inicialmente se cargaron 27,4 g (79,9 mmol, pureza: 75 %) de (5R)-2-alil-4-bencil-2,5-dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (620 ml) y agua (370 ml) y se agregaron 4,35 ml (1,60 mmol) de una solucion al 2,5 % de tetroxido de osmio en ferc-butanol y 51,2 g (240 mmol) de peryodato de sodio a 0 °C. La 5 solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA y se agito durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo de filtrado se lavo con tetrahidrofurano. Se concentro a vacfo y el residuo se recogio en acetato de etilo y agua. Despues de la separacion de las fases, la fase organica se lavo con solucion de sulfito de sodio acuoso 1 N (2 x 400 ml), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 23,6 g de producto bruto.
10 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,81 min (diastereomero 1), Tr = 0,84 min (diastereomero 2);
EM (lEPpos): m/z = 262 [M+H]+.
Ejemplo 29A
(5R)-4-Bencil-2-(2-hidroxietil)-2,5-dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
OH
imagen83
15 Inicialmente se cargaron 7,00 g (aproximadamente 26,8 mmol, producto bruto) de [(5R)-4-bencil-2,5-dimetil-3- oxomorfolin-2-il]acetaldel'ndo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en metanol (200 ml) y se agregaron 3,04 g (80,4 mmol) de borohidruro de sodio a 0 °C. La solucion de reaccion se dejo calentar hasta tA y se agito durante 30 min. Posteriormente se agrego agua a la solucion de reaccion, se elimino la mayor parte de metanol a vado y el residuo se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El 20 producto bruto se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 6,82 g (70 % d. t., pureza: 73 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,71 min; EM (lEPpos): m/z = 264 [M+H]+.
Ejemplo 30A
5
10
15
20
25
OH
imagen84
CH3
H3C ' "N
Inicialmente se cargaron 6,80 g (18,9 mmol, pureza: 73 %) de (5R)-4-bencil-2-(2-hidroxietil)-2,5-dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (191 ml), se agregaron 37,7 ml (75,4 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 2 h. Se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (37 ml) cuidadosamente y la mezcla se agito a reflujo durante 30 min. Se concentro completamente a vado, el residuo se recogio en acetonitrilo y se sometio directamente a purificacion y separacion diastereomerica por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua, isocratico). El isomero 1 enantiomericamente puro fue el primer compuesto que eluyo. Rendimiento: 1,34 g (28 % d. t., isomero 1 enantiomericamente puro). El isomero 2 enantiomericamente puro fue el segundo compuesto que eluyo. Rendimiento: 2,28 g (47 % d. t., isomero 2 enantiomericamente puro).
Isomero 1 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,55 min; EM (lEPpos): m/z = 250 [M+H]+;
Isomero 2 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,64 min; EM (lEPpos): m/z = 250 [M+H]+.
Ejemplo 31A
2-[(5R)-2,5-dimetilmorfolin-2-il]etanol [isomero enantiomericamente puro]
OH
H3C
imagen85
CH
Inicialmente se cargaron 2,25 g (9,02 mmol) de 2-[(5R)-4-bencil-2,5-dimetilmorfolin-2-il)etanol [isomero 2 enantiomericamente puro] del ejemplo 30A en etanol (90,7 ml), se agregaron 227 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 113 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con etanol. Se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 1,46 g (cuant.).
EM (IEPpos): m/z = 160 [M+H]+.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 4,21 (t, 1H), 3,53-3,44 (d, 2H), 3,34 (dd, 1H), 3,14 (t, 1H), 2,65-2,52 (m, 3H), 2,07 (s. a., 1H), 1,52 (td, 2H), 1,18 (s, 3H), 0,85 (d, 3H).
Ejemplo 32A
5
10
15
20
25
H3C
OH
H3C (
'O^/_
CH
'"^n^o
3
Inicialmente se cargaron 16,8 g (aprox. 64,3 mmol, producto bruto) de [(5R)-4-bencil-2,5-dimetil-3-oxomorfolin-2- il]acetaldel"ndo [ejemplo 28A, mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (275 ml) y se agregaron 77,2 ml (77,2 mmol) de una solucion 1 M de bromuro de metilmagnesio en tetrahidrofurano a -78 °C. Se agito a -78 °C durante 15 min y luego se dejo calentar hasta TA. Posteriormente se agrego cuidadosamente solucion de cloruro de amonio acuoso saturado (400 ml) a la solucion de reaccion, se elimino la mayona del tetrahidrofurano a vado y el residuo se recogio en diclorometano. Despues de la separacion de las fases, la fase organica se lavo con agua, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 16,2 g de producto bruto.
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,78, 0,80 min; EM (lEPpos): m/z = 278 [M+H]+.
Ejemplo 33A
1-[(5R)-4-Bencil-2,5-dimetilmorfolin-2-il]propan-2-ol [isomeros enantiomericamente puros 1+2+3+4]
H3C
OH
H3C (
'O^/_
CH
'N
3
Inicialmente se cargaron 16,2 g (aprox. 39,1 mmol, producto bruto) de (5R)-4-bencil-2-(2-hidroxipropil)-2,5- dimetilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en tetrahidrofurano (397 ml), se agregaron 78,3 ml (157 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 2 h. La mezcla se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (80 ml) cuidadosamente y se agito a reflujo durante 30 min. Posteriormente se concentro completamente a vado, el residuo se recogio en acetonitrilo y se sometio directamente a purificacion y separacion diastereomerica por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua, isocratico). Aqrn, el compuesto objetivo eluyo como tercer componente. Rendimiento: Compuesto objetivo: 3,11 g (29 % d. t.; isomero 3 enantiomericamente puro); isomero 1 enantiomericamente puro: 2,12 g (20 % d. t.); isomero 2 enantiomericamente puro: 506 mg (5 % d. t.); isomero 4 enantiomericamente puro: 1,72 g (16 % d. t.).
Isomero 3 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,39 min; EM (lEPpos): m/z = 264 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,34-7,18 (m, 5H), 4,10 (d, 1H), 3,96 (d, 1H), 3,79 (mc, 1H), 3,48 (dd, 1H), 3,36 (mc, 1H), 3,04 (d, 1H), 2,46 (d, 1H), 2,28 (mc, 1H), 1,88 (d, 1H), 1,44 (dd, 1H), 1,36 (dd, 1H), 1,23 (s, 3H), 1,01 (d, 3H), 0,98 (d, 3H).
Isomero 1 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,43 min; EM (lEPpos): m/z = 264 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 5 [ppm] = 7,33-7,18 (m, 5H), 4,16 (d, 1H), 3,90 (d, 1H), 3,76 (m6 1H), 3,50 (dd, 1H), 3,26 (dd, 1H), 3,10 (d, 1H), 2,43 (d, 1H), 2,32 (mc, 1H), 2,10 (dd, 1H), 1,84 (d, 1H), 1,27 (dd, 1H), 1,09-1,06 (m, 6H), 0,98 (d, 3H).
Isomero 2 enantiomericamente puro:
5 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,45 min; EM (lEPpos): m/z = 264 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 7,32-7,20 (m, 5H), 4,11 (d, 1H), 3,92 (d, 1H), 3,57 (mc, 1H), 3,51 (dd, 1H), 3,41 (dd, 1H), 3,06 (d, 1H), 2,47 (d, 1H), 2,34 (mc, 1H), 1,85-1,74 (m, 2H), 1,59 (dd, 1H), 1,06 (s, 3H), 1,03-0,97 (t, 6H).
Isomero 4 enantiomericamente puro:
10 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,44 min; EM (lEPpos): m/z = 264 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 7,49 (s, 5H), 4,69 (d, 1H), 4,28-4,15 (m, 2H), 3,86-3,73 (m, 3H), 3,63 (t, 1H), 3,32 (t, 1H), 3,21 (s. a., 1H), 2,84 (d, 1H), 1,52-1,38 (m, 4H), 1,28 (s, 3H), 1,01 (d, 3H).
Ejemplo 34A
1-[(5R)-2,5-Dimetilmorfolin-2-il]propan-2-ol [isomero enantiomericamente puro]
15
OH
imagen86
CH
3
Inicialmente se cargaron 3,10 g (11,8 mmol) de 1-[(5R)-4-bencil-2,5-dimetilmorfolin-2-il]propan-2-ol [ejemplo 33A, isomero 3 enantiomericamente puro] en etanol (118 ml), se agregaron 296 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 148 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y 20 el residuo filtrado se lavo con etanol caliente (100 ml). Se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 2,06 g (cuant.).
CG-EM (Procedimiento 1B): Tr = 3,86 min; EM (lEPpos): m/z = 173 [M]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 4,20 (d, 1H), 3,87 (s. a., 1H), 3,35 (dd, 1H), 3,16 (t, 1H), 2,67-2,53 (m, 3H), 2,05 (s. a., 1H), 1,44 (dd, 1H), 1,36 (dd, 1H), 1,23 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 0,85 (d, 3H).
25 Ejemplo 35A
W-Bencil-2-cloro-W-(1,4-dihidroxibutan-2-il]propanamida [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
Ha Cl^.CH3
HO'
Inicialmente se cargaron 20,6 g (106 mmol) de 2-(bencilamino)butano-1,4-diol [racemato] [bibl.: B. L. Feringa, B. de Lange, Heterocycles 1988, 27, 1197-1205] en /so-propanol (500 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 21,4 g (29,4 30 ml, 211 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 16,1 g (12,6 ml, 127 mmol) de cloruro de 2- cloropropionilo [racemato]. Despues de 30 min de agitacion, se agregaron gota a gota otros 10,4 g (8,37 ml, 84,4 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo [racemato] y la solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA y se concentro a continuacion a vado. El residuo se recogio en acetato de etilo (500 ml) y se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N (400 ml). La fase acuosa se extrajo de forma repetida con acetato de etilo. Las fases 35 organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 37,5 g (78 % d. t., pureza: 63 %, relacion diastereomerica
5
10
15
20
25
30
aprox. 2:1).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,71 min (diastereomero 1, 2 isomeros), Tr = 0,72 min (diastereomero 2, 2 isomeros);
EM (IEPpos): m/z = 286 [M+H]+.
Ejemplo 36A
4-Bencil-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
imagen87
CH3
HO'
Inicialmente se cargaron 37,5 g (82,5 mmol, pureza: 63 %) de W-bencil-2-cloro-W-(1,4-dihidroxibutan-2- il]propanamida [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en /so-propanol (500 ml) y se enfrio hasta 0 °C. Posteriormente se agregaron 73,5 g (655 mmol) de ferc-butilato de potasio en una porcion y se agito a 0 °C durante 1 h. La mayor parte del /so-propanol se elimino a vado, el residuo se recogio en acetato de etilo y se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 1 N (400 ml). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 28,8 g (cuant., pureza: 82 %, relacion diastereomerica aprox. 2,5:1).
CL-EM (procedimiento 7A): Tr = 1,42 min (diastereomero 1, 2 isomeros), Tr = 1,46 min (diastereomero 2, 2 isomeros);
EM (IEPpos): m/z = 250 [M+H]+.
Ejemplo 37A
2-(4-Bencil-6-metilmorfolin-3-il)etanol [racemato]
imagen88
CH3
HO
imagen89
Inicialmente se cargaron 28,8 g (94,7 mmol, pureza: 82 %) de 4-bencil-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en tetrahidrofurano (800 ml), se agregaron 231 ml (462 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y a continuacion se agito a reflujo durante 2 h. La mezcla se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (220 ml) cuidadosamente y se agito a reflujo durante 30 min. Se concentro a continuacion completamente a vado, se recogieron 6,0 g del residuo en acetonitrilo y se sometio a purificacion y separacion diastereomerica por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua, isocratico). En este caso, el compuesto objetivo eluyo como segundo componente (diastereomero 2, 2 isomeros). Rendimiento: Diastereomero 2 (2 isomeros): 1,95 g; Diastereomero 1 (2 isomeros): 698 mg.
Diastereomero 2 (2 isomeros):
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,33 min; EM (IEPpos): m/z = 236 [M+H]+;
Diastereomero 1 (2 isomeros):
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,23 min; EM (IEPpos): m/z = 236 [M+H]+.
5
10
15
20
25
30
2-(6-Metilmorfolin-3-il)etanol [racemato]
imagen90
CH3
HO
imagen91
Inicialmente se cargaron 1,95 g (8,29 mmol) de 2-(4-bencil-6-metilmorfolin-3-il)etanol [diastereomero 2, 2 isomeros del ejemplo 37A] en etanol (83 ml), se agregaron 208 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 104 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con etanol. Se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 1,37 g (cuant.).
EM (lEPpos): m/z = 146 [M+H]+.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 3,53-3,41 (m, 5H), 2,69 (mc, 1H), 2,60-2,43 (m, 2H), 1,82-1,69 (m, 1H), 1,58-1,44 (m, 1H), 1,03 (d, 3H), dos protones no visibles.
Ejemplo 39A
N-Bencil-2-cloro-W-[(2S)-1,4-dihidroxibutan-2-il]propanamida [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
Ha Ck XH,
HO
Inicialmente se cargaron 45,1 g (199 mmol, pureza: 86 %) (2S)-2-(bencilamino)butano-1,4-diol [F. Horiuchi, M. Matsui, Agr. Biol. Chem. 1973, 37, 1713-1716] en /so-propanol (1,00 l), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 40,2 g (55,4 ml, 397 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 37,8 g (29,6 ml, 298 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo [racemato]. Despues de 30 min de agitacion, se agregaron gota a gota otros 18,9 g (14,8 ml, 149 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo [racemato] y la solucion de reaccion se dejo enfriar hasta TA y se concentro a continuacion a vado. El residuo se recogio en acetato de etilo (1,00 l) y se lavo con agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 71,8 g (cuant., pureza: 82 %, relacion diastereomerica aprox. 1:1). CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,65 min (isomero 1 enantiomericamente puro), Tr = 0,67 min (isomero 2 enantiomericamente puro);
EM (lEPpos): m/z = 286 [M+H]+.
Ejemplo 40A
(5S)-4-Bencil-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
O CH3
HO
N
O
Inicialmente se cargaron 71,8 g (206 mmol, pureza: 82 %) de W-bencil-2-cloro-W-[(2S)-(1,4-dihidroxibutan-2- il]propanamida [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en /so-propanol (1,30 l), y la mezcla se enfrio hasta 0 °C. Posteriormente se agregaron 92,4 g (824 mmol) de ferc-butilato de potasio en una porcion, se agito a 0 °C durante 30 min. La solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA y el /so-propanol se elimino a vado. El residuo se recogio en acetato de etilo (500 ml). Se agrego agua (600 ml), se extrajo y, despues de la separacion de las fases, la fase
acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 ml). Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 58,6 g (cuant., pureza: 90 %, relacion diastereomerica aprox. 3:2).
CL-EM (procedimiento 3A): Tr = 1,51 min (isomero 1 enantiomericamente puro), Tr = 1,53 min (isomero 2 5 enantiomericamente puro);
EM (lEPpos): m/z = 250 [M+H]+.
Ejemplo 41A
2-[(3S)-4-Bencil-6-metilmorfolin-3-il]etanol [isomero enantiomericamente puro]
HO'
*N'
,CH,
imagen92
10 Inicialmente se cargaron 30,0 g (108 mmol) de (5S)-4-bencil-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (1,10 l), se agregaron 217 ml (433 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 2 h. La mezcla se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (200 ml) cuidadosamente y se agito a reflujo durante 30 min. Posteriormente se concentro completamente a vado, el residuo se recogio en acetonitrilo y se sometio a purificacion 15 y separacion diastereomerica por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua, isocratico). En este caso, el compuesto objetivo eluyo como segundo componente (isomero 2 enantiomericamente puro). Rendimiento: isomero 2 enantiomericamente puro: 12,1 g (47 % d. t.); isomero 1 enantiomericamente puro: 6,23 g (24 % d. t.).
Isomero 2 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,33 min; EM (lEPpos): m/z = 236 [M+H]+;
20 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,36-7,18 (m, 5H), 4,42 (t, 1H), 3,69-3,35 (m, 7H), 2,65-2,56 (m,
1H), 2,36-2,29 (m, 1H), 2,26-2,16 (m, 1H), 1,81-1,65 (m, 2H), 1,00 (d, 3H).
Isomero 1 enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,23 min; EM (lEPpos): m/z = 236 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO- d6): 8 [ppm] = 7,37-7,19 (m, 5H), 4,49 (t, 1H), 4,10 (d, 1H), 3,76 (dd, 1H), 3,5825 3,38 (m, 3H), 3,33-3,20 (m, 1H), 2,95 (d, 1H), 2,27 (mc, 1H), 1,80 (mc, 1H), 1,68 (dd, 1H), 1,48 (mc, 1H), 0,94
(d, 3H).
Ejemplo 42A
2-[(3S)-6-Metilmorfolin-3-il]etanol [isomero enantiomericamente puro]
HO
O
N
H
CH
30 Inicialmente se cargaron 58,0 g (246 mmol) de 2-[(3S)-4-bencil-6-metilmorfolin-3-il]etanol [isomero 2 enantiomericamente puro], ejemplo 41A (la cantidad de sustancia usada procede de varias reacciones de manera analoga al ejemplo 41A)] en etanol (1,50 l), se agregaron 2,90 g de paladio sobre carbon (al 10 %) y 2,90 g de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo 35 filtrado se lavo con etanol caliente (100 ml). Se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 35,5 g (99 % d. t).
Rotacion optica: = 89,7 0 (c = 0,565, cloroformo);
CL-EM (procedimiento 5A): Tr = 0,54 min; EM (lEPpos): m/z = 146 [M+H]+;
CL-EM (procedimiento 1A): EM (lEPpos): m/z = 146 [M+H]+;
5
10
15
20
25
RMN de 1H (400 MHz, CDCI3): 5 [ppm] = 3,88-3,80 (m, 2H), 3,71 (d. a., 1H), 3,63 (d. a., 1H), 3,50 (mc, 1H), 3,12 (s. a., 2H), 2,94 (mc, 1H), 2,81 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,39-2,25 (m, 1H), 1,45 (mc, 1H), 1,15 (d, 3H).
Ejemplo 43A
[3-(Benciloxi)ciclobutiliden][(terc-butoxicarbonil)amino]acetato de metilo
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imagen94
O-
'CH,
Inicialmente se cargaron 928 mg (3,12 mmol) de [(terc-butoxicarbonil)amino](dimetoxifosforil)acetato de metilo [racemato] y 500 mg (2,84 mmol) de 3-(benciloxi)ciclobutanona [K. Ogura, G. Tsuchihashi et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 1984, 57, 1637-1642] en diclorometano (50 ml), se agregaron 605 mg (0,590 ml, 3,97) de 1,8- diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno a TA y se agito posteriormente durante toda la noche. La solucion de reaccion se concentro a vado y el residuo se recogio en acetato de etilo. La fase organica se lavo con agua, solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N, solucion de cloruro de bicarbonato de sodio acuoso saturado y solucion de cloruro de sodio acuoso saturado, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vacfo. El residuo se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 651 mg (60 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,15 min; EM (lEPpos): m/z = 348 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 8,11 (s. a., 1H), 7,41-7,25 (m, 5H), 4,42 (s, 2H), 4,13 (quin, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,25 (d. a., 1H), 2,99 (d. a., 1H), 2,85 (d. a., 1H), 2,65 (m, 1H), 1,37 (s, 9H).
Ejemplo 44A
[3-(Benciloxi)ciclobutil][(terc-butoxicarbonil)amino]acetato de metilo [mezcla isomerica cis y trans, 4 isomeros]
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imagen96
O
CH
Inicialmente se cargaron 650 mg (1,87 mmol) de [3-(benciloxi)ciclobutiliden][(terc-butoxicarbonil)amino]acetato de metilo y 455 mg (18,7 mmol) de virutas de magnesio en metanol (50 ml) y se hizo reaccionar a TA en un bano ultrasonico [Elma, Transsonic T 780] durante 3 horas. Se agrego solucion de cloruro de amonio acuoso semisaturado a la solucion de reaccion y se extrajo de forma repetida con diclorometano. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacfo. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 630 mg (96 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,16 min; EM (lEPpos): m/z = 350 [M+H]+, 250 [M+H-COOC(CH3)3];
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 5 [ppm] = 7,39-7,20 (m, 6H), 4,34 (s, 2H), 4,07 (quin, 0,3H), 3,99-3,73 (m, 1,7 H),
3,60 (s, 3H), 2,34-1,94 (m, 3,5H), 1,74-1,59 (m, 1,5H), 1,45-1,27 (m, 9H).
Ejemplo 45A
{1-[3-(Benciloxi)ciclobutil]-2-hidroxietil}carbamato de terc-butilo [mezcla isomerica cis y trans, 4 isomeros]
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OH
5 Inicialmente se cargaron 620 mg (1,77 mmol) de [3-(benciloxi)ciclobutil][(terc-butoxicarbonil)amino]acetato de metilo [mezcla isomerica cis y trans, 4 isomeros] en tetrahidrofurano (6,0 ml) y se agregaron 4,44 ml (8,87 mmol) de solucion 2 M de borohidruro de litio en tetrahidrofurano a 0 °C. Se agito posteriormente durante 4 h y se dejo calentar hasta TA durante este tiempo. La reaccion se termino adicionando acetato de etilo (50,0 ml) y la solucion de reaccion se lavo posteriormente con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N. La fase organica se seco sobre 10 sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 560 mg (96 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,99 min; EM (lEPpos): m/z = 322 [M+H]+, 222 [M+H-Boc];
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,47-7,15 (m, 5H), 6,65-6,41 (m, 1H), 4,46 (s. a., 0,5H), 4,33 (s, 2H), 3,88-3,70 (m, 0,7H), 3,67-3,09 (m, 3,8H), 2,36-1,78 (m, 3,5H), 1,74-1,48 (m, 1,5H), 1,38 (s, 9H).
15 Ejemplo 46A
Trifluoroacetato de 2-amino-2-[3-(benciloxi)ciclobutil]etanol [mezcla isomerica cis y trans, 4 isomeros]
O
imagen99
Inicialmente se cargaron 560 mg (1,74 mmol) de {1-[3-(benciloxi)ciclobutil]-2-hidroxietil}carbamato de terc-butilo [mezcla isomerica cis y trans, 4 isomeros] en diclorometano (8,0 ml), se agrego 1,0 ml (12,9 mmol) de acido 20 trifluoroacetico a TA y se agito durante 2 h. La solucion de reaccion se concentro completamente a vacfo y el exceso de acido trifluoroacetico se elimino por coevaporacion repetida con diclorometano. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 580 mg (95 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,10 min; EM (lEPpos): m/z = 222 [M+H-TFA]+.
5
10
15
20
25
Cl
CH
3
imagen100
Inicialmente se cargaron 580 mg (1,73 mmol) de trifluoroacetato de 2-amino-2-[3-(benciloxi)ciclobutil]etanol [mezcla isomerica cis y trans, 4 isomeros] en /so-propanol (15 ml), la mezcla se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 700 mg (960 |jl, 6,92 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 242 mg (190 jl, 1,90 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo [racemato], se agito a 0 °C durante 1 h y luego se concentro completamente a vado. Se agrego solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N (50 ml) al residuo y se extrajo de forma repetida con diclorometano. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 638 mg (91 % d. t., pureza 77 %).
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,36 min; EM (lEPpos): m/z = 312 [M+H]+.
Ejemplo 48A
5-[3-(Benciloxi)ciclobutil]-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 8 isomeros]
O
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CH3
Inicialmente se cargaron 1,15 g (3,69 mmol) de W-{1-[3-(benciloxi)ciclobutil]-2-hidroxietil}-2-cloropropanamida [mezcla diastereomerica, 8 isomeros] en iso-propanol (30,0 ml), se enfrio hasta 0 °C y a continuacion se agregaron 1,66 g (14,8 mmol) de terc-butilato de potasio en una porcion. Se dejo calentar hasta Ta y posteriormente se agito a 50 °C durante 1 h. La mayona del iso-propanol se elimino a vado y el residuo se recogio en acetato de etilo. La fase organica se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 1 N, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El residuo se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 953 mg (93 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,88 min; EM (lEPpos): m/z = 276 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, CDCla): 8 [ppm] = 7,43-7,27 (m, 5H), 6,40 (s. a., 0,16H), 6,24 (s. a., 0,38H), 6,12-5,94 (m, 0,46H), 4,41 (s, 2H), 4,24-4,05 (m, 1,25H), 4,03-3,86 (m, 1,25H), 3,82-3,51 (m, 1,5H), 3,31-3,21 (m, 1H), 2,54-1,57 (m, 5H), 1,48-1,41 (m, 3H).
y\
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CH3
Inicialmente se cargaron 953 mg (3,46 mmol) de 5-[3-(benciloxi)ciclobutil]-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla 5 diastereomerica, 8 isomeros] en tetrahidrofurano (10 ml), se agregaron 6,92 ml (13,8 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 3 h. A continuacion, la solucion de reaccion se agrego cuidadosamente gota a gota a etanol (50,0 ml) y se agito a reflujo durante 8 h. Posteriormente la mezcla se concentro a vado, el residuo se recogio en acetonitrilo y se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 780 mg (84 % d. t.).
10 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,57, 0,60 min; EM (lEPpos): m/z = 262 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,39-7,24 (m, 5H), 4,37-4,31 (m, 2H), 4,11-3,98 (m, 0,3H), 3,92-3,78 (m, 0,7H), 3,72-3,54 (m, 0,5H), 3,50-3,40 (m, 1,5H), 2,94-2,70 (m, 1H), 2,61 (td, 0,3H), 2,48-1,82 (m, 5,7H), 1,73-1,40 (m, 2H), 1,06-0,94 (m, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 50A
15 5-[3-(Benciloxi)ciclobutil]-2-metilmorfolin-4-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
imagen103
Inicialmente se cargaron 900 mg (3,44 mmol) de 5-[3-(benciloxi)ciclobutil]-2-metilmorfolina [mezcla diastereomerica, 8 isomeros] y 890 mg (1,20 ml, 6,89 mmol) de W,W-diisopropiletilamina en diclorometano (45,0 ml), se agregaron gota a gota 881 mg (0,74 ml, 5,17 mmol) de cloroformiato de bencilo a 0 °C y se agito durante toda la noche y se
20 dejo calentar hasta TA durante este tiempo. La solucion de reaccion se concentro a vacfo y el residuo se recogio en acetonitrilo. La purificacion y separacion diastereomerica por RP-HPLC sobre una fase aquiral (acetonitrilo/agua) dio 537 mg (36 % d. t.) del compuesto objetivo del ejemplo 50A (mezcla diastereomerica, 4 isomeros) y 588 mg (43 % d. t.) del compuesto objetivo del ejemplo 51A (mezcla diastereomerica, 4 isomeros).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,26 min; EM (lEPpos): m/z = 396 [M+H]+;
25 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,41-7,24 (m, 10H), 5,22-5,01 (m, 2H), 4,33-4,26 (m, 2H), 4,09-3,66 (m, 4H), 3,51 (d, 1H), 3,29-3,10 (m, 2H), 2,82 (s. a., 0,3H), 2,48-1,79 (m, 3,3H), 1,69-1,52 (m, 1,4H), 1,14-1,07 (m, 3H).
imagen104
Inicialmente se cargaron 900 mg (3,44 mmol) de 5-[3-(benciloxi)ciclobutil]-2-metilmorfolina [mezcla diastereomerica, 5 8 isomeros] y 890 mg (1,20 ml, 6,89 mmol) de W,W-diisopropiletilamina en diclorometano (45,0 ml), se agregaron
gota a gota 881 mg (0,74 ml, 5,17 mmol) de cloroformiato de bencilo a 0 °C y se agito durante toda la noche y se dejo calentar hasta TA durante este tiempo. La solucion de reaccion se concentro a vado y el residuo se recogio en acetonitrilo. La purificacion y separacion diastereomerica por RP-HPLC sobre una fase aquiral (acetonitrilo/agua) dio 537 mg (36 % d. t.) del compuesto objetivo del ejemplo 50a (mezcla diastereomerica, 4 isomeros) y 588 mg (43 % d. 10 t.) del compuesto objetivo del ejemplo 51A (mezcla diastereomerica, 4 isomeros).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,29 min; EM (lEPpos): m/z = 396 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,44-7,22 (m, 10H), 5,20-4,98 (m, 2H), 4,36-4,20 (m, 2H), 4,14-3,34 (m, 6H), 2,88-2,57 (m, 1,5H), 2,44-1,53 (m, 4,5H), 1,10-1,03 (m, 3H).
Ejemplo 52A
15 3-(6-Metilmorfolin-3-il)ciclobutanol [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
imagen105
3
Inicialmente se cargaron 580 mg (1,47 mmol) de 5-[3-(benciloxi)ciclobutil]-2-metilmorfolin-4-carboxilato de bencilo [ejemplo 51A, mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en etanol (100 ml), se agregaron 58 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 58 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una 20 atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con etanol. El filtrado se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 245 mg (97 % d. t.).
CG-EM (Procedimiento 1B): Tr = 4,60, 4,67 min; EM (lEPpos): m/z = 171 [M]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 4,94-4,84 (m, 1H), 4,16-4,05 (d, 0,6H), 3,93-3,82 (m, 0,7H), 3,55-3,40 25 (m, 3,3H), 3,19-3,14 (m, 0,7H), 3,17 (d, 1H), 2,47-1,76 (m, 6H), 1,58-1,28 (m, 1,5H), 1,08-0,94 (m, 3,5H).
5
10
15
20
25
30
35
i2 /
O
I) Inicialmente se cargaron 5,00 g (20,3 mmol) de 2-(benciloxi)-5,7-diazaespiro[3,4]octano-6,8-diona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros, cis/trans aproximadamente 4:1; T. M. Shoup, M. M. Goodman, J. Labelled. Cpd. Radiopharm. 1999, 42, 215-225; documento US2006/292073 A1] en agua (100 ml) y se agregaron 32,0 g (102 mmol) de hidroxido de bario octahidratado. En siete porciones, la suspension se agito en el microondas (sintetizador Biotage), en cada caso durante 1,5 h a 140 °C. Las suspensiones se combinaron y se ajustaron hasta pH de aprox. 4 usando una solucion de acido sulfurico acuoso 6 N. El solido precipitado se filtro a vacfo, el filtrado se concentro posteriormente a vado y el solido obtenido se seco a alto vado. Esto dio 6,2 g del producto bruto.
II) Se agregaron gota a gota 21,3 g (24,9 ml, 196 mmol) de clorotrimetilsilano a 49,1 ml de una solucion 2 M de borohidruro de litio en tetrahidrofurano (98,2 mmol). La suspension obtenida se enfrio hasta 0 °C y posteriormente se agregaron 5,43 g del producto bruto de I) en porciones. Se dejo calentar hasta TA y entonces se agito a TA durante toda la noche. La reaccion se termino por la adicion gota a gota de metanol (15 ml) y la solucion de reaccion se concentro posteriormente a vado. El residuo se recogio en acetato de etilo y se lavo con solucion de hidroxido de sodio acuoso 2 N. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo, y las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 3,76 g (producto bruto).
CL-EM (procedimiento 4A): Tr = 2,10 min; EM (IEPpos): m/z = 208 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,39-7,22 (m, 5H), 4,66 (s. a., 1H), 4,32 (s, 2H), 4,15 (quin, 0,2H), 3,70 (quin, 0,8H), 3,22-3,14 (m, 2H), 2,34-2,26 (m, 2H), 1,91-1,74 (m, 2H), 1,72-1,61 (m, 2H).
Ejemplo 54A
[3-(Benciloxi)-1-(hidroximetil)ciclobutil]carbamato de terc-butilo [isomero cis y trans enantiomericamente puro]
CH
H3CA
O CH
X
^ nh oh
J
O
Inicialmente se cargaron 3,76 g (18,1 mmol) de [1-amino-3-(benciloxi)ciclobutil]metanol [mezcla diastereomerica, 2 isomeros, cis/trans aprox. 4:1 en diclorometano (150 ml), se agregaron 4,36 g (20,0 mmol) de dicarbonato de di-terc- butilo y 3,86 g (5,31 ml, 38,1 mmol) de trietilamina a TA y se agito a TA durante toda la noche. Posteriormente la mezcla se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N, solucion de cloruro de bicarbonato de sodio acuoso saturado y agua, la fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto (6,4 g) se purifico por RP-HPLC preparativa (procedimiento 1G) y se separo en los diastereomeros. Aqrn, el principal diastereomero que eluye mas rapidamente fue el isomero cis, y el menor diastereomero que eluye mas lento fue el isomero trans. Rendimiento: 3,45 g (61 % d. t., isomero cis enantiomericamente puro); 690 mg (12 % d. t., isomero trans enantiomericamente puro).
Diastereomero cis enantiomericamente puro:
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 2,00 min; EM (IEPpos): m/z = 308 [M+H]+;
5
10
15
20
25
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 2,02 min; EM (lEPpos): m/z = 308 [M+H]+;
Ejemplo 55A
Clorhidrato de [c/s-1-amino-3-(benciloxi)ciclobutil]metanol [isomero cis enantiomericamente puro]
xHCl
i2 /
imagen106
Inicialmente se cargaron 3,45 g (11,2 mmol) de [c/s-3-(benciloxi)-1-(hidroximetil)ciclobutil]carbamato de ferc-butilo [isomero c/s enantiomericamente puro del ejemplo 54A] en 1,4-dioxano (30 ml), se agregaron 11,2 ml de una solucion de cloruro de hidrogeno 4 N en 1,4-dioxano/agua a TA y se agito a TA durante 20 horas. Se concentro posteriormente a vacfo y el residuo se seco a alto vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 2,81 g (cuant.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,40 min; EM (lEPpos): m/z = 208 [M+H-HCl]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,24 (s. a., 3H), 7,43-7,25 (m, 5H), 5,54 (s. a., 1H), 4,39 (s, 2H), 3,90 (quin, 1H), 3,46 (d. a., 2H), 2,42 (mc, 2H), 2,12 (mc, 2H).
Ejemplo 56A
N-[c/s-3-(Benciloxi)-1-(hidroximetil)ciclobutil]-2-cloropropanamida [racemato]
H3C\^Cl
O' NH
O
OH
/
Inicialmente se cargaron 2,81 g (11,5 mmol) de clorhidrato [c/s-1-amino-3-(benciloxi)ciclobutil]metanol [isomero c/s enantiomericamente puro] en /so-propanol (70,0 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 4,67 g (6,43 ml, 46,1 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 1,61 g (1,26 ml, 12,7 mmol) de cloruro de 2-cloropropionilo [racemato]. La solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA, se agito durante 1 h y posteriormente se concentro la solucion de reaccion a vado. El residuo se recogio en diclorometano y se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno 1 N acuoso. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 3,38 g (97 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,85 min; EM (lEPpos): m/z = 298 [M+H]+.
c/s-2-(Benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-6-ona [racemate]
imagen107
Inicialmente se cargaron 3,38 g (11,4 mmol) de N-[c/s-3-(benciloxi)-1-(hidroximetil)cidobutil]-2-cloropropanamida 5 [racemate] en /so-propanol (250 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 3,82 g (34,1 mmol) de ferc-butilato de potasio en una porcion. Se dejo calentar hasta TA y se agito a 50 °C durante 1 h. La mayona del /so-propanol se elimino a vacte y el residuo se recogio en diclorometano. La fase organica se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 1 N, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vacte. El residuo se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 2,96 g (99 % d. t.).
10 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,86 min; EM (lEPpos): m/z = 262 [M+H]+.
Ejemplo 58A
c/s-2-(Benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano [racemato]
imagen108
Inicialmente se cargaron 2,96 g (11,3 mmol) de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-6-ona 15 [racemato] en tetrahidrofurano (200 ml), se agregaron 22,7 ml (45,3 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 2 h. La solucion de reaccion se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego gota a gota metanol (100 ml) cuidadosamente y se agito a reflujo durante 12 h. Posteriormente se concentro completamente a vacte, y el residuo se recogio en acetonitrilo y se purifico directamente por RP-HPLC (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 2,80 g (91 % d. t.).
20 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,61 min; EM (lEPpos): m/z = 248 [M+H]+.
Ejemplo 59A
c/s-2-(Benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano-5-carboxilato de ferc-butilo [racemato]
imagen109
Inicialmente se cargaron 2,80 g (11,3 mmol) de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano [racemate] en diclorometano (150 ml), se agregaron 3,71 g (17,0 mmol) de dicarbonato de di-ferc-butilo y 5,73 g (7,89 ml, 56,6 mmol) de trietilamina a TA y se agito a TA durante toda la noche. La solucion de reaccion se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 0,5 N, solucion de bicarbonato de sodio acuoso saturado y agua. La fase organica se 5 seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vacte. Rendimiento: 3,33 g (84 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,28 min; EM (lEPpos): m/z = 348 [M+H]+.
Ejemplo 60A
c/s-2-(Benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano-5-carboxilato de ferc-butilo [isomero 1 enantiomericamente puro]
10
imagen110
La separacion de los enantiomeros de 3,33 g del compuesto del ejemplo 59A (procedimiento 5D) dio 1,06 g del compuesto del ejemplo 60A [isomero 1 enantiomericamente puro] y 928 mg del compuesto del ejemplo 61A [isomero 2 enantiomericamente puro].
HPLC (procedimiento 11E): Tr = 5,06 min, 99,9 % de ee;
15 CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,30 min; EM (lEPpos): m/z = 348 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,40-7,23 (m, 5H), 4,37 (mc, 2H), 3,79 (quin, 1H), 3,62 (dd, 1H), 3,493,33 (m, 3H), 2,69-2,56 (m, 2H), 2,43 (dd, 1H), 2,32-2,23 (m, 1H), 1,78 (mc, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,01 (d, 3H).
Ejemplo 61A
c/s-2-(Benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano-5-carboxilato de ferc-butilo [isomero 2 enantiomericamente 20 puro]
imagen111
La separacion de los enantiomeros de 3,33 g del compuesto del ejemplo 59A (procedimiento 5D) dio 1,06 g del compuesto del ejemplo 60A [isomero 1 enantiomericamente puro] y 928 mg del compuesto del ejemplo 61A [isomero 2 enantiomericamente puro].
25 HPLC (procedimiento 11E): Tr = 13,5 min, 99,9 % de ee;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,30 min; EM (lEPpos): m/z = 348 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,38-7,25 (m, 5H), 4,37 (mc, 1H), 3,79 (quin, 1H), 3,62 (dd, 1H), 3,473,34 (m, 2H), 2,68-2,56 (m, 2H), 2,43 (dd, 1H), 2,32-2,22 (m, 1H), 1,78 (mc, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,01 (d, 3H).
5
10
15
20
25
imagen112
CH
imagen113
3
Inicialmente se cargaron en 1,4-dioxano (30 ml) 1,06 g (3,06 mmol) de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5- azaespiro[3,5]nonano-5-carboxilato de ferc-butilo [isomero 1 enantiomericamente puro del ejemplo 60A] y se agregaron 10,0 ml de una solucion de cloruro de hidrogeno 4 N en 1,4-dioxano a TA. Se agito a TA durante toda la noche, luego se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 1,04 g (cuant.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,48 min; EM (lEPpos): m/z = 248 [M+H-HCl]+.
Ejemplo 63A
Clorhidrato de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano [isomero 2 enantiomericamente puro]
imagen114
CH
imagen115
3
Inicialmente se cargaron en 1,4-dioxano (30 ml) 928 mg (2,67 mmol) de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5- azaespiro[3,5]nonano-5-carboxilato de ferc-butilo [isomero 2 enantiomericamente puro del ejemplo 61A] y se agregaron 10,0 ml de una solucion de cloruro de hidrogeno 4 N en 1,4-dioxano a TA. Se agito a TA durante toda la noche, luego se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 1,16 g (cuant.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,51 min; EM (lEPpos): m/z = 248 [M+H-HCl]+.
Ejemplo 64A
Clorhidrato de c/s-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-2-ol [isomero 1 enantiomericamente puro]
CH3
imagen116
Inicialmente se cargaron 1,03 g (3,66 mmol) de clorhidrato de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano [isomero 1 enantiomericamente puro del ejemplo 62A] en metanol (36,7 ml) y 3,34 ml de una solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 2 N, se agregaron 119 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 59,7 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con metanol. El filtrado se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 785 mg (99 % d. t.).
EM (procedimiento 1C): m/z = 158 [M+H-HCl]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,84 (s. a., 1H), 9,57 (s. a., 1H), 3,78-3,60 (m, 4H), 3,11 (d, 1H), 2,272,18 (m, 1H), 2,13-2,00 (m, 2H), 1,09 (d, 3H), tres protones ocultos.
5
10
15
20
25
CH3
imagen117
Inicialmente se cargaron 1,16 g (4,11 mmol) de clorhidrato de c/s-2-(benciloxi)-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonano [isomero 2 enantiomericamente puro del ejemplo 63A] en metanol (41,3 ml) y 3,75 ml de una solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 2 N y se agregaron 134 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 67,1 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con metanol. El filtrado se concentro a vacfo y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 870 mg (98 % d. t.).
EM (procedimiento 1C): m/z = 158 [M+H-HCl]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 9,96 (s. a., 1H), 9,67 (s. a., 1H), 3,84-3,59 (m, 4H), 3,10 (d, 1H), 2,292,17 (m, 1H), 2,15-1,99 (m, 2H), 1,09 (d, 3H), tres protones ocultos.
Ejemplo 66A
2-[(Bencilamino)metil]azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo [racemato]
imagen118
O O
H3C CH3
Se calentaron a reflujo 10,0 g (53,7 mmol) de 2-(aminometil)azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo y 2,03 g (37,8 mmol) de benzaldehfdo en 100 ml de metanol durante 2,5 horas. Posteriormente se enfrio hasta 0 °C y se agrego borohidruro de sodio lentamente a esta temperatura durante un periodo de 15 min. Se agito a TA durante toda la noche. Posteriormente se concentro a vado, se agregaron diclorometano y agua al residuo, las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las fases organicas combinadas se lavaron con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de sodio y se filtraron y el filtrado se concentro a vado. Se agrego diclorometano al residuo obtenido, y se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (diclorometano, luego diclorometano/metanol = 100:4). Rendimiento: 7,43 g (50 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 6A): Tr = 2,41 min; EM (lEPpos): m/z = 277 [M+H]+.
Ejemplo 67A
2-{[Bencil(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)amino]metil}azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
5
10
15
20
25
30
imagen119
O' O
Ha^ CH3
Se disolvieron 2,50 g (9,05 mmol) de 2-[(bencilamino)metil]azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo [racemato] en diclorometano (150 ml), se agregaron 5,55 ml (4,03 g , 39,8 mmol) de trietilamina y 3,04 ml (4,53 g, 27,1 mmol) de 2- bromopropanoato de metilo [racemato] y se agito a TA durante toda la noche. Entonces se agregaron 5,55 ml (4,03 g, 39,8 mmol) de trietilamina y 3,04 ml (4,53 g, 27,1 mmol) de 2-bromopropanoato de metilo [racemato] y se agito a 40 °C durante toda la noche. A continuacion se agregaron de nuevo 5,55 ml (4,03 g, 39,8 mmol) de trietilamina y
3,04 ml (4,53 g, 27,1 mmol) de 2-bromopropanoato de metilo [racemato] y se agito a 40 °C durante toda la noche. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se diluyo con agua y diclorometano y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano y las fases organicas combinadas se lavaron con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y luego se liberaron del disolvente a vado. El producto bruto obtenido se purifico por cromatograffa en gel de sflice (diclorometano, luego diclorometano/metanol = 100:1). Rendimiento: 3,22 g (94 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,00 min (diastereomero 1), Tr = 1,13 min (diastereomero 2);
EM (lEPpos): m/z = 363 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,35-7,28 (m, 4H), 7,27-7,20 (m, 1H), 4,18-3,98 (m, 1H), 3,85-3,73 (m, 1H), 3,71-3,51 (m, 6H), 3,51-3,38 (m, 1H), 3,04-2,88 (m, 1H), 2,85-2,69 (m, 1H), 2,15-1,96 (m, 1H), 1,93-1,65 (m, 1H), 1,34 (d, 9H), 1,26-1,15 (m, 3H).
Ejemplo 68A
Clorhidrato de A/-(azetidin-2-ilmetil)-A/-bencilalaninato de metilo [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
imagen120
Se agregaron 14,9 ml (59,7 mmol) de una solucion 4 N de cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano a 3,2 g (8,5 mmol) de 2-{[bencil(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)amino]metil}azetidin-1-carboxilato de ferc-butilo [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en dioxano (74 ml), y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuacion se agregaron de nuevo 14 ml (59,7 mmol) de solucion 4 N de cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. Posteriormente se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 3,13 g (98 % d. t., pureza: 80 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,68 min (diastereomero 1), Tr = 0,70 min (diastereomero 2);
EM (lEPpos): m/z = 263 [M+H-HCl]+.
Ejemplo 69A
4-Bencil-3-metil-1,4-diazabiciclo[4,2,0]octan-2-ona [isomero 3 enantiomericamente puro]
imagen121
H3C f
Inicialmente se cargaron 21,8 g (51,0 mmol, pureza: 70 %) de N-(azetidin-2-ilmetil)-N-bencilalanina de metilo [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en metanol (562 ml), se agregaron 28,2 g (204 mmol) de carbonato de potasio y se agito posteriormente a TA durante 2,5 dfas. La solucion de reaccion se filtro y la mayona del disolvente se elimino a 5 20 °C a vado. El residuo se recogio en agua y se extrajo de forma repetida con diclorometano y cloroformo//so-
propanol (7:3). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. Mediante el uso del procedimiento 7D, el producto bruto (12,1 g) se separo en los correspondientes isomeros. Aqm, el compuesto objetivo eluyo como tercer componente. Rendimiento: 2,47 g (21 % d. t.). hPlC (procedimiento 6E): Tr = 7,49 min, 99,0 % de ee;
10 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,50 min; EM (lEPpos): m/z = 231 [M+H]+.
Ejemplo 70A
3-Metil-1,4-diazabiciclo[4,2,0]octan-2-ona [isomero 3 enantiomericamente puro]
imagen122
HC N^
3 H
Inicialmente se cargaron 2,40 g (10,4 mmol) de 4-bencil-3-metil-1,4-diazabiciclo[4,2,0]octan-2-ona [isomero 3 15 enantiomericamente puro] en etanol (85 ml) y se agregaron 250 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 130 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y se agito posteriormente en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante toda la noche. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y el residuo filtrado se lavo con etanol caliente (100 ml). Se concentro a vado y el producto se seco a alto vado. Rendimiento: 1,56 g (cuant.).
20 CG-EM (Procedimiento 2B): Tr = 4,50 min; EM (lEPpos): m/z = 140 [M]+;
EM (procedimiento 1C): m/z = 141 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 4,59 (mc, 1H), 4,09-3,89 (m, 2H), 3,27 (q, 1H), 2,95 (dd, 1H), 2,58-2,53 (m, 2H), 2,33-2,04 (m, 2H), 1,12 (d, 3H).
Ejemplo 71A
25 W-Bencil-2-cloro-W-[(2R)-1,4-dihidroxibutan-2-il]propanamida [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
Ha Cl^/CH3
imagen123
Inicialmente se cargaron 45,1 g (55,3 mmol, pureza: 72 %) de (2R)-2-(bencilamino)butano-1,4-diol [B. L. Feringa, Tetrahedron 1989, 45, 6799-6818] en /so-propanol (239 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 11,2 g (15,4 ml, 111 mmol) de trietilamina. Posteriormente se agregaron gota a gota 10,5 g (8,23 ml, 83,0 mmol) de cloruro de 230 cloropropionilo [racemato]. Despues de 10 min de agitacion, la solucion de reaccion se concentro a vado, el residuo se recogio en acetato de etilo y se lavo con agua. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se
5
10
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30
concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 21,4 g (cuant., pureza: 82 %, relacion diastereomerica aprox. 3:2).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,65 min (isomero 1 enantiomericamente puro), Tr = 0,67 min (isomero 2 enantiomericamente puro);
EM (lEPpos): m/z = 286 [M+H]+.
Ejemplo 72A
(5R)-4-Bencil-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
/O CH3
HO^^"'"^N^^O
Inicialmente se cargaron 21,4 g (62,1 mmol, pureza: 82 %) de W-bencil-2-cloro-A/-[(2R)-1,4-dihidroxibutan-2- il]propanamida [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en /so-propanol (335 ml), se enfrio hasta 0 °C y se agregaron en una porcion 27,9 g (249 mmol) de ferc-butilato de potasio. Se agito durante toda la noche y se dejo calentar la reaccion hasta TA durante este tiempo. La mayor parte del /so-propanol se elimino a vado, el residuo se recogio en agua (300 ml) y se extrajo con acetato de etilo. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 13,3 g (69 % d. t., pureza: 81 %, relacion diastereomerica aprox. 3:2).
CL-EM (procedimiento 7A): Tr = 3,23 min (isomero 1 enantiomericamente puro), Tr = 3,34 min (isomero 2 enantiomericamente puro);
EM (lEPpos): m/z = 250 [M+H]+.
Ejemplo 73A
(5R)-4-Bencil-5-({[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}etil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
H3C
HaC-
CH
H3C
3
CH / 3 Si
/ O'
O^/CH3
N
O
Inicialmente se cargaron 13,3 g (43,3 mmol) de (5R)-4-bencil-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-3-ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en W,W-dimetilformamida (60,0 ml) y se agregaron 8,85 g (130 mmol) de imidazol a TA. A 0 °C se agregaron posteriormente 9,80 g (65,0 mmol) de cloruro de ferc-butildimetilsililo y la solucion de reaccion se agito durante toda la noche y se dejo calentar hasta TA durante este tiempo. Se concentro posteriormente a vado, se recogio en acetato de etilo y se lavo de forma repetida con agua y una vez con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado. La fase organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se purifico a continuacion por cromatograffa sobre gel de sflice (ciclohexano/acetato de etilo 6:1, luego ciclohexano/acetato de etilo 5:1). Rendimiento: 8,03 g (49 % d. t., relacion diastereomerica: aprox. 2,3:1).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,41 min; EM (lEPpos): m/z = 364 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,40-7,18 (m, 5H), 5,12-5,03 (m, 1H), 4,33-4,21 (m, 1H), 4,14 (d, 0,3H),
4,05 (m, 0,7H), 3,95-3,84 (m, 1H), 3,74-3,56 (m, 3H), 3,39 (dd, 0,3H), 3,28 (d, 0,7H), 1,98-1,70 (m, 2H), 1,39 (d, 0,9H), 1,35 (d, 2,1H), 0,82 (s, 9H), 0,02 (s, 1,8H), 0,00 (s, 4,2H).
5
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H3C,
H3C
CH
HC
3
CH / 3 Si.
/ O'
CH
3
CH
3
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O
Inicialmente se cargaron 7,00 g (18,6 mmol) de (5R)-4-bencil-5-(2-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}etil)-2-metilmorfolin-3- ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (233 ml) y se agregaron gota a gota 13,0 ml (26,1 mmol) de solucion de diisopropilamida de litio (2,0 M en tetrahidrofurano/n-heptano/etilbenceno) a -78° C. Se agito durante 15 min y se agregaron posteriormente 3,17 g (1,39 ml, 22,4 mmol) de yodometano. La solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA y se agito durante 2 h. La reaccion se termino por la adicion de solucion de cloruro de amonio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se lavo con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 8,36 g (70 % d. t., pureza: 59 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,47 min; EM (lEPpos): m/z = 378 [M+H]+.
Ejemplo 75A
(5R)-4-Bencil-5-(2-{[ferc-butil(dimetil)silil]oxi}etil)-2,2-dimetilmorfolina [isomero enantiomericamente puro]
H3C
H3C
CH
H3C
3
CH / 3 Si.
/ O
CH
CH
*N'
Inicialmente se cargaron 8,36 g (13,1 mmol, pureza: 59 %) de (5R)-4-bencil-5-(2-{[ferc-butil(dimetil)silil]-oxi}etil)-2,2- dimetilmorfolin-3-ona [isomero enantiomericamente puro] en tetrahidrofurano (133 ml), se agregaron 26,2 ml (52,3 mmol) de solucion 2 M de complejo de borano/sulfuro de dimetilo en tetrahidrofurano bajo argon y se agito a reflujo durante 4 h. Se enfrio posteriormente hasta 0 °C, se agrego metanol (30 ml) cuidadosamente, se agito a reflujo durante 30 min y luego se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 8,39 g (96 % d. t., pureza: 55 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,15 min; EM (lEPpos): m/z = 364 [M+H]+.
Ejemplo 76A
2-[(3R)-4-Bencil-6,6-dimetilmorfolin-3-il]etanol [mezcla enantiomerica, 2 isomeros]
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Inicialmente se cargaron 7,39 g (11,2 mmol, pureza: 55 %) de (5R)-4-bencil-5-(2-{[ferc-butil(dimetil)silil]-oxi}etil)-2,2- dimetilmorfolina [isomero enantiomericamente puro] en tetrahidrofurano (148 ml) y se agregaron 30,5 ml (30,5 mmol) de solucion de fluoruro de tetra-n-butilamonio (1,0 M en tetrahidrofurano) a TA. Se agito a TA durante 1 h y posteriormente se concentro a vado. El residuo se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua, isocratico). Rendimiento: 1,97 g (38 % d. t., relacion enantiomerica: aprox. 85:15); en esta etapa, se observo una isomerizacion proporcional del estereocentro a uno de los precursores anteriores HPLC (procedimiento 7E): Tr = 4,41 min, relacion enantiomerica R:S 85:15;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,35 min; EM (lEPpos): m/z = 250 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 7,31 (d, 4H), 7,22 (mc, 1H), 4,45 (t, 1H), 3,93 (d, 1H), 3,60 (dd, 1H), 3,54-3,40 (m, 3H), 3,10 (d, 1H), 2,40-2,29 (m, 2H), 1,85 (d, 1H), 1,79-1,69 (m, 1H), 1,59 (mc, 1H), 1,14 (s, 3H), 1,04 (s, 3H).
Ejemplo 77A
2-[(3R)-6,6-Dimetilmorfolin-3-il]etanol [mezcla enantiomerica, 2 isomeros]
» ch
3
CH
3
HO
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Inicialmente se cargo 1,00 g (4,01 mmol) de 2-[(3R)-4-bencil-6,6-dimetilmorfolin-3-il]etanol [mezcla enantiomerica, relacion enantiomerica: aprox. 85:15] en etanol (40,0 ml), se agregaron 150 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 150 mg de hidroxido de paladio sobre carbon (al 20 %) bajo argon y a continuacion se agito en una atmosfera de hidrogeno a presion normal durante 4 h. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas y se concentro a vado. Rendimiento: 680 mg (cuant.).
CG-EM (Procedimiento 2B): Tr = 3,71 min; EM (lEPpos): m/z = 159 [M]+;
RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 4,32 (s. a., 1H), 3,46 (t, 2H), 3,38 (dd, 1H), 3,21 (t, 1H), 2,64-2,54 (m, 2H), 2,47-2,42 (m, 1H), 1,36 (mc, 2H), 1,18 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 78A
(4R)-4-Etoxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -bencil-2-etilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
CH
HC
3 ^O
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Bajo argon se cargaron inicialmente 10,0 g (37,7 mmol) de (4R)-1-[(benciloxi)carbonil]-4-hidroxi-L-prolina en N,N- dimetilformamida (110 ml) y se agregaron 1,96 g (49,0 mmol, 60 % de suspension en aceite de parafina) de hidruro de sodio a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito durante 30 min y posteriormente se agregaron 7,54 ml (14,7 g, 94,2 mmol) de yodoetano. Se dejo calentar hasta TA, luego se enfrio nuevamente hasta 0 °C, se agregaron 1,96 g (49,0 mmol, 60 % de suspension en aceite de parafina) de hidruro de sodio y se agito durante 30 min. Se agregaron otros 7,54 ml (14,7 g, 94,2 mmol) de yodoetano, y se calento de nuevo hasta TA y se agito durante toda la noche. Se agrego agua cuidadosamente a la mezcla de reaccion y se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion posterior. Rendimiento: 14,8 g (94 % d. t., pureza: 77 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,06 min; EM (lEPpos): m/z = 322 [M+H]+.
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(4R)-4-Etoxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
HO
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CH
N
3
O
imagen129
O
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Inicialmente se cargaron 13,5 g (32,6 mmol, pureza: 77 %) de (4R)-4-etoxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1 -bencil-2- etilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (150 ml) bajo argon y se agregaron 817 mg (37,5 mmol) de borohidruro de litio a 0 °C. La mezcla de reaccion se dejo calentar hasta TA y luego se agito a TA durante toda la noche. Se agrego agua (100 ml) cuidadosamente, el pH se ajusto a pH = 1 usando una solucion 2 N de cloruro de hidrogeno acuoso y se extrajo posteriormente con acetato de etilo. Las fases organicas se lavaron con solucion de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 4,78 g (52 % d. t., relacion diastereomerica: aprox. 2:1).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,81 min (diastereomero 1), Tr = 0,83 min (diastereomero 2);
EM (lEPpos): m/z = 280 [M+H]+.
Ejemplo 80A
[(4R)-4-Etoxipirrolidin-2-il]metanol [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
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CH
3
Inicialmente se cargaron 2,00 g (7,16 mmol) de (4R)-4-etoxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en metanol (46,3 ml), se agregaron 221 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 111 mg de oxido de platino (IV) bajo argon y se agito en una atmosfera de hidrogeno a presion normal hasta que finalizo la captacion de hidrogeno. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas, se lavo con metanol y se concentro a vado. Rendimiento: 1,17 g (cuant.).
EM (procedimiento 2C): m/z = 146 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 4,04-2,67 (m, 10H), 2,10-1,30 (m, 2H), 1,22-0,97 (m, 3H).
Ejemplo 81A
(4R)-4-Etoxi-2-formilpirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
CH
O
imagen132
Inicialmente se cargaron 2,60 g (9,31 mmol) de (4R)-4-etoxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en diclorometano (46,6 ml) y se agregaron 4,36 g (3,96 ml, 55,9 mmol) de
dimetilsulfoxido, 9,62 g (13,0 ml, 129 mmol) de W,W-diisopropiletilamina y 5,93 g (37,2 mmol) de complejo de trioxido de azufre/piridina a 0 °C. La solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA y se agito a TA durante 3 h. La solucion de reaccion se diluyo con diclorometano, se lavo con agua y solucion de cloruro de sodio saturado, se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vado. El producto bruto se uso para el proximo paso sin purificacion 5 posterior. Rendimiento: 4,10 g (cuant., pureza: 65 %).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,96 min (isomero 1 enantiomericamente puro), Tr = 0,97 min (isomero 2 enantiomericamente puro);
EM (lEPpos): m/z = 278 [M+H]+.
Ejemplo 82A
10 (4R)-4-Etoxi-2-vinilpirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
H2C^
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o^
CH
N
3
O
imagen134
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A 0 °C y bajo argon se agregaron gota a gota 4,23 ml (10,6 mmol, solucion 2,5 M en n-hexano) de n-butillitio a 4,81 g
13,5 mmol) de bromuro de metiltrifenilfosfonio en tetrahidrofurano (30,8 ml). La solucion de reaccion se dejo calentar hasta TA. Se agito a TA durante 30 min, luego una vez mas se enfrio hasta 0 °C y se agregaron gota a gota 4,10 g 15 (9,61 mmol, pureza: 65 %) de (4R)-4-etoxi-2-formilpirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2
isomeros] en THF durante 10 min. Se agito durante 30 min y luego se vertio la solucion de reaccion en agua helada. Se extrajo con eter dietflico, las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 954 mg (36 % d. t., relacion diastereomerica: aprox. 2:1).
20 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 1,11 min (diastereomero 1), Tr = 1,13 min (diastereomero 2);
EM (lEPpos): m/z = 276 [M+H]+.
Ejemplo 83A
(4R)-4-Etoxi-2-(hidroxietil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
CH
imagen136
25 A 0 °C se agregaron gota a gota 34,7 ml (17,3 mmol, solucion 0,5 M en tetrahidrofurano) de 9- borabiciclo[3,3,1]nonano a 954 mg (3,47 mmol) de (4R)-4-etoxi-2-vinilpirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en tetrahidrofurano (53 ml). La solucion de reaccion se dejo calentar lentamente hasta TA. Posteriormente, a 0 °C, se agregaron solucion de carbonato de sodio acuoso 1 N (40 ml) y a continuacion solucion de peroxido de hidrogeno acuoso de 30 % de concentracion (40 ml). La solucion de reaccion se calento 30 hasta TA y se agito durante 30 min. A continuacion se agrego acetato de etilo a la solucion de reaccion, y la fase organica se lavo con agua y solucion de cloruro de sodio saturado. Las fases organicas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vado. El producto bruto se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 781 mg (75 % d. t., relacion diastereomerica: aprox. 2,5:1).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,87 min (diastereomero 1), Tr = 0,90 min (diastereomero 2);
35 EM (lEPpos): m/z = 294 [M+H]+.
[(4R)-4-Etoxipirrolidin-2-il]etanol [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
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CH
Inicialmente se cargaron 780 mg (2,66 mmol) de (4R)-4-etoxi-2-(hidroxietil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo [mezcla 5 diastereomerica, 2 isomeros] en metanol (17,2 ml), se agregaron 82,2 mg de paladio sobre carbon (al 10 %) y 41,1 mg de oxido de platino (IV) bajo argon y a continuacion se agito en una atmosfera de hidrogeno a presion normal hasta que finalizo la captacion de hidrogeno. La solucion de reaccion se filtro a traves de tierra de diatomeas, se lavo con metanol y se concentro a vado. Rendimiento: 465 mg (cuant.).
EM (procedimiento 1C): m/z = 160 [M+H-HCl]+.
10 Ejemplo 85A
4-Bencil-5-oxo-4,7-diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de ferc-butilo
imagen138
O
Y I^CH
o ch3 3
Bajo argon y a 0 °C se agregaron 2,47 g (61,9 mmol) de hidruro de sodio en porciones a 2,50 g (8,84 mmol) de 5- oxo-4,7-diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de ferc-butilo en 80 ml de THF y se agito a 0 °C durante 30 min. 15 Posteriormente se agregaron gota a gota 1,26 ml (1,81 g, 10,6 mmol) de bromuro de bencilo y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. Posteriormente se enfrio hasta 0 °C, se agregaron 1,24 g (30,9 mmol) de hidruro de sodio y se agito a 0 °C durante 30 min. Se agregaron gota a gota 0,63 ml (0,91 g, 5,3 mmol) de bromuro de bencilo y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuacion a 0 °C se agregaron primero etanol y luego agua y acetato de etilo. Despues de la separacion de fases, la fase acuosa se extrajo dos 20 veces con acetato de etilo y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio. Despues de la filtracion, el filtrado se concentro a vado, el residuo se seco a alto vado y se purifico por cromatograffa de gel de sflice (ciclohexano/acetato de etilo 10:1) y luego por HPLC preparativa (columna RP18, fase movil: gradiente acetonitrilo/agua). Esto dio 1,98 g (71 % d. t.) del producto deseado.
CL-EM (procedimiento 1A): Tr= 1,09 min; EM (lEPpos): m/z = 317 [M+H]+
25 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 7,38-7,14 (m, 5H), 4,41 (s, 2H), 4,16 (s. a., 2H), 1,40 (s. a., 9H), 0,980,89 (m, 2H), 0,79-0,72 (m, 2H).
Ejemplo 86A
4-Bencil-6-metil-5-oxo-4,7-diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de ferc-butilo [racemato]
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T is*
°
3
chch3
A -78 °C y bajo argon se agregaron gota a gota 11,38 ml (11,38 mmol) de una solucion 1 M de hexametildisilazida de litio en THF a 1,20 g (3,79 mmol) de 4-bencil-5-oxo-4,7-diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de ferc-butilo en 48 ml de THF y se agito a -78 °C durante 30 min. Posteriormente se agregaron gota a gota 0,47 ml (7,59 mmol) de yoduro de metilo y se agito durante 1,5 h. A continuacion a 0 °C se agregaron primero solucion de cloruro de amonio acuoso saturado y luego acetato de etilo. Despues de la separacion de fases, la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo, las fases organicas combinadas se lavaron con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado y entonces se secaron sobre sulfato de sodio. Despues de la filtracion, el filtrado se concentro a vado, el residuo se seco a alto vado, se disolvio en acetonitrilo y agua y se purifico por HPLC preparativa (columna RP18, fase movil: gradiente acetonitrilo/agua). Esto dio 0,54 g (41 % d. t.) del producto deseado.
Ejemplo 87A
6-Metil-5-oxo-4,7-diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de ferc-butilo [racemato]
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3
3
A -78 °C se agregaron 107 mg (1,55 mmol) de litio a 10 ml (7,70 g, 452 mmol) de amomaco y se agito durante unos pocos minutos. Posteriormente se agregaron gota a gota 540 mg (1,55 mmol) de 4-bencil-6-metil-5-oxo-4,7- diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de ferc-butilo [racemato] en 5 ml de THF, se calento lentamente hasta temperatura ambiente y luego se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuacion a 0 °C, se agregaron primero solucion de cloruro de amomaco acuoso saturado y luego acetato de etilo. Despues de la separacion de fases, la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo, las fases organicas combinadas se lavaron con solucion de cloruro de sodio acuoso saturado y se secaron sobre sulfato de sodio. Despues de la filtracion, el filtrado se concentro a vado y el residuo se seco a alto vado. Esto dio 353 mg del producto bruto el cual se uso sin purificacion posterior.
EM (procedimiento 1C): m/z = 241 [M+H]+.
Ejemplo 88A
Trifluoroacetato de 6-metil-4,7-diazaespiro[2,5]octan-5-ona [racemato]
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Se agregaron 1,06 ml (1,57 g, 13,8 mmol) de acido trifluoroacetico a 331 mg (1,38 mmol) de 6-metil-5-oxo-4,7-
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diazaespiro[2,5]octano-7-carboxilato de terc-butilo [racemato] en 10 ml de diclorometano y se agito a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentro posteriormente a vado y el residuo se disolvio en diclorometano. Se concentro a vado y el residuo obtenido se disolvio nuevamente en diclorometano, se libero del disolvente a vado y se seco a alta vado. El producto bruto obtenido (605 mg) se uso sin purificacion.
EM (procedimiento 1C): m/z = 141 [M+H]+.
Ejemplos de realizacion
Ejemplo 1:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)(4-hidroxi-3-metilpiperidin-1-il)metanona [mezcla diastereomerica 1:1 trans, 2 isomeros]
imagen142
H
N
F
imagen143
Cl
Inicialmente se cargaron 200 mg (0,250 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro] y 34,9 mg (0,300 mmol) de 3-metilpiperidin- 4-ol [isomero trans racemico, 2 isomeros] en W,W-dimetilformamida (2,00 ml) y se agregaron 131 mg (176 pl, 1,01 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 115 mg (0,300 mmol) de HATU a TA y se agito durante 1 h. Se agregaron 17,5 mg (0,150 mmol) de 3-metilpiperidin-4-ol [isomero trans racemico], 66,5 mg (88 pl, 0,505 mmol) de W,A/-diisopropiletilamina y 57,5 mg (0,150 mmol) de HATU y se agito posteriormente durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 76,6 mg (65 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,88 min; EM (lEPpos): m/z = 462 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 8 [ppm] = 8,99 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,28 (m, 3H), 6,82 (s, 1H), 6,69 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,84-4,49 (m, 3H), 4,25 (s. a., 1H), 3,91 (s, 3H), 3,50 (s. a., 1H), 3,22-3,08 (m, 1H), 3,07-2,78 (m. a., 1H), 1,91-1,64 (m. a., 1H), 1,49-1,20 (m, 2H), 0,85 (d. a., 3H).
Ejemplo 2:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)(4-hidroxi-3-metilpiperidin-1-il)metanona isomero 1 trans enantiomericamente puro]
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H
N
F
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Cl
[
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 70,0 mg del compuesto del ejemplo 1 de acuerdo con el procedimiento 3D dio 32,0 mg del ejemplo 2 (isomero 1 trans enantiomericamente puro) y 32,0 mg del ejemplo 3 (isomero 2 trans enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 3E): Tr = 9,37 min, 99,0 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,91 min; EM (lEPpos): m/z = 462 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 8,99 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,28 (m, 3H), 6,82 (s, 1H), 6,69 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,84-4,49 (m, 3H), 4,25 (s. a., 1H), 3,91 (s, 3H), 3,50 (s. a., 1H), 3,22-3,08 (m, 1H), 3,07-2,78 (m. a., 1H), 1,91-1,64 (m. a., 1H), 1,49-1,20 (m, 2H), 0,85 (d. a., 3H).
Ejemplo 3:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)(4-hidroxi-3-metilpiperidin-1-il)metanona
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H
N
F
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Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 70,0 mg del compuesto del ejemplo 1 de acuerdo con el procedimiento 3D dio 32,0 mg del ejemplo 2 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 32,0 mg del ejemplo 3 5 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 3E): Tr = 15,1 min, 99,0 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,91 min; EM (lEPpos): m/z = 462 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,99 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,28 (m, 3H), 6,82 (s, 1H), 6,69 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,84-4,49 (m, 3H), 4,25 (s. a., 1H), 3,91 (s, 3H), 3,50 (s. a., 1H), 3,22-3,08 (m, 1H), 3,07-2,78 (m. a., 10 1H), 1,91-1,64 (m. a., 1H), 1,49-1,20 (m, 2H), 0,85 (d. a., 3H).
Ejemplo 4:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(hidroximetil)-2,2-dimetilmorfolin-4-il]metanona [mezcla diastereomerica 1:1, 2 isomeros]
H3C
n
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O
//
N
H
N
F
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Cl
15 Inicialmente se cargaron 80,0 mg (0,101 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro] y 38,2 mg (0,263 mmol) de (6,6- dimetilmorfolin-3-il)metanol [racemato] en W,W-dimetilformamida (1,01 ml) y se agregaron 99,2 mg (134 pl, 0,786 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 100 mg (0,263 mmol) de HATU a TA y se agito durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico posteriormente por RP-HPLC 20 preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 55,1 mg (99 % d. t., pureza: 90 %).
CL-EM (procedimiento 3A): Tr = 2,02 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 8,98 (mc, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,37 (m, 3H), 6,90 (s. a., 1H), 6,74 (s. a., 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,88 (s. a., 1H), 4,80-4,51 (m, 2H), 4,01-3,38 (m, 9H), 3,20-2,74 (m, 1H), 1,14 (s. a., 6H).
Ejemplo 5:
25 (2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(hidroximetil)-2,2-dimetilmorfolin-4-il]metanona [isomero 1 enantiomericamente puro]
H3C
n
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O
//
N
H
N
F
imagen151
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 50,0 mg del compuesto del ejemplo 4 de acuerdo con el procedimiento 4D dio, despues de la repetida purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 16,2 mg del ejemplo 5 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 22,1 mg del ejemplo 6 (isomero 2 enantiomericamente puro). HPLC (procedimiento 4E): Tr = 5,05 min, 99,0 % de de;
5 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,94 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+.
Ejemplo 6:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(hidroximetil)-2,2-dimetilmorfolin-4-il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
H3C
n
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O
N
H
N
F
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Cl
10 La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 50,0 mg del compuesto del ejemplo 4 de acuerdo con el procedimiento 4D dio, despues de la repetida purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 16,2 mg del ejemplo 5 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 22,1 mg del ejemplo 6 (isomero 2 enantiomericamente puro). HPLC (procedimiento 4E): Tr = 6,50 min, 96,6 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,95 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+.
15 Ejemplo 7:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5R)-2,5-dimetilmorfolin-4-il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
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H
N
F
imagen155
Cl
Inicialmente se cargaron 100 mg (0,130 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- 20 metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro] y 23,0 mg (0,150 mmol) de clorhidrato (5R)- 2,5-dimetilmorfolina [isomero 2 enantiomericamente puro] en W,W-dimetilformamida (1,00 ml) y se agregaron 65,3 mg (88,1 pl, 0,510 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 57,7 mg (0,150 mmol) de HATU a TA y se agito durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico posteriormente por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 25,1 mg (40 % d. t.).
25 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 1,01 min; EM (lEPpos): m/z = 462 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,00 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,49-7,35 (m, 3H), 6,84 (s. a., 1H), 6,71 (s. a., 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,79-4,08 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,72-3,21 (m, 5H), 1,32-0,90 (m, 6H).
Ejemplo 8:
5
10
15
20
25
imagen156
H
N
F
imagen157
Cl
Inicialmente se cargaron 100 mg (0,130 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carbox^lico [isomero enantiomericamente puro] y 23,0 mg (0,150 mmol) de clorhidrato de (5R)-2,5-dimetilmorfolina [isomero 1 enantiomericamente puro] en W,A/-dimetilformamida (1,00 ml) y se agregaron 65,3 mg (88,1 pl, 0,510 mmol) de W,A/-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 57,7 mg (0,150 mmol) de HATU a TA y se agito durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 27,4 mg (44 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,99 min; EM (lEPpos): m/z = 462 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 9,00 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,34 (m, 3H), 6,83 (s, 1H), 6,69 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,81-4,52 (m, 2H), 4,04 (s. a., 1H), 3,97-3,88 (s, 4H), 3,84 (dd, 1H), 3,50 (d, 1H), 3,37 (dd, 1H), 3,27 (d, 1H), 1,23 (d, 3H), 1,15 (d, 3H).
Ejemplo 9:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5R)-2-hidroxietil)-2,5-dimetilmorfolin-4- il]metanona [mezcla diastereomerica 1:1,2 isomeros]
HO
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H
N
F
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Cl
Inicialmente se cargaron 120 mg (0,250 mmol, pureza: 77 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [racemato] y 48,4 mg (0,300 mmol) de 2-[(5R)-2,5-dimetilmorfolin-2-il]etanol [ejemplo 31A, isomero enantiomericamente puro] en W,W-dimetilformamida (1,17 ml) y se agregaron 115 mg (154 pl, 0,890 mmol) de N,N-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 116 mg (0,300 mmol) de HATU a TA y se agito durante 2 h. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 112 mg (84 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,00 (dd, 1H), 7,58 (s. a., 1H), 7,50-7,32 (m, 3H), 6,82 (s. a., 1H), 6,67 (s, 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,80-4,52 (m, 2H), 4,31 (t, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,73 (d, 1H), 2,96 (s. a., 0,5H), 2,02 (mc, 1H), 1,43 (s. a., 0,5H), 1,29-1,02 (m, 6H), seis protones ocultos.
Ejemplo 10:
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H
N
F
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Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 102 mg del compuesto del ejemplo 9 de acuerdo con el procedimiento 2D dio, despues de la nueva purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 24,7 mg del compuesto objetivo del ejemplo 10 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 24,0 mg del compuesto objetivo del 5 ejemplo 11 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 2E): Tr = 13,6 min, 99,0 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 6 [ppm] = 9,00 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,51-7,36 (m, 3H), 6,83 (s, 1H), 6,67 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,80-4,52 (m, 2H), 4,32 (t, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,73 (dd, 1H), 2,96 (s. a., 0,5H), 2,00 (mc, 1H), 1,43 (s. a., 10 0,5H), 1,26-1,02 (m, 6H), seis protones ocultos.
Ejemplo 11:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5R)-2-(2-hidroxietil)-2,5-dimetilmorfolin-4- il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
HO
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H
N
F
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Cl
15 La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 102 mg del compuesto del ejemplo 9 de acuerdo con el procedimiento 2D dio, despues de la nueva purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 24,7 mg del compuesto objetivo del ejemplo 10 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 24,0 mg del compuesto objetivo del ejemplo 11 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 2E): Tr = 15,6 min, 98,5 % de de;
20 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 6 [ppm] = 9,01 (s. a., 1H), 7,58 (s, 1H), 7,51-7,29 (m, 3H), 6,81 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,24 (d. a., 1H), 4,86-4,48 (m, 2H), 4,32 (t, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,73 (dd, 1H), 2,96 (s. a., 0,5H), 2,00 (mc, 1H), 1,43 (s. a., 0,5H), 1,21 (d, 3H), 1,07 (s. a., 3H), seis protones ocultos.
Ejemplo 12:
5
10
15
20
25
30
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F
Cl
Inicialmente se cargaron 270 mg (0,170 mmol, pureza: 23 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carbox^lico [racemato] y 35,8 mg (0,210 mmol) de 1-[(5R)-2,5-dimetilmorfolin-2-il]propan-2- ol [ejemplo 34A, isomero enantiomericamente puro] en N,N-dimetilformamida (793 jl) y se agregaron 78,0 mg (105 |jl, 0,600 mmol) de N,N-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 78,6 mg (0,210 mmol) de HATU a TA y se agito durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HpLC preparativa (acetonitrilo/agua). El producto bruto obtenido (20,0 mg) se purifico nuevamente mediante el procedimiento 1E. Esto dio 9,0 mg del compuesto objetivo (10 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,98 min; EM (lEPpos): m/z = 520 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,97 (dd, 1H), 7,58 (s. a., 1H), 7,50-7,33 (m, 3H), 6,81 (d, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,81-4,52 (m, 2H), 4,22 (d, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,70 (d, 2H), 2,97 (s. a., 1H), 1,96-1,85 (m, 1H), 1,35-1,01 (m, 10H), tres protones ocultos.
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona [mezcla diastereomerica 1:1, 2 isomeros]
Inicialmente se cargaron 200 mg (0,25 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi- 1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro] y 44,0 mg (0,30 mmol) de 2-(6-metilmorfolin-3- il)etanol [racemato] en N,N-dimetilformamida (2,00 ml) y se agregaron 131 mg (176 jl, 1,01 mmol) de N,N- diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 115 mg (0,30 mmol) de HATU a TA y se agito durante 1 h. Se agregaron otros 22,0 mg (0,15 mmol) de 2-(6-metilmorfolin-3-il)etanol [racemato], 65,5 mg (88 jl, 0,51 mmol) de N,N-diisopropiletilamina y 57,5 mg (0,15 mmol) de HATU y se agito posteriormente a TA durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 131 mg (97 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,90 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 8,99 (d. a., 1H), 7,58 (s, 1H), 7,49-7,35 (m, 3H), 6,84 (s. a., 1H), 6,71 (s. a., 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,82-4,13 (m, 4H), 3,92 (s, 3H), 3,83-3,22 (m, 6H), 3,06-2,60 (m, 1H), 1,98-1,73 (m, 2H), 1,22-
Ejemplo 13:
imagen165
H3C
OH
0,87 (m, 3H). Ejemplo 14:
imagen166
O
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N
H
N
F
imagen168
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 120 mg del compuesto del ejemplo 13 de acuerdo con el procedimiento 3D dio 55,9 mg del ejemplo 14 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 56,2 mg del ejemplo 15 (isomero 2 enantiomericamente puro).
5 HPLC (procedimiento 3E): Tr = 8,39 min, 99,9 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,94 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,99 (d. a., 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,30 (m, 3H), 6,84 (s. a., 1H), 6,71 (s. a., 1H), 5,23 (mc, 1H), 4,80-4,14 (m, 4H), 3,92 (s, 3H), 3,83-3,22 (m, 6H), 3,03-2,60 (m, 1H), 2,01-1,75 (m, 2H), 1,190,91 (m, 3H).
10 Ejemplo 15:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4- il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
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H
N
F
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Cl
Procedimiento 1:
15 La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 120 mg del compuesto del ejemplo 13 de acuerdo con el procedimiento 3D dio 55,9 mg del ejemplo 14 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 56,2 mg del ejemplo 15 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 3E): Tr = 16,2 min, 99,9 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
20 RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,06-8,92 (m, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,35 (m, 3H), 6,89-6,83 (m, 1H), 6,70 (s. a., 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,82-4,14 (m, 4H), 3,92 (s, 3H), 3,83-3,21 (m, 6H), 3,05-2,59 (m, 1H), 2,01-1,70 (m, 2H), 1,21-0,90 (m, 3H).
Procedimiento 2:
Inicialmente se cargaron 500 mg (1,23 mmol, pureza: 89 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi- 25 1,3-benzoxazol-5-carboxflico [ejemplo 13A, isomero enantiomericamente puro] y 232 mg (1,60 mmol) de 2-[(3S)-6- metilmorfolin-3-il]etanol [ejemplo 42a, isomero enantiomericamente puro] en W,A/-dimetilformamida (20,0 ml) y se agregaron 477 mg (643 pl, 3,69 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 654 mg (1,72 mmol) de HATU a TA, y se agito durante 14 h y posteriormente se purifico sin procesamiento posterior por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Las trazas del isomero menor se eliminaron por HPLC sobre una fase quiral de 30 acuerdo con el procedimiento 3D del producto obtenido. Rendimiento: 423 mg (70 % d. t.).
Rotacion optica: = 63,79 0 (c = 0,625, cloroformo);
HPLC (procedimiento 3E): Tr = 14,0 min, 99,9 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,04-8,94 (m, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,35 (m, 3H), 6,90-6,81 (m, 1H), 35 6,70 (s. a., 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,84-4,12 (m, 4H), 3,92 (s, 3H), 3,84-3,19 (m, 6H), 3,07-2,59 (m, 1H), 2,03-1,71 (m,
2H), 1,21-0,90 (m, 3H).
De acuerdo con la determinacion de la estructura por la formacion de complejo de a-trombina humana con el ejemplo 15 en el cristal, este compuesto es (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5- il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona que tiene la siguiente formula
5
imagen172
O
/)
N
imagen173
F Cl
Ejemplo 16:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(3-hidroxiciclobutil)-2-metilmorfolin-4- il]metanona [mezcla diastereomerica, 4 isomeros]
imagen174
O
N
H
N
F
imagen175
Cl
10 Inicialmente se cargaron 200 mg (0,33 mmol, pureza: 60 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi- 1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro] y 67,6 mg (0,40 mmol) de 3-(6-metilmorfolin-3- il)ciclobutanol [mezcla diastereomerica, 4 isomeros] en W,W-dimetilformamida (2,50 ml) y se agregaron 170 mg (229 |jl, 1,32 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 150 mg (0,40 mmol) de HATU a TA y se agito durante 2 h. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa 15 (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 83,9 mg (48 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,94, 0,95 min; EM (lEPpos): m/z = 518 [M+H]+.
Ejemplo 17:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(3-hidroxiciclobutil)-2-dimetilmorfolin-4- il]metanona [isomero 1 enantiomericamente puro]
imagen176
O
//
N
H
N
F
imagen177
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 75,0 mg del compuesto del ejemplo 16 de acuerdo con el procedimiento 1D dio 17,4 mg del ejemplo 17 (isomero 1 enantiomericamente puro), 8,6 mg del ejemplo 18 (isomero 2 enantiomericamente puro), 17,7 mg del ejemplo 19 (isomero 3 enantiomericamente puro) y 9,5 mg del 5 ejemplo 20 (isomero 4 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 1E): Tr = 11,1 min, 99 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,95 min; EM (lEPpos): m/z = 518 [M+H]+.
Ejemplo 18:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(3-hidroxiciclobutil)-2-dimetilmorfolin-4- 10 il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
imagen178
O
//
N
H
N
F
imagen179
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 75,0 mg del compuesto del ejemplo 16 de acuerdo con el procedimiento 1D dio 17,4 mg del ejemplo 17 (isomero 1 enantiomericamente puro), 8,6 mg del ejemplo 18 (isomero 2 enantiomericamente puro), 17,7 mg del ejemplo 19 (isomero 3 enantiomericamente puro) y 9,5 mg del 15 ejemplo 20 (isomero 4 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 1E): Tr = 12,6 min, 94,3:5,7 dr,
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,95 min; EM (lEPpos): m/z = 518 [M+H]+.
Ejemplo 19:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(3-hidroxiciclobutil)-2-dimetilmorfolin-4- 20 il]metanona [isomero 3 enantiomericamente puro]
imagen180
O
//
N
H
N
F
imagen181
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 75,0 mg del compuesto del ejemplo 16 de acuerdo con el procedimiento 1D dio 17,4 mg del ejemplo 17 (isomero 1 enantiomericamente puro), 8,6 mg del ejemplo 18 (isomero 2 enantiomericamente puro), 17,7 mg del ejemplo 19 (isomero 3 enantiomericamente puro) y 9,5 mg del 5 ejemplo 20 (isomero 4 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 1E): Tr = 14,5 min, 99 % de de;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,95 min; EM (lEPpos): m/z = 518 [M+H]+.
Ejemplo 20:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[5-(3-hidroxiciclobutil)-2-dimetilmorfolin-4- 10 il]metanona [isomero 4 enantiomericamente puro]
imagen182
O
//
N
H
N
F
imagen183
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 75,0 mg del compuesto del ejemplo 16 de acuerdo con el procedimiento 1D dio 17,4 mg del ejemplo 17 (isomero 1 enantiomericamente puro), 8,6 mg del ejemplo 18 (isomero 2 enantiomericamente puro), 17,7 mg del ejemplo 19 (isomero 3 enantiomericamente puro) y 9,5 mg del 15 ejemplo 20 (isomero 4 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 1E): Tr = 17,2 min, 96,1:3,9 dr,
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,94 min; EM (lEPpos): m/z = 518 [M+H]+.
Ejemplo 21:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(c/s-2-hidroxi-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]non- 20 5-il)metanona [isomero 1 enantiomericamente puro]
5
10
15
20
25
30
imagen184
O
N
imagen185
Cl
F
Inicialmente se cargaron 120 mg (0,152 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carbox^lico [isomero enantiomericamente puro] y 35,2 mg (0,182 mmol) de clorhidrato de c/s-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-2-ol [ejemplo 64A, isomero 1 enantiomericamente puro] en N,N- dimetilformamida (1,20 ml) y se agregaron 78,4 mg (106 pl, 0,607 mmol) de N,N-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 69,2 mg (0,182 mmol) de HATU y se agito a TA durante 1 h. A continuacion se agregaron 35,2 mg (0,182 mmol) de clorhidrato de c/s-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-2-ol [ejemplo 64A, isomero 1 enantiomericamente puro], 78,4 mg (106 pl, 0,607 mmol) de N,N-diisopropiletilamina y 69,2 mg (0,182 mmol) de HATU y se agito a TA durante 2 h mas. Sin posterior procesamiento, la solucion de reaccion se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 67,3 mg (80 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,91 min; EM (lEPpos): m/z = 504 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,00 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,51-7,34 (m, 3H), 6,93 (s, 1H), 6,78 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 5,08 (d, 1H), 4,80-4,51 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,89-3,80 (m, 1H), 3,62 (d, 1H), 3,52-3,43 (m, 2H), 2,90 (dd, 1H), 2,73-2,63 (m, 1H), 2,33 (s. a., 1H), 2,21-2,10 (m, 1H), 1,85 (t. a., 1H), 0,90 (d, 3H).
Ejemplo 22:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(c/s-2-hidroxi-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]non- 5-il)metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
imagen186
O
//
N
H
N
Cl
F
Inicialmente se cargaron 120 mg (0,152 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carboxflico [isomero enantiomericamente puro] y 35,2 mg (0,182 mmol) de clorhidrato de c/s-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-2-ol [ejemplo 65A, isomero 2 enantiomericamente puro] en N,N- dimetilformamida (1,20 ml) y se agregaron 78,4 mg (106 pl, 0,607 mmol) de N,N-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 69,2 mg (0,182 mmol) de HATU y la mezcla se agito a TA durante 1 h. A continuacion se agregaron 35,2 mg (0,182 mmol) de clorhidrato de c/s-7-metil-8-oxa-5-azaespiro[3,5]nonan-2-ol [ejemplo 65A, isomero 2 enantiomericamente puro], 78,4 mg (106 pl, 0,607 mmol) de N,N-diisopropiletilamina y 69,2 mg (0,182 mmol) de HATU y se agito a TA durante 2 h mas. Sin posterior procesamiento, la solucion de reaccion se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 44,2 mg (51 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,94 min; EM (lEPpos): m/z = 504 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,01 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,49-7,36 (m, 3H), 6,92 (s, 1H), 6,80 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 5,09 (d, 1H), 4,80-4,52 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,90-3,80 (m, 1H), 3,62 (d, 1H), 3,51-3,42 (m, 2H), 2,90 (dd, 1H), 2,69 (dd, 1H), 2,38-2,29 (d, 1H), 2,22-2,13 (m, 1H), 1,84 (t. a., 1H), 0,89 (d, 3H).
Ejemplo 23:
5
10
15
20
25
30
imagen187
imagen188
Inicialmente se cargaron 266 mg (0,337 mmol, pureza: 46 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carbox^lico [isomero enantiomericamente puro] y 154 mg (1,10 mmol) de 3-metil-1,4- diazabiciclo[4,2,0]octan-2-ona [ejemplo 70A, isomero 3 enantiomericamente puro] en W,W-dimetilformamida (3,32 ml) y se agregaron 378 mg (0,51 ml, 2,92 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 333 mg (0,877 mmol) de HATU a TA y se agito durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 174 mg (cuant.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,94 min; EM (lEPpos): m/z = 487 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 9,00 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,36 (m, 3H), 6,91 (s, 1H), 6,77 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,80-4,52 (m, 3H), 4,22 (mc, 1H), 4,05 (mc, 1H), 3,98-3,87 (m, 4H), 3,72 (m, 1H), 2,45-2,31 (m, 1H), 2,10-2,00 (m, 1H), 1,38 (d, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 24:
Acido {(3S)-4-[(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)carbonil]-6-metilmorfolin-3-
il}acetico [isomero enantiomericamente puro]
imagen189
imagen190
H
N
F
imagen191
Cl
Inicialmente se cargaron 600 mg (1,22 mmol) de (2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5- il)[(5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona [ejemplo 15, isomero 2 enantiomericamente puro] en acetonitrilo (120 ml), se agregaron 611 mg (2,68 mmol) de acido peryodico a TA y se agito durante 15 min. Posteriormente se enfrio hasta 0 °C y se agregaron 15,7 mg (0,07 mmol) de clorocromato de piridinio en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se agito a 0 °C durante 4 h (se controlo por CCF: diclorometano//so-propanol 10:1) y luego se concentro a vacfo hasta aprox. 20 ml. Se agrego solucion de bisulfito de sodio acuoso saturado (150 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). La fase organica se lavo con solucion de cloruro de hidrogeno acuoso 1 N (100 ml) y agua (100 ml), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro a vacfo. El residuo se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 312 mg (48 % d. t.). ri2n
Rotacion optica: = 133,9 0 (c = 0,55, cloroformo);
CL-EM (procedimiento 7A): Tr = 2,65 min; EM (lEPpos): m/z = 505 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,33 (s. a., 1H), 8,99 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,33 (m, 3H), 6,95-6,80 (m, 1H), 6,72 (s. a., 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,85-4,15 (m, 3H), 3,91 (s, 3H), 3,83-3,23 (m, 4H), 3,05-2,56 (m, 3H), 1,220,91 (m, 3H).
Ejemplo 25:
5
10
15
20
25
30
HaC
imagen192
O
//
N
H
N
F
imagen193
Cl
Inicialmente se cargaron 50,0 mg (0,08 mmol, pureza: 60 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7- metoxi-1,3-benzoxazol-5-carbox^lico [isomero enantiomericamente puro] y 15,7 mg (0,10 mmol) de 2-[(3R)-6,6- dimetil-morfolin-3-il]etanol [ejemplo 77a, mezcla enantiomerica, 2 isomeros] en W,W-dimetilformamida (1,00 ml) y se agregaron 42,5 mg (57,3 pi, 0,33 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 37,5 mg (0,10 mmol) de HATU a TA y se agito durante 2 h. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 30,7 mg (71 % d. t., relacion diastereomerica: aprox. 85:15). HPLC (procedimiento 3E): Tr = 6,07 min (compuesto objetivo), 8,46 min (isomero menor): aprox. 85:15 de relacion diastereomerica;
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,95 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 6 [ppm] = 9,00 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,35 (m, 3H), 6,82 (s. a., 1H), 6,68 (s, 1H), 5,23 (mc, 1H), 4,85-4,25 (m, 4H), 4,03-3,70 (m, 5H), 3,44 (s. a., 3H), 1,97-1,75 (m, 2H), 1,11 (s. a., 6H), un proton oculto.
Ejemplo 26:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(4R)-4-etoxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-1- il]metanona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
H3C
>
H3C
‘O
imagen194
O
*
N
H
N
F
imagen195
Cl
Inicialmente se cargaron 200 mg (0,49 mmol, pureza: 89 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi- 1,3-benzoxazol-5-carboxflico [ejemplo 13A, isomero enantiomericamente puro] y 106 mg (0,73 mmol) de [(4R)-4- etoxipirrolidin-2-il]metanol [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en W,A/-dimetilformamida (3,25 ml) y se agregaron 441 mg (595 pl, 3,42 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 223 mg (0,59 mmol) de HATU a TA y se agito durante toda la noche. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 192 mg (79 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,96 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-cfe): 6 [ppm] = 9,03-8,96 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50-7,36 (m, 3H), 7,02-6,94 (m, 1H), 6,87-6,80 (m, 1H), 5,25 (mc, 1H), 4,86-4,51 (m, 3H), 4,24-4,10 (m, 1H), 3,92 (s, 4H), 3,72-3,37 (m, 3H), 3,32-3,11 (m, 2H), 2,23-1,89 (m, 2H), 1,17-0,95 (m, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 27:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(4R)-4-etoxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-1- il]metanona [isomero 1 enantiomericamente puro]
HaC
>
H3C.
‘O
imagen196
O
//
N
H
N
F
imagen197
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 192 mg del compuesto del ejemplo 26 de acuerdo con el procedimiento 8D dio, despues de la purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 27,7 mg del ejemplo 27 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 6,7 mg del ejemplo 28 (isomero 2 enantiomericamente puro).
5 HPLC (procedimiento 8E): Tr = 8,59 min, >99,0 % de de (isomero 1 enantiomericamente puro),
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,93 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,99 (s. a., 1H), 7,58 (s, 1H), 7,51-7,35 (m, 3H), 6,97 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,83-4,51 (m, 3H), 4,19 (s. a., 1H), 3,92 (s, 4H), 3,71-3,46 (m, 3H), 3,28-2,97 (m, 2H), 2,09-1,93 (m, 2H), 1,16-0,94 (m, 3H), un proton oculto.
10 Ejemplo 28:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(4R)-4-etoxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-1- il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
H3C
>
H3C
O
imagen198
O
/)
N
H
N
F
imagen199
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 192 mg del compuesto del ejemplo 26 de acuerdo con 15 el procedimiento 8D dio, despues de la purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 27,7 mg del ejemplo 27 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 6,7 mg del ejemplo 28 (isomero 2 enantiomericamente puro). HPLC (procedimiento 8E): Tr = 15,9 min, >99,0 % de de (isomero 2 enantiomericamente puro),
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,96 min; EM (lEPpos): m/z = 492 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 8,99 (s. a., 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,35 (m, 3H), 6,96 (s, 1H), 6,81 (s, 20 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,90-4,50 (m, 3H), 4,24-4,07 (m, 1H), 3,92 (s, 5H), 3,65-3,47 (s. a., 3H), 3,24-3,05 (m, 1H), 2,24
1,87 (m, 2H), 1,13-1,01 (m, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 29:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(4R)-4-etoxi-2-(hidroxietil)pirrolidin-1-il]metanona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
H3C
)
H3C
‘O
imagen200
O
//
N
H
N
F
imagen201
Cl
Inicialmente se cargaron 171 mg (0,42 mmol, pureza: 89 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi- 1,3-benzoxazol-5-carbox^lico [ejemplo 13A, isomero enantiomericamente puro] y 100 mg (0,63 mmol) de 2-[(4R)-4- etoxipirrolidin-2-il]etanol [mezcla diastereomerica, 2 isomeros] en W,W-dimetilformamida (2,79 ml) y se agregaron 379 5 mg (511 pl, 2,93 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 191 mg (0,50 mmol) de HATU a TA y a continuacion se agito durante 2 h. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP- HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 145 mg (65 % d. t.).
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,97 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 9,08-8,94 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,52-7,32 (m, 3H), 6,95 (s. a., 1H), 6,80 10 (d, 1H), 5,24 (mc, 1H), 4,81-4,52 (m, 2H), 4,46 (s. a., 1H), 4,20 (s. a., 1H), 3,97-3,85 (m, 4H), 3,68-3,37 (m, 3H), 3,30
3,10 (m, 2H), 2,23-1,97 (m, 2H), 1,85-1,48 (m, 2H), 1,15-0,90 (m, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 30:
(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(4R)-4-etoxi-2-(2-hidroxietil)pirrolidin-1- il]metanona [isomero 1 enantiomericamente puro]
15
H3C
H3C
•O
imagen202
O
*
N
H
N
F
imagen203
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 140 mg del compuesto del ejemplo 29 de acuerdo con el procedimiento 9D dio 31,0 mg del ejemplo 30 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 73 mg del ejemplo 31 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 9E): Tr = 8,08 min, >99,0 % de de (isomero 1 enantiomericamente puro),
20 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,98 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 8,98 (d, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,50-7,35 (m, 3H), 6,95 (s, 1H), 6,79 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,81-4,52 (m, 2H), 4,44 (s. a., 1H), 4,20 (s. a., 1H), 3,92 (s, 4H), 3,64-3,35 (m, 5H), 2,27-2,02 (m, 2H),
1,70 (s. a., 2H), 1,06 (t, 3H), un proton oculto.
Ejemplo 31:
25 (2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(4R)-4-etoxi-2-(2-hidroxietil)pirrolidin-1-
il]metanona [isomero 2 enantiomericamente puro]
H3C
H3C
•o
imagen204
O
O
N
H
N
F
imagen205
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 140 mg del compuesto del ejemplo 29 de acuerdo con el procedimiento 9D dio 31,0 mg del ejemplo 30 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 73 mg del ejemplo 31 (isomero 2 enantiomericamente puro).
5 HPLC (procedimiento 9E): Tr = 10,2 min, >99,0 % de de (isomero 2 enantiomericamente puro),
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,96 min; EM (lEPpos): m/z = 506 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 8,99 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50-7,29 (m, 3H), 6,95 (s, 1H), 6,81 (s, 1H),
5,24 (mc, 1H), 4,85-4,51 (m, 2H), 4,46 (s. a., 1H), 4,20 (s. a., 1H), 3,98-3,84 (m, 4H), 3,59 (d, 3H), 3,29-3,08 (m, 2H), 2,21-1,97 (m, 2H), 1,82-1,72 (s. a., 1H), 1,66-1,47 (m, 1H), 0,99 (t, 3H), un proton oculto.
10 Ejemplo 32:
7-[(2-{[1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)carbonil]-6-metil-4,7-diazaespiro[2,5]octan-5- ona [mezcla diastereomerica, 2 isomeros]
imagen206
O
/)
N
H
N
F
Cl
Inicialmente se cargaron 100 mg (0,24 mmol, pureza: 89 %) de acido 2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi- 15 1,3-benzoxazol-5-carboxflico [ejemplo 13A, isomero enantiomericamente puro] y 100 mg (0,37 mmol) de trifluoroacetato de 6-metil-4,7-diazaespiro[2,5]octan-5-ona [racemato] en W,W-dimetilformamida (1,62 ml) y se agregaron 221 mg (297 pl, 1,71 mmol) de W,W-diisopropiletilamina. Posteriormente se agregaron 111 mg (0,29 mmol) de HATU a TA y a continuacion se agito durante 2 h. Sin procesamiento posterior, la solucion de reaccion se purifico por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua). Rendimiento: 82,6 mg (68 % d. t.).
20 CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,89 min; EM (lEPpos): m/z = 487 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,02 (dd, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,51-7,29 (m, 3H), 6,84 (d, 1H),
6,71 (s, 1H), 5,25 (mc, 1H), 4,96-4,46 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,69 (s. a., 1H), 3,21-2,99 (m, 1H), 1,42 (d, 3H), 0,900,30 (m, 4H).
Ejemplo 33:
25 7-[(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)carbonil]-6-metil-4,7-diazaespiro[2,5]octan-5- ona [isomero 1 enantiomericamente puro]
5
10
15
20
25
30
35
imagen207
O
/)
N
H
N
F
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 75,0 mg del compuesto del ejemplo 32 de acuerdo con el procedimiento 10D dio, despues de la repetida purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 15,9 mg del ejemplo 33 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 23,5 mg del ejemplo 34 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 10E): Tr = 4,68 min, >99,0 % de de (isomero 1 enantiomericamente puro),
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,91 min; EM (lEPpos): m/z = 487 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 9,02 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,49-7,33 (m, 3H), 6,84 (s, 1H),
6,71 (s, 1H), 5,25 (mc, 1H), 4,91-4,47 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,67 (s. a., 1H), 3,07 (s. a., 1H), 1,42 (d, 3H), 0,87-0,29 (m, 4H).
Ejemplo 34:
7-[(2-{[1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)carbonil]-6-metil-4,7-diazaespiro[2,5]octan-5- ona [isomero 2 enantiomericamente puro]
imagen208
O
/)
N
H
N
F
Cl
La separacion de los diastereomeros sobre una fase quiral de 75,0 mg del compuesto del ejemplo 32 de acuerdo con el procedimiento 10D dio, despues de la repetida purificacion por RP-HPLC preparativa (acetonitrilo/agua), 15,9 mg del ejemplo 33 (isomero 1 enantiomericamente puro) y 23,5 mg del ejemplo 34 (isomero 2 enantiomericamente puro).
HPLC (procedimiento 10E): Tr = 6,24 min, >99,0 % de de (isomero 2 enantiomericamente puro),
CL-EM (procedimiento 1A): Tr = 0,91 min; EM (lEPpos): m/z = 487 [M+H]+;
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 9,01 (d, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50-7,31 (m, 3H), 6,85 (s, 1H),
6,71 (s, 1H), 5,25 (mc, 1H), 4,94-4,48 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,10 (s. a., 1H), 1,42 (d, 3H), 0,90-0,27 (m, 4H), un proton oculto.
B) Evaluacion de la eficacia fisiologica
La adecuacion de los compuestos de acuerdo con la invencion para tratar trastornos tromboembolicos se puede demostrar en los siguientes sistemas de ensayo:
a) Descripciones del ensayo (in vitro)
a.1) Medicion de la inhibicion de trombina en tampon
Para determinar la inhibicion de trombina de las sustancias mencionadas anteriormente se construye un sistema de ensayo bioqmmico en el cual se usa la conversion de un sustrato de trombina para determinar la actividad enzimatica de la trombina humana. En este ensayo, la trombina escinde aminometilcumarina, lo cual se mide por fluorescencia, del sustrato peptico. Las determinaciones se llevan a cabo en placas de microtitulacion.
Las sustancias a ser ensayadas se disuelven en varias concentraciones en dimetilsulfoxido y se incuban durante 15 min con trombina humana (0,06 nmol/l disuelta en 50 mmol/l de tampon Tris [C,C,C-tris(hidroximetil)-aminometano], 100 mmol/l de cloruro de sodio, 0,1 % de BSA [albumina de suero bovino], pH 7,4) a 22 °C. Posteriormente se agrega el sustrato (5 pmol/l de Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC de la empresa Bachem). Despues de 30 min de incubacion, la muestra se excita a una longitud de onda de 360 nm y la emision se mide a 460 nm. Las emisiones
medidas de los lotes de ensayo con sustancia de ensayo se comparan con los lotes de control sin sustancia de ensayo (solo dimetilsulfoxido en lugar de la sustancia de ensayo en dimetilsulfoxido) y los valores de CI50 se calculan a partir de las relaciones de concentracion/actividad. Los datos de actividad representativos de este ensayo se muestran en la siguiente tabla 1 (en algunos casos como valores medios de determinaciones individuales):
5 Tabla 1
Ejemplo N.°
CI50 [nM] Ejemplo N.° CI50 [nM]
1
3,20 2 31,00
3
2,40 4 1,70
5
1,10 6 9,70
7
5,30 8 11,00
9
0,20 10 130,00
11
0,01 12 0,10
13
1,20 14 2,00
15
0,72 16 0,47
17
0,37 18 0,30
19
0,98 20 1,40
21
1,40 22 1,60
23
1,70 24 4,40
25
4,30 26 0,19
27
0,16 28 2,30
29
1,10 30 5,30
31
0,54 32 0,70
33
0,38 34 20,00
a.2) Determinacion de la selectividad
Para demostrar la selectividad de las sustancias con respecto a la inhibicion de trombina, se examinan las sustancias de ensayo respecto a su inhibicion de otras serina proteasas humanas, tales como factor Xa, factor XIIa, 10 Factor XIa, tripsina y plasmina. Para determinar la actividad enzimatica del factor Xa (1,3 nmol/l de Kordia), factor XIIa (10 nmol/l de Kordia), factor XIa (0,4 nmol/l de Kordia), tripsina (83 mU/ml de Sigma) y plasmina (0,1 pg/ml de Kordia), estas enzimas se disuelven (50 mmol/l de tampon Tris [C,C,C-tris(hidroximetil)aminometano], 100 mmol/l de cloruro de sodio, 0,1 % de BSA [albumina de suero bovino], 5 mmol/l de cloruro de calcio, pH 7,4) y se incuban durante 15 min con sustancia de ensayo en varias concentraciones en dimetilsulfoxido y con dimetilsulfoxido sin 15 sustancia de ensayo. La reaccion enzimatica luego se inicia adicionando los sustratos apropiados (5 pmol/l de Boc- Ile-Glu-Gly-Arg-AMC de Bachem para FXa, 5 pmol/l de H-Pro-Phe-Arg-AMC de Bachem para factor XIIa, 5 pmol/l de Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC de Bachem para tripsina, 5 pmol/l de Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC de Bachem para factor XIa, 50 pmol/l de MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC de Bachem para plasmina). Despues de un tiempo de incubacion de 30 min a 22 °C se mide la fluorescencia (excitacion: 360 nm, emision: 460 nm). Las emisiones medidas de los lotes 20 de ensayo con sustancia de ensayo se comparan con los lotes de control sin sustancia de ensayo (solo dimetilsulfoxido en lugar de la sustancia de ensayo en dimetilsulfoxido) y los valores de CI50 se calculan a partir de las relaciones de concentracion/actividad.
a.3) Determinacion de la actividad inhibidora de trombina de los inhibidores potenciales en muestras de plasma
25 Para determinar la inhibicion de trombina en muestras de plasma, se activa la protrombinasa existente en plasma mediante ecarina. La actividad de la trombina y/o su inhibicion por inhibidores potenciales se mide posteriormente por fluorescencia adicionando un sustrato.
Las sustancias a ser ensayadas se disuelven en varias concentraciones en dimetilsulfoxido y se diluyen con agua. En placas de fondo plano de 96 pocillos blancas se mezclan 20 jl de dilucion de sustancia con 20 jl de solucion de ecarina (reactivo de ecarina, empresa Sigma E-0504, concentracion final 20 mU por mezcla de reaccion) en tampon de Ca (200 mM de Hepes + 560 nM de cloruro de sodio + 10 mM de cloruro de calcio + 0,4 % de PEG) o con 20 jl 5 de tampon de Ca (como control sin estimular). Ademas se agregan 20 jl de sustrato de trombina fluorogenica (empresa Bachem I-1120, concentracion final 50 jmol/l) y 20 jl de plasma citrato (empresa Octapharma) y se homogeneiza bien. La placa se mide en un lector SpectraFluorplus usando un filtro de excitacion de 360 nm y un filtro de emision de 465 nm cada minuto durante 20 minutos. El valor de CI50 se determina cuando se alcanza aprox. el 70 % de la senal maxima (aprox. 12 min). Los datos de actividad representativos de este ensayo se muestran en 10 la siguiente tabla 2 (en algunos casos como valores medios de determinaciones individuales):
Tabla 2
Ejemplo N.°
CI50 [nM] Ejemplo N.° CI50 [nM]
1
21,0 2 31,0
3
11,6 4 9,8
5
4,8 6 16,5
7
11,4 8 25,3
9
14,3 10 1400
11
5,7 12 14,7
13
7,8 14 4,8
15
8,0 16 5,6
17
13,2 18 10,9
19
14,1 20 8,4
21
6,2 22 3,8
23
4,7 24 4,5
25
4,7 26 2
27
4,6 28 56
29
15 30 46
31
5 32 7,3
33
8,4 34 170
a.4) Ensayo de generacion de trombina (trombograma)
El efecto de las sustancias de ensayo en el trombograma (ensayo de generacion de trombina de acuerdo con
15 Hemker) se determina in vitro en plasma humano (Octaplas® de la empresa Octapharma). En el ensayo de
generacion de trombina de acuerdo con Hemker, la actividad de trombina en el plasma de coagulacion se determina midiendo los productos de escision fluorescentes del sustrato I-1140 (Z-Gly-Gly-Arg-AMC, Bachem). Para iniciar la reaccion de coagulacion se usan los reactivos de la empresa Thrombinoscope (reactivo PPP: 30 pM de factor tisular recombinante, 24 jM de fosfolfpidos en HEPES). La reaccion se lleva a cabo en presencia de concentraciones 20 variables de la sustancia de ensayo o el correspondiente disolvente. Ademas, se usa un calibrador de trombina de la empresa Thrombinoscope cuya actividad amidolftica es necesaria para calcular la actividad de trombina en una muestra de plasma.
El ensayo se lleva a cabo de acuerdo con las especificaciones del fabricante (Thrombinoscope BV): se incuban 4 jl de sustancia de ensayo o del disolvente, 76 jl de plasma y 20 jl de reactivo PPP o calibrador de trombina a 37 °C
25 durante 5 min. Despues de la adicion de 20 jl de 2,5 mM de sustrato de trombina en 20 mM de HEPES, 60 mg/ml
de BSA, 102 mM de cloruro de calcio, se mide la generacion de trombina cada 20 s durante un penodo de 120 min. La medicion se lleva a cabo mediante el uso de un fluorometro (Fluoroskan Ascent) de la empresa Thermo Electron, que esta equipado con un par de filtros 390/460 NM y un distribuidor. Usando el “software Thrombinoscope”, se
calcula el trombograma y se representa mediante un grafico. Se calculan los siguientes parametros: tiempo muerto, tiempo al pico, pico, ETP (potencial de trombina endogena) y la cola de inicio.
a.5) Determinacion de la actividad anticoagulante
La actividad anticoagulante de las sustancias de ensayo se determina in vitro en plasma humano, plasma de conejo 5 y plasma de rata. A este fin, se extrae sangre en una relacion de mezclado de citrato de sodio/sangre de 1:9 usando una solucion de citrato de sodio de 0,11 molar como patron. Inmediatamente despues de haberse extrafdo la sangre, se mezcla bien y se centrifuga a aprox. 4000 g durante 15 minutos. El sobrenadante se pipetea.
Se determina el tiempo de protrombina (PT, sinonimos: tiempo de tromboplastina, ensayo rapido) en presencia de concentraciones variables de sustancia de ensayo o el correspondiente disolvente mediante el uso del kit de ensayo 10 comercial (Neoplastin® de la empresa Boehringer Mannheim o Hemoliance® RecombiPlastin de la empresa Instrumentation Laboratory). Los compuestos de ensayo se incuban con el plasma a 37 °C durante 3 minutos. Luego se inicia la coagulacion por adicion de tromboplastina y se determina el momento del comienzo de la coagulacion. Se determina la concentracion de la sustancia de ensayo que efectua una duplicacion del tiempo de protrombina. Los datos de actividad representativos de este ensayo se muestran en la siguiente tabla 3 (en algunos casos como 15 valores medios de determinaciones individuales):
Tabla 3
Ejemplo N.°
CI50 [nM] Ejemplo N.° CI50 [nM]
3
1,8 7 1,9
11
1 12 1,5
13
1,4 15 1,1
21
1,3 25 1,1
27
1 33 0,8
Se determina el tiempo de trombina (TT) en presencia de concentraciones variables de la sustancia de ensayo o el correspondiente disolvente mediante el uso de un kit de ensayo comercial (reactivo de trombina de la empresa 20 Roche). Los compuestos de ensayo se incuban con el plasma a 37 °C durante 3 minutos. Luego se inicia la coagulacion por la adicion del reactivo de trombina y se determina el momento del comienzo de la coagulacion. Se determina la concentracion de la sustancia de ensayo que efectua una duplicacion del tiempo de trombina.
Se determina el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) en presencia de concentraciones variables de la sustancia de ensayo o el correspondiente disolvente mediante el uso de un kit de ensayo comercial (reactivo PTT de 25 la empresa Roche). Los compuestos de ensayo se incuban con el plasma y el reactivo PTT (cefalina, caolm) a 37 °C durante 3 minutos. Luego se inicia la coagulacion adicionando 25 mM de cloruro de calcio, y se determina el momento del comienzo de la coagulacion. Se determina la concentracion de la sustancia de ensayo que efectua una duplicacion del APTT.
a.6) Tromboelastografia (tromboelastograma)
30 La tromboelastografia se lleva a cabo con la ayuda del tromboelastografo ROTEM de la empresa Pentapharm y sus accesorios, copa y eje. La medicion se lleva a cabo en sangre completa extrafda de antemano en Monovette de citrato de sodio de la empresa Sarstedt. La sangre en los Monovette se mantiene en movimiento mediante el uso de un agitador y se preincuba a 37 °C durante 30 min.
Se prepara una solucion madre 2 molar de cloruro de calcio en agua. Esta se diluye 1:10 con una solucion de cloruro 35 de sodio acuoso al 0,9 %. Para la medicion se cargan inicialmente 20 pl de solucion de cloruro de calcio 200 mM en las copas (concentracion final 12,5 mM de cloruro de calcio). Se agregan 3,2 pl de sustancia o disolvente. La medicion se inicia adicionando 300 pl de sangre completa. Despues de la adicion, mediante la punta de la pipeta, la mezcla se aspira brevemente dentro de la pipeta y se libera nuevamente sin generar burbujas de aire. La medicion se lleva a cabo durante un penodo de 2,5 horas o se detiene cuando se establece la fibrinolisis. Para la evaluacion 40 se determinan los siguientes parametros: CT (tiempo de coagulacion/[s]), CFT (tiempo de formacion de la coagulacion/[s]), MCF (firmeza maxima del coagulo/[mm]) y el angulo alfa [°]. Los puntos de medicion se determinan cada 3 segundos y se representan mediante un grafico, con el eje y para MCF [mm] y el eje x para el tiempo [s].
a.7) Inhibicion de la trombina del factor de coagulacion unida al trombo
Los coagulos de sangre que se forman ya sea antes del inicio de un tratamiento con anticoagulantes, durante los 45 penodos libres de tratamiento o a pesar del tratamiento, contienen grandes cantidades de factores de coagulacion
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
que puedan favorecer la formacion progresiva del trombo. Estos factores de coagulacion se unen con firmeza al trombo y no pueden eliminarse por lavado. En ciertas situaciones clmicas, esto puede dar por resultado un riesgo para el paciente. Mediante el uso de los ensayos mencionados a continuacion, es posible demostrar, en trombos humanos, que tanto la trombina como FXa tienen actividad biologica (procoagulante).
Trombos formados in vitro
Los trombos se forman in vitro a partir de plasma humano y se examinan para ver la actividad de los factores de coagulacion ligados trombina y FXa. A este fin, se mezclan 300 pl de plasma, 30 pl de vesmulas lipfdicas y 30 pl de una solucion de cloruro de calcio acuoso en una placa 48 MTP y se incuban durante 30 min. Esta etapa y las siguientes etapas se llevan a cabo a 37 °C y con agitacion constante (300 r/min). Los trombos formados se transfieren a una nueva placa 48 MTP y se lavan dos veces durante 10 min en solucion de cloruro de sodio al 0,9 %, secandose los trombos en papel de filtro entre las etapas de lavado. El trombo se transfiere al tampon B (tampon Veronal de Owren, 1 % de BSA) y se incuba durante 15 min, se seca en papel de filtro y se incuba durante 30 min en sustancia de ensayo en varias concentraciones en tampon B. Los coagulos se lavan posteriormente dos veces como se ha descrito anteriormente. Se secan los trombos y se transfieren al tampon D: (240 pl de tampon Veronal de Owren, 1 % de BSA y 15,6 mM de cloruro de calcio) y se incuba con o sin 0,6 pM de protrombina durante 45 min. La reaccion se detiene con 75 pl de solucion de EDTA al 1 %. La actividad de trombina se mide de forma separada en el trombo en tampon A (7,5 mM de Na2EDTAx2H2O, 175 mM de cloruro de sodio, 1 % de BSA, pH 8,4) o en el sobrenadante de la ultima etapa. A este fin, se emplea el sustrato de trombina usado en a.1) en una concentracion final de 50 pM, y la fluorescencia resultante se mide en un lector de placas de fluorescencia (360/465 nm).
a. 8) influencia de los inhibidores de trombina sobre la trombolisis en plasma con bajo contenido en plaquetas
El efecto de las sustancias de ensayo sobre la trombolisis in vitro en plasma con bajo contenido en plaquetas se ensaya en presencia del activador tisular del plasminogeno (tPA). A este fin, con el control por medicion de turbidez (absorcion UV a 405 nm), inicialmente se forma un coagulo en una placa de microtitulacion en plasma humano con la adicion del factor tisular (tissue factor), se ajusta la disolucion del coagulo a una cierta ventana de tiempo adicionando simultaneamente el activador tisular del plasminogeno (tPA). La adicion simultanea de diferentes cantidades de la sustancia de ensayo puede dar por resultado un acortamiento del tiempo de trombolisis (tiempo entre la turbidez maxima y la vuelta a la lmea de base).
En una placa de microtitulacion de 384 pocillos, 0,7 pl de una mezcla de etanol/agua (1:1) que comprende varias concentraciones de las sustancias de ensayo, 1,7 pl de una solucion de trombomodulina humana (concentracion final 10 nM) y 1,7 pl de una solucion del activador tisular del plasminogeno humano (Actilyse®, concentracion final 3 nM) se agregan a 63 pl de plasma humano (Cruz Roja Alemana, corresponde al 90 % de plasma en el ensayo). La coagulacion se inicia adicionando 3,5 pl de una solucion que contiene factor tisular (recombiplastina 2G en una dilucion 1:100 en solucion 0,2 M de cloruro de calcio) a 37 °C. Inmediatamente despues se inicia la medicion de turbidez (medicion de absorcion UV a 405 nm) a intervalos de un minuto. El tiempo de trombolisis se calcula como el tiempo que transcurre desde la absorcion maxima hasta volver a la lmea de base.
b) Determinacion de la actividad antitrombotica (in vivo)
b. 1) Modelo de derivacion arteriovenosa y hemorragia (modelo de rata combinado)
Se anestesian ratas macho en ayuno (linaje: HSD CPB:WU) con un peso de 300-350 g usando Inactin (150-180 mg/kg). La formacion del trombo se inicia en una derivacion arteriovenosa de acuerdo con el procedimiento descrito por Christopher N. Berry et al., Br. J. Pharmacol. (1994), 113, 1209 1214. A este fin, se exponen la vena yugular izquierda y la arteria carotida derecha. Los dos vasos se conectan por una derivacion extracorporea mediante el uso de un tubo de polietileno (PE 60) con una longitud de 10 cm. En el medio, este tubo de polietileno se une a otro tubo de polietileno (PE160) con una longitud de 3 cm el cual contiene una hebra de nylon aspero y dispuesto para formar un bucle, para formar una superficie trombogena. La circulacion extracorporea se mantiene durante 15 minutos. La derivacion se elimina posteriormente y la hebra de nylon con el trombo se pesan inmediatamente. El peso de la hebra de nylon por si misma se determina antes de iniciarse el experimento.
Para determinar el tiempo de hemorragia, inmediatamente despues de abrir la circulacion de la derivacion, se corta la punta de la cola de las ratas en 3 mm usando una hojita de afeitar. La cola se coloca en solucion fisiologica que se mantiene a una temperatura de 37 °C, y se observa la hemorragia del corte durante un penodo de 15 minutos. Lo que se determina es el tiempo hasta que cesa la hemorragia durante al menos 30 segundos (tiempo de hemorragia inicial), el tiempo de hemorragia total durante un penodo de 15 minutos (tiempo de hemorragia acumulado) y la perdida de sangre cuantitativa mediante la determinacion fotometrica de la hemoglobina recolectada.
Antes de establecerse la circulacion extracorporea y del corte de la punta de la cola, se administran las sustancias de ensayo a los animales mientras estan despiertos por via intravenosa a traves de la vena yugular contralateral como un bolo simple o como bolo con infusion continua posterior o por via oral usando un tubo fanngeo.
b.2) Modelo del dano de cloruro de hierro (II) y hemorragia (modelo II combinado, rata)
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Se anestesian ratas macho (linaje: HsdRCCHan:Wist) con un peso de 300 g-325 g por via intraperitoneal con Inactin (180 mg/kg). La formacion del trombo se desencadena mediante el uso de cloruro de hierro(II) en la arteria carotida. A este fin se expone la arteria carotida derecha. Posteriormente se une la cabeza de la sonda del flujo, y se registra el flujo sangumeo durante 10 minutos. Luego se drenan la arteria y los alrededores. Se colocan parafilm (10 x 8 mm) y papel de filtro (10 x 16 mm doblado) debajo de la arteria carotida y se humedece con 20 pl de solucion de cloruro de hierro (II) (reactivo de tetrahidrato de cloruro de hierro (II) mas 99 %, Sigma, se prepara solucion en agua al 5 %). Se coloca un pequeno pedazo de papel de filtro sobre la parte superior de la arteria carotida y ademas se humedece con solucion de cloruro de hierro(II). La arteria carotida preparada de esta manera se cubre con un hisopo humedo y se deja durante 5 minutos. Posteriormente se quitan el parafilm y el papel filtro y la arteria se enjuaga con solucion de cloruro de sodio fisiologica. Posteriormente se une nuevamente la cabeza de sonda del flujo, y se registra el flujo sangumeo durante 30 minutos. Despues, la medicion se detiene y la seccion expuesta de la arteria carotida se aprieta con bridas tisulares y se extirpa. El trombo localizado en el vaso se quita del vaso con la ayuda de un par de pincitas y se pesa inmediatamente.
Para determinar el tiempo de hemorragia, despues de la lesion y la nueva union de la cabeza de sonda del flujo, se corta la punta de la cola de la rata en 3 mm usando una hojita de afeitar. La cola se coloca en agua que se mantiene a una temperatura de 37 °C, y se observa la hemorragia del corte durante un penodo de 15 minutos. Lo que se determina es el tiempo hasta que cesa la hemorragia durante al menos 30 segundos (tiempo de hemorragia inicial), el tiempo de hemorragia total durante un penodo de 15 minutos (tiempo de hemorragia acumulado) y la perdida de sangre cuantitativa mediante la determinacion fotometrica de la hemoglobina recolectada.
Las sustancias de ensayo se administran ya sea por via intravenosa a traves de la vena yugular como un bolo simple directamente antes del inicio del experimento o como un bolo (antes del inicio) con infusion continua posterior.
b.3) Modelo de reperfusion venosa y hemorragia en conejo (modelo combinado de conejo)
Se anestesian conejos machos de Nueva Zelanda con un peso de 2,8 - 3,4 kg mediante el uso de una inyeccion intramuscular en embolada de cetamina/Rompun. Posteriormente se afeita el animal en los lugares necesarios para la cirugfa. Se administra una infusion continua de anestesico (cetamina/Rompun) a traves de la vena auricular izquierda usando un cateter permanente. La vena femoral izquierda y derecha y la arteria femoral derecha se cateterizan con un tubo de polietileno (PE50). La vena yugular se expone cuidadosamente de modo que el vaso se tensione y se dane lo menos posible y no haya mas grasa en el vaso. Mediante el uso de un aparato adecuado para medir el flujo (Powerlab, Transonic TS420 incl. la cabeza de sonda de flujo), se registra el flujo en la vena yugular (Lab Chart Software). Antes del inicio del experimento, se extraen 1,4 ml de sangre citrada dos veces del conejo a traves de la arteria femoral, y se determina el tiempo de hemorragia basal en el borde de la oreja. Una vez que haya habido un flujo constante a partir de la vena yugular durante 10 min (regeneracion completa del vaso despues de la preparacion), se aprieta una seccion de 2 cm de la vena usando pequenas pincitas para el vaso. En una placa Petri, la sangre citrada extrafda anteriormente (300 pl) se mezcla con cloruro de calcio (0,25 M, 90 pl) y trombina (25 U/ml, 60 pl). Se extraen rapidamente 180 pl de la mezcla de sangre/cloruro de calcio/trombina en una jeringa de 1 ml y, a traves de una canula 27G, se inyecta dentro del segmento apretado del vaso. El sitio de inyeccion se aprieta con un par de pincitas durante un minuto de modo que no se pueda escapar la sangre. Dos minutos despues de la inyeccion del trombo, se administra la sustancia de ensayo como inyeccion en embolada e infusion a traves del cateter de la vena femoral izquierda. 14 minutos despues de la inyeccion del trombo, se administra el activador tisular del plasminogeno como inyeccion en embolada e infusion (Actilyse®, 20 pg/kg de bolo & 150 pg/kg/h de infusion) en la vena femoral derecha. 15 minutos despues de la inyeccion del trombo, se abre la estasis y se conecta la cabeza de sonda de flujo. Se registra el flujo sangumeo en el vaso durante 120 minutos, y el vaso se mantiene humedo con solucion de cloruro de sodio acuoso al 0,9 % caliente durante este tiempo. Despues de 105 minutos de reperfusion, se determina nuevamente el tiempo de hemorragia de la oreja. Al final del experimento, despues de 120 minutos de reperfusion, se eliminan 1,4 ml de sangre citrada, el animal se sacrifica sin dolor mediante una inyeccion en embolada de 1,5 ml de T61 y se determina el peso del trombo en la vena yugular. La sangre extrafda anteriormente y despues del experimento se usa para obtener plasma y para determinar el tiempo de coagulacion ex vivo.
Se calcula el area bajo la curva (AUC) de flujo de sangre/tiempo y se correlaciona con el area maxima obtenible, la cual se calcula a partir del flujo sangumeo antes del experimento y el tiempo (120 min). El area obtenible exclusivamente con el activador tisular del plasminogeno se sustrae del area obtenida usando la respectiva sustancia o dosificacion. El area resultante es una medida de la mejora de reperfusion mediante la sustancia que va a someterse a ensayo (tabla 4).
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Aumento de la reperfusion (area de flujo sangumeo/tiempo) despues del tratamiento con
compuesto del ejemplo 15 [iny. en embolada 0,33 mg/kg; infusion continua 0,43 mg/kg/h]
rivaroxaban [iny. en embolada 0,08 mg/kg; infusion continua 0,09 mg/kg/h] combinacion del compuesto del ejemplo 15 [iny. en embolada 0,33 mg/kg; infusion continua 0,43 mg/kg/h] con rivaroxaban [iny. en embolada 0,08 mg/kg; infusion continua 0,09 mg/kg/h]
12,2 %
13,0 % 49,5 %
efecto insignificante (p > 0,05)
efecto insignificante (p > 0,05)
efecto significativo (p < 0,05)
c) Determinacion de farmacocinetica
c.1) Farmacocinetica tras la administracion intravenosa de la sustancia de ensayo
Se anestesian ratas macho Wistar y se coloca un cateter en la vena yugular. Al dfa siguiente se administra una dosis definida de la sustancia de ensayo como solucion mediante inyeccion en la vena de la cola. Se recolectan muestras de sangre mediante el cateter durante un penodo de 7 horas (9 puntos en el tiempo).
Se administra una dosis definida de la sustancia de ensayo a Beagles hembra como una solucion a traves de la vena cefalica como una infusion de 15 min. Se recolectan muestras de sangre mediante un cateter en la vena cefalica durante un penodo de 7 horas (12 momentos).
La sangre se centrifuga en tubos de heparina. Para precipitar la protema, se agrega acetonitrilo a la muestra de plasma y se centrifuga. La sustancia de ensayo se cuantifica en el sobrenadante mediante CL/EM-EM. Las concentraciones de plasma de la sustancia de ensayo determinadas se usan para calcular los parametros farmacocineticos tales como AUC (area debajo de la curva de concentracion de plasma/tiempo, Vss (volumen de distribucion), Cmax (concentracion mas alta de la sustancia de ensayo en el plasma despues de la administracion), ti/2 (semivida) y CL (aclaramiento total de la sustancia de ensayo del plasma). Para calcular el aclaramiento en sangre, se determina la distribucion de sangre/plasma mediante la incubacion de la sustancia de ensayo en sangre. Despues de la eliminacion del plasma por centrifugacion, se determina la concentracion de la sustancia de ensayo en el plasma mediante CL/EM-Em.
c.2) Farmacocinetica tras la administracion peroral de la sustancia de ensayo
Se anestesian ratas macho Wistar, y se coloca un cateter en la vena yugular. Al dfa siguiente, se administra por via peroral una dosis definida de la sustancia de ensayo. Se recolectan muestras de sangre mediante el cateter durante un penodo de 24 horas (9 momentos).
Se administra por via oral una dosis definida de la sustancia de ensayo a Beagles hembra. Se recolectan muestras de sangre mediante un cateter en la vena cefalica durante un penodo de 24 horas (9 momentos).
La sangre se centrifuga en tubos de heparina. Para precipitar la protema, se agrega acetonitrilo a la muestra de plasma y se centrifuga. La sustancia de ensayo se cuantifica en el sobrenadante mediante CL/EM-EM. Las concentraciones de plasma de la sustancia de ensayo determinadas se usan para calcular los parametros farmacocineticos tales como AUC (area debajo de la curva de concentracion de plasma/tiempo), Cmax (concentracion mas alta de la sustancia de ensayo en el plasma despues de la administracion), ti/2 (semivida) y F (biodisponibilidad)
c.3) Ensayo de permeabilidad de Caco-2
La permeabilidad in vitro de la sustancia de ensayo a traves de una monocapa celular Caco-2 se determina mediante el uso de un sistema in vitro establecido para predecir la permeabilidad a traves del tubo gastrointestinal [1]. Las celulas Caco-2 (n.° ACC 169, DSMZ, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, Braunschweig) se siembran en placas de 24 pocillos y se cultivan durante 14 a 16 dfas. La sustancia de ensayo se disuelve en DMSO y se diluye hasta una concentracion de 2 pM en tampon de transporte (HBSS, solucion salina tamponada Hanks, Gibco/Invitrogen, suplementada con glucosa (concentracion final 19,9 mM) y HEPES (concentracion final 9,8 mM)). Para determinar la permeabilidad desde el apical hasta el basolateral (Papp A-B), se agrega la sustancia de ensayo en el lado apical y se agrega tampon de transporte en el lado basolateral de la monocapa celular. Para determinar la permeabilidad desde el basolateral hasta el apical (Papp B-A), se agrega la sustancia de ensayo en el lado basolateral y se agrega tampon de transporte en el lado apical de la monocapa celular. Al inicio del experimento, se toman muestras del compartimiento donante para determinar el equilibrio de la masa. Despues de un tiempo de incubacion de 2 horas a 37 °C, se toman muestras de los dos compartimientos. Las
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muestras se cuantifican por CL-EM/EM y se calculan los coeficientes de permeabilidad. Para cada monocapa celular se determina la permeabilidad de Lucifer Yellow para asegurar la integridad de la capa celular. En cada lote celular se determina conjuntamente la permeabilidad de atenolol (marcador para permeabilidad baja) y sulfasalazina (marcador para excrecion activa) para el control de calidad de las celulas.
Bibliograffa: Artursson, P. and Karlsson, J. (1991). Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells. Biochem. Biophys, 175 (3), 880-885.
c.4) Determinaciones de aclaramiento in vitro con hepatocitos
Se llevan a cabo incubaciones con hepatocitos primarios frescos a 37 °C en un volumen total de 1,5 ml con un robot Janus® modificado (Perkin Elmer) mientras se agita. Normalmente, las incubaciones contienen 1 millon de celulas hepaticas vivas / ml, ~ 1 pM de sustrato y 0,05 M de tampon fosfato de potasio (pH = 7,4). La concentracion de ACN final en la incubacion es < 1 %.
Se extraen alfcuotas de 125 pl de la incubacion despues de 2, 10, 20, 30, 50, 70 y 90 min y se transfieren a placas de filtro de 96 pocillos (0,45 pm de PTFE hidrofilo de union baja; Millipore: Multiscreen Solvinert). Cada uno de estos contienen 250 pl de ACN para detener la reaccion. Despues de la centrifugacion, los filtrados se analizan por EM/EM (habitualmente API 3000).
Los aclaramientos (CL) in vitro se calculan a partir de las semividas de la degradacion de la sustancia, mediante el uso de las siguientes ecuaciones:
> CL'intrinseco [ml/(minkg)] = (0,693 / in vitro t-i/2 [min]) ■ (peso del hngado [g hngado / kg de peso corporal]) ■ (numero de celulas [1,1-10A8] / peso del fngado [g]) / (numero de celulas [1-10A6] / volumen de incubacion [ml])
CLsangre se calcula sin tomar en cuenta la fraccion libre ("modelo bien agitado no restringido") por la siguiente ecuacion:
> CLsangre bien agitado [l/(hkg)] = (Qh [l/(hkg)]CL intrinseco [l/(hkg)]) / (Qh [l/(h kg)] + CL intrinseco [l/(hkg)])
Los factores de extrapolacion espedficos de la especie usados para el calculo se resumen en la siguiente tabla 5:
Tabla 5
macho / hembra
Raton m Raton h Rata m/h Perro m/h Macaco h Hombre m/h
Numero de celulas / g hngado [millones de celulas]
110 110 110 110 110 110
Hfgado [g] / kg de peso corporal
50 43 32 39 30 21
Flujo sangumeo en hngado [l/(hkg)]
5,4 5,4 4,2 2,1 2,5 1,3
Los valores Fmax que establecen la maxima biodisponibilidad posible - basada en la extraccion hepatica - se calculan de la siguiente forma:
Fmax bien agitado [%] = (1-(CLsangre bien agitado [l/(h kg)] / Qh [l/(h kg)])) ■ 100 c.5) Ensayo de inhibicion de CYP
Las propiedades inhibidoras de un compuesto activo sobre los citocromas P450 (CYP) del cuerpo humano pueden implicar extensos efectos clmicos (interacciones del farmaco) porque estas enzimas degradan (metabolizan) la mayona de los medicamentos recetados. En particular en esto estan involucradas las isoenzimas CYP de las familias 1A y 2C, CYP2D6 y, con una proporcion de casi el 50 % la CYP3A4. A fin de excluir o minimizar estas posibles interacciones del farmaco (interacciones farmaco-farmaco, DDI), se investiga la capacidad de las sustancias para poder inhibir la CYP1A2, CYP2C8, CYP2C9, CYP2D6 y CYP3A4 en humanos mediante el uso de microsomas hepaticos humanos (grupo de varios individuos). Esto tiene lugar mediante la medicion de metabolitos espedficos de la isoforma CYP formados a partir de sustratos estandares tales como, por ejemplo, fenacetina, amodiquina, diclofenaco, dextrometorfano, midazolam y testosterona. Los efectos inhibidores se investigan en seis concentraciones diferentes de los compuestos de ensayo (1,5, 3,1, 6,3, 12,5, 25 y 50 pM como concentracion maxima o 0,6, 1,3, 2,5, 5, 10 y 20 pM como concentracion maxima), en comparacion con la extension de la formacion del metabolito espedfico de la isoforma CYP de los sustratos estandares en ausencia de los compuestos de ensayo, y se calculan los correspondientes valores de CI50. Los inhibidores estandares espedficos de la isoforma CYP tales como, por ejemplo, furafilina, montelukast, sulfafenazol, fluoxetina y ketoconazol sirven como control de los resultados obtenidos. A fin de obtener las indicaciones de los posibles inhibidores basados en el mecanismo
(MBI) sobre CYP3A4, los microsomias hepaticos humanos se incuban en presencia del inhibidor que va a investigarse durante 30 minutos antes de la adicion de midazolam o testosterona como sustratos estandares de CYP3A4. Una reduccion del valor CI50 obtenido por la comparacion con la mezcla sin preincubacion sirve como indicador de una inhibicion basada en el mecanismo. Mibefradilo sirve como control positivo.
5 Realizacion: Las incubaciones de los sustratos estandares con microsomas hepaticos humanos (14-100 pg/ml) en presencia del compuesto de ensayo (como inhibidor potencial) se llevan a cabo a 37 °C en placas de 96 pocillos sobre una estacion de trabajo (Tecan, Genesis; Hamiltion, MICROLAB STARLET). Los tiempos de incubacion son de 10-15 minutos. Los compuestos de ensayo se disuelven preferentemente en acetonitrilo (1,0, 2,0, o 2,5, 5,0 mM de solucion madre). Las placas de 96 pocillos se preparan mediante la adicion secuencial de una solucion madre de 10 NADP+, EDTA, glucosa-6-fosfato y glucosa-6-fosfato dehidrogenasa en tampon de fosfato (pH 7,4), el compuesto de ensayo y una solucion de sustrato estandar y microsomas hepaticos humanos en tampon fosfato (pH 7,4). El volumen total es de 200 pl. Ademas en la placa de 96 pocillos se localizan las correspondientes incubaciones control con y sin inhibidor estandar. Despues del tiempo de incubacion respectivo, las incubaciones se detienen por la adicion de 100 pl de acetonitrilo que comprende un patron interno adecuado. Las protemas precipitadas se eliminan 15 por centrifugacion (3000 rpm, 10 minutos, 10 °C). Los sobrenadantes resultantes de las respectivas placas se combinan en una placa y se analizan por CL-EM/EM. A partir de los datos de medicion obtenidos se generan los valores de CI50 y se usan para evaluar el potencial inhibidor del compuesto de ensayo.
c. 6) Ensayo in vitro celular para determinar la induccion de las enzimas citocromicas que degradan el farmaco (CYP) en hepatocitos humanos primarios.
20 La induccion enzimatica es una propiedad no deseada de un farmaco que cuestiona el uso seguro y amplio del principio activo. Una consecuencia de la induccion enzimatica es una degradacion acelerada (metabolizacion) de los farmacos en el tngado. La ingesta combinada de un inductor enzimatico y otros medicamentos tales como, por ejemplo, inmunosupresores, coagulantes u otros anticonceptivos pueden conducir a la inefectividad completa de los farmacos.
25 El objetivo de la investigacion es proporcionar sustancias que no tengan esta interaccion del farmaco no deseada. Los inductores enzimaticos se identifican con la ayuda de hepatocitos primarios humanos en cultivo a largo plazo. Para cultivar las celulas, los hepatocitos se colocan en placa sobre una capa de colageno I (densidad 100000 celulas/cm2), y las celulas desarrolladas se cubren con una segunda capa de colageno (procedimiento sandwich). (Kern A, Bader A, Pichlmayr R, and Sewing KF, Biochem Pharmacol., 54, 761-772 (1997)). Para obtener el efecto de 30 las sustancias de ensayo sobre la regulacion de las enzimas hepaticas, los hepatocitos se incuban con los principios activos durante varios dfas en cultivo a largo plazo.
Desarrollo del ensayo: Despues de una fase de regeneracion de dos dfas, las celulas se tratan en medio E de Williams, 10 % de FCS, prednisolona, insulina, glucagon y L-glutamina, penicilina y estreptomicina con las sustancias de ensayo. A este fin, se preparan soluciones madre de los principios activos con una concentracion de 1 35 mg/ml en acetonitrilo o metanol y se pipetean en 8 etapas de dilucion (1:3) en medio de cultivo celular a los cultivos celulares y se incuban en una incubadora celular (96 % de humedad atmosferica, 5 % v/v de dioxido de carbono, 37 °C) durante aprox. 5 dfas. El medio de cultivo celular se cambia diariamente. Despues de este tiempo de incubacion, los cultivos celulares se incuban con sustratos espedficos del citocromo P450(CYP) para determinar la actividad de las enzimas hepaticas CYP1A2, CYP3A4, CYp2B6 y CYP2C19. Las muestras detenidas o bien se analizan 40 directamente o se almacenan a -20 °C hasta el analisis.
A este fin, los medios de los cultivos celulares se cromatograffan usando columnas de fase inversa C18 adecuadas y mezclas variables de acetonitrilo y 10 mM de formiato de amonio (HPLC-EM/EM).
Los datos de espectrometna de masas sirven para cuantificar la produccion de sustrato y, a partir de ahf, para calcular las actividades de la enzima hepatica. Los principios activos que tienen propiedades desfavorables con 45 respecto a la regulacion de la enzima hepatica no se investigan mas.
d) Purificacion, cristalizacion y determinacion de la estructura de monocristal de a-trombina humana (=FIIa) en un complejo con el ejemplo 15
d. 1) Cristalizacion de a-trombina humana
La protema a-trombina se adquirio de la empresa Haemochrom (Uniprot P00734, aminoacidos 328 a 622). Un vial 50 .con 5000 U (~1,7 mg) de las protemas se ajusta hasta una concentracion de aprox. 10 mg/ml usando 20 mM de tampon fosfato de pH 7,5, 350 mM de tampon de cristalizacion de cloruro de sodio y 2 mM de benzamidina. La concentracion de la a-trombina se verifica mediante el uso de un espectrofotometro NanoDrop® ND-1000. Un fragmento de hirudina (adquirido de la empresa Bachem) se agrega a la solucion de a-trombina en una relacion molar de 1:4. La mezcla se incuba a 4 °C durante al menos 2 horas. Los monocristales medibles se pueden obtener 55 a 10 °C usando el procedimiento de gota pendiente. A este fin, se pipetean conjuntamente volumenes identicos de la solucion protemica y la solucion de deposito (0,02 M de tampon fosfato de pH 7,5, 27 % de PEG 8000, 100 mM de solucion de cloruro de sodio) y se agregan germenes de cristal de a-trombina. En la mayona de los casos, los cristales de a-trombina se forman durante toda la noche.
Una solucion de 50 mM de DMSO del ejemplo 15 se diluyo con el tampon de deposito hasta una concentracion final de 5 mM. Se transfirieron cristales de a-trombina dentro de 2 jl de esta solucion y se dejaron en esta solucion durante toda la noche (= empapamiento).
5 d.3) Recoleccion y procesamiento de datos
El cristal empapado se coloco muy brevemente en una solucion con 0,02 M de tampon fosfato a pH 7,5, 27 % de PEG 8000, 100 mM de solucion de cloruro de sodio y 15 % de glicerol y posteriormente se congelo por choque en nitrogeno lfquido. El cristal se midio en un Sistema Bruker Proteum a l00K y una longitud de onda de 1,5418A. Como aparato detector sirvio un contador CCD. Los datos se integraron mediante el uso del programa SAINT y se 10 modifico la escala mediante el uso del programa SADABS (ambos contenidos en el paquete del programa Bruker Proteum). El cristal se disperso hasta una resolucion de 1,6A y cristalizo en el grupo espacial monoclmico C2 con aristas de celda a = 69,166A, b = 70,343A y c = 71,372A con una molecula en la unidad asimetrica.
d.4) Determinacion y refinamiento de la estructura
La estructura de la a-trombina pudo resolverse mediante el uso del procedimiento de reemplazo molecular 15 (molecular replacement) con otra estructura interna como modelo de busqueda y el programa PHASER (paquete del
programa cCP4). El ejemplo 15 se genero como modelo 3D con la ayuda del programa Discovery Studio, y se genero un archivo de parametros usando el programa PRODRG. El ejemplo 15 se coloco de forma manual en la densidad de electrones y se minimizo en la densidad de electrones en el programa COOT. Otro refinamiento se llevo a cabo de forma iterativa usando los programas REFMAC5.5 y COOT (ambos paquetes del programa CCP4) para 20 dar un valor R1 final del 20,52 % y un valor Rfree del 24,73 %. Los datos y la estadfstica de refinamiento se resumen en la tabla 6.
Tabla 6: Recoleccion de datos y estadfstica de refinamiento para la a-trombina humana en un complejo con el
ejemplo 15.
Longitud de onda
1,5418 A
Resolucion (capa externa)
71,27-1,59 (1,68-1,59) A
Reflexiones (observadas/promediadas)
130734/40347
Completituda
89,2 % (90,2 %)
I/sa
12,95 (2,85)
Rmergeab
0,064 (0,27)
Grupo espacial
C2
Parametros de celda
a
69,166A
b
70,343A
c
71,372A
b
100,28°
Rcrystc
0,2052
Rfreed
0,2473
Factor de temperatura Wilson
14,3 A 2
Longitudes de union RMSDe
0,023 A
Angulo de union RMSD
2,212°
a Los valores entre parentesis son para la capa de resolucion mas externa
b Rmerge = Zhkl ||hkl - <|hkl>| / Zhkl <|hkl>)
Ihkl es la intensidad del reflejo hkl y <Ihkl> es el valor medio de las
intensidades medidas multiples veces
c Rcryst = Z |Fobs - Fcalc| / Z Fobs; Fobs y Fcalc son los factores estructurales observados y calculados.
d 5 % de conjunto de ensayo
e RMSD, desviacion de la rafz cuadrada media del conjunto de parametros de la geometna de union
ideal.
25 d.5) Determinacion de la estructura absoluta del ejemplo 15 en a-trombina humana
El complejo de a-trombina con el ejemplo 15 cristaliza con una molecula en la unidad asimetrica. La estereoqmmica del ejemplo 15 se determina ineqmvocamente por el conocimiento de la estereoqmmica de la protema a-trombina. En el ejemplo 15, todos los estereocentros (C13, C28 y C31) tienen ineqmvocamente la configuracion S.
Estructura del Ejemplo 15: (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2- 30 hidroxietil)-2-metilmorfolin-4-il]metanona con la siguiente formula
5
10
15
20
25
30
imagen209
O
/)
N
H
N
vC13,
W /
Cl
F
C) Ejemplos de realizacion de composiciones farmaceuticas
Las sustancias de acuerdo con la invencion se pueden convertir en preparaciones farmaceuticas de la siguiente forma:
Comprimido:
Composicion:
100 mg del compuesto del ejemplo 1, 50 mg de lactosa (monohidrato), 50 mg de almidon de ir^z, 10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (empresa BASF, Alemania) y 2 mg de estearato de magnesio.
Peso del comprimido 212 mg. Diametro 8 mm, radio de curvatura 12 mm.
Preparacion:
La mezcla del compuesto del ejemplo 1, lactosa y almidon se granula con una solucion al 5 % (m/m) del PVP en agua. Despues del secado, el granulado se mezcla con el estearato de magnesio durante 5 min. Esta mezcla se comprime con una prensa de preparacion de comprimidos convencional (vease anteriormente el formato del comprimido).
Suspension oral:
Composicion:
1000 mg del compuesto del ejemplo 1, 1000 mg de etanol (96 %), 400 mg de Rhodigel (goma xantana) (empresa FMC, EE.UU.) y 99 g de agua.
Una monodosis de 100 mg del compuesto de acuerdo con la invencion corresponde a 10 ml de suspension oral. Preparacion:
El Rhodigel se suspende en etanol, se anade el compuesto del ejemplo 1 a la suspension. El agua se adiciona mientras se agita. La mezcla se agita durante aprox. 6 horas hasta que se completa el hinchamiento del Rhodigel.
Solucion administrable por via intravenosa:
Composicion:
1 mg del compuesto del ejemplo 1, 15 g de polietilenglicol 400 y 250 g de agua para inyectables.
Preparacion:
El compuesto del ejemplo 1 se disuelve junto con polietilenglicol 400 mediante agitacion en el agua. La solucion se esteriliza por filtracion (diametro del poro 0,22 pm) y se distribuye en condiciones asepticas en botellas de infusion esterilizadas por calor. Estas ultimas se cierran con tapones de infusion y tapas corona.

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    1. Compuesto de la formula
    en la cual
    imagen1
    R1 representa un grupo de las formulas
    R4
    X'
    R2
    imagen2
    imagen3
    R14
    imagen4
    en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
    X representa un atomo de oxfgeno, un atomo de azufre o CH-R6, en donde
    R6 representa hidroxi,
    R2 representa hidrogeno, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 o fenilo,
    en donde alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por hidroxi, metoxi, ciano, hidroxicarbonilo, aminocarbonilo, metilsulfonilo, difluorometoxi y trifluorometoxi, o
    en donde alquilo y cicloalquilo pueden estar sustituidos con 1 a 3 sustituyentes fluor,
    R3 representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
    o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, un anillo de ciclobutilo o un anillo de ciclopentilo,
    en donde el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi,
    R4 representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R5 representa alquilo C1-C4,
    o R4 y R5 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, un anillo de ciclobutilo o un anillo de ciclopentilo,
    en donde el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi,
    R7 representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
    en donde alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes fluor,
    R8 representa hidrogeno,
    R9 representa hidrogeno o alquilo C1-C6,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o ciano, o
    en donde alquilo puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes fluor,
    R10 representa hidrogeno,
    R11 representa alquilo C1-C4,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R12 representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
    o R11 y R12 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclopropilo, un anillo de ciclobutilo o un anillo de ciclopentilo,
    en donde el anillo de ciclobutilo y el anillo de ciclopentilo pueden estar sustituidos con un sustituyente hidroxi,
    R13 representa hidroximetilo o hidroxietilo,
    R14 representa metoxi o etoxi,
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
  2. 2. Compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque R1 representa un grupo de las formulas
    en las que * es el punto de union al grupo carbonilo,
    X representa un atomo de oxfgeno o CH-R6, en donde
    R6 representa hidroxi,
    R2 representa hidrogeno, alquilo C1-C4 o cicloalquilo C3-C6,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi o hidroxicarbonilo,
    y
    en donde cicloalquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R3 representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
    o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en donde el anillo de ciclobutilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R4 representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R5 representa alquilo C1-C4,
    R7 representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
    R8 representa hidrogeno,
    R9 representa hidrogeno o alquilo C1-C4,
    en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R10 representa hidrogeno,
    R11 y R12 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, R13 representa hidroximetilo o hidroxietilo,
    R14 representa metoxi o etoxi,
    o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
  3. 3. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque R1 representa un grupo de la formula
    en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
    X representa un atomo de oxfgeno,
    R2 representa metilo, etilo o ciclobutilo,
    en donde metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi, y
    en donde ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R3 representa hidrogeno,
    R4 representa hidrogeno o metilo, y R5 representa metilo, o R2 representa metilo,
    R3 representa hidrogeno o metilo,
    R4 representa metilo, etilo o propilo, en donde metilo, etilo y propilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi, y R5 representa metilo,
    o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo,
    imagen5
    o
    o
    o
    imagen6
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    en donde el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R4 representa hidrogeno o metilo, y
    R5 representa metilo,
    o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
  4. 4. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque R1 representa un grupo de las formulas
    en las que * es el punto de union al grupo carbonilo,
    X representa un atomo de oxfgeno,
    R2 representa metilo o etilo,
    en donde metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi,
    R3 representa hidrogeno,
    o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en donde el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R4 representa hidrogeno o metilo,
    R5 representa metilo,
    R7 representa hidrogeno o metilo,
    R8 representa hidrogeno,
    o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
  5. 5. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R1 representa un grupo de la formula
    en la que * es el punto de union al grupo carbonilo,
    X representa un atomo de oxfgeno,
    R2 representa metilo o etilo, en donde metilo y etilo estan sustituidos con un sustituyente hidroxi,
    R3 representa hidrogeno,
    o R2 y R3 junto con el atomo de carbono al cual estan unidos forman un anillo de ciclobutilo, en donde el anillo de ciclobutilo esta sustituido con un sustituyente hidroxi,
    R4 representa hidrogeno o metilo,
    R5 representa metilo,
    o una de las sales del mismo, los solvatos del mismo o los solvatos de las sales del mismo.
  6. 6. (2-{[(1S)-1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metil-morfolin- 4-il]metanona de acuerdo con la reivindicacion 1 con la siguiente formula
    imagen7
    o
    imagen8
    imagen9
    O
    /)
    N
    imagen10
    F Cl
    o una de las sales de la misma, los solvatos de la misma o los solvatos de las sales de la misma.
  7. 7. (2-{[(1S)-1-(3-Clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-metil-morfolin- 4-il]metanona de acuerdo con la reivindicacion 1 con la siguiente formula
    5
    imagen11
    O
    /)
    N
    imagen12
    F Cl
  8. 8. Procedimiento para preparar un compuesto de la formula (I) o una de las sales del mismo, solvatos del mismo o solvatos de las sales del mismo de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque un compuesto de la formula
    imagen13
    10 se hace reaccionar con un compuesto de la formula
    R1-H (IN),
    en la cual
    R1 tiene el significado que se dio en la reivindicacion 1
    15 con reactivos de deshidratacion.
  9. 9. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
  10. 10. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, usando una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de
    20 acuerdo con la invencion.
  11. 11. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en un procedimiento para el
    tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades tromboembolicas, usando una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con la invencion.
  12. 12. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de smdrome coronario agudo (SCA), tromboembolias venosas, trombosis venosas, en
    5 particular en venas profundas de la pierna y venas renales, embolias pulmonares, accidente cerebrovascular y/o profilaxis de trombosis en el contexto de intervenciones quirurgicas, en particular en el contexto de intervenciones quirurgicas en pacientes que padecen cancer, usando una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con la invencion.
  13. 13. Medicamento que contiene un compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5 en combinacion con 10 un excipiente inerte, no toxico y farmaceuticamente adecuado.
  14. 14. Medicamento de acuerdo con la reivindicacion 13 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades tromboembolicas.
  15. 15. Combinacion que contiene
    15
    (A) (2-{[(1S)-1-(3-clorofenil)-2-fluoroetil]amino}-7-metoxi-1,3-benzoxazol-5-il)[(2S,5S)-5-(2-hidroxietil)-2-
    metilmorfolin-4-il]metanona con la siguiente formula
    imagen14
    H3C
    OH
    20
    o una de las sales de la misma, los solvatos de la misma o los solvatos de las sales de la misma. y
    (B) 5-cloro-W-({(5S)-2-oxo-3-[4-(3-oxo-4-morfolinil)-fenil]-1,3-oxazolidin-5-il}-metil)-2-tiofeno-carboxamida
    (rivaroxaban) con la formula estructural
    Cl
    imagen15
    O
    O
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