ES2646175T3 - Derivados de azaindol como moduladores de CFTR - Google Patents

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ES2646175T3 ES14164892.3T ES14164892T ES2646175T3 ES 2646175 T3 ES2646175 T3 ES 2646175T3 ES 14164892 T ES14164892 T ES 14164892T ES 2646175 T3 ES2646175 T3 ES 2646175T3
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Jinglan Zhou
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula I:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que:**Fórmula** Ar1 es:**Fórmula** en la que: cada uno de G1, G2, G3 y G4 se seleccionan de forma independiente del grupo que consiste en CH y nitrógeno, en la que uno de G1, G2, G3 y G4 es nitrógeno y el resto de G1, G2, G3 y G4 es, cada uno, CH. Ar1 está unido a N(RN) a través de G2 o G3; Ar1 está no sustituido o sustituido con w apariciones de -WRW; RN es H, R2 o R3; el anillo A es un anillo monocíclico de 3-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en oxígeno, azufre y nitrógeno, en donde el anillo A está sustituido opcionalmente con q apariciones de - Q-RQ; el anillo B está opcionalmente condensado con un anillo de 5-7 miembros seleccionado del grupo que consiste en cicloalifático, arilo, heterocíclico y heteroarilo, en donde el anillo B, junto con dicho anillo condensado opcionalmente, está sustituido opcionalmente con x apariciones de -XRX; Q, W, o X es, de forma independiente, un enlace o es, de forma independiente, una cadena de alquilideno (C1- C6) en donde hasta dos unidades de metileno de Q, W, o X están opcional e independientemente sustituidos con -CO-, -CS-, -COCO-, -CONR'-, -CONR'NR'-, -CO2-, -OCO-, -NR'CO2-, -O-, -NR'CONR'-, -OCONR'-, -NR'NR', - NR'NR'CO-, -NR'CO-, -S-, -SO, -SO2-,-NR'-, -SO2NR'-, NR'SO2-, o -NR'SO2NR'-; cada RQ, RW y RX es, de forma independiente, R1, R2, R3, R4 o R5; R' es, de forma independiente, R2, R3 o R6; R1 es oxo, >=NN(R6)2, >=NN(R7)2, >=NN(R6R7), R6, o (alifático (C1-C4))n-Y; en donde n es 0 o 1; y Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, SR6, S(O)R6, SO2R6, NH2, NHR6, N(R6)2, NR6R8, COOH, COOR6 u OR6; o dos R1 en átomos adyacentes, juntos, forman**Fórmula** en la que J se selecciona del grupo que consiste en CH2, CF2, C(CH3)2, C(O), C(fenilo)2, B(OH) y CH(OEt); R2 es alifático, en donde cada R2 está no sustituido o sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R4 y R5; R3 es un anillo cicloalifático, arilo, heterocíclico o heteroarilo, en donde R3 está no sustituido o sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R4 y R5; R4 es OR5, OR6, OC(O)R6, OC(O)R5, OC(O)OR6, OC(O)OR5, OC(O)N(R6)2, OC(O)N(R5)2, OC(O)N(R6R5), SR6, SR5, S(O)R6, S(O)R5, SO2R6, SO2R5, SO2N(R6)2, SO2N(R5)2, SO2NR5R6, SO3R6, SO3R5, C(O)R5, C(O)OR5, C(O)R6, C(O)OR6, C(O)N(R6)2, C(O)N(R5)2, C(O)N(R 5R6), C(O)N(OR6)R6, C(O)N(OR5)R6, C(O)N(OR6)R5, C(O)N(OR5)R5, C(NOR6)R6, C(NOR6)R5, C(NOR5)R6, C(NOR5)R5, N(R6)2, N(R5)2, N(R5R6), NR5C(O)R5, NR6C(O)R6, NR6C(O)R5, NR5C(O)R6, NR6C(O)OR6, NR5C(O)OR6, NR6C(O)OR5, NR5C(O)OR5, NR6C(O)N(R6)2, NR6C(O)NR5R6, NR6C(O)N(R5)2, NR5C(O)N(R6)2, NR5C(O)NR5R6, NR5C(O)N(R5)2, NR6SO2R6, NR6SO2R5, NR5SO2R6, NR5SO2R5, NR6SO2N(R6)2, NR6SO2NR5R6, NR6SO2N(R5)2, NR5SO2NR5R6, NR5SO2N(R5)2, N(OR6)R6, N(OR6)R5, N(OR5)R5 o N(OR5)R6; R5 es un anillo cicloalifático, arilo, heterocíclico o heteroarilo, en el que R5 está no sustituido o sustituido con hasta 3 R1; R6 es H o alifático, en el que R6 está no sustituido o sustituido con R7; R7 es un anillo cicloalifático, arilo, heterocíclico o heteroarilo, y cada R7 está no sustituido o sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H, alquilo (C1-C6) de cadena lineal o ramificada, alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada o, 1,2-metilendioxi, 1,2-etilendioxi y (CH2)n-Z; Z se selecciona del grupo que consiste en halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, S-alifático, S(O)-alifático, SO2-alifático NH2, NH-alifático, N(alifático)2, N(alifático)R8, NHR8, COOH, C(O)O(-alifático) y O-alifático; R8 es acetilo, arilsulfonilo o alquilsulfonilo C1-C6 ; w es de 0 a 5; y cada uno de x y q es, de forma independiente, 0-5.

Description

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Derivados de azaindol como moduladores de CFTR Descripcion
CAMPO TECNICO DE LA INVENCION
La presente invencion se refiere a moduladores de los transportadores del casete de union a ATP ("ABC") o fragmentos de los mismos, incluyendo el regulador de la conductancia transmembrana en la fibrosis qmstica (“CFTR"), a composiciones de los mismos y a procedimientos in vitro con ellos. La presente invencion tambien se refiere a compuestos para su uso en los procedimientos para tratar enfermedades mediadas por el transportador de ABC.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
Los transportadores de ABC son una familia de protemas transportadoras de membrana que regulan el transporte de una amplia variedad de agentes farmacologicos, farmacos potencialmente toxicos, y xenobioticos, asf como aniones. Los transportadores ABC son protemas de membrana homologas que se unen y usan adenosm trifosfato (ATP) celular para sus actividades espedficas. Algunos de estos transportadores se descubrieron como protemas de resistencia a multiples farmacos (como la glicoprotema MDR1-P o la protema de resistencia a multiples farmacos MRP1), defendiendo las celulas cancerosas malignas contra agentes quimioterapeuticos. Hasta la fecha se han identificado 48 transportadores de ABC y se agruparon en 7 familias basandose en su identidad de secuencia y su funcion.
Los transportadores de ABC regulan diversas funciones fisiologicas importantes en el organismo y proporcionan defensa contra compuestos ambientales daninos. Por ello, representan potenciales objetivos farmacologicos importantes para el tratamiento de enfermedades asociadas con defectos en el transportador, la prevencion del transporte de farmacos fuera de la celula diana y la intervencion en otras enfermedades en las que la modulacion de la actividad del transportador de ABC puede ser beneficiosa.
Un miembro de la familia de los transportadores de ABC asociado habitualmente con la enfermedad es el canal de aniones mediado por AMPc/ATP, CFTR. El CFTR se expresa en diversos tipos celulares, incluyendo celulas de epitelios secretores y de absorcion, en las que regula el flujo de aniones a traves de la membrana, asf como la actividad de otros canales ionicos y protemas. En las celulas epiteliales, el funcionamiento normal del CFTR es fundamental para el mantenimiento del transporte de electrolitos por todo el cuerpo, incluyendo los tejidos respiratorio y digestivo. El CFTR se compone de aproximadamente 1.480 aminoacidos que codifican una protema formada por una repeticion en tandem de dominios transmembrana, conteniendo cada uno de ellos seis helices transmembrana y un dominio de union a nucleotidos. Los dos dominios transmembrana estan unidos por un gran dominio regulador (R) polar con multiples sitios de fosforilacion que regula la actividad del canal y el transito celular.
El gen que codifica el CFTR se ha identificado y secuenciado (vease Gregory, R. J. et al. (1990) Nature 347:382-386; Rich, D. P. et al. (1990) Nature 347:358-362), (Riordan, J. R. et al. (1989) Science 245:1066-1073). Un defecto en este gen causa mutaciones en el CFTR que provocan fibrosis qmstica (“FQ”), la enfermedad genetica mortal mas frecuente en seres humanos. La fibrosis qmstica afecta a aproximadamente uno de cada 2.500 lactantes en Estados Unidos. Dentro de la poblacion estadounidense general, hasta 10 millones de personas portan una sola copia del gen defectuoso sin efectos patologicos evidentes. Por el contrario, los individuos con dos copias del gen asociado a la FQ padecen los efectos debilitantes y mortales de la fibrosis qmstica, incluyendo la enfermedad pulmonar cronica.
En los pacientes con fibrosis qmstica, las mutaciones en el CFTR expresado endogenamente en los epitelios respiratorios conducen a una reduccion de la secrecion apical de aniones que causa un desequilibrio en el transporte de iones y fluidos. La disminucion resultante en el transporte de aniones contribuye a un aumento de la acumulacion de moco en el pulmon y a las infecciones microbianas acompanantes que, en ultima instancia, causan la muerte en los pacientes con FQ. Ademas de la enfermedad respiratoria, los pacientes con FQ padecen normalmente problemas gastrointestinales e insuficiencia pancreatica que, si se deja sin tratar, provoca la muerte. Ademas, la mayona de los varones con fibrosis qmstica son esteriles y la fertilidad disminuye entre las mujeres con fibrosis qmstica. Al contrario que los graves efectos de las dos copias del gen asociado a la fibrosis qmstica, los individuos con una sola copia del gen asociado a la FQ presentan una mayor resistencia al colera y a la deshidratacion como consecuencia de la diarrea, lo que quizas explique la frecuencia relativamente elevada del gen de la FQ dentro de la poblacion.
El analisis de secuencia del gen del CFTR de los cromosomas de la FQ ha revelado diversas mutaciones causantes de la enfermedad (Cutting, G. R. et al., (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. et al. (1990) Cell 61:863:870; y Kerem, B-S. et al. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451). Hasta la fecha, se han identificado mas de 1.000 mutaciones causantes de la enfermedad en el gen de la fibrosis qmstica (
http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/). La mutacion mas prevalente es una delecion de la
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fenilalanina en la posicion 508 de la secuencia de aminoacidos del CFTR y habitualmente se denomina AF508- CFTR. Esta mutacion se produce en aproximadamente el 70 de los casos de fibrosis qmstica y esta asociada con una enfermedad grave.
La delecion del residuo 508 en AF508-CFTR impide el plegamiento correcto de la protema naciente. Esto da como resultado la incapacidad de la protema mutante para salir del retmulo endoplasmatico (“RE”) y transitar hacia la membrana plasmatica. Como resultado, el numero de canales presentes en la membrana es mucho menor que el observado en las celulas que expresan el CFTR natural. Ademas de la alteracion del transito, la mutacion produce una abertura y un cierre defectuosos de los canales. En conjunto, el menor numero de canales en la membrana y la abertura y cierre defectuosos tienen como resultado una reduccion del transporte de los aniones a traves de los epitelios, que conduce a un transporte defectuoso de iones y fluidos. (Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4: 2709-2727). Sin embargo, los estudios han demostrado que los numeros reducidos del AF508-CFTR en la membrana son funcionales, aunque menos que el CFTR natural. (Dalemans et al. (1991), Nature Lond. 354: 526528; Denning et al., ant.; Pasyk y Foskett (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50). Ademas de AF508-CFTR, otras mutaciones en el CFTR causantes de enfermedad que producen un transito, una smtesis y/o una abertura y un cierre defectuosos de los canales se podnan regular por aumento o por disminucion para alterar la secrecion de aniones y modificar la progresion de la enfermedad y/o su gravedad
Aunque el CFTR transporta diversas moleculas ademas de aniones, es evidente que este papel (el transporte de aniones) representa un elemento en un importante mecanismo de transporte de iones y agua a traves del epitelio. Los otros elementos incluyen el canal de Na+ epitelial, ENaC, el cotransportador de Na+/2Cl-/K+, la bomba de ATPasa de Na+-K+ y los canales de K+ de la membrana basolateral, que son responsables de la captacion de cloruro en la celula.
Estos elementos trabajan juntos para conseguir un transporte direccional a traves del epitelio mediante su expresion y localizacion selectivas dentro de la celula. La absorcion de cloruro tiene lugar mediante la actividad coordinada del ENaC y del CFTR presentes en la membrana apical y la bomba de ATPasa de Na+-K+ y los canales de Cl-expresados en la superficie basolateral de la celula. El transporte activo secundario del cloruro desde el lado luminal conduce a la acumulacion del cloruro intracelular, que despues puede abandonar pasivamente la celula a traves de los canales del Cl -, lo que da lugar a un transporte vectorial. La disposicion del cotransportador de Na+/2Cl -/K+, la bomba de ATPasa de Na+-K+ y los canales de K+ de la membrana basolateral en la superficie basolateral y del CFTR en el lado luminal coordinan la secrecion del cloruro mediante CFTR en el lado luminal. Debido a que el agua probablemente nunca se transporta de forma activa por sf misma, su flujo a traves de los epitelios depende de diminutos gradientes osmoticos transepiteliales generados por el flujo masivo del sodio y cloruro.
Ademas de la fibrosis qmstica, la modulacion de la actividad del CFTR puede ser beneficiosa para otras enfermedades no causadas directamente por mutaciones en el CFTR, tales como enfermedades secretoras y otras enfermedades del plegamiento de protemas mediado por el CFTR. Estas incluyen, entre otras, la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC), la enfermedad del ojo seco y el smdrome de Sjogren.
La EPOC se caracteriza por una limitacion del flujo de aire que es progresiva y no totalmente reversible. La limitacion del flujo de aire se debe a una hipersecrecion de moco, enfisema y bronquiolitis. Los activadores del CFTR de tipo natural o mutante ofrecen un tratamiento potencial de la hipersecrecion de moco y del aclaramiento mucociliar alterado que es habitual en la EPOC. En concreto, el aumento de la secrecion de aniones a traves del CFTR puede facilitar el transporte de fluido hacia el lfquido de la superficie de las vfas respiratorias para hidratar el moco y optimizar la viscosidad del fluido periciliar. Esto conducina a un aumento del aclaramiento mucociliar y a una reduccion de los smtomas asociados con la EPOC. La enfermedad del ojo seco se caracteriza por una disminucion en la produccion acuosa de la lagrima y perfiles anormales de lfpidos, protemas y mucina en la pelmula lacrimal. . Existen muchas causas del ojo seco, algunas de las cuales incluyen la edad, la cirugfa ocular de Lasik, la artritis, medicaciones, quemaduras qmmicas/termicas, alergias y enfermedades tales como la fibrosis qmstica y el smdrome de Sjogren. El aumento de la secrecion de aniones a traves del CFTR aumentana el transporte de fluidos desde las celulas endoteliales corneales y las glandulas secretoras que rodean el ojo para aumentar la hidratacion corneal. Esto ayudana a aliviar los smtomas asociados con la enfermedad del ojo seco. El smdrome de Sjogren es una enfermedad autoinmunitaria en la que el sistema inmunologico ataca las glandulas productoras de humedad de todo el cuerpo, incluyendo el ojo, la boca, la piel, el tejido respiratorio, el tngado, la vagina y los intestinos. Los smtomas incluyen sequedad ocular, de boca y vaginal, asf como enfermedad pulmonar. La enfermedad tambien esta asociada con artritis reumatoide, lupus sistemico, esclerosis sistemica y polimiositis/dermatomiositis. Se cree que un transito de protemas defectuoso causa la enfermedad, para la que las opciones de tratamiento son limitadas. Los moduladores de la actividad del CFTR pueden hidratar los diversos organos afectados por la enfermedad y ayudar a elevar los smtomas asociados.
Como se ha indicado anteriormente, se cree que la delecion del residuo 508 en AF508-CFTR impide que la protema naciente se pliegue correctamente, produciendo la incapacidad de esta protema mutante para salir del RE y transitar hacia la membrana plasmatica. Como resultado de ello, hay cantidades insuficientes de la protema madura
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en la membrana plasmatica y el transporte del cloruro dentro de los tejidos epiteliales se reduce significativamente. De hecho, se ha demostrado que este fenomeno celular de procesamiento defectuoso del RE de los transportadores de ABC por la maquinaria del RE es la base subyacente, no solo de la enfermedad de FQ, sino de una amplia variedad de otras enfermedades aisladas y hereditarias. Las dos formas en las que la maquinaria del RE puede funcionar erroneamente son bien mediante la perdida del acoplamiento con la exportacion del RE de las protemas, lo que conduce a su degradacion, o bien mediante la acumulacion en el RE de estas protemas defectuosas/plegadas erroneamente [Aridor M, et al., Nature Med., 5(7), pp 745- 751 (1999); Shastry, B.S., et al., Neurochem. International, 43, pp 1-7 (2003); Rutishauser, J., et al., Swiss Med Wkly, 132, pp 211-222 (2002); Morello, JP et al., TIPS, 21, pp. 466- 469 (2000); Bross P., et al., Human Mut., 14, pp. 186-198 (1999)]. Las enfermedades asociadas con la primera clase de funcionamiento erroneo del RE son fibrosis qmstica (debida a AF508-CFTR plegado erroneamente, como se ha analizado anteriormente), enfisema hereditario (debido a la a1- antitripsina; variantes no Piz), hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion-fibrinolisis tales como deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal tales como enfermedad de celula l/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis (debida a enzimas del procesamiento lisosomal), Sandhof/Tay-Sachs (debida a p-hexosaminidasa), Crigler-Najjar de tipo II (debida a la UDP-glucuronil-sialic-transferasa), poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus (debida al receptor de insulina), enanismo de Laron (debido al receptor de hormona del crecimiento, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario (debido a la hormona preproparatiroidea), melanoma (debido a tirosinasa). Las enfermedades asociadas con la ultima clase de mal funcionamiento del RE son glucanosis CDG de tipo 1, enfisema hereditario (debido a la a1 -antitripsina (variante PiZ) , hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta (debida al procolageno de tipo I, II, IV) , hipofibrinogenemia hereditaria (debida al fibrinogeno), deficiencia de ACT (debida a la a1-antiquimiotripsina) , diabetes insfpida (DI), DI neurofiseal (debida a la hormona vasopresina/receptor V2) , DI nefrogenica (debida a la acuaporina II), smdrome de Charcot-Marie Tooth (debido a la protema de mielina periferica 22) , enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer (debida a la pAPP y a las presenilinas), enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de la poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-palido-luisiana y distrofia miotonica, asf como encefalopatfas espongiformes, tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la protema prionica) , enfermedad de Fabry (debida a la a- galactosidasa A lisosomal) , smdrome de Straussler-Scheinker, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC, enfermedad del ojo seco y smdrome de Sjogren.
Ademas de la regulacion por aumento de la actividad del CFTR, la reduccion de la secrecion de aniones por moduladores del CFTR puede ser beneficiosa para el tratamiento de diarreas secretoras, en las que el transporte de agua epitelial se aumenta espectacularmente como resultado del transporte de cloruro activado por secretores. El mecanismo implica la elevacion del AMPc y la estimulacion del CFTR.
Aunque existen numerosas causas de diarrea, las consecuencias principales de las enfermedades diarreicas, que se producen como consecuencia de un transporte de cloruro excesivo, son comunes a todas e incluyen deshidratacion, acidosis, alteracion del crecimiento y muerte.
Las diarreas agudas y cronicas representan un problema medico muy importante en muchas zonas del mundo. La diarrea es tanto un factor importante en la malnutricion como la causa principal de mortalidad (5.000.000 muertes/ano) en ninos menores de cinco anos.
Las diarreas secretoras tambien son una afeccion peligrosa en pacientes con smdrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y enfermedad inflamatoria intestinal (EII) cronica. Dieciseis millones de viajeros a pafses en vfas de desarrollo procedentes de naciones industrializadas desarrollan diarrea cada ano, con gravedad y el numero de casos de diarrea variables en funcion del pafs y de la zona del viaje.
La diarrea en animales estabulados y animales domesticos, tales como vacas, cerdos y caballos, ovejas, cabras, gatos y perros, tambien conocida como scours, es una causa fundamental de muerte en estos animales. La diarrea puede ser consecuencia de una transicion importante, tal como destete o movimiento ffsico, asf como en respuesta a diversas infecciones bacterianas o virales y generalmente se produce en las primeras horas de la vida del animal.
La bacteria causante de diarrea mas frecuente es la E. coli enterotoxigenica (ETEC) que posee el antfgeno de pili k99. Las causas virales frecuentes de diarrea incluyen rotavirus y coronavirus. Otros agentes infecciosos incluyen criptosporidium, giardia lamblia y salmonella, entre otros.
Los smtomas de la infeccion por rotavirus incluyen excrecion de heces acuosas, deshidratacion y debilidad. Los coronavirus causan una enfermedad mas grave en los animales neonatos y poseen una tasa de mortalidad mas alta que la infeccion por rotavirus. No obstante, a menudo, un animal joven puede infectarse con mas de un virus o con una combinacion de microorganismos vmcos y bacterianos a la vez. Esto aumenta espectacularmente la
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gravedad de la enfermedad.
Por consiguiente, existe la necesidad de moduladores de la actividad del transportador de ABC y composiciones de los mismos, que se puedan usar para modular la actividad del transportador de ABC en la membrana celular de un mairnfero.
Existe la necesidad de procedimientos de tratamiento de enfermedades causadas por el transportador de ABC usando dichos moduladores de la actividad del transportador de ABC.
Existe la necesidad de procedimientos de modulacion de la actividad del transportador de ASBC en la membrana celular de un marnffero ex vivo.
Existe la necesidad de moduladores de la actividad del CFTR que se puedan usar para modular la actividad del CFTR en la membrana celular de un mamnfero.
Existe la necesidad de procedimientos de tratamiento de enfermedades causadas por el CFTR usando dichos moduladores de la actividad del CFTR.
Existe la necesidad de procedimientos de modulacion de la actividad del CFTR en la membrana celular ex vivo de un mamffero. La WO2005/075435 A1 divulga moduladores de los transportadores del casete de union a ATP ("ABC") o fragmentos de los mismos, incluyendo el regulador de la conductancia transmembrana en la fibrosis qrnstica (“CFTR"), composiciones de los mismos y procedimientos con ellos. La WO 2007/117715 A2 divulga compuestos y composiciones farmaceuticamente aceptables de los mismos que son utiles como transportadores de los moduladores del casete de union a ATP ("ABC") o fragmentos de los mismos, incluyendo el regulador de la conductancia transmembrana en la fibrosis qrnstica (“CFTR").
SUMARIO DE LA INVENCION
Actualmente se ha descubierto que los compuestos de la presente invencion, y composiciones farmaceuticamente aceptables de los mismos, son utiles como moduladores de la actividad del transportador de ABC, en particular al actividad del CFTR. Estos compuestos tienen la formula general I:
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o una sal farmaceuticamente de los mismos, en la que Ar1, RN, anillo A, anillo B, X, RX y x se describen mas adelante.
Estos compuestos y composiciones farmaceuticamente aceptables son utiles para tratar o reducir la gravedad de diversas enfermedades, trastornos o afecciones, incluyendo, entre otras, fibrosis qrnstica, enfisema hereditario, hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion-fibrinolisis tales como la deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos, tales como la hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal tales como enfermedad de celulas I/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler- Najjar de tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, enanismo de Laron, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario, melanoma, glucanosis CDG de tipo I, enfisema hereditario, hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta, hipofibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, diabetes insfpida (DI) , DI neurofiseal, DI nefrogenica, smdrome de Charcot-Marie-Tooth, enfermedad de Perlizaeus- Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-palido-luisiana y distrofia miotonica, asf como encefalopatfas espongiformes tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria, enfermedad de Fabry , enfermedad de Straussler-Scheinker, EPOC, enfermedad del ojo seco o smdrome de Sjogren.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION
1. Descripcion general de los compuestos de la invencion:
La presente invencion se refiere compuestos de formula I utiles como moduladores de la actividad del
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transportador ABC, particularmente de la actividad del CFTR:
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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; en la que: Ar1 es:
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en la que:
cada uno de Gi, G2, G3 y G4 se seleccionan de forma independiente del grupo que consiste en CH y nitrogeno, en la que uno de Gi, G2, G3 y G4 es nitrogeno y el resto de Gi, G2, G3 y G4 es, cada uno, CH.
Ar1 esta unido a N(RN) a traves de G2 o G3;
Ar1 esta opcionalmente sustituido con w apariciones de -WRW; y RN es H, R2 o R3;
el anillo A es un anillo monodclico de 3-7 miembros que tiene 0-3 heteroatomos seleccionados del grupo que consiste en oxfgeno, azufre y nitrogeno, en el que el anillo A esta sustituido opcionalmente co q apariciones de - Q-RQ;
el anillo B opcionalmente condensado con un anillo de 5-7 miembros seleccionado del grupo que consiste en cicloalifatico, arilo, heterodclico y heteroarilo, en el que el anillo B, junto con dicho anillo condensado opcionalmente, esta sustituido opcionalmente con x apariciones de -XRX;
Q, W, o X es, de forma independiente, un enlace o es, de forma independiente, una cadena de alquilideno (C1-6) en la que dos unidades de metileno de Q, W, o X estan opcional e independientemente sustituidos -CO-, -CS-, - COCO-, -CONR'-, -CONRNR'- , -CO2-, -OCO-, -NR'CO2-, -O-, -NR'CONR'-, -OCONR'-, -NR'NR', -NR'NR'CO-, - NR'CO-, -S-, -SO, -SO2-, -NR'-, -SO2NR'-, NR'SO2-, o -NR'SO2NR'-; cada RQ, RW y RX es, de forma independiente, R1, R2, R3, R4 o R5;
R' es, de forma independiente, R2, R3 o R6;
R1 es oxo, =NN(R6)2, =NN(R7)2, =NN(R6R7), R6, o (alifatico (C1-C4))n-Y; en el que n es 0 o 1; y Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, SR6, S(O)R6, SO2R6, NH2, NHR6, N(R6)2, NR6R8, COOH, COOR6, u OR6; o
dos R1 en atomos adyacentes, juntos, forman
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en la que J se selecciona del grupo que consiste en CH2, CF2, C(CH3)2, C(O),
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C(fenilo)2, B(OH), y CH(OEt);
R2 es alifatico, en el que cada R2 esta opcionalmente sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R4 y R5;
R3 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en el que R3 esta opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R4 y R5;
R4 es OR5, OR6, OC(O)R6, OC(O)R5, OC(O)OR6, OC(O)OR5, OC(O)N(R6)2, OC(O)N(R5)2, OC(O)N(R6R5), SR6, SR5, S(O)R6, S(O)R5, SO2R6, SO2R5, SO2N(R6)2, SO2N(R5)2, SO2NR5R6, SO3R6, SO3R5, C(O)R5, C(O)OR5,
C(O)R6, C(O)OR6, C(O)N(R6)2, C(O)N(R5)2, C(O)N(R5R6), C(O)N(OR6)R6, C(O)N(OR5)R6, C(O)N(OR6)R5, C(O)N(OR5)R5, C(NOR6)R6, C(NOR6)R5, C(NOR5)R6, C(NOR5)R5, N(R6)2, N(R5)2, N(R5R6), NR5C(O)R5, NR6C(O)R6, NR6C(O)R5, NR5C(O)R6, NR6C(O)OR6, NR5C(O)OR6, NR6C(O)OR5, NR5C(O)OR5, NR6C(O)N(R6)2, NR6C(O)NR5R6, NR6C(O)N(R5)2, NR5C(O)N(R6)2, NR5C(O)NR5R6, NR5C(O)N(R5)2, NR6SO2R6, NR6SO2R5, NR5SO2R6, NR5SO2R5, NR6SO2N(R6)2, NR6SO2NR5R6, NR6SO2N(R5)2, NRsSO2NR5R6, NR5SO2N(R5)2, N(OR6)R6, N(OR6)R5, N(OR5)R5, o N(OR5)R6;
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R5 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en el que R5 esta opcionalmente sustituido con hasta 3 R1;
R6 es H o alifatico, en el que R6 esta opcionalmente sustituido con R7;
R7 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, y cada R7 esta opcionalmente sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en alquilo (C1-C6) de cadena lineal o ramificada, alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada o 1,2-metilendioxi, 1,2-etilendioxi y (CH2V Z;
Z se selecciona del grupo que consiste en halo, Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, S-alifatico, S(O)-alifatico, SO2-alifatico NH2, NH-alifatico, N(alifatico)2, N(alifatico)R8, NHR8, COOH, C(O)O(-alifatico) y O-alifatico;
R8 es acetilo, arilsulfonilo o alquilsulfonilo C1-C6; w es de 0 a 5; y
cada uno de x y q es, de forma independiente, 0-5.
2. Compuestos y Definiciones:
Los compuestos de la presente invencion incluyen los descritos generalmente anteriormente y se ilustran ademas mediante las clases, subclases y especies divulgadas en el presente documento. Como se usa en el presente documento, se aplicaran las siguientes definiciones a menos que indique lo contrario.
La expresion "transportador de ABC", como se usa en el presente documento, significa una protema transportadora de ABC o un fragmento de la misma que comprende al menos un dominio de union en el que dicha protema o dicho fragmento de la misma esta presente in vivo o in vitro. La expresion “dominio de union”, como se usa en el presente documento, significa un dominio del transportador de ABC que se puede unir a un modulador. Vease, por ejemplo, Hwang, T. C. et al., J. Gen. Physiol. (1998) : 111 (3) , 477-90. 111(3), 477-90.
El termino "CFTR", como se usa en el presente documento, significa regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qmstica, o una mutacion del mismo capaz de realizar una actividad de regulacion, incluyendo, pero sin limitacion, AF508 CFTR y G551D CFTR (veanse mutaciones del CFTR en, por ejemplo,
http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/).
El termino "modular", como se usa en el presente documento, significa aumentar o disminuir en una cantidad mensurable.
Para los fines de la presente invencion, los elementos qmmicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periodica de los Elementos, version CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed. Ademas, los principios generales de qmmica organica se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, y "March's Advanced Organic Chemistry", 5a Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001.
Como se describe en el presente documento, los compuestos de la invencion pueden estar sustituidos opcionalmente con uno o mas sustituyentes, tal como se ha ilustrado en general anteriormente, o como se pone de ejemplo mediante clases, subclases y especies concretas de la invencion. Se apreciara que la expresion “opcionalmente sustituido” se usa de forma intercambiable con la frase “sustituido o no sustituido.” En general, el termino “sustituido”, precedido o no por el termino “opcionalmente”, hace referencia a la sustitucion de radicales de hidrogeno en una estructura dada con el radical de un sustituyente especificado. A menos que se indique lo contrario, un grupo opcionalmente sustituido puede tener un sustituyente en cada posicion sustituible de l grupo y cuando mas de una posicion en cualquier estructura dada puede estar sustituida con mas de un sustituyente seleccionado de un grupo especificado, el sustituyente puede ser igual o diferente en cada posicion. Las combinaciones de sustituyentes prevista por la presente invencion son, preferentemente, aquellas que tienen como resultado la formacion de compuestos estables o qmmicamente viables. El termino “estable”, como se usa en el presente documento, hace referencia a los compuestos que no se alteran sustancialmente cuando estan sometidos a condiciones que permitan su produccion, deteccion y, preferentemente, su recuperacion, purificacion y uso para uno o mas de los fines divulgados en el presente documento. En algunas realizaciones, un compuesto estable o compuesto qmmicamente viable es uno que no se altera sustancialmente cuando se conserva a una temperatura de 40 °C o menor, en ausencia de humedad o de otras condiciones qmmicamente reactivas, durante al menos una semana.
El termino “alifatico” o “grupo alifatico”, como se usa en el presente documento, significa una cadena lineal (es decir, no ramificada) o ramificada, cadena de hidrocarburo sustituida o insustituida que esta completamente saturada o que contiene una o mas unidades de insaturacion o un hidrocarburo monodclico o hidrocarburo bidclico que esta completamente saturado o que contiene una o mas unidades de insaturacion, pero que no es aromatico (tambien denominado en el presente documento "carbociclo" "cicloalifatico" o "cicloalquilo" que tiene un unico punto de union al resto de la molecula. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alifaticos contienen 1-20 atomos de carbono alifaticos. En algunas realizaciones, los grupos alifaticos contienen 1-10 atomos de carbono alifaticos. En otras realizaciones, los grupos alifaticos contienen 1-8 atomos de carbono alifaticos. En otras
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realizaciones mas, los grupos alifaticos contienen 1-6 atomos de carbono alifaticos y en otras realizaciones mas, los grupos alifaticos contienen 1-4 atomos de carbono alifaticos. En algunas realizaciones, “cicloalifatico” (o “carbociclo” o “cicloalquilo”) hace referencia a un hidrocarburo C3-C8 monodclico o hidrocarburo C8-C12 bidclico que esta completamente saturado o que contiene una o mas unidades de insaturacion pero que no es aromatico, quetiene un unico punto de union al resto de la molecula, en la que cualquier anillo individual en dicho sistema de anillo bidclico tiene 3-7 miembros. Grupos alifaticos adecuados incluyen, entre otros, grupos alquilo, alquenilo, alquinilo lineales o ramificados, sustituidos o insustituidos, e tnbridos de los mismos tales como (cicloalquil)alquilo, (cicloalquenil)alquilo o (cicloalquil)alquenilo.
El termino “heteroalifatico”, como se usa en el presente documento, significa grupos alifaticos en los que uno o dos atomos de carbono estan sustituidos de forma independiente de uno o mas de oxfgeno, azufre, nitrogeno, fosforo o silicio. Grupos heteroalifaticos pueden ser grupos sustituidos o no sustituidos, ramificados o no ramificados, dclicos o adcliclos, e incluyen “heterociclo”, “heterociclilo”, “heterocicloalifatico” o “heterodclico”.
El termino “heterociclo”, “heterociclilo”, “heterocicloalifatico” o “heterodclico”, como se usa en el presente documento, significa sistemas de anillo no aromatico, monodclico, bidclico o tridclico en los que uno o una pluralidad de miembros de anillo es un heteroatomo seleccionado de forma independiente. En algunas realizaciones, el grupo heterociclo”, “heterociclilo”, “heterocicloalifatico” o “heterodclico” tiene de tres a catorce miembros de anillo en los que uno o mas miembros de anillo es un heteroatomos seleccionado de forma independiente del grupo que consiste en oxfgeno, azufre, nitrogeno y fosforo, y cada anillo en el sistema contiene de 3 a 7 miembros de anillo.
El termino “heteroatomo” significa uno o mas de boro, oxfgeno, azufre, nitrogeno, fosforo o silicio (incluyendo cualquier forma oxidada de nitrogeno, azufre, fosforo o silicio; la forma cuaternizada de cualquier nitrogeno basico o un nitrogeno sustituible de un anillo heterodclico, por ejemplo N (como en 3,4-dihidro-2H- pirrolilo), NH (como en pirrolidinilo) o NR+ (como en pirrolidinilo N-sustituido)).
El termino “insaturado”, como se usa en el presente documento, significa que un resto tiene una o mas unidades de insaturacion.
El termino “alcoxi,” o “tioalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente, unido a la cadena de carbono principal a traves de un atomo de oxfgeno ("alcoxi") o azufre ("tioalquilo").
Los terminos "haloalifatico" y "haloalcoxi" significan alifatico o alcoxi, segun sea el caso, sustituido con uno o mas atomos de halogeno. El termino "halogeno" significa F, Cl, Br, o I. Ejemplos de haloalifatico incluyen -CHF2, - CH2F, -CF3, -CF2-, o perhaloalquilo, tales como,-CF2CF3.
El termino “arilo” usado solo o como parte de un resto mas grande como en “aralquilo”, “aralcoxi” o “ariloxialquilo” hace referencia a sistemas de anillo monodclico, bidclico y tridclico que tienen un total de cinco a catorce miembros de anillo, en el que al menos un anillo en el sistema es aromatico y en el que cada anillo en el sistema contiene de 3 a 7 miembros de anillo. El termino “arilo” se puede usar de forma intercambiable con el termino “anillo arilo”. El termino "arilo" tambien se refiere a sistemas de anillos heteroarilo como se define en el presente documento a continuacion.
El termino “heteroarilo” usado solo o como parte de un resto mas grande como en “heteroaralquilo”, “heteroarilalcoxi” hace referencia a sistemas de anillo monodclico, bidclico y tridclico que tienen un total de cinco a catorce miembros de anillo, en el que al menos un anillo en el sistema es aromatico, al menos un anillo en el sistema contiene uno o mas heteroatomos y en el que cada anillo en el sistema contiene de 3 a 7 miembros de anillo. El termino “heteroarilo” se puede usar de forma intercambiable con el termino “anillo heteroarilo” o el termino "heteroaromatico”.
Un grupo arilo (incluyendo aralquilo, aralcoxi, ariloxialquilo y similares) o heteroarilo (incluyendo heteroaralquilo y heteroarilalcoxi y similares) puede contener uno o mas sustituyentes. Sustituyentes adecuados en el atomo de carbono insaturado de un grupo arilo o heteroarilo se seleccionan del grupo que consiste en halogeno, R°; -OR°; -SR°; 1, 2-metilendioxi; 1, 2-etilendioxi; fenilo (Ph) opcionalmente sustituido con R°; -O (Ph) opcionalmente sustituido con R°; -(CH2)1-2(Ph), opcionalmente sustituido con R°; -CH=CH (Ph) opcionalmente sustituido con R°; - NO2; -CN; -N(R°)2; -NR°C(O)R°; -NR°C(O)N(R°)2; -NR°CO2R°; -NR°NR°C(O)R°; -NR°NR°C(O)N(R°)2; - NR°NR°CO2R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°;-CO2R°; -C(O)R°; -C(O)N(R°)2; -OC(O)N(R°)2; -S(O)2R°; - SO2N(R°)2; -S(O)R°;-NR°SO2N(R°)2; -NR°SO2R°; -C(=S)N(R°)2; -C(=NH)-N(R°)2; y -(CH2)o-2NHC(O)R° en el que cada aparicion independiente de R° se selecciona del grupo que consiste en hidrogeno, grupo alifatico C1-6 opcionalmente sustituido, un anillo heteroarilo o heterodclico no sustituido de 5-6 miembros, fenilo, -O (Ph) o - CH2(Ph), o, a pesar de la definicion anterior, dos apariciones independientes de R°, en el mismo sustituyente o en sustituyentes distintos, tomadas junto con el/los atomo/s a los que cada grupo R° esta unido, forman un anillo cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo de 3-8 miembros que tiene 0-3 heteroatomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en nitrogeno, oxfgeno y azufre. Sustituyentes opcionales en el grupo
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alifatico de R° se seleccionan del grupo que consiste en NH2, NH(alifatico C1-4), N(alifatico Ci-4)2, halogeno, alifatico C1-4, OH, O(alifatico C1-4), NO2, CN, CO2H, CO2(alifatico C1-4), o(haloalifatico C1-4 ) y haloalifatico C1-4, en los que cada uno de los grupos alifaticos C1-4 anteriores de R° no esta sustituido.
Un grupo alifatico o heteroalifatico o un anillo heterodclico no aromatico puede contener uno o mas sustituyentes. Sustituyentes adecuados sobre el carbono saturado de un grupo alifatico o heteroalifatico, o de un anillo heterodclico no aromatico, se seleccionan del grupo que consiste en los enumerados anteriormente para el carbono no saturado de un grupo arilo o heteroarilo y, adicionalmente, incluyen los siguientes: =O, =S, =NNHR*, =NN(R*)2, =NNHC(O)R*, =NNHCo2(alquilo), =NNHSO2(alquilo), o =NR*, en los que cada R* se selecciona de forma independiente del grupo que consiste en hidrogeno y un alifatico C1a sustituido opcionalmente. Sustituyentes opcionales en el grupo alifatico de R* se seleccionan del grupo que consiste en NH2, NH(alifatico C1-4), N(alifatico C1- 4)2, halogeno, alifatico C1-4, OH, O(alifatico C1-4), NO2, CN, CO2H, CO2(alifatico C1-4), O(haloalifatico C1-4 ), o halo(alifatico C1-4), en los que cada uno de los grupos alifaticos C1-4 anteriores de R* no esta sustituido.
Sustituyentes opcionales en el nitrogeno de un anillo heterodclico no aromatico se seleccionan del grupo que consiste en -R+, -N(R+)2, -C(O)R+, -CO2R+, -C(O)C(O)R+, -C(O)CH2C(O)R+, -SO2R+, -SO2N(R+)2, -C(=S)N(R+)2, - C(=NH)-N(R+)2, y -NR+SO2R+; en los que R+ es hidrogeno, un alifatico C1a opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido, -O(Ph) opcionalmente sustituido, -CH2(Ph) opcionalmente sustituido, -(CH2)12- 2(Ph) opcionalmente sustituido; -CH=CH(Ph) opcionalmente sustituido; o un anillo heteroarilo o heterodclico de 5-6 miembros no sustituido que tiene de uno a cuatro heteroatomos seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en oxfgeno, nitrogeno y azufre o, a pesar de la definicion anterior, dos apariciones independientes de R+, en el mismo sustituyente o en sustituyentes diferentes, junto con el o los atomos a los que cada grupo R+ esta unido, forman un anillo cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo de 3-8 miembros que tiene 0-3 heteroatomos seleccionados de forma independiente de nitrogeno, oxfgeno y azufre. Sustituyentes opcionales en el grupo alifatico o el anillo fenilo de R+ se seleccionan del grupo que consiste en NH2, NH(alifatico C1-4), N(alifatico C1-4)2, halogeno, alifatico C1-4, OH, O(alifatico C1-4), NO2, CN, CO2H, CO2(alifatico C1-4), O(haloalifatico C1-4) y halo(alifatico C1.4), en
los que cada uno de los grupos alifaticos C14 anteriores de R+ no esta sustituido.
La expresion "cadena de alquilideno" se refiere a una cadena de carbono lineal o ramificada que puede estar completamente saturada o tener una o mas unidades de insaturacion y que tiene dos puntos de union al resto de la molecula. El termino "espirocicloalquilideno" se refiere a un anillo carbodclico que puede estar totalmente saturado o tener una o mas unidades de insaturacion y tiene dos puntos de union del mismo atomo de carbono del anillo con el resto de la molecula.
Como se ha detallado anteriormente, en algunas realizaciones se toman dos apariciones independientes de R° (o R+, o cualquier otra variable definida de forma similar en el presente documento) junto con el o los atomos a los que cada variable esta unida para formar un anillo cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo de 3-8 miembros que tienen 0-3 heteroatomos seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en nitrogeno, oxfgeno y azufre. Ejemplos de anillos que se forman cuando dos apariciones independientes de R° (o R+, o cualquier otra variable definida de forma similar en el presente documento) se toman junto con el o los atomos a los que cada variable esta unido incluyen, entre otros, los siguientes: a) dos apariciones independientes de R° (o R+, o cualquier otra variable definida de forma similar en el presente documento) que estan unidas al mismo atomo y se toman junto con dicho atomo para formar un anillo, por ejemplo N(R°)2, cuando ambas apariciones de R° se toman junto con el atomo de nitrogeno para formar un grupo piperidin-1-ilo, piperazin-1-ilo o morfilin-4-lo; y b) dos apariciones independientes de R° (o R+, o cualquier otra variable definida de forma similar en el presente documento) que estan unidas a diferentes atomos y se toman junto con dichos atomos para formar un anillo, por ejemplo en el que un grupo fenilo esta sustituido con dos apariciones de OR°
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estas dos apariciones de R° se toman junto con los atomos de oxfgeno a los que estan unidos para formar un anillo que contiene oxfgeno de 6 miembros fusionado.
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Se apreciara que se pueden formar diversos otros anillos cuando dos apariciones independientes de R° (o R+, o cualquier otra variable definida de forma similar en el presente documento) se toman junto con el o los atomos a los que cada variable esta unida y que los ejemplos detallados anteriormente no se pretende que sean limitantes.
A menos que se indique lo contrario, las estructuras representadas en el presente documento tambien se pretende incluir todas las formas isomericas (p. ej., formas enantiomericas, diaestereomericas y geometricas (o
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conformacionales) de la estructura, por ejemplo las configuraciones R y S para cada centro asimetrico, los isomeros (Z) y (E) de doble enlace y los isomeros conformacionales (Z) y (E). Por tanto, los isomeros estereoqmmicos unicos, asf como las mezclas enantiomericas, diatestereomericas y geometricas (o conformacionales) de los presentes compuestos estan dentro del alcance de la invencion. A menos que se indique lo contrario, todas estas formas tautomericas de los compuestos de la invencion entran dentro del alcance de la invencion. Adicionalmente, a menos que se indique lo contrario, con las estructuras representadas en el presente documento tambien se pretende incluir compuestos que difieren unicamente en la presencia de uno o mas atomos enriquecidos isotopicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras, a excepcion de la sustitucion de hidrogeno por deuterio o tritio, o la sustitucion de un carbono o por carbono 13C o 14C estan dentro del alcance de la presente invencion. Dichos compuestos son utiles, por ejemplo, como herramientas analtticas o sondas en ensayos biologicos.
1. Descripcion de compuestos de ejemplo
En una realizacion, Ar1 es un anillo sustituido opcionalmente seleccionado del grupo que consiste en:
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En algunas realizaciones, Ar1 es un grupo opcionalmente sustituido unido al atomo de nitrogeno N(RN) a traves del atomo G2 o G3.
En una realizacion, RN es hidrogeno. En otra realizacion, RN es un alifatico C1-C6 opcionalmente sustituido. O, RN es alquilo C1-C4. Realizaciones de ejemplo incluyen metilo, etilo o i-propilo.
En algunas realizaciones, el anillo A es un anillo cicloalifatico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido.
En otras realizaciones, el anillo A es un anillo de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que contiene 1 heteroatomo seleccionado del grupo que consiste en O, NH y S. O, el anillo A contiene dos heteroatomos seleccionados del grupo que consiste en O, S y NH.
En una realizacion, el anillo A se selecciona del grupo que consiste en:
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n (Q-RQ)q /v(Q-RQ)q hn^(q-rq)q rx(aRQ)q
^ X &
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El aniMo A se selecciona, preferentemente, del grupo que consiste en a, b, c, d y 1.
En una realizacion, el aniMo B esta condensado a un anillo heterodclico o heteroarilo de 5-7 miembros que tiene hasta 3 heteroatomos seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en B, O, N y S.
En otra realizacion, el anillo B esta condensado a un anillo heterodclico de 5-6 miembros que tiene hasta 3 heteroatomos seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en B, O, N y S.
En otra realizacion, el anillo B esta condensado a un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene hasta 3 heteroatomos seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en O, N y S.
En otra realizacion mas, el anillo B es, junto con dicho anillo condensado, esta opcionalmente sustituido con hasta dos sustituyentes RX.
En otra realizacion, el sustituyente RX es R1.
En otra realizacion, dicho anillo condensado al anillo B se selecciona del grupo que consiste en:
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i, ii, iii, viii, ix, x, xi, xii, xiii y xvi. En algunas realizaciones, el anillo que esta condensado al anillo B se selecciona del grupo que consiste en i, ii, iii, ix, xi, xii, xiii y xvi. En otras realizaciones, el anillo que esta condensado al anillo B es i. O, en anillo que esta condensado al anillo B es ii. O, es iii.
De acuerdo con otra realizacion, R1 es R6, en el que R6 es alquilo (C1-C6) o alquenilo o alquinilo (C1-C6) de cadena lineal o ramificada, opcionalmente sustituido con R7.
De acuerdo con otra realizacion, R1 es (alifatico C1-C4)n-Y, en el que n es 0 o 1 e Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, SR6, S(O)R6, SO2R6, NH2, NHR6, N(R6)2, NR6R8, COOH, COOR6, u OR6.
De acuerdo con otra realizacion, R1 se selecciona del grupo que consiste en halogeno, CF3, NH2, NH(alquilo C1-C4), NHC(O)CH3, OH, O(alquilo C1-C4), OPh, O-bencilo, S-(alquilo C1-C4), alifatico C1-C4, CN, SO2NH(alquilo C1-C4), y SO2N(alquilo C1-C4)2. De acuerdo con otras realizaciones mas, dos R1, en conjunto, se seleccionan del grupo que consiste en metilendioxi, difluorometilendioxi y etilendioxi.
De acuerdo con otra realizacion, R1 se selecciona del grupo que consiste en metilo, n-propilo, i-propilo, t- butilo, ciclopropilmetilo, ciclopropilo, halogeno, CF3, NH2, NH(CH3), NHC(O)CH3, OH, OCH3, OPh, O-bencilo, S- (C2H5), S-CH3, NO2, CN, SO2NH(n-propilo) y SO2N(n-propilo)2. De acuerdo con otra realizacion mas, dos R1, en conjunto, se seleccionan del grupo que consiste en metilendioxi y difluorometilendioxi.
De acuerdo con una realizacion, R2 es alquilo (C1-C6) o alquenilo o alquinilo (C1-C6) de cadena lineal o ramificada, opcionalmente sustituido con R1, R4 o R5 En determinadas realizaciones, R2 es alquilo (C1-C4) o alquenilo o alquinilo (C2-C4) de cadena lineal o ramificada, opcionalmente sustituido con R1, R4 o R5 De acuerdo con otras realizaciones, R2 es alquilo (C1-C4) o alquenilo o alquinilo (C2-C4) de cadena lineal o ramificada.
De acuerdo con una realizacion, R3 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en el que R3 esta opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R4 y R5 En una realizacion, R3 es un cicloalifatico C3-C8 opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente de R1, R2, R4 y R5 Ejemplos de cicloalifaticos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo. En otra realizacion, R3 es un arilo C6-C10 opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente de R1, R2, R4 y R5 Ejemplos de anillos arilo incluyen fenilo o naftilo. En otra realizacion, R3 es un heterodclico C3-C8 opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente de R1, R2, R4 y R5 Ejemplos de anillos heterodclicos incluyen azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperacinilo, morfolinilo o tiomorfolinilo. En otra realizacion, R3 es un anillo heteroarilo C5-C10 opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente de R1, R2, R4 y R5. Entre los ejemplos de heteroarilo se incluyen piridilo, pirazilo, triazinilo, furanilo, pirrolilo, tiofenilo, oxazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, pirimidinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, indolizinilo, indolilo, isoindolilo, indolinilo, indazolilo, bencimidazolilo, benzotiazolilo, purinilo, cinnolinilo, ftalazina, quinazolinilo, quinaoxalinilo, naftilirinilo o pteridinilo.
De acuerdo con una realizacion, R4 se selecciona del grupo que consiste en OR5, OR6, SR5, SR6, NR5COR5, NR5COR6, NR6COR5 y NR6COR6.
De acuerdo con una realizacion, R5 es cicloalquilo C5-C6, arilo C6 o C10, heteroarilo C5-C10 o heterociclilo C3-C7, opcionalmente sustituido con hasta 2 R1. En determinadas realizaciones, R5 es un ciclohexilo, fenilo, heteroarilo C5-C6 o heterociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido.
De acuerdo con una realizacion, R6 es H.
De acuerdo con otra realizacion, R6 es alquilo (C1-C6) o alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada, opcionalmente sustituido con R7.
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De acuerdo con otra realizacion, R6 es alquilo (C1-C6) o alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada.
De acuerdo con una realizacion, R7 es cicloalquilo C5-C6, fenilo, naftilo, heteroarilo C5-C10 o heterociclilo C3-C7, opcionalmente sustituido con alquilo (C1-C6) o alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada. O R7 es cicloalquilo C5-C6, fenilo, naftilo, heteroarilo C5-C10 o heterociclilo C3-C7, opcionalmente sustituido con metilendioxi, difluorometilendioxi, etilendioxi o (CH2VZ. En determinadas realizaciones, R7 es un ciclohexilo, fenilo, heteroarilo C5-C6 o heterociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido.
R8 es acetilo, arilsulfonilo o alquilsulfonilo C1-C6.
En algunas realizaciones, J es CH2. En otras realizaciones, J es CF2. O, J es C(CH3)2. O, J es C(O). O, J es
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O, J es
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O, J es
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O, J es
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O, J es C(fenilo)2. O, J es B(OH). O, J es CH(OEt).
En una realizacion, Q es un enlace. O, Q es una cadena alquilideno (C1-C6). O Q es una cadena alquilideno (C1-C6), en la que hasta dos unidades de metileno en la misma estan opcional e independientemente sustituidas por -CO-, -CS-, -COCO-, -CONR'-, -CONR'NR'-, -CO2-, -OCO-, -NR'CO2-, -O-, -NR'CONR'-, -OCONR'-, - NR'NR', -NR'NR'CO-, -NR'CO-, -S-, -SO, -SO2-,-NR'-, -SO2NR'-, NR'SO2- o -NR'SO2NR'- En una realizacion, dichas hasta dos unidades de metileno en la misma estan opcional e independientemente sustituidas por -CO-, -CONR'-, - CO2-, -OCO-, -NRCO2-, -O-, -NR'CONR'-, -OCONR'-, -NR'CO-, -S-, -SO, -SO2-, -NR'-, -SO2NR'-, NR'SO2- o - NR'SO2NR'-. O dichas hasta dos unidades de metileno en la misma estan opcional e independientemente sustituidas por -CO-, -O-, -S-, -NR'-, -CO2-, o -SO2-.
En una realizacion, w es 0-3. En otra realizacion, w es 1-3.
En algunas realizaciones, W es un enlace. En otras realizaciones, W es una cadena alquilideno (C1-C6) opcionalmente sustituida, en la que hasta dos unidades de metileno de W estan opcional e independientemente sustituidas por -CO-, -CONR'-, -CO2-, -OCO-, -NRCO2-, -O-,-NR'CONR'-, -OCONR'-, -NR'CO-, -S-, -SO, -SO2- -NR'-, -SO2NR'-, R'SO2-, o-NR'SO2NR'-. O W es una cadena alquilideno (C1-C6) opcionalmente sustituida, en la que hasta dos unidades de metileno no adyacentes de W estan opcionalmente sustituidas por -CONR'-, -CO2-, -O-, -S-, -SO2-,- NR'-, o -SO2NR'-.
En algunas realizaciones, Rw es, de forma independiente, R2 o R3
En otra realizacion, RW es alifatico C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta cuatro sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5.
En otra realizacion, RW es arilo C6-C10 opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5
En otra realizacion mas, RW es un anillo heterodclico monodclico o bidclico de 3-10 miembros
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opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5.
En otra realizacion, RW es un anillo heteroarilo monodclico o bidclico de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5
En una realizacion alternativa, x es 1-5. En algunas realizaciones, x es 1; en otras, x es 2; en algunas otras, x es 3; en otras mas, x es 4; y en otras, x es 5
En algunas realizaciones, X es un enlace. En algunas otras realizaciones, X es una cadena alquilideno (C1- C6) en la que uno o dos unidades de metileno no adyacentes estan opcional e independientemente sustituidas por O, NR', S, SO2, COO, o CO. En algunas realizaciones, RX es R2 o R3.
En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos de formula II:
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en la que:
Rx, X, x, RN, G1, G2, G3 y G4 son como se ha definido anteriormente; m es de 0 a 4;
Ar1 es:
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en la que uno de G1, G2, G3 y G4 es nitrogeno y el resto de G1, G2, G3, and G4 es cada uno CH; en la que Ar1 esta unido a N(RN) a traves de G2 o G3;
Ar1 esta opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes RW, en los que cada RW se selecciona de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R3 y R4;
En una realizacion, Ar1 esta unido a traves del atomo G2.
En otras realizaciones, Ar1 esta unido a traves del atomo G3.
En otra realizacion, la presente invencion proporciona compuestos de formula IIIA o formula IIIB:
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en las que Rx, X, x, m, RN, G1, G2, G3 y G4 son como se ha definido anteriormente; y cada RW se selecciona de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R3 y R4.
En una realizacion de IIIA, G1 es N, cada uno de G2 y G4 es CH, y G3 es C. En otra realizacion de IIIA, G2 es N, cada uno de G1 y G4 es CH, y G3 es C. En otra realizacion mas de IIIA, G4 es N, cada uno de G1 y G2 es CH, y G3 es C. En una realizacion de IIIB, G1 es N, cada uno de G3 y G4 es CH, y G2 es C. En otra realizacion de IIIB, G3 es N, cada uno de G1 y G4 es CH, y G2 es C. En otra realizacion mas de IIIB, G4 es N, cada uno de G1 y G3 es CH, y G2 es C.
En una realizacion, RW es R6 o (alifatico (C1-C4))n-Y;. n es 0 o 1; y
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Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, SR6, S(O)R6, SO2R6, NH2, NHR6, N(R6)2, NR6R8, COOH, COOR6, u OR6.
En una realizacion, RW es alifatico C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta cuatro sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R4 y R5
En otra realizacion, RW es un arilo C6-C10 opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5
En otra realizacion mas, RW es un anillo heterodclico monodclico o bidclico de 3-10 miembros opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5
En otra realizacion, RW es un anillo heteroarilo monodclico o bidclico de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con hasta cinco sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R4 y
R5.
En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona compuestos de formula IVA o formula IVB o formula IVC:
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H
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en las que Rx, X, x y RW se han definido anteriormente.
En una realizacion, RW que esta unido a un carbono n° 2 es R2 o R3
En algunas realizaciones, RW que esta unido al carbono n° 2 es alifatico C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta cuatro sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en R1, R4 y R5
En algunas realizaciones, RW que esta unido al carbono n° 2 es un alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente.
En algunas realizaciones, RW que esta unido al carbono n° 2 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, 1 -metilciclopropilo o terc-butilo.
En algunas realizaciones, RW que esta unido a un carbono n° 2 es terc-butilo.
En algunas realizaciones, RW que esta unido a un carbono n° 2 es etilo.
En algunas realizaciones, RW que esta unido a un carbono 1 -metilciclopropilo.
En algunas realizaciones, RW que esta unido al carbono n° 3 es H.
En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona compuestos de formula VA, formula VB o formula VC:
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en las que Rx, X, x y RW se han definido anteriormente.
En algunas realizaciones, W es alquilideno C1-C6 opcionalmente sustituido.
En algunas realizaciones, W es alquilideno C1-C6 sustituido con un grupo hidroxi, alcoxi o amino.
En algunas realizaciones, W es alquilideno C1-C6 sustituido con un grupo hidroxi.
En algunas realizaciones, Rw es R4 En algunas realizaciones, Rw es OR6.
En algunas realizaciones, Rw es OH.
En algunas realizaciones, W es alquilideno C1-C6 opcionalmente sustituido y Rw es OR6.
En algunas realizaciones, W es alquilideno C1-C6 sustituido con un grupo hidroxilo, alcoxi o amino, y Rw es
OH.
En algunas realizaciones, -WRw es -C2H4OH o -CH2CH(OH)CH2OH.
Ejemplos de compuestos de la presente invencion se citan mas adelante en la Tabla 1, en la que los compuestos de 9 a 11 y 15 son ejemplos de referencia
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Tabla 1
1
2 3
ixfy'Co
O^jC0+
5 6
7
8 9
CC^OdH- N
10
11 12
kojj&H A »
^0^05-0
13
14 15
A h
? O I >
4. Esquemas sinteticos generales
Los compuestos de formula I se pueden preparar mediante procedimientos bien conocidos en la materia. Mas adelante se ilustran procedimientos de ejemplo para la preparacion de compuestos de formula I. Los esquemas I siguientes ilustran un procedimiento sintetico de ejemplo para los compuestos de formula I.
ESQUEMAS DE SINTESIS
Los compuestos de la invencion se pueden preparar mediante procedimientos conocidos y como se ilustra en los Esquemas I-IX.
Esquema I
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a) SOCI2, DMF (cat.), DCM; b) HNRNAr1, pir.; c) HNRNAr1, HATU, TEA, DCM/DMF. Esquema II
a)
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NaOH, BTEAC, A; NaOH, A Esquema III
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a) NaOH, BTEAC, A; b) NaOH, A
Los fenilacetonitrilos estan disponibles comercialmente o se pueden preparar como se muestra en el Esquema IV.
Esquema IV
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a) Pd(PPha)4, CO, MeOH; b) LiAlH4, THF; c) SOCl2; d) NaCN; e) NBS o NCl, AIBN, CX4 (X = Br o Cl) Esquema V
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a) I2, /Ag2SO4, EtOH; b) HC=C-R", Pd(PPh3)2Ch, CuI, Et3N, tolueno/H2O; c) RC(O)Cl, piridina, CH2Cl2; d) t-BuOK, DMF; e) CuSO4, NH3/MeOH
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Esquema VI
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a) B0C2O, DMAP, Et3N, CH2CI2; b) n-BuLi, TMEDA, Et2O; I2; c) HC=C-R", Pd(PPh3)2Cl2, CuI, Et3N, tolueno/H2O; d) TBAF, THF; e) CuSO4, NH3/MeOH
Esquema VII
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a) B0C2O, DMAP, Et3N, CH2CI2; b) n-BuLi, TMEDA, Et2O; I2; c) 3M HCl; d) HC=C-R", Pd(PPh3)2Cl2, CuI, Et3N,
tolueno/H2O; e) fBuOK, DMF; f) CuSO4, NH3/MeOH
Esquema VIII
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a) Br2, H2SO4; b) HC=C-R", Pd(PPh3)2Cl2, CuI, Et3N, tolueno/H2O; c) TBAF, THF; d) H2, Ni Raney, MeOH Esquema IX
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a) R'"CHO, NaBHaCN, CF3CO2H; b) HC=C-R", Pd(PPha)2Cl2, CuI, Et3N; c) t-BuOK, DMF; d) NH3 (ac)/CuSO4, autoclave.
En los esquemas anteriores, el radical R usados en los mismos es un sustituyente, por ejemplo RW como se ha definido anteriormente en el presente documento. Un experto en la tecnica apreciara facilmente que v^as sinteticas adecuadas para varios sustituyentes de la presente invencion son tales que las condiciones y etapas de la reaccion.
5. Usos, formulacion y administracidn Composiciones farmaceuticamente aceptables
Como se ha tratado anteriormente, la presente invencion proporciona compuestos que son utiles como moduladores de los transportadores de ABC y, por tanto, son utiles en el tratamiento de enfermedades, trastornos o afecciones tales como fibrosis qmstica, enfisema hereditario, hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion-fibrinolisis tales como la deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos, tales como la hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal tales como enfermedad de celulas I/pseudo- Hurler, mucopolisacaridosis, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, enanismo de Laron, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario, melanoma, glucanosis CDG de tipo I, enfisema hereditario, hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta, hipofibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, diabetes insfpida (DI) , DI neurofiseal, DI nefrogenica, smdrome de Charcot-Marie-Tooth, enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-palido-luisiana y distrofia miotonica, asf como encefalopatfas espongiformes tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria, enfermedad de Fabry , enfermedad de Straussler-Scheinker, EPOC, enfermedad del ojo seco y smdrome de Sjogren.
De acuerdo con esto, en otro aspecto de la presente invencion se proporcionan composiciones farmaceuticamente aceptables, en las que estas composiciones comprenden cualquiera de los compuestos como se describe en el presente documento y comprenden, opcionalmente, un vehmulo, adyuvante o vehmulo farmaceuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, estas composiciones comprenden ademas opcionalmente uno o mas agentes terapeuticos adicionales.
Tambien se apreciara que ciertos de los compuestos de la presente invencion pueden existir en forma libre para el tratamiento, o cuando sea apropiado, como un derivado farmaceuticamente aceptable de los mismos. De acuerdo con la presente invencion, un derivado farmaceuticamente aceptable incluye, pero sin limitacion, sales, esteres, sales de dichos esteres, o cualquier otro aducto o derivado de los mismos que, tras su administracion a un paciente que lo necesite, sea capaz de proporcionar, directa o indirectamente, un compuesto descrito de otro modo en el presente documento, o un metabolito o residuo del mismo.
Como se usa en el presente documento, la expresion "sal farmaceuticamente aceptable" hace referencia a las sales que son, dentro del alcance del firme juicio medico, adecuadas para usar en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores sin excesiva toxicidad, irritacion, respuesta alergica y similares, y que son proporcionales a una razonable proporcion de beneficios/riesgos. Una “sal farmaceuticamente aceptable” significa cualquier sal no toxica o sal de un ester de un compuesto de la presente invencion que, tras la administracion a un receptor, es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, un compuesto de la presente invencion o un metabolito activo inhibidor o residuo del mismo. Como se usa en el presente documento, la expresion “metabolito activo inhibidor o residuo del mismo” significa que un metabolito o residuo del mismo tambien es un inhibidor de un transportador del casete de union a ATP.
En la tecnica se conocen bien sales farmaceuticamente aceptables. Por ejemplo, M. Berge, et al. describen sales farmaceuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de la presente invencion incluyen las derivadas de acidos y bases organicas e inorganicas adecuadas. Ejemplos de sales de adicion de acido no toxicas farmaceuticamente aceptables son sales de un grupo amino formado con acidos inorganicos, tales como acido clorlmdrico, acido bromhudrico, acido fosforico, acido sulfurico y acido perclorico, o con acidos organicos tales como acido acetico, acido oxalico, acido maleico, acido tartarico, acido cftrico, acido succmico o acido malonico, o usando otros procedimientos usados en la tecnica, tal como intercambio ionico. Otras sales farmaceuticamente aceptables incluyen adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato,laurato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato,
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pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, sales de valerato y similares. Las sales derivadas de bases adecuadas incluyen sales de metales alcalinos, de metales alcalino-terreos, de amonio y sales de N+(alquiloC1-4). La presente invencion tambien preve la cuaternizacion de cualquier grupo que contiene nitrogeno basico de los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva. Mediante dicha cuaternizacion se pueden obtener productos solubles en agua o aceite o dispersables. Sales de metales alcalinos o alcalino terreos representativas incluyen sales de sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Otras sales farmaceuticamente aceptables incluyen, cuando sea adecuado, cationes de amonio, de amonio cuaternaio y de amina no toxicos formados usando contraiones tales como haluro, hidroxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquilo inferior y sulfonato de arilo.
Como se ha descrito anteriormente, las composiciones farmaceuticamente aceptables de la presente invencion comprenden adicionalmente un vehmulo, adyuvante o vehmulo farmaceuticamente aceptable que, como se usa en el presente documento, incluye cualquiera y todos los disolventes, diluyentes u otros vehmulos lfquidos, dispersiones o suspensiones auxiliares, agentes de superficie activa, agentes isotonicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservantes, aglutinantes solidos, lubricantes y similares, como es adecuado para la forma de dosificacion concreta deseada. En Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) se divulgan varios vehmulos usados en la formulacion de composiciones farmaceuticamente aceptables y tecnicas conocidas para la preparacion de las mismas. Excepto en lo que respecta a cualquier medio vehmulo convencional es incompatible con los compuestos de la invencion, tal como produciendo cualquier efecto biologico indeseable o, de otro modo, interaccionando de un modo perjudicial con cualquier otro componente(s) de la composicion farmaceuticamente aceptable, su uso se contempla dentro del alcance de la presente invencion. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehmulos farmaceuticamente aceptables incluyen, entre otros, intercambiadores de iones, alumina, estearato de aluminio, lecitina, protemas sericas, tales como seroalbumina humana, sustancias tampon tales como fosfatos, glicina, acido sorbico o sorbato potasico, mezclas parciales de gliceridos de acidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato hidrogeno disodico, fosfato hidrogeno de potasio, cloruro sodico, sales de cinc, sflice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, poliacrilatos, ceras, polfmeros de bloque de polietileno- polioxipropileno, grasa de lana, azucares tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones tales como almidon de mafz y almidon de patata; celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sodica, etilcelulosa y acetato de celulosa; goma de tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes tales como manteca de cacao y ceras de supositorio; aceites tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon; aceite de cartamo; aceite de sesamo; aceite de oliva; aceite de mafz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol o polietilenglicol; esteres tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tampon tales como hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio; acido algmico; agua sin pirogenos; solucion salina isotonica; solucion de Ringer; alcohol etflico y soluciones de tampon fosfato, asf como otros lubricantes compatibles no toxicos tales como laurilsulfato sodico y estearato de magnesio, asf como agentes colorantes, agentes de liberacion, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, tambien puede haber conservantes y antioxidantes en la composicion, de acuerdo con el juicio del formulador.
Usos de Compuestos y Composiciones farmaceuticamente aceptables
En otro aspecto mas, la presente invencion proporciona compuestos para usar en un procedimiento de tratamiento de una afeccion, enfermedad o trastorno implicado mediante la actividad transportadora de ABC. En la presente se divulga un procedimiento de tratamiento de una afeccion, enfermedad o trastorno implicado mediante una deficiencia de actividad transportadora de ABC, comprendiendo el procedimiento la administracion de una composicion que comprende un compuesto de formula (I) a un sujeto, preferentemente un mairnfero, que lo necesite.
En determinadas realizaciones preferidas, la presente invencion proporciona compuestos para usar en un procedimiento de tratamiento de fibrosis qrnstica, enfisema hereditario (debido a la al-antitripsina; variantes no Piz), hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion-fibrinolisis tales como deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal tales como enfermedad de celula l/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis (debida a enzimas del procesamiento lisosomal), Sandhof/Tay-Sachs (debida a p-hexosaminidasa), Crigler-Najjar de tipo II (debida a la UDP-glucuronil-sialic- transferasa), poliendocrinopatfa/hiperinsulinemia, diabetes mellitus (debida al receptor de insulina), enanismo de Laron (debido al receptor de hormona del crecimiento, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario (debido a la hormona preproparatiroidea), melanoma (debido a tirosinasa). Las enfermedades asociadas con la ultima clase de mal funcionamiento del RE son glucanosis CDG de tipo 1, enfisema hereditario (debido a la a1- antitripsina (variante PiZ) , hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta (debida al procolageno de tipo I, II, IV) , hipofibrinogenemia hereditaria (debida al fibrinogeno), deficiencia de ACT (debida a la a1-antiquimiotripsina) , diabetes insfpida (DI), DI neurofiseal (debida a la hormona vasopresina/receptor V2) , DI nefrogenica (debida a la acuaporina II), smdrome de Charcot-Marie Tooth (debido a la protema de mielina periferica 22) , enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer (debida a la pAPP y a las presenilinas), enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva,
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enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de la poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-palido-luisiana y distrofia miotonica, as^ como encefalopatias espongiformes, tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la protema prionica) , enfermedad de Fabry (debida a la a-galactosidasa A lisosomal) , smdrome de Straussler-Scheinker, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC, enfermedad del ojo seco y smdrome de Sjogren, comprendiendo el paso de administrar a dicho mairnfero una cantidad efectiva de una composicion que comprende un compuesto de formula (I), o una realizacion preferida de la misma como se ha expuesto anteriormente.
De acuerdo con una realizacion preferida alternativa, la presente invencion proporciona compuestos para usar en un procedimiento para tratar la fibrosis qrnstica, que comprende la etapa de administrar a dicho marnffero una cantidad eficaz de una composicion que comprende un compuesto de formula (I), o una realizacion preferida de la misma como se ha expuesto anteriormente.
De acuerdo con la invencion, una "cantidad eficaz" del compuesto o de la composicion farmaceuticamente aceptable es esa cantidad eficaz para tratar o disminuir la gravedad de una o mas de fibrosis qrnstica, enfisema hereditario (debido la al-antitripsina; variantes no Piz), hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion- fibrinolisis tales como deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal tales como enfermedad de celula l/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis (debida a enzimas del procesamiento lisosomal), Sandhof/Tay-Sachs (debida a p-hexosaminidasa), Crigler-Najjar de tipo II (debida a la UDP-glucuronil-sialic-transferasa), poliendocrinopatfa/hiperinsulinemia, diabetes mellitus (debida al receptor de insulina), enanismo de Laron (debido al receptor de hormona del crecimiento, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario (debido a la hormona preproparatiroidea), melanoma (debido a tirosinasa). Las enfermedades asociadas con la ultima clase de mal funcionamiento del RE son glucanosis CDG de tipo 1, enfisema hereditario (debido a la a1-antitripsina (variante PiZ) , hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta (debida al procolageno de tipo I, II, IV) , hipofibrinogenemia hereditaria (debida al fibrinogeno), deficiencia de ACT (debida a la a1-antiquimiotripsina) , diabetes insfpida (DI), DI neurofiseal (debida a la hormona vasopresina/receptor V2) , DI nefrogenica (debida a la acuaporina II), smdrome de Charcot-Marie Tooth (debido a la protema de mielina periferica 22) , enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer (debida a la pAPP y a las presenilinas), enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de la poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-palido-luisiana y distrofia miotonica, asf como encefalopatfas espongiformes, tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la protema prionica) , enfermedad de Fabry (debida a la a-galactosidasa A lisosomal) , smdrome de Straussler-Scheinker, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC, enfermedad del ojo seco y smdrome de Sjogren.
Los compuestos y las composiciones de acuerdo con el procedimiento de la presente invencion se pueden administrar usando cualquier cantidad y cualquier via de administracion eficaz para tratar o disminuir la gravedad de una o mas de fibrosis qrnstica, enfisema hereditario (debido la al-antitripsina; variantes no Piz), hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion-fibrinolisis tales como deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos tales como hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal tales como enfermedad de celula l/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis (debida a enzimas del procesamiento lisosomal), Sandhof/Tay-Sachs (debida a p-hexosaminidasa), Crigler-Najjar de tipo II (debida a la UDP-glucuronil-sialic-transferasa), poliendocrinopatfa/hiperinsulinemia, diabetes mellitus (debida al receptor de insulina), enanismo de Laron (debido al receptor de hormona del crecimiento, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario (debido a la hormona preproparatiroidea), melanoma (debido a tirosinasa). Las enfermedades asociadas con la ultima clase de mal funcionamiento del RE son glucanosis CDG de tipo 1, enfisema hereditario (debido a la a1-antitripsina (variante PiZ) , hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta (debida al procolageno de tipo I, II, IV) , hipofibrinogenemia hereditaria (debida al fibrinogeno), deficiencia de ACT (debida a la a1-antiquimiotripsina) , diabetes insfpida (DI), DI neurofiseal (debida a la hormona vasopresina/receptor V2) , DI nefrogenica (debida a la acuaporina II), smdrome de Charcot-Marie Tooth (debido a la protema de mielina periferica 22) , enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer (debida a la pAPP y a las presenilinas), enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de la poliglutamina tales como Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-palido-luisiana y distrofia miotonica, asf como encefalopatfas espongiformes, tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la protema prionica) , enfermedad de Fabry (debida a la a-galactosidasa A lisosomal) , smdrome de Straussler- Scheinker, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC, enfermedad del ojo seco y smdrome de Sjogren.
La cantidad exacta requerida variara de un sujeto a otro en funcion de la especie, la edad y el estado general del sujeto, la gravedad de la infeccion, el agente concreto, su modo de administracion y similares. Los compuestos de la invencion se formulan, preferentemente, en forma de dosificacion unitaria para facilidad de
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administracion y uniformidad de la dosificacion. La expresion “forma de dosificacion unitaria”, como se usa en el presente documento, se refiere a una unidad ffsicamente pequena del agente terapeutico adecuado para el paciente que se va a tratar. No obstante, se entendera que el uso diario total de los compuestos y composiciones de la presente invencion sera decidido por el medico responsable dentro del alcance de un juicio medico solido. El nivel de dosis eficaz espedfico terapeuticamente eficaz para cualquier paciente u organismo dependera de diversos factores, incluyendo el trastorno que se este tratando y su gravedad, la actividad del compuesto espedfico usado, la composicion espedfica usada; la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo y la dieta del paciente o sujeto; la hora de administracion, la via de administracion y la tasa de excrecion del compuesto espedfico usado; la duracion del tratamiento, los farmacos usados en combinacion o coincidiendo con el compuesto espedfico usado y factores similares bien conocidos en las tecnicas medicas. El termino “paciente”, como se usa en el presente documento, significa un animal, preferentemente un mamffero, y, lo mas preferentemente, un ser humano.
Las composiciones farmaceuticamente aceptables de la presente invencion se pueden administrar a seres humanos y otros animales por via oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, topica (como en polvos, pomadas o gotas), bucal, como un nebulizador nasal u oral, o similares, dependiendo de la localizacion y la gravedad de la infeccion a tratar. En ciertas realizaciones, los compuestos de la invencion se pueden administrar por via oral o parenteral a niveles de dosis de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg y, preferentemente, de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg del peso corporal del sujeto al dfa, una o mas veces al dfa para obtener el efecto terapeutico deseado.
Las formas de dosificacion lfquidas para administracion oral incluyen, entre otros, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmaceuticamente aceptables. Ademas de los compuestos activos, las formas de dosificacion lfquidas pueden contener diluyente inerte de uso habitual en la tecnica, tal como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (en particular aceites de algodon, aceite de cacahuete, de mafz, de germen, de oliva, de ricino y de sesamo), glicerol,, alcohol de tetrahidrofurilo, polietilenglicoles y esteres de acidos grasos de sorbitano, y mezclas de los mismos. Ademas de los diluyentes inertes, las composiciones orales tambien pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspension, agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumantes.
Se pueden formular preparaciones inyectables, por ejemplo suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables esteriles de acuerdo con la tecnica conocida usando agentes de dispersion o humectantes adecuados y agentes de suspension. La preparacion inyectable esteril tambien puede ser una solucion o suspension o emulsion inyectable esteril en un diluyente o disolvente no toxico parenteralmente aceptable, por ejemplo en forma de una solucion en 1,3-butanodiol. Entre los vehfculos y disolventes aceptables que se pueden emplear estan agua, solucion de Ringer y solucion isotonica de cloruro sodico segun la U.S.P. Ademas, convencionalmente se emplean aceites fijos esteriles en forma de un disolvente o un medio de suspension. Para este fin se puede emplear cualquier aceite fijo suave incluyendo mono- o digliceridos sinteticos. Ademas, se usan acidos grasos tales como acido oleico en la preparacion de sustancias inyectables.
Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar mediante, por ejemplo, filtracion a traves de un filtro de retencion de bacterias o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles que se pueden disolver o dispersar en agua esteril u otro medio inyectable esteril antes de usar.
Con el fin de prolongar el efecto de un compuesto de la presente invencion, a menudo es deseable ralentizar la absorcion del compuesto de la inyeccion subcutanea o intramuscular. Esto se puede conseguir mediante el uso de una suspension lfquida de material cristalino o amorfo con mala solubilidad en agua. Por tanto, la tasa de absorcion del compuesto depende de su tasa de disolucion que, a su vez, puede depender del tamano del cristal y de la forma cristalina. Como alternativa, la absorcion retardada de un compuesto administrado parenteralmente se consigue disolviendo o suspendiendo el compuesto en un vehfculo oleoso. Las formas depot inyectables se fabrican formando matrices en microcapsulares del compuesto en polfmeros biodegradables, tales como polilactido-poliglicolido. Dependiendo de la proporcion entre el compuesto el polfmero, y la naturaleza del polfmero concreto empleado, se puede controlar la velocidad de liberacion del compuesto. Ejemplos de otros polfmeros biodegradables incluyen poli(ortoesteres) y poli(antndridos). Las formulaciones depot inyectables tambien se preparan atrapando el compuesto en liposomas o microemulsiones que son compatibles con tejidos corporales.
Las composiciones para administracion rectal o vaginal son, preferentemente, supositorios que se pueden preparar mezclando los compuestos de la presente invencion con excipientes o vehfculos no irritantes adecuados, tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio, que son solidos a temperatura ambiente pero lfquidos a temperatura corporal y, por tanto, se funden en el recto o la cavidad vaginal y liberan el compuesto activo.
Las formas de dosificacion solidas para administracion oral incluyen capsulas, comprimidos, pfldoras, polvos y granulos. En dichas formas de dosificacion solidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un
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excipiente o vetuculo inerte farmaceuticamente aceptable tal como citrato sodico o fosfato dicalcico y/o a) cargas o expansores tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y acido siKcico; b) aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, celulosa microcristalina, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arabiga; c) humectantes, tales como glicerol; d) agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato calcico, almidon de patata o de tapioca, acido algmico, ciertos silicatos y carbonato sodico; e) agentes retardantes de la disolucion, tales como parafina; f) aceleradores de la absorcion, tales como compuestos de amonio cuaternario; g) agentes humectantes, tales como, por ejemplo alcohol cetflico y monoestearato de glicerol; h) absorbentes, tales como caolm y arcilla bentonita; e i) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, laurilsulfato sodico; y mezclas de los mismos. En el caso de capsulas, comprimidos y pfldoras, la forma de dosificacion puede tambien comprender agentes tampon.
Las composiciones solidas de un tipo similar tambien se pueden usar como cargas en capsulas de gelatina rellenas duras y blandas, usando excipientes tales como lactosa o azucar de la leche, asf como polietilenglicoles de alto peso molecular, y similares. Las formas de dosificacion solidas de comprimidos, grageas, capsulas, pfldoras y granulos se pueden preparar con recubrimientos y coberturas, tales como recubrimientos entericos y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de la formulacion farmaceutica. Opcionalmente pueden contener agentes opacificantes, y tambien pueden ser de una composicion tal que liberen el o los ingredientes activos unicamente o, preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de un modo retardado. Ejemplos de incluir composiciones que se pueden usar incluyen sustancias polimericas y ceras. Las composiciones solidas de un tipo similar tambien se pueden usar como cargas en capsulas de gelatina rellenas duras y blandas, usando excipientes tales como lactosa o azucar de la leche, asf como polietilenglicoles de alto peso molecular, y similares.
Los compuestos activos tambien pueden estar en forma microencapsulada con uno o mas excipientes como se ha indicado anteriormente. Las formas de dosificacion solidas de comprimidos, grageas, capsulas, pfldoras y granulos se pueden preparar con recubrimientos y coberturas, tales como recubrimientos entericos, recubrimientos de control de la liberacion y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de la formulacion farmaceutica. En dichas formas de dosificacion solidas, el compuesto activo se puede mezclar con al menos un diluyente inerte, tal como sacarosa, lactosa o almidon. Dichas formas de dosificacion tambien pueden comprender, como es practica normal, sustancias adicionales aparte de los diluyentes inertes, por ejemplo lubricantes para formacion de comprimidos y otros auxiliares para formacion de comprimidos tales como estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de capsulas, comprimidos y pfldoras, las formas de dosificacion pueden tambien comprender agentes tampon. Opcionalmente pueden contener agentes opacificantes y tambien pueden ser de una composicion que liberen los principios activos solos o, preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente de un modo retardado. Ejemplos de incluir composiciones que se pueden usar incluyen sustancias polimericas y ceras.
Las formas de dosificacion para la administracion topica o transdermica de un compuesto de la presente invencion incluyen pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, nebulizadores, inhaladores o parches. El componente activo se mezcla en condiciones esteriles con un vetuculo farmaceuticamentee aceptable y con cualquier conservante o tampon necesario, segun se requiera. Las formulaciones oftalmicas, gotas oticas y gotas oculares tambien se contemplan dentro del alcance de la presente invencion. Adicionalmente, la presente invencion contempla el uso de parches transdermicos que tienen la ventaja anadida de proporcionar liberacion controlada de un compuesto en el cuerpo. Dichas formas de dosificacion se preparan disolviendo o dispersando el compuesto en el medio adecuado. Los potenciadores de la absorcion tambien se pueden usar para incrementar el flujo del compuesto en la piel. La velocidad se puede controlar proporcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto en una matriz o gel polimerico.
Como se ha descrito en general anteriormente, los compuestos de la invencion son utiles como moduladores de los transportadores de ABC. Por tanto, sin desear quedar ligado a teona alguna, los compuestos y las composiciones son particularmente utiles para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad, afeccion o trastorno en el que la hiperactividad o inactividad de los transportadores de ABC esta implicada en la enfermedad, afeccion o trastorno. Cuando la hiperactividad o inactividad de un transportador de ABC esta implicada en una enfermedad, afeccion o trastorno concreto, la enfermedad, afeccion o trastorno tambien se puede denominar “enfermedad, afeccion o trastorno mediada por un transportador de ABC”. De acuerdo con esto, en otro aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad, afeccion o trastorno en la que la hiperactividad o inactividad de un transportador de ABC esta implicada en el estado patologico.
Se puede analizar la actividad de un compuesto utilizado en la presente invencion como un modulador de un transportador de ABC de acuerdo con procedimientos descritos en general en la tecnica y en los ejemplos del presente documento.
Tambien se apreciara que los compuestos y composiciones farmaceuticamente aceptables de la presente invencion se pueden usar en terapias de combinacion, es decir, los compuestos y composiciones farmaceuticamente aceptables se pueden administrar junto con, antes de o despues de uno o mas procedimientos terapeuticos o
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medicos deseados. La combinacion concreta de terapias (terapeuticas y procedimientos) para usar en un regimen de combinacion tendra en cuenta la compatibilidad de las terapeuticas y/o procedimientos deseados y el efecto terapeutico que se desea conseguir. Tambien se apreciara que las terapias empleadas pueden conseguir un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, un compuesto de la invencion se puede administrar junto con otro agente usado para tratar el mismo trastorno) o pueden conseguir efectos diferentes (p. ej., control de cualquier efecto adverso). Como se usa en el presente documento, agentes terapeuticos adicionales que normalmente se administran para tratar prevenir una enfermedad o afeccion concreta se conocen como “adecuados para la enfermedad o afeccion que se este tratando”.
La cantidad de agente terapeutico adicional presente en las composiciones de la presente invencion no sera mas que la cantidad que normalmente se administrana en una composicion que comprende dicho agente terapeutico como el unico agente activo. Preferentemente, la cantidad de agente terapeutico adicional en las composiciones de la presente divulgacion varara desde aproximadamente el 50 % al 100 % de la cantidad que normalmente esta presente en una composicion que comprende dicho agente como el unico agente terapeuticamente activo.
Los compuestos de la presente invencion o composiciones farmaceuticamente aceptables de los mismos tambien se pueden incorporar en composiciones para recubrir un dispositivo medico implantable, tal como protesis, valvulas artificiales, injertos vasculares, endoprotesis vasculares y cateteres. De acuerdo con esto, la presente invencion, en otro aspecto, incluye una composicion para recubrir un dispositivo implantable que comprende un compuesto de la presente invencion como generalmente se ha descrito anteriormente, y en clases y subclases en el presente documento y un vehnculo adecuado para recubrir dicho dispositivo implantable. En otro aspecto mas, la presente invencion incluye un dispositivo implantable recubierto con una composicion que comprende un compuesto de la presente invencion como generalmente se ha descrito anteriormente, y en clases y subclases en el presente documento y un vehnculo adecuado para recubrir dicho dispositivo implantable. Recubrimientos adecuados y la preparacion general de dispositivos implantables revestidos se describen en las patentes de EE.UU. 6.099.562; 5.886.026; y 5.304.121. Los revestimientos son, normalmente, materiales polimericos biocompatibles tales como polfmero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenglicol, acido polilactico, acetato de etilenvinilo y mezclas de los mismos. Los recubrimientos pueden estar cubiertos, opcionalmente, mediante una cubierta adecuada de fluorosilicona, polisacaridos, polietilenglicol, fosfolfpidos o combinaciones de los mismos para conferir caractensticas de liberacion controlada en la composicion.
Otro aspecto de la invencion se refiere a la modulacion de la actividad del transportador de ABC en una muestra biologica in vitro, en el que el procedimiento comprende poner en contacto dicha muestra biologica con un compuesto de formula I o una composicion que comprende dicho compuesto. La expresion “muestra biologica”, como se usa en el presente documento, incluye, sin limitaciones, cultivos celulares o extractos de los mismos; material de biopsia obtenido de un mairnfero o extractos del mismo; y sangre, saliva, orina, heces, semen, lagrimas u otros fluidos corporales o extractos de los mismos.
La modulacion de la actividad del transportador de ABC en una muestra biologica es util para diversos fines conocidos para un experto en la tecnica. Ejemplos de dichos fines incluyen, entre otros, el estudio de los transportadores de ABC en fenomenos biologicos y patologicos, y la evaluacion comparativa de nuevos moduladores de los transportadores de ABC.
Se divulga un procedimiento de modulacion de la actividad de un canal de aniones in vitro o in vivo, que comprende la etapa de poner en contacto dicho canal con un compuesto de formula (I). En realizaciones preferidas, el canal de aniones es un canal de cloruro o un canal de bicarbonato. En otras realizaciones preferidas, el canal de aniones es un canal de cloruro.
Se divulga en la presente un procedimiento para aumentar el numero de transportadores de ABC funcionales en una membrana de una celula, que comprende la etapa de poner en contacto dicha celula con un compuesto de Formula (I). La expresion “transportador de ABC funcional”, como se usa en el presente documento, significa un transportador de aBc que es capaz de actividad de transporte. En realizaciones preferidas, dicho transportador de ABC funcional es CFTR.
De acuerdo con otra realizacion preferida, la actividad del transportador de ABC se mide midiendo el potencial de voltaje transmembrana. Los medios para medir el potencial de voltaje a traves de una membrana en la muestra biologica pueden emplear cualquiera de los procedimientos conocidos en la tecnica, tales como un ensayo optico del potencial de membrana u otros procedimientos electrofisiologicos.
El ensayo optico del potencial de membrana usa sensores FRET sensibles al voltaje descritos por Gonzalez y Tsien (Vease, Gonzalez, J. E. y R. Y. Tsien (1995) "Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells" Biophys J 69 (4): 1272-80, y Gonzalez, J. E. y R. Y. Tsien (1997) "Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4): 269-77) en combinacion con la instrumentacion para medir cambios de fluorescencia tales como el lector de sonda de voltaje/iones (VIPR) (Vease,
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Gonzalez, J. E., K. Oades, et al. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets" Drug Discov Today 4(9): 431-439).
Estos ensayos sensibles al voltaje estan basados en el cambio en la transferencia de energfa por resonancia de fluorescencia (FRET) entre el colorante sensible al voltaje soluble en la membrana DiSBAC2 (3) y un fosfoUpido fluorescente, CC2-DMPE, que se une a la hoja externa de la membrana plasmatica y actua como donante de FRET. Los cambios en el potencial de membrana (Vm) hacen que el DiSBAC2 (3) cargado negativamente se redistribuya a traves de la membrana plasmatica y que, por consiguiente, la cantidad de transferencia de energfa del CC2-DMPE cambie. Los cambios en la emision de fluorescencia se pueden controlar usando VIPR™ II, que es un manipulador de lfquidos y detector fluorescente integrado disenado para realizar exploraciones basadas en celulas en placas de microtitulacion de 96 o 384 pocillos.
En otro aspecto, la presente invencion proporciona un kit para su uso en la medicion de la actividad de un transportador de aBc, o un fragmento del mismo, en una muestra biologica in vitro o in vivo , que comprende (i) una composicion que comprende un compuesto de Formula (I) o cualquiera de las realizaciones anteriores; y (ii) instrucciones para a) poner en contacto la composicion con la muestra biologica y b) medir la actividad de dicho transportador de ABC o un fragmento del mismo. En una realizacion, el kit comprende ademas instrucciones para a) poner en contacto una composicion adicional con la muestra biologica; b) medir la actividad de dicho transportador de ABC, o un fragmento del mismo, en presencia de dicho compuesto adicional, y c) comparar la actividad del transportador de ABC en presencia del compuesto adicional con la densidad del transportador de ABC en presencia de una composicion de Formula (I). En realizaciones preferidas, el kit se usa para medir la densidad del CFTR.
Con el fin de que la invencion descrita en el presente documento se pueda entender mejor, se exponen los ejemplos siguientes. Debe entenderse que estos ejemplos son para fines ilustrativos unicamente y no deben interpretarse como limitantes de la presente invencion de ningun modo.
EJEMPLOS
La tabla 2 siguiente contiene una lista de bloques componentes de acido carboxflico que estaban disponibles comercialmente o que se prepararon mediante uno de los procedimientos que se describen a continuacion.
Tabla 2: Bloques componentes de acido carboxilico.
Compuesto
Nombre
A-1
Acido 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico
A-2
Acido 1-(3-metoxifenil)ciclopropanocarboxflico [CAS: 74205-29-1]
A-3
Acido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico
A-4
Acido 1-(4-metoxifenil)ciclopropanocarboxflico [CAS: 16728-01-1]
1. Preparacion de A-3: Acido 1-benzo[1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico
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Una mezcla de benzo[1,3]dioxol-5-acetonitrilo (5,10 g, 31,7 mmol), 1-bromo-2-cloro-etano (9,00 ml, 109 mmol) y benciltrietilamonio (0,181 g, 0,795 mmol) se calento a 70° C y, despues, a la mezcla se anadio lentamente 50 % (p/p) de hidroxido sodico acuoso (26 ml). La reaccion se agito a 70 °C durante 18 horas y despues se calento a 130 °C durante 24 horas. La mezcla de reaccion marron oscuro se diluyo con agua (400 ml) y se extrajo una vez con un volumen igual de acetato de etilo y una vez con un volumen igual de diclorometano. La solucion acuosa basica se acidifico con acido clorhndrico concentrado hasta un pH inferior a uno y el precipitado se filtro y se lavo con acido clorhndrico 1 M. El material solido se disolvio en diclorometano (400 ml) y se extrajo dos veces con volumenes iguales de acido clorhndrico 1 M y una vez con una solucion acuosa saturada de cloruro sodico. La solucion organica se seco sobre sulfato sodico y se evaporo hasta sequedad, dando un solido blanco o ligeramente blanquecino 5,23 g, 80 % ) ESI-EM m/z calc. 206,1, hallado 207,1 (M+1)+. Tiempo de retencion 2,37 minutos. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 1,07-1,11 (m, 2H), 1,38-1,42 (m, 2H), 5,98 (s, 2H), 6,79 (m, 2H), 6,88 (m, 1H), 12,26 (s, 1H).
2. Preparacion de A-1: Acido 1-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico
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Etapa a: Ester metilico de acido 2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol--5-carboxWco
Una solucion de 5-bromo-2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol (11,8 g, 50,0 mmol) y tetrakis(trifenilfosfino)paladio (0) [Pd(PPh3)4, 5,78 g, 5,00 mmol] en metanol (20 ml) que contiene acetonitrilo (30 ml) y trietilamina (10 ml) se agito en atmosfera de monoxido de carbono (379 kPa) a 75° C (temperatura del bano de aceite) durante 15 horas. La mezcla de reaccion enfriada y se filtro, y el filtrado se evaporo hasta sequedad. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice, dando ester metflico de acido 2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-carboxflico (11,5 g), que se uso directamente en la etapa siguiente.
Etapa b: (2,2-Difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol
El ester metflico de acido 2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-carboxflico (11,5 g) disuelto en 20 ml de tetrahidrofurano (THF) anhidro se anadio lentamente a una suspension de hidruro de litio aluminio (4,10 g, 106 mmol) en THF anhidro (100 ml) a 0° C. Despues, la mezcla se calento hasta la temperatura ambiente. Despues de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla de reaccion se enfrio hasta 0 °C y se trato con agua (4,1 g), seguido de hidroxido sodico (solucion acuosa al 10 %, 4,1 ml). La pasta resultante se filtro y se lavo con THF. El filtrado combinado se evaporo hasta sequedad y el residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice, dando (2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol (7,2 g, 38 mmol, 76 % en dos etapas) como un aceite incoloro.
Etapa c: 5-Clorometil-2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol
A una solucion de (2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-metanol (7,2 g, 38 mmol) en diclorometano (200 ml) a 0 °C se anadio lentamente cloruro de tionilo (45 g, 38 mmol). La mezcla resultante se agito durante la noche a temperatura ambiente y despues se evaporo hasta sequedad. El residuo se repartio entre una solucion acuosa de bicarbonato sodico saturado (100 ml) y diclorometano (100 ml). La capa acuosa separada se extrajo con diclorometano (150 ml). La capa organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se evaporo hasta sequedad, dando 5-clorometil-2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol (4,4 g) bruto, que se uso directamente en la siguiente etapa.
Etapa d: (2,2-Difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo
Una mezcla de 5-clorometil-2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol (4,4 g) y cianuro sodico (1,36 g, 27,8 mmol) en dimetilsulfoxido (50 ml) se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se vertio en hielo y se extrajo con acetato de etilo (300 ml). La capa organica se seco sobre sulfato sodico y se evaporo hasta sequedad, dando (2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo bruto (3,3 g), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Etapa e: 1-(2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)ddopropanocarbonitrilo
A una mezcla de (2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-acetonitrilo bruto, cloruro de benciltrietilamonio (3,00 g, 15,3 mmol) y 1-bromo-2-cloroetano(4,9 g, 38 mmol) a 70° C se anadio lentamente hidroxido sodico (solucion acuosa al 50 %, 10 ml).
La mezcla se agito durante la noche a 70 °C antes de diluir la mezcla de reaccion con agua (30 ml) y se extrajo en acetato de etilo. Las capas organicas combinadas se secaron sobre sulfato sodico y se evaporaron hasta sequedad, dando 1-(2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo bruto, que se uso directamente en la siguiente etapa.
Etapa f: Acido 1-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioxol-5-il)cidopropanocarboxWco
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1-(2,2-difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarbonitrilo (bruto de la ultima etapa) se sometio a reflujo en 10 % de hidroxido sodico acuoso (50 ml) durante 2,5 horas. La mezcla de reaccion enfriada se lavo con eter (l0o m) y la fase acuosa se acidifico hasta un pH 2 con acido clorlddrico 2 M. El solido precipitado se filtro, dando acido 1-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioxol-5-il)ddopropanocarbox^lico como un solido blanco (0,15 g, 1,6 % en cuatro etapas). ESI-EM m/z calc. 242,04, hallado 241,58 (M+1)+; RMN de 1H (CDCla) 8 7,14-7,04 (m, 2H), 6,98-6,96 (m, 1H), 1,741,64 (m, 2H), 1,26-1,08 (m, 2H).
La tabla 3 siguiente contiene una lista de bloques componentes de amina que estaban disponibles comercialmente o que se prepararon mediante uno de los procedimientos que se describen a continuacion.
Tabla 3: Bloques componentes de amina.
Compuesto
Nombre
B-1
2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina
B-2
2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-amina
B-3
2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
B-4
1H-pirrolo[2,3-b]piridin-6-amina [CAS: 145901-11-7]
B-5
2-etil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
B-6
2-(1-metilciclopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
B-7
2-ciclobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
B-8
2-(5-amino-2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol
3. Preparacion de B-2: 2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-amina
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Etapa a: 6-Cloro-2-yodo-piridin-3-ilamina
A una solucion de 6-cloro-piridin-3-ilamina (10,0 g, 77,8 mmol) en EtOH (150 ml) se anadio Ag2SO4 (12,1 g, 38,9 mmol) y I2 (23,7 g, 93,4 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 20 °C durante la noche. El disolvente se elimino mediante evaporacion al vado. Al residuo se anadieron agua (100 ml) y EtOAc (200 ml). Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (100 ml x 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron al vado, dando el producto bruto, que se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (eter de petroleo/acetato de etilo 7:1), dando 6-cloro-2-yodo-piridin-3- ilamina (17,1 g, 86 % ). RMN de 1H (DMSO), 300 MHz) 8 7,16 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,01 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,57 (s, 2 H).
Etapa b: 6-Cloro-2-(3,3-dimeti-but-1-inil)-piridin-3-ilamina
A una solucion de l compuesto de 6-Cloro-2-yodo-piridin-3-ilamina (16,0 g, 62,7 mmol) en tolueno (160 ml) y agua (80 ml) se anadieron Et3N (12,7 g, 125 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (2,2 g, 3,1 mmol), Cul (238 mg, 1,3 mmol) y 3,3-dimetil-but-1-ino (7,7 g, 94 mmol) sucesivamente en atmosfera de N2. La mezcla de la reaccion se calento a 70 °C durante 3 horas y se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (150 ml * 3). Los extractos organicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron al vado, dando 6-cloro-2-(3,3-dimetil-but-2-inil)-piridin-3-ilamina (11,5 g, 88 % que se uso en la siguiente etapa sin
purificacion adicional.
Etapa c: N-[6-Cloro-2-(3,3-dimeti-but-1-inil)-piridin-3-il]-butiramida
A una solucion de 6-cloro-2-(3,3-dimetil-but-2-inil)-piridin-3-ilamina (11,5 g, 55,2 mmol) y piridina (13,1 g, 166 mmol) en CH2Cl2 (150 ml) se anadio cloruro de butirilo (6,5 g, 61 mmol) gota a gota a 0° C. La mezcla se dejo calentar hasta la temperatura ambiente y se agito a esta temperatura durante la noche. Se anadio agua (50 ml) gota a gota a -0 °C. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se
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secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron al vado, dando /V-[6-cloro-2-(3,3-dimetil-but-1-inM)-piridin-3-il]- butiramida bruta (16 g), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN de 1H (CDCI3, 300 MHz) 8 8,72 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,88 (s a, 1 H), 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 2,40 (d, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,83-1,75 (m, 2 H), 1,40 (s, 9 H), 1,04 (d, J = 7,2 Hz, 3 H).).
Etapa d: 2-terc-butil-5-cloro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina
A una solucion de N-[6-Cloro-2-(3,3-dimeti-but-1-inil)-piridin-3-il]-butiramida (16 g) en DMF (150 ml) se anadio t-BuOK (12,4 g, 110 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calento a 70 °C durante 1 hora. El disolvente se elimino mediante evaporacion al vado. Se anadieron agua (100 ml) y acetato de etilo (200 ml). Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron al vado, dando el producto bruto, que se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de silice (eter de petroleo/acetato de etilo 10:1), dando 2-terc-butil-5- cloro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina (10,8 g, dos etapas: 94 % ). RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) 8 8,52 (s a, 1 H), 7,28 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,02 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,37 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 1,40 (s, 9 H).).
Etapa e: 2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-amina
En una autoclave de 500 ml, una solucion de 2-terc-butil-5-cloro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina (5,0 g, 24 mmol) y CuSO4-5H2O (0,5 g, 2,0 mmol) en amoniaco acuoso (200 ml) y CH3OH (100 ml) se calento a 180° C (a esta temperatura, la presion en la autoclave era de aproximadamente 2MPa) y se agito durante 10 horas. La mezcla se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente. El disolvente se elimino mediante evaporacion al vado. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron al vado, dando el producto bruto, que se purifico mediante HPLC preparativa, dando 2-terc- butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-amina (1,15 g, 26 %). RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) 8 10,63 (sa, 1 H), 7,35 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,23 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 5,86 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,40 (sa, 2 H), 1,29 (s, 9 H); EM (ESI;) m/e (M+H+): 190,2.
4. Preparacion de B-3: 2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
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A una mezcla de 6-cloropiridin-3-amina (30,0 g, 0,23 mol), DMAP (1 g) y Et3N (41,7 g, 0,47 mol) en CH2Cl2 (200 ml) se anadio Boc2O (54,5 g, 0,25 mol) a 0° C. La mezcla se dejo calentar hasta la temperatura ambiente y se agito durante la noche. La mezcla se lavo con solucion de NaHCO3 saturada. La solucion acuosa se extrajo con diclorometano. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron con Na2SO4 y se evaporaron al vado, dando 6-cloropiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (50,0 g, 94 %), que se uso directamente en la reaccion siguiente. RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 8 8,23 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 7,97 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 7,27-7,24 (m, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 1,52 (s, 9 H).
Etapa b: Ester terc-butWco del acido (6-cloro-4-yodo-pindin-3-il)-carbamico
A una solucion de TMEDA (1,45 g, 12,5 mmol) en Et2O seco (30 ml) se anadio, gota a gota, n-BuLi (5,0 ml, 12,5 mmol) a -78° C. La mezcla se agito durante 0,5 h a-78° C. Gota a gota se anadio una solucion de ester terc- butflico de acido (6-cloro-piridin-3-il)-carbamico (1,14 g, 5,0 mmol) en Et2O seco (10 ml) a la mezcla de reaccion a - 78° C y la mezcla resultante se continuo agitando durante 1 hora a -78° C. Gita a gota se anadio una solucion de I2 (1,52 g, 6,0 mmol) en Et2O seco (10 ml) a -78° C. Se continuo agitando la mezcla durante 1 hora a esta temperatura. La reaccion se inactivo con NH4Cl acuoso saturado. Se separo la capa organica y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron a presion reducida, dando un residuo, que se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo/acetato de etilo = 10:1), para obtener ester terc-butflico del acido (6-cloro-4-yodo-piridin-3-il)carbamico (1,75 g, 30 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 8 8,95 (s a, 1 H), 7,73 (s, 1 H), 6,64 (br s, 1 H), 1,54 (s, 1 H).
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Etapa c: Ester terc-butWco de acido [6-Cloro-4-(3,3-dimeti-but-1-inil)-pindin-3-il]-carbamico
A una solucion desoxigenada de ester terc-butilico de acido (6-cloro-4-yodo-piridin-3-il)-carbamico amina (23,3 g, 65,6 mmol), 3,3-dimetil-but-1-ino (53,8 g, 0,656 mol), CuI (623 mg, 3,3 mmol) y trietilamina (13,3 g, 0,13 mol) en tolueno (150 ml) y agua (50 ml) se anadio Pd(PPh3hCl2 (2,30 g, 3,28 mmol) en N2. La mezcla se calento a 70 °C y se agito durante 24 horas. El solido se elimino mediante filtracion y se lavo con acetato de etilo (200 ml x 3). El filtrado se evaporo a presion reducida, para obtener un residuo, que se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo/acetato de etilo = 10/1), dando ester terc-butilico del acido [6-cloro-4-(3,3-dimetil-but-1-inil)-piridin-3- il)carbamico (15,8 g, 78 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 8 9,10 (s a, 1 H), 7,21 (s, 1 H), 6,98 (s a, 1 H), 1,53 (s, 9 H), 1,36 (s, 9 H).
Etapa d: 2-terc-butil-5-doro-1H-pirrolo[2,3-c]pindina
Una mezcla de ester terc-butilico de acido [6-cloro-4-(3,3-dimetil-but-1-inil)-piridin-3-il]-carbamico (15,8 g, 51 mmol) y TBAF (26,6 g, 0,1 mol) en THF (200 ml) se calento a reflujo durante 24 horas. Despues de enfriar, la mezcla se vertio en agua helada y se extrajo con CH2O2 (300 ml * 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron a presion reducida, para obtener un residuo, que se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo/acetato de etilo = 10/1), dando cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (9,2 g, 87 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCla) 8 9,15 (s a, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 7,44 (s, 1 H), 6,25 (dd, J = 0,6, 2,1 Hz, 1H), 1,42 (s, 9 H).
Etapa e: 2-tenc-butil-1H-pinnolo[2,3-c]pinidin-5-amina
A una solucion de 2-terc-butil-5-cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (5,0 g, 24 mmol) en NH3.H2O (400 ml) se anadio CuSO4,5H2O (595 mg, 2,39 mmol). La mezcla se calento a 200 °C (presion 3 MPa) durante 24 horas. Despues de enfriar, la mezcla se extrajo con CH2O2 (150 ml * 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporaron a presion reducida, para obtener un residuo, que se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo/acetato de etilo = 10/1), para obtener 2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin- 5-amina (1,2 g, 27 %). RMN de 1H (400 MHz, DMSO) 8 10,66 (s a, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 6,39 (s, 1 H), 5,86 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 4,85 (s a, 2 H), 1,29 (s, 9 H).
5. Preparacion de B-1: 2-tenc-butil-1H-pinnolo[2,3-b]pinidin-5-amina
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Etapa a: 3-Bromo-5-nitropididin-2-amina
A una solucion de 5-nitro-piridin-2-ilamina (30 g, 0,22 mol) en acido acetico (200 ml) a 10 °C se anadio Br2 (38 g, 0,24 mol) gota a gota. Despues de la adicion, la mezcla se agito a 20 °C dura te 30 minutos. El solido se filtro y despues se disolvio en acetato de etilo (200 ml). La mezcla se basifico hasta un pH =8-9 con NaHCO3 acuoso saturado. Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron con Na2SO4 y se concentraron al vado, dando 3- bromo-5-nitropiridin-2-amina (14,8 g, 32 % ). RMN de 1H (CDCh, 400 MHz) 8 8,94 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 8,50 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 5,67 (s a, 2 H).
Etapa b: 3-(3,3-Dimetilbut-1-inil)-5-nitropiridin-2-amina
A una solucion de 3-bromo-5-nitropiridin-2-amina (1,0 g, 4,6 mmol) en tolueno/agua (5 ml/2,5 ml) se anadio Et3N (1,2 ml, 9,2 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (0,3 g, 0,46 mmol), CuI (35 mg, 0,18 mmol) y 3,3-dimetil-but-1-ino (0,75 g, 9,2 mmol) sucesivamente en atmosfera de N2. La mezcla se calento 70 °C durante 2,5 horas. El solido se filtro y la capa organica se separo, La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 y se concentraron al vado, dando 3-(3,3-dimetilbut-1-inil)-5- nitropiridin-2-amina (0,9 g, 90 %). RMN de 1H (CDCh, 400 MHz) 8 8,87 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 8,25 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 5,80 (s a, 2 H), 1,36 (s, 9 H).
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Una solucion de 3-(3,3-dimetilbut-1-inil)-5-nitropiridin-2-amina (0,4 g, 1,8 mmol) y TBAF (1,9 g, 7,3 mmol) en THF (10 ml) se calento a reflujo durante la noche. La mezcla de reaccion se concentro hasta sequedad al vado y el residuo se disolvio en acetato de etilo (20 ml). La capa organica se lavo con agua, salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro al vado, dando 2-terc-butil-5-nitro-pirrolo[2,3-b]piridina (0,25 g, 63 % ). RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) 8 11,15 (s a, 1 H), 9,20 (s, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,70 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 6,43 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 1,51 (s, 9 H).
Etapa d: 2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina
A una solucion de 2-terc-butil-5-nitro-1H-pirrolo[2,3-b]piridina (2,3 g, 0,01 mmol) en MeOH (50 ml) se anadio Ni Raney (0,23 g, 10 % ) con proteccion de N2. La mezcla se agito en atmosfera de hidrogeno (1 atmosfera) a 30 °C durante 1 hora. El catalizador se elimino mediante filtracion y el filtrado se concentro hasta sequedad al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de silice (eter de petroleo/acetato de etilo 1;2), para dar 2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (1,4 g, 70 % ). RMN de 1H (MeOD, 400 MHz) 8 7,71 (s, 1 H), 7,27 (s, 1 H), 5,99 (s, 1 H), 1,37(s, 9 H). EM (ESI) m/e (M+H+) 190,1.
6. Preparacion de B-5: 2-etil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina
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A una mezcla de 6-cloropiridin-3-amina (30,0 g, 230 mol), DMAP (1,0 g) y Et3N (41,7 g, 470 mol) en CH2Cl2 (200 ml) se anadio Boc2O (54,5 g, 250 mol) a 0°C. La mezcla de reaccion se dejo calentar hasta la temperatura ambiente y se agito durante la noche. La mezcla resultante se lavo con solucion de NaHCO3 saturada y salmuera (100 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro se evaporo al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (eter de petroleo/acetato de etilo 10/1), dando 6-cloropiridin-3-il-carbamato de terc-butilo (40,0 g, 76 %). RMN de 1H (CDCh, 400 MHz) 8 8,23(d, J = 2,8 Hz, 1 H), 7,96 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,25(d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,58 (s a, 1 H), 1,52(s, 9H).
Etapa b: Ester terc-butWco del acido (6-cloro-4-yodo-piridin-3-il)-carbamico
A una solucion de TMEDA (25,4 g, 219,3 mmol) en THF seco (300 ml) se anadio, gota a gota, n-BuLi (87,7 ml, 219,3 mmol), la mezcla se agito durante 0,5 horas a esta temperatura. Una solucion de ester terc-butilico de acido (6-cloro-piridin-3-il)-carbamico ((20 g, 87,7 mmol) en THF (170 ml) se anadio, gota a gota, a la mezcla de reaccion a -78 °C y se siguio agitando la mezcla resultante durante 1 hora a -78 °C. Despues, se anadio, gota a gota, una solucion de I2 (26,7 g, 105,3 mmol) en THF seco (170 ml) a -78 °C. Tras 1 hora, la reaccion se inactivo con NH4Cl saturado acuoso (300 ml). Se separo la capa organica y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (150 ml x 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentran a presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de silice (eter de petroleo/acetato de etilo 10/1), dando ester terc-butnico de acido 6-cloro-4-yodo-piridin-3-il)-carbamico (7 g, 22,7 %). RMN de 1H (CDCh, 300 MHz) 8 8,95 (s, 1 H), 7,73 (s, 1 H), 6,64 (sa, 1 H), 1,54 (s, 9H).
Etapa c: 4-(but-1-inil)-6-cloropiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo
A una solucion desoxigenada de ester terc-butflico de acido (6-cloro-4-yodo-piridin-3-il)-carbamico amina (6,0 g, 16,9 mmol), 1-butilo (169 mmol)), Cul (160,1 mg, 0,84mmol) y trietilamina (3,4 g, 33,2 mol) en tolueno (40 ml) y agua (14 ml) se anadio Pd(PPh3hCl2 (592 mg, 0,84 mmol) en N2 en autoclave. La mezcla se calento hasta 70 °C y se agito durante 24 horas. El solido se elimino mediante filtracion y se lavo con acetato de etilo (60 ml x 3). El filtrado se evaporo a presion reducida y el residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de silice (eter de petroleo/acetato de etilo 10/1), dando 4-(4-but-1-inil)-6-cloropiridin-3-il-carbamato de terc-butilo (3,5 g, 74 %). RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) 8 9,13 (s, 1 H), 7,22 (s, 1 H), 6,98 (s, 1 H), 2,53(c, J = 7,5 Hz, 2H), 1,54(s, 9H), 1,29 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
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Una mezcla de 4-(but-1-inil)-6-cloropiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (3,5 g, 12,5 mmol) y TBAF (6,65 g, 25 mmol) en THF (60 ml) se calento a reflujo durante 24 horas. Despues de enfriar, la mezcla se vertio en agua helada y se extrajo con CH2Cl2 (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporan a presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de s^lice (eter de petroleo/acetato de etilo 10/1), dando 2-etil-5-cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (2,0 g, 89 % ). RMN de1H (CDCl3, 300 MHz) 8 8,96 (sa, H), 8,46 (s, 1 H), 7,44 (s, 1 H), 6,24 (s, 1H), 2,89 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Etapa e: 2-etil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
Una suspension de 2-etil-5-cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (1,3 g, 7,19 mmol) en EtOH (20 ml), CuSO4-5H2O (179 mg, 0,72 mmol) y NH3H2O (60 ml) se anadio en una autoclave (100 ml). La reaccion se agito a 200° C y a 2 MPa durante 10 horas. La reaccion se enfrio hasta 25° C y se inactivo con agua, y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se evaporan a presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (eter de petroleo/acetato de etilo 10/1), dando 2-etil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina (190 mg, 16 %). RMN de1H (CDCla, 300 MHz) 8 10,71 (sa, H), 8,00 (s, 1 H), 6,39 (s, 1 H), 5,87 (s, 1H), 4,89 (s a, 2 H), 2,65 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 1,22 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
7. Preparacion de B-6: 2-(1-metilciclopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
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Etapa a: 6-dom-4-((1-metilddopropil)etinil)piridin-3-amina
A una solucion de 6-cloro-4-yodopiridin-3-amina (7,0 g, 28 mmol) en Et3N (100 ml) se anadio 1 -etinil-1 -metil- ciclopropano (11,0 g, 137 mmol), Cul (0,53 g, 2,8 mmol) and Pd(PPh3)2Cl2 (1,9 g, 2,8 mmol) en atmosfera de N2. La mezcla se sometio a reflujo durante la noche y se inactivo con H2O (100 ml). Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro y se purificaron mediante cromatograffa en gel de sflice (3 % EtOAc en eter de petroleo como eluyente), dando 6-cloro-4-((1-metilciclopropil)etinil)piridin-2-amina (3,0 g, 53 %). RMN de 1H (CDCh, 300 MHz) 8 7,84 (s, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 4,11 (s a, 2 H), 1,37 (s, 3 H), 1,03 (t, J = 2,4, 2 H) 0,76 (t, J = 2,4, 2 H).
Etapa b: 5-doro-2-(1-metilddopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina
A una solucion de 6-cloro-4-((1-metilciclopropil)etinil)piridin-3-amina (3,0 g, 15 mmol) en DMF (50 ml) se anadio t-r-BuOK (3,3 g, 29 mmol) en atmosfera de N2. La mezcla se calento a 80 °C durante la noche y se inactivo con H2O (100 ml). Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 3). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro y se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (3 % EtOAc en eter de petroleo), dando 5-cloro-2-((1-metilciclopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (2,2 g, 73
%). RMN de 1H (CDCla, 300 MHz) 8 9,79 (s a, 1 H), 8,37 (s, 1 H), 7,36 (s, 1 H), 6,16 (s, 1 H), 1,51 (s, 3 H), 1,09 (m, 2
H), 0,89 (m, 2 H).
Etapa c: 2-(1-metilddopmpil)-1H-pirmlo[2,3-c]piridin-5-amina
En una autoclave de 100 ml, una solucion de 5-cloro-2-(1-metilciclopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (1,0 g, 4,9 mmol) y CuSO4-5H2O (100 mg, 0,4 mmol) en amoniaco acuoso (60 ml) y EtOH (20 ml) se calento hasta 200 °C y se agito a esta temperatura durante 8 horas. La mezcla se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente. El alcohol se elimino al vado. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 3). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro y se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (2 % CH3OH en diclorometano como eluyente), dando 2-(1-metilciclopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina (250 mg, 27 %). RMN de 1H (DMSO, 300 MHz) 8 7,96 (s, 1 H), 6,37 (s, 1 H), 5,88 (d, J = 1,2, 1 H), 5,01 (s a, 2 H),
1,41 (s, 3 H), 0,98 (t, J = 2,1,2 H), 0,80 (t, J = 2,1, 2 H).
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A una solucion de 6-clorohex-1-ino (10,0 g, 86 mmol) in THF (100 ml) se anadio n-BuLi gota a gota a -78 °C. Despues de agitar durante 20 minutos a -78° C, se dejo calentar hasta 40 °C y se agito durante 3 dfas a dicha temperatura. La reaccion se inactivo con una solucion de NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con eter (3 x 50 ml). Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron y el eter se elimino mediante destilacion, dando una solucion de etinilciclobutano en THF que se uso en la etapa b.
Etapa b: 6-doro-4-(cdobutiletinil)piridin-3-ilcarbamato de terc-butilo
A una solucion de 6-cloro-4-yodopiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (7,0 g, 19,8 mmol) en Et3N (100 ml) se anadio la solucion de etinilciclobutano en THF (preparado en la etapa a), Pd(PPh3)2Cl2 (1,8 g, 2,1 mmol) y Cul (400 mg, 2,1 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 25°C durante 16 horas. La mezcla se diluyo con agua y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). El extracto se lavo con salmuera, se concentro al vacfo y se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (5-10 % de acetato de etilo en eter de petroleo como eluyente), dando 6-cloro-4- (ciclobutiletinil)piridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (3,6 g, rendimiento del 60 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) 8: 9,11 (s a, 1 H), 7,22 (s 1 H), 6,97 (s, 1 H), 3,39-3,25 (m, 1 H), 2,48-1,98 (m, 6 H), 1,52 (s, 9 H).
Etapa c: 5-doro-2-ddobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridina
A la solucion de 6-cloro-4-(ciclobutiletinil)piridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (2,6 g, 8,5 mmol) en DMF (50 ml) se anadio t-BuOK (1,9 g, 16 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 90°C durante 2 horas. La mezcla se diluyo con agua y se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). El extracto se lavo con salmuera, se concentro al vacfo y se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (5-10 % de acetato de etilo en eter de petroleo como eluyente), dando el producto puro de 5-cloro-2-ciclobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (0,9 g, rendimiento del 53 %). RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) 8: 8,66 (s a, 1 H), 8,45 (s, 1H), 7,44 (s 1 H), 6,27 (s, 1 H), 3,75-3,52 (m, 1 H), 2,52-1,90 (m, 6 H).
Etapa d: 2-ciclobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina
A la solucion de 5-cloro-2-ciclobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridina (200 mg, 0,97 mmol) en EtOH (10 ml) y NH3 H2O (30 ml) se anadio CuSO4,5H2O (30 mg, 0,12 mmol). La mezcla de reaccion se agito a 3MPa 180 °C durante 16 horas. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 * 30 ml). El extracto se seco, se concentro al vacro y se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice (5-10 % de MeOH en acetato de etilo como eluyente), dando 2- ciclobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina pura (40 mg, rendimiento del 22 %). RMN de 1H (300 MHz, MeOH) 8: 8,02 (s, 1 H), 6,72 (s, 1H), 6,11 (s 1 H), 3,72-3,60 (m, 1 H), 2,47-1,90 (m, 6 H). EM (ESI): mlz [M+H+] 188,1.
9. Preparacion de B-8:
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A una mezcla de 6-cloropiridin-3-amina (30,0 g, 230 mol), DMAP (1,0 g) y Et3N (41,7 g, 470 mol) en CH2CI2 (200 ml) se anadio B0C2O (54,5 g, 250 mol) a 0°C. La mezcla de reaccion se dejo calentar hasta la temperatura ambiente y se agito durante la noche. La mezcla resultante se lavo con una solucion de NaHCO3 saturado y salmuera (100 ml), la capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo al vado, el residuo se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de silice (eter de petroleo/acetato de etilo 10/1), dando 6-cloropiridin-3-il- carbamato de terc-butilo (40,0 g, 76 %). RMN de 1H (CDCla, 400 MHz) 8 1H-NMR (CDCla, 400 MHz) 8,23(d, J = 2,8 Hz, 1 H), 7,98 (m, 1 H), 7,26 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,51 (s a, 1 H), 1,52 (s, 9H).
Etapa b: 6-doro-4-yodopiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo
A una solucion de TMEDA (25,4 g, 219,3 mmol) en THF seco (300 ml) se anadio, gota a gota, n-BuLi (87,7 ml, 219,3 mmol), la mezcla se agito durante 0,5 horas a esta temperatura. Una solucion de 6-cloropiridin-3-il- carbamato de terc-butnico (20 g, 87,7 mmol) en THF (170 ml) se anadio, gota a gota, a la mezcla de reaccion a -78 °C y se siguio agitando la mezcla resultante durante 1 hora a -78 °C. Despues, se anadio, gota a gota, una solucion de I2 (26,7 g, 105,3 mmol) en THF seco (170 ml) a -78 °C. Tras 1 hora, la reaccion se inactivo con NH4Cl saturado acuoso (300 ml). Se separo la capa organica y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (150 ml x 3). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presion reducida, dando un residuo, que se purifico mediante cromatograffa en columna en gel de sflice (eter de petroleo/acetato de etilo = 10/1), dando 6-cloro-4-yodopiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (10,0 g, 33 %). RMN de 1H (CDCla, 400 MHz) 8 8,95 (s, 1 H), 7,73 (s, 1 H), 6,64 (sa, 1 H), 1,53 (s, 9H).
Etapa c: 6-cloro-4-yodopiridin-3-amina
La solucion de 6-cloro-4-yodopiridin-3-ilcarbamato de terc-butilo (10,0 g, 28 mmol) en HCl 3M (600 ml) se calento a 60 °C durante 12 horas. La mezcla se dejo enfriar hasta la temperatura ambiente y se trato con NaHCO3 saturado hasta pH=8. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro, se concentraron y se purificaron mediante cromatograffa en gel de sflice (10 % de acetato de etilo en eter de petroleo como eluyente), dando 6-cloro-4-yodopiridin-3-amina (6,6 g, 93 %). RMN de 1H (CDCls, 400 MHz) 8 7,81 (s, 1 H), 7,60 (s, 1 H), 4,13 (sa, 2 H).
Etapa d: 2-(6-cloro-4-yodopiridin-3-ilamino)etanol
A una solucion de 6-cloro-4-yodopiridin-3-amina (6,5 g, -25,5 mmol) in CH3OH (1500 ml) se anadio 2-(terc- butildimetilclorosililoxi)acetaldehfdo (18,0 g, 103 mmol). Despues, lentamente se anadio acido trifluoroacetico (150 ml) y NaBHsCN (8,0 g, 127 mmol) a 0 °C. La mezcla se dejo calentar hasta 25 °C y se continuo agitando durante 12 horas adicionales. La mezcla se concentro a presion reducida y se trato con NaOH (3M) hasta pH=8. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro. El disolvente se concentro al vado, dando el producto 2-(6-cloro-4-yodopiridin-3- ilamino)etanol bruto (14,5 g), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa e: 2-(6-Cloro2-(3,3-dimeti-but-1-inil)-piridin-3-ilamino)etanol
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A una solucion de 6-cloro-4-yodopiridin-3-amino)etanol (14,5 g, 49 mmol) en Et3N (200 ml) se anadio 3,3- dimetil-but-1-ino (12,0 g, 146 mmol), Cul (0,9 g, 4,9 mmol) y Pd(PPh3)2Cl2 (3,4 g, 4,9 mmol) en atmosfera de N2. La mezcla se sometio a reflujo durante la noche y se inactivo con H2O (100 ml). Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro y se purificaron mediante cromatograffa en gel de sflice (3 % de acetato de etilo en eter de petroleo como eluyente), dando 2-(6-cloro-4-((3,3-dimetilbut-1-inil)piridin-3-ilamino)etanol (3,6 g, 29 %). RMN de 1H (CDCla, 300 MHz) 8 7,74 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 4,77 (s a, 1 H), 3,92-3,90 (m, 2 H), 3,78-3,36 (m, 2 H), 1,34 (s, 9 H).
Etapa f: 2-(2-terc-butil-5-cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol
A una solucion de 2-(6-cloro-4-((3,3-dimetil-but-1-inil)piridin-3-ilamino)etanol (3,6 g, 14,3 mmol) en DMF (100 ml) se anadio t-BuOK (3,1 g, 28 mmol) en atmosfera de N2. La mezcla se calento a 80 °C durante 12 joras y despues se inactivo con H2O (200 ml). Se separo la capa organica y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (150 ml x 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro y se purificaron mediante cromatograffa en gel de sflice (3 % de acetato de etilo en eter de petroleo como eluyente), dando 2-(2- terc-butil-5-cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol (1,6 g, 44 %). RMN de 1H (CDCla, 300 MHz) 8 8,50 (s, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 6,28 (s, 1 H), 4,55 (t, J = 6,6, 2 H), 4,05 (t, J = 6,6, 2 H), 1,49 (s, 9 H).
Etapa g: 2-(5-amino-2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol
En una autoclave de 100 ml, una mezcla de 2-(2-terc-butil-5-cloro-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol (350 mg, 1,39 mmol) y CuSO4-5H2O (35 mg, 1,4 mmol) en amoniaco acuoso (14 ml) y CH3OH (7 ml) se calento hasta 120° C durante 14 horas. La mezcla se dejo enfriar hasta 25 °C. El metanol se elimino mediante evaporacion al vacro y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 3). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro y se purificaron mediante cromatograffa en gel de sflice (5 % de CH3OH en diclorometano como eluyente), dando 2-(5-amino-2-terc-butil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol (50 mg, 16 %). RMN de 1H (CDCls, 300 MHz) 8 8,22 (s, 1 H), 6,59 (s, 1 H), 6,08 (s, 1 H), 4,44 (t, J = 6,9 Hz, 2 H), 3,99 (t, J = 6,9 Hz, 2 H), 1,45 (s, 9 H).
10. Preparacion de 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il) cidopropanocarboxamida
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2-terc-Butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina (325 mg, 0,158 mmol) y acido 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxflico (300 mg, 1,58 mmol) se disolvieron en acetonitrilo (10 ml) que contiene trietilamina (659 pl, 0,470 mmol). A la mezcla se anadio hexafluorofosfato de 0-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (608 mg, 1,60 mmol) y la solucion resultante se dejo agitar durante 16 horas, durante las cuales se formo una gran cantidad de precipitado. La mezcla de reaccion se filtro y la torta del filtro se lavo con acetonitrilo y despues se seco, dando 1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il) ciclopropanocarboxamida (397 mg, 67 % ). ESI-EM m/z calc. 377,2, hallado; 378,5 (M+1)+; Tiempo de retencion 1,44 minutes. RMN de 1H (400 MHz, DMSO) 11,26 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,13 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,04-6,98 (m, 2H), 6,20 (d, J =
I, 0 Hz, 1H), 6,09 (s, 2H), 1,49-1,45 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,12-1,08 (m, 2H).
II. Preparacion de N-(2-terc-butil-1-(2-hidroxietil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5- il)ciclopropanocarboxamida
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A una solucion de acido 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico (24 mg, 0,10 mmol), 2-(5-amino-2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-il)etanol (23 mg, 0,10 mmol) y trietilamina (42 pl, 0,30 mmol) en DMF (1 ml) se anadio HATU (38 mg, 0,10 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se filtro y se purifico mediante HPLC de fase inversa (10-99 % CH3CN-H2O con 0,035 % de TFA), dando N-(2-terc- butil-1-(2-hidroxietil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida. ESI- EM m/z calc. 457,2, hallado 458,5 (M+1)+. Tiempo de retencion 1,77 minutos. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 9,54 (s a, 1H), 8,84 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,58 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 8,3, 1,7 Hz,
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1H), 6,67 (s, 1H), 4,58 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,76 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,28 (m, 2H).
12. Preparacion de N-(2-terc-butil-1-pirrolo[3,2-b]piridin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-
il)ciclopropanocarboxamida
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A una solucion de acido 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico (18 mg, 0,075 mmol), 2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-amina (16 mg, 0,083 mmol) y trietilamina (21 pl, 0,15 mmol) en DMF (1 ml) se anadio HATU (31 mg, 0,083 mmol). La reaccion se agito a 60 °C durante 18 horas. La mezcla se fitro y se purifico mediante HPLC de fase inversa (10-99 % CH3CN-H2O con 0,035 % de TFA), dando N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2- b]piridin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida como la sal de TFA. ESI-EM m/z calc. 413,2, hallado 414,1 (M+1)+. Tiempo de retencion 2,86 minutos.
13. Preparacion de N-(2-terc-butil-1-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-
il)ciclopropanocarboxamida
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A una solucion de acido 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxflico (18 mg, 0,075 mmol), 2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-amina (16 mg, 0,083 mmol) y trietilamina (21 pl, 0,15 mmol) en DMF (1 ml) se anadio HATU (31 mg, 0,083 mmol). La reaccion se agito a 60 °C durante 18 horas. La mezcla se fitro y se purifico mediante HPLC de fase inversa (10-99 % CH3CN-H2O con 0,035 % de TFA), dando N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3- b]piridin-5-il)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida como la sal de TFA. ESI-EM m/z calc. 413,2, hallado 414,3 (M+1)+. Tiempo de retencion 3,25 minutos.
14. Preparacion de compuestos adicionales
Los compuestos de la tabla 3 se prepararon a parir de acido A y amina B usando una reaccion de acoplamiento como se indica en los ejemplos 10-13.
Tabla 3.
N° de Compuesto
Nombre del compuesto Acido A Amina B
1
1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-6-il) ciclopropanocarboxamida A-1 B-4
8
1-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2- b]piridin-5-il) ciclopropanocarboxamida A-3 B-1
2
N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-il)-1-(4- metoxifenil)ciclopropanocarboxamida A-4 B-2
3
N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1-(4- metoxifenil)ciclopropanocarboxamida A-4 B-1
4
N-(2-terc-butil-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-5-il)-1-(3- metoxifenil)ciclopropanocarboxamida A-2 B-2
12
N-(2-terc-butil-1-pirrolo[3,2-b]piridin-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida A-1 B-2
13
N-(2-terc-butil-1-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida A-1 B-1
14
N-(2-terc-butil-1-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida A-1 B-3
10
1-(2,2,-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-(1- metilciclopropil)-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il) ciclopropanocarboxamida A-1 B-6
9
1-(2,2,-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(2-etil-1H- pirrolo[2,3-c]piridin-5-il) ciclopropanocarboxamida A-1 B-5
11
N-(2-ciclobutil-1H-pirrolo[2,3-c]piridin-5-il)-1-(2,2- difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamida A-1 B-7
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A continuacion se exponen los datos caracterizadores de compuestos de la presente invencion preparados de acuerdo con los compuestos anteriores.
Tabla 4.
Comp. N°
CL/EM M+1 CL/RT min. RMN
1
323,1 2,84 RMN de H (400 MHz, DMSO-d6) 1,11-1 15 (m, 2H), 1,47-1,51 (m, 2H), 6 09 (s, 2H), 6 36-6,39 (m, 1H), 6 99-7 07 (m, 2H), 7 14 (d, J = 1 3 Hz, 1H), 7,31-7 33 (m, 1H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 11,39 (s, 1H)
2
363,9 2,53
3
364,3 2,85
4
363,9 2,71
5
364,1 2,93
6
378,3 2,71 RMN de H (400 MHz, DMSO) 1,04-1 08 (m, 2H), 1 34 (s, 9H), 1,41-1 44 (m, 2H), 6,03 (s, 2H), 6 09 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 6,96-6 89 (m, 2H), 7,02 (d, J = 1 6 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 11,49 (s, 1H)
7
378,3 2,53 RMN de H (400 MHz, DMSO) 12,28 (s, 1H), 9,88 (s, 1H), 8,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,61-7,57 (m, 1H), 7,07 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,99-6 94 (m, 2H), 6,46 (s, 1H), 6 06 (s, 2H), 1 59-1,56 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,25-1,22 (m, 2H)
8
378,3 2,66 RMN de H (400 MHz, DMSO) 12 89 (s, 1H), 9 93 (s, 1H), 8 63 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,07 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,99-6,92 (m, 2H), 6,62 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,05 (s, 2H), 1,57-1,55 (m, 2H), 1 40 (s, 9H), 1,22-1,19 (m, 2H)
9
386,5 1,46 RMN de H (400,0 MHz, DMSO) d 11,31 (s, 1H), 8 21 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,63 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7 46 (d, J = 8 3 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 1,7, 8,3 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 2,75 (q, J = 7 6 Hz, 2H), 1,51 (dd, J = 3,9, 6 8 Hz, 2H), 1 27 (t, J = 7,6 Hz, 3H) y 1,16 (dd. J = 4,0. 6 9 Hz. 2H)ppm
10
4122 1,58 RMN de H (400 MHz, CDCl3) 8 26 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8 04 (s, 1 H), 7 59 (s, 1H), 7,26-7,22 (m, 2H), 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,15(d, J = 1,2 Hz, 1H), 1,75 (dd, J = 3 8, 6 8 Hz, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,13 (dd, J = 3,9, 6 8 Hz, 2H), 1,02-0,99 (m, 2H), 0 89-0,87 (m, 2H) ppm
11
412,5 1,56 RMN de H (4000 MHz, DMSO) d 11,33 (s, 1H), 8 22 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7 63 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 1,7, 8 3 Hz, 1H), 6,26 (s, 1H), 2 36-2,27 (m, 2H), 2,22 (td, J = 9,0, 3 8 Hz, 2H), 2,05-1 86 (m, 2H), 1 53-1,50 (m, 2H) and 1,16 (dd, J = 4 0, 6 9 Hz, 2H) ppm
12
414,1 2,86
13
414,3 3,25
14
414,1 1,59
15
458,5 1,77 RMN de H (400 MHz, DMSO-d6) 9 54 (br s, 1H), 8,84 (s, 1H), 7 83 (s, 1H), 7 58 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8 3 Hz, 1H), 7 35 (dd, J = 8,3, 1,7 Hz, 1H), 6 67 (s, 1H), 4,58 (t, J = 5 7 Hz, 2H), 3 76 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,28 (m, 2H)
Ensayos para detectar y medir las propiedades de correccion de AF508-CFTR de los compuestos
Procedimientos opticos del potencial de membrana para analizar las propiedades de modulacion de AF508- CFTR de los compuestos
El ensayo utiliza colorantes fluorescentes sensibles al voltaje para medir los cambios producidos en el potencial de membrana usando un lector de placas de fluorescencia (por ejemplo, FLIPR III, Molecular Devices, Inc.) como lectura del aumento de AF508-CFTR funcional en celulas NIH 3T3. La fuerza impulsora de la respuesta es la creacion de un gradiente de iones cloruro en combinacion con la activacion del canal mediante una sola etapa de adicion de lfquido tras haberse tratado previamente las celulas con compuestos y cargarlas posteriormente con un colorante sensible al voltaje.
Identificacion de los compuestos de correccion
5
10
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65
Para identificar moleculas pequenas que corrigen el defecto de trafico asociado con AF508-CFTR se desarrollo un formato de ensayo HTS de adicion unica. Las placas de ensayo que contienen las celulas se incuban durante 2-4 horas en incubador de cultivo tisular a 37°C, 5 % de CO2, 90 % de humedad. Las celulas estan listas para la exposicion al compuesto despues de adherirse al fondo de las placas de ensayo.
Las celulas se incuban en medio sin suero durante 16-24 h en incubador de cultivo tisular a 37 °C, % de CO2, 90 % de humedad en presencia o ausencia (control negativo) del compuesto de ensayo. Despues, las celulas se enjuagaron 3 X con solucion de Krebs Ringers y se cargaron con un pigmento de redistribucion sensible al voltaje. Para activar AF508-CFTR se anadieron a cada pocillo forscolina 10 jM y el potenciador del CFTR (20 jM) junto con medio sin Cl-. La adicion de medio sin Cl- estimulo la salida de Cl- como respuesta a la activacion de AF508-CFTR y la despolarizacion de membrana resultante se monitorizo opticamente usando pigmentos sensores de voltaje.
Identificacion de los compuestos potenciadores
Para identificar los potenciadores de AF508-CFTR se desarrollo un formato de ensayo HTS de doble adicion. Este ensayo de HTS utiliza colorantes fluorescentes sensibles al voltaje para medir los cambios producidos en el potencial de membrana en un FLIPR III como medicion del aumento de la abertura y el cierre (conductancia) de AF508 CFTR en celulas NIH 3T3 de A508 CFTR corregido en cuanto a la temperatura. La fuerza impulsora de la respuesta es el gradiente de iones Cl -en combinacion con la activacion del canal con forskolina en una sola etapa de adicion de lfquido usando un lector de placas fluorescente tal como FLIPR III despues de haber tratado previamente las celulas con compuestos potenciadores (o control de vehfculo de DMSO) y cargarlas posteriormente con un colorante de redistribucion.
Soluciones:
Solucion del bano N° 1: (en mM) NaCl 160, KCl 4, 5, CaCh22, MgCh 1, HEPES 10, pH 7, 4 con NaOH.
Solucion del bano sin cloruro: las sales cloruro de la solucion del bano N° 1 se sustituyen con sales de gluconato.
Cultivo celular
Para las mediciones opticas del potencial de membrana, se usan fibroblastos murinos NIH3T3 que expresan de forma estable AF508-CFTR. Las celulas se mantienen a 37 °C en CO2 al 5 % y una humedad del 90 % en medio Eagle modificado de Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, suero bovino fetal al 10 %, 1 x AANE , p-ME, 1 x pen/estrep y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm2. Para todos los ensayos opticos, las celulas se sembraron a ~20.000/pocillo en placas recubiertas con matrigel de 384 pocillos, y se cultivaron durante 2 h a 37 °C antes de cultivarlas a 27 °C durante 24 h para el ensayo del potenciador. Para los ensayos de correccion, las celulas se cultivan a 27 °C o 37 °C con y sin compuestos durante 16-24 horas.
Ensayos electrofisiologicos para analizar las propiedades de modulacion de AF508-CFTR de los compuestos
1. Ensayo de camara de Ussing
Se realizaron experimentos de camara de Ussing en celulas epiteliales polarizadas que expresaban AF508- CFTR para caracterizar mejor los moduladores del AF508-CFTR identificados en los ensayos opticos. Se aislaron epitelios de vfas respiratorias de FQ y no FQ de tejido de bronquio, se cultivaron segun lo descrito anteriormente (Galietta, L.J.V., Lantero, S., Gazzolo, A., Sacco, O., Romano, L., Rossi, G.A., & Zegarra-Moran, O. (1998) In Vitro Cell. Dev. Biol. 34.478-481), y se sembraron en filtros Snapwell™ Costar® que habfan sido recubiertos previamente con medio acondicionado con NIH3T3. Tras cuatro dfas, se retiraron los medios apicales y se cultivaron las celulas en una interfase de aire y lfquido durante > 14 dfas antes de su uso. Esto produjo una monocapa de celulas columnares completamente diferenciadas que eran ciliadas, rasgos que son caractensticos de los epitelios de las vfas respiratorias. Se aislo HBE de no FQ de no fumadores que no teman ninguna enfermedad pulmonar conocida. Se aislaron HBE de FQ de pacientes homocigoticos para AF508-CFTR.
Se montaron HBE cultivados en insertos de cultivo celular Snapwell™ Coster® en una camara de Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) y se midieron la resistencia transepitelial y la corriente de circuito corto en presencia de un gradiente de Cl-de basolateral a apical (Isc) usando un sistema de fijacion de voltaje (Departamento de bioingeniena, Universidad de Iowa, IA). En pocas palabras, se examinaron los HBE en condiciones de registro de fijacion de voltaje (Vhold = 0 mV) a 37 °C. La solucion basolateral contema (en mM) NaCl 145, K2HPO4, 0, 83, KH2PO4 3, 3, MgCl2, 1, 2, CaCh, 1, 2, Glucosa 10, HEPES 10 (el pH se ajusto a 7, 35 con NaOH) y la solucion apical contema (in mM) gluconato de sodio 145 , MgCh, 1, 2, CaCl2, 1, 2, glucosa 10, HEPES 10 (el pH se ajusto a 7, 35 con NaOH).
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Identificacion de los compuestos de correccion
El protocolo tipico utilizaba un gradiente de concentracion de Cl- de membrana basolateral a apical. Para establecer este gradiente, se uso solucion Ringer normal en la membrana basolateral, mientras que el NaCl apical se sustituyo con gluconato sodico equimolar (ajustado a pH 7, 4 con NaOH), dando un gran gradiente de concentracion de Cl-a traves del epitelio. Todos los experimentos se realizaron con monocapas intactas. Para activar completamente AF508-CFTR, se anadio forskolina (10 jM), inhibidor de PDE, IBMX (100 jM) y potenciador del CFTR, genistema (50 jM) en el lado apical.
Como se observa en otros tipos de celulas, la incubacion a temperaturas bajas de celulas FER y celulas epiteliales bronquiales humanas aisladas de pacientes con FQ, (CF-HBE) que expresa AF508-CFTR incrementa la densidad funcional del CFTR en la membrana plasmatica. Para determinar la actividad de los compuestos de correccion se incubaron las celulas con el compuesto de ensayo durante 24-48 horas a 37 °C y despues se lavaron 3X antes del registro. El Isc mediado por AMPc y genistema en las celulas tratadas con el compuesto se normalizo a los controles a 37 °C y se expreso como el porcentaje de actividad de la actividad del CFTR en wt-HBE. La preincubacion de las celulas con el compuesto de correccion aumento significativamente el Isc mediado por AMPc y genistema en comparacion con los controles a 37 °C.
Identificacion de los compuestos potenciadores
El protocolo tfpico utilizaba un gradiente de concentracion de Cl- de membrana basolateral a apical. Para establecer este gradiente, se uso solucion Ringer normal en la membrana basolateral, mientras que el NaCl apical se sustituyo con gluconato sodico equimolar (ajustado a pH 7, 4 con NaOH), dando un gran gradiente de concentracion de Cl-a traves del epitelio. Se anadieron forskolina (10 jM) y todos los compuestos de ensayo en el lado apical de los insertos de cultivo celular. Se comparo la eficacia de los potenciadores de AF508-CFTR putativos con la del potenciador conocido, la genistema.
2. Registros de pinzamiento zonal
Se hizo un seguimiento de la corriente de Cl-total en AF508-CFTR usando una configuracion de registro de fijacion perforada como se ha descrito previamente (Rae, J., Cooper, K., Gates, P. y Watsky, M. (1991) J. Neurosci. Methods 37, 15-26). Los registros de fijacion de voltaje se realizaron a 22 °C con un amplificador de pinzamiento zonal Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA). La solucion de la pipeta contema (en mM) N-metil- Dglucamina 150 (NMDG) -Cl, MgCh, 2, CaCh, 2, EGTA 10, HEPES 10 y 240 jg/ml de amfotericina-B (pH ajustado a 7, 35 con HCl). El medio extracelular contema (en mM) NMDG-Cl 150, MgC^2, CaCl2 2, HEPES 10 (pH ajustado a 7, 35 con HCl). La generacion de pulsos, la adquisicion de datos y el analisis se realizaron usando un PC dotado de un interfaz A/D Digidata 1320 en combinacion con Clampex 8 (Axon Instruments Inc.). Para activar AF508-CFTR, se anadieron forskolina 10 jM y genistema 20 jM al bano y se hizo un seguimiento de la relacion entre la corriente y el voltaje cada 30 segundos.
Identificacion de los compuestos de correccion
Para determinar la actividad de los compuestos de correccion para aumentar la densidad del AF508-CFTR funcional en la membrana plasmatica, los inventores usaron las tecnicas de registro de pinzamiento-perforado descrito anteriormente para medir la densidad de corriente tras el tratamiento durante 24 horas con los compuestos de correccion. Par activar completamente AF508-CFTR, se anadieron a las celulas forskolina 10 jM y genistema 20jM. En las condiciones de registro de los inventores, la densidad de la corriente tras una incubacion de 24 horas a 27 °C fue superior que la observada tras una incubacion de 24 horas a 37 °C. Estos resultados son consistentes con los efectos conocidos de la incubacion de baja temperatura sobre la densidad de AF508-CFTR en la membrana plasmatica. Para determinar los efectos de los compuestos de correccion sobre la densidad de la corriente del CFTR, las celulas se incubaron con 10 jM del compuesto de ensayo durante 24 horas a 37 °C y se comparo la densidad de la corriente con los controles a 27 °C y a 37 °C. Antes del registro, las celulas se lavaron 3X con medio de registro extracelular para eliminar todo compuesto de ensayo restante. La preincubacion con 10 jM de los compuestos de correccion aumento significativamente la corriente dependiente de AMPc y genistema en comparacion con los controles a 37 °C.
Identificacion de los compuestos potenciadores
Tambien se investigo la capacidad de los potenciadores de AF508-CFTR para aumentar la corriente macroscopica de Cl -de AF508-CFTR (Iaf50s) en celulas NIH3T3 que expresaban de manera estable AF508-CFTR usando tecnicas de registro de fijacion perforada. Los potenciadores identificados de los ensayos opticos evocaron un aumento dependiente de la dosis de IAf508 con una potencia y una eficacia similares a las observadas en los ensayos opticos. En todas las celulas examinadas, el potencial de inversion antes y durante la aplicacion de los potenciadores fue de aproximadamente -30 mV, que es el Eci calculado (-28 mV).
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Cultivo celular
Para los registros de celulas enteras, se usan fibroblastos murinos NIH3T3 que expresan de forma estable AF508-CFTR. Las celulas se mantienen a 37 °C en CO2 al 5 % y una humedad del 90 % en medio Eagle modificado de Dulbecco suplementado con glutamina 2 mM, suero bovino fetal al 10 %, 1 x AANE , p-ME, 1 x pen/estrep y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm2. Para los registros de celulas enteras, se sembraron 2.500-5.000 celulas sobre cubreobjetos de vidrio recubiertos de poli-L-lisina y se cultivaron durante 24-48 horas a 27 °C antes de usarlas para analizar la actividad de los potenciadores; y se incubaron con o sin el compuesto de correccion a 37 °C para medir la actividad de los correctores.
3. Registros de un solo canal
Se observo la actividad de abertura y cierre de CFTR de tipo natural y AF508-CFTR corregido en cuanto a la temperatura en celulas NIH3T3 usando registros de fijacion de membrana escindida de dentro hacia fuera segun lo descrito previamente (Dalemans, W., Barbr y , P., Champigny, G., Jallat, S., Dott, K., Dreyer, D., Cr y stal, R. G., Pavirani, A., Lecocq, J-P. Lazdunski, M. (1991) Nature 354, 526-528) usando un amplificador de pinzamiento zonal Axopatch 200B Axon Instruments Inc.). La pipeta contema (en mM): (NmDG 150, acido aspartico 150, CaCl2 5, MgCl 2 y HePES 10 (pH ajustado a 7, 35 con base Tris). El bano contema (en mM): NMDG-Cl 150, MgCh 2, EGTA 5, TES y base Tris 14 (pH ajustado a 7, 35 con HCl). Tras la escision, se activaron tanto el CFTR de tipo natural como el AF508-CFTR mediante la adicion de Mg-ATP 1 mM, 75 nM de la subunidad catalttica de la protema quinasa dependiente de cAMP (PKA; Promega Corp. Madison, WI) y NaF 10 mM para inhibir las protemas fosfatasas, lo que evito la reduccion de la corriente. Se mantuvo el potencial de la pipeta a 80 mV. Se analizo la actividad de los 5 canales de las fijaciones de membrana que conteman < 2 canales activos. El numero maximo de aberturas simultaneas determino el numero de canales activos durante un experimento. Para determinar la amplitud de la corriente de un solo canal, se filtraron fuera de lmea los datos registrados de 120 s de actividad de AF508-CFTR a 100 Hz y luego se usaron para crear histogramas de amplitud con todos los puntos que se ajustaron con funciones multigausianas usando el programa informatico de analisis Bio-Patch (Bio-Logic Comp. Francia). Se determinaron la corriente microscopica total y la probabilidad de abertura (Po) de 120 segundos de actividad de los canales. La Po se determino usando el programa Bio-Patch o a partir de la relacion Po = I/i (N) , en la que I = corriente media; i = amplitud de la corriente de un solo canal; y N = numero de canales activos de la fijacion.
Cultivo celular
Para los registros de pinzamiento zonal de membrana escindida, se usan fibroblastos murinos NIH3T3 que expresan de forma estable AF508-CFTR. Las celulas se mantienen a 37 °C en CO2 al 5 % y una humedad del 90 % en medio de Eagle modificado por Dulbecco complementado con glutamina 2 mM, suero bovino fetal al 10 %, 1 x AANE, p-ME, 1 x pen/estrep y HEPES 25 mM en matraces de cultivo de 175 cm2. Para los registros de un solo canal, se sembraron 2.500-5.000 celulas sobre cubreobjetos de vidrio recubiertos de poli-L-lisina y se cultivaron durante 24-48 horas a 27 °C antes de usarlas.
Se descubrio que los compuestos de la Tabla 1 exhibfan actividad de correccion tal como se mide en el ensayo descrito anteriormente.
Los compuestos de la invencion son utiles como moduladores de los transportadores de casetes de union a ATP. Usando los procedimientos descritos anteriormente, se han medido las actividades, es decir las CD50, de los compuestos y se muestran en la Tabla 5.
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Tabla 5
CI50/CE50 Bins:
+++ <= 2,0 < ++ <= 5,0 < actividad de Bins:+ <= 25,0 < ++ <= 100,0
Porcentaje de
N° de comp.

1 ++

2 +++

3 +++

4 +++

5 ++

6 +++

7 +++

8 +++

9 +++

10 +++

11 +++

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13 +++

14 +++

15 +++
Eficacia maxima Binned
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++
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+++
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+++
+++
< +++
CE50 Binned

Claims (22)

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    Reivindicaciones
    1. Un compuesto que tiene la formula I:
    imagen1
    o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; en la que:
    Ar1 es:
    imagen2
    en la que:
    cada uno de Gi, G2, G3 y G4 se seleccionan de forma independiente del grupo que consiste en CH y nitrogeno, en la que uno de Gi, G2, G3 y G4 es nitrogeno y el resto de Gi, G2, G3 y G4 es, cada uno, CH.
    Ar1 esta unido a N(RN) a traves de G2 o G3;
    Ar1 esta no sustituido o sustituido con w apariciones de -WRW;
    RN es H, R2 o R3;
    el anillo A es un anillo monodclico de 3-7 miembros que tiene 0-3 heteroatomos seleccionados del grupo que consiste en oxfgeno, azufre y nitrogeno, en donde el anillo A esta sustituido opcionalmente con q apariciones de - Q-RQ;
    el anillo B esta opcionalmente condensado con un anillo de 5-7 miembros seleccionado del grupo que consiste en cicloalifatico, arilo, heterodclico y heteroarilo, en donde el anillo B, junto con dicho anillo condensado opcionalmente, esta sustituido opcionalmente con x apariciones de -XRX;
    Q, W, o X es, de forma independiente, un enlace o es, de forma independiente, una cadena de alquilideno (Ci- Ca) en donde hasta dos unidades de metileno de Q, W, o X estan opcional e independientemente sustituidos con -CO-, -CS-, -COCO-, -CONR'-, -CONR'NR'-, -CO2-, -OCO-, -NR'CO2-, -O-, -NR'CONR'-, -OCONR'-, -NR'NR', - NR'NR'CO-, -NR'CO-, -S-, -SO, -SO2-,-NR'-, -SO2NR'-, NR'SO2-, o -NR'SO2NR'-; cada RQ, RW y RX es, de forma independiente, R1, R2, R3, R4 o R5;
    R' es, de forma independiente, R2, R3 o Ra;
    R1 es oxo, =NN(Ra)2, =NN(R7)2, =NN(RaR7), Ra, o (alifatico (C1-C4))n-Y; en donde n es 0 o 1; y
    Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, SRa, S(O)Ra, SO2Ra, NH2, NHRa, N(Ra)2, NRaR8, COOH, COORa u ORa; o
    dos R1 en atomos adyacentes, juntos, forman
    imagen3
    en la que J se selecciona del grupo que consiste en CH2, CF2, C(CH3)2, C(O),
    imagen4
    C(fenilo)2, B(OH) y CH(OEt);
    R2 es alifatico, en donde cada R2 esta no sustituido o sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R4 y R5;
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    R3 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en donde R3 esta no sustituido o sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R4 y R5;
    R4 es OR5, OR6, OC(O)R6, OC(O)R5, OC(O)OR6, OC(O)OR5, OC(O)N(R6)2, OC(O)N(R5)2, OC(O)N(R6R5), SR6,
    SR5, S(O)R6, S(O)R5, SO2R6, SO2R5, SO2N(R6)2, SO2N(R5)2, SO2NR5R6, SO3R6, SO3R5, C(O)R5, C(O)OR5,
    C(O)R6, C(O)OR6, C(O)N(R6)2, C(O)N(R5)2, C(O)N(R5R6), C(O)N(OR6)R6, C(O)N(OR5)R6, C(O)N(OR6)R5, C(O)N(OR5)R5, C(NOR6)R6, C(NOR6)R5, C(NOR5)R6, C(NOR5)R5, N(R6)2, N(R5)2, N(R5R6), NR5C(O)R5, NR6C(O)R6, NR6C(O)R5, NR5C(O)R6, NR6C(O)OR6, NR5C(O)OR6, NR6C(O)OR5, NR5C(O)OR5, NR6C(O)N(R6)2, NR6C(O)NR5R6, NR6C(O)N(R5)2, NR5C(O)N(R6)2, NR5C(O)NR5R6, NR5C(O)N(R5)2, NR6SO2R6, NR6SO2R5, NR5SO2R6, NR5SO2R5, NR6SO2N(R6)2, NR6SO2NR5R6, NR6SO2N(R5)2, NR5SO2NR5R6, NR5SO2N(R5)2, N(OR6)R6, N(OR6)R5, N(OR5)R5 o N(OR5)R6;
    R5 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en el que R5 esta no sustituido o sustituido con hasta 3 R1;
    R6 es H o alifatico, en el que R6 esta no sustituido o sustituido con R7;
    R7 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, y cada R7 esta no sustituido o sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H, alquilo (C1-C6) de cadena lineal o ramificada, alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada o, 1,2-metilendioxi, 1,2-etilendioxi
    y (CH2)n-Z;
    Z se selecciona del grupo que consiste en halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, S-alifatico, S(O)-alifatico, SO2-alifatico NH2, NH-alifatico, N(alifatico)2, N(alifatico)R8, NHR8, COOH, C(O)O(-alifatico) y O-alifatico;
    R8 es acetilo, arilsulfonilo o alquilsulfonilo C1-C6 ; w es de 0 a 5; y
    cada uno de x y q es, de forma independiente, 0-5.
  2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que Ar1 es un anillo no sustituido o sustituido seleccionado del grupo que consiste de:
    M H
    H H H
    \ X/ N
    Ar-i,
    Ar-ii, Ar-iii, y Ar-iv.
  3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el anillo A se selecciona del grupo que consiste de:
    .(O-RCK /^<<Q-RQ)q ^x«>RQ>q
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  4. 4. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que dicho compuesto tiene la formula II:
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    en la que:
    Rx, X, x, RN, Gi, G2, G3 y G4 son como se ha definido en la reivindicacion 1; m es de 0 a 4;
    Ar1 es:
    imagen10
    en la que Ar1 esta unido al N(RN) a traves de G2 o G3; y
    Ar1 esta no sustituido o sustituido con hasta 3 sustituyentes RW, en los que cada RW se selecciona de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R3 y R4
  5. 5. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde dicho compuesto tiene formula IIIA, formula IIIB.
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    en las que Rx, X, x, m, RN, G1, G2, G3 y G4 son como se ha definido en la reivindicacion 1; y cada RW se selecciona de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R3 y R4 6
  6. 6. El compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde dicho anillo condensado al anillo B se selecciona de ls grupo que consiste de:
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  7. 7. Un compuesto seleccionado de los siguientes:
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    o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.
  8. 8. Una composicion farmaceutica que comprende
    (i) un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 7; y
    (ii) un vehfculo farmaceuticamente aceptable.
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  9. 9. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 8, que comprende ademas un agente adicional seleccionado del grupo consistente de un agente mucolttico, broncodilatador, un antibiotico, un agente antiinfeccioso, un agente antiinflamatorio, un corrector del CFTR y un agente nutricional.
  10. 10. Un procedimiento de modulacion de transportadores de ABC en una membrana de una celula in vitro, que comprende el paso de poner en contacto dicha celula con un compuestos de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2.
  11. 11. El metodo de la reivindicacion 10, en donde el transportador de ABC es CFTR.
  12. 12. Un kit t para su uso en la medicion de la actividad de un transportador de ABC o un fragmento del mismo, en una muestra biologica in vitro o in vivo , que comprende:
    (i) una primera composicion que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 7; y
    (ii) instrucciones para
    a) poner en contacto la composicion con la muestra biologica;
    b) medir la actividad de dicho transportador de ABC o un fragmento del mismo.
  13. 13. Un compuesto que tiene la formula I:
    imagen17
    o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que: Ar1 es:
    imagen18
    en la que
    cada uno de G1, G2, G3 y G4 se seleccionan de forma independiente del grupo que consiste en CH y nitrogeno, en la que uno de G1, G2, G3 y G4 es nitrogeno y el resto de G1, G2, G3 y G4 es, cada uno, CH.
    Ar1 esta unido a N(RN) a traves de G2 o G3;
    Ar1 esta no sustituido o sustituido con w apariciones de -WRW; y RN es H, R2 o R3;
    el anillo A es un anillo monodclico de 3-7 miembros que tiene 0-3 heteroatomos seleccionados del grupo que consiste en oxfgeno, azufre y nitrogeno, en el que el anillo A esta no sustituido o sustituido con q apariciones de -Q-RQ;
    el anillo B esta condensado con un anillo de 5-7 miembros seleccionado del grupo que consiste en heterodclico y heteroarilo, en donde el anillo B, junto con dicho anillo condensado, esta no sustituido o sustituido con x apariciones de -XRX;
    Q, W, o X es, de forma independiente, un enlace o es de forma independiente, una cadena de alquilideno (C1- Ca) no sustituida o sustituida en donde dos unidades de metileno de Q, W, o X estan opcional e independientemente reemplazadas por -CO-, -CS-, -COCO-, -CONR'-, -CONR'NR'-, -CO2-, -OCO-, -NRCO2-, -O-, -NR'CONR'-, -OCONR'-, -NR'NR', -NR'NR'CO-, -NR'CO-, -S-, -SO, -SO2-,-NR'-, -SO2NR'-, NR'SO2- o - NR'SO2NR'-;
    cada RQ, RW y RX es, de forma independiente, R1, R2, R3, R4 o R5;
    R' es, de forma independiente, R2, R3 o Ra;
    R1 es oxo, =NN(Ra)2, =NN(R7)2, =NN(RaR7), Ra o (alifatico (C1-C4))n-Y;
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    en donde n es 0 o 1; y
    Y es halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, SR6, S(O)R6, SO2R6, NH2, NHR6, N(R6)2, NR6R8, COOH, COOR6 u OR6; o
    dos R1 en atomos adyacentes, tomados juntos, forman
    imagen19
    en la que J se selecciona del grupo que consiste en CH2, CF2, C(CH3)2, C(O),
    imagen20
    imagen21
    C(fenilo)2, B(OH) y CH(OEt);
    R2 es alifatico, en donde cada R2 esta no sustituido o sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R4 y R5;
    R3 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en donde R3 esta no sustituido o sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R4 y R5;
    R4 es OR5, OR6, OC(O)R6, OC(O)R5, OC(O)OR6, OC(O)OR5, OC(O)N(R6)2, OC(O)N(R5)2, OC(O)N(R6R5), SR6, SR5, S(O)R6, S(O)R5, SO2R6, SO2R5, SO2N(R6)2, SO2N(R5)2, SO2NR5R6, SO3R6, SO3R5, C(O)R5, C(O)OR5, C(O)R6, C(O)OR6, C(O)N(R6)2, C(O)N(R5)2, C(O)N(R5R6), C(O)N(OR6)R6, C(O)N(OR5)R6, C(O)N(OR6)R5, C(O)N(OR5)R5, C(NOR6)R6, C(NOR6)R5, C(NOR5)R6, C(NOR5)R5, N(R6)2, N(R5)2, N(R5R6), NR5C(O)R5, NR6C(O)R6, NR6C(O)R5, NR5C(O)R6, NR6C(O)OR6, NR5C(O)OR6, NR6C(O)OR5, NR5C(O)OR5, NR6C(O)N(R6)2, NR6C(O)NR5R6, NR6C(O)N(R5)2, NR5C(O)N(R6)2, NR5C(O)NR5R6, NR5C(O)N(R5)2,
    NR6SO2R6, NR6SO2R5, NR5SO2R6, NR5SO2R5, NR6SO2N(R6)2, NR6SO2NR5R6, NR6SO2N(R5)2,
    NRsSO2NR5R6, NR5SO2N(R45)2, N(OR6)R6, N(OR6)R5, N(OR5)R5 o N(OR5)R6;
    R5 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, en el que R5 esta no sustituido o sustituido con hasta 3 R1;
    R6 es H o alifatico, en el que R6 esta no sustituido o sustituido con R7;
    R7 es un anillo cicloalifatico, arilo, heterodclico o heteroarilo, y cada R7 esta opcionalmente sustituido con hasta 2 sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en H, alquilo (C1-C6) de cadena lineal o ramificada, alquenilo o alquinilo (C2-C6) de cadena lineal o ramificada, 1,2-metilendioxi, 1,2- etilendioxi y (CH2)n-Z;
    Z se selecciona del grupo que consiste en halo, CN, NO2, CF3, OCF3, OH, S-alifatico, S(O)-alifatico, SO2- alifatico, NH2, NH-alifatico, N(alifatico)2, N(alifatico)R8, NHR8, COOH, C(O)O(-alifatico) y O-alifatico;
    R8 es acetilo, arilsulfonilo o alquilsulfonilo C1-C6; w es de 0 a 5; y
    cada uno de x y q es, de forma independiente, 0-5.
    para su uso en un procedimiento para tratar una afeccion, una enfermedad o un trastorno en un paciente implicado por la actividad transportadora de ABC,
    en donde dicho procedimiento comprende la etapa de administrar a dicho paciente un compuesto que tiene la formula I.
  14. 14. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicacion 13, en el que Ar1 es un anillo no sustituido o sustituido seleccionado del grupo que consiste en:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    rrV
    H H H H
    -N
    -N r^r^r —N nrr'V'k
    N^- k Xj N
    At-
    ■i, Ar- ■ii, Ar- ■iii, y Ar-iv.
  15. 15. El compuesto para el uso como en la reivindicaicon 13, en el que el anillo A se selecciona del grupo que consiste de:
    imagen22
    w
    j k
    .(Q-Rq1„ ,.q ,
    y
    w
    o
    ^^(Q-RQ)q
    q r s y t.
  16. 16. El compuesto para el uso como en la reivindicacion 13, en el que dicho compuesto tiene formula II
    \X/
    !-RQ)(
    HN-
    'q -/- V(Q-RQ)q HN
    imagen23
    W
    (Q-RQ)q
    HN-
    Vv
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    imagen24
    en la que:
    Rx, X, x, RN, G1, G2, G3 y G4 son como se ha definido en la reivindicacion 13; m es de 0 a 4;
    Ar1 es:
    imagen25
    en la que Ar1 esta unido al N(RN) a traves de G2 o G3; y
    Ar1 esta no sustituido o sustituido con hasta 3 sustituyentes RW, en los que cada RW se selecciona de forma independiente del grupo que consiste en R1, R2, R3, R4 y R5.
  17. 17. El compuesto para el uso como en la reivindicacion 13, en el que dicho compuesto tiene formula IIIA, o formula IIIB:
    imagen26
  18. 18. El compuesto para el uso como en la reivindicacion 13, en el que dicho anillo condensado con el anillo B se selecciona del grupo que consiste de:
    imagen27
    imagen28
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    imagen29
  19. 19. El compuesto para el uso como en la reivindicacion 13, en el que dicho compuesto tiene formula IVA, formula IVB, o formula IVC:
    imagen30
    imagen31
    imagen32
  20. 20. El compuesto para el uso como en la reivindicacion 13, en el que dicho transportador de ABC es CFTR
  21. 21. Un compuesto seleccionado de los siguientes:
    imagen33
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    (continuacion)
    7
    8 9
    10
    11 12
    ^30LsyO5-<>
    13
    14 15
    A H s
    , o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos, para su uso en un procedimiento para tratar una afeccion, enfermedad o trastorno en un paciente implicado por la actividad transportadora de ABC, en el que dicho procedimiento comprende la etapa de administrar a dicho paciente un compuesto seleccionado de los compuestos 1 a 3 y 5 a 15.
  22. 22. El compuesto para el uso como en la reivindicacion 13 o la reivindicacion 21, en donde dicha afeccion, enfermedad o trastorno se selecciona de fibrosis qrnstica, enfisema hereditario, hemocromatosis hereditaria, deficiencias de la coagulacion-fibrinolisis, deficiencia de protema C, angioedema hereditario de tipo 1, deficiencias en el procesamiento de lfpidos, hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia de tipo 1, abetalipoproteinemia, enfermedades del almacenamiento lisosomal, enfermedad de celulas I/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar de tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, enanismo de Laron, deficiencia de mieloperoxidasa, hipoparatiroidismo primario, melanoma, glucanosis CDG de tipo 1, enfisema hereditario, hipertiroidismo congenito, osteogenesis imperfecta, hipofibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, diabetes insfpida (DI) , DI neurofiseal, DI nefrogenica, smdrome de Charcot-Marie-Tooth, enfermedad de Perlizaeus- Merzbacher, enfermedades neurodegenerativas, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrofica, paralisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, varios trastornos neurologicos de poliglutamina, Huntington, ataxia espinocerebelar de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, palidoluisiana dentatorubal, distrofia miotonica, asf como encefalopatfas espongiformes, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria, enfermedad de Fabry , smdrome de Straussler-Scheinker, EPOC, enfermedad del ojo seco y enfermedad de Sjogren.
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