ES2635308T3

ES2635308T3 - Pancreatina con contenido viral reducido

Info

Publication number: ES2635308T3
Application number: ES10178590.5T
Authority: ES
Inventors: Martin Frink; Claus-Juergen Koelln; Heinz Blume; Michael Rust
Original assignee: Abbott Laboratories GmbH
Current assignee: Abbott Laboratories GmbH
Priority date: 2005-07-29
Filing date: 2006-07-27
Publication date: 2017-10-03
Anticipated expiration: 2026-07-27
Also published as: US10704037B2; MX2008000850A; EP1913138A1; AU2006274835A1; CN101233229A; BRPI0614914A2; NO20171131A1; US20200299669A1; HUE034739T2; UA93384C2; NO342419B1; IL189103A0; KR101555058B1; CN101233229B; JP2009502876A; HK1120288A1; NO20081087L; CA2616943C; RU2008107261A; EP2278002B1

Abstract

Una pancreatina que con bajo contenido de contaminantes virales, obtenible mediante un proceso que comprende las etapas de (a) precalentar una forma dispersada de pancreatina que contiene uno o más disolventes a una temperatura de 85°C a 100°C, y (b) calentar continuamente la forma dispersada de pancreatina a una temperatura de 85°C a 100°C durante un período de 18 horas a 30 horas, y obtener un contenido total de disolventes en la forma dispersada de pancreatina igual o menor que 3,5% en peso en cualquier punto durante la etapa (b) del proceso, en donde la forma dispersada de pancreatina se selecciona entre polvos, pélets, micropélets, microesferas, gránulos y productos granulados, en donde el nivel de título de cualquier contaminante viral presente en la pancreatina dispersada después del calentamiento es al menos 1000 veces menor que el nivel de título de dicho contaminante viral presente en la pancreatina dispersada antes del calentamiento, y en donde la actividad lipasa de la pancreatina después del calentamiento es al menos 50% de la actividad lipasa antes del calentamiento.

Description

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DESCRIPCION

Pancreatina con contenido viral reducido

La presente invencion se refiere a pancreatina en la que la concentracion de contaminantes virales se reduce calentando la pancreatina, y a composiciones farmaceuticas de la misma. La pancreatina es una sustancia que deriva de glandulas pancreaticas de mairnfero y comprende diferentes enzimas digestivas tales como lipasas, amilasas y proteasas. La pancreatina se ha utilizado para tratar la insuficiencia pancreatica exocrina, que a menudo se asocia con fibrosis qmstica, pancreatitis cronica, post-pancreatectomfa, cirugfa de bypass post-gastrointestinal (p. ej., gastroenterostom^a con Billroth II) y obstruccion ductal de neoplasia (p. ej. del pancreas o conducto biliar comun). Para la aplicacion de pancreatina en productos farmacologicos se prefiere mantener sustancialmente el alto nivel intrmseco de actividad de las diferentes enzimas digestivas. Sin embargo, Estas enzimas pueden estar sujetas a degradacion, p.ej. durante el almacenamiento, y son particularmente sensibles a temperaturas elevadas. Por lo tanto, la pancreatina requiere condiciones cuidadosamente controladas durante el proceso global de manipulacion, fabricacion y almacenamiento.

Debido al origen animal de la pancreatina, esta puede comprender adicionalmente otros componentes que no son deseados tales como uno o mas contaminantes biologicos, p.ej. contaminantes virales. Durante mas de 100 anos de comercializacion de productos farmaceuticos que contienen pancreatina, no se ha referido ningun caso en el que los pacientes hayan sido realmente afectados por pancreatina contaminada por ningun virus. Sin embargo, las empresas productoras de productos farmaceuticos derivados de tejidos biologicos y/o fluidos corporales experimentan una creciente presion de los organismos reguladores para aumentar el nivel de seguridad de sus productos, reduciendo todos los tipos de contaminantes al nivel mas bajo posible, con independencia de si cualquier contaminante es considerado un patogeno humano o no. Para la aplicacion de pancreatina en productos farmacologicos, es deseable por lo tanto minimizar la concentracion de contaminantes biologicos de la misma a los lfmites de deteccion generalmente aceptados.

Por lo tanto, para el proceso de fabricacion, manipulacion y almacenamiento de la pancreatina, el experto en la tecnica se enfrenta al desaffo de adaptar tales procesos de tal manera que se mantenga un alto nivel de actividad de las diferentes enzimas digestivas mientras que al mismo tiempo se minimiza la concentracion de uno o mas contaminantes biologicos de la misma.

Los actuales procedimientos de fabricacion de pancreatina no parecen permitir una inactivacion eficaz de todos los contaminantes biologicos, en particular de virus espedficos, hasta los lfmites de deteccion actualmente aceptados.

Se conocen diferentes enfoques para reducir las concentraciones de virus y bacterias dentro de las composiciones enzimaticas. Tales metodos incluyen tratamiento termico, filtracion, adicion de inactivadores o sensibilizadores qmmicos, tratamiento con irradiacion y calentamiento prolongado. Estos metodos se describen a continuacion.

El tratamiento termico implica que el producto, p.ej., se calienta a 60°C durante 70 horas, lo que puede danar los productos sensibles. En algunos casos, la inactivacion termica convencional puede destruir realmente una cantidad sustancial de la actividad enzimatica de un producto.

La filtracion consiste en filtrar el producto con el fin de eliminar ffsicamente los contaminantes. Desafortunadamente, este metodo puede tambien eliminar productos que tienen un alto peso molecular. Ademas, en ciertos casos, los virus pequenos y los contaminantes y patogenos de tamano similar no pueden ser eliminados por el filtro.

El procedimiento de sensibilizacion qmmica implica la adicion de agentes nocivos que se unen al ADN/ARN del virus y que son activados por UV u otra radiacion. La radiacion produce intermedios reactivos y/o radicales libres que se unen al ADN/ARN del virus, rompen los enlaces qmmicos en la cadena principal del ADN/ARN, y/o se entrecruzan o forman complejos de tal manera que el virus no puede replicar mas. Este procedimiento requiere que el sensibilizador no unido sea lavado de los productos ya que los sensibilizadores son toxicos, si no son mutagenicos o carcinogenos, y no se pueden administrar a un paciente.

La Patente de los Estados Unidos Num. 3.956.483 (Lewis) describe un metodo para preparar pancreatina que tiene actividades amilolfticas, proteolfticas y lipolfticas adecuadas y para eliminar bacterias daninas de la misma mientras se mantienen dichas actividades. Dicho metodo comprende calentar la pancreatina a una temperatura suficientemente alta entre aproximadamente 49-82°C (aproximadamente 120°F y 180°F). Sin embargo, Lewis no proporciona un proceso que sea adecuado para minimizar la concentracion de virus hasta los lfmites de deteccion actualmente aceptados.

El documento US 6.749.851 (Mann) sugiere el tratamiento de composiciones que comprenden enzimas digestivas mediante la estabilizacion de las composiciones en una primera etapa ya sea (a) reduciendo la temperatura de, (b) reduciendo los disolventes de, o (c) anadiendo un estabilizador a la composicion, seguido de irradiacion de la composicion en una segunda etapa.

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Braeuniger et al. (Braeuniger et al., Int. J. Hyg., Environ. Health 203, 71-75, 2000 ) sugieren el uso de calor para la inactivacion del parvovirus bovino. Se ha demostrado que el parvovirus bovino que se puede desactivar depende de la exposicion y de la humedad. En general, contenidos de humedad mas altos permiten duraciones de exposicion al calor mas cortas, proporcionando la misma inactivacion que un contenido de humedad mas bajo combinado con una duracion de la exposicion mas larga. Sin embargo, Braeuniger et al. no revelan nada sobre el efecto que el calor tiene sobre enzimas tales como lipasas, amilasas y proteasas que forman parte de la pancreatina animal. Por lo tanto, existe la necesidad de un procedimiento que proporcione pancreatina que tenga enzimas con un alto nivel de actividad a la vez que reduzca suficientemente la concentracion de contaminantes biologicos.

Se ha encontrado ahora que se pueden emplear condiciones seleccionadas en la fabricacion de pancreatina en la que se ha reducido la concentracion de uno o mas contaminantes biologicos y en la que la actividad enzimatica se mantiene a un nivel aceptable. En particular, se ha encontrado que un procedimiento tal como se describe y reivindica en la presente memoria es util para disminuir la concentracion de contaminantes virales en la pancreatina. Ademas, se ha descubierto que el proceso descrito en la presente memoria satisface eficazmente diversos requisitos reglamentarios relativos a la eliminacion de virus de productos biologicos (p.ej., "Note For Guidance on Virus Validation Studies: The Design, Contribution and Interpretation of Studies Validating the Inactivation and Removal of Viruses", Expedido por el Comite de Medicamentos Patentados (en adelante denominado "CPMP(BWP/268/95") a la vez que mantiene las actividades enzimaticas (p.ej. lipasa, proteasa y amilasa) a un nivel aceptable.

Otra ventaja del procedimiento descrito en la presente memoria, y de la pancreatina resultante, asf como de las composiciones farmaceuticas que comprenden la pancreatina obtenida mediante el proceso descrito en la presente memoria, es su aplicabilidad a escala de laboratorio, a escala piloto y a escala de produccion.

Se describe en la presente memoria un proceso para la fabricacion de pancreatina en el que se ha reducido la concentracion de uno o mas contaminantes biologicos, en particular contaminantes vfticos, calentando una forma dispersada de pancreatina que contiene uno o mas disolventes a una temperatura de al menos 85°C y obteniendo un contenido total de disolventes en la forma dispersa de pancreatina inferior a 9% en peso en cualquier punto durante dicha etapa de calentamiento. Dicho proceso proporciona pancreatina en la que la actividad enzimatica se mantiene a un nivel aceptable y en la que se reducen las concentraciones de uno o mas contaminantes biologicos, en particular de uno o mas contaminantes vmcos.

Se describe en la presente memoria un proceso para la fabricacion de pancreatina, que comprende las etapas de

(a) precalentamiento de una forma dispersada de pancreatina que contiene uno o mas disolventes a una temperatura de al menos 85°C, y

(b) calentamiento continuo de la forma dispersada de pancreatina a una temperatura de al menos 85°C durante un penodo de hasta 48 horas, y obtencion de un contenido total de disolventes en la forma dispersada de pancreatina de menos de 9% en peso en cualquier punto durante la etapa (b) del proceso.

La presente invencion esta dirigida a la pancreatina con un contenido reducido de contaminantes virales, obtenible mediante el proceso del parrafo anterior, en donde la temperatura maxima en las etapas (1) y (b) es de 100°C, el periodo de calentamiento en la etapa (b) es de 18 horas a 30 horas, y el contenido total de disolventes obtenido en la etapa (b) es igual o inferior a 3,5% en peso en cualquier punto durante la etapa (b) del proceso, en donde la forma dispersada de pancreatina se selecciona entre polvos, pelets, micropelets, granulos y productos granulados. La presente invencion tambien se refiere a una composicion farmaceutica que contiene la pancreatina con un contenido reducido de contaminantes virales de la invencion, y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.

En la presente memoria se describe un proceso para la fabricacion de una composicion farmaceutica que comprende pancreatina, de acuerdo con el procedimiento descrito, en donde dicha composicion farmaceutica esta en una forma de dosificacion adecuada para administracion oral y para liberacion inmediata y/o modificada, semejante forma de dosificacion se puede seleccionar entre comprimidos, microcomprimidos, pelets, micropelets, microesferas, granulos, productos granulados, polvos, suspensiones, emulsiones, dispersiones, capsulas, bolsitas asf como otras formas de dosificacion.

Se describe adicionalmente una composicion farmaceutica que comprende

(1) una cantidad farmacologicamente eficaz de pancreatina en donde dicha pancreatina se ha calentado en forma de una pancreatina dispersada que contiene uno o mas disolventes, en donde la cantidad total de disolventes presentes en la pancreatina es inferior a 9% en peso en cualquier punto durante la etapa de calentamiento, a una temperatura de al menos 85°C; en donde el nivel de tftulo de un contaminante viral presente en la pancreatina despues del calentamiento es al menos 1000 veces menor que el nivel de tftulo del contaminante viral presente en la pancreatina antes del calentamiento; y

(2) uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.

Las composiciones farmaceuticas se pueden preparar en forma de una capsula o bolsa en donde la capsula o bolsa comprenden pancreatina sometida al proceso descrito.

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Se pueden prever metodos de tratamiento de la insuficiencia pancreatica exocrina administrando una cantidad segura y eficaz de pancreatina obtenida por el proceso descrito en la presente memoria.

Otros objetos, caractensticas y ventajas se expondran en la descripcion detallada de las realizaciones que siguen, y en parte seran evidentes a partir de la descripcion o se pueden aprender mediante la practica de la invencion reivindicada. Estos objetos y ventajas se realizaran y alcanzaran mediante los procesos y composiciones particularmente senalados en la descripcion escrita y en las reivindicaciones de la misma.

Breve descripcion de los dibujos

Figura 1: Actividad lipasa despues del experimento de calentamiento de pancreatina a temperaturas de 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C con un contenido de disolvente de 1%. La actividad lipasa se determino despues de 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas.

Figura 2: Actividad lipasa despues del calentamiento de pancreatina a temperaturas de 90°C y 95°C con un contenido de disolvente de 3%. La actividad lipasa se determino despues de 2, 4, 8, 15, 24 y 48 horas.

Figura 3: Actividad lipasa despues del calentamiento de pancreatina a una temperatura de 80°C con un contenido de disolvente de 3%, 6%, 9% y 12%. La actividad lipasa se determino despues de 0,5, 1,0 y 3,0 horas.

Figura 4: Reduccion logantmica del tftulo de pancreatina porcina enriquecida con un parvovirus porcino (denominado en lo sucesivo "pancreatina enriquecida con PPV") a temperaturas de 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C con un contenido de disolvente de 1%. La concentracion de virus se determino despues de 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas.

Figura 5: Reduccion logantmica del tftulo de pancreatina enriquecida con PPV a temperaturas de 90°C y 95°C con un contenido de disolvente de 1% y 3% durante un penodo de 12 horas. La concentracion de virus se determino despues de 3, 6 y 12 horas.

A menos que se defina lo contrario, se pretende que todos los terminos tecnicos y cientificos utilizados en la presente memoria tengan el mismo significado que entiende comunmente un experto en la tecnica pertinente.

Segun se utiliza en la presente memoria, se pretende que el termino "esterilizar" signifique una reduccion en la concentracion de al menos un contaminante biologico encontrado en la pancreatina, en particular la pancreatina dispersada, que esta siendo sometida al proceso descrito en la presente memoria. Mas espedficamente, se pretende que el termino esterilizar signifique una reduccion en la concentracion de al menos un contaminante viral hallado en la pancreatina, en particular la pancreatina dispersada, que esta siendo sometida al proceso descrito en la presente memoria.

Segun se utiliza en la presente memoria, se pretende que el termino "pancreatina" signifique pancreatina procedente de cualquier glandula de pancreas de mamfero, tales como las pancreatinas bovina y porcina. Por ejemplo, la pancreatina que se produce de acuerdo con los procesos descritos en la Patente de los Estados Unidos Num. 4.623.624 o de acuerdo con procesos analogos se puede utilizar para los propositos de la presente descripcion. Para conseguir los resultados preferidos de disminucion de los contaminantes biologicos en la pancreatina, se utiliza una forma dispersada de pancreatina que es compatible con las condiciones del proceso descritas en la presente memoria. Las formas dispersadas de pancreatina comprenden, por ejemplo, polvos, pelets, micropelets, granulos, microesferas, granulos y productos granulados. Los resultados preferidos se consiguen con polvos de pancreatina, p.ej. polvos de pancreatina obtenidos directamente de un proceso para producir pancreatina. La pancreatina segun se utiliza en la presente memoria tambien puede comprender uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables que son compatibles con las condiciones del proceso que se describen en la presente memoria y que se pueden seleccionar, por ejemplo, entre los excipientes farmaceuticamente aceptables proporcionados a continuacion.

Segun se utiliza en la presente memoria, se pretende que el termino "contaminantes biologicos" signifique un contaminante que, en contacto directo o indirecto con pancreatina, puede tener un efecto deletereo sobre la pancreatina o sobre un receptor de la misma. Ademas, se pretende que el termino "contaminante biologico activo" signifique un contaminante biologico que es capaz de causar un efecto deletereo, solo o combinado con otro factor, tal como un segundo contaminante biologico, en la preparacion de pancreatina o en el receptor de pancreatina. Tales contaminantes biologicos incluyen, pero no se limitan a, contaminantes virales y/o germenes. Los germenes incluyen, pero no se limitan a, bacterias, mohos y/o levaduras. Un contaminante biologico puede ser un patogeno humano.

Segun se utiliza en la presente memoria, se pretende que el termino "virus" o "contaminantes virales" signifique particularmente virus sin envoltura. Mas espedficamente, el termino "virus" o "contaminantes virales" incluye los llamados virus altamente resistentes como los parvoviridae, en particular los parvoviridae porcinos, los circoviridae, en particular los circoviridae porcinos y los caliciviridae, en particular los caliciviridae porcinos. El parvovirus porcino (PPV) puede servir como un modelo o virus indicador generalmente aceptado para toda la clase de virus altamente resistentes, en particular virus porcinos altamente resistencia. Ademas, el termino "virus" o "contaminantes virales" en el contexto de la presente descripcion tambien incluye los picornaviridae, en particular los picornaviridae porcinos,

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los reoviridae, en particular los reoviridae porcinos, los astroviridae, en particular los astroviridae porcinos, los adenoviridae, en particular los adenoviridae porcinos y los hepeviridae, en particular los hepeviridae porcinos.

Segun se utiliza en la presente memoria, se pretende que los terminos "disolvente" o "disolventes" signifiquen la cantidad o proporcion de Kquido que esta presente en la pancreatina, ya sea como lfquido unido o complejado ya sea como Kquido disponible libremente. L^quido disponible libremente significa que el lfquido presente en la pancreatina que se esta calentando que no esta unido o no forma complejo con la pancreatina. Dichos lfquidos presentes en la pancreatina comprenden habitualmente agua y disolventes organicos respetuosos con las enzimas, y mezclas de agua con dichos disolventes organicos respetuosos con las enzimas. Los disolventes organicos respetuosos con las enzimas adecuados son, p.ej., disolventes organicos volatiles como acetona, cloroformo, diclorometano o alcanoles C1-C4 de cadena lineal o ramificada, particularmente metanol, etanol, 1-propanol, 2- propanol, 2-butanol, terc-butanol o mezclas de dichos disolventes. Se prefiere el 2-propanol como disolvente organico respetuoso con las enzimas. Tfpicamente, la razon de agua a disolvente organico respetuoso con las enzimas esta entre 50:1 y 3:1, mas tfpicamente entre 30:1 y 10:1.

Siempre que se utilice un intervalo de temperatura, por ejemplo de 85°C a 100°C, se pretende que signifique una temperatura en cualquier punto dentro del intervalo mencionado expresamente, asf como un perfil de temperatura que conduzca a diferentes temperaturas dentro del intervalo expresamente mencionado, incluyendo los lfmites del intervalo. El intervalo de temperatura durante el proceso descrito en la presente memoria se puede aplicar continuamente o discontinuamente, siempre que se cumplan los periodos de tiempo totales dentro de los intervalos de temperatura descritos.

El proceso descrito en la presente memoria comprende el calentamiento de una forma dispersada de pancreatina que contiene uno o mas disolventes a una temperatura de al menos 85°C y la obtencion de un contenido total de disolventes en forma dispersada de pancreatina de menos de 9% en peso en cualquier punto durante dicha etapa de calentamiento. En una realizacion, la forma dispersada de pancreatina se puede calentar durante un penodo de hasta 48 horas.

En semejante proceso, el contenido de disolventes de la pancreatina es tfpicamente menor que 8%, aun mas tfpicamente menor que 6%, normalmente menor que 5%, mayormente igual o menor que 3,5%, preferiblemente 0,1% a 3,5%, mas preferiblemente de 0,1% a 3% e incluso mas preferiblemente de 0,1% a 1,6% en peso. En otras realizaciones, el contenido de disolventes es inferior a 7,5%, 7,0%, 6,5%, 6,0%, 5,5%, 5,0%, 4,5%, 4,0%, 3,5%, 3,0%, 2,5%, 2,0%, 1,5%, 1,0 % o 0,5%. El proceso descrito en la presente memoria utiliza una pancreatina dispersada, en particular un polvo de pancreatina, con un contenido inicial de disolventes de 9% en peso o menos, tfpicamente entre 2% y 3,5% en peso. La pancreatina se calienta a continuacion a la temperatura deseada del proceso que puede ser de 85°C a 100°C, p.ej. 90°C. Durante la fase de precalentamiento inicial, el contenido de disolventes en la pancreatina disminuira tfpicamente en funcion del tiempo y la temperatura. Se debe entender que la duracion de dicha fase de precalentamiento inicial es una funcion del tamano del lote y de la temperatura inicial del lote y, por tanto, puede llevar entre aproximadamente 15 minutos y hasta 10 horas. Despues de la fase de precalentamiento, la forma dispersada de pancreatina se continua calentando a una temperatura de al menos 85°C, usualmente dentro del intervalo de 85°C a 100°C, p.ej. a 90°C, y durante el tiempo del proceso descrito, es decir, durante un penodo de hasta 48 horas, p.ej. durante un penodo de 24 horas. Cuando se utiliza el proceso dentro de los parametros descritos en la presente memoria (tfpicamente a presion atmosferica), el contenido de disolventes alcanzado al final de la fase de precalentamiento puede encontrarse tfpicamente entre 0,1% y 1,6% en peso. Se puede observar que el contenido de disolventes de 0,1% a 1,6% en peso alcanzado al final de la fase de precalentamiento sera relativamente constante en todo el intervalo de los parametros preferidos del proceso. Despues de la terminacion del proceso descrito en la presente memoria, la pancreatina calentada se puede volver a exponer a condiciones ambientales normales (p.ej., temperatura ambiente y condiciones normales de humedad). La disminucion de los contaminantes virales en la pancreatina que se ha conseguido mediante el proceso descrito en la presente memoria se mantendra bajo estas condiciones ambientales normales debido a que cualquier contaminante viral tal como se describe en la presente memoria habra sido desactivado irreversiblemente en las condiciones del proceso.

En otra alternativa, la pancreatina dispersada se precalienta a una temperatura de al menos 85°C y posteriormente se calienta a una temperatura de al menos 85°C durante un penodo de 1 hora a 36 horas, mas preferiblemente durante un penodo de 8 horas a 30 horas, aun mas preferiblemente durante un periodo de 10 horas a 24 horas. En una alternativa adicional de dicho proceso, la pancreatina dispersada se precalienta a una temperatura de al menos 85°C y se calienta con posterioridad a una temperatura de al menos 85°C durante un penodo de 1 hora a 36 horas, tal como, p.ej., 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 11 horas, 12 horas, 13 horas, 14 horas, 15 horas, 16 horas, 17 horas, 18 horas, 19 horas, 20 horas, 21 horas, 22 horas, 23 horas, 24 horas, 25 horas, 26 horas, 27 horas, 28 horas, 29 horas, 30 horas, 31 horas, 32 horas, 33 horas, 34 horas, 35 horas, o 36 horas, y en otra alternativa de semejante proceso, la pancreatina dispersada se precalienta a un temperatura de al menos 85°C y con posterioridad se calienta a una temperatura de al menos 85°C durante un penodo de 10 horas a 30 horas.

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En otra alternativa, la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, p.ej., a una temperatura de 85°C a 100°C, y se calienta con posterioridad a una temperatura de 85 subsiguientemente C a 100 subsiguientemente C, espedficamente a una temperatura de 85°C, 86°C, 87°C, 88°C, 89°C, 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C, 96°C, 97°C, 98°C, 99°C, 100°C, o cualquier temperatura en los intervalos entre estos valores de temperatura en numeros enteros dados. En una realizacion adicional de dicho proceso, la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, p.ej. a una temperatura de 85°C a 95°C, y se calienta con posterioridad a una temperatura de 85°C a 95°C, espedficamente a una temperatura de 85°C, 86°C, 87°C, 88°C, 89°C, 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C o cualquier temperatura en los intervalos entre estos valores de temperatura en numeros enteros dados. En otras alternativas, la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, p.ej. a una temperatura de 90°C a 100°C, y se calienta con posterioridad a una temperatura de 90°C a 100°C, espedficamente a una temperatura de 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C, 96°C, 97°C, 98°C, 99°C, 100°C, o cualquier temperatura en los intervalos entre estos valores de temperatura en numeros enteros dados. En una alternativa mas preferida, la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, por ejemplo a una temperatura de 90°C a 95°C, y con posterioridad se calienta a una temperatura de 90°C a 95°C, espedficamente a una temperatura de 90°C, 91°C, 92°C, 93°C, 94°C, 95°C o cualquier temperatura en los intervalos entre estos valores de temperatura en numeros enteros dados.

En otra alternativa de semejante proceso, el contenido de disolventes obtenido de la pancreatina es de 0,1% a 3,5% en peso y la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, p.ej. a una temperatura de 85°C a 100°C, y con posteridad se calienta durante un penodo de 8 horas a 30 horas a una temperatura de 85°C a 100°C.

En otra alternativa de semejante proceso, el contenido de disolventes obtenido de la pancreatina es de 0,1% a 3,0% en peso y la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, p.ej. a una temperatura de 85°C a 95°C, y con posterioridad se calienta durante un penodo de 10 horas a 30 horas a una temperatura de 85°C a 95°C.

En otra alternativa de dicho proceso, el contenido de disolventes obtenido de la pancreatina es de 0,1% a 1,6% en peso y la pancreatina se precalienta a una temperatura de al menos 85°C, p.ej. a una temperatura de 85°C a 95°C, y son posterioridad se calienta durante un penodo de 10 horas a 30 horas a una temperatura de 85°C a 95°C.

Con cada alternativa unica y combinada de semejante proceso, disminuye la concentracion de uno o mas contaminantes biologicos en la pancreatina, en particular la concentracion de uno o mas contaminantes vfticos, sin afectar sustancialmente a la actividad de la pancreatina. En una realizacion, la concentracion de virus altamente resistentes en la pancreatina, mas preferiblemente la concentracion del parvovirus porcino, disminuye.

La presente invencion esta dirigida a una pancreatina obtenible mediante procesos descritos en la presente memoria. La pancreatina con un contenido reducido de contaminantes virales de la invencion se puede obtener bajo las condiciones del proceso definidas en la reivindicacion 1 adjunta.

Se describe adicionalmente un proceso para fabricar una composicion farmaceutica que comprende pancreatina de acuerdo con el proceso descrito en el presente documento, en donde dicha composicion farmaceutica esta en una forma de dosificacion adecuada para administracion oral. La forma de dosificacion oral puede ser para liberacion inmediata y/o modificada, semejante forma de dosificacion puede estar en forma de comprimidos, microcomprimidos, pelets, micropelets, microesferas, granulos, productos granulados, polvos, suspensiones, emulsiones, dispersiones, capsulas, bolsitas asf como otras formas de dosificacion.

En una realizacion de semejante proceso para la fabricacion de una composicion farmaceutica, la pancreatina y/o su forma de dosificacion se recubren adicionalmente con un revestimiento resistente al acido gastrico.

En otra realizacion de semejante proceso para la fabricacion de una composicion farmaceutica, la pancreatina recubierta resistente a acido gastrico opcionalmente o su forma de dosificacion se cargan adicionalmente en bolsitas y/o capsulas.

Se describe en la presente memoria una composicion farmaceutica que comprende

(2) uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.

En una realizacion de semejante composicion farmaceutica, la pancreatina esta presente en una forma de dosificacion que es adecuada para la administracion oral. La forma de dosificacion oral puede ser para la liberacion inmediata y/o modificada, semejante forma de dosificacion puede estar en forma de comprimidos,

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microcomprimidos, granulos, productos granulados, polvos, suspensiones, emulsiones, dispersiones, capsulas, bolsitas, as^ como otras formas de dosificacion.

En otra realizacion de semejante composicion farmaceutica, la pancreatina y/o los excipientes farmaceuticamente aceptables se recubren adicionalmente con un revestimiento resistente al acido gastrico.

Tambien se describe una composicion farmaceutica en forma de una capsula o bolsita, comprendiendo la capsula o bolsita la pancreatina se describe en la presente memoria.

En una realizacion de semejante composicion farmaceutica, la composicion comprende adicionalmente excipientes farmaceuticamente aceptables.

En otra realizacion de semejante composicion farmaceutica, la composicion esta en una forma de dosificacion adecuada para la administracion oral. La forma de dosificacion oral puede ser para la liberacion inmediata y/o modificada, semejante forma de dosificacion puede estar en forma de comprimidos, microcomprimidos, pelets, micropelets, granulos, productos granulados, polvos, suspensiones, emulsiones, dispersiones, capsulas, bolsitas, asf como en otras formas de dosificacion conocidas.

En otra realizacion de semejante composicion farmaceutica, la pancreatina y/o los excipientes farmaceuticamente aceptables y/o su forma de dosificacion se recubren adicionalmente con un revestimiento resistente al acido gastrico.

Las composiciones farmaceuticas descritas en la presente memoria pueden comprender excipientes farmaceuticamente aceptables. Los excipientes farmaceuticamente aceptables para su uso en las composiciones descritas anteriormente se ilustran mediante: azucares tales como lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; almidones tales como almidon de mafz, almidon de tapioca y almidon de patata; celulosa y derivados tales como carboximetilcelulosa sodica, etilcelulosa y metilcelulosa; fosfatos de calcio tales como fosfato dicalcico y fosfato tricalcico; sulfato de sodio; sulfato de calcio; polivinilpirrolidona; poli(alcohol de vimlico); acido estearico; estearatos de metales alcalinoterreos tales como estearato de magnesio y estearato de calcio; acido estearico; aceites vegetales tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de sesamo, aceite de oliva y aceite de mafz; tensioactivos no ionicos, cationicos y anionicos; polfmeros de etilenglicol; beta-ciclodextrina; alcoholes grasos; y solidos de cereales hidrolizados, asf como otros cargas, aglutinantes, disgregantes, agentes no toxicos compatibles, p.ej. talco; tampones, conservantes, antioxidantes, lubricantes, aromatizantes y otros excipientes que son aceptables para su uso en formulaciones farmaceuticas.

Generalmente, una composicion farmaceutica de acuerdo con la invencion puede comprender de 0,1% a 100%, tal como, p.ej., 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1 %, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 85%, 90%, 95% o 100%, preferiblemente de 25% a 90%, tal como, p.ej., 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60% , 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o 90%, mas preferiblemente de 50% a 90%, tal como, p.ej., 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o 90% en peso de pancreatina y las proporciones restantes, si las hay, constituidas por coadyuvantes, excipientes y/o portadores farmaceuticamente aceptables.

En una realizacion, las composiciones farmaceuticas comprenden (a) de 50% a 90% en peso de pancreatina obtenida por el proceso descrito en la presente memoria, y (b) de 10% a 50% en peso de excipientes farmaceuticamente aceptables, p.ej., polfmeros de etilenglicol, en particular etilenglicol 2000, 3000, 4000, 6000, 8000 y/o 10000, anadiendo los constituyentes (a) y (b) hasta 100% en peso.

En otra realizacion, las composiciones farmaceuticas comprenden (a) de 55% a 85% en peso de pancreatina obtenida por el proceso descrito en la presente memoria, (b) de 5% a 35% en peso de polfmeros de etilenglicol, (c) de 1,0% a 20% en peso de propan-2-ol, y (d) opcionalmente de 0% a 10% en peso de parafina, anadiendo los constituyentes (a), (b), (c) y (d) hasta 100% en peso en cada caso. Otras composiciones que comprenden pancreatina se describen por ejemplo en los documentos EP 0 583 726 y en EP 0 826 375 .

Los procesos descritos en la presente memoria se pueden llevar a cabo a cualquier temperatura de al menos 85°C que no de como resultado un nivel inaceptable de dano de la pancreatina. De acuerdo con los procesos descritos en la presente memoria, un "nivel aceptable" de dano puede variar dependiendo de ciertas caractensticas de los procesos particulares descritos en la presente memoria que se emplean, tales como la naturaleza y caractensticas de la pancreatina particular que se este utilizando, y/o del uso pretendido de la pancreatina que se este calentando y puede ser determinado empmcamente por un experto en la tecnica. Un "nivel inaceptable" de dano sena por lo tanto un nivel de dano que impidiera el uso seguro y eficaz de la pancreatina que se este calentando. El nivel particular de dano en una muestra de pancreatina dada se puede determinar utilizando cualquiera de los metodos y mecanismos conocidos por un experto en la tecnica.

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Con respecto a la actividad lipasa de la pancreatina en la invencion, hay una actividad enzimatica despues de un calentamiento de 50% o mas es, preferiblemente de 70% o mas, mas preferiblemente de 85% o mas y lo mas preferiblemente de 90% o mas de la actividad enzimatica original.

Para establecer las condiciones para minimizar el nivel de disminucion de la actividad enzimatica, se llevaron a cabo experimentos. En varias series de tales experimentos, se determino la actividad enzimatica original y la actividad enzimatica residual de la lipasa como enzima principal antes y despues del calentamiento en ciertas condiciones experimentales que se describen con detalle a continuacion.

En una serie similar de experimentos, se determino la disminucion de la concentracion de contaminantes biologicos en la misma. En tales experimentos, se determinaron los valores del tftulo de virus de parvovirus porcino altamente resistente como virus principal antes y despues del calentamiento en ciertas condiciones experimentales que se describen con detalle a continuacion. Para cada experimento, se utilizaron muestras de pancreatina porcina enriquecidas con parvovirus porcino.

Los tftulos de virus incluyendo las desviaciones tfpicas de las muestras enriquecidas con PPV se determinaron por titulacion final y posterior calculo de la dosis infecciosa de cultivo de tejido semi-maxima (=TCID5o) de acuerdo con la formula de Spearman-Kaerber como se describe en "Bundesanzeiger" Aleman Num. 84, 4 de mayo de 1.994. Por lo tanto, se prepararon diluciones seriadas a la tercera parte de las aftcuotas utilizando medio de cultivo celular y se anadieron aftcuotas de cada dilucion utilizando replicas 1:8 en placas de microtitulacion de 96 pocillos que conteman las celulas diana correspondientes. Despues de un penodo de incubacion de seis a siete dfas, las celulas diana fueron inspeccionadas microscopicamente para determinar el ECP inducido por el virus. Los tftulos de virus se calcularon como se ha mencionado anteriormente y estos se presentan como el log-io TCID50 por ml con ftmites de confianza de 95%. La capacidad del tratamiento para desactivar o eliminar los virus se describio por medio de los factores de reduccion logarftmica (LRF). Estos LRF se calcularon de acuerdo con la directriz de la CE III/8115/89-EN (ahora sustituida por CPMP/BWP/268/95), apendice II como la diferencia de los tftulos virales entre las muestras de control de mantenimiento y las muestras que habfan sido expuestas a calentamiento.

Con respecto a la pancreatina en la invencion, hay una disminucion en la concentracion de contaminantes biologicos activos en la misma, en particular una disminucion en la concentracion de contaminantes virales, de al menos 3,0, preferiblemente 3,5, mas preferiblemente 4,0 y lo mas preferiblemente 4,5 o mas reducciones logarftmicas del tftulo. Para cumplir con las recomendaciones de la autoridad sobre la seguridad viral de los productos biologicos (vease, p.ej. CPMP/BWP/268/95), se considera generalmente robusta una etapa del proceso que puede proporcionar reducciones logarftmicas del tftulo de 4,0 en terminos de desactivacion del virus y por lo tanto se considera satisfactoria.

Una reduccion log del tftulo indica de este modo la reduccion en la concentracion de virus en unidades logarftmicas en base 10 (=logi0), es decir, una reduccion log del tftulo de 3 comprendena una reduccion 1000-9999 veces de la concentracion viral, mientras que una reduccion log del tftulo de 4 comprendena una reduccion de 10000-99999 veces de la concentracion viral. Se puede decir que un proceso para esterilizar pancreatina es mas eficaz si la aplicacion de este procedimiento da lugar a una disminucion satisfactoria de virus incluso altamente resistentes en la pancreatina.

Para establecer las condiciones para la reduccion log del tftulo mas eficaz, se llevaron a cabo experimentos. Debido a limitaciones tecnicas, actualmente solo es posible determinar disminuciones en la concentracion de contaminantes biologicos en muestras de pancreatina de log del tftulo de 4,5 a 5,0 (ftmite de deteccion).

En una primera serie, se realizaron experimentos en los que se determino la actividad lipasa despues del calentamiento durante periodos espedficos y temperaturas diferentes pero constantes. En el primer experimento, se determino la actividad de lipasa despues de calentar durante 0, 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas a 80°C a un contenido de disolventes de 1%. En un segundo experimento, se determino la actividad lipasa despues de calentar durante 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas a 85°C con un contenido de disolventes del 1%. En un tercer experimento, se determino la actividad lipasa despues de calentar durante 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas a 90°C con un contenido de disolventes del 1%. En un cuarto experimento, se determino la actividad lipasa despues de calentar durante 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas a 95°C a un contenido de disolventes del 1%. En un quinto experimento, se determino la actividad lipasa despues de calentar durante 0, 6, 12, 15, 18, 21 y 24 horas a 100°C con un contenido de disolventes de 1%. Los resultados de esta primera serie de experimentos se muestran en la tabla 1 y se ilustran en la Figura 1.

Tabla 1: Calentamiento de la Pancreatina a 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C (contenido de disolventes de 1%); Los datos presentados en la tabla 1 son valores medios de dos incubaciones; n/a = no aplicable; Temp. = Temperature

Tiempo de incubacion [h]: Actividad lipasa residual [%]

Temp.: 80°C 85°C 90°C 95°C 100°C

0: 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0

2: 99,3 n/a n/a n/a n/a

4: 99,0 n/a n/a n/a n/a

6: 98,8 98,9 95,0 91,1 84,0

12: 97,7 96,2 91,7 86,1 71,4

15: 96,5 94,7 90,6 84,2 66,3

18: 94,6 93,5 88,6 80,1 60,3

21: 93,6 93,5 87,0 77,8 56,0

24: 92,5 92,1 85,8 77,8 52,8

30: 91,3 90,7 83,7 74,8 n/a

5 Como se puede observar a partir de la tabla 1 y en la figura 1 para un contenido constante de disolventes de 1%, la actividad lipasa disminuye a medida que aumenta el tiempo de incubacion a una temperature dada. Ademas, la actividad lipasa disminuye en mayor medida a altas temperaturas a un tiempo de incubacion dado. Cuando se usa en composiciones farmaceuticas, se deduce que el calentamiento llevado a cabo durante un periodo de hasta e incluyendo 30 horas a temperaturas de hasta e incluyendo 95°C proporciona pancreatina que tiene actividad

10 enzimatica residual aceptable a un contenido de disolventes de 1%. Cuando se usa en composiciones farmaceuticas, se deduce adicionalmente que el calentamiento llevado a cabo durante un periodo de hasta e incluyendo 24 horas a temperaturas de hasta 100°C inclusive, proporciona pancreatina que tiene actividad enzimatica residual aceptable con un contenido de disolventes de 1%.

15 En una segunda serie, se realizaron dos experimentos en los que se determino la actividad lipasa con un contenido de disolventes de 3% despues del calentamiento. En el primer experimento, se determino la actividad lipasa despues de calentar durante 0, 2, 4, 6, 8, 15, 24 y 48 horas a 90°C y 95°C a un contenido de disolventes de 3%. Los resultados de esta segunda serie de experimentos se muestran en la tabla 2 y se ilustran en la Figura 2.

20 Tabla 2: Calentamiento de la pancreatina a 90°C y 95°C (contenido de disolventes de 3%).

Tiempo de incubacion [h]: Actividad lipasa [%]

Temperatura: 90°C 95°C

0: 100,0 100,0

2: 94,1 95,1

4: 91,0 90,2

8: 86,8 81,4

15: 84,0 66,0

24: 71,4 54,1

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10

15

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35

Tiempo de incubacion [h]: Actividad lipasa [%]

Temperatura: 90°C 95°C

48: 53,5 31,3

Como se puede observar a partir de la tabla 2 y en la figura 2 para un contenido de disolventes constante de 3%, la actividad lipasa disminuye a medida que aumenta el tiempo de incubacion a una temperatura dada. Ademas, la actividad lipasa disminuye en mayor medida a altas temperaturas a un tiempo de incubacion dado. Cuando se utiliza en composiciones farmaceuticas, se deduce que el calentamiento llevado a cabo durante un periodo de hasta e incluyendo 48 horas a temperaturas de hasta e incluyendo 90°C proporciona pancreatina que tiene actividad enzimatica residual aceptable a un contenido de disolventes de 3%. Cuando se utiliza en composiciones farmaceuticas, se deduce adicionalmente que los experimentos de calentamiento en seco llevados a cabo durante un periodo de hasta e incluyendo 24 horas a temperaturas de hasta e incluyendo 95°C proporcionan pancreatina que tiene actividad enzimatica residual aceptable a un contenido de disolventes de 3%.

En una tercera serie de experimentos, se determino la actividad lipasa despues de calentar durante 0,5, 1,0 y 3,0 horas a 80°C a diferentes pero constantes contenidos de disolventes de 3%, 6%, 9% y 12%, respectivamente. Los resultados de estos experimentos se muestran en la tabla 3 y se ilustran en la figura 3.

Tabla 3: Tratamiento termico de pancreatina a 80°C con un contenido de disolventes de 3%, 6%, 9% y 12%,

respectivamente.

Tiempo de incubacion [h]: Actividad lipasa residual [%]

disolventes: 3% 6% 9% 12%

0: 100,0 100,0 100,0 100,0

0,5: 101,2 92,8 63,0 37,8

1,0: 100,5 88,2 50,7 23,9

3,0: 100,1 73,5 33,5 12,8

Como se puede observar a partir de la tabla 3 y en figura 3 para una temperatura constante pero diferentes contenidos de disolventes de 3%, 6%, 9% y 12%, respectivamente, la actividad lipasa disminuye a medida que aumenta el tiempo de incubacion a 80°C. Ademas, la actividad lipasa disminuye en mayor medida a altos contenidos de disolventes a un tiempo de incubacion dado. Cuando se utiliza en composiciones farmaceuticas, se deduce que el calentamiento llevado a cabo durante un periodo de hasta e incluyendo 3 horas a una temperatura de 80°C proporciona pancreatina que tiene actividad enzimatica residual aceptable a un contenido de disolventes de 6%. Cuando se utiliza en composiciones farmaceuticas, se deduce adicionalmente que los experimentos de calentamiento en seco llevados a cabo durante un periodo de hasta e incluyendo 1 hora a una temperatura de 80°C proporcionan pancreatina que tiene actividad enzimatica residual aceptable con un contenido de disolventes de 9%.

Esta serie de experimentos demuestra que las enzimas son sensibles a largos penodos de calor y sensibles a altos contenidos de disolventes. Su elevada actividad original se mantiene si el calentamiento se produce bajo condiciones controladas, es decir, durante penodos cortos, y/o a bajas temperaturas, y/o con bajos contenidos de disolventes. En una realizacion, la alta actividad enzimatica original se mantiene si las enzimas se tratan termicamente a bajas temperaturas ya bajo contenido de disolventes durante un corto periodo de tiempo.

Para evaluar la reduccion del parvovirus porcino, los log-io TCID50 despues de calentar durante 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas a 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C se determinaron a un disolvente constante de 1%. Los resultados de estos experimentos se muestran en la tabla 4. En la tabla 4 y en las siguientes tablas, los tttulos que se indican como "menores que" (<) expresan el lfmite de deteccion.

Tabla 4: Calentamiento de pancreatina enriquecida con PPV a 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C con un contenido de disolventes de 1%; n/a = no aplicable; Temp. = Temperature; h = horas; LTR = Reduccion logantmica del t^tulo.

Tiempo de incubacion [h]: logio TCID50 de Pancreatina enriquecida con PPV

Temp. de Incubacion:: 80°C 85°C 90°C 95°C 100°C

0 h: 7,2 7,2 7,8 7,8 7,8

6 h: 6,9 6,0 5,5 4,7 n/a

12 h: 5,6 <5,1 4,0 3,9 < 3,8

15 h: 5,8 <4,1 < 3,8 < 3,8 n/a

18 h: < 5,0 <4,0 < 3,8 < 3,8 n/a

21 h: <4,8 < 3,9 < 3,8 < 3,8 n/a

24 h: <4,6 < 3,9 < 3,8 < 3,8 < 3,8

30 h: <4,2 < 3,8 < 3,8 < 3,8 n/a

18 h de mantenimiento: 7,9 7,5 7,7 7,8 7,8 (24 h de mantenimiento)

30 h de mantenimiento: 7,5 7,5 7,4 7,3 n/a

LTR (18 h de mantenimiento frente a 18 hx°C): >2,9 >3,5 3,9 4,0 n/a

LTR (30 h de mantenimiento frente a 30 h a x °C): >3,3 >3,7 3,6 3,5 4,0 (24 h de mantenimiento frente a 24h a 100°C)

5 Se prepararon lotes de polvo de pancreatina adicionales 2 a 4 y se procesaron a 85°C como se ha descrito anteriormente en la Tabla 4 y a continuacion en el Ejemplo 13. Para evaluar la reduccion del parvovirus porcino, de nuevo se determinaron los log-io TCID50 despues de calentar durante 6, 12, 15 , 18, 21, 24 y 30 horas a 85°C a un contenido de disolvente constante de 1%. Los resultados de estos experimented adicionales se muestran en la tabla 4a.

10

Tabla 4a: Calentamiento de 3 lotes diferentes de pancreatina enriquecidos con PPV a 85°C con un contenido de disolventes de 1%. Los valores proporcionados como "±" se denominan intervalos de confianza de 95%. "*" significa que no se pudo detectar ningun virus infeccioso; Temp. = Temperatura; H = horas; LTR = Reduccion Log del tttulo.

Tiempo [h]/Temp. de Incubacion: logi0 TCID50 de Pancreatina enriquecida con PPV/85°C

Lote Num.: 2 3 4

0 h: 7,5 ± 0,2 7,5 ± 0,2 7,2 ± 0,3

6 h: 5,9 ± 0,3 5,6 ± 0,2 5,9 ± 0,2

12 h: 4,9 ± 0,3 < 4,6 ± 0,4 4,8 ± 0,3

15 h: < 4,3 ± 0,3 < 4,3 ± 0,3 < 4,4 ± 0,3

18 h: <4,1 ± 0,3 <3,8 ±0,2 < 4,2 ± 0,1

Tiempo [h]/Temp. de Incubacion: logio TCID50 de Pancreatina enriquecida con PPV/85°C

Lote Num.: 2 3 4

21 h: <3,9 ±0,2 <3,8 ±0,2 <3,9 ±0,2

24 h: <3,7 ±0,1 3,7* <3,8 ±0,1

30 h: <3,7 ±0,1 <3,7 ±0,1 3,8*

18 h de mantenimiento: 7,7 ± 0,2 7,7 ± 0,3 7,7 ± 0,3

30 h de mantenimiento: 7,7 ± 0,3 7,4 ± 0,3 7,6 ± 0,3

LTR (18 h de mantenimiento frente a 18 h a 85°C): >3,6 ± 0,4 >3,9 ±0,4 >3,5 ±0,3

LTR (30 h de mantenimiento frente a 30 h a 85 °C): >4,0± 0,3 >3,7± 0,3 >3,8 ± 0,3

La Tabla 5 muestra la reduccion logantmica del titulo en comparacion con el comienzo del experimento. La Figura 4 ilustra la reduccion logantmica del tftulo de la pancreatina enriquecida con PPV despues de calentar a 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C con un contenido de disolventes de 1%.

5

TABLA 5 Reduccion Log del Tftulo despues de calentar la pancreatina enriquecida con PPV a 80°C, 85°C, 90°C, 95°C y 100°C con un contenido de disolventes de 1%; n/a = no aplicable; Temperatura = Temperatura.

Tiempo de incubacion [h]: Reduccion Log del Tftulo de parvovirus porcino

Temp.: 80°C 85°C 90°C 95°C 100°C

0: 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

6: 0,3 1,2 2,3 3,1 n/a

12: 1,6 >2,1 3,8 3,9 >4,0

15: 1,4 >3,1 >4,0 >4,0 n/a

18: >2,2 >3,2 >4,0 >4,0 n/a

21: >2,4 >3,3 >4,0 >4,0 n/a

24: >2,6 >3,3 >4,0 >4,0 4,0

30: >3,0 >3,4 >4,0 >4,0 n/a

Como se puede observar a partir de las tablas 4 y 5, asf como en Figura 4 para un contenido constante de 10 disolventes de 1%, la reduccion log del titulo aumenta a medida que aumenta el tiempo de incubacion a una temperatura dada. Ademas, la reduccion log del titulo disminuye en mayor medida a medida que aumenta la temperatura. Cuando se utiliza en composiciones farmaceuticas, se deduce que el calentamiento llevado a cabo durante un penodo de hasta e incluyendo 30 horas a una temperatura de 80°C proporciona pancreatina que tiene una disminucion aceptable en la concentracion de contaminantes biologicos en la misma a un contenido de 15 disolventes de 1%. Los experimentos llevados a cabo durante un periodo de 12 horas y a una temperatura de 90°C proporcionan pancreatina que tiene una disminucion en la concentracion de contaminantes biologicos activos en la misma a un contenido de disolventes de 1%.

A partir de la tabla 4a se puede observar que las recomendaciones de las autoridades sobre la seguridad viral de los 20 productos biologicos (vease, por ejemplo, CPMP/BWP/268/95) pueden cumplirse cuando se aplican los parametros

expuestos en la tabla 4a, es dedr, a temperaturas de proceso de 85°C (vease, p.ej., lote 2, LTR despues de 30 horas). Experimentos similares con lotes adicionales procesados a 80°C mostraron que las recomendaciones de las autoridades sobre la seguridad viral de los productos biologicos no pudieron cumplirse, es dedr, que no se pudieron alcanzar las reducciones logarftmicas del tftulo de 4,0 a temperaturas de proceso de 80°C.

5

En otra serie de experimentos, se determino el logio TCID50 despues de calentar durante hasta 12 horas a una temperatura constante y a contenido diferentes, pero constantes disolventes de 1% y 3%, respectivamente. Los resultados de estos experimentos se muestran en la tabla 6.

10 Tabla 6: Calentamiento de pancreatina enriquecido con PPV a 90°C y 95°C con un contenido de disolventes de 1% y

3%, respectivamente.

Tiempo de Incubacion [h]: logio TCID50 de Pancreatina enriquecida con PPV

Temperatura: 90°C, contenido de disolventes 1% 90°C, contenido de disolventes 3% 95°C, contenido de disolventes 1% 95°C, contenido de disolventes 3%

0: 8,2 8,2 8,2 8,2

3: 6,8 6,2 6,4 6,1

6: 5,9 5,8 6,1 5,1

12: 5,0 4,9 4,6 5,0

La Tabla 7 muestra la reduccion logantmica del tftulo (para los resultados presentados en la tabla 5) en parvovirus porcino respecto a la cantidad inicial. La Figura 5 ilustra la reduccion logantmica del tftulo de pancreatina enriquecida 15 con PPV despues de calentar a 90°C y 95°C con un contenido de disolventes de 1% y 3%, respectivamente. Los experimentos que condujeron a los resultados presentados en las tablas 6 y 7 se realizaron en condiciones ligeramente diferentes en comparacion con los experimentos que condujeron a los resultados presentados en la tabla 5.

20 Tabla 7: Reduccion log del tftulo de calentamiento de pancreatina enriquecida con PPV a 90°C y 95°C con un

contenido de disolventes de 1% y 3%, respectivamente.

Tiempo de incubacion [h]: Reduccion log del tftulo de parvovirus porcino (PPV)

0: 0,0 0,0 0,0 0,0

3: 1,4 2,0 1,8 2,1

6: 2,3 2,4 2,1 3,1

12: 3,2 3,3 3,6 3,2

Se puede observar a partir de las tablas 6 y 7, asf como a partir de la Figura 5 para un contenido de disolventes constante de 1% y 3% respectivamente, que la reduccion logantmica del tftulo aumenta a medida que aumenta el 25 tiempo de incubacion a una temperatura dada. Ademas, la reduccion logantmica del tftulo aumenta en mayor medida con un contenido de disolventes de 3% en comparacion con 1%. Para uso en composiciones farmaceuticas, se deduce que el calentamiento llevado a cabo durante un penodo de al menos 6 horas a una temperatura de 95°C proporcionara una pancreatina que tendra una disminucion aceptable en la concentracion de contaminantes biologicos en la misma a un contenido de disolventes de 3%. Para uso en composiciones farmaceuticas, se deduce 30 que el calentamiento llevado a cabo durante un penodo de 12 horas a una temperatura de 90°C proporciona una pancreatina que tiene una disminucion aceptable en la concentracion de contaminantes biologicos en la misma a un contenido de disolventes de 1% o 3%, respectivamente.

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Esta serie de experimented demuestra que la concentracion de parvovirus porcino se puede reducir eficazmente mediante calentamiento en las condiciones expuestas anteriormente. De los experimented anteriores se puede concluir que la reduccion es mas eficaz a altas temperatures y/o durante un largo periodo de tiempo y/o con un mayor contenido de disolventes. En una realizacion, la concentracion del parvovirus porcino se puede reducir eficazmente si el virus se calienta a una temperatura adecuada y el contenido de disolventes durante un periodo de tiempo suficiente.

Los resultados obtenidos para la disminucion de la concentracion de parvovirus porcino estan en contraste con lo que se ha demostrado para las enzimas. Por lo tanto, el experto en la tecnica se enfrenta a la dificultad de disenar un proceso de esterilizacion de la pancreatina de tal manera que se mantenga un alto nivel de actividad de las diferentes enzimas digestivas mientras que se reduce al mismo tiempo la concentracion de uno o mas contaminantes biologicos, en particular de virus, a un nivel aceptable.

A partir de los experimentos anteriores se puede observar que la concentracion de parvovirus porcino en pancreatina en condiciones experimentales se reduce mientras que el nivel de actividad de lipasa permanece aceptable para el uso en composiciones farmaceuticas. Estas condiciones experimentales pueden resumirse de la siguiente manera:

Calentar durante un pertedo de hasta 48 horas a una temperatura de al menos 85°C con un contenido de disolventes inferior al 9% en peso.

Las etapas de ajuste del contenido de disolventes y del calentamiento pueden ocurrir a cualquier presion que no sea perjudicial para la pancreatina que se esta calentando. Generalmente, los procedimientos descritos se llevan a cabo a presion atmosferica, reducida o elevada. Las presiones adecuadas pueden ser determinadas empmcamente por un experto en la tecnica. En una alternativa los procesos se llevan a cabo a presion atmosferica o reducida. En otra alternativa, los procesos se llevan a cabo a presion atmosferica. De acuerdo con otra alternativa, los procedimientos descritos en la presente memoria se llevan a cabo a vacte mientras se esterilizan.

De un modo similar, de acuerdo con los procedimientos descritos en la presente memoria, el calentamiento puede ocurrir en cualquier atmosfera que no sea perjudicial para la pancreatina que se esta tratando. Tfpicamente, los procedimientos descritos en la presente memoria se llevan a cabo en atmosfera estandar. De acuerdo con una alternativa, los procedimientos descritos se llevan a cabo en una atmosfera de bajo contenido de oxfgeno o en una atmosfera inerte. Cuando se emplea una atmosfera inerte, la atmosfera se compone preferiblemente de nitrogeno o un gas noble, tal como helio o argon, mas preferiblemente un gas noble de mayor peso molecular, y lo mas preferiblemente argon. Se apreciara que la combinacion de una o mas de las caractensticas descritas en la presente memoria se puede emplear para minimizar adicionalmente los efectos indeseables sobre los procesos descritos en la presente memoria, manteniendo al mismo tiempo la eficacia adecuada de los procesos sobre el contaminante o los contaminantes biologicos.

El contenido de disolventes de la pancreatina puede reducirse mediante cualquiera de los metodos y mecanismos conocidos por los expertos en la tecnica para reducir el disolvente a partir de una preparacion de una o mas enzimas digestivas sin producir un nivel inaceptable de dano a la preparacion. Tales metodos incluyen, pero no se limitan a, evaporacion, concentracion, concentracion centnfuga, vitrificacion, adicion de soluto, liofilizacion (con o sin la adicion previa de ascorbato) y secado por pulverizacion.

Un metodo preferido para reducir el contenido de disolventes de la pancreatina es la concentracion, que puede lograrse mediante cualquiera de los metodos y mecanismos conocidos por los expertos en la tecnica. La concentracion puede conseguirse por calentamiento controlado de la preparacion y posterior evaporacion del disolvente no deseado o por evaporacion a traves de presion reducida. Tambien se puede aplicar una combinacion de estos dos metodos bajo condiciones suaves, evaporacion a baja temperatura bajo presion reducida, para conseguir el contenido de disolventes deseado. Independientemente del metodo utilizado, la preparacion resultante tendra entonces el contenido de disolventes deseado.

Los procedimientos descritos en la presente memoria pueden llevarse a cabo a cualquier escala, a escala de laboratorio con preparaciones que tengan una masa de 1 g a 1.000 g; a escala de planta piloto con preparaciones que tienen una masa de 1 kg a 50 kg y una escala de produccion con preparaciones que tienen una masa de al menos 100 kg, preferiblemente de 200 kg a 1500 kg.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos son ilustrativos y no pretenden limitar la invencion reivindicada.

Determinacion de la actividad enzimatica

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La determinacion de la actividad lipasa se realizo de acuerdo con un metodo de ensayo Solvay que se basa en la monograffa de polvo de pancreas en Ph. Eur. (Pancreas Powder, European Pharmacopoeia 5.0, 2179-2182; 01/2005:0350).

Determinacion del contenido de disolventes

Los contenidos de disolventes relacionados como agua a los que se hace referencia en la presente memoria se refieren a niveles determinados por el metodo Karl Fischer modificado aprobado por la FDA (Meyer y Boyd, Analytical Chem., 31:215-219, 1959; May, et al., J. Biol. Standardization, l0:249-259, 1982; Centers for Biologics Evaluation and Research, FDA, Docket No. 89D-0140, 83-93; 1990. La cuantificacion del contenido de otros disolventes puede determinarse por medios conocidos en la tecnica, dependiendo del solvente empleado. Otros medios adecuados para determinar los contenidos de disolventes en la pancreatina durante o despues del procedimiento descrito en la presente memoria, que tambien se incluyen en la presente descripcion, son, por ejemplo, metodos termogravimetricos (incluyendo secado por infrarrojos y secado por microondas), metodos espectrometricos (incluyendo espectroscopia infrarroja, espectroscopia de microondas y espectroscopia de resonancia magnetica nuclear), conductometna, decametna o conduccion termica. Usualmente, el metodo preferido para determinar los contenidos de disolventes en pancreatina es un metodo termogravimetrico (p.ej., determinacion de "perdida por secado"), ya que este metodo cubrina todos los ftquidos que pueden estar presentes en la pancreatina, comprendiendo, por ejemplo, agua y disolventes organicos respetuosos con las enzimas como el isopropanol. Los metodos termogravimetricos son particularmente adecuados para medir contenidos de disolventes de 9% a 3,5% en peso en la pancreatina. Cuando se deban determinar contenidos de disolventes mas bajos en la pancreatina, p.ej. contenido de disolventes por debajo de 3,5%, mas tipicamente de menos de 3%, incluso mas tipicamente de menos de 1,6% en peso, la proporcion de agua presente en el contenido de disolventes de la pancreatina superara tfpicamente la proporcion de disolvente organico respetuoso con la enzima presente en la pancreatina. Por lo tanto, puede ser ventajoso medir el contenido de disolventes por debajo de 3,5%, mas tfpicamente de menos de 3%, incluso mas tfpicamente de menos de 1,6% en peso, utilizando el metodo Karl Fischer mas sensible o una modificacion del mismo. Para los tamanos de lote tecnicos y la medicion continua, es ventajosa la determinacion espectroscopica infrarroja de los contenidos de disolvente, en particular cuando se deben medir contenidos de disolventes por debajo de 3,5%, mas tfpicamente de menos de 3%, incluso mas tfpicamente de menos de 1,6% en peso, p.ej. en el estado estacionario del proceso de calentamiento despues del precalentamiento. Se prefieren metodos de determinacion de espectroscopia infrarroja cercana (NIR) que son conocidos por los expertos en la tecnica. Los metodos espectroscopicos de infrarrojos tendran que ser normalizados tfpicamente contra un metodo de referencia que puede ser el metodo de titulacion de agua Karl-Fischer o una modificacion del mismo. Por las razones expuestas anteriormente, el metodo mas preferido para medir el contenido total de disolventes en una pancreatina es una combinacion de un metodo termogravimetrico (es decir, determinar la perdida por secado en la pancreatina, en particular para una pancreatina con un mayor contenido de disolventes) con un metodo de Karl Fischer o una modificacion del mismo (es decir, determinar el contenido de agua restante en la pancreatina, en particular para una pancreatina con un contenido de disolventes mas bajo).

Determinacion de la reduccion del parvovirus porcino

Los tftulos de virus dentro de las muestras tratadas se determinaron mediante titulacion final del virus y la TCID50 se calculo de acuerdo con la formula de Spearman-Kaerber como se describe en el Bundesanzeiger Num. 84, 4 de mayo de 1994. Con el fin de eludir la incompatibilidad de la pancreatina con las celulas Pk-13 (rinon porcino) detectoras, el material de ensayo se diluyo 3 tftulos log (por ejemplo 1:2000) antes de la titulacion en cada caso. La capacidad del tratamiento para desactivar o eliminar el virus se describio por medio de los factores de reduccion logarftmicos. Con el fin de poder estimar la reduccion de los tftulos de virus independientemente de la disminucion obligatoria de la infectividad durante el penodo de incubacion, que en cierta medida puede resultar de las propiedades del propio material de ensayo, se tomaron muestras de retencion. La reduccion logarftmica del tftulo (LTR) de las muestras se calculo como la diferencia entre el tftulo del virus (log-10 TCID50/ml) de la muestra de mantenimiento y la muestra final de acuerdo con la directriz de la CE III/8115/89-EN, apendice II (ahora sustituido por CPMP/BWP/268/95).

Calentamiento

Para la escala de laboratorio, el calentamiento se realizo en un horno de secado (por ejemplo, de la empresa Memmert, ULE 400) o evaporador rotativo (por ejemplo, de la empresa Buchi, R-144) con un bano de agua (p.ej. Buchi B-480). En la escala de la planta piloto, se utilizo un secador de vacfo (compama: Hosokawa, Vrieco-Nauta®, volumen 120 L). En la escala de produccion se utilizo un secador de vacfo (compama: Hosokawa, Vrieco-Nauta®, volumen 4000 L).

Preparacion de polvo de pancreatina normalizado

Se secaron 50 kg a 1000 kg de pancreatina humeda (contenido inicial de disolventes 40-50%) en un secador de vacfo con agitacion continua. La temperatura se aumento gradualmente de 60°C a 95°C. El secado se llevo a cabo a

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continuacion a una temperature de al menos 70°C hasta que se alcanzo un contenido de disolventes <3,5%. Para obtener muestras de polvo de pancreatina de contenido de disolvente de 6%, 9% o 12% en peso, respectivamente, se pueden tomar muestras en los puntos anteriores apropiados durante el proceso de secado de una manera conocida.

a) Las etapas adicionales para la preparacion de polvo de pancreatina normalizado a escala de laboratorio incluyen:

Calentar a la temperature deseada hasta que se alcanzo un contenido de disolventes de 1%, o 3% en peso, respectivamente, de acuerdo con los requisitos de partida de los experimented descritos a continuacion (ejemplos 1 a 11 a continuacion).

Para una preparacion alternativa de polvo de pancreatina normalizado con un contenido de disolventes de 6%, 9% o 12% en peso, respectivamente, se puede anadir una cantidad apropiada de un disolvente, por ejemplo, agua, propan-2-ol o mezclas de los mismos a una pancreatina en polvo con un contenido de disolventes de 3,5% en peso, y la muestra de pancreatina humedecida obtenida puede homogeneizarse segun sea necesario para obtener una muestra con el contenido de disolventes deseado.

b) Las etapas adicionales para la preparacion de polvo de pancreatina normalizado en una planta piloto y a escala de produccion incluyen:

Calentar a la temperatura deseada hasta que se alcanzo un contenido de disolventes de 1% en peso y una temperatura del producto de 80°C a 100°C de acuerdo con los requisitos iniciales de los experimentos descritos a continuacion (ejemplos 1 a 11 a continuacion).

Procesamiento adicional de pancreatina para estudios de parvovirus porcino:

De acuerdo con principios generalmente aceptados en las comunidades cientfficas y farmacologicas, la pancreatina se enriquecio con parvovirus porcino anadido para establecer un estudio demostrativo preliminar. El enriquecimiento se realizo de acuerdo con la directriz CPMP/BWP/268/95.

Despues de realizar el secado convencional del proceso de produccion (vease mas arriba) sobre la pancreatina, el polvo de pancreatina se enfrio y se volvio a suspender en agua (dando como resultado una suspension al 40% para obtener una distribucion homogenea del virus anadido dentro del polvo de pancreatina). A continuacion, la pancreatina se enriquecio con una suspension de parvovirus porcino altamente concentrada en medio de cultivo celular a una razon 9:1 (suspension de pancreatina:suspension de virus). La suspension resultante se liofilizo a continuacion y se calento posteriormente a una temperatura de 80°C a 100°C hasta que se alcanzo un contenido de disolventes de 1% y 3% en peso, respectivamente, de acuerdo con los requisitos de partida de los experimentos descritos mas adelante (Ejemplos 12 a 20 siguientes).

Ejemplo 1:

Cuarenta y ocho kg de pancreatina normalizada con un contenido de disolvente de 1% se calentaron con posterioridad a 80°C durante un periodo de 30 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 1 y en la figura 1.

Ejemplo 2:

Cuarenta y ocho kg de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 85°C durante un periodo de 30 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 1 y en la figura 1.

Ejemplo 3:

Cuarenta y ocho kg de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 90°C durante un periodo de 30 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 1 y en la figura 1.

Ejemplo 4:

Cuarenta y ocho kg de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 95°C durante un periodo de 30 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 1 y en la figura 1.

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Ejemplo 5:

Cuarenta y ocho kg de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 100°C durante un periodo de 30 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 6, 12, 15, 18, 21 y 24 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 1 y en la figura 1.

Ejemplo 6:

Un gramo y medio de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 3% se calentaron con posterioridad a 90°C durante un penodo de 48 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 2, 4, 8, 6, 15, 24 y 48 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 2 y en la figura 2.

Ejemplo 7:

Un gramo y medio de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 3% se calentaron con posterioridad a 95°C durante un periodo de 48 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0, 2, 4, 8, 6, 15, 24 y 48 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 2 y en la figura 2.

Ejemplo 8:

Un gramo y medio de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 3% se calentaron con posterioridad a 80°C durante un periodo de 3,0 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0,5, 1,0 y 3,0 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 3 y en la figura 3.

Ejemplo 9:

Un gramo y medio de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 6% se calentaron con posterioridad a 80°C durante un periodo de 3,0 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0,5, 1,0 y 3,0 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 3 y en la figura 3.

Ejemplo 10:

Un gramo y medio de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 9% se calentaron con posterioridad a 80°C durante un periodo de 3,0 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0,5, 1,0 y 3,0 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 3 y en la figura 3.

Ejemplo 11:

Un gramo y medio de pancreatina normalizada con un contenido de disolventes de 12% se calentaron con posterioridad a 80°C durante un periodo de 3,0 horas. La actividad lipasa se determino despues de 0,5, 1,0 y 3,0 horas. Los resultados de este experimento se muestran en la tabla 3 y en la figura 3.

Ejemplo 12:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 80°C durante un periodo de 30 horas. La concentracion de virus se determino despues de 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 4 y 5, asf como en la figura 4.

Ejemplo 13:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 85°C durante un periodo de 30 horas. La concentracion de virus se determino despues de 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 4, 4a y 5, asf como en la figura 4.

Ejemplo 14:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 90°C durante un periodo de 30 horas. La concentracion de virus se determino despues de 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 4, y 5, asf como en la figura 4.

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Ejemplo 15:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 95°C durante un periodo de 30 horas. La concentracion de virus se determino despues de 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 4, y 5, asf como en la figura 4.

Ejemplo 16:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 100°C durante un periodo de 30 horas. La concentracion de virus se determino despues de 6, 12, 15, 18, 21, 24 y 30 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 4, y 5, asf como en la figura 4.

Ejemplo 17:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 90°C durante un periodo de 12 horas. La concentracion de virus se determino despues de 3, 6 y 12 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 6, y 7, asf como en la figura 5.

Ejemplo 18:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 3% se calentaron con posterioridad a 90°C durante un periodo de 12 horas. La concentracion de virus se determino despues de 3, 6 y horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 6, y 7, asf como en la figura 5.

Ejemplo 19:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 1% se calentaron con posterioridad a 95°C durante un periodo de 12 horas. La concentracion de virus se determino despues de 3, 6 y 12 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 6, y 7, asf como en la figura 5.

Ejemplo 20:

Un gramo y medio de pancreatina enriquecida con parvovirus porcino con un contenido de disolventes de 3% se calentaron con posterioridad a 95°C durante un periodo de 30 horas. La concentracion de virus se determino despues de 3, 6 y 12 horas. Los resultados de este experimento se muestran en las tablas 6, y 7, asf como en la figura 5.

Ejemplo 21 - Composicion farmaceutica que comprende pancreatina:

Una composicion que comprende la pancreatina obtenida por el procedimiento descrito en la presente memoria se obtiene como sigue: se mezclan 10 kg de pancreatina obtenida por medio del procedimiento del ejemplo 2 con 2,5 kg de etilenglicol 4000 y 1,5 kg de propan-2-ol para proporcionar una mezcla que se extruyo a continuacion de una manera conocida en una prensa de extrusion. Los micropelets de pancreatina se preparan como se describe en el documento EP 0 583 726 y se pueden envasar adicionalmente en capsulas o bolsitas.

Ejemplo 22 - Micropelets de pancreatina recubiertos con un recubrimiento resistente al acido gastrico:

Los nucleos de micropelets de pancreatina obtenidos por el ejemplo 21 pueden proporcionarse con un recubrimiento resistente al acido gastrico. Por ejemplo, los nucleos de micropelets de pancreatina pueden recubrirse con agentes formadores de pelfcula resistentes a los jugos gastricos tales como, por ejemplo, acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulosa (= HPMCAS), ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa (= HPMCP), acetato ftalato de celulosa (CAP) o poli(acetato ftalato de vinilo) (= PVAP). Tambien pueden usarse copolfmeros conocidos como agentes formadores de pelfcula tales como, por ejemplo, copolfmeros de acido metacnlico/metacrilato de metilo o copolfmeros de acido metacnlico/acrilato de etilo. Los agentes formadores de pelfcula se pueden aplicar a los nucleos de micropelets de pancreatina utilizando diversos aparatos de recubrimiento de pelfcula, p.ej. aplicadores de revestimiento, en las formas de uso habituales, p.ej. en forma de soluciones organicas o dispersiones organicas o acuosas, opcionalmente con adicion de un plastificante convencional. Los micropelets de pancreatina recubiertos de pelfcula resistentes al acido gastrico resultantes se distinguen por una elevada densidad aparente, por ejemplo en el intervalo de 0,6 g/ml a 0,85 g/ml, lo que permite aumentar el peso de relleno por capsula y por lo tanto el contenido

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de compuesto activo de cada capsula. Otros detalles experimental sobre el procedimiento para preparar los micropelets de pancreatina recubiertos con pelmula resistente al acido gastrico se describen en el documento EP 0 583 726.

El uso de valores numericos individuales se indica como aproximaciones como si los valores estuvieran precedidos por el termino "alrededor de" o "aproximadamente". De manera similar, los valores numericos en los diversos intervalos especificados en esta solicitud, a menos que se indique expresamente lo contrario, se indican como aproximaciones como si los valores mmimo y maximo dentro de los rangos indicados estuvieran precedidos por el termino "alrededor de " o "aproximadamente". De esta manera, se pueden usar variaciones por encima y por debajo de los intervalos indicados para conseguir sustancialmente los mismos resultados que los valores dentro de los intervalos. Segun se utiliza en la presente memoria, los terminos "alrededor de" y "aproximadamente" cuando se refieren a un valor numerico tendran sus significados simples y ordinarios para un experto con un conocimiento practico normal en la tecnica con la cual esta mas estrechamente relacionado el asunto particular o la tecnica relevante para el intervalo o elemento en cuestion. La cantidad de ampliacion de la frontera numerica estricta depende de muchos factores. Por ejemplo, algunos de los factores que se pueden considerar incluyen la trascendencia del elemento y/o el efecto que tendra una cantidad dada de variacion en el rendimiento de la materia reivindicada, asf como otras consideraciones conocidas por los expertos en la tecnica. Segun se utiliza en la presente memoria, no se pretende que el uso de cantidades diferentes de dfgitos significativos para diferentes valores numericos limite como el uso de los terminos "alrededor de" o "aproximadamente" servira para ampliar un valor numerico concreto. Asf, como asunto general, "alrededor de" o "aproximadamente" amplfan el valor numerico. Ademas, la descripcion de intervalos se entiende como un intervalo continuo que incluye cada valor entre los valores mmimo y maximo mas la ampliacion del intervalo proporcionada por el uso del termino "alrededor de" o "aproximadamente". Por lo tanto, se pretende que la recitacion de intervalos de valores en la presente memoria sirva simplemente como un metodo abreviado de referirse individualmente a cada valor separado que entra dentro del intervalo, a menos que se indique de otro modo en la presente memoria y cada valor separado se incorpora a la memoria descriptiva como si fuera recitado individualmente en la presente memoria.

Se debe considerar que el uso de los terminos "un", "uno", "una", "el" y "la" y referentes similares en el contexto de esta descripcion (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) abarca tanto el singular como el plural, a no ser que se indique lo contrario en la presente memoria o se contradiga claramente con el contexto. Todos los metodos descritos en la presente memoria pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario en la presente memoria o que de otro modo se contradiga claramente con el contexto. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o un lenguaje ilustrativo (p.ej., tal como, preferido, preferiblemente) proporcionado en la presente memoria, tiene la intencion de ilustrar adicionalmente el contenido de la descripcion y no plantea una limitacion del alcance de las reivindicaciones. No se debe considerar que ningun lenguaje en la memoria descriptiva indique ningun elemento no reivindicado como esencial para la practica de la invencion reivindicada.

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Una pancreatina que con bajo contenido de contaminantes virales, obtenible mediante un proceso que comprende las etapas de

(a) precalentar una forma dispersada de pancreatina que contiene uno o mas disolventes a una temperatura de 85°C a 100°C, y

(b) calentar continuamente la forma dispersada de pancreatina a una temperatura de 85°C a 100°C durante un penodo de 18 horas a 30 horas, y obtener un contenido total de disolventes en la forma dispersada de pancreatina igual o menor que 3,5% en peso en cualquier punto durante la etapa (b) del proceso,

en donde la forma dispersada de pancreatina se selecciona entre polvos, pelets, micropelets, microesferas, granulos y productos granulados,

en donde el nivel de tftulo de cualquier contaminante viral presente en la pancreatina dispersada despues del calentamiento es al menos 1000 veces menor que el nivel de tftulo de dicho contaminante viral presente en la pancreatina dispersada antes del calentamiento, y

en donde la actividad lipasa de la pancreatina despues del calentamiento es al menos 50% de la actividad lipasa antes del calentamiento.
2. Pancreatina, obtenible mediante un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el contenido de disolventes obtenidos en la etapa (b) del proceso es de 0,1% a 3,5% en peso.
3. Pancreatina, obtenible mediante un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la temperatura en la etapa (a) del proceso y la temperatura en la etapa (b) del proceso es igual o diferente y es de 85°C a 95°C.
4. Pancreatina, obtenible por un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el calentamiento se realiza de forma continua.
5. Pancreatina, obtenible mediante un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el calentamiento se realiza de forma discontinua.
6. Pancreatina, obtenible mediante un proceso segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el nivel de tftulo de cualquier contaminante viral presente en la pancreatina dispersada despues del calentamiento es al menos 10000 veces menor que el nivel de tftulo de dicho contaminante viral presente en la pancreatina dispersada antes del calentamiento.
7. Pancreatina, obtenible mediante un proceso segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el contenido de disolventes obtenidos en la forma dispersada de pancreatina durante el calentamiento se determina mediante un metodo de titulacion de agua Karl Fischer o un metodo espectroscopico de infrarrojos normalizado contra un metodo de titulacion de agua Karl Fischer.
8. Pancreatina, obtenible mediante un proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde la forma dispersada de pancreatina es un polvo.
9. Una composicion farmaceutica, que comprende una cantidad farmacologicamente eficaz de una pancreatina de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables.
10. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 9, en donde la composicion esta en forma de una capsula o una bolsita.